WO2012113117A1

WO2012113117A1 - 一种含有蛋白质或多肽的口服制剂、其制备方法及用途

Info

Publication number: WO2012113117A1
Application number: PCT/CN2011/000815
Authority: WO
Inventors: 马二利; 郑昌学
Original assignee: MADE IT BIOTECH (BEIJING) Ltd
Current assignee: MADE IT BIOTECH (BEIJING) Ltd
Priority date: 2011-02-24
Filing date: 2011-05-10
Publication date: 2012-08-30
Anticipated expiration: 2013-08-24
Also published as: CN102113996A; CN102113996B

Description

一种含有蛋白质或多肽的口服制剂、其制备方法及用途技术领域

本发明属于药物学和制剂学领域，涉及一种含有蛋白质或多肽的口服制剂、其制备方法及用途。背景技术

胰岛素 ( insul in ) ，甲状旁腺激素（parathyroid hormone) , 降素（ca lci tonin) , 生长激素（growth hormone)，肠促胰岛素样肽 -1 ( GLP-1 ) 等蛋白质或多肽药物，是临床治疗中的重要药物。但这类药物的共同特点是口服给药几乎无效，需要频繁的注射给药。

蛋白盾多肽类药物由于在临床中缺乏口服给药途径而限制了它们的应用，胃肠道中蛋白酶的降解以及肠上皮细胞屏障作用等多种因素限制了这类药物的口服生物利用度。几十年来，研究人员采用共价修饰、酶抑制剂、吸收促进剂、微嚢微球包裹、 W/0 (油包水）乳剂等策略，以期解决蛋白质多肽类药物口服生物利用度低的问题。 Car ino G. P. et al (2000) J. Control. Release. 65: 261-269; Kathryn Wehi tehead, et al (2004) J. Control. Release. 98: 37-45; Yan Pan, et al (2002) Int. J. Pharm 249: 139-147; Nerurkar M. M. et a l (1996) Pharm. Res. 13: 528-534; Marschutz M. K. et a l (2000) Biomateria l s 21: 1499-1507; Chri s topher J. H. et al (1997) Adv. Drug. Del iver. Rev. 25: 71-89; Jeff Wang, et a l (2003) J. Control. Release. 88: 369-380; Roger R. C. New, et al (1997) Adv. Drug. Del iver. Rev. 25: 59-69; Anja Graf, et al (2008) Int. J. Pharm. 350: 351-360; R. Nes l ihan Gursoy et al (2004) Biomed. Pharmacother. 58: 173-182; CN01115327. X, US4849405, US5824638。

上述策略存在明显的不足，如共价修饰会降低药物活性，并可能改变药物分子的药理、毒理，带来高昂的制备成本和严重的安全隐患；酶抑止剂能有效避免蛋白酶的水解作用，但酶抑制剂同时也影响了食物蛋白的消化，长期服用将造成消化吸收紊乱甚至胰脏的肿大或增生；吸收促进剂在增加肠道通透性的同时，有可能对细胞膜造成不可逆的破坏，长期服用会导致膜中毒；微嚢微球制备工程中常需要有机溶剂的参与，并需要高速离心等步骤，增加了工艺的复杂性。

另外有研究表明，中链脂肪酸可以作为底物引发级联反应并最终打开细胞间紧密连接，从而增加肠道的渗透性（ Masahiro Hayashi_: et al (1997) ADV. DRUG. DELIVER. REV. 28: 191-204. ) 。 Panayiostis等人以中链脂肪酸甘油酯作为吸收促进剂，研究了 W/0 型微乳制剂对亲水性小分子药物的吸收效果（Panayiostis P. Constantinides, et al (1994) PHARM RES 11: 1385-90; Panayiostis P. Constantinides, et al (1996) PHARM RES 13: 210-215。 ) , 但其所用药物分子量不足 700道尔顿，并且该类药物直接口服后生物利用度可达 2%，与蛋白质多肽类药物存在本质差别。经过进一步的研究， P. Constantinides通过联合应用高 HLB 值（亲水亲油平衡值 )表面活性剂和低 HLB值表面活性剂，获得了能够包含 RGD、降素、胰岛素等不同亲水分子的自乳化 W/0制剂，但其口服生物利用度效果却没有公开的报道。 Mao-Bo Cheng等人制备了含蚓激酶的口服 W/0型微乳制剂（Mao-Bo Cheng, et al( 2008 ) J. Control. Release. 129: 41 - 48 ) 。

上述文献以微乳为载体，实现了对蛋白质或多肽药物的包裹，但存在一个最大的问题就是这些制剂乳化效果差，粒径大小悬殊很大，并且乳化后（稀释后）乳液出现了分层；或者清亮区域狭小，稀释后不能均匀分散，从而会限制其口服生物利用度效果。甚至可能导致乳滴破乳，包裹于内层水相中的蛋白质多肽类分子会被快速释放出来，被胃肠道中的蛋白酶降解，或与中链脂肪酸酯等物质由于不相容性的问题，蛋白质多肽类分子发生絮集、沉淀，造成药物活性丟失且难以被机体吸收。并且这些产品口服给药后药物起效慢，通常需要 4个小时，甚至 8个小时以后才能达到血药浓度峰值，与现有药物作用方式差别巨大，为临床应用带来诸多不便（G. Sharma , et a l (2010) EUR. J. PHARM. BIOPHARM. 76: 159-169; Amani El sayed, et a l (2009) EUR. J. PHARM. BIOPHARM. 73: 269 - 279 ) ₀ 发明内容

本发明人通过大量的试验和创造性的劳动，惊奇地发现，通过选用高 HLB 值表面活性剂和中链脂肪酸酯（特别再添加磷脂时），得到的含有蛋白质或多肽的乳剂的相容性和稳定性很好，乳剂在保持较高的生物利用度的同时，保持优异的乳化性能。并且乳剂在被水稀释时，能均勾分散，生成的乳滴粒径分布比较均匀，不会导致乳液不清。并且本发明的乳剂经口服给药后，能被快速吸收，有着与同类注射药物相近的血药浓度或药效达峰时间，这将为临床应用带来极大便利。由此提供了下述发明：本发明的一个方面涉及一种乳剂，包含蛋白质或多肽、水相、油相、乳化剂，其特征在于，所述油相含有中链脂肪酸酯（例如中链脂肪酸甘油酯），并且所述乳化剂包括 HLB值大于 12的乳化剂；具体地，所述油相为中链脂肪酸酯（例如中链脂肪酸甘油酯），所述乳化剂为 HLB值大于 12的乳化剂。

所述蛋白质或多肽为乳剂的有效成分（药效成分）或者活性成分。所述蛋白质或多肽可以从生物机体中分离获得，也可以通过基因工程手段（例如基因重组）或化学合成的方式获得。

根据本发明的任一项所述的乳剂，其中，所述蛋白质或多肽为降钙素、胰岛素、 GLP-1、曱状旁腺激素、甲状旁腺激素 1-84、甲状旁腺激素 1-34、或生长激素。在一些实施方案中，所述降钙素，包括鲑鱼、鰻鱼和人的降钙素；所述胰岛素，包括猪、牛、人和重组的胰岛素；所述 GLP-1 , 包括重组和合成的 GLP-1 ; 所述曱状旁腺激素，包括人体甲状旁腺激素 1-84、重组和 /或合成的曱状旁腺激素 1-34 ; 所述长激素，包括猪、牛、人体和重组的生长激素。

根据本发明的任一项所述的乳剂，其中，所述中链脂肪酸酯为中链脂肪酸甘油酯、聚乙二醇化的中链脂肪酸甘油酯、乙酰化中链脂肪酸甘油酯、中链脂肪酸丙二醇酯、中链脂肪酸丁二醇酯、或中链脂肪酸聚乙二醇酯。所述中链脂肪酸甘油酯可以为中链脂肪酸甘油一酯、中链脂肪酸甘油二酯、以及中链脂肪酸甘油三酯中的一种或多种。所述中链脂肪酸甘油酯中的中链脂肪酸可以结合在甘油分子中的任何一个或多个羟基位置，当形成中链脂肪酸甘油二酯或中链脂肪酸甘油三酯时，甘油分子中的羟基上结合的中链脂肪酸分子可以相同或者不同。在本发明中，中链脂肪酸是指碳原子数 6 - 12的脂肪酸，其可以是饱和的，也可以是不饱和的，可以是直链的，也可以是支链的。具体地，所述中链脂肪酸为辛酸和 /或癸酸。

在本发明的一个实施方案中，所述中链脂肪酸酯为碳原子数 6 - 12的脂肪酸的甘油一酯、甘油二酯、和 /或甘油三酯；更具体地，为选自辛酸癸酸甘油酯、聚乙二醇辛酸 /癸酸甘油酯、辛酸甘油酯、癸酸甘油酯中的一种或多种。

根据本发明的任一项所述的乳剂，其中，所述 HLB值大于 12 的乳化剂为选自泊洛沙姆 188、泊洛沙姆 407、吐温 20、吐温 80、聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯、聚氧乙烯醚（35)蓖麻油、聚氧乙烯醚（40)氢化蓖麻油、生育酚琥珀酸聚乙二醇酯、聚乙二醇 -32-月桂酸甘油酯、聚乙二醇- 32-硬脂酸甘油酯中的一种或多种。

根据本发明的任一项所述的乳剂，其中，所述蛋白质或多肽为 0. 01 - 1重量份，所述中链脂肪酸酯（例如中链脂肪酸甘油酯）为 5 0 - 1 000重量份，所述 HLB值大于 12 的乳化剂为 20 - 2000 重量份；具体地，所述蛋白质或多肽为 0. 01 - 0. 5重量份，所述中链脂肪酸酯（例如中链脂肪酸甘油酯）为 1 00一 5 00重量份，所述 HLB值大于 12的乳化剂为 50 - 1 000重量份；更具体地，所述蛋白质或多肽为 0. 01 - 0. 3重量份，所述中链脂肪酸酯（例如中链脂肪酸甘油酯）为 1 00 - 300重量份，所述 HLB值大于 12的乳化剂为 5 0 - 5 00重量份。

根据本发明的任一项所述的乳剂，优选地，所述乳剂还含有磷脂，并且磷脂与蛋白质或者多肽的摩尔比为 1 0 : 1至 1 000: 1。所述磷脂与蛋白质或者多肽的摩尔比优选为 20: 1至 5 00: 1，更优选为 60: 1至 200 : 1。所述磷脂优选为大豆卵磷脂和 /或蛋黄卵磷脂。

根据本发明的任一项所述的乳剂，其还包含药学上可接受的辅料，例如分散介质、等渗剂、抗氧化剂、冻干保护剂、或 pH 调节剂。

根据本发明的任一项所述的乳剂，其中，所述分散介质选自壳聚糖、二氧化硅、硅酸铝镁、羧曱基纤维素钠、交联纤维素钠、交联羧曱基纤维素钠、硫酸镁、硬脂酸镁、聚乙二醇 400、和甘油中的一种或多种。

根据本发明的任一项所述的乳剂，其中，所述等渗剂选自木糖醇、' 氯化钠、果糖、山梨醇、和葡萄糖中的一种或多种。

根据本发明的任一项所述的乳剂，其中，所述抗氧化剂选自 L-半胱氨酸盐酸盐、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、没食子酸丙酯、谷胱甘肽、焦亚硫酸钠、焦亚硫酸钾、和维生素 E中的一种或多种。

根据本发明的任一项所述的乳剂，其中，所述的冻干保护剂选自蔗糖、乳糖、海藻糖、葡萄糖、甘氨酸、精氨酸、和木糖醇中的一种或多种。

根据本发明的任一项所述的乳剂，其中，所述的 pH值调节剂选自盐酸、硫酸、乳酸、苹果酸、醋酸、枸橼酸、磷酸、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、和磷酸二氢钠中的一种或多种。

根据本发明的任一项所述的乳剂，其为微乳剂。微乳是指由水、油、乳化剂组成的，各向同性、透明、热力学稳定的分散体系，通常粒径小于 500nm。

根据本发明的任一项所述的乳剂，其通过口服给药。

根据本发明的任一项所述的乳剂，其各组分及含量如下：重组人胰岛素 0. 008 - 0. 012重量份盐酸适量

0. 04一 0. 06重量份生理盐水 0. 4 - 0. 6重量份中链脂肪酸甘油三酯（例如 Crodamol ^ _{& ι}

0. 8 - 1. 2重量份

GTCC ) 聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯（例如

0.8 - 1.2重量份

Solutol HS 15, BASF)

吐温 80 1.2 - 1.8重量份维生素 E 0.08 - 0.12重量份; 本发明还涉及该乳剂在制备治疗或预防糖尿病、或者降低血糖的药物中的用途。本发明还涉及一种治疗或预防糖尿病、或者降低血糖的方法，包括给予有效量的该乳剂的步骤。在本发明的一个实施方案中，所述乳剂的组分及含量如下：

重组人胰岛素 0.01重

盐酸适量

0.05重量份

生理盐水 0.5重量份

中链脂肪酸甘油三酯（例如 Crodamol

1重量份

GTCC)

聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯（例如

1重量份

Solutol HS 15, BASF)

吐温 80 1.5

维生素 E 0.1

根据本发明的任一项所述的乳剂，其各組分及含量如下：

0.004 - 0.006 重量猪胰岛素

份

氢氧化钠适量

PBS緩冲液 0.8 - 1.2重量份聚乙二醇辛酸 /癸酸甘油酯（例如

1.8 - 2.2重量份

Sof itgen® 767, SASOL) 泊洛沙姆 188 (例如 Lutrol F68, BASF) Q.15 - 0.25重量份大豆卵磷脂（例如 Epikuron 170,

0.4 - 0.6重量份

Degussa )

二氧化硅（例如 SYLOID®, GRACE

0.8- 1.2重量份

DAVISON)

交联纤维素钠 0.1-Q.14重量份

0.013 - 0.017 重量硬脂酸镁

份

甘氨酸 0.25 - 0.35重量份；本发明还涉及该乳剂在制备治疗或预防糖尿病、或者降低血糖的药物中的用途。本发明还涉及一种治疗或预防糖尿病、或者降低血糖的方法，包括给予有效量的该乳剂的步骤。在本发明的一个实施方案中，所述乳剂的组分及含量如下：

猪胰岛素 0.005重量份氢氧化钠适量

PBS緩冲液 1重量份

聚乙二醇辛酸 /癸酸甘油酯（例如

2重量份

Sofitgen® 767, SAS0L)

泊洛沙姆 188 (例如 Lutrol F68, BASF) 0.2重量份

大豆卵磷脂（例如 Epikuron 170，

0.5重量份

Degussa )

二氧化硅（例如 SYLOID®, GRACE

1重量份

DAVISON)

交联纤维素钠 0.12重量份

硬脂酸镁 0.015重量份甘氨酸 0.3重量份。根据本发明的任一项所述的乳剂，其各组分及含量如下

PTH 1-34 0.0008-0.0012重量份 PBS緩冲液 0.4-0.6重量份辛酸癸酸甘油酯（例如 Miglyol ®812，

0.6 - 0.8重量份 SASOL)

聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯（例如

1.8-2.2重量份 Solutol HS 15, BASF)

生育酚琥珀酸聚乙二醇酯（例如 TPGS,

0.4 - 0.6重量份 Eastman )

吐温 20 0.4-0.6重量份维生素 E 0.08- 0.12重量份; 本发明还涉及该乳剂在制备治疗或预防骨质疏松的药物中的用途。本发明还涉及一种治疗或预防骨质疏松的方法，包括给予有效量的该乳剂的步驟。在本发明的一个实施方案中，所述乳剂的组分及含量如下：

PTH 1-34 0.001重量份

PBS緩冲液 0.5重量份

辛酸癸酸甘油酯（例如 Miglyol ®812,

0.7重量份

SASOL)

聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯（例如

2重量份

Solutol HS 15， BASF)

生育酚琥珀酸聚乙二醇酯（例如 TPGS,

0.5重量份

Eastman )

吐温 20 0.5重量份

维生素 E 0.1重量份。根据本发明的任一项所述的乳剂，其各组分及含量如下

GLP-1 0.08-0.12重量份去离子水 55 - 65重量份辛酸癸酸甘油酯（例如 Miglyol ®812,

12 - 18重量份

SASOL)

泊洛沙姆 188(例如 Lutrol F68, BASF ) 1.3- 1.7重量份大豆卵碑脂（例如 Epikuron 170，

6-8重量份

Degussa )

甘油 8- 12重量份聚乙二醇 400 6-8重量份

维生素 E 00..2255-- 00..3355重重量份；本发明还涉及该乳剂在制备治疗或预防糖尿病、或者降低血糖的药物中的用途。本发明还涉及一种治疗或预防糖尿病、或者降低血糖的方法，包括给予有效量的该乳剂的步骤。在本发明的一个实施方案中，所述乳剂的组分及含量如下：

GLP-1 0.1重量份

去离子水 60重量份

辛酸癸酸甘油酯（例如 Miglyol ®812

15重量份

SASOL)

泊洛沙姆 188(例如 Lutrol F68, BASF ) 1.5重量份

大豆卵麟脂（例如 Epikuron 170，

7重量份

Degussa )

甘油 10重量份

聚乙二醇 400 7重量份

维生素 E 0.3重量份 < 根据本发明的任一项所述的乳剂，其为冻干乳剂（冻干制剂）。对本领域技术人员而言，能够制得上述乳剂的冻干制剂，例如在上述乳剂中加入适量的冻干保护剂，然后通过冷冻干燥（例如温度- 40'C，工作真空度 30pa)后去除水分，从而得到干燥的蛋白质或多肽冻干乳剂。冻千后乳剂不含水相，可以做成片剂、胶嚢剂等终剂型。本发明所的乳剂的制备方法，例如可以¹采用下面的步骤：

1 )如下的步骤 A或 B:

A. 在 4 - 25°C奈件下，将蛋白质或多肽分子溶于水相；

B. 制备蛋白质或多肽的磷脂复合物；

2 ) 在 20 - 70°C条件下，将中链脂肪酸酯、 HLB值大于 12的乳化剂相混合，并在 200 - 800πηρ搅袢奈件下持续搅拌，直至整个体系呈透明清亮状；

3) 在 4 - 37°C条件下，将步骤 1 ) 产物加入到步骤 2 ) 产物中，并在 200 - 800rmp条件下继续搅拌，直至形成透明清亮的均匀制剂，最终获得含蛋白质或多肽药物的乳剂。

关于步骤 A，可选地，溶于水相的成分还包括 pH调节剂和 / 或等渗剂。

关于步骤 B，为对本领域技术人员而言，能够制备所述的磷脂复合物。例如采用下面的方法：分别将磷脂和蛋白溶于有机相和水相，混合后，冷冻干燥（-40 至- 150°C, 甚至更低；压力为低于 -100帕，低于 -200帕，或者低于 -300帕；冻干时间为 12小时以上，例如 12 - 24 小时，或者为 24 小时以上，例如 24 - 48 小时），获得蛋白磷脂复合物。在优选的实施方案中，磷脂与蛋白质或者多肽的摩尔比为 10: 1至 1000: 1。所述磷脂与蛋白质或者多肽的摩尔比更优选为 20: 1至 500: 1，进一步优选为 60: 1至 200: 1。所述磷脂优选为大豆卵嶙脂和 /或蛋黄卵磷脂。有机相为二氯甲烷、丙酮、或二甲基亚砜，优选二甲基亚砜。

关于步骤 2 ) ，可选地，相混和的还包括去离子水；可选地，还包括分散介盾和 /或抗氧化剂。

在本发明的一个实施方案中，所述制备方法还包括步骤 4 ) ：将步骤 3 ) 中制得的乳剂进行冻干，得到冻干乳剂。步骤 B )和步骤 4 ) 中涉及的冻干步骤可以使用本发明描述的冻干保护剂。在本发明中，术语 "胶束（mice l les ) " 是指在溶液中由若干溶质分子或离子締合形成的以疏水基团为内核、亲水基团为外壳的分子有序聚集体。胶束是一种胶体分散体系，属于一类締合胶体。两亲性高分子物质在溶液中分散达到临界胶束浓度（CMC ) 时，分子締合自组装形成胶束。发明的有益效果

在本发明中通过选用 HLB值（亲水亲油平衡值）为 12以上的非离子表面活性剂为乳化剂，中链脂肪酸酯为油相，含蛋白质多肽药物的水溶液为水相，制备出分散性好，粒径均勾，乳化性能良好的蛋白质多肽的乳剂。本发明的显著特点，是解决了蛋白质多肽类乳剂乳化性能的问题，能显著增加蛋白质或多肽药物的口服生物利用度，极具应用前景，并且制备工艺简单，适于工业化生产，该产品的剂型，可以是乳剂、胶束溶液、自乳化给药体系、膏状物质或固体粉末。附图说明

Fig.1: 回肠给药后大鼠血糖化时相图。

Fig.2: PTH1- 34血药浓度。

Fig.3: PTH1-34药效试验。对于胫骨近端 BMD、胫骨近端 BMC、胫骨 BMD、胫骨 BMD四组中的每一组，从左至右的四个柱状图形分别表示口服组、注射组、对照组、假手术组。具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。实施例 1: 口服胰岛素制剂（样品 1) 的制备

其组成如下：

猪胰岛素 0.005克

5摩尔氢氧化钠适量

PBS緩冲液（北京索莱宝科技有限公司） 1克

聚乙二醇辛酸 / 癸酸甘油酯 ₂克

( Sofitgen® 767， SAS0L)

泊洛沙姆 188 (Lutrol F68, BASF) 0.2克

大豆卵御旨（ Epikuron 170， Degussa ) 0· 5克

二氧化硅（ SYLOID®, GRACE DAVISON) 1克

交联纤维素钠 Q.12克

硬脂酸镁 0.015克甘氨酸 0. 3克

该制剂的制备方法如下：

1 ) 室温下，将上述重量的猪胰岛素溶解于 0. 2克 PBS緩冲液，加入适量氢氧化钠，所得溶液搅拌至澄清，得 A溶液；

2 ) 室温下，将上述重量的大豆卵磷脂溶解于 60ml的二甲基亚砜，搅拌至澄清后，加入步骤 1 ) 中的 A溶液，在 300r/min条件下搅拌 5fflin，随后放置到液氮中 30min, 所得产物经冷冻干燥后，得到猪胰岛素大豆卵磷脂复合物；

3 ) 70 °C下，将上述重量的甘氨酸、泊洛萨姆 188 溶于剩余 PBS緩冲液，与上述重量的聚乙二醇辛酸 /癸酸甘油酯，混合并搅拌至透明清亮；

4 ) 室温下，猪胰岛素大豆卵磷脂复合物，加入到步驟 3 ) 中的产物中，在 200r/min转速下将混合物搅拌 15min;

5 )室温下，将上述重量的二氧化硅、交联纤维素钠、硬脂酸混合后，在 200r/min转速下，逐滴加入步骤 4 ) 的产物，随后提高转速至 300r/min，并保持 30min; 所得产物经冷冻干燥（温度 - 40'C，工作真空度 30pa )后，最终获得胰岛素口服制剂，为样丄。

样品 1可以做成片剂、胶嚢剂等终剂型。

本领域技术人员可以理解，尽管实施例 1中的各组分的重量单位是克，但是也可以理解为重量份，即各组分之间满足上面的实施例 1中的重量比例就可以。实施例 2: 胰岛素口服制剂（样品 2 ) 的制备

其组成如下：

重组人胰岛素 0. 01克 1摩尔盐酸

壳聚糖 0.05克生理盐水 0.5克中链脂肪酸甘油三酯（Crodamol GTCC) 1克

聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯（Solutol HS

15， BASF)

吐温 80 1.5克维生素 E 0。 1克该制剂的制备方法如下：

1 )室温下，将重组胰岛素、壳聚糖溶于生理盐水，加入适量盐酸、搅拌至澄清，得 A溶液；

2) 40°C下，将上述重量的中链脂肪酸甘油三酯、聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯、吐温 80和维生素 E，混合并搅袢至透明清亮；

3) 室温下，将 A 溶液，逐滴加入到步骤 2 ) 的产物中，在 200r/min转速下将混合物搅袢至透明清亮，最终获得胰岛素口服制剂，为样品 2。

本领域技术人员可以理解，尽管实施例 ²中的各组分的重量单位是克，但是也可以理解为重量份, 即各組分之间满足上面的实施例 1中的重量比例就可以。实施例 3: 重组人曱状旁腺激素 1-34口服制剂（样品 3) 的制备

其组成如下：

PTH 1-34 0.001克

PBS緩冲液（北京索莱宝科技有限公司 ) 0.5克辛酸癸酸甘油酯（ Miglyol ®812， 0.7克 SASOL)

聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯（Solutol HS

2克

15， BASF)

生育酚琥珀酸聚乙二醇酯（ TPGS， ^

、 0· 5克

Eastman )

吐温 20 0.5克维生素 E 0.1克该制剂的制备方法如下：

1 )室温下，将上述重量的 PTH1-34溶于 PBS緩冲液，搅拌至澄清，得 A溶液；

2) 60°C下，将上述重量的辛酸癸酸甘油酯、聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯、生育酚琥珀酸聚乙二醇酯、吐温 20、维生素 E, 混合并搅袢至透明清亮；

3) 室温下，将 A 溶液，逐滴加入到步骤 2) 的产物中，在 lOOr/min转速下将混合物搅拌 15min, 最终获得 PTH 1-34口服制剂，为样品 3。

本领域技术人员可以理解，尽管实施例 3中的各组分的重量单位是克，但是也可以理解为重量份，即各组分之间满足上面的实施例 3中的重量比例就可以。实施例 4: GLP-1口服制剂（样品 4) 的制备

其组成如下

GLP-1 0.1克

去离子水 60克

辛酸癸酸甘油酯（ Miglyol ®812, ^

、 15克

SAS0L) 泊洛沙姆 188 (Lutrol F68, BASF) 1.5克

大豆卵麟脂（Epikuron 170， Degussa ) 7克

甘油 10克

聚乙二醇 400 7克

维生素 E 0.3克

该制剂的制备方法如下：

1 )室温下，将上述重量的 GLP-1溶于 5克去离子水，将上述重量的大豆卵磷脂溶于 30ml的二氯曱烷中，两相混合后，置于液氮 30min，冷冻千燥，所得产物为 GLP- 1大豆磷脂复合物；

2) 70°C下，将上述重量的辛酸癸酸甘油酯、泊洛萨姆 188、 5克去离子水，混合并搅拌至透明清亮；

3) 室温下，在 500r/min转速下，将 GLP- 1大豆卵磷脂复合物加入步骤 2) 的产物中，继续搅拌 5min，得初乳 B;

4) 室温下，将上述重量的甘油、聚乙二醇、维生素 E，和剩余的 50克水混合，在 500r/mifi转速下，逐滴加入初乳 B, 继续搅拌 5min后，经高压均质机（意大利 Niro Soavi )处理（ Obar, 循环 5次），最终获得的透明清亮的胶束溶液，即为 GLP-1 口服制剂，为样品 4。

本领域技术人员可以理解，尽管实施例 4中的各组分的重量单位是克，但是也可以理解为重量份，即各组分之间满足上面的实施例 4中的重量比例就可以。实施例 5: 样品 2、 3、 4的稳定性研究

口服制剂样品 2、 3、 4的稳定性，通过肉眼观察制剂是否出现絮状物质或产生 "油一水" 界面而判定。

样品 1、 2中胰岛素的稳定性，采用高效液相色谱进行研究，所用色镨仪为 Agilent 1200。

色谱洗脱条件：

流动相为线性梯度洗脱，其中流动相 A为乙腈，流动相 B为 0.05 mol/L磷酸二氢钠（pH3.0) ： 0 - lOmin流动相 A从 20 %升至 50%，流动相 B从 80%变至 50%; 11 - 15min流动相 A从 50% 变至 80%，流动相 B从 50%变至 20%; 21 - 25min流动相 A从 80%变至 20%, 流动相 B从 20%变至 80%。流速 1.0mL/min，检测波长为 214nm, 柱温 40° (：。

在 6个月的考察期内，放置于 4。C的样品 2制剂、样品 3制剂、样品 4制剂没有产生肉眼可见的絮状物质，也没有产生 "油 —水" 界面。

另外对照高效液相色谱图，我们发现样品 1、 2在不同时间（ 0、 3m、 6m) 其药效成分胰岛素的保留时间、峰面积，均没有发生显著变化，这就表明，在 4'C条件下，所得样品至少能保持 6个月的稳定性。实施例 6: 样品 1 - 4的药物成分的含量变化试验

所得制剂至于 4°C冰箱，并在放置后的 0天、第三个月、第六个月测定药物含量。釆用 HPLC 法进行药物活性成分含量的测定，结果如表 1所示。

表 1: 样品 1-4药物成分含量的变化

样品 4 95.0 93.8 94.6 实施例 7: 乳剂稀释液粒径及外观研究

实施例 2、实施例 3制备的样品 2、 3，放置 4°C冰箱，并于 0 天、第三个月、第六个月测定乳剂粒径及外观清亮情况。用 Malvern Zetasizer 3000HSA 粒度分析仪检测的粒径，测定前，样品 2、 3用 Millipore超纯水分别稀释 5、 30、 100倍，并肉眼测定各稀释液外观是否清亮。结果如下面的表 2所示。

表 2: 乳剂稀释液粒径及外观的结果

实施例 8: 胰岛素口服制剂药效研究

试验组 1: 体重为 180-220克范围的雄性 SD大鼠， 6只，给药为实施例 1制备的样品 1。

试验组 2: 体重为 180-220克范围的雄性 SD大鼠， 6只，给药为实施例 2制备的样品 2。

对照组：体重为 180- 220克范围的雄性 SD大鼠， 6只，给药为胰岛素水溶液，皮下注射。

试验方法：

将体重为 180-220克范围的雄性 SD大鼠禁食 12h后开始试验；实验前用剂量为 50mg的戊巴比妥钠对动物进行麻醉。待动物麻醉后，按仰位方式将其捆绑，并在腹部切一小口，用给药器对回肠给药。给药后，缝合切口，并在 0. 5、 1、 2、 3、 4h时刻点，由尾静脉取血，使用罗氏血糖测定仪测定血糖并计算每组内 6只大鼠的平均血糖值。其中试验组 1中给药为样品 1，按胰岛素计，给药剂量为 0. 3mg/kg; 试验组 2中给药为样品 2，按胰岛素计，给药剂量为 lmg/kg; 对照组为皮下注射对照药物，给药剂量按胰岛素计为 0. 02mg/kg。给药后，大鼠血糖变化如图 1 所示。图 1 显示样品 1和样品 2均能够有效地降低大鼠的血糖。其中样品 1 与对照组在给药后 1小时，血糖浓度均降至最低值。实施例 9 : PTH1-34口月良制剂的灌胃吸收试验

试验组：体重为 180-220克范围的雄性 SD大鼠， 12只，给药为实施例 3制备的样品 3，胃部给药。

对照组：体重为 180-220克范围的雄性 SD大鼠， 10只，给药为 PTH1- 34 PBS溶液，皮下注射。

试验方法：

所有大鼠在禁食 12h后开始试验。试验组采用胃部给药方式，对照组选用 PTH1- 34注射液。胃部给药：采用给药器，以 PTH1-34 计，按 5(Vg/kg剂量对大鼠胃部灌注 PTH1-34口服制剂；注射给药：以 PTH1- 34计，按 l(Vg/kg剂量，皮下注射 PTH1-34注射液。

给药后 15、 30、 45、 60、 75、 90、 105min时刻点，由尾静脉取血，分离出血清备测。血清中 PTH 1-34浓度用 PTH 1-34 高灵敏度 EIA试剂盒（美国 Alpco Di agnos t ic , 货号 31-IPTHUU-E01 ) 检测，该试剂盒仅与外源 PTH1-34特异性反应，而不与大鼠本身 PTH反应，因而所能检测到的 PTH1-34 , 即为给药后进入大鼠血液中的 ΡΤΗ1-34。灌胃组动物为 12只，注射组动物为 10只。给药后， PTH1-34血药浓度变化如图 2所示。图 2显示，灌胃给药后， PTH1-34 能够迅速进入大鼠体内，两者血药浓度达峰时间极其相近（试验组血药浓度达峰时间为 18. 3 ± 1. 2分钟，对照组达峰时间为 17. 4 ± 0. 9分钟）按血药浓度计，灌胃给药组相对于注射组的生物利用度为 6. 73%。实施例 10: PTH1-34口服制剂的药效试验

通过建立去势雌鼠模型，研究口服 PTH1-34制剂对动物骨密度、骨矿含量的影响。

口服组：选取 2月龄的雌性大鼠 6只，切除雌鼠双侧卵巢，给药为实施例 3制备的样品 3 , 口服灌胃方式给药。

注射组：选取 2月龄的雌性大鼠 6只，切除雌鼠双侧卵巢，给药为实施例 3制备的样品 3， PTH1-34 PBS注射液，皮下注射。

对照组：选取 2月龄的雌性大鼠 6只，切除雌鼠双侧卵巢，给药为实施例 3制备的样品 3，不给药。

假手术组：选取 2月龄的雌性大鼠 5只，保留卵巢，切除卵巢附近同等大小的脂肪，不给药。

试验方法：

选取 2月龄的雌性大鼠，随机分为去势组（去势动物，通过手术切除大鼠双侧卵巢，包括口服组、注射组、对照组）与假手术组，饲养 6周，随后口服组和注射组连续给药 8周，每周给药 6 天，每天一次，给药前对大鼠禁食 10 小时。其中口服组剂量 10(Vg/kg (n=6 ),注射组给药剂量 l(^g/kg( n=6 ),对照组（n-6)、假手术组（n-5 )不给药。然后后测定左侧胫骨的骨密度（BMD) 、骨矿含量（ BMC ) (双能 X 射线吸收法检测， dual X-ray absorptimetry ) ， *P<0.01， **Ρ<0· 05。结果如图 3所示。

由图 3可知，与对照组相比，经过治疗，骨质疏松模型大鼠的胫骨及胫骨近端 BMD (单位 g/cra²) 、 BMC (单位 g) 均有显著增加，这就表明， PTH1-34注射液及 PTH1-34 口服制剂，均能促进骨骼生成，对骨质疏松有着显著的疗效。

尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

Claims

权利要求

1. 一种乳剂，包含蛋白质或多肽、水相、油相、乳化剂，其特征在于，所述油相含有中链脂肪酸酯，并且所述乳化剂包括 HLB 值大于 12的乳化剂。

2. 根据权利要求 1所述的乳剂，其中，所述蛋白质或多肽为降钙素、胰岛素、 GLP- 1、曱状旁腺激素、曱状旁腺激素 1-84、甲状旁腺激素 1-34、或生长激素。

3. 根据权利要求 1所述的乳剂，其中，所述中链脂肪酸酯为中链脂肪酸甘油酯、聚乙二醇化的中链脂肪酸甘油酯、乙酰化中链脂肪酸甘油酯、中链脂肪酸丙二醇酯、中链脂肪酸丁二醇酯、中链脂肪酸聚乙二醇酯；具体地，为碳原子数 6 - 12的脂肪酸的甘油一酯、甘油二酯、和 /或甘油三酯；更具体地，为选自辛酸癸酸甘油酯、聚乙二醇辛酸 /癸酸甘油酯、辛酸甘油酯、癸酸甘油酯中的一种或多种。

4. 根据权利要求 1所述的乳剂，其中，所述 HLB值大于 12的乳化剂为选自泊洛沙姆 188、泊洛沙姆 407、吐温 20、吐温 80、聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯、聚氧乙烯醚（35)蓖麻油、聚氧乙浠醚（40) 氢化蓖麻油、生育酚琥珀酸聚乙二醇酯、聚乙二醇 -32-月桂酸甘油酯、聚乙二醇 -32-硬脂酸甘油酯中的一种或多种。

5. 根据权利要求 1所述的乳剂，其中，所述蛋白质或多肽为 0. 01 - 1重量份，所述中链脂肪酸酯为 50 - 1000重量份，所述 HLB 值大于 12的乳化剂为 20 - 2000重量份；具体地，所述蛋白质或多肽为 0. 01 - 0. 5重量份，所述中链脂肪酸酯为 100 - 500重量份，所述 HLB值大于 12的乳化剂为 50 - 1000重量份；更具体地，所述蛋白质或多肽为 0. 01 - 0. 3重量份，所述中链脂肪酸酯为 100 一 300重量份，所述 HLB值大于 12的乳化剂为 50 - 500重量份。

6. 根据权利要求 1所述的乳剂，其中，所述乳化剂还含有磷脂。

7. 根据权利要求 6所述的乳剂，其中，磷脂与蛋白质或者多肽的摩尔比为 10: 1至 1000: 1，优选为 20: 1至 500: 1，更优选为 60: 1至 200: 1。

8. 根据权利要求 6所述的乳剂，其中，所述磷脂为大豆卵磷脂和 /或蛋黄卵磷脂。

9. 根据权利要求 1至 8中任一项所述的乳剂，其还包含药学上可接受的辅料，例如分散介质、等渗剂、抗氧化剂、冻干保护剂、或 pH调节剂。

10. 根据权利要求 2 所述的乳剂，其各组分及含量如下面的

(1) - (6) 组中的任一组所示：

( 1)

重組人胰岛素 0.008 - 0.012重量份盐酸适量

0.04 - 0.06重量份生理盐水 0.4- 0.6重量份中链脂肪酸甘油三酯 0.8 -1.2重量份聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯 0.8 -1.2重量份吐温 80 1.2 -1.8重量份维生素 E 0.08- 0.12重量份； (2)

重组人胰岛素 0.01重

盐酸适量

壳聚糖 0.05重量份生理盐水 0.5重量份中链脂肪酸甘油三酯 1重量份

聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯 1重量份

吐温 8G 1.5重量份维生素 E 0.1重量份；

(3)

0.004 - 0.006 重量猪胰島素

份

氢氧化钠适量

PBS緩沖液 0.8 -1.2重量份聚乙二醇辛酸 /癸酸甘油酯 1.8 - 2.2重量份泊洛沙姆 188 0.15 - 0.25重量份大豆卵磷脂 0.4 - 0.6重量份二氧化硅 0.8 -1.2重量份交联纤维素钠 0.1 - 0.14重量份

0.013 - 0.017 重量硬脂酸镁

份

甘氨酸 0.25 - 0.35重量份； (4)

猪胰岛素 0.005重量份氢氧化钠适量

PBS緩沖液 1重量份

聚乙二醇辛酸 /癸酸甘油酯 2重量份

泊洛沙姆 188 0.2重量份

大豆卵磷脂 0.5重量份

二氧化硅 1重量份交联纤维素钠 0.12重量份硬脂酸镁 0.015重量份甘氨酸 0.3重量份;

(5)

GLP-1 0.08-0.12重量份去离子水 55 - 65重量份辛酸癸酸甘油酯 12-18重量份泊洛沙姆 188 1.3- 1.7重量份大豆卵磷脂 6-8重量份甘油 8-12重量份聚乙二醇 400 6-8重量份维生素 E 0.25 - 0.35重量份 (6)

GLP-1 0.1重量份去离子水 60重量份

辛酸癸酸甘油酯 15重量份

泊洛沙姆 188 1.5重量份大豆卵磷脂 7重量份

甘油 10重量份

聚乙二醇 400 7重量份

维生素 E 0.3重量份。

11. 根据权利要求 2所述的乳剂其各组分及含量如下：

0.0008-0.0012 重

PTH 1-34

份

PBS緩冲液 0.4- 0.6重量份辛酸癸酸甘油酯 0.6- 0.8重量份聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯 1.8-2.2重量份生育酚琥珀酸聚乙二醇酯 0.4- 0.6重量份吐温 20 0.4 - 0.6重量份维生素 E 0.08一 0.12重量份; 具体地，所述乳剂的组分及含量如下

PTH 1-34 0.001重量份

PBS緩冲液 0.5重量份

辛酸癸酸甘油酯 0.7重量份

聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯 2重量份

生育酚琥珀酸聚乙二醇酯 0.5重量份

吐温 20 0.5重量份

维生素 E 0.1重量份。

12. 根据权利要求 1至 11中任一项所述的乳剂，其为微乳剂或冻干乳剂。

13. 权利要求 1-12 项任一项所述的乳剂的制备方法，包括下述步驟：

1 ) 如下的步驟 A或 B:

A. 在 4-25°C条件下，将蛋白质或多肽分子溶于氷相；

B. 制备蛋白质或多肽的磷脂复合物；

2) 在 20 - 70。C条件下，将中链脂肪酸酯、 HLB值大于 12的乳化剂相混合，并在 200 - 800rmp搅拌条件下持续搅拌，直至整个体系呈透明清亮状；

3) 在 4- 37。C条件下，将步驟 1) 产物加入到步骤 ² )产物中，并在 200 - 800rmp条件下继续搅拌，直至形成透明清亮的均匀制剂，最终获得含蛋白质或多肽药物的乳剂。

14. 权利要求 10所述的乳剂在制备治疗或预防糖尿病、或者降低血糖的药物中的用途。

15. 权利要求 11所述的乳剂在制备治疗或预防骨质疏松的药物中的用途。

16. 一种治疗或预防糖尿病、或者降低血糖的方法，包括给予有效量的权利要求 10所述的乳剂的步骤。

17. 一种治疗或预防骨质疏松的方法，包括给予有效量的权利要求 11所述的乳剂的步骤。