[go: up one dir, main page]

WO2008152173A1 - Extractos fenolicos de piel de almendra conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, y su procedimiento de obtención. - Google Patents

Extractos fenolicos de piel de almendra conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, y su procedimiento de obtención. Download PDF

Info

Publication number
WO2008152173A1
WO2008152173A1 PCT/ES2008/070104 ES2008070104W WO2008152173A1 WO 2008152173 A1 WO2008152173 A1 WO 2008152173A1 ES 2008070104 W ES2008070104 W ES 2008070104W WO 2008152173 A1 WO2008152173 A1 WO 2008152173A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
extract
type
procedure
proanthocyanidins
obtaining
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/ES2008/070104
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Begoña BARTOLOMÉ SUALDEA
María MONAGAS JUAN
Ignacio Garrido Lafuente
Rosa LEBRÓN AGUILAR
María Carmen GÓMEZ-CORDOVÉS DE LA VEGA
José Carlos QUINTELA FERNANDEZ
Esther DE LA FUENTE GARCÍA
Alejandro JARA GARCÍA-NAVAS
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Exxentia Grupo Fitoterapeutico Sa (40%)
Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC
Exxentia Grupo Fitoterapeutico SA
Original Assignee
Exxentia Grupo Fitoterapeutico Sa (40%)
Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC
Exxentia Grupo Fitoterapeutico SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Exxentia Grupo Fitoterapeutico Sa (40%), Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC, Exxentia Grupo Fitoterapeutico SA filed Critical Exxentia Grupo Fitoterapeutico Sa (40%)
Priority to US12/664,350 priority Critical patent/US8802165B2/en
Priority to EP08775443A priority patent/EP2165712A4/en
Publication of WO2008152173A1 publication Critical patent/WO2008152173A1/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/73—Rosaceae (Rose family), e.g. strawberry, chokeberry, blackberry, pear or firethorn
    • A61K36/736—Prunus, e.g. plum, cherry, peach, apricot or almond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A61K8/4973—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom
    • A61K8/498—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom having 6-membered rings or their condensed derivatives, e.g. coumarin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/52—Stabilizers
    • A61K2800/522—Antioxidants; Radical scavengers

Definitions

  • Bioactive phenolic extracts for application in the food, dietary, cosmetic and pharmaceutical industry.
  • Proanthocyanidins or condensed tannins are oligomers and polymers of flavan-3-ol widely distributed in the plant kingdom.
  • the most abundant flavan-3-ol units are (+) - afzelequine, (+) - catechin and (+) - gallocatechin (2R.3S forms) and their diastereomers (-) - epiafzelequine, (-) - epicatechin and ( -) - epigallocatechin (2R.3R forms), respectively.
  • Proanthocyanidins constituted exclusively by (epi) catechin are called procyanidins.
  • Propelargonidines and prodelfinidines contain at least one unit of (epi) afzelequine and (epi) gallocatechin, respectively, together with units of (epi) catechin.
  • the flavan-3-ol units are joined by the C-4 carbon of the upper unit and the C-6 or C-8 carbon of the lower unit, being more abundant C4-C8 isomers than C4-C6.
  • type A procyanidins have an ether type bond between the C-2 carbon of the upper unit and the C-7 carbon hydroxyl group of the lower unit (Porter LJ.
  • proanthocyanidins Flavans and proanthocyanidins In the flavonoids (Harborne JB, Ed.) Chapman and Hall, New York, pp. 21-62). While type B proanthocyanidins are found in many plant species, the natural sources in which type A proanthocyanidins (cranberry, peanut, avocado, plum, cinnamon and curry) have been scarce; Similarly, procyanidins are the majority with respect to propelargonidines and prodelfinidines in the plant kingdom (Prior RL, Gu L. (2005) Occurrence and biological significance of proanthocyanidin in the American diet. Phytochemistry 66, 2264-2280).
  • Type A proanthocyanidins have potentially beneficial properties / activities for health. human, such is the ability to inhibit bacterial adhesion in the urinary tract - which reduces the risk of urinary infections - (Foo LY, Lu YR, Howell AB, Vorsa N. (2000) A-type proanthocyanidin trimers from cranberry that inhibit adherence of uropathogenic P-fimbriated Escherichia coli. J Nat. Prod. 63, 1225-1228; Foo LY, Lu YR, Howell AB, Vorsa N.
  • proanthocyanidins that is, procyanidins, propelargonidines and prodelfinidines - arises, especially with type A bonds.
  • This patent refers to formulations to be used in the treatment against hypertension. Only type A procyanidins are included, that is, formed exclusively by (epi) catechin.
  • This patent refers to the obtaining of lithchi extracts rich in type A proanthocyanidins, although identifications of the type of molecules contained in the extract are not included.
  • the extracts contain proanthocyanidins with at least one type A bond, particularly procyanidins.
  • Plant proantocyanidin extract effective at inhibiting adherence of bacteria with P-type fimbriae to surfaces, Howell, AB; Vorsa, N.
  • This patent refers to obtaining proanthocyanidin extracts from plants of the families Ericaceae, Rosaceae, Pinaceae and Vitaceae, preferably Vaccinium macrocarpon. The extracts are used in the prevention and treatment of urinary tract infections caused by Escherichia co // type P.
  • This patent refers to the use of certain procyanidins (A and B) against urinary and other infections.
  • proanthocyanidins the text indicates that they are formed by units of (epi) catechin (that is, procyanidins).
  • This patent refers to plant extracts containing procyanidins with at least one type A bond and their use in the prevention and treatment of urogenital infections.
  • Torres, J. L. Refers to new products that result from the conjugation of polyphenolic extracts rich in procyanidins and prodelfinidines with molecules containing the thiol group.
  • the tegument or skin of the almond which separates from the almond during its industrial processing, is a by-product with little economic value, being used mostly as feed for cattle.
  • various phenolic compounds have been identified both non-flavonoid type such as flavonoid (Sang, S .; Lapsley, K .; Jeong, WS .; Lachance, PA; Ho, CT; Rosen, RT. (2002) Antioxidant phenolic compounds isolated from almond skins (Prunus amygdalus Batsch) J. Agrie.
  • the problem to be solved is the obtaining of extracts containing proanthocyanidins with properties / activities potentially beneficial for human health.
  • low cost raw materials and simple and profitable production processes are sought.
  • the invention relates to phenolic extracts containing procyanidins, propelargonidines and prodelfinidines, and obtained from the skin of the almond
  • the method of obtaining which is also protected, consists of a maceration of the plant material with solvents, followed by a stage of purification of the extract and, optionally, a final drying of the purified extract.
  • the possible activities or properties of these extracts such as antioxidant activity and others, which determine their use as a food or dietary ingredient and in the cosmetic and pharmaceutical industry are also protected.
  • Figure 1 Examples of the chemical structures of the proanthocyanidins that would be found in the extracts object of this patent.
  • Figure 2 Analysis by MALDI-TOF of the sample obtained in example 1, the area corresponding to the tetramers being enlarged. The presence of procyanidins, propelargonidines and prodelfinidines from dimers to heptamers is checked, containing both types of bonds, B and A. The m / z signals corresponding to the sodium adducts [M + Na] + of the detected proanthocyanidins are indicated below.
  • Figure 4 Analysis by MALDI-TOF of the sample obtained in example 2, the area corresponding to the tetramers being enlarged. The presence of procyanidins, propelargonidines and prodelfinidines from dimers to octamers is checked, containing both types of bonds, B and A. Next, the m / z signals corresponding to the sodium adducts [M + Na] + of the detected proanthocyanidins are indicated.
  • the present invention consists of phenolic extracts of the skin (tegument) of the almond [Prunus dulc ⁇ s (Mili.) D.A. Webb, Prunus amygdalus (L.) Batsch., Amygdalus dulc ⁇ s (Mili.), Amygdalus communis (L.) or Prunus communis (L.)] characterized by containing procyanidins, propelargonidines and prodelfinidines.
  • the skin of the almond is a low-cost agri-food by-product, so that this procedure for obtaining extracts would imply a recovery of said by-product since products of greater added value would be obtained.
  • the skin could be used both wet and dry, separated from the fruit by a scalding process and then repelled, or by roasting.
  • Procyanidins are polymers formed solely by (+) - catechin and / or (-) - epicatechin.
  • propelargonidines and prodelfinidines are polymers containing units of (+) - afzelequine and / or (-) - epiafzelequine - case of propelargonidines- and of (+) - gallocatechin and / or (-) - galloepicatechin - case of prodelfinidines-, and may also contain (+) - catechin and / or (-) - epicatechin units.
  • the total phenolic content of the extract is determined by the colorimetric method of Singleton V. L., Rossi J.A. (1965) Colorimetry of total phenolics with phosphomolibdicphosphotungstic acid reagent. Am J Enol Vitic 16, 144-158, which is based on the oxidation in basic medium of the hydroxyl groups of the phenols by the Folin-Ciocalteu reagent. The results are expressed as mg of gallic acid / g of extract. In this way, the extracts obtained following the processes detailed below have a minimum total phenolic content of 50 mg / g (5%).
  • the extracts contain the three types of proanthocyanidins (procyanidins, propelargonidines and prodelfinidines) linked by both type B or A bonds.
  • a mass spectrometry analysis in particular by MALDI-TOF-MS ("matrix-assisted” laser desorption / ionization time-of-flight mass spectrometry ").
  • MALDI-TOF-MS matrix-assisted laser desorption / ionization time-of-flight mass spectrometry
  • the extracts are analyzed by high performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry (HPLC / MS) to separate the different isomers of dimers and trimers of procyanidins, propelargonidines and prodelfinidines, both with bonds of type B as type A. Since there are hardly any commercial patterns of proanthocyanidins, the identification of chromatographic peaks is based on their mass spectrum, which allows us to know the forming units (without distinguishing between diastereomers).
  • HPLC / MS mass spectrometry
  • m / z 290.08 * (CAT) + 274.08 * (AFZ) + 306.07 * (GAL) - 2.02 * ( ⁇ ) -4.04 * (A) - 1.01, where CAT, AFZ and GAL correspond, respectively, to the number of units of (epi) catechin, (epi) afzelequina and (epi) galocatechin that make up the proanthocyanidin molecule; B and A correspond, respectively, to the number of links of type B and A between the constituent units.
  • the m / z signals corresponding to dimers and trimers of procyanidins, propelargonidines, and prodelfinidines with type B and A bonds are collected below.
  • the contents of each compound are expressed as mg of (-) - epicatechin / g of extract.
  • the extracts obtained have a minimum content of monomers, dimers and trimers of proanthocyanidins of 10 mg / g (1%).
  • the percentage of proanthocyanidins of type A is calculated by dividing the contents of dimers and trimers of type A between the contents of dimers and trimers of type A and B.
  • the extracts obtained have a minimum percentage of proanthocyanidins of type A of the fifteen%.
  • Another aspect of the invention is the procedure for obtaining the extracts characterized in that some of the following steps are carried out:
  • the skin can be degreased using organic solvents (i.e., hexane).
  • Extraction can be carried out with pure methanol, ethanol and water or mixtures thereof; at a temperature between 25 0 C and 100 0 C, and preferably between 50 0 C to 70 0 C; acidified or not with any inorganic type acid such as HCI, H 2 SO 4 , H 3 PO 4 or any organic acid such as acetic acid, citric acid or any cationic resin in protonated form.
  • Usual systems are used for solid-liquid extractions (incubator, reflux, etc.), and an ultrasonic bath can also be used.
  • the extraction time can be comprised according to the type of equipment used between 2 hours and 24 hours. After this time, the liquid extract is separated from the solid residue by centrifugation or by pressing and / or filtration.
  • the extraction vehicle can also be pure methanol, ethanol and water or mixtures thereof, and acidified or not with the same acids discussed above.
  • a specific extractor equipment is used that allows liquids to be used at high temperatures and pressures.
  • the working conditions will be pressures between 500 psi and 3000 psi and temperatures between 60 0 C and 180 0 C, preferably 100 0 C to 140 0 C.
  • the extraction time with superheated liquids can be comprised according to the conditions used between 1 minute and 6 hours
  • one of the methods contemplated is the extraction with organic solvents such as ethyl acetate, acetone, n-butanol, iso-propanol or their mixtures and acidified with the same acids used in the process Extraction
  • Another alternative is the purification by adsorption chromatography or ion exchange on Dowex or Amberlite type resins by gradient elution of methanol or ethanol type alcohols between 20% and 80% in alcohol.
  • the extract can be dried in various ways, although it must be characterized by working at temperatures below 40 0 C. Freeze drying, concentration and / or vacuum drying, air drying, and atomization are also contemplated as forms of drying.
  • the almond skin extracts object of this patent have antioxidant capacity, evaluated in vitro by the ORAC method (oxygen radical absorption capacity) using fluorescein as a fluorescent substance.
  • the antioxidants present in the extract neutralize the peroxyl radicals generated by the thermal decomposition of AAPH, thus preventing its reaction with fluorescein.
  • the results are expressed as mmoles of Trolox / g of extract, with Trolox being a synthetic compound, a water-soluble analogue of vitamin E.
  • the ORAC method is one of those recommended for measuring the antioxidant properties of food and dietary products, as well as of their quality control (Prior RL, Wu X., Schaich K. (2005) Standardized methods for the determination of antioxidant capacity of phenolics in foods and dietary supplements. J. Agrie. Food Chem. 53, 4290-4302 .).
  • oxidative stress or oxidative overload is involved in many degenerative diseases, such as cancer, atherosclerosis, Alzheimer's disease or the aging process itself.
  • oxidative stress as a cause of these diseases, it is considered that a preventive strategy is the diet rich in antioxidant compounds, including phenolic compounds.
  • antioxidant compounds including phenolic compounds.
  • an extract has good in vitro properties does not necessarily imply that it acts as an effective antioxidant in vivo. Other factors such as bioavailability, metabolism, interactions between nutrients, etc. they can condition the activity in the physiological environment of the potentially bioactive compounds / s present in the extract.
  • the ORAC methodology is a good experimental approach for the optimization of procurement processes, quality control and comparison between potentially active extracts.
  • ORAC values for some commercial phenolic extracts.
  • the differences in antioxidant capacity between products are due not only to the source used, which determines the active phenolic structures, but also to the process of obtaining the extract.
  • the extracts object of this patent have an antioxidant capacity similar or superior to that found for many of the phenolic extracts marketed at present. In any case, these extracts may also present other activities / properties of interest to the food, dietary, cosmetic and pharmaceutical industry that would also be included in this invention. Thus, for example, it is expected that extracts containing procyanidins, propelargonidines and prodelfinidines of type A present activities described for isolated molecules such as the inhibitory capacity of bacterial adhesion in the urinary tract and certain pseudo-insulin activity.
  • Extracts could be used as ingredients in food, for the preparation of dietary and cosmetic supplements and in the manufacture of medicines.
  • Example 1 Almond skin extract containing procyanidins, propelargonidines and prodelfinidines
  • Samples of almond skin detached during the roasting of the fruit were used in an industrial scale oven.
  • the skins were ground.
  • the ground sample was degreased with hexane.
  • the degreased sample was mixed with methanol / HCI (1000: 1 v / v) and held for 15 min. in an ultrasonic bath at 25 0 C. It was allowed to stand 15 min., repeating the operation twice in total. Subsequently, the mixture was centrifuged. The supernatant was removed and the residue was extracted again 2 more times. The corresponding supernatants were joined and the mixture was brought to dryness at low pressure in a rotary evaporator. The residue was redissolved in 40 mL of distilled water and extracted with ethyl acetate.
  • ESI electrospray ionization interface
  • B3 [(+) - catechin- (4 ⁇ ⁇ 8) - (+) - catechin] B1 [(-) - epicatechin- (4 ⁇ ⁇ 8) - (+) - catechin], B2 [(-) - epicatechin- (4 ⁇ ⁇ 8) - (-) - epicatechin], Bl [(-) -epicatechin- (4 ⁇ ⁇ 6) - (+) - catechin], B5 [(-) - epicatechin- (4 ⁇ ⁇ 6) - (-) - epicatechin] and C1 [(-) - epicatechin- (4 ⁇ ⁇ 8) - (-) - epicatechin- (4 ⁇ ⁇ 8) - (-) - epicatechin].
  • B3 [(+) - catechin- (4 ⁇ ⁇ 8) - (+) - catechin]
  • B1 [(-) - epicatechin- (4 ⁇ ⁇ 8) - (+) - catechin]
  • B2 [(-) - epic
  • the antioxidant capacity of the extract was also determined following the ORAC method that evaluates the oxygen radical absorption capacity.
  • This extract # 1 presented a good antioxidant capacity, with its ORAC value of 3.0 mmol Trolox / g.
  • Example 2 Almond skin extract containing procyanidins, propelargonidines and prodelfinidines
  • the acidified skin / ethanol ratio was 1/10.
  • the mixture was pressed and the remains of the skin of the extractive liquid were filtered off on a thin mesh of 0.2 mm.
  • the resulting liquid was dried under vacuum at a temperature below 6O 0 C.
  • the insoluble dry residue was filtered on fine pore paper filter.
  • ESI electrospray ionization interface
  • B3 [(+) - catechin- (4 ⁇ ⁇ 8) - (+) - catechin] B1 [(-) - epicatechin- (4 ⁇ ⁇ 8) - (+) - catechin], B2 [(-) - epicatechin- (4 ⁇ ⁇ 8) - (-) - epicatechin], Bl [(-) -epicatechin- (4 ⁇ ⁇ 6) - (+) - catechin], B5 [(-) - epicatechin- (4 ⁇ ⁇ 6) - (-) - epicatechin] and C1 [(-) - epicatechin- (4 ⁇ ⁇ 8) - (-) - epicatechin- (4 ⁇ ⁇ 8) - (-) - epicatechin].
  • B3 [(+) - catechin- (4 ⁇ ⁇ 8) - (+) - catechin]
  • B1 [(-) - epicatechin- (4 ⁇ ⁇ 8) - (+) - catechin]
  • B2 [(-) - epic
  • the total content of flavan-3-oles compounds was 114.02 mg / g, expressed as (-) - epicatechin. Of these, 53.39 mg / g correspond to dimers and trimers of proanthocyanidins. Of this total proanthocyanidins, 11, 40 mg / g correspond to type A dimers, that is, 21.4% of identified proanthocyanidins have a type A bond.
  • the antioxidant capacity of the extract was also determined following the ORAC method that evaluates the oxygen radical absorption capacity.
  • This extract # 2 had a good antioxidant capacity, its ORAC value being 12.1 mmol Trolox / g.
  • Example 3 Almond skin extract containing procyanidins, propelargonidines and prodelfinidines
  • Example 2 The same sample of almond skin was used as in Example 2.
  • the working conditions were 2000 psi of pressure and 90 0 C of temperature, the extraction time being 30 min.
  • the resulting liquid was dried under vacuum at a temperature below 6O 0 C. From here it was operated in the same way as in Example 2 and the analyzes for the characterization of the extract and for the identification of its components were performed similarly, obtaining an extract substantially equivalent to that obtained in example 2.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Esta invención se refiere a extractos fenólicos conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas obtenidos a partir de Ia piel de Ia almendra [Prunus dulcís (Mili.) D.A. Webb, Prunus amygdalus (L.) Batsch., Amygdalus dulcís (Mili.), Amygdalus communis (L.) o Prunus communis (L.)]. En particular, se quieren conseguir extractos ricos en proantocianidinas con enlaces de tipo A. El procedimiento de obtención que también se protege consiste en: a) una maceración del material vegetal con disolventes orgánicos a 25-100 °C, b) una purificación por extracción líquido-líquido y/o cromatografía de adsorción o intercambio iónico, y c) opcionalmente, un secado final. También se protegen las posibles actividades/propiedades de estos extractos tales como Ia actividad antioxidante y otras, que determinan su uso como ingrediente alimentario o dietético, y en Ia industria cosmética y farmacéutica.

Description

EXTRACTOS FENÓLICOS DE PIEL DE ALMENDRA CONTENIENDO PROCIANIDINAS, PROPELARGONIDINAS Y PRODELFINIDINAS, Y SU PROCEDIMIENTO DE OBTENCIÓN.
SECTOR DE LA TÉCNICA
Extractos fenólicos bioactivos de aplicación en Ia industria alimentaria, dietética, cosmética y farmacéutica.
ESTADO DE LA TÉCNICA
Las proantocianidinas o taninos condensados son oligómeros y polímeros de flavan-3-ol ampliamente distribuidos en el reino vegetal. Las unidades de flavan-3-ol más abundantes son (+)-afzelequina, (+)-catequina y (+)- galocatequina (formas 2R.3S) y sus diasteroisómeros (-)-epiafzelequina, (-)- epicatequina y (-)-epigalocatequina (formas 2R.3R), respectivamente. Las proantocianidinas constituidas exclusivamente por (epi)catequina se denominan procianidinas. Las propelargonidinas y prodelfinidinas contienen al menos una unidad de (epi)afzelequina y (epi)galocatequina, respectivamente, junto con unidades de (epi)catequina. En las procianidinas/propelargonidinas/prodelfinidinas de tipo B, las unidades de flavan-3-ol se encuentran unidas por el carbono C-4 de Ia unidad superior y el carbono C-6 o C-8 de Ia unidad inferior, siendo más abundantes los isómeros C4-C8 que los C4-C6. Además de este enlace C-C interflavánico, las procianidinas de tipo A presentan un enlace de tipo éter entre el carbono C-2 de Ia unidad superior y el grupo hidroxilo del carbono C-7 de Ia unidad inferior (Porter LJ. (1988) Flavans and proanthocyanidins. In The flavonoids (Harborne J. B., Ed.) Chapman and Hall, New York, pp. 21-62). Mientras que las proantocianidinas de tipo B se encuentran en muchas especies de plantas, son escasas las fuentes naturales en las que se han identificado proantocianidinas de tipo A (arándano, cacahuete, aguacate, ciruela, canela y curry); de igual forma, las procianidinas son mayoritarias respecto a propelargonidinas y prodelfinidinas en el reino vegetal (Prior R. L., Gu L. (2005) Occurrence and biological significance of proanthocyanidin in the American diet. Phytochemistry 66, 2264-2280).
Figure imgf000004_0001
Flavan-3-ol R2 C-2 C-3
(+) -Afzelequina H H R S
(+) -Catequina H OH R S
(+) -Galocatequina OH OH R S
(-) -Epiafzelequina H H R R
(-) -Epicatequina H OH R R
(-) -Epigalocatequina OH OH R R
Los productos ricos en proantocianidinas más comercializados actualmente se obtienen de fuentes como semillas de uva, manzana, cacao, corteza de pino, etc., y contienen mayoritariamente procianidinas de tipo B. Las proantocianidinas de tipo A presentan propiedades/actividades potencialmente beneficiosas para Ia salud humana, tal es Ia capacidad de inhibición de Ia adhesión bacteriana en el tracto urinario -Io que reduce el riesgo de infecciones urinarias- (Foo L.Y., Lu Y.R., Howell A. B., Vorsa N. (2000) A-type proanthocyanidin trimers from cranberry that inhibit adherence of uropathogenic P-fimbriated Escherichia coli. J Nat. Prod. 63, 1225-1228; Foo L.Y., Lu Y.R., Howell A.B., Vorsa N. (2000) The structure of cranberry proanthocyanidins which inhibit adherence of uropathogenic P-fimbriated Escherichia coli in vitro. Phytochemistry 54, 173-181 ), y Ia actividad seudo- insulina -Io que mejora el metabolismo de Ia glucosa en pacientes con diabetes del tipo 2- (Anderson R.A., Broadhurst C. L., Polansky M. M., Schmidt W.F., Khan A., Flanagan V.P., Shoene N.W., Graves D. J. (2004) Isolation and characterization of polyphenol type-A polymers from cinnamon with insulin-like biological activity. J. Agrie. Food Chem. 52, 65-70). También se han demostrado actividades antioxidante (Barreiros A.L.B.S., David J. P., de Queiroz L. P., David J. M. (2000) A-type proanthocyanidin antioxidant from Dioclea lasiophylla. Phytochemistry 55, 805-808J y antiinflamatoria (Lin L. C, Kuo Y. C, Chou CJ. (2002) Immunomodulatory proanthocyanidins from Ecdysanthera utilis. J. Nat. Prod. 65, 505-508) para las proantocianidinas de tipo A.
Dicho Io anterior, surge, pues, el interés por nuevos productos ricos en los tres tipos de proantocianidinas -es decir, procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas-, especialmente con enlaces de tipo A. Algunas patentes previas relacionadas con productos conteniendo proantocianidinas son las siguientes:
-WO2005/072726: Compositions and methods of use of A-type procyanidins, Schmitz, H. H.; Kwik-Uribe, C. L.; KeIm, M.A.; Hammerstone, J. F.
Esta patente se refiere a formulaciones a emplear en el tratamiento contra Ia hipertensión. Se incluyen exclusivamente procianidinas de tipo A, es decir, formadas exclusivamente por (epi)catequina.
-WO2004/112813: Litchi sinensis extracts containing oligomeric proanthocyanidins, RuII, S.; Alaoui, I.; Fabry, B.
Esta patente se refiere a Ia obtención de extractos de litchi ricos en proantocianidinas de tipo A, aunque no se incluyen identificaciones del tipo de moléculas contenidas en el extracto.
-US2004/156925: Plant proanthocyanidin extract effective at inhibiting utility,
Howell, A. B.; Vorsa, N.
Esta patente se refiere a Ia obtención de extractos de proantocianidinas para
Ia prevención y tratamiento de infecciones del tracto urinario causadas por Escherichia coli tipo P. Los extractos contienen proantocianidinas con al menos un enlace de tipo A, particularmente procianidinas.
-WO99/12541 : Plant proantocyanidin extract effective at inhibiting adherence of bacteria with P-type fimbriae to surfaces, Howell, A. B.; Vorsa, N. Esta patente se refiere a Ia obtención de extractos de proantocianidinas a partir de plantas de las familias Ericaceae, Rosaceae, Pinaceae y Vitaceae, preferiblemente Vaccinium macrocarpon. Los extractos se emplean en Ia prevención y tratamiento de infecciones del tracto urinario causadas por Escherichia co// tipo P.
-US2002/028260: Proanthocyanidin composition extracted from Vaccinium useful in pharmaceutical compositions for preventing or treating urogenital infection, Mickelsen, J. N.; Mickelsen, R. A.; Walker, E. B. Esta patente se refiere al uso de ciertas procianidinas (A y B) contra infecciones urinarias y otros. Aunque en el titulo se habla de proantocianidinas, en el texto se indica que están formadas por unidades de (epi)catequina (es decir, procianidinas).
-US2002/0228260: Plant proanthocyanidin extracts, Walter, E. B.; Mickelsen, R. A.; Mickelsen, J. N.
Esta patente se refiere a extractos de plantas conteniendo procianidinas con al menos un enlace de tipo A y su uso en el prevención y tratamiento de infecciones urogenitales.
-ES2171142: Conjugados de flavanoles y cisteamina. Torres, J. L. Se refiere a nuevos productos que resultan de Ia conjugación de extractos polifenólicos ricos en procianidinas y prodelfinidinas con moléculas que contienen el grupo tiol.
Un punto importante en Ia invención y desarrollo de productos ricos en compuestos potencialmente activos es su coste, tanto de materia prima inicial como de procedimiento de producción. En este sentido, los subproductos de Ia industria agroalimentaria son fuentes atractivas de compuestos bioactivos.
El tegumento o piel de Ia almendra, que se separa de Ia almendra durante el procesamiento industrial de Ia misma, es un subproducto con escaso valor económico, empleándose mayormente como alimento para ganado. En Ia piel de Ia almendra, se han identificado diversos compuestos fenólicos tanto de tipo no-flavonoideo como flavonoideo (Sang, S.; Lapsley, K.; Jeong, W-S.; Lachance, P.A.; Ho, C-T; Rosen, RT. (2002) Antioxidant phenolic compounds isolated from almond skins (Prunus amygdalus Batsch). J. Agrie. Food Chem., 50, 2459-2463; Milbury P. E., Chen C.Y., Dolnikowski G.G., Blumberg J. B. (2006) Determination of flavonoids and phenolics and their distribution in almonds. J Agrie Food Chem 54 , 5027-5033; Wijeratne SSK, Abou-Zaid MM, Shahidi F. (2006) Antioxidants polyphenols in almond and its coproduets. J Agrie Food Chem, 54, 312-318). En relación a los flavan-3- oles, Brieskon, C. H.; Betz, R. (1998) Procyanidin polymers crucial to the structure of the almond seed coat. Z. Lebensm. Unters. Forsch. 187, 347- 353, identificaron los monómeros (+)-catequina y (-)-epicatequina, así como los dímeros de procianidinas B1 , B3 y B4. Posteriormente, Lazarus, S.A., Adamson, G. E., Hammerstone, J. F., Schmitz, H. H. (1999) High performance liquid chromatography/mass spectrometry analysis of proanthocyanidins in food and beverages. J. Agrie. Food Chem. 47, 3693-3701 , confirman Ia presencia de procianidinas de tipo B, demostrando a su vez Ia ausencia de procianidinas de tipo A en los extractos que obtuvieron a partir de piel de almendra.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
Breve descripción de Ia invención
El problema a resolver es Ia obtención de extractos conteniendo proantocianidinas con propiedades/actividades potencialmente beneficiosas para Ia salud humana. Además, se buscan materias primas de bajo coste y procesos de producción sencillos y rentables.
La invención se refiere a extractos fenólicos conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, y obtenidos de Ia piel de Ia almendra
[Prunus dulcís (Mili.) D.A. Webb, Prunus amygdalus (L.) Batsch., Amygdalus dulcís (Mili.), Amygdalus communis (L.) or Prunus communis (L.)]. En particular, se quieren conseguir extractos ricos en proantocianidinas con enlaces de tipo A. Es de esperar que estos extractos presenten propiedades diferentes, cuando no mejoradas, con respecto a los productos comercializados actualmente y que contienen mayoritariamente procianidinas de tipo B.
El procedimiento de obtención, que también se protege, consiste en una maceración del material vegetal con disolventes, seguido de una etapa de purificación del extracto y, opcionalmente, un secado final del extracto purificado. También se protegen las posibles actividades o propiedades de estos extractos tales como Ia actividad antioxidante y otras, que determinan su uso como ingrediente alimentario o dietético y en Ia industria cosmética y farmacéutica.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
Figura 1 : Ejemplos de las estructuras químicas de las proantocianidinas que se encontrarían en los extractos objeto de esta patente.
Figura 2: Análisis por MALDI-TOF de Ia muestra obtenida en el ejemplo 1 , ampliándose Ia zona correspondiente a los tetrámeros. Se comprueba Ia presencia de procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas desde dímeros hasta heptámeros, conteniendo ambos tipos de enlaces, B y A. A continuación se indican las señales m/z correspondientes a los aducios sódicos [M+Na]+ de las proantocianidinas detectadas.
Figura 3: Análisis por HPLC con columna de fase inversa de Ia muestra obtenida en el ejemplo 1 , con identificación de picos cromatográficos correspondientes a dímeros y trímeros de procianidinas de tipo B (m/z= 577 y 865, respectivamente) y dímeros y trímeros de procianidinas de tipo A (m/z= 575 y 863, respectivamente).
Figura 4: Análisis por MALDI-TOF de Ia muestra obtenida en el ejemplo 2, ampliándose Ia zona correspondiente a los tetrámeros. Se comprueba Ia presencia de procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas desde dímeros hasta octámeros, conteniendo ambos tipos de enlaces, B y A. A continuación se indican las señales m/z correspondientes a los aducios sódicos [M+Na]+ de las proantocianidinas detectadas. Figura 5: Análisis por HPLC con columna de fase inversa de Ia muestra obtenida en el ejemplo 2, con identificación de picos cromatográficos correspondientes a dímeros y trímeros de procianidinas de tipo B (m/z= 577 y 865, respectivamente), dímeros y trímeros de procianidinas de tipo A (m/z= 575 y 863, respectivamente), dímeros y trímeros de propelargonidinas de tipo B (m/z= 561 y 849, respectivamente), dímeros de propelargonidinas de tipo A (m/z= 559), y dímeros de prodelfinidinas de tipo A (m/z= 591 ).
Descripción detallada de Ia invención
La presente invención consiste en extractos fenólicos de Ia piel (tegumento) de Ia almendra [Prunus dulcís (Mili.) D.A. Webb, Prunus amygdalus (L.) Batsch., Amygdalus dulcís (Mili.), Amygdalus communis (L.) or Prunus communis (L.)] caracterizados por contener procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas. La piel de Ia almendra es un subproducto agroalimentario de bajo coste por Io que este procedimiento de obtención de extractos supondría una valorización de dicho subproducto ya que se obtendrían productos de mayor valor añadido. La piel podría emplearse tanto húmeda como seca, separada del fruto por un proceso de escaldado y posterior repelado, o por tostación.
Las procianidinas son polímeros formados únicamente por (+)-catequina y/o (-)-epicatequina. En cambio, las propelargonidinas y prodelfinidinas son polímeros que contienen unidades de (+)-afzelequina y/o (-)-epiafzelequina - caso de las propelargonidinas- y de (+)-galocatequina y/o (-)- galoepicatequina -caso de las prodelfinidinas-, pudiendo contener también unidades de (+)-catequina y/o (-)-epicatequina. Las diferencias estructurales entre (epi)catequina (dihidroxi-sustitución en el anillo B) y (epi)afzelequina (monohidroxi-sustitución en el anillo B) y (epi)galocatequina (trihidroxi- sustitución en el anillo B) justificarían posibles peculiaridades en las propiedades/actividades fisiológicas de estos tres grupos de proantocianidinas. Es de esperar, por tanto, que los extractos conteniendo combinaciones de estos tres tipos de proantocianidinas presenten propiedades diferentes, cuando no mejoradas, con respecto a los productos comercializados actualmente y que contienen únicamente procianidinas. Otra característica estructural de las proantocianidinas que determina sus propiedades/actividades fisiológicas es el tipo de enlace (A ó B) entre las unidades formadoras. La presente invención se refiere también a extractos de piel de Ia almendra caracterizados por contener procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas de tipo A.
El contenido fenólico total del extracto se determina por el método colorimétrico de Singleton V. L., Rossi J.A. (1965) Colorimetry of total phenolics with phosphomolibdicphosphotungstic acid reagent. Am J Enol Vitic 16, 144-158, que se basa en Ia oxidación en medio básico de los grupos hidroxilos de los fenoles por el reactivo de Folin-Ciocalteu. Los resultados se expresan como mg de ácido gálico /g de extracto. De esta forma, los extractos obtenidos siguiendo los procesos que a continuación se detallan presentan un contenido fenólico total mínimo de 50 mg/g (5 %).
Para confirmar que los extractos contienen los tres tipos de proantocianidinas (procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas) unidas tanto por enlaces de tipo B ó A, se realiza un análisis por espectrometría de masas, en concreto por MALDI-TOF-MS ("matrix-assisted láser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry"). Para este análisis, el extracto se cristaliza en una matriz sólida sobre Ia que incide el láser, que produce Ia ionización de las moléculas contenidas en el extracto. Los iones formados migran por el efecto de un campo eléctrico y Io hacen en función de su relación masa/carga {m/z), Io que permite Ia determinación de las masas moleculares de las sustancias contenidas en el extracto. La energía de ionización baja y Ia eficacia de transmisión alta hacen de esta técnica una de las más resolutivas para el estudio de las proantocianidinas (Reed J. D., Krueger C. G., Vestling M. M. (2005) MALDI-TOF mass spectrometry of oligomeric food polyphenols. Phytochemistry 66, 2248-2263).
En Ia tabla siguiente se indican las masas monoisotópicas correspondientes a los aducios sódicos de las procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas de tipo B y A que se encontrarían en los extractos objeto de esta patente. La asignación de Ia estructura a Ia masa observada [M+Na]+ {m/z) se hace teniendo en cuenta el cálculo teórico: m/z = 290.08*(C>4T) + 274.08*{AFZ) + 306.07*{GAL) - 2.02*(β) -4.04*(A) + 22.99, donde CAT, AFZ y GAL corresponden, respectivamente, al número de unidades de (epi)catequina, (epi)afzelequina y (epi)galocatequina que componen Ia molécula de proantocianidina; B y A corresponden, respectivamente, al número de enlaces de tipo B y A entre las unidades constitutivas. A modo de ejemplo, a continuación, se recogen las señales m/z correspondientes a procianidinas, propelargonidinas [hasta con 2 unidades de (epi)afzelequina] y prodelfinidinas [hasta con 2 unidades de (epi)galocatequina] con enlaces de tipo B y A.
Señales MALDI-TOF-MS [M+Na]+ (m/z)
Figure imgf000011_0001
Señales MALDI-TOF-MS [M+Na]+ {miz)
Figure imgf000012_0001
g-Grado de polimerización.
Además del análisis MALDI-TOF, los extractos se analizan por cromatografía líquida de alta eficacia acoplada a espectrometría de masas (HPLC/MS) para separar entre sí los distintos isómeros de los dímeros y trímeros de procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, tanto con enlaces de tipo B como de tipo A. Dado que apenas existen patrones comerciales de proantocianidinas, Ia identificación de los picos cromatográficos se basa en su espectro de masas, que nos permite conocer las unidades formadoras (sin bien sin distinguir entre diasteroisómeros). La asignación de Ia estructura a Ia masa observada [M-H]" (m/z) se hace de acuerdo a Ia siguiente expresión: m/z = 290.08*(CAT) + 274.08*(AFZ) + 306.07*(GAL) - 2.02*(β) -4.04*(A) - 1.01 , donde CAT, AFZ y GAL corresponden, respectivamente, al número de unidades de (epi)catequina, (epi)afzelequina y (epi)galocatequina que componen Ia molécula de proantocianidina; B y A corresponden, respectivamente, al número de enlaces de tipo B y A entre las unidades constitutivas. A modo de ejemplo, a continuación, se recogen las señales m/z correspondientes a dímeros y trímeros de procianidinas, propelargonidinas, y prodelfinidinas con enlaces de tipo B y A.
Señales ESI-MS [M-H]' (m/z)
Figure imgf000013_0001
g-Grado de polimerización.
Algunos ejemplos de las estructuras químicas de las proantocianidinas que se encontrarían en los extractos objeto de esta patente se incluyen en Ia figura 1.
Para Ia cuantificación de las proantocianidinas identificadas se utiliza un detector de fluorescencia operando en condiciones específicas para flavan- 3-oles (λeχcitacióπ=280 nm, λemisióπ=310 nm). Los contenidos de cada compuesto se expresan como mg de (-)-epicatequina /g de extracto. De esta forma, los extractos obtenidos presentan un contenido mínimo en monómeros, dímeros y trímeros de proantocianidinas de 10 mg/g (1 %).
El porcentaje de proantocianidinas de tipo A se calcula dividiendo los contenidos de dímeros y trímeros de tipo A entre los contenidos de los dímeros y trímeros de tipo A y B. De esta forma, los extractos obtenidos presentan un porcentaje mínimo de proantocianidinas de tipo A del 15%. Otro aspecto de Ia invención es el procedimiento de obtención de los extractos caracterizado porque se efectúan algunos de los siguientes pasos:
- maceración del material vegetal con disolventes - purificación del extracto
- secado del extracto purificado.
Se parte de piel de almendra húmeda o seca obtenida después del escaldado y posterior repelado, o después de Ia tostación de Ia almendra. Si Ia muestra está seca, se puede moler para reducir el tamaño. Para evitar posibles interferencias de Ia grasa, Ia piel se puede desengrasar empleando disolventes orgánicos (i.e., hexano).
La extracción se puede llevar a cabo con metanol, etanol y agua puros o sus mezclas; a temperatura entre 25 0C y 100 0C, y de preferencia entre 50 0C a 70 0C; acidulado o no con cualquier ácido de tipo inorgánico como por ejemplo HCI, H2SO4, H3PO4 o cualquier ácido orgánico como ácido acético, cítrico o alguna resina catiónica en forma protonada. Se emplean sistemas habituales para las extracciones sólido-líquido (incubador, reflujo, etc.), pudiéndose emplear también un baño de ultrasonidos. El tiempo de extracción puede estar comprendido según el tipo de equipo utilizado entre 2 horas y 24 horas. Después de este tiempo, el extracto líquido se separa del residuo sólido por centrifugación o por prensado y/o filtración.
Una alternativa que acelera el proceso anterior y reduce el volumen de líquido extractante, es Ia extracción con líquidos sobrecalentados. El vehículo de extracción puede ser también metanol, etanol y agua puros o sus mezclas, y acidulados o no con los mismos ácidos comentados anteriormente. En este caso se emplea un equipo extractor específico que permite utilizar líquidos a elevadas temperaturas y presiones. Las condiciones de trabajo serán presiones entre 500 psi y 3000 psi y temperaturas entre 60 0C y 180 0C, con preferencia 100 0C a 140 0C. El tiempo de extracción con líquidos sobrecalentados puede estar comprendido según las condiciones empleadas entre 1 minuto y 6 horas. En cuanto a Ia etapa de purificación del extracto, uno de los métodos que se contemplan es Ia extracción con disolventes orgánicos como acetato de etilo, acetona, n-butanol, iso-propanol o sus mezclas y acidulados con los mismos ácidos utilizados en el proceso de extracción.
Otra alternativa es Ia purificación por cromatografía de adsorción o intercambio iónico sobre resinas tipo Dowex o Amberlite por elución en gradiente de alcoholes tipo metanol o etanol entre 20% y 80% en alcohol.
El extracto se puede secar de diversas formas, si bien se debe caracterizar por trabajar a temperaturas inferiores a 40 0C. La liofilización, concentración y/o secado a vacío, secado con aire, y atomización también se contemplan como formas de secado.
En cuanto a sus propiedades, los extractos de piel de almendra objeto de esta patente presentan capacidad antioxidante, evaluada in vitro por el método ORAC (capacidad de absorción de radicales de oxígeno) empleando fluoresceína como sustancia fluorescente. Los antioxidantes presentes en el extracto neutralizan los radicales peroxilo generados por Ia descomposición térmica de AAPH, evitando así su reacción con Ia fluoresceína. Los resultados se expresan como mmoles de Trolox/g de extracto, siendo el Trolox un compuesto sintético, análogo hidrosoluble de Ia vitamina E. El método ORAC es uno de los recomendados para Ia medida de las propiedades antioxidantes de alimentos y productos dietéticos, así como del control de Ia calidad de los mismos (Prior R. L., Wu X., Schaich K. (2005) Standardized methods for the determination of antioxidant capacity of phenolics in foods and dietary supplements. J. Agrie. Food Chem. 53, 4290- 4302.).
Actualmente, se admite que el estrés oxidativo o sobrecarga oxidativa está implicado en multitud de enfermedades degenerativas, como el cáncer, Ia aterosclerosis, Ia enfermedad de Alzheimer o el proceso mismo de envejecimiento. No obstante, los mecanismos etiopatogénicos no se conocen completamente. Frente al estrés oxidativo como causa de estas enfermedades, se considera que una estrategia preventiva es Ia dieta rica en compuestos antioxidantes, entre ellos, los compuestos fenólicos. Ahora bien, el hecho de que un extracto presente buenas propiedades in vitro no implica necesariamente que actúe como antioxidante efectivo in vivo. Otros factores como biodisponibilidad, metabolismo, interacciones entre nutrientes, etc. pueden condicionar Ia actividad en el medio fisiológico de los compuesto/s potencialmente bioactivos presentes en el extracto.
En cualquier caso, Ia metodología ORAC es una buena aproximación experimental para Ia optimización de procesos de obtención, control de calidad y comparativa entre extractos potencialmente activos. A modo de referencia, podemos mencionar los valores ORAC para algunos extractos fenólicos comerciales. Las diferencias en Ia capacidad antioxidante entre productos se deben no sólo a Ia fuente empleada, que determina las estructuras fenólicas activas, sino también al proceso de obtención del extracto.
Figure imgf000016_0001
Referencias
Monagas M., Hernández-Ledesma B., Garrido I., Martin-Alvarez PJ. , Gómez- Cordoves C, Bartolomé, B. (2005). Quality assessment of commercial dietary antioxidant producís from V/í/s Vinifera I. grape seeds. Nutr. Cáncer, 53, 244- 254.
Monagas M., Hernández-Ledesma B., Gómez-Cordovés C, Bartolomé, B. (2006). Commercial dietary ingredients from Vitis vinifera L. leaves and grape skins: antioxidant and chemical characterization. J. Agrie. Food Chem., 54, 319-327.
Garrido I., Bartolomé B., Gómez-Cordovés C. (2007). Hydrophilic and lipophilic antioxidant capacities of commercial dietary antioxidant supplements. ¡tal. J. Food Sci., en prensa.
Los extractos objeto de esta patente presentan una capacidad antioxidante similar o superior a Ia encontrada para muchos de los extractos fenólicos comercializados en Ia actualidad. En cualquier caso, estos extractos también pueden presentar otras actividades/propiedades de interés para Ia industria alimentaria, dietética, cosmética y farmacéutica que también se incluirían en esta invención. Así, por ejemplo, es de esperar que los extractos conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas de tipo A presenten actividades descritas para moléculas aisladas como Ia capacidad inhibitoria de Ia adhesión bacteriana en el tracto urinario y cierta actividad seudo-insulina.
Estos extractos se podrían emplear como ingredientes en alimentos, para Ia elaboración de suplementos dietéticos y de cosméticos y en Ia fabricación de medicamentos.
EJEMPLOS DE REALIZACIÓN DE LA INVENCIÓN Para una mejor compresión de Ia invención se adjuntan dos ejemplos que no son limitantes en cuanto a su aplicación.
Ejemplo 1 : Extracto de piel de almendra conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas
Se utilizaron muestras de piel de almendra desprendidas durante Ia tostación del fruto en un horno a escala industrial. Las pieles se molieron. La muestra molida se desengrasó con hexano. La muestra desengrasada se mezcló con metanol/HCI (1000:1 v/v) y se mantuvo durante 15 min. en un baño de ultrasonidos a 25 0C. Se dejó reposar 15 min., repitiéndose Ia operación dos veces en total. Posteriormente Ia mezcla se centrifugó. El sobrenadante se retiró y el residuo se extrajo de nuevo 2 veces más. Se unieron los sobrenadantes correspondientes y Ia mezcla se llevó a sequedad a baja presión en un rotavapor. El residuo se redisolvió en 40 mL de agua destilada y se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas se combinaron. Posteriormente, el extracto se llevó a sequedad en rotavapor a una temperatura inferior a 40 0C para obtener un extracto seco. El contenido en polifenoles de este extracto #1 fue de 78,3 mg/g, siendo el rendimiento del proceso del 2.1 %.
Se llevó a cabo el análisis MALDI-TOF del extracto empleando ácido 2,5- dihidroxibenzoico (ácido gentísico) como matriz. Así, se comprobó que el extracto contenía procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas hasta heptámeros (Figura 2). De igual forma, se comprobó que las procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas encontradas correspondían a ambos tipos, A y B (Figura 2, ampliación para tetrámeros). A continuación se indican las señales m/z correspondientes a los aducios sódicos [M+Na]+ de las proantocianidinas detectadas:
Ejemplo 1 : señales MALDI-TOF-MS [M+Na]+ (m/z)
Figure imgf000018_0001
Figure imgf000019_0001
g-Grado de polimerización.
* Indica solapamiento de las señales correspondientes a proantocianidinas de tipo B y A.
También se realizó un análisis por HPLC empleando una columna de fase inversa Waters Nova-Pak® Cíe [300 mm x 3,9 mm (diámetro interno); tamaño de partícula: 4μm] y aplicando un gradiente de elución compuesto por agua/ácido acético (98:2, v/v) y agua/acetonitrilo/ácido acético, (73:25:2, v/v/v) con un flujo de 1 ,0 mL/min Se inyectó un volumen de muestra de 75 μl_ de una solución del extracto 21 mg/ml en metanol/agua (50:50, v/v).
Por un lado, se empleó un detector de masas cuadrupolar acoplado a una interfase de ionización por electrospray (ESI) que permitió identificar algunos picos cromatográficos como dímeros y trímeros de procianidinas de tipo B (m/z= 577 y 865, respectivamente) y dímeros y trímeros de procianidinas de tipo A (m/z= 575 y 863, respectivamente) (Figura 3). No fue posible Ia asignación de picos cromatográficos correspondientes a otros tipos de compuestos detectados por el análisis MALDI-TOF (i.e., propelargonidinas y prodelfinidinas) debido posiblemente a Ia baja concentración de los mismos y/o coelución entre ellos. Dado que se disponían de patrones de dímeros y trímeros de procianidinas tipo B previamente aislados de otras plantas, fue posible Ia asignación de Ia estructura química de los compuestos: B3 [(+)-catequina-(4α→8)-(+)- catequina], B1 [(-)-epicatequina-(4β→8)-(+)-catequina], B2 [(-)-epicatequina- (4β→8)-(-)-epicatequina], Bl [(-)-epicatequina-(4β→6)-(+)-catequina], B5 [(-)- epicatequina-(4β→6)-(-)-epicatequina] y C1 [(-)-epicatequina-(4β→8)-(-)- epicatequina-(4β→8)-(-)-epicatequina]. Sin embargo, no fue posible Ia asignación de estructuras al resto de picos cromatográficos por Ia falta de disponibilidad de patrones.
Por otro lado, empleando un detector de fluorescencia, se determinó el área de los picos cromatográficos correspondientes a los compuestos identificados y se calculó su contenido empleando Ia curva de calibrado de Ia (-)-epicatequina. A continuación, se indica los contenidos de las proantocianidinas de tipo B y A identificadas en el extracto de piel de almendra:
EXTRACTO #1 : composición
Compuesto fenólico Concentración (mg/g)
(+)-Catequina 6,50
(-)-Epicatequina 4,48
Procianidinas dímeros B (B3+B1) 1 ,41
Procianidina dímero B (B2) 1 ,41
Procianidina dímero B (B7) 1 ,11
Procianidina dímero B (B5) 0,70
Procianidina trímero B (Ci) 1 ,25
Procianidina dímero A (tr=31 ,8 min) 0,52
Procianidina dímero A (tr=32,9 min) 0,23
Procianidina dímero A (tr=36,4 min) 0,31
Procianidina dímero A (tr=50,6 min) 0,07
Procianidina trímero A (tr=31 ,4 min) 0,26
TOTAL 18,25 El contenido total en compuestos flavan-3-oles fue de 18,25 mg/g, expresados como (-)-epicatequina. De ellos, 7,27 mg/g se corresponden con dímeros y trímeros de proantocianidinas. De este total de proantocianidinas, 1 ,39 mg/g se corresponden con dímeros de tipo A, es decir, el 19,0 % de proantocianidinas identificadas presentan un enlace de tipo A.
También se determinó Ia capacidad antioxidante del extracto siguiendo el método ORAC que evalúa Ia capacidad de absorción de radicales de oxígeno. Este extracto #1 presentó una buena capacidad antioxidante, siendo su valor ORAC de 3,0 mmoles de Trolox/g.
Ejemplo 2: Extracto de piel de almendra conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas
La piel de almendra húmeda desprendida del escaldado industrial del fruto se extrajo con etanol acidulado con HCI a pH=3, manteniéndose a reflujo durante 4 horas a una temperatura próxima a su punto de ebullición. La relación piel/etanol acidulado fue de 1/10. La mezcla se prensó y se separaron por filtración sobre malla fina de 0,2 mm los restos de Ia piel del líquido extractivo. El líquido resultante se sometió a secado bajo vacío a una temperatura inferior a 6O0C.
El extracto seco se resuspendió en agua acidulada con HCI a pH=3, con una relación extracto/agua de 1/10. El residuo seco insoluble se filtró sobre filtro de papel de poro fino. El residuo sólido depositado sobre el filtro se lavó con agua (pH=3), y se recuperó el líquido filtrado, añadiéndose al líquido anterior.
El extracto de piel de almendra purificado y disuelto en agua se cargó en una columna llena de resina Amberlita XAD-7, lavada previamente con 5 volúmenes de etanol y 5 volúmenes de agua destilada acidulada a pH=3. Después del paso de todo el líquido de extracción se lavó Ia resina con 2 volúmenes de columna de solución acuosa de etanol al 20% y tras comprobar que no salía a través de Ia columna materia seca disuelta se eluyó el material retenido con 5 volúmenes de una disolución etanol/agua (60/40). Esta última fracción se secó bajo vacío a una temperatura inferior a 4O0C. El contenido en polifenoles totales de este extracto #2 fue de 264.6 mg/g, siendo el rendimiento del proceso del 3.3%.
Se llevó a cabo el análisis MALDI-TOF del extracto empleando ácido 2,5- dihidroxibenzoico (ácido gentísico) como matriz. Así, se comprobó que el extracto #2 contenía procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas hasta octámeros (Figura 4). De igual forma, se comprobó que las procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas encontradas correspondían a ambos tipos, A y B (Figura 4, ampliación para tetrámeros). A continuación se indican las señales m/z correspondientes a los aducios sódicos [M+Na]+ de las proantocianidinas detectadas:
Señales MALDI-TOF-MS [M+Na]+ (m/z)
Figure imgf000022_0001
Señales MALDI-TOF-MS [M+Na]+ (m/z)
Figure imgf000023_0001
g-Grado de polimerización.
* Indica solapamiento de las señales correspondientes a proantocianidinas de tipo B y A.
También se realizó un análisis por HPLC empleando una columna de fase inversa Waters Nova-Pak® Ci8 [300 mm x 3,9 mm (diámetro interno); tamaño de partícula: 4μm] y aplicando un gradiente de elución compuesto por agua/ácido acético (98:2, v/v) y agua/acetonitrilo/ácido acético, (73:25:2, v/v/v) con un flujo de 1 ,0 mL/min Se inyectó un volumen de muestra de 5 μl_ de una solución del extracto de 43 mg/ml en metanol/agua (50:50, v/v).
Por un lado, se empleó un detector de masas cuadrupolar acoplado a una interfase de ionización por electrospray (ESI) que permitió identificar algunos picos cromatográficos como dímeros y trímeros de procianidinas de tipo B (m/z= 577 y 865, respectivamente), dímeros y trímeros de procianidinas de tipo A (m/z= 575 y 863, respectivamente), dímeros y trímeros de propelargonidinas de tipo B (m/z= 561 y 849, respectivamente), dímeros de propelargonidinas de tipo A (m/z= 559) y dímeros de prodelfinidinas de tipo A (m/z= 591 ) (Figura 5). No fue posible Ia asignación de picos cromatográficos correspondientes a otros tipos de compuestos detectados por el análisis MALDI-TOF (i.e., trímeros de propelargonidinas y prodelfinidinas) debido posiblemente a Ia baja concentración de los mismos y coelución entre ellos.
Dado que se disponían de patrones de dímeros y trímeros de procianidinas tipo B previamente aislados de otras plantas, fue posible Ia asignación de Ia estructura química de los compuestos: B3 [(+)-catequina-(4α→8)-(+)- catequina], B1 [(-)-epicatequina-(4β→8)-(+)-catequina], B2 [(-)-epicatequina- (4β→8)-(-)-epicatequina], Bl [(-)-epicatequina-(4β→6)-(+)-catequina], B5 [(-)- epicatequina-(4β→6)-(-)-epicatequina] y C1 [(-)-epicatequina-(4β→8)-(-)- epicatequina-(4β→8)-(-)-epicatequina]. Sin embargo, no fue posible Ia asignación de estructuras al resto de picos cromatográficos por Ia falta de disponibilidad de patrones.
Por otro lado, empleando un detector de fluorescencia, se determinó el área de los picos cromatográficos correspondientes a los compuestos identificados y se calculó su contenido empleando Ia curva de calibrado de Ia (-)-epicatequina. A continuación, se indica los contenidos de las proantocianidinas de tipo B y A identificadas en el extracto de piel de almendra:
EXTRACTO #2: composición
Compuesto fenólico Concentración (mg/g)
(+)-Catequina 40,82
(-)-Epicatequina 19,81
Procianidinas dímeros B (B3+B1) 10,75
Procianidina dímero B (B2) 11 ,42
Procianidina dímero B (B7) 5,22
Procianidina dímero B (B5) 2,22
Procianidina trímero B (Ci) 8,02
Procianidina dímero A (tr=32,7 min) 2,95
Procianidina dímero A (tr=33,7 min) 2,48
Procianidina dímero A (tr=36,9 min) 1 ,74 Procianidina dímero A (tr=50,1 min 1 ,47
Procianidina trímero A (tr=32,0 min) 2,13
Propelargonidina dímero B (tr=22,5 min) 1 ,90
Propelargonidina trímero B (tr=22,9 min) 1 ,66
Propelargonidina dímero A (tr=23,6 min) 0,80
Prodelfinidina dímero A (tr=51 ,1 min) 0,63
TOTAL 114,02
El contenido total en compuestos flavan-3-oles fue de 114,02 mg/g, expresados como (-)-epicatequina. De ellos, 53,39 mg/g se corresponden con dímeros y trímeros de proantocianidinas. De este total de proantocianidinas, 11 ,40 mg/g se corresponden con dímeros de tipo A, es decir, el 21 ,4 % de proantocianidinas identificadas presentan un enlace de tipo A.
También se determinó Ia capacidad antioxidante del extracto siguiendo el método ORAC que evalúa Ia capacidad de absorción de radicales de oxígeno. Este extracto #2 presentó una buena capacidad antioxidante, siendo su valor ORAC de 12,1 mmoles de Trolox/g.
Ejemplo 3: Extracto de piel de almendra conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas
Se partió de Ia misma muestra de piel de almendra que en el ejemplo 2. También se empleó el mismo líquido extractante (etanol acidulado con HCI a pH=3) pero se utilizó un equipo extractor específico que permite utilizar líquidos a elevadas temperaturas y presiones. Las condiciones de trabajo fueron 2000 psi de presión y 90 0C de temperatura, siendo el tiempo de extracción de 30 min. El líquido resultante se sometió a secado bajo vacío a una temperatura inferior a 6O0C. A partir de aquí se operó de igual forma que en el ejemplo 2 y los análisis para Ia caracterización del extracto y para Ia identificación de sus componentes se realizaron del mismo modo, obteniéndose un extracto sustancialmente equivalente al obtenido en el ejemplo 2.

Claims

REIVINDICACIONES
1. Extracto de piel de almendra [Prunus dulcís (Mili.) D.A. Webb, Prunus amygdalus (L.) Batsch., Amygdalus dulcís (Mili.), Amygdalus communis (L.) o Prunus communis (L.)] caracterizado por un contenido fenólico > 50 mg/g (5 %), por contener procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas y presentar capacidad antioxidante.
2. Extracto de piel de almendra según Ia reivindicación 1 caracterizado por contener por contener dímeros y trímeros de proantocianidinas de tipo A en un porcentaje > 15 % referido al total de dímeros y trímeros de proantocianidinas de tipo A y B.
3. Procedimiento para Ia obtención de un extracto según cualquiera de las reivindicaciones 1-2 caracterizado porque comprende los siguientes pasos:
-a) preparación del material vegetal que contenga Ia piel ya sea tanto húmeda como seca, separada del fruto por un proceso de escaldado y posterior repelado, o por tostación, pudiendo estar molida en el caso de estar seca para reducir el tamaño; así mismo opcionalmente para evitar posibles interferencias de Ia grasa, Ia piel se puede desengrasar empleando disolventes orgánicos como el hexano.
-b) extracción de Ia piel con disolventes orgánicos, bien por maceración (incubador, reflujo, baño de ultrasonidos, etc.) a temperatura entre 25 0C y 100 0C, o bien empleando extractores que utilizan líquidos sobrecalentados a temperatura entre 60 0C y 180 0C, y presiones entre 500 psi y 3000 psi; c) purificación del extracto mediante extracción con disolventes y/o cromatografía de adsorción o intercambio iónico,
- y, opcionalmente d) secado del extracto purificado.
4. Procedimiento de obtención de extractos según Ia reivindicación 3 caracterizado porque en Ia etapa de maceración se emplean disolventes como metanol, etanol y agua puros o sus mezclas, a temperatura entre 25 0C y 100 0C, preferentemente entre 50 0C y 70 0C, y tiempo de extracción comprendido entre 2 horas y 24 horas, separándose el extracto líquido del residuo sólido por centrifugación o por prensado y/o filtración.
5. Procedimiento de obtención de extractos según Ia reivindicación 4 caracterizado porque en Ia etapa de maceración se emplean disolventes acidulados con ácidos inorgánicos del grupo de HCI, H2SO4, H3PO4, ácidos orgánicos del grupo del ácido acético, ácido cítrico o alguna resina catiónica en forma protonada.
6. Procedimiento de obtención de extractos según Ia reivindicación 3 caracterizado porque en Ia etapa de extracción se emplean líquidos sobrecalentados como vehículo de extracción, que puede ser agua, metanol o etanol puros o sus mezclas, bajo presión (500 psi a 3000 psi) y una temperatura desde 60 0C hasta 180 0C, preferentemente entre 100 0C y 140 0C, y tiempo de extracción comprendido entre 1 minuto y 6 horas.
7. Procedimiento de obtención de extractos según Ia reivindicación 3 caracterizado porque en Ia etapa de purificación se realiza una extracción con disolventes orgánicos como acetato de etilo, acetona, n-butanol, iso- propanol o sus mezclas.
8. Procedimiento de obtención de extractos según Ia reivindicación 7 caracterizado porque en Ia etapa de maceración se emplean disolventes acidulados con ácidos inorgánicos del grupo de HCI, H2SO4, H3PO4, ácidos orgánicos del grupo del ácido acético, ácido cítrico o alguna resina catiónica en forma protonada.
9. Procedimiento de obtención de extractos según Ia reivindicación 3 caracterizado porque en Ia etapa de purificación se emplea cromatografía de adsorción o intercambio iónico sobre resinas tipo Dowex o Amberlite por elución en gradiente de alcoholes tipo metanol o etanol entre 20% y 80% en alcohol.
10. Procedimiento de obtención de extractos según Ia reivindicación 3 caracterizado porque en Ia etapa de secado se trabaja a temperaturas inferiores a 40 0C.
11. Procedimiento de obtención de extractos según Ia reivindicación 3 caracterizado porque se emplea liofilización, concentración y/o secado a vacío, secado con aire, o atomización.
12. Procedimiento de obtención de extractos según las reivindicaciones 3 a 11 , caracterizado porque en el procedimiento de obtención se efectúan los siguientes pasos:
- maceración del material vegetal con metanol/HCI (1000:1 , v/v) - purificación del extracto por extracción con acetato de etilo
- concentración a sequedad del extracto manteniendo Ia temperatura por debajo de 40 0C.
13. Procedimiento de obtención de extractos según las reivindicaciones 3 a 11 , caracterizado porque en el procedimiento de obtención se efectúan los siguientes pasos:
- maceración del material vegetal con etanol/HCI (pH=3)
- purificación del extracto por cromatografía en columna
- secado a vacío del extracto manteniendo Ia temperatura por debajo de 40 0C.
14. Extracto de piel de almendra caracterizado por obtenerse según el procedimiento indicado en las reivindicaciones 3 a 13 y por contener dímeros y trímeros de proantocianidinas de tipo A en un porcentaje > 15 % referido al total de de dímeros y trímeros de proantocianidinas, y por un contenido fenólico > 50 mg/g (5%).
15. Aditivo, ingrediente o suplemento alimentario funcional caracterizado por comprender el extracto de piel de almendra con actividad antioxidante según las reivindicaciones 1 , 2 y 14.
16. Producto alimentario o bebida funcional caracterizado por comprender el extracto de piel de almendra con actividad antioxidante según las reivindicaciones 1 , 2 y 14.
17. Composición farmacéutica caracterizada por comprender el extracto de piel de almendra con actividad antioxidante y/o favorable para prevenir infecciones microbianas, y/o actividad antiglucémica según las reivindicaciones 1 , 2 y 14.
18. Uso de aditivo, ingrediente o suplemento alimentario funcional según Ia reivindicación 15 en Ia elaboración de un producto alimentario funcional con actividad antioxidante.
19. Uso de aditivo, ingrediente según Ia reivindicación 15 en Ia elaboración de un producto cosmético con actividad antioxidante.
20. Composición farmacéutica según Ia reivindicación 17 para su uso en Ia elaboración de un medicamento para el tratamiento de infeccione urinarias por su capacidad inhibitoria de Ia adhesión bacteriana en el tracto urinario.
21. Composición farmacéutica según Ia reivindicación 17 para su uso en Ia elaboración de un medicamento para el tratamiento de Ia diabetes por su actividad antiglucémica como seudoinsulina.
PCT/ES2008/070104 2007-06-12 2008-05-28 Extractos fenolicos de piel de almendra conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, y su procedimiento de obtención. Ceased WO2008152173A1 (es)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US12/664,350 US8802165B2 (en) 2007-06-12 2008-05-28 Phenolic extracts of almond peel containing procyanidins, propelargonidins, and prodelphinidins, and method for preparation thereof
EP08775443A EP2165712A4 (en) 2007-06-12 2008-05-28 PHENOLIC EXTRACTS OF ALCOHOL SKIN CONTAINING PROCYANIDES, PROPELARGONIDINES AND PRODELPHINIDES AND METHOD FOR OBTAINING THE SAME

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ESP200701616 2007-06-12
ES200701616A ES2311403B1 (es) 2007-06-12 2007-06-12 Extractos fenolicos de piel de almendra conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, y su procedimiento de obtencion.

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2008152173A1 true WO2008152173A1 (es) 2008-12-18

Family

ID=40129280

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/ES2008/070104 Ceased WO2008152173A1 (es) 2007-06-12 2008-05-28 Extractos fenolicos de piel de almendra conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, y su procedimiento de obtención.

Country Status (6)

Country Link
US (1) US8802165B2 (es)
EP (1) EP2165712A4 (es)
AR (1) AR066740A1 (es)
CL (1) CL2008001685A1 (es)
ES (1) ES2311403B1 (es)
WO (1) WO2008152173A1 (es)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016059281A1 (es) * 2014-10-17 2016-04-21 Universitat Rovira I Virgili Utilización de proantocianidinas para la supresión del apetito o inducción de la saciedad

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8507018B2 (en) * 1998-03-12 2013-08-13 Mars, Incorporated Products containing polyphenol(s) and L-arginine and methods of use thereof
EP2829277A1 (en) 2013-07-26 2015-01-28 Natac Biotech, S.L. Use of a-type proanthocyanidins in treating a mineralocorticoid receptor related disease
GB201506526D0 (en) * 2015-04-17 2015-06-03 Uropharma Ltd And Synesis Llc Medicinal composition
US20170156360A1 (en) * 2015-12-04 2017-06-08 Whitewave Services, Inc. Almond-Based Food Products with Improved Taste Characteristics
CN107602521B (zh) * 2017-11-01 2020-06-19 天津农学院 一种火龙果皮提取原花青素的方法及制得的原花青素与用途
CN111665306A (zh) * 2020-06-19 2020-09-15 新疆农业大学 一种野山杏果肉黄酮类化合物的测定方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE413873T1 (de) * 1997-09-09 2008-11-15 Univ Rutgers Proanthocyanidinhaltiges pflanzenextrakt für die hemmung von p-type fimbriae-bakterieller adhäsion an oberflächen
JP2000032953A (ja) * 1998-07-15 2000-02-02 Ezaki Glico Co Ltd アーモンド種皮またはその抽出物を配合した飲食物
US6210681B1 (en) * 1999-09-07 2001-04-03 Jlb, Inc. Plant proanthocyanidin extracts
EP1250331B1 (de) * 2000-01-28 2004-11-03 MERCK PATENT GmbH Benzofuranonderivate enthaltende formulierung zum schutz vor oxidativem stress
ES2171142B1 (es) 2000-12-22 2003-12-16 Consejo Superior Investigacion Conjugados de flavanoles y cisteamina.
KR100531472B1 (ko) * 2002-08-09 2005-11-28 주식회사 이롬 항산화 활성을 가지는 찔레나무 추출물을 포함하는 화장품 조성물 및 상기 추출물의 제조방법
EP1491191B1 (de) 2003-06-24 2007-09-26 Cognis IP Management GmbH Extrakte von Litchi sinensis enthaltend oligomere Proanthocyanidine
CA2554071C (en) 2004-01-28 2013-05-07 Mars, Incorporated A-type procyanidins useful in the treatment of nitric oxide mediated disorders

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CIFUENTES ET AL.: "Fast determination of procyanidins and other phenolic compounds in food samples by miceller electrokinetic chromotography using acidic buffers", ELECTROPHORESIS, vol. 22, no. 8, May 2001 (2001-05-01), pages 1561 - 1567, XP008126885 *
GU L. ET AL.: "Screening of Foods Containing Proanthocyanidins and Their Structural Characterization Using LC-MS/MS and Thiolytic Degradation", JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY, vol. 51, no. 25, 2003, pages 7513 - 7521, XP002527765 *
HARNLY J.M. ET AL.: "Flavonoid Contnt of U.S. Fruits, Vegetables, and Nuts", JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY, vol. 54, no. 26, 2006, pages 9966 - 9977, XP008126882 *
LAZARUS S.A. ET AL.: "High-Performance Liquid Chromatography/Mass Spectrometry Analysis of Proanthocyanidins in Foods and Beverages", JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY, vol. 47, no. 9, 1999, pages 3693 - 3701, XP008126880 *
MILBURY P.E. ET AL.: "Determination of flavonoids and phenolics and their distribution in almonds", JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY, vol. 54, no. 14, 12 July 2006 (2006-07-12), pages 5027 - 5033, XP008126886 *
PRIOR R.L. ET AL.: "Occurrence and biological significance of proanthocyanidins in the American diet", PHYTOCHEMISTRY, vol. 66, no. 18, 1 September 2005 (2005-09-01), pages 2264 - 2280, XP005060992 *
SANG S. ET AL.: "Antioxidative phenolic compounds isolated from almond skins (Prunus amygdalus Batsch)", JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY, vol. 50, no. 8, 10 April 2002 (2002-04-10), pages 2549 - 2463, XP008126881 *
See also references of EP2165712A4 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016059281A1 (es) * 2014-10-17 2016-04-21 Universitat Rovira I Virgili Utilización de proantocianidinas para la supresión del apetito o inducción de la saciedad

Also Published As

Publication number Publication date
EP2165712A4 (en) 2011-09-28
ES2311403B1 (es) 2010-01-12
CL2008001685A1 (es) 2009-01-02
US8802165B2 (en) 2014-08-12
ES2311403A1 (es) 2009-02-01
AR066740A1 (es) 2009-09-09
EP2165712A1 (en) 2010-03-24
US20100184850A1 (en) 2010-07-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wu et al. Investigation of in vitro and in vivo antioxidant activities of flavonoids rich extract from the berries of Rhodomyrtus tomentosa (Ait.) Hassk
Seo et al. Determination of polyphenol components of Lonicera japonica Thunb. using liquid chromatography–tandem mass spectrometry: contribution to the overall antioxidant activity
US10183007B2 (en) Method of producing proanthocyanidin oligomer
Tavares et al. Antioxidant and antiproliferative properties of strawberry tree tissues
ES2311403B1 (es) Extractos fenolicos de piel de almendra conteniendo procianidinas, propelargonidinas y prodelfinidinas, y su procedimiento de obtencion.
EP2015645A2 (en) Extracts and methods comprising cinnamon species
Chen et al. Identification and evaluation of antioxidants defatted Camellia oleifera seeds by isopropanol salting-out pretreatment
Zhang et al. Characterization of polyphenolics in grape pomace extracts using ESI Q-TOF MS/MS
Meng et al. Flavan-3-ol-cysteine and acetylcysteine conjugates from edible reagents and the stems of Cynomorium songaricum as potent antioxidants
Alberti et al. Evaluation of radical scavenging activity of Sempervivum tectorum and Corylus avellana extracts with different phenolic composition
Abdl Aziz et al. Metabolites profiling by LC-ESI-MS/MS technique and in-vitro antioxidant activity of Bauhinia madagascariensis Desv. and Bauhinia purpurea L. aerial parts cultivated in Egypt: a comparative study
Purushothaman et al. Quantification of total phenolic content, HPLC analysis of flavonoids and assessment of antioxidant and anti-haemolytic activities of Hibiscus rosa-sinensis L. flowers in vitro
Pascoal et al. Free Radical Scavenging Activity, Determination of Phenolic Compounds and HPLC-DAD/ESIMS Profile of Campomanesia Adamantium Leaves
Xu et al. An in vitro study on the dental caries preventing effect of oligomeric procyanidins in sorghum episperm
Lee et al. Antioxidant activity of different parts of Lespedeza bicolor and isolation of antioxidant compound
Din et al. Antioxidant and cytoprotective effects of an ethanol extract of Acalypha wilkesiana var. macafeana from Malaysia
Sharma et al. Role of plant extract in the inhibition of dental caries
KR20160136867A (ko) 법제 하수오 추출물을 유효성분으로 포함하는 산화적 스트레스 개선용 조성물
Azari et al. Antioxidants activity of extracts from Sambucus nigra, efficiency of different extraction methods
KR101963841B1 (ko) 신갈나무 화분으로부터 분리된 폴리아민계 화합물을 함유하는 항산화용 조성물
Babatunde et al. Bioguided isolation of an antioxidant compound from Combretum racemosum P. Beav leaf
Duenas et al. Phenolic composition and antioxidant activity of mocan seeds (Visnea mocanera Lf).
WO2014096488A1 (es) Extractos fenólicos de uncaria tomentosa l. (uña de gato) que contienen procianidinas, propelargonidinas y flavanolignanos, procedimiento de obtención y sus aplicaciones
Pasdaran et al. Cytotoxic properties, anthocyanin and furanocoumarin content of red-pigments obtained from Callistemon citrinus (Curtis) skeels flowers
Ŧ# 158; irin et al. Composition Analysis of Salsola grandis and Its Effects on Colon Cancer Cells

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 08775443

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2008775443

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 12664350

Country of ref document: US