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WO2007077770A1 - アルキルレゾルシノール配糖体とその製造方法並びに用途 - Google Patents

アルキルレゾルシノール配糖体とその製造方法並びに用途 Download PDF

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WO2007077770A1
WO2007077770A1 PCT/JP2006/325658 JP2006325658W WO2007077770A1 WO 2007077770 A1 WO2007077770 A1 WO 2007077770A1 JP 2006325658 W JP2006325658 W JP 2006325658W WO 2007077770 A1 WO2007077770 A1 WO 2007077770A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
glycoside
alkylresorcinol
acid
butylresorcinol
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/JP2006/325658
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Takashi Shibuya
Ayashi Noguchi
Satoru Takayama
Yasuo Suemoto
Makoto Takeuchi
Masayuki Nakano
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo KK
Original Assignee
Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo KK
Hayashibara Biochemical Laboratories Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo KK, Hayashibara Biochemical Laboratories Co Ltd filed Critical Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo KK
Priority to JP2007552917A priority Critical patent/JP5244400B2/ja
Publication of WO2007077770A1 publication Critical patent/WO2007077770A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides

Definitions

  • Alkylresorcinol glycoside its production method and use
  • the present invention relates to a novel 4-alkylresorcinol glycoside, a process for producing the same, and uses thereof. More specifically, 4-alkylresorcinol or a derivative thereof (excluding glycosides, hereinafter referred to as 4 alkylresorcinol in the present specification). And its derivatives (excluding glycosides) are sometimes referred to as “4 alkylresorcinols.”) 4 alkylresorcinol glycosides having one or two glycosyl groups bonded thereto, and The present invention relates to a production method and a composition containing the 4-alkylresorcinol glycoside.
  • 4 Alkylresorcinols prevent and improve skin pigmentation (Japanese Patent Laid-Open No. 2001-206813), whitening (Japanese Patent Laid-Open No. 2002-179516), and wrinkle suppression (Japanese Patent Laid-Open No. 2001-302506) ), And can be used as a component of an external composition for skin, and has antibacterial activity against bacteria that are involved in the development and deterioration of acne (Patent No. 2875374).
  • 4 n-butylresorcinol has already been used as an active ingredient in quasi-drugs for topical skin preparations.
  • alkylresorcinols generally have a number of problems, such as low solubility in water, difficult to handle, poor stability after dissolution, and irritation. Are inconvenient when used as pharmaceuticals, quasi-drugs, cosmetics, etc., and the development of methods for using these in stabilized, water-solubilized and low-stimulated derivatives is desired.
  • Japanese Patent Publication No. 7-36759 and Japanese Patent Application Laid-Open No. 2001-46096 propose a method for producing a glycoside using a glycosyltransferase.
  • JP-A-2002-179516 describes a whitening composition containing an alkylresorcinol derivative.
  • there has been no development of effective means for solving the drawbacks that have been an obstacle to the use of these alkylresorcinols and all of the above patent documents describe alkylresorcinol glycosides. Descriptions about the body are not allowed.
  • the present invention eliminates the drawbacks of alkylresorcinols, has excellent water solubility and stability, is substantially tasteless, odorless, has no irritation and has no fear of toxicity, and has physiological activity in vivo. It is an object of the present invention to provide an alkylresorcinol derivative that can sufficiently exhibit the above.
  • alkylresorcinol glycosides are water-soluble, stable, virtually tasteless, odorless, and less irritating.
  • alkylresorcinol glycosides are water-soluble, stable, virtually tasteless, odorless, and less irritating.
  • alkylresorcinol glycosides in large quantities at low cost by an organic synthesis method or an enzymatic method, particularly an enzyme method using glycosyltransferase, was found, and further, this alkylresorcinol glycoside was contained.
  • the caulked composition was established and the present invention was completed.
  • the alkyl resorcinol glycoside of the present invention is more stable than alkyl resorcinols, exhibits high water solubility, is odorless, odorless, less irritating, and less toxic. It is easily hydrolyzed in the body and exhibits the original physiological activity of alkylresorcinols. Further, the alkylresorcinol glycoside of the present invention can be blended at a high concentration in a composition such as a pharmaceutical, a quasi-drug, or a cosmetic, and the whitening effect of alkylresorcinols is a therapeutic effect against anti-sensitive diseases. It is possible to produce an excellent composition.
  • the method for producing an alkylresorcinol glycoside of the present invention is to produce an alkylresorcinol glycoside from an alkylresorcinol and, in particular, an inexpensive partial decomposition product of starch at a low cost in large quantities. Can do.
  • FIG. 1 is a diagram showing a UV absorption spectrum of a 4 n-butylresorcinol glycoside of the present invention.
  • FIG. 2 is a diagram showing an elution pattern of HPLC (using a CAPCELLPAK C18 AG120 column) of a 4-n-ptylresorcinol glycoside-containing preparation of the present invention prepared by a glycosyltransferase reaction using a glycosyltransferase.
  • FIG. 3 Reaction product of the present invention a (3—0—a D darcobilanosyl 4-n-butylresorcinol) and reaction product b (1-0-a-D-darcobilanosyl-4-n-butylresorcinol)
  • a 0—a D darcobilanosyl 4-n-butylresorcinol
  • reaction product b 1-0-a-D-darcobilanosyl-4-n-butylresorcinol
  • FIG. 4 is a diagram showing a 1 H-NMR ⁇ vector of a reaction product a (3-O-a-D-darcobilanosyl 4-n-butylresorcinol) of the present invention.
  • FIG. 5 Reaction product of the present invention a (3—0—a D darcoviranosyl 4-n-butyl methacrylate It is a figure which shows the C-NMR ⁇ vector of solcinol).
  • FIG. 6 is a diagram showing a H—H COZY spectrum of a reaction product a (3-0-a D darcoviranosyl-4-n-butylresorcinol) of the present invention.
  • FIG. 7 shows a C—H COZY spectrum of the reaction product a (3-0-a D darcoviranosyl-4-n-butylresorcinol) of the present invention.
  • FIG. 8 is a diagram showing a 1 H-NMR ⁇ vector of a reaction product b (1-0-a D darcobilanosyl-4-n-butylresorcinol) of the present invention.
  • FIG. 9 is a diagram showing a 13 C-NMR ⁇ vector of the reaction product b (1-0-a D darcobilanosyl-4-n-butylresorcinol) of the present invention.
  • FIG. 10 is a diagram showing a H—H COZY spectrum of a reaction product b (1-0-a D darcoviranosyl-4-n-butylresorcinol) of the present invention.
  • FIG. 11 is a diagram showing a C—H COZY spectrum of the reaction product b of the present invention (l—O—a—D-darcoviranosyl 4-n-butylresorcinol).
  • FIG. 12 is a diagram showing a remote C—H COZY spectrum of a reaction product b (1-0-a D darcoviranosyl-4-n-butylresorcinol) of the present invention.
  • FIG. 13 is an enlarged view of a part of the remote C—H COZY spectrum of the reaction product b (l—0—a D—Dalcoviranosyl 4-n-butylresorcinol) in FIG.
  • the 4 alkylresorcinol glycoside referred to in the present invention is a 4-alkylresorcinol glycoside having a glycosyl group bonded to either R or R of the 4 alkylresorcinol represented by the following general formula 1.
  • It may be a resorcinol glycoside, or in two places of the glycosyl basic forces R and R,
  • It may be a 4-alkylresorcinol glycoside bonded to each other, or a mixture of two or more of these glycosides.
  • R and R each independently represent a hydrogen atom or a glycosyl group
  • At least one of R is a glycosyl group, and R is a cyclic structure having 3 to 20 carbon atoms or
  • the 4-alkylresorcinol glycoside of the present invention may have a cyclic or branched structure in which the alkyl group has a carbon number of 3 to 20, preferably 4 to 18 substituted with an alkyl group, It may have 1 to 20 unsubstituted linear structures.
  • the cyclic structure is not limited to an aliphatic group such as an alkyl group or an alkenyl group.
  • an aromatic group such as a phenyl group is included as long as the portion directly bonded to resorcinol is an alkyl group. To do. Further, when such an aromatic cyclic substituent exists, the carbon number is counted including the carbon number of the aromatic substituent.
  • alkyl group having a cyclic or branched structure examples include a cyclopentyl group, a cyclohexyl group, a 2-phenylethyl group, an isooctyl group, an amyl group, an isoamyl group, an isobutyl group, a tertiary butyl group, and a 1-methylpropyl group.
  • Preferred examples include a group, 2-methylhexyl group or isostearyl group. Of these, preferred are those having a cyclic alkyl group, those having a branched alkyl group that is preferred by a less toxic cyclopropyl group, a good balance between effect and toxicity, and 1 methylpropyl.
  • Group or 1-methylbutyl group is preferred ⁇ .
  • the 1-ethylpropyl group or 1-isopropyl 2-methylpropyl group is preferable in that the effect of the present invention is remarkable, and it is preferable because the stability can be improved.
  • alkyl group having an unsubstituted linear structure examples include, for example, methyl group, ethyl group, propyl group, butyl group, pentyl group, hexyl group, heptyl group, octyl group, nonyl group, decyl group. Group, undecyl group, dodecyl group, tridecyl group, tetradecyl group, pentadecyl group, hexadecyl group, heptadecyl group, octadecyl group, nonadecyl group and eicosyl group. Of these, those having an alkyl group having 1 to 7 carbon atoms are particularly desirable butyl groups, which are desirable from the standpoint of their anti-inflammatory activity and their anti-inflammatory activity.
  • one or more of the hydrogen atoms of the alkyl group contains an oxygen atom such as a hydrocarbon group other than a methyl group, a carboxyl group, or a ketone group.
  • an oxygen atom such as a hydrocarbon group other than a methyl group, a carboxyl group, or a ketone group.
  • 4-alkylresorcinol glycosides in the presence of optical isomers, as long as they have the physiological activity of 4-alkylresorcinols such as antibacterial action and whitening action, One of them or a mixture of both may be used.
  • the glycosyl group bonded to the two hydroxyl groups of the alkylresorcinol of the 4 alkylresorcinol glycoside of the present invention is any one that can be bonded to the 4 alkylresorcinol by a synthesis method or an enzymatic method.
  • darcosyl group galactosyl group, fructosyl group, arabinosyl group, maltosyl group, isomaltosyl group, selbiosyl group, rabuinosyl group, gentiobiosyl group, codibiosyl group, laminaribiosyl group, -gerovosyl group, sambubiosyl group, neohebrosyl group
  • Examples of one or two types of forces selected from a peridosyl group, a cellotriosyl group, a glycerol group, or a gentiotriosyl group can be given.
  • a darcosyl group or a dalcosyl group desired by a malto-oligosyl group such as a maltosyl group is particularly desirable.
  • the 4 alkylresorcinol glycosides of the present invention were produced by combining methods such as organic synthesis methods, fermentation methods, enzymatic methods, and the like, which are not limited to the origins and production methods, and appropriate combinations thereof. It may be a thing. Specifically, an organic synthesis method in which acylyl sucrose is condensed with 4-alkylresorcinol in the presence of a peracid-silver catalyst and an enzyme method using a glycosyltransferase can be preferably exemplified.
  • the enzyme method in which a glycosyltransferase is allowed to act on a system containing 4-alkylresorcinols and ⁇ -glycosyl compounds is inexpensive in large quantities from 4 alkylresorcinols and inexpensive starches and partial hydrolysates thereof. Since an alkyl resorcinol glycoside can be produced, it is economical and can be advantageously used industrially.
  • alcohol and tertiary butyl alcohol are condensed with resorcinol at 200-300 ° C, 4-cyclopentylresorcinol, 4-cyclohexylresorcinol, 4 isooctylresorcinol, 4-amylresorcinol, 4-isoamylresorcinol, 4- Isobutyl resorcino , 4-tert-butyl resorcinol and the like can be obtained.
  • the introduction of another alkyl group having a branch at the 1-position can also be obtained by conducting a Grignard reaction using 4-isobutyrylresorcinol or the like as a starting material and, if necessary, a catalytic reduction reaction using palladium as a catalyst.
  • the 4-alkylresorcinol thus obtained tends to be less stable in storage than linear alkyl-substituted resorcinols such as 4 n-butylresorcinol. An example is shown below.
  • Table 1 shows the results of preparing 0.5% aqueous solutions of various 4 alkylresorcinols, storing them at 40 ° C for 1 month, and quantifying 4 alkylresorcinols by HPLC.
  • HPLC conditions were as follows: Column: ODS 4.6 mm x 150 mm, Column temperature: 40 ° C, Detection: UV 230 nm absorption, Mobile phase: 25% Acetonitrile—15 mM Tetraptylamonium bromide added 15 mM phosphate buffer ( pH 6.5), flow rate: lml / min. The quantitative value after storage was divided by the quantitative value immediately after production and multiplied by 100 to obtain the residual rate.
  • a glycosyltransferase used for the production of a glycoside comprises a 4-alkylresorcinol and a glycosyl compound.
  • a glycosyltransferase used for the production of a glycoside comprises a 4-alkylresorcinol and a glycosyl compound.
  • ⁇ -darcosidase belongs to an enzyme derived from an animal or plant tissue such as pig liver, buckwheat seed, or the like in the genus Mucor or Penicillium.
  • Enzymes derived from cultures obtained by culturing microorganisms such as fungi or yeasts belonging to the genus Saccharomyces in a nutrient medium are cyclomaltodextrin glucanotransferases, such as the genus Bacillus, the genus Klebsiella, etc.
  • Enzymes derived from bacterial cultures that belong to OC amylase belong to the genus Bacillus And known enzymes having transglycosylation activity such as enzymes derived from mold cultures belonging to the genus Aspergillus or the like. These glycosyltransferases do not necessarily need to be purified and used. Usually, the object of the present invention can be achieved with a crude enzyme such as a culture solution of these microorganisms or a concentrated solution thereof.
  • these enzymes may be used after being purified by various known methods, or may be used after being immobilized on a carrier.
  • Commercially available glycosyltransferases can also be used.
  • the amount of enzyme is selected so that the reaction is completed within about 5 to 80 hours of economic point.
  • a method of performing an enzyme reaction in a batch system or a continuous system can be appropriately selected.
  • the glycosyl compound used in the present invention is not particularly limited as long as it becomes a substrate for the enzyme when a 4-alkylresorcinol glycoside is produced using glycosyltransferase.
  • amylose, dextrin Preferred examples include starch partial hydrolysates such as cyclodextrin and maltooligosaccharide, and OC darcosyl compounds such as liquefied starch and gelatinized starch.
  • glycosyl compounds suitable for each enzyme may be selected depending on the sugar transferase used.
  • the concentration of the glycosyl compound in the reaction solution during the transglycosylation reaction is not particularly limited, but is usually 0.1% by mass or more (hereinafter referred to as mass% unless otherwise specified in the present specification). Is expressed as “%”), and 0.1% to 70% is desirable, and 0.1% to 50% of the solution is particularly desirable.
  • the liquid containing 4 alkylresorcinols at the time of the reaction should contain 4 alkylresorcinols in as high a concentration as possible.
  • 4 alkylresorcinols are suspended.
  • a concentration of about 0.005% or more is used, and a solution of about 0.01% to 10.0% is particularly desirable.
  • glycosyltransferase it is desirable to allow glycosyltransferase to act in a state where the charged concentration of 4 alkylresorcinols is increased.
  • 4-alkylresorcinols When the reaction is carried out in suspension, about 0.1% to 2.0% suspension of 4 alkylresorcinols containing a suitable amount of glycosyl compound and 4 alkylresorcinol-rich solution with a pH of about 4 0 to 7.0, and as high as possible at which glycosyltransferase can act, specifically about 20 ° C to 90 ° C.
  • 4-alkylresorcinol Suspended 4-alkylresorcinols gradually dissolve as the compounds are converted to 4-alkylresorcinol glycosides, and at the same time, 4-alkylresorcinol glycosides are easily produced at high concentrations.
  • alkylresorcinols in the alkaline solution are liable to be decomposed. Therefore, in order to prevent this, it is desirable to keep them as dark and anaerobic as possible. If necessary, acid-detergents such as L-ascorbic acid and erythorbic acid can coexist.
  • a liquid containing a high amount of alkylresorcinols containing about 0.5% to 10.0% alkylresorcinols and an appropriate amount of ⁇ -glycosyl compound is about 7.5 to 10%.
  • the temperature is maintained at about 50 ° C. to 80 ° C. and a glycosyltransferase is allowed to act on this, an alkyl resorcinol glycoside is easily produced at a high concentration.
  • alkylresorcinols for example, strong alkaline aqueous solutions such as caustic soda aqueous solution, caustic potash aqueous solution, sodium carbonate aqueous solution, hydroxide-calcium water, ammonia water, etc.
  • alkyl resorcinol compound solution dissolved in a high concentration, with an acidic aqueous solution [rho Eta Since it is easy to cause precipitation of alkylresorcinols, before the pH adjustment, a-glycosyl compounds and a small amount of alkylresorcinol glycosides can coexist to suppress the precipitation of alkylresorcinols. Initiating the reaction can also be carried out advantageously.
  • the liquid containing a high amount of the alkylresorcinols is mutually combined with water.
  • a soluble organic solvent for example, a lower alcohol such as methanol, ethanol, n propanol, isopropanol, n-butanol, and acetonitrile acetone, and a lower ketone can be appropriately selected.
  • the relatively high-molecular alkylresorcinol glycoside produced by the transglycosylation reaction may be used as it is or after purification with a porous synthetic adsorbent as necessary.
  • 2. 1. 3 or partial hydrolysis with an amylase such as j8-amylase (EC 3.2.1. 2) to reduce the number of a-darcosyl groups in a-glycosylalkylresorcinols Can do.
  • darcoamylase when darcoamylase is allowed to act, it can hydrolyze higher molecular weight compounds than ⁇ -maltosyl-4 alkylresorcinols to produce glucose and accumulatively produce ⁇ -darcosyl-4 alkylresorcinols.
  • a high molecular weight compound higher than one maltotriosyl-4 alkylresorcinol is hydrolyzed to form maltose, and mainly ⁇ -darcosyl-4-alkylresorcinol. Mixtures with ⁇ -maltosyl 4 alkylresorcinols can be accumulated.
  • the 4-alkylresorcinol glycoside that can be obtained by the method for producing a glycoside by the enzymatic method of the present invention is different in the binding mode of the darcosyl group to the hydroxyl group of 4-alkylresorcinol, which is in the 1- or 3-position.
  • Three types are obtained: those in which a glycosyl group is introduced into any of the hydroxyl groups, and those in which a glycosyl group is introduced in both the 1- and 3-positions.
  • the number of monosaccharides constituting each glycosyl group is not particularly limited. However, in terms of ease of production and ease of handling, it is usually desirable to have 1 to 6 monosaccharides. And one or two is particularly desirable.
  • reaction solution Obtained by the production method of the present invention
  • the reaction solution is left as it is, partially purified, highly purified, and Sarasako separates these three types of glycosides individually and mixes the fractions. It is also optional to filter and concentrate syrup or dry and powder it into the composition for external use of the present invention by a conventional method.
  • the method for purifying these 4 alkylresorcinol glycosides is not particularly limited as long as it can increase the purity of the 4 alkylresorcinol glycosides.
  • the 4 alkylresorcinol glycosides and impurities such as ⁇ - glycosyl compounds may be separated and purified using the difference in adsorptivity by the adsorbent.
  • the 4 alkylresorcinols that have been glycosylated are not necessarily removed because they are physiologically active themselves.
  • 4 alkylresorcinols are possible. It is desirable to increase the purity of resorcinol glycosides.
  • the porous synthetic adsorbent is a porous, wide, adsorbing surface area and nonionic styrene-dibutylbenzene polymer, phenol-formalin rosin, talile.
  • Synthetic resin such as salt resin and meta acrylate resin.
  • reaction solution in which the 4-alkylresorcinol glycoside of the present invention is produced is passed through, for example, a column filled with the porous synthetic adsorbent as described above, the 4-alkylresorcinol glycoside and the relatively A small amount of unreacted 4 alkylresorcinols are adsorbed on the porous synthetic adsorbent, whereas the majority of the glycosyl compounds that coexist in large amounts flow out without being adsorbed.
  • the reaction solution is heated to remove insoluble matter, or the aluminate cate Treatment with magnesium acid, magnesium aluminate, etc.
  • purification methods such as adsorption removal and treatment with strong acidic ion exchange resin (H type), medium basic or weak basic ion exchange resin (OH type), etc. This is also optional.
  • the 4-alkylresorcinol glycoside selectively adsorbed on the porous synthetic adsorbent column and the relatively small amount of the unreacted 4-alkylresorcinol were washed with dilute alkali or water. Thereafter, if a relatively small amount of an organic solvent or a mixed solution of an organic solvent and water, for example, methanol water, ethanol water, or the like is passed through, first, the 4 alkylresorcinol glycoside is eluted, and the amount of liquid passing is increased. If the organic solvent concentration is increased, unreacted 4 alkylresorcinols will be eluted.
  • an organic solvent or a mixed solution of an organic solvent and water for example, methanol water, ethanol water, or the like
  • the porous synthetic adsorbent can be used repeatedly. enable.
  • This eluate containing a high content of 4 alkylresorcinol glycosides is distilled, and after first distilling off the organic solvent and concentrating to an appropriate concentration, a syrup-like product containing 4 alkylresorcinol glycosides as the main component. Is obtained. Furthermore, by drying and pulverizing this by a method such as freeze-drying or spray-drying, a powdered product mainly comprising 4 alkylresorcinol glycosides can be obtained.
  • the purification using the porous synthetic adsorbent of the present invention has a feature that it is possible to simultaneously remove impurities such as water-soluble salts contained in the enzyme reaction solution, which is not only the glycosyl compound.
  • All of the 4 alkylresorcinol glycosides obtained by the synthesis method or enzymatic method as described above are stable and have higher water solubility than the 4 alkylresorcinols themselves.
  • it since it maintains its own physiological activity, it has excellent antibacterial and whitening effects.
  • the expression of this physiological activity is due to the glycosyl power of 4 alkylresorcinol on the skin surface or in the skin, where the glycoside is decomposed into 4 alkylresorcinols and sugar, and the function of 4 alkylresorcinol is exerted. It is thought.
  • a mixture of three types of 4 alkylresorcinol glycosides, which differ in the mode of attachment of the glycosyl group to the hydroxyl group of 4 alkylresorcinol, can be isolated as is, individually isolated, or individually What was isolated can be combined and the composition of this invention can be manufactured. Preferably, only the hydroxyl group at the 1-position is glycosylated.
  • these 4 alkyl resorcinol glycosides can be treated with an alkali, converted into a salt, and contained as a salt in the composition.
  • Preferred salts include, for example, alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt, alkaline earth metal salts such as calcium and magnesium, organic amine salts such as ammonium salt, triethanolamine salt, and triethylamine salt, and lysine.
  • alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt
  • alkaline earth metal salts such as calcium and magnesium
  • organic amine salts such as ammonium salt, triethanolamine salt, and triethylamine salt
  • Preferred examples include basic amino acid salts such as salts and arginine salts.
  • the term “whitening” is used to mean not only a positive effect of whitening the skin but also a preventive effect of suppressing skin blackening. For example, it includes not only the effect of improving pigmentation such as stains and buckwheat but also the effect of suppressing pigmentation.
  • the amount of the 4-alkylresorcinol glycoside or a salt thereof in the composition of the present invention is an amount that exhibits the physiological functions of the 4-alkylresorcinol glycoside such as antibacterial, whitening, and antioxidant.
  • the limit is usually used at 0.001% to 10%, 0.05% to 5% is preferred 0.1% to 2% is more preferred 0.05 to 1% is particularly desirable That's right. If it is within the range, 4 alkylresorcinol glycosides can be easily blended, and excellent effects, especially whitening, has an antioxidant effect.
  • the composition containing the 4 alkylresorcinol glycoside of the present invention refers to pharmaceuticals, quasi drugs, cosmetics, miscellaneous goods and the like.
  • 4 alkylresorcinol glycosides have excellent antibacterial action, whitening action, antioxidant action, etc., and therefore can be advantageously blended in a composition for external use for whitening purposes.
  • cosmetics especially quasi drugs.
  • quasi-drugs it is safer and more effective to display the effect, precautions for use and quasi-drugs, and clarify the usage. It is preferable for the performance.
  • Such a medicinal effect may be determined according to the characteristics of the active ingredient blended in the external preparation for skin.
  • the 4-alkylresorcinol glycoside which is an essential component of this external preparation for skin, has a whitening action based on a melanin production inhibitory action and an anti-inflammatory action. It is also possible to display a whitening effect based on the action and an anti-inflammatory action.
  • components that are usually used in formulations such as cosmetics, quasi-drugs, and pharmaceuticals, that is, water (purification) Water, hot spring water, deep sea water, etc.), alcohols, oils, surfactants, metal soaps, gelling agents, powders, water-soluble polymers, carbohydrates, film-forming agents, resins, UV protection agents, inclusions Compound, Antibacterial agent, Preservative, Fragrance, Dye, Deodorant, Salt, PH adjuster, Coolant, Animal or microbial extract, Plant extract, Blood circulation promoter, Anti-inflammatory agent, Astringent, Anti Seborrheic agents, whitening agents, active oxygen scavengers, cell activators, moisturizers, chelating agents, keratolytic agents, enzymes, hormones, vitamins, minerals, etc. can be included. Specific examples thereof include the following components.
  • Alcohol is used for the purpose of dissolution, refreshing feeling, antiseptic, moisturizing and the like.
  • Alcohols include lower alcohols such as ethanol and isopropanol, and glycerin, diglycerin, polyglycerin, ethylene glycol, diethylene glycol, propylene glycol, dipropylene glycol, 1,3-butylene glycol, pentylene glycol, and polyethylene glycol.
  • polyalcohols such as isopentyldiol
  • sugar alcohols such as sorbitol, maltitol, maltotriitol, maltotetriitol, and maltopentitol.
  • the oil agent is used as a component of the base material for the purpose of improving usability or feeling of use. Any of those used in normal cosmetics can be used. For example, whether it is a natural oil or a synthetic oil, or whether it is a solid, semi-solid, or liquid. It doesn't matter about the properties. As oils, hydrocarbons, waxes, fatty acids, higher alcohols, ester oils, silicone oils, fluorine oils, etc. can be used. .
  • ester oils such as cetyl triethyl 2-ethylhexylate, pentaerythritol tetra-2-ethylhexylate, corn oil, olive oil, rapeseed oil, cottonseed oil, coconut oil, palm oil, Liquid lanolin, hydrogenated coconut oil, hydrogenated oil, mole, hydrogenated castor oil
  • Olive oil castor oil, jojoba oil, mink oil, virgin demian nut oil, apricot oil, persic oil, safflower oil, castor oil, apogad oil, meadowweed oil, camellia oil, almond oil
  • Oils derived from plants and animals such as sesame oil, sesame oil, borage oil, shea butter; waxes such as beeswax, carnauba wax, candelilla wax, ibotarou, lanolin, reduced lanolin, hard lanolin, jojoba wax, gay wax; pristane, Hydrocarbons such as ozokerite, liquid paraffin, squalane, ⁇ serine, ceresin, and microcrystalline wax; higher fatty acids such as oleic acid, isostearic acid, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, behenic acid, and undecylenic acid ; Higher alcohols such as cetyl alcohol, stearyl alcohol, isostearyl alcohol, behenyl alcohol, otatildodecanol, myristyl alcohol, cetosteryl alcohol; cetyl isooctanoate, isopropyl myristate, Hexyldec
  • Red 202 whose surface may be treated May be raked red 202, red 228, red 226, yellow 4, blue 404, yellow 5, red 505, red 230, red 223, orange 201, red 213, yellow 204, yellow Organic dyes such as Color No. 203, Blue No. 1, Green No. 201, Purple No. 201, Red No. 204; organic powders such as polyethylene powder, polymethyl methacrylate, nylon powder, organopolysiloxane elastomer, etc.
  • Vitamin B such as vitamin B12, Vitamin B15 or its derivative
  • Vitamin B such as vitamin B12, Vitamin B15 or its derivative
  • ⁇ -tocopherol, ⁇ -Tocopherol, y-tocopherol vitamin E such as vitamin E acetate, vitamin D, vitamin H, pantothenic acid, pantethine, pyro-quinoline quinone, vitamin P such as vitamin P and their derivatives, etc. Preferred examples can be given.
  • Usable UV protection agents include para-aminobenzoic acid UV absorbers, anthranilic acid UV absorbers, salicylic acid UV absorbers, cinnamic acid UV absorbers, benzophenone UV absorbers, and sugar UV absorbers. An agent can be mentioned.
  • paraaminobenzoic acid and its ester octyl salicylate, homomethyl salicylate, methyl 2,5 diisopropylcinnamate, cinoxalate, diparamethoxyketic acid mono-2-ethyl hexyl hexylate, dihydroxydimethoxybenzophenol
  • Non-dihydroxydimethoxybenzophenone sodium disulfonate dihydroxybenzophenone, 1- (3,4 dimethoxyphenol) -1,4 dimethyl-1,3-pentanedione, dimethico-ethyl benzomalonic acid and its esters, dimethoxybenzylidene Dioxoimidazolidine 2-ethylhexyl propionate, tetrahydroxybenzophenone, 2, 4, 6 tris "one (2-ethylhexyloxycarboxyl) -lino" 1, 3, 5 triazine, trimethoxy key Methyl bis (trimethyl bis
  • Water-soluble polymers and carbohydrates are used for stabilizing the system, for improving usability or feeling of use, and for obtaining a moisturizing effect.
  • water-soluble polymers that can be used include plant polymers such as pullulan, carrageenan, pectin, agar, locust bean gum, cellulose polymers such as methylcellulose, carboxymethylcellulose, and hydroxypropylcellulose, and sodium alginate.
  • Examples include bulge polymers such as alginic acid polymers and carboxyvinyl polymers.
  • saccharide examples include maltose, manoletotriose, manoletotetraose, trenosulose, a saccharide derivative of trehalose, and a cyclic saccharide such as a cyclic tetrasaccharide.
  • antiseptic and antibacterial agent examples include benzoic acid, sodium benzoate, paraoxybenzoic acid ester, benzalkonium chloride, phenoxyethanol, isopropylmethylphenol and the like.
  • the 4-alkylresorcinol glycoside of the present invention has an excellent whitening effect alone.
  • the composition of the present invention may be used in combination with a conventionally known whitening agent.
  • the whitening agent is used for the purpose of preventing skin darkening caused by sunburn and the like, and spots and freckles caused by pigmentation.
  • whitening agents that can be used include arbutin, linoleic acid, 5,5'-dipropylbisphenol-2,2'-diol, vitamin C and its derivatives, vitamin E and its derivatives, glycyrrhizic acid and Its derivatives, tranexamic acid and its derivatives, tetrahydrotalcuminoids, placenta extract, indigo extract, ripe mitsu extract, licorice extract, age extract, argon extract, seaweed extract, cucumber extract, cuckoo extract , Gokahi extract, rice bran extract, wheat germ extract, saicin extract, hawthorn extract, sunpens extract, shirayuri extract, peonies extract, sempukuka extract, soybean extract, tea extract, molasses Extract, Beechlen extract, Grape extract, Hop extract, Maikai extract, Mokka extract, Yukinoshita extract, Yokui Down extract, mention may be made of royal jelly extract or the like.
  • Anti-inflammatory agents are used for the purpose of suppressing inflammation such as hot flashes and erythema on the skin after sunburn.
  • Anti-inflammatory agents include io and its derivatives, glycyrrhizic acid and its derivatives, Lithyl retinoic acid and its derivatives, salty lepocalcun, aloe extract,retea extract, ashtapa extract, al-force extract, indigo extract, inchinko extract, nettle extract, obata extract, hypericum extract, force mitre Examples include extract, licorice extract, kingfish force extract, tareson extract, comfrey extract, salvia extract, sicon extract, perilla extract, birch extract, gentian extract and the like.
  • the cell activator is used for the purpose of improving rough skin.
  • the cell activator that can be used in the composition of the present invention include power fin, chicken crown extract, shell extract, shell extract, royal jelly, silk protein and its degradation product, or derivatives thereof, ratatopherin or Degradation products, mucopolysaccharides such as chondroitin sulfate and hyaluronic acid or their salts, collagen, yeast extract, lactic acid bacteria extract, bifidobacteria extract, fermentation metabolic extract, yew extract, barley extract, senpri extract Organic acid such as glycerin, citric acid, malic acid, tartaric acid and succinic acid, and derivatives thereof.
  • the active oxygen scavenger is used for the purpose of suppressing oxidative damage such as suppression of lipid peroxide production.
  • active oxygen scavengers include superoxide dismutase, mannitol, taercetin, catechin and its derivatives, rutin and its derivatives, bopi extract, coconut extract, melissa extract, rakan extract, retinol and carotenoid Vitamin A and its derivatives, vitamin B and its derivatives such as thiamine, riboflavin, pyridoxine and nicotinic acid, vitamin C and its derivatives, vitamin P and its derivatives such as rutin, hesperidin and naringin, vitamin E such as tocopherol And its derivatives, dibutylhydroxytoluene, butylhydroxyl-sol and the like.
  • moisturizing agents include proteins such as elastin and keratin or derivatives thereof, hydrolysates and salts thereof, amino acids such as glycine, serine, aspartic acid, glutamic acid, arginine and theanine and derivatives thereof, sorbitol, Erythritol, trehalose and its derivatives, inositol, glucose, maltose, sucrose and its derivatives, dextrin, cyclodextrin, cyclic tetrasaccharide and their derivatives, saccharides such as honey, D panthenol and its derivatives, urea, phospholipid, Ceramide, Oren extract, Shobu extract, Zi extract, Senkiyu extract, Zeaoi extract, Tachijiakousou extract Products, dokudami extract, hamamelis extract, bodaiju extract, marronnier extract, quince extract and the like.
  • proteins such as elastin and keratin or derivatives thereof, hydroly
  • the form of the composition for external use of the skin of the present invention is not particularly limited.
  • lotion, essence, milky lotion, cream, lotion, knock, cosmetic liquid, cleaning agent, makeup cosmetics, hair care cosmetics, bath preparations examples thereof include dispersions, ointments, liquids, aerosols, patches, poultices, and replenishers.
  • the purpose of use is generally known for external preparations for skin, such as basic skin care and makeup, and can be applied to other uses.
  • Particularly preferred is an emulsified essence preparation or cream preparation that can fully utilize the effects of the present invention.
  • the production method is not particularly limited, and can be produced by conventional methods.
  • the medium was removed from each bottle, washed with PBS (phosphate buffered saline), treated with trypsin, and the cells were detached from the culture bottle to obtain cell suspensions.
  • the cell suspension was centrifuged to collect cells. The number of cells obtained and the degree of melanin pigmentation were observed and visually observed according to the following criteria to evaluate cytotoxicity and melanin production inhibitory action. The results are shown in Table 3.
  • glycoside which is the compound of the present invention, has the same melanogenesis inhibitory action as aglycone. It can also be seen that cytotoxicity is reduced by glycosides.
  • 4-n-Butylresorcinol was prepared based on the method described in Example 1 of GB 1,581,428. 4 g of 4-n-butylresorcinol and 80 g of a-cyclodextrin (hereinafter sometimes abbreviated as “ ⁇ -CD”) were dissolved in 800 mL of 50 mM acetate buffer (pH 5.5, containing 2 mM CaCl). Later, Bacillus stearothermophile
  • reaction product After stopping the reaction by heating at 100 ° C for 10 minutes, the column (7 « ⁇ ⁇ X 39cm, 1) packed with porous synthetic adsorbent (Mitsubishi Kasei Co., Ltd., trade name“ Diaion HP-20 ”) 5L). The column was washed with water, and 35% ethanol was passed through to elute the fraction adsorbed on the column. The obtained fraction was concentrated to dryness, suspended and dissolved in 96% ethanol, and then insoluble carbohydrates were removed. After the solvent in the supernatant is distilled off, the sample is dissolved again in water, freeze-dried, and a powder sample containing a reaction product by glycosyltransferase (hereinafter sometimes abbreviated as “reaction product”). 3.
  • reaction product a powder sample containing a reaction product by glycosyltransferase
  • Tube Lens Offset — 10. 0V
  • reaction product a reaction product a
  • reaction product b reaction product b
  • the glucose residue is in the pyranose type, and the chemical shift of anomeric carbon to chemical shift ⁇ 97.
  • reaction product a is chemically 3—O—a—D—Curcopyranosyl 4-N-butylresorcinol represented by Formula 1 and l—O—a D darcobilanosyl 4-n-butylresorcinol where reaction product b is represented by Formula 2 Tells you that you have
  • the mass of these reaction products corresponds to the molecular weight of butylresorcinol in which two molecules of glucose are bound to butylresorcinol, and, as shown in Chemical Formula 1, 4 n-butylresorcinol by glycosyltransferase is used.
  • 4 n-butyl resorcinol used in Example 7 10 mg
  • 4 n-butylresorcinol used in Example 7 used as a substrate for preparing glycosides in Example 7, and D-ODS in Experiment 1 — 5 — L-O-a-D-Darcopyranosyl— 4— n-butylresorcinol (reaction product b) 10 mg, prepared by column chromatography using S5, and 3— 0— ⁇ — D Darcoviranosyl 4 — ⁇ —Butyl resorcinol (reaction product a) 10 mg each, each with deionized water, stirred for 2 to 3 minutes with a vortex mixer and left to stand until insoluble matter is no longer visible. was determined as the solubility of each compound. The results are shown in Table 6.
  • Freeze-dried powder containing the reaction product prepared in Example 7 (1 O—a D darcopyranosyl 4-n-butylresorcinol and 3-O—a-D-darcopyranosyl 4-n Contains a small amount of 4-n-butylresorcinol glycoside in which two or more darcosyl residues are bonded to butylresorcinol: hereinafter referred to as “4-n-butylresorcinol glycoside-containing powder”), 1 -0- a D Dalcoviranosi luo 4— n-Butyl resorcinol and 3-O— a—D—Darcopyranosyl 4— n— Butyl resorcinol 4 n butyl resorcinol glycoside preparations and 4 n used in Example 7 A test for confirming the whitening effect using butyl resorcinol was conducted as follows.
  • mice B16 melanoma cells were cultured, and after removing the culture supernatant, either 4-n-butylresorcinol or three types of 4-n-butylresorcinol glycoside preparations were added. Then, 4 n-butylresorcinol or 4 n-butylresorcinol glycoside was added to a medium prepared so as to have the concentrations shown in Table 7, and further cultured for 72 hours. The cells are collected, packed in a glass tube and observed for color tone, and the degree of whitening based on the melanin production inhibitory action is determined according to the following criteria. The results are shown in Table 7.
  • whitening effect was similarly determined using kojic acid (2.5 mM) used as a skin whitening agent as a skin whitening agent.
  • a portion of the collected cells is stained with a dye that stains only living cells (Alamable I), and the percentage of viable cells stained with the dye that is incorporated into all cells is determined. It is shown in Table 7 as (%).
  • the concentration of 4 n-butylresorcinol glycoside in the powder containing 4 n-butylresorcinol glycoside used in the following experiment was calculated based on the molar extinction coefficient of resorcinol at 280 nm.
  • a test for confirming the whitening effect of 4n butylresorcinol glycoside was performed as follows. That is, in the same manner as in Test Example 2, mouse B16 melanoma cells were cultured for 24 hours, the culture supernatant was removed, and a medium containing each test sample to the concentration shown in Table 8 was added. The culture was further continued for 72 hours. Cells are collected, packed in a single tube, and the color tone is observed. The degree of whitening effect based on the melanin production inhibitory effect is determined according to the following criteria, and the results are shown in Table 8.
  • 4-n-butylresorcinol glycoside-containing powder preparation is composed of L-ascorbic acid sodium salt, potassium 4-methoxysalicylate, kojic acid, arbutin, tranexamic acid, ellagic acid, A synergistic whitening effect was observed when used in combination with linoleic acid, power mitre extract, and tetrahydrocurcumin.
  • TSA value thiobarbituric acid value
  • 4-n-Butylresorcinol was prepared based on the method described in Example 1 of GB 1,581,428. After dissolving 20 g of 4-n-butylresorcinol in 800 mL of 50 mM acetate buffer (pH 5.5), 400 g of dextrin (Matsuya Chemical Co., Ltd., trade name “Pinedetas #l”) was added and stirred. Thereafter, acetate buffer was added to make up a total volume of 4000 mL.
  • reaction product a and reaction product b were subjected to MS analysis and NMR analysis in the same manner as in Test Example 3.
  • reaction product a was 3-O-a- It was confirmed that D-darcopyrano silu 4-n-butylresorcinol and reaction product b was l-O- ⁇ -D-darcobilanosyl 4- ⁇ -butylresorcinol.
  • the amount produced was smaller than that of reaction product a and reaction product b, 1, 3-O-a-D-darcoviranosyl 4-n -Production of a substance corresponding to butylresorcinol was confirmed.
  • Freeze-dried powder containing 4 n-ptylresorcinol glycoside prepared in Example 7 Sample, reaction product a and reaction product b prepared by column chromatography using D-ODS-5 S5 in Example 7 3 parts by mass (freeze-dried sample is 3 parts by mass as 4 n-butyl resorcinol glycoside), 5 parts by mass of ethanol, 5 parts by mass of glycerol and 87 parts by mass of purified water as a base And a test solution was prepared. Apply any of these solutions to the inside of the upper arm of 5 volunteers each (15 people in total) in the range of lcm x 1cm 3 times a day for 3 consecutive days, and then the skin condition at the site of application for 1 week Was observed.
  • Example 7 4-n-methylresorcinol, 4-n-ethylresorcino 1-nore, 4-n-hexenoresolezonoresinore, 4-n-heptinorezonoresinole, 4-n-octylresorcinol, 4-n-decylresorcinol and 4-n eicosylresorcinol 5g and dextrin lOOg were used for the transglycosylation reaction, and the reaction solution was filled with a porous synthetic adsorbent (Mitsubishi Kasei Co., Ltd., trade name “Diaion HP-20”) as in Experiment 1.
  • the saccharides were purified using a column prepared by removing 96% ethanol-precipitated saccharides and freeze-dried to prepare these alkylresorcinol glycoside powder preparations (purity: 85% to 91%).
  • lotion cosmetics 1 to 18 which are skin external preparations of the present invention were prepared according to the following formulation. That is, the formulation components were stirred and dissolved at 80 ° C. and stirred and cooled to obtain a lotion. What are these lotions This also had an excellent whitening effect.
  • the combination of each component of the example showing the composition containing the glycoside of the present invention shown below is the ratio of each component to the total mass of the cosmetic (
  • a lotion was prepared by the conventional method using the following formulation.
  • This product was an excellent cosmetic product that, when applied to the skin, whitens the skin and gives the skin a moisturizing effect.
  • this product contains 4-n-butylresorcinol glycoside, the storage stability was also good.
  • a two-layer lotion was prepared by a conventional method using the following formulation.
  • This product was an excellent cosmetic product that, when applied to the skin, whitens the skin and gives the skin wrinkles.
  • this product contained 3-O-a-D monodalcopyranosyl 4-n-butyl resorcinol, the storage stability was also good.
  • An emulsion was prepared by a conventional method using the following formulation.
  • This product was an excellent cosmetic product that, when applied to the skin, whitens the skin and gives wrinkles to the skin.
  • this product contains 1 -0-a D-darcobilanosyl 4-n-butylresorcinol, which is free from starch generation and browning, and thus has good storage stability.
  • An emulsion was prepared by a conventional method using the following formulation.
  • This product was an excellent cosmetic product that, when applied to the skin, whitens the skin and gives wrinkles to the skin. In addition, this product does not show browning, etc., if starch is generated, and 3—O—a—D—Dalcobilanosyl-4— Because it contains n-butylresorcinol! /, storage stability was also good.
  • the composition of the present invention can be used in various applications such as cosmetics, quasi drugs, and external medicines. Among them, it is particularly useful as a cosmetic because it has excellent anti-acid effect and Z or whitening effect.
  • the 4-n-alkylresorcinol glycoside of the present invention is highly water-soluble and has an excellent action and effect, it can be used for various uses, preferably as an external skin whitening composition.

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Abstract

　４－アルキルレゾルシノール類の欠点を解消し、水溶性及び安定性に優れ、実質的に無味、無臭で、刺激性もなく、毒性の懸念もなく、加えて、生体内で生理活性を充分発揮しうる４－アルキルレゾルシノール誘導体を提供することを課題とし、４－アルキルレゾルシノール類の水酸基の何れか一方、或いは、両方にグリコシル基が結合した４－アルキルレゾルシノール配糖体を提供することにより解決する。  

Description

明 細 書
アルキルレゾルシノール配糖体とその製造方法並びに用途
技術分野
[0001] 本発明は、新規 4 アルキルレゾルシノール配糖体と、その製造方法、並びに用途 に関し、更に詳細には、 4 アルキルレゾルシノール又はその誘導体 (配糖体を除く 、以下本明細書では 4 アルキルレゾルシノールとその誘導体 (配糖体を除く）を併 せて「4 アルキルレゾルシノール類」という場合がある。 )に、グリコシル基が 1個又は 2個結合している 4 アルキルレゾルシノール配糖体、及び、その製造方法、並びに 、この 4 -アルキルレゾルシノール配糖体を含有せしめた組成物に関する。
背景技術
[0002] 4 アルキルレゾルシノール類は、皮膚色素沈着症の予防や改善（特開 2001— 2 06813号公報）、美白（特開 2002— 179516号公報）、搔痒抑制（特開 2001— 30 2506号公報)等に有効で、皮膚外用組成物の成分として利用できることや、にきび の発生や悪化に関与する細菌に対して抗菌作用を有することから、にきび抑制化粧 品の成分として利用できること (特許第 2875374号公報)も知られており、その利用 範囲は極めて広ぐ 4 n—ブチルレゾルシノールは、既に医薬部外品の有効成分と して皮膚外用剤に使用されて 、る。
[0003] しかし、 4 アルキルレゾルシノール類は、一般に水に対する溶解度が低く扱いにく い上に、溶解後の安定性が悪ぐさらに、刺激性がある等、数々の問題点があり、 4 アルキルレゾルシノール類を医薬品、医薬部外品、化粧料などとして使用する際に 不都合であり、これらを安定化、水溶化及び低刺激化された誘導体で用いる方法の 開発が望まれている。
[0004] また、アルキルレゾルシノールの経皮吸収性を改善する目的で、 4位のアルキル基 を変換する試みがなされ、 4ーシクロペンチルレゾルシノール、 4ーシクロへキシルレ ゾルシノール（例えば、特表 2005— 527534号公報、特表 2005— 526093号公報 、特開平 11— 152203号公報を参照）等の環状アルキル基を有するレゾルシノール 誘導体、 4一（1 メチルプロピル）レゾルシノール、 4一（1ーメチルブチル）レゾルシ ノールなどの分岐アルキル基を有するレゾルシノール誘導体が開発されて 、る（例え ば、特開 2006— 124358号公報、特開 2006— 124357号公報を参照）。これらの 化合物は、メラニン産生抑制作用が低くなるものの、経皮吸収性が向上し、有用な有 効成分と期待されたが、安定性が、直鎖アルキル基のものに比して、損なわれ、この 安定性を確保する技術の開発が望まれて 、た。
[0005] さらに、レゾルシノールの水溶性を向上するために、特公平 7— 36759号公報及び 特開 2001—46096号公報には、糖転移酵素を利用した配糖体の製造方法が提案 されており、特開 2002— 179516号公報にはアルキルレゾルシノールの誘導体を含 有する美白用組成物が記載されている。し力しながら、未だこれらのアルキルレゾル シノール類を利用する際の障害となっている欠点を解決する有効な手段の開発はな されておらず、上記した特許文献には、何れもアルキルレゾルシノール配糖体に関 する記載は認められない。
[0006] なお、 4 アルキルレゾルシノールの配糖体及び Z又はそのァシル化体の製造原 料である、 4 アルキルレゾルシノールについては、その製造は既に知られている（ 例えば、特開平 2— 49715号公報、 Lille, J. ； Bitter, L. A. ; Peiner, V.
Trudy― Nauchono― Issledovatel skn Institut Slantsev (19D9) , No . 18, 127— 34を参照）。フエノール性物質の配糖ィ匕の方法については、例えば、 CGTase (シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ） [EC 2. 4. 1. 19]、 α ァ ミラーゼ [EC 3. 2. 1. 1]、 j8—アミラーゼ [EC 3. 2. 1. 2]、ダルコアミラーゼ [EC 3. 2. 1. 3]、 α—ダルコシダーゼ [EC 3. 2. 1. 20]、 j8—ガラクトシダーゼ [EC 3. 2. 1. 23]等の細菌類の酵素を利用した糖転移反応が知られている（例えば、 特開 2004— 115392号公報、特開 2001— 238673号公報を参照）。
発明の開示
[0007] 本発明は、アルキルレゾルシノール類の欠点を解消し、水溶性及び安定性に優れ 、実質的に無味、無臭で、刺激性もなぐ毒性の懸念もなぐ力 tlえて、生体内で生理 活性を充分発揮しうるアルキルレゾルシノール誘導体を提供することを課題とする。
[0008] 本発明者は、上記課題を解決するために鋭意研究した結果、アルキルレゾルシノ ール類に対して、グリコシル基が 1個又は 2個 a 結合したアルキルレゾルシノール 類の配糖体 (以下総称して、「アルキルレゾルシノール配糖体」という場合がある。）が 、水溶性、安定性に優れ、実質的に無味、無臭で、刺激性も少なぐ毒性の懸念もな ぐ生体内で容易に加水分解され、アルキルレゾルシノール類本来の生理活性を発 揮することを見出した。また、有機合成法、又は、酵素法、なかでも、糖転移酵素を使 用した酵素法により、大量安価にアルキルレゾルシノール配糖体を製造する方法を 見出し、さらに、このアルキルレゾルシノール配糖体を含有せしめた組成物を確立し て、本発明を完成した。
[0009] 本発明のアルキルレゾルシノール配糖体は、アルキルレゾルシノール類に比して安 定で、高い水溶解性を示し、しカゝも、無臭で、刺激性も少なぐ毒性の懸念もなぐ生 体内で容易に加水分解され、アルキルレゾルシノール類本来の生理活性を発揮する 。また、本発明のアルキルレゾルシノール配糖体は、医薬品、医薬部外品、化粧料等 の組成物へ高濃度に配合することができ、アルキルレゾルシノール類の持つ美白効 果ゃ抗感受性疾患に対する治療効果に優れた組成物を製造することができる。さら に、本発明のアルキルレゾルシノール配糖体の製造方法は、アルキルレゾルシノー ル類と、とりわけ、安価な澱粉部分分解物とから、大量安価にアルキルレゾルシノー ル配糖体を製造することができる。
図面の簡単な説明
[0010] [図 1]本発明の 4 n—ブチルレゾルシノール配糖体の UV吸収スペクトルを示す図 である。
[図 2]糖転移酵素を使用した糖転移反応により調製した本発明の 4— n—プチルレゾ ルシノール配糖体含有標品の HPLC (CAPCELLPAK C18 AG120カラム使用 )の溶出パターンを示す図である。
[図 3]本発明の反応生成物 a (3— 0— a D ダルコビラノシルー 4—n—ブチルレ ゾルシノール）及び応生成物 b (1 -0 - a -D-ダルコビラノシル—4—n ブチル レゾルシノール）の MSスペクトルを示す図である。
[図 4]本発明の反応生成物 a (3— O— a—D—ダルコビラノシル 4—n—ブチルレ ゾルシノール）の1 H— NMR ^ベクトルを示す図である。
[図 5]本発明の反応生成物 a (3— 0— a D ダルコビラノシルー 4—n—ブチルレ ゾルシノール）の C— NMR ^ベクトルを示す図である。
[図 6]本発明の反応生成物 a (3— 0— a D ダルコビラノシルー 4—n—ブチルレ ゾルシノール）の H— H COSYスペクトルを示す図である。
[図 7]本発明の反応生成物 a (3— 0— a D ダルコビラノシルー 4—n—ブチルレ ゾルシノール）の C—H COSYスペクトルを示す図である。
[図 8]本発明の反応生成物 b (l— 0— a D ダルコビラノシルー 4—n—ブチルレ ゾルシノール）の1 H—NMR ^ベクトルを示す図である。
[図 9]本発明の反応生成物 b (l— 0— a D ダルコビラノシルー 4—n—ブチルレ ゾルシノール）の13 C—NMR ^ベクトルを示す図である。
[図 10]本発明の反応生成物 b (l— 0— a D ダルコビラノシルー 4—n—ブチルレ ゾルシノール）の H— H COSYスペクトルを示す図である。
[図 11]本発明の反応生成物 b (l— O— a—D—ダルコビラノシル 4—n—ブチルレ ゾルシノール）の C—H COSYスペクトルを示す図である。
[図 12]本発明の反応生成物 b (l— 0— a D ダルコビラノシルー 4—n—ブチルレ ゾルシノール）の遠隔 C—H COSYスペクトルを示す図である。
[図 13]図 12の反応生成物 b (l— 0— a D—ダルコビラノシルー 4—n—ブチルレゾ ルシノール）の遠隔 C—H COSYスペクトルの一部を拡大した図である。
発明を実施するための最良の形態
[0011] 本発明でいう 4 アルキルレゾルシノール配糖体は、下記一般式 1に示す 4 アル キルレゾルシノール類の R、Rの何れか一方にグリコシル基が結合した 4 アルキル
1 2
レゾルシノール配糖体であってもよぐまた、グリコシル基力 R及び Rの 2箇所に、
1 2
各々結合した 4 アルキルレゾルシノール配糖体であってもよぐこれらの配糖体の 2 種以上の混合物であってもよ 、。
[0012] [化 2] 一般式 1
Figure imgf000006_0001
(但し、式中 R、 Rはそれぞれ独立に水素原子またはグリコシル基を表し、且つ、 R
1 2 1
、 Rの少なくとも何れかはグリコシル基であり、 Rは炭素数 3乃至 20の環状構造又は
2 3
分岐構造を有するアルキル基、或いは、炭素数 1乃至 20の直鎖構造を有するアルキ ル基を表す。 )
本発明の 4 アルキルレゾルシノール配糖体は、そのアルキル基の炭素数が、 3乃 至 20、望ましくは、 4乃至 18のアルキル基で置換された環状又は分岐構造を有する ものであってもよく、 1乃至 20の非置換の直鎖構造を有するものであってもよい。前 記環状構造はアルキル基やアルケニル基の脂肪族に限らず、例えばフ ニル基のよ うな芳香族基であっても、レゾルシノールに直接結合する部分がアルキル基である限 りに於いては包含する。又、炭素数はこの様な芳香族環状置換基が存する場合には 、芳香族置換基の炭素数も含めて数える。この環状又は分岐構造を有するアルキル 基としては、例えば、シクロペンチル基、シクロへキシル基、 2—フエ-ルェチル基、ィ ソォクチル基、アミル基、イソアミル基、イソブチル基、ターシャリーブチル基、 1ーメチ ルプロピル基、 1 メチルブチル基、 1 ェチルプロピル基、 1ーェチルー 2—メチル プロピル基、 1 イソプロピル 2 メチルプロピル基、 1 ジメチルー 3—メチルブチ ル基、 1ーブチルペンチル基、 1 イソブチルー 3 メチルブチル基、イソプロピル基 、イソブチル基、イソアミル基、 2—メチルへキシル基又はイソステアリル基などが好適 に例示できる。これらの内、好適なものは、環状アルキル基を有するものとしては、毒 性の低いシクロプロピル基が好ましぐ分岐アルキル基を有するものとしては、効果と 毒性のバランスの良 、、 1 メチルプロピル基乃至は 1 メチルブチル基が好まし ヽ 。また、本願発明の効果が著しい点では、 1—ェチルプロピル基乃至は 1—イソプロ ピル 2—メチルプロピル基力 著し 、安定性の向上が得られるので好まし 、。
[0014] また、非置換の直鎖構造を有するアルキル基としては、例えば、メチル基、ェチル 基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、へキシル基、ヘプチル基、ォクチル基、ノニ ル基、デシル基、ゥンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデ シル基、へキサデシル基、ヘプタデシル基、ォクタデシル基、ノナデシル基及びエイ コシル基が挙げられる。これらの内、炭素数が 1乃至 7のアルキル基を有するものがメ ラニンの生成抑制作用ゃ抗炎症作用の強さの点から望ましぐブチル基が特に望ま しい。
[0015] さらに、本発明の 4 アルキルレゾルシノール配糖体には、そのアルキル基の水素 原子の 1個以上が、メチル基以外の炭化水素基、カルボキシル基ゃケトン基をはじめ とする酸素原子を含む置換基、アミノ基、ニトロ基をはじめとする窒素原子を含む置 換基、スルホン基ゃスルヒド基などの硫黄原子を含む置換基、フッ素基、クロ口基など のハロゲン基等で置換されたものも含まれる。また、これらの 4—アルキルレゾルシノ 一ル配糖体の中で、光学異性体の存在する場合には、抗菌作用や美白作用等の 4 アルキルレゾルシノール類の生理活性を有している限り、その一方であっても、或 いは、両者が混在するものであってもよい。
[0016] 本発明の 4 アルキルレゾルシノール配糖体の、アルキルレゾルシノールの 2つの 水酸基に結合したグリコシル基とは、合成法或いは酵素法などにより、 4 アルキル レゾルシノールに結合させることが可能なものであれば、制限はなぐ例えば、ダルコ シル基、ガラクトシル基、フラクトシル基、ァラビノシル基、マルトシル基、イソマルトシ ル基、セルビオシル基、ラフイノシル基、ゲンチオビオシル基、コージビオシル基、ラミ ナリビオシル基、 -ゲロシル基、サンブビオシル基、ネオヘスペリドシル基、セロトリオ シル基、グリセロール基又はゲンチォトリオシル基力 選ばれる何れ力 1種又は 2種を 例示することができる。なかでも、製造の容易さの点からは、ダルコシル基や、マルト シル基をはじめとするマルトオリゴシル基が望ましぐダルコシル基が特に望まし 、。
[0017] 本発明の 4 アルキルレゾルシノール配糖体の由来や製造方法に制限はなぐ有 機合成法、発酵法、酵素法などの方法やこれらの方法を適宜組み合わせて製造した ものでもよい。具体的には、ァシルイ匕糖を過酸ィ匕銀触媒の存在下で 4—アルキルレゾ ルシノールと縮合させる有機合成法や、糖転移酵素を利用した酵素法を好ましく例 示することができる。なかでも、 4—アルキルレゾルシノール類と α グリコシル化合 物とを含む系に、糖転移酵素を作用させる酵素法は、 4 アルキルレゾルシノール類 と安価な澱粉やその部分加水分解物等から、大量安価に 4 アルキルレゾルシノー ル配糖体を製造できることから、経済性に優れ、工業的に有利に利用できる。
[0018] 本発明の 4 アルキルレゾルシノール配糖体の製造に使用する 4 アルキルレゾル シノール類の由来や製造方法に制限はなぐ例えば、レゾルシノールと対応するカル ボン酸を塩ィ匕亜鉛の存在下縮合し、亜鉛アマルガム Ζ塩酸で還元する方法、レゾル シノールと対応するアルコールとを 200乃至 400°Cの高温下で縮合させる方法 (例え は、 Lille, J. ； Bitter, L. A. ； Pemer, V. Trudy― Nauchono― Issledo vatel' skii Institut Slantsev (1969) , No. 18, 127— 34を参照）、飽和 カルボン酸とレゾルシノールとをアルミナ触媒を使用して 200°C乃至 400°Cの高温下 で反応させて得る方法 (例えば、英国特許第 1, 581, 428号明細書参照)等によつ て容易に得ることができるし、市販品を使用してもよ 、。
[0019] 4 アルキルレゾルシノール類の製造方法について、さらに、具体的に説明すると、 例えば、イソォクチル基ゃイソステアリル基を導入するのであれば、レゾルシノールと イソオクタン酸或 、はイソステアリン酸を塩ィ匕亜鉛の存在下で縮合すればょ 、し、シク 口ペンチノレアノレコーノレ、シクロへキシノレアノレコーノレ、フエネチノレアノレコーノレ、 2—ェチ ルへキサノール、イソアミルアルコール、ァミルアルコール、イソブチルアルコール、タ ーシャリーブチルアルコールをレゾルシノールと 200乃至 300°Cで縮合させれば、 4 —シクロペンチルレゾルシノール、 4—シクロへキシルレゾルシノール、 4 イソォクチ ルレゾルシノール、 4—アミルレゾルシノール、 4—イソアミルレゾルシノール、 4—イソ ブチルレゾルシノール、 4 ターシャリーブチルレゾルシノール等が得られる。更に、 1位にメチル基を有するアルキル基を導入する場合には、特開 2006— 124358号 公報、特開 2006— 124357号公報に記載の方法に従えば良ぐァセトフヱノンにプ 口ピルクロリドゃブチルクロリドから誘導したグリニャール試薬を反応させれば、 4— (1 ステアリルレゾルシノールが得られる。同様に、 1位にェチル基を導入する場合には、 2', 4'—ジヒドロキシプロピオフエノンを出発物質とし、残存した水酸基を、パラジゥ ムを触媒として接触還元すれば、所望の誘導体が得られる。この方法についても特 開 2006— 124357号公報に記載されている。他の 1位に分岐を有するアルキル基 の導入も、 4 イソブチリルレゾルシノール等を出発物質としてグリニャール反応、必 要に応じてパラジウムを触媒とする接触還元反応を行うことにより得ることができる。 斯くして得られた 4 アルキルレゾルシノールは、 4 n—ブチルレゾルシノールなど の直鎖アルキル置換レゾルシノールに比して、保存における安定性が低 、傾向にあ る。その一例を下記に示す。
[0020] <参考例>
4位水素原子をアルキル基で置換したレゾルシノール誘導体の水溶液の安定性を 比較した。即ち、各種 4 アルキルレゾルシノールの 0. 5%水溶液を作製し、 40°Cで 1ヶ月間保存し、 HPLCにて 4 アルキルレゾルシノールの定量を行った結果を表 1 に示す。 HPLCの条件は、カラム： ODS 4. 6mm X 150mm,カラム温度： 40°C、 検出：紫外部 230nmの吸収、移動相： 25%ァセトニトリル— 15mMテトラプチルアン モ-ゥムブロミド加 15mMリン酸緩衝液 (pH6. 5)、流速： lml/分であった。保存後 の定量値を、製造直後の定量値で除し、 100を乗じた値を残存率として求めた。
[0021] [表 1]
4位のアルキル基の種類 残存率 （％)
n ブチル基 99. 8
シクロペンチル基 92. 3
シク口へキシル基 92. 5
2—フヱニルェチル基 95. 1
アミル基 94. 4
イソアミル基 93. 9
ターシャリ一ブチル基 91. 2
イソブチル基 95. 7
イソステアリル基 94. 1
1 一メチルプロピル基 93. 7
1 一ェチルプロピル基 92. 2
1—イソプロピル—
2—メチルプロピル基 93. 1
1 一メチルブチル基 95. 9
[0022] 表 1から明らかなように、アルキル基として分岐アルキル基や環状アルキル基を採 用すると、安定性が低くなることが判明した。
[0023] 本発明の 4 アルキルレゾルシノール配糖体の酵素法による製造方法にっ 、て、 具体的に説明すると、配糖体の製造に用いる糖転移酵素は、 4 アルキルレゾルシ ノール類とグリコシル化合物とを含有する溶液に作用させる時、 4 -アルキルレゾル シノール配糖体を生成するものであれば特に制限はない。作用効果の点からは、 a 結合により配糖体を生成する酵素が望ましい。
[0024] 具体的には、例えば、 α—ダルコシダーゼは、ブタの肝臓、ソバの種子などの動植 物組織由来の酵素、または、ムコール（Mucor)属、ぺ-シリウム（Penicillium)属等 に属するカビ、またはサッカロミセス（Saccharomyces)属などに属する酵母などの 微生物を栄養培地で培養し得られる培養物由来の酵素が、シクロマルトデキストリン グルカノトランスフェラーゼは、バチルス（Bacillus)属、クレブシーラ（Klebsiella) 属等に属する細菌培養物由来の酵素が、 OC アミラーゼは、バチルス属などに属す る細菌、または、ァスペルギルス (Aspergillus)属などに属するカビ培養物由来の酵 素等、糖転移活性を有する公知の酵素を適宜選択することができる。これらの糖転移 酵素は、必ずしも精製して使用する必要はなぐ通常は、これら微生物の培養液、そ の濃縮液ゃ塩析物などの粗酵素で本発明の目的を達成することができる。
[0025] これらの酵素は、必要に応じて、公知の各種方法で精製して使用してもよいし、担 体に固定ィ匕して使用してもよい。また、市販の糖転移酵素を利用することもできる。通 常は、経済性の点力 約 5乃至 80時間で反応を終了するように酵素量が選ばれる。 また、固定ィ匕酵素を使用する場合には、バッチ式或いは連続式で酵素反応を行う方 法を適宜選択できる。
[0026] 本発明に用いるグリコシルイ匕合物としては、糖転移酵素を使用して 4 アルキルレ ゾルシノール配糖体を製造する際、当該酵素の基質となるものであればよぐ例えば 、アミロース、デキストリン、シクロデキストリン、マルトオリゴ糖等の澱粉部分加水分解 物、更には、液化澱粉、糊化澱粉等の OC ダルコシルイ匕合物を好適に例示すること ができる。
[0027] 4 アルキルレゾルシノール配糖体の生成を容易にするためには、使用する糖転 移酵素の違いにより、各々の酵素に好適なグリコシルイ匕合物を選択すればよい。
[0028] 糖転移反応を行う際の反応液中のグリコシルイ匕合物の濃度に特に制限はないが、 通常は、 0. 1質量％以上 (以下、本明細書では特に断らない限り質量％を「％」と表 記する。）が用いられ、 0. 1%乃至 70%が望ましぐ 0. 1%乃至 50%の溶液が特に 望ましい。
[0029] また、反応時の 4 アルキルレゾルシノール類含有液は、 4 アルキルレゾルシノー ル類をできるだけ高濃度に含有するものが望ましぐ例えば、 4 アルキルレゾルシノ ール類を、懸濁状で、または、高温で溶解させた、もしくは pH7. 0を越えるアルカリ 側 pHで溶解させた溶液状で、 4 アルキルレゾルシノール類を高濃度に含有する溶 液が適しており、通常は、 4 アルキルレゾルシノール類の濃度が約 0. 005%以上 のものが用いられ、約 0. 01%乃至 10. 0%の溶液が特に望ましい。
[0030] 本発明の反応方法は、 4 アルキルレゾルシノール類の仕込み濃度を高めた状態 で、糖転移酵素を作用させるのが望ましい。例えば、 4—アルキルレゾルシノール類 を懸濁状で反応せしめる場合には、約 0. 1%乃至 2. 0%の懸濁状 4 アルキルレゾ ルシノール類と適量のグリコシル化合物とを含有する 4 アルキルレゾルシノール類 高含有液を、 pH約 4. 0乃至 7. 0とし、糖転移酵素が作用しうるできるだけ高温、具 体的には、約 20°C乃至 90°Cに維持し、これに糖転移酵素を作用させると、 4 アル キルレゾルシノール類が 4 アルキルレゾルシノール配糖体に変換するにつれて懸 濁状 4—アルキルレゾルシノール類が徐々に溶解し、同時に、 4—アルキルレゾルシ ノール配糖体が容易に高濃度で生成する。
[0031] また、例えば、 pH7. 0を越えるアルカリ側でアルキルレゾルシノール類を配糖ィ匕す る場合【こ ίま、 pH約 7. 5乃至 10. 0の水【こ約 0. 20/0乃至 5. 00/0の ノレキノレレ:/ノレシノ 一ル類を加熱溶解し、これに適量の aーグリコシル化合物を溶解して得られるアルキ ルレゾルシノール類高含有液を、糖転移酵素の作用しうるできるだけ高 pH、高温、 具体的には、 pH約 7. 5乃至 10. 0、温度約 20°C乃至 90°Cに維持し、これに糖転移 酵素を作用させるとアルキルレゾルシノール配糖体を容易に、高濃度に生成する。こ の際、アルカリ性溶液中のアルキルレゾルシノール類は、分解を起しやすいので、こ れを防ぐため、できるだけ遮光、嫌気下に維持するのが望ましい。必要ならば、 L- ァスコルビン酸、エリソルビン酸などの酸ィ匕防止剤を共存させてもょ 、。
[0032] また、例えば、約 0. 5%乃至 10. 0%のアルキルレゾルシノール類と適量の α—グ リコシルイ匕合物とを含有するアルキルレゾルシノール類高含有液を pH約 7. 5乃至 1 0. 0、温度約 50°C乃至 80°Cに維持し、これに糖転移酵素を作用させると、アルキル レゾルシノール配糖体を容易に、高濃度で生成する。
[0033] また、アルキルレゾルシノール類として、例えば、約 0. 1規定乃至 1. 0規定のカセ イソーダ水溶液、カセイカリ水溶液、炭酸ソーダ水溶液、水酸ィ匕カルシウム水、アンモ ユア水などの強アルカリ性水溶液に、約 0. 5%乃至 10. 0%の高濃度に溶解させた ものを用い、これに塩酸、硫酸などの酸性水溶液をカ卩えて、酵素が作用し得る pH、 望ましくは pH7. 0を越える pHに調整するとともに、 α グリコシルイ匕合物を加え、直 ちに、糖転移酵素を作用させることは、アルキルレゾルシノール配糖体を容易に高濃 度に生成させることができるので、極めて好都合である。
[0034] この際、高濃度に溶解させたアルキルレゾルシノール類溶液も、酸性水溶液で ΡΗ を調整するとアルキルレゾルシノール類が析出を起し易 、ので、その pH調整前に、 aーグリコシル化合物や少量のアルキルレゾルシノール配糖体などを共存させて、ァ ルキルレゾルシノール類の析出を抑制しつつ糖転移反応を開始することも有利に実 施できる。
[0035] また、更に必要ならば、反応前のアルキルレゾルシノール類の溶解度を高め、アル キルレゾルシノール類への糖転移反応を容易にするために、アルキルレゾルシノー ル類高含有液に水と互いに溶解しうる有機溶媒、例えば、メタノール、エタノール、 n プロパノール、イソプロパノール、 n—ブタノール、ァセトニトリルアセトンなどの低級 アルコール、低級ケトンなどを共存させることも、適宜選択できる。
[0036] また、糖転移反応により生成せしめた比較的高分子のアルキルレゾルシノール配 糖体は、必要により、そのままで、または、多孔性合成吸着榭脂により精製した後、グ ルコアミラーゼ（EC 3. 2. 1. 3)、または j8—アミラーゼ（EC 3. 2. 1. 2)などのァ ミラーゼによって部分カ卩水分解し、 a—グリコシルアルキルレゾルシノール類の a - ダルコシル基の数を低減させることができる。例えば、ダルコアミラーゼを作用させる 場合には、 α マルトシルー 4 アルキルレゾルシノール類以上の高分子物を加水 分解し、グルコースを生成するとともに α—ダルコシルー 4 アルキルレゾルシノール 類を蓄積生成させることができ、また、 ）8—アミラーゼを作用させる場合には、 ひ一マ ルトトリオシルー 4 アルキルレゾルシノール類以上の高分子物をカ卩水分解し、マルト ースを生成するとともに、主に α—ダルコシル一 4—アルキルレゾルシノール類と α マルトシル 4 アルキルレゾルシノール類との混合物を、蓄積生成させることが できる。
[0037] 本発明の酵素法による配糖体の製造方法により得ることのできる 4 アルキルレゾ ルシノール配糖体は、 4 アルキルレゾルシノールの水酸基へのダルコシル基の結 合様式の異なる、 1位又は 3位の水酸基の何れかにグリコシル基が導入されたものと 、 1位及び 3位の両方にグリコシル基が導入されたものの 3種類が得られる。この場合 、個々のグリコシル基を構成する単糖類の個数に特に制限はないが、製造のしゃす さや取り扱いやすさの点からは、通常単糖が 1個乃至 6個のものが望ましぐ 1個及び Ζ又 2個のものが望ましぐ 1個のものが特に望ましい。本発明の製造方法で得られた 反応溶液は、そのままで、部分精製して、高度に精製して、さら〖こは、この 3種類の配 糖体を個々に分画して、分画したものを混合して、これらを、常法により、濾過、濃縮 したシラップや、乾燥、粉末化して、本発明の皮膚外用組成物に配合することも随意 である。
[0038] これらの 4 アルキルレゾルシノール配糖体の精製方法は、 4 アルキルレゾルシノ 一ル配糖体の純度をあげることができる方法であれば、特に制限はないが、通常は、 多孔性合成吸着剤による吸着性の差を利用して 4 アルキルレゾルシノール配糖体 と αーグリコシルイ匕合物などの夾雑物とを分離して精製すればよい。この場合、配糖 化されて!/ヽな 、4 アルキルレゾルシノール類は、それ自体にも生理活性があるので 、必ずしも除去する必要はないが、水溶性向上等の点からは、できるだけ 4 アルキ ルレゾルシノール配糖体の純度をあげることが望ましい。
[0039] 本発明で 、う多孔性合成吸着剤とは、多孔性で広!、吸着表面積を有し、かつ非ィ オン性のスチレンージビュルベンゼン重合体、フエノールーホルマリン榭脂、アタリレ ート榭脂、メタアタリレート榭脂などの合成樹脂であり、例えば、市販されている Rohm
& Haas社製造の商品名アンバーライト XAD— 1、アンバーライト XAD— 2、アン バーライト XAD— 4、アンバーライト XAD— 7、アンバーライト XAD— 8、アンバーラ イト XAD—11、アンバーライト XAD— 12、三菱化成工業株式会社製造の商品名ダ ィャイオン HP— 10、ダイヤイオン HP— 20、ダイヤイオン HP— 30、ダイヤイオン HP —40、ダイヤイオン HP— 50、 IMACTI社製造の商品名イマタティ Syn— 42、イマク ティ Syn— 44、イマタティ Syn— 46などがある。
[0040] 本発明の 4 アルキルレゾルシノール配糖体を生成せしめた反応液を、例えば、上 記のような多孔性合成吸着剤を充填したカラムに通液すると、 4 アルキルレゾルシ ノール配糖体及び比較的少量の未反応 4 アルキルレゾルシノール類が多孔性合 成吸着剤に吸着するのに対し、多量に共存するグリコシルイ匕合物の大部分は吸着さ れることなぐそのまま流出する。
[0041] 必要ならば、糖転移酵素の反応終了後、多孔性合成吸着剤に接触させるまでの間 に、例えば、反応液を加熱して生じる不溶物を濾過して除去したり、ケィ酸アルミン酸 マグネシウム、アルミン酸マグネシウムなどで処理して反応液中の蛋白性物質などを 吸着除去したり、強酸性イオン交換榭脂 (H型)、中塩基性または弱塩基性イオン交 換榭脂 (OH型)などで処理して脱塩するなどの精製方法を組み合せて、利用するこ とも随意である。
[0042] 前述のようにして、多孔性合成吸着剤カラムに選択的に吸着した 4 アルキルレゾ ルシノール配糖体と比較的少量の未反応 4 アルキルレゾルシノール類とは、希ァ ルカリ、水などで洗浄した後、比較的少量の有機溶媒または有機溶媒と水との混合 液、例えば、メタノール水、エタノール水などを通液すれば、まず、 4 アルキルレゾ ルシノール配糖体が溶出し、通液量を増すか有機溶媒濃度を高めるかすれば未反 応 4 アルキルレゾルシノール類が溶出してくる。
[0043] この有機溶媒による 4 アルキルレゾルシノール配糖体及び未反応 4 アルキルレ ゾルシノール類の溶出操作は、同時に、多孔性合成吸着剤の再生操作にもなるので 、この多孔性合成吸着剤の繰り返し使用を可能にする。
[0044] この 4 アルキルレゾルシノール配糖体高含有溶出液を蒸留処理して、まず有機 溶媒を溜去した後、適当な濃度にまで濃縮すれば 4 アルキルレゾルシノール配糖 体を主成分とするシラップ状製品が得られる。更に、これを凍結乾燥や噴霧乾燥など の方法で乾燥し粉末ィ匕することによって、 4 アルキルレゾルシノール配糖体を主成 分とする粉末状製品が得られる。
[0045] また、本発明の多孔性合成吸着剤による精製は、グリコシルイ匕合物だけでなぐ酵 素反応液に含まれる水溶性の塩類等の夾雑物も同時に除去できる特長を有している
[0046] 上記のごとぐ合成法或いは酵素法などにより得られた、 4 アルキルレゾルシノー ル配糖体は、何れも、 4 アルキルレゾルシノール類自身に比して水溶性が高ぐ安 定で、且つ、それ自身の持つ生理活性を維持しているので、抗菌性や美白効果にも 優れている。この生理活性の発現は、 4 アルキルレゾルシノールの配糖体力 皮膚 表面或 、は皮膚内に於 、て、配糖体が 4 アルキルレゾルシノール類と糖とに分解 されて、 4 アルキルレゾルシノールの機能が発揮されると考えられる。 4 アルキル レゾルシノールの水酸基へのグリコシル基の結合様式の間異なる 3種類の 4 アルキ ルレゾルシノール配糖体の混合物は、そのままで、個々に単離して、或いは、個々に 単離したものを組み合わせて本発明の組成物を製造することができる。好ま 、もの は 1位の水酸基のみ配糖化されたものである。また、これらの 4 アルキルレゾルシノ 一ル配糖体は、アルカリで処理し、塩と為して、塩として、組成物に含有せしめること もできる。好ましい塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、 カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩、アンモ-ゥム塩、トリエタノールァ ミン塩、トリェチルァミン塩等の有機アミン塩類、リジン塩、アルギニン塩等の塩基性 アミノ酸塩等が好ましく例示できる。
[0047] なお、本明細書において、「美白」の用語は、肌を白くする積極的効果のみならず、 肌の黒化を抑制する予防的効果も含む意味で用いるものとする。例えば、シミ、ソバ カス等の色素沈着を改善する効果のみならず、色素沈着を抑制する効果を含むもの とする。
[0048] 本発明の組成物における 4 アルキルレゾルシノール配糖体或いはその塩類の配 合量は、 4 アルキルレゾルシノール配糖体のもつ抗菌、美白、抗酸化等の生理機 能が発揮される量であれば、制限はなぐ通常、 0. 001%乃至 10%で使用され、 0. 05%乃至 5%が好ましぐ 0. 1%乃至 2%がより好ましぐ 0. 05乃至 1%が特に望ま しい。力かる範囲であれば、 4 アルキルレゾルシノール配糖体を容易に配合するこ とができ、且つ優れた効果、特に美白ゃ抗酸化効果を奏する。 0. 001%未満では 4 —アルキルレゾルシノール配糖体の生理機能が発揮されず、 10%を越えると、効果 が頭打ちとなる場合や配合処方により澱や着色の発生、使用感の低下などの物性的 な問題が発生する場合がある。
[0049] 本発明の 4 アルキルレゾルシノール配糖体を配合した組成物とは、医薬品、医薬 部外品、化粧料、雑貨などをいう。なかでも、 4 アルキルレゾルシノール配糖体は優 れた抗菌作用、美白作用、抗酸化作用などを有することから、美白などを目的とした 皮膚外用組成物に有利に配合することができる。これらの内では、化粧料、取り分け 、医薬部外品に適用することが好ましい。医薬部外品に於いては、その薬効と使用 上の注意と医薬部外品である旨とを表示し、その使用態様を明確にしておくことが、 安全に、且つ、効果をより効率的に奏するために好ましい。この様な、薬効としては、 当該皮膚外用剤に配合される有効成分の特性に従って定めれば良ぐ例えば、ァス コルビン酸類、アルブチン、トラネキサム酸類を含有せしめた場合にはメラニン産生 抑制効果に基づく美白作用を、グリチルリチン酸ジカリウムやグリチルレチン酸ステア リルエステルなどのグリチルレチン酸類を含有させた場合には、抗炎症作用を表示 することが好ましい。また、この皮膚外用剤の必須成分である、 4—アルキルレゾルシ ノール配糖体は、メラニン産生抑制作用に基づく美白作用や、抗炎症作用を有して いるため、かかる化合物を有効成分としてメラニン産生抑制作用に基づく美白作用 や、抗炎症作用を表示することも可能である。
[0050] これらの組成物には、必要に応じて本発明の効果を損なわない範囲で、通常、化 粧料ゃ医薬部外品、医薬品等の製剤に使用される成分、すなわち、水 (精製水、温 泉水、海洋深層水など）、アルコール類、油剤、界面活性剤、金属セッケン、ゲルィ匕 剤、粉体、水溶性高分子、糖質、皮膜形成剤、樹脂、紫外線防御剤、包接化合物、 抗菌剤、防腐剤、香料、色素、消臭剤、塩類、 PH調整剤、清涼剤、動物や微生物由 来の抽出物、植物抽出物、血行促進剤、抗炎症剤、収斂剤、抗脂漏剤、美白剤、活 性酸素消去剤、細胞賦活剤、保湿剤、キレート剤、角質溶解剤、酵素、ホルモン類、 ビタミン類、ミネラル類等をカ卩えることができる。その具体例としては、例えば、以下の ような成分を挙げることができる。
[0051] アルコールは、溶解、清涼感、防腐、保湿等の目的で用いられる。アルコールとし ては、エタノール、イソプロパノール等の低級アルコール、及びグリセリン、ジグリセリ ン、ポリグリセリン、エチレングリコーノレ、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、 ジプロピレングリコール、 1, 3—ブチレングリコーノレ、ペンチレングリコール、ポリェチ レングリコール、イソペンチルジオール等の多価アルコール、ソルビトール、マルチト ール、マルトトリイトール、マルトテトライトール、マルトペンタイトール等の糖アルコー ノレを挙げることができる。
[0052] 油剤は、基材の構成成分として、使用性もしくは使用感を改善する目的等で用いら れる。通常の化粧料に使用されるものであればいずれも使用することができ、天然系 油であるか、合成油であるか等の由来について、又は、固体、半固体、液体であるか 等の性状については問わない。油剤としては炭化水素類、ロウ類、脂肪酸類、高級 アルコール類、エステル油、シリコーン油類、フッ素系油類等を使用することができる 。より具体的には、トリー 2—ェチルへキサン酸セチル、テトラー 2—ェチルへキサン 酸ペンタエリスリット等の合成エステル油、トウモロコシ油、ォリーブ油、ナタネ油、綿 実油、ヤシ油、パーム油、液状ラノリン、硬化ヤシ油、硬化油、モクロウ、硬化ヒマシ油
、ォリーブ油、ヒマシ油、ホホバ油、ミンク油、マ力デミアンナッツ油、杏仁油、パーシッ ク油、サフラワー油、ヒマヮリ油、アポガド油、メドウホーム油、ツバキ油、アーモンド油
、エゴマ油、ゴマ油、ボラージ油、シァ脂等の植物や動物由来の油脂；ミツロウ、カル ナウパロウ、キャンデリラロウ、イボタロウ、ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、ホホバ ロウ、ゲイロウ等のワックス類;プリスタン、ォゾケライト、流動パラフィン、スクヮラン、ヮ セリン、セレシン、マイクロクリスタリンワックス等の炭化水素類;ォレイン酸、イソステア リン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、ゥンデシレン 酸等の高級脂肪酸類；セチルアルコール、ステアリルアルコール、イソステアリルアル コール、ベへニルアルコール、オタチルドデカノール、ミリスチルアルコール、セトステ ァリルアルコール等の高級アルコール等;イソオクタン酸セチル、ミリスチン酸イソプロ ピル、イソステアリン酸へキシルデシル、アジピン酸ジイソプロピル、セバチン酸ジ— 2 ーェチルへキシル、乳酸セチル、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ 2—ェチルへキサン 酸エチレングリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、ジー 2—へプチルゥン デカン酸グリセリン、トリー 2—ェチルへキサン酸グリセリン、トリー 2—ェチルへキサン 酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ一 2—ェ チルへキサン酸ペンタンエリトリット等の合成エステル油類；ジメチルポリシロキサン、 メチルフエ-ルポリシロキサン、ジフエ-ルポリシロキサン等の鎖状ポリシロキサン；ォ クタメチルシクロテトラシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、ドデカメチルシ クロへキサンシロキサン等の環状ポリシロキサン；ァミノ変性ポリシロキサン、ポリエー テル変性ポリシロキサン、アルキル変性ポリシロキサン、フッ素変性ポリシロキサン等 の変性ポリシロキサン等のシリコーン油等の油剤類;脂肪酸セッケン (ラウリン酸ナトリ ゥム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールァ ミンエーテル等のァ-オン界面活性剤類；塩化ステアリルトリメチルアンモ-ゥム、塩 化ベンザルコ-ゥム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類;イミダゾリ ン系両性界面活性剤（2—ココイル - 2—イミダゾリ-ゥムヒドロキサイド 1—カルボ キシェチロキシ 2ナトリウム塩等）、ベタイン系界面活性剤（アルキルべタイン、アミドべ タイン、スルホベタイン等）、ァシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類;ソルビタン 脂肪酸エステル類 (ソルビタンモノステアレート、セスキォレイン酸ソルビタン等）、ダリ セリン脂肪酸類 (モノステアリン酸グリセリン等）、プロピレングリコール脂肪酸エステル 類 (モノステアリン酸プロピレングリコール等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキ ルエーテル、 POEソルビタン脂肪酸エステル類（POEソルビタンモノォレエート、モノ ステアリン酸ポリオキエチレンソルビタン等）、 POEソルビット脂肪酸エステル類（POE ソルビットモノラウレート等）、 POEグリセリン脂肪酸エステル類 (POE グリセリン モノイソステアレート等）、 POE脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコールモノォレー ト、 POEジステアレート等）、 POEアルキルエーテル類（POE2—オタチルドデシルェ 一テル等）、 POEアルキルフエ-ルエーテル類（POEノ-ルフエ-ルエーテル等）、 プル口-ック型類、 POE · POPアルキルエーテル類（POE · POP2-デシルテトラデ シルエーテル等）、テトロニック類、 POEヒマシ油 '硬化ヒマシ油誘導体（POEヒマシ 油、 POE硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルダルコシド等の非イオン 界面活性剤類；ポリエチレングリコール、グリセリン、 1, 3 ブチレングリコール、エリス リトーノレ、ソルビトール、キシリトーノレ、 マノレチトーノレ、プロピレングリコール、ジプロピレ ングリコール、ジグリセリン、イソプレングリコール、 1, 2 ペンタンジオール、 2, 4— へキサンジオール、 1, 2—へキサンジオール、 1, 2—オクタンジオール等の多価ァ ルコール類;ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム等の保湿成分類； 表面を処理されていても良い、マイ力、タルク、カオリン、合成雲母、炭酸カルシウム、 炭酸マグネシウム、無水ケィ酸 (シリカ）、酸ィ匕アルミニウム、硫酸バリウム等の粉体類 、；表面を処理されていても良い、ベンガラ、黄酸化鉄、黒酸化鉄、酸化コバルト、群 青、紺青、酸化チタン、酸ィ匕亜鉛の無機顔料類;表面を処理されていても良い、雲母 チタン、魚燐箔、ォキシ塩ィ匕ビスマス等のパール剤類;レーキ化されていても良い赤 色 202号、赤色 228号、赤色 226号、黄色 4号、青色 404号、黄色 5号、赤色 505号 、赤色 230号、赤色 223号、橙色 201号、赤色 213号、黄色 204号、黄色 203号、青 色 1号、緑色 201号、紫色 201号、赤色 204号等の有機色素類;ポリエチレン末、ポ リメタクリル酸メチル、ナイロン粉末、オルガノポリシロキサンエラストマ一等の有機粉 体類;ビタミン A又はその誘導体、ビタミン B6塩酸塩、ビタミン B6トリパルミテート、ビタ ミン B6ジォクタノエート、ビタミン B2又はその誘導体、ビタミン B12、ビタミン B15又は その誘導体等のビタミン B類； α—トコフエロール、 β—トコフエロール、 y—トコフエ口 ール、ビタミン Eアセテート等のビタミン E類、ビタミン D類、ビタミン H、パントテン酸、 パンテチン、ピロ口キノリンキノン、ビタミン P類等のビタミン類やこれらの誘導体等など が好ましく例示できる。
使用可能な紫外線防御剤としては、パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤、アントラ 二ル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、桂皮酸系紫外線吸収剤、ベ ンゾフエノン系紫外線吸収剤、糖系紫外線吸収剤を挙げることができる。より具体的 には、パラアミノ安息香酸及びそのエステル、サリチル酸ォクチル、サリチル酸ホモメ ンチル、 2, 5 ジイソプロピルケイ皮酸メチル、シノキサート、ジパラメトキシケィ皮酸 モノー 2—ェチルへキサン酸グリセリル、ジヒドロキシジメトキシベンゾフエノン、ジヒドロ キシジメトキシベンゾフエノンジスルホン酸ナトリウム、ジヒドロキシベンゾフエノン、 1— (3, 4 ジメトキシフエ-ル）一 4, 4 ジメチルー 1, 3 ペンタンジオン、ジメチコジェ チルベンゾマロン酸及びそのエステル、ジメトキシベンジリデンジォキソイミダゾリジン プロピオン酸 2 ェチルへキシル、テトラヒドロキシベンゾフエノン、 2, 4, 6 トリス「一 (2 ェチルへキシルォキシカルボ-ル）ァ-リノ」 1, 3, 5 トリアジン、トリメトキシ ケィ皮酸メチルビス（トリメチルシロキシ)シリルイソペンチル、ノ ラジメチルァミノ安息 香酸ァミル、パラジメチルァミノ安息香酸 2—ェチルへキシル、ジェチルアミノヒドロキ シベンゾへキシル安息香酸エステル、ノ ラメトキシケィ皮酸エステル混合物、パラメチ ルケィ皮酸 2 ェチルへキシル、 2 ヒドロキシー 4ーメトキシベンゾフエノン、ヒドロキ シメトキシベンゾフエノンスルホン酸及びその三水塩、ヒドロキシメトキシベンゾフエノン スルホン酸ナトリウム、 2— (2'—ヒドロキシ一 5'— t—ォクチルフエ-ル)ベンゾトリアゾ ール、 4—メトキシ— 4'— t—ブチルジベンゾィルメタン、フエ-ルペンズイミダゾール スルホン酸、 4— tert—ブチル 4—メトキシジベンゾィルメタン、 2 シァノ 3, 3— ジフエ-ルプロパー 2 ェン酸 2 ェチルへキシルエステル（オタトクレリン）、 4— (2 - β—ダルコビラノシロキシ）プロポキシ 2—ヒドロキシベンゾフエノン、テレフタリリ デンジカンフルスルホン酸、フェルラ酸、 2, 2'—メチレンビス（6— (2Ηベンゾトリァゾ ール— 2—ィル）—4— (1, 1, 3, 3—テトラメチルブチル）フエノール、メトリゾールトリ シロキサン、酸化チタン、酸ィ匕亜鉛等を例示することができる。
[0054] 水溶性高分子や糖質は、系の安定化のため、又は使用性もしくは使用感を改良す るために用いられ、また保湿効果を得るためにも用いられる。使用可能な水溶性高 分子としては、プルラン、カラギーナン、ぺクチン、寒天、ローカストビーンガム等の植 物系高分子、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセ ルロース等のセルロース系高分子、アルギン酸ナトリウム等のアルギン酸系高分子、 カルボキシビ二ルポリマー等のビュル系高分子等が含まれる。糖質としては、マルト ース、マノレトトリオース、マノレトテトラオース、トレノヽロース、トレハロースの糖質誘導体 、環状四糖などの環状糖質などを挙げることができる。
[0055] 防腐剤、抗菌剤としては、安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラォキシ安息香酸エス テル、塩化ベンザルコ-ゥム、フエノキシエタノール、イソプロピルメチルフエノール等 を挙げることができる。
[0056] 本発明の 4 アルキルレゾルシノール配糖体は、単独で優れた美白効果を有する 力 その効果をさらに向上させるために、本発明の組成物には、従来公知の美白剤 を併用してもよい。美白剤は日焼け等により生じる皮膚の黒化、色素沈着により生じ るシミ、ソバカス等の現象を防止する目的で用いられる。使用可能な他の美白剤とし ては、アルブチン、リノール酸、 5, 5'—ジプロピルビスフエ-ルー 2, 2'—ジオール、 ビタミン C及びこれらの誘導体、ビタミン E及びその誘導体、グリチルリチン酸及びそ の誘導体、トラネキサム酸及びその誘導体、テトラヒドロタルクミノイド、胎盤抽出物、 藍抽出物、力ミツレ抽出物、カンゾゥ抽出物、エイジッ抽出物、ォゥゴン抽出物、海藻 抽出物、クジン抽出物、ケィケットウ抽出物、ゴカヒ抽出物、コメヌ力抽出物、小麦胚 芽抽出物、サイシン抽出物、サンザシ抽出物、サンペンズ抽出物、シラユリ抽出物、 シャクャク抽出物、センプクカ抽出物、大豆抽出物、茶抽出物、糖蜜抽出物、ビヤク レン抽出物、ブドウ抽出物、ホップ抽出物、マイカイ力抽出物、モッカ抽出物、ユキノ シタ抽出物、ョクイニン抽出物、ロイヤルゼリー抽出物等を挙げることができる。
[0057] 抗炎症剤は、 日焼け後の皮膚のほてりや紅斑等の炎症を抑制する目的で用いられ る。抗炎症剤としては、ィォゥ及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体、グ リチルレチン酸及びその誘導体、塩ィ匕レポカルチュン、アロエ抽出物、アルテア抽出 物、ァシタパ抽出物、アル-力抽出物、藍エキス、インチンコゥ抽出物、イラクサ抽出 物、ォゥバタ抽出物、オトギリソゥ抽出物、力ミツレ抽出物、カンゾゥ抽出液、キンギン 力抽出物、タレソン抽出物、コンフリー抽出物、サルビア抽出物、シコン抽出物、シソ 抽出物、シラカバ抽出物、ゲンチアナ抽出物等を挙げることができる。
[0058] 細胞賦活剤は、肌荒れの改善等の目的で用いられる。本発明の組成物に使用可 能な細胞賦活剤としては、力フ イン、鶏冠抽出物、貝殻抽出物、貝肉抽出物、ロー ャルゼリー、シルクプロテイン及びその分解物又はそれらの誘導体、ラタトフエリン又 はその分解物、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸等のムコ多糖またはそれらの塩、コ ラーゲン、酵母抽出物、乳酸菌抽出物、ビフィズス菌抽出物、発酵代謝抽出物、イチ ヨウ抽出物、ォォムギ抽出物、センプリ抽出物、タイソゥ抽出物、ニンジン抽出物、口 ーズマリー抽出物、グリコール酸、クェン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、コハク酸等の 有機酸及びそれらの誘導体等を挙げることができる。
[0059] 活性酸素消去剤は、過酸化脂質生成抑制等の酸化障害抑制等の目的で用いられ る。活性酸素除去剤としては、スーパーオキサイドデイスムターゼ、マン-トール、タエ ルセチン、カテキン及びその誘導体、ルチン及びその誘導体、ボタンピ抽出物、ヤシ ャジッ抽出物、メリッサ抽出物、羅漢果抽出物、レチノールやカロチノイド等のビタミン A類及びその誘導体、チアミン、リボフラビン、ピリドキシン、ニコチン酸等のビタミン B 類及びその誘導体、ビタミン C及びその誘導体、ルチン、ヘスペリジン、ナリンジン等 のビタミン P類及びその誘導体、トコフエロール等のビタミン E類及びその誘導体、ジ ブチルヒドロキシトルエン及びブチルヒドロキシァ -ソール等を挙げることができる。
[0060] 保湿剤としては、エラスチン、ケラチン等のタンパク質又はそれらの誘導体、加水分 解物並びにそれらの塩、グリシン、セリン、ァスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン 、テアニン等のアミノ酸及びそれらの誘導体、ソルビトール、エリスリトール、トレハロー ス及びその誘導体、イノシトール、グルコース、マルトース、蔗糖及びその誘導体、デ キストリン、シクロデキストリン、環状四糖及びそれらの誘導体、ハチミツ等の糖類、 D パンテノール及びその誘導体、尿素、リン脂質、セラミド、ォゥレン抽出物、ショウブ 抽出物、ジォゥ抽出物、センキユウ抽出物、ゼ-ァオイ抽出物、タチジヤコゥソゥ抽出 物、ドクダミ抽出物、ハマメリス抽出物、ボダイジュ抽出物、マロニエ抽出物、マルメ口 抽出物等を挙げることができる。
[0061] 本発明の皮膚外用組成物の形態としては、特に限定されず、例えば、ローション、 エッセンス、乳液、クリーム、化粧水、ノック、美容液、洗浄料、メーキャップ化粧品、 ヘアケア化粧品、浴用剤、分散液、軟膏、液剤、エアゾール剤、貼布剤、パップ剤、リ -メント剤等を挙げることができる。又、使用目的も、疾病の治療や予防の他、基礎的 なお肌の手入れやメークアップなどの装 、など、通常皮膚外用剤で知られて 、る用 途に応用できる。特に好ましいのは、本発明の効果を存分に生かせる、乳化形態の エッセンス製剤乃至はクリーム製剤である。また、その製造方法に特に制限はなぐ 常法により製造することができる。
[0062] 次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明は下記の実施例に 何ら限定されるものではな 、。
実施例 1
[0063] 4 シクロへキシルレゾルシノールを 1. 9g秤取り、これにビストリメチルシリルァセタ ミド 2mlをァセトニトリル 10mlに溶解させてカ卩え、 30分室温で攪拌し、反応させた後 、溜去し、これにあらためてァセトニトリル 100mlをカ卩え、過酸化銀 200mgとペンタァ セチルグルコース 5gを 20mlのァセトニトリルに溶解、分散させて、氷冷下滴下した。 滴下後、アイスバスをはずし、室温まで徐々に戻し、し力る後に加熱し、 2時間還流さ せた。室温まで冷却した後、重曹とともに氷上に注ぎ、反応を止め、酢酸ェチル 500 mlで抽出し、 100mlの水で 2回洗浄し、酢酸ェチル相を無水硫酸ナトリウムで乾燥さ せた後、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し (溶出溶媒;クロ口ホルム ：メタノール = 100： 0→90： 10→70 : 30) , 4-シクロへキシルー 1 - (テトラァセチル ダルコシル）レゾルシノールと 4—シクロへキシル 3— (テトラァセチルダルコシル）レ ゾルシノールと 1, 3 ビス（テトラァセチルダルコシル） 4 シクロへキシルレゾルシ ノールとを得た。これらをそれぞれアンモニア飽和メタノール溶液で 5時間処理し、 4 -シクロへキシル 1 ダルコシルレゾルシノール（ィ匕合物 1) 42 lmg、 4 シクロへ キシル 3—ダルコシルレゾルシノール（ィ匕合物 2) 345mg及び 1, 3 ビスダルコシ ルー 4—シクロへキシルレゾルシノール（ィ匕合物 3) 95mgを得た。 実施例 2
[0064] 実施例 1と同様に、 4 -シクロへキシルレゾルシノールを 4 -シクロペンチルレゾルシ ノールに変えて処理し、 4 シクロペンチルー 1—ダルコシルレゾルシノール（化合物 4) 396mg、 4 シクロペンチルー 3—ダルコシルレゾルシノール（ィ匕合物 5) 223mg 及び 1, 3 ビスダルコシル— 4 シクロペンチルレゾルシノール（ィ匕合物 6) 119mg を得た。
実施例 3
[0065] 実施例 1と同様に、 4ーシクロへキシルレゾルシノールを 4一（2 フエ-ルェチル） レゾルシノールに変えて処理し、 1—ダルコシル— 4— (2—フエ-ルェチル）レゾルシ ノール（ィ匕合物 7) 287mg、 3 -ダルコシルー 40 (2 フエ-ルェチル）レゾルシノール (化合物 8) 181mg及び 1, 3 ビスダルコシルー 4一（2 フエ-ルェチル）レゾルシ ノール (化合物 9) 76mgを得た。
実施例 4
[0066] 実施例 1と同様に、 4ーシクロへキシルレゾルシノールを 4一（1 メチルプロピル）レ ゾルシノールに変えて処理し、 1—ダルコシル— 4— (1—メチルプロピル）レゾルシノ ール（化合物 10) 32 lmg、 3 ダルコシル 40 ( 1 メチルプロピル）レゾルシノール (化合物 l l) 239mg及び 1, 3 ビスダルコシル— 4— (1—メチルプロピルレゾルシノ ール (ィ匕合物 12) 105mgを得た。
実施例 5
[0067] 実施例 1と同様に、 4ーシクロへキシルレゾルシノールを 4一（1一ェチルプロピル） レゾルシノールに変えて処理し、 4一（1 ェチルプロピル） 1—ダルコシルレゾルシ ノーノレ（ィ匕合物 13) 29 lmg、 4— (1—ェチノレプロピノレ） 3 ダルコシルレゾルシノ ール（化合物 14) 204mg及び 1, 3 ビスダルコシル 4— ( 1 ェチルプロピルレゾ ルシノール (化合物 15) 83mgを得た。
実施例 6
[0068] 実施例 1と同様に、 4 シクロへキシルレゾルシノールを 4— (1—イソプロピル一 2 —メチルプロピル）レゾルシノールに変えて処理し、 1—ダルコシル— 4— (1—イソプ 口ピル一 2—メチルプロピル）レゾルシノール（ィ匕合物 16) 168mg、 3—ダルコシル一 40 (1 イソプロピル 2 メチルプロピル）レゾルシノール（化合物 17) 118mg及び 1, 3 ビスダルコシル一 4— (1—イソプロピル一 2—メチルプロピル）レゾルシノール (化合物 18) 64mgを得た。
[0069] <試験例 1： 4 アルキルレゾルシノール配糖体の安定性 >
前記参考例と同様に、実施例 1乃至 6で作製したィ匕合物 1乃至 18について、安定 性を検討した。結果を表 2に示す。
[0070] [表 2]
Figure imgf000025_0001
[0071] 表 2から明らかなように、配糖体化することにより、安定性が向上したことがわ力る [0072] <レゾルシノール配糖体の薬理活性の検討 > メラノーマ B— 16でメラニン産生抑制作用を調べた。即ち、対数増殖期にあるメラノ 一マ B— 16細胞をトリプシン処理した後、 FBS (ゥシ胎仔血清)含有 MEM培地に 1. 5 X 103個/ mlの濃度になるように加え、メラノーマ B— 16の FBS含有 MEM懸濁液 を作成した。この懸濁液を 5本の培養ボトルに 10mlずつ分注し、 37°C、 5容量％CO 濃度の炭酸ガスインキュベーターに入れて 2日間培養した。その後、 4本の培養ボト
2
ルには、上記 4ーシクロへキシルレゾルシノール（コントロール）、化合物 1、化合物 2 及び化合物 3をそれぞれ 0. 001% (最終濃度）になるように、 10容量％DMSO 'FB S含有 MEM培地溶液とともに 5mlずつ加えた。残りの 1本にはコントロールとして 10 容量0 /oDMSO 'FBS含有 MEM培地溶液を 5ml加えた。これらのボトルを 37°C、 5 容量％炭酸ガスの条件下 2日間培養した。その後、各培養ボトルに 15mlの FBS含 有 MEM培地を加え、更に、上記と同様上記 4ーシクロへキシルレゾルシノール、ィ匕 合物 1、化合物 2及び化合物 3をそれぞれ加え、残る 1本にはべヒクルを加えた。これ を更に 2日間培養した。培養終了後、各ボトルについて、培地を除去し、 PBS (燐酸 緩衝生理食塩水)で洗浄した後、トリプシン処理をして細胞を培養ボトルから剥離さ せ、細胞懸濁液とした。この細胞懸濁液を遠心分離にかけ細胞を回収した。得られた 細胞の細胞数及びメラニン色素沈着の度合いを見て以下の基準で肉眼観察して、 細胞毒性とメラニン産生抑制作用を評価した。結果を表 3に示す。
[細胞毒性の評価基準]
+：コントロールと比較して細胞数がかなり少なく細胞毒性あり。
士：コントロールと比較して細胞数が僅かに少ないが、細胞毒性の判定は困難。 ：コントロールと比較して細胞数に殆ど差がなく細胞毒性は認められな 、。
[メラニン産生抑制作用]
+：コントロールに比較して明らかに白化されており、メラニン産生抑制作用あり。 士：コントロールより僅かに白化されており、メラニン産生抑制作用が僅かに認められ る。
一 ：コントロールとほぼ同等であり、メラニン産生抑制作用は認められない。
[表 3] メラニン産生
化合物の種類 細胞毒性
抑制作用
4一シクロへキシノレ
土〜 +
レゾルシノール + 化合物 1 ― +
化合物 2 ― +
化合物 3 一 土〜 +
[0074] 表 3から明らかなように、本発明の化合物である配糖体はァグリコンと同様のメラ- ン産生抑制作用を有することがわかる。また、細胞毒性は配糖体ィ匕することにより、低 下することがわかる。
実施例 7
[0075] < 4 n ブチルレゾルシノール配糖体の調製 >
英国特許第 1, 581, 428号明細書の実施例 1に記載の方法に基づき、 4— n—ブ チルレゾルシノールを調製した。この 4— n—ブチルレゾルシノール 4gと、 a—シクロ デキストリン (以下、「α— CD」と略記する場合がある。）80gを 50mM酢酸緩衝液 (p H5. 5、2mM CaCl含む） 800mLに溶かしたのち、バチルス ステアロサーモフィ
2
ラス由来のシクロマルトデキストリングルカノトランスフェラーゼ (株式会社林原生物化 学研究所販売）を 500単位 Zg— —CDを添加し、 40°Cで 24時間反応させた。 10 0°Cで 10分間加熱して反応を停止させたのち、 1M酢酸緩衝液 (pH4. 5)を 80mL 加え、ダルコアミラーゼ (生化学工業製)を 10単位 Zg— a— CD添加して 50°Cで 20 時間反応させた。 100°Cで 10分間加熱して反応を停止した後、多孔性合成吸着剤（ 三菱化成株式会社販売、商品名「ダイヤイオン HP— 20」）を充填したカラム（7«η φ X 39cm、 1. 5L)に供した。このカラムを水で洗浄した後、 35%エタノールを通液し てカラムに吸着した画分を溶出させた。得られた画分を濃縮乾固し、 96%エタノール に懸濁溶解した後不溶の糖質を除去した。上清の溶媒を留去後、ふたたび水に溶 解して凍結乾燥を行ない、糖転移酵素による反応生成物 (以下、「反応生成物」と略 記する場合がある。）を含む粉末標品 3. 21gを得た。得られた粉末標品の一部を使 用して、高速液体クロマトグラフィー（以下、「HPLC」と略記する場合がある。）にかけ 、溶出画分の液体クロマトグラム質量分析 (以下、「LCZMS」と略記する場合がある 。）分析、及び、紫外 (以下、「uv」と略記する場合がある）吸収スペクトル分析を行な つた。なお、これらの分析は、下記条件で実施した。
< HPLC >
装 置： CR— 4A及び LCD— 10AD (株式会社島津製作所販売）
カラム： CAPCELLPAK C18 AG 120 4. 6mm X 2
50mm (信和化工株式会社製）
移動相：ァセトニトリル Z水 Z酢酸（35 : 65 : 0. 2)
流 速： 0. 5mL/ mm
温 度： 40°C
< UV>
装 置: SPD— 10AVP (株式会社島津製作所販売）
波 長： UV280nm
< LC/MS >
装 置： LCQ Advantage (サーモエレクトロン株式会社販）
検出条件：
ESi, negative mode, / z50〜2000
Sheath Gas Flow : 40
Ion Spray Voltage： 5kV
Capillary Temp. ： 275°C
Capillary Voltage : - 7. 0V
Tube Lens Offset :— 10. 0V
反応生成物を含む凍結乾燥標品の水溶液は、原料の 4 n プチルレゾルシノー ルとほぼ同じ吸収スペクトルを示し（図 1)、糖転移酵素よる反応生成物のレゾルシノ ール骨格部分には、反応前と大きな変化はないと考えられた。また、この標品を HPL Cに供したところ、図 2に示すように、リテンションタイムが、約 7. 34分と約 9. 42分の 位置に UV280nmに吸収を有する（レゾルシノール骨格を有する） 2種の反応生成 物のピークが認められた (以下、「反応生成物 a」、「反応生成物 b」という。）。これら 2 つのピーク部分の MS分析では、イオンの質量を電荷で除した値 (MZZ)とイオン強 度との関係を示す図 3から明らかなように、何れも質量が 387の酢酸イオン付加分子 イオンが検出され、酢酸イオンの分子量は 59であることから、 2種類の反応生成物の 分子量は、何れも 328であることが判明した。これらの反応生成物の粉末標品 3. 21 g中にしめる含量は、 UV280nmの吸光度による HPLCの溶出パターンを示すチヤ ートにしめる各反応生成物の溶出ピーク面積の測定及び 4 n—ブチルレゾルシノー ルの UV280nmのモル吸光係数 (配糖体の糖質部分は紫外吸収がな!、ので、 4—n ーブチルレゾルシノールとその配糖体とは、 UV280nmのモル吸光係数とは同一と 見なして計算）から、各々 0. 85g及び 1. 87gと計算された (表 4)。
[0077] [表 4]
Figure imgf000029_0001
[0078] <試験例 2 :反応生成物の構造決定 >
実施例 7で調製した反応生成物を含む粉末乾燥標品 lgを、ァセトニトリル z水 Z酢 酸（ = 30Z70ZO. 2)の溶液に溶解した後、この溶解に使用した溶液を移動相とし て用いた D— ODS - 5 S5 (YMC社販売）カラムクロマトグラフィーにより分画して、 2種類の反応生成物 a (純度 99%以上)及び反応生成物 b (純度 96. 8%)を、それぞ れ 0. 25g及び 0. 56g得た。これらの反応生成物の一部を使用して、下記の条件で NMR分析を行い、それぞれの構造を決定した。
<NMR装置 >
装置: JNM—AL300 (日本電子株式会販売）
溶媒: D O
2
基準物質：トリメチルシリルプロピオン酸ナトリウム—2, 2, 3, 3-d
4
磁場強度：1 H— NMR 300. 4MHz
13C - NMR 75. 45MHz
[0079] く NMR解析〉 下記に示す反応生成物 a及び反応生成物 bの NMR分析による化学シフト（図 4乃 至図 13)、及び、ベンゼン環の水素が水酸基（1位、 3位）、 O—ダルコシル基（3位、 1位）、及び、 n—ブチル基 (4位）に置換された場合の化学シフト計算値を参考にして 、反応生成物 a及び反応生成物 bの NMR分析の全てのシグナルを帰属させた。その 結果を表 5に示す。
[表 5]
Figure imgf000030_0001
<反応生成物 aの NMRによる解析 >
¾一 NMRおよび13 C— NMRスペクトルを図 4及び図 5に示した。図 4から明らかな ように、 — NMRにおいて、化学シフトが 6ppm乃至 7ppmの位置にベンゼンプロト ンが 3個分、化学シフトが 3ppm乃至 6ppmの位置に糖の水酸基以外のプロトンが 6 個分、化学シフトが 0. 5ppm乃至 3ppmの位置にブチル基プロトンが 9個分観察され た。図 5から明らかなように、 13C— NMR ^ベクトルにおいては、化学シフトが ΙΟΟρρ m乃至 160ppmの位置にベンゼンカーボンのシグナル 6本（1位と 3位はほぼ同じ位 置）、化学シフトが 60ppm乃至 lOOppmの位置に糖カーボンのシグナル力 ½本、ィ匕 学シフトが lOppm乃至 35ppmの位置にブチル基カーボンのシグナル力 本観察さ れた。また、表 2に示す、各炭素原子の化学シフト δ ( δ
C Μ直力もグルコース残基はピ ラノース型であり、化学シフト δ 97. lppmにァノメリック炭素の、水素原子の化学シ
C
フト δ ( δ ) 5. 52ppmにァノメリックプロトンのシグナルが観察され（図 4及び図 6)、
H
ダルコシル基の 1〜位のィ匕学シフト（δ 97. lppm, δ 5. 52ppm(lH, d, J= 3. 3
C H
Hz) )から (表 5)、グルコース残基は α結合していると考えられた。さらに、ブチル基 1 立プロトンにジエミナル非等価性が認められた（図 5及び図 7)。
[0082] <反応生成物 bの NMRによる解析 >
ェ!！ NMRおよび13 C— NMRスペクトルを図 8及び図 9に示した。反応生成物 bの NMRスペクトルは、反応生成物 aと同様、 H— NMRにおいて、化学シフトが 6ppm 乃至 7ppmの位置にベンゼンプロトンが 3個分、 3ppm乃至 6ppmの位置に糖の水酸 基以外のプロトンが 6個分、化学シフトが 0. 5ppm乃至 3ppmの位置にブチル基プロ トンが 9個分観察された（図 8)ものの、反応生成物 aとは異なり、ブチル基 Γ位プロト ンのジエミナル非等価性はほとんど認められなかった（図 8及び図 10)。 13C-NMR スペクトルは、反応生成物 aとよく似ていた。反応生成物 aと同様、ダルコシル基の 1~ 位のィ匕学シフト（δ 98. Oppm, δ 5. 30ppm (lH, d, J = 3. 7Hz) )力らグノレ =f
C H 一 スは α結合していると考えられた（図 9、図 11及び表 5)。また、遠隔 C—H COSY( コージ一）においてダルコシル基 立のプロトンとの相関が認められるベンゼンカー ボン（2位と 6位)を調べたところ、ブチル基 Γ位プロトンと遠隔カップリングが認められ たベンゼンカーボン（3乃至 5位）とは異なって!/、た（図 12及び図 13)。
[0083] これら解析結果から、反応生成物 bでは、グルコースは 3位ではなく 1位に転移して いると考えられた。従って、反応生成物 bと NMR ^ベクトルの異なる反応生成物 aで は、 3位にグルコースが転移していると考えられた。そして、ブチル基ジエミナルプロト ンの非等価性が反応生成物 aのみで生じたことも、反応生成物 aでは、ブチル基に隣 接してグルコース残基が存在するために、立体障害による回転の制限等の影響を受 けると考えられるので、反応生成物 aのグルコース残基の結合部位が 1位であることと よく一致する。従って、これらの試験結果及びその解析結果は、反応生成物 aが化学 式 1で示される 3— O— a—D—クルコピラノシル 4— n—プチルレゾルシノール、 反応生成物 bが化学式 2で示される l—O— a D ダルコビラノシルー 4—n—ブチ ルレゾルシノールの構造を有することを物語っている。
[化 3]
Figure imgf000032_0001
[化 4]
化学式 2:
Figure imgf000032_0002
また、具体的な MS分析のデータは示さないけれども、図 2に示す CAPCELLPA K C18 AG120カラムを使用した HPLCの溶出画分の LCZMS分析結果におい て、リテンションタイム力 5. 08分乃至 5. 33分、 5. 95分乃至 6. 20分、及び、 8. 2 9分付近に溶出される 3つの画分には、 UV280nmに吸収を有し（レゾルシノール骨 格を有する）、質量が 549の酢酸イオン付加分子イオンが検出されたことから、これら の画分には、質量 490を有し、疎水性の強度の異なる 3種類の反応生成物が含まれ ることが明らかになった。そして、これらの反応生成物の質量量は、ブチルレゾルシノ ールに 2分子のグルコースが結合したブチルレゾルシノールの分子量に相当すること 、及び、化学式 1に示すように、糖転移酵素による 4 n—ブチルレゾルシノールへの グルコース残基の転移部位は、その 1位と 3位の OH基としかないので、この 3種類の 質量 490の反応生成物は、ダルコアミラーゼによる消化が完全に行われていない n ーブチルレゾルシノールの 1位の OH基にマルトシル基が α 結合した l—O— α— D マルトシル 4 η ブチルレゾルシノール及び η ブチルレゾルシノールの 3位 の ΟΗ基に 2分子のマルトシル基が α—結合した 3— O— a—D マルトシルー 4— n—ブチルレゾルシノールと、両方の OH基にグルコース残基力 各々 1個 α結合し た 1, 3 -0 - a—D—ダルコピラノシル— 4— n—ブチルレゾルシノールの何れかで あると判断した。従って、この結果は、シクロマルトデキストリン ダルカノトランスフェラ ーゼを使用した 4 n—ブチルレゾルシノールへの糖転移反応にお!、ては、その何 れか一方の OH基にグルコースが結合した配糖体の生成量よりは少ないものの、両 方の OH基にグルコース残基が結合した配糖体も生成されることを物語っている。
[0087] <試験例 3 :溶解性試験 >
実施例 7で配糖体を調製するための基質として使用した 4 n プチルレゾルシノ ール（以下、「実施例 7で使用した 4 n—ブチルレゾルシノール」という。） 10mg、及 び実験 1で D— ODS— 5 S5を用いたカラムクロマトグラフィーにより調製した l— O - a—D—ダルコピラノシル— 4— n—ブチルレゾルシノール（反応生成物 b) 10mg、 及び、 3— 0— α— D ダルコビラノシルー 4—η—ブチルレゾルシノール（反応生成 物 a) 10mgに、各々脱イオン水を加え、ボルテックスミキサーで 2分間乃至 3分間攪 拌して静置したときに不溶物が目視で認められなくなるときの、それぞれの最大濃度 を求め、それぞれの化合物の溶解度とした。その結果を表 6に示す。
[0088] [表 6]
Figure imgf000033_0001
表 6から明らかなように、 2種類の 4— n—ブチルレゾルシノール配糖体の溶解度は 、何れも 4 n—ブチルレゾルシノールの 2倍であった。これにより、 4—n—ブチルレ ゾルシノールを配糖ィ匕することにより、水に対する溶解度が向上することが確認され た。また、グルコースの結合位置による溶解度の差は認められな力つた。
[0090] <試験例 4 :薬理活性の検討 >
実施例 7で調製した反応生成物含有凍結乾燥粉末（1 O— a D ダルコピラノ シル一 4— n—ブチルレゾルシノール及び 3— O— a—D—ダルコピラノシル一 4— n ブチルレゾルシノールの他に、 4 n ブチルレゾルシノールに 2個以上のダルコ シル残基が結合した 4— n—プチルレゾルシノール配糖体を少量含有:以下、「4— n ーブチルレゾルシノール配糖体含有粉末」という。）、 1 -0- a D ダルコビラノシ ルー 4— n—ブチルレゾルシノール及び 3— O— a—D—ダルコピラノシル— 4— n— ブチルレゾルシノールの 3種類の 4 n ブチルレゾルシノール配糖体標品と、実施 例 7で使用した 4 n プチルレゾルシノールとを使用して、その美白効果を確認す る試験を以下のように行った。すなわち、試験例 1に準じて、マウス B16メラノーマ細 胞を培養し、培養上清を除去後、 4—n—ブチルレゾルシノール或いは 3種類の 4—n ブチルレゾルシノール配糖体標品の何れかを添カ卩して、 4 n ブチルレゾルシノ 一ル或 、は 4 n ブチルレゾルシノール配糖体が、各々表 7に示す濃度なるように 調製した培地を添加して、更に 72時間培養した。細胞を回収し、細胞をキヤビラリ一 管に詰めて色調を観察して、下記判定基準によりメラニン産生抑制作用に基づく白 色化作用の程度を判定し、その結果を表 7に示す。陽性対照として、美白剤として皮 膚外用剤に使用されて 、るコウジ酸（2. 5mM)を使用して同様に美白効果の判定を 行った。また、回収した細胞の一部を、各々生細胞のみを染色する色素（アラマブル 一）で染色し、全細胞中にしめる色素で染色された生細胞の割合（％)を求めて、細 胞生存率（％)として、表 7に示す。また、以下の実験で使用した 4 n プチルレゾ ルシノール配糖体含有粉末中の 4 n ブチルレゾルシノール配糖体の濃度は、 U V280nmにおけるレゾルシノールのモル吸光係数をもとに計算した。
[0091] [表 7] 細胞生存率 培地に添加した成分 美白効果の判定
(%) 無添加 （濃度） 一 99.8
4一 n—プチルレゾルシノール配糖体含有
粉末 （0. 5mM) + 97.2
4一 n—プチルレゾルシノ一ル配糖体含有
粉末 （2mM) + + 95.8
1 -0- a -D-グノレコピラノシノレ一 4 - η—ブチルレゾルシノール （0. 5mM) + 98.2
1一 o— α— D—ダルコピラノシル一 4 - η―ブチルレゾルシノール （ 2 mM) + + 96.8
3— o— a— D—ダルコピラノシル一 4 - η—プチルレゾルシノール （ 0. 5 mM) + 97.7
3 -0- a -D-ダルコピラノシルー 4 - η -ブチルレゾルシノ一ル （ 2 m Μ) + + 97.3
(0. 5 mM) + 98.6
( 1 mM) + + 79.7 コウジ酸
(2. 5 mM) + 92.1
[0092] [白色化作用]
薬剤なしのコントロールの黒色度に対して
一：変化なし。
士：わずかに白色化した。
+ :やや白色化した。
+ + :かなり白色化した。
+ + + :完全に白色化した。
[0093] 表 7から明らかなように、 3種類の 4— n—ブチルレゾルシノール配糖体標品は、い ずれも 0.5mM或いは 2. OmMで、陽性対照物質として設置した 2.5mMコウジ酸と 同等、もしくは、より強い白色化作用が認められた。また、使用した 3種類の 4—n—ブ チルレゾルシノール配糖体標品間では、その美白作用の強さに差は認められなかつ た。一方、 4— n—ブチルレゾルシノールは、 0. 5mM濃度では、 3種類の 4 n—ブ チルレゾルシノール配糖体標品と同等の美白作用を示し、 ImMの濃度では強い美 白作用が認められたものの、 B16メラノーマ細胞の生存率が 79. 7%にまで低下して いることから、この美白作用は、 4—n—ブチルレゾルシノールの細胞毒性によるもの と考えられた。 3種類の 4— n—ブチルレゾルシノール配糖体標品は、濃度が 2. Om Mの場合でも、 B16メラノーマ細胞の生存率は 95. 8%乃至 97. 3%で、培地のみ（ 無添加）で培養した細胞とほぼ同じ細胞生存率を示し、何れも細胞毒性は認められ なかったことから、 4—n—ブチルレゾルシノールは、配糖ィ匕することにより、その美白 効果が低減されることなぐ毒性が低減されることが明らかになった。
[0094] <試験例 5 :薬理活性の検討 >
実施例 7で調製した 4— n プチルレゾルシノール配糖体含有粉末標品を使用して 、 4 n プチルレゾルシノール配糖体の美白効果を確認する試験を以下のように行 つた。すなわち、試験例 2と同じ方法により、マウス B16メラノーマ細胞を 24時間培養 後、培養上清を除去し、各々の試験試料を表 8に示す濃度になるように配合した培 地を添加して、更に 72時間培養した。細胞を回収し、キヤビラリ一管に詰めて色調を 観察して、下記判定基準によりメラニン産生抑制作用に基づく白色化効果の程度を 判定し、その結果を表 8に示す。
[0095] [表 8]
試験試料 配糖体含有粉末 （I mM) 添加 美白効果の判定 の有無
4— n プチルレゾルシノール配糖
体含有粉末 （I mM) +
L ァスコルビン酸ナトリウム 無 +
( 1 mM) 有 + + へ
4ーメ トキシサルチル酸カリウム +
( 1 mM)
¾ 有 + + + コウジ酸 無 +
( 1 mM) 有 + + + アルブチン +
( 1 mM) 有 + + + トラネキサム酸 無 ±
( 1 mM) 有 + + エラグ酸 無 +
( 2 . 5 mM) 有 + +
土 有 + + 力ミツレキス * +
( 1 %) 有 + + + テトラヒ ドロタルクミン +
( 2 mM) 有 + +
* ：エタノール/水 （8 2 ：質量比） 抽出物 （配合量は乾燥物換算量)
[0096] [白色化作用]
薬剤なしのコントロールの黒色度に対して
一：変化なし。
士：わずかに白色化した。
+ :やや白色化した。
+ + :かなり白色化した。
+ + + :完全に白色化した。
[0097] 表 8から明らかなように、 4— n—ブチルレゾルシノール配糖体含有粉末標品は、 L —ァスコルビン酸ナトリウム塩、 4—メトキシサリチル酸カリウム、コウジ酸、アルブチン 、トラネキサム酸、エラグ酸、リノール酸、力ミツレエキス、及びテトラヒドロクルクミンと 併用した場合、相乗的白色化効果を示すことが認められた。この結果は、 4 n—ブ チルレゾルシノール配糖体力 L ァスコルビン酸ナトリウム塩、 4—メトキシサリチル 酸カリウム、コウジ酸、アルブチン、トラネキサム酸、エラグ酸、リノール酸、力ミツレエ キス、及びテトラヒドロクルクミンと併用した場合に、相乗的にメラニンの生成を抑制し 、優れた色白化効果を発揮することを物語っている。
[0098] <試験例 6： 4 n—ブチルレゾルシノール配糖体の抗酸ィ匕効果評価：脂質過酸化抑 制効果 >
1%卵黄レシチンと 0. 4%ドデシル硫酸ナトリウムとの混合溶液 1. 5mLに、 2. 4m molZLの硫酸第一鉄 0. 5mLと、 4. 8mmolZLのァスコルビン酸溶液 0. 5mLとを 加え、さらに、実施例 7で調製した 4— n—プチルレゾルシノール配糖体含有粉末を 緩衝液に溶解して調製した、表 9に示す濃度の 4— n プチルレゾルシノール配糖体 を含有する溶液の何れか 0. 5mLを加え、 37°Cの水浴中で 1時間加温した。その後 、チォバルビツール酸値 (以下、「TBA値」という。）を常法により測定し、過酸化度を 求めた。 4—n—ブチルレゾルシノール配糖体含有粉末の代わりに、ブランクとして緩 衝液、陽性対照として 0. 10%のコウジ酸溶液を 0. 5mLカ卩えて同様に反応させた。 溶液調製には、 10mmol/Lのトリス一塩酸緩衝液 (pH7. 5)を用いた。ブランクの T BA値を 100として、 4 n—ブチルレゾルシノール配糖体含有粉末或いは陽性対照 をカロえた時の TBA値の相対値を求め、 100から減じて求めた過酸ィ匕脂質の生成の 抑制率 (％)を抗酸ィ匕効果として、表 9に示す。
[0099] [表 9]
Figure imgf000038_0001
表 9から明らかなように、 4— n—プチルレゾルシノール配糖体含有粉末を添加した 場合は、 0. 001%以上の添加で、添加量に依存した過酸化脂質の生成の抑制が認 められ、 0. 01%では抑制率が 29. 8%となり、 0. 1%のコウジ酸を添カ卩した場合 (抑 制率 30. 0%)と同等の抑制効果が認められた。更に、 0. 05%の添加では、抑制率 42. 5%に上昇し、 0. 10%以上の添加では 50%を越える強い抑制効果が認められ 、 4 n—プチルレゾルシノール配糖体含有粉末は、コウジ酸に比して抗酸ィ匕効果に 優れていることが確認された。この結果は、 4— n—ブチルレゾルシノール配糖体を皮 膚外用剤に配合することにより、肌に対する強い酸化防止効果が得られるだけでなく 、酸ィ匕防止剤として皮膚外用剤の安定性の向上にも寄与できることを物語っている。
[0101] これらの試験結果は、 4 n—ブチルレゾルシノール配糖体は、メラニン生成抑制 作用及び抗酸化作用などを有することから、これを配合した皮膚外用組成物は、美 白及び Z又は美肌効果や老化防止効果に優れていることを物語っている。また、 4 n ブチルレゾルシノール配糖体は、 4 n ブチルレゾルシノールに比して細胞 毒性が低いことから、皮膚外用剤に配合した場合、皮膚に対する刺激性が 4 n—ブ チルレゾルシノールよりも低 、ことを物語って 、る。
実施例 8
[0102] < 4 n ブチルレゾルシノール配糖体の製造 >
英国特許第 1, 581, 428号明細書の実施例 1に記載の方法に基づき、 4— n—ブ チルレゾルシノールを調製した。この 4— n—ブチルレゾルシノール 20gを、 50mM酢 酸緩衝液 (pH5. 5) 800mLに溶解した後、デキストリン (松谷化学工業株式会社販 売、商品名「パインデッタス # l」）400gを加え、攪拌した後、酢酸緩衝液を加えて、 全量を 4000mLとした。そこへバチルス ステアロサーモフィラス由来のシクロマルト デキストリングルカノトランスフェラーゼ (株式会社林原生物化学研究所販売）を 600 単位 Zg デキストリンをカ卩え、 50°Cで 24時間反応させた。この反応液を 100°Cで 1 0分間加熱して反応を停止させた後、反応液を濾過し、これにダルコアミラーゼ (EC
3. 2. 1. 3、生化学工業株式会社販売）を 10単位 Zg—デキストリン添加し、 PH4. 5、 55°Cに維持して 5時間反応させた。反応液を加熱して酵素を失活させ、濾過し、 濾液を多孔性合成吸着剤、商品名ダイヤイオン HP— 10 (三菱化成工業株式会社 販売）を 6L充填したカラムに SV2で負荷した。カラムを水で洗浄した後、 35%ェタノ 一ルを通液して配糖体画分を溶出させた。得られた画分を濃縮乾固し、 96%ェタノ ールに懸濁溶解したのちに不溶物を除去した。上清を濃縮乾固し、ふたたび水に溶 解した後、凍結乾燥を行ない、 4 n プチルレゾルシノール配糖体を含有する粉末 標品を得た。この標品を、ァセトニトリル Z水 Z酢酸（ = 30Z70ZO. 2)に溶解した 後、この溶解に使用した溶液を移動相として用いた D— ODS— 5 S5 (YMC社販売 )カラムクロマトグラフィーにより分画して、 2種類の反応生成物 a (純度 99%以上)及 び反応生成物 b (純度 96. 8%)を、それぞれ 95%の収率で得た。
[0103] この反応生成物 a及び反応生成物 bを、試験例 3と同じ方法で、 MS分析及び NMR 分析を行ったところ、実験 1と同様に、反応生成物 aは 3— O— a—D—ダルコピラノ シルー 4—n—ブチルレゾルシノールであり、反応生成物 bは l—O— α— D—ダルコ ビラノシル 4— η—ブチルレゾルシノールであることが確認された。また、実験 1と同 様、反応生成物 a及び反応生成物 bより生成量は少ないものの、これらと異なる位置 に溶出された画分に、 1, 3— O— a—D—ダルコビラノシル 4— n—ブチルレゾル シノールに相当する物質の生成を確認した。
[0104] [安全性試験]
実施例 7で調製した 4 n プチルレゾルシノール配糖体を含有する凍結乾燥粉末 標品、実施例 7で D— ODS— 5 S5を用いたカラムクロマトグラフィーにより調製した 反応生成物 a及び反応生成物 bの何れか 3質量部（凍結乾燥標品は、 4 n ブチル レゾルシノール配糖体として 3質量部）を、基剤としてエタノール 5質量部、グリセロー ル 5質量部及び精製水 87質量部を混合した溶液に溶解し、試験液を調製した。この 何れかの溶液を各々 5名（合計 15名）のボランティアの上腕の内側に lcm X 1cmの 範囲に、一日 3回 3日間連続して塗布し、その後 1週間塗布した部位の皮膚の状態を 観察した。また、対照として、試験液を塗布した部分に隣接する lcm X lcmの範囲 に、基剤のみを、 1日 3回 3日間連続して塗布し、塗布開始日から 1週間、皮膚の状 態を観察した。試験溶液或いは対照の溶液を塗布した、何れの場合にも、塗布部位 には、肌荒れや発赤などの変化は認められず、これら 3種類の 4 n—プチルレゾル シノール配糖体標品は、何れも皮膚外用剤に配合しても安全性の高い物質と判断さ れた。
実施例 9
[0105] <アルキル基の異なる 7種類のアルキルレゾルシノール配糖体の製造 >
実施例 7の方法に準じて、 4—n—メチルレゾルシノール、 4—n—ェチルレゾルシノ 一ノレ、 4— n—へキシノレレゾノレシノーノレ、 4— n—ヘプチノレレゾノレシノーノレ、 4— n—ォ クチルレゾルシノール、 4— n—デシルレゾルシノール及び 4— n エイコシルレゾル シノールの何れか 5gとデキストリン lOOgを使用して糖転移反応を行 ヽ、反応液を、 実験 1と同様に、多孔性合成吸着剤 (三菱化成株式会社販売、商品名「ダイヤイオン HP— 20」）を充填したカラムを用いて精製し、 96%エタノールで沈殿する糖質を除 去後、凍結乾燥して、これらのアルキルレゾルシノール配糖体粉末標品（純度は 85 %乃至 91%)を調製した。
[0106] 実施例 9で調製した 7種のアルキルレゾルシノール配糖体粉末標品にカ卩えて、実施 例 7で調製した 4— n—プチルレゾルシノール配糖体の粉末標品を使用して、実験 3 と同じ方法で、 0. 5mM或いは 2mMとなるように各配糖体を、試験例 4と同様にマウ ス B16メラノーマの培地に添加して、その白色化試験を実施したところ、 2mMの濃度 の 4 n ブチルレゾルシノール配糖体含有粉末の添加で強 、白色化効果 (かなり 白色化した）が認められた。 4 n—メチルレゾルシノール配糖体、 4—n—ェチルレ ゾルシノール配糖体、 4—n—ブチルレゾルシノール配糖体、 4—n—へキシルレゾル シノール配糖体、 4— n—へプチルレゾルシノール配糖体を培地に添カ卩したした場合 には、 2mMの濃度でかなり強い白色化効果 (やや白色化した）が認められた。また、 4 n ォクチルレゾルシノール配糖体、 4 n デシルレゾルシノール配糖体及び 4 n—エイコシルレゾルシノール配糖体を培地に添加した場合にも白色化効果が認 められたものの、 4—n—へプチルレゾルシノール配糖体或 、はそれより低分子量の アルキルレゾルシノール配糖体を添加した場合に比して、弱 ヽ白色化効果 (わずか に白色化した)であった。なお、この実験に使用した濃度では、何れのアルキルレゾ ルシノール配糖体においても、細胞の生存率は 96%乃至 99%と高ぐ試験に使用し た濃度においては、 B16メラノーマに対する細胞毒性は認められな力つた。
実施例 10
[0107] <ローション >
実施例 1乃至 6で調製した化合物 1乃至 18を使用し、以下に示す処方に従って、 本発明の皮膚外用剤である、ローションィ匕粧料 1乃至 18を作製した。即ち、処方成 分を 80°Cで攪拌可溶ィ匕し、攪拌冷却してローションを得た。これらのローションは、何 れも優れた美白作用を有していた。なお、以下に示す、本発明の配糖体を配合した 組成物を示す実施例の各成分の配合は、化粧品の総質量に占める各成分の割合 (
%)で示す。
(処方） (%)
(1) 1, 3-ブタンジォーノレ 5
(2) 1, 2 ペンタンジオール 3
(3)グリチルリチン酸ジカリウム 0. 1
(4) L ァスコルビン酸— 2—ダルコシド 3
(5)実施例 1乃至 6の方法で調製したィ匕合物 1乃至 18の何れか 1種
(6)グリセリン 3
(7)水 84. 9
実施例 11
<化粧水 >
下記の配合処方を使用し、常法により化粧水を調製した。本品は、肌に適用するこ とによって、肌を美白にし、且つ肌に張りゃ艷を与える、優れたィ匕粧品であった。また 、本品は、 4— n—ブチルレゾルシノール配糖体を含んでいるので、保存安定性も良 好であった。
(処方） (%)
(1)グリセリン 5
(2) 1, 3 ブチレングリコール 6. 5
(3)モノラウリン酸ポリオキシエチレン
ソルビタン（20E. O. ) 1. 2
(4)エチルアルコール 8
(5)実施例 7の方法で調製した 4 n—ブチル
レゾルシノール配糖体含有粉末 0. 5
(6)乳酸 0. 05
(7)乳酸ナトリウム 0. 1
(8)パラメトキシケィ皮酸 2 ェチルへキシル 0. 1 (9)プルラン 0. 05
(10)防腐剤 適直
(11)香料 適量
(12)水 適直
[0109] この化粧水を 10名のボランティアに、 1日 3回、 10日間使用してもらい、 4-n-ブ チルレゾルシノール配糖体に代えて、 4 n ブチルレゾルシノールを等モル配合し た化粧水で同様の試験を行い、その使用感を比較したところ、何れのボランティアも 4-n-プチルレゾルシノール配糖体を配合したィ匕粧水の方力 肌に対する刺激が 少ないと回答した。
実施例 12
[0110] <化粧水 >
下記の配合処方を使用し、常法により 2層化粧水を調製した。本品は、肌に適用す ることによって、肌を美白にし、且つ肌に張りゃ艷を与える、優れた化粧品であった。 また、本品は、 3— O— a—D モノダルコピラノシル一 4— n—ブチルレゾルシノー ルを含んでいるので、保存安定性も良好であった。
(処方） (%)
(1)スクヮラン 8
(2)テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット 0. 3
(3)ソルビット 34
(4)プルラン 0. 001
(5)エチルアルコール 1
(6)実施例 7の方法で調製した 3— O— a— D—ダル
コピラノシル 4— n—ブチルレゾルシノール 0. 5
(7) L ァスコルビン酸— 2—ダルコシド 2
(8)収れん剤 (カラミン） 0. 1
(9)防腐剤 適量
(10)香料 適量
(11)精製水 残量 実施例 13
[0111] <乳液>
下記の配合処方を使用し、常法により乳液を調製した。本品は、肌に適用すること によって、肌を美白にし、且つ肌に張りゃ艷を与える、優れたィ匕粧品であった。また、 本品は、澱の発生や褐変等もなぐ 1 -0 - a D—ダルコビラノシルー 4—n—ブチ ルレゾルシノールを含んで ヽるので、保存安定性も良好であった。
(処方） (%)
(1)モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン
(20E. O. ) 1
(2)テトラステアリン酸ポリオキシエチレンソルビッ
卜（60E. O. ) 0. 5
(3)モノステアリン酸グリセリン 1
(4)ステアリン酸 0. 5
(5)ベへ-ノレアルコール 0. 5
(6)スクヮラン 8
(7)実施例 7の方法で調製した 1 O α D—ダル
コピラノシノレ 4 η ブチノレレゾノレシノーノレ 1
(8)防腐剤 0. 1
(9)カノレボキシビニノレポリマー 0. 1
(10)水酸化ナトリウム 0. 05
(11)エチルアルコール 5
(12)水 残量
(13)香料 適量
実施例 14
[0112] <乳液>
下記の配合処方を使用し、常法により乳液を調製した。本品は、肌に適用すること によって、肌を美白にし、且つ肌に張りゃ艷を与える、優れたィ匕粧品であった。また、 本品は、澱の発生ゃ褐変等が認められず、 3— O— a—D—ダルコビラノシル—4— n—ブチルレゾルシノールを含んで!/、るので、保存安定性も良好であった。
(処方） (%)
(1)ポリオキシエチレン（20)ポリオキシ
プロピレン（2)セチルエーテル ]
(2)メチルポリシロキサン (信越ィ匕学工業株式会社
販売、商品名「KF96— A」） 2
(3)流動パラフィン（中粘度） 3
(4)プロピレングリコール 5
(5)実施例 7の方法で調製した 3— O— a— D—ダル
コピラノシノレ 4 n ブチノレレゾノレシノーノレ
(6)グリセリン 2
(7)エチルアルコール 15
(8)カノレボキシビニノレポリマー 0. 25
(9)ヒドロキシプロピルセルロース 0. 1
(10)プルラン 0. 05
(11) 2—ァミノメチルプロパノール 0. 1
(12)防腐剤 適量
(13)精製水 残量
産業上の利用可能性
本発明の組成物は、化粧料、医薬部外品及び外用医薬品等、種々の用途に供す ることができる。中でも、抗酸ィ匕効果及び Z又は美白効果に優れているので、化粧料 として特に有用である。また、本発明の 4— n—アルキルレゾルシノール配糖体は、何 れも水溶性が高ぐ且つ優れた作用効果を有するので、種々の用途、好ましくは皮膚 外用美白組成物として用いることができる。

Claims

請求の範囲 下記一般式 1に表される 4位の水素原子が、分岐構造及び Z又は環状構造を有す る炭素数 3乃至 20のアルキル基、或いは、直鎖構造を有する炭素数 1乃至 20のアル キル基で置換された 4 アルキルレゾルシノール配糖体又はその塩。
[化 1] 一般式 1
Figure imgf000046_0001
(但し、式中 R、 Rはそれぞれ独立に水素原子またはグリコシル基を表し、且つ、 R
1 2 1
、 Rの少なくとも何れかはグリコシル基であり、 Rは炭素数 3乃至 20の環状構造、又
2 3
は、分岐構造を有するアルキル基、或いは、炭素数 1乃至 20の直鎖構造を有するァ ルキル基を表す。 )
[2] 前記配糖体におけるアルキル基力 シクロペンチル基、シクロへキシル基、 1 フエ -ルェチル基、 2—フ -ルェチル基、イソォクチル基、アミル基、イソアミル基、イソ ブチル基、ターシャリーブチル基、 1 メチルプロピル基、 1 メチルブチル基、 1 ェチルプロピル基、 1ーェチルー 2—メチルプロピル基、 1 イソプロピル 2—メチ ルプロピル基、 1 ジメチルー 3 メチルブチル基、 1ーブチルペンチル基、 1 イソ ブチルー 3—メチルブチル基、 4 イソステアリル基、メチル基、ェチル基、プロピル 基、ブチル基、へキシル基、ヘプチル基、ォクチル基、デシル基又はエイコシル基で あることを特徴とする、請求の範囲第 1項に記載の配糖体及び Z又はその塩。
[3] 前記配糖体におけるグリコシル基力 ダルコシル基、ガラクトシル基、ァラビノシル基 、マルトシル基、イソマルトシル基、セルビオシル基、ラフイノシル基、ゲンチオビオシ ル基、コージビオシル基、ラミナリビオシル基、ニゲロシル基、サンブビオシル基、ネ ォヘスペリドシル基、セロトリオシル基、グリセロール基及び z又はゲンチォトリオシル 基であることを特徴とする、請求の範囲第 1項又は第 2項に記載の配糖体及び Z又 はその塩。
[4] 一般式 1に於いて、 Rのみがグリコシル基であることを特徴とする、請求の範囲第 1 項乃至第 3項の何れか 1項に記載の配糖体及び Z又はその塩。
[5] 請求の範囲第 1項 1乃至第 4項の何れか 1項に記載の配糖体及びその塩力 選択 される 1種乃至は 2種以上を含有することを特徴とする組成物。
[6] 4 アルキルレゾルシノール配糖体及び Z又はその塩類を 0. 001質量％以上含 有せしめた請求の範囲第 5項に記載の組成物。
[7] 美白用及び Z又は抗感受性疾患用である請求の範囲第 5項又は第 6項に記載の 組成物。
[8] 化粧品、医薬部外品、医薬品又は雑貨の何れかである請求の範囲第 5項乃至第 7 項の何れか 1項に記載の組成物。
[9] 美白組成物及び Z又は抗感受性疾患組成物の有効成分としての請求の範囲第 1 項乃至第 4項の何れか 1項に記載の 4 アルキルレゾルシノール配糖体及び Z又は その塩の使用。
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