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WO2004036228A1 - 液体分注のための方法及び装置 - Google Patents

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WO2004036228A1
WO2004036228A1 PCT/JP2003/012447 JP0312447W WO2004036228A1 WO 2004036228 A1 WO2004036228 A1 WO 2004036228A1 JP 0312447 W JP0312447 W JP 0312447W WO 2004036228 A1 WO2004036228 A1 WO 2004036228A1
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WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
dispensing
image
unit
liquid
tip
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2003/012447
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Nobuhiro Hanafusa
Kiyohiro Sugiyama
Masaru Furuta
Ryo Yamaguchi
Nobuyuki Akinaga
Keisuke Miyamoto
Ryuh Konoshita
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Proteome Systems Ltd
Shimadzu Corp
Original Assignee
Proteome Systems Ltd
Shimadzu Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from JP2003161483A external-priority patent/JP4438323B2/ja
Priority claimed from JP2003161482A external-priority patent/JP4385655B2/ja
Priority claimed from JP2003161484A external-priority patent/JP4483205B2/ja
Application filed by Proteome Systems Ltd, Shimadzu Corp filed Critical Proteome Systems Ltd
Priority to JP2005501342A priority Critical patent/JP4479654B2/ja
Priority to US10/529,005 priority patent/US7823535B2/en
Priority to AU2003266690A priority patent/AU2003266690A1/en
Priority to EP03808895A priority patent/EP1548448A4/en
Publication of WO2004036228A1 publication Critical patent/WO2004036228A1/ja
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Ceased legal-status Critical Current

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    • B01L3/0268—Drop counters; Drop formers using pulse dispensing or spraying, eg. inkjet type, piezo actuated ejection of droplets from capillaries
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
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    • G01N2035/1027—General features of the devices
    • G01N2035/1034—Transferring microquantities of liquid
    • G01N2035/1041—Ink-jet like dispensers

Definitions

  • the present invention relates to a method and an apparatus for dispensing samples and reagents in an analyzer used in fields such as chemical, industrial, clinical and biotechnology. It is. Background art
  • a laser desorption / ionization mass spectrometry method In order to analyze the mass of target molecules, a laser desorption / ionization mass spectrometry method is used in which a sample placed on a sample plate attached to a mass spectrometer is irradiated with laser light to ionize and analyze the sample. Have been When preparing samples by placing them on a sample plate, there are methods that use a matrix and methods that do not.
  • MALDI-TOF matrix-assisted laser desorption / time-of-flight mass spectrometry
  • biomolecules are separated by electrophoresis or the like, then transferred to a membrane and immobilized, and the sample immobilized on the membrane is applied to the membrane using a microdispensing technique using a piezo element.
  • a method for performing mass spectrometry using the reaction products produced by performing various reactions described above has been proposed (see International Publication No. WO98 / 47006 pamphlet).
  • Immunoblotting is generally Western blotting This is a method in which a protein sample or the like is developed by electrophoresis, then immobilized on a membrane, and then its specific antibody to the target substance is reacted as a probe to detect its presence.
  • the sample plate After dispensing reagents and samples to the sample plate or the object on which the membrane is immobilized on the sample plate using a dispensing mechanism such as a piezo element, the sample plate is transferred to another device such as a mass spectrometer or other Transfer to the analyzer or pre-processing device for analysis and next processing. It is first necessary to accurately dispense reagents and samples only to the spots developed on the sample plate ⁇ membrane.
  • the dispensing element is clogged by the dispensing mechanism or that the dispensing element (referred to as a dispensing element) can be exchanged for dispensing another reagent or sample. At this time, when the dispensing element is newly installed or replaced, it may deviate from the predetermined position.
  • a dispensing device that dispenses a small amount of a sample or reagent is required.
  • a method using a piezoelectric element such as a piezo element
  • a method by opening and closing pulp Various methods have been put into practical use, such as a method of using air bubbles formed by locally heating the air.
  • FIG. 16 shows a conventional dispensing device provided with an imaging device for monitoring the tip of the dispensing head.
  • Reference numeral 102 denotes a dispensing mechanism for dispensing a reagent, which has a nozzle at its lower end so that a small amount of reagent can be dropped.
  • An XY table 104 is disposed below the dispensing mechanism 102, and an object to be dispensed with a reagent is placed on the XY table 104.
  • the X—Y table 104 moves in the X and Y directions in the horizontal plane, and positions the reagent dispensing position of the object below the nozzle of the dispensing mechanism 1 ⁇ 2.
  • Reference numeral 106 denotes an imaging device for monitoring the state of droplets formed at the nozzle tip, and a light source 108 is arranged on the opposite side of the imaging device 106 for monitoring with a transmission image.
  • the imaging device 106 that monitors the dispensing state is installed in a horizontal state, that is, at the same height as the nozzle tip.
  • the object is placed on a movable table such as an XY table 104.
  • the imaging device 106 When the imaging device 106 is installed in the horizontal direction and the interference between the table 104 and the imaging device 106 is to be avoided, the imaging device 106 is moved to the X-Y table 104.
  • the equipment must be mounted outside the range of movement, and the equipment becomes larger.
  • the discharge unit has a downward opening, and the liquid filled in the space connected to the discharge unit is pressed by a drive unit equipped with a piezo element, and the liquid is discharged from the discharge unit.
  • a dispensing unit equipped with a piezo chip for discharging droplets.
  • the tip of the piezo chip was imaged with a CCD camera or the like and enlarged and displayed, and the image was filled manually by watching the image. The operator had to wipe off any leaks.
  • a small amount of pL to L is dispensed by a piezo method and a syringe method.
  • the piezo-type dispensing apparatus includes a piezo chip 302 having a discharge section at the tip.
  • the piezo chip 2 presses the liquid reservoir connected to the discharge unit by a driving unit equipped with a piezo element.
  • the droplets are ejected from the ejection section.
  • a piezo dispensing control unit 304 is provided to control the driving unit to discharge a droplet of a certain size.
  • the piezo dispensing control unit 304 sets a piezo element drive. According to the parameters, the droplet 306 is discharged from the piezo chip 302.
  • the syringe-type dispenser uses a motor 3 1 4 to discharge the droplet 6 from the probe 3 12 connected to the syringe pump 3 10 and to operate the syringe pump 3 10. Is carried out.
  • the tip of the probe 3 12 may be provided with a disposable tip 3 16. Tip 316 is replaced for each sample or reagent.
  • the syringe dispensing control unit 318 By controlling the drive of the motor 314 by the syringe dispensing control unit 318 so that the operation parameters of the syringe pump 310 are set, the droplets 306 of a predetermined size are formed. Discharged.
  • the ejection conditions are set according to the liquid properties such as the viscosity of the sample or reagent to be ejected, but the size of the ejected droplets changes due to changes in environmental conditions such as temperature. In addition, the smaller the number of droplets, the more quantitative the sample.
  • An object of the present invention is to enable accurate dispensing at a position to be dispensed. Disclosure of the invention
  • the above object is achieved by a dispensing device that can specify a position to be dispensed and that can automatically dispense to the specified position.
  • the dispensing device of the first aspect includes a dispensing mechanism having a dispensing element for dropping a sample or a reagent, an image reading device for reading a lower image, and an object for dispensing a sample or a reagent.
  • a dispensing mechanism having a dispensing element for dropping a sample or a reagent, an image reading device for reading a lower image, and an object for dispensing a sample or a reagent.
  • Support on top surface move in horizontal plane and move forward
  • a movable table for positioning an object at least at a dispensing position below the dispensing element and at an image reading position below the image reading device; a monitor unit for displaying an image read by the image reading device;
  • a dispensing position specifying unit that specifies a dispensing position on the object based on the image of the object displayed on the monitor unit, and a dispensing position on the object that is specified by the dispensing position specifying unit.
  • a dispensing control unit for performing
  • the image read by the image reading device is displayed on the monitor, and the dispensing position on the object is specified based on the image of the object displayed on the monitor.
  • the dispensing control unit performs relative positioning between the object and the dispensing element, and controls the dispensing operation by the dispensing mechanism, so that the dispensing position is displayed on the image displayed on the monitor unit.
  • the reagent or sample is automatically dispensed to the specified position.
  • the dispensing mechanism may include a plurality of dispensing elements so that a plurality of types of reagents and samples can be injected into a common dispensing position or different dispensing positions.
  • a dispensing position information creating unit may be further provided, and dispensing position information relating to the dispensing position on the object on which the dispensing operation has been performed by the dispensing position designating unit may be created. As a result, it is possible to leave information as to which position of the target object has been dispensed.
  • the dispensing position information creating section may output the created dispensing position information to the outside.
  • the target to which the reagents and samples have been dispensed is transferred to an analyzer such as a mass spectrometer, or to a pretreatment device as needed.
  • the analyzer or pre-processing device at the transfer destination takes in the dispensing position information created and output by the dispensing position information creation unit and dispenses the object.
  • the dispensing position designation unit can designate a dispensing position on the image of the object displayed on the monitor unit by, for example, a cursor.
  • an imaging device for imaging the tip of the dispensing element can be further provided.
  • the imaging device performs the dispensing operation so as to image the tip of the dispensing element that performs the dispensing operation among the dispensing elements. It is supported by the moving mechanism so that it can be moved with the change of the dispensing element.
  • the second aspect of the present invention achieves the above object by enabling accurate dispensing operation even when a dispensing element is newly mounted or replaced. Things.
  • the dispensing device includes a dispensing mechanism in which a dispensing element for dropping a sample or a reagent is detachable, an image reading device that reads a lower image, and a sample or a reagent that is dispensed.
  • a movable table that supports the object on the upper surface, moves in a horizontal plane, and positions the object at least at a dispensing position below the dispensing element and at an image reading position below the image reading device;
  • a dispensing position is detected based on an image read by the image reading device when dispensing is performed at a predetermined position on the movable table by the dispensing mechanism, and the reference position on the movable table read at the same time is detected.
  • the dispensing element of the dispensing mechanism is mounted at a predetermined position.However, to ensure that the dispensing position of the mounted dispensing element is always the same, High machining accuracy is required. In addition, individual dispensing elements have machine differences. Therefore, dispensing is performed so that the dispensing position is the specified position. In order to adjust the mounting of injection elements, a high degree of machining accuracy and skillful adjustment capability are required.
  • the dispensing element of the dispensing mechanism is detachable, and the image reading device when dispensing to a predetermined position on the movable table by the dispensing element is performed.
  • the dispensing position is detected based on the image read by the scanner, and the dispensing position is calibrated based on the reference base point on the movable table read at the same time.
  • the accompanying adjustment work becomes simple.
  • the second aspect also includes one provided with a plurality of dispensing elements.
  • the calibration unit performs calibration for each dispensing element.
  • the above object is achieved by a position information reading apparatus which can create accurate information on a position where liquid dispensing or other processing has been performed.
  • the position information reading device is an image reading device that reads an image of an object on a table, and information or a position specified in the image based on the image read by the image reading device.
  • a position information creating unit that creates information on the detected position based on a plurality of reference points serving as references on the object.
  • a monitor unit that displays an image read by the image reading device, and a position on the object based on the image of the object displayed on the monitor unit
  • a position specifying unit for specifying wherein the position information generating unit generates information on a position on the target object specified by the position specifying unit.
  • the position information reading device uses the information of the position specified in the image or the information of the detected position as a plurality of reference points serving as references on the object. I will make it based on As a result, the position information within the object can be accurately determined based on the reference point.
  • the image reading device reads the image of the table together with the image of the object, and the position information creating unit creates the position on the object based on a plurality of base points serving as references on the table. It can be. As a result, the information of the target position in the object can be accurately determined based on the base point. Then, even when the target object is removed from the table and attached to the table again, it is possible to accurately position the target position within the target object from the position information based on the base point. .
  • the position information creation unit can output the created position information to the outside, even if the object is transferred to another device such as an analyzer, the position information creation unit can use the position information to accurately locate the target position. Can be positioned.
  • a fourth aspect of the present invention achieves the above object by a sample plate that enables accurate information on a position where a liquid dispensing or other processing has been performed to be created.
  • the sample plate of the fourth aspect is a plate-like body having a surface on which a sample or a reagent is dispensed, which is convenient for accurately obtaining positional information.
  • a plurality of reference marks are provided. Since the sample plate is provided with a plurality of position reference marks in the surface on which the sample or reagent is dispensed, it is convenient to generate accurate positional information of the dispensing position in the sample plate.
  • the fifth aspect of the present invention is to reduce the size of the dispensing device,
  • the above-mentioned object is achieved by providing a mechanism capable of monitoring the above.
  • the dispensing apparatus according to the fifth aspect includes a dispensing mechanism having a nozzle for dropping a sample or a reagent, an object on which a sample or a reagent is dispensed is supported on an upper surface, and the object moves by moving in a horizontal plane and the object A movable table for positioning an object below the nozzle; and a flat surface which is within a moving range of the movable table and is mounted at an upper position not in contact with the movable table.
  • the imaging device for monitoring the dispensing state obliquely upward at an angle from the horizontal direction, it can be installed within the movable range of the movable table without interfering with the movable table, The dispensing device becomes smaller.
  • a light source may be arranged at a position opposite to the imaging device with respect to the tip of the nozzle.
  • the light emitted from the light source is reflected by the surface of the object and passes through the tip of the nozzle. It is directed in the direction of incidence on the imaging device.
  • the imaging device can also be set to capture an image of the surface of an object below the nozzle together with an image of the tip of the nozzle.
  • the state of the surface of the object can be monitored together with the monitoring of the nozzle tip, so that more information can be obtained. For example, it is possible to check whether a sample or reagent has been accurately dispensed to the target position.For example, when the sample or reagent to be dispensed is a membrane, It is also possible to observe the state of the film and to observe the change over time in the state of the film during the reaction.
  • a dispensing method and dispensing apparatus using a piezo tip which aims to achieve the above object by facilitating the adjustment of the liquid amount at the tip of the piezo tip before the start of dispensing. Things.
  • the discharge unit has a downward opening, and the liquid filled in the space connected to the discharge unit is pressed by a driving unit equipped with a piezo element, so that droplets are discharged from the discharge unit.
  • An image of the ejection section before filling the space with the liquid is captured and stored by an imaging device, and as a preparation step before starting the dispensing operation from the piezo chip, after filling the space with the liquid,
  • the image of the discharge unit is captured by the imaging device and the pressure control mechanism is controlled while determining the difference from the image before liquid filling.After the liquid appears from the discharge unit, the difference from the image before liquid filling is eliminated. Retract liquid Providing a degree.
  • the image of the tip of the piezo chip before filling the liquid into the piezo chip shows a state in which the liquid does not appear from the ejection part, and is a state that becomes a reference when filling the liquid into the piezo chip. Thereafter, the liquid is poured into the piezo chip, and pressure is applied by a pressure control mechanism to supply the liquid to the discharge section of the piezo chip. This state is a state where the liquid is filled. An image of the discharge section of the piezo chip is acquired from the start of liquid filling, and the difference from the image before filling is obtained.
  • the dispensing apparatus in which the dispensing method of the sixth aspect is executed, comprises a discharge unit having a downward opening, and a liquid filled in a space connected to the discharge unit.
  • a dispensing unit provided with a piezo chip for discharging liquid droplets from the discharge unit by pressing the liquid, a pressure control mechanism capable of adjusting the pressure state of the liquid filled in the space, and capturing an image of the discharge unit
  • a control device that controls the pressure control mechanism so that the liquid is compared with the image, and after the liquid emerges from the discharge section, the liquid is retracted until there is no difference from the image before the liquid is filled.
  • the piezo chip can be more accurately filled with the liquid.
  • delicate pressure control had to be performed while viewing the image of the tip of the piezo chip manually, but in the present invention, the image of the ejection section before filling the piezo chip with liquid is captured by an imaging device and stored.
  • the pressure control mechanism is controlled while acquiring the difference between the image before the liquid filling and the image of the discharge part by the imaging device, and after the liquid emerges from the discharge part and before the liquid filling Since the liquid is retracted until there is no difference from the image of the above, the liquid amount at the tip of the piezo chip can be easily adjusted.
  • a seventh aspect of the present invention is to achieve the above object by improving the quantitativeness of dispensing a small amount of a sample solution or a reagent solution.
  • the quantitative dispensing method obtains an image of a liquid drop from a discharge unit of the dispensing unit, and determines the size of the liquid drop from the image to control the dispensed amount of the liquid drop.
  • the quantitative dispensing method has the following steps (A) to (C).
  • A a step of acquiring an image of a droplet discharged from the discharge unit.
  • B a step of determining the size of the droplet based on the captured image.
  • C adjusting the parameter of the control signal to the discharge drive unit of the dispensing unit so that the dispensed amount of the droplet becomes a predetermined value based on the obtained droplet size.
  • the quantification is improved when dispensing a small amount of pL to L such as a sample solution or a reagent solution.
  • the size of the droplet obtained in step (B) is determined by, for example, the diameter and radius of the droplet.
  • the step of determining the size of the droplet can be performed by automatic calculation using image processing.
  • image processing Such an image processing program is readily available.
  • the droplet size can be determined quickly and accurately.
  • the step of determining the size of the droplet can be performed by manual calculation on the image. According to the manual calculation, the cost required for the image processing program can be reduced.
  • the dispensing unit has a piezo head with a piezo head that discharges liquid droplets from the discharge part by pressing the liquid filled in the space connected to the discharge part at the tip by the drive part with the piezo element.
  • the parameter of the control signal may include at least one of the magnitude of the applied voltage to the piezo element, the rise time of the applied voltage, the applied time, and the fall time of the applied voltage. .
  • the dispensing unit may be of a dispensing type using a syringe pump.
  • the parameter of the control signal may include at least one of stroke, speed, and acceleration of the plunger of the syringe pump.
  • the image for determining the size of the droplet can be an image of a droplet hanging in a ball shape at the tip of the discharge unit.
  • the step of adjusting the parameters of the control signal can be performed by automatic control by a control unit that controls the ejection drive unit. In that case, the number of man-hours of the worker is reduced.
  • the step of adjusting the parameters of the control signal can be performed by inputting the control signal to a control unit that controls the ejection driving unit. In that case, the system becomes simple.
  • FIG. 1 is a perspective view schematically showing one embodiment of a dispensing apparatus.
  • FIG. 2 is a plan view showing an upper surface of a table on which a sample plate and the like are arranged in the embodiment.
  • FIG. 3 is a sectional view showing a dispensing mechanism according to the embodiment.
  • FIG. 4 is a block diagram showing the embodiment as a function.
  • FIG. 5 is a front view showing an embodiment of the dispensing device according to the fifth aspect.
  • FIG. 6 is a schematic front view showing the vicinity of the nozzle tip in the embodiment.
  • FIG. 7 is a block diagram schematically showing an embodiment of the sixth aspect.
  • FIG. 8 is a sectional view schematically showing an example of a piezo chip in the same device.
  • FIG. 9 is a flowchart showing the operation of the embodiment.
  • FIG. 10 is a block diagram schematically showing an apparatus to which the method of one embodiment of the seventh aspect is applied.
  • FIG. 11 is a sectional view schematically showing an example of a piezo chip in the apparatus.
  • FIG. 12 is a waveform chart showing control parameters in the embodiment.
  • FIG. 13 is a flowchart showing the operation of the embodiment.
  • FIG. 14 is a block diagram schematically showing an apparatus to which the method of another embodiment of the same aspect is applied.
  • FIG. 15 is a front view of the tip of the mouthpiece showing a dispensing style in the embodiment.
  • FIG. 16 is a front view showing a conventional dispensing device corresponding to the dispensing device of the fifth aspect.
  • FIG. 17 is a block diagram schematically showing a conventional piezo type dispensing apparatus.
  • FIG. 18 is a block diagram schematically showing a conventional syringe type dispensing apparatus. BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
  • FIG. 1 schematically shows an embodiment of the liquid dispensing apparatus of the present invention.
  • Reference numeral 4 denotes a print head as a dispensing mechanism, which is equipped with four dispensing elements 10-1 to 10-4 each having a piezo element for dispensing a reagent or the like in a row. .
  • the positions of the dispensing elements 10-1 to 10-4 are fixed.
  • a pressure control unit 7 for adjusting the pressure applied to the dispensing element 10-1 to 10-4 in order to control the dispensed amount from the dispensing element 10-1 to 10-4 4 knobs 8 for adjusting the pressure in the dispensing element 10 0-1 to 10-4 are arranged corresponding to each dispensing element 10-1 to 10-4. Are lined up.
  • a scanner 6 is arranged as an image reading device to capture the sample plate to be dispensed together with the table as an image. The position of scanner 6 is also fixed.
  • the table 2 is a movable table that can move in a horizontal plane, on which a sample plate 50 is placed at a predetermined position, as will be described later with reference to FIG. Table 2 moves in a plane, and at the time of dispensing, the specified position of the sample plate 50 is positioned below the dispensing element 10-1 to 10-14. Position the part to be imaged below scanner 6.
  • a CCD camera 5 is arranged as an imaging device for capturing an image of the tip and monitoring the dispensing state.
  • the CCD camera 5 is mounted so as to capture an image of the tip of the dispensing element 10-1 to 10-4 from diagonally above in order to save installation space.
  • the dispensing elements 10 0-1 to 10-4 are for dispensing different liquids, and the dispensing elements 10 0-1 to 1 are arranged such that a predetermined dispensing position such as a sample plate 50 is positioned downward. 0—4 performs the dispensing operation.
  • the camera 5 dispenses so that the image of the dispensing element 1 0—1 to 10—4 performing that operation is captured. Note: It is mounted so that it can move in parallel to the array of elements 10-1 to 10-4.
  • Table 2 Printhead 4, Camera 5 and Scanner It is stored in a case composed of a and a lid 9b, and the lid 9b of the case can be opened at any time, for example, when exchanging the sample plate 50.
  • Fig. 2 shows a sample plate placed on the table 2.
  • Reference numeral 52 denotes a membrane, which is affixed onto the sample plate 50, and into which a reagent or a sample is dispensed.
  • the sample immobilized on the membrane 52 is, for example, a protein, a peptide, which is separated and developed in one-dimensional direction by SDS (sodium dodecyl sulfate) polyacrylamide gel electrophoresis or other chromatography. It is a molecule such as sugar, lipid, nucleic acid or a mixture thereof.
  • the sample can be immobilized on the membrane 52 by spreading the sample on a gel or other electrophoresis medium, and then transferring the sample to the membrane 52.
  • Examples of the material of the membrane used for such solid-phase immobilization include PVDF (polyvinylidene difluoride) ⁇ nitrocellulose, nylon (registered trademark), and derivatives thereof.
  • Liquids and extracts can be dispensed.
  • a substance serving as a probe that binds to the target molecule can be dispensed.
  • an antibody is used when the target molecule is an antigen.
  • a biological substance that specifically reacts with the target molecule can be used.
  • several antibodies and biological substances can be used in combination. It is preferable to dispense the reagent only in the area where the spot on the membrane 52 exists. As a result, waste of reagents can be reduced.
  • a primary reagent containing a probe that specifically reacts with the target substance as a reagent to be dispensed, and a secondary reagent that develops the target substance after reacting with the probe Reagents can be used.
  • the primary reagent is first dispensed from one of the dispensing elements 10-1 to 10-4, and then the dispensing element 10-1 to 10-4 is placed on the area where the primary reagent has been dispensed. Dispense the secondary reagent from the others.
  • a coloring reagent or a fluorescent reagent can be used.
  • a reaction with a metal ion or a method using these methods is also available.
  • a method using a gold colloid-labeled antibody in addition to dispensing a coloring reagent or a fluorescent reagent, a reaction with a metal ion or a method using these methods is also available.
  • Examples of such a method include a method using a gold colloid-labeled antibody, and a method in which a protein or the like having an affinity for metal ions is introduced into a fluorescent reaction using a Ni 2 + chelating enzyme or the like.
  • Each sample plate 50 is provided with a plurality of marks b. These marks b are reference points that serve as references when creating a dispensing position on the membrane 52 attached to the sample plate 50 as information.
  • reference points b are provided at the four corners of a substantially rectangle, and the reference points b are also captured by the scanner 16 together with the image of the membrane 52. Sample play One corner of the sample 50 is cut off to indicate the orientation of the sample plate 50.
  • An area 54 provided on the table 2 is an area provided as a test print unit for performing a dispensing test using the dispensing elements 10-1 to 10-4.
  • a filter paper is attached to it, so that the dispensing state during test printing can be checked with the CCD camera 5.
  • An area 56 provided on the table 2 is a maintenance section for the dispensing elements 10-1 to 10-4, and a sponge 57 is provided.
  • a mark a is provided on the surface of the table 2 as a base point serving as a reference for the position of the sample plate 50 arranged on the table 2.
  • the mark a is a reference when the dispensing position is taken out as information, and is also a reference for matching the position on the image acquired by the scanner 6 with the movement of the table 2.
  • Each of the dispensing elements 10-1 to 10-4 in the head 4 has the same structure.
  • the liquid dispensing device used for the microdispensing method is the dispensing method using the piezo element described above.
  • a reagent filled in a space connected to a discharge section at the tip is pressed by a drive section having a piezo element to discharge droplets from the discharge section.
  • the control signal parameter can include at least one of the magnitude of the applied voltage to the piezo element, the rise time of the applied voltage, the applied time, and the fall time of the applied voltage. .
  • an ink jet type liquid ejection device A device provided with a liquid ejection element used in the device can also be used.
  • a dispensing device using a syringe pump can be used.
  • the parameters of the control signal may include at least one of the stroke, speed, and acceleration of the plunger of the syringe pump.
  • a piezo chip 10 having a discharge port at a lower end and a hollow needle 16 at an upper end as a liquid discharge section is detachably attached to a chip holding section 31 of the liquid dispensing apparatus by a screw 29.
  • the piezo chip 10 can be removed by loosening the screw 29, and can be fixed by tightening the screw 29.
  • the dispensing position shifts.
  • the dispensing position is calibrated based on the base point a on the table 2.
  • the dispensing liquid container 20 is disposable, has an opening at a lower end and an upper end, and is a container for storing a dispensing liquid inside with a lower end opening closed by a lid 15.
  • the lid 15 at the lower end is an elastic septum, which can be penetrated by the hollow needle 16 of the piezo chip 10, and is formed by an elastic member that can close the through hole by elasticity when the hollow needle 16 is pulled out. It is configured.
  • the elastic member forming the lid 15 is, for example, rubber.
  • the air introduction head 30 can be mounted from the upper part of the container 20. It is like that.
  • the air introduction head 30 adjusts the pressure in the container 20 and adjusts the amount of liquid discharged from the chip 10.
  • a seal member 32 is provided at the tip of the air introduction head 30.
  • the seal member 32 is, for example, an O-ring.
  • An arm mechanism is provided for detachably mounting the air introduction head 30.
  • the arm mechanism includes an arm 33 and a lock 36, and the air introduction head 30 is held at one end of the arm 33.
  • the arm 33 has a base end rotatably supported by the liquid dispensing apparatus main body by a pin 34.
  • the lock 36 is rotatably supported on the arm 33 by a pin 38, and a hook 40 is provided at the base end. The hook 40 is engaged with the convex portion 35 fixed to the liquid dispensing device main body, so that the container 20 can be locked while being mounted on the chip 10.
  • the air introduction head 30 is slidably inserted into a hole formed in the arm 33, and is urged by the panel 41 to push the air introduction head 30 toward the container 20.
  • the base end of the air introduction head 30 protrudes from the arm 33, and a crocodile 45 is provided at that portion to prevent the air introduction head 30 from coming out of the arm 33. .
  • the base end of the air introduction head 30 is connected to a pressure control mechanism via a pipe 44.
  • a compressed coil panel 42 is inserted between the arm 33 and the lock 36 to urge the lock 36 in the direction in which the hook 40 engages with the projection 35 around the pin 38. ing.
  • a panel 43 is hung between the arm 33 and the main body of the liquid dispensing apparatus, and the panel 43 urges the arm 33 to pull in the opening direction (clockwise direction in the figure).
  • the container 20 is placed on the tip 10, pushed downward, penetrated the septum 15 with the hollow needle 16, and the solution in the container 20. Immerse the hollow needle 1 into 6. Since the air introduction head 30 is held by the arm 33, the air introduction head 30 is attached to the opening of the container 20 by rotating the arm 33 counterclockwise in the figure. Then, the container 20 and the air introduction head 30 are connected with the seal member 32 while maintaining the airtightness.
  • the hook 40 is engaged with the convex portion 35 and the arm 33 is subjected to the force S, so that the arm 33 is prevented from rotating clockwise so as to open. Since the air introduction head 30 is urged by the panel 41 so as to be pressed in the direction of the container 20, the container 30 and the head 30 are airtightly connected with the arm 33 locked. Is maintained.
  • the liquid can be discharged from the chip 10.
  • push lock 36 in the direction of arm 33 The lock 36 rotates clockwise about the pin 38 in the figure, the hook 40 and the projection 35 are disengaged, and the arm 33 rotates clockwise in the figure by the force of the panel 43. Moves, and the air introduction head 30 moves away from the container 20.
  • the air introduction head 30 can be attached to and detached from the container 20 by using the arm mechanism in this manner, the attachment and detachment of the container 20 and the air introduction head to the container 20 can be achieved.
  • the attachment and detachment of 0 can be easily performed.
  • the CCD camera 5 will be described.
  • a dispensing device that dispenses a small amount of a sample or reagent is required.
  • a method for dispensing a small amount of liquid a method using a piezoelectric element such as a piezo element in the embodiment, a method by opening and closing pulp, a method using bubbles formed by locally heating the solution, and the like.
  • a piezoelectric element such as a piezo element in the embodiment
  • a method by opening and closing pulp a method using bubbles formed by locally heating the solution, and the like.
  • various things have been put to practical use.
  • the CCD camera 5 for monitoring the dispensing state is arranged obliquely upward at an angle from the horizontal direction, so that it can be installed within the movable range of the movable table 2 without interfering with the movable table 2.
  • the dispensing device becomes smaller.
  • a light source may be arranged at a position opposite to the CCD camera 5 across the tip of the dispensing element, in which case the light source reflects the emitted light from the surface of the sample plate 50 that is the object. It is directed to the direction of incidence on the CCD camera 5 via the tip of the dispensing element.
  • the light source By providing such a light source, it is possible to monitor the sample or reagent droplet formed at the tip of the dispensing element. In this case, the image of the droplet can be captured with transmitted light, so that a clearer image can be obtained and accurate monitoring can be performed. Further, by turning on the light source in synchronization with the dispensing timing, droplets can be captured like a still image.
  • the CCD camera 5 can also be set to capture an image of the sample plate surface below the dispensing element together with an image of the dispensing element tip.
  • the state of the surface of the sample plate can be monitored together with the monitoring of the tip of the dispensing element, so that more information can be obtained. For example, it is possible to check whether a sample or reagent has been accurately dispensed to a target position.For example, if the sample or reagent to be dispensed is a membrane, the membrane before and after dispensing can be confirmed. It is also possible to observe the state of the film and to observe the change over time of the film state during the reaction.
  • this dispensing device there is a device for dispensing a reagent into a solid phase such as a polyvinylidene difluoride (PVDF) membrane.
  • a solid phase such as a polyvinylidene difluoride (PVDF) membrane.
  • PVDF polyvinylidene difluoride
  • a reagent is dispensed to develop the spot.
  • a solid phase nitrocellulose, nylon (registered trademark), or the like can be used in addition to the PVDF membrane.
  • FIG. 4 shows the functions of the device of FIG. 1 as a block diagram.
  • Reference numeral 60 denotes a monitor that displays an image read by the image reading device 6 such as a scanner.
  • the dispensing position designation section 62 is for designating a dispensing position on the object 50 based on an image of the object 50 such as a membrane displayed on the monitor section 60.
  • the dispensing control unit 64 controls the relative position between the object and the dispensing element so that the dispensing position on the object specified by the dispensing position specifying unit 62 is below the dispensing element of the dispensing element 10. The positioning is performed, and the dispensing operation by the dispensing element 10 is controlled.
  • Dispensing element 10 has piezo element
  • the dispensing control unit 64 adjusts the pressure in the dispensing element 10 by the pressure control unit 7, and controls the application of voltage to the piezo element by the dispensing control unit 66. The liquid is discharged from the piezo element.
  • the dispensing position information creating unit 68 creates dispensing position information on the dispensing position on the object 50 on which the dispensing operation has been performed by the dispensing position designation unit 62.
  • the dispensing position information creating section 68 can output the created dispensing position information to the outside.
  • the object 50 is provided with a plurality of reference points b, which serve as a reference for the position in the object, and the image reading device 6 transmits the reference point b together with the image of the object 50.
  • the analysis position information creation unit 68 can create the position on the object 50 specified by the analysis position designation unit 62 based on the plurality of reference points b. Even if it is detached and attached to the playback table 2 at any time, if an image is acquired by the scanner 6, accurate positioning can be performed based on the reference point b. Also, when the object 50 is moved to an analyzer or the like, it is possible to accurately position the dispensing position within the object 50 from the dispensing position information based on the reference point b. become able to.
  • the table 2 supporting the object is driven by the table driving mechanism 65 and moves in a plane, and is positioned at a predetermined position instructed by the dispensing control section 64.
  • a plurality of reference base points a are provided on the table 2 so that the image reading device 6 reads the image of the base point a together with the image of the object 50.
  • the position on the object 50 can be created based on a plurality of base points a.
  • the dispensing position information within the object 50 can be accurately determined based on the base point a .
  • the dispensing element 10 for dropping a sample or a reagent is detachable, and includes a calibrating unit 72 for calibrating the dispensing position of the dispensing element 10.
  • the calibration section 72 detects the dispensing position based on the image read by the image reading device 6 when dispensing is performed at a predetermined position on the table 2 by the dispensing element 10 and simultaneously reads the table. Calibrate the dispensing position based on the above base point. Dispensing for calibration is performed at a plurality of predetermined positions, for example, as indicated by three points of a membrane 53 that discolors when a reagent or the like on the table 2 shown in FIG. 2 is dispensed. Perform this calibration every time the dispensing element is attached.
  • the position information to be obtained is not limited to the information on the dispensing position.
  • the present invention can be similarly applied to a case where information of a detected position such as a spot in an image read by an image reading device is created.
  • FIG. 5 shows an embodiment of the dispensing apparatus of the same phase.
  • the dispensing mechanism 102 for dispensing a reagent (or sample) has a nozzle at its lower end so that a small amount of liquid can be dropped.
  • An X-Y table 104 as a movable table is arranged below the dispensing mechanism 102, and an object to be dispensed is placed on the X-Y table 104. Is done.
  • the X—Y tapes 104 are attached to the Y drive mechanism 104 Y and the Y drive mechanism 104 Y, which drive the surface supporting the object in the direction perpendicular to the paper surface (Y direction).
  • It has an X drive mechanism 104 X that drives the surface supporting the object in the horizontal direction (X direction) in the figure.
  • the object support surface of the X-Y table 104 was moved in the Y and X directions in the horizontal plane by the Y drive mechanism 104 and the X drive mechanism 104 X, and was placed on the support surface. Dispensing target object Below nozzle of 102 Position.
  • the imaging device 106 is, for example, a CCD camera, and the imaging device 106 is a nozzle tip of the dispensing mechanism 102 so that the light receiving axis 110 of the imaging device 106 has an angle 0 from the horizontal direction. It is mounted diagonally above the part.
  • the imaging device 106 is set to capture an image of a droplet formed at the tip of the nozzle of the dispensing mechanism 102.
  • the position on the plane where the imaging device 106 is mounted is within the moving range of the X_Y table 104, but the X- ⁇ table 104 moves within the moving range.
  • the mounting position of the imaging device 106 is set above the X-tape 104 so that the imaging device 106 does not come into contact with the imaging device 106.
  • There is an appropriate range for the angle ⁇ between the light receiving axis 110 of the imaging device 106 and the horizontal plane. 0 is at least large enough that the imaging device 106 does not interfere with the table 104, and captures an image of a sample or reagent droplet formed at the nozzle tip of the dispensing mechanism 102. It is set in a range that does not hinder the operation.
  • An appropriate angle ⁇ is about 15 to 45 degrees.
  • a light source 108 is attached above the X-tape 104 at a position opposite to the imaging device 106 across the nozzle tip, and the imaging device 106 captures images with transmitted light. You can do it.
  • the light 1 1 2 emitted from the light source 8 is reflected by the surface of the object 1 1 4 on the X-tape 104, and the nozzle 1 2 of the dispensing mechanism 102
  • the light source 108 and the imaging device 1 pass through the droplets 122 formed at the leading end of the imaging device 106 and enter the imaging device 106 along the light receiving axis 110 of the imaging device 106.
  • relative position of nozzle 120 and target object 114 are set.
  • the depth of field of the imaging device 106 must be set so that the surface of the droplet 122 at the tip of the nozzle and the surface of the object 114 underneath are also focused. Is preferred. Thus, the state of the droplet 122 at the nozzle tip and the state of the surface of the object 114 can be simultaneously captured and monitored.
  • this dispensing device there is one for dispensing a reagent to a solid phase such as a PVDF (polyvinylidene difluoride) membrane.
  • a solid phase such as a PVDF (polyvinylidene difluoride) membrane.
  • the spot developed by thin-layer chromatography is transferred to the PVDF membrane, and a reagent is dispensed to develop the spot.
  • nitrocellulose, nylon (registered trademark), and the like can be used in addition to the PVDF membrane.
  • One way to achieve such image capture is to use a flash as the light source 108, make the imaging device 106 continuously capture images, and start dropping from the nozzle 120 There is a method of fixing the time until the light is turned on. This makes it easy to image a large number of droplets at the same timing and monitor the shape of the droplets.
  • a droplet shape monitor controls the voltage applied to the piezo element of the dispensing mechanism that dispenses samples and reagents, the opening and closing of the valve, etc., so that the shape of the droplet repeated many times becomes constant.
  • FIG. 7 schematically shows an example of a dispersing apparatus according to an embodiment of the sixth aspect.
  • Reference numeral 201 denotes a dispensing mechanism using a piezo chip, which is provided with a piezo chip as shown in FIG. 8 described later.
  • Reference numeral 203 denotes a droplet discharged from the piezo chip, which is dispensed to a target 205 such as a container plate held below the dispensing mechanism 201.
  • a CCD camera 204 is arranged as an imaging device for capturing and monitoring an image of the discharge section at the tip of the dispensing mechanism 201.
  • the CCD camera 204 can simultaneously image the ejected droplets 203 along with the state of the ejection unit.
  • the imaging device is not limited to a CCD camera, and another camera may be used.
  • the CCD camera 204 captures an image of the tip of the dispensing mechanism 1 from the horizontal direction. Although the image may be taken from an obliquely upward direction with an inclination from the horizontal, it is preferable to take an image from the horizontal direction in order to more accurately monitor the state of the tip of the discharge section.
  • the tip of the dispensing mechanism 1 is placed on the optical axis of the CCD camera 204 so that an image can be taken with transmitted light.
  • the light source 2 is disposed on the opposite side of the CCD camera 204 from the side.
  • the light source 202 may emit light that is continuous in time, but a flashlight is used in this embodiment.
  • a strobe it can be set to emit light in synchronization with the timing at which the droplets 203 are ejected from the dispensing mechanism 201, in which case the camera 204 is operated continuously. Even when the flash is on, a clear image is captured only when the strobe light is emitted. Since the clear image is obtained by capturing the images of the droplets 203 sequentially discharged at the same timing, information like a still image can be obtained. Therefore, it is convenient to monitor the state of the droplet 203.
  • Reference numeral 206 denotes a dispensing control unit, which applies a voltage to the piezo element of the dispensing mechanism 201. Discharge is performed by applying.
  • the timing at which the strobe 202 emits light is synchronized by the dispensing control unit 206 with the timing of voltage application to the piezo element of the dispensing mechanism 201 from the dispensing mechanism 201. It is controlled to emit light after a certain period of time from the ejection of the droplet.
  • Reference numeral 208 denotes a pressure control mechanism, which keeps the discharge liquid such as a sample or a reagent filled in the reservoir, which is a space for filling the liquid of the dispensing mechanism 201, so as to always maintain a constant pressure. is there.
  • the pressure control mechanism 208 is also used in the present invention to adjust the liquid level at the tip of the discharge section before the start of the discharge operation.
  • Reference numeral 206 denotes a control computer, which controls a dispensing control unit 206 to control dispensing operation, includes a storage device for storing images captured by the CCD camera 204, and a dispensing mechanism 200. Compare the image stored in the storage device with the image of the discharge unit before filling the reservoir of the piezo chip with the liquid in 1 and the image after filling the reservoir with the liquid. After the appearance, the function of the control device that controls the pressure control mechanism 208 so as to retreat until there is no difference from the image before liquid filling is also realized.
  • FIG. 8 schematically shows an example of a piezo chip in the dispensing mechanism 201.
  • the piezo chip is provided with a flow path from the reservoir 232 to the hole of the discharge section 230 at the tip, and the liquid in the reservoir 232 or the flow path is supplied to a driving section having a piezo element.
  • the liquid is discharged from the discharge part 230 by pressing with the liquid 234.
  • the driving of the piezo element is controlled by the dispensing control unit 6.
  • a pressure control mechanism 208 is connected to the reservoir 232 so as to maintain a constant pressure state even when the sample and the reagent in the reservoir 232 decrease.
  • the parameter that the dispensing control unit 206 controls the driving of the piezo element is It is the magnitude of the applied voltage to the piezo element, the applied voltage rise time, the applied time, the applied voltage fall time, or at least one of them.
  • the operation of adjusting the liquid level at the tip of the discharge section before the start of the dispensing operation in this embodiment will be described. In this embodiment, the case where the adjustment is automatically performed by the control computer 7 is described. However, this operation can also be performed manually while viewing the image of the tip of the discharge section.
  • the tip of the piezo chip can be confirmed by capturing the image of the CCD camera 204.
  • control computer 7 instructs the piezo chip to fill the solution
  • control computer 207 first acquires and holds an image of the tip of the piezo chip before filling with the CCD camera 204. This image is referred to as an image (a).
  • control computer 2007 controls the pressure control mechanism 208 to pressurize the solution and push it out toward the tip of the piezo chip.
  • control computer 7 periodically captures the image of the tip of the piezo chip using the CCD camera 2 • 4, and calculates the difference from the previously captured image (a) before filling. If there is a change in the difference, it means that extra solution has come out from the tip of the piezo chip.
  • feedback is applied to the pressure control.
  • control computer 207 periodically captures the image of the tip of the piezo using the CCD camera 204, and continues to take the difference from the previously captured image (a) before filling. I have.
  • the feed pack is periodically applied to the control, and the feed pack is stopped when the amount of excess liquid is detected from the difference between the images, and the state is maintained.
  • FIG. 10 schematically shows an apparatus to which the method of the seventh embodiment of the present invention is applied, in which a piezo-type dispensing apparatus is used to automatically determine the size of a droplet. This shows a case in which the control for keeping the constant is also performed automatically.
  • a CCD camera 320 for a droplet 6 discharged from the piezo chip 302 is provided as an imaging device.
  • Reference numeral 3222 denotes an image storage unit for storing an image captured by the CCD camera 320. The image capture by the CCD camera 320 is synchronized with the timing at which the droplet 6 is ejected, or asynchronously.
  • An image processing unit 3 2 4 performs image processing such as binarization and contour extraction on the image stored in the image storage unit 3 2 2, and performs processing such as the diameter of the droplet. Obtain the size such as the radius and calculate the dispensed volume. If the image of the droplets processed by the image processing unit 324 is captured by the CCD camera 320 in synchronization with the discharge of the droplets, the image of each droplet at the same time from the discharge It is. In the case of asynchronous capture, multiple images are captured in chronological order by the CCD camera 320 for one image.Force of that, each droplet uses the image of the droplet passing through the same place. Perform image processing in 3 2 4.
  • Reference numeral 326 denotes an image processing unit which displays an image of the image-processed droplet.
  • the dispensed amount obtained by performing the image processing in the image processing unit 324 is sent to the piezo dispensing control unit 304 a.
  • the piezo dispensing control unit 304 a controls the driving of the piezo chip 302 so that the dispensed volume (the size of the droplet 6) to be discharged next becomes equal to a preset value. .
  • the liquid reservoir 332 connected to the hole of the ejection section 330 at the leading end is pressed by the driving section 3334 having the piezo element. By doing so, the liquid is discharged from the discharge unit 330.
  • a pressurizing unit (not shown) is connected to the liquid reservoir 3332 so as to maintain a constant pressure state even when the amount of the sample or the reagent in the liquid reservoir 3332 decreases.
  • the parameter that the piezo dispensing control section 304 a controls the driving of the piezo chip 2 depends on the magnitude of the voltage applied to the piezo element, as shown in 12-2. V. , Applied voltage rise time t, applied time t 2 , applied voltage fall time t 3 , or at least one of them.
  • FIG. 13 summarizes the operation of this embodiment.
  • the driving of the piezo chip 302 is controlled by a preset piezo chip control parameter, and the droplet 6 is ejected.
  • the CCD camera 320 captures the image of the droplet 360 in synchronization with or asynchronously with the ejection of the droplet, and stores the image in the image storage unit 322.
  • the image processing section 3224 performs image processing such as binarization and contour extraction on the image stored in the image storage section 3222 to determine the size of the droplet, such as the diameter and radius, and calculates the size of the droplet. Calculate injection volume.
  • the piezo dispensing control section 304 a repeats the driving of the piezo chip 302 without changing the piezo chip control parameters.
  • the piezo tip control parameter is changed, and the piezo dispensing control section 304a sets the next dispensed volume to be equal to the predetermined value.
  • the driving of the piezo chip 302 is controlled.
  • FIG. 14 schematically shows an apparatus to which the method of the other embodiment is applied, in which a dispensing apparatus using a syringe pump is used to automatically determine the size of a droplet and control the same to be constant. Also shows the case of performing automatically.
  • the droplet 6 is discharged from the probe 3 12 connected to the syringe pump 3 10 by controlling and driving the motor 14 for operating the syringe pump 3 10 by the syringe dispensing control unit 3 18 a.
  • a disposable tip 3 16 is provided at the tip of the probe 3 12.
  • the CCD camera 320 taking in the image of the liquid droplet 310, the image storage unit 322, the image processing unit 324, and the image display unit 326 are the same as those shown in FIG. is there.
  • the syringe dispensing control unit 318a captures data on the size of the droplet, such as the diameter and radius of the droplet 306, from the image processing unit 324, and discharges it from the next.
  • the drive of the motor 314 is controlled so that the size of the droplet 306 to be set becomes equal to a preset value.
  • the parameters that the syringe dispensing control section 318a controls the driving of the motor 314 are all or at least one of the stroke, speed, and acceleration of the plunger.
  • a disposer should be used.
  • the droplet 3 06 hangs on the tip of the pull tip 3 16 (the tip of the probe 3 12 if the disposer pull tip 3 16 is not used).
  • the image is captured by 20 and image processing such as binarization and contour extraction is performed by the image processing unit 322, and the diameter or radius of the droplet is calculated to calculate the dispensed amount.
  • the syringe dispensing control device 3 18 a returns the plunger if the liquid volume corresponding to the size of the obtained droplet 310 is larger than the target dispensing volume. By pressing the plunger if not enough, the dispensing amount is controlled in real time, and the probe or disposable tip droplet 306 is dispensed to the container 340 or the plate 342.
  • the liquid dispensing apparatus of the present invention is used, for example, as a method and apparatus for dispensing reagents and the like onto a membrane in order to develop a solid-phased substance developed on the membrane into a sample for mass spectrometry or the like. Can be used.

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Abstract

対象物上にサンプルや試薬を分注するための方法と装置である。モニター部（６０）に表示されたメンブレンなどの対象物（５０）の画像に基づいて対象物（５０）上の分注位置を分注位置指定部（６２）で指定すると、分注制御部（６４）は対象物上の指定分注位置が分注素子（１０）の下方にくるように対象物と分注素子との相対的位置決めを行ない、分注素子（１０）による分注動作を制御する。分注位置情報作成部（６８）は、分注位置指定部（６２）が指定し分注動作がなされた対象物（５０）上の分注位置に関する分注位置情報を作成し、外部に出力することができる。

Description

明 細 書
液体分注のための方法及び装置 技術分野 ' 本発明は、 化学、 工業、 臨床、 バイオ技術などの分野で使用される分 析装置において、 サンプルや試薬を分注するための方法と装置に関する ものである。 背景技術
対象分子の質量を分析する目的で、 質量分析装置に装着されたサンプ ルプレート上に配置された試料にレーザー光を照射することにより試料 をイオン化して分析するレーザー脱離イオン化質量分析方法が行なわれ ている。 試料をサンプルプレート上に配置して作成する際、 マトリック スを使用する方法と、 使用しない方法がある。
マトリックスを使用する方法を飛行時間型質量分析装置と組み合わせ た方法は、 MA L D I— T O F (マ ト リ ックス支援型レーザー脱離ィォ ン化ー飛行時間） 質量分析方法と呼ばれている。 MA L D I—T O Fで は、 測定試料はマトリックス溶液とともにサンプルプレートに滴下し、 乾燥後測定を行なっている。
一方、 対象試料としては、 生体分子を電気泳動等により分離した後、 メンプレンに転写して固相化し、 そのメンブレンに固相化された試料に 対しピエゾ素子による微量分注技術を利用してメンプレン上で各種反応 を行ない生成する反応産物を利用して質量分析する方法が提唱されてい る （国際公開第 WO 9 8 / 4 7 0 0 6号パンフレツ ト参照。）。
メンプレン上に展開して固相化された物質を検出する方法として、 免 疫プロット法がある。 免疫ブロット法は一般にはウェスタンプロット法 とも呼ばれ、 タンパク質試料等を電気泳動により展開し、 その後メンプ レンに固相化した後に、 対象物質に対する特異抗体をプロープとして反 応させてその存在を検出する方法である。
サンプルプレート、 又はサンプルプレート上にメンプレンを固定した 対象物にピエゾ素子などによる分注機構により試薬やサンプルを分注し た後、 そのサンプルプレートなどを別の装置、 例えば質量分析系やその 他の分析装置、 又は前処理装置に移し変えて分析や次の処理を行なう。 サンプルプレートゃメンプレンに展開したスポットのみに正確に試薬 やサンプルを分注することがまず必要になる。
分注機構で分注素子が詰まったり、 他の試薬やサンプルを分注するた めに分注素子 （分注素子という） を交換できるようになつていることが 好ましい。 その際、 分注素子を新たに装着したり、 交換したりしたとき に、 所定の位置からずれることがある。
試薬やサンプルを分注したサンプルプレートは次の分析装置や処理装 置に移し替えたとき、試薬などを分注した位置を正確に知る必要がある。 対象物に対し処理を施したときにその位置情報を知りたいという要請 は、 液体分注装置に限らず種々の分析装置や処理装置で共通している。 サンプル、 試薬にかかわらず、 液相を用いることの多い分析装置の分 野では、 分析の際に使用する溶液の量を減らす試みが行われている。 こ れは、 貴重なサンプルの無駄を省くためや高価な試薬の使用量を減らす ためのみならず、 溶液間の生化学的な反応においては、 溶液の量が少な V、ほど反応にかかる時間が短くてすむため、 実験の処理効率をあげるた めに有効な方法だからである。
微量溶液で反応を実行するためには、 サンプル又は試薬を微量に分注 する分注装置が必要である。 微量の液を分注するための方法として、 ピ ェゾ素子などの圧電素子を用いた方法やパルプの開閉による方法、 溶液 を局所的に加熱してできる気泡を用いる方法など、 様々なものが実用化 されている。
微量な液体を目的の容器に分注する際には、 圧電素子であれば素子へ の電圧の与え方、 パルプを用いるのであれば開閉時間など、 種々のパラ メータの微妙な制御が要求される。 これらのパラメータを最適化するた め、 また、 数多くのポジションに分注する際には分注時間も長期にわた るため、 分注する液滴の形状をモニタして分注機のおかれている環境の 変化ゃ圧電素子の経時変化に対応するために、 分注へッド先端部に形成 される液滴の画像を撮像装置で取り込んでモニタすることが行われてい る。
第 1 6図に分注へッド先端部をモニタする撮像装置を設けた従来の分 注装置を示す。
1 0 2は試薬を分注する分注機構であり、 その下端にノズルを有し、 微量の試薬を滴下できるようになつている。 分注機構 1 0 2の下部には X— Yテーブル 1 0 4が配置されており、 X— Yテーブル 1 0 4上には 試薬の分注される対象物が載置される。 X— Yテーブル 1 0 4は水平面 内で X方向と Y方向に移動し、 対象物の試薬分注位置を分注機構 1 ◦ 2 のノズルの下方に位置決めする。
1 0 6はノズル先端部に形成される液滴の状態をモニタする撮像装置 であり、 透過画像でモニタするために撮像装置 1 0 6と反対側には光源 1 0 8が配置されている。
目標とする分注ポジションに正確に分注するためには、 分注ノズル先 端部と対象物の距離は短いほうが好ましい。 そのため、 分注状態をモ- タリングする撮像装置 1 0 6は、 水平状態に、 すなわちノズル先端部と 同じ高さに設置されている。
また、 対象物上の多数のポジションで安定した分注を行うために、 第 1 6図に示されているように、 対象物は X— Yテーブル 1 0 4などの可 動テーブルに乗せられる。
撮像装置 1 0 6を水平方向に設置し、 かつ、 一¥テーブル1 0 4と 撮像装置 1 0 6との間の干渉を避けようとすると、 撮像装置 1 0 6を X 一 Yテーブル 1 0 4の移動範囲外に取り付けなければならず、 装置が大 型化する。
ピエゾチップを備えた分注装置としては、 吐出部が下向きの開口をも ち、 その吐出部につながる空間に充填された液を、 ピエゾ素子を備えた 駆動部により押圧することによりその吐出部から液滴を吐出するピエゾ チップを備えた分注ユエットがある。
そのような分注装置で、 ピエゾチップから液を微量分注する場合、 そ のピエゾチップの先端に余分な液が存在せず、 ちょうど先端まで液が充 填された状態を保たなくては意図した液量の液滴を 出させることはで きない。
そのため、 これまでは、 分注を開始する前のテスト分注においてピエ ゾチップ先端を C C Dカメラ等で撮像して拡大表示し、 その画像を見な がらマニュアル操作で充填し、 余分な液が先端から漏れていれば拭き取 るという操作を行なっていた。
しかし、 従来のマニュアルによる方法では、 ピエゾチップへの液の充 填は経験がないとなかなかうまくできず、 意図した大きさの液滴を作り 出すことが困難であった。
サンプル液や試薬液などの p L〜 Lの微量分注はピエゾ方式ゃシリ ンジ方式で行われている。
ピエゾ方式の分注装置は、 第 1 7図に示されるように、 先端に吐出部 をもつピエゾチップ 3 0 2を備えている。 ピエゾチップ 2は吐出部につ ながる液溜めを、 ピエゾ素子を備えた駆動部により押圧することにより 吐出部から液滴 3 0 6を吐出する。 駆動部を制御して一定の大きさの液 滴を吐出するために、 ピエゾ分注制御部 3 0 4が設けられており、 ピエ ゾ分注制御部 3 0 4に設定されたピエゾ素子駆動のパラメータに従って ピエゾチップ 3 0 2から液滴 3 0 6を吐出する。
シリンジ方式の分注装置は、 第 1 8図に示されるように、 シリンジポ ンプ 3 1 0につながるプローブ 3 1 2からの液滴 6の吐出を、 シリンジ ポンプ 3 1 0を作動させるモータ 3 1 4を駆動することにより行なう。 プロープ 3 1 2の先端にはデイスポーザブル （使い捨て） チップ 3 1 6 が設けられることもある。 チップ 3 1 6はサンプル又は試薬ごとに付け 替えられる。 シリンジポンプ 3 1 0の動作パラメータが設定されたもの になるように、 シリンジ分注制御部 3 1 8によりモータ 3 1 4の駆動を 制御することにより、 所定の大きさの液滴 3 0 6が吐出される。
吐出しょうとするサンプルや試薬の粘性などの液性によって吐出条件 を設定しているが、 温度など環境条件の変化によって吐出される液滴の 大きさは変化する。 また液滴が微量になればなるほど定量性にかけてく る。
本発明は、 分注すべき位置に正確に分注できるようにすることを目的 とするものである。 発明の開示
本発明の第 1の局面は、 分注すべき位置を指定することができ、 指定 した位置に自動的に分注できるようにする分注装置によって上記目的を 達成するものである。
その第 1の局面の分注装置は、 サンプル又は試薬を滴下する分注素子 を備えた分注機構と、 下方の画像を読み取る画像読取り装置と、 サンプ ル又は試薬が分注される対象物を上面に支持し、 水平面内で移動して前 記対象物を少なくとも前記分注素子の下方の分注位置及び前記画像読取 り装置の下方の画像読取り位置に位置決めする可動テーブルと、 前記画 像読取り装置が読み取った画像を表示するモニター部と、 前記モニター 部に表示された前記対象物の画像に基づいて対象物上の分注位置を指定 する分注位置指定部と、 前記分注位置指定部が指定した対象物上の分注 位置が前記分注機構の分注素子の下方にくるように前記対象物と分注素 子との相対的位置決めを行ない前記分注機構による分注動作を制御する 分注制御部とを備えている。
第 1の局面の分注装置によれば、 画像読取り装置が読み取った画像を モニター部に表示し、 そのモニター部に表示された対象物の画像に基づ いて対象物上の分注位置を指定することにより、 分注制御部が対象物と 分注素子との相対的位置決めを行ない分注機構による分注動作を制御す るようにしたので、 モニター部に表示された画像上で分注位置を指定す ることにより、 その指定された位置に試薬やサンプルが自動的に分注さ れる。
分注機構は分注素子を複数個備え、 共通の分注位置又は異なる分注位 置に複数種類の試薬やサンプルを注入できるようにしてもよい。
分注位置情報作成部をさらに備え、 分注位置指定部が指定し分注動作 がなされた対象物上の分注位置に関する分注位置情報を作成するように してもよい。 これにより、 対象物のどの位置に分注がなされたかを情報 として残すことができる。
さらに、 分注位置情報作成部は作成した分注位置情報を外部に出力で きるものとしてもよい。 試薬やサンプルが分注された対象物は、 質量分 析装置などの分析装置に移送されたり、 必要に応じて前処理装置に移送 される。 その際、 移送先の分析装置や前処理装置では、 分注位置情報作 成部が作成し出力した分注位置情報を取りこみ、 その対象物の分注され た位置を知ることにより分注位置の分析を行なったり、 分注位置に前処 理を施したりする作業を容易に行なうことができるようになる。
分注位置指定部はモニター部に表示された対象物の画像上で、 例えば カーソルにより分注位置を指定するようにするものとすることができる。 分注動作をモニターして分注素子からの吐出量を調整するために、 分 注素子の先端部を撮像する撮像装置をさらに備えることができる。 その 場合、 分注機構が複数の分注素子を備えている場合には、 撮像装置は分 注素子のうち分注動作を行なう分注素子の先端部を撮像するように、 分 注動作を行なう分注素子の変更に伴って移動できるように移動機構に支 持されている。
本発明の第 2の局面は、 分注素子を新たに装着したり、 交換したりし たときにも正確な分注動作を行なうことができるようにすることによつ て上記目的を達成するものである。
その第 2の局面の分注装置は、 サンプル又は試薬を滴下する分注素子 が着脱可能になっている分注機構と、 下方の画像を読み取る画像読取り 装置と、 サンプル又は試薬が分注される対象物を上面に支持し、 水平面 内で移動して前記対象物を少なく とも前記分注素子の下方の分注位置及 ぴ前記画像読取り装置の下方の画像読取り位置に位置決めする可動テー ブルと、 前記分注機構により前記可動テーブル上の所定の位置に分注を 行なったときの前記画像読取り装置による読取り画像に基づいて分注位 置を検出し、 同時に読み取った前記可動テーブル上の基準となるベース ボイントを基にして分注位置の校正を行なう校正部とを備えている。 分注機構の分注素子は所定の位置に装着されるようになっているが、 装着した分注素子の分注位置が常に同じ位置になるようにするには、 分 注素子装着部分に高度な機械加工精度が要求される。 また、 個々の分注 素子には機差がある。 そのため、 分注位置が所定の位置になるように分 注素子の装着を調整しようとすれば高度な機械加工精度と熟練した調整 能力が要求される。
しかし、 第 2の局面の液体分注装置では、 分注機構の分注素子が着脱 可能になっており、 分注素子により可動テーブル上の所定の位置に分注 を行なったときの画像読取り装置による読取り画像に基づいて分注位置 を検出し、 同時に読み取った可動テーブル上の基準となるベースボイン トを基にして分注位置の校正を行なうようにしたので、 分注素子の装着 や交換に伴う調整作業が簡単なものになる。
第 2の局面は分注素子を複数個備えたものも含んでいる。 その場合、 校正部は各分注素子について校正を行なう。
本発明の第 3の局面は、 液体分注その他の処理を施した位置に関する 正確な情報を作成できるようにする位置情報読取り装置により上記目的 を達成するものである。
その第 3の局面の位置情報読取り装置は、 テーブル上の対象物の画像 を読み取る画像読取り装置と、 前記画像読取り装置が読み取った画像を 基にして、 その画像中で指定された位置の情報又は検出された位置の情 報をその対象物上の基準となる複数のリファレンスポィントを基にして 作成する位置情報作成部とを備えている。
対象物上の指定位置の情報を得る場合には、 画像読取り装置が読み取 つた画像を表示するモニター部と、 前記モニター部に表示された前記対 象物の画像に基づいて対象物上の位置を指定する位置指定部とをさらに 備え、 前記位置情報作成部は前記位置指定部が指定した対象物上の位置 の情報を作成するものとする。
位置情報読取り装置は、画像読取り装置が読み取つた画像を基にして、 その画像中で指定された位置の情報又は検出された位置の情報をその対 象物上の基準となる複数のリファレンスポイントを基にして作成するよ うにしたので、 リファレンスポィントを基にして対象物内での位置情報 を正確に定めることができる。
そして、 対象物を分析装置などに移動させた場合にも、 そのリファレ ンスボイントを基にしてその位置情報から対象物内での目的とする位置 に正確に位置決めすることができるようになる。
前記画像読取り装置は対象物の画像とともに前記テーブルの画像も読 み取るものとし、 前記位置情報作成部は前記対象物上の位置をテーブル 上の基準となる複数のベースボイントを基にして作成するものとするこ とができる。 これにより、 対象物内での目的とする位置の情報をベース ポイントを基にして正確に定めることができる。 そして、 対象物をいつ たんテーブルから取り外し、 再びテーブルに取り付けた場合にも、 その ベースポイントを基にしてその位置情報から対象物内での目的の位置に 正確に位置決めすることができるようになる。
位置情報作成部は作成した位置情報を外部に出力できるものとすれば、 その対象物を分析装置など他の装置に移送した場合にも、 その位置情報 を利用して目的とする位置に正確に位置決めすることができる。
本発明の第 4の局面は、 液体分注その他の処理を施した位置に関する 正確な情報を作成できるようにするサンプルプレートにより上記目的を 達成するものである。
その第 4の局面のサンプルプレートは、 位置情報を正確に得るのに好 都合なものであって、 サンプル又は試薬が分注される表面をもつ板状体 であって、 その表面内に位置の基準となる複数のマークを備えている。 そのサンプルプレートはサンプル又は試薬が分注される表面内に位置 の基準となる複数のマークを備えているので、 サンプルプレート内の分 注位置の正確な位置情報を作成するのに好都合である。
本発明の第 5の局面は、 た分注装置を小型化するとともに、 分注状態 をモニタできる機構を備えることにより上記目的を達成するものである。 その第 5の局面の分注装置は、 サンプル又は試薬を滴下するノズルを 備えた分注機構と、 サンプル又は試薬が分注される対象物を上面に支持 し、 水平面内で移動して前記対象物を前記ノズルの下方に位置決めする 可動テーブルと、 平面上は前記可動テーブルの移動範囲内にあって、 前 記可動テーブルと接触しない上方の位置に取りつけられ、 前記ノズルの 先端部を斜め上方から撮像する撮像装置とを備えている。
分注状態をモニタするための撮像装置を、 水平方向から角度をもたせ て斜め上方に配置するようにしたことにより、 可動テーブルと干渉する ことなく可動テーブルの移動範囲内に設置することができ、 分注装置が 小型になる。
ノズルの先端部を挾んで撮像装置とは反対側の位置に光源を配置して もよく、 その場合、 その光源はその発する光が対象物の表面で反射しノ ズルの先端部を経由して撮像装置に入射する方向に向けられる。 このよ うな光源を設けることにより、 ノズル先端部に形成されるサンプル又は 試薬の滴をモニタする場合には、 その滴の画像を透過光で撮像すること ができるようになり、 より鮮明な画像を得て正確なモニタを行なうこと ができるようになる。
撮像装置はノズルの先端部の画像とともにノズルの下部にある対象物 表面の画像も撮像するように設定しておくこともできる。その場合には、 ノズル先端部のモニタとともに、 対象物表面の状態もモユタできるよう になり、 より多くの情報を得ることができる。 例えば、 目的とするポジ ションに的確にサンプルや試薬が分注できているかどうかを確認できる ようになったり、 また例えば、 サンプルや試薬が分注される対象物が膜 の場合、 分注前後の膜の状態を観察したり、 反応中の膜状態の経時変化 の観察をしたりすることも可能になる。 本発明の第 6の局面は、 ピエゾチップによる分注方法と分注装置にお いて、 分注開始前にピエゾチップ先端の液量調整を容易にすることによ り上記目的を達成しようとするものである。
第 6の局面の分注方法は、 吐出部が下向きの開口をもち、 その吐出部 につながる空間に充填された液を、 ピエゾ素子を備えた駆動部により押 圧することによりその吐出部から液滴を吐出するピエゾチップと、 前記 空間に充填された液の圧力状態を調整できる圧力制御機構と、 吐出部の 画像を撮像する撮像装置を備えた分注ュ-ットにおける分注方法におい て、 前記空間に液を充填する前の吐出部の画像を撮像装置により取り込 んで記憶させておき、 ピエゾチップからの分注動作を開始する前の準備 段階として、 前記空間に液を充填した後、 撮像装置により吐出部の画像 を取り込んで液充填前の画像との差異を求めながら圧力制御機構を制御 して、 液が吐出部から現れた後、 液充填前の画像との差異がなくなるま で液を後退させる工程を設ける。
液をピエゾチップへ充填する前のピエゾチップ先端の画像は液が吐出 部から現れていない状態を表わしており、 液をピエゾチップに充填する 際の基準になる状態である。 その後、 ピエゾチップに液を入れ、 圧力制 御機構により圧力をかけてピエゾチップの吐出部まで液を供給する。 こ の状態が液を充填した状態となる。 液の充填開始からピエゾチップの吐 出部の画像を取得し、 充填前の画像との差をとつていく。 圧力制御機構 により加圧していって、 その画像の差として吐出部から余分液量が現れ たのを確認できると、 そこから圧力制御機構を陰圧にするように圧力制 御にフィードバックをかけ、 余分液量が見えなくなるところで圧力制御 を固定する。 これで分注動作前の準備が完成し、 その状態から吐出によ る分注を開始する。
この準備段階の工程を制御装置により自動化すれば、 ピエゾチップへ の液の充填を開始するだけで、 ピエゾチップによる分注ができるように なるまで自動的に圧力調整が実行される。
この第 6の局面の分注方法が実行される本発明の分注装置は、 吐出部 が下向きの開口をもち、 その吐出部につながる空間に充填された液を、 ピエゾ素子を備えた駆動部により押圧することによりその吐出部から液 滴を吐出するピエゾチップを備えた分注ュニットと、 前記空間に充填さ れた液の圧力状態を調整できる圧力制御機構と、 吐出部の画像を撮像す る撮像装置と、 撮像装置が撮像した画像を記憶する記憶装置と、 前記空 間に液を充填する前の吐出部の画像で記憶装置に記憶された画像と前記 空間に液を充填した後の画像とを比較し、 液が吐出部から現れた後、 液 充填前の画像との差異がなくなるまで後退するように圧力制御機構を制 御する制御装置とを備えている。
撮像装置は吐出部の画像を水平方向から撮像するように設置されてい ると、 ピエゾチップへの液の充填をより正確に行なうことができる。 従来マニュアルでピエゾチップ先端の画像を見ながら微妙な圧力制御 をしなければいけなかったが、 本発明では、 ピエゾチップに液を充填す る前の吐出部の画像を撮像装置により取り込んで記憶させておき、 液の 充填開始後、 撮像装置により吐出部の画像を取り込んで液充填前の画像 との差異を求めながら圧力制御機構を制御して、 液が吐出部から現れた 後、 液充填前の画像との差異がなくなるまで液を後退させるようにした ので、 ピエゾチップ先端の液量調整を容易に行なうことができるように なる。
また、 この工程を自動化すれば、 ピエゾチップへの液の充填を開始す るだけで、 ピエゾチップによる分注ができるようになるまで自動的に圧 力調整が実行される。 さらに、 待機中もモニターを続行するようにすれ ば、 常にピエゾチップ先端の状態を一定に保つことが可能になる。 本発明の第 7の局面は、 微量のサンプル液や試薬液の分注の定量性を 高めることによって上記目的を達成しようとするものである。
その第 7の局面の定量分注方法は、 分注ュニットの吐出部から出る液 滴の画像を取得し、 その画像から液滴の大きさを求めて液滴の分注量を 制御する。
すなわち、 その定量分注方法は、 次のステップ （A ) から （C ) を備 えている。
( A ) 前記吐出部から吐出された液滴の画像を取得するステップ。 ( B )その取り込んだ画像に基づいて液滴の大きさを求めるステップ。 ( C ) その求めた液滴の大きさに基づいて液滴の分注量が所定値にな るように分注ュニットの吐出駆動部への制御信号のパラメータを調節す るステップ。
これにより、 サンプル液や試薬液などの p L〜 Lの微量分注におい て定量性が向上する。
ステップ （B ) で求める液滴の大きさは、 例えば液滴の直径や半径で める。
その液滴の大きさを求めるステップは画像処理を用いた自動計算によ り行なうことができる。 そのような画像処理プログラムは容易に入手す ることができる。 画像処理を用いた自動計算を利用すれば、 すばやく正 確に液滴の大きさを求めることができる。
また、 液滴の大きさを求めるステップは画像上で手動計算により行な うこともできる。 手動計算によれば、 画像処理プログラムに要する費用 を削減することができる。
分注ユニットは、 先端の吐出部につながる空間に充填された液を、 ピ ェゾ素子を備えた駆動部により押圧することによりその吐出部から液滴 を吐出するピエゾへッドを備えたピエゾ分注方式のものとすることがで きる。 その場合、 制御信号のパラメータは、 ピエゾ素子への印加電圧の 大きさ、 印加電圧の立上がり時間、 印加時間、 印加電圧の立下がり時間 のうちの少なく とも 1つを含んだものとすることができる。
また、 分注ユニットは、 シリンジポンプによる分注方式のものとする こともできる。 その場合、 制御信号のパラメータは、 シリンジポンプの プランジャのストローク、 速さ、 加速のうちの少なくとも 1つを含んだ ものとすることができる。
シリンジポンプによる分注方式では、 液滴の大きさを求める画像は、 吐出部の先端に玉状にぶら下がった状態の液滴の画像とすることができ る。
制御信号のパラメータを調節するステップは、 吐出駆動部を制御する 制御部による自動制御により行なうことができる。 その場合には作業者 の工数が少なくてすむ。
また、 制御信号のパラメータを調節するステップは、 吐出駆動部を制 御する制御部に入力することにより行なうこともできる。 その場合には システムが簡単になる。 図面の簡単な説明
第 1図は分注装置の一実施例を概略的に表わす斜視図である。
第 2図は同実施例においてサンプルプレートなどが配置されたテープ ルの上面を示す平面図である。
第 3図は同実施例における分注機構を示す断面図である。
第 4図は同実施例を機能として示すプロック図である。
第 5図は第 5の局面の分注装置の一実施例を示す正面図である。 第 6図は同実施例におけるノズル先端部付近を示す概略正面図である 第 7図は第 6の局面の一実施例を概略的に示すプロック図である。 第 8図は同装置におけるピエゾチップの一例を概略的に示す断面図で ある。
第 9図は同実施例の動作を示すフローチャート図である。
第 1 0図は第 7の局面の一実施例の方法が適用される装置を概略的に 示すブロック図である。
第 1 1図は同装置におけるピエゾチップの一例を概略的に示す断面図 である。
第 1 2図は同実施例における制御パラメータを示す波形図である。 第 1 3図は同実施例の動作を示すフローチヤ一ト図である。
第 1 4図は同局面の他の実施例の方法が適用される装置を概略的に示 すプロック図である。
第 1 5図は同実施例における分注様式を示すプ口一プ先端部の正面図 である。
第 1 6図は第 5の局面の分注装置に対応した従来の分注装置を示す正 面図である。
第 1 7図は従来のピエゾ方式の分注装置を概略的に示すプロック図で める。
第 1 8図は従来のシリンジ方式の分注装置を概略的に示すプロック図 である。 発明を実施するための最良の形態
第 1図は本発明の液体分注装置の一実施例を概略的に表したものであ る。
4は分注機構であるプリントヘッドであり、 試薬などを分注するピエ ゾ素子を備えた 4個の分注素子 1 0— 1〜1 0— 4がー列に並べられて 装着されている。分注素子 1 0— 1〜1 0— 4の位置は固定されている。 分注素子 1 0— 1〜1 0— 4からの分注量を制御するために、 分注素子 1 0— 1〜1 0— 4にかかる圧力を調整するための圧力制御部 7が装置 本体の前面に取り付けられており、 分注素子 1 0— 1〜1 0— 4内の圧 力を調整する摘み 8が各分注素子 1 0— 1〜1 0— 4に対応して 4個配 列されている。
分注しようとするサンプルプレートをテーブルとともに画像として取 り込むために画像読取り装置としてスキャナー 6が配置されている。 ス キヤナー 6の位置も固定され Tいる。
テーブル 2は水平面内で移動できる可動テープルであり、 そのテープ ル 2上には、 後で第 2図を参照して示すように、 サンプルプレート 5 0 が所定の位置に載置されている。 テーブル 2は平面内で移動し、 分注時 にはサンプルプレート 5 0の指定された位置を分注素子 1 0— 1〜 1 0 一 4の下方に位置決めし、 画像を取込み時にはテーブル 2上の撮像すベ き部分をスキャナー 6の下方に位置決めする。
分注素子 1 0— 1〜1 0— 4から分注をするときに、 先端部の画像を 取り込み、 分注の様子をモニタするために撮像装置として C C Dカメラ 5が配置されている。 C C Dカメラ 5は、設置スペースを抑えるために、 斜め上方から分注素子 1 0— 1〜 1 0— 4の先端部の画像を取り込むよ うに取りつけられている。 分注素子 1 0— 1〜1 0— 4は互いに異なる 液を分注するものであり、 サンプルプレート 5 0などの所定の分注位置 が下方に位置決めされた分注素子 1 0— 1〜 1 0— 4が分注動作を行な う。 分注動作を行なう分注素子 1 0— 1〜1 0— 4が変わったときに、 その動作を行なう分注素子 1 0— 1〜 1 0— 4の画像を取り込むように、 カメラ 5は分注素子 1 0— 1〜1 0— 4の配列に平行に移動できるよう に取り付けられている。
テーブル 2、 プリントヘッ ド 4、 カメラ 5及びスキャ^ "一 6は本体 9 aと蓋 9 bとからなるケース内に収納され、 ケースの蓋 9 bはサンプル プレート 5 0の交換の際など、 随時に開けることができるようになって いる。
第 2図はテーブル 2上に配置されたサンプルプレートなどを表したも のである。
2枚のサンプルプレート 5 0がそれぞれ所定の位置に固定して載置で きるようになつている。 5 2はメンプレンで、 サンプルプレート 5 0上 に貼り付けられ、 この分注装置で試薬やサンプルが分注されるものであ る。 メンプレン 5 2に固相化された試料は、 例えば、 S D S (ドデシル 硫酸ナトリウム） ポリアクリルアミ ドゲル電気泳動やその他のクロマト グラフィ一によつて一次元方向に分離されて展開したタンパク質、 ぺプ チド、 糖、 脂質、 核酸等の分子又はそれらの混合物である。
メンブレン 5 2への試料の固相化は、 ゲルその他の泳動媒体に試料を 展開させた後、 メンプレン 5 2に転写することにより行なうことができ る。
このような固相化に使用されるメンプレンの材質としては、 P V D F (polyvinylidene difluoride) ^ 二卜ロセルロース、 ナイロン (登録商 標） 又はその派生物等を挙げることができる。
メンブレン 5 2上に展開して固相化されたスポット内の物質を検出す るために、 メンブレン 5 2に固相化された試料成分に分注素子 1 0— 1 〜 1 0— 4から消化液や抽出液を分注することができる。
また、 対象分子に結合するプローブとなる物質を分注することもでき る。 そのようなプローブとしては、 対象分子が抗原である場合には抗体 を使用する。 一般的には、 対象分子と特異的に反応する生体物質を使用 することができる。 また、 幾つかの抗体や生体物質を組み合わせて使用 することもできる。 試薬の分注は、 メンプレン 5 2上のスポットの存在する領域のみに行 なうようにするのが好ましい。 それにより、 試薬の無駄を省くことがで さる。
対象物質を光学的に検出できるようにするためには、 分注する試薬と して対象物質と特異的に反応するプローブを含む一次試薬と、 プローブ と反応した後の対象物質を発色させる二次試薬を用いることができる。 その場合、 分注素子 1 0— 1〜 1 0— 4のいずれかからまず一次試薬を 分注し、 その後一次試薬を分注した領域上に分注素子 1 0— 1〜1 0— 4の他のものから二次試薬を分注する。 そのような二次試薬としては、 発色試薬や蛍光試薬を用いることができる。
また、 対象分子にプローブを反応させた後、 それを適当な手段により 検出する方法として、 発色試薬や蛍光試薬を分注することのほかに、 金 属イオンを反応させたり、 又はこれらの方法を組み合わせることができ る。 そのような方法としては、 金コロイ ド標識抗体を用いる方法や、 金 属イオンに親和性をもつタンパク質等を N i 2 +キレート酵素などを用 いて蛍光反応に導入する方法がある。
複数の分注素子 1 0— 1〜1 0— 4が設けられているので、 テープル 2によりサンプルプレート 5 0上の分注位置を移動させることにより、 分注素子 1 0— 1〜1 0— 4を替えて複数の試薬を分注することができ る。
各サンプルプレート 5 0には複数のマーク bが設けられている。 それ らのマーク bはサンプルプレート 5 0上に貼り付けられたメンプレン 5 2上の分注位置を情報として作成するときの基準となるリファレンスポ ィントである。 この例ではほぼ矩形の 4つの隅にリファレンスポィント bが設けられており、 メンプレン 5 2の画像とともにそれらのリファレ ンスポィント b もスキヤう "一 6によって取り込まれる。 サンプルプレー ト 5 0の 1つの角は、 サンプルプレート 5 0の方位を示すために切り落 とされている。
テーブル 2上に設けられた領域 5 4は、 分注素子 1 0— 1〜1 0— 4 による分注テストを行なうためのテストプリント部として設けられた領 域である。 そこにもろ紙が取りつけられており、 テストプリント時の分 注状態を C C Dカメラ 5で確認できるようになっている。
テーブル 2上に設けられた領域 5 6は、 分注素子 1 0— 1〜1 0— 4 のメンテナンス部であり、 スポンジ 5 7が設けられている。 分注素子 1 0—：！〜 1 0— 4の先端に液や汚れが付着した場合に、 このメンテナン ス部が分注素子 1 0 _ 1〜 1 0 _ 4の下に移動させられ、 そのスポンジ 5 7によって分注素子 1 0— 1〜 1 0— 4の先端についた液や汚れが拭 き取られるようになっている。
また、 テーブル 2の表面にはテーブル 2上に配置されるサンプルプレ ート 5 0の位置の基準となるベースポィントとしてマーク aが設けられ ている。 マーク aは、 分注位置を情報として取り出す場合の基準となる ものであり、 またスキャナー 6で取得した画像上の位置とテーブル 2の 動きとを合わせる基準となるものである。 へッド 4におけるそれぞれの 分注素子 1 0 — 1〜 1 0 — 4は同じ構造である。
微量分注方式に用いる液体分注装置の一例は、 上に述べたピエゾ素子 による分注方式のものである。 そのような液体分注装置では、 先端の吐 出部につながる空間に充填された試薬を、 ピエゾ素子を備えた駆動部に より押圧することによりその吐出部から液滴を吐出する。 その場合、 制 御信号のパラメータは、 ピエゾ素子への印加電圧の大きさ、 印加電圧の 立上がり時間、 印加時間、 印加電圧の立下がり時間のうちの少なくとも 1つを含んだものとすることができる。
これに類似の液体分注装置として、 インクジエツト方式の液体吐出装 置で用いられている液体吐出素子を備えたものも用いることができる。 微量分注方式に用いる液体分注装置の他の例として、 シリンジポンプ による分注方式の装置も用いることができる。 その場合、 制御信号のパ ラメータは、 シリンジポンプのプランジャのス トローク、 速さ、 加速の うちの少なく とも 1つを含んだものとすることができる。
分注素子として、 ピエゾ素子を内蔵したピエゾチップ 1 0を備えた分 注機構の一例を第 3図を用いて詳細に説明する。
下端に吐出口をもち上端に中空針 1 6をもった液体吐出部としてのピ ェゾチップ 1 0が、 ネジ 2 9により、 液体分注装置のチップ保持部 3 1 に着脱可能に取りつけられている。 ピエゾチップ 1 0はネジ 2 9を緩め ることにより取り外すことができ、 ネジ 2 9を締付けることにより固定 することができる。 ピエゾチップ 1 0を着脱すると、 分注位置のずれが 生じる。 そのために、 後述するように、 この実施例ではテーブル 2上の ベースボイント aを基準として分注位置を校正する。
分注液容器 2 0は使い捨て可能なものであり、 下端と上端に開口をも ち、 下端開口が蓋 1 5により閉じられて内部に分注液を収容する容器で ある。 下端開口の蓋 1 5は弾性体セプタムであり、 ピエゾチップ 1 0の 中空針 1 6により貫通でき、 かつその貫通した中空針 1 6を引き抜くと その貫通穴を弾性によって閉じることのできる弾性部材により構成され ている。 蓋 1 5を構成する弾性部材は、 例えばゴムである。
容器 2 0をチップ 1 0上に装着し、 中空針 1 6により下端開口の蓋 1 5を貫通して装着した状態で、 容器 2 0の上部からエアー導入へッド 3 0を取り付けることができるようになつている。 エアー導入へッド 3 0 は、 容器 2 0内の圧力を調整し、 チップ 1 0からの液の吐出量を調整す るものである。
エアー導入へッド 3 0の先端部にはシール部材 3 2が設けられている。 シール部材 3 2は例えば Oリングである。 エアー導入へッド 3 0を容器 2 0に対して押し付けることにより、 シール部材 3 2は容器 2 0の開口 部の内側面と接触して容器 2 0の開口部を気密を保って封止し、 エアー 導入へッド 3 0に圧力制御機構から送られるエアーにより容器 2 0内の 圧力を制御できるようになる。
エアー導入へッド 3 0を着脱可能に装着するためにアーム機構を備え ている。 アーム機構はアーム 3 3とロック 3 6を備え、 エアー導入へッ ド 3 0はアーム 3 3の一端部で保持されている。 アーム 3 3はその、基端 部がピン 3 4によって液体分注装置本体に回動可能に支持されている。 ロック 3 6はピン 3 8によってアーム 3 3に回動可能に支持されており 基端部には鈎 4 0が設けられている。 鉤 4 0は液体分注装置本体に固定 された凸部 3 5と係合して、 容器 2 0をチップ 1 0上に装着した状態で ロックできるようになっている。
エアー導入へッド 3 0はアーム 3 3に開けられた穴にスライド可能に 揷入され、 パネ 4 1によってエアー導入ヘッド 3 0を容器 2 0の方向に 押し出すように付勢される。 エアー導入へッド 3 0の基端部はアーム 3 3から突出し、 その部分に鰐 4 5が設けられていることによってエアー 導入へッド 3 0がアーム 3 3から抜け出るのが防止されている。 エアー 導入へッド 3 0の基端部は配管 4 4を介して圧力制御機構に接続されて いる。
ロック 3 6を、 ピン 3 8を中心に鉤 4 0が凸部 3 5と係合する方向に 付勢するためにアーム 3 3とロック 3 6の間には圧縮状態のコイルパネ 4 2が挿入されている。
アーム 3 3と液体分注装置本体の間にはパネ 4 3がかけられており、 パネ 4 3はアーム 3 3を開く方向 （図では時計周りの方向） に引っ張る ように付勢している。 第 3図の機構において、 容器 2 0を装着する場合は、 容器 2 0をチッ プ 1 0上に置き、 下方向に押して中空針 1 6でセプタム 1 5を貫通し、 容器 2 0内の溶液に中空針 1 6を浸す。 エアー導入へッド 3 0はアーム 3 3に保持されているため、 アーム 3 3を図で反時計方向に回動させる ことにより、 エアー導入へッド 3 0が容器 2 0の開口部に装着され、 容 器 2 0とエアー導入へッド 3 0がシール部材 3 2によって気密を保って 接続される。 またこのとき、 鈎 4 0は凸部 3 5と係合してアーム 3 3力 S 口ックされ、 アーム 3 3が開くように時計方向に回動するのが防止され る。 エアー導入へッド 3 0はパネ 4 1によって容器 2 0の方向に押し付 けるように付勢されているので、 アーム 3 3をロックした状態で容器 2 0とへッド 3 0の気密接続が維持される。
この状態でチップ 1 0から液の吐出を行なうことができるようになる。 容器 2 0を取り外す場合は、 ロック 3 6をアーム 3 3の方向に押す。 ロック 3 6はピン 3 8を中心に図で時計方向に回動し、 鉤 4 0と凸部 3 5の係合が解除され、 アーム 3 3はパネ 4 3の力によって図で時計方向 に回動し、 エアー導入ヘッド 3 0が容器 2 0から離れる。
この状態ではエアー導入へッド 3 0はアーム機構とともにピン 3 4を 中心に回動するため、 エアー導入へッ ド 3 0と容器 2 0の間が大きく開 き、 エアー導入ヘッド 3 0のシール材 3 2や、 容器 2 0の周辺の掃除な どのメンテナンスがしゃすくなる。
また、 このようにアーム機構を用いてエアー導入へッド 3 0を容器 2 0に対して着脱できるようにすれば、 容器 2 0の着脱、 及ぴ容器 2 0へ のエアー導入へッド 3 0の着脱を容易に行なうことができるようになる。 第 1図に戻って C C Dカメラ 5について説明する。
サンプル、 試薬にかかわらず、 液相を用いることの多い分析装置の分 野では、 分析の際に使用する溶液の量を減らす試みが行なわれている。 これは、 貴重なサンプルの無駄を省くためや高価な試薬の使用量を減ら すためのみならず、 溶液間の生化学的な反応においては、 溶液の量が少 ないほど反応にかかる時間が短くてすむため、 実験の処理効率をあげる ために有効な方法だからである。
微量溶液で反応を実行するためには、 サンプル又は試薬を微量に分注 する分注装置が必要である。 微量の液を分注するための方法として、 実 施例のピエゾ素子などの圧電素子を用いた方法のほか、 パルプの開閉に よる方法、 溶液を局所的に加熱してできる気泡を用いる方法など、 様々 なものが実用化されている。
微量な液体を目的の位置に分注する際には、 圧電素子であれば素子へ の電圧の与え方、 バルブを用いるのであれば開閉時間など、 種々のパラ メータの微妙な制御が要求される。 これらのパラメータを最適化するた め、 また、 数多くの位置に分注する際には分注時間も長くなるため、 分 注する液滴の形状をモニタして分注機のおかれている環境の変化ゃ圧電 素子の経時変化に対応するために、 分注素子先端部に形成される液滴の 画像を撮像装置で取り込んでモニタすることが好ましい。 C C Dカメラ 5はそのような撮像装置の一例である。
分注状態をモニタするための C C Dカメラ 5を水平方向から角度をも たせて斜め上方に配置するようにしたことにより、 可動テーブル 2と干 渉することなく可動テーブル 2の移動範囲内に設置することができ、 分 注装置が小型になる。
分注素子先端部を挟んで C C Dカメラ 5とは反対側の位置に光源を配 置してもよく、 その場合、 その光源はその発する光が対象物であるサン プルプレート 5 0の表面で反射し分注素子先端部を経由して C C Dカメ ラ 5に入射する方向に向けられる。このような光源を設けることにより、 分注素子先端部に形成されるサンプル又は試薬の滴をモニタする場合に は、 その滴の画像を透過光で撮像することができるようになり、 より鮮 明な画像を得て正確なモニタを行なうことができるようになる。さらに、 この光源を分注のタイミングと同期させて点灯することにより、 液滴を 静止画像のように取り込むことができる。
C C Dカメラ 5は分注素子先端部の画像とともに分注素子の下方にあ るサンプルプレート表面の画像も撮像するように設定しておくこともで きる。 その場合には、 分注素子先端部のモニタとともに、 サンプルプレ 一ト表面の状態もモニタできるようになり、 より多くの情報を得ること ができる。 例えば、 目的とする位置に的確にサンプルや試薬が分注でき ているかどうかを確認できるようになったり、 また例えば、 サンプルや 試薬が分注される対象物が膜の場合、分注前後の膜の状態を観察したり、 反応中の膜状態の経時変化の観察をしたりすることも可能になる。
この分注装置の用途と して、 例えば P V D F ( polyvinyli dene difluoride) 膜のような固相に試薬を分注するものがあげられる。 P V D F膜には、 クロマトグラフィーにより展開したスポットが転写させら れており、 そのスポットを発色させるために、 試薬が分注される。 その ような固相として使用できるものとしては、 P V D F膜の他に、 ニトロ セルロースやナイロン （登録商標） なども用いることができる。
第 4図は第 1図の装置の機能をプロック図として示したものである。 6 0はスキャナーなどの画像読取り装置 6が読み取った画像を表示す るモニター部である。 分注位置指定部 6 2はモニター部 6 0に表示され たメンプレンなどの対象物 5 0の画像に基づいて対象物 5 0上の分注位 置を指定するためのものである。 分注制御部 6 4は分注位置指定部 6 2 が指定した対象物上の分注位置が分注素子 1 0の分注素子の下方にくる ように対象物と分注素子との相対的位置決めを行ない、 分注素子 1 0に よる分注動作を制御するものである。 分注素子 1 0がピエゾ素子を備え たものである場合には、 分注制御部 6 4は圧力制御部 7により分注素子 1 0内の圧力を調整し、 分注制御ュニット 6 6によりピエゾ素子への電 圧印加を制御してピエゾ素子から液を吐出する。
分注位置情報作成部 6 8は、 分注位置指定部 6 2が指定し分注動作が なされた対象物 5 0上の分注位置に関する分注位置情報を作成するもの である。 分注位置情報作成部 6 8は作成した分注位置情報を外部に出力 することができる。
対象物 5 0には第 2図に示されるように対象物内の位置の基準となる リ ファレンスポイント bを複数個設けておき、 画像読取り装置 6が対象 物 5 0の画像とともにリ ファレンスポィント bの画像も読み取るように する。 これにより、 分析位置情報作成部 6 8は分析位置指定部 6 2が指 定した対象物 5 0上の位置を複数のリファレンスポィント bを基にして 作成するものとすることができ、 対象物をいつたん取り外し、 再ぴテー ブル 2に取りつけた場合にもスキャナー 6で画像を取得すれば、 リファ レンスボイント bを基に正確に位置決めすることができるようになる。 また、 対象物 5 0を分析装置などに移動させた場合にも、 そのリファレ ンスポイント bを基にしてその分注位置情報から対象物 5 0内での分注 位置に正確に位置決めすることができるようになる。
対象物を支持するテーブル 2はテーブル駆動機構 6 5により駆動され て平面内で移動し、 分注制御部 6 4により指示された所定の位置に位置 決めされる。 テーブル 2上には、 基準となるベースポイント aを複数個 設けておき、 画像読取り装置 6が対象物 5 0の画像とともにベースボイ ント aの画像も読み取るようにし、 分析位置情報作成部 6 8は対象物 5 0上の位置を複数のベースポィント aを基にして作成することもできる ものとすることができる。 これにより、 対象物 5 0内での分注位置情報 をベースボイント aを基にして正確に定めることができるようになる。 サンプル又は試薬を滴下する分注素子 1 0は着脱可能になっており、 分注素子 1 0の分注位置を校正するための校正部 7 2を備えている。 校 正部 7 2は、 分注素子 1 0によりテーブル 2上の所定の位置に分注を行 なったときの画像読取り装置 6による読取り画像に基づいて分注位置を 検出し、 同時に読み取ったテーブル上の基準となるベースポイントを基 にして分注位置の校正を行なう。 校正のための分注は、 例えば図 2に示 すテーブル 2上の試薬などを分注すると発色するようなメンプレン 5 3 による 3つの点で示すような、 予め定められた複数の位置で行なう。 こ の校正は、 分注素子を装着するたびに行なう。
上記の実施例は分注装置に本発明を適用した場合を例にして説明して いるが、 求めようとする位置情報は分注位置の情報に限らず、 メンプレ ンゃ泳動媒体などの画像を画像読取り装置で読み取り、 その画像中のス ポットなど検出された位置の情報を作成する場合にも本発明を同様に適 用することができる。
第 5の局面の分注装置の一実施例について説明する。
第 5図は同局面の分注装置の一実施例を示したものである。 試薬 （又 はサンプル） を分注する分注機構 1 0 2は、 その下端にノズルを有し、 微量の液を滴下できるようになっている。 分注機構 1 0 2の下部には可 動テーブルとしての X— Yテーブル 1 0 4が配置されており、 X— Yテ 一プル 1 0 4上には試薬の分注される対象 が載置される。 X— Yテー プル 1 0 4は、 対象物を支持する面を図で紙面垂直方向 （Y方向） に駆 動する Y駆動機構 1 0 4 Yと、 Y駆動機構 1 0 4 Yに取りつけられ、 対 象物を支持する面を図で横方向 （X方向） に駆動する X駆動機構 1 0 4 Xとを備えている。 X— Yテーブル 1 0 4の対象物支持面はその Y駆動 機構 1 0 4 Yと X駆動機構 1 0 4 Xにより水平面内で Y方向と X方向に 移動し、 支持面上に載置された対象物を分注機構 1 0 2のノズルの下方 に位置決めする。
撮像装置 1 0 6は例えば C C Dカメラであり、 撮像装置 1 0 6の受光 軸 1 1 0が水平方向から角度 0をもつように、 撮像装置 1 0 6は分注機 構 1 0 2のノズル先端部の斜め上方に取り付けられている。 撮像装置 1 0 6は分注機構 1 0 2のノズル先端部に形成される液滴の画像を取り込 むように設定されている。
撮像装置 1 0 6が取り付けられている位置の平面上の位置は、 X _ Y テーブル 1 0 4の移動範囲内にあるが、 X— Υテーブル 1 0 4がその移 動範囲内で移動しても撮像装置 1 0 6と接触しないように、 撮像装置 1 0 6の取付け位置は X— Υテープル 1 0 4の上方に設定されている。 撮像装置 1 0 6の受光軸 1 1 0と水平面のなす角 Θには適当な範囲が 存在する。 0は少なくとも撮像装置 1 0 6が Χ— Υテーブル 1 0 4と干 渉しないだけの大きさをもち、 分注機構 1 0 2のノズル先端に形成され るサンプル又は試薬の液滴の画像を取り込むのに支障のない範囲に設定 される。 そのような角度 Θとしては、 1 5〜4 5度程度が適当である。 ノズル先端を挟んで撮像装置 1 0 6と反対側の位置で、 X— Υテープ ル 1 0 4の上方には、 光源 1 0 8が取り付けられており、 撮像装置 1 0 6が透過光で撮像できるようになつている。
第 6図に示されるように、 光源 8から発した光 1 1 2が X— Υテープ ル 1 0 4上の対象物 1 1 4の表面で反射し、 分注機構 1 0 2のノズル 1 2 0の先端部に形成された液滴 1 2 2を経由し、 撮像装置 1 0 6の受光 軸 1 1 0に沿って撮像装置 1 0 6に入射するように、 光源 1 0 8、 撮像 装置 1 0 6、 ノズル 1 2 0及ぴ対象物 1 1 4の相対的な位置関係が設定 されている。
撮像装置 1 0 6の被写界深度は、 ノズル先端部の液滴 1 2 2及びその 下にある対象物 1 1 4の表面にも焦点が合うように設定されていること が好ましい。 これにより、 ノズル先端部の液滴 1 2 2の状態と、 対象物 1 1 4の表面の状態を同時に画像として取り込みモニタすることができ る。
この分注装置の用途と して、 例えば P V D F ( polyvinylidene difluoride) 膜のような固相に試薬を分注するものがあげられる。 P V D F膜には、 薄層クロマトグラフィ一により展開したスポットが転写さ せられており、 そのスポットを発色させるために、 試薬が分注される。 そのような固相として使用できるものとしては、 P V D F膜の他に、 二 トロセルロースやナイロン （登録商標） なども用いることができる。
X— Yテーブル 4を移動させて多数の分注位置でノズル先端から試薬 やサンプルの分注を繰り返す。 その際、 ノズル先端から滴下する液滴の 形状をモニタするときに、 ノズル 1 2 0からの液滴 1 2 2の滴下開始か ら撮像装置 1 0 6が画像を取り込むタイミングを一定にすることにより、 それらの液滴を同じタイミングの画像として処理することができるよう になる。
そのような画像の取込みを実現する 1つの方法として、 光源 1 0 8と してストロポを使用し、 撮像装置 1 0 6は連続して撮像するようにし、 ノズル 1 2 0からの滴下開始からストロポを点灯させるまでの時間を一 定にする方法を挙げることができる。 これにより、 多数の液滴を同じタ イミングで撮像して液滴の形状をモユタするのが容易になる。 このよう な液滴形状のモニタは、 多数繰り返される液滴の形状が一定になるよう に、 サンプルや試薬を分注する分注機構のピエゾ素子への印加電圧ゃパ ルブの開閉などを制御するのに利用することができる。
光源 1 0 8はストロボに限らず、 連続して発光するものであってもよ く、 その場合は撮像装置 1 0 6の方で液滴 1 2 2滴下開始から一定の時 間に画像を取り込むような制御をすればよい。 第 7図は第 6の局面の一実施例の分 ¾装置を概略的に表したものであ る。 2 0 1はピエゾチップによる分注機構で、 後で示す第 8図に示され るようなピエゾチップが設けられている。 2 0 3はそのピエゾチップか ら吐出された液滴であり、 分注機構 2 0 1の下部に保持された容器ゃプ レートなどのターゲット 2 0 5に分注される。 分注機構 2 0 1の先端に ある吐出部の画像を取り込んでモニタするために撮像装置として C C D カメラ 2 0 4が配置されている。 C C Dカメラ 2 0 4は吐出部の状態と ともに、 吐出される液滴 2 0 3も同時に撮像することができる。 撮像装 置としては C C Dカメラに限らず、 他のカメラを用いてもよい。
C C Dカメラ 2 0 4は分注機構 1の先端部を水平方向から撮像する。 水平から傾斜をもって斜め上方向から撮像してもよいが、 吐出部の先端 の状態をより正確にモニタするためには、 水平方向から撮像するのが好 ましい。
分注機構 2 0 1の先端部の画像をより正確に取り込むために、 この実 施例では透過光で撮像できるように、 C C Dカメラ 2 0 4の光軸上には、 分注機構 1の先端部を挟んで C C Dカメラ 2 0 4と反対側に光源 2が配 置されている。 光源 2 0 2としては時間的に連続した光を発光するもの でもよいが、この実施例としてはストロポを使用する。ストロボの場合、 液滴 2 0 3が分注機構 2 0 1から吐出されるタイミングと同期して発光 するように設定することができ、 その場合にはカメラ 2 0 4を連続して 作動させている場合でも、 ストロボ 2 0 2が発光した場合にのみ鮮明な 画像が取り込まれる。 その鮮明な画像は、 順次吐出される液滴 2 0 3の 画像が同じタイミングで取り込まれたものであるため、 あたかも静止画 像のような情報が得られる。 そのため液滴 2 0 3の状態をモエタするの に好都合である。
2 0 6は分注制御ュニットで、 分注機構 2 0 1のピエゾ素子に電圧を 印加することにより吐出を行なう。 また、 ス トロボ 2 0 2の発光するタ イミングは、 分注制御ュニット 2 0 6により分注機構 2 0 1のピエゾ素 子への電圧印加のタイミングに同期させて分注機構 2 0 1からの液滴吐 出の一定時間後に発光するように制御される。
2 0 8は圧力制御機構であり、 分注機構 2 0 1の液を充填する空間で あるリザーパに充填されたサンプルや試薬などの吐出液が常に一定の圧 力を保つように保持するものである。 圧力制御機構 2 0 8は、 この発明 において吐出動作開始前の吐出部先端の液面を調製するためにも使用さ れる。
2 0 7は制御コンピュータであり、 分注制御ュニット 2 0 6を制御し て分注動作を制御するとともに、 C C Dカメラ 2 0 4が撮像した画像を 記憶する記憶装置を備え、 分注機構 2 0 1におけるピエゾチップのリザ 一パに液を充填する前の吐出部の画像で記憶装置に記憶された画像とリ ザ一バに液を充填した後の画像とを比較し、 液が吐出部から現れた後、 液充填前の画像との差異がなくなるまで後退するように圧力制御機構 2 0 8を制御する制御装置の機能も実現している。
第 8図は分注機構 2 0 1におけるピエゾチップの一例を概略的に示し たものである。
ピエゾチップは、 リザーパ 2 3 2から先端の吐出部 2 3 0の孔につな がる流路を備えており、 リザーパ 2 3 2又は流路にある液を、 ピエゾ素 子を備えた駆動部 2 3 4により押圧することにより吐出部 2 3 0から液 を吐出する。 ピエゾ素子の駆動は、 分注制御ュニット 6により制御され る。 リザーバ 2 3 2のサンプルや試薬が減少してきた場合でも一定の圧 力状態を保つように、 リザーバ 2 3 2には圧力制御機構 2 0 8が接続さ れている。
分注制御ュニット 2 0 6がピエゾ素子の駆動を制御するパラメータは ピエゾ素子への印加電圧の大きさ、 印加電圧立上がり時間、 印加時間、 印加電圧立下がり時間の全て、 又はそのうちの少なくとも 1つである。 第 9図により、 この実施例で分注動作開始前の吐出部先端部の液面状 態を調製する動作を説明する。 この実施例は制御コンピュータ 7により 自動的に調整を行う場合を説明しているが、 この動作を吐出部先端部の 画像を見ながらマニュアルで行なうこともできる。
分注を開始する前に、 まず溶液充填を実行する。 ピエゾチップ先端は C C Dカメラ 2 0 4の画像を取り込むことで確認できる。
制御コンピュータ 7によりピエゾチップへの溶液充填を指示すると、 制御コンピュータ 2 0 7はまず C C Dカメラ 2 0 4で充填前のピエゾチ ップ先端の画像を取得し保持する。 この画像を画像 （a ) とする。
次に、 制御コンピュータ 2 0 7は、 圧力制御機構 2 0 8を制御し溶液 を加圧してピエゾチップ先端方向に押し出す。 このとき制御コンビユー タ 7は C C Dカメラ 2◦ 4を用いてピエゾチップ先端の画像を定期的に 取り込み、 先に取った充填前の画像 （a ) との差分を取る。 その差に変 化があれば溶液がピエゾチップ先端から余分に出ていることになるので、 その状態を検知すると、 圧力制御にフィードバックをかけていく。 この 間も制御コンピュータ 2 0 7は C C Dカメラ 2 0 4を用いてピエゾチッ プ先端の画像を定期的に取り込んでおり、先に取った充填前の画像（a ) との差分を取る動作を続けている。 庄カ制御に定期的にフィードパック をかけていって、 余分液量がなくなったことを画像の差分から検知した ところでフィードパックを止め、 その状態を保持する。
第 1 0図は第 7の居面の一実施例の方法が適用される装置を概略的に 表したものであり、 ピエゾ方式の分注装置を用い、 液滴の大きさを自動 的に求め、 一定にする制御も自動的に行なう場合を示したものである。 ピエゾチップ 3 0 2から吐出される液滴 3 0 6の画像を取り込むため に、 撮像装置として、 ピエゾチップ 3 0 2から吐出される液滴 6に向け た C C Dカメラ 3 2 0が設けられている。 3 2 2は C C Dカメラ 3 2 0 が取り込んだ画像を記憶する画像記憶部である。 C C Dカメラ 3 2 0に よる画像の取込みは、 液滴 6が吐出されるタイミングと同期させるか又 は非同期で取り込む。
3 2 4は画像処理部であり、 画像処理部 3 2 4は画像記憶部 3 2 2に 記憶されている画像を二値化や輪郭抽出などの画像処理を実施してその 液滴の直径や半径などの大きさを求めて、 分注量を計算する。 画像処理 部 3 2 4が画像処理する液滴の画像は、 C C Dカメラ 3 2 0で液滴の吐 出と同期させて取り込んだ画像の場合は、 それぞれの液滴について吐出 から同じ時間での画像である。 非同期で取り込んだ場合は、 一つの画像 について C C Dカメラ 3 2 0により時系列に複数の画像が取り込まれる 力 その内で各液滴について同じ場所を通過する液滴の画像を採用して 画像処理部 3 2 4で画像処理する。
3 2 6は画像処理された液滴の画像を表示する画像処理部である。 ま た、 画像処理部 3 2 4で画像処理されて求められた分注量はピエゾ分注 制御部 3 0 4 aに送られる。 ピエゾ分注制御部 3 0 4 aでは次から吐出 される分注量 （液滴 6の大きさ） が予め設定された設定値に等しくなる ようにピエゾチップ 3 0 2の駆動を制御していく。
ピエゾチップ 3 0 2としては、 例えば第 1 1図に示されるように、 先 端の吐出部 3 3 0の孔につながる液溜め 3 3 2を、 ピエゾ素子を備えた 駆動部 3 3 4により押圧することにより吐出部 3 3 0から液を吐出する。 液貯め 3 3 2のサンプルや試薬が減少してきた場合でも一定の圧力状態 を保つように、 液溜め 3 3 2には加圧部 （図示略） が接続されている。 ピエゾ分注制御部 3 0 4 aがピエゾチップ 2の駆動を制御するパラメ ータは、 第 1 2阅に示されるように、 ピエゾ素子への印加電圧の大きさ V。、 印加電圧立上がり時間 tい 印加時間 t 2、 印加電圧立下がり時間 t 3の全て、 又はそのうちの少なくとも 1つである。
第 1 3図にこの実施例の動作をまとめて示す。
予め設定されたピエゾチップ制御パラメータでピエゾチップ 3 0 2の 駆動を制御し、 液滴 6を吐出する。 その液滴 3 0 6の画像を C C Dカメ ラ 3 2 0が液滴の吐出と同期して又は非同期で取り込み、 画像記憶部 3 2 2に記憶する。 画像処理部 3 2 4は画像記憶部 3 2 2に記憶されてい る画像を二値化や輪郭抽出などの画像処理を実施してその液滴の直径や 半径などの大きさを求めて、 分注量を計算する。 ピ ゾ分注制御部 3 0 4 aはその分注量が所定の値である場合は、 ピエゾチップ制御パラメ一 タを変更しないで、 ピエゾチップ 3 0 2の駆動を繰り返していく。 しか し、 その分注量が所定の値でない場合は、 ピエゾチップ制御パラメータ を変更し、 ピエゾ分注制御部 3 0 4 aは次から吐出される分注量が所定 の値に等しくなるようにピエゾチップ 3 0 2の駆動を制御する。
第 1 4図は他の実施例の方法が適用される装置を概略的に表したもの であり、 シリンジポンプによる分注装置を用い、 液滴の大きさを自動的 に求め、 一定にする制御も自動的に行なう場合を示したものである。 シリンジポンプ 3 1 0につながるプローブ 3 1 2からの液滴 6の吐出 を、 シリンジポンプ 3 1 0を作動させるモータ 1 4をシリンジ分注制御 部 3 1 8 aにより制御して駆動することにより行なう。 プロープ 3 1 2 の先端にはデイスポーザブルチップ 3 1 6が設けられる。
液滴 3 0 6 .の画像を取り込む C C Dカメラ 3 2 0、画像記憶部 3 2 2、 画像処理部 3 2 4、 及び画像表示部 3 2 6は第 1 0図に示されたものと 同じである。
シリンジ分注制御部 3 1 8 aは、 画像処理部 3 2 4から液滴 3 0 6の 直径や半径などの液滴の大きさに関するデータを取り込み、 次から吐出 される液滴 3 0 6の大きさが予め設定された設定値に等しくなるように モータ 3 1 4の駆動を制御していく。
シリンジ分注制御部 3 1 8 aがモータ 3 1 4の駆動を制御するパラメ ータは、 プランジャのストローク、 速度、 加速度の全て又はそのうちの 少なくとも 1つである。
第 1 5図に示されるように、 シリンジ方式で数百 n L〜数/ Lの分注 量の液滴 3 0 6 を容器 3 4 0やプレート 3 4 2に分注する場合は、 ディ スポーザプルチップ 3 1 6の先端 （デイスポーザプルチップ 3 1 6を用 いない場合はプローブ 3 1 2の先端） に液滴 3 0 6が玉状にぶら下がる ので、 その状態の液滴 6を C C Dカメラ 3 2 0により画像として捉え、 画像処理部 3 2 2にて、 2値化や輪郭抽出などの画像処理を実施し、 液 滴の直径又は半径を求めて、 分注量を計算する。 シリンジ分注制御都 3 1 8 aは、 モータ 1 4の駆動を制御する際、 求められた液滴 3 0 6の大 きさに該当する液量が目的の分注量より多ければブランジャを戻し、 足 らなければプランジャを押すことにより、 分注量をリアルタイムで制御 し、 プローブ又はディスポーザブルチップの液滴 3 0 6を容器 3 4 0又 はプレート 3 4 2に分注する。
本発明をシリンジポンプによる分注方式に適用する場合、 チップ 3 1 6としてディスポーザブルのチップでかつチップの中にフィルターや担 体を保持しているチップを用いて分注する場合にも全く同様に適用する ことができる。 産業上の利用可能性
本発明の液体分注装置は、 例えば、 メンブレン上に展開して固相化さ れた物質を質量分析などの試料とするためにメンブレン上に試薬などを 分注するための方法及び装置などとして利用することができる。

Claims

請 求 の 範 囲
1 . サンプル又は試薬を滴下する分注素子を備えた分注機構と、 下方の画像を読み取る画像読取り装置と、
サンプル又は試薬が分注される対象物を上面に支持し、 水平面内で移 動して前記対象物を少なくとも前記分注素子の下方の分注位置及び前記 画像読取り装置の下方の画像読取り位置に位置決めする可動テーブルと、 前記画像読取り装置が読み取つた画像を表示するモニタ一部と、 前記モニター部に表示された前記対象物の画像に基づいて対象物上の 分注位置を指定する分注位置指定部と、
前記分注位置指定部が指定した対象物上の分注位置が前記分注機構の 分注素子の下方にくるように前記対象物と分注素子との相対的位置決め を行ない前記分注機構による分注動作を制御する分注制御部とを備えた 液体分注装置。
2 . 前記分注機構は分注素子を複数個備えている請求の範囲第 1項に 記載の液体分注装置。
3 . 前記分注位置指定部が指定し分注動作がなされた対象物上の分注 位置に関する分注位置情報を作成する分注位置情報作成部をさらに備え た請求の範囲第 1項又は第 2項に記載の液体分注装置。
4 . 前記分注位置情報作成部は作成した分注位置情報を外部に出力で きるものである請求の範囲第 1項から第 3項のいずれかに記載の液体分 注装置。
5 . 前記分注位置指定部は前記モニター部に表示された前記対象物の 画像上で分注位置を指定するものである請求の範囲第 1項から第 4項の いずれかに記載の液体分注装置。
6 . 前記分注素子の先端部を撮像する撮像装置をさらに備えている請 求の範囲第 1項に記載の液体分注装置。
7 . 前記分注素子のうち分注動作を行なう分注素子の先端部を撮像す る撮像装置をさらに備え、 該撮像装置は分注動作を行なう分注素子の変 更に伴って移動できるように移動機構に支持されている請求の範囲第 2 項に記載の液体分注装置。
8 . サンプル又は試薬を滴下する分注素子が着脱可能になっている分 注機構と、
下方の画像を読み取る画像読取り装置と、
サンプル又は試薬が分注される対象物を上面に支持し、 水平面内で移 動して前記対象物を少なくとも前記分注素子の下方の分注位置及び前記 画像読取り装置の下方の画像読取り位置に位置決めする可動テーブルと、 前記分注機構により前記可動テープル上の所定の位置に分注を行なつ たときの前記画像読取り装置による読取り画像に基づいて分注位置を検 出し、 同時に読み取った前記可動テーブル上の基準となるベースボイン トを基にして分注位置の校正を行なう校正部とを備えた分注装置。
9 . 前記分注機構は分注素子を複数個備えており、 前記校正部は分注 素子のそれぞれについて校正を行なうものである請求の範囲第 8項に記 載の分注装置。
1 0 . テーブル上の対象物の画像を読み取る画像読取り装置と、 前記画像読取り装置が読み取った画像を基にして、 その画像中で指定 された位置の情報又は検出された位置の情報をその対象物上の基準とな る複数のリ ファ レンスポイントを基にして作成する位置情報作成部とを 備えた位置情報読取り装置。
1 1 . 前記画像読取り装置が読み取った画像を表示するモニター部と、 前記モニター部に表示された前記対象物の画像に基づいて対象物上の位 置を指定する位置指定部とをさらに備え、
前記位置情報作成部は前記位置指定部が指定した対象物上の位置の情 報を作成するものである請求の範囲第 1 0項に記載の位置情報読取り装 置。
1 2 . 前記画像読取り装置は対象物の画像とともに前記テーブルの画 像も読み取るものであり、
前記位置情報作成部は前記対象物上の位置をテーブル上の基準となる 複数のベースボイントを基にして作成するものである請求の範囲第 1 0 項又は第 1 1項に記載の位置情報読取り装置。
1 3 . 前記分注位置情報作成部は作成した分注位置情報を外部に出力 できるものである請求の範囲第 1 0項から第 1 2項のいずれかに記載の 位置情報読取り装置。
1 4 . サンプル又は試薬が分注される表面をもつ板状体であって、 前 記表面内に位置の基準となる複数のマークを備えているサンプルプレー h o
1 5 . サンプル又は試薬を滴下するノズルを備えた分注機構と、 サンプル又は試薬が分注される対象物を上面に支持し、 水平面内で移 動して前記対象物を前記ノズルの下方に位置決めする可動テーブルと、 平面上は前記可動テーブルの移動範囲内にあって、 前記可動テーブル と接触しない上方の位置に取りつけられ、 前記ノズルの先端部を斜め上 方から撮像する撮像装置とを備えた分注装置。
1 6 . 前記ノズルの先端部を挟んで前記撮像装置とは反対側の位置に 光源が配置されており、 前記光源はその発する光が前記対象物の表面で 反射し前記ノズルの先端部を経由して前記撮像装置に入射する方向に向 けられている請求の範囲第 1 5項に記載の分注装置。
1 7 . 前記撮像装置は前記ノズルの先端部に形成される液滴の形状を 前記ノズル先端部の画像として撮像する請求の範囲第 1 5項又は第 1 6 項に記載の分注装置。
1 8 . 前記撮像装置は前記ノズルの先端部の画像とともに前記ノズル の下部にある前記対象物表面の画像も撮像するように設定されている請 求の範囲第 1 5項から第 1 7項のいずれかに記載の分注装置。
1 9 . サンプル又は試薬を滴下するノズルの斜め上方に撮像装置を設 置して、 そのノズルから滴下する液滴の状態を前記撮像装置により撮像 することにより分注状態をモニタすることを特徴とするモニタリング方 法。
2 0 . 吐出部が下向きの開口をもち、 その吐出部につながる空間に充 填された液を、 ピエゾ素子を備えた駆動部により押圧することによりそ の吐出部から液滴を吐出するピエゾチップと、 前記空間に充填された液 の圧力状態を調整できる圧力制御機構と、 前記吐出部の画像を撮像する 撮像装置を備えた分注ュニットにおける分注方法において、
前記空間に液を充填する前の前記吐出部の画像を前記撮像装置により 取り込んで記憶させておき、
前記ピエゾチップからの分注動作を開始する前の準備段階として、 前 記空間に液を充填した後、 前記撮像装置により前記吐出部の画像を取り 込んで液充填前の画像との差異を求めながら前記圧力制御機構を制御す ることにより、 液が前記吐出部から現れた後、 液充填前の画像との差異 がなくなるまで後退させる工程とを備えた分注方法。
2 1 . 前記圧力制御機構の制御を前記撮像装置により取り込んだ画像 に基づいて自動で行なわせる請求の範囲第 2 0項に記載の分注方法。
2 2 . 吐出部が下向きの開口をもち、 その吐出部につながる空間に充 填された液を、 ピエゾ素子を備えた駆動部により押圧することによりそ の吐出部から液滴を吐出するピエゾチップを備えた分注ユエットと、 前記空間に充填された液の圧力状態を調整できる圧力制御機構と、 前記吐出部の画像を撮像する撮像装置と、
前記撮像装置が撮像した画像を記憶する記憶装置と、
前記空間に液を充填する前の前記吐出部の画像で前記記憶装置に記憶 された画像と前記空間に液を充填した後の画像とを比較し、 液が前記吐 出部から現れた後、 液充填前の画像との差異がなくなるまで後退するよ うに前記圧力制御機構を制御する制御装置とを備えた分注装置。
2 3 . 前記撮像装置は前記吐出部の画像を水平方向から撮像するよう に設置されている請求の範囲第 2 2項に記載の分注装置。
2 4 . 先端の吐出部から液滴を吐出する分注ュニットにおける分注方 法において、
前記吐出部から吐出された液滴の画像を取得するステップと、 その取り込んだ画像に基づいて液滴の大きさを求めるステップと、 その求めた液滴の大きさに基づいて液滴の分注量が所定値になるよう に前記分注ュ-ットの吐出駆動部への制御信号のパラメータを調節する ステップとを備えた分注方法。
2 5 . 前記分注ユニットは、 先端の吐出部につながる空間に充填され た液を、 ピエゾ素子を備えた駆動部により押圧することによりその吐出 部から液滴を吐出するピエゾヘッドを備えたピエゾ分注方式のものであ る請求の範囲第 2 4項に記載の分注方法。
2 6 . 前記制御信号のパラメータは、 前記ピエゾ素子への印加電圧の 大きさ、 印加電圧の立上がり時間、 印加時間、 印加電圧の立下がり時間 のうちの少なくとも 1つを含んでいる請求の範囲第 2 5項に記載の分注 方法。
2 7 . 前記分注ュニットはシリンジポンプによる分注方式のものであ る請求の範囲第 2 4項に記載の分注方法。
2 8 . 前記制御信号のパラメータは、 前記シリンジポンプのプランジ ャのストローク、 速さ、 加速のうちの少なく とも 1つを含んでいる請求 の範囲第 2 7項に記載の分注方法。
2 9 . 液滴の大きさを求める画像は、 前記吐出部の先端に玉状にぶら 下がった状態の液滴の画像である請求の範囲第 2 7項又は第 2 8項に記 載の分注方法。
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Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006126013A (ja) * 2004-10-28 2006-05-18 Shimadzu Corp プロテオーム解析装置
JP2006167000A (ja) * 2004-12-13 2006-06-29 Micronics Kk 点眼装置、およびノズルチップ
JP2008542715A (ja) * 2005-05-23 2008-11-27 シーメンス メディカル ソリューションズ ダイアグノスティクス 診断液体の診断試薬の分取
US8381676B2 (en) * 2005-01-31 2013-02-26 Boston Scientific Scimed, Inc. Method and system for coating a medical device using optical drop volume verification
CN103308700A (zh) * 2012-03-08 2013-09-18 研能科技股份有限公司 自动化微喷液检测装置
TWI487915B (zh) * 2012-03-08 2015-06-11 Microjet Technology Co Ltd 自動化微噴液檢測裝置
JP2015517109A (ja) * 2012-04-18 2015-06-18 バイオファイア・ダイアグノスティクス，リミテッド・ライアビリティ・カンパニー マイクロスポッティング装置
JP2017009532A (ja) * 2015-06-25 2017-01-12 株式会社日立ハイテクノロジーズ 自動分析装置および撮像方法
WO2018088460A1 (ja) * 2016-11-11 2018-05-17 株式会社アイカムス・ラボ ウェルアドレス取得システム、ウェルアドレス取得方法、及びプログラム
JP2019184494A (ja) * 2018-04-13 2019-10-24 東芝テック株式会社 液滴分注装置
JP2019184495A (ja) * 2018-04-13 2019-10-24 東芝テック株式会社 液滴分注装置
JP2021084429A (ja) * 2019-11-29 2021-06-03 株式会社リコー 液吐出ユニットおよび液吐出装置
JP2024509794A (ja) * 2021-03-15 2024-03-05 エル・ピー・ケー・エフ・レーザー・アンド・エレクトロニクス・ソシエタス・ヨーロピア キャリア上に液体を滴下するための装置及び方法

Families Citing this family (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4183577B2 (ja) * 2003-07-25 2008-11-19 武蔵エンジニアリング株式会社 液滴調整方法及び液滴吐出方法並びにその装置
KR101026935B1 (ko) * 2003-12-10 2011-04-04 엘지디스플레이 주식회사 디스펜서 정렬장치 및 그 방법
JP4748503B2 (ja) * 2004-03-23 2011-08-17 大日本スクリーン製造株式会社 処理装置
US20050257738A1 (en) * 2004-05-21 2005-11-24 Semiconductor Energy Laboratory Co., Ltd. Manufacturing apparatus of semiconductor device and pattern-forming method
US8101244B2 (en) * 2004-06-09 2012-01-24 Smithkline Beecham Corporation Apparatus and method for producing or processing a product or sample
TWI428271B (zh) * 2004-06-09 2014-03-01 Smithkline Beecham Corp 生產藥物之裝置及方法
US20060002594A1 (en) * 2004-06-09 2006-01-05 Clarke Allan J Method for producing a pharmaceutical product
EP1963002A1 (en) * 2005-11-29 2008-09-03 Koninklijke Philips Electronics N.V. Ink jet device and method for producing a biological assay substrate by releasing a plurality of substances onto the substrate
US20090166529A1 (en) * 2006-04-14 2009-07-02 Shuichi Shinma Method for preparing specimen for mass spectrometry
JPWO2008038812A1 (ja) * 2006-09-28 2010-01-28 株式会社島津製作所 マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析用サンプル調製法及びマトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析法
WO2008042960A2 (en) * 2006-10-03 2008-04-10 Kalypsys, Inc. Droplet detection system
ES2344228T3 (es) * 2007-03-23 2010-08-20 Siemens Aktiengesellschaft Dispositivo y procedimiento para revestir un componente con dispositivo de ajuste.
EP2058135A1 (en) * 2007-11-07 2009-05-13 Koninklijke Philips Electronics N.V. Printer device and method for producing biological test arrays
WO2012030313A1 (en) 2008-04-25 2012-03-08 James Winkelman Method of determining a complete blood count and a white blood cell differential count
US9602777B2 (en) 2008-04-25 2017-03-21 Roche Diagnostics Hematology, Inc. Systems and methods for analyzing body fluids
WO2011024218A1 (ja) * 2009-08-26 2011-03-03 株式会社ミマキエンジニアリング プリンタ装置およびその印刷方法
CN102012359B (zh) * 2010-11-19 2012-03-28 华中科技大学 一种液体多参数传感器
JP2012169475A (ja) * 2011-02-15 2012-09-06 Toshiba Corp インプリント装置および半導体基板の製造方法
JP5689952B2 (ja) * 2011-04-11 2015-03-25 エンジニアリングシステム株式会社 観察用光学系付き液体吐出装置
JP2012234920A (ja) * 2011-04-28 2012-11-29 Toshiba Corp 半導体製造装置および半導体装置の製造方法
US10723497B2 (en) * 2014-11-03 2020-07-28 Vanrx Pharmasystems Inc. Apparatus and method for monitoring and controlling the filling of a container with a pharmaceutical fluid in an aseptic environment
ES2774942T3 (es) * 2011-07-22 2020-07-23 Roche Diagnostics Hematology Inc Detección y posicionamiento de aplicador de muestras
US20130133574A1 (en) * 2011-11-29 2013-05-30 Illinois Tool Works Inc. Material deposition system for depositing materials on a substrate
JP6239613B2 (ja) 2012-07-13 2017-11-29 ロッシュ ダイアグノスティクス ヘマトロジー インコーポレイテッド 基板上への試料の制御供給
ITMI20121803A1 (it) * 2012-10-24 2014-04-25 Altergon Sa Metodo e dispositivo di misura e controllo di dosaggio di piccole quantità di fluido per mezzo di ago risonante, ed ago risonante adatto allo scopo
US11141752B2 (en) * 2012-12-27 2021-10-12 Kateeva, Inc. Techniques for arrayed printing of a permanent layer with improved speed and accuracy
US12330178B2 (en) 2012-12-27 2025-06-17 Kateeva, Inc. Techniques for arrayed printing of a permanent layer with improved speed and accuracy
KR102039808B1 (ko) 2012-12-27 2019-11-01 카티바, 인크. 정밀 공차 내로 유체를 증착하기 위한 인쇄 잉크 부피 제어를 위한 기법
US11673155B2 (en) 2012-12-27 2023-06-13 Kateeva, Inc. Techniques for arrayed printing of a permanent layer with improved speed and accuracy
JP2014175563A (ja) * 2013-03-12 2014-09-22 Panasonic Corp ペースト塗布装置
KR101407716B1 (ko) * 2013-04-03 2014-06-13 에이비메디컬 주식회사 정량분주 기능을 갖는 노즐장치
EP2848306B1 (en) 2013-09-13 2016-04-06 Bruker Daltonik GmbH Dispenser system for mass spectrometric sample preparations
WO2015088592A1 (en) 2013-12-12 2015-06-18 Kateeva, Inc. Ink-based layer fabrication using halftoning to control thickness
WO2015172025A1 (en) * 2014-05-08 2015-11-12 The Cleveland Clinic Foundation Systems and methods for detection, analysis, isolation and/or harvesting of biological objects
US10201832B2 (en) 2014-05-30 2019-02-12 The Boeing Company Methods for dispensing a substance on a surface
CA2981975C (en) 2015-04-06 2023-08-01 Nanocytomics, LLC Automated specimen deposition systems and associated methods
KR101740146B1 (ko) * 2015-10-30 2017-05-26 주식회사 프로텍 펌프 위치 피드백 방식 디스펜서 및 디스펜싱 방법
EP3376235B1 (en) * 2015-11-13 2020-02-26 Konica Minolta, Inc. Reaction method and surface plasmon-field enhanced fluorescence apparatus
WO2017218882A1 (en) 2016-06-16 2017-12-21 Nanocytomics, LLC Automated staining system
CN109564237B (zh) 2016-06-30 2022-12-13 拜克门寇尔特公司 物质分配评估系统
JP7291683B2 (ja) * 2017-07-18 2023-06-15 モレキュラー デバイシーズ， エルエルシー ピペット先端の撮像ベースの位置特定を伴う物体ピッキング装置
CN107807246B (zh) * 2017-11-24 2023-12-05 培力(南宁)药业有限公司 一种薄层色谱喷淋显色仪及其检测方法
KR101979539B1 (ko) * 2018-03-20 2019-05-16 엔젯 주식회사 프린팅 장치
JP6933297B2 (ja) * 2018-04-23 2021-09-08 株式会社島津製作所 オートサンプラ
JP7556792B2 (ja) 2018-05-16 2024-09-26 カタログ テクノロジーズ， インコーポレイテッド Ｄｎａにおけるデータ記憶のためのプリンター－フィニッシャーシステム
GB201818478D0 (en) * 2018-11-13 2018-12-26 Great North Res & Innovation Ltd Apparatus
TWI898518B (zh) 2018-12-21 2025-09-21 美商凱特伊夫公司 小液滴量測設備、列印系統及用於小液滴量測之方法
KR102036289B1 (ko) * 2019-02-27 2019-10-24 에이피시스템 주식회사 도포 장치 및 이를 이용한 도포 방법
KR20200131421A (ko) * 2019-05-14 2020-11-24 세메스 주식회사 약액 토출 장치 및 약액 토출 방법
CN113905828B (zh) 2019-05-31 2023-11-14 科迪华公司 印刷机校准模块
JP7433821B2 (ja) * 2019-09-24 2024-02-20 東芝テック株式会社 薬液滴下装置
CN110596411B (zh) * 2019-10-22 2020-11-06 威海迈维特智能识别技术有限公司 一种微流控芯片点样机及点样方法
CN110749282A (zh) * 2019-11-04 2020-02-04 和卓生物科技（上海）有限公司 一种吸头校准设备
CN113559947B (zh) * 2021-07-26 2022-05-06 杭州都林生物科技有限公司 一种自动化点样仪
KR20240171739A (ko) 2023-05-31 2024-12-09 주식회사 씨티바이오 액체 분주 장치 및 이를 이용한 액체 분주 방법

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01219535A (ja) * 1988-02-26 1989-09-01 Shimadzu Corp マイクロマニピュレータにおける微小器具の位置決め用プレート
JPH0312550A (ja) * 1989-06-09 1991-01-21 Kyoto Denshi Kogyo Kk 質量分析計におけるフィラメントへの試料塗布方法
JPH0666558A (ja) * 1992-08-14 1994-03-08 Hitachi Constr Mach Co Ltd 微細対象物測定装置の測定箇所視野内設定方法
JPH07333231A (ja) * 1994-06-10 1995-12-22 Aloka Co Ltd 自動分注装置
JPH10307088A (ja) * 1997-05-07 1998-11-17 Hitachi Ltd 異物固定方法およびマーク形成方法、ならびに、それらに使用する装置
JPH11287812A (ja) * 1998-04-02 1999-10-19 Matsushita Electric Ind Co Ltd 自動分注装置および分注方法
JP2002162404A (ja) * 2000-11-24 2002-06-07 Olympus Optical Co Ltd 液体分注装置

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6121048A (en) 1994-10-18 2000-09-19 Zaffaroni; Alejandro C. Method of conducting a plurality of reactions
US6838051B2 (en) 1999-05-03 2005-01-04 Ljl Biosystems, Inc. Integrated sample-processing system
EP1048723B1 (en) 1998-09-09 2004-04-14 Hitachi Software Engineering Co., Ltd. Biochip and method of using biochip
JP2001021558A (ja) 1999-04-30 2001-01-26 Agilent Technol Inc ポリヌクレオチドアレイの製作法
US6362004B1 (en) * 1999-11-09 2002-03-26 Packard Biochip Technologies, Llc Apparatus and method for using fiducial marks on a microarray substrate
US6890760B1 (en) * 2000-07-31 2005-05-10 Agilent Technologies, Inc. Array fabrication
WO2002034944A1 (en) 2000-10-23 2002-05-02 Dia Chip Limited High precision and intellectual biochip arrayer having function of respotting
US20020149628A1 (en) 2000-12-22 2002-10-17 Smith Jeffrey C. Positioning an item in three dimensions via a graphical representation
US7270712B2 (en) * 2001-06-01 2007-09-18 Litrex Corporation Industrial microdeposition system for polymer light emitting diode displays, printed circuit boards and the like

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01219535A (ja) * 1988-02-26 1989-09-01 Shimadzu Corp マイクロマニピュレータにおける微小器具の位置決め用プレート
JPH0312550A (ja) * 1989-06-09 1991-01-21 Kyoto Denshi Kogyo Kk 質量分析計におけるフィラメントへの試料塗布方法
JPH0666558A (ja) * 1992-08-14 1994-03-08 Hitachi Constr Mach Co Ltd 微細対象物測定装置の測定箇所視野内設定方法
JPH07333231A (ja) * 1994-06-10 1995-12-22 Aloka Co Ltd 自動分注装置
JPH10307088A (ja) * 1997-05-07 1998-11-17 Hitachi Ltd 異物固定方法およびマーク形成方法、ならびに、それらに使用する装置
JPH11287812A (ja) * 1998-04-02 1999-10-19 Matsushita Electric Ind Co Ltd 自動分注装置および分注方法
JP2002162404A (ja) * 2000-11-24 2002-06-07 Olympus Optical Co Ltd 液体分注装置

Cited By (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006126013A (ja) * 2004-10-28 2006-05-18 Shimadzu Corp プロテオーム解析装置
JP2006167000A (ja) * 2004-12-13 2006-06-29 Micronics Kk 点眼装置、およびノズルチップ
US8381676B2 (en) * 2005-01-31 2013-02-26 Boston Scientific Scimed, Inc. Method and system for coating a medical device using optical drop volume verification
JP2008542715A (ja) * 2005-05-23 2008-11-27 シーメンス メディカル ソリューションズ ダイアグノスティクス 診断液体の診断試薬の分取
US8263414B2 (en) 2005-05-23 2012-09-11 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Dispensing of a diagnostic liquid onto a diagnostic reagent
US8486715B2 (en) 2005-05-23 2013-07-16 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Dispensing of a diagnostic liquid onto a diagnostic reagent
CN103308700A (zh) * 2012-03-08 2013-09-18 研能科技股份有限公司 自动化微喷液检测装置
TWI487915B (zh) * 2012-03-08 2015-06-11 Microjet Technology Co Ltd 自動化微噴液檢測裝置
US10471408B2 (en) 2012-04-18 2019-11-12 Biofire Diagnostics, Llc Microspotting device
JP2015517109A (ja) * 2012-04-18 2015-06-18 バイオファイア・ダイアグノスティクス，リミテッド・ライアビリティ・カンパニー マイクロスポッティング装置
US11207655B2 (en) 2012-04-18 2021-12-28 Biofire Diagnostics, Llc Microspotting device
JP2017009532A (ja) * 2015-06-25 2017-01-12 株式会社日立ハイテクノロジーズ 自動分析装置および撮像方法
WO2018088460A1 (ja) * 2016-11-11 2018-05-17 株式会社アイカムス・ラボ ウェルアドレス取得システム、ウェルアドレス取得方法、及びプログラム
JPWO2018088460A1 (ja) * 2016-11-11 2019-10-03 株式会社アイカムス・ラボ ウェルアドレス取得システム、ウェルアドレス取得方法、及びプログラム
JP2019184495A (ja) * 2018-04-13 2019-10-24 東芝テック株式会社 液滴分注装置
JP2019184494A (ja) * 2018-04-13 2019-10-24 東芝テック株式会社 液滴分注装置
JP2021084429A (ja) * 2019-11-29 2021-06-03 株式会社リコー 液吐出ユニットおよび液吐出装置
JP7451972B2 (ja) 2019-11-29 2024-03-19 株式会社リコー 液吐出ユニット、液吐出装置および液吐出方法
JP2024509794A (ja) * 2021-03-15 2024-03-05 エル・ピー・ケー・エフ・レーザー・アンド・エレクトロニクス・ソシエタス・ヨーロピア キャリア上に液体を滴下するための装置及び方法
JP7595783B2 (ja) 2021-03-15 2024-12-06 エル・ピー・ケー・エフ・レーザー・アンド・エレクトロニクス・ソシエタス・ヨーロピア キャリア上に液体を滴下するための装置及び方法

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