WO2010109920A1

WO2010109920A1 - 高濃度モノクローナル抗体溶液中のウイルス除去方法

Info

Publication number: WO2010109920A1
Application number: PCT/JP2010/002219
Authority: WO
Inventors: 本郷智子; 小室雅廉
Original assignee: Asahi Kasei Medical Co Ltd
Current assignee: Asahi Kasei Medical Co Ltd
Priority date: 2009-03-27
Filing date: 2010-03-26
Publication date: 2010-09-30
Anticipated expiration: 2011-09-27
Also published as: EP2412817A1; CN102365368B; ES2573663T3; JP5755136B2; JPWO2010109920A1; EP2412817B2; EP2412817B1; US9056896B2; US20120077963A1; EP2412817A4; ES2573663T5; CN102365368A

Abstract

　本発明の目的は、高い濃度のモノクローナル抗体溶液から、小ウイルスまで膜によって除去し、抗体を短時間かつ高い収率で濾液として回収する方法を提供することである。本発明によれば、モノクローナル抗体溶液中のウイルスをウイルス除去膜で濾過することで除去するウイルス除去工程を含む、モノクローナル抗体を含む製剤の製造方法であって，（１）モノクローナル抗体におけるモノマー含有率が９０％以上であり、（２）モノクローナル抗体溶液におけるモノクローナル抗体濃度が２０ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌであり、（３）モノクローナル抗体溶液は、塩基性アミノ酸を少なくとも含み、かつ（４）ウイルス除去膜のパルボウイルスの除去率が、ＬＲＶ（Log Reduction Value：対数減少値）≧４である、ことを特徴とする、上記の方法が提供される。

Description

高濃度モノクローナル抗体溶液中のウイルス除去方法

　本発明は、高濃度モノクローナル抗体溶液中に存在するウイルスを除去する方法、及び高濃度モノクローナル抗体溶液の製造方法に関する。

　細胞培養により製造されたモノクローナル抗体を含む抗体医薬には原料由来または工程由来のウイルスの混入が懸念されるため、抗体医薬を製造する過程でウイルスを不活化、あるいは除去する必要がある。抗体医薬に混入するおそれのあるウイルスの不活化方法としては、加熱処理や化学薬品による処理などが行なわれているが、それら単独の処理だけではウイルスの不活化は充分でなく、またこれらの方法では抗体医薬中の抗体そのものも変性するおそれがある。このような背景から、化学的な変性を伴わない物理的なウイルス除去手段として、濾過膜によるウイルスの分離除去が実施されている。

　ウイルス除去用の濾過膜としては、セルロースのような天然素材よりなる膜、あるいはポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）のような合成高分子素材よりなるウイルス除去膜が知られている（非特許文献１～４）。

　これらのウイルス除去膜を装填したウイルス除去装置による抗体医薬の濾過は、短時間で、より多くの量の抗体を濾過でき、かつ充分に高いウイルス除去性能をもってウイルスを除去できることが理想である。しかし実際には、例えばセルロース膜では２０ｍｇ／ｍｌ以上の抗体濃度でも膜の目詰まりを起こし難く、濾過できるが、耐圧性が低く、実使用圧力を１００ｋＰａ程度までしか上げられない。あるいは合成高分子膜では、耐圧性は高く、実使用圧力を３００ｋＰａ程度まで上げても問題ないが、抗体濃度を２０ｍｇ／ｍｌ程度に上げると膜が目詰まりを起こし、濾過できなくなってしまうというような問題があった。そのため、１０ｍｇ／ｍｌ以下の低濃度での濾過が行なわれるのが一般的であった。

　しかしながら近年では抗体医薬の製剤濃度が高くなる傾向にあり、それに伴いウイルスを除去するための濾過工程に於いても抗体濃度を高くしたいという要求が高まりつつある。　モノクローナル抗体溶液中の抗体濃度を高くするとモノクローナル抗体同士が会合して凝集体を形成し易くなる傾向があり、ウイルス除去膜のように小さな孔径を持つ膜で濾過される場合には、濾過による物理的なストレスによりモノクローナル抗体同士の会合が更に顕著となり、上記したようにウイルス除去膜が目詰まりしてしまう。

　特にモノクローナル抗体溶液からパルボウイルスのような直径１８－２４ｎｍ程度の小ウイルスを高い除去率で除去するためには、パルボウイルス除去を対象とした孔径の小さいウイルス除去膜が必要となるが、このような膜で高濃度のモノクローナル抗体溶液を濾過するとすぐに目詰まりしてしまい、抗体の回収率が著しく低くなったり、濾過に要する時間が非常に長くなったりしてしまうという問題があった。

　モノクローナル抗体に関する先行技術ではないが、フィブリノーゲンに着目して、アルギニン、グアニジン、シトルリン、尿素及びその誘導体及び塩から選択されるカオトロピック物質、及びポリエトキシソルビタンエステル及びその誘導体から選択される化合物から選択される少なくとも一つの成分を蛋白溶液に加え、次に１５ｎｍ以上３５ｎｍ未満の孔径を持つウイルス除去膜で蛋白溶液を濾過する、ナノ濾過により蛋白溶液からウイルスを除去する方法を開示する先行技術がある（特許文献１）。

　特許文献１には、前記成分が蛋白分子の会合、あるいは分子周辺の水和層形成を抑制ないしは阻止するという推定が記載されているが、意図している蛋白質はフィブリノーゲン、第VIII因子等の血液凝固因子である。また実施例はフィブリノーゲン溶液の膜透過性をアルギニンの存在／非存在下で比較しているだけである。更にフィブリノーゲン濃度も５ｍｇ／ｍｌ未満であり、低濃度の溶液を対象としている。フィブリノーゲンは、出血時にポリマー化して止血に役立つ蛋白質であるが、長さが６０ｎｍ近くある紐状の細長いタンパク質である。これに対してモノクローナル抗体は、直径１５ｎｍ程度の球状の蛋白質であり、等電点や親水性等の物理化学的な性質もフィブリノーゲンとは大きく異なる蛋白質である。　特許文献１はフィブリノーゲンに関する発明であって、モノクローナル抗体に関する技術ではなく、蛋白質として全く異なる性質に関する技術であるので、モノクローナル抗体を精製する上で参考になる技術ではない。

　特許文献２には、ウイルス混在のおそれのあるフィブリノーゲンを含有する溶液からウイルス除去膜を用いてウイルスを除去する方法において、フィブリノーゲンを含有する溶液に塩基性アミノ酸またはその塩類及び塩化ナトリウムを含有させることを特徴とするウイルス除去法が記載されている。特許文献２もフィブリノーゲン溶液を対象とした膜によるウイルス除去であり、またタンパク濃度も５～１６．５ｍｇ／ｍｌと低く本願の目的とする高濃度モノクローナル抗体溶液とは大きく異なる。またウイルス除去膜もパルボウイルスのような小ウイルスの除去性能が低い膜すなわち小さなウイルスは通過可能な膜を用いており、除去対象とするウイルスも本願の対象に比べて大きいものであるため、モノクローナル抗体の凝集体が膜との関係で濾過時に問題となることもない技術である。

　モノクローナル抗体の精製プロセスにおいて、ウイルス除去膜を用いる際の液の条件（ｐＨ，イオン強度　等）は多岐にわたり、そのため、抗体と膜の表面の物理化学的特性は液条件により異なる。実際、液条件によっては、抗体濾過の際にＦｌｕｘが非常に低いケースがあった。この原因として、抗体表面と膜表面との間の相互作用が関係しており、中でも両者の間に働く静電的相互作用が影響している。抗体と膜の表面の電荷の性質は、表面電位（ゼータ電位）として表され、溶液のｐＨと等電点（ｐＩ）との関係性で、プラスまたは、マイナスの電位状態に変化している。モノクローナル抗体のｐＩは６～１０に範囲であることが知られており、ｐＨ＜ｐＩの条件では、モノクローナル抗体は高いプラス電位を持ち、膜濾過においては、不利に作用する。そのため、抗体の表面電位を緩和し、膜との静電的相互作用を抑制すれば、濾過のＦｌｕｘ向上につながると考えられるが、一方、このような液条件下では、高濃度のモノクローナル抗体溶液においては、抗体自身の電荷に起因した分散安定性が悪くなることで、凝集体を作りやすくなり、膜濾過において、経時的なＦｌｕｘ低下を引き起こすという問題があった。

　すなわち、膜と抗体の表面電位を制御し、かつ高濃度の抗体自体の会合を抑制することで、膜による濾過性を向上させ、高濃度のモノクローナル抗体溶液から、短時間かつ高い収率で、小ウイルスまで膜によって除去する方法に関する先行技術は存在しなかった。

米国特開２００３/０２３２９６９号公報特開２００１－３３５５０９号公報

Manabe.S、Removal of virus through novel membrane filtration method.、Dev. Biol. Stand.、(1996)88: 81-90. Brandwein Hら、Membrane filtration for virus removal.、Dev Biol (Basel).、(2000)102: 157-63. Aranha-Creadoら、Clearance of murine leukaemia virus from monoclonal antibody solution by a hydrophilic PVDF microporous membrane filter.、Biologicals. (1998) Jun;26(2):167-72. L. Moce-Llivinaら、Comparison of polyvinylidene fluoride and polyether sulfone membranes in filtering viral suspensions、Journal of Virological Methods 、(2003) April、 Vol.109, Issue 1,Pages 99-101.

　上記問題点に鑑み、本発明の課題は、高い濃度のモノクローナル抗体溶液から、小ウイルスまで膜によって除去し、抗体を短時間かつ高い収率で濾液として回収する方法を提供することにある。

　本発明者らは、上記問題点を解決するために鋭意検討を行なった結果、塩基性アミノ酸を添加したモノクローナル抗体溶液を用いてウイルス除去膜で濾過することによって、高濃度モノクローナル抗体溶液中に存在するウイルスを高い除去率で除去できることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明によれば以下の発明が提供される。

［１］　モノクローナル抗体溶液中のウイルスをウイルス除去膜で濾過することで除去するウイルス除去工程を含む、モノクローナル抗体を含む製剤の製造方法であって、
（１）モノクローナル抗体におけるモノマー含有率が９０％以上であり、
（２）モノクローナル抗体溶液におけるモノクローナル抗体濃度が２０ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌであり、
（３）モノクローナル抗体溶液は、塩基性アミノ酸を少なくとも含み、かつ
（４）ウイルス除去膜のパルボウイルスの除去率が、ＬＲＶ（Log Reduction Value：対数減少値）≧４である、
ことを特徴とする、上記の方法。

［２］　モノクローナル抗体溶液中のウイルスをウイルス除去膜で濾過することで除去するウイルス除去工程を含む、モノクローナル抗体溶液のウイルス除去方法であって、
（１）モノクローナル抗体におけるモノマー含有率が９０％以上であり、
（２）モノクローナル抗体溶液におけるモノクローナル抗体濃度が２０ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌであり、
（３）モノクローナル抗体溶液は、塩基性アミノ酸を少なくとも含み、かつ
（４）ウイルス除去膜のパルボウイルスの除去率が、ＬＲＶ（Log Reduction Value：対数減少値）≧４である、
ことを特徴とする、上記の方法。

［３］　モノクローナル抗体溶液中のウイルスをウイルス除去膜で濾過することで除去するウイルス除去工程を含む、モノクローナル抗体を含む製剤の製造方法において、
（１）モノクローナル抗体におけるモノマー含有率が９０％以上であり、
（２）モノクローナル抗体溶液におけるモノクローナル抗体濃度が２０ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌであり、
（３）モノクローナル抗体溶液は、塩基性アミノ酸を少なくとも含み、かつ
（４）前記溶液中のモノクローナル抗体のゼータ電位Ｅｉ１（ｍＶ）が、
ａ）前記ウイルス除去膜のゼータ電位Ｅｍ（ｍＶ）に対し、
０ｍＶ　≦　Ｅｉ１－　Ｅｍ　≦　２０ｍＶ
ｂ）前記モノクローナル抗体を含む
ｐＨ＝４、イオン強度０．１ｍＭの溶液中のモノクローナル抗体のゼータ電位Ｅｉ０（ｍＶ）に対し、
１０ｍＶ　≦　Ｅｉ０　－　Ｅｉ１　≦　４０ｍＶ
の範囲である、上記方法。

［４］　モノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体溶液を、ウイルス除去膜でろ過するウイルス除去方法において、
（１）モノクローナル抗体におけるモノマー含有率が９０％以上であり、
（２）モノクローナル抗体溶液におけるモノクローナル抗体濃度が２０ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌであり、
（３）モノクローナル抗体溶液は、塩基性アミノ酸を少なくとも含み、かつ
（４）前記溶液中のモノクローナル抗体のゼータ電位Ｅｉ１（ｍＶ）が、
ａ）前記ウイルス除去膜のゼータ電位Ｅｍ（ｍＶ）に対し、
０ｍＶ　≦　Ｅｉ１－　Ｅｍ≦　２０ｍＶ
ｂ）前記モノクローナル抗体を含む
ｐＨ＝４、イオン強度　０．１ｍＭの溶液中のモノクローナル抗体のゼータ電位Ｅｉ０（ｍＶ）に対し、
１０ｍＶ　≦　Ｅｉ０　－　Ｅｉ１　≦　４０ｍＶ
の範囲である上記方法。
［５］　モノクローナル抗体溶液中のモノクローナル抗体のゼータ電位Ｅｉ１（ｍＶ）が、ウイルス除去膜のゼータ電位Ｅｍ（ｍＶ）に対し、
－４％　ｘ　Ｅｍ　≦　Ｅｉ１　≦　－５５０％　ｘ　Ｅｍ
である、［３］又は［４］に記載の方法。
［６］　モノクローナル抗体を含むｐＨ＝４、イオン強度０．１ｍＭの溶液中のモノクローナル抗体のゼータ電位Ｅｉ０（ｍＶ）が、＋２５ｍＶ以上である、［３］から［５］の何れか１項に記載の方法。

［７］　モノクローナル抗体溶液が、細胞培養で作られるモノクローナル抗体溶液である、［１］から［６］の何れか１項に記載の方法。
［８］　モノクローナル抗体溶液のｐＨが４～７の範囲である［１］から［７］の何れか１項に記載の方法。
［９］　ウイルス除去膜の材質が、セルロースである、［１］から［８］の何れか１項に記載の方法。
［１０］　ウイルス除去膜の材質が、親水化された合成高分子である、［１］から［９］の何れか１項に記載の方法。
［１１］　合成高分子が、ポリフッ化ビニリデン、ポリエーテルスルホン、ポリスルホン、又はポリエチレンである、［１０］に記載の方法。
［１２］　塩基性アミノ酸が、アルギニン、ヒスチジン、リジンまたはそれらの誘導体、あるいはそれらの塩である、［１］から［１１］の何れか１項に記載の方法。

［１３］　モノクローナル抗体溶液における抗体に対する塩基性アミノ酸の含有量が０．１～２０ｍｍｏｌ／ｇである、［１］から［１２］の何れかに記載の方法。
［１４］　抗体の処理量が２ｋｇ／ｍ²／３時間／ｂａｒ(圧力換算) 以上である、［１］から［１３］の何れか１項に記載の方法。
［１５］　モノクローナル抗体溶液が、無機塩、緩衝液成分、界面活性剤、又は糖類から選ばれる一種以上を含む、［１］から［１４］の何れか１項に記載の方法。
［１６］　ウイルス除去膜による濾過がデットエンドフィルトレーションである、［１］から［１５］の何れか１項に記載の方法。
［１７］　モノクローナル抗体溶液をウイルス除去膜で濾過することによってウイルスを除去する工程を、クロマトグラフィー後、濃縮後、又はバッファー交換後のいずれかに行う、［１］から［１６］の何れか１項に記載の方法。
［１８］　モノクローナル抗体溶液をウイルス除去膜で濾過することによってウイルスを除去する工程を、濃縮後、又はバッファー交換後のいずれかに行う、［１］から［１７］の何れか１項に記載の方法。

　本発明によれば、抗体の凝集体形成を抑制すると共に、抗体と膜との間の電位の関係を制御可能となり、高濃度のモノクローナル抗体溶液を、短時間かつ高い収率で処理でき、かつ小ウイルスまで高い除去率で除去することができる。本発明によれば、抗体医薬の製造工程の簡略化、コンパンクト化、低コスト化などの副次効果を期待できる。

　以下、本発明について更に詳細に説明する。
　本発明で使用する抗体はモノクローナル抗体である。また、モノクローナル抗体はいかなる方法で製造及び精製されたものでよい。ＣＨＯなどの動物細胞培養で作られたモノクローナル抗体であることが好ましい。モノクローナル抗体の製造は基本的には公知の技術を利用することができる。抗原を通常の免疫方法に従って動物に免疫し、公知のスクリーニング法により、モノクローナルな抗体を産生する細胞をスクリーニングし、この細胞と腫瘍細胞とのハイブリドーマを作成してこれを大量培養することによって作成できる。

　さらに、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマが産生する（マウス）モノクローナル抗体に限られるものではなく、ヒトに対する異種抗体抗原性を低下させること等を目的として人為的に改変されたキメラ抗体を含む。あるいは再構成したヒト型化抗体を本発明に用いることもできる。これはヒト以外の哺乳動物、たとえばマウス抗体の相補性決定領域によりヒト抗体の相補性決定領域を置換したものであり、その一般的な遺伝子組換手法も知られている。その既知方法を用いて、再構成ヒト型化抗体を得ることができる。

　モノクローナル抗体溶液中の抗体の濃度は、２０ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌである。好ましくは２０ｍｇ／ｍｌ～８０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは２０ｍｇ／ｍｌ～７０ｍｇ／ｍｌ，さらに好ましくは２０ｍｇ／ｍｌ～５０ｍｇ／ｍｌである。抗体の濃度が高くなるとウイルス除去膜による濾過速度が低下する傾向にある。

　モノクローナル抗体溶液中の抗体の純度はモノマーが９０％以上、より好ましくは、９５％以上である。抗体溶液中に含まれるモノマー以外の不純物としては会合体・凝集体があり、これらは抗体の２量体、３量体、４量体またはそれ以上である。会合体・凝集体の量が多いと、ウイルス除去膜で濾過する際に、目詰まりを起こし、高い処理量が得られない。

　モノクローナル抗体溶液は、塩基性アミノ酸を少なくとも含む。塩基性アミノ酸は、アルギニン、ヒスチジン、グアニジン、リジンまたはそれらの誘導体、あるいはそれらの塩を用いることができる。好ましくは、アルギニン、ヒスチジン、リジンまたはそれらの誘導体、あるいはそれらの塩である。より好ましくはアルギニンまたはその誘導体、あるいはそれらの塩である。

　モノクローナル抗体溶液中の塩基性アミノ酸の濃度は、濾過性の向上効果より、１０ｍＭ～３００ｍＭの範囲が好ましい。また、モノクローナル抗体溶液における抗体に対する塩基性アミノ酸の含有量は、濾過性の向上効果より０．１～２０ｍｍｏｌ／ｇであることが好ましい。より好ましくは、０．３～１０ｍｍｏｌ／ｇ、さらに好ましくは０．６～７ｍｍｏｌ／ｇの範囲である。

（塩基性アミノ酸の作用原理）
　塩基性アミノ酸をモノクローナル抗体溶液中に添加することにより濾過性が改善される理由は明らかではないが、本発明者らは、以下のように考えている。抗体は通常等電点以下では、（＋）にチャージしていることが知られている。本発明における塩基性アミノ酸は、抗体表面の電位を緩和し、ウイルス除去膜の（－）チャージとの静電的相互作用（静電引力）を抑制する効果があると考えられる。また、一般的に抗体の等電点に近いｐＨ域においては、抗体同士の静電反発力が減少することにより、抗体自体は疎水性相互作用のため、会合しやすくなったり、抗体と膜との疎水性相互作用のため、濾過性が低下したりする傾向にあるが、塩基性アミノ酸は、さらには抗体同士および抗体-膜との疎水性相互作用抑制にも効果があると考えられる。

　抗体や膜の表面の電位はゼータ電位として表される。抗体や膜の表面のゼータ電位の測定方法は、例えば、Zｅｔａ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ａｎａｌｙｚｅｒ　ＥＬＳ－Ｚ　（大塚電子株式会社製）を用いて電気泳動光散乱法により測定することができるが、測定方法はこれに限定されるものではない。所定の溶液条件下でのモノクローナル抗体のゼータ電位をＥｉｌ（ｍＶ）、所定の溶液条件下でのウイルス除去膜のゼータ電位をＥｍ（ｍＶ）とすると、以下の関係にあることが望ましい。ここで、「所定の溶液条件下でのウイルス除去膜のゼータ電位」とは、「モノクローナル抗体溶液と同じ組成の溶液であって、モノクローナル抗体を含まない溶液でウイルス除去膜を満たした条件下における当該ウイルス除去膜のゼータ電位」を意味する。

　抗体のゼータ電位Ｅｉｌと膜のゼータ電位Ｅｍとの間にある関係は、
０ｍＶ≦Ｅｉｌ－Ｅｍ≦２０ｍＶ
であることが望ましい。この範囲にＥｉｌ－Ｅｍがあると、抗体と膜の間に働く相互作用が小さくなり、より膜のろ過速度向上につながる効果があると考えられる。Ｅｉｌ－Ｅｍが２０ｍＶを超えると、抗体と膜の間に働く静電的相互作用が大きくなり、濾過に不利に作用する。

　また、本発明のウイルス除去膜の電位は、本出願のｐＨ範囲内では、マイナスに荷電しており、さらに、抗体はプラスに荷電している。別の表し方で示すと、抗体のゼータ電位Ｅｉｌと膜のゼータ電位Ｅｍの間にある関係は、
－４％　ｘ　Ｅｍ　≦　Ｅｉ１　≦　－５５０％　ｘ　Ｅｍ
であることが望ましい。

　本発明のモノクローナル抗体において、抗体の等電点以下のｐＨすなわち、ｐＨ＝４でかつ、イオン強度０．１ｍＭでの抗体のゼータ電位（基本電位）をＥｉ０（ｍＶ）は、＋２５ｍＶ以上であることが望ましい。好ましくは、＋２７ｍＶ以上、より好ましくは、＋２９ｍＶ以上である。

　塩基性アミノ酸の添加により、抗体と膜との静電的相互作用を抑制し、高い濾過性（Ｆｌｕｘ）を発現するためには、抗体の表面電位（ゼータ電位）Ｅｉ１は＋２０ｍＶ以下に緩和されることが望ましい。

　さらに、抗体のゼータ電位Ｅｉ０とＥｉｌとの間の関係は
１０ｍＶ　≦　Ｅｉ０　－　Ｅｉ１　≦　４０ｍＶ
であることが望ましい。Ｅｉ０　－　Ｅｉ１　が１０ｍＶより小さいと、抗体の基本電位に対する緩和作用が弱く、期待される濾過速度向上効果が得られない。

　モノクローナル抗体溶液のｐＨは４．０～７．０の範囲であることが好ましい。ｐＨ４．０未満およびｐＨ７．０を超えると、抗体自体の変性や分解が起こることがある。ｐＨ４．０～７．０の範囲では、抗体自体は安定化しており、表面が＋荷電しているため凝集体形成が抑制される。また、塩基性アミノ酸は、ｐＨ４．０～７．０の範囲で高濃度抗体のウイルス除去膜濾過における濾過性を向上させる作用を発揮する。

　モノクローナル抗体溶液は更に、無機塩、緩衝液成分、界面活性剤、又は糖類から選ばれる一種以上を含むことができる。

　無機塩としては、ＮａＣｌ、緩衝塩を含むことができる。緩衝液としては、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液等を用いることができる。無機塩、緩衝液成分の濃度としては、イオン強度として、１０～５００ｍＭの範囲であることが好ましい。ここで、イオン強度は、以下の式より計算できる。
イオン強度＝１／２×Σ（Ｃｉ×Ｚｉ²）
Ｃｉ；　モル濃度　、Ｚｉ；　イオン価数

　界面活性剤は、非イオン性界面活性剤であるＴｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ８０等を用いることができ、濃度は０．０１～０．０５ｗ％含むことができる。

　糖類（単糖、二糖、三糖、オリゴ糖、糖アルコールなどがある）の添加剤としてグルコース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、ソルボース、マルトース　スクロース（ショ糖）、ソルビトール、マンニトール、デキストラン等を１～１０ｗ％含むことができ、好ましくは１～５ｗｔ％含むことができる。

　ウイルス除去膜の材質は、セルロースまたは親水化された合成高分子を用いることができる。セルロースは再生セルロース、天然セルロース、酢酸セルロース等を用いることができる。親水化された合成高分子は、親水化ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、親水化ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、親水化ポリエチレン（ＰＥ），親水化ポリスルホン（ＰＳ）等を用いることができる。親水化方法としては、コーティング、グラフト反応、架橋反応等の方法により、膜表面に親水性の官能基を導入したり、親水性ポリマーを固定したりする方法があげられる。

　膜の形状は平膜および中空糸膜いずれでもよいが、膜面積が大きくても、膜を容器に装填して作成したフィルターを小型にできるため、好ましくは中空糸膜である。被濾過液入り口側の一次側空間と濾過液出側の2次側空間が膜によって仕切られたフィルターを作成することが出来る。ウイルス除去膜を濾過に用いる際には、フィルターの形態として使用することができる。

　ウイルス除去膜はパルボウイルスの除去性能がＬＲＶ４以上であることが必要である。より望ましくはＬＲＶ５以上である。パルボウイルス除去を対象とした市販のウイルス除去フィルターとして、ウイルス除去膜がセルロースからなるＰｌａｎｏｖａ^TM１５Ｎ（旭化成メディカル（Ａｓａｈｉ　Ｋａｓｅｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ）社製），Ｐｌａｎｏｖａ^TM２０Ｎ（旭化成メディカル（Ａｓａｈｉ　Ｋａｓｅｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ）社製）、親水化ＰＥＳからなるＶｉｒｏｓａｒｔ　ＣＰＶ　（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社製）、Ｖｉｒｅｓｏｌｖｅ　Ｐｒｏ　（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）等が挙げられる。

　パルボウイルスは、マウスパルボウイルスのＣＨＯ細胞（マウス由来）への混入により製造プロセスにおけるモノクローナル抗体への汚染の実例があり、動物細胞を用いて作られたバイオ医薬品のウイルス安全性評価に関するガイドライン（ＩＣＨ　Ｑ５Ａ）がＦＤＡから出されている。

　パルボウイルスは、エンベロープを持たないことから、物理化学的に安定で、生物学的製剤の製造プロセス中の不活化工程で一般的に行なわれる加熱、低ｐＨ、化学薬品処理に対して耐性があり、不活化法とは異なる作用機序のウイルス除去方法としてウイルス除去膜によるパルボウイルス除去のニーズが高まってきた。

　パルボウイルスはパルボウイルス科に属し、現在公知の最小ウイルス（直径１８～２４ｎｍ）である。マウスパルボウイルス（ＭＶＭ），ブタパルボウイルス（ＰＰＶ）、犬パルボウイルス（ＣＰＶ）等があげられる。本出願のウイルス除去膜評価には、モデルウイルスとしてＰＰＶを用いている。

　ウイルス除去膜のウイルスの除去性能はＬＲＶ（Ｌｏｇ　Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　Ｖａｌｕｅ）で表される。
　ＬＲＶはウイルス除去膜の濾過前後での抗体溶液中のウイルス濃度変化を下記式から計算する。
ＬＲＶ＝ｌｏｇ₁₀（Ｃ_O／Ｃ_F）
ここで、Ｃｏ＝ウイルス除去膜で濾過する前の抗体溶液中のウイルス濃度
　Ｃ_F＝ウイルス除去膜で濾過した後の抗体溶液中のウイルス濃度

　ウイルス濃度は感染価、ウイルス核酸のコピー数等で表現できる。感染価の測定法としてＴＣＩＤ５０法、プラーク法などが挙げられる。ウイルスの核酸のコピー数はＰＣＲ法等で測定できる。

　ウイルス除去膜で濾過する前に、モノクローナル抗体濃度２０～１００ｍｇ／ｍｌの範囲であり、塩基性アミノ酸を少なくとも含む抗体溶液組成に調整する必要がある。上述したように、モノクローナル抗体溶液のｐＨは４～７の範囲であることが好ましい。塩基性アミノ酸濃度は、抗体あたり０．１～２０ｍｍｏｌ／ｇの範囲であることが好ましい。

　クロマトグラフィー処理後の抗体溶出液に塩基性アミノ酸を所定濃度添加し、所定ｐＨになるように調整することもできるし、公知の方法にて、溶出液のバッファー液組成から、所定の塩基性アミノ酸、ｐＨに調整された液とバッファー交換することもできる。また、抗体濃縮とバッファー交換を同時に行い、所望の液組成に調整することもできる。ｐＨ調整はＮａＯＨ，ＨＣｌ，無機酸、有機酸、緩衝液で行なうことができる。緩衝液としては、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液等を用いることができる。

　ウイルス除去膜による抗体溶液の濾過方法はデットエンドフィルトレーションであることが好ましい。濾過圧力を一定にする定圧濾過、濾過速度を一定にする定速濾過いずれでもよい。濾過圧力はウイルス除去膜の材質によるが、膜の耐圧力以下の範囲で行なう。例えば、セルロースからなるウイルス除去膜の場合は、４９ｋＰａ（０．５ｂａｒ）～９８ｋＰａ（１ｂａｒ）の範囲が最適である。親水化ＰＶＤＦ，親水化ＰＥＳ，親水化ＰＳの場合は、９８ｋＰａ（１ｂａｒ）～４９０ｋＰａ（５ｂａｒ）の範囲が最適である。

　ウイルス除去膜で濾過する温度は、抗体溶液の状態に影響しない（変性させない）温度範囲であればよいが、４℃～４０℃の範囲が好ましい。より好ましくは、４℃～３５℃の範囲である。温度は抗体溶液の粘度に影響し、ウイルス除去膜濾過の際のＦｌｕｘに影響するので、抗体自体の温度に対する安定性にもよるが、さらに好ましくは２０℃～３５℃の範囲である。

　所定組成に液を調整後、ウイルス除去膜で濾過前に、ウイルス除去膜の孔径サイズよりも大きい孔径の膜からなるフィルターで予備濾過をすることもできる。ここで大きい孔径のフィルターとは、Ｐｌａｎｏｖａ^TM３５Ｎ，Ｐｌａｎｏｖａ^TM７５Ｎ（以上旭化成メディカル社製）、０．１μｍフィルター、０．２μｍフィルター等を用いることができる。予備濾過なしに、直接ウイルス除去膜で濾過することもできる。

　抗体の処理量（Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ）は、以上の抗体濃度、濾過圧力、温度の範囲内で、ウイルス除去膜の膜面積、時間、濾過圧力あたりの処理量として、通常２ｋｇ／ｍ²／３時間／ｂａｒ（または９８ｋPa）が得られる。抗体の処理量（Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ）は、上記単位あたりの濾過液量（Ｖ）と濾液中に回収された抗体の濃度（Ｃ）から算出（抗体の処理量＝Ｖ×Ｃ）され、Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔで濾過性と収率の両方が評価できる。

（Ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ中でのウイルス濾過のポジション）
　ウイルス除去膜で濾過する工程は、クロマトグラフィー後、濃縮後、濃縮／バッファー交換後のいずれかである。クロマトグラフィーとしては、イオン交換樹脂、ゲル濾過樹脂をカラムに詰めたカラムクロマトグラフィー、多孔膜の表面にイオン交換基を付与したメンブレンクロマトグラフィーが例示できる。クロマトグラフィーの分離モードとしては、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー（陽イオン交換；ＣＥＸ、陰イオン交換；ＡＥＸ）、疎水クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、アフィニティクロマトグラフィー、金属キレートアフィニティクロマトグラフィー、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー等がある。クロマトグラフィーのリガンドとしてイオン交換と疎水相互作用を複合させたクロマトグラフィーもある。

　濃縮工程は、公知の方法に従って、限外濾過（ＵＦ）膜を用いた方法で行なうことができる。遠心濃縮で行なうことができる。

　バッファー交換工程は、公知の方法に従って、限外濾過膜を用いて濃縮と同時に行なうこともできる。ゲル濾過法により行なうこともできる。透析膜を用いた透析法によっても行なうことができる。

　ウイルス除去膜による濾過に引き続き、クロマトグラフィー処理による精製処理をすることができる。また、ＵＦ処理によりさらに高濃度化することもできる。ウイルス除去膜濾過の際のそのままの液組成で、最終製剤化することもできる。また、ウイルス除去膜濾過後に糖類や界面活性剤等を添加し、最終製剤化することもできる。他の組成の溶媒と、バッファー交換することもできる。また、さらに凍結乾燥処理することもできる。

　以下に示す実施例では、ウイルス除去膜がセルロース中空糸膜からなるＰｌａｎｏｖａ^TM２０Ｎ（旭化成メディカル株式会社製）（以降、フィルターＡと表記する）及び親水化ポリフッ化ビニリデン中空糸膜からなるフィルター（以降、フィルターＢと表記する）を用いた。

　また、モノクローナル抗体製剤中間製品のモデルとして、国際公開第０４／０８７７６１号パンフレットに記載の方法に従い、モノクローナル抗体溶液を下記［モノクローナル抗体の調製］の通り調製し使用した。

（フィルターＢの作成）
　メルトフローインデックス（ＭＦＩ）が２．５（ｇ／１０ｍｌ）のポリフッ化ビニリデン樹脂（呉羽化学（株）製、Ｔ＃１３００）、４９ｗｔ％、フタル酸ジシクロヘキシル（大阪有機化学工業（株）製工業品）５１ｗｔ％からなる組成物を、ヘンシェルミキサー（三井鉱山（株）製、形式２０Ｂ）を用いて７０℃で攪拌混合した後、冷却して粉体状としたものをホッパーより二軸同方向スクリュー式押出機（テクノベル（株）製ＫＺＷ２５ＴＷ－５０ＭＧ－ＮＨ（－６００））に投入し、２１０℃溶融混合し均一溶解した。続いて、中空内部に温度が１３０℃のフタル酸ジブチル（大八化学工業（株）製　工業品）を流しつつ、内直径０．８ｍｍ、外直径１．０５ｍｍの環状オリフィスからなる紡口より、それぞれ均一溶解物を中空糸状に押し出し、１０、２０、３０、４０℃に温調された冷却水浴中で冷却固化させて、５０ｍ／分の速度で金属枠に巻き取った。その後、５８ｗｔ％イソプロピルアルコール水溶液（大八化学工業（株）製工業品）でフタル酸ジシクロヘキシル及びフタル酸ジブチルを抽出除去し、付着した５８ｗｔ％イソプロピルアルコール水溶液を水で置換した後、水中に浸漬した状態で高圧蒸気滅菌装置（平山製作所（株）製ＨＶ－８５）を用いて１２５℃で熱処理を４時間施した。その後、付着した水をイソプロピルアルコール（大八化学工業（株）製　工業品）で置換した後、真空乾燥機（エステック（株）製）で６０℃の温度で乾燥することにより中空糸状の微多孔膜を得た。なお巻き取りから乾燥に至る全ての工程では、中空糸は定長状態で固定して処理を行った。

　続いて、上記の微多孔膜に対し、グラフト法による親水化処理を行った。反応液は、ヒドロキシプロピルアクリレート（大阪有機化学（株）製　工業品）を８体積％となるように、３－ブタノール（純正化学（株）製　工業品）の２５体積％水溶液に溶解させ、４５℃に保持した状態で、窒素バブリングを３０分間行ったものを用いた。まず、窒素雰囲気下において、該微多孔膜をドライアイスで－６０℃に冷却しながら、Ｃｏ６０を線源としてγ線を２５ｋＧｙ照射した。照射後の微多孔膜は、１３．４Ｐａ以下の減圧下に１５分間静置した後、上記反応液と該微多孔膜を６０℃で接触させ、１時間静置した。その後、該微多孔膜を５８ｗｔ％イソプロピルアルコール水溶液で洗浄し、６０℃で真空乾燥を４時間行い、親水性を有する微多孔膜を得た。該微多孔膜は水に接触させた時に自発的に細孔内に水が浸透することを確認した。該微多孔膜１２本の束の両端をポリウレタンで目止めし、ポリスチレン製の中空糸膜が入口側空間と出口側空間に仕切られているカートリッジに接合して、フィルター（有効膜面積０．００１ｍ²）を作成した。上記方法で得られた親水化ＰＶＤＦ中空糸膜からなるフィルターを以降フィルターＢと表記する。

（モノクローナル抗体の調製）
　デプスフィルター、および０．２（μｍ）メンブランフィルターで清澄化したヒトモノクローナル抗体（ヒトＩｇＧ１）を含むＣＨＯ細胞無血清培養上清（発現量：７００ｍｇ／Ｌ）１５００（ｍｌ）を１０( ｍｍｏｌ / l )リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）で平衡化したＰｒｏｔｅｉｎ　Ａカラム（ＧＥ　Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製　Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ　２０ｍｍ　ＩＤ　×　２０ｃｍ）に添加した（線速度５００ｃｍ／ｈ）。次いで、５カラム容量の２０(ｍｍｏｌ/ l )クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．４）により、ヒトモノクローナル抗体を溶出した（線速度５００ｃｍ／ｈ）。この溶出液を１０(ｍｍｏｌ/ l )リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．２）で中和し、さらに１．５(ｍｍｏｌ/ l )Ｔｒｉｓ－ＨＣｌでｐＨ８．０に調整後、１０(ｍｍｏｌ/ l ) Ｔｒｉｓ－ＨＣｌで平衡化した陰イオン交換カラム（ＧＥ　Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製　Ｑ　Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　ＸＬ　１０ｍｍ　ＩＤ　×　１５ｃｍ）に添加した（線速度３００ｃｍ／ｈ）。添加終了後、３カラム容量の平衡化緩衝液をカラムに通液し（線速度３００ｃｍ／ｈ）、カラム非吸着分を１．０(ｍｏｌ / l )酢酸でｐＨ５．０に調製後、２０(ｍｍｏｌ/ l ) 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）で平衡化した陽イオン交換カラム（ＧＥ　Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製、　ＳＰ　Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　ＦＦ　２６ｍｍ　ＩＤ　×　１５ｃｍ）に添加した（線速度３００ｃｍ／ｈ）。添加終了後、５カラム容量の平衡化緩衝液で洗浄し（線速度３００ｃｍ／ｈ）、さらに５カラム容量の２０(ｍｍｏｌ/ l )酢酸ナトリウム／０．３０(ｍｏｌ/ l )塩化ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）を通液し、ヒトモノクローナル抗体溶液として溶出した（線速度３００ｃｍ／ｈ）。この溶出液を限外濾過膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製　Ｂｉｏｍａｘ　３０　５０ｃｍ²）で以下の表１及び表２にあげた液条件になるように濃縮およびバッファー組成に交換した。

（ウイルス除去性能の測定）
　培養したＰＫ-１３細胞（ＡＴＣＣより入手、ＡＴＣＣ　Ｎｏ．ＣＲＬ－６４８９）を、牛血清（Ｕｐｓｔａｔｅ社製、５６℃の水浴で３０分間加熱し、非働化させた後に使用）３体積％、およびペニシリン／ストレプトマイシン（＋１００００　Ｕｎｉｔｓ／ｍｌ　Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ，＋１００００μｇ／ｍｌ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ、インビトロジェン製）１体積％入りＤ－ＭＥＭ（インビトロジェン製、ｈｉｇｈ－ｇｌｕｃｏｓｅ）（この混合液は以後３％ＦＢＳ／Ｄ－ＭＥＭと記載）で希釈し、細胞濃度２．０×１０⁵（ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）の希釈懸濁液を調製した。この細胞懸濁液を、９６ｗｅｌｌ丸底細胞培養プレート（Ｆａｌｃｏｎ社製）を１０枚準備し、全てのｗｅｌｌに１００（μｌ）ずつ分注した。

　次いで、下記３時間濾過を行った濾液の全量混合液について、それらの３％ＦＢＳ／Ｄ－ＭＥＭによる１０倍、１０²倍、１０³倍、１０⁴倍、１０⁵倍希釈液を調製した。さらに、濾過直前に採取した各元液について、それらの３％ＦＢＳ／Ｄ－ＭＥＭによる１０²倍、１０³倍、１０⁴倍、１０⁵倍、１０⁶倍、１０⁷倍希釈液を調製した。上記細胞懸濁液を分注した９６穴細胞培養プレートに、各濾液および濾液の１０倍、１０²倍、１０³倍、１０⁴倍、１０⁵倍希釈液と、元液の１０²倍、１０³倍、１０⁴倍、１０⁵倍、１０⁶倍、１０⁷倍希釈液を、８wellに１００(μl)ずつ分注し、３７℃、５％二酸化炭素雰囲気下、インキュベーター中で、１０日間培養した。

　次いで、１０日間培養した上記の細胞培養プレートに対し、赤血球吸着法（ウイルス実験学　総論　国立予防衛生研究所学友会編、ｐ．１７３）によるＴＣＩＤ５０（５０％感染価）の測定を行った。ニワトリ保存血（日本バイオテスト製）をＰＢＳ（－）（日水製薬株式会社製、商品に添付の方法で調製）で５倍に希釈後、２５００( rpm ) 、４℃で５分間遠心分離し赤血球を沈殿させた後、上清を吸引除去して、得られた赤血球を含む沈殿物を再度ＰＢＳ（－）で２００倍に希釈した。

　次いで、調製した赤血球沈殿物のＰＢＳ（－）希釈液を、上記細胞培養プレートの全wellに１００(μl)ずつ分注し、２時間静置した後、培養した細胞組織の表面に対する赤血球の吸着の有無を目視で確認し、吸着が確認されたものをウイルス感染が起きたwell、吸着が確認されなかったものを感染なしのwellとして数えた。得られた培養液ごとのウイルス感染の有無について、濾液ないしその希釈液、又は元液の希釈液ごとに割合を確認し、Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ法（ウイルス実験学　総論　国立予防衛生研究所学友会編、ｐ．４７９－４８０）により、感染価としてｌｏｇ（ＴＣＩＤ₅₀／ｍｌ）を算出し、ウイルス除去率ＬＲＶを求めたところ、ＬＲＶ４以上となった。

（モノクローナル抗体純度の測定）
　ＨＰＬＣ（島津製作所製　Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ、カラム：東ソーＧＰＣ用カラム　ＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷＸＬ、移動相：リン酸緩衝液（ｐＨ６．９）／０．３( mol / l )塩化ナトリウム水溶液）により、以下の実施例、比較例の液条件になるように調整したモノクロナール抗体溶液純度を、ピーク面積比より測定したところ、以下の表３のようになった。

（抗体および膜のゼータ電位（表面電位）測定）
　Zｅｔａ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ａｎａｌｙｚｅｒ　ＥＬＳ－Ｚ（大塚電子株式会社製）を用いて製造業者の指示書に従って電気泳動光散乱法により測定した（引用文献：Ｏｔｓｕｋａ　Ｄｅｎｓｉ　Ｗｅｂ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｗｗｗ／ｐｈｏｔａｌ　ｃｏ．ｊｐ．）。移動度より所定液条件での抗体のゼータ電位（Ｅｉ１）を算出した。ｐＨ＝４，イオン強度　０．１ｍＭ　ＮａＣｌ溶液中での抗体のゼータ電位（Ｅｉ０）は、＋３７ｍＶであった。膜のゼータ電位（Ｅｍ）は、上記と同様にZｅｔａ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ａｎａｌｙｚｅｒ　ＥＬＳ－Ｚ（大塚電子株式会社製）を用いて製造業者の指示書に従って測定した。具体的には、膜のゼータ電位（Ｅｍ）は、平板試料用セルユニット（大塚電子株式会社製）を使い、これに膜を設置し、抗体溶液と同じ組成の溶液であって抗体を含まない溶液で膜を満たし、その条件下において、ヒドロキシプロピルセルロースでコーティングした、ほぼ電位ゼロのポリスチレンラテックスからなるモニター粒子（大塚電子株式会社製）を用いて測定した（引用文献　Ｏｔｓｕｋａ　Ｄｅｎｓｉ　Ｗｅｂ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｗｗｗ／ｐｈｏｔａｌ　ｃｏ．ｊｐ．）。セルロースからなる膜の場合は、中空糸膜の代わりに、平膜を作成し（引用文献　特開昭５９－４５３３３号公報）、表面のゼータ電位を測定した。抗体および膜のゼータ電位は、以下の表４に示す。

実施例１～７及び比較例１～５
　上記で示したように、モノクローナル抗体溶液を、表１の条件になるように濃縮およびバッファー組成に交換した後、この段階でのモノクローナル抗体純度の測定を上記の方法で行なった。その後、ＰＰＶを０．５ｖｏｌ%添加して、よく攪拌した後、実施例１～７、比較例１～５の溶液を膜面積０．００１ｍ²のフィルターＡを用いて９８ｋＰａ（１ｂａｒ）の圧力でＤｅａｄ－ｅｎｄ式濾過を３時間実施した。濾過できるモノクローナル抗体量（ｋｇ／ｍ²／３ｈｒ／ｂａｒ）を算出し、結果を表１に示した。ＰＰＶの除去性能の評価は上記の方法で行なった。さらに、抗体純度の結果を表３に示した。

実施例８～１４及び比較例６～９
　上記で示したように、モノクローナル抗体溶液を、表２の条件になるように濃縮およびバッファー組成に交換した後、この段階でのモノクローナル抗体純度の測定を上記の方法で行なった。その後、ＰＰＶを０．５ｖｏｌ%添加して、よく攪拌した後、実施例８～１４、比較例６～９の溶液を膜面積０．００１ｍ²のフィルターＢを用いて２９４ｋＰａ（３ｂａｒ）の圧力でＤｅａｄ－ｅｎｄ式濾過を３時間実施した。濾過できるモノクローナル抗体量（ｋｇ／ｍ²／３時間／ｂａｒ）を算出し、結果を表２に示した。ＰＰＶの除去性能の評価は上記の方法で行なった。さらに、抗体純度の結果を表３に示した。

　以上の結果、実施例１～１４について、モノクローナル抗体処理量２ｋｇ／ｍ^２／３ｈｒ／ｂａｒ以上および、ウイルス除去性（ＰＰＶ　ＬＲＶ　４以上）を満たすことができた。

　本発明は、抗体医薬の製造過程に於けるウイルス除去方法として有用に用いることができる。

Claims

モノクローナル抗体溶液中のウイルスをウイルス除去膜で濾過することで除去するウイルス除去工程を含む、モノクローナル抗体を含む製剤の製造方法であって、
（１）モノクローナル抗体におけるモノマー含有率が９０％以上であり、
（２）モノクローナル抗体溶液におけるモノクローナル抗体濃度が２０ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌであり、
（３）モノクローナル抗体溶液は、塩基性アミノ酸を少なくとも含み、かつ
（４）ウイルス除去膜のパルボウイルスの除去率が、ＬＲＶ（Log Reduction Value：対数減少値）≧４である、
ことを特徴とする、上記の方法。
モノクローナル抗体溶液中のウイルスをウイルス除去膜で濾過することで除去するウイルス除去工程を含む、モノクローナル抗体溶液のウイルス除去方法であって、
（１）モノクローナル抗体におけるモノマー含有率が９０％以上であり、
（２）モノクローナル抗体溶液におけるモノクローナル抗体濃度が２０ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌであり、
（３）モノクローナル抗体溶液は、塩基性アミノ酸を少なくとも含み、かつ
（４）ウイルス除去膜のパルボウイルスの除去率が、ＬＲＶ（Log Reduction Value：対数減少値）≧４である、
ことを特徴とする、上記の方法。
モノクローナル抗体溶液中のウイルスをウイルス除去膜で濾過することで除去するウイルス除去工程を含む、モノクローナル抗体を含む製剤の製造方法において、
（１）モノクローナル抗体におけるモノマー含有率が９０％以上であり、
（２）モノクローナル抗体溶液におけるモノクローナル抗体濃度が２０ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌであり、
（３）モノクローナル抗体溶液は、塩基性アミノ酸を少なくとも含み、かつ
（４）前記溶液中のモノクローナル抗体のゼータ電位Ｅｉ１（ｍＶ）が、
ａ）前記ウイルス除去膜のゼータ電位Ｅｍ（ｍＶ）に対し、
０ｍＶ　≦　Ｅｉ１－　Ｅｍ　≦　２０ｍＶ
ｂ）前記モノクローナル抗体を含む
ｐＨ＝４、イオン強度　０．１ｍＭの溶液中のモノクローナル抗体のゼータ電位Ｅｉ０（ｍＶ）に対し、
１０ｍＶ　≦　Ｅｉ０　－　Ｅｉ１　≦　４０ｍＶ
の範囲である、上記方法。
モノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体溶液を、ウイルス除去膜でろ過するウイルス除去方法において、
（１）モノクローナル抗体におけるモノマー含有率が９０％以上であり、
（２）モノクローナル抗体溶液におけるモノクローナル抗体濃度が２０ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌであり、
（３）モノクローナル抗体溶液は、塩基性アミノ酸を少なくとも含み、かつ
（４）前記溶液中のモノクローナル抗体のゼータ電位Ｅｉ１（ｍＶ）が、
ａ）前記ウイルス除去膜のゼータ電位Ｅｍ（ｍＶ）に対し、
０ｍＶ　≦　Ｅｉ１－　Ｅｍ　≦　２０ｍＶ
ｂ）前記モノクローナル抗体を含む
ｐＨ＝４、イオン強度　０．１ｍＭの溶液中のモノクローナル抗体のゼータ電位Ｅｉ０（ｍＶ）に対し、
１０ｍＶ　≦　Ｅｉ０　－　Ｅｉ１　≦　４０ｍＶ
の範囲である上記方法。
モノクローナル抗体溶液中のモノクローナル抗体のゼータ電位Ｅｉ１（ｍＶ）が、ウイルス除去膜のゼータ電位Ｅｍ（ｍＶ）に対し、
－４％　ｘ　Ｅｍ　≦　Ｅｉ１　≦　－５５０％　ｘ　Ｅｍ
である、請求項３又は４に記載の方法。
モノクローナル抗体を含むｐＨ＝４、イオン強度０．１ｍＭの溶液中のモノクローナル抗体のゼータ電位Ｅｉ０（ｍＶ）が、＋２５ｍＶ以上である、請求項３から５の何れか１項に記載の方法。
モノクローナル抗体溶液が、細胞培養で作られるモノクローナル抗体溶液である、請求項１から６の何れか１項に記載の方法。
モノクローナル抗体溶液のｐＨが４～７の範囲である請求項１から７の何れか１項に記載の方法。
ウイルス除去膜の材質が、セルロースである、請求項１から８の何れか１項に記載の方法。
ウイルス除去膜の材質が、親水化された合成高分子である、請求項１から９の何れか１項に記載の方法。
合成高分子が、ポリフッ化ビニリデン、ポリエーテルスルホン、ポリスルホン、又はポリエチレンである、請求項１０に記載の方法。
塩基性アミノ酸が、アルギニン、ヒスチジン、リジンまたはそれらの誘導体、あるいはそれらの塩である、請求項１から１１の何れか１項に記載の方法。
モノクローナル抗体溶液における抗体に対する塩基性アミノ酸の含有量が０．１～２０ｍｍｏｌ／ｇである、請求項１から１２の何れかに記載の方法。
抗体の処理量が２ｋｇ／ｍ²／３時間／ｂａｒ(圧力換算) 以上である、請求項１から１３の何れか１項に記載の方法。
モノクローナル抗体溶液が、無機塩、緩衝液成分、界面活性剤、又は糖類から選ばれる一種以上を含む、請求項１から１４の何れか１項に記載の方法。
ウイルス除去膜による濾過がデットエンドフィルトレーションである、請求項１から１５の何れか１項に記載の方法。
モノクローナル抗体溶液をウイルス除去膜で濾過することによってウイルスを除去する工程を、クロマトグラフィー後、濃縮後、又はバッファー交換後のいずれかに行う、請求項１から１６の何れか１項に記載の方法。
モノクローナル抗体溶液をウイルス除去膜で濾過することによってウイルスを除去する工程を、濃縮後、又はバッファー交換後のいずれかに行う、請求項１から１７の何れか１項に記載の方法。