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WO2014032151A1 - Nanopartícula polimérica de finasterida, suspensão aquosa contendo a mesma, composição para tratamento de alopecia, processo de preparação de dita composição, e seu uso - Google Patents

Nanopartícula polimérica de finasterida, suspensão aquosa contendo a mesma, composição para tratamento de alopecia, processo de preparação de dita composição, e seu uso Download PDF

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WO2014032151A1
WO2014032151A1 PCT/BR2013/000334 BR2013000334W WO2014032151A1 WO 2014032151 A1 WO2014032151 A1 WO 2014032151A1 BR 2013000334 W BR2013000334 W BR 2013000334W WO 2014032151 A1 WO2014032151 A1 WO 2014032151A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
finasteride
oil
surfactant
polymeric
group
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/BR2013/000334
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Adrian Raffin POHLMANN
Denise Duarte JORNADA
Silva Stanisçuaski GUTERRES
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Universidade Federal do Rio Grande do Sul UFRGS
Biolab Sanus Farmaceutica Ltda
Original Assignee
Universidade Federal do Rio Grande do Sul UFRGS
Biolab Sanus Farmaceutica Ltda
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
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Priority to PE2019001938A priority patent/PE20191713A1/es
Priority to KR1020157008182A priority patent/KR102128478B1/ko
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Priority to MX2015002299A priority patent/MX357601B/es
Priority to DK13832319.1T priority patent/DK2891487T3/en
Priority to MYPI2015700616A priority patent/MY207375A/en
Priority to EP13832319.1A priority patent/EP2891487B1/en
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    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery

Definitions

  • the present invention relates to a topical pharmaceutical composition for the treatment of alopecia, said composition comprising polymeric nanoparticles, preferably nanocapsules, containing finasteride, additives and a pharmaceutically acceptable carrier, as well as the use of nanoparticles to prepare said composition. for the treatment of alopecia.
  • the invention further includes a process for preparing finasteride nanocapsules suitable for a topical carrier composition for treating alopecia.
  • Hair loss also called baldness
  • Hair loss can manifest itself in a variety of ways. It may be irreversible in cases classified as scarring alopecia, where there is destruction of the hair follicle; or reversible in non-scarring cases that have a varied cause, and may originate from pharmacological treatment, type of diet, physiological or psychological stress, fungal infection, chemotherapy or genetic inheritance. Because of this, several pharmacological and non-pharmacological treatments (implants and laser applications) are used in an attempt to reverse this situation.
  • a drug In hair therapy, for a drug to have the desired action, it must reach the follicle capillary (in the epidermis), where is the enzyme responsible for triggering the pathology, without permeating to the blood capillaries that irrigate the hair follicle (avoiding a systemic action).
  • a formulation to be effective it must be able to promote drug penetration and retention at its site of action (DRAKE, L., et al .; "The effects of finasteride on scalp skin and serum androgen in men with androgenetic alopecia ". Journal of the American Academy of Dermatology, 1999, v. 41, no. 4, p. 550-554).
  • Androgenic alopecia is the transformation of the mature (terminal) hair follicle into an immature follicle (velus) through successive hair cycles with a time shortening of the anagen phase.
  • ITAMI Molecular basis of androgenetic alopecia.” : From androgen to paracrine mediators through dermal papilla ". Journal Of Dermatological Science, 2011, v. 61, p.1-6).
  • the pathogenic bases of baldness are likely to be mediated through intracellular signaling in the hair follicle (INUI, S.; ITAMI, S.; "Molecular basis of androgenetic alopecia: From androgen to paracrine mediators through dermal papilla”. Journal Of Dermatological Science, 2011, v. 61, p.1-6).
  • DHT dihydrotestosterone
  • DHT cannot be converted to estrogen by aromatase but remains purely androgenic activity
  • in vitro studies show that DHT is bound with more androgen receptor affinity than testosterone (LIU, S .; YAMAUCHI, H .; "Different patterns of 5a-reductase expression, cellular distribution, and testosterone metabolism in human follicular dermal papilla cells.” Biochemical and Biophysical Research Communications, 2008 , 368 p.858-864).
  • LIU S .
  • YAMAUCHI YAMAUCHI, H .
  • the action of these androgen hormones occurs by their diffusion through the cell membrane in order to bind to the intracellular androgen receptor.
  • hormone-receptor complex undergoes conformational changes, thus occurring a binding of the complex with the promoter site in DNA, triggering the production of messenger RNAs that will transcribe the genetic response (INUI, S .; ITAMI, S. ; "Molecular basis of androgenetic alopecia: From androgen to paracrine mediators through dermal papilla”. Journal Of Dermatological Science, 2011, v. 61, p.1-6).
  • the developed response is the reduction of the anagen phase of the hair growth cycle and, thus, the hair passes early to the telogen phase (ELLIS, JA; HARRAP, S B., "The Genetics of Androgenetic Alopecia” (Clinics in Dermatology, 2001, v. 19, pp. 149-154).
  • Androgenic alopecia has a pattern in hair loss, which facilitates its diagnosis and easily distinguishes it from other types.
  • the default is initially the loss of wires in the front or vertex only, and may expand to other regions.
  • the degree of alopecia can be determined using the Hamilton-Norwood scale. This scale points to three types of hair loss pattern: vertex pattern (where hair loss begins at the back), anterior pattern (where hair loss begins at the front) and the normal pattern (where hair loss begins both at the back). front and back), all patterns being divided into seven stages of hair loss (SINCLAIR, RD; "Male androgenetic alopecia.” The Journal of Men 1 s Health & Gender, 2004, v 1, no. 4 , pp. 319-327).
  • alopecia can be both topical and systemic.
  • drugs approved by ANVISA the following can be mentioned: (i) as systemic, the drug composed of finasteride (1 mg) of oral use, marketed under the brand name Propecia®, which acts as a DHT hormone blocker; and (ii) as topics: (a) the minoxidil-based drug marketed under the brand name Regain® / Rogain® in the form of 2% mousse (for women) and 5% (for men); and (b ) the alphaestradiol-based medicine, marketed under the brand name Avieis®, as a 0.025% solution.
  • the active ingredient has several stability, bioavailability and formulation difficulties that result from its physicochemical and biological / physiological properties.
  • To address or reduce the negative characteristics of the active ingredient alternatives were sought to "protect against its degradation” or "increase its solubility".
  • the development of new drug delivery systems has been the target of improvements aimed at improving therapeutic efficacy and safety in use by changing pharmacokinetic and pharmacodynamic aspects.
  • colloidal drug delivery systems are polymeric nanoparticles and liposomes (Avnesh Kumari, Sudesh Kumar Yadav, Subhash C. Yadav, Biodegradable polymeric nanoparticles, Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, Volume 75, Issue 1, 1 January 2010, Pages 1-18; Vladimir P.
  • Nanocapsules are colloidal drug carrier systems that have diameters between 10 and 1000 nm and are divided according to their supramolecular architectures into vesicular or matrix.
  • Nanocapsules vesicular
  • Nanocapsules have an oily nucleus surrounded by a polymeric matrix, and the drug may be dispersed in the nucleus and / or adsorbed to the polymeric wall.
  • (Matrix) nanospheres do not have the oily core, only the polymeric structure, so the drug may be retained or adsorbed onto the polymeric matrix.
  • Nanoparticles made of biodegradable polymer have been preferred because they have greater therapeutic potential, high stability in biological fluids and during storage (SCHAFFAZICK, SH, et al .; “Characterization and physical-chemical stability of nanoparticulate drug delivery polymer systems” Qu ⁇ mica Nova, 2003, v. 26, no. 5, pp. 726-737).
  • nanocapsulate systems For the preparation of these nanoparticulate systems, different physicochemical processes can be employed, such as: (i) interfacial deposition of pre-pressed polymers, (b) salting-out, and (c) emulsification-diffusion.
  • preparation of nanocapsules stands out the interfacial deposition of ! preformed polymers, proposed by Fessi and colleagues in 1989 (FESSI, H .; et al; "Nanocapsule formation by interfacial polymer deposition following solvent displacement.” International Journal of Pharmaceutics, 1989, v. 55, no. 1, p. R1-R4), in which the polymer is dissolved in organic solvent together with the oily component, the lipophilic surfactant and the encapsulating drug or active.
  • This organic / oily phase is injected, under moderate agitation, into an aqueous phase, which is composed of water and hydrophilic surfactant. This mixture spontaneously gives rise to nanocapsules with average diameters between 200 and 50.0 nm. Finally, the organic solvent and excess water are removed.
  • hair follicles become, in the long run, the only reservoirs for non-particulate topical substances. These observations show that hair follicles are important targets for drug release, as they are surrounded by a narrow network of blood capillaries and dendritic cells (Langerhans cells).
  • PLGA poly (lactide-co-glycolide)
  • actives Hinokitiol, glycyrretinic acid and 6-benzylaminopurine
  • Fujifilm Corporation is a protein nanoparticle-based product containing an active ingredient for hair treatment;
  • the product is composed of nanoparticles made from proteins (such as casein, collagen, gelatin, albumin, among others).
  • An active ingredient that promotes hair growth is also present, including finasteride and minoxidil as one of these active ingredients.
  • WO2005000258 owned by Amorepacific Corportation, self-assembled polymeric nanoparticles comprising an amphiphilic polymer and a physiologically active ingredient; wherein the amphiphilic polymer comprises polycaprolactone as a hydrophobic block and polyethylene glycol as a hydrophilic block, and said physiologically active ingredient is comprised of the amphiphilic polymer.
  • the physiologically active ingredient may be finasteride (as specified in claim 10; see also examples 45-47) or minoxidil (see page 8, lines 8-18).
  • the motivation for the claimed improvement, that is, the use of an amphiphilic polymer in the formation of nanoparticles containing an active ingredient was to reduce the colloidal instability causing precipitation or flocculation that occurs when a hydrophobic polymer is used in the preparation of nanoparticles.
  • the present invention aims to provide * a pharmaceutical composition for the topical treatment of alopecia, said composition comprising polymeric nanoparticles, nanocapsules preferably containing finasteride, additives and pharmaceutically acceptable carrier.
  • the invention further includes a process for preparing finasteride nanocapsules suitable for a topical carrier composition for the treatment of alopecia.
  • a first embodiment of the invention relates to a topical pharmaceutical composition
  • a topical pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of polymeric nanoparticles, preferably finasteride nanocapsules, stably dispersed in a pharmaceutically acceptable carrier; and optionally containing additives.
  • said polymeric nanoparticles are formed by preparing the organic and aqueous phases, wherein: the organic phase comprises: (a) a hydrophobic polymer, (b) an oil or mixture of oils , (c) by at least one low EHL lipophilic surfactant, (d) a solvent, and (e) finasteride; and the aqueous phase comprises: (a) at least one hydrophilic surfactant, and (b) water.
  • the invention comprises the use of polymeric nanoparticles, preferably nanocapsules, for the preparation of a pharmaceutical composition for treating alopecia.
  • the process of preparing the composition of the invention comprises two stages.
  • the first stage relating to the preparation of polymeric nanoparticles, preferably nanocapsules, of the invention comprises the steps of: (i) preparing the organic phase by dissolving the hydrophobic polymer and finasteride, an oil or mixture of oils, at least one surfactant low EHL in an organic solvent; (ii) preparing the aqueous phase by mixing at least one preferably neutral hydrophilic surfactant in water; (iii) injecting the organic phase into the aqueous phase to allow instantaneous formation of nanostructures by diffusion of the organic phase into the medium, the mixture being stirred for sufficient time for such diffusion to provide adequate encapsulation of finasteride; (iv) removing the organic solvent to allow recovery of the aqueous phase containing the nanocapsules.
  • nanocapsules After preparation of the nanocapsules, they are suspended in an appropriate carrier, optionally containing additives such as dispersants, moisturizers, softening agents, thickeners, sequestrants, preservatives, antioxidants, fragrances and the like.
  • additives such as dispersants, moisturizers, softening agents, thickeners, sequestrants, preservatives, antioxidants, fragrances and the like.
  • Figure 1 shows transmission electron microscopy of finasteride-containing nanocapsules (NF25).
  • the black bar in the right corner of the image represents 0.2 micrometers.
  • Figure 2 shows finasteride concentrations over 30 days determined in aliquots of the resting nanocapsules (in gray) and in the aliquot that was shaken (in black) before collection (both from the same batch).
  • Figure 3 shows photographs of the animals on the first day (lane 1), after 15 days (lane 2) and 23 days (lane 3) of treatment for the groups treated with: NF25 (A); NEF25 (B); suspension of the drug in water (C) and water (D).
  • Figure 4 shows the histopathological analysis of the groups: NF25 (A), NEF25 (B), C2 + (C) and C- (D).
  • Figure 6 shows the particle size distribution (laser diffraction) by volume for the NPXF05 formulation.
  • Figure 7 shows Analysis of the percent drug remaining in the supernatant of the formulations (triplicate of lots) NF25 (A) and NPXF05 (B), left to stand for 30 days.
  • Figure 8 shows Photograph of animals at day 0 (photo 1) and at 15 days (photo 2) and 23 days (photo 3) treatment for the NF25 (A) and NPXF05 (B) treated groups.
  • Figure 9 shows the histopathological analysis of skin removed from the back of animals after 23 days of treatment with: NPXF05 (A) and NF25 (B).
  • Figure 10 shows the average number of mature follicles per histological field analyzed for animals treated with formulation NF25 (A) and formulation NPXF05 (B).
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition effective in the topical treatment of alopecia, said composition comprising nanoparticulate systems, preferably finasteride nanocapsules, pharmaceutically acceptable carriers; and optionally containing additives.
  • the invention also includes a process for preparing polymeric nanoparticles, preferably finasteride nanocapsules, which comprise said composition.
  • Finasteride is a synthetic azo-steroid with potent selective antagonistic action on the type 2 5a-reductase enzyme. Finasteride acts by irreversible binding to the enzyme, preventing the conversion of testosterone to its active metabolite, dihydrotestosterone (DHT).
  • DHT dihydrotestosterone
  • the use of finasteride was initially approved for prostate size reduction with associated urinary obstruction (benign prostate hyperplasia), as DHT in men, despite being responsible for prostate development, may be involved in the development of hyperplasia. However, it was observed that patients using this drug also had a reversal of alopecia.
  • the present invention avoids the disadvantages and adverse effects associated with systemic administration of finasteride by proposing a topically applied pharmaceutical composition of finasteride for the treatment of alopecia.
  • the invention is based on the preparation of finasteride nanocapsules by means of a preformed polymer interfacial deposition method in which finasteride, a hydrophobic polymer, at least one oil or the mixture of oils is first dissolved. - and at least one low EHL (Lipophilic Hydrophilic Balance) surfactant in an organic solvent to form the organic phase; and mixing at least one preferably neutral hydrophilic surfactant in water to form the aqueous phase.
  • EHL Lipophilic Hydrophilic Balance
  • the invention is particularly directed to the preparation of polymeric nanoparticles preferably carried out by the method of self-organizing nanocapsules from solutions with consequent interfacial polymer deposition, due to their insolubility in both the inner and outer phase of colloidal dispersions.
  • other methods may be used for producing the nanocapsules of the invention.
  • Said polymeric nanoparticles, preferably nanocapsules, are formed from the organic and aqueous phases, wherein: the organic phase comprises: (a) a hydrophobic polymer, (b) an oil or mixture of oils, (c) at least one low EHL lipophilic surfactant, (d) a solvent, and (e) finasteride; and the aqueous phase comprises: (a) at least one hydrophilic surfactant, and (b) water.
  • Said polymer used to encapsulate finasteride is a hydrophobic polymer selected from the group consisting of vinyl polymers, polyesters, polyamides, polyurethanes, acrylic polymers and polycarbonates.
  • the hydrophobic polymer employed is a biodegradable polymer from the group of polyesters having a melting point below 120 ° C. More preferably, the biodegradable hydrophobic polymer of the polyester group is a poly (lactide), a poly (glycolide), poly (lactide co-glycolide) copolymers, a polycaprolactone, a polyester polycaprolactone copolymer with a polyamide, with a polyurethane or a vinyl polymer, and most preferably it is poly ( ⁇ -caprolactone).
  • the oil or mixture of oils used in the organic phase of preparing the nanocapsules of the invention is selected from the group consisting of medium chain triglycerides, canola oil, soybean oil, olive oil, rice oil, grape seed oil, fish oil, flaxseed oil, and essential oils.
  • the medium chain triglycerides are used; where from the medium chain triglycerides, those from the group of capric and caprylic acid triglycerides, propylene glycol dicaprilocaprate, oleyl macrogolglycerides, lauroyl, linoleoyl and mixtures thereof are selected.
  • the essential oils are selected those from the group of linalool, farnesol and their mixtures.
  • the triglycerides of capric and caprylic acids are preferably used.
  • Unistab® S-69 is a commercially available blend of linalool and farnesol.
  • the second embodiment of the invention is intended to increase encapsulation of finasteride by the addition of a new oil to the lipid core composition of the formulation, wherein its solubility is greater than that of caprylic and capric triglyceride.
  • a commercial Unistab S-69® mixture consisting of farnesol and linalol was preferably used, in which the solubility of finasteride is approximately 90 mg / mL (HPLC assay).
  • Farnesol is a sesquiterpene alcohol and linalool is a terpene alcohol, both of which are found in Several essential oils are insoluble in water but miscible in other oils and organic solvents such as acetone and ethanol.
  • Unistab S-69® was mixed with triglycerides in a ratio of 2.3: 1 (v / v) (Unistab S-69®: triglycerides). Although this ratio, considering the finasteride saturation in Unistab S-69®, could be employed in the preparation of a formulation with drug concentration up to 2.0 mg / mL, due to Unistab S-69® volatility and consequent loss of By dragging oil during the solvent evaporation process under reduced pressure, a formulation with a finasteride concentration of 0.5 mg / ml was prepared to ensure the nanometric characteristic of the system. Such a formulation composed of a new lipid core constitutes the second embodiment of the invention.
  • Said lipophilic surfactant employed in the organic phase of preparing the polymeric nanoparticles of the invention is a low EHL surfactant, preferably having a value in the range of 3 to 6, preferably liquid or solid, selected from the group consisting of sorbitan monostearate.
  • the lipophilic surfactant used in the organic phase of the invention is sorbitan monostearate.
  • the solvent used in the organic phase of preparing the polymeric nanoparticles of the present invention is a organic solvent selected from the group consisting of acetone, dimethyl sulfoxide, dimethylformamide, N-methylpyrrolidone, dioxane, propylene carbonate, diethyl ether, tetrahydrofuran, organohalogenates, ethyl acetate, acetonitrile, methylethyl ketone, mixtures thereof, or other solvent having physicochemical properties of intermolecular interaction with water.
  • the organic solvent is preferably acetone.
  • the aqueous phase contains at least one hydrophilic surfactant for the preparation of the nanoparticles of the invention, preferably an emulsifier such as polyoxygenated polymers, or an ionic surfactant such as lecithin, or a neutral surfactant selected from the group consisting of polysorbate 20, 60 or 80 stearate.
  • the polysorbate is employed, and most preferably the polysorbate 80 is chosen for the aqueous phase of preparing the nanoparticles of the invention.
  • the aqueous suspension of polymeric nanoparticles comprises: - in the organic phase: (a) from 0.001% to 80.0% (w / w) finasteride, (b) from 0.01% to 30.0% (w / w) of a hydrophobic polymer, (c) from 0.01% to 50.0% (w / w) of an oil or mixture of oils, (d) from 0.01% to 50.0% (w / w) at least one low EHL lipophilic surfactant, preferably solid, and (e) from 10% to 80% (w / w) of an organic solvent; and
  • - in the aqueous phase (a) from 0.05% to 20.0% (w / w) of at least one hydrophilic surfactant, and (b) from 10% to 90% (w / w) water.
  • polymeric nanoparticles preferably nanocapsules, comprise:
  • - in the aqueous phase (a) from 0.05% to 20.0% (w / w) of at least one hydrophilic surfactant, preferably polysorbate; and (b) from 10% to 90% (w / w) of water.
  • the pharmaceutical composition for treating alopecia contains: (A) the nanocapsules of the present invention comprising: (a) from 0.01% to 2.5% (w / w) finasteride; (b) from 0.1% to 10.0% (w / w) of a hydrophobic polymer, preferably poly ( ⁇ -caprolactone); (c) from 0.1% to 5.0% (w / w) of an oil and / or mixture of oils, preferably medium chain triglycerides and / or the medium chain triglyceride mixture with Unistab® S-69 ; (d) from 0.1% to 5.0% (w / w) of at least one low EHL lipophilic surfactant, preferably sorbitan monostearate; (e) from 0.001% to 10% (w / w) of a hydrophilic surfactant, preferably polysorbate 80; and (B) a pharmaceutically acceptable carrier, wherein the The amounts of the nanocapsule components are in percent of the final formulation and said nanocapsules are
  • a preferred pharmaceutical composition for treating alopecia of the present invention comprises from 0.01 to 1.0% (w / w) finasteride, in the form of polymeric nanoparticles, preferably in the form of nanocapsules, dispersed in a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the pharmaceutical composition for treating alopecia optionally contains additives such as dispersants, surfactants, moisturizing agents, emollient agents, thickeners, sequestrants, preservatives, antioxidants, fragrances and the like.
  • EXAMPLE 1 Nanocapsules of the Invention Containing 0.25% Finasteride - First Embodiment of the Invention
  • EXAMPLE 1.1 Preparation of Finasteride Nanocapsules According to a First Embodiment of the Invention (NF25) Finasteride nanocapsule suspensions were prepared from an organic phase and an aqueous phase using the composition described in Table 1.
  • the polymer (Poly ( ⁇ -caprolactone) was solubilized in the organic phase together with finasteride, capric and caprylic acid triglycerides and low surfactant EHL (sorbitan monostearate) under moderate heating between 20 ° C and 40 ° C. preferably at 40 ° C employing acetone as a solvent.
  • the neutral surfactant (polysorbate 80) was dissolved in water to form the aqueous phase. After solubilization of all components of the organic phase and the aqueous phase, the organic phase was injected with a funnel into the aqueous phase.
  • the primary emulsion of nanocapsules of the invention After formation of the primary emulsion of nanocapsules of the invention, it was kept under moderate agitation for 10 minutes and then concentrated to a final volume of 100 ml in a rotary evaporator under reduced pressure in a thermostated bath in the 10 ° evaporation flask. C and 80 ° C, preferably between 30 ° C and 45 ° C for solvent and excess water removal, to adjust the final finasteride concentration. This formulation was called NF25.
  • a finasteride nanoemulsion formulation at a concentration of 0.25% was also prepared.
  • the preparation method was identical to that of finasteride nanocapsules (NF25), but excluding the polymer (Poly ( ⁇ -caprolactone)).
  • Table 2 presents the composition of this formulation, which was named NEF25.
  • pH Determination The pH determination was performed in a potentiometer calibrated with pH 4.0 and 7.0 buffer solution, directly in the suspensions.
  • the zeta potential of nanocapsule suspensions was determined using the electrophoresis methodology using the Zetasizer® nano-ZS model ZEN 3600 equipment (alvern, USA). Determination was performed from 500-fold dilutions in 10 mM NaCl solution (filtered through 0.45 ⁇ ⁇ filter, Millipore Millex-HP) and the results were obtained by averaging three determinations.
  • the viscosity of the suspensions was measured using a vibrational viscometer (SV-10, A&D Company, Japan). For this, the viscosity was measured directly in the suspensions for 30 seconds with data collection every 5 seconds at a temperature of 25 ⁇ 1.0 ° C.
  • Table 3 shows the values obtained for pH, diameter, polydispersity index, zeta potential and viscosity of the finasteride nanocapsule (NF25) formulation of the first embodiment of the invention.
  • the formulations (batch triplicate) were macroscopically homogeneous, milky in appearance and, when diluted, showed a bluish tint Tyndall), evidencing the presence of at least one nanoparticulate population.
  • the pH of the finasteride-containing nanocapsule (NF25) suspension was around 4.5. Additionally, this pH range is suitable for cutaneous administration according to the literature (SZNITOWSKA et al., 2001).
  • the suspensions had a diameter of approximately 220 nm with a polydispersion index of 0.14.
  • one of the few reports in the literature of particulate systems for follicular topical application containing finasteride refers to microparticulate formulations of liposomes and nisosomes with particle sizes of 1.9 and 4.4 ⁇ m, respectively (TABBAKHIAN et al. ., 2006).
  • formulations containing Finasteride (NF25) developed in the present invention have a small diameter (nanometer scale) and narrow particle distribution, as demonstrated by the low polydispersity index ( ⁇ 0.2).
  • the mean zeta potential (for the triplicate of formulations) was approximately -14 mV.
  • EXAMPLE 1.5 Study of the Finasteride Nanocapsule Stability of the First Embodiment of the Invention To determine the stability of the finasteride nanocapsules (NF25), the following were evaluated: THE . Finasteride assay in nanocapsules
  • Nanocapsule suspensions were treated with ultrasound acetonitrile (for 30 minutes) causing dissolution of the formulation components.
  • the determination of finasteride was performed by high performance liquid chromatography (HPLC).
  • nanocrystals When the concentration of a drug exceeds its solubility in the oil used as the nanocapsule nucleus, simultaneous formation of nanocrystals may occur, which may have the same hydrodynamic radius as the nanocapsules formed, thus generating a narrow size distribution that does not differ in size. relation to nanocapsules. Additionally, over time, such crystals may increase in size and precipitate.
  • the stability monitoring of the formulation and the identification of the possible simultaneous presence of nanocrystals were performed by quantifying the finasteride in the suspensions using two techniques. Each batch was fractionated into two samples: one was left standing and the other was left free until analysis, when it was agitated. For analysis, an aliquot (at times 0 and 30 days) of the resting sample supernatant was removed and an aliquot of the free sample (after vortexing, 15 seconds), so that it was possible to differentiate the presence of precipitated crystals by reducing drug content in the resting sample, and possible drug degradation through the aliquot of the stirred sample (assessed by HPLC).
  • B6CBAF1 hybrids For the experiments were used female mice, B6CBAF1 hybrids, from the vivarium of the University of Vale do Itaja ⁇ (UNIVALI).
  • the B6CBAF1 mouse strain comes from the cross between the C57BL female and the CBA male.
  • the hybrid B6CBAF1 has a gene mutation that leads the animal to develop a pathological condition of androgenic baldness when it receives daily testosterone or dihydrotestosterone supplements. Androgenic alopecia occurs spontaneously and is noticeable through thinning of the dorsal hair.
  • the animals were under conventional temperature and relative humidity conditions throughout the experiment, with light and dark cycle of 12 hours each. All animals received subcutaneous injections of 1% testosterone dispersed in a mixture of polysorbate 80 in water (100 mg / mL) at a dose of 1 mg / day.
  • the animals received only subcutaneous testosterone testosterone injections (1).
  • all animals had their backs shaved with Veet® depilatory cream for complete hair removal.
  • daily injections of testosterone were maintained and a daily topical formulation application was added to the treatment, depending on the treatment group (placebo, treatment, controls).
  • the groups were treated with the following formulations: water (negative control), finasteride suspension in water and polysorbate 80 (positive control 1), finasteride nanoemulsion (NEF25 - positive control 2) and finasteride nanocapsules (NF25).
  • the slides were prepared and stained with hematoxylin eosin.
  • the analysis (Zeiss Light Microscope - Primo Star coupled to the Canon Power Shot camera, PC1250) was then analyzed to determine the growth phase in which the hair was.
  • n 12 fields
  • NEF25 free and finasteride nanoemulsion
  • the formulation of finasteride nanocapsules (NF25) presented 82 ⁇ 14 cells per field, being significantly higher (ANOVA, 0.05) than the others.
  • ANOVA, 0.05 topically formulating finasteride nanocapsules (NF25) accelerate hair growth and follicle development with predisposition to androgenic baldness, as finasteride nanoemulsion formulation (NEF25) did not yield satisfactory results.
  • EXAMPLE 2 Nanocapsules of the Invention Containing 0.05% Finasteride - Second Embodiment of the Invention
  • EXAMPLE 2.1 Preparation of Finasteride Nanocapsules According to a Second Embodiment of the Invention (NPXF05) Suspensions of finasteride nanocapsules were prepared from an organic phase and an aqueous phase using the composition described in Table 5.
  • the polymer (Poly ( ⁇ -caprolactone) was solubilized in the organic phase together with finasteride, medium chain triglycerides, Unistab S-69 ® and low EHL (sorbitan monostearate) surfactant under moderate heating at 20 ° C. C and 40 ° C, preferably the 40 ° C using acetone as a solvent.
  • the neutral surfactant (polysorbate 80) was dissolved in water to form the aqueous phase. After solubilization of all components of the organic phase and the aqueous phase, the organic phase was injected with a funnel into the aqueous phase.
  • the pH determination was performed in a calibrated potentiometer with pH 4.0 and 7.0 buffer solution, directly in the suspensions.
  • Zetasizer® nano-ZS model ZEN 3600, Malvern, USA was used to determine the diameter and polydispersion of suspended nanoparticles by dynamic light scattering. For this, the samples They were diluted in milliQ® water (0.45 ⁇ m filtered, Illipore Millex-HP filter) 500 times at room temperature and the results determined by averaging three replicates. ⁇ . Determination of particle size distribution by laser diffraction
  • laser diffraction analyzes were performed (Mastersizer 2000, Malvern, UK), a technique capable of measuring particles in a wide range of diameters (0.02 to 2000 ⁇ ). Analyzes were performed by adding a sample of the formulation to the dispersion fixture containing about 100 mL of distilled water. The amount added was sufficient to achieve an obscuration between 0.02 and 0.10. To avoid interference the background signal was measured before analysis.
  • the zeta potential of nanocapsule suspensions was determined using the electrophoresis methodology using the Zetasizer® nano-ZS model ZEN 3600 equipment (Malvern, USA). Determination was performed from 500-fold dilutions in 10 mM NaCl solution (0.45 ⁇ filter, Millipore Millex-HP) and results were obtained by averaging three determinations.
  • Viscosity The viscosity of the suspensions was measured using a vibrational viscometer (SV-10, A & D Company, Japan). For this, the viscosity was measured directly in the suspensions for 30 seconds with data collection every 5 seconds at a temperature of 25 ⁇ 1.0 ° C.
  • the formulation of nanocapsules prepared according to the second embodiment of the invention was macroscopically homogeneous, with the typical odor of Unistab S-69®.
  • Table 6 shows the values obtained from pH, diameter, polydispersity index, zeta potential and viscosity of the finasteride nanocapsule formulation (NPXF05) of the second embodiment of the invention.
  • Table 6 shows the results obtained from pH, diameter, polydispersity index, zeta potential and viscosity of the finasteride nanocapsule formulation (NPXF05) of the second embodiment of the invention.
  • Table 6 shows the values obtained from pH, diameter, polydispersity index, zeta potential and viscosity of the finasteride nanocapsule formulation (NPXF05) of the second embodiment of the invention.
  • NPXF05 finasteride nanocapsule formulation
  • Nanocapsule suspensions were treated with ultrasound acetonitrile (for 30 minutes) causing dissolution of the formulation components.
  • the determination of finasteride was performed by high performance liquid chromatography (HPLC).
  • the quantification of finasteride by HPLC of a newly prepared formulation was performed.
  • the formulation was Divided into two samples, the first was allowed to stand, the second was stirred prior to dosing, performed after 30 days of preparation. From the sample kept at rest, only one aliquot of the supernatant was collected (avoiding any movement); From the other sample, an aliquot (referring to 20% of the supernatant) was collected after vortexing for 15 seconds.
  • mice Female mice, hybrid B6CBAF1, from the vivarium of the University of Vale do Itaja ⁇ (UNIVALI). The animals were under conventional temperature and relative humidity conditions during the experiment, with light and dark cycle of 12 hours each. All animals received subcutaneous injections of 1% testosterone dispersed in a mixture of polysorbate 80 in water (100 mg.mL-1) at a dose of 1 mg / day. Five injections were given per week for 4 weeks.
  • the slides were prepared and stained with hematoxylin eosin.
  • the analysis (Zeiss Light Microscope - Primo Star coupled to the Canon Power Shot camera, PC1250) was then analyzed to determine the growth phase in which the hair was.
  • FIG. 9 presents the results of the histopathological analysis of the groups.
  • the nanocapsule formulation prepared with the combination of Unistab S-69® and caprylic and capric acid triglyceride (NPXF05) showed higher growth than finasteride nanocapsule formulations (NF25).
  • Figure 10 shows the average number of mature follicles by histological fields analyzed. These analyzes revealed that the NPXF05 formulation presented an accelerated growth and apparently higher than that of the NF25 formulation, despite presenting a smaller number of mature follicles per analyzed histological field.
  • Finasteride nanocapsules are prepared as described in examples 1.1 and 2.1. Topical solutions are prepared resulting in the formulations of Table 7.
  • Table 7 Formulations as a topical solution containing the nanocapsule suspensions containing 0.25% finasteride (NF25 - first embodiment) and containing 0.05% finasteride (NPXF05 - second embodiment)
  • Finasteride nanocapsules are prepared as described in examples 1.1 and 2.1.
  • Table 8 Topical gel formulas containing nanocapsule suspensions containing 0.25% finasteride (NF25 - first embodiment) and containing 0.05% finasteride (NPXF05 - second embodiment)
  • EXAMPLE 3.C Formulation as a topical lotion
  • Phase 1 is initially prepared as described in Example 3.A using the phasing composition of Table 9. Separately, melt the components of phase 2 in a 50 ° C water bath and remove from heating after melting. Add phase 3 to phase 1 and disperse under constant magnetic stirring. Add this mixture of phases 1 and 3 over the molten and cooled phase 2 to 40 ° C under moderate mechanical agitation to avoid air incorporation.
  • Table 9 Formulation as a topical lotion containing nanocapsule suspensions containing 0.25% finasteride and containing 0.1% finasteride

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Description

NANOPARTÍCULA POLIMÉRICA DE FINASTERIDA, SUSPENSÃO AQUOSA
7
CONTENDO A MESMA, COMPOSIÇÃO PARA TRATAMENTO DE ALOPECIA, PROCESSO DE PREPARAÇÃO DE DITA COMPOSIÇÃO, E SEU USO
CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção se refere a uma composição farmacêutica, de veiculação tópica, para o tratamento de alopecia, dita composição compreendendo nanoparticulas poliméricas, preferencialmetne nanocápsulas , contendo finasterida, aditivos e veiculo farmaceuticamente aceitáveis, bem como uso das nanoparticulas para preparar dita composição para o tratamento da alopecia. A invenção ainda inclui um processo de preparação de nanocápsulas de finasterida apropriadas para uma composição de veiculação tópica para o tratamento de alopecia
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
A queda capilar, também chamada de calvície, pode se manifestar de formas variadas. Ela pode ser irreversível nos casos classificados como alopecias cicatriciais , onde há a destruição do folículo capilar; ou reversível nos casos não-cicatriciais que têm causa variada, podendo ser originária de tratamento farmacológico, de tipo de alimentação, de estresse fisiológico ou psicológico, de infecção fúngica, de quimioterapia ou por herança genética. Devido a isso, diversos tratamentos farmacológicos e não- farmacológicos (implantes e aplicações de laser) são utilizados na tentativa de reverter essa situação.
Na terapêutica capilar, para que um fármaco tenha a ação desejada, é necessário que ele atinja o folículo capilar (na epiderme) , local onde se encontra a enzima responsável pelo desencadeamento da patologia, sem permear para os capilares sanguíneos que irrigam o folículo piloso (evitando uma ação sistémica) . Assim, para que uma formulação seja efetiva, é necessário que seja capaz de promover a penetração e retenção do fármaco em seu local de ação (DRAKE, L., et ai.; "The effects of finasteride on scalp skin and serum androgen leveis in men with androgenetic alopecia". Journal of the American Academy of Dermatology, 1999, v. 41, n. 4, p. 550-554) .
A alopecia androgênica é a transformação do folículo capilar maduro (terminal) em um folículo imaturo (velus) através de sucessivos ciclos capilares com um encurtamento no tempo da fase anágena. Dessa forma, devido à redução no tempo de crescimento e de desenvolvimento do fio, ele acaba se tornando progressivamente mais curto, mais fino e, muitas vezes, sem coloração (INUI, S.; ITAMI, S . ; "Molecular basis of androgenetic alopecia: From androgen to paracrine mediators through dermal papilla". Journal Of Dermatological Science, 2011, v. 61, p.1-6) . Este é o tipo de alopecia mais comum e que atinge principalmente homens, estando ligada, entre outros fatores, à regulação dos hormônios sexuais. Um maior entendimento da calvície androgênica veio com os estudos de Hamilton (1942) que descreveu o padrão de perda capilar e a fisiologia a um processo ligado a uma predisposição genética do folículo capilar que ocorre sob a influência dos hormônios andrógenos (TRUEB, R.M.; "Molecular mechanisms of androgenetic alopecia". Experimental Gerontology, 2002, v. 37, n. 8-9, p. 981-990). Contudo, não existe uma correlação entre a alopecia androgênica e os níveis de testosterona, testosterona livre e de testosterona biodisponível . É provável que as bases patogênicas da calvície sejam mediadas através de sinalizações intracelulares no folículo capilar (INUI, S.; ITAMI, S . ; "Molecular basis of androgenetic alopecia: From androgen to paracrine mediators through dermal papilla". Journal Of Dermatological Science, 2011, v. 61, p.1-6) . Através da ação da enzima 5oí-redutase, a testosterona é convertida em um hormônio mais potente, a diidrotestosterona (DHT) . Acredita-se que sua ação seja superior à da testosterona por dois motivos principais: (i) a DHT não pode ser convertida em estrógeno pela aromatase, permanecendo apenas sua atividade puramente androgênica, (ii) estudos in vitro demonstram que a DHT liga-se com mais afinidade ao receptor androgênico que a testosterona (LIU, S.; YAMAUCHI, H.; "Different patterns of 5a-reductase expression, cellular distribution, and testosterone metabolism in human follicular dermal papilla cells". Biochemical and Biophysical Research Communications, 2008, 368 p.858-864) . A ação desses hormônios andrógenos se dá pela difusão dos mesmos pela membrana celular com a finalidade de se ligar ao receptor androgênico intracelular. Com essa ligação, o complexo hormônio- receptor sofre mudanças conformacionais , ocorrendo, assim, uma ligação do complexo com o sítio promotor no DNA, desencadeando a produção de RNAs mensageiros que irão transcrever a resposta genética (INUI, S.; ITAMI, S . ; "Molecular basis of androgenetic alopecia: From androgen to paracrine mediators through dermal papilla". Journal Of Dermatological Science, 2011, v. 61, p.1-6). Na ligação da DHT com o receptor androgêníco presente no foliculo capilar, a resposta desenvolvida é a diminuição da fase anágena do ciclo de crescimento capilar e, dessa forma, o fio de cabelo passa precocemente para a fase telógena (ELLIS, J. A.; HARRAP, S. B . ; "The genetics of androgenetic alopecia". Clinics in Dermatology, 2001, v. 19, p. 149- 154) .
A alopecia androgênica apresenta um padrão na queda capilar, o que facilita o seu diagnóstico e facilmente a diferencia dos demais tipos. Como padrão tem-se inicialmente a perda dos fios na parte frontal ou no vértex apenas, podendo expandir-se para as demais regiões. O grau da alopecia pode ser determinado através da escala de Hamilton-Norwood . Essa escala aponta três tipos de padrão de perda capilar: padrão vértex (onde a perda dos fios se inicia na parte posterior) , padrão anterior (onde a perda dos fios se inicia na parte frontal) e o padrão normal (iniciando a perda tanto pela parte frontal quanto pela parte posterior) , sendo todos os padrões divididos em sete estágios de perda dos fios (SINCLAIR, R.D.; "Male androgenetic alopecia". The Journal of Men 1 s Health & Gender, 2004, v. 1, n. 4, p. 319-327).
Atualmente, o tratamento da alopecia pode ser tanto tópico quanto sistémico. Entre os medicamentos aprovados pela ANVISA (Brasil), podem ser citados: (i) como sistémico, o medicamento composto de finasterida (1 mg) de uso oral, comercializado sob o nome de marca Propecia®, que atua como bloqueadora do hormônio DHT; e (ii) como tópicos: (a) o medicamento a base de minoxidil, comercializado sob o nome de marca Regain®/Rogain® na forma de mousse a 2% (para mulheres) e a 5% (para homens) e (b) o medicamento baseado em alfaestradiol, comercializado sob o nome de marca Avieis®, na forma de solução a 0,025%.
O principio ativo ( finasterida) apresenta diversas dificuldades de estabilidade, biodisponibilidade e de formulação que são resultantes de sua propriedade fisico- quimica e biológica/fisiológica. Para resolver ou reduzir as características negativas do princípio ativo, pesquisou- se alternativas para "proteger contra sua degradação" ou para "aumentar a sua solubilidade". O desenvolvimento de novos sistemas de liberação de fármacos tem sido alvo de aperfeiçoamentos que visam à melhoria na eficácia terapêutica e segurança no uso, através da alteração de aspectos farmacocinéticos e farmacodinâmicos . Dentre os sistemas coloidais de liberação de fármacos, destacam-se as nanopartícuias poliméricas e lipossomas (Avnesh Kumari, Sudesh Kumar Yadav, Subhash C. Yadav, Biodegradable polymeric nanoparticles based drugdelivery systems, Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, Volume 75, Issue 1, 1 January 2010, Pages 1- 18; Vladimir P. Torchilin, RECENT ADVANCES WITH LIPOSOMES AS PHARMACEUTICAL CARRIERS , NATURE REVIEWS, VOLUME 4, FEBRUARY 2005, p. 145) . Devido às suas potencialidades terapêuticas e à maior estabilidade durante o armazenamento e no contato com os fluidos biológicos, as nanopartículas poliméricas, constituídas por polímeros biodegradáveis, têm atraído maior atenção dos pesquisadores quando comparadas aos lipossomas (SCHAFFAZICK, S. H., et al.; "Caracterização e estabilidade físico-química de sistemas poliméricos nanoparticulados para a administração de fármacos". Química Nova, 2003, v. 26, n. 5, p. 726-737) .
As nanopartículas poliméricas são sistemas coloidais carreadores de fármacos que apresentam diâmetros entre 10 e 1000 nm, sendo divididas, conforme suas arquiteturas supramoleculares , em vesiculares ou matriciais. Nanocápsulas (vesiculares) apresentam um núcleo oleoso envolvido por uma matriz polimérica, podendo o fármaco estar disperso no núcleo e/ou adsorvido à parede polimérica. Nanoesferas (matriciais) não apresentam o núcleo oleoso, apenas a estrutura polimérica, assim o fármaco pode estar retido ou adsorvido na matriz polimérica. As nanopartículas constituídas de polímero biodegradável têm sido preferidas por apresentarem maior potencialidade terapêutica, alta estabilidade nos fluidos biológicos e durante o armazenamento (SCHAFFAZICK, S. H., et al.; "Caracterização e estabilidade físico-química de sistemas poliméricos nanoparticulados para a administração de fármacos". Química Nova, 2003, v. 26, n. 5, p. 726-737).
Para a preparação desses sistemas nanoparticulados, podem ser empregados diferentes processos físico-químicos, tais como: (i) deposição interfacial de polímeros pré- fprmados, (b) salting-out, e a (c) emulsificação-difusão Entre as principais técnicas para preparação de nanocápsulas destaca-se a deposição interfacial de ! polímeros pré-formados , proposta por Fessi e colaboradores em 1989 (FESSI, H.; et al; "Nanocapsule formation by interfacial polymer deposition following solvent displacement" . International Journal of Pharmaceutics , 1989, v. 55, n. 1, p. R1-R4), na qual o polímero é dissolvido em solvente orgânico juntamente com o componente oleoso, o tensoativo lipofílico e o fármaco ou ativo a encapsular. Esta fase orgânica/oleosa é injetada, sob agitação moderada, sobre uma fase aquosa, a qual é composta de água e tensoativo hidrofílico. Esta mistura origina, de forma espontânea, as nanocápsulas , com diâmetros médios situados entre 200 e 50.0 nm. Finalmente, o solvente orgânico e o excesso de água são removidos.
A maioria dos produtos de uso tópico disponíveis para o tratamento da alopecia consiste de uma formulação com os princípios ativos dissolvidos em uma solução hidroalcoólica . Entretanto, devido à baixa permeabilidade de alguns fármacos através da camada de queratina, somente uma fração da dose aplicada atinge o local de ação, penetrando nos poros capilares e folículos (TSUJIMOTO, H., et al.; "Evaluation of the permeability of hair growing ingredient encapsulated PLGA nanospheres to hair follicles and their hair growing effects". Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2007, v. 17, p. 4771-4777) . Como resultado, o crescimento capilar com o uso destes produtos não supera as expectativas dos consumidores, levando à falta de adesão ao tratamento. Estudos recentes confirmaram •a hipótese de que nanopartícuias podem penetrar eficientemente nos folículos pilosos (LADEMANN, J. , et al.; "Nanoparticles - An efficient carrier for drug delivery into the hair follicles". European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics , 2007, v. 66, n. 2, p. 159-164) alcançando estruturas funcionais profundas onde permanecem estocadas por alguns dias. No caso de substâncias não- particuladas , tais efeitos a longo prazo não foram observados nos folículos pilosos ou no estrato córneo. A princípio, o estrato córneo não possui a característica de reservatório de substâncias topicamente aplicadas já que tais substâncias permanecem localizadas na superfície da pele ou nas camadas celulares superiores (que são continuamente removidas por descamação) . Portanto, os folículos pilosos tornam-se, em longo prazo, os únicos reservatórios para substâncias não-particuladas de uso tópico. Estas observações mostram que os folículos pilosos são importantes alvos para liberação de fármacos, uma vez que estão rodeados por uma estreita rede de capilares sanguíneos e células dendríticas (células de Langerhans) .
Por exemplo, o efeito de nanoesferas de poli (lactideo- co-glicolideo) (PLGA) contendo três diferentes ativos (Hinokitiol, ácido glicirretínico e 6-benzilaminopurina) para crescimento capilar foi avaliado in vivo (TSUJIMOTO, H., et al.; "Evaluation of the permeability of hair growing ingredient encapsulated PLGA nanospheres to hair follicles and their hair growing effects". Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2007, v. 17, p. 4771-4777) . Analisando a intensidade de fluorescência destes princípios ativos em biópsias de couro cabeludo humano, os autores verificaram que as nanoesferas exerceram um efeito de permeabilidade nos poros 2 a 2,5 vezes maior quando comparadas ao grupo controle dos mesmos ingredientes ativos em uma solução tampão (PBS) . Também foi possível visualizar um aumento na atividade capilar, cujo ciclo passou da fase de repouso para a fase de crescimento, sugerindo que nanoesferas de PLGA podem ser promissores carreadores de fármacos nos folículos pilosos.
Até o presente momento, poucos trabalhos da literatura relatam a veiculação da finasterida em sistemas nanoparticulados . No documento US20Ò'60204588, de titularidade de Elan Pharma International Limited, é descrita uma composição farmacêutica contendo finasterida nanoparticulada (possuindo tamanho médio inferior a 2000nm) e pelo menos um estabilizante de superfície, que pode estar adsorvido ou associado com a superfície do princípio ativo. Quanto ao método de preparação da formulação nanoparticulada de finasterida, este compreende em dispersar a finasterida em um meio de dispersão líquido, e mecanicamente reduzir o tamanho da partícula. O pedido de patente US20110117045, de titularidade de
Fujifilm Corporation, trata de um produto à base de nanopartículas de proteína contendo um ingrediente ativo para o tratamento capilar; o produto é composto por nanopartículas produzidas a partir de proteínas (como caseína, colágeno, gelatina, albumina, entre outros) estando também presente um ingrediente ativo que promove o crescimento capilar, sendo incluída a finasterida e minoxidil como um desses ingredientes ativos. No documento WO2005000258, de titularidade de Amorepacific Corportation, são descritas nanoparticulas poliméricas auto-montadas compreendendo um polímero anfifílico e um ingrediente fisiologicamente ativo; sendo que o polímero anfifílico compreende policaprolactona como bloco hidrofóbico e polietilenoglicol como bloco hidrofílico, e o dito ingrediente fisiologicamente ativo está compreendido pelo polímero anfifílico. O ingrediente fisiologicamente ativo pode ser a finasterida (como especificado na reivindicação 10; ver também exemplos 45- 47) ou o minoxidil (ver página 8, linhas 8-18) . A motivação do aperfeiçoamento reivindicado, ou seja, o emprego de um polímero anfifílico na formação de nanoparticulas contendo um ingrediente ativo foi a de reduzir a instabilidade coloidal causadora da precipitação ou floculação que ocorre quando é utilizado um polímero hidrofóbico na preparação das nanoparticulas .
No entanto, é desejável o emprego de um homopolímero que é tecnicamente menos complexo, e mais simples de se obter do que um copolímero que na verdade é uma estrutura em blocos de polímeros em que a proporção das partes hidrofílica e lipofílica é difícil de controlar, acarretando, assim, dificuldades posteriores na formação de nanoparticulas, especialmente de nanocápsulas . Além disso, o uso de copolímeros em bloco que são preparados em proporção 1:1 das porções hidrofílicas e lipofílicas acarreta a falta de flexibilidade no equilíbrio hidrófilo-lipófilo (EHL) o que pode limitar a qualidade nanotecnológica da formulação. A possibilidade de variação da concentração do estabilizante (tensoativo hidrofilico ou emulsionante ) é uma vantagem na preparação de nanoparticulas . Os homopolimeros lipofilicos podem ser formulados como nanoparticulas empregando-se estabilizantes em proporções variadas na formulação, propiciando uma otimização da estabilidade física dos coloides nanotecnológicos .
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
A presente invenção objetiva proporcionar* uma composição farmacêutica para o tratamento tópico da alopecia, dita composição compreendendo nanoparticulas poliméricas, preferencialmente nanocápsulas , contendo finasterida, aditivos e veículo farmaceuticamente aceitáveis. A invenção ainda inclui um processo de preparação de nanocápsulas de finasterida apropriadas para uma composição de veiculação tópica para o tratamento de alopecia.
Uma primeira concretização da invenção diz respeito a uma composição farmacêutica de uso tópico compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de nanoparticulas poliméricas, preferencialmente nanocápsulas de finasterida, estavelmente dispersas em um veículo farmaceuticamente aceitável; e opcionalmente contendo aditivos.
Em uma segunda concretização, as ditas nanoparticulas poliméricas, preferencialmente nanocápsulas, são formadas por meio da preparação das fases orgânica e aquosa, em que: a Fase orgânica compreende: (a) um polímero hidrofóbico, (b) um óleo ou a mistura de óleos, (c) pelo menos um tensoativo lipofilico de baixo EHL, (d) um solvente, e (e) finasterida; e a Fase aquosa compreende: (a) pelo menos um tensoativo hidrofilico, e (b) água. Em uma terceira concretização, a invenção compreende o uso de nanoparticulas poliméricas, preferencialmente nanocápsulas, para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento da alopecia.
O processo de preparação da composição da invenção compreende dois estágios. O primeiro estágio, referente à preparação das nanoparticulas poliméricas, preferencialmente as nanocápsulas, da invenção compreende as etapas de: (i) preparação da fase orgânica pela dissolução do polímero hidrofóbico e da finasterida, um óleo ou a mistura de óleos, pelo menos um tensoativo de baixo EHL, em um solvente orgânico; (ii) preparação da fase aquosa pela mistura, de pelo menos um tensoativo hidrofilico, preferencialmente neutro, em água; (iii) injeção da fase orgânica na fase aquosa para permitir a formação instantânea de nanoestruturas pela difusão da fase orgânica no meio, sendo a mistura mantida sob agitação por um tempo suficiente para que tal difusão propicie o encapsulamento adequado da finasterida; (iv) remoção do solvente orgânico para permitir a recuperação da fase aquosa contendo as nanocápsulas .
Após a preparação das nanocápsulas, elas são suspensas em um veículo apropriado, opcionalmente, contendo aditivos, tais como, dispersantes, hidratantes, agentes emolientes, espessantes, sequestrantes , conservantes, antioxidantes, fragrâncias e semelhantes.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
A Figura 1 mostra microscopia eletrônica de transmissão das nanocápsulas contendo finasterida (NF25) . A barra preta no canto direito da imagem representa 0,2 micrômetros .
A Figura 2 mostra concentrações de finasterida ao longo de 30 dias determinadas em aliquotas das nanocápsulas em repouso (em cinza) e em aliquota que foi agitada (em preto) antes de proceder à coleta (ambas de um mesmo lote) .
A Figura 3 mostra fotografias dos animais no primeiro dia (coluna 1), após 15 dias (coluna 2) e 23 dias (coluna 3) de tratamento para os grupos tratados com: NF25 (A) ; NEF25 (B) ; suspensão do fármaco em água (C) e água (D) .
A Figura 4 mostra a análise histopatológica dos grupos: NF25 (A), NEF25 (B) , C2+ (C) e C- (D).
A Figura 5 mostra o número de folículos maduros por campo histológico analisado (n=12) para os tratamentos C- (água) , C2+ (fármaco livre), NEF25 (nanoemulsão) e NF25 (nanocápsulas) .
A Figura 6 mostra a distribuição do tamanho de partícula (difratometria de laser) por volume para a formulação NPXF05.
A Figura 7 mostra a Análise da percentagem de fármaco remanescente no sobrenadante das formulações (triplicata de lotes) NF25 (A) e NPXF05 (B) , deixadas em repouso por 30 dias .
A Figura 8 mostra a Fotografia dos animais no dia 0 (foto 1) e com 15 dias (foto 2) e 23 dias (foto 3) de tratamento para os grupos tratados com NF25 (A) e NPXF05 (B) .
A Figura 9 mostra a análise histopatológica da pele retirada do dorso dos animais após 23 dias de tratamento com: NPXF05 (A) e NF25 (B) . A Figura 10 mostra o número médio de folículos maduros por campo histológico analisado para os animais tratados com a formulação NF25 (A) e com a formulação NPXF05 (B) .
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica eficaz no tratamento tópico de alopecia, dita composição compreendendo sistemas nanoparticulados, preferencialmente nanocápsulas de finasterida, veículos farmaceuticamente aceitáveis; e opcionalmente contendo aditivos.
A invenção também inclui um processo de preparação das nanopartículas poliméricas, preferencialmente nanocápsulas de finasterida, que integram dita composição.
A finasterida é um azo-esteróide sintético com potente ação antagonista seletivã sobre a enzima 5a-redutase do tipo 2. A finasterida age pela ligação irreversível à enzima, impedindo a conversão da testosterona ao seu metabólito ativo, a diidrotestosterona (DHT) . O uso da finasterida foi inicialmente aprovado para a redução de tamanho da próstata com obstrução urinária associada (hiperplasia benigna de próstata) , visto que a DHT em homens, apesar de ser responsável pelo desenvolvimento da próstata, pode estar envolvida no desenvolvimento de hiperplasia. Contudo, observou-se que os pacientes que faziam uso desse fármaco também apresentavam uma reversão do quadro de alopecia. Por esta razão, estudos começaram a ser desenvolvidos para investigar o potencial da finasterida no tratamento da calvície (SINCLAIR, R. D.; "Male androgenetic alopecia: part II". The Journal of Men's Health & Gender, 2005, v. 2, n. 1, p. 38-44). Um estudo realizado por Kaufman e colaboradores (2008), com 1553 homens entre 18 e 41 anos, avaliou a ação da finasterida na dose de 1 mg por dia frente a um placebo, durante cinco anos. Como resultado o tratamento com finasterida levou a um decréscimo na probabilidade da perda visível de cabelo, comparado com o aumento da probabilidade da perda visível de cabelos nos pacientes tratados com placebo. Nesse estudo, ao final de 5 anos, 75% dos pacientes tratados com placebo desenvolveram calvície e apenas 10% dos pacientes tratados com finasterida desenvolveram a patologia. Uma revisão sobre a segurança e eficácia da utilização da finasterida para tratamento da alopecia androgênica em mulheres mostrou, como conclusão, que esse fármaco pode ser utilizado de forma segura e eficaz nos casos em que o tratamento tópico com minoxidil não é efetivo (STOUT, S. M . ; STUMPF, J. L.; "Finasteride Treatment of Hair Loss in Women" . The Annals of Pharmacotherapy, 2010, v. 44, n. 6, p.1090-1097) .
A presente invenção evita as desvantagens e efeitos adversos associados com a administração sistémica de finasterida, ao propor uma composição farmacêutica de aplicação tópica de finasterida para o tratamento de alopecia .
A invenção se baseia na preparação de nanocápsulas de finasterida, por meio de um método de deposição interfacial de polímero pré-formado, no qual é primeiramente feita a dissolução da finasterida, de um polímero hidrofóbico, de pelo menos um óleo ou a mistura de óleos,- e de pelo menos um tensoativo de baixo EHL (Equilíbrio Hidrófilo Lipófilo) , em um solvente orgânico, para formar a fase orgânica; e a mistura de pelo menos um tensoativo hidrofílico, preferencialmente neutro, em água, para formar a fase aquosa .
A invenção é particularmente dirigida para a preparação de nanopartículas poliméricas realizada, preferencialmente, pelo método de auto-organização de nanocápsulas a partir de soluções com consequente deposição interfacial de polímero, devido à sua insolubilidade tanto na fase interna quanto na fase externa das dispersões coloidais. No entanto, deve ficar claro que outros métodos podem ser usados para a produção das nanocápsulas da invenção . As ditas nanopartículas poliméricas, preferencialmente nanocápsulas , são formadas a partir das fases orgânica e aquosa, sendo que: a Fase orgânica compreende: (a) um polímero hidrofóbico, (b) um óleo ou a mistura de óleos, (c) pelo menos um tensoativo lipofílico de baixo EHL, (d) um solvente, e (e) finasterida; e a Fase aquosa compreende: (a) pelo menos um tensoativo hidrofílico, e (b) água. O dito polímero utilizado para encapsular a finasterida é um polímero hidrofóbico selecionado do grupo consistindo de polímeros vinílicos, poliésteres, poliamidas, poliuretanas , polímeros acrílicos e policarbonatos. Preferencialmente, o polímero hidrofóbico empregado é um polímero biodegradável do grupo dos poliésteres tendo ponto de fusão menor que 120°C. Mais preferencialmente, o polímero hidrofóbico biodegradável do grupo dos poliésteres é um poli ( lactídeo) , um poli (glicolídeo) , copolímeros de poli ( lactideo-co- glicolídeo) , uma policaprolactona, um copolímero de policaprolactona com um poliéster, com uma poliamida, com uma poliuretana ou com um polímero vinílico, e mais preferencialmente ainda, é a poli (ε-caprolactona) .
O óleo ou a mistura de óleos utilizado na fase orgânica da preparação das nanocápsulas da invenção é selecionado do grupo consistindo de triglicerídeos de cadeia média, óleo de canola, óleo de soja, óleo de oliva, óleo de arroz, óleo de semente de uva, óleo de peixe, óleo de linhaça, e óleos essenciais.
São preferencialmente utilizados os triglicerideos de cadeia média; onde, dentre os triglicerideos de cadeia média, são selecionados aqueles do grupo de trigliceridos dos ácidos cáprico e caprilico, dicaprilocaprato de propilenoglicol, macrogolglicerideos de oleila, lauroila, linoleoila e suas misturas. Dentre os óleos essenciais são selecionados aqueles do grupo de linalol, farnesol e suas misturas .
Em uma primeira concretização da invenção, são preferencialmente utilizados os triglicerideos dos ácidos cáprico e caprilico.
E, em uma segunda concretização da presente invenção, é preferencialmente utilizada a mistura de trigliceridos dos ácidos cáprico e caprilico e de Unistab® S-69. O Unistab® S-69 é uma mistura de linalol e farnesol, mistura de óleos essenciais disponível no mercado.
A segunda concretização da invenção visa aumentar a encapsulação da finasterida por meio da adição de um novo óleo na composição do núcleo lipídico da formulação, no qual a sua solubilidade seja maior que no triglicerídeo caprilico e cáprico. Para tanto, foi empregada, como preferencial, uma mistura comercial, Unistab S-69®, composta por farnesol e linalol, na qual a solubilidade da finasterida é de aproximadamente 90 mg/mL (doseamento feito por CLAE) . O farnesol é um álcool sesquiterpênico e o linalol um álcool terpênico, ambos são encontrados em diversos óleos essenciais, são insolúveis em água, mas misciveis em outros óleos e solventes orgânicos como a acetona e o etanol. Por ser volátil, o Unistab S-69® foi misturado aos triglicerideos na proporção de 2,3:1 (v/v) (Unistab S-69®: triglicerideos) . Embora essa proporção, considerando a saturação da finasterida no Unistab S-69®, pudesse ser empregada na preparação de uma formulação com concentração de fármaco de até 2,0 mg/mL, devido à volatilidade do Unistab S-69® e consequente perda do óleo por arraste de vapor durante o processo de evaporação de solvente por pressão reduzida, foi preparada uma formulação com concentração de finasterida de 0,5 mg/mL, de forma a assegurar a característica nanométrica do sistema. Essa formulação composta de um novo núcleo lipídico constitui a segunda concretização da invenção.
0 dito tensoativo lipofílico empregado na fase - orgânica de preparação das nanopartículas poliméricas da invenção é um tensoativo de baixo EHL, preferencialmente com um valor na faixa de 3 a 6, sendo líquidos ou sólidos, preferencialmente sólido, selecionado do grupo consistindo de monoestearato de sorbitano, diestearato de sorbitano, triestearato de sorbitano, macrogolglicerídeos caprilocaproíliço, lauratos de propileno glicol, caprilatos de propileno glicol, monoestearato de glicerila, oleatos de poliglicerila, ou suas misturas. Preferencialmente, o tensoativo lipofílico utilizado na fase orgânica da invenção é o monoestearato de sorbitano.
O solvente utilizado na fase orgânica de preparação das nanopartículas poliméricas da presente invenção é um solvente orgânico selecionado do grupo consistindo de acetona, dimetilsulfóxido, dimetilformamida, N- metilpirrolidona, dioxano, carbonato de propileno, éter dietilico, tetrahidrofurano, organohalogenados, acetato de etila, acetonitrila, metiletilcetona , suas misturas, ou outro solvente que apresente propriedades fisico-quimicas de interação intermolecular com a água. Em uma concretização preferida da invenção o solvente orgânico é preferencialmente a acetona.
A fase aquosa contém pelo menos um tensoativo hidrofilico para a preparação das nanoparticulas da invenção sendo de preferência um emulsionante como polímeros polioxigenados , ou um tensoativo iônico, como lecitina, ou um tensoativo neutro selecionado do grupo consistindo de polissorbato 20, 60 ou 80, estearato de macrogol, cetoestearil éter de macrogol, lauril éter de macrogol, oleil éter de macrogol, oleato de macrogol, polioxil óleo de mamona, polioxil óleo de mamona hidrogenado, ou suas misturas. De preferência é empregado o polissorbato, e mais preferencialmente ainda é escolhido o polissorbato 80, para a fase aquosa da preparação das nanoparticulas da invenção.
A seguir são apresentadas concretizações específicas da invenção. No entanto, deve ser entendido que tais exemplos são providos somente para finalidade ilustrativa e que várias modificações ou mudanças, à luz das concretizações aqui reveladas, serão sugestivas aos especialistas na técnica e devem estar incluídas dentro do espirito e alcance desta descrição e escopo das reivindicações que a acompanham.
A suspensão aquosa de nanoparticulas poliméricas compreende : - na fase orgânica: (a) de 0,001% a 80,0% (p/p) de finasterida, (b) de 0,01% a 30,0% (p/p) de um polímero hidrofóbico, (c) de 0,01% a 50,0% (p/p) de um óleo ou uma mistura de óleos, (d) de 0,01% a 50,0% (p/p) de pelo menos um tensoativo lipofílico de baixo EHL, preferencialmente sólido, e (e) de 10% a 80% (p/p) de um solvente orgânico; e
- na fase aquosa (a) de 0,05% a 20,0% (p/p) de pelo menos um tensoativo hidrofílico, e (b) de 10% a 90% (p/p) de água.
Em uma primeira formulação preferencial da suspensão aquosa, as nanoparticulas poliméricas, preferencialmente nanocápsulas, compreendem:
- na fase orgânica: (a) de 0,005% a 50,0% (p/p) de finasterida; (b) de 0,05% a 20,0% (p/p) de um polímero hidrofóbico, preferencialmente poli ( ε-caprolactona) ; (c) de 0,05% a 20,0% (p/p) de um óleo, -preferencialmente triglicerídios de cadeia média; (d) de 0,05% a 20,0% (p/p) de pelo menos um tensoativo lipofílico, preferencialmente o monoestearato de sorbitano; e (e) de 10% a 80% (p/p) de um solvente orgânico, preferencialmente a acetona; e - na fase aquosa: (a) de 0,05% a 20,0% (p/p) de pelo menos um tensoativo hidrofílico, preferencialmente o polissorbato; e (b) de 10% a 90% (p/p) de água. Em uma segunda formulação preferencial da suspensão aquosa, as nanoparticulas poliméricas, preferencialmente nanocápsulas , compreendem:
- na fase orgânica: (a) de 0, 005% a 50,0% (p/p) de finasterida; (b) de 0,05% a 20,0% (p/p) de um polímero hidrofóbico, preferencialmente poli ( ε-caprolactona) ; (c) de 0,05% a 20,0% (p/p) de uma mistura de óleos, preferencialmente a mistura de triglicerídos dos ácidos cáprico e caprílico, com linalol e farnesol (Unistab® S- 69); (d) de 0,05% a 20,0% (p/p) de pelo menos um tensoativo lipofílico, preferencialmente o monoestearato de sorbitano; e (e) de 10% a 80% (p/p) de um solvente orgânico, preferencialmente a acetona; e
- na fase aquosa: (a) de 0,05% a 20,0% (p/p) de pelo menos um tensoativo hidrofílico, preferencialmente o polissorbato; e (b) de 10% a 90% (p/p) de água.
A composição farmacêutica para o tratamento de alopecia contém: (A) as nanocápsulas da presente invenção, compreendendo: (a) de 0,01% a 2,5% (p/p) de finasterida; (b) de 0,1% a 10,0% (p/p) de um polímero hidrofóbico, preferencialmente a poli ( ε-caprolactona) ; (c) de 0,1% a 5,0% (p/p) de um óleo e/ou uma mistura de óleos, preferencialmente triglicerídeos de cadeia média e/ou da mistura de triglicerídeos de cadeia média com Unistab® S- 69; (d) de 0,1% a 5,0% (p/p) de pelo menos um tensoativo lipofílico de baixo EHL, preferencialmente o monoestearato de sorbitano; (e) de 0,001% a 10% (p/p) de um tensoativo hidrofílico, preferencialmente o polissorbato 80; e (B) um veículo farmaceuticamente aceitável, sendo que as quantidades dos componentes das nanocápsulas estão em percentagem da formulação final e as ditas nanocápsulas estão dispersos no dito veiculo farmaceuticamente aceitável. Uma composição farmacêutica preferencial para tratamento de alopecia da presente invenção compreende de 0,01 a 1,0% (p/p) de finasterida, na forma de nanoparticulas poliméricas, preferencialmente na forma de nanocápsulas, dispersos em um veiculo farmaceuticamente aceitável.
A composição farmacêutica para o tratamento da alopecia contém, opcionalmente, aditivos tais como dispersantes, tensoativos, agentes hidratantes, agentes emolientes, espessantes, sequestrantes , conservantes, antioxidantes, fragrâncias e semelhantes.
A seguir são apresentadas concretizações especificas da invenção. No entanto, deve ser entendido que tais exemplos são providos somente para finalidade ilustrativa e que várias modificações ou mudanças, à ■ luz das concretizações aqui reveladas, serão sugestivas aos especialistas na técnica e devem estar incluídas dentro do espírito e alcance desta descrição e escopo das reivindicações que a acompanham.
EXEMPLO 1 : Nanocápsulas da invenção contendo 0,25% de finasterida - primeira concretização da invenção
EXEMPLO 1.1: Preparação das nanocápsulas de finasterida de acordo com uma primeira concretização da invenção (NF25) As suspensões de nanocápsulas de finasterida foram preparadas a partir de uma fase orgânica e de uma fase aquosa, empregando-se a composição descrita na Tabela 1.
Tabela 1. Composição das suspensões de nanocápsulas de poli (ε-caprolactona) contendo 0,25% de finasterida, preparadas de acordo com a primeira concretização da invenção [NF25]
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O polímero ( Poli (ε-caprolactona ) ) foi solubilizado na fase orgânica juntamente com a finasterida, os triglicerideos de ácido cáprico e caprilico e o tensoativo de baixo EHL (monoestearato de sorbitano) , sob aquecimento moderado entre 20°C e 40°C, preferencialmente a 40°C, empregando acetona como solvente. O tensoativo neutro (polissorbato 80) foi dissolvido em água para formar a fase aquosa. Após a solubilização de todos os componentes da fase orgânica e da fase aquosa, a fase orgânica foi injetada, com auxílio de um funil, sobre a fase aquosa. Após a formação da emulsão primária de nanocápsulas da invenção, a mesma foi mantida sob agitação moderada durante 10 minutos e, então, concentrada a um volume final de 100 mL, em evaporador rotatório sob pressão reduzida em banho termostatizado no balão de evaporação entre 10 °C e 80 °C, preferencialmente entre 30°C e 45°C para eliminação do solvente e do excesso de água, para ajuste da concentração final de finasterida. Essa formulação foi chamada de NF25.
EXEMPLO 1.2: Preparação de nanoemulsão de finasterida (NEF25)
Para fins de comparação, , também foi preparada uma formulação de nanoemulsão de finasterida a uma concentração de 0,25%. O método de preparação foi idêntico ao das nanòcápsulas de finasterida (NF25) , excluindo-se, contudo, o polímero (Poli (ε-caprolactona) ) . A Tabela 2 apresenta a composição dessa formulação, que foi denominada NEF25.
Tabela 2. Composição de nanoemulsão contendo 0,25% de finasterida (NEF25)
Fase orgânica Quantidade
Triglicerídeos de ácidos
3,30 mL cáprico e caprílico
Monoestearato de sorbitano 770 mg
Acetona 250 mL
, Finasterida 250 mg
Fase aquosa Quantidade
Polissorbato 80 770 mg
Água destilada 500 mL EXEMPLO 1.3: Caracterização físico-quimica das nanocápsulas de finasterida 0,25% de acordo com a primeira concretização da invenção
A. Determinação do pH A determinação de pH foi realizada em potenciômetro calibrado com solução tampão pH 4,0 e 7,0, diretamente nas suspensões .
B . Determinação do diâmetro de partícula e índice de polidispersão por espalhamento múltiplo de luz Para a determinação do diâmetro e da polidispersão das nanopartículas em suspensão através de espalhamento de luz dinâmico utilizou-se o equipamento Zetasizer® nano-ZS modelo ZEN 3600, 'Malvern, EUA. Para tanto, as amostras foram diluídas, em água milliQ® (filtrada em filtro 0,45 μιη, Millipore Millex-HP) 500 vezes à temperatura ambiente e os resultados determinados através da média de três repetições .
C . Determinação da distribuição de tamanho de partícula por difratometria de laser Para avaliar se existe a presença concomitante de população micrométrica na formulação de nanopartículas foram realizadas análises através de difração de laser (Mastersizer 2000, Malvern, UK) , técnica capaz de medir partículas numa ampla faixa de diâmetros (0,02 a 2000 μπι) . As análises foram realizadas por adição de uma amostra da formulação no acessório de dispersão contendo cerca de 100 mL de água destilada. O montante adicionado foi aquele suficiente para atingir uma obscuração entre 0,02 e 0,10. Para evitar interferências o sinal de fundo foi medido antes da análise. D. Potencial zeta
O potencial zeta das suspensões de nanocápsulas foi determinado através da metodologia de eletroforese empregando o equipamento Zetasizer® nano-ZS modelo ZEN 3600 ( alvern, EUA) . A determinação foi realizada a partir de diluições de 500 vezes em solução de NaCl 10 mM (filtrada em filtro 0,45 μπ\, Millipore Millex-HP) e os resultados foram obtidos através da média de três determinações .
E . Viscosidade
A viscosidade das suspensões foi medida utilizando um viscosimetro vibracional (SV-10, A&D Company, Japão) . Para isso, a viscosidade foi medida diretamente nas suspensões, durante 30 segundos com coleta de dados a cada 5 segundos, a uma temperatura de 25 ± 1,0 °C.
Resultados : A tabela abaixo (Tabela 3) apresenta os valores obtidos de pH, diâmetro, indice de polidispersão, potencial zeta e viscosidade da formulação de nanocápsulas de finasterida (NF25), da primeira concretização da invenção. As formulações (triplicata de lotes) mostraram-se macroscopicamente homogéneas, com um aspecto leitoso e, quando diluídas, apresentaram um tom azulado (efeito Tyndall) , evidenciando a presença de pelo menos uma população nanoparticulada .
Tabela 3. pH, diâmetro médio, índice de polidispersão, potencial zeta e viscosidade das formulações de nanocápsulas de finasterida (NF25) .
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O pH da suspensão de nanocápsulas contendo finasterida (NF25) situou-se em torno de 4,5. Adicionalmente, essa faixa de pH é adequada para a administração cutânea segundo a literatura (SZNITOWSKA et al., 2001).
As suspensões apresentaram diâmetro de aproximadamente 220 nm com um índice de polidispersão de 0,14. Até o presente momento, um dos poucos relatos da literatura de sistemas particulados para aplicação tópica folicular contendo finasterida refere-se a formulações microparticuladas de lipossomas e nisossomas que apresentam tamanho de partícula de 1,9 e 4,4 um, respectivamente (TABBAKHIAN et al . , 2006). Assim, as formulações contendo finasterida (NF25) desenvolvidas na presente invenção, apresentam diâmetro reduzido (em escala nanométrica) e estreita distribuição das partículas, conforme demonstrado através do baixo índice de polidispersão (< 0,2) . O potencial zeta médio (para a triplicata de formulações) foi de aproximadamente -14 mV. Esses valores são decorrentes do revestimento das partículas pelo tensoativo polissorbato 80 utilizado na fase aquosa da formulação, o qual evita a coalescência do sistema através de impedimento estéreo.
EXEMPLO 1.4: Microscopia eletrônica de transmissão
Para uma melhor avaliação das características morfológicas das suspensões das nanocápsulas de finasterida foi procedida à análise de microscopia eletrônica de transmissão
A análise foi realizada em microscópio eletrônico de transmissão (Jeol, JEM 1200 Exll, Centro de Microscopia Eletrônica — UFRGS), operando a 80 kV. As suspensões diluídas foram depositadas em filmes de suporte de carbono em grids, negativamente corados com solução de acetato de uranila (2% m/v) e observados em magnitude de 250.000 vezes ( Figura 1) .
EXEMPLO 1.5: Estudo da estabilidade das nanocápsulas de finasterida da primeira concretização da invenção Para a determinação da estabilidade das nanocápsulas de finasterida (NF25) , foram avaliados: A . Doseamento da finasterida nas nanocápsulas
As suspensões de nanocápsulas foram tratadas com acetonitrila em ultrasson (por 30 minutos) ocasionando a dissolução dos componentes da formulação. O doseamento da finasterida foi realizado através de cromatografia liquida de alta eficiência (CLAE) .
As análises foram realizadas em cromatógrafo Perkin Élmer Series 200, utilizando-se detector ultravioleta visível 210 nm, coluna LiChrospher 100 RP-18 (5um, 250 x 4 mm), pré-coluna do mesmo material (5 μπι) e fase móvel isocrática de acetonitrila: água (75:25), fluxo de 1 mL/min e volume de injeção de 100 i .
B . Verificação da presença de cristais
Quando a concentração de um fármaco excede sua solubilidade no óleo, utilizado como núcleo das nanocápsulas, pode ocorrer formação simultânea de nanocristais , os quais podem apresentar o mesmo raio hidrodinâmico das nanocápsulas formadas, gerando assim uma distribuição de tamanho estreita, que não se diferencia em relação à das nanocápsulas. Adicionalmente, ao longo do tempo, esses cristais podem sofrer um aumento de tamanho, precipitando.
Dessa forma, o acompanhamento da estabilidade da formulação e a identificação da eventual presença simultânea de nanocristais foram realizados através da quantificação da finasterida nas suspensões empregando duas técnicas. Cada lote foi fracionado em duas amostras: uma foi deixada em repouso e a outra foi deixada livre até a análise, momento em que sofreu agitação. Para análise foi retirada uma aliquota (nos tempos 0 e 30 dias) do sobrenadante da amostra em repouso e uma aliquota da amostra livre (após agitação em vórtex, 15 segundos) , para que fosse possível diferenciar a presença de cristais precipitados, através da diminuição do teor de fármaco na amostra em repouso, e uma possível degradação do fármaco, através da aliquota da amostra agitada (avaliada por CLAE) .
Resultados : Para verificar a estabilidade da formulação de nanocápsulas , três lotes foram avaliados no dia 0 e. após 30 dias de armazenamento (40°C e umidade relativa de 75%) quanto ao diâmetro, índice de polidispersão, potencial zeta e doseamento da finasterida, para caracterizar o comportamento desses sistemas. Os resultados estão apresentados na tabela 4.
Tabela 4. Resultados de estabilidade da formulação formulação de nanocápsulas de finasterida (NF25) preparadas de acordo com a primeira concretização da invenção nos tempos 0 e 30 dias (armazenamento a 40 °C e umidade relativa de 75%)
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Durante os 30 dias de armazenamento, não foram observadas alterações significativas nos valores de diâmetro, índice de polidispersão ou potencial zeta. Quanto ao doseamento, a concentração de fármaco apresentada no dia 30 foi igual à concentração inicialmente utilizada. Ou seja, as nanocápsulas apresentaram concentração de finasterida similar à utilizada na preparação (0,25%), não apresentando alteração no formato ou aparecimento de picos de degradação adicionais no cromatograma resultante da análise por CLAE . Ressaltando que nesse experimento as determinações das concentrações de finasterida em função do tempo de armazenamento, foram realizadas em aliquotas de suspensões posteriores a sua agitação. A Figura 2 apresenta os resultados dessa verificação.
Para a amostra que foi agitada antes do doseamento, pode-se verificar que não houve a diminuição do teor de finasterida ao longo dos 30 dias de armazenamento demonstrando que não há degradação nestas condições de armazenamento.
EXEMPLO 1 . 6 : Ensaio in vivo para determinação da capacidade de recuperação capilar
Para os experimentos foram utilizados camundongos- fêmeas, híbridos B6CBAF1, provenientes do biotério da Universidade do Vale do Itajaí (UNIVALI) . A linhagem de camundongos B6CBAF1 provém do cruzamento entre a fêmea da linhagem C57BL e o macho da linhagem CBA. O híbrido B6CBAF1 apresenta uma mutação gênica que leva o animal a desenvolver um quadro patológico de calvície androgênica, quando esse recebe suplementações diárias de testosterona ou de diidrotestosterona . O quadro de alopecia androgênica ocorre de forma espontânea, sendo perceptível através do afinamento dos pelos dorsais. A redução dos pelos de forma difusa pode ser atingida de forma rotineira pela administração de 0,1 mL de uma suspensão com concentração mínima de 1% de testosterona ou de diidrotestosterona por via subcutânea (MATIAS et al . , 1989; SUNDBERG et al., 1999) . Desta forma, os animais da linhagem B6CBAF1 foram selecionados para o estudo empregando-se esta posologia para indução da alopecia.
Os animais ficaram sob condições convencionais de temperatura e umidade relativa durante todo o experimento, com ciclo claro e escuro de 12 horas cada. Todos os animais receberam injeções subcutâneas de testosterona 1%, dispersa em uma mistura de polissorbato 80 em água (100 mg/mL) , na dose de 1 mg/dia.
Na primeira semana, os animais receberam apenas as injeções de testosterona subcutâneas de testosterona (1) . No primeiro dia da segunda semana de experimento, todos os animais tiveram o dorso depilado com creme depilatório Veet®, para a total remoção dos pêlos. Após a depilação, mantiveram-se as aplicações diárias de injeções de testosterona, sendo acrescida no tratamento uma aplicação tópica diária de formulação, conforme o grupo de tratamento (placebo, tratamento, controles) . Os grupos foram tratados com as seguintes formulações: água (controle-negativo) , suspensão de finasterida em água e polissorbato 80 (controle-positivo 1) , nanoemulsão de finasterida (NEF25 - controle-positivo 2) e nanocápsulas de finasterida (NF25) .
Para esse teste optou-se pelo uso de dois controles positivos. Um constituído pelo fármaco em uma dispersão grosseira (em água com polissorbato 80 a 0,77%), com aglomerados de diâmetro médio (D [4, 3] ) de 3,2 pm e Span de 1,481 e outro pela formulação de nanoemulsão (NEF25) , com diâmetro da população nanométrica de 276 nm e Span 1,523 (com a presença de uma pequena população micrométrica com diâmetro médio de 12,8 μπι) . A comparação com a formulação nanoemulsionada objetivou verificar se as nanocápsulas possuem efeito devido a sua constituição (invólucro polimérico) ou se a ação se dá apenas pela nanoencapsulação (de parte) do fármaco. Para acompanhamento do crescimento dos pêlos, fotografias foram tiradas nos dias 1, 15, e 23.
Resultados :
Conforme pode ser observado na Figura 3, o tratamento com nanocápsulas de finasterida (NF25) mostrou aceleração do crescimento de pelos, que cobriram em quase sua totalidade o dorso dos animais após os 23 dias. Os demais tratamentos recuperaram apenas pequenas áreas de pelo, sendo que o tratamento com água apresentou apenas um inicio de crescimento. Os resultados ainda demonstraram a superioridade da formulação com nanocápsulas de finasterida (NF25), frente à formulação nanoemulsionada (NEF25) .
EXEMPLO 1.7: Análise histopatológica
No 24° dia, após o ensaio in vivo para determinação da capacidade de recuperação capilar, os animais foram sacrificados por deslocamento da cervical, para ser realizado a análise histopatológica dos animais. Uma pequena porção de pele foi retirada do dorso dos animais (representativos de cada grupo) e foi submetida à análise histopatológica, a fim de visualizar o estágio de crescimento dos pelos de cada grupo.
Para isso, as lâminas foram preparadas e coradas com hematoxilina eosina. Procedeu-se então a análise (Microscópio de luz Zeiss - Primo Star acoplado à câmera fotográfica Canon Power Shot, PC1250) para determinar a fase de crescimento na qual os pêlos se encontravam.
Para quantificar os dados obtidos por histologia, procedeu-se a contagem dos folículos maduros (com pigmentação e inseridos no tecido adiposo) de cada uma das lâminas histológicas de cada grupo. Para tanto, foram analisadas 4 lâminas por grupo, sendo que a contagem foi realizada com base em 3 focos diferentes da mesma lâmina, totalizando 12 campos analisados por grupo. Para comparação entre os grupos procedeu-se análise estatística por ANOVA (cx=0,05). A Figura 4 apresenta os resultados da análise histopatológica dos grupos.
A análise histológica corrobora a eficácia do tratamento com as nanocápsulas de finasterida (NF25) . Na Figura 4, em A (tratamento com NF25) , pode-se observar a presença abundante de folículos terminais
(maduros/desenvolvidos) devido a forte presença de melanina (representada pela parte escura no centro do folículo) , assim como a sua base desenvolvida junto ao tecido adiposo (inserção profunda na pele), o que representa um folículo terminal em desenvolvimento. Esta interpretação encontra sustentação na literatura científica (MEIDAN et al., 2005; VOGT et al., 2006; OTBERG et al . , 2007). Por sua vez, para NEF25 e para C2+, observa-se a presença diminuída de folículos com pouca pigmentação (ou ausente), localizados em maior quantidade próximos à derme, o que caracteriza uma involução dos folículos terminais para folículos velus (sem pigmentação e desenvolvidos nas camadas mais superficiais da derme) . Esta interpretação apresenta sustentação na literatura científica (SINCLAIR et al., 2003; MEIDAN et al . , 2005; VOGT et al . , 2006; OTBERG et al . , 2007) . Adicionalmente, com base na observação das lâminas, foi procedida a contagem dos folículos maduros por campo analisado. A Figura 5 apresenta os resultados baseados na média do número de folículos por campo (n = 12 campos) por grupo avaliado. Conforme se pode observar na Figura 5, não houve diferenças significativas entre os grupos água, livre e Nanoemulsão de finasterida (NEF25) , os quais apresentaram 11 ± 15, 4' ± 8 e 18 ± 13 células por campo, respectivamente. Por sua vez, a formulação de nanocápsulas de finasterida (NF25) apresentou 82 ± 14 células por campo, sendo significativamente superior (ANOVA, a 0,05) às demais. Esses resultados demonstram que a formulação de nanocápsulas de finasterida (NF25) , por via tópica, aceleram o crescimento capilar e o desenvolvimento do folículo com predisposição para a calvície androgênica, visto que a formulação de nanoemulsão de finasterida (NEF25) não apresentou resultados satisfatórios. EXEMPLO 2 : Nanocápsulas da invenção contendo 0,05% de finasterida - segunda concretização da invenção
EXEMPLO 2.1: Preparação das nanocápsulas de finasterida de acordo com uma segunda concretização da invenção (NPXF05) As suspensões de nanocápsulas de finasterida foram preparadas a partir de uma fase orgânica e de uma fase aquosa, empregando-se a composição descrita na Tabela 5.
Tabela 5. Composição das suspensões de nanocápsulas de poli (ε-caprolactona) contendo 0,05% de finasterida, preparadas de acordo com a segunda concretização da invenção [NPXF05]
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O polímero (Poli (ε-caprolactona) ) foi solubilizado na fase orgânica juntamente com a finasterida, os triglicerideos de cadeia média, o Unistab S-69® e o tensoativo de baixo EHL (monoestearato de sorbitano) , sob aquecimento moderado entre 20°C e 40°C, preferencialmente a 40°C, empregando acetona como solvente. O tensoativo neutro (polissorbato 80) foi dissolvido em água para formar a fase aquosa. Após a solubilização de todos os componentes da fase orgânica e da fase aquosa, a fase orgânica foi injetada, com auxílio de um funil, sobre a fase aquosa.
Após a formação da emulsão primária de nanocápsulas da invenção, a mesma foi mantida sob agitação moderada durante 10 minutos e, então, concentrada a um volume final de 100 mL, em evaporador rotatório sob pressão reduzida em banho termostatizado no balão de evaporação entre 10 °C e 80°C, preferencialmente entre 30 °C e 45 °C para eliminação do solvente e do excesso de água, para ajuste da concentração final de finasterida. Essa formulação foi chamada de NPXF05. EXEMPLO 2.2: Caracterização fisico-química das nanocápsulas de finasterida 0,05% de acordo com a segunda concretização da invenção (NPXF05)
A. ' Determinação de pH
A determinação de pH foi realizada em potenciômetro calibrado com solução tampão pH 4,0 e 7,0, diretamente nas suspensões .
B . Determinação do diâmetro de partícula e índice de polidispersão por espalhamento múltiplo de luz
Para a determinação do diâmetro e da polidispersão das nanopartículas em suspensão através de espalhamento de luz dinâmico utilizou-se o equipamento Zetasizer® nano-ZS modelo ZEN 3600, Malvern, EUA. Para tanto, as amostras foram diluídas, em água milliQ® (filtrada em filtro 0,45 pm, illipore Millex-HP) 500 vezes à temperatura ambiente e os resultados determinados através da média de três repetições. C . Determinação da distribuição de tamanho de partícula por difratometria de laser
Para avaliar se existe a presença concomitante de população micrométrica na formulação de nanopartículas foram realizadas análises através de difração de laser (Mastersizer 2000, Malvern, UK) , técnica capaz de medir partículas numa ampla faixa de diâmetros (0,02 a 2000 μπι) . As análises foram realizadas por adição de uma amostra da formulação no acessório de dispersão contendo cerca de 100 mL de água destilada. 0 montante adicionado foi àquele suficiente para atingir uma obscuração entre 0,02 e 0,10. Para evitar interferências o sinal de fundo foi medido antes da análise.
D . Potencial zeta
O potencial zeta das suspensões de nanocápsulas foi determinado através da metodologia de eletroforese empregando o equipamento Zetasizer® nano-ZS modelo ZEN 3600 (Malvern, EUA) . A determinação foi realizada a partir de diluições de 500 vezes em solução de NaCl 10 mM (filtrada em filtro 0,45 μπι, Millipore Millex-HP) e os resultados foram obtidos através da média de três determinações.
E. Viscosidade A viscosidade das suspensões foi medida utilizando um viscosimetro vibracional (SV-10, A & D Company, Japão) . Para isso, a viscosidade foi medida diretamente nas suspensões, durante 30 segundos com coleta de dados a cada 5 segundos, a uma temperatura de 25 ± 1,0°C.
Resultados :
A formulação de nanocápsulas preparadas de acordo com a segunda concretização da invenção mostrou-se macroscopicamente homogénea, com o odor típico do Unistab S-69®. A tabela abaixo (Tabela 6) apresenta os valores obtidos de pH, diâmetro, índice de polidispersão, potencial zeta e viscosidade da formulação de nanocápsulas de finasterida (NPXF05) , da segunda concretização da invenção. Para fins de comparação foram apresentados conjuntamente os resultados das formulações de NPXF05 e NF25.
Tabela 6. Comparação dos resultados da caracterização físico-química das formulações da segunda concretização da
Figure imgf000042_0001
A partir da análise fisico-quimica pode-se observar que, embora modificadas, as formulações apresentaram características semelhantes. Contudo, a análise de diâmetro por difratometria de laser demonstrou que as formulações preparadas com a mistura de Unistab S-69® e triglicerídeo caprílico e cáprico (NPXF05) , contendo finasterida 0,05%, apresentaram apenas populações nanométricas (Figura 6).
EXEMPLO 2 . 3 : Estudo da estabilidade das nanocápsulas de finasterida da segunda concretização da invenção Para a determinação da estabilidade das nanocápsulas de finasterida (NPXF05) , foram avaliados:
A . Doseamento da finasterida nas nanocápsulas
As suspensões de nanocápsulas foram tratadas com acetonitrila em ultrasson (por 30 minutos) ocasionando a dissolução dos componentes da formulação. O doseamento da finasterida foi realizado através de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) .
As análises foram realizadas em cromatógrafo Perkin Élmer Series 200, utilizando-se detector ultravioleta visível 210 nm, coluna LiChrospher 100 RP-18 (5μιη, 250 x 4 mm) , pré-coluna do mesmo material (5 μιη) e fase móvel isocrática de acetonitrila: água (75:25), fluxo de 1 mL/min e volume de injeção de 100 μΐ.
B . Verificação da presença de cristais
Para verificar a presença de fármaco disperso na fase externa, foi realizada a quantificação da finasterida por CLAE de uma formulação recém-preparada . A formulação foi dividida em duas amostras, a primeira foi deixada em repouso, a segunda foi agitada antes do doseamento, realizado após 30 dias da sua preparação. Da amostra mantida em repouso foi coletada apenas uma aliquota do sobrenadante (evitando qualquer movimentação) ; da outra amostra, foi coletada uma aliquota (referente a 20% do sobrenadante) após agitação em vórtex por 15 segundos.
Resultados :
Adicionalmente, foi realizada a avaliação da sedimentação de cristais (através do doseamento por CLAE do sobrenadante) de uma triplicata de formulações NPXF25 mantida em repouso por um período de 30 dias. Os resultados foram comparados com os da formulação NF25 e estão apresentados na Figura 7. Conforme observado, a adição do Unistab S-69® ao triglicerídeo dos ácidos caprílico e cáprico possibilitou um maior encapsulamento de finasterida sem a perda das características nanotecnológicas do sistema. Conforme observado, não houve um decaimento expressivo na concentração do ativo para a formulação NPXF05, sendo esse de apenas 4,1 ± 0,4% em relação ao inicial.
EXEMPLO 2.4: Ensaio in vivo para determinação da capacidade de recuperação capilar
Para os experimentos foram utilizados camundongos fêmeas, híbridos B6CBAF1, provenientes do biotério da Universidade do Vale do Itajaí (UNIVALI). Os animais ficaram em condições convencionais de temperatura e umidade relativa durante o experimento, com ciclo claro e escuro de 12 horas cada. Todos os animais receberam injeções subcutâneas de testosterona 1%, dispersa em uma mistura de polissorbato 80 em água (100 mg.mL-1), na dose de 1 mg/dia. Foram aplicadas 5 injeções por semana durante 4 semanas.
Novamente foi procedido o ensaio de aceleração do crescimento capilar, sendo dessa vez testada à formulação de nanocápsulas de finasterida (NPXF05) . Na primeira semana os animais receberam apenas as injeções de testosterona. No primeiro dia da segunda semana de experimento, todos os animais tiveram o dorso depilado com creme depilatório Veet®, para a total remoção dos pêlos. Após a depilação, mantiveram-se as injeções diárias de testosterona, sendo acrescida no tratamento uma aplicação tópica diária de formulação, conforme o grupo de tratamento (placebo, tratamento, controles) . Os grupos-teste foram as formulações de nanocápsulas de finasterida 0,05% (NPXF05) preparadas de acordo com a segunda concretização da invenção, as quais foram comparadas com os resultados da formulação contendo nanocápsulas de finasterida 0,25% (NF25) preparadas de acordo com a primeira concretização da invenção .
Para acompanhamento do crescimento dos pêlos, fotografias foram tiradas nos dias 0, 15, e 23.
Resultado : Conforme pode ser observada na Figura 8 a formulação de nanocápsulas de finasterida 0,05% (NPXF05) preparada com a associação de Unistab S-69® e triglicerideo dos ácidos caprilico e cáprico apresentou um crescimento maior do que as formulações de nanocápsulas de finasterida 0,25% (NF25) . Quando analisadas as fotografias do 15° dia, observa-se que os animais tratados com a formulação de nanocápsulas de finasterida 0,05% (NPXF05) apresentam um crescimento superior.
EXEMPLO 2.5: Análise histopatológica
No 24° dia, após o ensaio in vivo para determinação da capacidade de recuperação capilar, os animais foram sacrificados por deslocamento da cervical, para ser realizado a análise histopatológica dos animais. Uma pequena porção de pele foi retirada do dorso dos animais (representativos de cada grupo) e foi submetida à análise histopatológica, a fim de visualizar o estágio de crescimento dos pelos de cada grupo.
Para isso, as lâminas foram preparadas e coradas com hematoxilina eosina. Procedeu-se então a análise (Microscópio de luz Zeiss - Primo Star acoplado à câmera fotográfica Canon Power Shot, PC1250) para determinar a fase de crescimento na qual os pêlos se encontravam.
Para quantificar os dados obtidos por histologia, procedeu-se a contagem dos folículos maduros (com pigmentação e inseridos no tecido adiposo) de cada uma das lâminas histológicas de cada grupo. Para tanto, foram analisadas 4 lâminas por grupo, sendo que a contagem foi realizada com base em 3 focos diferentes da mesma lâmina, totalizando 12 campos analisados por grupo. Para comparação entre os grupos procedeu-se análise estatística por ANOVA (a=0, 05) . A Figura 9 apresenta os resultados da análise histopatológica dos grupos. Conforme pode ser observada na Figura 9 a formulação de nanocápsulas preparadas com a associação de Unistab S-69® e triglicerideo dos ácidos caprilico e cáprico (NPXF05) apresentaram um crescimento maior do que as formulações de nanocápsulas de finasterida (NF25) . Quando analisadas as fotografias do 15° dia, observa-se que os animais tratados com a formulação NPXF05 já apresentam um crescimento superior às demais. A Figura 10 apresenta o número médio de folículos maduros por campos histológicos analisados. Essas análises revelaram que, a formulação NPXF05 apresentou um crescimento acelerado e aparentemente superior ao da formulação NF25, apesar de apresentar número menor de folículos maduros por campo histológico analisado.
EXEMPLO 3 : Composições farmacêuticas compreendendo
Nanocápsulas de finasterida
Exemplo 3.A - Formulação na forma de solução tópica
São preparadas nanocápsulas de finasterida como descrito nos exemplos 1.1 e 2.1. As soluções tópicas são preparadas resultando nas formulações da Tabela 7.
Tabela 7: Formulações na forma de solução tópica contendo as suspensões de nanocápsulas contendo 0,25% de finasterida (NF25 - primeira concretização), e contendo 0,05% de finasterida (NPXF05 - segunda concretização)
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Unistab® S-69 2, 00
Monoestearato de sorbitano 0, 77 0, 77
Poli ( ε-caprolactona) 1, 00 1, 00
Finasterida 0, 25 0, 05
Polissorbato 80 0, 77 0, 77
Água destilada q.s.p. 100 q.s.p. 100
Exemplo 3.B - Formulação na forma de gel tópico
São preparadas nanocápsulas de finasterida como descrito nos exemplos 1.1 e 2.1.
As suspensões de nanocápsulas, preparadas como descrito no Exemplo 3. A, foram espessadas com 0,2 % de Carbopol® 940. Trietanolamina q.s. foi adicionada até obtenção de viscosidade adequada para aplicação tópica. O gel resultante tem a formulação apresentada na Tabela 8.
Tabela 8: Formulações na forma de gel tópico contendo as suspensões de nanocápsulas contendo 0,25% de finasterida (NF25 - primeira concretização), e contendo 0,05% de finasterida (NPXF05 - segunda concretização)
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Polissorbato 80 0, 77 0, 77
Carbopol 940 0,20 0,20
Água destilada q.s.p. 100 q.s.p. 100
Trietanolamina q.s. q.s.
EXEMPLO 3.C: Formulação na forma de loção tópica
Inicialmente é preparada a fase 1 conforme descrito no Exemplo 3. A, empregando a composição da fasel da Tabela 9. Separadamente, fundir os componentes da fase 2 em banho de água a 50 °C e retirar do aquecimento após fusão. Adicionar a fase 3 na fase 1 e dispersar sob agitação magnética constante. Adicionar esta mistura das fases 1 e 3 sobre a fase 2 fundida e resfriada a 40 °C sob agitação mecânica moderada para evitar incorporação de ar.
Tabela 9: Formulação na forma de loção tópica contendo a suspensões de nanocápsulas contendo 0,25% de finasterida e contendo 0,1 % de finasterida
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Todas as publicações e pedidos de patente mencionados na presente descrição são indicativos do nível daqueles especialistas na técnica à qual a invenção se refere. Todas as publicações e pedidos de patente são aqui incorporados a título de referência na mesma extensão como se cada publicação individual ou cada pedido de patente fosse especificamente e individualmente indicado para ser incorporado a título de referência.
Apesar de certas concretizações terem sido descritas, elas foram apresentadas como um modo exemplificativo somente, e não há intenção de limitar o escopo da invenção. De fato, as novas concretizações aqui descritas podem ser concretizadas em uma variedade de outras formas; mais que isso, várias omissões, substituições e mudanças na forma das concretizações aqui descritas podem ser feitas sem se afastar do espírito da invenção. As reivindicações que acompanham esta descrição e suas equivalentes são consideradas como cobrindo tais formas ou modificações na medida em que elas podem estar dentro do escopo e espírito da invenção.

Claims

REIVINDICAÇÕES
1. Nanopartícuia polimérica caracterizada por compreender o principio ativo finasterida, sendo que dita nanoparticula é formada a partir da preparação de uma fase orgânica e uma fase aquosa, em que:
(a) a Fase orgânica compreende: (i) um polímero hidrofóbico, (ii) um óleo ou uma mistura de óleos, (iii) pelo menos um tensoativo lipofílico de baixo EHL, (iv) um solvente orgânico, e (v) finasterida; e
(ii) a Fase aquosa compreende: (vi) pelo menos um tensoativo hidrofílico, e (vii) água.
2. Nanoparticula polimérica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de estar na forma de nanocápsula.
3. Nanoparticula polimérica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de dito polímero hidrofóbico ser selecionado do grupo consistindo de polímeros vinílicos, poliésteres, poliamidas, poliuretanas , polímeros acrílicos e policarbonatos.
4. Nanoparticula polimérica de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de dito polímero hidrofóbico ser um polímero biodegradável do grupo dos poliésteres tendo ponto de fusão menor que 120°C.
5. Nanopartícula polimérica de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de dito polímero biodegradável do grupo dos poliésteres tendo ponto de fusão menor que 120°C ser selecionado do grupo consistindo de um poli ( lactídeo) , um poli (glicolídeo) , copolímeros de poli ( lactideo-co-glicolideo ) , uma policaprolactona, um copolímero de policaprolactona com um poliéster, com uma poliamida, com uma poliuretana ou com um polímero vinílico.
6. Nanopartícula polimérica de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de dita policaprolactona ser a poli (□- caprolactona ) .
7. Nanopartícula polimérica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de dito óleo ser selecionado do grupo consistindo de triglicerídeos de cadeia média, óleo de canola, óleo de soja, óleo de oliva, óleo de arroz, óleo de semente de uva, óleo de peixe, óleo de linhaça, óleos essenciais, e mistura de dois ou mais. destes.
8. Nanopartícula polimérica de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de ditos triglicerídios de cadeia média serem selecionados do grupo de triglicerídos dos ácidos cáprico e caprílico, dicaprilocaprato de propilenoglicol , macrogolglicerídeos de oleíla, lauroila, linoleoila e suas misturas.
9. Nanoparticula polimérica de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de ditos óleos essenciais serem selecionados do grupo de linalol, farnesol e suas misturas.
10. Nanoparticula polimérica de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato do dito óleo ser o triglicerideos dos ácidos cáprico e caprilico.
11. Nanoparticula polimérica de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato do dito da mistura de óleos ser triglicerideos dos ácidos cáprico e caprilico, e a mistura linalol e farnesol.
12. Nanoparticula polimérica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de dito tensoativo lipofilico de baixo
EHL tem um valor na faixa de 3 a 6 e é selecionado do grupo consistindo de monoestearato de sorbitano, diestearato de sorbitano, triestearato de sorbitano, macrogolglicerideos caprilocaproilico, lauratos de propileno glicol, caprilatos de propileno glicol, monoestearato de glicerila, oleatos de poliglicerila, e suas misturas.
13. Nanoparticula polimérica de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de dito tensoativo lipofilico de baixo EHL ser o monoestearato de sorbitano.
14. Nanoparticula polimérica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de dito solvente orgânico ser um solvente que apresenta propriedades fisico-quimicas de interação intermolecular com a água e é selecionado do grupo consistindo de acetona, dimetilsulfóxido, dimetilformamida, N- metilpirrolidona, dioxano, carbonato de propileno, éter dietilico, organohalogenados , acetato de etila, tetrahidrofurano, acetonitrila, metiletilcetona, e suas misturas .
15. Nanoparticula polimérica de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de dito solvente orgânico ser acetona.
16. Nanoparticula polimérica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de dito tensoativo hidrofilico ser selecionado do grupo consistindo de polímeros polioxigenados , tensoativo iônico e tensoativo neutro.
17. Nanoparticula polimérica de acordo com a reivindicação 16, caracterizada pelo fato de dito tensoativo hidrofilico ser um tensotivo neutro selecionado do grupo consistindo de polissorbato 20, 60 ou 80, estearato de macrogol, cetoestearil éter de macrogol, lauril éter de macrogol, oleil éter de macrogol, oleato de macrogol, polioxil óleo de mamona, polioxil óleo de mamona hidrogenado, e suas misturas.
18. Nanopartícula polimérica de acordo com a reivindicação 17, caracterizada pelo fato de dito tensoativo hidrofilico neutro ser o polissorbato 80.
19. Suspensão aquosa de nanoparticulas poliméricas como definidas em qualquer uma das reivindicações 1 a 18, dita suspensão sendo caracterizada pelo fato de compreender:
(i) uma fase orgânica contendo: (a) de 0,001% a 80,0% (p/p) de finasterida, (b) de 0,01% a 30,0% (p/p) de um polímero hidrofóbico, (c) de 0,01% a 50,0% (p/p) de um óleo ou uma mistura de óleos, (d) de 0,01% a 50,0% (p/p) de pelo menos um tensoativo lipofílico de baixo EHL, preferencialmente sólido, e (e) de 10% a 80% (p/p) de um solvente orgânico; e
(ii) uma fase aquosa contendo (f) de 0,05% a 20,0% (p/p) de pelo menos um. tensoativo hidrofilico, e (g) de 10% a 90% (p/p) de água.
20. Suspensão aquosa de nanoparticulas poliméricas de acordo com a reivindicação 19, dita suspensão sendo caracterizada pelo fato de compreender:
(i) uma fase orgânica contendo: (a) de 0, 005% a 50,0% (p/p) de finasterida; (b) de 0,05% a 20,0% (p/p) de poli ( ε-caprolactona) ; (c) de 0,05% a 20,0% (p/p) de triglicerídios de cadeia média; (d) de 0,05% a 20,0% (p/p) de monoestearato de sorbitano; e (e) de 10% a 80% (p/p) de acetona; e (ii) uma fase aquosa contendo:, (f) de 0,05% a 20,0% (p/p) de polissorbato; e (g) de 10% a 90% (p/p) de água.
21. Suspensão aquosa de nanoparticulas poliméricas de acordo com a reivindicação 19, dita suspensão sendo caracterizada pelo fato de compreender:
(i) uma fase orgânica contendo: (a) de 0, 005% a 50,0% (p/p) de finasterida; (b) de 0,05% a 20,0% (p/p) de poli ( ε-caprolactona) ; (c) de 0,05% a 20,0% (p/p) de uma mistura de óleos compreendendo triglicerídos dos ácidos cáprico e caprílico, com linalol e farnesol (Unistab® S-69) ; (d) de 0,05% a 20,0% (p/p) de monoestearato de sorbitano; e (e) de 10% a 80% (p/p) de acetona; e
(ii) uma fase aquosa contendo: (f) de 0,05% a 20,0% (p/p) de polissorbato; e (g) de 10% a 90% (p/p) de água.
22. Composição farmacêutica para o tratamento de alopecia caracterizada por compreender:
(A) nanoparticulas poliméricas como definidas em qualquer das reivindicações 1 a 18, ditas nanocápsulas compreendendo (a) de 0,01% a 2,5% (p/p) de finasterida; (b) de 0,1% a 10,0% (p/p) de um polímero hidrofobico, preferencialmente a poli ( ε-caprolactona) ; (c) de 0,1% a 5,0% (p/p) de um óleo e/ou uma mistura de óleos, preferencialmente triglicerídeos de cadeia média e/ou da mistura de triglicerídeos de cadeia média com Unistab® S-69; (d) de 0,1% a 5,0% (p/p) de pelo menos um tensoativo lipofilico de baixo EHL, preferencialmente o monoestearato de sorbitano; (e) de 0,001% a 10% (p/p) de um tensoativo hidrofilico, preferencialmente o polissorbato 80; e
(B) um veiculo farmaceuticamente aceitável, sendo que as quantidades dos componentes das nanocápsulas estão em percentagem da formulação final e as ditas nanocápsulas estão dispersas no dito veiculo farmaceuticamente aceitável.
23. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 20 ou 21, caracterizada pelo fato de compreender nanocápsulas dispersas em um veiculo farmaceuticamente aceitável contendo de 0,01 a 1,0% (p/p) de finasterida.
24. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de ser de administração tópica e de estar na forma de solução, de gel ou de loção.
25. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 22, 23 ou 24, caracterizada pelo fato de compreender adicionalmente aditivos selecionados de dispersantes, tensoativos, agentes hidratantes, agentes emolientes, espessantes, sequestrantes, conservantes, antioxidantes, fragrâncias e semelhantes.
26. Processo de preparação de nanopartículas poliméricas definidas de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, dito processo sendo caracterizado pelo fato de compreender as etapas de:
•5 (i) preparação de uma fase orgânica pela dissolução do polímero hidrofóbico e da finasterida, um óleo fixo ou uma mistura de óleos, pelo menos um tensoativo de baixo EHL, em um solvente orgânico;
(ii) preparação da fase aquosa pela mistura de pelo menos0 um tensoativo hidrofílico preferencialmente neutro, em água;
(iii) injeção da fase orgânica na fase aquosa para permitir a formação da emulsão primária de nanopartículas na interface das duas fases, sendo a mistura mantida sob5 agitação por um tempo suficiente para o encapsulamento adequado dos ingredientes ativos;
(iv) remoção de pelo menos um solvente orgânico e recuperação da fase aquosa contendo as nanocápsulas.
27. Processo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que dito polímero hidrofóbico ser selecionado do grupo consistindo de polímeros vinílicos, poliésteres, poliamidas, poliuretanas , polímeros acrílicos e policarbonatos.
28. Processo de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que dito poliéster tem ponto de fusão menor que 120°C ser selecionado do grupo consistindo de um poli ( lactideo) , um poli (glicolideo) , copolimeros de poli (lactideo-co-glicolideo) , uma policaprolactona, um copolimero de policaprolactona com um poliéster, com uma poliamida, com uma poliuretana ou com um polímero vinilico.
29. Processo de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que as nanocápsulas de finasterida são obtidas pelo método de deposição interfacial de polímero pré-formado, sendo que em uma primeira etapa é feita a dissolução da finasterida, do polímero hidrofóbico, do óleo fixo ou a mistura de óleos e de pelo menos um tensoativo de baixo EHL em um solvente orgânico para formar a fase orgânica; e em uma segunda etapa é feita a mistura de pelo menos um tensoativo hidrofílico em água para formar a fase aquosa.
30. Uso das nanocápsulas como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 18 caracterizado pelo fato de ser para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento da alopecia.
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