[go: up one dir, main page]

WO2008094062A1 - Pharmaceutical compositions useful for preventing and treating oncological diseases - Google Patents

Pharmaceutical compositions useful for preventing and treating oncological diseases Download PDF

Info

Publication number
WO2008094062A1
WO2008094062A1 PCT/RU2007/000044 RU2007000044W WO2008094062A1 WO 2008094062 A1 WO2008094062 A1 WO 2008094062A1 RU 2007000044 W RU2007000044 W RU 2007000044W WO 2008094062 A1 WO2008094062 A1 WO 2008094062A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
skql
day
treatment
tumor
composition according
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/RU2007/000044
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Vladimir Petrovich Skulachev
Maxim Vladimirovich Skulachev
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
'mitotechnology' LLC
Mitotechnology LLC
Mitotech LLC
Original Assignee
'mitotechnology' LLC
Mitotechnology LLC
Mitotech LLC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 'mitotechnology' LLC, Mitotechnology LLC, Mitotech LLC filed Critical 'mitotechnology' LLC
Priority to US12/524,961 priority Critical patent/US8349902B2/en
Priority to PCT/RU2007/000044 priority patent/WO2008094062A1/ru
Publication of WO2008094062A1 publication Critical patent/WO2008094062A1/ru
Anticipated expiration legal-status Critical
Priority to US13/674,443 priority patent/US9408859B2/en
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4355—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having oxygen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/473—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. acridines, phenanthridines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4741—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having oxygen as a ring hetero atom, e.g. tubocuraran derivatives, noscapine, bicuculline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants

Definitions

  • This invention relates to the fields of pharmacology, medicine, oncology, and, in particular, relates to a class of chemical compounds of structure (1), which can be used in pharmaceutical compositions for the prevention and treatment of various oncological diseases, in particular as an antitumor drug, and a drug used in combination therapy of cancer.
  • One aspect of the present invention is a pharmaceutical composition for the prevention and / or treatment of cancer, comprising a compound consisting of an addressing moiety, a linker group and an antioxidant.
  • the general chemical structure of the compounds of such compounds has the following general formula (I):
  • m is an integer of 1 to 3
  • Y is the same or different substituents representing lower alkyl or lower alkoxy; or two vicinal Y are interconnected in such a way that they form a structure: and / or its reduced form, where Rl and R2 are the same or different substituents, independently of one another, lower alkyl or lower alkoxy
  • L is a linker unit, which is: a) a simple or branched hydrocarbon chain, not necessarily substituted by one or more substituents, and optionally containing one or more double or triple bonds; b) natural isoprenoid chain; n is an integer of 1 to 20;
  • B - represents a) Skulachev-ion Sk:
  • Sk + Z "where Sk is a lipophilic cation; Z is a pharmacologically acceptable nion; b) a charged hydrophobic peptide of 1-20 amino acids, with the exception of compounds in which A is ubiquinone (2-methyl-4,5-dimethoxy-3, 6-dioxo-l, 4-cyclohexadienyl) or tocopherol or a superoxide dismutase mimetic or ebselen, while L is divalent decyl or divalent pentyl or divalent propyl, and B is triphenylphosphonium; as well as its solvates, isomers or prodrugs.
  • A is ubiquinone (2-methyl-4,5-dimethoxy-3, 6-dioxo-l, 4-cyclohexadienyl) or tocopherol or a superoxide dismutase mimetic or ebselen
  • L is divalent decyl or divalent pent
  • Another aspect of the present invention is a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of cancer, comprising a compound of structure (II), wherein A is a plastoquinone residue of the formula:
  • L is a linker unit, which is: a) a simple or branched hydrocarbon chain, not necessarily substituted by one or more substituents, and optionally containing one or more double or triple bonds; b) natural isoprenoid chain; n is an integer of 1 to 20;
  • Sk + Z "where Sk is a lipophilic cation; Z is a pharmacologically acceptable anion; b) a charged hydrophobic peptide of 1-20 amino acids, with the exception of compounds in which A is ubiquinone (2-methyl-4,5-dimethoxy-3, b-dioxo-l, 4-cyclohexadienyl) or tocopherol or superoxide dismutase mimetic or ebselen, with L being divalent decyl or divalent pentyl or divalent propyl and B being triphenylphosphonium; as well as its solvates, isomers or prodrugs.
  • A is ubiquinone (2-methyl-4,5-dimethoxy-3, b-dioxo-l, 4-cyclohexadienyl) or tocopherol or superoxide dismutase mimetic or ebselen, with L being divalent decyl or divalent pentyl or
  • Another aspect of the present invention is a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of cancer, including a compound of structure (I) - SkQl O
  • compositions for the prophylaxis and treatment of cancer comprising a therapeutically or prophylactically justified amount of a compound of structure (I), and at least one pharmaceutically acceptable diluent or carrier.
  • the pharmaceutically acceptable diluent or carrier may be a filler, a diluent (diluent), or a mixture thereof.
  • thermalally justified) the quantity of substance is understood as the quantity response from a patient being treated by a doctor or veterinarian.
  • “Prophylactically justified)) amount of a substance is understood to mean the amount of compound (I) 5 that prevents or suppresses the disease or alleviates the course of the disease in a patient suffering from a medical condition that the doctor or veterinarian is trying to prevent, suppress or alleviate.
  • the patient is a human.
  • Various oncological diseases include, but are not limited to: malignant neoplasms of the lips, mouth, and pharynx; malignant neoplasms of the digestive system; malignant neoplasms of the respiratory system and chest; malignant neoplasms of bones and articular cartilage; melanoma and other malignant neoplasms of the skin; malignant neoplasms of mesothelial and soft tissues; malignant neoplasms of the mammary gland; malignant neoplasms of the female genital organs; malignant neoplasms of the male genital organs; malignant neoplasms of the urinary tract; malignant neoplasms of the eye, brain and other parts of the central nervous system; malignant neoplasms of the thyroid gland and other endocrine glands; malignant neoplasms of inaccurate, secondary and unspecified
  • ZNO Malignant neoplasms
  • ZNO Malignant neoplasms
  • ZNO Malignant neoplasms
  • ZNO Malignant neoplasms
  • ZNO Malignant neoplasms
  • ZNO Malignant neoplasms
  • ZNO Malignant neoplasms
  • ZNO Malignant neoplasms
  • ZNO Malignant neoplasms
  • ZNO Malignant neoplasms
  • ZNO of the tongue ZNO of the base of the tongue, ZNO of other and unspecified parts of the tongue, ZNO of the back of the tongue, ZNO of the lateral surface of the tongue, ZNO of the lower surface of the tongue, ZNO lingual tonsils, GNR of the oral cavity, ZNO of the bottom of the oral cavity, ZNO of the lateral part of the bottom of the oral cavity, ZNO of the palate, ZNO of the tongue, ZNO of other and unspecified parts of the mouth, ZNO of the mucous membrane of the cheek, Z
  • Malignant neoplasms of the respiratory and chest organs include, but are not limited to: 3HO esophagus, 3HO stomach, 3HO small intestine, 3HO jejunum, 3HO ileum, 3HO Meckel diverticulum, 3HO small intestine, 3HO caecum appendix, 3HO ascending colon, 3HO hepatic flexure of the colon, 3HO transverse colon, 3HO splenic flexure of the colon, 3HO descending colon, 3HO sigmoid colon, 3HO rectosigmoid compound, 3HO of the rectum, 3HO of the anus and anal canal, 3HO of the anus of unspecified localization, 3HO of the anal canal, 3HO of the cloacogenic zone, 3HO of the liver and intrahepatic bile ducts, hepatic cell carcinoma, cancer of the intrahepatic bile duct, hepatoblastoma, angiosarcoma of the liver and other liver sarcom
  • Malignant neoplasms of the respiratory and chest organs include, but are not limited to: 3HO nasal cavity and middle ear, 3HO sinuses, 3HO larynx, 3HO trachea, 3HO bronchi and lungs, 3HO thymus gland, 3HO heart, mediastinal wall and pleura, 3HO upper respiratory tract unspecified part.
  • Malignant neoplasms of the skin include, but are not limited to: malignant melonoma, malignant melanoma of the lip, malignant melanoma of the eyelid, including adhesions of the eyelids, malignant melanoma of the ear and external auditory meatus, malignant melanoma of the scalp and neck, malignant melanoma of the head, malignant melanoma of the upper limb, including the area of the shoulder joint, malignant melanoma of the lower limb, including the area the hip joint, and other 3HO skin.
  • Malignant neoplasms of mesothelial and soft tissues include, but are not limited to: mesothelioma, pleural mesothelioma, peritoneal mesothelioma, pericardial mesothelioma, Kaposi’s sarcoma, peripheral nerves and autonomic nervous system, 3HO retroperitoneal space and peritoneum, 3HO other types of soft tissue.
  • Female genital malignancies include, but are not limited to: 3HO vulva, 3HO vagina, 3HO cervix, 3HO uterine body, 3HO ovary, 3HO placenta.
  • Male genital malignancies include, but are not limited to: 3HO penis, 3HO prostate, 3HO testicle.
  • Malignant neoplasms of the urinary tract include, but are not limited to: 3HO kidney, 3HO renal pelvis, 3HO ureter, 3HO bladder, 3HO urethra, 3HO paraurethral glands.
  • Malignant neoplasms of the eye, brain and other parts of the central nervous system include, but are not limited to: 3HO of the eye and its adnexa, 3HO of the meninges, 3HO of the brain, 3HO of the spinal cord, cranial nerves and other parts of the central nervous system, 3HO of the central nervous system.
  • Malignant neoplasms of the thyroid gland and other endocrine glands include, but are not limited to: 3HO thyroid gland, 3HO adrenal gland, 3HO other endocrine glands and related structures, 3HO parathyroid (parathyroid) gland, 3HO pituitary gland, 3HO craniopharyngeal duct, 3HO pineal gland, 3HO pineal gland glomus, 3HO aortic glomus and other paraganglia.
  • Malignant neoplasms of lymphoid, hematopoietic and related tissues include, but are not limited to: Hodgkin's disease [lymphogranulomatosis], Hodgkin's disease - lymphoid prevalence, Hodgkin's disease - nodular sclerosis, Hodgkin's disease - mixed cell variant, Hodgkin's disease - lymphoid depletion, other forms of Hodgkin's disease Hodgkin's disease, unspecified, follicular [nodular] non-Hodgkin lymphoma, small cell lymphoma with split nuclei, follicular, mixed, small cell lymphoma with split and cores and large cell, large cell lymphoma, follicular, other types of follicular non-Hodgkin lymphoma, unspecified follicular non-Hodgkin lymphoma, diffuse non-Hodgkin lymphoma, small cell lymphoma (
  • the compounds of formula (I) can be used for the effective prevention or treatment of all forms of cancer, as well as the negative effects and side effects of cancer therapy, regardless of the cause.
  • compositions related to the present invention can be either somatic or local.
  • Prescribing methods include enteral, such as oral, sublingual and rectal; local, such as percutaneous, intradermal and oculodermal, and parenteral.
  • Suitable parenteral administration methods include injections, for example, intravenous, intramuscular, subcutaneous, intraperitoneal, intraarterial, and the like. injections, and non-injection methods, such as intravaginal or nasal.
  • the compounds and pharmaceutical compositions of the present invention are administered parenterally or orally.
  • the administration may be in the form of intravenous injections or tablets, granules, capsules, or other compressed or compressed form.
  • the compound of formula (I) When administering a compound of formula (I) in the form of a pharmaceutical composition, the compound of formula (I) must be formulated with a suitable amount of a pharmaceutically acceptable diluent or carrier, so as to have a suitable form for administration to a patient.
  • a pharmaceutically acceptable diluent or carrier refers to a diluent, excipient, excipient or carrier with which the compound of formula (I) is mixed for administration to a patient.
  • Such pharmaceutical carriers may be liquids, such as water and oils, including petroleum, animal, vegetable and synthetic, such as peanut oil, soybean oil, mineral oil and the like oils.
  • compositions may be saline, acacia gum, gelatin, starch, talc, keratin, colloidal silver, urea, etc.
  • the composition may also include excipients, stabilizers, thickeners, lubricants and coloring agents.
  • Compounds and compositions related to the present invention can be administered in the form of capsules, tablets, pills, pads, granules, syrups, elixirs, solutions, suspensions, emulsions, suppositories or sustained release formulations, or in any other form suitable for administration to the patient.
  • One aspect of the present invention is the use of compounds of formula (I) and compositions in the form of solutions for oral and parenteral administration.
  • the therapeutically feasible amount of the compound of formula (I) required to treat a particular disease or symptom depends on the nature of the disease or symptom and method of administration, and should be determined in consultation with the attending physician.
  • Acceptable doses for oral administration are from 0.025 to 120,000 ⁇ g / kg body weight of the patient, more preferably 25 ⁇ g / kg body weight of the patient, and most preferably 50 ⁇ g / kg body weight of the patient.
  • Acceptable doses for intravenous administration are from 0.1 to 10,000 ⁇ g / kg of patient body weight, more preferably 25 ⁇ g / kg of patient body weight, and most preferably 125 ⁇ g / kg of patient body weight.
  • Fig.l Effect of SkQl on the morphology of normal and Ras-transformed mouse fibroblasts.
  • Figure 2 The effect of SkQl on the area of normal and Ras-transformed mouse fibroblasts.
  • Figure 3 shows the effect of SkQl on the growth of tumors derived from HCTl lb-p53wt cells
  • Figure 4 the effect of SkQl on the growth of HCTl 16 xenografts.
  • the experiment was carried out using cells transformed with a genetic construct expressing the RAS oncogen, thus simulating the state of a cell that underwent cancer transformation (for a description of the model, see Levipa EM, Domnina LV 5 Rovepsku YA, Vasiliev JM., (1996), Exp. Cell. Res. Res. ., Nov 25, ppl 59-65).
  • Cells of Ras-transformed murine line fibroblasts had a pronounced altered morphology (Fig. 1), close to the morphology of metastatic cancer cells (reduction in area, cell elongation). Morphometric analysis showed that the average values of the cell area are sharply reduced compared with the control (figure 2).
  • the SkQl preparation was diluted with sterile physiological sodium chloride solution to obtain two working concentrations of 0.5 ⁇ M and 5.0 ⁇ M.
  • the drug was administered to animals intraperitoneally in single doses of 5.0 pM / kg and 50.0 pM / kg in a volume of 0.2 ml / mouse.
  • the A-431 cell line was used [1], deposited in the Russian collection of cell cultures and has the following characteristics:
  • A431 cells were grown on RPMI-1640 medium containing 10% fetal calf serum, 2 mM glutamine. Cells were transferred onto cell culture mattresses from a ratio of 1: 2 or 1: 3 from a full monolayer. The medium was replaced every 2-3 days. The accumulated cell suspension was transmitted for subsequent inoculation to immunodeficient mice. Animals and implanted tumors
  • mice of Balb / c pude mice aged 8–9.5 weeks were used. All mice are self-breeding GU RONTS. The mice were kept in a specialized virus-free compartment with sterile air supply, on sterile briquetted feed and water, at normalized temperature and humidity conditions.
  • the A-431 cell line was transplanted once subcutaneously at 1.7-1x10 cells per mouse in 0.2 ml of RPMI-1640 growth medium. Evaluation of the antitumor effect
  • T / C indicator ( ⁇ reatmept / Coptrol), calculated as the ratio of the average volumes of tumors in the treated and control groups and expressed as a percentage.
  • T / C ⁇ 42% was taken as a minimum criterion of effectiveness [Pharmaceutical Drug Guide, edt. bu, V. A. Teischer, Numapa Press, Totova, New-Jerseu, 1997, p. 101-125].
  • the ratio of the average tumor volume in subsequent measurements to the initial (VWo) was calculated.
  • the first measurement of tumors was performed during treatment, and the last 3 measurements were performed within 6 days after the end of treatment. Tumor measurements were stopped on day 21-24 of 3 experiments after the death of the first mouse in group 1 (control).
  • the tolerability of treatment was judged by death at the appropriate time for each drug. Histological examination
  • mice were killed by an overdose of ether anesthesia, autopsy was performed, tumors were isolated and transferred to histological and immunohistochemical studies.
  • Tumors were fixed in 10% neutral formalin and embedded in paraffin. Histological examination was performed on sections of tumors stained with hematoxylin-eosin. The study of the number of microvessels in a tumor was carried out on sections of tumors by a standard immunohistochemical method using antibodies against CD34 antigen. The presence of vascular mimicry components was evaluated by staining the sections of the tumor with Schiff's reagent. Results:
  • mice on day “0” were transplanted subcutaneously with A-431 at 1.7x106 cells per mouse in 0.2 ml of RPMI culture medium. After tumor transplantation, mice were divided into groups of 7 each.
  • mice the average body weight of mice was 20.3 [19.6 ⁇ 21.0] g., 0.2 ml of physical solution was administered intraperitoneally. sodium chloride solution from 1 to 14 days after tumor transplantation.
  • mice average body weight of mice 19.9 [19.2 ⁇ 20.6] g., From 1 to 14 days after tumor transplantation, SkQl was administered intraperitoneally in a single dose of 5.0 nM / kg, the total dose of 70.0 nM / kg Group 3, the average body weight of mice was 19.8 [19, l ⁇ 20.5] g., From 1 to 14 days after tumor transplantation, SkQl was administered intraperitoneally in a single dose of 50.0 nM / kg, the total dose of 700.0 nM / kg Results:
  • the first mouse died on the 22nd day with a tumor; at dissection, visually pathological changes in the organs were not found.
  • the remaining mice with tumors were euthanized on the 23rd day; at dissection, no visually pathological changes in organs were found.
  • mice from the tumor began on the 7-8th day after the end of treatment - two mice fell on the 21-21th day after the transplantation of the tumor; no autopsy revealed any pathological changes in the organs.
  • the remaining mice with tumors were euthanized on the 23rd day; at dissection, no visually pathological changes in organs were found.
  • mice on day “0” were subcutaneously transplanted with A-431 at 1.0x106 cells per mouse in 0.2 ml of RPMI culture medium. After transplantation of tumors, the mice were divided into 2 groups of 10 in each.
  • the experimental group received daily intraperitoneal injections of SkQl for 1-8 days after tumor transplantation:
  • Group 1 the average body weight of mice was 20.3 [19.8 ⁇ 21.8] g., 0.2 ml of physical dose was administered intraperitoneally. sodium chloride solution from 1 to 8 days after tumor transplantation.
  • Group 2 average body weight of mice 20, l [19.6 ⁇ 20.6] r., From 1 to 8 days after tumor transplantation, the drug was administered intraperitoneally in a single dose of 5.0 nM / kg, the total dose of 40.0 ⁇ M / KG. Results:
  • mice on day “0” were transplanted subcutaneously with A-431, 1, OxIO 6 cells per mouse in 0.2 ml of RPMI nutrient medium. After transplantation of tumors, the mice were divided into 2 groups of 9 in each.
  • the experimental group received daily intraperitoneal injections of SkQl for 1-14 days after tumor transplantation:
  • Group 1 the average body weight of mice was 18.8 [18.3 ⁇ 19.3] g., 0.2 ml of physical solution was administered intraperitoneally. sodium chloride solution from 1 to 8 days after tumor transplantation.
  • Group 2 average body weight of mice 18.7 [18.2 ⁇ 19.2] g., From 1 to 14 days after tumor transplantation, the drug was administered intraperitoneally in a single dose of 5.0 nM / kg, the total dose of 70.0 nM / kg Results:
  • the first mouse died on the 21st day with a tumor; at dissection, visually pathological changes in the organs were not found.
  • the remaining mice with tumors were euthanized on the 23rd day; at dissection, no visually pathological changes in organs were found.
  • mice Treatment tolerance is satisfactory. The death of mice began on the 7th day after the end of treatment; at the autopsy of dead and euthanized mice, visually pathological changes in the organs were not found.
  • xenograft tumors have a typical structure of undifferentiated tumors of the epidermoid type.
  • Comparison of control samples with experimental group 2 showed that SkQl at a dose of 5 nmol / kg causes a partial differentiation of tumors: signs of partial keratinization appear in the tumor tissue.
  • the number of microvessels in the tumor was counted in the areas of the tumor containing the maximum number of vessels (the so-called “hot spots”). According to our data, the number of microvessels in a tumor (day 23, 9 days after the end of treatment) does not statistically significantly differ in the three studied groups. However, it was noted that the microvessels of tumors of group 2 have a smaller diameter than in the control group.
  • TPO tumor growth
  • TPO short-term inhibitory effect
  • a ten-fold increase in a single dose or an increase in the number of injections does not lead to a prolongation of this effect.
  • a 5-day course of treatment should be considered minimally significant.
  • mice in each group were divided into 4 subgroups (10 mice in each subgroup):
  • Tumor size was measured every 3 days. After 4 weeks, the mice were clogged, tumors recorded for histological studies.
  • Table 2 presents the results of a study of the effectiveness of the combined use of SkQl at a dose of 500nM / kg in 0.2 ml / mouse for 5 days when administered orally using a dosage form in the form of an alcohol solution and doxorubicin, administered in all schemes once, intraperitoneally at a dose of 7 mg / kg on day 7 after tumor transplantation.
  • Doxorubicin use regimens provided for its use in the “before”, “after” and “in the middle of kypca” SkQ,
  • TPO% by tumor volume.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ ПОЛЕЗНЫЕ ПРИ ПРОФИЛАКТИКЕ И ЛЕЧЕНИИ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Область техники, к которой относится изобретение
Данное изобретение относится к областям фармакологии, медицине, онкологии, и, в частности, касается класса химических соединений структуры (1), которые могут быть применены в составе фармацевтических композиций для профилактики и лечения различных онкологических заболеваний, в частности в качестве противоопухолевого препарата, а также препарата, используемого в комбинированной терапии онкологических заболеваний.
Уровень техники
Несмотря на существование в клинической практике большого числа отечественных и зарубежных противоопухолевых препаратов, эффективность большинства из них недостаточна и спектр онкозаболеваний, чувствительных к химиотерапии, ограничен. Поэтому остается актуальным вопрос о разработке новых более активных препаратов, а также поиск веществ, эффективных при опухолях с первичной и приобретенной резистентностью к лекарственной терапии.
О применении соединений, заявляемых в качестве митохондриально адресованных антиоксидантов, для терапии онкологических заболеваний заявлено сообщается в WO2006005759. В этой заявке утверждается, что обработка мышей с привитыми опухолями (эпителиальных раков) митохондриально адресованным антиоксидантом МitоQ [данное соединение исключено из заявки заявителя] приводит к уменьшению размеров опухолей, некротизации и снижению их васкуляризации.
Однако, никаких экспериментальных данных, подтверждающих обоснованность этих заявлений не приведено, отсутствуют примеры фармацевтической композиции, которую можно было бы использовать для этой цели, (в том числе и концентрации действующего вещества МitоQ), способ, режим введения, дозировки. Также отсутствуют количественные данные по противоопухолевому эффекту использованного вещества, в то время как на настоящем этапе развития противораковых технологий количественная оценка терапевтического действия препарата на раковые опухоли является ключевым параметром, по которому определяется возможность применения соединения в качестве противоопухолевого препарата. Кроме того, соединение МitоQ обладает выраженным прооксидантным действием, что действительно может приводить к последствиям, заявляемым авторами. Таким образом, в заявке WO2006005759 скорее идет речь о противоопухолевом действии митохондриально-адресованных прооксидантов и, таким образом, эта заявка не решает задачи борьбы с онкологическими заболеваниями при помощи митохондриально-адресованных антиокисдантов.
Предположение о возможном противоопухолевом действии описываемых соединений также сделано в заявке на патент автора данного изобретения, зарегистрированный под номером RU 2005132217 от 19.10.2005 года. Однако приведенные в ней экспериментальные примеры достаточно отдаленно связаны с онкологическими заболеваниями, чтобы однозначно свидетельствовать о полезности соединений для профилактики или терапии рака.
Сущность изобретения
Одним из аспектов настоящего изобретения является фармацевтическая композиция для профилактики и/или лечения онкологических заболеваний, включающая в себя соединение, состоящее из адресующей части, линкерной группы и антиоксиданта. Общая химическая структура соединений таких соединений имеет следующую общую формулу (I):
Figure imgf000003_0001
где А - эффекторная группа - антиоксидант структуры:
Figure imgf000003_0002
и/или его восстановленная форма где m - целое число 1 - 3; Y - одинаковые или разные заместители, представляющие собой низший алкил или низший алкокси; или два вицинальных Y связаны между собой таким образом, что образуют структуру:
Figure imgf000004_0001
и/или его восстановленную форму, где Rl и R2 одинаковые или разные заместители, независимо друг от друга представляющие собой низший алкил или низший алкокси; L - линкерное звено, представляющее собой: а) простую или разветвленную углеводородную цепь, не обязательно замещенную одним или более заместителем, и при необходимости содержащую одну или более двойную или тройную связь; б) природную изопреноидную цепь; п - целое число 1 - 20; В - представляет собой а) Скулачев-ион Sk:
Sk+Z" где Sk - липофильный катион; Z - фармакологически приемлемый нион; б) заряженный гидрофобный пептид из 1-20 аминокислот, за исключением соединений, в которых А представляет собой убихинон (2-мeтил- 4,5-димeтoкcи-3,6-диoкco-l,4-циклoгeкcaдиeнил) или токоферол или миметик супероксиддисмутазы или эбселен, при том что L - дивалентный децил или дивалентный пентил или дивалентный пропил, а В - трифенилфосфоний; а также его сольваты, изомеры или пролекарственные формы.
Другим аспектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция для профилактики и лечения онкологических заболеваний, включающая в себя соединение структуры (II), где А представляет собой остаток пластохинона формулы:
Figure imgf000004_0002
Y-метил, m-2; L - линкерное звено, представляющее собой: а) простую или разветвленную углеводородную цепь, не обязательно замещенную одним или более заместителем, и при необходимости содержащую одну или более двойную или тройную связь; б) природную изопреноидную цепь; п - целое число 1 - 20;
В - представляет собой а) Скулачев-ион Sk:
Sk+Z" где Sk - липофильный катион; Z - фармакологически приемлемый анион; б) заряженный гидрофобный пептид из 1-20 аминокислот, за исключением соединений, в которых А представляет собой убихинон (2-мeтил-4,5- димeтoкcи-3,б-диoкco-l,4-циклoгeкcaдиeнил) или токоферол или миметик супероксиддисмутазы или эбселен, при том что L - дивалентный децил или дивалентный пентил или дивалентный пропил, а В - трифенилфосфоний; а также его сольваты, изомеры или пролекарственные формы.
Еще одним аспектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция для профилактики и лечения онкологических заболеваний, включающая в себя соединение структуры (I) - SkQl О
Figure imgf000005_0001
SkQl ( 3)
Еще одним аспектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция для профилактики и лечения онкологических заболеваний, включающая терапевтически или профилактически оправданное количество соединения структуры (I), и, по крайней мере, один фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель. Фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель может представлять собой наполнитель, разжижитель (разбавитель) или их смесь. Под «тepaпeвтичecки оправданным)) количеством вещества понимается количество отклик у пациента, подвергающегося лечению врачом или ветеринаром. Под
«пpoфилaктичecки оправданным)) количеством вещества понимается количество соединения (I)5 которое предотвращает или подавляет болезнь или облегчает течение болезни у пациента, страдающего от медицинского состояния, которое врач или ветеринар пытается предотвратить, подавить или облегчить.
В одном из аспектов настоящего изобретения пациентом является человек. Различные онкологические заболевания включают, но не ограничены: злокачественными новообразованиями губы, полости рта и глотки; злокачественными новообразованиями органов пищеварения; злокачественными новообразованиями органов дыхания и грудной клетки; злокачественными новообразованиями костей и суставных хрящей; меланомой и другими злокачественными новообразованиями кожи; злокачественными новообразованиями мезотелиальных и мягких тканей; злокачественными новообразованиями молочной железы; злокачественными новообразованиями женских половых органов; злокачественными новообразованиями мужских половых органов; злокачественными новообразованиями мочевых путей; злокачественными новообразованиями глаза, головного мозга и других отделов ЦНС; злокачественными новообразованиями щитовидной железы и др.эндокринных желез; злокачественными новообразованиями неточно обозначенных, вторичных и неуточненных локализаций; злокачественными новообразованиями лимфоидной, кроветворной и родственных им тканей.
Злокачественные новообразования (далее ЗНО) губы, полости рта и глотки включают, но не ограничены: ЗНО губы, ЗНО языка, ЗНО основания языка, ЗНО других и неуточненных частей языка, ЗНО спинки языка, ЗНО боковой поверхности языка, ЗНО нижней поверхности языка, ЗНО язычной миндалины, ЗНО десны, ЗНО дна полости рта, ЗНО передней части дна полости рта, ЗНО боковой части дна полости рта, ЗНО неба, ЗНО язычка, ЗНО других и неуточненных отделов рта, ЗНО слизистой оболочки щеки, ЗНО преддверия рта, ЗНО ретромолярной области, ЗНО околоушной слюнной железы, ЗНО поднижнечелюстной железы, ЗНО подъязычной железы, ЗНО миндалины, ЗНО миндаликовой ямочки, ЗНО дужки небной миндалины, ЗНО ротоглотки, ЗНО ямки надгортанника, ЗНО передней поверхности надгортанника, ЗНО боковой стенки ротоглотки, ЗНО задней стенки ротоглотки, ЗНО жаберных щелей, ЗНО б носоглотки, 3HO грушевидного синуса, 3HO нижней части глотки, 3HO заперстневидной области, 3HO черпалонадгортанной складки нижней части глотки, 3HO задней стенки нижней части глотки.
Злокачественные новообразования органов дыхания и грудной клетки включают, но не ограничены: 3HO пищевода, 3HO желудка, 3HO тонкого кишечника, 3HO двенадцатиперстной кишки, 3HO тощей кишки, 3HO подвздошной кишки, 3HO дивертикула Меккеля, 3HO тонкого кишечника неуточненной локализации, 3HO слепой кишки, 3HO червеобразного отростка, 3HO восходящей ободочной кишки, 3HO печеночного изгиба ободочной кишки, 3HO поперечной ободочной кишки, 3HO селезеночного изгиба ободочной кишки, 3HO нисходящей ободочной кишки, 3HO сигмовидной кишки, 3HO ректосигмоидного соединения, 3HO прямой кишки, 3HO заднего прохода и анального канала, 3HO заднего прохода неуточненной локализации, 3HO анального канала, 3HO клоакогенной зоны, 3HO печени и внутрипеченочных желчных протоков, печеночноклеточный рак, рак внутрипеченочного желчного протока, гепатобластома, ангиосаркома печени и другие саркомы печени, 3HO желчного пузыря, 3HO внепеченочного желчного протока, 3HO ампулы фатерова сосочка, 3HO поджелудочной железы, 3HO головки поджелудочной железы, 3HO тела поджелудочной железы, 3HO хвоста поджелудочной железы, 3HO протока поджелудочной железы, 3HO островковых клеток поджелудочной железы, 3HO селезенки.
Злокачественные новообразования органов дыхания и грудной клетки включают, но не ограничены: 3HO полости носа и среднего уха, 3HO придаточных пазух, 3HO гортани, 3HO трахеи, 3HO бронхов и легких, 3HO вилочковой железы, 3HO сердца, средостенения и плевры, 3HO верхних дыхательных путей неуточненной части.
Злокачественные новообразования кожи включают, но не ограничены: злокачественной мелономой кожи, злокачественной меланомой губы, злокачественной меланомой века, включая спайку век, злокачественной меланомой уха и наружного слухового прохода, злокачественной меланомой волосистой части головы и шеи, злокачественной меланомой туловища, злокачественной меланомой верхней конечности, включая область плечевого сустава, злокачественной меланомой нижней конечности, включая область тазобедренного сустава, и другие 3HO кожи.
Злокачественные новообразования мезотелиальных и мягких тканей включают, но не ограничены: мезотелиомой, мезотелиомой плевры, мезотелиомой брюшины, мезотелиомой перикарда, саркомой Капоши, периферических нервов и вегетативной нервной системы, 3HO забрюшиного пространства и брюшины, 3HO других типов соединительной и мягких тканей.
Злокачественные новообразования женских половых органов включают, но не ограничены: 3HO вульвы, 3HO влагалища, 3HO шейки матки, 3HO тела матки, 3HO яичника, 3HO плаценты.
Злокачественные новообразования мужских половых органов включают, но не ограничены: 3HO полового члена, 3HO предстательной железы, 3HO яичка.
Злокачественные новообразования мочевых путей включают, но не ограничены: 3HO почки, 3HO почечной лоханки, 3HO мочеточника, 3HO мочевого пузыря, 3HO уретры, 3HO парауретральных желез.
Злокачественные новообразования глаза, головного мозга и других отделов ЦНС включают, но не ограничены: 3HO глаза и его придаточного аппарата, 3HO мозговых оболочек, 3HO головного мозга 3HO спинного мозга, черепных нервов и других отделов центральной нервной системы, 3HO центральной нервной системы.
Злокачественное новообразование щитовидной железы и др. эндокринных желез включают, но не ограничены: 3HO щитовидной железы, 3HO надпочечника, 3HO других эндокринных желез и родственных структур, 3HO паращитовидной (околощитовидной) железы, 3HO гипофиза, 3HO краниофарингеального протока, 3HO шишковидной железы, 3HO каротидного гломуса, 3HO аортального гломуса и других параганглиев.
Злокачественные новообразования лимфоидной, кроветворной и родственных им тканей включают, но не ограничены: болезнь Ходжкина [лимфогранулематоз], болезнь Ходжкина - лимфоидное преобладание, болезнь Ходжкина - нодулярный склероз, болезнь Ходжкина - смешанноклеточный вариант, болезнь Ходжкина - лимфоидное истощение, другие формы болезни Ходжкина, болезнь Ходжкина неуточненная, фолликулярная [нодулярная] неходжскинская лимфома, мелкоклеточная лимфома с расщепленными ядрами, фолликулярная, смешанная, мелкоклеточная лимфома с ращепленными ядрами и крупноклеточная, крупноклеточная лимфома, фолликулярная, другие типы фолликулярной неходжкинской лимфомы, фолликулярная неходжкинская лимфома неуточненная, диффузная неходжкинская лимфома, лимфома мелкоклеточная (диффузная), лимфома мелкоклеточная с расщепленными ядрами (диффузная), лимфома смешанная мелко- и крупноклеточная (диффузная), лимфома крупноклеточная (диффузная) - ретикулосаркома, лимфома иммунобластная (диффузная), лимфома лимфобластная (диффузная), лимфома недифференцированная (диффузная), опухоль Беркита, диффузная неходжкинская лимфома неуточненная, периферические и кожные Т-клеточные лимфомы, грибовидный микоз, болезнь Сезари, лимфома Т-зоны, лимфоэпителиоидная лимфома (лимфома Леннерта), периферическая Т-клеточная лимфома, другие неуточненные Т-клеточные лимфомы, лимфосаркома, В-клеточная лимфома неуточненная, злокачественные иммунопролиферативные болезни, макроглобулинемия Вальденстрема, болезнь альфа-тяжелых цепей, болезнь гамма- тяжелых цепей, иммунопролиферативная болезнь тонкого кишечника, другие злокачественные иммунопролиферативные болезни, множественная миелома и злокачественные плазмоклеточные новообразования, плазмоклеточный лейкоз, плазмоцитома экстрамедуллярная, лимфоидный лейкоз [лимф о лейкоз], острый лимфобластный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, подострый лимфоцитарный лейкоз, пролимфоцитарный лейкоз, волосатоклеточный лейкоз (лейкемический ретикулоэндотелиоз), Т-клеточный лейкоз взрослых, миелоидный лейкоз [миелолейкоз], Острый миелоидный лейкоз, хронический миелоидный лейкоз, подострый миелоидный лейкоз, миелоидная саркома (хлорома, гранулоцитарная саркома), острый промиелоцитарный лейкоз, острый миеломоноцитарный лейкоз, моноцитарный лейкоз, острый моноцитарный лейкоз, хронический моноцитарный лейкоз, подострый моноцитарный лейкоз, острая эритремия и эритролейкоз, хроническая эритремия, острый мегакариобластный лейкоз, тучноклеточный лейкоз, острый панмиел о лейкоз, острый миелофиброз, болезнь Леттерера-Сиве (нелипидный ретикулоэндотелиоз, ретикулез), злокачественный гистиоцитоз, злокачественная тучноклеточная опухоль, истинная гистиоцитарная лимфома.
Соединения формулы (I) могут быть использованы для эффективной профилактики или терапии всех форм рака, а также негативных последствий и побочных эффектов терапии рака, независимо от вызвавших их причин.
Применение фармацевтических композиций, относящихся к настоящему изобретению, может быть как соматическим, так и местным. Методы назначения включают энтеральные, такие как оральный, сублингвальный и ректальный; местные, такие как чрезкожный, интрадермальный и окулодермальный, и парентеральные. Приемлемые парентеральные методы назначения включают инъекции, например, внутривенные, внутримышечные, подкожные, внутрибрюшинные, внутриартериальные и т.п. инъекции, и неинъекционные методы, такие как внутривлагалищные или назальные. Предпочтительно, соединения и фармацевтические композиции, относящиеся к настоящему изобретению, назначаются парентерально или перорально. В частности, назначение может быть проведено в форме внутривенных инъекций или таблеток, гранул, капсул или другой прессованной или сжатой формы.
При назначении соединения формулы (I) в виде фармацевтической композиции, соединение формулы (I) должно быть смешано по рецептуре с подходящим количеством фармацевтически приемлемого разбавителя или носителя, таким образом, чтобы иметь надлежащую форму для назначения пациенту. Термин «paзбaвитeль» относится к разжижителю, вспомогательному лекарственному веществу, наполнителю или носителю, с которым соединение формулы (I) смешивается для назначения пациенту. Такими фармацевтическими носителями могут быть жидкости, такие как вода и масла, включая петролейные, животные, растительные и синтетические, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло и подобные им масла. Фармацевтическими разбавителями могут быть физиологический раствор, смола акации, желатин, крахмал, тальк, кератин, коллоидное серебро, мочевина и т.д. Также композиция может включать вспомогательные вещества, стабилизаторы, загустители, смазочные и окрашивающие агенты.
Соединения и композиции, относящиеся к настоящему изобретению, могут быть назначены в виде капсул, таблеток, пилюль, подушечек, гранул, сиропов, эликсиров, растворов, суспензий, эмульсий, суппозиториев или составов с замедленным высвобождением, или в любой другой форме, подходящей для назначения пациенту. Одним из аспектов настоящего изобретения является применение соединений формулы (I) и композиций в виде растворов для перорального и парэнтерального назначения.
Терапевтически оправданное количество соединения формулы (I), требующееся для лечения частного заболевания или симптома, зависит от природы заболевания или симптома и метода назначения, и должно быть определено при консультации с лечащим врачом. Приемлемые дозы при назначении перорально составляют от 0,025 до 120000 мкг/кг веса тела пациента, более предпочтительно 25 мкг/кг веса тела пациента и наиболее предпочтительно 50 мкг/кг веса тела пациента. Приемлемые дозы при назначении внутривенно составляют от 0,1 до 10000 мкг/кг веса тела пациента, более предпочтительно 25 мкг/кг веса тела пациента и наиболее предпочтительно 125 мкг/кг веса тела пациента.
Примеры приемлемых фармацевтических композиций для перорального применения:
Фармацевтическая композиция - 1 — желатиновые капсулы
Figure imgf000011_0001
Фармацевтическая композиция - 2 - таблетки
Figure imgf000011_0002
Фармацевтическая композиция - 3 — таблетки
Figure imgf000011_0003
Фармацевтическая композиция - 4 - суспензии
Figure imgf000012_0001
Пример приемлемой фармацевтической композиции для применения в виде аэрозоля:
Figure imgf000012_0002
Пример приемлемой фармацевтической композиции для применения в виде суппозиториев:
Figure imgf000012_0003
Краткое описание фигур
Фиг.l Влияние SkQl на морфологию нормальных и Rаs-трансформированных фибробластов мыши.
Фиг.2 Влияние SkQl на площадь нормальных и Rаs-трансформированных фибробластов мыши.
Фиг.З влияние SkQl на рост опухолей, полученных из клеток HCTl lб-p53wt и
HCT116-p53-/-.
Фиг.4 влияние SkQl на рост ксенографтов HCTl 16.
Подробное описание изобретения Экспериментальные примеры Экспериментальный пример 1. Действие SkQl на морфологию и прикрепленность Rаs —трансформированных эпителиальных клеток.
Эксперимент проводили с использованием клеток, трансформированных генетической конструкцией, экспрессирующей онкоген RAS, таким образом моделируя состояние клетки, претерпевшей раковую трансформацию (описание модели см. Lеviпа EM, Domnina LV5 Rоvепskу YA, Vаsiliеv JM., (1996), Ехр.Сеll. Rеs., Nоv 25, ррl 59-65). Клетки Rаs-рансформированных мышиных фибробластов линии имели ярко-выраженную измененную морфологию (фиг. 1), близкую к морфологии метастазирующих раковых клеток (уменьшение площади, вытягивание клеток). Морфометрический анализ показал, что средние значения площади клеток резко снижены по сравнению с контролем (фиг.2). В этих клетках было значительно снижено содержание элементов цитоскелета, а так же белков фокальных контактов, винкулина и паксилина. Клетки были плохо прикреплены и распластаны, что приводило к нарушению структуры монослоя. Все эти признаки свойственны метастазирующим раковым клеткам, обладающим большей подвижностью по сравнению с нормальными.
Инкубации с SkQl (20 нМ, 7 дней) приводила к значительным изменениям морфологии клеток (фиг. 1). Средние значения площади клеток возрастали многократно (фиг.2). Морфологические изменения коррелировали с увеличением содержания актиновых фибрилл, усилением фокальных контактов и улучшением прикрепленности клеток к подложке. Rаs -трансформированные фибробласты обработанные SkQl образовывали участки монослоя сходные с монослоем нормальных фибробластов.
Полученные результаты свидетельствуют, что в модельной системе обработка метастазирующих раковых клеток препаратом SkQl приводила к нормализации их состояния.
Экспериментальный пример 2. Изучение противоопухолевой активности SkQl на гетеротрансплантатах рака кожи человека A-431 у иммунодефицитных мышей
Эксперимент проведен с учетом рекомендаций министерства здравоохранения Российской Федерации и международным рекомендациям, опубликованным в следующих источниках: Ларионов Л.Ф., Химиотерапия злокачественных опухолей, M., 1962 т.; Трещалина Е.М. и соавт., Методические указания по изучению противоопухолевой активности фармакологических веществ в кн.: «Pyкoвoдcтвo по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических вeщecтв» под общей ред. член-корр. РАМН проф. Р.У.Хабриева, 2005 г.;Experimental еvаluаtiоп оf апtituтоr drugs in the USA and USSR апd сliпiсаl соrrеlаtiопs, NCI Мопоgrарh 55, 1980; Survеу апd апtituтоr tохiсitу tеst sуstетs, EORTC Sсrеепiпg апd Рhаrтасоlоgу grоuр, 1989; Апtiсапсеr dгаg dеvеlортепt guidе: Рrесliпiсаl sсrеепiпg, сliпiсаl triаls, апd аррrоvаl, Еdt. Теiсhеr B.A., 1997. Тестируемый препарат
Перед введением животным препарат SkQl разводили стерильным физиологическим раствором хлористого натрия для получения двух рабочих концентраций 0,5 μМ и 5,0 μМ. Препарат вводили животным внутрибрюшинно в разовых дозах 5,0 пМ/кг и 50,0 пМ/кг в объеме 0,2 мл/мышь. Культура опухолевых клеток
Для постановки эксперимента использовали клеточную линию A-431 [1], депонированную в Российской коллекции клеточных культур и имеет следующие характеристики:
• Происхождение: человек, эпидермоидная карцинома J.Nаtl.Сапсеr Гпst. 1973. 51: 14171423.
• Морфология: эпителиальная
• Способ культивирования: монослойный
• Условия культивирования: среда DMEM сыворотка эмбриональная бычья 10%
• процедура пересева снятие клеток, используя трипсин 0.25%: версен 0.02% (3 :7), кратность рассева 1 :3 1 :6, оптимальная плотность 2.04.0x104 кл/cм2 криоконсервация ростовая среда, 10% DMSO, 1.0x106 клеток/мл в ампуле
• Жизнеспособность после криоконсервации: 83% (окраска трипановым синим на нулевом пассаже)
• Контроль контаминации: бактерии, грибы и микоплазма не обнаружены
• Контроль видовой идентичности: кариологический, изоферментный (ЛДГ и Г6ФДГ) анализ.
• Кариология: 2n=46, пределы изменчивости по числу хромосом 5577, модальное число хромосом 6871. • Туморогенность: туморогенны в иммуно дефицитных мышах и обработанных антитимоцитарной сывороткой
• Другие характеристики: большое число рецепторов к эпидермальному фактору роста
• Область применения: изучение факторов роста, клеточная биология
• Коллекции: ATCC CRL 1555; ECACC 85090402; ИНЦ РАН.
Клетки линии A431 выращивали на среде RPMI- 1640, содержащей 10% телячью эмбриональную сыворотку, 2мM глутамина. Клетки переносили на матрасы для культивирования клеток из соотношения 1:2 или 1:3 от полного монослоя. Замену среды осуществляли каждые 2-3 дня. Наработанная клеточная суспензия передавалась для последующей перевивки иммунодефицитным мышам. Животные и имплантированные опухоли
Для проведения эксперимента использовали иммунодефицитных мышей- самок Ваlb/с пudе в возрасте 8-9,5 недель (масса тела 18-21 г.). Все мыши собственного разведения ГУ РОНЦ. Мышей содержали в специализированном безвирусном отсеке со стерильной подачей воздуха, на брикетированных стерильных кормах и воде, при нормированном температурном и влажностном режиме.
Клеточную линию A-431 трансплантировали один раз подкожно по 1,7-1x10 клеток на мышь в 0,2 мл питательной среды RPMI- 1640. Оценка противоопухолевого эффекта
Выполнялась по общепринятому показателю Т/С (Тrеаtmепt/Сопtrоl), рассчитанному как соотношение средних объемов опухолей в леченной и контрольной группах и выраженному в процентах. Показатель рассчитывали по формуле: T/C%=(Vo/Vk)/(Vk)xl00%, где Vo и Vk - средний объем опухоли в леченой группе и в контроле. Соответственно, в группе контроля T/C=100%. Средний объем опухоли вычисляли по формуле Vср (мм3)=axbxc. В качестве минимального критерия эффективности принимали T/C<42% [Апtiсапсеr Drug Dеvеlорmепt Guidе, еdt. bу В.А.Теiсhеr, Нumапа Рrеss, Тоtоwа, Nеw-Jеrsеу, 1997, p.101-125]. Для анализа скорости роста в группе контроля (показатель стандартности) рассчитывали соотношение среднего объема опухоли при последующих измерениях к начальному (VWo).
Измерение начинали после появления пальпируемых опухолей (9 сутки после трансплантации) у всех мышей в группе 3 (контроль). Затем у всех мышей выполняли многократные измерения объема опухолей до 20-х суток после трансплантации.
Таким образом, в леченых группах первое измерение опухолей выполнено в процессе лечения, а 3 последних измерения - в течение 6-ти дней после окончания лечения. Измерения опухолей прекратили на 21-24 сутки 3-х опытов после гибели первой мыши в группе 1 (контроль).
О переносимости лечения судили по гибели в соответствующие для каждого препарата сроки. Гистологическое исследование
Мышей умертвляли передозировкой эфирного наркоза, проводили аутопсию, опухоли выделяли и передавали на гистологическое и иммуногистохимическое исследование.
Опухоли фиксировались в 10% нейтральном формалине и заключались в парафин. Гистологическое исследование проводилось на срезах опухолей, окрашенных гематоксилин-эозином. Исследования количества микрососудов в опухоли проводилось на срезах опухолей стандартным иммуногистохимическим методом с использованием антител против CD34 антигена. Наличие компонентов сосудистой мимикрии оценивалась окрашиванием срезов опухоли реактивом Шиффа. Результаты:
Изучение противоопухолевой активности было проведено в 3 опытах. Опыт 1
Всем мышам в день «0» подкожно трансплантировали A-431 по 1,7x106 клеток на мышь в 0,2 мл питательной среды RPMI. После трансплантации опухолей мышей делили на группы по 7 в каждой.
Двум из подопытных групп ежедневно выполняли внутрибрюшинные ежедневные инъекции препарата SkQl в течение 1-14 суток после трансплантации опухоли:
Группа 1 (контроль), средняя масса тела мышей 20,3[19,6÷21,0]г., вводили внутрибрюшинно по 0,2 мл физ. раствора хлористого натрия с 1 по 14 сутки после трансплантации опухоли.
Группа 2, средняя масса тела мышей 19,9[19,2÷20,6]г., с 1 по 14 сутки после трансплантации опухоли вводили внутрибрюшинно препарат SkQl в разовой дозе 5,0 нМ/кг, суммарная доза 70,0 нМ/кг. Группа 3, средняя масса тела мышей 19,8[19,l÷20,5]г., с 1 по 14 сутки после трансплантации опухоли вводили внутрибрюшинно препарат SkQl в разовой дозе 50,0 нМ/кг, суммарная доза 700,0 нМ/кг. Результаты:
Группа 1 (контроль) Показано, что в средний объем опухолей (Vср) на 9 сутки после трансплантации составил 458[318÷598]мм3, на 14 сутки Vcρ=1295[959÷1631]мм3, на 17 сутки Vcp=1996[1319÷2673]мм3, на 20 сутки Vcp=2564[2064÷3064]мм3. Соотношение средних объемов опухоли в процессе роста составило, соответственно срокам измерения, 2,83-4,36-5,6 раз. Параметры роста свидетельствуют о стандартной скорости опухоли под кожей у мышей в течение 20 дней.
Первая мышь погибла на 22 сутки с опухолью, при вскрытии визуально патологических изменений в органах не найдено. Остальные мыши с опухолями умерщвлены на 23 сутки, при вскрытии визуально патологических изменений по органам не найдено.
Группа 2 (препарат SkQl в разовой дозе 5,0 нМ/кг) на 9 сутки после трансплантации Vcρ=289[87÷1491]мм3, на 14 сутки Vcρ=955[515÷1395]мм3, на 17 сутки Vcp=1349[903÷1793]мм3, на 20 сутки Vcp=1863[919÷2807]мм3. Противоопухолевый эффект составил соответственно срокам T/C=63, 74, 67, 73%. Статистически достоверных различий с группой контроля нет (p>0,05). Переносимость лечения удовлетворительная. Гибель мышей от опухоли началась на 7-8 сутки после окончания лечения - две мыши пали на 21-21 сутки после трансплантации опухоли, при вскрытии визуально патологических изменений в органах не найдено. Остальные мыши с опухолями умерщвлены на 23 сутки, при вскрытии визуально патологических изменений по органам не найдено.
Группа 3 (препарат SkQl в разовой дозе 50,0 нМ/кг) на 9 сутки после трансплантации Vcp=730[430÷1030]мм3, на 14 сутки Vcp=2078[1328÷2828]мм3, на 17 сутки Vcρ=2678[1667÷3689]мм3. на 20 сутки Vcρ=3557[2042÷5072] мм3. Показатель эффективности лечения, соответственно срокам, составил: TVC=I 59, 160, 134, 146%. Переносимость введения удовлетворительная. На 23 сутки все мыши умерщвлены и подвергнуты аутопсии. При вскрытии визуально патологических изменений по органам не найдено.
Таким образом, по результатам первого эксперимента можно сделать следующие выводы:
В группе 3, получившей лечение препаратом в разовой дозе 50,0 нМ/кг, 170=134-160%, что свидетельствуют о возможной стимуляции роста опухоли.
В группе 2 после 8-ми инъекций препарата в разовой дозе 5,0 нМ/кг получено ингибирование роста опухоли T/C=63%. Суммарная доза к моменту регистрации эффекта составила 40,0 нМ/кг. Продолжение введения препарата не привело к усилению эффекта, но и не сопровождалось ускорением роста опухоли. Сделано предположение, что препарат может быть более эффективным при 8-ми кратном курсе в разовой дозе 5,0 нМ/кг (суммарная доза 40,0 нМ/кг). Опыт 2
Всем мышам в день «0» подкожно трансплантировали A-431 по 1,0x106 клеток на мышь в 0,2 мл питательной среды RPMI. После трансплантации опухолей мышей делили на 2 группы по 10 в каждой.
Подопытной группе ежедневно выполняли внутрибрюшинные ежедневные инъекции препарата SkQl в течение 1-8 суток после трансплантации опухоли:
Группа 1 (контроль): средняя масса тела мышей 20,3[19,8÷21,8]г., вводили внутрибрюшинно по 0,2 мл физ. раствора хлористого натрия с 1 по 8 сутки после трансплантации опухоли.
Группа 2: средняя масса тела мышей 20,l[19,6÷20,6]r., с 1 по 8 сутки после трансплантации опухоли вводили внутрибрюшинно препарат в разовой дозе 5,0 нМ/кг, суммарная доза 40,0 ΉМ/КГ. Результаты:
Группа 1 (контроль) Показано, что средний объем опухолей (Vср) на 8 сутки составил 155[117÷193]мм3, на 14 сутки Vcρ=1008[828÷1188]мм3, на 17 сутки Vcp=l 641 [1152÷2130]мм3, на 24 сутки Vcp=2936[2261÷3611]мм3. Соотношение средних объемов опухоли в процессе роста составило, соответственно срокам измерения, 6,5-10,5-18,9 раз. Параметры роста свидетельствуют об относительно высокой скорости опухоли под кожей у мышей в этом опыте.
Первая мышь без лечения погибла на 24 сутки с опухолью, при вскрытии визуально патологических изменений в органах не найдено. Остальные мыши с опухолями умерщвлены на 24 сутки, при вскрытии визуальных патологических изменений по органам не найдено.
Группа 2 (препарат в разовой дозе 5,0 нМ/кг) на 8 сутки после трансплантации Vcp=95[55÷135]мм3, на 14 сутки Vcp=724[441÷1007]мм3, на 17 сутки
Vcp=1582[1007÷2157]мм3, на 24 сутки Vcp=2953[1730÷4176] мм3. Противоопухолевый эффект соответственно срокам составил: T/C=61, 72, 96, 101%. Переносимость лечения удовлетворительная. Первая мышь от опухоли погибла на 16 сутки после окончания лечения и одновременно с контролем. При вскрытии погибшей и умерщвленных мышей визуально патологических изменений в органах не найдено.
Результаты опыта показали, что при внутрибрюшинном ежедневном 8- кратном лечении иммунодефицитных мышей с подкожным гетеротрансплантатом рака кожи человека A-431, препарат SkQl в разовой дозе 5,0 нМ/кг (суммарная доза 40,0 нМ/кг), воспроизводится ингибирующее действие препарата (T/C=61%). Опыт 3
Всем мышам в день «0» подкожно трансплантировали A-431 по 1,OxIO6 клеток на мышь в 0,2 мл питательной среды RPMI. После трансплантации опухолей мышей делили на 2 группы по 9 в каждой.
Подопытной группе ежедневно выполняли внутрибрюшинные ежедневные инъекции препарата SkQl в течение 1-14 суток после трансплантации опухоли:
Группа 1 (контроль): средняя масса тела мышей 18,8[18,3÷19,3]г., вводили внутрибрюшинно по 0,2 мл физ. раствора хлористого натрия с 1 по 8 сутки после трансплантации опухоли.
Группа 2: средняя масса тела мышей 18,7[18,2÷19,2]г., с 1 по 14 сутки после трансплантации опухоли вводили внутрибрюшинно препарат в разовой дозе 5,0 нМ/кг, суммарная доза 70,0 нМ/кг. Результаты:
Группа 1 (контроль) Показано, что средний объем опухолей (Vср) на 14 сутки составил 94[9÷179]мм3 и на 21 сутки Vcp=567[27÷1107]мм3. Параметры роста свидетельствуют об относительно низкой скорости опухоли под кожей у мышей в этом опыте.
Первая мышь погибла на 21 сутки с опухолью, при вскрытии визуально патологических изменений в органах не найдено. Остальные мыши с опухолями умерщвлены на 23 сутки, при вскрытии визуально патологических изменений по органам не найдено.
Группа 2 (препарат в разовой дозе 5,0 нМ/кг) на 14 сутки после трансплантации Vcp=39[6÷72]мм3 и на 21 сутки Vcp=25б[94÷418] мм3.
Непосредственно после окончания лечения отмечен значимый противоопухолевый эффект, T/C=41.
Переносимость лечения удовлетворительная. Гибель мышей началась на 7 сутки после окончания лечения, при вскрытии павших и умерщвленных мышей визуально патологических изменений в органах не найдено.
Результаты опыта показали, что непосредственно после окончания лечения иммунодефицитных мышей с подкожным гетеротрансплантатом рака кожи человека A-431 при внутрибрюшинном ежедневном 14-кратном раннем лечении препарат SkQl в разовой дозе 5,0 нМ/кг (суммарная доза 70,0 нМ/кг) проявил минимально значимый противоопухолевый эффект, T/C=42%. Гистологическое исследование
Гистологическое и иммуногистохимическое исследование срезов опухолей проведено на материале, полученном в опыте 1.
При гистологическом исследовании показано, что ксенографты опухолей имеют типичное строение недифференцированных опухолей эпидермоидного типа. Сравнение контрольных образцов с опытной группой 2 показало, что препарат SkQl в дозе 5 нмоль/кг вызывает частичную дифференцировку опухолей: в ткани опухоли появляются признаки частичного ороговевания.
Количество микрососудов в опухоли подсчитывали в участках опухоли, содержащей максимальное количество сосудов (т.н. "hоt sроts"). По нашим данным количество микрососудов в опухоли (день 23, через 9 дней после окончания лечения) статистически значимо не отличается в трех исследованных группах. Однако, замечено, что микрососуды опухолей группы 2 имеют меньший диаметр, чем в контрольной группе.
Окрашивание образцов PAS реактивом показало, что опухоли контрольной группы имеют признаки васкулогенной мимикрии внутри опухоли, тогда как в группе, получавших лечение препаратом SkQl, признаков васкулярной мимикрии внутри опухоли не обнаружено. Вывод
Экспериментальное изучение в опытах на иммунодефицитных мышах с подкожным ксенографтом рака кожи человека A-431 показало, что при длительном внутрибрюшинном введении в разовых дозах 5,0 нмоль/кг препарат SkQl не вызывает стимуляции роста опухоли, а в отдельных случаях вызывает ингибирование роста более 50%.
Введение препарата SkQl в дозе 5,0 нмоль/кг вызывает частичную дифференцировку опухоли A431, уменьшает признаки васкулогенной мимикрии, но не влияет на количество микрососудов в опухоли.
Экспериментальный пример 3. Изучение противоопухолевого действия препарата на опухолях мышей (подкожное введение карцинома Эрлиха) Схема эксперимента
Эксперимент проводили по согласно рекомендациям, приведенным в описании экспериментального примера 2.
Введение препарата начинали через 48 часов после трансплантации опухоли и продолжали ежедневно в течение 5, 10, 15 или 30 дней. Для оценки эффективности лечения опухоли измеряли после окончания курса введения препарата: многократно при коротких курсах или однократно после окончания 30-дневного курса. Об эффективности воздействия судили по стандартному показателю торможению роста опухоли (TPO) по отношению к контрольной группе без лечения и выражали в процентах. Полученные результаты обрабатывали статистически, рассчитывая доверительные интервалы средних сравниваемых величин, достоверными считали различия при p<0,05.
Как показано, на мышах с п/к карциномой Эрлиха препарат SkQl в разовой дозе 0,5 нМ/кг при ежедневном внутрибрюшинном введении оказывает кратковременное ингибирующее действие (TPO=40-50%) сразу после окончания одного 5 -дневного курса. Десятикратное повышение разовой дозы или увеличение числа инъекций не приводит к пролонгированию указанного эффекта. Таким образом, минимально значимым следует считать 5-ти дневный курс лечения.
Таблица 1. Результаты экспериментов на мышах с перевиваемой карциномой Эрлиха
Figure imgf000021_0001
Figure imgf000022_0001
Экспериментальный пример 4. Изучение противоопухолевого действия препарата на карциноме толстой кишки человека.
Были использованы 2 сублинии клеток карциномы толстой кишки человека, различающиеся по статусу p53 - клетки с диким типом p53 (HCTl 16 p53+/+)) и клетки с инактивированным p53 (HCTl 16 p53-/-)) (получение линий см. Вuпz, F., Dutriаuх, А., Lепgаuеr, С, Wаldmап, Т., Zhоu, S., Вrоwп, J. Р., Sеdivу, J. M., Кiпzlеr, К. W., апd Vоgеlstеiп, В. (1998) Sсiепсе, 282, ppl497-1500, описание модели - см., например, Sablina AA, Сhumаkоv PM, Kopnin BP. (2003), J. Вiоl. Сhеm., 278, рр. 27362-27371).
Клетки в количестве lмлн были привиты подкожно бестимусным мышам.
Мыши в каждой группе были разделены на 4 подгруппы (по 10 мышей в каждой подгруппе):
-получавшие в качестве питья чистую воду;
- получавшие воду с добавлением SkQl из расчета 0,01нмoль препарата на мышь в сутки (0,5нM/кг/cyтки);
- получавшие воду с добавлением SkQl из расчета ОДнмоль препарата на мышь в сутки (5нM/кг/cyтки);
- получавшие воду с добавлением SkQl из расчета lнмоль препарата на мышь в сутки (50нM/кг/cyтки).
Размер опухолей измерялся каждые 3 дня. Через 4 недели мыши были забиты, опухоли зафиксированы для гистологических исследований.
Согласно полученным данным, добавление препарата SkQl в питьевую воду сопровождалось уменьшением роста опухолей по сравнению с контрольной группой, получавшей чистую воду, причем изменения в росте опухолей с инактивированным p53 были значительно больше, чем в опухолях с p53 дикого типа (см. фиг.З). Наибольший эффект препарата SkQl наблюдался при добавлении его в питьевую воду из расчета ОДнмоль препарата на мышь в сутки (5нM/кг/cyтки).
Согласно полученным данным, добавление препарата SkQl в питьевую воду в большей степени вызывало уменьшение роста опухолей с инактивированным p53, чем в опухолях с p53 дикого типа.
Также было показано существенное подавление роста ксенографтов HCTl 16 в случае добавления SkQl в питьевую воду из расчета ОДнмоль препарата на мышь в сутки (5нM/кг/cyтки) - фиг.4.
Экспериментальный пример 5. Разработка режимов введения SkQl совместно с химиотерапией доксорубицином
Для разработки способа комбинированной терапии онкологических заболеваний с использованием SkQl совместно с химиотерапией было проведено исследование влияния препарата на эффективность однократного введения доксорубицина (одним из механизмов действия препарата является активация окислительных процессов внутри опухолевых и нормальных клеток). SkQl вводился до, вовремя или после использования доксорубицина в максимальной дозе 500 нМ/кг (для того, чтобы максимально заблокировать окислительный механизм действия доксорубицина) .
В таблице 2 представлены результаты изучения эффективности сочетанного применения SkQl в дозе 500нM/кг в 0.2 мл/мышь в течение 5 дней при пероральном применении его с использованием лекарственной формы в виде спиртового раствора и доксорубицина, вводимого во всех схемах однократно, внутрибрюшинно в дозе 7 мг/кг на 7 сутки после трансплантации опухоли. Схемы применения доксорубицина предусматривали использование его в схемах «дo», «пocлe» и «в середине кypca» SkQl,
Показано, что применение SkQl в монотерапии тормозит рост опухоли на 33% непосредственно после окончания курса лечения. Противоопухолевый эффект доксорубицина, примененного на 7 сутки, т.е. при развившейся опухоли, менее выражен. TPO при этом составляет на 10 и 14 сутки 26% и 38% соответственно.
Из всех изученных схем сочетанного применения SkQl и доксорубицина, наиболее эффективной оказалась схема 5-дневного лечения SkQl «дo» введения доксорубицина. Максимальное торможение роста опухоли наблюдается к 10 суткам (61%) и достоверно прослеживается до 21 суток. Важно, что эффекты SkQl на 7 сутки были одинаковы в группах, получавших SkQl в монорежимах и в группах с последующим применением доксорубицина (TPO =33 и 39% соответственно). Другие схемы сочетанного применения SkQl и доксорубицина оказались малоэффективны. В этих случаях терапевтические эффекты комбинации не превышали значения эффекта доксорубицина и были ниже эффекта SkQl, примененного в монотерапии.
Таким образом, наиболее эффективной оказалась схема, предполагающая введение доксорубицина после курса SkQl (5 дней). Обнаружено, что добавление в питьевую воду SkQl (наибольший эффект - при добавлении 5 нМ SkQl) увеличивает сопротивляемость инфекционным болезням иммунодефицитных мышей, определенной по продолжительности жизни при содержании их в комнате без подачи стерильного воздуха.
Показано, что эффективность противоопухолевого действия SkQl может зависеть от статуса p53 в опухоли. Добавление препарата SkQl (максимальный эффект - 5 нМ SkQl) в питьевую воду в большей степени вызывало уменьшение роста опухолей с инактивированным p53, чем в опухолях с p53 дикого типа.
Применение SkQl (500 нМ, 5-дневный курс) до введения доксорубицина, оказалось наиболее эффективным (максимальное торможение роста опухоли наблюдается к 10 суткам (61%) и достоверно прослеживается до 21 суток). Другие схемы сочетанного применения SkQl вовремя или после инъекции доксорубицина оказались малоэффективны.
Таблица 2
Действие препарата SkQl ( спиртовой раствор) в комбинации с доксорубицином на рост карциномы Льюиса легкого
TPO %, по объему опухоли.
Группа Доза мг/кг, режим Дни ОПЫТЕ I. опыта и способ введения
7 10 14 17 21
0.2 мл/мышь 199+ ЮОб± 3034±35 5596+
Контроль спиртовой раствор 10575+3243 реr.оs. х 10 66 182 4 1100
500 нм, 0.2
SkQ мл/мышь реr.оs. х 33 42 48 28 30
5 (2-6 сутки)
DOX ( 7 мг/кг хl 7- _2
DOX 26 38 35 30 ые сутки в/б
500 нм, 0.2 мл/мышь реr.оs. х
SkQ+ DOX 5 (2-6 сутки) + 392 61 58 51 50
DOX (7 мг/кг хl 7- ые сутки в/б
500 нм, 0.2 мл/мышь реr.оs. х
SkQ+ DOX 2 5 (5,6,7,8,9 сутки) 23 37 23 29 +SkQ
+ DOX ( мг/кг х 17-ые сутки в/б
DOX (7 мг/кг хl 7- ые сутки в/б+500
DOX+ нм, 0.2 мл\мышь _2 18 24 28 6
SkQl реr.оs. х 5
(8,9,10,11,12 сутки)
1 - Для контроля даны значения объема опухоли в мм3.
2 - День введения доксорубицина

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Фармацевтическая композиция для профилактики и/или лечения онкологических заболеваний, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы (I):
Figure imgf000026_0001
где А - эффекторная группа - антиоксидант
Figure imgf000026_0002
и/или его восстановленная форма где m - целое число от 1 до 3; Y - одинаковые или разные заместители, представляющие собой низший алкил или низший алкокси; или два вицинальных Y связаны между собой таким образом, что образуют структуру:
Figure imgf000026_0003
и/или его восстановленную форму, где Rl и R2 одинаковые или разные заместители, независимо друг от друга представляющие собой низший алкил или низший алкокси; L-линкерное звено, представляющее собой: а) простую или разветвленную углеводородную цепь, не обязательно замещенную одним или более заместителем, и при необходимости содержащую одну или более двойную или тройную связь; б) природную изопреноидную цепь; п - целое число от 1 до 20; В - представляет собой а) Скулачев-ион Sk:
Sk+Z- где Sk - липофильный катион; Z - фармакологически приемлемый анион; б) заряженный гидрофобный пептид из 1-20 аминокислот, за исключением соединений, в которых А представляет собой убихинон (2- мeтил-4,5-димeтoкcи-3,6-диoкco-l,4-циклoгeкcaдиeнил) или токоферол или миметик супероксиддисмутазы или эбселен, при том что L - дивалентный децил или дивалентный пентил или дивалентный пропил, а В - трифенилфосфоний; а также его сольваты, изомеры или пролекарственные формы и фармакологически приемлемый носитель.
2. Композиция по п. 1, в которой А представляет собой остаток пластохинона формулы:
Figure imgf000027_0001
Y - метил, m = 2;
L - линкерное звено, представляющее собой: а) простую или разветвленную углеводородную цепь, не обязательно замещенную одним или более заместителем, и при необходимости содержащую одну или более двойную или тройную связь; б) природную изопреноидную цепь; п - целое число от 1 до 20;
В - представляет собой а) Скулачев-ион Sk:
Sk+Z" где Sk - липофильный катион; Z - фармакологически приемлемый анион; б) заряженный гидрофобный пептид из 1 -20 аминокислот, за исключением соединений, в которых А представляет собой убихинон (2-мeтил-4,5- димeтoкcи-3,6-диoкco-l,4-циклoгeкcaдиeнил) или токоферол или миметик супероксиддисмутазы или эбселен, при том что L — дивалентный децил или дивалентный пентил или дивалентный пропил, а В — трифенилфосфоний; а также его сольваты, изомеры или про лекарственные формы и фармакологически приемлемый носитель.
3. Композиция по п. 2, в которой соединением формулы (I) является вещество
SkQl: v О
Figure imgf000028_0001
SkQl
4. Фармацевтическая композиция по любому из п.п. 1-3 для орального, парентерального, чрезкожного, внутривенного, внутриартериального, сублинrвальноrо, внутримышечного, ректального, назального, липосомального, вагинального, перокулярного, локального, подкожного, внутрисуставного применения
5. Композиция по любому из п.п. 1-4 в виде раствора, таблеток или других форм для орального применения.
6. Композиция по любому из п.п. 1-4 в виде раствора для парентерального применения.
7. Композиция по любому из пл. 1-4 в виде мази, повязки, пленки и других форм для чрезкожного применения
•8. Применение композиции по любому из п.п. 1-8 для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения онкологических заболеваний млекопитающих.
9. Применение по п. 8, при котором млекопитающим является человек.
10. Применение по п.8, при котором патологией является онкологическое заболевание.
11. Применение по п.10, при котором заболеванием является карцинома.
12. Применение по п.10, при котором заболеванием является саркома.
13. Применение по п.10, при котором заболеванием является лейкоз.
14.Пpимeнeниe композиции по любому из п.п. 1-8 в комбинированной терапии рака вместе (то есть одновременно, заблаговременно, после) с другим противораковым препаратом или препаратами.
15. Применение по п.14, при котором терапией является химиотерапия.
16. Применение по п.14, при котором терапией является фотодинамическая терапия.
17. Применение по п.14, при котором терапией является радиотерапия.
18. Способ профилактики и/или лечения патологий млекопитающих, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении и/или профилактике, эффективного количества фармацевтической композиции, охарактеризованной в одном из пунктов 1-6.
PCT/RU2007/000044 2007-01-29 2007-01-29 Pharmaceutical compositions useful for preventing and treating oncological diseases Ceased WO2008094062A1 (en)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US12/524,961 US8349902B2 (en) 2007-01-29 2007-01-29 Pharmaceutical compositions useful for preventing and treating oncological diseases
PCT/RU2007/000044 WO2008094062A1 (en) 2007-01-29 2007-01-29 Pharmaceutical compositions useful for preventing and treating oncological diseases
US13/674,443 US9408859B2 (en) 2007-01-29 2012-11-12 Pharmaceutical compositions useful for preventing and treating cancer

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/RU2007/000044 WO2008094062A1 (en) 2007-01-29 2007-01-29 Pharmaceutical compositions useful for preventing and treating oncological diseases

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US12/524,961 A-371-Of-International US8349902B2 (en) 2007-01-29 2007-01-29 Pharmaceutical compositions useful for preventing and treating oncological diseases
US13/674,443 Continuation-In-Part US9408859B2 (en) 2007-01-29 2012-11-12 Pharmaceutical compositions useful for preventing and treating cancer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2008094062A1 true WO2008094062A1 (en) 2008-08-07

Family

ID=39674282

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2007/000044 Ceased WO2008094062A1 (en) 2007-01-29 2007-01-29 Pharmaceutical compositions useful for preventing and treating oncological diseases

Country Status (2)

Country Link
US (2) US8349902B2 (ru)
WO (1) WO2008094062A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011059355A1 (ru) * 2009-11-13 2011-05-19 Общество С Ограниченной Ответственностью "Mиtotex" Фармацевтические субстанции на основе митохондриально-адресованных антиоксидантов

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8518915B2 (en) * 2007-06-29 2013-08-27 Mitotech Sa Use of mitochondrially-addressed compounds for preventing and treating cardiovascular diseases
WO2019113210A1 (en) 2017-12-05 2019-06-13 Anthos Partners, Lp Phosphonium-based ionic drug conjugates
CA3191819A1 (en) 2020-09-09 2022-03-17 Hazel Szeto Methods and compositions for delivery of biotin to mitochondria
US20240300987A1 (en) * 2021-06-15 2024-09-12 Smartin Bio Inc. Trap1 inhibitor and use thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999026582A2 (en) * 1997-11-25 1999-06-03 University Of Otago Mitochondrially targeted compounds
US6331532B1 (en) * 1998-11-25 2001-12-18 University Of Otago Mitochondrially targeted antioxidants

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5538974A (en) 1994-01-27 1996-07-23 Senju Pharamceutical Co., Ltd. Ophthalmic composition for lowering intraocular pressure
US20070270381A1 (en) 2000-05-25 2007-11-22 Antipodean Pharmaceuticals, Inc. Mitochondrially targeted antioxidants
US20080275005A1 (en) 1998-11-25 2008-11-06 Murphy Michael P Mitochondrially targeted antioxidants
US20020044913A1 (en) 2000-02-11 2002-04-18 Hamilton Nathan D. Cosmetics to support skin metabolism
ITRM20010755A1 (it) 2001-12-20 2003-06-20 Simonelli Giuseppe Uso del chinone q10 per il trattamento delle malattie oculari.
US6984636B2 (en) 2002-08-12 2006-01-10 Medical Research Council Mitochondrially targeted antioxidants
AU2005261654A1 (en) 2004-07-13 2006-01-19 Oridis Biomed Forschungs- Und Entwicklungs Gmbh Mitochondrially targeted antioxidants in the treatment of liver diseases and epithelial cancers
RU2318500C2 (ru) 2005-10-18 2008-03-10 Общество С Ограниченной Ответственностью "Митотехнология" Способ воздействия на организм путем адресной доставки биологически активных веществ в митохондрии, фармацевтическая композиция для его осуществления и соединение, применяемое для этой цели
EA200900582A1 (ru) 2006-10-20 2009-08-28 Общество С Ограниченной Ответственностью "Митотехнология" Фармацевтические композиции для профилактики и лечения глазных патологий
US8518915B2 (en) 2007-06-29 2013-08-27 Mitotech Sa Use of mitochondrially-addressed compounds for preventing and treating cardiovascular diseases
WO2011108946A1 (en) * 2010-03-04 2011-09-09 Androgenix Ltd Methods for improving sperm functionality

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999026582A2 (en) * 1997-11-25 1999-06-03 University Of Otago Mitochondrially targeted compounds
US6331532B1 (en) * 1998-11-25 2001-12-18 University Of Otago Mitochondrially targeted antioxidants

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011059355A1 (ru) * 2009-11-13 2011-05-19 Общество С Ограниченной Ответственностью "Mиtotex" Фармацевтические субстанции на основе митохондриально-адресованных антиоксидантов
EA023248B1 (ru) * 2009-11-13 2016-05-31 Общество С Ограниченной Ответственностью "Митотех" Фармацевтические субстанции на основе митохондриально-адресованных антиоксидантов
AU2009355359B2 (en) * 2009-11-13 2016-11-10 Mitotech S.A. Pharmaceutical substances on the basis of mitochondrially addressed antioxidants

Also Published As

Publication number Publication date
US9408859B2 (en) 2016-08-09
US20100144680A1 (en) 2010-06-10
US8349902B2 (en) 2013-01-08
US20130072463A1 (en) 2013-03-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12403130B2 (en) Pharmaceutical combinations for treating cancer
US9006284B2 (en) Combination therapy for treating proliferative diseases
MX2014013294A (es) Inhibidores de 3-haloalilamina sustituidos de ssao y uso de los mismos.
US9364459B2 (en) 3-(indolyl)- or 3-(azaindolyl)- 4-arylmaleimide derivatives for use in the treatment of colon and gastric adenocarcinoma
EP2433636A1 (en) Treatment of Malignant Diseases
WO2008094062A1 (en) Pharmaceutical compositions useful for preventing and treating oncological diseases
TW201919616A (zh) 用於治療ｔ－ｐｌｌ的化合物
KR20170005125A (ko) 클래스 ⅲ 수용체 티로신 키나제 억제제 및 알킬화 히스톤-디아세틸라제 억제제 융합 분자 edo-s101을 포함하는 약학적 조합물 및 암 치료에 사용되는 이의 용도
EP4319750A1 (en) Combination therapies for the treatment of cancer
US20100003346A1 (en) Combination methods of treating cancer
WO2023244639A1 (en) Methods of predicting cns cancer response to treatment with egfr inhibitors
CN114599352A (zh) 用于治疗癌症的α-甲基-DL-酪氨酸烷基酯
US20230405132A1 (en) Antitumor pharmaceutical composition and use thereof
US20210220312A1 (en) Compositions And Methods For Modulating Cancer
WO2024081447A1 (en) Egfr inhibitors for treating lung cancer
JP5202332B2 (ja) がんの治療のための化合物および方法
CN116271057A (zh) 一种预防或治疗滤泡淋巴瘤的联合用药物组合物及其应用
SE1350211A1 (sv) Metoder och kompositioner för behandling av cancermetastaser
PT1757283E (pt) Potenciador do efeito antitumoral, agente antitumoral e método para a terapia do cancro
CN101448514A (zh) 黑素瘤的治疗
RU2623034C1 (ru) Противоопухолевое средство
CN120815157A (zh) 多肽化合物在制备治疗和/或减轻肿瘤恶液质的药物中的应用
WO2025174879A1 (en) Methods of reducing or eliminating measurable residual disease
WO2015044491A1 (es) Uso de un compuesto indólico con sustituyentes nucleofílicos en el c3 y sus variantes diméricas en la preparación de una composición farmacéutica útil para el tratamiento de neoplasias linfoides b
EP2258370A1 (en) Treatment of malignant diseases

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 07793986

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 12524961

Country of ref document: US

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 07793986

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1