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WO2004089399A1 - Novel uses of rfrp and ot7t022 - Google Patents

Novel uses of rfrp and ot7t022 Download PDF

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Publication number
WO2004089399A1
WO2004089399A1 PCT/JP2004/003480 JP2004003480W WO2004089399A1 WO 2004089399 A1 WO2004089399 A1 WO 2004089399A1 JP 2004003480 W JP2004003480 W JP 2004003480W WO 2004089399 A1 WO2004089399 A1 WO 2004089399A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
amino acid
acid sequence
seq
phe
sequence represented
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2004/003480
Other languages
French (fr)
Japanese (ja)
Inventor
Hirokazu Matsumoto
Jiro Noguchi
Chieko Kitada
Shuji Hinuma
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Takeda Pharmaceutical Co Ltd, Takeda Chemical Industries Ltd filed Critical Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Publication of WO2004089399A1 publication Critical patent/WO2004089399A1/en
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
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    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to a novel use of RFRP and OT7T022, a receptor protein of RFRP.
  • Novel receptor OT7T022 and its binding C-terminal LPL RF amide-like, LPL RS amide-like, LPQ RF amide-like or LPL RL amide-like peptides (RFRP-1, RFRP-2, RFRP-3) (WO00Z29441).
  • An object of the present invention is to elucidate further functions of RFRP and ⁇ T 7 T022, and to provide a new medicine. Disclosure of the invention
  • RFRP has a Teng-glucagon secretion promoting action, a blood glucose increasing action, a memory erasing promoting action, etc., which are completely different from conventionally known actions. I found it. The present inventors have further studied based on these findings, and as a result, have completed the present invention.
  • the present invention [1] a polypeptide containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof
  • Teng Glucagon secretagogue blood sugar increasing agent, urine production enhancer, memory elimination enhancer (bad elimination enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, Prevention and treatment of dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer
  • Polypeptide is SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22 Listed agents,
  • (ii) contains the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, and is N-terminal to the amino acid sequence
  • 1 to 100 amino acids counted from the C-terminal of the first (Met) to 100th (Arg) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 are added.
  • a peptide consisting of a good amino acid sequence human RFRP-2
  • (iii) contains the amino acid sequence of the 127th (Leu) to 131st (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, and is N-terminal to the amino acid sequence And 1 to 126 amino acids counted from the C-terminal of the first (Met) to 126th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
  • a peptide consisting of a good amino acid sequence human RFRP-3
  • V It contains the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, and is represented by SEQ ID NO: 1 on the N-terminal side of the amino acid sequence. 1 to 100 amino acids counted from the C-terminus of the 1st (Met) to 100th (Arg) amino acid sequence of the amino acid sequence to be added.
  • a peptide consisting of a good amino acid sequence ( ⁇ RFRP— 2)
  • (viii) contains the 121st (Leu) to 125th (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, and is represented by SEQ ID NO: 1 on the N-terminal side of the amino acid sequence.
  • Peptide molecular RFRP-3 consisting of an amino acid sequence with 1 to 120 amino acids counted from the C-terminus of the 1st (Met) to 120th (Ser) amino acid sequence to be added ,
  • SEQ ID NO: contains the amino acid sequence from the 90th (Leu) to the 94th (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22, and is represented by SEQ ID NO: 1 on the N-terminal side of the amino acid sequence. Consisting of an amino acid sequence that may have 1 to 89 amino acids counted from the C-terminus of the first (Met) to 89th (Asn) amino acid sequence (rat RFRP-1) ,
  • (X) contains the 121st (Leu) -125th (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22, and the N-terminal of the amino acid sequence On the side, 1 to 120 amino acids counted from the C-terminal of the first (Met) to 120th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 may be added.
  • Sequence peptide (rat RFRP-3),
  • a peptide (human RFRP-2) consisting of the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3,
  • (V) a peptide consisting of the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 ( ⁇ RFRP-2); (vi) SEQ ID NO: 5 101st (Ser) to 131st (Phe), 104th (Ala) to 131st (Phe), 115th (Asn) to 131st (Phe), 124th (Val)-131st (Phe), 125th (Pro)-131st (Phe), 126th (Asn)-131st (Phe) or 127th (Leu)-131st Peptide consisting of the amino acid sequence of (Phe) ( ⁇ RFRP-3),
  • a glucagon secretion promoter comprising a DNA encoding a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof, Hypoglycemic agent, urine production enhancer, memory elimination enhancer (disabling memory elimination enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance Syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer prevention and treatment,
  • DNA encodes a polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22
  • V a peptide consisting of the 101st (Ser) -112nd (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 ( ⁇ RFRP-2);
  • a peptide (deletion type) comprising an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptides U) to (X) are deleted
  • (XV) a peptide comprising an amino acid sequence obtained by combining deletion, addition, insertion, and substitution of the above (xi) to (xiv);
  • [8] diabetes impaired glucose tolerance, comprising a DNA encoding a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof; Ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, Indigestion, memory and learning disorders, obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergic, insulinoma, Lipotoxic or cancer diagnostics,
  • Treatment and treatment of dysfunction frequent urination, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion or memory learning disorder,
  • diabetes comprising an antibody against a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof , Impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, bone loss Disease, arteriosclerosis, thrombotic disease, dyspepsia, memory learning disorder, obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy Diagnostics for insulin allergy, insulinoma, lipotoxicity or cancer,
  • [11] contains a nucleotide sequence complementary to the DNA encoding the polypeptide or the partial peptide thereof having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or a portion thereof Glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory decrease inhibitor), or diabetes, glucose intolerance, ketosis, acidosis, diabetes Sexual neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion or memory learning Prevention and treatment of disorders
  • Tengurugagon containing a compound or a salt thereof that increases the expression level of a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof Secretagogues, hyperglycemic agents, urinary production enhancers, memory elimination enhancers (an aversive memory elimination enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria , Insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer prevention and treatment, [13] Glucagon comprising a compound having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a compound capable of reducing the expression level of a partial peptide thereof, or a salt thereof Secretion suppressant, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory decline inhibitor), or diabetes
  • Receptor protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, T7TO22, a partial peptide thereof or a salt thereof
  • Tenguru glucagon secretagogue hyperglycemic agent, urine production enhancer, memory elimination enhancer (an aversive memory elimination enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema Dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer prevention and treatment,
  • the agent of the above-mentioned [14], wherein the OT7T022 is a receptor protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 27;
  • a receptor protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 OT7T022 or a DNA encoding a partial peptide thereof ⁇ Glucagon secretagogue, blood sugar increasing agent, urine production enhancer, memory elimination enhancer (an aversive memory elimination enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, urination Prevention and treatment of dysfunction, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer,
  • Amino acid represented by SEQ ID NO: 11 Receptor protein OT7TO22 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the acid sequence, containing an antibody against a partial peptide or a salt thereof
  • Diabetes impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, bone loss Disease, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion, memory and learning disorders, obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipodystrophy Diagnostic agents for contraction, insulin allergy, insulinoma, lipotoxicity or cancer,
  • Receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, complementary to the DNA encoding the partial peptide thereof Glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory decrease inhibitor), or diabetes, glucose tolerance Disorders, ketolysis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retina Prevention and treatment of dysfunction, pollakiuria, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion or memory learning disorder,
  • a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof, and / or the polypeptide A receptor protein OT7T022 containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 with its partial peptide, its amide, its ester, or its salt;
  • a method for screening a Tenguru-cagon secretion regulator, a blood glucose regulator or a urine production regulator which comprises using a compound or a salt thereof that changes the binding property to a partial peptide or a salt thereof,
  • a receptor protein having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, OT7TO22, a partial peptide thereof or a salt thereof;
  • Type 2 diabetes Hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer prevention and treatment methods,
  • a compound that reduces the expression level of receptor protein OT7TO22 or a partial peptide thereof which has the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11
  • a method of inhibiting glucagon secretion, decreasing blood glucose, suppressing urine production, suppressing memory learning (controlling memory loss), or treating diabetes, metabolic dysfunction, or ketosis which comprises administering an effective amount of a salt thereof.
  • Acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, night Urine, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion or memory learning prevention and treatment methods
  • Teng-glucagon secretagogue hyperglycemic agent, urine production enhancer, memory elimination enhancer (disgusting memory elimination enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension , Edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer.
  • a receptor protein ⁇ T 7 T O 22 containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof, or a salt thereof;
  • an antibody against a receptor protein OT7TO22 having an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof or a salt thereof,
  • SEQ ID NO: 11 Base complementary to DNA encoding receptor protein ⁇ T7TO22 or a partial peptide thereof, which has the same or substantially the same amino acid sequence as that represented by SEQ ID NO: 11 An antisense DNA containing the sequence or a portion thereof,
  • a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, its partial peptide or a salt thereof, or an agonist.
  • Glucagon secretagogue hyperglycemic drug, urine production enhancer, memory erasure enhancer (disgusting memory erasure enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension , Edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy
  • Prophylactic / therapeutic drugs such as constriction, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity, cancer,
  • ⁇ 7 ⁇ 022 characterized by ⁇ glucagon secretion enhancer, hyperglycemic drug, urine production enhancer, memory erasure enhancer (an aversive memory elimination enhancer), or obesity, high fat Blood, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity, Prevention and treatment of cancer, etc. How to confirm that the drug is an agonist against ⁇ 7 ⁇ 022,
  • Figure 1 shows the results of examining changes in blood glucose levels when RFRP-1 was intravenously administered to unanesthetized rats.
  • (1-1) is the blood group of the physiological saline administration group
  • (1--) is the blood group of the RFRP-11 1 nmo 1 / kg administration group
  • (-en) is the blood group of the RFRP-1 10 nmo 1 / kg administration group.
  • the values are average figures
  • FIG. 2 shows the results of examining changes in blood glucagon concentration when intravenously administering RFRP-1 to unanesthetized rats.
  • (- ⁇ —) is the blood of the saline administration group
  • ( ⁇ ) is the blood of the RFRP-11 1 nmo1 / kg administration group
  • (—Garden) is the blood of the RFRP-1 10 nmo1 Zkg administration group.
  • FIG 3 shows the results of examining the change in blood insulin concentration when RFRP-1 was intravenously administered to an anesthetized rat.
  • ((- ⁇ -1) is the saline administration group
  • (-1 ⁇ -) is the RFRP-11 mg nm 1 kg administration group
  • (—en) is the RFRP-1 110 nmol lZkg administration blood insulin.
  • Figure 4 shows the percentage of freezing in the sound cue test when RFRP-1 ( ⁇ ) and saline ( ⁇ ) were administered intraventricularly.
  • the RFRP used in the present invention is a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 (hereinafter, may be referred to as RFRP).
  • 3 cells of animal cells eg, guinea pig, rat, mouse, chicken, egret, bush, hidge, horse, monkey, etc.
  • 3 cells eg, retinal cells, liver cells, spleen cells, nerve cells, glial cells, kidney
  • Bone marrow cells mesangial cells, Langerhans cells, epidermal cells, epithelial cells, endothelial cells, fibroblasts, fiber cells, muscle cells, fat cells, immune cells (eg, macrophages, T cells, B cells, natural Killer cells, mast cells, neutrophils, basophils, eosinophils, monocytes), megakaryocytes, synovial cells, chondrocytes, bone cells, osteoblasts, osteoclasts, breast
  • the amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is about 70% or more, preferably about 80% or more, more preferably about 90% or more as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1. More preferably, the amino acid sequence has about 95% or more homology.
  • examples of the amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 include an amino acid sequence having the 22nd to 180th amino acid sequences of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
  • the RFRP used in the present invention is a polypeptide comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 (for example, , SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22), and comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
  • Glucagon secretion-enhancing activity, hypoglycemic activity, urine-promoting activity that is substantially the same as the peptide It is a polypeptide that has a function of promoting memory erasure (a function of promoting elimination of unpleasant memory).
  • Glucagon secretion promoting activity, blood glucose increasing activity, urine production promoting effect, memory erasing promoting effect (promotion of elimination of unpleasant memory) are characteristically (eg, biochemical or drug) (Physical) indicates that they are the same. Accordingly, the ⁇ glucagon secretion promoting activity, blood glucose increasing activity, urine production promoting effect, memory erasure promoting effect (promotion of elimination of unfavorable memory) and the like are equivalent (eg, about 0.1 to 100 times, preferably about 0 times). (5 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times), but the quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the polypeptide may be different. (4) Glucagon secretion promoting activity, blood glucose increasing activity, and memory erasure promoting activity (promotion of elimination of unpleasant memory) can be measured according to the methods of Examples 1 to 3, respectively.
  • RFRP examples include (i) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22. Amino acid sequence in which 20 (preferably 1 to 15, more preferably 1 to 5, and more preferably 1 to 3) amino acids have been deleted, (ii) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or 1 to 20 (preferably 1 to 15, more preferably 1 to 5, more preferably 1 to 15 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22 or SEQ ID NO: 22) Is an amino acid sequence to which 1 to 3 amino acids are added, (iii) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22 1 to 20 (preferably 1 to 15, more preferably 1 to 5, more preferably, the amino acid sequence amino acids 1-3) is inserted, (iv) SEQ ID NO: 1,
  • the amino acid sequence is deleted, added, inserted or substituted as described above, the position of the deletion, addition, insertion or substitution is not particularly limited.
  • the polypeptide has an N-terminal (amino terminal) at the left end and a C-terminal (carboxyl terminal) at the right end according to the convention of peptide labeling.
  • RFRP including human RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, has a C-terminal lipoxyl group (_CO ⁇ H), carboxylate (—COO—), amide (one CONH 2 ) or ester (—COOR).
  • R in the ester e.g., methyl, Echiru, n- propyl Le, CI_ 6 alkyl group such as isopropyl or n- butyl, cyclo pentyl, C 3 _ 8 cycloalkyl group such as cyclohexyl, for example , phenyl, alpha-C 6 _ 12 Ariru groups, naphthyl, for example, benzyl, phenylene Lou C ⁇ 2 alkyl or alpha-naphthylmethyl etc. alpha-naphthyl, such as phenethyl - other 4 Ararukiru such as an alkyl group For example, a bivaloyloxymethyl group commonly used as an oral ester is used.
  • RFRP has a carboxyl group (or carboxylate) at a position other than the C-terminus
  • a compound in which the carboxyl group is amidated or esterified is also included in the range of RFRP referred to in the present invention.
  • ester in this case, for example, the above-mentioned C-terminal ester and the like are used.
  • RFRPs are those in which the amino group of the N-terminal amino acid residue (eg, methionine residue) is protected by a protecting group (for example, a 6- acyl group such as an alkanol such as a formyl group or an acetyl group).
  • a protecting group for example, a 6- acyl group such as an alkanol such as a formyl group or an acetyl group.
  • N-terminal glutamine residue generated by cleavage in vivo, resulting from pyroglutamine oxidation, substituent on the side chain of amino acid in the molecule eg, 1 OH, --SH, amino group, imidazole group, India Lumpur group, Guanijino group, etc.
  • a suitable protecting group e.g., formyl group, is also protected by a C E _ 6 Ashiru groups such as C E _ 6 Arukanoiru group such Asechiru group
  • RFRP sugar chain Complex proteins, such as so-called glycoproteins, to which is bound.
  • these polypeptides may be abbreviated as RFRP.
  • a peptide RFRP comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, a rat RFRP comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, a mouse RFRP comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, and an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22
  • Rat RFRP consisting of, for example, human RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, human RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, and amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 RFRP is preferably used.
  • the partial peptide of RFRP (hereinafter sometimes referred to as RFRP partial peptide) is the partial peptide of RFRP described above, and is the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by OT7T022 (SEQ ID NO: 11) described later. Any of these can be used as long as they have the ability to bind to a receptor protein or a salt thereof containing the same amino acid sequence.
  • the RFRP partial peptide has 1 to 5 (preferably 1 to 3) amino acids in its amino acid sequence deleted, or 1 to 5 (preferably 1 to 3) in its amino acid sequence. ) Is added, or 1 to 5 (preferably, 1 to 3) amino acids are inserted into the amino acid sequence, or 1 to 5 (preferably, 1 to 5) in the amino acid sequence. (3) amino acids may be composed of an amino acid sequence substituted with another amino acid, or may be composed of an amino acid sequence obtained by combining deletion, addition, insertion, and substitution thereof. .
  • the RFRP partial peptide has a C-terminal lipoxyl group (—COOH), lipoxylate (—COO—), amide (one C ⁇ NH 2 ) or ester (—COOR) (R is as defined above) Any of these may be used. Of these, those having a C-terminal amide (—C ⁇ NH 2 ) are preferred.
  • the RFRP partial peptide has a lipoxyl group (or lipoxylate) at a position other than the C-terminus, the one in which the carboxyl group is amidated or esterified is also included in the RFRP partial peptide referred to in the present invention. .
  • the ester in this case, for example, the above-mentioned C-terminal ester or the like is used.
  • the N-terminal amino acid residue (eg, methionine residue) is protected with a protecting group, but the N-terminal side is cleaved in vivo as in the case of RFRP.
  • Pyroglutamine oxidation of the generated glutamine residue those in which the substituent on the side chain of the amino acid in the molecule is protected by an appropriate protecting group, or complex peptides such as so-called glycopeptides to which sugar chains are bound Is also included.
  • these partial peptides are sometimes abbreviated as RFRP partial peptides.
  • the RFRP partial peptide is preferably a peptide having an RFamide, RSamide or RLamide structure, more preferably a peptide having an RFamide or RSamide structure, particularly preferably a peptide having RFamide.
  • RFamide structure means that the C-terminus of the peptide is Arginine (Arginine)
  • -Phenylalanine (NH) structure means -NH 2 structure
  • RS amide structure means that the C-terminal of peptide is Arginine (Arginine) -Serine (Serine) -NH 2 structure
  • the RLamide structure means that the C-terminus of the peptide is in arginine (arginine) -Leucine (leucine) -NH 2 structure.
  • RFRP partial peptides for example,
  • (ii) contains the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3; On the N-terminal side of the column, 1 to 100 amino acids are added, counting from the C-terminal of the first (Met) to 100th (Arg) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
  • Human RFRP-2 consisting of an amino acid sequence
  • (iii) contains the 127th (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, and has a sequence at the N-terminal side of the amino acid sequence. It consists of an amino acid sequence with 1 to 126 amino acids, counting from the C-terminal of the 1st (Met) to 126th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by No. 1 Human RFRP—3,
  • (V) contains the amino acid sequence from the 101st (Ser) to the 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5; An amino acid sequence consisting of the first (Met) to 100th (Arg) amino acid sequence represented by the amino acid sequence, which may have 1 to 100 amino acids added from the C-terminal, RFRP-2,
  • (vii) It contains the amino acid sequence from the 90th (Leu) to 94th (Phe) 'of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, and is represented by SEQ ID NO: 1 on the N-terminal side of the amino acid sequence.
  • a mouse RFRP consisting of an amino acid sequence that may have 1 to 89 amino acids added from the C-terminus of the 1st (Met) to 89th (Asn) amino acid sequence to be added 1,
  • SEQ ID NO: contains the amino acid sequence from the 90th (Leu) to the 94th (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22, and is represented by SEQ ID NO: 1 on the N-terminal side of the amino acid sequence.
  • Rat RFRP-1 consisting of an amino acid sequence that may have 1 to 89 amino acids counted from the C-terminal of the first (Met) to 89th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence
  • (X) contains the amino acid sequence from the 121st (Leu) to the 125th (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22, and is represented by SEQ ID NO: 1 on the N-terminal side of the amino acid sequence.
  • Rat RFRP-3 consisting of an amino acid sequence that may have 1 to 120 amino acids added from the C-terminus of the 1st (Met) to 120th (Ser) amino acid sequence
  • a human RFRP-1 comprising the amino acid sequence of positions 73 (Met) to 92nd (Phe), 81st (Met) to 92nd (Phe) or 84th (Ser) to 92nd (Phe),
  • (V) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 consisting of the 101st (Ser) to the 112th (Ser) amino acid sequence;
  • amides of these peptides are preferred.
  • the C-terminal of the peptide represented by the 81st (Met) to 92nd (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 was amidated (one C (NH 2 ) Peptide (SEQ ID NO: 13)
  • the C-terminal of the peptide represented by the amino acid sequence from the 101st (Ser) to the 112th (Ser) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is amidated.
  • the (-CONH 2 ) peptide (SEQ ID NO: 15) and the C-terminal of the peptide represented by the amino acid sequence at positions 124 (Val) to 131 (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 are amides.
  • Physiologically acceptable as a salt of RFRP or RFRP partial peptides with acids (eg, inorganic acids, organic acids) and bases (eg, alkali metal salts) are used, and physiologically acceptable acid addition salts are particularly preferred.
  • acids eg, inorganic acids, organic acids
  • bases eg, alkali metal salts
  • physiologically acceptable acid addition salts are particularly preferred.
  • examples of such salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid) Succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, and benzenesulfonic acid).
  • inorganic acids eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid
  • RFRP or a salt thereof or RFRP partial peptide or a salt thereof can be produced according to the method described in WO00Z29441, WO01Z661: 34 and the like.
  • the DNA encoding RFRP may be any DNA as long as it contains the above-described base sequence encoding RFRP. Further, it may be any of genomic DNA, genomic DNA library, cDNA derived from the above-described cells and tissues, cDNA library derived from the above-described cells and tissues, and synthetic DNA.
  • the vector used for the library may be any of bacteriophage, plasmid, cosmid, phagemid and the like. In addition, it can also be directly amplified by Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (hereinafter abbreviated as RT-PCR method) using a total RNA or mRNA fraction prepared from the cells and tissues described above.
  • RT-PCR method Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction
  • Examples of the DNA encoding RFRP include, for example, a DNA containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, or SEQ ID NO: 23 Hybridizes with the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 or SEQ ID NO: 23 under highly stringent conditions It has a base sequence and is substantially the same as RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22 Any DNA may be used as long as it encodes a polypeptide having activity.
  • DNA that can be hybridized below include, for example, about 70% or more of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, or SEQ ID NO: 23, respectively.
  • DNA containing a base sequence having a homology of about 80% or more, more preferably about 90% or more, and still more preferably about 95% or more is used.
  • Hybridization is performed according to a method known per se or a method analogous thereto, for example, a method described in Molecular Cloning 2nd (J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989). You can do it.
  • a commercially available library it can be performed according to the method described in the attached instruction manual. More preferably, it can be performed according to high stringency conditions.
  • High stringency conditions refer to, for example, a sodium concentration of about 19 to 40 mM, preferably about 19 to 2 OmM, and a temperature of about 50 to 70, preferably about 60 to 65.
  • a sodium concentration of about 19 to 40 mM, preferably about 19 to 2 OmM, and a temperature of about 50 to 70, preferably about 60 to 65.
  • the case where the sodium concentration is about 19 mM and the temperature is about 65 is most preferable.
  • DNA encoding human RF RP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 a DNA having the base sequence represented by SEQ ID NO: 2 or the like is used.
  • DNA encoding human RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 DNA comprising the base sequence represented by SEQ ID NO: 4 and the like are used.
  • DNA encoding the RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 a DNA consisting of the base sequence represented by SEQ ID NO: 6 and the like are used.
  • DNA encoding rat RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 includes SEQ ID NO: 8 DNA consisting of the base sequence represented by is used.
  • DNA encoding the mouse RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 a DNA having the base sequence represented by SEQ ID NO: 10 or the like is used.
  • DNA encoding rat RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22 DNA consisting of the base sequence represented by SEQ ID NO: 23 or the like is used.
  • the DNA encoding the RFRP partial peptide includes any of the above-described nucleotide sequences encoding the RFRP partial peptide: any DNA may be used. Further, it may be any of genomic DNA, genomic DNA library, cDNA derived from the cells and tissues described above, cDNA library derived from the cells and tissues described above, and synthetic DNA.
  • Examples of the DNA encoding the RFRP partial peptide include a DNA containing a base sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, or SEQ ID NO: 23.
  • a DNA having a partial base sequence of a DNA encoding a polypeptide having a similar activity can be used.
  • DNAs capable of hybridizing with the base sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 or SEQ ID NO: 23 have the same significance as described above.
  • DNA encoding the specific RFRP partial peptide described above is used as the DNA encoding the RFRP partial peptide.
  • the DNA encoding RFRP-1 is as follows: The nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 6 from the 172nd to the 276th, the 208th to the 276th, the 217th to the 217th A DNA consisting of the 276th base, the 241st to 276th or the 250th to 276th base sequence, (v) The DNA encoding the RFRP-2 comprising the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 is SEQ ID NO: DNA consisting of the nucleotide sequence at positions 301 to 336 of the nucleo
  • DNA encoding mouse RFRP-3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10: 352nd to 375th, 35th ⁇ th to 375th, and 358th to 375th of the base sequence represented by SEQ ID NO: 10. Th or 361st th
  • DNA encoding rat RFRP-11 consisting of the 94th (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) amino acid sequence includes: 172nd to 282nd, 214th to 282nd, 223rd to 282nd, 247th to 282nd or 250th to the base sequence represented by SEQ ID NO: 8 or 51, respectively DNA consisting of the 282nd base sequence,
  • the DNA encoding rat RFRP-3 consisting of the amino acid sequence from the 20th (Ser) to the 125th (Phe) or the 121st (Leu) to the 125th (Phe) is SEQ ID NO: 8 or DNA consisting of the nucleotide sequence from the 352nd to the 375th, the 355th to the 375th, the 358th to the 375th or the 361st to the 375th nucleotide sequence of the nucleotide sequence represented by 51 is used. It is.
  • Cloning of DNA that completely encodes RFRP or its partial peptide can be performed according to the method described in WO 00/29441, WO 01Z66134 and the like.
  • RFRP or its partial peptide When RFRP or its partial peptide is produced from DNA encoding RFRP or its partial peptide, it can be produced according to the method described in WO00Z29441, WO01Z66134 and the like.
  • RFRP or a partial peptide thereof, OT7T022 or a partial peptide thereof described below, and a DNA encoding the same may be labeled by a method known per se, specifically, isotope-labeled one, Fluorescent labels (for example, fluorescent labels with fluorescein or the like), biotinylated or enzyme-labeled ones, and the like can be used.
  • RFRP partial peptide or its amide or its ester or its salt As the receptor protein OT7T022 (hereinafter abbreviated as ⁇ 7 ⁇ 022), for example, an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 is used. The contained receptor protein is used.
  • ⁇ ⁇ 7 ⁇ 0 2 2 can be, for example, a mammal, such as a human, a guinea pig, a rat, a mouse, a heron, a bush, a sheep, a horse, a monkey, etc., and any cell (eg, a spleen cell, a nerve cell, a glial cell).
  • a mammal such as a human, a guinea pig, a rat, a mouse, a heron, a bush, a sheep, a horse, a monkey, etc.
  • any cell eg, a spleen cell, a nerve cell, a glial cell.
  • Cells kidney / 3 cells, bone marrow cells, mesangial cells, Langerhans cells, epidermal cells, epithelial cells, endothelial cells, fibroblasts, fiber cells, muscle cells, fat cells, immune cells (eg, macrophages, ⁇ cells, ⁇ Cells, natural killer cells, mast cells, neutrophils, basophils, eosinophils, monocytes), megakaryocytes, synovial cells, chondrocytes, bone cells, osteoblasts, osteoclasts, breast cells, Hepatocytes or stromal cells, or precursors of these cells, stem cells or cancer cells), blood cells, or any tissue where these cells are present, such as the brain, Each site (e.g., olfactory bulb, acrosomal nucleus, basal sphere, hippocampus, thalamus, hypothalamus, hypothalamus, cerebral cortex, medulla oblongata, cerebellum, occipital lobe
  • amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 is, for example, about 50% or more, preferably about 70% or more, the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11. More preferably, the amino acid sequence has about 80% or more, more preferably about 90% or more, and most preferably about 95% or more homology.
  • Examples of the protein having an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 include, for example, a protein having an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11; Preferred is a receptor protein having substantially the same activity as that of ⁇ 7 ⁇ 0 2 2 consisting of the amino acid sequence represented by No. 11; specifically, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 2 Represented by 7 And a receptor protein comprising an amino acid sequence.
  • Substantially the same activity includes, for example ,: ligand binding activity or signal signaling. Substantially the same indicates that their activities are the same in nature. Therefore, the activities such as the ligand binding activity or the signal transduction activity are equivalent (eg, about 0.01 to 100 times, preferably about 0.5 to 20 times, more preferably about 0.5 to 2 times). It is preferable that the quantitative factors such as the degree of activity and the molecular weight of the protein be different.
  • the measurement of the activity such as ligand binding activity or signal information transduction can be carried out according to a method known per se. For example, it can be measured according to a ligand determination method to be described later ⁇ screening method. .
  • OT7T022 includes (i) one or more or more amino acids in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 27 (preferably, about 1 to 30, More preferably about 1 to 10 amino acids, and still more preferably several (1 or 2) amino acids deleted, (ii) SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 27 An amino acid sequence obtained by adding one or more (preferably about 1 to 30, more preferably about 1 to 10, and more preferably several (1 or 2)) amino acids to the amino acid sequence represented.
  • OT 7 T 022 in the present specification has N at the left end according to the convention of peptide notation. The end (amino end) and the right end are the C end (carboxyl end).
  • ⁇ T 7 TO 22 including OT7T 022 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 has a C-terminal lipoxyl group (_C ⁇ H), carboxylate (—C ⁇ 0—), amide It may be either (—C ⁇ NH 2 ) or ester (_C ⁇ R).
  • R in the ester is, for example, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl or n-butyl.
  • Alkyl group for example, cyclo pentyl, C 3 _ 8 cycloalkyl group such as cyclohexyl, for example, phenyl, C 6 _ 12 Ariru groups such as ⁇ - naphthyl, for example, benzyl, or phenyl _Ci_ 2 alkyl group such as phenethyl ⁇ - naphthyl -0 such shed one naphthylmethyl, other C 7 _ i 4 Ararukiru group such _ 2 alkyl groups, such as Viva Roy Ruo carboxymethyl group which is generally used as an oral ester.
  • OT7T022 has a carboxyl group (or carboxylate) at a position other than the C-terminus
  • a compound in which a carbonyl group is amidated or esterified is also included in the scope of OT7T022.
  • the ester in this case, for example, the above-mentioned C-terminal ester and the like are used.
  • Amino group protecting groups Mechionin residues of N-terminal (e.g., formyl group, such as C 2 _ 6 Arukanoiru group such Asechiru CI- 6 Ashiru Group, etc.), N-terminal cleavage of the darminyl mill group generated in vivo by pyroglutamine oxidation, substituents on the side chains of amino acids in the molecule (eg, — ⁇ H, — SH, amino group, imidazole group, indole group, guanidino group, etc.) are protected by appropriate protecting groups (eg, formyl group, acetyl group such as C 2 _ 6 alkanoyl group, etc., etc.). Or a complex protein such as a so-called glycoprotein to which a sugar chain is bound.
  • N-terminal e.g., formyl group, such as C 2 _ 6 Arukanoiru group such Asechiru CI- 6 Ashiru Group, etc.
  • ⁇ T 7 TO 22 include, for example, rat OT7T 022 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, human ⁇ T7T022 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: A mouse comprising the amino acid sequence represented by 27 ⁇ 7 TO 22 and the like are used.
  • the partial peptide of OT7T022 may be any peptide as long as it is the partial peptide of ⁇ T7TO22 described above.For example, in the site of OT7T022 protein molecule that is exposed outside the cell membrane, Those having a receptor-binding activity are used.
  • the extracellular region Is a peptide containing a portion that was analyzed to be
  • a peptide partially containing a hydrophobic (Hydrophobic) site can be used.
  • a peptide containing individual domains may be used, but a peptide containing a plurality of domains at the same time may be used.
  • the number of amino acids in the partial peptide of OT7T022 is preferably a peptide having an amino acid sequence of at least 20 or more, preferably 50 or more, more preferably 100 or more of the constituent amino acid sequences of OT7T022.
  • the partial peptide of OT7T022 has one or more (preferably about 1 to 10, more preferably several (1 or 2)) amino acids in the amino acid sequence, or One or more (preferably about 1 to 20, more preferably about 1 to 10, and more preferably several (1 or 2)) amino acids added to the amino acid sequence; or One or more (preferably about 1 to 10, more preferably several (1 or 2)) amino acids in the amino acid sequence may be substituted with another amino acid.
  • the partial peptide of OT7T022 has a carboxyl group (or carboxylate) other than the C-terminus
  • those in which the carboxyl group is amidated or esterified are also included in the scope of OT7T022.
  • the ester in this case, for example, the above-mentioned C-terminal ester and the like are used.
  • the partial peptides of OT7T022 include, as in OT7T022 described above, those in which the amino group of the N-terminal methionine residue is protected with a protecting group, Glutamine residue generated by cleavage at the end in vivo is pyroglutamine-oxidized, and the substituent on the side chain of the amino acid in the molecule is protected by an appropriate protecting group, or a sugar chain is bonded.
  • Complex peptides such as glycopeptides are also included.
  • a physiologically acceptable acid addition salt is particularly preferable.
  • examples of such salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid) , Tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid).
  • inorganic acids eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid
  • organic acids eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid
  • Tartaric acid citric acid, malic acid, oxalic acid
  • benzoic acid methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid
  • OT7T022 or a salt thereof, and a cell expressing OT7T022 or a cell membrane fraction thereof can be produced according to the method described in WOO 0/29441, WOO 1Z66134 and the like.
  • the polynucleotide encoding OT7T022 may be any polynucleotide containing a nucleotide sequence (DNA or RNA, preferably DNA) encoding OT7T022.
  • the polynucleotide is a DNA encoding OT7T022, RNA such as mRNA, and may be double-stranded or single-stranded. In the case of double-stranded, double-stranded DNA, double-stranded RNA or DNA: RNA hybrid may be used. In the case of a single strand, it may be a sense strand (that is, a coding strand) or an antisense strand (that is, a non-coding strand).
  • the mRNA of OT7T022 is quantified by the method described in the well-known extraordinary experimental medicine “New PCR and Its Applications” 15 (7), 1997 or a method analogous thereto. be able to.
  • the DNA encoding OT7T022 may be any of genomic DNA, genomic DNA library, cDNA derived from the above-described cells and tissues, cDNA library derived from the above-described cells and tissues, and synthetic DNA.
  • the vector used for the library may be any of bacteriophage, plasmid, cosmid, phagemid and the like.
  • the DNA encoding OT7TO22 includes, for example, a DNA containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 or SEQ ID NO: 28 Or a nucleotide sequence that hybridizes with the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 or SEQ ID NO: 28 under eight stringent conditions.
  • DN ⁇ encoding a receptor protein having substantially the same activity as OT7 ⁇ 022 (eg, ligand binding activity, signal transduction activity, etc.) consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 27. Any one may be used.
  • DNA that can hybridize with the base sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 or SEQ ID NO: 28 include, for example, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 or sequence DNA containing a base sequence having a homology of about 70% or more, preferably about 80% or more, more preferably about 90% or more, and most preferably about 95% or more with the base sequence represented by No. 28 Is used.
  • Hybridization can be performed according to a method known per se or a method analogous thereto, for example, a method described in Molecular Cloning (Molecular Cloning) 2nd (J. Sambrooketa, Cold Spring Harbor Lab. "Press, 1989).
  • a commercially available library it can be carried out according to the method described in the attached instruction manual, and more preferably, under high stringent conditions.
  • the high stringent conditions include, for example, a sodium concentration of about 19 to 4 OmM, preferably about 19 to 2 OmM, a temperature of about 50 to 70, and preferably about 60 to 65: Show. In particular, a sodium concentration of about 19 mM and a temperature of about 65 are most preferred.
  • DNA encoding rat T7TO22 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11
  • a DNA consisting of the base sequence represented by SEQ ID NO: 12 or the like is used.
  • DNA encoding human OT7T022 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 24
  • DNA comprising the base sequence represented by SEQ ID NO: 25 or SEQ ID NO: 26 and the like are used.
  • DNA encoding mouse OT7T022 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 DNA consisting of the base sequence represented by SEQ ID NO: 28 or the like is used.
  • any DNA may be used as long as it contains the base sequence encoding the partial peptide of OT7T022 described above.
  • it may be any of genomic DNA, genomic DNA library, the above-described cDNA derived from cells and tissues, the above-described cDNA library derived from cells and tissues, and synthetic DNA.
  • the vector used for the library may be any of bacteriophage, plasmid, cosmid, phagemid and the like. Alternatively, it can be directly amplified by reverse transcriptase polymerase chain reaction (hereinafter abbreviated as RT-PCR method) using the mRNA fraction prepared from the cells and tissues described above.
  • RT-PCR method reverse transcriptase polymerase chain reaction
  • the DNA encoding the partial peptide of OT7T022 includes, for example, (1) a DNA having a base sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 or SEQ ID NO: 28 DNA having a partial base sequence, or '(2) a base that hybridizes with the base sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 or SEQ ID NO: 28 under high stringent conditions It has a sequence and has substantially the same activity as ⁇ T 7 T022 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 27 (eg, ligand binding activity or signal transduction activity) Etc.)
  • a DNA having a partial nucleotide sequence of the DNA encoding the probe protein may be used.
  • Hybridization methods and conditions are the same as described above.
  • ⁇ T7TO22 or a partial peptide thereof is produced from DNA encoding OT7T022 or a partial peptide thereof, it can be carried out according to the method described in WOO / 29441, WO01 / 66134 or the like.
  • Antibodies against RFRP, its partial peptide, or its amide or its ester or its salt can be produced and used according to a method known per se, for example, the method described in WO 0029441, WOO 1Z66134, or the like. Wear.
  • An antibody against OT7T022, its partial peptide or a salt thereof can be produced and used according to a method known per se, for example, a method described in WO00 / 29441, WO01 / 66134 or the like.
  • a part of the base sequence of the DNA encoding RFRP or OT7T022 or a polynucleotide containing a part of the base sequence complementary to the DNA refers to the partial peptide of RFRP or OT7T022 described above. Not only does it include DNA encoding, but also RNA.
  • an antisense polynucleotide capable of inhibiting the replication or expression of the RFRP gene or OT7T022 gene is cloned or determined, and DNA encoding RFRP or OT7T022 is determined.
  • Such a polynucleotide can hybridize with the RNA of the RFRP gene or the OT7T022 gene and can inhibit the synthesis or function of the RNA, or can be an RFRP-related RNA or OT7T022-related
  • the expression of the RFRP gene or the ⁇ T7T022 gene can be regulated and controlled through the interaction with RNA.
  • Polynucleotides that are complementary to a selected sequence of RFRP-related RNA or OT7T022-related RNA, and polynucleotides that can specifically hybridize to RFRP-related RNA or QT7T022-related RNA, are in vivo and in vivo. Outside RFRP gene or OT 7 T022 It is useful for regulating and controlling gene expression, and is also useful for treating or diagnosing diseases.
  • the term "corresponding" means having homology or being complementary to a particular sequence of nucleotides, base sequences or nucleic acids, including genes.
  • “Corresponding” between a nucleotide, base sequence or nucleic acid and a peptide (protein) usually refers to the amino acid of the peptide (protein) specified in the directive derived from the nucleotide (nucleic acid) sequence or its complement.
  • I have. 5 'end hairpin loop, 5' end 6—base pair 'repeat, 5' end untranslated region, polypeptide translation start codon, '.
  • the 3 'end palindrome region and the 3' end avid loop may be selected as preferred regions of interest, but any region within the RFRP gene or OT7T022 gene may be selected as the region of interest.
  • Antisense polynucleotides include polydexoxy liponucleotides containing 2-dexoxy D-ribose, polyribonucleotides containing D-ribose, and N-glycosides of purine or pyrimidine bases.
  • Type of polynucleotide or other polymer with a non-nucleotide backbone eg, commercially available protein nucleic acids and synthetic sequence-specific nucleic acid polymers
  • polymers containing special bonds where the polymer is DNA And base pairing as found in RNA (contains nucleotides having a configuration that allows base attachment)).
  • RNA hybrids can be double-stranded DNA, single-stranded DNA, double-stranded RNA, single-stranded RNA, and even DNA: RNA hybrids, and can also be unmodified polynucleotides (or unmodified oligonucleotides), or With known modifications, e.g., labeled, capped, methylated, substituted by one or more natural nucleotides with analogs, known in the art, intramolecular Nucleotide-modified, such as those having uncharged bonds (eg, methylphosphonates, phosphotriesters, phosphoramidates, sorbamates, etc.), charged or sulfur-containing bonds (eg, phosphoro Chooate, phospho Mouth, such as proteins (nucleases, nucleases, inhibitors, toxins, antibodies, signal peptides, poly-L-lysine, etc.) and sugars (eg, monosaccharides) Those having a chain group, those having an
  • nucleoside not only contain purine and pyrimidine bases, but may also include those having other modified heterocyclic bases. Such modifications may include methylated purines and pyrimidines, acylated purines and pyrimidines, or other heterocycles. Modified nucleotides and modified nucleotides may also be modified at the sugar moiety, e.g., where one or more hydroxyl groups have been replaced with a halogen, an aliphatic group, or the like, or a functional group such as an ether, an amine, etc. It may be converted.
  • the antisense polynucleotide (nucleic acid) of the present invention is RNA, DNA, or a modified nucleic acid (RNA, DNA).
  • modified nucleic acids include sulfur derivatives of nucleic acids, thiophosphate derivatives, and polynucleoside amides: those that are resistant to degradation of nucleoside amides, but are not limited thereto. Absent.
  • the antisense nucleic acid of the present invention can be preferably designed according to the following policy. That is, to make the antisense nucleic acid more stable in the cell, to make the antisense nucleic acid more cell permeable, to have a greater affinity for the target sense strand, and to be more toxic if it is toxic. Minimize the toxicity of sense nucleic acids.
  • the antisense nucleic acids of the present invention may have altered or modified sugars, bases, It may contain a linkage and may be provided in a special form such as ribosomes, microspheres, applied by gene therapy, or provided in an added form.
  • polycations such as polylysine, which acts to neutralize the charge of the phosphate skeleton
  • lipids which increase the interaction with the cell membrane or increase the uptake of nucleic acids ( For example, phospholipids, cholesterol, etc.).
  • Preferred lipids for addition include cholesterol and its derivatives (eg, cholesteryl chromate formate, cholic acid, etc.).
  • nucleic acid can be attached to the 3 'end or 5' end of the nucleic acid, and can be attached via a base, sugar, or intramolecular nucleoside bond.
  • Other groups include cap groups specifically arranged at the 3 'end or 5' end of a nucleic acid for preventing degradation by nucleases such as exonuclease and RNase.
  • capping groups include, but are not limited to, hydroxyl-protecting groups known in the art, including glycols such as polyethylene glycol and tetraethylene glycol.
  • the antisense nucleic acid inhibitory activity can be examined using the transformant of the present invention, the in vivo or in vitro gene expression system of the present invention, or the in vivo or in vitro translation system of a G protein-coupled receptor protein. it can.
  • the nucleic acid can be applied to cells by various methods known per se.
  • the siRNA for a polynucleotide encoding RFRP or OT7T022 is a double-stranded RNA containing a portion of the RNA encoding RFRP or OT7TO22 and its complementary RNA.
  • the siRNA can be designed and produced based on the sequence of the polynucleotide of the present invention according to a known method (eg, Nature, 411, 494, 2001).
  • a ribozyme containing a part of RNA encoding RFRP or ⁇ T 7 TO 22 can be prepared according to a known method (eg, TRENDS in Molecular Medicine, Vol. 7, pp. 221, 2001). It can be designed and manufactured based on the nucleotide sequence. For example, it can be produced by replacing a part of the sequence of a known lipozyme with a part of RNA encoding RFRP or OT7T022. You. As a part of the RNA encoding RFRP or OT7T022, a sequence near a consensus sequence NUX (where N indicates all bases and X indicates a base other than G) which can be cleaved by a known ribozyme, etc. Is mentioned.
  • RFRP has the action of promoting Teng glucagon secretion, increasing blood sugar, promoting urine production, and promoting memory erasure (the ability to promote elimination of unpleasant memory)
  • RFRP RFRP, its partial peptide, or Amide or its ester or salt thereof
  • DNA encoding RFRP DNA encoding RFRP
  • antibody against RFRP antibody against RFRP
  • antisense DNA against DNA encoding RFRP V
  • the partial peptide or its salt abbreviated as ⁇ 7 ⁇ 022
  • DNA encoding ⁇ 7 ⁇ 022 (vii) an antibody against OT7T022, and (viii) antisense DNA against OT7T022 encoding DNA are as follows: Application.
  • a) RFRP, b) DNA encoding RFRP, c) OT7T022 or d) DNA encoding OT7T022 used as a medicament for the prevention and treatment of diseases associated with RFRP or ⁇ T7T022 dysfunction. can do.
  • the amount of RFRP or OT7T022 in the patient's body is increased, for example, by transplanting the cells into the patient. , RFR ⁇ or 0 ⁇ 7 ⁇ 022.
  • DNA encoding RFRP or DNA encoding OT7T022 is useful as a safe and low-toxic agent for preventing and / or treating diseases associated with dysfunction of RFRP or OT7TO22.
  • DNA encoding a) RFRP, b) DNA encoding RFRP, c) OT7TO22 or d) OT7T022 is, for example, a Teng-glucagon secretagogue, a hyperglycemic agent, urine production.
  • Stimulant amnesic stimulant (enhancement of bad memory) or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity, cancer, etc.
  • RFRP or OT7T022 When RFRP or OT7T022 is used as the above-mentioned prophylactic / therapeutic agent, it can be formulated according to conventional means.
  • DNA encoding RFRP or DNA encoding OT7T022 when used as the above-mentioned prophylactic / therapeutic agent, these DNAs may be used alone or in retrovirus vector, adenovirus vector, adenovirus associated virus. After insertion into a suitable vector, such as a vector, it can be carried out in a conventional manner. DNA can be administered neat or with supplements to promote uptake, such as through gene guns or catheters such as Hyde-mouth gel catheters.
  • a) RFRP, b) RFRP-encoding DNA, c) OT7T022 or d) OT7T022-encoding DNA may be orally administered as sugar-coated tablets, capsules, elixirs, microcapsules, etc., if necessary. It can be used parenterally, in the form of an injection, such as a sterile solution with water or other pharmaceutically acceptable liquid, or a suspension.
  • a) RFRP, b) DNA encoding RFRP, c) OT7T022 or d) DNA encoding OT7TO22 can be obtained from known physiologically acceptable carriers, flavoring agents, excipients, bases, etc. It can be manufactured by mixing with vehicles, preservatives, stabilizers, binders, etc. in the generally accepted unit dosage form required for the practice of the drug product. This is to ensure that capacity is obtained.
  • Additives that can be incorporated into tablets, capsules, etc. include, for example, gelatin, binders such as corn starch, tragacanth, gum arabic, crystalline Excipients such as cellulose, swelling agents such as corn starch, gelatin, alginic acid, lubricants such as magnesium stearate, sweeteners such as sucrose, lactose or saccharin, peppermint, coconut oil or cherry Suitable flavoring agents are used.
  • a liquid carrier such as oils and fats can be further contained in the above-mentioned evening material.
  • Sterile compositions for injection can be formulated according to standard pharmaceutical practice, such as dissolving or suspending the active substance in a vehicle such as water for injection, or naturally occurring vegetable oils such as sesame oil or coconut oil.
  • aqueous liquids for injection include physiological saline, isotonic solutions containing glucose and other adjuvants (eg, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride, etc.), and suitable solubilizing agents.
  • alcohols e.g., ethanol
  • polyalcohol e.g., propylene grayed recall, polyethylene glycol
  • nonionic surfactant eg, Porisoru base one preparative 8 0 TM, HCO-5 0
  • oily liquid for example, sesame oil, soybean oil and the like are used, and may be used in combination with a solubilizing agent such as benzyl benzoate or benzyl alcohol.
  • prophylactic / therapeutic agent examples include a buffer (eg, a phosphate buffer and a sodium acetate buffer), a soothing agent (eg, benzalkonium chloride, pro-proin hydrochloride, etc.), a stabilizer (eg, It may be combined with human serum albumin, polyethylene glycol, etc.), preservatives (eg, benzyl alcohol, phenol, etc.), antioxidants and the like.
  • a buffer eg, a phosphate buffer and a sodium acetate buffer
  • a soothing agent eg, benzalkonium chloride, pro-proin hydrochloride, etc.
  • a stabilizer eg, It may be combined with human serum albumin, polyethylene glycol, etc.
  • preservatives eg, benzyl alcohol, phenol, etc.
  • the preparations obtained in this way are safe and low toxic, so they can be used, for example, in human mammals (eg, rats, mice, puppies, sheep, bush, puppies, cats, dogs, monkeys, etc.). Can be administered.
  • human mammals eg, rats, mice, puppies, sheep, bush, puppies, cats, dogs, monkeys, etc.
  • the dose of RFRP varies depending on the administration target, target organ, symptoms, administration method, and the like. However, in the case of oral administration, for example, in obese patients (assuming a body weight of 6 O kg), about 0 The amount is from 1 to 100 mg, preferably from about 1.0 to 50 mg, and more preferably from about 1.0 to 20 mg. In the case of parenteral administration, the single dose varies depending on the administration target, target organ, symptoms, administration method, etc.
  • an injection for example, in the form of an injection, for example, in an obese patient (with a body weight of 60 kg), about 0.01 to 3 Omg per day, preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably about 0.1 to 20 mg per day It is convenient to administer about 0.1 to 1 Omg by intravenous injection. For other animals, the equivalent dose per 60 kg body weight can be administered.
  • the dose of DNA varies depending on the administration target, target organ, symptoms, administration method, and the like.
  • oral administration for example, in obese patients (assuming 6 kg of body weight), about 0.1 ⁇ : L 0 Omg, preferably about 1.0-5 Omg, more preferably about 1.0-20 mg.
  • parenteral administration the single dose varies depending on the administration subject, target organ, symptoms, administration method, and the like.
  • the dose can be administered in terms of weight per 60 kg.
  • the DNA encoding RFRP, the DNA encoding OT7T022, or the antisense DNA against these DNAs can be used as a probe to produce human or mammal (eg, rat, mouse, egret, sheep, pig, pig). DNA or mRNA abnormalities (genetic abnormalities) that encode RFRP or ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ T7T022 in cats, cats, dogs, monkeys, etc.). It is useful as a gene diagnostic agent for mutation or decreased expression, increase of the DNA or mRNA or overexpression.
  • the above-described genetic diagnosis using DNA or antisense DNA can be performed, for example, by the known Northern hybridization or PCR-SSCP method (Genomics, Vol. 5, pp. 874-879 (1989)). The Proceedings of the National Academy of Sciences of the United Academy of Sciences of the United States States of America), Vol. 86, pp. 2766-2770 (1989)).
  • RFRP or 0T7T022 when the expression of RFRP or 0T7T022 is detected to be reduced by Northern hybridization, it is likely that the disease is associated with a dysfunction of RFRP or ⁇ T7T022, or It can be diagnosed that the possibility of future disease is high.
  • Northern hybridization detects overexpression of RFRP or ⁇ 702 ⁇ 22, then it is likely or future that the disease is associated with overexpression of RFR ⁇ or ⁇ 702 ⁇ 022. It can be diagnosed as having a high likelihood of being affected.
  • Diseases associated with RFRP or ⁇ 7 ⁇ 022 dysfunction include, for example, obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy , Insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity, cancer and the like.
  • Diseases associated with overexpression of RFRP or ⁇ 7 ⁇ ⁇ 022 include, for example, diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturia, hyperlipidemia Sexual dysfunction, skin diseases, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic diseases, indigestion, memory and learning disorders.
  • DNA encoding RFRP or OT7TO22 as a probe, it can be used for screening a compound or a salt thereof that changes the expression level of RFRP or OT7T022.
  • the present invention relates to, for example, RFRP contained in (a) a) blood of a non-human mammal, b) a specific organ, c) a tissue or cell isolated from an organ, or (ii) a transformant,
  • RFRP contained in (a) a) blood of a non-human mammal, b) a specific organ, c) a tissue or cell isolated from an organ, or (ii) a transformant
  • a method for screening a compound or a salt thereof that changes the expression level of RFRP or OT7TO22 by measuring the amount of mRN of T7T022.
  • the measurement of the amount of mRNA of RFRP or OT7T022 is specifically performed as follows.
  • RFRP or OT7T022 mRNA contained in the obtained cells can be quantified, for example, by extracting mRNA from cells or the like by a usual method and using, for example, a technique such as TaqMan PCR, which is known per se.
  • the analysis can also be performed by performing Northern blotting by a means.
  • a transformant expressing RFRP or OT7T022 is prepared according to the method described in WO 00/29441 or WOO 1 No. 66134, and the mRNA of RFRP or OT7TO22 contained in the transformant is similarly prepared. It can be quantified and analyzed.
  • a certain time before giving a drug or physical stress to a normal or disease model non-human mammal (30 minutes to 24 hours, preferably 30 minutes to 12 hours, more preferably 1 hour Before to 6 hours before) or after a certain time (after 30 minutes to 3 days, preferably after 1 hour to 2 days, more preferably after 1 hour to 24 hours), or at the same time as the drug or physical stress.
  • the mRNA of RFRP or OT7T022 contained in the cells is administered.
  • test compound When culturing the transformant according to a conventional method, the test compound is mixed into the medium, and after culturing for a certain period of time (after 1 day to 7 days, preferably After 1 day to 3 days, more preferable 2 to 3 days later), by quantifying and analyzing the amount of RFRP or OT7T022 mRNA contained in the transformant.
  • Test compounds include, for example, peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, and plasma.These compounds are novel compounds. Or a known compound.
  • the test compound may form a salt, and a salt with a physiologically acceptable acid (eg, an inorganic acid) or a base (eg, an organic acid) is used as the salt of the test compound.
  • physiologically acceptable acid addition salts include salts with inorganic acids (for example, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.), and organic acids (for example, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, Acid, succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.).
  • inorganic acids for example, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.
  • organic acids for example, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, Acid, succinic acid, tartaric acid, cit
  • the compound obtained by using the screening method of the present invention is a compound having an action of changing the expression level of RFRP or OT7T022. Specifically, (a) increasing the expression level of RFRP or OT7T022
  • cell stimulating activity through ⁇ T 7 ⁇ 022 eg, arachidonic acid release, acetylcholine release, intracellular Ca 2+ release, intracellular cAMP generation, intracellular cGMP generation, inositol phosphate production, cell membrane potential fluctuation, Compounds that enhance intracellular protein phosphorylation, activation of c-fos, and activities that promote or suppress PH reduction, especially the activity of inhibiting intracellular cAMP production).
  • Mouth Reduce the expression of RFRP A compound that attenuates the cell stimulating activity by reducing it.
  • Examples of the compound include peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, and fermentation products. These compounds may be novel compounds or known compounds.
  • a salt with a physiologically acceptable acid eg, an inorganic acid, etc.
  • a base eg, an organic acid, etc.
  • a physiologically acceptable acid addition salt is particularly preferable.
  • Such salts include, for example, salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, Salts with propionic acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc. are used.
  • Compounds or salts thereof that increase the expression level of RFRP or OT7TO22 obtained by the above screening method include, for example, Teng-glucagon secretion enhancer, blood glucose increasing agent, urine production enhancer, memory erasure enhancer ( Elimination enhancer) or hypertrophy, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, artery It can be used as a prophylactic or therapeutic agent for sclerosis, thrombotic diseases, lipotoxicity, cancer, etc.
  • Compounds or salts thereof that reduce the expression level of RFRP or OT7TO22 obtained by the above screening method include, for example, ⁇ glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory decrease inhibitor) Drug) or diabetes, glucose intolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic diseases, dyspepsia, memory and learning disorders. Diabetes includes insulin-dependent (type I) diabetes and non-insulin-dependent (type II) diabetes.
  • a compound or a salt thereof obtained by using the screening method of the present invention is used as a pharmaceutical composition, it can be formulated according to a conventional method. Specifically, it can be produced in the same manner as the above-mentioned prophylactic / therapeutic agent containing RFRP.
  • the resulting formulation is safe and low toxic, it can be administered, for example, to humans and mammals (eg, rats, mice, egrets, higgs, bushus, horses, cats, dogs, monkeys, etc.) ⁇ : Can be
  • the dose of the compound or a salt thereof varies depending on the administration subject, the target organ, the condition, the administration method, and the like.
  • About 0.1 to 10 Omg preferably about 1. 0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 20 mg.
  • a compound or a salt thereof that increases the expression level of RFRP or OT7T022 per day is about 0.01 to 3 Omg, preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably about 0.1 to 20 mg. It is convenient to administer about 0.1 to 1 Omg by intravenous injection. In the case of other animals, the dose can be administered in terms of weight per 60 kg.
  • antibodies against RFRP or OT7T022 (hereinafter abbreviated as the antibodies of the present invention) large? Alternatively, since it can specifically recognize 0,07,022, it can be used for detecting or neutralizing RFRP or OT7TO22 in a test solution.
  • a method for quantifying RFRP or OT 7 T 022 in a test solution characterized by comprising:
  • the present invention provides a method for quantifying RFRP or OT7T022 in a test solution, characterized in that:
  • one antibody is an antibody that recognizes the N-terminal of RFRP or OT7TO22, and the other antibody reacts with the C-terminal of RFRP or OT7T022. It is desirable that
  • RFRP or OT7TO22 can be quantified using a monoclonal antibody against RFRP or OT7TO22 (hereinafter, the monoclonal antibody of the present invention), and can also be detected by tissue staining or the like.
  • the antibody molecule itself may be used, and the F (ab ') 2 , Fab ′ or the Fab fraction may be used.
  • the method for quantifying RFRP or OT7T022 using the antibody of the present invention is not particularly limited, and may be an antibody, an antigen or an antibody corresponding to the amount of antigen in the test solution (eg, the amount of RFRP or ⁇ T7T022).
  • Any method that detects the amount of the antigen complex by chemical or physical means and calculates it from a standard curve prepared using a standard solution containing a known amount of antigen can be used.
  • nephrometry, a competitive method, an immunometric method and a San German method are preferably used, but in terms of sensitivity and specificity, it is particularly preferable to use a sandwich method described later.
  • a labeling agent used in a measurement method using a labeling substance for example, a radioisotope, an enzyme, a fluorescent substance, a luminescent substance and the like are used.
  • the radioisotope for example, [ 125 I], [ 131 I], [ 3 H], [ 14 C] and the like are used.
  • the enzyme a stable enzyme having a large specific activity is preferable.
  • the fluorescent substance for example, fluorescamine, fluorescein isothiosinate and the like are used.
  • the luminescent substance for example, luminol, a luminol derivative, luciferin, lucigenin and the like are used.
  • a biotin-avidin system can be used for binding the antibody or antigen to the labeling agent.
  • the carrier include insoluble polysaccharides such as agarose, dextran, and cellulose; synthetic resins such as polystyrene, polyacrylamide, and silicon; and glass.
  • the test solution is reacted with the insolubilized monoclonal antibody of the present invention (primary reaction), and further reacted with another labeled monoclonal antibody of the present invention (secondary reaction).
  • primary reaction By measuring the activity of the labeling agent, the amount of RFRP in the test solution can be quantified.
  • the primary reaction and the secondary reaction may be performed in the reverse order, or simultaneously, or at different times. Is also good.
  • the labeling agent and the method of insolubilization can be in accordance with those described above.
  • the antibody used for the solid phase antibody or the labeling antibody is not necessarily one type, and a mixture of two or more types of antibodies is used for the purpose of improving the measurement sensitivity and the like. May be used.
  • the monoclonal antibody of the present invention used in the primary reaction and the secondary reaction is preferably an antibody having a different binding site between RFRP or OT7T022. It is required. That is, the antibody used in the primary reaction and the secondary reaction is, for example, when the antibody used in the secondary reaction recognizes the C-terminal of RFRP or OT7T022, the antibody used in the primary reaction is preferably C An antibody that recognizes other than the end, for example, the N-end, is used.
  • the monoclonal antibody of the present invention can be used in a measurement system other than the sandwich method, for example, a competition method, an immunometric method, or a nephrometry method.
  • the competition method after the antigen in the test wave and the labeled antigen are allowed to react competitively with the antibody, the unreacted labeled antigen (F) is separated from the labeled antigen (B) bound to the antibody ( BZF separation), the amount of B or F label is measured, and the amount of antigen in the test solution is quantified.
  • a soluble phase is used as the antibody
  • B / F separation is carried out using polyethylene glycol
  • a liquid phase method using a second antibody against the above antibody or a solid phase antibody is used as the first antibody
  • An immobilization method using a soluble antibody as the first antibody and an immobilized antibody as the second antibody is used.
  • the antigen in the test wave and the immobilized antigen are subjected to a competitive reaction with a certain amount of labeled antibody, and then the solid phase and the liquid phase are separated.
  • the excess amount of the labeled antibody is allowed to react, and then the immobilized antigen is added to bind the unreacted labeled antibody to the solid phase, and then the solid phase and the liquid phase are separated.
  • the amount of the label in either phase is measured to determine the amount of the antigen in the test wave.
  • the amount of insoluble sediment produced as a result of the antigen-antibody reaction in a gel or in a solution is measured.
  • Laser nephrometry using laser scattering even when the amount of antigen in the test wave is small and only a small amount of sediment is obtained Li is preferably used.
  • RFRP or ⁇ T7T022 can be quantified with high sensitivity by using the antibody of the present invention.
  • a decrease in the concentration of RFRP or OT7T022 is detected by quantifying the concentration of RFRP or OT7T022 using the antibody of the present invention, for example, obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, It is a disease such as hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity, cancer, or It can be diagnosed that it is likely to be affected in the future.
  • an increase in the concentration of RFRP or OT7T022 is detected, for example, diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturia, Hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin It can be diagnosed as a disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, dyspepsia, memory learning disorder, or a high likelihood of suffering in the future.
  • an RF scale By using OT 7 TO 22 or constructing an expression system for recombinant ⁇ T 7 TO 22 and using a receptor-binding assay system using the expression system, an RF scale can be obtained. (Eg, peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, fermentation products, etc.) or a salt thereof can be efficiently screened.
  • Such compounds include (ii) cell stimulating activity via OT 7 TO 22 (eg, arachidonic acid release, acetylcholine release, intracellular Ca 2+ release, intracellular cAMP production, intracellular cGMP production, inositol Compounds that have an activity to promote or inhibit phosphoric acid production, cell membrane potential fluctuations, phosphorylation of intracellular proteins, activation of c-fos, reduction of pH, etc.
  • cell stimulating activity via OT 7 TO 22 eg, arachidonic acid release, acetylcholine release, intracellular Ca 2+ release, intracellular cAMP production, intracellular cGMP production, inositol Compounds that have an activity to promote or inhibit phosphoric acid production, cell membrane potential fluctuations, phosphorylation of intracellular proteins, activation of c-fos, reduction of pH, etc.
  • OT7T022 agonist So-called OT7T022 agonist
  • mouth a compound that inhibits OT7T022-mediated cell stimulating activity
  • OT7T022 angiogonist a compound that enhances the binding force between RFRP and OT7T022, Or (2) a compound that reduces the binding strength between RFRP and OT7T022. That is, the present invention
  • a method of screening for a glucagon secretion regulator, a blood glucose regulator, a urine production regulator, a memory erasure promoter or a memory learning decrease inhibitor characterized by using RFRP and / or OT 7 T022;
  • the Teng-glucagon secretion regulator, blood sugar regulator, urine formation regulator, memory erasure enhancer or memory learning decrease inhibitor is a compound or a salt thereof that alters the binding or signal transmission between RFRP and OT7T022. is there.
  • the screening method of the present invention is characterized in that, in the cases (i) and (ii), for example, the amount of RFRP bound to OT7T022, the cell stimulating activity and the like are measured and compared.
  • the present invention provides
  • a) The amount of labeled RFRP bound to OT7T022 is measured and compared when the labeled RFRP is brought into contact with OT7T022 and when the labeled RFRP and the test compound are brought into contact with OT7T022.
  • RFRP activating compounds eg, RFRP
  • OT7T022-containing cells RFRP activating compounds and test compounds are contacted with ⁇ T7 ⁇ 022-containing cells.
  • ⁇ 7 TO 22-mediated cell stimulating activity is measured and compared, wherein the ⁇ glucagon secretion regulator, a blood glucose regulator, a urine production regulator, a memory eraser or a memory learning A method for screening a reduction inhibitor, and e)
  • RFRP activating compounds and test compounds are contacted with ⁇ T7 ⁇ 022-containing cells.
  • ⁇ 7 TO 22-mediated cell stimulating activity is measured and compared, wherein the ⁇ glucagon secretion regulator, a blood glucose regulator, a urine production regulator, a memory eraser or a memory learning A method for screening a reduction inhibitor, and e)
  • RFRP activating compounds for example, RFRP
  • RFRP activating compounds and test compounds are contacted with ⁇ T7 ⁇ 022-containing cells.
  • a compound or a salt thereof for example, a low-molecular-weight synthetic compound, preferably a low-molecular-weight synthetic agonist
  • RFRP radio frequency fingerprinting
  • the compound or a salt thereof that alters the binding property between RFRP and OT7T022 can be obtained by performing the screening method of the present invention using RFRP.A specific description of the screening method of the present invention will be given below. I do.
  • OT7TO22 used in the screening method of the present invention, a cell membrane fraction of a mammalian organ containing ⁇ T7 ⁇ 022 is suitable.
  • human-derived ⁇ 7TO22 expressed in large amounts using recombinants is suitable for screening. .
  • OT7T022 To produce OT7T022, the method described in WO00Z29441 or WO00 / 66134 is used, but it is preferably carried out by expressing DNA encoding OT7T022 in mammalian cells or insect cells.
  • Complementary DNA is used for the DNA fragment encoding the target protein portion, but is not necessarily limited to this.
  • a gene fragment or a synthetic DNA may be used.
  • the DNA fragment In order to introduce the DNA fragment encoding OT7T022 into host animal cells and express them efficiently, the DNA fragment must be expressed in a nuclear polyhedrosis virus (NCR) belonging to a baculovirus using an insect as a host.
  • NCR nuclear polyhedrosis virus
  • .PV polyhedrin promoter
  • SV40-derived promoter SV40-derived promoter
  • retrovirus promoter meta-oral thionein promoter
  • human heat shock It is preferable to incorporate it downstream of a promoter, cytomegalovirus promoter, SR promoter and the like.
  • Examination of the amount and quality of the expressed receptor can be carried out by a method known per se. For example, the method can be performed according to the method described in the literature [; Nambi, P. et al., The Journal of Biological Chemistry (J. Biol. Chem.), 267, 19555-1959, 1992]. Can be.
  • OT7T022-containing cells may be ⁇ T7TO22 purified according to a method known per se, or cells containing ⁇ T7T022 may be used. Alternatively, a membrane fraction of cells containing ⁇ 7 ⁇ 022 may be used.
  • the cell when a cell containing ⁇ 7 ⁇ 022 is used, the cell may be immobilized with daltaraldehyde, formalin, or the like.
  • the immobilization method can be performed according to a method known per se.
  • the cell containing ⁇ 7 ⁇ 022 refers to a host cell expressing ⁇ 7 ⁇ 022, and the host cell is preferably Escherichia coli, Bacillus subtilis, yeast, insect cells, animal cells, and the like.
  • the cell membrane fraction refers to a cell membrane-rich fraction obtained by disrupting cells and then obtained by a method known per se.
  • the cells can be crushed by crushing the cells with a Potter-Elvehj em-type homogenizer, crushing with a Perling Blender- 10 Polytron (manufactured by Kinematica), crushing by ultrasonic waves, or thinning the cells while applying pressure with a French press. Fragmentation caused by jetting from a nozzle can be mentioned.
  • centrifugal fractionation methods such as differential centrifugation and density gradient centrifugation are mainly used.
  • the cell lysate is centrifuged at low speed (500-3000 rpm) for a short time (typically, about 1-10 minutes), and the supernatant is further centrifuged at high speed (15000-30000 rm) for 30 minutes-2 hours.
  • the resulting precipitate is used as the membrane fraction.
  • the membrane fraction contains a large amount of expressed OT7T022 and membrane components such as cell-derived phospholipids and membrane proteins.
  • the amount of ⁇ T7T022 in cells containing OT7T022 and in the membrane fraction is preferably 10 3 to 10 8 molecules, and more preferably 10 5 to 10 7 molecules per cell.
  • OT7T022 fraction and labeled RFRP are required to perform a) to c) above. It is.
  • OT7TO22 fraction a natural ⁇ T7TO22 fraction or a recombinant OT7TO22 fraction having an activity equivalent thereto is desirable.
  • equivalent activity means equivalent ligand binding activity :, signal transduction action and the like.
  • labeled RFRP a labeled RFRP, a labeled RFRP analog compound, or the like is used.
  • RFRP labeled with [ 3 H], [ 125 I], [ 14 C], [ 35 S] or the like is used.
  • a cell containing ⁇ 7 ⁇ 022 or a membrane of the cell is used.
  • the buffer may be any buffer that does not inhibit the binding between RFRP and ⁇ 7T022, such as a phosphate buffer with ⁇ 4: L 0 (preferably ⁇ 6 to 8) and a buffer of Tris-monohydrochloride. .
  • surfactants such as CHAPS, Tween-80 TM (Kao-Atlas), digitonin, and deoxycholate can be added to the buffer to reduce non-specific binding.
  • a protease inhibitor such as PMSF, louptin, E_64 (manufactured by Peptide Research Laboratories), and peptide suptin can be added to suppress the degradation of OT7T022 and RFRP by the protease.
  • RFRP a certain amount (50 00 ⁇ 500000 cm), the coexistence of test compound 10- 4 M ⁇ 10- 1Q M simultaneously.
  • the reaction is performed at about 0-5 Ot :, preferably about 4-37, for about 20 minutes-24 hours, preferably about 30 minutes-3 hours.
  • the solution is filtered through a glass fiber filter paper, etc., and washed with an appropriate amount of the same buffer. Measure at evening or key counter.
  • the specific binding amount B—NSB
  • the test compound which is 50% or less can be selected as a candidate substance having competitive inhibitory ability.
  • cells containing 7T 7 TO 22 are cultured in a multiwell plate or the like. Before conducting screening, replace the cells with fresh medium or an appropriate buffer that is not toxic to cells, add test compounds, etc., incubate for a certain period of time, and extract cells or collect supernatant. The product produced is quantified according to the respective method. If the production of a substance (for example, arachidonic acid) as an indicator of cell stimulating activity is difficult due to the presence of a degrading enzyme contained in cells, an inhibitor for the degrading enzyme is added to perform the assay. Is also good. In addition, activities such as inhibition of cAMP production can be detected as an inhibitory effect on production of cells whose basal production has been increased by forskolin or the like.
  • a substance for example, arachidonic acid
  • cells expressing appropriate OT7T022 are required.
  • the cells expressing OT7TO22 cell lines having natural OT7T022, the above-mentioned cell lines expressing recombinant OT7T022, and the like are desirable.
  • Test compounds include, for example, peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, and plasma.These compounds are novel compounds. Or a known compound.
  • the test compound may form a salt, and a salt with a physiologically acceptable acid (eg, an inorganic acid) or a base (eg, an organic acid) is used as the salt of the test compound.
  • a physiologically acceptable acid eg, an inorganic acid
  • a base eg, an organic acid
  • physiologically acceptable acid addition salts are particularly preferred.
  • physiologically acceptable acid addition salts for example, salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid, Salts with tartaric acid, cunic acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc. are used.
  • inorganic acids eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfur
  • a compound designed to bind to the ligand-binding pocket based on the atomic coordinates of the active site of OT7T022 and the position of the ligand-binding pocket is preferably used.
  • the measurement of the atomic coordinates of the active site of OT7T022 and the position of the ligand binding pocket can be performed using a known method or a method analogous thereto.
  • a kit for screening a compound or a salt thereof that alters the binding property or signal transduction between RFRP and OT7T022 includes RFRP, a cell containing OT7T022 or a cell membrane fraction thereof.
  • screening kit of the present invention examples include the following. 1. Screening reagent
  • CHO cells expressing the OT7T022, 12 well plates were passaged at 5 X 10 5 cells Z holes, 37T :, 5% C_ ⁇ 2, which were cultured for 2 days at 95% air.
  • the specific method of evaluating whether it is an agonist or an antagonist to ⁇ 7 ⁇ 022 may be in accordance with the following (i) or (ii).
  • test compound is brought into contact with cells containing OT7T022, and the above-mentioned cell stimulating activity is measured.
  • the compound having a cell stimulating activity or a salt thereof is an agonist against OT7T022.
  • a compound (eg, a ligand) that activates OT7T022 is converted to OT7T0 Cell stimulating activity via OT 7 TO 22 when exposed to cells containing 22 and when a compound that activates OT 7 T 022 and a test compound are brought into contact with cells containing OT 7 TO 22 Measure and compare.
  • a compound or a salt thereof capable of decreasing the cell stimulating activity of a compound that activates OT7T022 is an antagonist of O7T022.
  • Compounds obtained using the screening method or the screening kit of the present invention include peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, enzymatic products, and the like. Or a known compound.
  • the compound obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention is a compound having an action of altering the binding between RFRP and OT7T022 or signal transduction, and specifically, (a) via OT7T022 A compound having a cell stimulating activity (so-called OT7T022 agonist), (mouth) a compound having no cell stimulating activity (so-called OT7T022 antenna), (c) a compound that enhances the binding force between RFRP and OT7T 022, Or (ii) a compound that reduces the binding strength between RFRP and OT7TO22.
  • a salt with a physiologically acceptable acid eg, an inorganic acid, etc.
  • a base eg, an organic acid, etc.
  • a physiologically acceptable acid addition salt is particularly preferable.
  • examples of such salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) and organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid) Succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, succinic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.).
  • inorganic acids eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.
  • organic acids eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid
  • Succinic acid tartaric acid, citric acid, malic acid
  • OT7T022 agonist has the same action as the physiological activity of RFRP, and is useful as a safe and low-toxicity drug.
  • OT7 TO22 antagonists can suppress the biological activity of RFRP, they are useful as safe and low-toxic drugs for suppressing the biological activity of RFRP.
  • a compound or a salt thereof that enhances the binding strength between RFRP and OT7T 022 is represented by R Because it can enhance the physiological activity of FRP, it is useful as a safe and low-toxicity drug.
  • a compound or a salt thereof that reduces the binding force between RFRP and OT7T022 can reduce the biological activity of RFRP, and is therefore useful as a safe and low-toxic drug for suppressing the biological activity of RFRP.
  • the OT7T022 agonist and the compound or a salt thereof that enhances the binding strength between RFRP and OT7T022 obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention include, for example, a Teng glucagon secretion promoter, a blood glucose increasing agent, and the like.
  • a compound or a salt thereof that reduces the binding force between OT7T022 antagonist and RFRP and OT7T022 obtained using the screening method or the screening kit of the present invention is, for example, a ⁇ glucagon secretion inhibitor, a hypoglycemic agent, Urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory loss inhibitor), or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturia, high fat It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for blood disorders, sexual dysfunction, skin diseases, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic diseases, indigestion, memory learning disorders, and the like. Diabetes includes insulin-dependent (type I) diabetes and non-insulin-dependent (type II) diabetes.
  • the compound or a salt thereof obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention is used as the above-mentioned pharmaceutical composition, it can be formulated according to a conventional method. Specifically, it can be produced in the same manner as the above-mentioned prophylactic / therapeutic agent containing RFRP.
  • the resulting product is safe and has low toxicity, it should be administered to humans and mammals (for example, rats, mice, egrets, higgs, bush, pests, cats, dogs, monkeys, etc.).
  • the dose of the compound or a salt thereof varies depending on the administration subject, target organ, symptom, administration method, and the like.
  • the amount of OT7T022 agonist per day is about 0.1 to 10 Omg, preferably about 1.0 to 5 Omg, more preferably about 1.0 to 20 mg.
  • parenteral administration the single dose varies depending on the subject of administration, target organs, symptoms, administration method, etc.
  • the amount of ⁇ T 7 TO 22 agonist per day is about 0.01 to 3 Omg, preferably about 0.1 to 2 Omg, more preferably about 0.1 to 1 Omg. It is convenient to administer by injection. In the case of other animals, the dose can be administered in terms of weight per 60 kg.
  • the antibody against OT7T022 can specifically recognize OT7T022, it can be used for screening a compound or a salt thereof that changes the amount of OT7T022 in the cell membrane.
  • Non-human mammal a) Blood, b) Specific organ, c) Tissues or cells isolated from organs are destroyed, and cell membrane fraction is isolated.
  • OT7 contained in cell membrane fraction A method for screening a compound or a salt thereof that changes the amount of OT7T022 in a cell membrane by quantifying TO22,
  • a non-human mammal's a) blood, b) a specific organ, c) tissue or cells isolated from the organ, sectioned, and then subjected to immunostaining to obtain the receptor at the cell surface Quantification of the degree of staining of body proteins changes the amount of OT7TO22 in the cell membrane by confirming the protein on the cell membrane A method for screening a compound or a salt thereof is provided.
  • the quantification of ⁇ T 7 TO 22 contained in the cell membrane fraction is specifically performed as follows.
  • non-human mammals eg, mouse, rat, egret, sheep, pig, pig, cat, dog, monkey, etc., more specifically, immunocompromised rat, mouse, egret, etc.
  • a drug eg, an immunomodulator
  • a physical stress eg, immersion stress, electric shock, light, low temperature, etc.
  • blood or a specific organ eg For example, tissue or cells isolated from the brain, liver, kidney, etc.
  • the obtained organ, tissue or cell is suspended in, for example, an appropriate buffer (for example, Tris-HCl buffer, phosphate buffer, Hess buffer, etc.) to destroy the organ, tissue or cell
  • an appropriate buffer for example, Tris-HCl buffer, phosphate buffer, Hess buffer, etc.
  • a cell membrane fraction is obtained by using a surfactant (eg, Triton X100 TM , Tween 20 TM, etc.) and further using a technique such as centrifugation, filtration, or column fractionation.
  • a surfactant eg, Triton X100 TM , Tween 20 TM, etc.
  • the cell membrane fraction refers to a cell membrane-rich fraction obtained by disrupting cells and then obtained by a method known per se.
  • Cells can be crushed by crushing the cells with a Potter-Elvehjem homogenizer, crushing with a Pelling Blender ⁇ Polytron (Kinematica), crushing by ultrasonic waves, pressing the cells from a narrow nozzle while applying pressure with a French press, etc. Crushing by eruption is mentioned.
  • centrifugal fractionation methods such as differential centrifugation and density gradient centrifugation are mainly used.
  • the cell lysate is centrifuged at a low speed (500-3000 rpm) for a short time (typically about 1-10 minutes), and the supernatant is further spun at a higher speed (15000-3000 rpm), usually 30 minutes-2 hours. Centrifuge and use the resulting precipitate as the membrane fraction.
  • a low speed 500-3000 rpm
  • a short time typically about 1-10 minutes
  • a higher speed usually 30 minutes-2 hours.
  • expressed OT7T022 and cell-derived It is rich in membrane components such as phospholipids and membrane proteins.
  • OT7T022 contained in the cell membrane fraction can be quantified by, for example, a sandwich immunoassay using the antibody of the present invention, Western blot analysis, or the like.
  • Such a sandwich immunoassay can be performed in the same manner as described above, and the Western blot can be performed by a means known per se.
  • a transformant expressing OT7T022 is prepared according to the above method, and OT7TO22 contained in the cell membrane fraction can be quantified.
  • a test compound is administered simultaneously with a drug or physical stress, and after a certain period of time after administration (After 30 minutes to 3 days, preferably after 1 hour to 2 days, more preferably after 1 hour to 24 hours), it can be carried out by quantifying the amount of OT7TO22 in the cell membrane,
  • test compound When culturing the transformant according to a conventional method, the test compound is mixed in a medium, and after the culturing for a fixed time (from 1 day to 7 days, preferably from 1 day to 3 days, more preferably from 2 days to 3 days) This can be done after a day) by quantifying the amount of RFRP in the cell membrane.
  • the confirmation of OT7T022 contained in the cell membrane fraction is specifically performed as follows.
  • the compound obtained by using the screening method of the present invention is a compound having an effect of changing the amount of OT7TO22 in the cell membrane. Specifically, (a) by increasing the amount of OT7T022 in the cell membrane, A compound that enhances the cell stimulating activity mediated by QT7T022. (Mouth) A compound that reduces the cell stimulating activity by decreasing the amount of OT7T022 in the cell membrane.
  • a salt with a physiologically acceptable acid eg, an inorganic acid, etc.
  • a base eg, an organic acid, etc.
  • a physiologically acceptable acid addition salt is particularly preferable.
  • examples of such salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) and organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid) Succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.).
  • inorganic acids eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.
  • organic acids eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid
  • Succinic acid tartaric acid, citric acid, mal
  • Compounds or salts thereof that enhance cell stimulating activity by increasing the amount of OT7T022 in the cell membrane include, for example, ⁇ glucagon secretion enhancers, blood glucose enhancers, urine production enhancers, memory erasure enhancers (memory elimination enhancers) Or hypertrophy, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for thrombotic diseases, lipotoxicity, cancer and the like.
  • Compounds or salts thereof that reduce cell stimulating activity by reducing the amount of OT 7 TO 22 in the cell membrane include, for example, Teng glucagon secretion inhibitor, blood glucose Hypoglycemic, urine production inhibitor, memory learning inhibitor (memory hypothesis inhibitor), or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for enuresis, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion, memory learning disorder and the like. Diabetes includes insulin-dependent (type I) diabetes and non-insulin-dependent (type II) diabetes.
  • a compound or a salt thereof obtained by using the screening method of the present invention is used as a pharmaceutical composition, it can be formulated according to a conventional method. Specifically, it can be produced in the same manner as the above-mentioned preventive, therapeutic and ameliorating agents containing RFRP.
  • the resulting formulation is safe and low toxic, it can be administered, for example, to humans and mammals (eg, rats, mice, egrets, higgs, pigs, mice, cats, dogs, monkeys, etc.). it can.
  • mammals eg, rats, mice, egrets, higgs, pigs, mice, cats, dogs, monkeys, etc.
  • the dose of the compound or a salt thereof varies depending on the administration subject, target organ, symptom, administration method, and the like.
  • the compound or a salt thereof that increases the amount of OT7TO22 in the cell membrane is about 0.1 to 10 Omg per day, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 20 mg.
  • the single dose varies depending on the administration target, target organ, symptoms, administration method, and the like.
  • the compound or its salt that increases the amount of OT7T022 in the cell membrane is about 0.01 to 3 mg / day, preferably about 0.1 to 20 mg / day, more preferably about 0.1 to 20 mg / day. It is convenient to administer about 1 Omg by intravenous injection. For other animals, the equivalent dose per 60 kg body weight can be administered.
  • antibodies to RFRP or OT7T022 may be used, for example, to inhibit glucocagon secretion, hypoglycemia, urine production inhibitors, memory learning and depression (memory loss inhibitors), or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, Diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturnal enuresis, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion, It can be used as a preventive and therapeutic agent for memory and learning disorders. Diabetes includes insulin-dependent (type I) diabetes and non-insulin-dependent (type II) diabetes.
  • the prophylactic, therapeutic and ameliorating agents can be produced and used in the same manner as the above-mentioned pharmaceuticals containing RFRP.
  • Antisense DNA against DNA encoding RFRP or antisense DNA against DNA encoding OT7T022 is, for example, a glucagon secretion inhibitor, a hypoglycemic agent, a urine production inhibitor, Memory learning and learning depression inhibitor (memory loss inhibitor) or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturnal enuresis, hyperlipidemia, sexual function It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for disorders, skin diseases, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic diseases, dyspepsia, memory and learning disorders. Diabetes includes insulin-dependent (type I) diabetes and non-insulin-dependent (type II) diabetes.
  • the antisense DNA when used, the antisense DNA may be used alone or after being inserted into a suitable vector such as a retrovirus vector, an adenovirus vector, an adenovirus associated virus vector, and the like, followed by a conventional method. it can.
  • the antisense DNA can be administered as it is or in the form of a preparation together with a physiologically acceptable carrier such as an adjuvant for promoting uptake, and then administered using a gene gun or a catheter such as a hydrogel catheter.
  • the antisense DNA can be used as a diagnostic tool for examining the presence of RFRP or OT7T022-encoding DNA in tissues and cells and the expression status thereof. It can also be used as a oligonucleotide probe.
  • Mammalian ES cells in which the OT7T022 gene has been inactivated are artificially mutated OT7T022 genes in mammalian ES cells to suppress the gene expression ability or to encode the gene. By substantially eliminating the activity of OT7T022, the gene was substantially inactivated without the ability to express ⁇ T7TO22 (hereinafter referred to as the knockout gene of the present invention).
  • OT7 TO22 DNA encoding the above-mentioned OT7 TO22 is used.
  • mouse OT7T022 gene mouse OT7 TO22 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 is used.
  • a gene (genomic DNA) comprising the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 28, which codes for the partial protein of SEQ ID NO: 28, is used.
  • OT7TO22 As the rat OT7T022 gene, a gene encoding OT7TO22 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 and containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 12 is used.
  • a mammal used as a material for the ES cells for example, humans, porcupines, pigs, sheep, sheep, goats, puppies, dogs, cats, guinea pigs, hamsters, mice, rats, and the like are used.
  • the non-human animal may be any animal other than a human having the OT7TO22 gene, but a non-human mammal is preferred.
  • a non-human mammal for example, red sea lions, bushes, higgins, goats, blue herons, dogs, cats, guinea pigs, hamsters, mice, rats, and the like are used.
  • rodents that have relatively short ontogenesis and biological cycles in terms of preparation of disease animal models and are easy to breed, especially mice (for example, C57BLZ6 strains as pure strains, B6C3 F1 system, BDF1 system, B6D2F1 system, BALBZc system, ICR system, etc. (Preferably, pure system is C57BLZ6 system, etc.)
  • a BDF line or an ICR line) or a rat (eg, a Wistar line, an SD line, etc.) is particularly preferable.
  • Methods of artificially mutating the T7TO22 gene include, for example, deletion of part or all of the gene sequence by genetic engineering, or insertion or substitution of another gene. With these mutations, the knockout gene of the present invention can be prepared, for example, by shifting the codon reading frame or disrupting the function of the promoter or exon.
  • ES cells in which the OT7TO22 gene has been inactivated include: A drug resistance gene (eg, a neomycin resistance gene, a hygromycin resistance gene or a zeocin resistance gene, preferably a neomycin resistance gene, etc.), or a reporter gene (eg, a lacZ (Escherichia coli) 3-galactosidase gene) ), Cat (chloramphenicol acetyltransferase gene), GUS (/ 3-dalcuronidase gene), luciferase gene, equorin gene, taurmarin gene, GFP (Green Fluorescent Protein) gene, etc., preferably lac etc.) OT7T022 gene exon Gene disruption by disrupting function or by inserting a DNA sequence that terminates gene transcription (for example,
  • drug resistance gene refers to a gene involved in drug resistance of antibiotics and the like, and is used as a marker for selecting whether or not the introduced gene has been expressed in cells.
  • reporter gene refers to a group of genes that serve as indicators of gene expression, and usually uses the structural gene of an enzyme that catalyzes a luminescence reaction or a color reaction. (Ii) those with no genetic background, (ii) those with a sensitive method to quantify gene expression, (iii) those with little effect on transformed cells, and (iv) expression. Those showing the localization of the site are preferably used (Plant Cell Engineering, Vol. 2, p. 721, 1990). In addition, although the above-mentioned “drug resistance gene” and the like are used for the same purpose, the “reporter gene” not only indicates whether the gene to be introduced is expressed in a cell but also in which tissue and when. It can be examined, and the expression level can be accurately and quantitatively examined.
  • the evening vector is introduced into the chromosome of the animal by, for example, homologous recombination, and the resulting ES cells are subjected to Southern hybridization analysis or probe using the DNA sequence on or near the OT7T022 gene as a probe.
  • the DNA sequence on the targeting vector and the DNA sequence of the neighboring region other than the OT7T022 gene used for the preparation of the targeting vector are analyzed by PCR using primers to obtain the knockout ES cells of the present invention. Can be.
  • Examples of the above-mentioned targeting vectors include plasmids derived from Escherichia coli (eg, pBR322, pBR325, pUC12, pUC13, etc.) and plasmids derived from Bacillus subtilis (eg, pUB110, pTB5, pC194).
  • Yeast-derived plasmids eg, pSH19, pSHI5, etc.
  • bacteriophages such as ⁇ phage
  • retroviruses such as Moroni leukemia virus, vaccinia virus or adenovirus vectors, baculovirus, papilla Tumor viruses, viruses from the herpesvirus group, or animal viruses such as Epstein-Barr-virus are used.
  • ⁇ S cells for inactivating the ⁇ 7 ⁇ 022 gene by the homologous recombination method or the like for example, those already established as described above may be used, or the known Evans and Kaufman method may be used. A newly established one may be used.
  • mouse ES cells currently, 129 ES cells are generally used, but since the immunological background is not clear, an alternative pure immunologically
  • C A mouse established using a 57 BLZ6 strain mouse or a BDF 1 strain hybrid mouse with the DBAZ2 strain F1 of the C57BLZ6 strain and the DBAZ2 strain
  • the BDF 1 strain mouse has the advantage that the number of eggs collected is large and the eggs are operational, and the C57BLZ6 strain mouse has a genetic background.
  • a model mouse it can be used advantageously because it is possible to return the genetic background to the C57BLZ6 strain by backcrossing with a C57B LZ6 strain mouse.
  • blastocysts 3.5 days after fertilization are generally used, but 8-cell stage embryos (preferably 8 cell stage embryos 2.5 days after fertilization) By collecting eggs and culturing to blastocysts, a large number of early embryos can be efficiently obtained.
  • the ES cell line obtained in this way usually has very good growth potential, but it must be carefully subcultured because it tends to lose its regenerative ability to develop into individuals.
  • a suitable feeder cell such as STO fibroblasts
  • a carbon dioxide incubator preferably 5% carbon dioxide, 95% air or 5% oxygen
  • LIF 1-1 000 OU / ml
  • 5% CO 2, 90% air at about 37 ⁇
  • trypsin ZEDTA solution typically 0.001-0.5% trypsin 0.1-5 mM EDTA
  • a method is employed in which cells are made into single cells by treatment with about 0.1% trypsin / ⁇ lmM EDTA) and seeded on freshly prepared feeder cells.
  • Such subculture is usually performed every 1 to 3 days. At this time, it is desirable to observe the cells, and if morphologically abnormal cells are found, discard the cultured cells.
  • ES cells can be cultured in monolayer to high density or in suspension culture to form cell clumps, depending on the appropriate conditions, for example, parietal muscle, visceral muscle, myocardium, etc. [MJ Evans and MH Kaufman, Nature, 292, 154, 1981; GR Martin Proceding of National Institute of Technology. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 78, pp. 7634, 1981; TC Doetschman et al., Journals 'Ob Embrio Gösig' and 'Exeperimental Morphology 1'. 87, 27, 1985], and the OT7TO22 gene-deficient cells obtained by differentiating the ES cells of the present invention are useful in in vitro cell biological studies of OT7T022.
  • DMEM Dulbecco's modified Eagle's medium
  • the non-human animal deficient in ⁇ T7 ⁇ 022 gene expression of the present invention may be, for example, a cell derived from a mammalian ES cell in which the ⁇ 7 ⁇ 022 gene is inactivated. It is a non-human animal in which germline and somatic cells have been introduced with the inactivated ⁇ 7 ⁇ 022 gene sequence in the early stage of embryogenesis.
  • a method known in the art can be used to apply the targeting vector to a non-human animal ES cell or non-human animal egg cell (e.g., electoral poration, microinjection, calcium phosphate, lipofection, agglutination, Introduced by particle gun method, DEAE-Dextran method, etc.
  • Preferred methods of introduction include the electroinjection method when introduced into ES cells, and the microinjection method when introduced into egg cells) This can be achieved by homologous recombination of the inactivated OT7T022 gene sequence of the targeting vector with the OT7T022 gene on the chromosome of a non-human animal ES cell or non-human animal egg cell.
  • Cells in which the OT7T022 gene was knocked out were subjected to Southern hybridization using a DNA sequence on or near the OT7T022 gene as a probe.
  • DNA analysis on the targeting vector and the DNA sequence in the neighboring region other than the mouse-derived OT7TO22 gene used in the targeting vector and PCR analysis using primers can do.
  • a cell line in which the OT7T022 gene has been inactivated by homologous recombination is cloned, and the cells are used at an appropriate time in the early stage of embryogenesis, for example, in the 8-cell stage.
  • Chimera prepared by injecting into non-human animal embryos or blastocysts (injection method), or sandwiching the OT7T022 gene-inactivated ES cell mass between two 8-cell stage embryos (assembly chimera method) The embryo is implanted into the uterus of the pseudopregnant non-human animal.
  • the animals produced are chimeric animals composed of both cells with the normal OT7T022 locus and cells with the artificially mutated OT7T022 locus.
  • all tissues are artificially obtained from the population obtained by crossing such a chimeric individual with a normal individual. It can be obtained by selecting individuals composed of cells having the OT7T022 gene locus obtained by adding a mutation to, for example, by judging coat color or the like. The individuals obtained in this manner are usually OT7TO22 heterozygous expression-deficient individuals, and OT7T22 heterozygous expression-deficient individuals are crossed to obtain OT7T022 homo-expression-insensitive individuals from their offspring. Can be.
  • a transgenic non-human animal having a targeting vector introduced into a chromosome can be obtained by injecting a gene solution into the nucleus of an egg cell by a microinjection method. It can be obtained by comparing human animals and selecting those having a mutation in the ⁇ T 7 TO 22 locus by homologous recombination.
  • a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression can be distinguished from a normal animal by measuring the mRNA level of the animal using a known method and indirectly comparing the expression level.
  • germline acquisition and retention can be performed according to standard methods. That is, by mating male and female animals having the inactivated gene sequence, a homozygous animal having the inactivated gene sequence on both homologous chromosomes can be obtained. The obtained homozygous animal can be efficiently obtained by rearing the mother animal in such a manner that one normal individual and a plurality of homozygous animals are obtained. By mating male and female heterozygous animals, homozygous and heterozygous animals having the inactivated gene sequence can be bred and subcultured. The progeny of the animal having the inactivated gene sequence thus obtained is also included in the OT7T022 gene expression-deficient non-human animal of the present invention.
  • Mammalian ES cells in which the OT7T022 gene has been inactivated in this way are extremely useful for creating a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression.
  • Bone marrow transplanted animals using animals and other disease state model animals, or their tissues or cells derived therefrom can be used for diseases caused by OT7TO22 deficiency, such as various biological activities that can be induced by OT7T022.
  • Diseases resulting from inactivation of the biological activity of OT7T 022 based on the deletion (eg, obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, Glycemia, hypertension, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, It can be a better model for lipotoxicity, cancer, etc., and is useful for investigating the causes of these diseases and studying treatments.
  • deletion eg, obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, Glycemia, hypertension, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease.
  • Bone marrow transplanted mice have the potential to become more suitable disease models because of the limited changes in gene function.
  • a donor animal a disease model animal obtained from the non-human animal deficient in OT7T022 gene expression described above is used as a donor animal, and its bone marrow is collected and transplanted into another recipient animal whose bone marrow has been destroyed by irradiation in advance.
  • a bone marrow was collected from another pathological model animal as a donor animal, and a pathological model animal obtained from a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression in which bone marrow was previously destroyed by irradiation was transplanted as a recipient animal. Bone marrow transplanted mice are also included.
  • the non-human animal deficient in expression of the OT7T022 gene of the present invention a disease model animal caused by drug induction or stress load on the animal, and a cross between a non-human animal lacking the OT7TO22 gene expression and another disease model animal Disease model animal that occurs, OT7T022 gene expression deficient non-human animal, disease model animal caused by crossing of other disease model animal with drug-induced or stress-induced stress model animal, OT7T022 gene expression non-human animal
  • the pathological model animals obtained by bone marrow transplantation using the obtained pathological model animals and other pathological model animals, or their tissues or cells derived therefrom, are screened as a preventive, therapeutic or ameliorating drug for the disease.
  • Can be used for ling examples of the above-mentioned tissues and cells derived therefrom include measuring the specific activity using a homogenate such as liver or kidney, or measuring the activity or production amount of a specific product using peritoneal macrophages. Can be used for screening.
  • Non-human animal deficient in OT7T022 gene expression used in the screening method of the present invention a pathological model animal caused by drug induction or stress load of the animal, a cross between a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression and another pathological model animal
  • Animal model and other disease model Examples of the disease state model animal obtained by bone marrow transplantation using the product, or their tissues or cells derived therefrom include the same ones as described above.
  • Test compounds include, for example, peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, and plasma.These compounds are novel compounds. Or a known compound.
  • the test compound may form a salt, and a salt with a physiologically acceptable acid (eg, an inorganic acid) or a base (eg, an organic acid) is used as the salt of the test compound.
  • physiologically acceptable acid addition salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) and organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, etc.).
  • the OT7T022 gene expression-deficient non-human animal of the present invention a disease model animal caused by drug induction or stress load of the animal, a OT7T022 gene expression-deficient non-human animal and other A disease model animal resulting from crossing with a disease model animal, which is caused by drug induction or stress load on a disease model animal caused by crossing a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression with another disease model animal
  • a pathological model animal obtained from bone marrow transplantation using a pathological model animal, a non-human animal deficient in ⁇ T7TO22 gene expression, and another pathological model animal (hereinafter referred to as OT7T0) Or a non-human animal deficient in gene expression), or their tissues or cells derived therefrom, are treated with a test compound and compared with untreated control animals.
  • the preventive, therapeutic, and ameliorating effects of the test compound can be tested using the changes in animal organs, tissues, cells, disease symptoms, and the like as indices.
  • test animals such as OT7T022 gene expression-deficient non-human animals
  • test compounds include, for example, oral administration and intravenous injection. Can be selected appropriately according to The dose of the test compound is appropriately selected according to the administration method and the properties of the test compound. can do.
  • a cholesterol-loading treatment is performed on a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression of the present invention, and a test compound is administered before or after cholesterol-loading treatment.
  • the animal can be screened by measuring the blood cholesterol level, body weight change, and the like over time.
  • a drug such as STZ or aloxane is administered to a non-human animal or the like in which the OT7TO22 gene expression of the present invention is deficient, and a test compound is administered before or after the glucose load treatment, and the blood glucose level and body weight change of the animal are administered. Screening can be performed by measuring such factors over time.
  • test compound when administered to a test animal, when the body weight of the test animal decreases by about 10% or more, preferably about 30% or more, more preferably about 50% or more,
  • the test compound can be selected as a substance having a therapeutic or preventive effect on obesity.
  • the preventive / therapeutic agent obtained by using the screening method of the present invention contains a compound selected from the test compounds described above, and is used for the prevention / treatment of a disease caused by OT7T022 deficiency.
  • a compound derived from the compound can be used in the same manner.
  • the compound obtained by the screening method may form a salt.
  • the salt of the compound include a salt with an inorganic base, a salt with an organic base, a salt with an inorganic acid, and a salt with an organic acid.
  • pharmaceutically acceptable salts such as salts and salts with basic or acidic amino acids.
  • the salt with an inorganic base include, for example, alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt, alkaline earth metal salts such as calcium salt and magnesium salt, and aluminum salt and ammonium salt.
  • salts with organic bases include, for example, trimethylamine, triethylamine, pyridine, picoline, 2,6-lutidine, ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, cyclohexylamine, dicyclohexylamine. Salts with silamine, N, N'-dibenzylethylenediamine and the like.
  • salts with inorganic acids include salts with hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, and the like.
  • Preferred examples of the salt with an organic acid include, for example, formic acid, acetic acid, propionic acid, fumaric acid, oxalic acid, tartaric acid, maleic acid, citric acid, succinic acid, malic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, and benzoic acid And salts with acids and the like.
  • Preferred examples of the salt with a basic amino acid include salts with, for example, arginine, lysine, and oltinine.
  • Preferred examples of the salt with an acidic amino acid include, for example, salts with aspartic acid, glutamic acid, and the like. .
  • the compound or its salt obtained by using the screening method of the present invention can be carried out in a conventional manner, for example, sugar-coated tablets and capsules as necessary. It can be used orally as an elixir, microcapsule or the like, or parenterally in the form of an injection such as a sterile solution with water or another pharmaceutically acceptable liquid, or a suspension.
  • the compound or a salt thereof may be combined with a pharmaceutically acceptable carrier, flavoring agent, excipient, vehicle, preservative, stabilizer, binder, and the like in a unit dosage form required for generally accepted drug practice. It can be manufactured by mixing. The amount of the active ingredient in these preparations is such that an appropriate dose in the specified range can be obtained.
  • a liquid carrier such as an oil or fat.
  • Sterile compositions for injection can be formulated according to normal pharmaceutical practice such as dissolving or suspending the active substance in vehicles such as water for injection, and naturally occurring vegetable oils such as sesame oil, coconut oil and the like.
  • Aqueous solutions for injection include, for example, physiological saline, isotonic solutions containing glucose and other adjuvants (eg, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride, etc.).
  • glucose and other adjuvants eg, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride, etc.
  • alcohol eg, ethanol, etc.
  • polyalcohol eg, propylene glycol, polyethylene glycol, etc.
  • non-ionic surfactant eg, Polysorbate 80 TM, HCO-50, etc.
  • oily liquid include sesame oil and soybean oil, and may be used in combination with a solubilizing agent such as benzyl benzoate or benzyl alcohol.
  • a buffer eg, phosphate buffer, sodium acetate buffer, etc.
  • a soothing agent eg, benzalkonium chloride, proprochlorinate, etc.
  • a stabilizer eg, human serum albumin, polyethylene glycol) Etc.
  • preservatives eg, benzyl alcohol, phenol, etc.
  • antioxidants eg, antioxidants and the like.
  • the prepared injection solution is usually filled in a suitable ampoule.
  • the preparations obtained in this way are safe and low toxic and can be used, for example, in humans or in warm-blooded animals (eg, mice, rats, puppies, higgs, bushus, puppies, pumas, birds, cats, dogs). , Monkeys, chimpanzees, etc.).
  • the dose of the compound or a salt thereof varies depending on symptoms and the like. However, in the case of oral administration, generally in an adult (assuming a body weight of 60 kg) obese patient, about 0.1 to 100 mg / day, preferably It is about 1.0-50 mg, more preferably about 1.0-2 Omg. When administered parenterally, the single dose varies depending on the subject of administration, target organ, symptoms, administration method, etc.
  • the dose can be administered in terms of weight per 60 kg.
  • the present invention relates to a method for administering a test compound to a non-human animal deficient in expression of the ⁇ T7 ⁇ 022 gene of the present invention, and detecting the expression of a reporter gene, which enhances the activity of a promoter for the gene of the present invention. Screening for inhibitors Provide a way.
  • the non-human animal deficient in expression of the OT7T022 gene of the present invention may be the non-human animal deficient in expression of the OT7T022 gene of the present invention, wherein the OT7T022 gene is inactivated by introducing a reporter gene.
  • a reporter gene which can be expressed under the control of a promoter for the OT7T022 gene is used.
  • test compound examples include the same compounds as described above.
  • reporter gene the same ones as described above are used, and (3) 3-galactosidase gene (1 ac Z), soluble alkaline phosphatase gene, luciferase gene and the like are preferable.
  • the repo-1 gene is under the control of the promoter for the OT7T022 gene.
  • OT7T022 For example, if a part of the OT7T022 gene region is replaced with the / 3_galactosidase-lactide gene (lacZ) derived from Escherichia coli, it should be used instead of OT7T022 in the tissue that expresses the OT7TO22 gene.
  • 3-galactosidase is expressed. Therefore, for example, by staining with a reagent that serves as a substrate for / 3-galactosidase, such as 5-bromo-4-chloro-3, -indolyl, 3_galacto-ylanoside (X-gal), In addition, the expression state of OT7T022 in the animal body can be observed.
  • the OT7TO22 gene-deficient mouse or its tissue section is fixed with dartalaldehyde or the like, washed with phosphate buffered saline (PBS), and stained with X-ga1. After reacting at room temperature or around 37 for about 30 minutes to 1 hour, the tissue sample may be washed with ImM EDTA / PBS solution to stop the 3) -galactosidase reaction and the color may be observed. Further, mRNA encoding 1acZ may be detected according to a conventional method.
  • PBS phosphate buffered saline
  • a test compound is administered to a test animal.
  • the test compound when the expression of the reporter protein is increased by about 10% or more, preferably about 30% or more, more preferably about 50% or more, the test compound can be selected as a substance that promotes the promoter activity for the OT7T022 gene.
  • the test compound when the test compound is administered to the test animal, if the expression of the reporter protein is reduced by about 10% or more, preferably about 30% or more, more preferably about 50% or more, the test compound inhibits the promoter activity of the T7T022 gene. Can be selected.
  • the substance obtained by using the above-mentioned screening method is a substance selected from the above-mentioned test compounds, and is a substance that promotes or inhibits the promoter one activity for the OT7T022 gene.
  • the substance obtained by the screening method may form a salt.
  • the salt of the substance include physiologically acceptable acids (eg, inorganic acids) and bases (eg, organic acids). Are used, and physiologically acceptable acid addition salts are particularly preferable.
  • physiologically acceptable acids eg, inorganic acids
  • bases eg, organic acids
  • physiologically acceptable acid addition salts are particularly preferable.
  • such salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) and organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid) Succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.).
  • inorganic acids eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.
  • organic acids
  • a substance that promotes the promoter activity of the OT7T022 gene can promote the expression of OT7TO22 and can promote the function of ⁇ T7TO22.
  • substances that inhibit the promoter activity of the ⁇ T7T022 gene can inhibit the expression of 0227 ⁇ 022 and inhibit the function of ⁇ 7 ⁇ 022, such as ⁇ glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, etc. , Urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory decline inhibitor), or diabetes, glucose intolerance, ketosis, Acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, atherosclerosis, thrombotic disease, It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for dyspepsia, memory and learning disorders. Diabetes includes insulin-dependent (type I) diabetes and non-insulin-dependent (type II) diabetes.
  • a substance derived from the substance obtained by the above screening can be used in the same manner.
  • the drug containing the substance obtained by the screening method can be produced in the same manner as the drug containing the compound obtained by the above-mentioned screening method A.
  • the preparations obtained in this way are safe and have low toxicity, for example, in humans or mammals (for example, rats, mice, guinea pigs, egrets, sheep, sheep, bush, horses, horses, cats, animals And monkeys).
  • mammals for example, rats, mice, guinea pigs, egrets, sheep, sheep, bush, horses, horses, cats, animals And monkeys.
  • the dose of the substance varies depending on the target disease, the administration subject, the administration route, and the like.
  • a substance that promotes the activity of the promoter for the OT7TO22 gene for the purpose of treating obesity is orally administered, Typically, in adult patients (assuming a body weight of 60 kg), the substance is administered at about 0.1 to 100 mg, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 20 mg per day.
  • the single dose of the substance may vary depending on the administration target, target disease, etc.
  • a substance that promotes the activity of the promoter for the OT7TO22 gene for the purpose of treating obesity may be used.
  • the substance When administered to an adult patient (with a body weight of 6 O kg) usually in the form of an injection, the substance is administered in an amount of about 0.01 to 30 mg, preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably about 0.1 to 30 mg per day. It is convenient to administer about 1 to 1 Omg by intravenous injection. In the case of other animals, the dose can be administered in terms of 60 kg of body weight.
  • the OT7TO22 gene-deficient non-human animal of the present invention is extremely useful for screening for a compound or a salt thereof that promotes or inhibits the activity of the promoter for the OT7TO22 gene, and that the OT7T022 gene expression Investigating or preventing the causes of various diseases caused by insufficiency. I can make a contribution.
  • transgenic animal a DNA containing the promoter region of the OT7T022 gene
  • genes encoding various proteins are ligated downstream of the DNA and injected into egg cells of an animal to produce a so-called transgenic animal (transgenic animal). If it is prepared, it will be possible to specifically synthesize the peptide and examine its action in the living body.
  • a low-molecular-weight compound that specifically promotes or suppresses the production ability of OT7T022 itself in the body Can be used as a search system.
  • Teng glucagon secretagogue hyperglycemic drug, urine production enhancer, memory erasure enhancer (an aversive memory erasure enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, Prevention and treatment of edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxin, cancer, etc.
  • Teng glucagon secretion inhibitor blood sugar Hypoglycemic, urinary depressant, memory-learning depressant (memory-depressant), or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, Prevention and treatment of enuresis, hypolipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, dyspepsia, memory learning disorder, etc. are combined with
  • OT7T022 Teng-glucagon secretagogue, hyperglycemic drug, urine production enhancer, memory erasure enhancer (an aversive memory elimination enhancer), or obesity, hyperlipidemia, Prevention of type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic diseases, lipotoxicity, cancer, etc.
  • OT7T022 Teng-glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory decrease inhibitor), or diabetes, glucose intolerance, ketolysis, Acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, digestion Prevention of poor, memory and learning disorders, etc.
  • This confirmation method can be performed by using the above-mentioned drug instead of a test compound in a method for screening a compound that changes the binding property between RFRP and OT7T022.
  • the kit for the confirmation method of the present invention is a kit for screening a compound that alters the binding between RFRP and OT7T022, which contains the above drug in place of the test compound.
  • bases, amino acids, and the like are indicated by abbreviations based on the abbreviations by the IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature or commonly used abbreviations in the art, and examples thereof are described below.
  • amino acids may have optical isomers, L-form shall be indicated unless otherwise specified.
  • B guanine (G), guanine (G) or thymine (T) D adenine (A), guanine (G) or thymine (T) V adenine (A), guanine (G) or cytosine (C) N adenine (A) , Guanine (G), cytosine (C) or thymine (T) or unknown or other base
  • H is or H histidine
  • sequence numbers in the sequence listing in the present specification indicate the following sequences.
  • SEQ ID NO: 2 This shows the base sequence of DNA encoding RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence of rat-derived G protein-coupled receptor protein r ⁇ T7TO22.
  • FIG. 1 shows the nucleotide sequence of cDNA encoding rat-derived G protein-coupled receptor protein rOT7TO22.
  • [SEQ ID NO: 13] 2 shows the amino acid sequence of the RFRP partial peptide.
  • the nucleotide sequence of DNA encoding RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22 is shown.
  • FIG. 1 shows an amino acid sequence encoding human-derived G protein-coupled receptor protein hOT7TO22.
  • FIG. 2 shows the partial amino acid sequence of mouse-derived G protein-coupled receptor protein OT7T022.
  • Rat ⁇ 7 ⁇ 022 cDNA (SEQ ID NO: 12, WO00 / 29441) was used as a probe.
  • a 580_1170 b ⁇ DNA fragment of rat cDNA was prepared as a probe (PCR-DIG probe synthesis kit, Roche Diagnostics).
  • 1 st plaque hybridization was performed on a mouse 129 SV J lambda genomic library (Stratagene), and as a result, six positive plaques were obtained. Six positive plaques obtained by 1 st plaque hybridization were subjected to 2 nd plaque hybridization, and two positive clones were isolated.
  • the electroporation was performed using a Gene Pulser electroporation system (manufactured by Bio-Rad) at a voltage of 230 V, a resistance of 500 F, and a DNA solution concentration of 30 gZm1.
  • the gene transfer experiment was performed three times, and neomycin-resistant strains of 1 Q00 or more were obtained.
  • the 739 neomycin-resistant strains obtained with the targeting vector p 022Tg V-2 were cultured in 24-well plates, frozen and thawed in 170, treated with proteinase K, and DNA was extracted by ethanol precipitation.
  • the BamHI-Xho1600bP fragment (outside the genome used for the evening targeting vector) on the 5th side of the genome of 595 strains was used as a probe, and the Southern hybridization was performed. Was done. As a result, a 5.4 kb band presumed to be a homologous recombinant was observed in 6 strains (wild-type 3.8 kb).
  • Southern analysis was performed on the six ES cell lines (No. 126, 130, 283, 491, 532, 545) in which DNA fragments considered to be homologous recombinants were detected for reconfirmation. After culturing each cryopreserved cell, DNA was extracted, cut with BamHI-XhoI, and subjected to Southern hybridization using the above 600 bp fragment as a probe. As a result, a 5.4 kb fragment (only the 3.8 kb fragment was observed in the wild type) was confirmed again in all cells.
  • homologous recombinant cell lines No. 130, 283, 532
  • the mixture was allowed to stand at room temperature for 60 minutes, centrifuged, and the pellet was gently suspended in 4 ml of Carnoy's solution, followed by standing at room temperature. Repeated about 30 times 5 times. After centrifugation, add 2-3 ml of Carnoy's solution to the pellet to adjust to an appropriate concentration, and place on a slide glass. Two to three drops of cell suspension were added. After air-drying, the cells were stained with a 3% Giemsa solution, and chromosomes in the metaphase were observed under a microscope. As a result, the ratio of cells having a normal karyotype was 69 to 61%. Since no karyotypic abnormalities were observed in the three homologous recombinant cell lines, a cell line No. 283 having good growth properties was selected.
  • the homologous recombinant cell line No. 283 was injected into C57BLZ 6 strain 'mouse blastocysts by a conventional method.
  • the injected blastocysts were transplanted into the oviducts of pseudopregnant mice obtained by crossing with vasectomized mice separately.
  • For 283 strains about half of the transplanted embryos were born as offspring, and 75% were chimeric mice.
  • Male chimeric mice were bred to C57BLZ6 strain female mice for germline transfer in offspring and heterozygous mice were obtained.
  • RFRP-1 human RFRP-1 (37 amino acid) consisting of the 56th (Ser) to 92nd (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 was used.
  • this peptide is abbreviated as RFRP-1.
  • 300 a1 blood was collected using a 1 ml dose of tuberculin syringe and a 25-gauge needle (both from Terumo) before administration of RFRP-1.
  • the syringe was previously filled with 30 OKI U / m1a ⁇ rotinin solution containing 3 mg Zm1EDTA.
  • Otsuka physiological saline or a 1 mL solution of RFRP-1 (Peptide Research Laboratories) (17, 80, 170 nmo 1) was injected intravenously at 1 mL ZK g from a tube.
  • 3001 blood samples were collected from the face vein.
  • the collected blood was centrifuged (13,000 rpm, 5 minutes) using a micro high-speed refrigerated centrifuge (MR-150, Tommy Seie), and supernatant (plasma) was collected.
  • the blood glucose concentration was measured using Fuji Dry Chem 3500 (FUJI FILM).
  • FILM Fuji Dry Chem 3500
  • Otsuka physiological saline or a physiological saline solution of R FRP-1 (80 nmo 1 / mL) was intravenously administered at 1 mL ZK g from the tube.
  • Blood was collected from the nod vein by 30 O 1 at 1, 3, 5, and 15 minutes after the start of intravenous administration. The collected blood was centrifuged (13,000 rpm, 5 minutes) using a micro high-speed refrigerated centrifuge (MR-150, Tomi Issei), and the supernatant (plasma) was collected.
  • Blood glucagon levels Glucagon kit "Daiichi” (Daiichi Radioisotope Laboratories), blood insulin levels rat insulin [125 1] was measured using a thickness Si system (Ame rsh am B ioscie nc es ). As shown in Fig. 2, the RFRP-1 administration group showed a significant (p ⁇ 0.01) increase in blood glucagon concentration 2 minutes after administration and a significant increase 5 minutes after administration compared to the control group. ⁇ 0.01) The rise continued. On the other hand, blood insulin levels did not change with RFRP-1 administration (Fig. 3).
  • the skull was exposed and a hole was drilled in the bone using a dental drill to implant a guide cannula AG-12 (inner diameter 0.4 mm, outer diameter 0.5 mm, Acom).
  • a guide cannula AG-12 inner diameter 0.4 mm, outer diameter 0.5 mm, Acom
  • anchor screws were buried in four places around the area.
  • a stainless steel guide force neur, AG-12 was inserted so that its tip was located in the upper part of the lateral ventricle.
  • the localization coordinates are: AP: -0.8 mm, L: 1. 5 mm, H: 4.5 mm.
  • the guide force neura was fixed to the skull with flash glue, dental cement and anchor screws.
  • the guide cannula was inserted with a stainless steel dummy force cannula, AD-12 (outer diameter 35 mm, Acom), and fixed with Cabinite (Acom). After surgery, rats were housed in individual cages. The recovery period was one week after the operation, and handling was sufficiently performed during that period.
  • rats were placed in a shock chamber for 2 minutes as a training session, followed by 30 minutes of sound stimulation, followed immediately by electrical stimulation. Repeated (5 minutes in total). After the test, it was left in the chamber for 2 minutes and then returned to its original cage. Next, at 24 hours (day 1) and 48 hours (day 2) after the above training, the rats were placed in the same chamber as the training, and 30 seconds of sound stimulation were performed as in the training 5 times. They were given at the appropriate timing and placed in a chamber for 5 minutes.
  • the behavior analysis was performed using analysis software FrezeFrame (Actimetric). Freezing was defined as the behavior with a change rate of 15 or less observed by sound stimulation.
  • RFRP-1 (3 nmo 1) and saline (Otsuka Pharmaceutical) were administered intraventricularly before and after training and before testing.
  • the number of experimental animals was 12 for each group.
  • the directions for bringing the test animals to the laboratory were changed each time, and the experimental animals were kept in a room separate from the room where the experiment was performed.
  • the freezing rate was significantly reduced on the second day in the RFRP-1 administration group as compared to the saline administration group (saline administration group: 46.5%, RFRP administration group: 35). . Five%) . From these results, it was found that RFRP-1 has a memory erasure promoting effect.
  • RFRP and OT7T 022 or the DNA or ⁇ T 7 T 022 agonists that encode them are, for example, ⁇ glucagon secretion enhancer, blood glucose increasing agent, urine production enhancer, memory erasure enhancer (an erasure enhancer for bad memories) Or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic It is useful as a prophylactic or therapeutic agent for retinopathy, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity, cancer, etc.
  • Angonist is, for example, ⁇ glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory decrease inhibitor), or diabetes, glucose intolerance, ketosis, acidosis , Diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturnal enuresis, hypolipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, digestion It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for poor, memory and learning disorders.

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Abstract

RFRP, OT7T022, DNA encoding the same and an agonist to OT7T022 are useful as pancreatic glucagon secretion promoters, hyperglycemic agents or urine formation promoters, while an antagonist to OT7T022 is useful as a pancreatic glucagon secretion inhibitor, a hypoglycemic agent or a urine formation inhibitor.

Description

明 細 書  Specification

RFRPおよび〇T 7 TO 22の新規用途 技術分野 New applications for RFRP and 〇T 7 TO 22

本発明は、 RFRPおよび RFRPのレセプ夕一蛋白質である OT 7 T 0 22の新規用途に関する。 背景技術  The present invention relates to a novel use of RFRP and OT7T022, a receptor protein of RFRP. Background art

新規な受容体 OT7T022とそれに結合する C末端が L PL RF amide 様、 LPL RS amide様、 LPQ RF amide様または L P L RL amide様の ペプチド （RFRP— 1、 RFRP— 2、 RFRP— 3) が報告されている （ WO00Z29441号） 。  Novel receptor OT7T022 and its binding C-terminal LPL RF amide-like, LPL RS amide-like, LPQ RF amide-like or LPL RL amide-like peptides (RFRP-1, RFRP-2, RFRP-3) (WO00Z29441).

OT7T 022と RFRP— 1、 RFRP- 2, RFRP—3がプロラクチ ン分泌に関与していることが報告されている （W〇01 66134号） 。  It has been reported that OT7T022 and RFRP-1, RFRP-2, and RFRP-3 are involved in prolactin secretion (W-0166134).

RFRP- 1に対応する NP S Fや RFRP— 3に対応する NPVFが OT 7 TO 22に結合し、 抗ォピオイドに関与していることが報告されている （The Journal of Biological Chemistry, vol.276, No.40, p36961-36969, 2001) 。 しかし、 RFRPおよび OT 7 T 022の生体内における機能および作用機 序については、 さらに解明すべき点が数多く残されている。  It has been reported that NP SF corresponding to RFRP-1 and NPVF corresponding to RFRP-3 bind to OT 7 TO 22 and participate in anti-opioids (The Journal of Biological Chemistry, vol.276, No. .40, p36961-36969, 2001). However, there are many points left to be elucidated further about the functions and action mechanisms of RFRP and OT7T022 in vivo.

本発明は、 RFRPおよび〇T 7 T022のさらなる機能を解明し、 新たな 医薬を提供することを課題とする。 発明の開示  An object of the present invention is to elucidate further functions of RFRP and ΔT 7 T022, and to provide a new medicine. Disclosure of the invention

本発明者らは、 上記の課題に鑑み、 鋭意研究を重ねた結果、 RFRPが従来 知られている作用と全く異なる滕グルカゴン分泌促進作用、 血糖上昇作用、 記 憶消去促進作用などを有することを見出した。 本発明者らは、 これらの知見に 基づいて、 さらに検討を重ねた結果、 本発明を完成するに至った。  The present inventors have conducted intensive studies in view of the above problems, and as a result, have found that RFRP has a Teng-glucagon secretion promoting action, a blood glucose increasing action, a memory erasing promoting action, etc., which are completely different from conventionally known actions. I found it. The present inventors have further studied based on these findings, and as a result, have completed the present invention.

すなわち、 本発明は、 〔1〕 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミドも しくはそのエステルまたはその塩を含有してなる滕グルカゴン分泌促進剤、 血 糖上昇剤、 尿生成促進剤、 記憶消去促進剤 （嫌な記憶の消去促進剤） 、 または 肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インス リン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インス リノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性または癌の予防 ·治療剤、 〔2〕 ポリペプチドが配列番号： 1、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号 ： 7、 配列番号： 9または配列番号： 2 2で表されるアミノ酸配列からなるポ リペプチドである上記 〔1〕 記載の剤、 That is, the present invention [1] a polypeptide containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof Teng Glucagon secretagogue, blood sugar increasing agent, urine production enhancer, memory elimination enhancer (bad elimination enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, Prevention and treatment of dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer, [2] Polypeptide is SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22 Listed agents,

〔3〕 部分ペプチドが、  (3) the partial peptide is

( i ) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 8 8番 目 （Leu) 〜第 9 2番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 8 7番目 （Asn) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜8 7個のアミノ酸が付加 していてもよいアミノ酸配列からなるペプチド （ヒト R F R P— 1 ) 、  (i) It contains the 8th (Leu) to 92nd (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, and at the N-terminal side of the amino acid sequence, 1 to 87 amino acids counted from the C-terminus of the 1st (Met) to 87th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1; Peptide (human RFRP-1),

(i i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1 番目 （Ser) 〜第 1 1 2番目 （Ser) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配 列の N末端側に、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜 第 1 0 0番目 （Arg) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜1 0 0個のアミノ 酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるペプチド（ヒト R F R P— 2 )、 (ii) contains the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, and is N-terminal to the amino acid sequence In addition, 1 to 100 amino acids counted from the C-terminal of the first (Met) to 100th (Arg) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 are added. A peptide consisting of a good amino acid sequence (human RFRP-2),

(i i i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1 2 7 番目 （Leu) 〜第 1 3 1番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配 列の N末端側に、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜 第 1 2 6番目 （Asn) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜1 2 6個のアミノ 酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるペプチド（ヒト R F R P— 3 )、(iii) contains the amino acid sequence of the 127th (Leu) to 131st (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, and is N-terminal to the amino acid sequence And 1 to 126 amino acids counted from the C-terminal of the first (Met) to 126th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1. A peptide consisting of a good amino acid sequence (human RFRP-3),

(iv) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 8 8番目 （Leu) 〜第 9 2番 目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に、 配列番号 ： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 8 7番目 （Asn) のアミ ノ酸配列の C末端から数えて 1〜 87個のアミノ酸が付加していてもよいアミ ノ酸配列からなるペプチド （ゥシ RFRP— 1) 、 (iv) It contains the 8th (Leu) to 92nd (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, and the N-terminal side of the amino acid sequence has SEQ ID NO: 1. The first (Met) to 87th (Asn) amino acids in the represented amino acid sequence A peptide consisting of an amino acid sequence to which 1 to 87 amino acids may be added, counting from the C-terminus of the amino acid sequence (ゥ RFRP-1);

(V) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 101番目 （Ser) 〜第 1 1 2番目 （Ser) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に、 配列 番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 100番目 （Arg) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜 100個のアミノ酸が付加していても. よいアミノ酸配列からなるペプチド （ゥシ RFRP— 2) 、  (V) It contains the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, and is represented by SEQ ID NO: 1 on the N-terminal side of the amino acid sequence. 1 to 100 amino acids counted from the C-terminus of the 1st (Met) to 100th (Arg) amino acid sequence of the amino acid sequence to be added. A peptide consisting of a good amino acid sequence (ゥ RFRP— 2),

(vi) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 127番目 （Leu) 〜第 13 1番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に、 配列 番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 126番目 （Asn) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜126個のアミノ酸が付加していても よいアミノ酸配列からなるペプチド （ゥシ RFRP— 3) 、  (vi) It contains the 127th (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, and is represented by SEQ ID NO: 1 on the N-terminal side of the amino acid sequence. Peptide consisting of an amino acid sequence with 1 to 126 amino acids counted from the C-terminus of the 1st (Met) to 126th (Asn) amino acid sequence (ゥ RFRP-3) ,

(vii) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 90番目 （Leu) 〜第 94 番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に、 配列番 号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 89番目 （Asn) のァ ミノ酸配列の C末端から数えて 1〜 89個のアミノ酸が付加していてもよいァ ミノ酸配列からなるペプチド （マウス RFRP— 1) 、  (vii) It contains the 90th amino acid sequence (Leu) to the 94th amino acid sequence (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, and is represented by SEQ ID NO: 1 on the N-terminal side of the amino acid sequence. Peptides consisting of an amino acid sequence to which 1 to 89 amino acids can be added, counting from the C-terminus of the amino acid sequence at the 1st (Met) to 89th (Asn) amino acid sequence (mouse RFRP — 1),

(viii) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 121番目 （Leu) 〜第 1 25番目 (Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に、 配 列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 120番目 （Ser ) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜120個のアミノ酸が付加していて もよいアミノ酸配列からなるペプチド （マウス RFRP— 3) 、  (viii) contains the 121st (Leu) to 125th (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, and is represented by SEQ ID NO: 1 on the N-terminal side of the amino acid sequence. Peptide (mouse RFRP-3) consisting of an amino acid sequence with 1 to 120 amino acids counted from the C-terminus of the 1st (Met) to 120th (Ser) amino acid sequence to be added ,

(ix) 配列番号： 7または 22で表わされるアミノ酸配列の第 90番目 （Leu) 〜第 94番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に 、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 89番目 （Asn ) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜89個のアミノ酸が付加していても よいアミノ酸配列からなるペプチド （ラット RFRP— 1) 、  (ix) SEQ ID NO: contains the amino acid sequence from the 90th (Leu) to the 94th (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22, and is represented by SEQ ID NO: 1 on the N-terminal side of the amino acid sequence. Consisting of an amino acid sequence that may have 1 to 89 amino acids counted from the C-terminus of the first (Met) to 89th (Asn) amino acid sequence (rat RFRP-1) ,

.(X) 配列番号： 7または 22で表わされるアミノ酸配列の第 121番目 （Leu ) 〜第 125番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端 側に、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 120番 目 （Ser) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜120個のアミノ酸が付加し ていてもよいアミノ酸配列からなるペプチド （ラット RFRP— 3) 、 (X) contains the 121st (Leu) -125th (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22, and the N-terminal of the amino acid sequence On the side, 1 to 120 amino acids counted from the C-terminal of the first (Met) to 120th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 may be added. Sequence peptide (rat RFRP-3),

(xi) 上記 （i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が 付加したアミノ酸配列からなるペプチド、  (xi) a peptide having an amino acid sequence obtained by adding 1 to 5 amino acids to the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X),

(xii) 上記 （ i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が 揷入されたァミノ酸配列からなるぺプチド、  (xii) a peptide consisting of an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids have been inserted into the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X),

(xiii) 上記 （ i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のァミノ 酸で置換されたァミノ酸配列からなるペプチド、 または  (xiii) a peptide comprising an amino acid sequence substituted with 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X), or

(xiv) 上記 （xi) 〜 （xiii) の付加 ·挿入 ·置換を組み合わせたアミノ酸配列 からなるペプチドである上記 〔1〕 記載の剤、  (xiv) the agent of the above-mentioned (1), which is a peptide comprising an amino acid sequence obtained by combining addition, insertion and substitution of the above (xi) to (xiii);

〔4〕 部分ペプチドが、  (4) partial peptide,

(i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 56番 目 （Ser) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 70番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 73番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 81番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe ) または第 84番目 （Ser) 〜第 92番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるぺプ チド （ヒ卜 RFRP— 1) 、  (i) 56th (Ser) to 92nd (Phe), 70th (Met) to 92nd (Phe), 73rd position of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 A peptide (human RFRP) consisting of the amino acid sequence from (Met) to 92nd (Phe), 81st (Met) to 92nd (Phe) or 84th (Ser) to 92nd (Phe) — 1),

(ii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 101 番目 （Ser) 〜第 1 12番目 （Ser) のアミノ酸配列からなるペプチド （ヒト R F R P - 2 ) 、  (ii) a peptide (human RFRP-2) consisting of the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3,

(iii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 101 番目 （Asn) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 104番目 （Asn) 〜第 131番目 （Phe ) 、 第 1 15番目 （Asn) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 124番目 （Val) 〜第 1 31番目 （Phe) 、 第 125番目 （Pro) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 126番目 (Asn) 〜第 131番目 （Phe) または第 127番目 （Leu) 〜第 131番目 （Phe ) のアミノ酸配列からなるペプチド （ヒト RFRP— 3) 、  (iii) 101st (Asn) to 131st (Phe), 104th (Asn) to 131st (Phe), 115th of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 (Asn)-131st (Phe), 124th (Val)-131st (Phe), 125th (Pro)-131st (Phe), 126th (Asn)-131st (Phe) or a peptide consisting of the 127th (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequence (human RFRP-3),

(iv) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 58番目 （Ser) 〜第 92番 目 （Phe) 、 第 70番目 （Lys) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 73番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 81番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe) または第 84番目 （ Ser) 〜第 92番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド （ゥシ RFRP— 1) 、 (iv) The 58th amino acid (Ser) to the 92nd amino acid (Phe), the 70th amino acid (Lys) to the 92nd amino acid (Phe), and the 73rd amino acid sequence (Met) to the 72nd amino acid of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5. 92nd (Phe), 81st (Met)-92nd (Phe) or 84th ( A peptide consisting of the amino acid sequence from Ser) to 92nd (Phe) (ゥ RFRP-1),

(V) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 101番目 （Ser) 〜第 1 1 2番目 （Ser) のアミノ酸配列からなるペプチド （ゥシ RFRP— 2) 、 (vi) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 101番目 （Ser) 〜第 13 1番目 （Phe) 、 第 104番目 （Ala) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 115番目 （ Asn) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 124番目 （Val) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 125番目 （Pro) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 126番目 （Asn) 〜第 131 番目 （Phe) または第 127番目 （Leu) 〜第 131番目 （Phe) のアミノ酸配列 からなるペプチド （ゥシ RFRP— 3) 、  (V) a peptide consisting of the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (ゥ RFRP-2); (vi) SEQ ID NO: 5 101st (Ser) to 131st (Phe), 104th (Ala) to 131st (Phe), 115th (Asn) to 131st (Phe), 124th (Val)-131st (Phe), 125th (Pro)-131st (Phe), 126th (Asn)-131st (Phe) or 127th (Leu)-131st Peptide consisting of the amino acid sequence of (Phe) (ゥ RFRP-3),

(vii) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 58番目 （Ser) 〜第 94 番目 （Phe) 、 第 72番目 （Val) 〜第 94番目 （Phe) 、 第 75番目 （Met) 〜 第 94番目 （Phe) 、 第 83番目 （Val) 〜第 94番目 （Phe) または第 84番目 (Pro) 〜第 94番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド （マウス RFR P— 1 ) 、  (vii) 58th (Ser) to 94th (Phe), 72nd (Val) to 94th (Phe), 75th (Met) to 94th of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) amino acid sequence (mouse RFR P-1),

(viii) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 118番目 （Phe) 〜第 1 25番目 （Phe) 、 第 119番目 （Pro) 〜第 125番目 （Phe) 、 第 120番目 (viii) 118th (Phe) to 125th (Phe), 119th (Pro) to 125th (Phe), 120th amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9

(Ser) 〜第 125番目 （Phe) または第 121番目 （Leu) 〜第 125番目 （Phe ) のアミノ酸配列からなるペプチド （マウス RFRP— 3) 、 A peptide consisting of the amino acid sequence of (Ser) -125th (Phe) or 121st (Leu) -125th (Phe) (mouse RFRP-3),

(ix) 配列番号： 7または 22で表わされるアミノ酸配列の第 58番目 （Ser) 〜第 94番目 （Phe) 、 第 72番目 （Asp) 〜第 94番目 （Phe) 、 第 75番目 （ Met) 〜第 94番目 （Phe) 、 第 83番目 （Val) 〜第 94番目 （Phe) または第 84番目 （Pro) 〜第 94番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド （ラッ 卜 RFRP— 1) 、  (ix) 58th (Ser) to 94th (Phe), 72nd (Asp) to 94th (Phe), 75th (Met) to 75th (Ser) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 A peptide consisting of the 94th (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) amino acid sequence (rat RFRP-1);

(X) 配列番号： 7または 22で表わされるアミノ酸配列の第 118番目 （Phe ) 〜第 125番目 （Phe) 、 第 1 19番目 （Pro) 〜第 125番目 （Phe) 、 第 1 20番目 （Ser) 〜第 125番目 （Phe) または第 121番目 （Leu) 〜第 125 番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド （ラット RFRP—3) 、  (X) 118th (Phe) -125th (Phe), 119th (Pro) -125th (Phe), 120th (Ser) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 ) To the 125th (Phe) or 121st (Leu) to 125th (Phe) amino acid sequence (rat RFRP-3),

(xi) 上記 （ i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のアミノ酸 が欠失したアミノ酸配列からなるペプチド （欠失型） 、 (xi) 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the above peptides (i) to (X) A peptide consisting of an amino acid sequence in which is deleted (deletion type),

(xii) 上記 （ i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が 付加したアミノ酸配列からなるペプチド （付加型） 、  (xii) a peptide (addition type) comprising an amino acid sequence obtained by adding 1 to 5 amino acids to the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X),

(xiii) 上記 （ i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜5個のアミノ酸 が挿入されたアミノ酸配列からなるペプチド （挿入型） 、  (xiii) a peptide (insertion type) comprising an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids have been inserted into the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X),

(xiv) 上記 （ i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のアミノ酸 で置換されたアミノ酸配列からなるペプチド （置換型） 、 または  (xiv) a peptide (substituted type) comprising an amino acid sequence substituted with 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X), or

(XV) 上記 （xi) 〜 （xiv) の欠失 ·付加: '挿入 ·置換を組み合わせたアミノ酸 配列からなるペプチドである上記 〔1〕 記載の剤、  (XV) The agent according to the above (1), which is a peptide comprising an amino acid sequence obtained by combining the deletion and addition of (xi) to (xiv) above:

〔5〕 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリべプチドまたはその部分ペプチドをコードする D N Aを含有してなる塍グルカゴン分泌促進剤、 血糖上昇剤、 尿生成促進剤、 記憶 消去促進剤 （嫌な記憶の消去促進剤） 、 または肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿 病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インスリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾 患、 脂肪毒性または癌の予防 ·治療剤、  [5] a glucagon secretion promoter comprising a DNA encoding a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof, Hypoglycemic agent, urine production enhancer, memory elimination enhancer (disabling memory elimination enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance Syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer prevention and treatment,

〔6〕 DN Aが配列番号： 1、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配列番号： 9または配列番号： 22で表されるアミノ酸配列からなるポリぺプ チドをコードする DN Aである上記 〔5〕 記載の剤、  [6] DNA encodes a polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22 The agent according to the above (5), which is DNA,

〔7〕 DNAが、  (7) DNA is

(i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 56番 目 （Ser) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 70番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 73番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 81番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe ) または第 84番目 （Ser) 〜第 92番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるぺプ チド （ヒ卜 RFRP— 1) 、  (i) 56th (Ser) to 92nd (Phe), 70th (Met) to 92nd (Phe), 73rd position of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 A peptide (human RFRP) consisting of the amino acid sequence from (Met) to 92nd (Phe), 81st (Met) to 92nd (Phe) or 84th (Ser) to 92nd (Phe) — 1),

(ii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 101 番目 （Ser) 〜第 1 12番目 （Ser) のアミノ酸配列からなるペプチド （ヒト R F R P - 2 ). 、  (ii) a peptide consisting of the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 (human RFRP-2);

(iii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 101 番目 （Asn) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 104番目 （Asn) 〜第 131番目 （Phe ) 、 第 1 15番目 （Asn) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 124番目 （Val) 〜第 1 31番目 （Phe) 、 第 125番目 （Pro) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 126番目(iii) No. 101 of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 (Asn)-131st (Phe), 104th (Asn)-131st (Phe), 115th (Asn)-131st (Phe), 124th (Val)-1st 31st (Phe), 125th (Pro)-131st (Phe), 126th

(Asn) 〜第 131番目 （Phe) または第 127番目 （Leu) 〜第 131番目 （Phe ) のアミノ酸配列からなるペプチド （ヒト RFRP— 3) 、 A peptide consisting of the amino acid sequence of (Asn) -131st (Phe) or 127th (Leu) -131st (Phe) (human RFRP-3),

(iv) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 58番目 （Ser) 〜第 92番 目 （Phe) 、 第 70番目 （Lys) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 73番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 81番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe) または第 84番目 （ Ser) 〜第 92番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド （ゥシ RFRP— 1) 、  (iv) The 58th amino acid (Ser) to the 92nd amino acid (Phe), the 70th amino acid (Lys) to the 92nd amino acid (Phe), the 73rd amino acid sequence (Met) to the 72nd amino acid of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 A peptide consisting of the 92nd (Phe), 81st (Met) to 92nd (Phe) or 84th (Ser) to 92nd (Phe) amino acid sequence (ゥ RFRP-1),

(V) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 101番目 （Ser) 〜第 11 2番目 （Ser) のアミノ酸配列からなるペプチド （ゥシ RFRP— 2) 、  (V) a peptide consisting of the 101st (Ser) -112nd (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (ゥ RFRP-2);

(vi) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 101番目 （Ser) 〜第 13 1番目 （Phe) 、 第 104番目 （Ala) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 1 15番目 （ Asn) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 124番目 （Val) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 125番目 （Pro) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 126番目 （Asn) 〜第 131 番目 （Phe) または第 127番目 （Leu) 〜第 131番目 （Phe) のアミノ酸配列 からなるペプチド （ゥシ RFRP— 3) 、  (vi) The 101st (Ser) to 131st (Phe), the 104th (Ala) to the 131st (Phe), and the 115th (Asn) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 131st (Phe), 124th (Val)-131st (Phe), 125th (Pro)-131st (Phe), 126th (Asn)-131st (Phe) or A peptide consisting of the 127th (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequence (ゥ RFRP-3),

(vii) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 58番目 （Ser) 〜第 94 番目 （Phe) 、 第 72番目 （Val) 〜第 94番目 （Phe) 、 第 75番目 （Met) 〜 第 94番目 （Phe) 、 第 83番目 （Val) 〜第 94番目 （Phe) または第 84番目 (Pro) 〜第 94番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド （マウス RFR P— 1) 、  (vii) 58th (Ser) to 94th (Phe), 72nd (Val) to 94th (Phe), 75th (Met) to 94th of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 (Phe), the 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) amino acid sequence (mouse RFR P-1),

(viii) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 1 18番目 （Phe) 〜第 1 25番目 （Phe) 、 第 1 19番目 （Pro) 〜第 125番目 （Phe) 、 第 120番目 (viii) 118th (Phe) to 125th (Phe), 119th (Pro) to 125th (Phe), 120th amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9

(Ser) 〜第 125番目 （Phe) または第 121番目 （Leu) 〜第 125番目 （Phe ) のアミノ酸配列からなるペプチド （マウス RFRP— 3) 、 A peptide consisting of the amino acid sequence of (Ser) -125th (Phe) or 121st (Leu) -125th (Phe) (mouse RFRP-3),

. (ix) 配列番号： 7または 22で表わされるアミノ酸配列の第 58番目 （Ser) 〜第 94番目 （Phe) 、 第 72番目 （Asp) 〜第 94番目 （Phe) 、 第 75番目 （ Met) 〜第 94番目 （Phe) 、 第 83番目 （Val) 〜第 94番目 （Phe) または第 84番目 （Pro) 〜第 94番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド （ラッ 卜 RFRP - 1) 、 (ix) The 58th (Ser) to 94th (Phe), the 72nd (Asp) to the 94th (Phe), and the 75th (the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22) A peptide consisting of the amino acid sequence from Met) to 94th (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) (rat RFRP-1) ,

(X) 配列番号： 7または 22で表わされるアミノ酸配列の第 1 18番目 （Phe ) 〜第 125番目 （Phe) 、 第 1 19番目 （Pro) 〜第 125番目 （Phe) 、 第 1 20番目 （Ser) 〜第 125番目 （Phe) または第 121番目 （Leu) 〜第 125 番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド （ラット RFRP— 3) 、  (X) 118th (Phe) to 125th (Phe), 119th (Pro) to 125th (Phe), and 120th (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 A peptide consisting of the amino acid sequence from Ser) to 125th (Phe) or 121st (Leu) to 125th (Phe) (rat RFRP-3),

(xi) 上記 U) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のアミノ酸 が欠失したアミノ酸配列からなるペプチド （欠失型） 、  (xi) a peptide (deletion type) comprising an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptides U) to (X) are deleted,

(xii) 上記 （i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が 付加したアミノ酸配列からなるペプチド （付加型） 、  (xii) a peptide (addition type) comprising an amino acid sequence obtained by adding 1 to 5 amino acids to the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X),

(xiii) 上記 （i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜5個のアミノ酸 が挿入されたアミノ酸配列からなるペプチド （挿入型） 、  (xiii) a peptide (insertion type) comprising an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids have been inserted into the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X),

(xiv) 上記 （i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のアミノ酸 で置換されたアミノ酸配列からなるペプチド （置換型） 、 または  (xiv) a peptide (substituted type) comprising an amino acid sequence substituted with 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X), or

(XV) 上記 （xi) 〜 （xiv) の欠失 ·付加 ·挿入 ·置換を組み合わせたアミノ酸 配列からなるペプチド、  (XV) a peptide comprising an amino acid sequence obtained by combining deletion, addition, insertion, and substitution of the above (xi) to (xiv);

をコードする DN Aである上記 〔5〕 記載の剤、 The agent according to the above (5), which is a DNA encoding

〔8〕 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリべプチドまたはその部分ペプチドをコードする D N Aを含有してなる糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性 神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能 障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良、 記憶 学習障害、 肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難 症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギ 一、 インスリノ一マ、 脂肪毒性または癌の診断剤、  [8] diabetes, impaired glucose tolerance, comprising a DNA encoding a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof; Ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, Indigestion, memory and learning disorders, obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergic, insulinoma, Lipotoxic or cancer diagnostics,

〔9〕 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミドも しくはそのエステルまたはその塩に対する抗体を含有してなる滕グルカゴン分 泌抑制剤、 血糖低下剤、 尿生成抑制剤、 記憶学習低下抑制剤 （記憶低下抑制剤 ) 、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障 害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良または記憶学 習障害の予防 ·治療剤、 [9] a polypeptide containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an antibody against an ester thereof, or a salt thereof; Tenguru glucagon min Lactation inhibitor, hypoglycemic agent, urinary production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory decline inhibitor), or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retina Prevention and treatment of dysfunction, frequent urination, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion or memory learning disorder,

〔1 0〕 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミド もしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体を含有してなる糖尿病、 耐糖 能障害、 ケ卜ーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿 病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減 少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良、 記憶学習障害、 肥満、 高脂血症、 2 型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インスリノ一マ、 脂肪毒性 または癌の診断剤、  [10] diabetes comprising an antibody against a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof , Impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, bone loss Disease, arteriosclerosis, thrombotic disease, dyspepsia, memory learning disorder, obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy Diagnostics for insulin allergy, insulinoma, lipotoxicity or cancer,

〔1 1〕 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するポリべプチドまたはその部分ペプチドをコードする D N Aに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンス D N Aを含有 してなる塍グルカゴン分泌抑制剤、 血糖低下剤、 尿生成抑制剤、 記憶学習低下 抑制剤 （記憶低下抑制剤） 、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 ァシド 一シス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良または記憶学習障害の予防 ·治療剤、  [11] contains a nucleotide sequence complementary to the DNA encoding the polypeptide or the partial peptide thereof having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or a portion thereof Glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory decrease inhibitor), or diabetes, glucose intolerance, ketosis, acidosis, diabetes Sexual neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion or memory learning Prevention and treatment of disorders

〔1 2〕 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を増加 させる化合物またはその塩を含有してなる滕グルカゴン分泌促進剤、 血糖上昇 剤、 尿生成促進剤、 記憶消去促進剤 （嫌な記憶の消去促進剤） 、 または肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵 抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インスリノ一 マ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性または癌の予防 ·治療剤、 〔1 3〕 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を減少 させる化合物またはその塩を含有してなる塍グルカゴン分泌抑制剤、 血糖低下 剤、 尿生成抑制剤、 記憶学習低下抑制剤 （記憶低下抑制剤） 、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良または記憶学習障害の予防 ·治療 剤、 [12] Tengurugagon containing a compound or a salt thereof that increases the expression level of a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof Secretagogues, hyperglycemic agents, urinary production enhancers, memory elimination enhancers (an aversive memory elimination enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria , Insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer prevention and treatment, [13] Glucagon comprising a compound having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a compound capable of reducing the expression level of a partial peptide thereof, or a salt thereof Secretion suppressant, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory decline inhibitor), or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy , Frequent urination, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion or memory learning prevention / treatment agent,

〔1 4〕 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質〇T 7 T O 2 2、 その部分べプチ ドまたはその塩を含有してなる滕グルカゴン分泌促進剤、 血糖上昇剤、 尿生成 促進剤、 記憶消去促進剤 （嫌な記憶の消去促進剤） 、 または肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インスリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性または癌の予防，治療剤、  [14] Receptor protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, T7TO22, a partial peptide thereof or a salt thereof Tenguru glucagon secretagogue, hyperglycemic agent, urine production enhancer, memory elimination enhancer (an aversive memory elimination enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema Dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer prevention and treatment,

〔1 5〕 O T 7 T 0 2 2が配列番号： 1 1、 配列番号： 2 4または配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質である上記 〔1 4〕 記 載の剤、  [15] the agent of the above-mentioned [14], wherein the OT7T022 is a receptor protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 27;

〔1 6〕 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2またはその部分べ プチドをコードする D N Aを含有してなる塍グルカゴン分泌促進剤、 血糖上昇 剤、 尿生成促進剤、 記憶消去促進剤 （嫌な記憶の消去促進剤） 、 または肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵 抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インスリノ一 マ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性または癌の予防 ·治療剤、  [16] a receptor protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 OT7T022 or a DNA encoding a partial peptide thereof塍 Glucagon secretagogue, blood sugar increasing agent, urine production enhancer, memory elimination enhancer (an aversive memory elimination enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, urination Prevention and treatment of dysfunction, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer,

〔1 7〕 D N Aが配列番号： 1 1、 配列番号： 2 4または配列番号： 2 7で表 されるアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質〇T 7 T O 2 2またはその部分 ペプチドをコードする D N Aである上記 〔1 6〕 記載の剤、  [17] The DNA as described above, wherein the DNA encodes a receptor protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 27, or T7TO22 or a partial peptide thereof. (16) the agent according to the above,

〔1 8〕 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2またはその部分べ プチドをコードする D N Aを含有してなる糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜 尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓 性疾患、 消化不良、 記憶学習障害、 肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎 縮、 インスリンアレルギー、 インスリノーマ、 脂肪毒性または癌の診断剤、[18] identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 Receptor protein containing the amino acid sequence of OT7T022 or DNA encoding a partial peptide thereof Diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic Retinopathy, frequent urination, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion, memory learning disorder, obesity, hyperlipidemia, Diagnostic agents for type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, lipotoxicity or cancer,

〔1 9〕 配列番号： 1 1で表されるァミノ:酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2、 その部分べプチ ドまたはその塩に対する抗体を含有してなる滕グルカゴン分泌抑制剤、 血糖低 下剤、 尿生成抑制剤、 記憶学習低下抑制剤 （記憶低下抑制剤） 、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良または記憶学習障害の予防 ·治療 剤、 [19] Amino acid represented by SEQ ID NO: 11: Receptor protein OT7TO22 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the acid sequence, containing an antibody against a partial peptide or a salt thereof Tenguru glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory decrease inhibitor), or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy , Diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturnal enuresis, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion or memory disorder

〔2 0〕 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2、 その部分べプチ ドまたはその塩に対する抗体を含有してなる糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜 尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓 性疾患、 消化不良、 記憶学習障害、 肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 ィンスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎 縮、 インスリンアレルギー、 インスリノーマ、 脂肪毒性または癌の診断剤、  [20] A receptor protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, OT7TO22, containing an antibody against a partial peptide or a salt thereof. Diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, bone loss Disease, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion, memory and learning disorders, obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipodystrophy Diagnostic agents for contraction, insulin allergy, insulinoma, lipotoxicity or cancer,

[ 2 1〕 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 O T 7 T 0 2 2またはその部分べ プチドをコードする D N Aに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアン チセンス D N Aを含有してなる塍グルカゴン分泌抑制剤、 血糖低下剤、 尿生成 抑制剤、 記憶学習低下抑制剤 （記憶低下抑制剤） 、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケト一シス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜 症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動 脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良または記憶学習障害の予防 ·治療剤、 [21] Receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, complementary to the DNA encoding the partial peptide thereof Glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory decrease inhibitor), or diabetes, glucose tolerance Disorders, ketolysis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retina Prevention and treatment of dysfunction, pollakiuria, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion or memory learning disorder,

〔2 2〕 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2、 その部分べプチ ドまたはその塩に対するァゴニストを含有してなる滕グルカゴン分泌促進剤、 血糖上昇剤、 尿生成促進剤、 記憶消去促進剤 （嫌な記憶の消去促進剤） 、 また は肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 イン スリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 イン スリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性または癌の予防 ·治療剤、 〔2 3〕 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 O T 7 T 0 2 2、 その部分べプチ ドまたはその塩に対するアン夕ゴニストを含有してなる滕グルカゴン分泌抑制 剤、 血糖低下剤、 尿生成抑制剤、 記憶学習低下抑制剤 （記憶低下抑制剤） 、 ま たは糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖 尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾 患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良または記憶学習障害 の予防 ·治療剤、  [22] A receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, or an agonist against the partial peptide or a salt thereof. Tenguru glucagon secretion enhancer, blood sugar increasing agent, urine production enhancer, memory elimination enhancer (disabling memory elimination enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, Prevention and treatment of edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes mellitus, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer, [23] SEQ ID NO: 1 Receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 1, or an agonist for its partial peptide or its salt Contained Teng-glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, memory-learning inhibitor (memory-lowering inhibitor), or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, sugar Urinary nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturnal enuresis, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion or memory learning disorder Prophylactic and therapeutic agents,

〔2 4〕 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 O T 7 T 0 2 2またはその部分べ プチドの発現量を増加させる化合物またはその塩を含有してなる塍グルカゴン 分泌促進剤、 血糖上昇剤、 尿生成促進剤、 記憶消去促進剤 （嫌な記憶の消去促 進剤） 、 または肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿 困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンァレ ルギ一、 インスリノ一マ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性または癌の予防 · 治療剤、  [24] a compound that increases the expression level of receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 Or a salt thereof containing glucagon secretion enhancer, blood sugar increasing agent, urine production enhancer, memory elimination enhancer (an aversive memory elimination enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, Prevention and treatment of hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer,

〔2 5〕 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2またはその部分べ プチドの発現量を減少させる化合物またはその塩を含有してなる滕グルカゴン 分泌抑制剤、 血糖低下剤、 尿生成抑制剤、 記憶学習低下抑制剤 （記憶低下抑制 剤） 、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケト一シス、 アシドーシス、 糖尿病性神経 障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良または記憶学 習障害の予防 ·治療剤、 [25] a compound or a salt thereof that reduces the expression level of the receptor protein OT7TO22 or a partial peptide thereof having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11; Tenguru glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory loss suppression containing Agent) or diabetes, impaired glucose tolerance, ketolysis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthrosis Prophylactic and therapeutic agents for osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic diseases, indigestion or memory learning disorders,

〔2 6〕 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミド もしくはそのエステルまたはその塩、 および （または） 配列番号： 1 1で表さ れるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するレセ プ夕ー蛋白質 O T 7 T O 2 2、 その部分ペプチドまたはその塩を用いることを 特徴とする塍グルカゴン分泌調節薬、 血糖調節薬または尿生成促進薬のスクリ [26] a polypeptide having an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof; and / or 11 Glucagon secretion characterized by using a receptor protein OT7TO22, or a partial peptide or a salt thereof, containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 1. Screens for modulators, glycemic regulators or urine production enhancers

—ニング方法、 —How to

〔2 7〕 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するポリぺプチド、 その部分べプチドもしくはそのアミド もしくはそのエステルまたはその塩、 および （または） 配列番号： 1 1で表さ れるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセ プター蛋白質 O T 7 T 0 2 2、 その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる 塍グルカゴン分泌調節薬、 血糖調節薬または尿生成抑制薬のスクリーニング用 十ッ卜、  [27] a polypeptide containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof or a salt thereof, and / or SEQ ID NO: 11 Receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 11, a partial peptide thereof or a salt thereof. For screening for blood glucose modulators or urine production inhibitors

〔2 8〕 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミド もしくはそのエステルまたはその塩、 および （または） 該ポリペプチド、 その 部分べプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と配列番 号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列 を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2、 その部分ペプチドまたはその塩 との結合性を変化させる化合物またはその塩を用いることを特徴とする滕グル カゴン分泌調節薬、 血糖調節薬または尿生成調節薬のスクリーニング方法、 [28] a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof, and / or the polypeptide A receptor protein OT7T022 containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 with its partial peptide, its amide, its ester, or its salt; A method for screening a Tenguru-cagon secretion regulator, a blood glucose regulator or a urine production regulator, which comprises using a compound or a salt thereof that changes the binding property to a partial peptide or a salt thereof,

〔2 9〕 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミド もしくはそのエステルまたはその塩、 および （または） 該ポリペプチド、 その 部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と配列番 号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列 を含有するレセプ夕一蛋白質〇T 7 T O 2 2、 その部分ペプチドまたはその塩 を含有してなる塍グルカゴン分泌調節薬、 血糖調節薬または尿生成調節薬のス クリーニング用キット、 [29] a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof, and / or the polypeptide , That SEQ ID NO: 11 Receptor protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by the partial peptide or its amide, its ester or its salt, T7TO22, its portion A glucagon secretion regulator containing a peptide or a salt thereof, a screening kit for a blood glucose regulator or a urine production regulator,

〔3 0〕 哺乳動物に対して、  [30] For mammals,

( i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミドも しくはそのエステルまたはその塩、  (i) a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof;

(i i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードする D N A、  (ii) a DNA encoding a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof,

(i i i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分べプチドの発現量を増加さ せる化合物またはその塩、  (iii) a compound or a salt thereof, which increases the expression level of a polypeptide or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1;

(iv) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 O T 7 T O 2 2、 その部分ペプチド またはその塩、  (iv) a receptor protein having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, OT7TO22, a partial peptide thereof or a salt thereof;

( V ) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 O T 7 T O 2 2またはその部分ぺプ チドをコードする D NA、  (V) a DNA encoding a receptor protein OT7TO22 or a partial peptide thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11;

(vi) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質〇T 7 T 0 2 2、 その部分ペプチド またはその塩に対するァゴニスト、 または  (vi) an agonist against the receptor protein 〇T7T022, a partial peptide thereof or a salt thereof having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11; or

(vi i) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2またはその部分ぺプ チドの発現量を増加させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴 とする塍グルカゴン分泌促進方法、 血糖上昇方法、 尿生成促進方法、 記憶消去 促進方法 （嫌な記憶の消去促進方法） 、 または肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿 病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インスリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾 患、 脂肪毒性または癌の予防 ·治療方法、 (vii) a compound that increases the expression level of a receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 or A method of promoting glucagon secretion, a method of increasing blood sugar, a method of promoting urine production, a method of promoting memory erasure (a method of promoting elimination of unpleasant memory), or obesity, hyperlipidemia, which comprises administering an effective amount of the salt. Type 2 diabetes, Hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer prevention and treatment methods,

〔3 1〕 哺乳動物に対して、  [31] For mammals,

( i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミドも しくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、  (i) a polypeptide containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, an antibody against a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof;

(i i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリべプチドまたはその部分べプチドをコードする D N Aに相補的な塩基配列またはその一部を含有するァンチセンス D N A、 (ii) a nucleotide sequence complementary to the DNA encoding the polypeptide containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof, or a part thereof Antisense DNA containing

(i i i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を減少さ せる化合物またはその塩、 (iii) a compound or a salt thereof, which reduces the expression level of a polypeptide containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof,

(iv) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 O T 7 T 0 2 2、 その部分ペプチド またはその塩に対する抗体、  (iv) an antibody against the receptor protein OT7T022, a partial peptide or a salt thereof, which has the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11;

( V ) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質ひ T 7 T 0 2 2またはその部分ぺプ チドをコードする D NAに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチ センス D NA、  (V) DNA encoding the receptor protein T7T022 or a partial peptide thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 An antisense DNA containing a complementary nucleotide sequence or a part thereof,

(vi) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質〇T 7 T O 2 2、 その部分ペプチド またはその塩に対するアンタゴニスト、 または  (vi) an antagonist to the receptor protein 〇T 7 T O 22, a partial peptide thereof or a salt thereof, containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11; or

(vi i) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 O T 7 T O 2 2またはその部分ぺプ チドの発現量を減少させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴 とする塍グルカゴン分泌抑制方法、 血糖低下方法、 尿生成抑制方法、 記憶学習 低下抑制方法 （記憶低下抑制方法） 、 または糖尿病、 而糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜 尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓 性疾患、 消化不良または記憶学習障害の予防 ·治療方法、 (vii) a compound that reduces the expression level of receptor protein OT7TO22 or a partial peptide thereof, which has the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 Or a method of inhibiting glucagon secretion, decreasing blood glucose, suppressing urine production, suppressing memory learning (controlling memory loss), or treating diabetes, metabolic dysfunction, or ketosis, which comprises administering an effective amount of a salt thereof. , Acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, night Urine, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion or memory learning prevention and treatment methods,

〔3 2〕 滕グルカゴン分泌促進剤、 血糖上昇剤、 尿生成促進剤、 記憶消去促進 剤 （嫌な記憶の消去促進剤） 、 または肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎 縮、 インスリンアレルギー、 インスリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒 性または癌の予防 ·治療剤を製造するための  [32] Teng-glucagon secretagogue, hyperglycemic agent, urine production enhancer, memory elimination enhancer (disgusting memory elimination enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension , Edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer.

( i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミドも しくはそのエステルまたはその塩、  (i) a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof;

(i i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードする D N A、  (ii) a DNA encoding a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof,

(i i i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を増加さ せる化合物またはその塩、  (iii) a compound or a salt thereof that increases the expression level of a polypeptide containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof,

(iv) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質〇T 7 T O 2 2、 その部分ペプチド またはその塩、  (iv) a receptor protein ΔT 7 T O 22 containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof, or a salt thereof;

( V ) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 O T 7 T O 2 2またはその部分ぺプ チドをコードする D NA、  (V) a DNA encoding a receptor protein OT7TO22 or a partial peptide thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11;

(vi) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質〇T 7 T O 2 2、 その部分ペプチド またはその塩に対するァゴニスト、 または  (vi) an agonist against the receptor protein ΔT 7 T O 22, a partial peptide thereof or a salt thereof having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11; or

(vi i) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2またはその部分ぺプ チドの発現量を増加させる化合物またはその塩の使用、  (vii) a compound that increases the expression level of a receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 or Use of that salt,

〔3 3〕 滕グルカゴン分泌抑制剤、 血糖低下剤、 尿生成抑制剤、 記憶学習低下 抑制剤 （記憶低下抑制剤） 、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 ァシド 一シス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良または記憶学習障害の予防 ·治療剤を製造するための [33] Teng glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, memory learning decrease Inhibitors (memory loss inhibitors) or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturnal enuresis, hyperlipidemia, sexual dysfunction For the manufacture of prophylactic and therapeutic agents for skin diseases, arthrosis, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic diseases, dyspepsia or memory learning disorders

( i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミドも しくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、  (i) a polypeptide containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, an antibody against a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof;

(i i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードする D N Aに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンス D NA、 (ii) a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a nucleotide sequence complementary to DNA encoding a partial peptide thereof or a part thereof Antisense DNA,

(i i i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリべプチドまたはその部分べプチドの発現量を減少さ せる化合物またはその塩、 (iii) a compound or a salt thereof, which reduces the expression level of a polypeptide or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1;

(iv) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 O T 7 T O 2 2、 その部分ペプチド またはその塩に対する抗体、  (iv) an antibody against a receptor protein OT7TO22 having an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof or a salt thereof,

( V ) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質〇T 7 T O 2 2またはその部分ぺプ チドをコードする D N Aに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチ センス D NA、  (V) SEQ ID NO: 11 Base complementary to DNA encoding receptor protein {T7TO22 or a partial peptide thereof, which has the same or substantially the same amino acid sequence as that represented by SEQ ID NO: 11 An antisense DNA containing the sequence or a portion thereof,

(vi) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 O T 7 T 0 2 2、 その部分ペプチド またはその塩に対するアン夕ゴニスト、 または .  (vi) a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, its partial peptide or a salt thereof, or an agonist. .

(vi i) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 O T 7 T O 2 2またはその部分ぺプ チドの発現量を減少させる化合物またはその塩の使用、  (vii) a compound that reduces the expression level of receptor protein OT7TO22 or a partial peptide thereof, which has the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 Or use of its salts,

〔3 4〕 塍グルカゴン分泌促進薬、 血糖上昇薬、 尿生成促進薬、 記憶消去促進 薬 （嫌な記憶の消去促進薬） 、 または肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎 縮、 インスリンアレルギー、 インスリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒 性、 癌などの予防 ·治療薬、 滕グルカゴン分泌抑制薬、 血糖低下薬、 尿生成抑 制薬、 記憶学習低下抑制薬 （記憶低下抑制薬） 、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜 症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動 脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良、 記憶学習障害などの予防 ·治療薬が〇T 7 T 022に結合することを確認する方法、 [34] 塍 Glucagon secretagogue, hyperglycemic drug, urine production enhancer, memory erasure enhancer (disgusting memory erasure enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension , Edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy Prophylactic / therapeutic drugs such as constriction, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity, cancer, Teng-glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine formation inhibitor, memory learning inhibitor (memory decrease Or diabetes, glucose intolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthrosis, How to confirm that prophylactic and therapeutic drugs such as osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic diseases, dyspepsia, memory learning disorders, etc. bind to 〇T7T022,

[35] ΟΤ 7Τ022を用いることを特.徴とする、塍グルカゴン分泌促進薬、 血糖上昇薬、 尿生成促進薬、 記憶消去促進薬 （嫌な記憶の消去促進薬） 、 また は肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 イン スリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 イン スリノ一マ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性、 癌などの予防 ·治療薬が ΟΤ 7 Τ 022に対するァゴニストであることを確認する方法、  [35] Τ 7Τ022, characterized by 塍 glucagon secretion enhancer, hyperglycemic drug, urine production enhancer, memory erasure enhancer (an aversive memory elimination enhancer), or obesity, high fat Blood, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity, Prevention and treatment of cancer, etc. How to confirm that the drug is an agonist against ΟΤ 7 Τ 022,

[36] ΟΤ7Τ022を用いることを特徴とする、滕グルカゴン分泌抑制薬、 血糖低下薬、 尿生成抑制薬、 記憶学習低下抑制薬 （記憶低下抑制薬） 、 または 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病 性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良、 記憶学習障害などの予 防 ·治療薬が ΟΤ7Τ022に対するアン夕ゴニストであることを確認する方 法、 および  [36] Teng-glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, memory learning inhibitor (memory-lowering inhibitor), or diabetes, glucose tolerance disorder, ketosis, acidosis, characterized by using ΟΤ7 用 い る 022 Diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturnal enuresis, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion, memory Prevention of learning disability, etc. · How to make sure that the remedy is an anthony gonist against ΟΤ7Τ022, and

〔37〕 各薬を ΟΤ7 TO 22に接触させた場合における、 各薬と〇T 7 TO 22との結合量を測定することを特徴とする上記 〔34〕 〜 〔36〕 記載のス クリーニング方法を提供する。 図面の簡単な説明  [37] The screening method according to any one of [34] to [36], wherein the amount of each drug bound to 〇T7TO22 when each drug is brought into contact with ΟΤ7TO22 is measured. provide. BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES

図 1は RFRP— 1を無麻酔下のラットに静脈投与した際の血中グルコース濃 度の変動を調べた結果を示す。 図中、 （一〇一） は生理食塩水投与群、 （一▲ ―) は RFRP— 1 1 nmo 1/kg投与群および (—園—） は RFRP— 1 10 nmo 1 / k g投与群の血中グルコース濃度を表す。 値は平均値士標 準偏差（me an土 SE) (n = 4) を示す。 *は生理食塩水投与群に比べて、 P値が 0. 05以下であることを示す。 Figure 1 shows the results of examining changes in blood glucose levels when RFRP-1 was intravenously administered to unanesthetized rats. In the figure, (1-1) is the blood group of the physiological saline administration group, (1--) is the blood group of the RFRP-11 1 nmo 1 / kg administration group, and (-en) is the blood group of the RFRP-1 10 nmo 1 / kg administration group. Represents medium glucose concentration. The values are average figures The quasi-deviation (mean earth SE) (n = 4) is shown. * Indicates that the P value is 0.05 or less as compared with the physiological saline administration group.

図 2は RFRP— 1を無麻酔下のラットに静脈投与した際の血中グルカゴン濃 度の変動を調べた結果を示す。 図中、 （―〇—） は生理食塩水投与群、 （一▲ ―) は RFRP— 1 1 nmo 1 /k g投与群および （—園—） は RFRP— 1 10 nmo 1 Zk g投与群の血中グルカゴン濃度を表す。 値は平均値土標 準偏差 （me an土 SE) (n = 4) を示す。 * *は生理食塩水投与群に比べ て、 P値が 0. 01以下であることを示す。 Figure 2 shows the results of examining changes in blood glucagon concentration when intravenously administering RFRP-1 to unanesthetized rats. In the figure, (-〇—) is the blood of the saline administration group, (、) is the blood of the RFRP-11 1 nmo1 / kg administration group, and (—Garden) is the blood of the RFRP-1 10 nmo1 Zkg administration group. Represents medium glucagon concentration. The values indicate the mean soil standard deviation (mean soil SE) (n = 4). ** indicates that the P value is 0.01 or less compared to the physiological saline administration group.

図 3は RFRP— 1を無麻酔下のラッ卜に静脈投与した際の血中インスリン濃 度の変動を調べた結果を示す。 図中、 （ （―〇一） は生理食塩水投与群、 （一 ▲―) は RFRP— 1 1 nmo 1 kg投与群および （—園—） は RFRP ― 1 10 nmo lZkg投与群の血中インスリン濃度を表す。 値は平均値土 標準偏差 （me an±SE) (n = 4) を示す。 Figure 3 shows the results of examining the change in blood insulin concentration when RFRP-1 was intravenously administered to an anesthetized rat. In the figure, ((-〇-1) is the saline administration group, (-1 ▲-) is the RFRP-11 mg nm 1 kg administration group, and (—en) is the RFRP-1 110 nmol lZkg administration blood insulin. The value indicates the mean soil standard deviation (me an ± SE) (n = 4).

図 4は RFRP— 1 (♦) および生理食塩水 （〇） を脳室内に投与した時の 音手がかり試験におけるフリージングの割合を示す。 縦軸は投与後 1日目お よび 2日目のそれぞれのフリージング （％) を平均値士標準誤差 （me an 土 SE) (n = 4) で示したものである。 発明を実施するための最良の形態 Figure 4 shows the percentage of freezing in the sound cue test when RFRP-1 (♦) and saline (〇) were administered intraventricularly. The vertical axis shows the freezing (%) on the 1st and 2nd days after administration as the standard error of the mean (mean soil SE) (n = 4). BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION

本発明で用いられる RFRPは、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列と 同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド （以下、 R FRPと称する場合がある） であり、 ヒトゃ温血動物 （例えば、 モルモット、 ラット、 マウス、 ニヮトリ、 ゥサギ、 ブ夕、 ヒッジ、 ゥシ、 サルなど） の細胞 (例えば、 網膜細胞、 肝細胞、 脾細胞、 神経細胞、 グリア細胞、 陴臓) 3細胞、 骨髄細胞、 メサンギゥム細胞、 ランゲルハンス細胞、 表皮細胞、 上皮細胞、 内 皮細胞、 繊維芽細胞、 繊維細胞、 筋細胞、 脂肪細胞、 免疫細胞 （例、 マクロフ ァ一ジ、 T細胞、 B細胞、 ナチュラルキラ一細胞、 肥満細胞、 好中球、 好塩基 球、 好酸球、 単球） 、 巨核球、 滑膜細胞、 軟骨細胞、 骨細胞、 骨芽細胞、 破骨 細胞、 乳腺細胞、 肝細胞もしくは間質細胞、 またはこれら細胞の前駆細胞、 幹 細胞もしくは癌細胞など） もしくはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、 例 えば、 脳、 脳の各部位 （例、 網膜、 嗅球、 扁桃核、 大脳基底球、 海馬、 視床、 視床下部、 大脳皮質、 延髄、 小脳） 、 脊髄、 下垂体、 胃、 fl萃臓、 腎臓、 肝臓、 生殖腺、 甲状腺、 胆のう、 骨髄、 副腎、 皮膚、 筋肉、 肺、 消化管 （例、 大腸、 小腸） 、 血管、 心臓、 胸腺、 脾臓、 顎下腺、 末梢血、 前立腺、 睾丸、 卵巣、 胎 盤、 子宮、 骨、 関節、 骨格筋など、 または血球系の細胞もしくはその培養細胞 (例えば、 MEL, Ml, CTLL- 2, HT—2, WEH I— 3, HL— 6 0， J OSK- 1, K562, ML- 1 ,: MOLT- 3, MOLT— 4， MO LT - 10, CCRF-CEM, TALL - 1, J u r k a t , CCRT-H SB— 2, KE— 37， SKW - 3， HUT - 78, HUT - 102， H 9, U937, THP - 1, HEL, J K- 1 , CMK, K〇一 812， MEG—01など） に由来するポリペプチドであってもよく、 合成ポリペプチドであつ てもよい。 The RFRP used in the present invention is a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 (hereinafter, may be referred to as RFRP). 3 cells of animal cells (eg, guinea pig, rat, mouse, chicken, egret, bush, hidge, horse, monkey, etc.) 3 cells (eg, retinal cells, liver cells, spleen cells, nerve cells, glial cells, kidney) , Bone marrow cells, mesangial cells, Langerhans cells, epidermal cells, epithelial cells, endothelial cells, fibroblasts, fiber cells, muscle cells, fat cells, immune cells (eg, macrophages, T cells, B cells, natural Killer cells, mast cells, neutrophils, basophils, eosinophils, monocytes), megakaryocytes, synovial cells, chondrocytes, bone cells, osteoblasts, osteoclasts, breast cells Hepatocytes or interstitial cells or precursor cells thereof cells, stem Cells or cancer cells) or any tissue in which these cells are present, for example, the brain, parts of the brain (eg, retina, olfactory bulb, amygdala, basal sphere, hippocampus, thalamus, hypothalamus, cerebral cortex, medulla oblongata) , Cerebellum), spinal cord, pituitary, stomach, fl spleen, kidney, liver, gonad, thyroid, gall bladder, bone marrow, adrenal gland, skin, muscle, lung, gastrointestinal tract (eg, large intestine, small intestine), blood vessel, heart, thymus , Spleen, submandibular gland, peripheral blood, prostate, testicle, ovary, placenta, uterus, bone, joint, skeletal muscle, etc., or cells of the blood system or their cultured cells (e.g., MEL, Ml, CTLL-2, HT —2, WEH I—3, HL—60, J OSK-1, K562, ML-1,, MOLT-3, MOLT—4, MOLT-10, CCRF-CEM, TALL-1, Jurkat, CCRT -HSB-2, KE-37, SKW-3, HUT-78, HUT-102, H9, U937, THP-1, HEL, JK-1, CMK, K〇812, MEG-01 etc.) Polypep derived from It may be a peptide or a synthetic polypeptide.

配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列とし ては、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列と約 70%以上、 好ましくは約 80%以上、 より好ましくは約 90%以上、 さらに好ましくは約 95%以上の 相同性を有するアミノ酸配列などがあげられる。 例えば、 配列番号： 1で表わ されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、 配列番号： 1で 表わされるアミノ酸配列の第 22〜180番目のアミノ酸配列を有するァミノ 酸配列などがあげられる。  The amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is about 70% or more, preferably about 80% or more, more preferably about 90% or more as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1. More preferably, the amino acid sequence has about 95% or more homology. For example, examples of the amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 include an amino acid sequence having the 22nd to 180th amino acid sequences of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1. Can be

より具体的には、 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のァ ミノ酸配列として、 例えば、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配 列番号： 9または配列番号： 22で表されるアミノ酸配列などがあげられる。 本発明に用いられる RFRPは、 具体的には、 前記の配列番号： 1で表わさ れるアミノ酸配列からなるポリペプチドまたは配列番号： 1で表わされるアミ ノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列 （例えば、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配列番号： 9または配列番号： 22で表されるアミノ酸配 列など） を有し、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列からなるポリべプチ ドと実質的に同質の塍グルカゴン分泌促進活性、 血糖上昇活性、 尿生成促進作 用、 記憶消去促進作用 （嫌な記憶の消去促進作用） などを有するポリペプチド である。 More specifically, as an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, for example, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 Or the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22. Specifically, the RFRP used in the present invention is a polypeptide comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 (for example, , SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22), and comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1. Glucagon secretion-enhancing activity, hypoglycemic activity, urine-promoting activity that is substantially the same as the peptide It is a polypeptide that has a function of promoting memory erasure (a function of promoting elimination of unpleasant memory).

アミノ酸配列の相同性は、 相同性計算アルゴリズム NCB I BLAST ( Na t i on a l Cen t e r f o r B i o t e c hno l ogy I n f o rma t i on Ba s i c Lo c a l A l i gnme n t S e a r c h T o o 1 ) を用い、 以下の条件 （期待値 = 10 ；ギャップを許す； マトリクス = BLOSUM62 ；フィルタリング =OFF) にて計算すること ができる。  The homology of the amino acid sequence was determined using the homology calculation algorithm NCB I BLAST (Nati on al Center for Biotec hno l ogy I nfo rma ti on Ba sic Lo cal A li gn mn e nt Search T oo 1). It can be calculated by the condition (expected value = 10; gap is allowed; matrix = BLOSUM62; filtering = OFF).

実質的に同質とは、 滕グルカゴン分泌促進活性、 血糖上昇活性、 尿生成促進 作用、 記憶消去促進作用 （嫌な記憶の消去促進作用） などが性質的に （例、 生 理化学的に、 または薬理学的に） 同質であることを示す。 従って、 塍グルカゴ ン分泌促進活性、 血糖上昇活性、 尿生成促進作用、 記憶消去促進作用 （嫌な記 憶の消去促進作用） などが同等 （例、 約 0. 1〜100倍、 好ましくは約 0. 5〜10倍、 より好ましくは 0. 5〜2倍） であることが好ましいが、 これら の活性の程度、 ポリペプチドの分子量などの量的要素は異なっていてもよい。 塍グルカゴン分泌促進活性、 血糖上昇活性、 記憶消去促進作用 （嫌な記憶の 消去促進作用） の測定は、 それぞれ実施例 1〜3の方法などに準じて行なうこ とができる。  Substantially the same quality means that Teng glucagon secretion promoting activity, blood glucose increasing activity, urine production promoting effect, memory erasing promoting effect (promotion of elimination of unpleasant memory) are characteristically (eg, biochemical or drug) (Physical) indicates that they are the same. Accordingly, the 塍 glucagon secretion promoting activity, blood glucose increasing activity, urine production promoting effect, memory erasure promoting effect (promotion of elimination of unfavorable memory) and the like are equivalent (eg, about 0.1 to 100 times, preferably about 0 times). (5 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times), but the quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the polypeptide may be different. (4) Glucagon secretion promoting activity, blood glucose increasing activity, and memory erasure promoting activity (promotion of elimination of unpleasant memory) can be measured according to the methods of Examples 1 to 3, respectively.

また、 RFRPとしては、 例えば、 （i) 配列番号： 1、 配列番号： 3、 配 列番号： 5、 配列番号： 7、 配列番号： 9または配列番号： 22で表わされる アミノ酸配列中の 1〜20個 （好ましくは、 1〜15個、 さらに好ましくは、 1〜5個、 より好ましくは、 1〜3個） のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、 (ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配列番号 ： 9または配列番号： 22で表わされるアミノ酸配列に 1〜20個 （好ましく は、 1〜15個、 さらに好ましくは、 1〜5個、 より好ましくは、 1〜3個） のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、 （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3、 配 列番号： 5、 配列番号： 7、 配列番号： 9または配列番号： 22で表わされる アミノ酸配列に 1〜20個 （好ましくは、 1〜15個、 さらに好ましくは、 1 〜5個、 より好ましくは、 1〜3個） のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、 (iv) 配列番号： 1、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配列番号 ： 9または配列番号： 22で表わされるアミノ酸配列中の 1〜20個 （好まし くは、 1〜15個、 さらに好ましくは、 1〜5個、 より好ましくは、 1〜3個 ) のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、 または （V) それら 欠失 ·付加 ·挿入 ·置換を組み合わせたアミノ酸配列を有するポリペプチドも 含まれる。 Examples of RFRP include (i) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22. Amino acid sequence in which 20 (preferably 1 to 15, more preferably 1 to 5, and more preferably 1 to 3) amino acids have been deleted, (ii) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or 1 to 20 (preferably 1 to 15, more preferably 1 to 5, more preferably 1 to 15 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22 or SEQ ID NO: 22) Is an amino acid sequence to which 1 to 3 amino acids are added, (iii) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22 1 to 20 (preferably 1 to 15, more preferably 1 to 5, more preferably, the amino acid sequence amino acids 1-3) is inserted, (iv) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or 1 to 20 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22 (preferably, 1 To 15, more preferably 1 to 5, and more preferably 1 to 3) amino acids substituted with another amino acid, or (V) a combination of deletion, addition, insertion, and substitution thereof. Polypeptides having different amino acid sequences are also included.

上記のようにアミノ酸配列が欠失、 付加、 挿入または置換されている.場合、 その欠失、 付加、 挿入または置換の位は特に限定されない。  When the amino acid sequence is deleted, added, inserted or substituted as described above, the position of the deletion, addition, insertion or substitution is not particularly limited.

本明細書におけるポリペプチドは、 ペプチド標記の慣例に従って左端が N末 端 （ァミノ末端） 、 右端が C末端 （カルボキシル末端） である。 配列番号： 1 で表わされるアミノ酸配列からなるヒト RFRPをはじめとする RFRPは、 C末端が力ルポキシル基 （_CO〇H) 、 カルポキシレート（—COO―)、 アミ ド （一 CONH2) またはエステル （― COOR) の何れであってもよい。 ここでエステルにおける Rとしては、 例えば、 メチル、 ェチル、 n—プロピ ル、 イソプロピルもしくは n—ブチルなどの Ci_6アルキル基、 例えば、 シクロ ペンチル、 シクロへキシルなどの C3_8シクロアルキル基、 例えば、 フエニル、 α—ナフチルなどの C6_12ァリール基、 例えば、 ベンジル、 フエネチルなどの フエ二ルー C ^2アルキル基もしくは α—ナフチルメチルなどの α—ナフチル — アルキル基などの 4ァラルキル基のほか、 経口用エステルとして 汎用されるビバロイルォキシメチル基などが用いられる。 In the present specification, the polypeptide has an N-terminal (amino terminal) at the left end and a C-terminal (carboxyl terminal) at the right end according to the convention of peptide labeling. RFRP, including human RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, has a C-terminal lipoxyl group (_CO〇H), carboxylate (—COO—), amide (one CONH 2 ) or ester (—COOR). Here, as R in the ester, e.g., methyl, Echiru, n- propyl Le, CI_ 6 alkyl group such as isopropyl or n- butyl, cyclo pentyl, C 3 _ 8 cycloalkyl group such as cyclohexyl, for example , phenyl, alpha-C 6 _ 12 Ariru groups, naphthyl, for example, benzyl, phenylene Lou C ^ 2 alkyl or alpha-naphthylmethyl etc. alpha-naphthyl, such as phenethyl - other 4 Ararukiru such as an alkyl group For example, a bivaloyloxymethyl group commonly used as an oral ester is used.

RFRPが C末端以外にカルボキシル基 （またはカルボキシレート） を有し ている場合、 カルボキシル基がアミド化またはエステル化されているものも本 発明でいう RFRPの範囲に含まれる。 この場合のエステルとしては、 例えば 上記した C末端のエステルなどが用いられる。  When the RFRP has a carboxyl group (or carboxylate) at a position other than the C-terminus, a compound in which the carboxyl group is amidated or esterified is also included in the range of RFRP referred to in the present invention. As the ester in this case, for example, the above-mentioned C-terminal ester and the like are used.

さらに、 RFRPには、 N末端のアミノ酸残基 （例、 メチォニン残基） のァ ミノ基が保護基 （例えば、 ホルミル基、 ァセチル基などの アルカノィルな どの 6ァシル基など）で保護されているもの、 生体内で切断されて生成する N末端のグルタミン残基がピログルタミン酸化したもの、 分子内のアミノ酸の 側鎖上の置換基 （例えば一 OH、 ― SH、 アミノ基、 イミダゾール基、 インド ール基、 グァニジノ基など） が適当な保護基 （例えば、 ホルミル基、 ァセチル 基などの Cェ _ 6アルカノィル基などの Cェ _ 6ァシル基など） で保護されているも の、 あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖蛋白質などの複合蛋白質なども含まれ る。 以下、 これらのポリペプチドを含めて RFRPと略称することもある。 本発明で用いられる RFRPの具体例としては、 例えば、 配列番号： 1で表 わされるアミノ酸配列からなるヒト RFRP、 配列番号： 3で表わされるアミ ノ酸配列からなるヒト RFRP、 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列から なるゥシ RFRP、 配列番号： 7で表わされるアミノ酸配列からなるラット R FRP、 配列 号： 9で表わされるアミノ酸配列からなるマウス RFRP、 配 列番号： 22で表わされるアミノ酸配列からなるラット RFRPなどが用いら れ、 例えば、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列からなるヒト RFRP、 配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列からなるヒト RFRP、 配列番号： 5 で表わされるアミノ酸配列からなるゥシ RFRPが好ましく用いられる。 In addition, RFRPs are those in which the amino group of the N-terminal amino acid residue (eg, methionine residue) is protected by a protecting group (for example, a 6- acyl group such as an alkanol such as a formyl group or an acetyl group). N-terminal glutamine residue generated by cleavage in vivo, resulting from pyroglutamine oxidation, substituent on the side chain of amino acid in the molecule (eg, 1 OH, --SH, amino group, imidazole group, India Lumpur group, Guanijino group, etc.) a suitable protecting group (e.g., formyl group, is also protected by a C E _ 6 Ashiru groups such as C E _ 6 Arukanoiru group such Asechiru group), or a sugar chain Complex proteins, such as so-called glycoproteins, to which is bound. Hereinafter, these polypeptides may be abbreviated as RFRP. Specific examples of the RFRP used in the present invention include, for example, human RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, human RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5 A peptide RFRP comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, a rat RFRP comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, a mouse RFRP comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, and an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22 Rat RFRP consisting of, for example, human RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, human RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, and amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 RFRP is preferably used.

RFRPの部分ペプチド （以下、 RFRP部分ペプチドと称する場合がある ) としては、 前記した RFRPの部分ペプチドであって、 後述する OT7T0 22 (配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその塩） に結合する能力を有 する'ものであれば、 いかなるものでもよい。  The partial peptide of RFRP (hereinafter sometimes referred to as RFRP partial peptide) is the partial peptide of RFRP described above, and is the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by OT7T022 (SEQ ID NO: 11) described later. Any of these can be used as long as they have the ability to bind to a receptor protein or a salt thereof containing the same amino acid sequence.

また、 RFRP部分ペプチドは、 そのアミノ酸配列中の 1〜5個 （好ましく は、 1〜3個） のアミノ酸が欠失し、 または、 そのアミノ酸配列に 1〜 5個 （ 好ましくは、 1〜3個） のアミノ酸が付加し、 または、 そのアミノ酸配列に 1 〜5個 （好ましくは、 1〜3個） のアミノ酸が挿入され、 または、 そのアミノ 酸配列中の 1〜 5個 （好ましくは、 1〜3個） のアミノ酸が他のアミノ酸で置 換されたアミノ酸配列からなるものであってもよく、 または、 それら欠失 -付 加 ·挿入 ·置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるものであってもよい。 また、 RFRP部分ペプチドは C末端が力ルポキシル基 （― COOH) 、 力 ルポキシレート （― COO— ) 、 アミド （一 C〇NH2) またはエステル （― C OOR) (Rは上記と同意義を示す） のいずれであってもよい。 なかでも、 C 末端がアミド （― C〇NH2) であるものが好ましい。 R F R P部分べプチドが C末端以外に力ルポキシル基 （または力ルポキシレ —ト） を有している場合、 カルボキシル基がアミド化またはエステル化されて いるものも本発明でいう R F R P部分べプチドに含まれる。 この場合のエステ ルとしては、 例えば上記した C末端のエステルなどが用いられる。 Further, the RFRP partial peptide has 1 to 5 (preferably 1 to 3) amino acids in its amino acid sequence deleted, or 1 to 5 (preferably 1 to 3) in its amino acid sequence. ) Is added, or 1 to 5 (preferably, 1 to 3) amino acids are inserted into the amino acid sequence, or 1 to 5 (preferably, 1 to 5) in the amino acid sequence. (3) amino acids may be composed of an amino acid sequence substituted with another amino acid, or may be composed of an amino acid sequence obtained by combining deletion, addition, insertion, and substitution thereof. . The RFRP partial peptide has a C-terminal lipoxyl group (—COOH), lipoxylate (—COO—), amide (one C〇NH 2 ) or ester (—COOR) (R is as defined above) Any of these may be used. Of these, those having a C-terminal amide (—C〇NH 2 ) are preferred. When the RFRP partial peptide has a lipoxyl group (or lipoxylate) at a position other than the C-terminus, the one in which the carboxyl group is amidated or esterified is also included in the RFRP partial peptide referred to in the present invention. . As the ester in this case, for example, the above-mentioned C-terminal ester or the like is used.

さらに、 RFRP部分ペプチドには、 前記した RFRPと同様に、 N末端の アミノ酸残基 （例、 メチォニン残基） のァミノ基が保護基で保護されているも の、 N端側が生体内で切断され生成したグルタミン残基がピログルタミン酸化 したもの、 分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されてい るもの、 あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合べプチドなど も含まれる。 以下、 これらの部分ペプチドも含めて RFRP部分ペプチドと略 称することもある。  Further, in the RFRP partial peptide, the N-terminal amino acid residue (eg, methionine residue) is protected with a protecting group, but the N-terminal side is cleaved in vivo as in the case of RFRP. Pyroglutamine oxidation of the generated glutamine residue, those in which the substituent on the side chain of the amino acid in the molecule is protected by an appropriate protecting group, or complex peptides such as so-called glycopeptides to which sugar chains are bound Is also included. Hereinafter, these partial peptides are sometimes abbreviated as RFRP partial peptides.

RFRP部分ペプチドとして好ましくは、 RFamide、 R S amideまたは R L amide構造を有するペプチド、 より好ましくほ、 R Famideまたは R S amide構造 を有するペプチド、 .特に好ましくは、 RF amideを有するペプチドが挙げられる  The RFRP partial peptide is preferably a peptide having an RFamide, RSamide or RLamide structure, more preferably a peptide having an RFamide or RSamide structure, particularly preferably a peptide having RFamide.

RFamide構造とは、 ペプチドの C末端が Arginine (アルギニン） RFamide structure means that the C-terminus of the peptide is Arginine (Arginine)

-Phenylalanine (フエ二ルァラニン） -NH2構造になっていることをいい、 RS amide構造とは、 ペプチドの C末端が Arginine (アルギニン） -Serine (セリン ) -NH2構造になっていることをいい、 RLamide構造とは、 ペプチドの C末端が Arginine (アルギニン） -Leucine (ロイシン） -NH2構造になっていることを意味 する。 -Phenylalanine (NH) structure means -NH 2 structure, RS amide structure means that the C-terminal of peptide is Arginine (Arginine) -Serine (Serine) -NH 2 structure , the RLamide structure means that the C-terminus of the peptide is in arginine (arginine) -Leucine (leucine) -NH 2 structure.

RFRP部分ペプチドの中でも、 例えば、  Among RFRP partial peptides, for example,

(i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 88番 目 （Leu) 〜第 92番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 8 7番目 （Asn) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜87個のアミノ酸が付加 していてもよいアミノ酸配列からなるヒト RFRP— 1、  (i) It contains the 88th (Leu) to 92nd (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, and has, on the N-terminal side of the amino acid sequence, SEQ ID NO: : A human RFRP consisting of an amino acid sequence that may have 1 to 87 amino acids added from the C-terminal of the 1st (Met) to 87th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by 1. — 1,

.(ii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 101 番目 （Ser) 〜第 1 12番目 （Ser) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配 列の N末端側に、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜 第 100番目 （Arg) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜100個のアミノ 酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるヒト RFRP— 2、 (ii) contains the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3; On the N-terminal side of the column, 1 to 100 amino acids are added, counting from the C-terminal of the first (Met) to 100th (Arg) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1. Human RFRP-2 consisting of an amino acid sequence

(iii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 127 番目 （Leu) 〜第 1 31番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配 列の N末端側に、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜 第 1 26番目 （Asn) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜126個のアミノ 酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるヒト R F R P— 3、  (iii) contains the 127th (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, and has a sequence at the N-terminal side of the amino acid sequence. It consists of an amino acid sequence with 1 to 126 amino acids, counting from the C-terminal of the 1st (Met) to 126th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by No. 1 Human RFRP—3,

(iv) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 88番目 （Leu) 〜第 92番 目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に、 配列番号 (iv) contains the 88th (Leu) to 92nd (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5;

： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 87番目 （Asn) のアミ ノ酸配列の C末端から数えて 1〜87個のアミノ酸が付加していてもよいアミ ノ酸配列からなるゥシ RFRP— 1、 : From the amino acid sequence that may have 1 to 87 amino acids counted from the C-terminal of the 1st (Met) to 87th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by 1. NARPHI RFRP— 1,

(V) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 10 1番目 （Ser) 〜第 1 1 2番目 （Ser) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に、 配列 番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 100番目 （Arg) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜100個のアミノ酸が付加していても よいアミノ酸配列からなるゥシ RFRP— 2、  (V) contains the amino acid sequence from the 101st (Ser) to the 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5; An amino acid sequence consisting of the first (Met) to 100th (Arg) amino acid sequence represented by the amino acid sequence, which may have 1 to 100 amino acids added from the C-terminal, RFRP-2,

(vi) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 127番目 （Leu) 〜第 1 3 1番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に、 配列 番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 126番目 （Asn) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜126個のアミノ酸が付加していても よいアミノ酸配列からなるゥシ RFRP— 3、  (vi) It contains the 127th (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, and is represented by SEQ ID NO: 1 on the N-terminal side of the amino acid sequence. The amino acid sequence of the first (Met) to 126th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence to which 1 to 126 amino acids may be added, counting from the C-terminal, RFRP-3,

(vii) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 90番目 （Leu) 〜第 94 番目 （Phe)'のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に、 配列番 号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 89番目 （Asn) のァ ミノ酸配列の C末端から数えて 1〜89個のアミノ酸が付加していてもよいァ ミノ酸配列からなるマウス RFRP— 1、  (vii) It contains the amino acid sequence from the 90th (Leu) to 94th (Phe) 'of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, and is represented by SEQ ID NO: 1 on the N-terminal side of the amino acid sequence. A mouse RFRP consisting of an amino acid sequence that may have 1 to 89 amino acids added from the C-terminus of the 1st (Met) to 89th (Asn) amino acid sequence to be added 1,

(viii) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 12 1番目 （Leu) 〜第 1 25番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に、 配 列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 120番目 （Ser ) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜120個のアミノ酸が付加していて もよいアミノ酸配列からなるマウス RFRP— 3、 (viii) the 12th (Leu) to 1st amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 It contains the amino acid sequence of the 25th (Phe) and, at the N-terminal side of the amino acid sequence, the amino acid sequence of the 1st (Met) to 120th (Ser) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 Mouse RFRP-3, consisting of an amino acid sequence that may have 1 to 120 amino acids added from the end,

(ix) 配列番号： 7または 22で表わされるアミノ酸配列の第 90番目 （Leu) 〜第 94番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に 、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 89番目 （Asn ) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜89個のアミノ酸が付加していても よいアミノ酸配列からなるラット RFRP— 1、  (ix) SEQ ID NO: contains the amino acid sequence from the 90th (Leu) to the 94th (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22, and is represented by SEQ ID NO: 1 on the N-terminal side of the amino acid sequence. Rat RFRP-1, consisting of an amino acid sequence that may have 1 to 89 amino acids counted from the C-terminal of the first (Met) to 89th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence

(X) 配列番号： 7または 22で表わされるアミノ酸配列の第 121番目 （Leu ) 〜第 125番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端 側に、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 120番 目 （Ser) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜120個のアミノ酸が付加し ていてもよいアミノ酸配列からなるラット RFRP— 3、  (X) contains the amino acid sequence from the 121st (Leu) to the 125th (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22, and is represented by SEQ ID NO: 1 on the N-terminal side of the amino acid sequence. Rat RFRP-3 consisting of an amino acid sequence that may have 1 to 120 amino acids added from the C-terminus of the 1st (Met) to 120th (Ser) amino acid sequence

(xi) 上記 （i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が 付加したアミノ酸配列からなるぺプチド、  (xi) a peptide comprising an amino acid sequence obtained by adding 1 to 5 amino acids to the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X),

(xii) 上記 （ i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が 挿入されたアミノ酸配列からなるぺプチド、  (xii) a peptide consisting of an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids have been inserted into the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X),

(xiii) 上記 （i) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜5個のァミノ 酸で置換されたアミノ酸配列からなるペプチド、 または  (xiii) a peptide consisting of an amino acid sequence substituted with 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptides (i) to (X), or

(xiv) 上記 （xi) 〜.（xiii) の付加 ·挿入 ·置換を組み合わせたアミノ酸配列 からなるべプチドなどが用いられる。  (xiv) A peptide consisting of an amino acid sequence obtained by combining addition, insertion and substitution of the above (xi) to (xiii) is used.

これらの RFRP部分ペプチドの中でも、  Among these RFRP partial peptides,

(i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 56番 目 （Ser) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 70番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 (i) The 56th (Ser) to 92nd (Phe), 70th (Met) to 92nd (Phe), 92nd (Phe) amino acid sequences represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3

73番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 81番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe ) または第 84番目 （Ser) 〜第 92番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるヒト RFRP- 1 , A human RFRP-1 comprising the amino acid sequence of positions 73 (Met) to 92nd (Phe), 81st (Met) to 92nd (Phe) or 84th (Ser) to 92nd (Phe),

(ii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 101 番目 （Ser) 〜第 1 1 2番目 （Ser) のアミノ酸配列からなるヒト R F R P _ 2、(ii) No. 101 of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 The human RFRP_2 consisting of the amino acid sequence of the (Ser) to the 1st and 2nd (Ser)

(i i i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1 番目 （Asn) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 0 4番目 （Asn) 〜第 1 3 1番目 （Phe ) 、 第 1 1 5番目 （Asn) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 2 4番目 （Val) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 2 5番目 （Pro) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 2 6番目 (Asn) 〜第 1 3 1番目 （Phe) または第 1 2 7番目 （Leu) 〜第 1 3 1番目 （Phe ) のアミノ酸配列からなるヒト R F R P— 3、 (iii) 101st (Asn) to 131st (Phe), 104th (Asn) to 131st of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 (Phe), 115th (Asn)-131st (Phe), 124th (Val)-131st (Phe), 125th (Pro)-1st Human RFRP consisting of the amino acid sequence of 1 3 1 (Phe), 1 2 6 (Asn)-1 3 1 (Phe) or 1 2 7 (Leu)-13 1 (Phe) — 3,

(iv) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目 （Ser) 〜第 9 2番 目 （Phe) 、 第 7 0番目 （Lys) 〜第 9 2番目 （Phe) 、 第 7 3番目 （Met) 〜第 9 2番目 (Phe) 、 第 8 1番目 （Met) 〜第 9 2番目 （Phe) または第 8 4番目 （ Ser) 〜第 9 2番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるゥシ R F R P— 1、  (iv) 58th (Ser)-92nd (Phe), 70th (Lys)-92nd (Phe), 73rd of amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (Met)-92nd (Phe), 81st (Met)-92nd (Phe) or 84th (Ser)-92nd (Phe) amino acid sequence RFRP— 1,

( V ) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1番目 （Ser) 〜第 1 1 2番目 （Ser) のアミノ酸配列からなるゥシ R F R P— 2、  (V) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 consisting of the 101st (Ser) to the 112th (Ser) amino acid sequence;

(vi) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1番目 （Ser) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 0 4番目 （Al a) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 1 5番目 （ Asn) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 2 4番目 （Val) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 2 5番目 （Pro) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 2 6番目 （Asn) 〜第 1 3 1 番目 （Phe) または第 1 2 7番目 （Leu) 〜第 1 3 1番目 （Phe) のアミノ酸配列 からなるゥシ R F R P— 3、  (vi) No. 101 (Ser) to No. 131 (Phe), No. 104 (Al a) to No. 131 (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, 1st 15th (Asn) to 13th 1st (Phe), 1st 24th (Val) to 1st 31st (Phe), 1st 25th (Pro) to 1st 31st (Phe), the amino acid sequence of the 126th (Asn) to the 131st (Phe) or the 127th (Leu) to the 131st (Phe) amino acid sequence

(vi i) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目 （Ser) 〜第 9 4 番目 （Phe) 、 第 7 2番目 （Val) 〜第 9 4番目 （Phe) 、 第 7 5番目 （Met) 〜 第 9 4番目 （Phe) 、 第 8 3番目 （Val) 〜第 9 4番目 （Phe) または第 8 4番目 (Pro) 〜第 9 4番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるマウス R F R P _ 1、 (vi i i) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 1 1 8番目 （Phe) 〜第 1 2 5番目 （Phe) 、 第 1 1 9番目 （Pro) 〜第 1 2 5番目 （Phe) 、 第 1 2 0番目 (Ser) 〜第 1 2 5番目 （Phe) または第 1 2 1番目 （Leu) 〜第 1 2 5番目 （Phe ) のアミノ酸配列からなるマウス R F R P— 3、  (vi i) 58th (Ser)-94th (Phe), 72nd (Val)-94th (Phe), 75th of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 Mouse RFRP consisting of the amino acid sequence from (Met) to 94th (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) _ 1, (vi ii) The amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 from the 118th (Phe) to the 125th (Phe), the 119th (Pro) to the 125th ( Phe), mouse RFRP-3 consisting of the amino acid sequence of the 120th (Ser) to the 125th (Phe) or the 121st (Leu) to the 125th (Phe)

.(ix) 配列番号： 7または 2 2で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目 （Ser) 〜第 9 4番目 （Phe) 、 第 7 2番目 （Asp) 〜第 9 4番目 （Phe) 、 第 7 5番目 （ Met) 〜第 94番目 （Phe) 、 第 83番目 （Val) 〜第 94番目 （Phe) または第 84番目 （Pro) 〜第 94番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるラット R F R P . (ix) SEQ ID NO: 7 or 22 (Ser) to 94th (Phe), 72nd (Asp) to 94th (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 7 Fifth ( Rat RFRP consisting of the amino acid sequence from Met) to 94th (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe)

(X) 配列番号： 7または 22で表わされるアミノ酸配列の第 118番目 （Phe ) 〜第 125番目 （Phe) 、 第 1 19番目 （Pro) 〜第 125番目 （Phe) 、 第 1 20番目 （Ser) 〜第 125番目 （Phe) または第 121番目 （Leu) 〜第 125 番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるラット RFRP— 3、 (X) 118th (Phe) -125th (Phe), 119th (Pro) -125th (Phe), 120th (Ser) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 )-Rat RFRP consisting of the 125th (Phe) or 121st (Leu)-125th (Phe) amino acid sequence, 3,

(xi) 上記 （i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のアミノ酸 が欠失したアミノ酸配列からなる欠失型べプチド、  (xi) a deletion type peptide consisting of an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptides (i) to (X) have been deleted,

(xii) 上記 （i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が 付加したアミノ酸配列からなる付加型べプチド、  (xii) an addition peptide consisting of an amino acid sequence obtained by adding 1 to 5 amino acids to the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X),

(xiii) 上記 （i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸 が挿入されたァミノ酸配列からなる挿入型べプチド、  (xiii) an insertion type peptide comprising an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids have been inserted into the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X),

(xiv) 上記 （ i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のアミノ酸 で置換されたアミノ酸配列からなる置換型ペプチド、 または  (xiv) a substituted peptide consisting of an amino acid sequence substituted with 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptides (i) to (X), or

(XV) 上記 （xi) 〜 （xiv) の欠失 ·付加 ·挿入 ·置換を組み合わせたアミノ酸 配列からなるペプチドなどが好ましく用いられる。  (XV) Peptides having an amino acid sequence obtained by combining deletion, addition, insertion, and substitution of the above (xi) to (xiv) are preferably used.

特にこれらのペプチドのアミド体 （好ましくは、 これらペプチドの C末端の 力ルポキシル基 （_COOH) がアミド化された （― CONH2) ペプチド） が 好ましい。 In particular, amides of these peptides (preferably, (—CONH 2 ) peptides in which the C-terminal carbonyl group (_COOH) of these peptides is amidated) are preferred.

具体的には、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 81番目 （Met) 〜 第 92番目 （Phe) のアミノ酸配列で表されるペプチドの C末端がアミド化され た （一 C〇NH2) ペプチド （配列番号： 13) 、 配列番号： 1で表わされるァ ミノ酸配列の第 101番目 （Ser) 〜第 1 12番目 （Ser) のアミノ酸配列で表 されるペプチドの C末端がアミド化された （― CONH2) ペプチド （配列番号 ： 15) および配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 124番目 （Val) 〜第 131番目 （Phe) のアミノ酸配列で表されるペプチドの C末端がアミド化 された （_CONH2) ペプチド （配列番号： 14) などがあげられる。 Specifically, the C-terminal of the peptide represented by the 81st (Met) to 92nd (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 was amidated (one C （NH 2 ) Peptide (SEQ ID NO: 13) The C-terminal of the peptide represented by the amino acid sequence from the 101st (Ser) to the 112th (Ser) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is amidated. The (-CONH 2 ) peptide (SEQ ID NO: 15) and the C-terminal of the peptide represented by the amino acid sequence at positions 124 (Val) to 131 (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 are amides. (_CONH 2 ) peptide (SEQ ID NO: 14).

RFRPまたは R F R P部分べプチドの塩としては、 生理学的に許容される 酸 （例、 無機酸、 有機酸） や塩基 （例、 アルカリ金属塩） などとの塩が用いら れ、 とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。 このような塩として は、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水素酸、 硫酸） との塩、 あ るいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスルホン酸、 ベンゼンスルホン酸） との塩などが用いられる。 Physiologically acceptable as a salt of RFRP or RFRP partial peptides Salts with acids (eg, inorganic acids, organic acids) and bases (eg, alkali metal salts) are used, and physiologically acceptable acid addition salts are particularly preferred. Examples of such salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid) Succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, and benzenesulfonic acid).

R F R Pもしくはその塩または R F R P部分べプチドもしくはその塩は、 W O00Z29441号、 WO01Z661:34号などに記載の方法に従って製 造することができる。  RFRP or a salt thereof or RFRP partial peptide or a salt thereof can be produced according to the method described in WO00Z29441, WO01Z661: 34 and the like.

RFRPをコードする DNAとしては、 前述した RFRPをコードする塩基 配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。 また、 ゲノム DN A、 ゲノム DNAライブラリー、 前記した細胞 ·組織由来の cDNA、 前記し た細胞 ·組織由来の c DNAライブラリ一、 合成 DNAのいずれでもよい。 ライブラリ一に使用するベクターは、 バクテリオファージ、 プラスミド、 コ スミド、 ファージミドなどいずれであってもよい。 また、 前記した細胞 ·組織 より total RN Aまたは mRN A画分を調製したものを用いて直接 Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (以下、 RT-PCR法と略称する ) によって増幅することもできる。  The DNA encoding RFRP may be any DNA as long as it contains the above-described base sequence encoding RFRP. Further, it may be any of genomic DNA, genomic DNA library, cDNA derived from the above-described cells and tissues, cDNA library derived from the above-described cells and tissues, and synthetic DNA. The vector used for the library may be any of bacteriophage, plasmid, cosmid, phagemid and the like. In addition, it can also be directly amplified by Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (hereinafter abbreviated as RT-PCR method) using a total RNA or mRNA fraction prepared from the cells and tissues described above.

RFRPをコードする DN Aとしては、 例えば、 配列番号： 2、 配列番号： 4、 配列番号： 6、 配列番号： 8、 配列番号 10または配列番号： 23で表 わされる塩基配列を含有する DNA、 またほ配列番号： 2、 配列番号： 4、 配 列番号： 6、 配列番号： 8、 配列番号： 10または配列番号： 23で表わされ る塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダィズする塩基配列を 有し、 配列番号： 1、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配列番号 ： 9または配列番号： 22で表されるアミノ酸配列からなる RFRPと実質的 に同質の活性を有するポリペプチドをコードする D N Aなどであれば何れのも のでもよい。  Examples of the DNA encoding RFRP include, for example, a DNA containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, or SEQ ID NO: 23 Hybridizes with the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 or SEQ ID NO: 23 under highly stringent conditions It has a base sequence and is substantially the same as RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22 Any DNA may be used as long as it encodes a polypeptide having activity.

.配列番号： 2、 配列番号： 4、 配列番号： 6、 配列番号： 8、 配列番号： 1 0または配列番号： 23で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件 下でハイブリダィズできる DNAとしては、 例えば、 それぞれ配列番号： 2、 配列番号： 4、 配列番号： 6、 配列番号： 8、 配列番号： 10または配列番号 ： 23で表わされる塩基配列と約 70%以上、 好ましくは約 80%以上、 より 好ましくは約 90%以上、 さらに好ましくは約 95%以上の相同性を有する塩 基配列を含有する DN Aなどが用いられる。 SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 or SEQ ID NO: 23 and high stringency conditions Examples of DNA that can be hybridized below include, for example, about 70% or more of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, or SEQ ID NO: 23, respectively. Preferably, DNA containing a base sequence having a homology of about 80% or more, more preferably about 90% or more, and still more preferably about 95% or more is used.

塩基配列の相同性は、 相同性計算アルゴリズム NCB I BLAST (N a t i o n a 1 Ce n t e r f o r B i o t e c hno l ogy I n f o r m a t i on Ba s i c L o c a: 1 A l i gnme n t S e a r c h Too l) を用い、 以下の条件 （期待値 = 10 ；ギャップを許す；フィ ルタリング =ON；マッチスコア = 1 ；ミスマッチスコア =_ 3) にて計算す ることができる。  The homology of the nucleotide sequences was determined using the homology calculation algorithm NCB I BLAST (Nationa 1 Center for Biotec hno l ogy I nformatin on B a sic L oca: 1 Ali gn mn e nt Search Tool) under the following conditions ( Expected value = 10; gap allowed; filtering = ON; match score = 1; mismatch score = _3).

ハイブリダィゼ一シヨンは、 自体公知の方法あるいはそれに準じる方法、 例 えば、 モレキュラー 'クロ一ニング （Molecular Cloning) 2nd (J. Sambrooket al.， Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989) に記載の方法などに従って行な うことができる。 また、 市販のライブラリーを使用する場合、 添付の使用説明 書に記載の方法に従って行なうことができる。 より好ましくは、 ハイストリン ジエンドな条件に従って行なうことができる。  Hybridization is performed according to a method known per se or a method analogous thereto, for example, a method described in Molecular Cloning 2nd (J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989). You can do it. When a commercially available library is used, it can be performed according to the method described in the attached instruction manual. More preferably, it can be performed according to high stringency conditions.

ハイストリンジェントな条件とは、 例えば、 ナトリウム濃度が約 19〜40 mM、 好ましくは約 19〜2 OmMで、 温度が約 50〜70 ：、 好ましくは約 60〜65 の条件を示す。 特に、 ナトリウム濃度が約 19 mMで温度が約 6 5での場合が最も好ましい。  High stringency conditions refer to, for example, a sodium concentration of about 19 to 40 mM, preferably about 19 to 2 OmM, and a temperature of about 50 to 70, preferably about 60 to 65. In particular, the case where the sodium concentration is about 19 mM and the temperature is about 65 is most preferable.

より具体的には、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列からなるヒト RF RPをコードする DNAとしては、 配列番号： 2で表わされる塩基配列からな る DNAなどが用いられる。 配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列からなる ヒト RFRPをコードする DNAとしては、 配列番号： 4で表わされる塩基配 列からなる DNAなどが用いられる。 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列 からなるゥシ RFRPをコードする DNAとしては、 配列番号： 6で表わされ る塩基配列からなる DNAなどが用いられる。 配列番号： 7で表わされるアミ ノ酸配列からなるラット RFRPをコードする DNAとしては、 配列番号： 8 で表わされる塩基配列からなる DNAなどが用いられる。 配列番号： 9で表わ されるアミノ酸配列からなるマウス RFRPをコードする DN Aとしては、 配 列番号： 10で表わされる塩基配列からなる DNAなどが用いられる。 配列番 号： 22で表わされるアミノ酸配列からなるラッ卜 RFRPをコードする DN Aとしては、 配列番号： 23で表わされる塩基配列からなる DNAなどが用い られる。 More specifically, as the DNA encoding human RF RP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a DNA having the base sequence represented by SEQ ID NO: 2 or the like is used. As the DNA encoding human RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, DNA comprising the base sequence represented by SEQ ID NO: 4 and the like are used. As the DNA encoding the RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, a DNA consisting of the base sequence represented by SEQ ID NO: 6 and the like are used. DNA encoding rat RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 includes SEQ ID NO: 8 DNA consisting of the base sequence represented by is used. As the DNA encoding the mouse RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, a DNA having the base sequence represented by SEQ ID NO: 10 or the like is used. As DNA encoding rat RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22, DNA consisting of the base sequence represented by SEQ ID NO: 23 or the like is used.

R F R P部分べプチドをコ一ドする D N Aとしては、 前述した R F R P部分 ペプチドをコードする塩基配列を含有する:ものであればいかなるものであって もよい。 また、 ゲノム DNA、 ゲノム DNAライブラリー、 前記した細胞 ·組 織由来の cDNA、 前記した細胞 ·組織由来の c DNAライブラリー、 合成 D NAのいずれでもよい。  The DNA encoding the RFRP partial peptide includes any of the above-described nucleotide sequences encoding the RFRP partial peptide: any DNA may be used. Further, it may be any of genomic DNA, genomic DNA library, cDNA derived from the cells and tissues described above, cDNA library derived from the cells and tissues described above, and synthetic DNA.

RFRP部分ペプチドをコードする DNAとしては、例えば、配列番号： 2、 配列番号： 4、 配列番号： 6、 配列番号： 8、 配列番号： 10または配列番号 ： 23で表わされる塩基配列を含有する DNAの部分塩基配列を有する DNA、 または配列番号： 2、 配列番号： 4、配列番号： 6、 配列番号： 8、 配列番号 ： 10または配列番号： 23で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな 条件下でハイブリダィズする塩基配列を有し、 配列番号： 1、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配列番号： 9または配列番号： 22で表される アミノ酸配列からなる R FRPと実質的に同質の活性を有するポリぺプチドを コードする DNAの部分塩基配列を有する D N Aなどが用いられる。  Examples of the DNA encoding the RFRP partial peptide include a DNA containing a base sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, or SEQ ID NO: 23. DNA having the partial base sequence of SEQ ID NO: 2, or SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 or SEQ ID NO: 23 and under high stringent conditions Having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22; For example, a DNA having a partial base sequence of a DNA encoding a polypeptide having a similar activity can be used.

配列番号： 2、 配列番号： 4、 配列番号： 6、 配列番号： 8、 配列番号： 1 0または配列番号： 23で表わされる塩基配列とハイブリダィズできる DNA は、 前記と同意義を示す。  DNAs capable of hybridizing with the base sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 or SEQ ID NO: 23 have the same significance as described above.

ハイブリダィゼーシヨンの方法および八イストリンジェントな条件は前記と 同様のものが用いられる。  The same hybridization method and eight stringent conditions are used as described above.

また、 RFRP部分ペプチドをコードする DNAとしてより具体的には、 前 記した具体的な RFRP部分べプチドをコードする D N Aなどが用いられる。 例えば、  More specifically, DNA encoding the specific RFRP partial peptide described above is used as the DNA encoding the RFRP partial peptide. For example,

(i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 56番 目 （Ser) 〜第 9 2番目 （Phe) 、 第 7 0番目 （Me t) 〜第 9 2番目 （Phe) 、 第 7 3番目 （Met) 〜第 9 2番目 （Phe) 、 第 8 1番目 （Met) 〜第 9 2番目 （Phe ) または第 8 4番目 （Ser) 〜第 9 2番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるヒト R F R P— 1をコードする D N Aとしては、 それぞれ配列番号： 2または配列 番号： 4で表わされる塩基配列の第 1 6 6番目〜第 2 7 6番目、 第 2 0 8番目 〜第 2 7 6番目、 第 2 1 7番目〜第 2 7 6番目、 第 2 4 1番目〜第 2 7 6番目 または第 2 5 0番目〜第 2 7 6番目の塩基配列からなる D N A、 (i) No. 56 of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 Eye (Ser) to 9th (Phe), 70th (Met) to 92nd (Phe), 73rd (Met) to 92nd (Phe), 81st The DNA encoding human RFRP-1 consisting of the amino acid sequence of (Met) -92th (Phe) or 84th (Ser) -92th (Phe) is SEQ ID NO: 2 or the sequence, respectively. 166th to 276th, 208th to 276th, 217th to 276th, 241st of the base sequence represented by No. 4: DNA consisting of the base sequence of the 2nd to 276th or the 250th to 276th bases,

(i i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1 番目 （Ser) 〜第 1 1 2番目 （Ser) のアミノ酸配列からなるヒト R F R P— 2 をコードする D NAとしては、 それぞれ配列番号： 2または配列番号： 4で表 わされる塩基配列の第 3 0 1番目〜第 3 3 6番目の塩基配列からなる D N A、 (ii) As a DNA encoding human RFRP-2, consisting of the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 Is a DNA consisting of the 31st to 336th nucleotide sequence of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 4, respectively;

(i i i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1 番目 （Asn) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 0 4番目 （Asn) 〜第 1 3 1番目 （Phe ) 、 第 1 1 5番目 （Asn) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 2 4番目 （Val) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 2 5番目 （Pro) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 2 6番目 (Asn) 〜第 1 3 1番目 （Phe) または第 1 2 7番目 （Leu) 〜第 1 3 1番目 （Phe ) のアミノ酸配列からなるヒト R F R P— 3をコードする D NAとしては、 そ れぞれ配列番号： 2または配列番号： 4で表わされる塩基配列の第 3 0 1番目 〜第 3 9 3番目、第 3 1 0番目〜第 3 9 3番目、第 3 4 3番目〜第 3 9 3番目、 第 3 7 0番目〜第 3 9 3番目、 第 3 7 3番目〜第 3 9 3番目、 第 3 7 6番目〜 第 3 9 3番目または第 3 7 9番目〜第 3 9 3番目の塩基配列からなる D NA、(iii) 101st (Asn) to 131st (Phe), 104th (Asn) to 131st of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 (Phe), 115th (Asn)-131st (Phe), 124th (Val)-131st (Phe), 125th (Pro)-1st Human RFRP consisting of the amino acid sequence of 1 3 1 (Phe), 1 2 6 (Asn)-1 3 1 (Phe) or 1 2 7 (Leu)-13 1 (Phe) — The DNAs encoding 3 are the 31st to 39th, and the 310th to 39th nucleotides of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 4, respectively. 3rd, 3rd 3rd to 3rd 3rd, 3rd 70th to 3rd 3rd, 3rd 3rd to 3rd 3rd, 3rd 3rd to 3rd 3rd Or a DNA consisting of the 379th to 393rd nucleotide sequences,

(iv) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目 （Ser) 〜第 9 2番 目 （Phe) 、 第 7 0番目 （Lys) 〜第 9 2番目 （Phe) 、 第 7 3番目 （Met) 〜第 9 2番目 （Phe) 、 第 8 1番目 （Met) 〜第 9 2番目 （Phe) または第 8 4番目 （ Ser) 〜第 9 2番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるゥシ R F R P— 1をコード する D N Aとしては、 配列番号： 6で表わされる塩基配列の第 1 7 2番目〜第 2 7 6番目、 第 2 0 8番目〜第 2 7 6番目、 第 2 1 7番目〜第 2 7 6番目、 第 2 4 1番目〜第 2 7 6番目または第 2 5 0番目〜第 2 7 6番目の塩基配列から なる D NA、 (v) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 101番目 （Ser) 〜第 1 1 2番目 （Ser) のアミノ酸配列からなるゥシ RFRP— 2をコードする DNAと しては、 配列番号： 6で表わされる塩基配列の第 301番目〜第 336番目の 塩基配列からなる DNA、 (iv) 58th (Ser)-92nd (Phe), 70th (Lys)-92nd (Phe), 73rd of amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (Met)-92nd (Phe), 81st (Met)-92nd (Phe) or 84th (Ser)-92nd (Phe) amino acid sequence The DNA encoding RFRP-1 is as follows: The nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 6 from the 172nd to the 276th, the 208th to the 276th, the 217th to the 217th A DNA consisting of the 276th base, the 241st to 276th or the 250th to 276th base sequence, (v) The DNA encoding the RFRP-2 comprising the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 is SEQ ID NO: DNA consisting of the nucleotide sequence at positions 301 to 336 of the nucleotide sequence represented by 6,

(vi) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 101番目 （Ser) 〜第 13 1番目 （Phe) 、 第 104番目 （Ala) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 1 15番目 （ Asn) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 124番目 （Val) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 125番目 （Pro) 〜第 131番目 （Ph ) 、 第 126番目 （Asn) 〜第 131 番目 （Phe) または第 127番目 （ u) 〜第 131番目 （Phe) のアミノ酸配列 からなるゥシ RFRP— 3をコードする DNAとしては、 配列番号： 6で表わ される塩基配列の第 301番目〜第 393番目、 第 310番目〜第 393番目、 第 343番目〜第 393番目、 第 370番目〜 393番目、 第 373番目〜 第 393番目、 第 376番目〜第 393番目または第 379番目〜第 393番 目の塩基配列からなる DNA、  (vi) The 101st (Ser) to 131st (Phe), the 104th (Ala) to the 131st (Phe), and the 115th (Asn) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 131st (Phe), 124th (Val)-131st (Phe), 125th (Pro)-131st (Ph), 126th (Asn)-131st (Phe) or As DNA encoding RFRP-3 consisting of the 127th (u) to 131st (Phe) amino acid sequence, the 301st to 393rd and 393rd nucleotides of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 6 From the 310th to 393rd, 343th to 393rd, 370th to 393rd, 373th to 393rd, 376th to 393rd or 379th to 393rd base sequence DNA

(vii) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 58番目 （Ser) 〜第 94 番目 （Phe) 、 第 72番目 （Val) 〜第 94番目 （Phe) 、 第 75番目 （Met) 〜 第 94番目 （Phe) 、 第 83番目 （Val) 〜第 94番目 （Phe) または第 84番目 (Pro) 〜第 94番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるマウス R F R P— 1をコ —ドする DN Aとしては、 配列番号： 10で表わされる塩基配列の第 172番 目〜第 282番目、 第 214番目〜第 282番目、 第 223番目〜第 282番 目、 第 247番目〜第 282番目または第 250番目〜第 282番目の塩基配 列からなる DNA、  (vii) 58th (Ser) to 94th (Phe), 72nd (Val) to 94th (Phe), 75th (Met) to 94th of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 The DNA encoding mouse RFRP-1 consisting of the amino acid sequence of the 83rd (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) 172nd to 282nd, 214th to 282nd, 223th to 282nd, 247th to 282nd or 250th to 250th of the base sequence represented by SEQ ID NO: 10. DNA consisting of the 282nd base sequence,

(viii) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 1 18番目 （Phe) 〜第 1 (viii) 1st to 18th amino acids (Phe) to 1st in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9

25番目 （Phe) 、 第 1 19番目 （Pro) 〜第 125番目 （Phe) 、 第 120番目 (Ser) 〜第 125番目 （Phe) または第 121番目 （Leu) 〜第 125番目 （Phe25th (Phe), 1st 19th (Pro)-125th (Phe), 120th (Ser)-125th (Phe) or 121st (Leu)-125th (Phe)

) のアミノ酸配列からなるマウス RFRP— 3をコードする DNAとしては、 配列番号： 10で表わされる塩基配列の第 352番目〜第 375番目、 第 35 β番目〜第 375番目、 第 358番目〜第 375番目または第 361番目〜第DNA encoding mouse RFRP-3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10: 352nd to 375th, 35th βth to 375th, and 358th to 375th of the base sequence represented by SEQ ID NO: 10. Th or 361st th

375番目の塩基配列からなる DNA、 (ix) 配列番号： 7または 22で表わされるアミノ酸配列の第 58番目 （Ser) 〜第 94番目 （Phe) 、 第 72番目 （Asp) 〜第 94番目 （Phe) 、 第 75番目 （ Met) 〜第 94番目 （Phe) 、 第 83番目 （Val) 〜第 94番目 （Phe) または第 84番目 （Pro) 〜第 94番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるラット R F R P 一 1をコードする DNAとしては、 それぞれ配列番号： 8または 51で表わさ れる塩基配列の第 172番目〜第 282番目、 第 214番目〜第 282番目、 第 223番目〜第 282番目、 第 247番目〜第 282番目または第 250番 目〜第 282番目の塩基配列からなる DNA、 DNA consisting of the 375th base sequence, (ix) 58th (Ser) to 94th (Phe), 72nd (Asp) to 94th (Phe), 75th (Met) to 75th amino acid (She) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 DNA encoding rat RFRP-11 consisting of the 94th (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) amino acid sequence includes: 172nd to 282nd, 214th to 282nd, 223rd to 282nd, 247th to 282nd or 250th to the base sequence represented by SEQ ID NO: 8 or 51, respectively DNA consisting of the 282nd base sequence,

(x) 配列番号： 7または 22で表わされるアミノ酸配列の第 118番目 （Phe ) 〜第 125番目 （Phe) 、 第 119番目 （Pro) 〜第 125番目 （Phe) 、 第 1 (x) 118th (Phe) to 125th (Phe), 119th (Pro) to 125th (Phe), 1st amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22

20番目 （Ser) 〜第 125番目 （Phe) または第 121番目 （Leu) 〜第 125 番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるラット RFRP— 3をコードする DNAと しては、 それぞれ配列番号： 8または 51で表わされる塩基配列の第 352番 目〜第 375番目、 第 355番目〜第 375番目、 第 358番目〜第 375番 目または第 361番目〜第 375番目の塩基配列からなる DNAなどが用いら れる。 The DNA encoding rat RFRP-3 consisting of the amino acid sequence from the 20th (Ser) to the 125th (Phe) or the 121st (Leu) to the 125th (Phe) is SEQ ID NO: 8 or DNA consisting of the nucleotide sequence from the 352nd to the 375th, the 355th to the 375th, the 358th to the 375th or the 361st to the 375th nucleotide sequence of the nucleotide sequence represented by 51 is used. It is.

RFRPまたはその部分べプチドを完全にコードする DN Aのクローニング は、 WO 00/29441号、 WO01Z66134号などに記載の方法に従 つて行うことができる。  Cloning of DNA that completely encodes RFRP or its partial peptide can be performed according to the method described in WO 00/29441, WO 01Z66134 and the like.

また、 RFRPまたはその部分ペプチドをコードする DNAから RFRPま たはその部分ペプチドを製造する場合、 WO00Z29441号、 WO01Z66134号などに記載の方法に従って行うことができる。  When RFRP or its partial peptide is produced from DNA encoding RFRP or its partial peptide, it can be produced according to the method described in WO00Z29441, WO01Z66134 and the like.

RFRPもしくはその部分ペプチド、 後述の OT 7 T022もしくはその部 分ペプチド、 およびこれらをコードする DNAは、 自体公知の方法で標識化さ れていてもよく、 具体的にはアイソトープラベル化されたもの、 蛍光標識され たもの （例えば、 フルォレセインなどによる蛍光標識） 、 ピオチン化されたも のまたは酵素標識されたものなどがあげられる。  RFRP or a partial peptide thereof, OT7T022 or a partial peptide thereof described below, and a DNA encoding the same may be labeled by a method known per se, specifically, isotope-labeled one, Fluorescent labels (for example, fluorescent labels with fluorescein or the like), biotinylated or enzyme-labeled ones, and the like can be used.

. RFRPもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、 RFRP 部分べプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する レセプ夕一蛋白質 O T 7 T 0 2 2 (以下、 Ο Τ 7 Τ 0 2 2と略記する） として は、 例えば、 配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的 に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質が用いられる。 . For RFRP or its amide or its ester or its salt, RFRP partial peptide or its amide or its ester or its salt As the receptor protein OT7T022 (hereinafter abbreviated as ΤΤ7Τ022), for example, an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 is used. The contained receptor protein is used.

Ο Τ 7 Τ 0 2 2は、 例えば、 哺乳動物 （例えば、 ヒト、 モルモット、 ラット、 マウス、 ゥサギ、 ブ夕、 ヒッジ、 ゥシ、 サルなど） のあらゆる細胞 （例えば、 脾細胞、 神経細胞、 グリア細胞、 塍臓 /3細胞、 骨髄細胞、 メサンギゥム細胞、 ランゲルハンス細胞、 表皮細胞、 上皮細胞、 内皮細胞、 繊維芽細胞、 繊維細胞、 筋細胞、 脂肪細胞、 免疫細胞 （例、 マクロファージ、 Τ細胞、 Β細胞、 ナチュ ラルキラ一細胞、 肥満細胞、 好中球、 好塩基球、 好酸球、 単球） 、 巨核球、 滑 膜細胞、 軟骨細胞、 骨細胞、 骨芽細胞、 破骨細胞、 乳腺細胞、 肝細胞もしくは 間質細胞、 またはこれら細胞の前駆細胞、 幹細胞もしくはガン細胞など） や血 球系の細胞、 またはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、 例えば、 脳、 脳の 各部位 （例、 嗅球、 扁頭核、 大脳基底球、 海馬、 視床、 視床下部、 視床下核、 大脳皮質、 延髄、 小脳、 後頭葉、 前頭葉、 側頭葉、 被殻、 尾状核、 脳染、 黒質 ) 、 脊髄、 下垂体、 胃、 塍臓、 腎臓、 肝臓、 生殖腺、 甲状腺、 胆のう、 骨髄、 副腎、 皮膚、 筋肉、 肺、 消化管 （例、 大腸、 小腸） 、 血管、 心臓、 胸腺、 脾臓、 顎下腺、 末梢血、 末梢血球、 前立腺、 睾丸、 精巣、 卵巣、 胎盤、 子宮、 骨、 関 節、 骨格筋など （特に、 脳や脳の各部位） に由来する蛋白質であってもよく、 また合成蛋白質であってもよい。  Τ Τ 7 Τ 0 2 2 can be, for example, a mammal, such as a human, a guinea pig, a rat, a mouse, a heron, a bush, a sheep, a horse, a monkey, etc., and any cell (eg, a spleen cell, a nerve cell, a glial cell). Cells, kidney / 3 cells, bone marrow cells, mesangial cells, Langerhans cells, epidermal cells, epithelial cells, endothelial cells, fibroblasts, fiber cells, muscle cells, fat cells, immune cells (eg, macrophages, Τ cells, Β Cells, natural killer cells, mast cells, neutrophils, basophils, eosinophils, monocytes), megakaryocytes, synovial cells, chondrocytes, bone cells, osteoblasts, osteoclasts, breast cells, Hepatocytes or stromal cells, or precursors of these cells, stem cells or cancer cells), blood cells, or any tissue where these cells are present, such as the brain, Each site (e.g., olfactory bulb, acrosomal nucleus, basal sphere, hippocampus, thalamus, hypothalamus, hypothalamus, cerebral cortex, medulla oblongata, cerebellum, occipital lobe, frontal lobe, temporal lobe, putamen, caudate nucleus, brain Stain, substantia nigra), spinal cord, pituitary, stomach, kidney, kidney, liver, gonad, thyroid, gall bladder, bone marrow, adrenal gland, skin, muscle, lung, digestive tract (eg, large intestine, small intestine), blood vessel, heart, Proteins derived from the thymus, spleen, submandibular gland, peripheral blood, peripheral blood cells, prostate, testes, testis, ovaries, placenta, uterus, bones, joints, skeletal muscle, etc. (particularly in the brain and parts of the brain) Or a synthetic protein.

配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列と しては、 例えば、 配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列と約 5 0 %以上、 好ましくは約 7 0 %以上、 より好ましくは約 8 0 %以上、 さらに好ましくは約 9 0 %以上、 最も好ましくは約 9 5 %以上の相同性を有するアミノ酸配列など が挙げられる。  The amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 is, for example, about 50% or more, preferably about 70% or more, the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11. More preferably, the amino acid sequence has about 80% or more, more preferably about 90% or more, and most preferably about 95% or more homology.

配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を 含有する蛋白質としては、 例えば、 配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列 と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、 配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸 配列からなる〇Τ 7 Τ 0 2 2と実質的に同質の活性を有するレセプ夕一蛋白質 などが好ましく、 具体的には、 配列番号： 2 4または配列番号： 2 7で表され るァミノ酸配列からなるレセプター蛋白質などがあげられる。 Examples of the protein having an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 include, for example, a protein having an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11; Preferred is a receptor protein having substantially the same activity as that of Τ 7 Τ 0 2 2 consisting of the amino acid sequence represented by No. 11; specifically, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 2 Represented by 7 And a receptor protein comprising an amino acid sequence.

アミノ酸配列の相同性は、 相同性計算アルゴリズム NCB I BLAST ( Na t i on a l Ce n t e r f o r B i o t e c hno l o gy I n f o rma t i on B a s i c Lo c a l A l i gnme n t S e a r c h To o l) を用い、 以下の条件 （期待値 = 10 ；ギャップを許す； マトリクス = BLOSUM62 ；フィルタリング =〇FF) にて計算すること ができる。  Amino acid sequence homology was calculated using the homology calculation algorithm NCB I BLAST (Nati on al Center for Biote hno logy I nfo rma ti on B asic Lo cal A li gn mn e nt Search To ol). (Expected value = 10; Allow gap; Matrix = BLOSUM62; Filtering = 計算 FF).

実質的に同質の活性としては、 例えば、：リガンド結合活性またはシグナル情 報伝達作用などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それらの活性が性質的に同 質であることを示す。 したがって、 リガンド結合活性またはシグナル情報伝達 作用などの活性が同等 （例、 約 0. 01〜100倍、 好ましくは約 0. 5〜2 0倍、 より好ましくは約 0. 5〜2倍） であることが好ましいが、 これらの活 性の程度や蛋白質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。  Substantially the same activity includes, for example ,: ligand binding activity or signal signaling. Substantially the same indicates that their activities are the same in nature. Therefore, the activities such as the ligand binding activity or the signal transduction activity are equivalent (eg, about 0.01 to 100 times, preferably about 0.5 to 20 times, more preferably about 0.5 to 2 times). It is preferable that the quantitative factors such as the degree of activity and the molecular weight of the protein be different.

リガンド結合活性またはシグナル情報伝達作用などの活性の測定は、 自体公 知の方法に準じて行なうことができるが、 例えば、 後述するリガンドの決定方 法ゃスクリ一二ング方法に従って測定することができる。  The measurement of the activity such as ligand binding activity or signal information transduction can be carried out according to a method known per se. For example, it can be measured according to a ligand determination method to be described later ゃ screening method. .

また、 OT7T022としては、 （ i ) 配列番号： 1 1、 配列番号： 24ま たは配列番号： 27で表わされるアミノ酸配列中の 1または 2個以上 （好まし くは、 1〜30個程度、 より好ましくは 1〜1 0個程度、 さらに好ましくは数 個 （1または 2個） ) のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、 （ii) 配列番号： 1 1、 配列番号： 24または配列番号： 27で表わされるアミノ酸配列に 1ま たは 2個以上（好ましくは、 1〜30個程度、 より好ましくは 1〜10個程度、 さらに好ましくは数個（1または 2個）） のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、 (iii) 配列番号： 1 1、 配列番号： 24または配列番号： 27で表わされるァ ミノ酸配列中の 1または 2個以上 （好ましくは、 1〜30個程度、 より好まし くは 1〜10個程度、 さらに好ましくは数個 （1または 2個） ） のアミノ酸が 他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、 または （iv) それら欠失 ·付加，置 換を組み合わせたアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質なども用いられる。 本明細書における OT 7 T 022は、 ぺプチド標記の慣例に従って左端が N 末端 （ァミノ末端） 、 右端が C末端 （カルボキシル末端） である。 配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列からなる OT7T 022をはじめとする〇T 7 TO 22は、 C末端が力ルポキシル基 （_C〇〇H) 、 カルポキシレート（—C 〇0— )、 アミド （― C〇NH2) またはエステル （_C〇〇R) のいずれであつ てもよい。 OT7T022 includes (i) one or more or more amino acids in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 27 (preferably, about 1 to 30, More preferably about 1 to 10 amino acids, and still more preferably several (1 or 2) amino acids deleted, (ii) SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 27 An amino acid sequence obtained by adding one or more (preferably about 1 to 30, more preferably about 1 to 10, and more preferably several (1 or 2)) amino acids to the amino acid sequence represented. (Iii) one or two or more amino acids in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 27 (preferably about 1 to 30, more preferably 1 to 30) About 10 amino acids, more preferably several (1 or 2) amino acids The amino acid sequence are substituted with amino acid, or (iv) their deletion, addition, etc. receptor protein comprising the amino acid sequence which is a combination of substitution is also used. OT 7 T 022 in the present specification has N at the left end according to the convention of peptide notation. The end (amino end) and the right end are the C end (carboxyl end). 〇T 7 TO 22 including OT7T 022 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 has a C-terminal lipoxyl group (_C〇〇H), carboxylate (—C〇0—), amide It may be either (—C〇NH 2 ) or ester (_C〇〇R).

ここでエステルにおける Rとしては、 例えば、 メチル、 ェチル、 n—プロピ ル、 イソプロピルもしくは n—ブチルなどの

Figure imgf000039_0001
アルキル基、 例えば、 シクロ ペンチル、 シクロへキシルなどの C3_8シクロアルキル基、 例えば、 フエニル、 α—ナフチルなどの C6_12ァリール基、 例えば、 ベンジル、 フエネチルなどの フエニル _Ci_2アルキル基もしくはひ一ナフチルメチルなどの α—ナフチル -0,_2アルキル基などの C 7 _ i 4ァラルキル基のほか、 経口用エステルとして 汎用されるビバロイルォキシメチル基などが用いられる。 Here, R in the ester is, for example, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl or n-butyl.
Figure imgf000039_0001
Alkyl group, for example, cyclo pentyl, C 3 _ 8 cycloalkyl group such as cyclohexyl, for example, phenyl, C 6 _ 12 Ariru groups such as α- naphthyl, for example, benzyl, or phenyl _Ci_ 2 alkyl group such as phenethyl α- naphthyl -0 such shed one naphthylmethyl, other C 7 _ i 4 Ararukiru group such _ 2 alkyl groups, such as Viva Roy Ruo carboxymethyl group which is generally used as an oral ester.

OT7T022が C末端以外にカルボキシル基 （またはカルボキシレート） を有している場合、 力ルポキシル基がアミド化またはエステル化されているも のも OT7T022の範囲に含まれる。 この場合のエステルとしては、 例えば 上記した C末端のエステルなどが用いられる。  When OT7T022 has a carboxyl group (or carboxylate) at a position other than the C-terminus, a compound in which a carbonyl group is amidated or esterified is also included in the scope of OT7T022. As the ester in this case, for example, the above-mentioned C-terminal ester and the like are used.

さらに、 OT 7 TO 22には、 上記した OT 7 T 022において、 N末端の メチォニン残基のァミノ基が保護基 （例えば、 ホルミル基、 ァセチルなどの C2 _6アルカノィル基などの Ci— 6ァシル基など）で保護されているもの、 N端側が 生体内で切断され生成したダル夕ミル基がピログルタミン酸化したもの、 分子 内のアミノ酸の側鎖上の置換基 （例えば、 —〇H、 —SH、 アミノ基、 イミダ ゾ一ル基、 インドール基、 グァニジノ基など） が適当な保護基 （例えば、 ホル ミル基、 ァセチルなどの C2_ 6アルカノィル基などの — 6ァシル基など） で保 護されているもの、 あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖蛋白質などの複合蛋白 質なども含まれる。 In addition, the OT 7 TO 22, in OT 7 T 022 as described above, Amino group protecting groups Mechionin residues of N-terminal (e.g., formyl group, such as C 2 _ 6 Arukanoiru group such Asechiru CI- 6 Ashiru Group, etc.), N-terminal cleavage of the darminyl mill group generated in vivo by pyroglutamine oxidation, substituents on the side chains of amino acids in the molecule (eg, —〇H, — SH, amino group, imidazole group, indole group, guanidino group, etc.) are protected by appropriate protecting groups (eg, formyl group, acetyl group such as C 2 _ 6 alkanoyl group, etc., etc.). Or a complex protein such as a so-called glycoprotein to which a sugar chain is bound.

〇T 7 TO 22の具体例としては、 例えば、 配列番号： 1 1で表わされるァ ミノ酸配列からなるラット OT7T 022、 配列番号： 24で表されるァミノ 酸配列からなるヒト〇T7T022、 配列番号： 27で表されるァミノ酸配列 からなるマウス ΟΤ 7 TO 22などが用いられる。 OT7T 022の部分ペプチドとしては、 前記した〇T 7 TO 22の部分べ プチドであれば何れのものであってもよいが、 例えば、 OT7T022蛋白質 分子のうち、 細胞膜の外に露出している部位であって、 レセプタ一結合活性を 有するものなどが用いられる。 Specific examples of 〇T 7 TO 22 include, for example, rat OT7T 022 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, human 〇T7T022 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: A mouse comprising the amino acid sequence represented by 27 ΟΤ 7 TO 22 and the like are used. The partial peptide of OT7T022 may be any peptide as long as it is the partial peptide of 〇T7TO22 described above.For example, in the site of OT7T022 protein molecule that is exposed outside the cell membrane, Those having a receptor-binding activity are used.

具体的には、 配列番号： 1 1、 配列番号： 24または配列番号： 27で表わ されるアミノ酸配列からなる OT7T022の部分ペプチドとしては、 疎水性 プロット解析において細胞外領域 （親水性 （Hydrophilic) 部位） であると分析 された部分を含むペプチドである。 また、：疎水性 （Hydrophobic) 部位を一部に 含むペプチドも同様に用いることができる。 個々のドメインを個別に含むぺプ チドも用い得るが、 複数のドメインを同時に含む部分のペプチドでも良い。  Specifically, as a partial peptide of OT7T022 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 27, the extracellular region (hydrophilic) Is a peptide containing a portion that was analyzed to be Also, a peptide partially containing a hydrophobic (Hydrophobic) site can be used. A peptide containing individual domains may be used, but a peptide containing a plurality of domains at the same time may be used.

OT7T022の部分ペプチドのアミノ酸の数は、 前記した OT7T022 の構成アミノ酸配列のうち少なくとも 20個以上、 好ましくは 50個以上、 よ り好ましくは 100個以上のアミノ酸配列からなるペプチドなどが好ましい。 また、 OT 7 T022の部分ペプチドは、 上記アミノ酸配列中の 1または 2 個以上 （好ましくは、 1〜10個程度、 さらに好ましくは数個 （1または 2個 ) ) のアミノ酸が欠失し、 または、 そのアミノ酸配列に 1または 2個以上 （好 ましくは、 1〜20個程度、 より好ましくは 1〜10個程度、 さらに好ましく は数個 （1または 2個） ） のアミノ酸が付加し、 または、 そのアミノ酸配列中 の 1または 2個以上 （好ましくは、 1〜10個程度、 より好ましくは数個 （1 または 2個） ） のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されていてもよい。  The number of amino acids in the partial peptide of OT7T022 is preferably a peptide having an amino acid sequence of at least 20 or more, preferably 50 or more, more preferably 100 or more of the constituent amino acid sequences of OT7T022. In addition, the partial peptide of OT7T022 has one or more (preferably about 1 to 10, more preferably several (1 or 2)) amino acids in the amino acid sequence, or One or more (preferably about 1 to 20, more preferably about 1 to 10, and more preferably several (1 or 2)) amino acids added to the amino acid sequence; or One or more (preferably about 1 to 10, more preferably several (1 or 2)) amino acids in the amino acid sequence may be substituted with another amino acid.

また、 OT7T 022の部分ペプチドは C末端が力ルポキシル基 （― COO H) 、 カルボキシレート （一 COO— ) 、 アミド （― CONH2) またはエステ ル （_C〇OR) (Rは上記と同意義を示す） のいずれであってもよい。 In the partial peptide, the C-terminus force Rupokishiru group OT7T 022 (- COO H), carboxylate (one COO-), amide - a (CONH 2) or ester le (_C_〇_OR) (R is as above defined Shown).

OT7T 022の部分ペプチドが C末端以外にカルボキシル基 （またはカル ポキシレート） を有している場合、 カルボキシル基がアミド化またはエステル 化されているものも OT 7 T 022の範囲に含まれる。 この場合のエステルと しては、 例えば上記した C末端のエステルなどが用いられる。  When the partial peptide of OT7T022 has a carboxyl group (or carboxylate) other than the C-terminus, those in which the carboxyl group is amidated or esterified are also included in the scope of OT7T022. As the ester in this case, for example, the above-mentioned C-terminal ester and the like are used.

. さらに、 OT 7 T 022の部分ペプチドには、 前記した OT7T 022と同 様に、 N末端のメチォニン残基のァミノ基が保護基で保護されているもの、 N 端側が生体内で切断され生成したグルタミン残基がピログルタミン酸化したも の、 分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されているもの、 あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれ る。 Further, the partial peptides of OT7T022 include, as in OT7T022 described above, those in which the amino group of the N-terminal methionine residue is protected with a protecting group, Glutamine residue generated by cleavage at the end in vivo is pyroglutamine-oxidized, and the substituent on the side chain of the amino acid in the molecule is protected by an appropriate protecting group, or a sugar chain is bonded. Complex peptides such as glycopeptides are also included.

QT7T 022またはその部分ペプチドの塩としては、 とりわけ生理学的に 許容される酸付加塩が好ましい。 この様な塩としては、例えば無機酸（例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水素酸、 硫酸） との塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスルホン酸、 ベンゼンスルホン酸） との塩 などが用いられる。  As a salt of QT7T022 or a partial peptide thereof, a physiologically acceptable acid addition salt is particularly preferable. Examples of such salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid) , Tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid).

OT7T022またはその塩、 および OT 7 T 022を発現する細胞または その細胞膜画分は、 WOO 0/29441号、 WOO 1Z66134号などに 記載の方法に従って製造することができる。  OT7T022 or a salt thereof, and a cell expressing OT7T022 or a cell membrane fraction thereof can be produced according to the method described in WOO 0/29441, WOO 1Z66134 and the like.

OT7T022をコードするポリヌクレオチドとしては、 OT7T022を コードする塩基配列 （DNAまたはRNA、 好ましくは DNA) を含有するも のであればいかなるものであってもよい。 該ポリヌクレオチドとしては、 OT 7T022をコードする DNA、 mRN A等の RN Aであり、 二本鎖であって も、 一本鎖であってもよい。 二本鎖の場合は、 二本鎖 DNA、 二本鎖 RNAま たは DNA： RNAのハイブリッドでもよい。 一本鎖の場合は、 センス鎖 （即 ち、 コード鎖） であっても、 アンチセンス鎖 （即ち、 非コード鎖） であっても よい。  The polynucleotide encoding OT7T022 may be any polynucleotide containing a nucleotide sequence (DNA or RNA, preferably DNA) encoding OT7T022. The polynucleotide is a DNA encoding OT7T022, RNA such as mRNA, and may be double-stranded or single-stranded. In the case of double-stranded, double-stranded DNA, double-stranded RNA or DNA: RNA hybrid may be used. In the case of a single strand, it may be a sense strand (that is, a coding strand) or an antisense strand (that is, a non-coding strand).

〇T7 T022をコードするポリヌクレオチドを用いて、 例えば、 公知の実 験医学増刊 「新 PCRとその応用」 15(7)、 1997記載の方法またはそれに準じた 方法により、 OT7T022の mRN Aを定量することができる。  MUsing the polynucleotide encoding T7 T022, for example, the mRNA of OT7T022 is quantified by the method described in the well-known extraordinary experimental medicine “New PCR and Its Applications” 15 (7), 1997 or a method analogous thereto. be able to.

OT7T 022をコードする DNAとしては、 ゲノム DNA、 ゲノム DNA ライブラリー、 前記した細胞 ·組織由来の cDNA、 前記した細胞 ·組織由来 の cDNAライブラリー、 合成 DNAのいずれでもよい。 ライブラリ一に使用 するベクタ一は、 バクテリオファージ、 プラスミド、 コスミド、 ファージミド などいずれであってもよい。 また、 前記した細胞 ·組織より total RN Aまたは mRNA画分を調製したものを用いて直接 Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (以下、 R T-P C R法と略称する） によって増幅することもで きる。 The DNA encoding OT7T022 may be any of genomic DNA, genomic DNA library, cDNA derived from the above-described cells and tissues, cDNA library derived from the above-described cells and tissues, and synthetic DNA. The vector used for the library may be any of bacteriophage, plasmid, cosmid, phagemid and the like. In addition, total RNA or Using the prepared mRNA fraction, it can also be directly amplified by Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (hereinafter abbreviated as RTPCR method).

具体的には、 OT 7 TO 22をコードする DN Aとしては、 例えば、 配列番 号： 12、 配列番号： 25、 配列番号： 26または配列番号： 28で表わされ る塩基配列を含有する DNA、 または配列番号： 12、 配列番号： 25、 配列 番号： 26または配列番号： 28で表わされる塩基配列と八イストリンジェン 卜な条件下でハイブリダィズする塩基配列を有し、 配列番号： 1 1、 配列番号： 24または配列番号： 27で表されるアミノ酸配列からなる OT 7 Τ 022と 実質的に同質の活性 （例、 リガンド結合活性、 シグナル情報伝達作用など） を 有するレセプター蛋白質をコードする DN Αであれば何れのものでもよい。 配列番号： 12、 配列番号： 25、 配列番号： 26または配列番号： 28で 表わされる塩基配列とハイブリダィズできる DNAとしては、 例えば、 配列番 号： 12、 配列番号： 25、 配列番号： 26または配列番号： 28で表わされ る塩基配列と約 70%以上、 好ましくは約 80%以上、 より好ましくは約 90 %以上、 最も好ましくは約 95%以上の相同性を有する塩基配列を含有する D N Aなどが用いられる。  Specifically, the DNA encoding OT7TO22 includes, for example, a DNA containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 or SEQ ID NO: 28 Or a nucleotide sequence that hybridizes with the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 or SEQ ID NO: 28 under eight stringent conditions. DNΑ encoding a receptor protein having substantially the same activity as OT7Τ022 (eg, ligand binding activity, signal transduction activity, etc.) consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 27. Any one may be used. Examples of DNA that can hybridize with the base sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 or SEQ ID NO: 28 include, for example, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 or sequence DNA containing a base sequence having a homology of about 70% or more, preferably about 80% or more, more preferably about 90% or more, and most preferably about 95% or more with the base sequence represented by No. 28 Is used.

塩基配列の相同性は、 相同性計算アルゴリズム NCB I BLAST (N a t i o n a 1 Ce n t e r f o r B i o t e c hno l ogy I n f o r m a t i on B a s i c Lo c a l A l i gnme n t S e a r c h Too l) を用い、 以下の条件 （期待値 = 10 ；ギャップを許す；フィ ル夕リング =〇N；マッチスコア = 1 ；ミスマッチスコア =— 3) にて計算す ることができる。  The nucleotide sequence homology was determined using the homology calculation algorithm NCB I BLAST (Nationa 1 Center for Biotec hno l ogy I nformati on B asic Local A li gn mn e nt Search Tool) under the following conditions (expected value). = 10; allow a gap; filter ring = 〇N; match score = 1; mismatch score =-3).

ハイブリダィゼ一シヨンは、 自体公知の方法あるいはそれに準じる方法、 例 えば、 モレキュラー 'クロ一ニンク (Molecular Cloning) 2nd (J. Sambrooket aし, Cold Spring Harbor Lab. "Press, 1989) に記載の方法などに従って行な うことができる。 また、 市販のライブラリ一を使用する場合、 添付の使用説明 書に記載の方法に従って行なうことができる。 より好ましくは、 ハイストリン ジェン卜な条件に従って行なうことができる。 該ハイストリンジェン卜な条件とは、 例えば、 ナトリウム濃度が約 1 9〜4 OmM、 好ましくは約 1 9〜2 OmMで、 温度が約 50〜70で、 好ましくは 約 60〜65 :の条件を示す。 特に、 ナトリウム濃度が約 1 9 mMで温度が約 65 の場合が最も好ましい。 Hybridization can be performed according to a method known per se or a method analogous thereto, for example, a method described in Molecular Cloning (Molecular Cloning) 2nd (J. Sambrooketa, Cold Spring Harbor Lab. "Press, 1989). When a commercially available library is used, it can be carried out according to the method described in the attached instruction manual, and more preferably, under high stringent conditions. The high stringent conditions include, for example, a sodium concentration of about 19 to 4 OmM, preferably about 19 to 2 OmM, a temperature of about 50 to 70, and preferably about 60 to 65: Show. In particular, a sodium concentration of about 19 mM and a temperature of about 65 are most preferred.

より具体的には、 配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列からなるラット 〇T 7 TO 22をコードする DNAとしては、 配列番号： 12で表わされる塩 基配列からなる DNAなどが用いられる。 配列番号： 24で表わされるァミノ 酸配列からなるヒト OT7T 022をコ ドする DNAとしては、 配列番号： 25または配列番号： 26で表わされる塩基配列からなる DNAなどが用いら れる。 配列番号： 27で表わされるアミノ酸配列からなるマウス OT7T02 2をコードする DNAとしては、 配列番号： 28で表わされる塩基配列からな る DN Aなどが用いられる。  More specifically, as the DNA encoding rat T7TO22 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a DNA consisting of the base sequence represented by SEQ ID NO: 12, or the like is used. As the DNA encoding human OT7T022 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 24, DNA comprising the base sequence represented by SEQ ID NO: 25 or SEQ ID NO: 26 and the like are used. As the DNA encoding mouse OT7T022 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27, DNA consisting of the base sequence represented by SEQ ID NO: 28 or the like is used.

OT7T022の部分ペプチドをコードする DNAとしては、 前述した OT 7T022の部分ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであればいか なるものであってもよい。 また、 ゲノム DNA、 ゲノム DNAライブラリ一、 前記した細胞 ·組織由来の c DNA、 前記した細胞 ·組織由来の c DNAライ ブラリー、合成 DNAのいずれでもよい。ライブラリ一に使用するべクタ一は、 バクテリオファージ、 プラスミド、 コスミド、 ファージミドなどいずれであつ てもよい。 また、 前記した細胞 ·組織より mRNA画分を調製したものを用い て直接 Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (以下、 RT-P C R法と略称する） によって増幅することもできる。  As the DNA encoding the partial peptide of OT7T022, any DNA may be used as long as it contains the base sequence encoding the partial peptide of OT7T022 described above. Further, it may be any of genomic DNA, genomic DNA library, the above-described cDNA derived from cells and tissues, the above-described cDNA library derived from cells and tissues, and synthetic DNA. The vector used for the library may be any of bacteriophage, plasmid, cosmid, phagemid and the like. Alternatively, it can be directly amplified by reverse transcriptase polymerase chain reaction (hereinafter abbreviated as RT-PCR method) using the mRNA fraction prepared from the cells and tissues described above.

具体的には、 OT7T022の部分ペプチドをコードする DN Aとしては、 例えば、 （ 1 ) 配列番号： 12、 配列番号： 25、 配列番号： 26または配列 番号： 28で表わされる塩基配列を有する DNAの部分塩基配列を有する DN A、 または' (2) 配列番号： 12、 配列番号： 25、 配列番号： 26または配 列番号： 28で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブ リダィズする塩基配列を有し、 配列番号： 1 1、 配列番号： 24または配列番 号： 27で表わされるアミノ酸配列からなる〇T 7 T022と実質的に同質の 活性 （例、 リガンド結合活性またはシグナル情報伝達作用など） を有するレセ プ夕ー蛋白質をコードする DN Aの部分塩基配列を有する DN Aなどが用いら れる。 Specifically, the DNA encoding the partial peptide of OT7T022 includes, for example, (1) a DNA having a base sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 or SEQ ID NO: 28 DNA having a partial base sequence, or '(2) a base that hybridizes with the base sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 or SEQ ID NO: 28 under high stringent conditions It has a sequence and has substantially the same activity as ΔT 7 T022 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 27 (eg, ligand binding activity or signal transduction activity) Etc.) For example, a DNA having a partial nucleotide sequence of the DNA encoding the probe protein may be used.

ハイブリダイゼーションの方法および条件は前記と同様である。  Hybridization methods and conditions are the same as described above.

OT 7 T 022またはその部分ペプチドをコードする DNAから〇T7 TO 22またはその部分ペプチドを製造する場合、 WOO 0/29441号、 WO 01/66134号などに記載の方法に従って行うことができる。  When 〇T7TO22 or a partial peptide thereof is produced from DNA encoding OT7T022 or a partial peptide thereof, it can be carried out according to the method described in WOO / 29441, WO01 / 66134 or the like.

RFRP, その部分ペプチド、 もしくはそのアミドもしくはそのエステルま たはその塩に対する抗体は、 自体公知の方法、例えば W〇 00 29441号、 WOO 1Z66134号などに記載の方法に従って製造し、 使用することがで きる。  Antibodies against RFRP, its partial peptide, or its amide or its ester or its salt can be produced and used according to a method known per se, for example, the method described in WO 0029441, WOO 1Z66134, or the like. Wear.

OT7T022, その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体は、 自体公知 の方法、 例えば WO00/29441号、 WO01/66134号などに記載 の方法に従って製造し、 使用することができる。  An antibody against OT7T022, its partial peptide or a salt thereof can be produced and used according to a method known per se, for example, a method described in WO00 / 29441, WO01 / 66134 or the like.

RFRPまたは OT7T 022をコードする D N Aの塩基配列の一部、 また は該 DN Aと相補的な塩基配列の一部を含有してなるポリヌクレオチドとは、 上記した RFRPまたは OT 7 T 022の部分ペプチドをコードする D N Aを 包含するだけではなく、 RN Aをも包含する意味で用いられる。  A part of the base sequence of the DNA encoding RFRP or OT7T022 or a polynucleotide containing a part of the base sequence complementary to the DNA refers to the partial peptide of RFRP or OT7T022 described above. Not only does it include DNA encoding, but also RNA.

本発明に従えば、 RFRP遺伝子または OT7T 022遺伝子の複製または 発現を阻害することのできるアンチセンス ·ポリヌクレオチド （核酸） を、 ク ローン化した、 あるいは決定された RFRPまたは OT7T 022をコードす る DNAの塩基配列情報に基づき設計し、 合成しうる。 そうしたポリヌクレオ チド （核酸） は、 RFRP遺伝子または OT7T 022遺伝子の RNAとハイ プリダイズすることができ、 該 R N Aの合成または機能を阻害することができ るか、 あるいは RFRP関連 RN Aまたは OT 7 T 022関連 RN Aとの相互 作用を介して RFRP遺伝子または〇T 7 T022遺伝子の発現を調節 ·制御 することができる。 RFRP関連 RN Aまたは OT 7 T022関連 RNAの選 択された配列に相補的なポリヌクレオチド、 および R F R P関連 RN Aまたは QT7T 022関連 RNAと特異的にハイブリダィズすることができるポリヌ クレオチドは、 生体内および生体外で RFRP遺伝子または OT 7 T022遺 伝子の発現を調節 ·制御するのに有用であり、 また病気などの治療または診断 に有用である。 用語 「対応する」 とは、 遺伝子を含めたヌクレオチド、 塩基配 列または核酸の特定の配列に相同性を有するあるいは相補的であることを意味 する。 ヌクレオチド、 塩基配列または核酸とペプチド （蛋白質） との間で 「対 応する」 とは、 ヌクレオチド （核酸） の配列またはその相補体から誘導される 指令にあるペプチド （蛋白質） のアミノ酸を通常指している。 OT7T022 遺伝子の 5， 端ヘアピンループ、 5' 端 6—ベースペア ' リピート、 5， 端非 翻訳領域、 ポリペプチド翻訳開始コドン、 '.蛋白質コード領域、 ORF翻訳開始 コドン、 3' 端非翻訳領域、 3' 端パリンドローム領域、 および 3' 端へアビ ンループは好ましい対象領域として選択しうるが、 RFRP遺伝子または OT 7T 022遺伝子内の如何なる領域も対象として選択しうる。 According to the present invention, an antisense polynucleotide (nucleic acid) capable of inhibiting the replication or expression of the RFRP gene or OT7T022 gene is cloned or determined, and DNA encoding RFRP or OT7T022 is determined. It can be designed and synthesized based on the nucleotide sequence information of Such a polynucleotide (nucleic acid) can hybridize with the RNA of the RFRP gene or the OT7T022 gene and can inhibit the synthesis or function of the RNA, or can be an RFRP-related RNA or OT7T022-related The expression of the RFRP gene or the ΔT7T022 gene can be regulated and controlled through the interaction with RNA. Polynucleotides that are complementary to a selected sequence of RFRP-related RNA or OT7T022-related RNA, and polynucleotides that can specifically hybridize to RFRP-related RNA or QT7T022-related RNA, are in vivo and in vivo. Outside RFRP gene or OT 7 T022 It is useful for regulating and controlling gene expression, and is also useful for treating or diagnosing diseases. The term "corresponding" means having homology or being complementary to a particular sequence of nucleotides, base sequences or nucleic acids, including genes. “Corresponding” between a nucleotide, base sequence or nucleic acid and a peptide (protein) usually refers to the amino acid of the peptide (protein) specified in the directive derived from the nucleotide (nucleic acid) sequence or its complement. I have. 5 'end hairpin loop, 5' end 6—base pair 'repeat, 5' end untranslated region, polypeptide translation start codon, '. Protein coding region, ORF translation start codon, 3' end untranslated region of OT7T022 gene, The 3 'end palindrome region and the 3' end avid loop may be selected as preferred regions of interest, but any region within the RFRP gene or OT7T022 gene may be selected as the region of interest.

目的核酸と、 対象領域の少なくとも一部に相補的でハイプリダイズすること ができるポリヌクレオチドとの関係は、 対象物と 「アンチセンス」 であるとい うことができる。 アンチセンス ·ポリヌクレオチドは、 2—デォキシー D—リ ボースを含有しているポリデォキシリポヌクレオチド、 D—リポースを含有し ているポリリボヌクレオチド、 プリンまたはピリミジン塩基の N—グリコシド であるその他のタイプのポリヌクレオチド、 あるいは非ヌクレオチド骨格を有 するその他のポリマー （例えば、 市販の蛋白質核酸および合成配列特異的な核 酸ポリマー） または特殊な結合を含有するその他のポリマー （但し、 該ポリマ 一は DNAや RNA中に見出されるような塩基のペアリングゃ塩基の付着を許 容する配置をもつヌクレオチドを含有する） などが挙げられる。 それらは、 2 本鎖 DNA、 1本鎖 DNA、 2本鎖 RNA、 1本鎖 RNA、 さらに DNA : R NAハイブリッドであることができ、 さらに非修飾ポリヌクレオチド （または 非修飾オリゴヌクレオチド） 、 さらには公知の修飾の付加されたもの、 例えば 当該分野で知られた標識のあるもの、 キャップの付いたもの、 メチル化された もの、 1個以上の天然のヌクレオチドを類縁物で置換したもの、 分子内ヌクレ ォチド修飾のされたもの、 例えば非荷電結合 （例えば、 メチルホスホネート、 ホスホトリエステル、 ホスホルアミデート、 力ルバメ一トなど） を持つもの、 電荷を有する結合または硫黄含有結合 （例えば、 ホスホロチォエート、 ホスホ 口ジチォェ一トなど） を持つもの、 例えば蛋白質 （ヌクレアーゼ、 ヌクレア一 ゼ'インヒビ夕一、 トキシン、 抗体、 シグナルペプチド、 ポリ一 L一リジンな ど） や糖 （例えば、 モノサッカライドなど） などの側鎖基を有しているもの、 インターカレント化合物（例えば、 ァクリジン、 プソラレンなど） を持つもの、 キレート化合物 （例えば、 金属、 放射活性をもつ金属、 ホウ素、 酸化性の金属 など） を含有するもの、 アルキル化剤を含有するもの、 修飾された結合を持つ もの （例えば、 ひァノマ一型の核酸など） であってもよい。 ここで 「ヌクレオ シド」 、 「ヌクレオチド」 および 「核酸」：とは、 プリンおよびピリミジン塩基 を含有するのみでなく、 修飾されたその他の複素環型塩基をもつようなものを 含んでいて良い。こうした修飾物は、メチル化されたプリンおよびピリミジン、 ァシル化されたプリンおよびピリミジン、 あるいはその他の複素環を含むもの であってよい。 修飾されたヌクレオチドおよび修飾されたヌクレオチドはまた 糖部分が修飾されていてよく、 例えば、 1個以上の水酸基がハロゲンとか、 肪族基などで置換されていたり、 あるいはエーテル、 ァミンなどの官能基に変 換されていてよい。 The relationship between the target nucleic acid and a polynucleotide that is complementary to at least a portion of the target region and can hybridize can be said to be "antisense" with the target. Antisense polynucleotides include polydexoxy liponucleotides containing 2-dexoxy D-ribose, polyribonucleotides containing D-ribose, and N-glycosides of purine or pyrimidine bases. Type of polynucleotide or other polymer with a non-nucleotide backbone (eg, commercially available protein nucleic acids and synthetic sequence-specific nucleic acid polymers) or other polymers containing special bonds (where the polymer is DNA And base pairing as found in RNA (contains nucleotides having a configuration that allows base attachment)). They can be double-stranded DNA, single-stranded DNA, double-stranded RNA, single-stranded RNA, and even DNA: RNA hybrids, and can also be unmodified polynucleotides (or unmodified oligonucleotides), or With known modifications, e.g., labeled, capped, methylated, substituted by one or more natural nucleotides with analogs, known in the art, intramolecular Nucleotide-modified, such as those having uncharged bonds (eg, methylphosphonates, phosphotriesters, phosphoramidates, sorbamates, etc.), charged or sulfur-containing bonds (eg, phosphoro Chooate, phospho Mouth, such as proteins (nucleases, nucleases, inhibitors, toxins, antibodies, signal peptides, poly-L-lysine, etc.) and sugars (eg, monosaccharides) Those having a chain group, those having an interactive compound (eg, acridine, psoralen, etc.), those containing chelating compounds (eg, metal, radioactive metal, boron, oxidizing metal, etc.), It may be one containing an alkylating agent or one having a modified bond (for example, a nucleic acid of the type I). Here, “nucleoside”, “nucleotide” and “nucleic acid”: not only contain purine and pyrimidine bases, but may also include those having other modified heterocyclic bases. Such modifications may include methylated purines and pyrimidines, acylated purines and pyrimidines, or other heterocycles. Modified nucleotides and modified nucleotides may also be modified at the sugar moiety, e.g., where one or more hydroxyl groups have been replaced with a halogen, an aliphatic group, or the like, or a functional group such as an ether, an amine, etc. It may be converted.

本発明のアンチセンス ·ポリヌクレオチド （核酸） は、 R N A、 D NA、 あ るいは修飾された核酸 （R NA、 D NA) である。 修飾された核酸の具体例と しては核酸の硫黄誘導体ゃチォホスフェート誘導体、 そしてポリヌクレオシド アミドゃオリ： ίヌクレオシドアミドの分解に抵抗性のものが挙げられるが、 そ れに限定されるものではない。 本発明のアンチセンス核酸は次のような方針で 好ましく設計されうる。 すなわち、 細胞内でのアンチセンス核酸をより安定な ものにする、 アンチセンス核酸の細胞透過性をより高める、 目標とするセンス 鎖に対する親和性をより大きなものにする、 そしてもし毒性があるならアンチ センス核酸の毒性をより小さなものにする。  The antisense polynucleotide (nucleic acid) of the present invention is RNA, DNA, or a modified nucleic acid (RNA, DNA). Specific examples of the modified nucleic acids include sulfur derivatives of nucleic acids, thiophosphate derivatives, and polynucleoside amides: those that are resistant to degradation of nucleoside amides, but are not limited thereto. Absent. The antisense nucleic acid of the present invention can be preferably designed according to the following policy. That is, to make the antisense nucleic acid more stable in the cell, to make the antisense nucleic acid more cell permeable, to have a greater affinity for the target sense strand, and to be more toxic if it is toxic. Minimize the toxicity of sense nucleic acids.

こうして修飾は当該分野で数多く知られており、 例えば J. Kawakami et al .， Pharm Tech Japan, Vol . 8, pp. 247, 1992 ; Vol . 8， pp. 395, 1992 ; S. T. Crooke et al . ed.， Ant i sense Research and Appl icat ions, CRC Press, 1993 などに .開示がある。  Thus, many modifications are known in the art, for example, J. Kawakami et al., Pharm Tech Japan, Vol. 8, pp. 247, 1992; Vol. 8, pp. 395, 1992; ST Crooke et al. Ed. ., Ant isense Research and Applicat ions, CRC Press, 1993.

本発明のアンチセンス核酸は、 変化せしめられたり、 修飾された糖、 塩基、 結合を含有していて良く、 リボゾーム、 ミクロスフエアのような特殊な形態で 供与されたり、 遺伝子治療により適用されたり、 付加された形態で与えられる ことができうる。 こうして付加形態で用いられるものとしては、 リン酸基骨格 の電荷を中和するように働くポリリジンのようなポリカチオン体、 細胞膜との 相互作用を高めたり、 核酸の取込みを増大せしめるような脂質 （例えば、 ホス ホリピド、 コレステロールなど） といった粗水性のものが挙げられる。 付加す るに好ましい脂質としては、 コレステロールやその誘導体 （例えば、 コレステ リルクロ口ホルメート、 コール酸など） が挙げられる。 こうしたものは、 核酸 の 3' 端あるいは 5' 端に付着させることができ、 塩基、 糖、 分子内ヌクレオ シド結合を介して付着させることができうる。 その他の基としては、 核酸の 3 ' 端あるいは 5' 端に特異的に配置されたキャップ用の基で、 ェキソヌクレア ーゼ、 RNa s eなどのヌクレアーゼによる分解を阻止するためのものが挙げ られる。 こうしたキャップ用の基としては、 ポリエチレングリコール、 テトラ エチレングリコ一ルなどのグリコールをはじめとした当該分野で知られた水酸 基の保護基が挙げられるが、 それに限定されるものではない。 The antisense nucleic acids of the present invention may have altered or modified sugars, bases, It may contain a linkage and may be provided in a special form such as ribosomes, microspheres, applied by gene therapy, or provided in an added form. Thus, in the form of addition, polycations such as polylysine, which acts to neutralize the charge of the phosphate skeleton, and lipids, which increase the interaction with the cell membrane or increase the uptake of nucleic acids ( For example, phospholipids, cholesterol, etc.). Preferred lipids for addition include cholesterol and its derivatives (eg, cholesteryl chromate formate, cholic acid, etc.). These can be attached to the 3 'end or 5' end of the nucleic acid, and can be attached via a base, sugar, or intramolecular nucleoside bond. Other groups include cap groups specifically arranged at the 3 'end or 5' end of a nucleic acid for preventing degradation by nucleases such as exonuclease and RNase. Such capping groups include, but are not limited to, hydroxyl-protecting groups known in the art, including glycols such as polyethylene glycol and tetraethylene glycol.

アンチセンス核酸の阻害活性は、 本発明の形質転換体、 本発明の生体内や生 体外の遺伝子発現系、 あるいは G蛋白質共役型レセプター蛋白質の生体内や生 体外の翻訳系を用いて調べることができる。 該核酸それ自体公知の各種の方法 で細胞に適用できる。  The antisense nucleic acid inhibitory activity can be examined using the transformant of the present invention, the in vivo or in vitro gene expression system of the present invention, or the in vivo or in vitro translation system of a G protein-coupled receptor protein. it can. The nucleic acid can be applied to cells by various methods known per se.

RFRPまたは OT7T 022をコードするポリヌクレオチドに対する s i RNAは、 RFRPまたは OT7 TO 22をコードする RNAの一部とそれに 相補的な RN Aを含有する二重鎖 RN Aである。  The siRNA for a polynucleotide encoding RFRP or OT7T022 is a double-stranded RNA containing a portion of the RNA encoding RFRP or OT7TO22 and its complementary RNA.

s i RNAは、 公知の方法 （例、 Nature, 411巻， 494頁， 2001年） に準じて、 本発明のポリヌクレオチドの配列を基に設計して製造することができる。  The siRNA can be designed and produced based on the sequence of the polynucleotide of the present invention according to a known method (eg, Nature, 411, 494, 2001).

RFRPまたは〇T 7 TO 22をコードする RNAの一部を含有するリボザ ィムは、 公知の方法 （例、 TRENDS in Molecular Medicine, 7巻， 221頁， 2001 年） に準じて、 本発明のポリヌクレオチドの配列を基に設計して製造すること ができる。 例えば、 公知のリポザィムの配列の一部を RFRPまたは OT 7 T 022をコードする RNAの一部に置換することによって製造することができ る。 RFRPまたは OT7T 022をコードする RNAの一部としては、 公知 のリボザィムによって切断され得るコンセンサス配列 NUX (式中、 Nはすべ ての塩基を、 Xは G以外の塩基を示す） の近傍の配列などが挙げられる。 A ribozyme containing a part of RNA encoding RFRP or ΔT 7 TO 22 can be prepared according to a known method (eg, TRENDS in Molecular Medicine, Vol. 7, pp. 221, 2001). It can be designed and manufactured based on the nucleotide sequence. For example, it can be produced by replacing a part of the sequence of a known lipozyme with a part of RNA encoding RFRP or OT7T022. You. As a part of the RNA encoding RFRP or OT7T022, a sequence near a consensus sequence NUX (where N indicates all bases and X indicates a base other than G) which can be cleaved by a known ribozyme, etc. Is mentioned.

RFRPは滕グルカゴン分泌促進作用、 血糖上昇作用、 尿生成促進作用、 記 憶消去促進作用 （嫌な記憶の消去促進作用） を有しているので、 （i) RFR P、 その部分ペプチド、 もしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその 塩 （以下、 RFRPと略記する） 、 （ii) RFRPをコードする DNA、 (iii ) RFRPに対する抗体、 (iv) RFRPをコードする DNAに対するアンチ センス DNA、 （V) OT7T 022、 その部分ペプチドまたはその塩 （ΟΤ 7Τ022と略記する） 、 （vi) ΟΤ7Τ022をコードする DNA、 (vii) OT7T 022に対する抗体、 (viii) OT7T022をコードする DNAに 対するアンチセンス DNAは、 以下のような用途を有している。  Since RFRP has the action of promoting Teng glucagon secretion, increasing blood sugar, promoting urine production, and promoting memory erasure (the ability to promote elimination of unpleasant memory), (i) RFRP, its partial peptide, or Amide or its ester or salt thereof (hereinafter abbreviated as RFRP), (ii) DNA encoding RFRP, (iii) antibody against RFRP, (iv) antisense DNA against DNA encoding RFRP, (V) OT7T022 The partial peptide or its salt (abbreviated as ΟΤ 7ΟΤ022), (vi) DNA encoding ΟΤ7ΟΤ022, (vii) an antibody against OT7T022, and (viii) antisense DNA against OT7T022 encoding DNA are as follows: Application.

(1) RFRPの機能不全に関連する疾患の予防 ·治療剤  (1) Prevention and treatment of diseases related to RFRP dysfunction

a) RFRP, b) R F R Pをコードする DN A、 c) OT7T022また は d) OT7T022をコードする DNAを、 R F R Pまたは〇T 7 T 022 の機能不全に関連する疾患の予防 ·治療などの医薬として使用することができ る。  a) RFRP, b) DNA encoding RFRP, c) OT7T022 or d) DNA encoding OT7T022 used as a medicament for the prevention and treatment of diseases associated with RFRP or 〇T7T022 dysfunction. can do.

例えば、 生体内において RFR.Pまたは ΟΤ7Τ 022が減少しているため に、 RFRPまたは ΟΤ7Τ 022の機能が期待できない患者がいる場合に、 a) RFRPを該患者に投与し該 RFRPの量を補充したり、 b) (ィ） RF R Pをコ一ドする DNAまたは〇T 7 TO 22をコ一ドする DNAを該患者に 投与し発現させることによって、 あるいは （口） 対象となる細胞に RFRPを コ一ドする DNAまたは OT 7 Τ 022をコードする DN Αを挿入し発現させ た後に、 該細胞を該患者に移植することなどによって、 患者の体内における R FRPまたは OT 7 T 022の量を増加させ、 R F R Ρまたは 0 Τ 7 Τ 022 の機能を充分に発揮させることができる。 すなわち、 RFRPをコードする D NAまたは OT7T022をコードする DN Aは、 安全で低毒性な RFRPま たは OT 7 TO 22の機能不全に関連する疾患の予防および/または治療剤と して有用である。 具体的には、 a) RFRP、 b) R F R Pをコードする DN A、 c) OT 7 TO 22または d) OT7T 022をコードする DNAは、 例えば、 滕グルカ ゴン分泌促進剤、 血糖上昇剤、 尿生成促進剤、 記憶消去促進剤 （嫌な記憶の消 去促進剤） または肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排 尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンァ レルギ一、 インスリノ一マ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性、 癌などの予防 •治療剤として使用することができる。 For example, if there is a patient who cannot expect the function of RFRP or ΟΤ7Τ022 due to a decrease in RFR.P or ΟΤ7 022 in vivo, a) administer RFRP to the patient and replace the amount of RFRP. B) (ii) administering RFRP-encoding DNA or ΔT7TO22-encoding DNA to the patient and expressing it; or (mouth) applying RFRP to target cells. After inserting and expressing the DNA to be transferred or DN DN encoding OT7Τ022, the amount of RFRP or OT7T022 in the patient's body is increased, for example, by transplanting the cells into the patient. , RFRΡ or 0Τ7Τ022. That is, DNA encoding RFRP or DNA encoding OT7T022 is useful as a safe and low-toxic agent for preventing and / or treating diseases associated with dysfunction of RFRP or OT7TO22. . Specifically, DNA encoding a) RFRP, b) DNA encoding RFRP, c) OT7TO22 or d) OT7T022 is, for example, a Teng-glucagon secretagogue, a hyperglycemic agent, urine production. Stimulant, amnesic stimulant (enhancement of bad memory) or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity, cancer, etc.

RFRPまたは OT7T022を上記予防 ·治療剤として使用する場合は、 常套手段に従って製剤化することができる。  When RFRP or OT7T022 is used as the above-mentioned prophylactic / therapeutic agent, it can be formulated according to conventional means.

一方、 RFRPをコードする DNAまたは OT7T 022をコードする DN Aを上記予防 ·治療剤として使用する場合は、 これら DNAを単独あるいはレ トロウィルスベクタ一、 アデノウイルスベクター、 アデノウイルスァソシエー テツドウィルスベクターなどの適当なベクタ一に挿入した後、 常套手段に従つ て実施することができる。 DNAは、 そのままで、 あるいは摂取促進のための 補助剤とともに、 遺伝子銃やハイド口ゲルカテーテルのようなカテーテルによ つて投与できる。  On the other hand, when DNA encoding RFRP or DNA encoding OT7T022 is used as the above-mentioned prophylactic / therapeutic agent, these DNAs may be used alone or in retrovirus vector, adenovirus vector, adenovirus associated virus. After insertion into a suitable vector, such as a vector, it can be carried out in a conventional manner. DNA can be administered neat or with supplements to promote uptake, such as through gene guns or catheters such as Hyde-mouth gel catheters.

例えば、 a) RFRP, b) R F R Pをコードする DNA、 c) OT7T0 22または d) OT7T022をコードする DNAは、 必要に応じて糖衣を施 した錠剤、 カプセル剤、 エリキシル剤、 マイクロカプセル剤などとして経口的 に、 あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、 ま たは懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。 例えば、 a) RFR P、 b) RFRPをコードする DNA、 c) OT 7 T 022または d) OT 7 TO 22をコードする DNAを生理学的に認められる公知の担体、 香味剤、 賦 形剤、 べヒクル、 防腐剤、 安定剤、 結合剤などとともに一般に認められた製剤 実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができる, これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られるよう にするものである。  For example, a) RFRP, b) RFRP-encoding DNA, c) OT7T022 or d) OT7T022-encoding DNA may be orally administered as sugar-coated tablets, capsules, elixirs, microcapsules, etc., if necessary. It can be used parenterally, in the form of an injection, such as a sterile solution with water or other pharmaceutically acceptable liquid, or a suspension. For example, a) RFRP, b) DNA encoding RFRP, c) OT7T022 or d) DNA encoding OT7TO22 can be obtained from known physiologically acceptable carriers, flavoring agents, excipients, bases, etc. It can be manufactured by mixing with vehicles, preservatives, stabilizers, binders, etc. in the generally accepted unit dosage form required for the practice of the drug product. This is to ensure that capacity is obtained.

. 錠剤、 カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、 例えば、 ゼ ラチン、 コーンスターチ、 トラガント、 アラビアゴムのような結合剤、 結晶性 セルロースのような陚形剤、 コーンスターチ、 ゼラチン、 アルギン酸などのよ うな膨化剤、 ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、 ショ糖、 乳糖または サッカリンのような甘味剤、 ペパーミント、 ァカモノ油またはチェリ一のよう な香味剤などが用いられる。 調剤単位形態がカプセルである場合には、 上記夕 イブの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。 注射のた めの無菌組成物は注射用水のようなべヒクル中の活性物質、 胡麻油、 椰子油な どのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施 に従って処方することができる。 注射用の水性液としては、 例えば、 生理食塩 水、 ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液 （例えば、 D—ソルビトール、 D 一マンニトール、 塩化ナトリウムなど） などが用いられ、 適当な溶解補助剤、 例えば、 アルコール （例、 エタノール） 、 ポリアルコール （例、 プロピレング リコール、 ポリエチレングリコール） 、 非イオン性界面活性剤 （例、 ポリソル ベ一ト 8 0 TM、 H C O—5 0 ) などと併用してもよい。 油性液としては、 例え ば、 ゴマ油、 大豆油などが用いられ、 溶解補助剤である安息香酸ベンジル、 ベ ンジルアルコールなどと併用してもよい。 Additives that can be incorporated into tablets, capsules, etc. include, for example, gelatin, binders such as corn starch, tragacanth, gum arabic, crystalline Excipients such as cellulose, swelling agents such as corn starch, gelatin, alginic acid, lubricants such as magnesium stearate, sweeteners such as sucrose, lactose or saccharin, peppermint, coconut oil or cherry Suitable flavoring agents are used. When the preparation unit form is a capsule, a liquid carrier such as oils and fats can be further contained in the above-mentioned evening material. Sterile compositions for injection can be formulated according to standard pharmaceutical practice, such as dissolving or suspending the active substance in a vehicle such as water for injection, or naturally occurring vegetable oils such as sesame oil or coconut oil. . Examples of aqueous liquids for injection include physiological saline, isotonic solutions containing glucose and other adjuvants (eg, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride, etc.), and suitable solubilizing agents. , for example, alcohols (e.g., ethanol), polyalcohol (e.g., propylene grayed recall, polyethylene glycol), nonionic surfactant (eg, Porisoru base one preparative 8 0 TM, HCO-5 0 ) such as in combination with Is also good. As the oily liquid, for example, sesame oil, soybean oil and the like are used, and may be used in combination with a solubilizing agent such as benzyl benzoate or benzyl alcohol.

また、 上記予防 ·治療剤は、 例えば、 緩衝剤 （例えば、 リン酸塩緩衝液、 酢 酸ナトリウム緩衝液） 、 無痛化剤 （例えば、 塩化ベンザルコニゥム、 塩酸プロ 力インなど） 、 安定剤 （例えば、 ヒト血清アルブミン、 ポリエチレングリコー ルなど） 、 保存剤 （例えば、 ベンジルアルコール、 フエノールなど） 、 酸化防 止剤などと配合してもよい。 調製された注射液は通常、 適当なアンプルに充填 される。  Examples of the prophylactic / therapeutic agent include a buffer (eg, a phosphate buffer and a sodium acetate buffer), a soothing agent (eg, benzalkonium chloride, pro-proin hydrochloride, etc.), a stabilizer (eg, It may be combined with human serum albumin, polyethylene glycol, etc.), preservatives (eg, benzyl alcohol, phenol, etc.), antioxidants and the like. The prepared injection solution is usually filled into a suitable ampoule.

このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、 例えば、 ヒトゃ哺 乳動物 （例えば、 ラット、 マウス、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブ夕、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど） に対して投与することができる。  The preparations obtained in this way are safe and low toxic, so they can be used, for example, in human mammals (eg, rats, mice, puppies, sheep, bush, puppies, cats, dogs, monkeys, etc.). Can be administered.

R F R Pの投与量は、 投与対象、 対象臓器、 症状、 投与方法などにより差異 はあるが、 経口投与の場合、 一般的に例えば、 肥満患者 （体重 6 O k gとして ) においては、 一日につき約 0 . 1〜 1 0 O m g、 好ましくは約 1 . 0〜5 0 m g、 より好ましくは約 1 . 0〜2 0 m gである。 非経口的に投与する場合は、 その 1回投与量は投与対象、 対象臓器、 症状、 投与方法などによっても異なる が、 例えば、 注射剤の形では通常例えば、 肥満患者 （体重 60 kgとして） に おいては、 一日につき約 0. 01〜3 Omg程度、 好ましくは約 0. 1〜20 mg程度、 より好ましくは約 0. 1〜1 Omg程度を静脈注射により投与する のが好都合である。 他の動物の場合も、 体重 60 k g当たりに換算した量を投 与することができる。 The dose of RFRP varies depending on the administration target, target organ, symptoms, administration method, and the like. However, in the case of oral administration, for example, in obese patients (assuming a body weight of 6 O kg), about 0 The amount is from 1 to 100 mg, preferably from about 1.0 to 50 mg, and more preferably from about 1.0 to 20 mg. In the case of parenteral administration, the single dose varies depending on the administration target, target organ, symptoms, administration method, etc. However, for example, in the form of an injection, for example, in an obese patient (with a body weight of 60 kg), about 0.01 to 3 Omg per day, preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably about 0.1 to 20 mg per day It is convenient to administer about 0.1 to 1 Omg by intravenous injection. For other animals, the equivalent dose per 60 kg body weight can be administered.

DNAの投与量は、 投与対象、 対象臓器、 症状、 投与方法などにより差異は あるが、 経口投与の場合、 一般的に例えば、 肥満患者 （体重 6 O kgとして） においては、 一日につき約 0.1〜： L 0 Omg、 好ましくは約 1. 0〜5 Omg 、 より好ましくは約 1. 0〜20mgである。 非経口的に投与する場合は、 そ の 1回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、 例えば、 注射剤の形では通常例えば、 肥満患者 （体重 6 O kgとして） におい ては、 一日につき約 0. 01〜30mg程度、 好ましくは約 0. l〜20mg 程度、 より好ましくは約 0. 1〜1 Omg程度を静脈注射により投与するのが 好都合である。 他の動物の場合も、 体重 60 kg当たりに換算した量を投与す ることができる。  The dose of DNA varies depending on the administration target, target organ, symptoms, administration method, and the like. In the case of oral administration, for example, in obese patients (assuming 6 kg of body weight), about 0.1 ~: L 0 Omg, preferably about 1.0-5 Omg, more preferably about 1.0-20 mg. In the case of parenteral administration, the single dose varies depending on the administration subject, target organ, symptoms, administration method, and the like. ), It is convenient to administer about 0.01 to 30 mg, preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably about 0.1 to 1 Omg per day by intravenous injection. In the case of other animals, the dose can be administered in terms of weight per 60 kg.

(2) 遺伝子診断剤  (2) Gene diagnostic agent

RFRPをコードする DNA、 OT7T022をコードする DNA、 または これら DN Aに対するアンチセンス DN Aは、 プローブとして使用することに より、 ヒトまたは哺乳動物 （例えば、 ラット、 マウス、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブタ、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど） における RFRPまたは〇T 7 T 022をコ一 ドする DNAまたは mRNAの異常 （遺伝子異常） を検出することができるの で、 例えば、 該 DNAまたは mRNAの損傷、 突然変異あるいは発現低下や、 該 D N Aまたは m R N Aの増加あるいは発現過多などの遺伝子診断剤として有 用である。  The DNA encoding RFRP, the DNA encoding OT7T022, or the antisense DNA against these DNAs can be used as a probe to produce human or mammal (eg, rat, mouse, egret, sheep, pig, pig). DNA or mRNA abnormalities (genetic abnormalities) that encode RFRP or に お け る T7T022 in cats, cats, dogs, monkeys, etc.). It is useful as a gene diagnostic agent for mutation or decreased expression, increase of the DNA or mRNA or overexpression.

DNAまたはアンチセンス DNAを用いる上記の遺伝子診断は、 例えば、 自 体公知のノーザンハイブリダィゼ一シヨンや P C R— S S C P法 （ゲノミック ス （Genomics) ， 第 5巻， 874〜 879頁 （1989年） 、 プロシ一ジング ズ ·ォブ ·ザ ·ナショナル ·アカデミー ·ォブ ·サイェンシィズ ·ォブ ·ユー エスェ一 (Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America) , 第 86巻， 2766〜2770頁 （1989年） ） など により実施することができる。 The above-described genetic diagnosis using DNA or antisense DNA can be performed, for example, by the known Northern hybridization or PCR-SSCP method (Genomics, Vol. 5, pp. 874-879 (1989)). The Proceedings of the National Academy of Sciences of the United Academy of Sciences of the United States States of America), Vol. 86, pp. 2766-2770 (1989)).

例えば、 ノーザンハイブリダィゼーシヨンにより R F R Pまたは 0 T 7 T 0 22の発現低下が検出された場合は、 例えば、 R F R Pまたは〇T 7 T 022 の機能不全に関連する疾患である可能性が高いまたは将来罹患する可能性が高 いと診断することができる。  For example, when the expression of RFRP or 0T7T022 is detected to be reduced by Northern hybridization, it is likely that the disease is associated with a dysfunction of RFRP or ΔT7T022, or It can be diagnosed that the possibility of future disease is high.

例えば、 ノーザンハイブリダィゼーションにより RFRPまたは〇Τ 7 Τ 0 22の発現過剰が検出された場合は、 例えば、 R F R Ρまたは ΟΤ 7 Τ 022 の過剰発現に関連する疾患である可能性が高いまたは将来罹患する可能性が高 いと診断することができる。  For example, if Northern hybridization detects overexpression of RFRP or 〇Τ702〇Τ22, then it is likely or future that the disease is associated with overexpression of RFRΡ or Ρ702ΟΤ022. It can be diagnosed as having a high likelihood of being affected.

RFRPまたは ΟΤ7Τ022の機能不全に関連する疾患としては、 例えば、 肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インス リン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インス リノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性、 癌などが挙げられる。  Diseases associated with RFRP or ΟΤ7Τ022 dysfunction include, for example, obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy , Insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity, cancer and the like.

RFRPまたは ΟΤ 7Τ022の過剰発現に関連する疾患としては、 例えば、 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病 性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良、 記憶学習障害などが挙 げられる。  Diseases associated with overexpression of RFRP or ΟΤ7 発 現 022 include, for example, diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturia, hyperlipidemia Sexual dysfunction, skin diseases, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic diseases, indigestion, memory and learning disorders.

(3) RFRPまたは OT7 TO 22の発現量を変化させる化合物またはその 塩を含有する医薬  (3) A drug containing a compound or a salt thereof that alters the expression level of RFRP or OT7 TO22

RFRPまたは OT 7 TO 22をコードする DNAは、 プローブとして用い ることにより、 RFRPまたは OT7T022の発現量を変化させる化合物ま たはその塩のスクリーニングに用いることができる。  By using DNA encoding RFRP or OT7TO22 as a probe, it can be used for screening a compound or a salt thereof that changes the expression level of RFRP or OT7T022.

すなわち： 本発明は、 例えば、 （i ) 非ヒト哺乳動物の a) 血液、 b) 特定 の臓器、 c) 臓器から単離した組織もしくは細胞、 または （ii) 形質転換体等 に含まれる RFRPまたは〇T 7 T 022の mRN Α量を測定することによる、 RFRPまたは OT 7 TO 22の発現量を変化させる化合物またはその塩のス クリーニング方法を提供する。 RFRPまたは OT7T 022の mRN A量の測定は具体的には以下のよう にして行なう。 That is, the present invention relates to, for example, RFRP contained in (a) a) blood of a non-human mammal, b) a specific organ, c) a tissue or cell isolated from an organ, or (ii) a transformant, Provided is a method for screening a compound or a salt thereof that changes the expression level of RFRP or OT7TO22 by measuring the amount of mRN of T7T022. The measurement of the amount of mRNA of RFRP or OT7T022 is specifically performed as follows.

( i) 正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物 （例えば、 マウス、 ラット、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブ夕、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど、 より具体的には免疫不 全モデルラット、 マウス、 ゥサギなど） に対して、 薬剤 （例えば、 免疫調節薬 など） あるいは物理的ストレス （例えば、 浸水ストレス、 電気ショック、 明暗、 低温など） などを与え、 一定時間経過した後に、 血液、 あるいは特定の臓器 （ 例えば、 脳、 肝臓、 腎臓など） 、 または臓器から単離した組織、 あるいは細胞 を得る。  (i) Normal or disease model non-human mammals (eg, mice, rats, rabbits, sheep, sheep, bushus, birds, cats, dogs, monkeys, etc .; more specifically, immune-compromised model rats, mice, rabbits, etc.) ) To a drug (for example, an immunomodulator) or physical stress (for example, immersion stress, electric shock, light and dark, low temperature, etc.), and after a certain period of time, blood or specific organ ( For example, tissues or cells isolated from the brain, liver, kidney, etc.) or organs.

得られた細胞に含まれる RFRPまたは OT7T022の mRNAは、 例え ば、通常の方法により細胞等から mRNAを抽出し、例えば、 TaqMan P CRなどの手法を用いることにより定量することができ、 自体公知の手段によ りノーザンブロットを行うことにより解析することもできる。  RFRP or OT7T022 mRNA contained in the obtained cells can be quantified, for example, by extracting mRNA from cells or the like by a usual method and using, for example, a technique such as TaqMan PCR, which is known per se. The analysis can also be performed by performing Northern blotting by a means.

(ii) RFRPまたは OT7T022を発現する形質転換体を WO 00/2 9441号または WOO 1ノ 66134号に記載の方法に従い作製し、 該形質 転換体に含まれる RFRPまたは OT 7 TO 22の mRNAを同様にして定量、 解析することができる。  (ii) A transformant expressing RFRP or OT7T022 is prepared according to the method described in WO 00/29441 or WOO 1 No. 66134, and the mRNA of RFRP or OT7TO22 contained in the transformant is similarly prepared. It can be quantified and analyzed.

RFRPまたは OT 7T022の発現量を変化させる化合物またはその塩の スクリーニングは、  Screening for a compound or a salt thereof that alters the expression level of RFRP or OT 7T022

( i) 正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物に対して、 薬剤あるいは物理 的ストレスなどを与える一定時間前 （30分前〜 24時間前、 好ましくは 30 分前〜 12時間前、 より好ましくは 1時間前〜 6時間前） もしくは一定時間後 (30分後〜 3日後、 好ましくは 1時間後〜 2日後、 より好ましくは 1時間後 〜24時間後） 、 または薬剤あるいは物理的ストレスと同時に試験化合物を投 与し、 投与後一定時間経過後 （30分後〜 3日後、 好ましくは 1時間後〜 2日 後、 より好ましくは 1時間後〜 24時間後） 、 細胞に含まれる RFRPまたは OT7T022の mRN A量を定量、 解析することにより行なうことができ、 . (ϋ)形質転換体を常法に従い培養する際に試験化合物を培地中に混合させ、 一定時間培養後 （1日後〜 7日後、 好ましくは 1日後〜 3日後、 より好ましく は 2日後〜 3日後） 、 該形質転換体に含まれる RFRPまたは OT7T022 の mRNA量を定量、 解析することにより行なうことができる。 (i) A certain time before giving a drug or physical stress to a normal or disease model non-human mammal (30 minutes to 24 hours, preferably 30 minutes to 12 hours, more preferably 1 hour Before to 6 hours before) or after a certain time (after 30 minutes to 3 days, preferably after 1 hour to 2 days, more preferably after 1 hour to 24 hours), or at the same time as the drug or physical stress. After a certain period of time after administration (30 minutes to 3 days, preferably 1 hour to 2 days, more preferably 1 hour to 24 hours), the mRNA of RFRP or OT7T022 contained in the cells is administered. (Ϋ) When culturing the transformant according to a conventional method, the test compound is mixed into the medium, and after culturing for a certain period of time (after 1 day to 7 days, preferably After 1 day to 3 days, more preferable 2 to 3 days later), by quantifying and analyzing the amount of RFRP or OT7T022 mRNA contained in the transformant.

試験化合物としては、 例えば、 ペプチド、 蛋白質、 非ペプチド性化合物、 合 成化合物、 発酵生産物、 細胞抽出液、 植物抽出液、 動物組織抽出液、 血漿など が用いられ、 これら化合物は新規な化合物であってもよいし、 公知の化合物で あってもよい。  Test compounds include, for example, peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, and plasma.These compounds are novel compounds. Or a known compound.

試験化合物は塩を形成していてもよく、 試験化合物の塩としては、 生理学的 に許容される酸 （例、 無機酸など） や塩基 （例、 有機酸など） などとの塩が用 いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。 この様な塩とし ては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水考酸、 硫酸など） との 塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイ ン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、'蓚酸、 安息香酸、 メタンスル ホン酸、 ベンゼンスルホン酸など） との塩などが用いられる。  The test compound may form a salt, and a salt with a physiologically acceptable acid (eg, an inorganic acid) or a base (eg, an organic acid) is used as the salt of the test compound. Particularly preferred are physiologically acceptable acid addition salts. Examples of such salts include salts with inorganic acids (for example, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.), and organic acids (for example, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, Acid, succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.).

本発明のスクリ一二ング方法を用いて得られる化合物は、 R F R Pまたは O T7T022の発現量を変化させる作用を有する化合物であり、 具体的には、 (ィ） RFRPまたは OT7T022の発現量を増加させることにより、 〇T 7 Τ 022を介する細胞刺激活性 （例えば、 ァラキドン酸遊離、 ァセチルコリ ン遊離、 細胞内 Ca2+遊離、 細胞内 cAMP生成、 細胞内 cGMP生成、 イノ シトールリン酸産生、 細胞膜電位変動、 細胞内蛋白質のリン酸化、 c一 f o s の活性化、 PHの低下などを促進する活性または抑制する活性など、 特に細胞 内 cAMP生成抑制活性） を増強させる化合物、 （口） RFRPの発現量を減 少させることにより、 該細胞刺激活性を減弱させる化合物である。 The compound obtained by using the screening method of the present invention is a compound having an action of changing the expression level of RFRP or OT7T022. Specifically, (a) increasing the expression level of RFRP or OT7T022 Thus, cell stimulating activity through 〇T 7 Τ022 (eg, arachidonic acid release, acetylcholine release, intracellular Ca 2+ release, intracellular cAMP generation, intracellular cGMP generation, inositol phosphate production, cell membrane potential fluctuation, Compounds that enhance intracellular protein phosphorylation, activation of c-fos, and activities that promote or suppress PH reduction, especially the activity of inhibiting intracellular cAMP production). (Mouth) Reduce the expression of RFRP A compound that attenuates the cell stimulating activity by reducing it.

該化合物としては、 ペプチド、 蛋白質、 非ペプチド性化合物、 合成化合物、 発酵生産物などが挙げられ、 これら化合物は新規な化合物であってもよいし、 公知の化合物であってもよい。  Examples of the compound include peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, and fermentation products. These compounds may be novel compounds or known compounds.

該化合物の塩としては、 生理学的に許容される酸 （例、 無機酸など） や塩基 (例、 有機酸など） などとの塩が用いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸 付加塩が好ましい。 この様な塩としては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リ ン酸、 臭化水素酸、 硫酸など） との塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ 酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスルホン酸、 ベンゼンスルホン酸など） との塩な どが用いられる。 As the salt of the compound, a salt with a physiologically acceptable acid (eg, an inorganic acid, etc.) or a base (eg, an organic acid, etc.) is used, and a physiologically acceptable acid addition salt is particularly preferable. . Such salts include, for example, salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, Salts with propionic acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc. are used.

上記スクリーニング方法で得られる RFRPまたは OT 7 TO 22の発現量 を増加させる化合物またはその塩は、 例えば、 滕グルカゴン分泌促進剤、 血糖 上昇剤、 尿生成促進剤、 記憶消去促進剤 （嫌な記憶の消去促進剤） 、 または肥 満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリ ン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インスリ ノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性、 癌などの予防 ·治療剤として使用 することができる。  Compounds or salts thereof that increase the expression level of RFRP or OT7TO22 obtained by the above screening method include, for example, Teng-glucagon secretion enhancer, blood glucose increasing agent, urine production enhancer, memory erasure enhancer ( Elimination enhancer) or hypertrophy, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, artery It can be used as a prophylactic or therapeutic agent for sclerosis, thrombotic diseases, lipotoxicity, cancer, etc.

上記スクリーニング方法で得られる RFRPまたは OT 7 TO 22の発現量 を減少させる化合物またはその塩は、 例えば、 塍グルカゴン分泌抑制剤、 血糖 低下剤、 尿生成抑制剤、 記憶学習低下抑制剤 （記憶低下抑制剤） 、 または糖尿 病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎 症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節 症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良、 記憶学習障害などの予防 · 治療剤として使用することができる。 糖尿病には、 インスリン依存型 （I型） 糖尿病、 インスリン非依存型 （II型） 糖尿病などが含まれる。  Compounds or salts thereof that reduce the expression level of RFRP or OT7TO22 obtained by the above screening method include, for example, 塍 glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory decrease inhibitor) Drug) or diabetes, glucose intolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic diseases, dyspepsia, memory and learning disorders. Diabetes includes insulin-dependent (type I) diabetes and non-insulin-dependent (type II) diabetes.

本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩を医薬組 成物として使用する場合、 常套手段に従って製剤化することができる。 具体的 には、 上記した RFRPを含有する予防 ·治療剤と同様に製造することができ る。  When a compound or a salt thereof obtained by using the screening method of the present invention is used as a pharmaceutical composition, it can be formulated according to a conventional method. Specifically, it can be produced in the same manner as the above-mentioned prophylactic / therapeutic agent containing RFRP.

得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、 ヒトゃ哺乳動物（例えば、 ラット、 マウス、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブ夕、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど） に対 して投与 ^：ることができる。  Because the resulting formulation is safe and low toxic, it can be administered, for example, to humans and mammals (eg, rats, mice, egrets, higgs, bushus, horses, cats, dogs, monkeys, etc.) ^: Can be

該化合物またはその塩の投与量は、 投与対象、 対象臓器、 症状、 投与方法な どにより差異はあるが、 経口投与の場合、 一般的に例えば、 肥満患者 （体重 6 .O kgとして） においては、 一日につき RFRPまたは〇T 7 TO 22の発現 量を増加させる化合物またはその塩を約 0. 1〜10 Omg、 好ましくは約 1. 0〜50mg、 より好ましくは約 1. 0〜20mgである。 非経口的に投与す る場合は、 その 1回投与量は投与対象、 対象臓器、 症状、 投与方法などによつ ても異なるが、 例えば、 注射剤の形では通常例えば、 肥満患者 （体重 60 kg として） においては、 一日につき RFRPまたは OT 7 T 022の発現量を増 加させる化合物またはその塩を約 0. 01〜3 Omg程度、 好ましくは約 0. l〜20mg程度、 より好ましくは約 0. 1〜1 Omg程度を静脈注射により 投与するのが好都合である。 他の動物の場合も、 体重 60 kg当たりに換算し た量を投与することができる。 The dose of the compound or a salt thereof varies depending on the administration subject, the target organ, the condition, the administration method, and the like. About 0.1 to 10 Omg, preferably about 1. 0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 20 mg. In the case of parenteral administration, the single dose varies depending on the administration target, target organ, symptoms, administration method, and the like. ), a compound or a salt thereof that increases the expression level of RFRP or OT7T022 per day is about 0.01 to 3 Omg, preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably about 0.1 to 20 mg. It is convenient to administer about 0.1 to 1 Omg by intravenous injection. In the case of other animals, the dose can be administered in terms of weight per 60 kg.

(4) 抗体を用いる診断方法  (4) Diagnostic method using antibodies

RFRPまたは OT 7T022に対する抗体 （以下、 本発明の抗体と略記す る）は、尺 尺？または0丁7丁 022を特異的に認識することができるので、 被検液中の RFRPまたは OT7 TO 22の検出や中和に使用することができ る。  Are antibodies against RFRP or OT7T022 (hereinafter abbreviated as the antibodies of the present invention) large? Alternatively, since it can specifically recognize 0,07,022, it can be used for detecting or neutralizing RFRP or OT7TO22 in a test solution.

すなわち、 本発明は、  That is, the present invention

( i ) 本発明の抗体と、 被検液および標識化された RFRPまたは OT 7 TO 22とを競合的に反応させ、 該抗体に結合した標識化された RFRPまたは O T7T022の割合を測定することを特徴とする被検液中の RFRPまたは O T 7 T 022の定量法、 および  (i) Competitively reacting the antibody of the present invention with a test solution and labeled RFRP or OT7TO22, and measuring the ratio of labeled RFRP or OT7T022 bound to the antibody. A method for quantifying RFRP or OT 7 T 022 in a test solution, characterized by comprising:

( i i ) 被検波と担体上に不溶化した本発明の抗体および標識化された本発明の 別の抗体とを同時あるいは連続的に反応させたのち、 不溶化担体上の標識剤の 活性を測定することを特徴とする被検液中の R F R Pまたは O T 7 T 022の 定量法を提供する。  (ii) Simultaneously or continuously reacting the test wave with the antibody of the present invention immobilized on the carrier and another labeled antibody of the present invention, and then measuring the activity of the labeling agent on the insoluble carrier. The present invention provides a method for quantifying RFRP or OT7T022 in a test solution, characterized in that:

上記 （ii) の定量法においては、 一方の抗体が RFRPまたは OT 7 TO 2 2の N端部を認識する抗体で、 他方の抗体が R FRPまたは OT 7 T 022の C端部に反応する抗体であることが望ましい。  In the quantification method (ii) above, one antibody is an antibody that recognizes the N-terminal of RFRP or OT7TO22, and the other antibody reacts with the C-terminal of RFRP or OT7T022. It is desirable that

また、 RFRPまたは OT 7 TO 22に対するモノクローナル抗体 （以下、 本発明のモノクローナル抗体） を用いて RFRPまたは OT 7 TO 22の定量 を行うことができるほか、 組織染色等による検出を行なうこともできる。 これ らの目的には、 抗体分子そのものを用いてもよく、 また、 抗体分子の F (a b') 2、 F ab'、 あるいは F a b画分を用いてもよい。 In addition, RFRP or OT7TO22 can be quantified using a monoclonal antibody against RFRP or OT7TO22 (hereinafter, the monoclonal antibody of the present invention), and can also be detected by tissue staining or the like. For these purposes, the antibody molecule itself may be used, and the F (ab ') 2 , Fab ′ or the Fab fraction may be used.

本発明の抗体を用いる RFRPまたは OT7T022の定量法は、 特に制限 されるべきものではなく、 被測定液中の抗原量 （例えば、 RFRP量または〇 T7T 022量） に対応した抗体、 抗原もしくは抗体—抗原複合体の量を化学 的または物理的手段により検出し、 これを既知量の抗原を含む標準液を用いて 作製した標準曲線より算出する測定法であれば、 いずれの測定法を用いてもよ レ^ 例えば、 ネフロメトリ一、 競合法、 ィムノメトリック法およびサンドイツ チ法が好適に用いられるが、 感度、 特異性の点で、 後述するサンドイッチ法を 用いるのが特に好ましい。  The method for quantifying RFRP or OT7T022 using the antibody of the present invention is not particularly limited, and may be an antibody, an antigen or an antibody corresponding to the amount of antigen in the test solution (eg, the amount of RFRP or ΔT7T022). Any method that detects the amount of the antigen complex by chemical or physical means and calculates it from a standard curve prepared using a standard solution containing a known amount of antigen can be used. For example, nephrometry, a competitive method, an immunometric method and a San German method are preferably used, but in terms of sensitivity and specificity, it is particularly preferable to use a sandwich method described later.

標識物質を用いる測定法に用いられる標識剤としては、 例えば、 放射性同位 元素、 酵素、 蛍光物質、発光物質などが用いられる。放射性同位元素としては、 例えば、 〔125 I〕 、 〔131 I〕 、 〔3H〕 、 〔14C〕 などが用いられる。 上記 酵素としては、 安定で比活性の大きなものが好ましく、 例えば、 —ガラクト シダーゼ、 /3—ダルコシダーゼ、 アルカリフォスファターゼ、 パ一ォキシダー ゼ、 リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる。 蛍光物質としては、 例えば、 フル ォレスカミン、 フルォレツセンイソチオシァネートなどが用いられる。 発光物 質としては、 例えば、 ルミノール、 ルミノール誘導体、 ルシフェリン、 ルシゲ ニンなどが用いられる。 さらに、 抗体あるいは抗原と標識剤との結合にビォチ ン一アビジン系を用いることもできる。 As a labeling agent used in a measurement method using a labeling substance, for example, a radioisotope, an enzyme, a fluorescent substance, a luminescent substance and the like are used. As the radioisotope, for example, [ 125 I], [ 131 I], [ 3 H], [ 14 C] and the like are used. As the above-mentioned enzyme, a stable enzyme having a large specific activity is preferable. As the fluorescent substance, for example, fluorescamine, fluorescein isothiosinate and the like are used. As the luminescent substance, for example, luminol, a luminol derivative, luciferin, lucigenin and the like are used. Further, a biotin-avidin system can be used for binding the antibody or antigen to the labeling agent.

抗原あるいは抗体の不溶化に当っては、 物理吸着を用いてもよく、 また通常 酵素等を不溶化、 固定化するのに用いられる化学結合を用いる方法でもよい。 担体としては、 ァガロース、 デキストラン、 セルロースなどの不溶性多糖類、 ポリスチレン、 ポリアクリルアミド、 シリコン等の合成樹脂、 あるいはガラス 等があげられる。  For the insolubilization of an antigen or an antibody, physical adsorption may be used, or a method using a chemical bond usually used for insolubilizing and immobilizing an enzyme or the like may be used. Examples of the carrier include insoluble polysaccharides such as agarose, dextran, and cellulose; synthetic resins such as polystyrene, polyacrylamide, and silicon; and glass.

サンドイッチ法においては不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検液 を反応させ （1次反応） 、 さらに標識化した別の本発明のモノクローナル抗体 を反応させ （2次反応） たのち、 不溶化担体上の標識剤の活性を測定すること により被検液中の R F R P量を定量することができる。 1次反応と 2次反応は 逆の順序に行っても、 また、 同時に行なってもよいし時間をずらして行なって もよい。 標識化剤および不溶化の方法は前記のそれらに準じることができる。 また、 サンドイッチ法による免疫測定法において、 固相用抗体あるいは標識用 抗体に用いられる抗体は必ずしも 1種類である必要はなく、 測定感度を向上さ せる等の目的で 2種類以上の抗体の混合物を用いてもよい。 In the sandwich method, the test solution is reacted with the insolubilized monoclonal antibody of the present invention (primary reaction), and further reacted with another labeled monoclonal antibody of the present invention (secondary reaction). By measuring the activity of the labeling agent, the amount of RFRP in the test solution can be quantified. The primary reaction and the secondary reaction may be performed in the reverse order, or simultaneously, or at different times. Is also good. The labeling agent and the method of insolubilization can be in accordance with those described above. In the immunoassay by the sandwich method, the antibody used for the solid phase antibody or the labeling antibody is not necessarily one type, and a mixture of two or more types of antibodies is used for the purpose of improving the measurement sensitivity and the like. May be used.

本発明のサンドイッチ法による RFRPまたは OT7T 022の測定法にお いては、 1次反応と 2次反応に用いられる本発明のモノクローナル抗体は、 R FRPまたは OT7T022の結合する部位が相異なる抗体が好ましく用いら れる。 すなわち、 1次反応および 2次反応に用いられる抗体は、 例えば、 2次 反応で用いられる抗体が、 RFRPまたは OT7T022の C端部を認識する 場合、 1次反応で用いられる抗体は、 好ましくは C端部以外、 例えば N端部を 認識する抗体が用いられる。  In the method for measuring RFRP or OT7T022 by the sandwich method of the present invention, the monoclonal antibody of the present invention used in the primary reaction and the secondary reaction is preferably an antibody having a different binding site between RFRP or OT7T022. It is required. That is, the antibody used in the primary reaction and the secondary reaction is, for example, when the antibody used in the secondary reaction recognizes the C-terminal of RFRP or OT7T022, the antibody used in the primary reaction is preferably C An antibody that recognizes other than the end, for example, the N-end, is used.

本発明のモノクローナル抗体をサンドィツチ法以外の測定システム、 例えば、 競合法、 ィムノメトリック法あるいはネフロメトリ一などに用いることができ る。  The monoclonal antibody of the present invention can be used in a measurement system other than the sandwich method, for example, a competition method, an immunometric method, or a nephrometry method.

競合法では、 被検波中の抗原と標識抗原とを抗体に対して競合的に反応させ たのち、 未反応の標識抗原（F) と、 抗体と結合した標識抗原 （B) とを分離し (BZF分離） 、 B, Fいずれかの標識量を測定し、 被検液中の抗原量を定量 する。 本反応法には、 抗体として可溶性抗体を用い、 B/F分離をポリエチレ ングリコール、 前記抗体に対する第 2抗体などを用いる液相法、 および、 第 1 抗体として固相化抗体を用いるか、 あるいは、 第 1抗体は可溶性のものを用い 第 2抗体として固相化抗体を用いる固相化法とが用いられる。  In the competition method, after the antigen in the test wave and the labeled antigen are allowed to react competitively with the antibody, the unreacted labeled antigen (F) is separated from the labeled antigen (B) bound to the antibody ( BZF separation), the amount of B or F label is measured, and the amount of antigen in the test solution is quantified. In this reaction method, a soluble phase is used as the antibody, B / F separation is carried out using polyethylene glycol, a liquid phase method using a second antibody against the above antibody, or a solid phase antibody is used as the first antibody, or An immobilization method using a soluble antibody as the first antibody and an immobilized antibody as the second antibody is used.

ィムノメトリック法では、 被検波中の抗原と固相化抗原とを一定量の標識化 抗体に対して競合反応させた後固相と液相を分離するか、 あるいは、 被検波中 の抗原と過剰量の標識化抗体とを反応させ、 次に固相化抗原を加え未反応の標 識化抗体を固相に結合させたのち、 固相と液相を分離する。 次に、 いずれかの 相の標識量を測定し被検波中の抗原量を定量する。  In the immunometric method, the antigen in the test wave and the immobilized antigen are subjected to a competitive reaction with a certain amount of labeled antibody, and then the solid phase and the liquid phase are separated. The excess amount of the labeled antibody is allowed to react, and then the immobilized antigen is added to bind the unreacted labeled antibody to the solid phase, and then the solid phase and the liquid phase are separated. Next, the amount of the label in either phase is measured to determine the amount of the antigen in the test wave.

また、 ネフロメトリーでは、 ゲル内あるいは溶液中で抗原抗体反応の結果生 .じた不溶性の沈降物の量を測定する。 被検波中の抗原量が僅かであり、 少量の 沈降物しか得られない場合にもレーザーの散乱を利用するレーザーネフロメ卜 リーなどが好適に用いられる。 In nephelometry, the amount of insoluble sediment produced as a result of the antigen-antibody reaction in a gel or in a solution is measured. Laser nephrometry using laser scattering even when the amount of antigen in the test wave is small and only a small amount of sediment is obtained Li is preferably used.

これら個々の免疫学的測定法を本発明の定量方法に適用するにあたっては、 特別の条件、 操作等の設定は必要とされない。 それぞれの方法における通常の 条件、 操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて R F R Pまたは〇T 7 Τ 0 22の測定系を構築すればよい。 これらの一般的な技術手段の詳細については、 総説、 成書などを参照することができる。  In applying these individual immunoassays to the quantification method of the present invention, no special conditions, operations, and the like need to be set. It is sufficient to construct a measurement system for RFRP or ΔT 7 Τ 022 by adding ordinary technical considerations of those skilled in the art to ordinary conditions and operating methods in each method. For details of these general technical means, reference can be made to reviews, written documents, and the like.

例えば、 入江 寛編 「ラジオィムノアツセィ」 （講談社、 昭和 49年発行） 、 入江 寛編 「続ラジオィムノアツセィ」 （講談社、 昭和 54年発行） 、 石川栄 治ら編 「酵素免疫測定法」 （医学書院、 昭和 53年発行） 、 石川栄治ら編 「酵 素免疫測定法」 （第 2版） （医学書院、 昭和 57年発行） 、 石川栄治ら編 「酵 素免疫測定法」 （第 3版） （医学書院、 昭和 62年発行） 、 「Methods in ENZYMOLOGYJ Vol. 70 (Immunochemical Techniques (Par t A))、 同書 Vol.  For example, edited by Hiro Irie, "Radio Imuno Atsushi" (Kodansha, published in 1974), edited by Hiro Irie, "Radio Imuno Atssei" (Kodansha, published in 1974), edited by Eiji Ishikawa et al. (Issue Shoin, published in 1983), Eiji Ishikawa et al., “Enzyme Immunoassay” (2nd edition) (Medical Shoin, published in 1982), Eiji Ishikawa, et al., “Enzyme Immunoassay” (No. 2) 3rd edition) (Medical Shoin, published in 1987), “Methods in ENZYMOLOGYJ Vol. 70 (Immunochemical Techniques (Part A)), Vol.

73 (Immunochemical Techniques (Part B))、 同書 Vol. 74 (Immunochemical Techniques (Part C))、 同書 Vol. 84 (Immunochemical Techniques (Part D ： Selected Immunoassays)) 同書 Vol. 92 (Immunochemical Techniques (Part E ： Monoclonal Antibodies and General Immunoassay Methods)) , 同書 Vol. 121 (Immunochemical Techniques (Part I ： Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodies)) (以上、 ァカデミックプレス社発行）などを参照することができる。 以上のようにして、 本発明の抗体を用いることによって、 RFRPまたは〇 T 7 T022を感度良く定量することができる。 73 (Immunochemical Techniques (Part B)), ibid.Vol. 74 (Immunochemical Techniques (Part C)), ibid.Vol. 84 (Immunochemical Techniques (Part D: Selected Immunoassays)) ibid.Vol. 92 (Immunochemical Techniques (Part E: Monoclonal) Antibodies and General Immunoassay Methods)), ibid., Vol. 121 (Immunochemical Techniques (Part I: Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodies)) (all published by Academic Press). As described above, RFRP or 〇T7T022 can be quantified with high sensitivity by using the antibody of the present invention.

さらには、 本発明の抗体を用いて RFRPまたは OT7T022の濃度を定 量することによって、 RFRPまたは OT 7 T022の濃度の減少が検出され た場合、 例えば、 肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排 尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンァ レルギ一、 インスリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性、 癌などの疾患 である、 または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。  Furthermore, when a decrease in the concentration of RFRP or OT7T022 is detected by quantifying the concentration of RFRP or OT7T022 using the antibody of the present invention, for example, obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, It is a disease such as hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity, cancer, or It can be diagnosed that it is likely to be affected in the future.

また、 RFRPまたは OT7T 022の濃度の増加が検出された場合には、 例えば、 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚 疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良、 記憶学習障害な どの疾患である、 または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。 In addition, if an increase in the concentration of RFRP or OT7T022 is detected, for example, diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturia, Hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin It can be diagnosed as a disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, dyspepsia, memory learning disorder, or a high likelihood of suffering in the future.

(5) 塍グルカゴン分泌調節薬、 血糖調節薬、 尿生成調節薬、 記憶消去促進薬 または記憶学習低下抑制薬のスクリーニング方法  (5) Screening methods for glucagon secretion regulators, blood glucose regulators, urine formation regulators, memory erasure enhancers or memory learning decline inhibitors

OT 7 TO 22を用いるか、 または組換え型〇T 7 TO 22の発現系を構築 し、 該発現系を用いたレセプター結合アツセィ系を用いることによって、 RF 尺？と0丁7丁022との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物 （例 えば、 ペプチド、 蛋白質、 非ペプチド性化合物、 合成化合物、 発酵生産物など ) またはその塩を効率よくスクリーニングすることができる。  By using OT 7 TO 22 or constructing an expression system for recombinant ΔT 7 TO 22 and using a receptor-binding assay system using the expression system, an RF scale can be obtained. (Eg, peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, fermentation products, etc.) or a salt thereof can be efficiently screened.

このような化合物には、 （ィ） OT 7 TO 22を介して細胞刺激活性 （例え ば、 ァラキドン酸遊離、 アセチルコリン遊離、 細胞内 Ca2+遊離、 細胞内 cA MP生成、 細胞内 cGMP生成、 イノシトールリン酸産生、 細胞膜電位変動、 細胞内蛋白質のリン酸化、 c一 f o sの活性化、 pHの低下などを促進する活 性または抑制する活性など、 特に細胞内 cAMP生成抑制活性） を有する化合 物 （いわゆる、 OT 7 T 022ァゴニスト） 、 （口） OT 7 T 022を介する 細胞刺激活性を阻害する化合物（いわゆる、 OT7T022アン夕ゴニス卜）、 (八） RFRPと OT7T022との結合力を増強する化合物、 あるいは （二 ) RFRPと OT7T022との結合力を減少させる化合物などが含まれる。 すなわち、 本発明は、 Such compounds include (ii) cell stimulating activity via OT 7 TO 22 (eg, arachidonic acid release, acetylcholine release, intracellular Ca 2+ release, intracellular cAMP production, intracellular cGMP production, inositol Compounds that have an activity to promote or inhibit phosphoric acid production, cell membrane potential fluctuations, phosphorylation of intracellular proteins, activation of c-fos, reduction of pH, etc. So-called OT7T022 agonist), (mouth) a compound that inhibits OT7T022-mediated cell stimulating activity (so-called OT7T022 angiogonist), (8) a compound that enhances the binding force between RFRP and OT7T022, Or (2) a compound that reduces the binding strength between RFRP and OT7T022. That is, the present invention

(1) RFRPおよび （または） OT 7 T022を用いることを特徴とする塍 グルカゴン分泌調節薬、 血糖調節薬、 尿生成調節薬、 記憶消去促進薬または記 憶学習低下抑制薬のスクリーニング方法、  (1) a method of screening for a glucagon secretion regulator, a blood glucose regulator, a urine production regulator, a memory erasure promoter or a memory learning decrease inhibitor, characterized by using RFRP and / or OT 7 T022;

(2) ( i ) RFRPと〇T 7 T 022とを接触させた場合と （ii) RFRP と OT7T022および試験化合物とを接触させた場合との比較を行なうこと を特徴とする滕グルカゴン分泌調節薬、 血糖調節薬、 尿生成調節薬、 記憶消去 促進薬または記憶学習低下抑制薬のスクリーニング方法を提供する。  (2) (i) Teng-glucagon secretion modulator characterized by comparing RFRP with 〇T7T022 and (ii) contacting RFRP with OT7T022 and a test compound A method for screening a blood glucose regulator, a urine production regulator, a memory elimination promoter or a memory learning decline inhibitor.

該滕グルカゴン分泌調節薬、 血糖調節薬、 尿生成調節薬、 記憶消去促進薬ま たは記憶学習低下抑制薬は、 RFRPと OT7T 022との結合性またはシグ ナル伝達を変化させる化合物またはその塩である。 本発明のスクリーニング方法においては、 （ i) と （ii) の場合における、 例えば、 OT7T022に対する RFRPの結合量、 細胞刺激活性などを測定 して、 比較することを特徴とする。 The Teng-glucagon secretion regulator, blood sugar regulator, urine formation regulator, memory erasure enhancer or memory learning decrease inhibitor is a compound or a salt thereof that alters the binding or signal transmission between RFRP and OT7T022. is there. The screening method of the present invention is characterized in that, in the cases (i) and (ii), for example, the amount of RFRP bound to OT7T022, the cell stimulating activity and the like are measured and compared.

より具体的には、 本発明は、  More specifically, the present invention provides

a) 標識した RFRPを、 OT7T022に接触させた場合と、 標識した R FRPおよび試験化合物を OT7T022に接触させた場合における、 標識し た RFRPの OT7T022に対する結合量を測定し、 比較することを特徴と する該勝グルカゴン分泌調節薬、 血糖調節薬、 尿生成調節薬、 記憶消去促進薬 または記憶学習低下抑制薬のスクリ一二ング方法、  a) The amount of labeled RFRP bound to OT7T022 is measured and compared when the labeled RFRP is brought into contact with OT7T022 and when the labeled RFRP and the test compound are brought into contact with OT7T022. A screening method of a glucagon secretion regulator, a blood glucose regulator, a urine generation regulator, a memory erasure promoter or a memory learning decrease inhibitor,

b) 標識した RFRPを、 OT7T022を含有する細胞または該細胞の膜 画分に接触させた場合と、 標識した RFRPおよび試験化合物を〇T 7 TO 2 2を含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合における、 標識した RFRPの該細胞または該膜画分に対する結合量を測定し、 比較することを特 徴とする該塍グルカゴン分泌調節薬、 血糖調節薬、 尿生成調節薬、 記憶消去促 進薬または記憶学習低下抑制薬のスクリーニング方法、  b) When the labeled RFRP is brought into contact with the cell containing OT7T022 or the membrane fraction of the cell, and the labeled RFRP and the test compound are contacted with the cell containing ΔT 7 TO22 or the membrane fraction of the cell. The glucagon secretion regulator, a blood glucose regulator, a urine production regulator, and a memory, wherein the amount of the labeled RFRP bound to the cell or the membrane fraction is measured and compared. Screening methods for extinction promoting drugs or memory learning / deterioration inhibitors,

c) 標識した RFRPを、 〇T 7 TO 22をコードする DNAを含有する形 質転換体を培養することによって細胞膜上に発現した OT 7 TO 22に接触さ せた場合と、 標識した RFRPおよび試験化合物を OT 7 TO 22をコードす る D N Aを含有する形質転換体を培養することによつて細胞膜上に発現した O T 7 T 022に接触させた場合における、 標識した RFRPの OT7T022 に対する結合量を測定し、 比較することを特徴とする該滕グルカゴン分泌調節 薬、 血糖調節薬、 尿生成調節薬、 記憶消去促進薬または記憶学習低下抑制薬の スクリーニング方法、  c) When the labeled RFRP is brought into contact with OT7TO22 expressed on the cell membrane by culturing a transformant containing DNA encoding 〇T7TO22, and the labeled RFRP and test Measure the amount of labeled RFRP bound to OT7T022 when the compound is brought into contact with OT7T022 expressed on the cell membrane by culturing a transformant containing DNA encoding OT7TO22 A screening method for the Teng-glucagon secretion regulator, a blood glucose regulator, a urine production regulator, a memory erasure promoter or a memory learning decline inhibitor, characterized in that:

d) RFRPを活性化する化合物 （例えば、 RFRPなど） を OT7T02 2を含有する細胞に接触させた場合と、 RFRPを活性化する化合物および試 験化合物を〇T 7Τ 022を含有する細胞に接触させた場合における、 ΟΤ 7 TO 22を介した細胞刺激活性を測定し、 比較することを特徴とする該塍グル カゴン分泌調節薬、 血糖調節薬、 尿生成調節薬、 記憶消去促進薬または記憶学 習低下抑制薬のスクリーニング方法、 および e) RFRPを活性化する化合物 （例えば、 RFRPなど） を OT7T02 2をコードする DNAを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上 に発現した OT 7 TO 22に接触させた場合と、 RFRPを活性化する化合物 および試験化合 /を OT7T 022をコードする DNAを含有する形質転換体 を培養することによって細胞膜上に発現した OT7T 022に接触させた場合 における、 レセプ夕一を介する細胞刺激活性を測定し、 比較することを特徴と する該膝グルカゴン分泌調節薬、 血糖調節薬、 尿生成調節薬、 記憶消去促進薬 または記憶学習低下抑制薬のスクリーニング方法を提供する。 d) RFRP activating compounds (eg, RFRP) are contacted with OT7T022-containing cells, and RFRP activating compounds and test compounds are contacted with 〇T7Τ022-containing cells.塍 7 TO 22-mediated cell stimulating activity is measured and compared, wherein the 塍 glucagon secretion regulator, a blood glucose regulator, a urine production regulator, a memory eraser or a memory learning A method for screening a reduction inhibitor, and e) When a compound that activates RFRP (for example, RFRP) is brought into contact with OT7TO22 expressed on the cell membrane by culturing a transformant containing DNA encoding OT7T022, Measurement of cell stimulating activity via receptor exclusion when OT7T022 expressed on the cell membrane is contacted by culturing a transformant containing the activating compound and the test compound / DNA encoding OT7T022 And a screening method for the knee glucagon secretion regulator, blood glucose regulator, urine formation regulator, memory erasure promoter or memory learning decline inhibitor, characterized in that they are compared with each other.

本発明のスクリーニング方法では、 RFRPの代わりに、 RFRPと OT 7 TO 22との結合性を変化させる化合物またはその塩 （例えば、 低分子合成化 合物、 好ましくは低分子合成ァゴニスト） を用いることもできる。 この RFR Pと OT7T022との結合性を変化させる化合物またはその塩は、 RFRP を用いて本発明のスクーニング方法を実施することによって得ることができる, 本発明のスクリーニング方法の具体的な説明を以下にする。  In the screening method of the present invention, a compound or a salt thereof (for example, a low-molecular-weight synthetic compound, preferably a low-molecular-weight synthetic agonist) that changes the binding property between RFRP and OT 7 TO 22 may be used instead of RFRP. it can. The compound or a salt thereof that alters the binding property between RFRP and OT7T022 can be obtained by performing the screening method of the present invention using RFRP.A specific description of the screening method of the present invention will be given below. I do.

まず、 本発明のスクリーニング方法に用いる OT 7 TO 22としては、 〇T 7 Τ 022を含有する哺乳動物の臓器の細胞膜画分が好適である。 しかし、 特 にヒト由来の臓器は入手が極めて困難なことから、 スクリ一ニングに用いられ るものとしては、 組換え体を用いて大量発現させたヒト由来の ΟΤ 7 TO 22 などが適している。  First, as the OT7TO22 used in the screening method of the present invention, a cell membrane fraction of a mammalian organ containing {T7} 022 is suitable. However, since it is extremely difficult to obtain human-derived organs, human-derived ΟΤ7TO22 expressed in large amounts using recombinants is suitable for screening. .

OT7T022を製造するには、 WO00Z29441号または W〇 0 \/ 66134号に記載の方法が用いられるが、 OT7T022をコードする DN Aを哺乳細胞や昆虫細胞で発現することにより行なうことが好ましい。 目的と する蛋白質部分をコードする DNA断片には相補 DNAが用いられるが、 必ず しもこれに制約されるものではない。 例えば、 遺伝子断片や合成 DNAを用い てもよい。 OT7T 022をコードする DNA断片を宿主動物細胞に導入し、 それらを効率よく発現させるためには、 該 DN A断片を昆虫を宿主とするバキ ュロウィルスに属する核多角体病ウィルス （nuclear polyhedrosis virus； N .P V) のポリヘドリンプロモー夕一、 S V40由来のプロモータ一、 レトロゥ ィルスのプロモーター、 メタ口チォネインプロモーター、 ヒトヒートショック プロモーター、 サイ卜メガロウィルスプロモーター、 SRひプロモータ一など の下流に組み込むのが好ましい。 発現したレセプ夕一の量と質の検査はそれ自 体公知の方法で行うことができる。 例えば、 文献 [； Nambi, P. ら、 ザ ·ジャー ナル ·ォブ ·バイオロジカル ·ケミストリー （J. Biol. Chem. ) ,267巻， 19555 〜19559頁， 1992年〕 に記載の方法に従って行なうこ ができる。 To produce OT7T022, the method described in WO00Z29441 or WO00 / 66134 is used, but it is preferably carried out by expressing DNA encoding OT7T022 in mammalian cells or insect cells. Complementary DNA is used for the DNA fragment encoding the target protein portion, but is not necessarily limited to this. For example, a gene fragment or a synthetic DNA may be used. In order to introduce the DNA fragment encoding OT7T022 into host animal cells and express them efficiently, the DNA fragment must be expressed in a nuclear polyhedrosis virus (NCR) belonging to a baculovirus using an insect as a host. .PV) polyhedrin promoter, SV40-derived promoter, retrovirus promoter, meta-oral thionein promoter, human heat shock It is preferable to incorporate it downstream of a promoter, cytomegalovirus promoter, SR promoter and the like. Examination of the amount and quality of the expressed receptor can be carried out by a method known per se. For example, the method can be performed according to the method described in the literature [; Nambi, P. et al., The Journal of Biological Chemistry (J. Biol. Chem.), 267, 19555-1959, 1992]. Can be.

したがって、 本発明のスクリーニング方法において、 OT7T022を含有 するものとしては、 それ自体公知の方法に従って精製した〇T7 TO 22であ つてもよいし、 〇T 7 T 022を含有する細胞を用いてもよく、 また ΟΤ7Τ 022を含有する細胞の膜画分を用いてもよい。  Therefore, in the screening method of the present invention, OT7T022-containing cells may be 〇T7TO22 purified according to a method known per se, or cells containing 〇T7T022 may be used. Alternatively, a membrane fraction of cells containing {7} 022 may be used.

本発明のスクリーニング方法において、 ΟΤ 7 Τ 022を含有する細胞を用 いる場合、該細胞をダルタルアルデヒド、ホルマリンなどで固定化してもよい。 固定化方法はそれ自体公知の方法に従って行なうことができる。  In the screening method of the present invention, when a cell containing ΟΤ7Τ022 is used, the cell may be immobilized with daltaraldehyde, formalin, or the like. The immobilization method can be performed according to a method known per se.

ΟΤ7Τ022を含有する細胞としては、 ΟΤ7Τ022を発現した宿主細 胞をいうが、 該宿主細胞としては、 大腸菌、 枯草菌、 酵母、 昆虫細胞、 動物細 胞などが好ましい。  The cell containing ΟΤ7Τ022 refers to a host cell expressing ΟΤ7Τ022, and the host cell is preferably Escherichia coli, Bacillus subtilis, yeast, insect cells, animal cells, and the like.

細胞膜画分としては、 細胞を破砕した後、 それ自体公知の方法で得られる細 胞膜が多く含まれる画分のことをいう。 細胞の破砕方法としては、 Potter— Elvehj em型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、 ヮーリングブレンダ一ゃポ リトロン （Kinematica社製） による破砕、 超音波による破碎、 フレンチプレス などで加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させることによる破碎などが挙 げられる。 細胞膜の分画には、 分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠 心力による分画法が主として用いられる。 例えば、 細胞破砕液を低速 （500 〜3000 r pm) で短時間 （通常、 約 1〜10分） 遠心し、 上清をさらに高 速 （15000〜30000 r m) で通常 30分〜 2時間遠心し、 得られる 沈澱を膜画分とする。 該膜画分中には、 発現した OT 7T022と細胞由来の リン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含まれる。  The cell membrane fraction refers to a cell membrane-rich fraction obtained by disrupting cells and then obtained by a method known per se. The cells can be crushed by crushing the cells with a Potter-Elvehj em-type homogenizer, crushing with a Perling Blender- 10 Polytron (manufactured by Kinematica), crushing by ultrasonic waves, or thinning the cells while applying pressure with a French press. Fragmentation caused by jetting from a nozzle can be mentioned. For cell membrane fractionation, centrifugal fractionation methods such as differential centrifugation and density gradient centrifugation are mainly used. For example, the cell lysate is centrifuged at low speed (500-3000 rpm) for a short time (typically, about 1-10 minutes), and the supernatant is further centrifuged at high speed (15000-30000 rm) for 30 minutes-2 hours. The resulting precipitate is used as the membrane fraction. The membrane fraction contains a large amount of expressed OT7T022 and membrane components such as cell-derived phospholipids and membrane proteins.

OT7T 022を含有する細胞や膜画分中の〇T 7T022の量は、 1細胞 当たり 103〜108分子であるのが好ましく、 105〜107分子であるのが好 適である。 なお、 発現量が多いほど膜画分当たりの OT7T 022結合活性 （ 比活性） が高くなり、 高感度なスクリーニング系の構築が可能になるばかりで なく、 同一ロットで大量の試料を測定できるようになる。 The amount of ΔT7T022 in cells containing OT7T022 and in the membrane fraction is preferably 10 3 to 10 8 molecules, and more preferably 10 5 to 10 7 molecules per cell. The higher the expression level, the higher the OT7T022 binding activity per membrane fraction ( Specific activity), making it possible to construct a highly sensitive screening system, and to measure a large number of samples in the same lot.

RFRPと OT7T022との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合 物またはその塩をスクリーニングする上記の a) 〜c) を実施するためには、 例えば、 適当な OT7T 022画分と、 標識した RFRPが必要である。  To screen for a compound or a salt thereof that alters the binding or signal transduction between RFRP and OT7T022, for example, the appropriate OT7T022 fraction and labeled RFRP are required to perform a) to c) above. It is.

OT 7 TO 22画分としては、 天然型の〇T 7 TO 22画分か、 またはそれ と同等の活性を有する組換え型 OT7 TO 22画分などが望ましい。 ここで、 同等の活性とは、同等のリガンド結合活性:、シグナル情報伝達作用などを示す。 標識した RFRPとしては、 標識した RFRP、 標識した RFRPアナログ 化合物などが用いられる。 例えば 〔3H〕 、 〔125 I〕 、 〔14C〕 、 〔35S〕 な どで標識された R F R Pなどが用いられる。 As the OT7TO22 fraction, a natural ΔT7TO22 fraction or a recombinant OT7TO22 fraction having an activity equivalent thereto is desirable. Here, “equivalent activity” means equivalent ligand binding activity :, signal transduction action and the like. As the labeled RFRP, a labeled RFRP, a labeled RFRP analog compound, or the like is used. For example, RFRP labeled with [ 3 H], [ 125 I], [ 14 C], [ 35 S] or the like is used.

具体的には、 RFRPと OT 7 TO 22との ί§合性またはシグナル伝達を変 化させる化合物またはその塩のスクリーニングを行なうには、 まず〇Τ 7 Τ 0 22を含有する細胞または細胞の膜画分を、 スクリーニングに適したバッファ —に懸濁することにより ΟΤ7Τ022標品を調製する。 バッファーには、 ρ Η4〜： L 0 (望ましくは ρΗ6〜8) のリン酸バッファー、 トリス一塩酸バッ ファーなどの RFRPと ΟΤ 7 T 022との結合を阻害しないバッファ一であ ればいずれでもよい。 また、 非特異的結合を低減させる目的で、 CHAPS、 Twe en-80™ (花王—アトラス社） 、 ジギトニン、 デォキシコレートな どの界面活性剤をバッファーに加えることもできる。 さらに、 プロテアーゼに よる OT7T 022や RFRPの分解を抑える目的で PMS F、 ロイぺプチン、 E_ 64 (ペプチド研究所製） 、 ぺプス夕チンなどのプロテアーゼ阻害剤を添 加することもできる。 0.01〜1 Om 1の該レセプ夕一溶液に、 一定量 （50 00〜 500000 c m) の標識した R F R Pを添加し、 同時に 10— 4M〜 10— 1QMの試験化合物を共存させる。 非特異的結合量（NSB) を知るために 大過剰の未標識の R F R Pを加えた反応チューブも用意する。 反応は約 0〜 5 Ot：、 望ましくは約 4〜37 で、 約 20分〜 24時間、 望ましくは約 30分 〜3時間行う。 反応後、 ガラス繊維濾紙等で濾過し、 適量の同バッファーで洗 浄した後、 ガラス繊維濾紙に残存する放射活性を液体シンチレーシヨンカウン 夕一またはァ一カウンターで計測する。 拮抗する物質がない場合のカウント（B 0) から非特異的結合量 （NSB) を引いたカウント （B。― NSB) を 100 %とした時、 特異的結合量 （B— NSB) が、 例えば、 50%以下になる試験 化合物を拮抗阻害能力のある候補物質として選択することができる。 Specifically, in order to screen for a compound or a salt thereof that alters the affinity or signal transduction between RFRP and OT7TO22, first, a cell containing Τ7Τ022 or a membrane of the cell is used. Prepare the ΟΤ7Τ022 standard by suspending the fractions in a buffer suitable for screening. The buffer may be any buffer that does not inhibit the binding between RFRP and ΟΤ7T022, such as a phosphate buffer with ρΗ4: L 0 (preferably ρΗ6 to 8) and a buffer of Tris-monohydrochloride. . In addition, surfactants such as CHAPS, Tween-80 ™ (Kao-Atlas), digitonin, and deoxycholate can be added to the buffer to reduce non-specific binding. Furthermore, a protease inhibitor such as PMSF, louptin, E_64 (manufactured by Peptide Research Laboratories), and peptide suptin can be added to suppress the degradation of OT7T022 and RFRP by the protease. To the receptions evening first solution of 0.01 to 1 Om 1, were added labeled RFRP a certain amount (50 00~ 500000 cm), the coexistence of test compound 10- 4 M~ 10- 1Q M simultaneously. Prepare a reaction tube containing a large excess of unlabeled RFRP to determine the amount of non-specific binding (NSB). The reaction is performed at about 0-5 Ot :, preferably about 4-37, for about 20 minutes-24 hours, preferably about 30 minutes-3 hours. After the reaction, the solution is filtered through a glass fiber filter paper, etc., and washed with an appropriate amount of the same buffer. Measure at evening or key counter. When the count (B.-NSB) obtained by subtracting the non-specific binding amount (NSB) from the count (B 0) when there is no antagonistic substance is 100%, the specific binding amount (B—NSB) The test compound which is 50% or less can be selected as a candidate substance having competitive inhibitory ability.

RFRPと OT7T022との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合 物またはその塩をスクリーニングする上記の d) 〜e) の方法を実施するため には、 例えば、 OT7T022を介する細胞刺激活性を公知の方法または市販 の測定用キットを用いて測定することができる。  In order to carry out the above-mentioned methods d) to e) of screening for a compound or a salt thereof that alters the binding or signal transduction between RFRP and OT7T022, for example, a known method for OT7T022-mediated cell stimulating activity or It can be measured using a commercially available measurement kit.

具体的には、 まず、 〇T 7 TO 22を含有する細胞をマルチウエルプレート 等に培養する。 スクリーニングを行なうにあたっては前もって新鮮な培地ある いは細胞に毒性を示さない適当なバッファ一に交換し、 試験化合物などを添加 して一定時間ィンキュベートした後、 細胞を抽出あるいは上清液を回収して、 生成した産物をそれぞれの方法に従って定量する。 細胞刺激活性の指標とする 物質 （例えば、 ァラキドン酸など） の生成が、 細胞が含有する分解酵素によつ て検定困難な場合は、 該分解酵素に対する阻害剤を添加してアツセィを行なつ てもよい。 また、 c AMP産生抑制などの活性については、 フオルスコリンな どで細胞の基礎的産生量を増大させておいた細胞に対する産生抑制作用として 検出することができる。  Specifically, first, cells containing 7T 7 TO 22 are cultured in a multiwell plate or the like. Before conducting screening, replace the cells with fresh medium or an appropriate buffer that is not toxic to cells, add test compounds, etc., incubate for a certain period of time, and extract cells or collect supernatant. The product produced is quantified according to the respective method. If the production of a substance (for example, arachidonic acid) as an indicator of cell stimulating activity is difficult due to the presence of a degrading enzyme contained in cells, an inhibitor for the degrading enzyme is added to perform the assay. Is also good. In addition, activities such as inhibition of cAMP production can be detected as an inhibitory effect on production of cells whose basal production has been increased by forskolin or the like.

細胞刺激活性を測定してスクリーニングを行なうには、 適当な OT7T02 2を発現した細胞が必要である。 OT 7 TO 22を発現した細胞としては、 天 然型の OT 7T022を有する細胞株、 上記の組換え型 OT 7T022を発現 した細胞株などが望ましい。  In order to perform screening by measuring cell stimulating activity, cells expressing appropriate OT7T022 are required. As the cells expressing OT7TO22, cell lines having natural OT7T022, the above-mentioned cell lines expressing recombinant OT7T022, and the like are desirable.

試験化合物としては、 例えば、 ペプチド、 蛋白質、 非ペプチド性化合物、 合 成化合物、 発酵生産物、 細胞抽出液、 植物抽出液、 動物組織抽出液、 血漿など が用いられ、 これら化合物は新規な化合物であってもよいし、 公知の化合物で あってもよい。  Test compounds include, for example, peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, and plasma.These compounds are novel compounds. Or a known compound.

試験化合物は塩を形成していてもよく、 試験化合物の塩としては、 生理学的 に許容される酸 （例、 無機酸など） や塩基 （例、 有機酸など） などとの塩が用 いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。 この様な塩とし ては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水素酸、 硫酸など） との 塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイ ン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスル ホン酸、 ベンゼンスルホン酸など） との塩などが用いられる。 The test compound may form a salt, and a salt with a physiologically acceptable acid (eg, an inorganic acid) or a base (eg, an organic acid) is used as the salt of the test compound. Particularly preferred are physiologically acceptable acid addition salts. Such salt For example, salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid, Salts with tartaric acid, cunic acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc. are used.

また、 試験化合物としては、 OT7T 022の活性部位の原子座標およびリ ガンド結合ポケッ卜の位置に基づいて、 リガンド結合ポケッ卜に結合するよう に設計された化合物が好ましく用いられる。 OT7T022の活性部位の原子 座標およびリガンド結合ポケッ卜の位置の測定は、 公知の方法あるいはそれに 準じる方法を用いて行うことができる。  As the test compound, a compound designed to bind to the ligand-binding pocket based on the atomic coordinates of the active site of OT7T022 and the position of the ligand-binding pocket is preferably used. The measurement of the atomic coordinates of the active site of OT7T022 and the position of the ligand binding pocket can be performed using a known method or a method analogous thereto.

RFRPと OT7T022との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合 物またはその塩のスクリーニング用キットは、 RFRP、 OT7T022を含 有する細胞またはその細胞膜画分を含有するものなどである。  A kit for screening a compound or a salt thereof that alters the binding property or signal transduction between RFRP and OT7T022 includes RFRP, a cell containing OT7T022 or a cell membrane fraction thereof.

本発明のスクリーニング用キッ卜の例としては、 次のものが挙げられる。 1. スクリーニング用試薬  Examples of the screening kit of the present invention include the following. 1. Screening reagent

a) 測定用緩衝液および洗浄用緩衝液  a) Measurement buffer and washing buffer

Hanks' Balanced Salt Solution (ギブコ社製） に、 0.05%のゥシ血清ァ ルブミン （シグマ社製） を加えたもの。  Hanks' Balanced Salt Solution (manufactured by Gibco) plus 0.05% serum albumin (manufactured by Sigma).

孔径 0.45 imのフィルターで濾過滅菌し、 4 で保存するか、 あるいは用 時調製しても良い。  Sterilize by filtration with a 0.45 im pore size filter and store in 4 or prepare as needed.

b) OT7T022標品  b) OT7T022 standard

OT7T022を発現させた CHO細胞を、 12穴プレートに 5 X 105個 Z 穴で継代し、 37T：、 5%C〇2、 95 % a i rで 2日間培養したもの。 CHO cells expressing the OT7T022, 12 well plates were passaged at 5 X 10 5 cells Z holes, 37T :, 5% C_〇 2, which were cultured for 2 days at 95% air.

c) 標識 RFRP  c) Sign RFRP

市販の 〔3H〕 、 〔125 I〕 、 〔14C〕 、 〔35S〕 などで標識した RFRP 水溶液の;!犬態のものを 4であるいは—20でにて保存し、 用時に測定用緩衝 液にて l ^Mに希釈する。 Commercially available [3 H], [125 I], [14 C], the RFRP aqueous solution labeled with a [35 S];! Save those dogs state at 4 or in -20, measurement upon use Dilute to 1M with buffer.

d) RFRP標準液  d) RFRP standard solution

. RFRPを 0.1 %ゥシ血清アルブミン （シグマ社製） を含む PBSで ImM となるように溶解し、 — 20 で保存する。 2. 測定法 Dissolve RFRP in ImM with PBS containing 0.1% ゥ serum albumin (Sigma) and store at –20. 2. Measurement method

a) 12穴組織培養用プレートにて培養した OT7T022発現 CHO細胞 を、 測定用緩衝液 1 m 1で 2回洗浄した後、 490 ^ 1の測定用緩衝液を各穴 に加える。  a) Wash OT7T022-expressing CHO cells cultured on a 12-well tissue culture plate twice with 1 ml of measurement buffer, and add 490 ^ 1 measurement buffer to each well.

b) 10— 3〜： L 0— 1QMの試験化合物溶液を 5 1加えた後、標識 RFRPを 5 1加え、 室温にて 1時間反応させる。 非特異的結合量を知るためには試験 化合物の代わりに 10— 3Mの RFRPを 5 a 1加えておく。 b) 10- 3 ~: L 0- 1Q M after addition test compound solution 5 1, the labeled RFRP 5 1 added, reacted at room temperature for 1 hour. A supplementary 5 a 1 a RFRP of 10- 3 M in place of the test compound to determine the amount of non-specific binding.

c) 反応液を除去し、 lm 1の洗浄用緩衝液で 3回洗浄する。 細胞に結合し た標識 RFRPを 0.2N NaOH— 1 %SDSで溶解し、 4mlの液体シン. チレ一夕一 A (和光純薬製） と混合する。  c) Remove the reaction solution and wash three times with 1 ml of washing buffer. The labeled RFRP bound to the cells is dissolved in 0.2N NaOH-1% SDS, and mixed with 4 ml of liquid Syn. Chile overnight A (manufactured by Wako Pure Chemical Industries).

d) 液体シンチレ一シヨンカウンター （ベックマン社製） を用いて放射活性 を測定し、 Percent Maximum Binding (PMB) を次の式で求める。  d) Measure the radioactivity using a liquid scintillation counter (manufactured by Beckman), and determine the Percent Maximum Binding (PMB) by the following formula.

PMB= [ (B-NSB) Z (B。― NSB) ] X 100  PMB = [(B-NSB) Z (B.- NSB)] X 100

PMB： Percent Maximum Binding  PMB: Percent Maximum Binding

B ：検体を加えた時の値  B: Value when the sample is added

NSB ： Non-specific Binding (非特異的結合量)  NSB: Non-specific Binding

0 ：取大口 α里  0: Toriguchi α-sato

ΟΤ7Τ 022に対するァゴニストであるかアンタゴニストであるかの具体 的な評価方法は以下の （ i) または （ii) に従えばよい。  The specific method of evaluating whether it is an agonist or an antagonist to {7} 022 may be in accordance with the following (i) or (ii).

( i ) 前記 a) 〜c) のスクリーニング方法で示されるバインディング ·アツ セィを行い、 RFRPと OT7T 022との結合性を変化させる （特に、 結合 を阻害する） 化合物を得た後、 該化合物が上記した細胞刺激活性を有している か否かを測定する。 細胞刺激活性を有する化合物またはその塩は OT 7 TO 2 2に対するァゴニストであり、 該活性を有しない化合物またはその塩は〇T 7 TO 22に¾するアン夕ゴニストである。  (i) After performing the binding assay shown in the screening methods a) to c) above to obtain a compound that changes the binding property (particularly, inhibits the binding) between RFRP and OT7T022, It is determined whether or not it has the above-mentioned cell stimulating activity. The compound having a cell stimulating activity or a salt thereof is an agonist against OT 7 TO 22, and the compound having no such activity or a salt thereof is an ammonium gonist corresponding to {T 7 TO 22}.

(ii) (a) 試験化合物を OT7T 022を含有する細胞に接触させ、 上記し た細胞刺激活性を測定する。 細胞刺激活性を有する化合物またはその塩は OT 7 T 022に対するァゴニストである。  (ii) (a) The test compound is brought into contact with cells containing OT7T022, and the above-mentioned cell stimulating activity is measured. The compound having a cell stimulating activity or a salt thereof is an agonist against OT7T022.

(b) OT7T 022を活性化する化合物 （例えば、 リガンド） を OT7T0 22を含有する細胞に接触させた場合と、 OT 7 T 022を活性化する化合物 および試験化合物を OT 7 TO 22を含有する細胞に接触させた場合における, OT 7 TO 22を介した細胞刺激活性を測定し、 比較する。 OT7T022を 活性化する化合物による細胞刺激活性を減少させ得る化合物またはその塩は O 丁 7 T 022に対するアン夕ゴニストである。 (b) A compound (eg, a ligand) that activates OT7T022 is converted to OT7T0 Cell stimulating activity via OT 7 TO 22 when exposed to cells containing 22 and when a compound that activates OT 7 T 022 and a test compound are brought into contact with cells containing OT 7 TO 22 Measure and compare. A compound or a salt thereof capable of decreasing the cell stimulating activity of a compound that activates OT7T022 is an antagonist of O7T022.

本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られ る化合物としては、 ペプチド、 蛋白質、 非ペプチド性化合物、 合成化合物、 発 酵生産物などが挙げられ、 これら化合物は新規な化合物であってもよいし、 公 知の化合物であってもよい。  Compounds obtained using the screening method or the screening kit of the present invention include peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, enzymatic products, and the like. Or a known compound.

本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られ る化合物は、 RFRPと OT7T022との結合性またはシグナル伝達を変化 させる作用を有する化合物であり、 具体的には、 （ィ） OT7T022を介し て細胞刺激活性を有する化合物 （いわゆる、 OT7T022ァゴニスト） 、 （ 口） 該細胞刺激活性を有しない化合物 （いわゆる、 OT7T022アン夕ゴニ スト） 、 （ハ） RFRPと OT7T 022との結合力を増強する化合物、 ある いは （二） RFRPと OT 7 TO 22との結合力を減少させる化合物である。 該化合物の塩としては、 生理学的に許容される酸 （例、 無機酸など） や塩基 (例、 有機酸など） などとの塩が用いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸 付加塩が好ましい。 この様な塩としては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リ ン酸、 臭化水素酸、 硫酸など） との塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ 酸、 篠酸、 安息香酸、 メタンスルホン酸、 ベンゼンスルホン酸など） との塩な どが用いられる。  The compound obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention is a compound having an action of altering the binding between RFRP and OT7T022 or signal transduction, and specifically, (a) via OT7T022 A compound having a cell stimulating activity (so-called OT7T022 agonist), (mouth) a compound having no cell stimulating activity (so-called OT7T022 antenna), (c) a compound that enhances the binding force between RFRP and OT7T 022, Or (ii) a compound that reduces the binding strength between RFRP and OT7TO22. As the salt of the compound, a salt with a physiologically acceptable acid (eg, an inorganic acid, etc.) or a base (eg, an organic acid, etc.) is used, and a physiologically acceptable acid addition salt is particularly preferable. . Examples of such salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) and organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid) Succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, succinic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.).

OT7T022ァゴニストは、 RFRPが有する生理活性と同様の作用を有 しており安全で低毒性な医薬として有用である。  OT7T022 agonist has the same action as the physiological activity of RFRP, and is useful as a safe and low-toxicity drug.

OT7 TO 22アン夕ゴニストは、 RFRPが有する生理活性を抑制するこ とができるので、 RFRPの生理活性を抑制するための安全で低毒性な医薬と レて有用である。  Since OT7 TO22 antagonists can suppress the biological activity of RFRP, they are useful as safe and low-toxic drugs for suppressing the biological activity of RFRP.

RFRPと OT7T 022との結合力を増強する化合物またはその塩は、 R F R Pが有する生理活性を増強することができるので、 安全で低毒性な医薬と して有用である。 A compound or a salt thereof that enhances the binding strength between RFRP and OT7T 022 is represented by R Because it can enhance the physiological activity of FRP, it is useful as a safe and low-toxicity drug.

RFRPと OT7T022との結合力を減少させる化合物またはその塩は、 R F R Pが有する生理活性を減少させることができるので、 R F R Pの生理活 性を抑制するための安全で低毒性な医薬として有用である。  A compound or a salt thereof that reduces the binding force between RFRP and OT7T022 can reduce the biological activity of RFRP, and is therefore useful as a safe and low-toxic drug for suppressing the biological activity of RFRP.

具体的には、 本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを 用いて得られる OT7T 022ァゴニストおよび RFRPと OT7T022と の結合力を増強する化合物またはその塩は、例えば、滕グルカゴン分泌促進剤、 血糖上昇剤、 尿生成促進剤、 記憶消去促進剤 （嫌な記憶の消去促進剤） 、 また は肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 イン スリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 イン スリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性、 癌などの予防 ·治療剤として 使用することができる。  Specifically, the OT7T022 agonist and the compound or a salt thereof that enhances the binding strength between RFRP and OT7T022 obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention include, for example, a Teng glucagon secretion promoter, a blood glucose increasing agent, and the like. , Urine production enhancer, memory elimination enhancer (disgusting memory elimination enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity, cancer and the like.

一方、 本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて 得られる OT7T022アン夕ゴニストおよび RFRPと OT7T 022との 結合力を減少させる化合物またはその塩は、例えば、塍グルカゴン分泌抑制剤、 血糖低下剤、 尿生成抑制剤、 記憶学習低下抑制剤 （記憶低下抑制剤） 、 または 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病 性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良、 記憶学習障害などの予 防 ·治療剤として使用することができる。 糖尿病には、 インスリン依存型 （I 型） 糖尿病、 インスリン非依存型 （II型） 糖尿病などが含まれる。  On the other hand, a compound or a salt thereof that reduces the binding force between OT7T022 antagonist and RFRP and OT7T022 obtained using the screening method or the screening kit of the present invention is, for example, a 塍 glucagon secretion inhibitor, a hypoglycemic agent, Urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory loss inhibitor), or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturia, high fat It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for blood disorders, sexual dysfunction, skin diseases, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic diseases, indigestion, memory learning disorders, and the like. Diabetes includes insulin-dependent (type I) diabetes and non-insulin-dependent (type II) diabetes.

本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られ る化合物またはその塩を上記の医薬組成物として使用する場合、 常套手段に従 つて製剤化することができる。 具体的には、 上記した RFRPを含有する予防 •治療剤と同様に製造することができる。  When the compound or a salt thereof obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention is used as the above-mentioned pharmaceutical composition, it can be formulated according to a conventional method. Specifically, it can be produced in the same manner as the above-mentioned prophylactic / therapeutic agent containing RFRP.

得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、 ヒトゃ哺乳動物（例えば、 ラット、 マウス、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブ夕、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど） に対 して投与することができる。 該化合物またはその塩の投与量は、 投与対象、 対象臓器、 症状、 投与方法な どにより差異はあるが、 経口投与の場合、 一般的に例えば、 肥満患者 （体重 6 0 kgとして） においては、 一日につき OT7T022ァゴニストを約 0.1〜 10 Omg、 好ましくは約 1. 0〜5 Omg、 より好ましくは約 1. 0〜20 mgである。 非経口的に投与する場合は、 その 1回投与量は投与対象、 対象臓 器、 症状、 投与方法などによっても異なるが、 例えば、 注射剤の形では通常例 えば、 肥満患者 （体重 6 O kgとして） においては、 一日につき〇T 7 TO 2 2ァゴニストを約 0. 01〜3 Omg程度、 好ましくは約 0. 1〜2 Omg程 度、 より好ましくは約 0. 1〜1 Omg程度を静脈注射により投与するのが好 都合である。 他の動物の場合も、 体重 60 kg当たりに換算した量を投与する ことができる。 Because the resulting product is safe and has low toxicity, it should be administered to humans and mammals (for example, rats, mice, egrets, higgs, bush, pests, cats, dogs, monkeys, etc.). Can be. The dose of the compound or a salt thereof varies depending on the administration subject, target organ, symptom, administration method, and the like. In the case of oral administration, for example, in an obese patient (with a body weight of 60 kg), The amount of OT7T022 agonist per day is about 0.1 to 10 Omg, preferably about 1.0 to 5 Omg, more preferably about 1.0 to 20 mg. In the case of parenteral administration, the single dose varies depending on the subject of administration, target organs, symptoms, administration method, etc. For example, in the case of injection, usually, for example, an obese patient (body weight 6 O kg ), The amount of 〇T 7 TO 22 agonist per day is about 0.01 to 3 Omg, preferably about 0.1 to 2 Omg, more preferably about 0.1 to 1 Omg. It is convenient to administer by injection. In the case of other animals, the dose can be administered in terms of weight per 60 kg.

(6) 細胞膜における〇T 7 TO 22の量を変化させる化合物またはその塩を 含有する医薬 .  (6) A drug containing a compound or a salt thereof that alters the amount of ΔT 7 TO 22 in a cell membrane.

OT7T022に対する抗体は、 OT 7 T 022を特異的に認識することが できるので、 細胞膜における OT7T022の量を変化させる化合物またはそ の塩のスクリーニングに用いることができる。  Since the antibody against OT7T022 can specifically recognize OT7T022, it can be used for screening a compound or a salt thereof that changes the amount of OT7T022 in the cell membrane.

すなわち、 本発明は、 例えば、  That is, the present invention, for example,

( i) 非ヒト哺乳動物の a) 血液、 b) 特定の臓器、 c) 臓器から単離した 組織もしくは細胞等を破壊した後、 細胞膜画分を単離し、 細胞膜画分に含まれ る OT 7 TO 22を定量することによる、 細胞膜における OT7T022の量 を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、  (i) Non-human mammal a) Blood, b) Specific organ, c) Tissues or cells isolated from organs are destroyed, and cell membrane fraction is isolated.OT7 contained in cell membrane fraction A method for screening a compound or a salt thereof that changes the amount of OT7T022 in a cell membrane by quantifying TO22,

(ii) OT7T022を発現する形質転換体等を破壊した後、 細胞膜画分を 単離し、 細胞膜画分に含まれる〇T 7 TO 22を定量することによる、 細胞膜 における〇T 7 TO 22の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニン グ方法、  (ii) After disrupting the OT7T022-expressing transformant, etc., isolate the cell membrane fraction and determine the amount of ΔT 7 TO 22 in the cell membrane by quantifying ΔT 7 TO 22 contained in the cell membrane fraction. A screening method for the compound to be changed or a salt thereof,

(iii) 非ヒト哺乳動物の a) 血液、 b) 特定の臓器、 c) 臓器から単離した 組織もしくは細胞等を切片とした後、 免疫染色法を用いることにより、 細胞表 層での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化することにより、 細胞膜上の該蛋 白質を確認することによる、 細胞膜における OT 7 TO 22の量を変化させる 化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。 (iii) A non-human mammal's a) blood, b) a specific organ, c) tissue or cells isolated from the organ, sectioned, and then subjected to immunostaining to obtain the receptor at the cell surface Quantification of the degree of staining of body proteins changes the amount of OT7TO22 in the cell membrane by confirming the protein on the cell membrane A method for screening a compound or a salt thereof is provided.

(iv) 〇T 7 TO 22を発現する形質転換体等を切片とした後、 免疫染色法 を用いることにより、 細胞表層での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化する ことにより、 細胞膜上の該蛋白質を確認することによる、 細胞膜における OT 7T 022の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供 する。  (iv) と し た T7TO22-expressing transformants, etc., were sectioned, and the degree of staining of the receptor protein on the cell surface was quantified by using immunostaining, whereby It is intended to provide a method for screening a compound or a salt thereof that changes the amount of OT7T022 in a cell membrane by confirming the protein.

細胞膜画分に含まれる〇T 7 TO 22の定量は具体的には以下のようにして 行なう。  The quantification of ΔT 7 TO 22 contained in the cell membrane fraction is specifically performed as follows.

( i ) 正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物 （例えば、 マウス、 ラット、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブタ、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど、 より具体的には免疫不 全ラット、 マウス、 ゥサギなど） に対して、 薬剤 （例えば、 免疫調節薬など） あるいは物理的ストレス （例えば、 浸水ストレス、 電気ショック、 明喑、 低温 など） などを与え、 一定時間経過した後に、 血液、 あるいは特定の臓器 （例え ば、 脳、 肝臓、 腎臓など） 、 または臓器から単離した組織、 あるいは細胞を得 る。 得られた臓器、 組織または細胞等を、 例えば、 適当な緩衝液 （例えば、 ト リス塩酸緩衝液、 リン酸緩衝液、 へぺス緩衝液など） 等に懸濁し、 臓器、 組織 あるいは細胞を破壊し、 界面活性剤 （例えば、 トリトン X100TM、 ツイーン 20TMなど） などを用い、 さらに遠心分離や濾過、 カラム分画などの手法を用 いて細胞膜画分を得る。 (i) Normal or disease model non-human mammals (eg, mouse, rat, egret, sheep, pig, pig, cat, dog, monkey, etc., more specifically, immunocompromised rat, mouse, egret, etc.) To a drug (eg, an immunomodulator) or a physical stress (eg, immersion stress, electric shock, light, low temperature, etc.), and after a certain period of time, blood or a specific organ (eg For example, tissue or cells isolated from the brain, liver, kidney, etc.) or organs. The obtained organ, tissue or cell is suspended in, for example, an appropriate buffer (for example, Tris-HCl buffer, phosphate buffer, Hess buffer, etc.) to destroy the organ, tissue or cell Then, a cell membrane fraction is obtained by using a surfactant (eg, Triton X100 ™ , Tween 20 ™, etc.) and further using a technique such as centrifugation, filtration, or column fractionation.

細胞膜画分としては、 細胞を破砕した後、 それ自体公知の方法で得られる細 胞膜が多く含まれる画分のことをいう。 細胞の破砕方法としては、 Potter— Elvehjem型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、 ヮーリングブレンダーゃポ リトロン （Kinematica社製） による破砕、 超音波による破砕、 フレンチプレス などで加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させることによる破砕などが挙 げられる。 細胞膜の分画には、 分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠 心力による分画法が主として用いられる。 例えば、 細胞破砕液を低速 （500 〜3000 r pm) で短時間 （通常、 約 1〜10分） 遠心し、 上清をさらに高 速 （15000〜 3000 O r pm) で通常 30分〜 2時間遠心し、 得られる 沈澱を膜画分とする。 該膜画分中には、 発現した OT7T022と細胞由来の リン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含まれる。 The cell membrane fraction refers to a cell membrane-rich fraction obtained by disrupting cells and then obtained by a method known per se. Cells can be crushed by crushing the cells with a Potter-Elvehjem homogenizer, crushing with a Pelling Blender リ Polytron (Kinematica), crushing by ultrasonic waves, pressing the cells from a narrow nozzle while applying pressure with a French press, etc. Crushing by eruption is mentioned. For cell membrane fractionation, centrifugal fractionation methods such as differential centrifugation and density gradient centrifugation are mainly used. For example, the cell lysate is centrifuged at a low speed (500-3000 rpm) for a short time (typically about 1-10 minutes), and the supernatant is further spun at a higher speed (15000-3000 rpm), usually 30 minutes-2 hours. Centrifuge and use the resulting precipitate as the membrane fraction. In the membrane fraction, expressed OT7T022 and cell-derived It is rich in membrane components such as phospholipids and membrane proteins.

細胞膜画分に含まれる OT7T 022は、 例えば、 本発明の抗体を用いたサ ンドイッチ免疫測定法、 ウェスタンブロット解析などにより定量することがで さる。  OT7T022 contained in the cell membrane fraction can be quantified by, for example, a sandwich immunoassay using the antibody of the present invention, Western blot analysis, or the like.

かかるサンドィツチ免疫測定法は上記の方法と同様にして行なうことができ， ウエスタンブロットは自体公知の手段により行なうことができる。  Such a sandwich immunoassay can be performed in the same manner as described above, and the Western blot can be performed by a means known per se.

(ii) OT7T 022を発現する形質転換体を上記の方法に従い作製し、 細 胞膜画分に含まれる OT 7 TO 22を定量することができる。  (ii) A transformant expressing OT7T022 is prepared according to the above method, and OT7TO22 contained in the cell membrane fraction can be quantified.

細胞膜における OT 7T022の量を変化させる化合物またはその塩のスク リーニングは、  Screening of a compound or a salt thereof that alters the amount of OT 7T022 in the cell membrane,

(i) 正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物に対して、 薬剤あるいは物理 的ストレスなどを与える一定時間前 （30分前〜 24時間前、 好ましくは 30 分前〜 12時間前、 より好ましくは 1時間前〜 6時間前） もしくは一定時崗後 (i) A fixed time before giving a drug or physical stress to a normal or disease model non-human mammal (30 minutes to 24 hours, preferably 30 minutes to 12 hours, more preferably 1 hour Before ~ 6 hours before) or after a certain time

(30分後〜 3日後、 好ましくは 1時間後〜 2日後、 より好ましくは 1時間後 〜24時間後） 、 または薬剤あるいは物理的ストレスと同時に試験化合物を投 与し、 投与後一定時間経過後 （30分後〜 3日後、 好ましくは 1時間後〜 2日 後、 より好ましくは 1時間後〜 24時間後） 、 細胞膜における OT 7 TO 22 の量を定量することにより行なうことができ、 (30 minutes to 3 days, preferably 1 hour to 2 days, more preferably 1 hour to 24 hours) or a test compound is administered simultaneously with a drug or physical stress, and after a certain period of time after administration (After 30 minutes to 3 days, preferably after 1 hour to 2 days, more preferably after 1 hour to 24 hours), it can be carried out by quantifying the amount of OT7TO22 in the cell membrane,

(ii)形質転換体を常法に従い培養する際に試験化合物を培地中に混合させ、 —定時間培養後 （1日後〜 7日後、 好ましくは 1日後〜 3日後、 より好ましく は 2日後〜 3日後） 、 細胞膜における RFRPの量を定量することにより行な うことができる。  (ii) When culturing the transformant according to a conventional method, the test compound is mixed in a medium, and after the culturing for a fixed time (from 1 day to 7 days, preferably from 1 day to 3 days, more preferably from 2 days to 3 days) This can be done after a day) by quantifying the amount of RFRP in the cell membrane.

細胞膜画分に含まれる OT7T 022の確認は具体的には以下のようにして 行なう。  The confirmation of OT7T022 contained in the cell membrane fraction is specifically performed as follows.

(iii) 正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物 （例えば、 マウス、 ラット、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブ夕、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど、 より具体的には免疫不 全モデルラット、 マウス、 ゥサギなど） に対して、 薬剤 （例えば、 免疫調節薬 など） あるいは物理的ストレス （例えば、 浸水ストレス、 電気ショック、 明暗、 低温など） などを与え、 一定時間経過した後に、 血液、 あるいは特定の臓器 （ 例えば、 脳、 肝臓、 腎臓など） 、 または臓器から単離した組織、 あるいは細胞 を得る。 得られた臓器、 組織または細胞等を、 常法に従い組織切片とし、 本発 明の抗体を用いて免疫染色を行う。 細胞表層での該受容体蛋白質の染色度合い を定量化することにより、 細胞膜上の該蛋白質を確認することにより、 定量的 または定性的に、 細胞膜における OT7T022の量を確認することができる。 (iii) Normal or disease model non-human mammals (eg, mice, rats, egrets, sheep, sheep, bush, puppies, cats, dogs, monkeys, etc .; more specifically, immunocompromised model rats, mice, ) To a drug (for example, an immunomodulator) or physical stress (for example, immersion stress, electric shock, light and dark, low temperature, etc.), and after a certain period of time, blood or specific organ ( For example, tissues or cells isolated from the brain, liver, kidney, etc.) or organs. The obtained organ, tissue or cell is cut into a tissue section according to a conventional method, and immunostained using the antibody of the present invention. By quantifying the degree of staining of the receptor protein on the cell surface, and confirming the protein on the cell membrane, the amount of OT7T022 in the cell membrane can be quantitatively or qualitatively confirmed.

(iv) OT7T 022を発現する形質転換体等を用いて同様の手段をとるこ とにより確認することもできる。  (iv) The same can be confirmed by using a transformant expressing OT7T022 or the like and performing the same procedure.

本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物は、 細胞膜における O T 7 TO 22の量を変化させる作用を有する化合物であり、 具体的には、 （ィ ) 細胞膜における OT7T022の量を増加させることにより、 QT7T02 2を介する細胞刺激活性を増強させる化合物、 （口） 細胞膜における OT7T 022の量を減少させることにより、 該細胞刺激活性を減弱させる化合物であ る。  The compound obtained by using the screening method of the present invention is a compound having an effect of changing the amount of OT7TO22 in the cell membrane. Specifically, (a) by increasing the amount of OT7T022 in the cell membrane, A compound that enhances the cell stimulating activity mediated by QT7T022. (Mouth) A compound that reduces the cell stimulating activity by decreasing the amount of OT7T022 in the cell membrane.

該化合物の塩としては、 生理学的に許容される酸 （例、 無機酸など） や塩基 (例、 有機酸など） などとの塩が用いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸 付加塩が好ましい。 この様な塩としては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リ ン酸、 臭化水素酸、 硫酸など） との塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ 酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスルホン酸、 ベンゼンスルホン酸など） との塩な どが用いられる。  As the salt of the compound, a salt with a physiologically acceptable acid (eg, an inorganic acid, etc.) or a base (eg, an organic acid, etc.) is used, and a physiologically acceptable acid addition salt is particularly preferable. . Examples of such salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) and organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid) Succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.).

細胞膜における OT7T022の量を増加させることにより、 細胞刺激活性 を増強させる化合物またはその塩は、 例えば、 鸱グルカゴン分泌促進剤、 血糖 上昇剤、 尿生成促進剤、 記憶消去促進剤 （嫌な記憶の消去促進剤） 、 または肥 満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリ ン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インスリ ノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性、 癌などの予防 ·治療剤として使用 することができる。  Compounds or salts thereof that enhance cell stimulating activity by increasing the amount of OT7T022 in the cell membrane include, for example, 鸱 glucagon secretion enhancers, blood glucose enhancers, urine production enhancers, memory erasure enhancers (memory elimination enhancers) Or hypertrophy, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for thrombotic diseases, lipotoxicity, cancer and the like.

. 細胞膜における OT 7 TO 22の量を減少させることにより、 細胞刺激活性 を減弱させる化合物またはその塩は、 例えば、 滕グルカゴン分泌抑制剤、 血糖 低下剤、 尿生成抑制剤、 記憶学習低下抑制剤 （記憶低下抑制剤） 、 または糖尿 病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎 症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節 症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良、 記憶学習障害などの予防 · 治療剤として使用することができる。 糖尿病には、 インスリン依存型 （I型） 糖尿病、 インスリン非依存型 （II型） 糖尿病などが含まれる。 Compounds or salts thereof that reduce cell stimulating activity by reducing the amount of OT 7 TO 22 in the cell membrane include, for example, Teng glucagon secretion inhibitor, blood glucose Hypoglycemic, urine production inhibitor, memory learning inhibitor (memory hypothesis inhibitor), or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for enuresis, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion, memory learning disorder and the like. Diabetes includes insulin-dependent (type I) diabetes and non-insulin-dependent (type II) diabetes.

本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩を医薬組 成物として使用する場合、 常套手段に従つ.て製剤化することができる。 具体的 には、 上記した R F R Pを含有する予防 ·治療 ·改善剤と同様に製造すること ができる。  When a compound or a salt thereof obtained by using the screening method of the present invention is used as a pharmaceutical composition, it can be formulated according to a conventional method. Specifically, it can be produced in the same manner as the above-mentioned preventive, therapeutic and ameliorating agents containing RFRP.

得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、 ヒトゃ哺乳動物（例えば、 ラット、 マウス、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブタ、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど） に対 して投与することができる。  Because the resulting formulation is safe and low toxic, it can be administered, for example, to humans and mammals (eg, rats, mice, egrets, higgs, pigs, mice, cats, dogs, monkeys, etc.). it can.

該化合物またはその塩の投与量は、 投与対象、 対象臓器、 症状、 投与方法な どにより差異はあるが、 経口投与の場合、 一般的に例えば、 肥満患者 （体重 6 O kgとして） においては、 細胞膜における OT7 TO 22の量を増加させる 化合物またはその塩を一日につき約 0.1〜10 Omg、 好ましくは約 1. 0〜 50mg、 より好ましくは約 1. 0〜20mgである。 非経口的に投与する場 合は、 その 1回投与量は投与対象、 対象臓器、 症状、 投与方法などによっても 異なるが、 例えば、 注射剤の形では通常例えば、 肥満患者 （体重 6 O kgとし て） においては、 細胞膜における OT7T022の量を増加させる化合物また はその塩を一日につき約 0. 01〜3 Omg程度、 好ましくは約 0. 1〜20 mg程度、 より好ましくは約 0. 1〜1 Omg程度を静脈注射により投与する のが好都合である。 他の動物の場合も、 体重 60 kg当たりに換算した量を投 与することができる。  The dose of the compound or a salt thereof varies depending on the administration subject, target organ, symptom, administration method, and the like. In the case of oral administration, for example, in an obese patient (with a body weight of 60 kg), The compound or a salt thereof that increases the amount of OT7TO22 in the cell membrane is about 0.1 to 10 Omg per day, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 20 mg. In the case of parenteral administration, the single dose varies depending on the administration target, target organ, symptoms, administration method, and the like. For example, in the case of injection, usually, for example, an obese patient (weight of 6 O kg ), The compound or its salt that increases the amount of OT7T022 in the cell membrane is about 0.01 to 3 mg / day, preferably about 0.1 to 20 mg / day, more preferably about 0.1 to 20 mg / day. It is convenient to administer about 1 Omg by intravenous injection. For other animals, the equivalent dose per 60 kg body weight can be administered.

(7) 尺 ！^?または〇丁 7 T 022に対する抗体を含有してなる医薬 RFRPまたは OT7T022に対して抗体 （特に、 中和抗体） は、 RFR Pまたは〇T 7 TO 22が関与するシグナル伝達、 例えば、 OT7T022を 介する細胞刺激活性を不活性化することができる。 したがって、 RFRPまたは OT7T022に対する抗体は、 例えば、 塍グ ルカゴン分泌抑制剤、 血糖低下剤、 尿生成抑制剤、 記憶学習低下抑制剤 （記憶 低下抑制剤） 、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿 病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性 機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良、 記憶学習障害などの予防 ·治療剤として使用することができる。 糖尿病には、 インスリン依存型 （I型） 糖尿病、 インスリン非依存型 （II型） 糖尿病などが 含まれる。 (7) Shaku! Pharmaceuticals comprising antibodies to ^? Or 〇7T 022 Antibodies to RFRP or OT7T022 (especially neutralizing antibodies) are signal transductions involving RFRP or 〇T 7 TO 22 such as OT7T022 Mediated cell stimulating activity can be inactivated. Thus, antibodies to RFRP or OT7T022 may be used, for example, to inhibit glucocagon secretion, hypoglycemia, urine production inhibitors, memory learning and depression (memory loss inhibitors), or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, Diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturnal enuresis, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion, It can be used as a preventive and therapeutic agent for memory and learning disorders. Diabetes includes insulin-dependent (type I) diabetes and non-insulin-dependent (type II) diabetes.

上記予防 ·治療 ·改善剤は、 前記した R F R Pを含有する医薬と同様にして 製造し、 使用することができる。  The prophylactic, therapeutic and ameliorating agents can be produced and used in the same manner as the above-mentioned pharmaceuticals containing RFRP.

(8) アンチセンス DNAを含有してなる医薬  (8) Drug containing antisense DNA

RFRPをコードする DNAに対するアンチセンス DNAまたは OT7T0 22をコードする DNAに対するアンチセンス DNA (以下、 アンチセンス D NAと略記する） は、 例えば、 塍グルカゴン分泌抑制剤、 血糖低下剤、 尿生成 抑制剤、 記憶学習低下抑制剤 （記憶低下抑制剤） 、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜 症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動 脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良、 記憶学習障害などの予防 ·治療剤として使用 することができる。 糖尿病には、 インスリン依存型 （I型） 糖尿病、 インスリ ン非依存型 （II型） 糖尿病などが含まれる。  Antisense DNA against DNA encoding RFRP or antisense DNA against DNA encoding OT7T022 (hereinafter abbreviated as antisense DNA) is, for example, a glucagon secretion inhibitor, a hypoglycemic agent, a urine production inhibitor, Memory learning and learning depression inhibitor (memory loss inhibitor) or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturnal enuresis, hyperlipidemia, sexual function It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for disorders, skin diseases, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic diseases, dyspepsia, memory and learning disorders. Diabetes includes insulin-dependent (type I) diabetes and non-insulin-dependent (type II) diabetes.

例えば、 該アンチセンス DNAを用いる場合、 該アンチセンス DNAを単独 あるいはレトロウイルスベクター、 アデノウイルスベクター、 アデノウイルス ァソシェ一テツドウィルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、 常套 手段に従って実施することができる。 該アンチセンス DNAは、 そのままで、 あるいは摂取促進のために補助剤などの生理学的に認められる担体とともに製 剤化し、 遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与 できる。  For example, when the antisense DNA is used, the antisense DNA may be used alone or after being inserted into a suitable vector such as a retrovirus vector, an adenovirus vector, an adenovirus associated virus vector, and the like, followed by a conventional method. it can. The antisense DNA can be administered as it is or in the form of a preparation together with a physiologically acceptable carrier such as an adjuvant for promoting uptake, and then administered using a gene gun or a catheter such as a hydrogel catheter.

. さらに、 該アンチセンス DN Aは、 組織や細胞における RFRPまたは OT 7T022をコ一ドする DNAの存在やその発現状況を調べるための診断用ォ リゴヌクレオチドプローブとして使用することもできる。 Furthermore, the antisense DNA can be used as a diagnostic tool for examining the presence of RFRP or OT7T022-encoding DNA in tissues and cells and the expression status thereof. It can also be used as a oligonucleotide probe.

(9) OT7T 022ノックアウト動物  (9) OT7T 022 knockout animal

COT7T022遺伝子発現不活性哺乳動物 E S細胞〕  COT7T022 gene expression inactive mammalian ES cells)

OT7T 022遺伝子が不活性化された哺乳動物 E S細胞とは、 哺乳動物 E S細胞が有する OT7T022遺伝子に人為的に変異を加えることにより、 遺 伝子の発現能を抑制するか、 もしくは該遺伝子がコードしている OT7T02 2の活性を実質的に喪失させることにより、 遺伝子が実質的に〇T7 TO 22 の発現能を有さない不活性化された （以下、 本発明のノックアウト遺伝子と称 することがある） 哺乳動物の ES細胞をいう。  Mammalian ES cells in which the OT7T022 gene has been inactivated are artificially mutated OT7T022 genes in mammalian ES cells to suppress the gene expression ability or to encode the gene. By substantially eliminating the activity of OT7T022, the gene was substantially inactivated without the ability to express ΔT7TO22 (hereinafter referred to as the knockout gene of the present invention). A) Mammalian ES cells.

OT7 TO 22遺伝子としては、 前記した OT 7 TO 22をコードする DN Aが用いられるが、 具体的には、 マウス OT7T022遺伝子としては、 配列 番号： 27で表わされるアミノ酸配列からなるマウス OT 7 TO 22の部分蛋 白質をコードする、 配列番号： 28で表わされる塩基配列からなる遺伝子 （ゲ ノム DNA) などが用いられる。  As the OT7 TO22 gene, DNA encoding the above-mentioned OT7 TO22 is used. Specifically, as the mouse OT7T022 gene, mouse OT7 TO22 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 is used. A gene (genomic DNA) comprising the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 28, which codes for the partial protein of SEQ ID NO: 28, is used.

ラット OT7T022遺伝子としては、 配列番号： 1 1で表わされるァミノ 酸配列からなる OT 7 TO 22をコードする、 配列番号： 12で表わされる塩 基配列を含有する遺伝子などが用いられる。  As the rat OT7T022 gene, a gene encoding OT7TO22 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 and containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 12 is used.

本明細書中、 ES細胞の材料とする哺乳動物としては、 例えば、 ヒト、 ゥシ、 ブタ、 ヒッジ、 ャギ、 ゥサギ、 ィヌ、 ネコ、 モルモット、 ハムスター、 マウス、 ラットなどが用いられる。  In the present specification, as a mammal used as a material for the ES cells, for example, humans, porcupines, pigs, sheep, sheep, goats, puppies, dogs, cats, guinea pigs, hamsters, mice, rats, and the like are used.

また、 本明細書中、 非ヒト動物としては、 OT 7 TO 22遺伝子を有するヒ ト以外の動物ならば、 いかなる動物でもよいが、 非ヒト哺乳動物が好ましい。 非ヒト哺乳動物としては、 例えば、 ゥシ、 ブ夕、 ヒッジ、 ャギ、 ゥサギ、 ィヌ、 ネコ、 モルモット、 ハムスター、 マウス、 ラットなどが用いられる。 非ヒト哺 乳動物のなかでも、 病態動物モデル系の作製の面から個体発生および生物サイ クルが比較的短く、 また繁殖が容易なゲッ歯動物、 とりわけマウス （例えば純 系として、 C 57BLZ6系統， DBA 2系統など、 交雑系として、 B6C3 F 1系統， BDF 1系統， B6D2F 1系統， BALBZc系統， I CR系統 など （なかでも好ましくは、 純系として、 C 57 BLZ6系統など、 交雑系と して、 BDF 1系統または I CR系統など） ） またはラット （例えば、 Wi s t a r系統， SD系統など） などが特に好ましい。 In the present specification, the non-human animal may be any animal other than a human having the OT7TO22 gene, but a non-human mammal is preferred. As the non-human mammal, for example, red sea lions, bushes, higgins, goats, blue herons, dogs, cats, guinea pigs, hamsters, mice, rats, and the like are used. Among non-human mammals, rodents that have relatively short ontogenesis and biological cycles in terms of preparation of disease animal models and are easy to breed, especially mice (for example, C57BLZ6 strains as pure strains, B6C3 F1 system, BDF1 system, B6D2F1 system, BALBZc system, ICR system, etc. (Preferably, pure system is C57BLZ6 system, etc.) In particular, a BDF line or an ICR line)) or a rat (eg, a Wistar line, an SD line, etc.) is particularly preferable.

〇T7 TO 22遺伝子に人為的に変異を加える方法としては、 例えば、 遺伝 子工学的手法により該遺伝子配列の一部又は全部の削除、 もしくは他遺伝子の 挿入または置換があげられる。 これらの変異により、 例えば、 コドンの読み取 り枠をずらすか、 プロモーターあるいはェキソンの機能を破壊することにより 本発明のノックアウト遺伝子を作製することができる。  方法 Methods of artificially mutating the T7TO22 gene include, for example, deletion of part or all of the gene sequence by genetic engineering, or insertion or substitution of another gene. With these mutations, the knockout gene of the present invention can be prepared, for example, by shifting the codon reading frame or disrupting the function of the promoter or exon.

OT 7 TO 22遺伝子が不活性化された哺乳動物 （好ましくは、 非ヒト哺乳 動物） ES細胞 （以下、 OT7T022遺伝子不活性化 ES細胞またはノック アウト ES細胞と略記する） の具体例としては、 例えば、 薬剤耐性遺伝子 （例 えば、 ネオマイシン耐性遺伝子、 ハイグロマイシン耐性遺伝子またはゼォシン 耐性遺伝子など、 好ましくは、 ネオマイシン耐性遺伝子など） 、 あるいはレポ 一ター遺伝子 （例えば、 l a c Z (大腸菌 )3 _ガラクトシダ一ゼ遺伝子） 、 c a t (クロラムフエニコールァセチルトランスフェラーゼ遺伝子） 、 GUS ( /3—ダルクロニダーゼ遺伝子） 、 ルシフェラーゼ遺伝子、 ェクオリン遺伝子、 タウマリン遺伝子、 GFP (Green Fluorescent Protein) 遺伝子など、 好まし くは、 l a c など） 等を挿入することにより OT 7 T 022遺伝子のェキソ ンの機能を破壊するか、 あるいはェキソン間のィントロン部分に遺伝子の転写 を終結させる DNA配列 （例えば、 polyA付加シグナルなど） を挿入し、 完全 な mRNAを合成できなくすることによって、 結果的に遺伝子を破壊するよう に構築した DNA配列を有する DNAベクター （以下、 ターゲテイングべクタ 一と略記する） を作製する。 レポ一夕一遺伝子を挿入してェキソンの機能を破 壊する場合、 該レポ一夕一遺伝子は、 OT 7 T022プロモーターの制御下で 発現するように挿入することが好ましい。  Specific examples of ES cells in which the OT7TO22 gene has been inactivated (preferably, non-human mammals) ES cells (hereinafter abbreviated as OT7T022 gene-inactivated ES cells or knockout ES cells) include: A drug resistance gene (eg, a neomycin resistance gene, a hygromycin resistance gene or a zeocin resistance gene, preferably a neomycin resistance gene, etc.), or a reporter gene (eg, a lacZ (Escherichia coli) 3-galactosidase gene) ), Cat (chloramphenicol acetyltransferase gene), GUS (/ 3-dalcuronidase gene), luciferase gene, equorin gene, taurmarin gene, GFP (Green Fluorescent Protein) gene, etc., preferably lac etc.) OT7T022 gene exon Gene disruption by disrupting function or by inserting a DNA sequence that terminates gene transcription (for example, a polyA addition signal) into the intron between exons, resulting in inability to synthesize complete mRNA A DNA vector (hereinafter abbreviated as "targeting vector 1") having a DNA sequence constructed in such a manner as to produce a DNA sequence is prepared. When the repo overnight gene is inserted to disrupt the function of exon, it is preferable to insert the repo overnight gene so that it is expressed under the control of the OT7T022 promoter.

上記 「薬剤耐性遺伝子」 とは、 抗生物質などの薬剤耐性に関与する遺伝子を 示し、 導入される遺伝子が細胞において発現したか否かを選抜するマーカーと して利用される。  The “drug resistance gene” refers to a gene involved in drug resistance of antibiotics and the like, and is used as a marker for selecting whether or not the introduced gene has been expressed in cells.

. また、 上記 「レポーター遺伝子」 とは、 遺伝子発現の指標になる遺伝子群の ことを示し、 通常、 発光反応や呈色反応を触媒する酵素の構造遺伝子が利用さ れることが多く、 （i ) 遺伝的背景がないもの、 （ii) 遺伝子発現を定量的に 行える高感度の方法があるもの、 （iii) 形質転換細胞への影響が少ないもの、 (iv) 発現部位の局在性が示されるものなどが好ましく用いられる （植物細胞 工学、 第 2巻、 第 721頁、 1990) 。 また、 上記の 「薬剤耐性遺伝子」 な ども同じ目的で使用されるが、 「レポーター遺伝子」 は、 単に導入される遺伝 子が細胞において発現したかどうかだけではなく、 どの組織でいつ発現したか を調べることができ、 しかも定量的に発現量を正確に調べることができるもの である。 The term “reporter gene” refers to a group of genes that serve as indicators of gene expression, and usually uses the structural gene of an enzyme that catalyzes a luminescence reaction or a color reaction. (Ii) those with no genetic background, (ii) those with a sensitive method to quantify gene expression, (iii) those with little effect on transformed cells, and (iv) expression. Those showing the localization of the site are preferably used (Plant Cell Engineering, Vol. 2, p. 721, 1990). In addition, although the above-mentioned “drug resistance gene” and the like are used for the same purpose, the “reporter gene” not only indicates whether the gene to be introduced is expressed in a cell but also in which tissue and when. It can be examined, and the expression level can be accurately and quantitatively examined.

さらに、 夕一ゲティングベクタ一を、 例えば、 相同組換え法により該動物の 染色体に導入し、 得られた ES細胞について OT7T022遺伝子上あるいは その近傍の D N A配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーション解析あ るいはタ一ゲティングベクター上の DNA配列とターゲティングベクタ一作製 に使用した OT7T022遺伝子以外の近傍領域の DNA配列をプライマーと した PC R法により解析し、 本発明のノックアウト ES細胞を選別することに より得ることができる。  Furthermore, the evening vector is introduced into the chromosome of the animal by, for example, homologous recombination, and the resulting ES cells are subjected to Southern hybridization analysis or probe using the DNA sequence on or near the OT7T022 gene as a probe. The DNA sequence on the targeting vector and the DNA sequence of the neighboring region other than the OT7T022 gene used for the preparation of the targeting vector are analyzed by PCR using primers to obtain the knockout ES cells of the present invention. Can be.

上記の夕一ゲティングベクタ一としては、 例えば、 大腸菌由来のプラスミド (例、 pBR 322， pBR 325, pUC 12, pUC 13など） 、 枯草菌 由来のプラスミド （例、 pUB 1 10, pTB 5, pC 194など） 、 酵母由 来のプラスミド （例、 pSH19， p SHI 5など） 、 λファージなどのバク テリオファージ、 モロニ一白血病ウィルスなどのレトロウイルス、 ワクシニア ウィルスまたはアデノウイルスベクタ一、 バキュロウィルス、 ゥシ乳頭腫ウイ ルス、 ヘルぺスウィルス群からのウィルス、 またはェプスタイン ·バ一 ·ウイ ルスなどの動物ウィルスなどが用いられる。  Examples of the above-mentioned targeting vectors include plasmids derived from Escherichia coli (eg, pBR322, pBR325, pUC12, pUC13, etc.) and plasmids derived from Bacillus subtilis (eg, pUB110, pTB5, pC194). ), Yeast-derived plasmids (eg, pSH19, pSHI5, etc.), bacteriophages such as λ phage, retroviruses such as Moroni leukemia virus, vaccinia virus or adenovirus vectors, baculovirus, papilla Tumor viruses, viruses from the herpesvirus group, or animal viruses such as Epstein-Barr-virus are used.

また、 相同組換え法等により ΟΤ7Τ 022遺伝子を不活性化させる元の Ε S細胞としては、 例えば、 前述のような既に樹立されたものを用いてもよく、 また公知の Evansと Kaufmanの方法に準じて新しく樹立したものでもよい。 例え ば、 マウスの ES細胞の場合、 現在、 一般的には 129系統の ES細胞が使用 されているが、 免疫学的背景がはっきりしていないので、 これに代わる純系で 免疫学的に遺伝的背景が明らかな E S細胞を取得するなどの目的で例えば、 C 57 BLZ6系統マウスや DBAZ2系統との交雑種 BDF 1系統マウス （C 57 BLZ6系統と DBAZ2系統との F 1) を用いて樹立したものなども良 好に用いうる。 BDF 1系統マウスは、 採卵数が多く、 かつ、 卵が操作上にで あるという利点に加えて、 C 57 BLZ6系統マウスを遺伝的背景に持つので、 これを用いて得られた ES細胞は病態モデルマウスを作出したとき、 C 57B LZ6系統マウスと戻し交配することでその遺伝的背景を C 57BLZ6系統 に戻すことが可能である点で有利に用い得る。 Further, as the original 細胞 S cells for inactivating the ΟΤ7Τ022 gene by the homologous recombination method or the like, for example, those already established as described above may be used, or the known Evans and Kaufman method may be used. A newly established one may be used. For example, in the case of mouse ES cells, currently, 129 ES cells are generally used, but since the immunological background is not clear, an alternative pure immunologically For example, to obtain ES cells with clear background, for example, C A mouse established using a 57 BLZ6 strain mouse or a BDF 1 strain hybrid mouse with the DBAZ2 strain (F1 of the C57BLZ6 strain and the DBAZ2 strain) can also be used favorably. The BDF 1 strain mouse has the advantage that the number of eggs collected is large and the eggs are operational, and the C57BLZ6 strain mouse has a genetic background. When a model mouse is created, it can be used advantageously because it is possible to return the genetic background to the C57BLZ6 strain by backcrossing with a C57B LZ6 strain mouse.

また、 ES細胞を樹立する場合、 一般には受精後 3.5日目の胚盤胞を使用す るが、 これ以外に 8細胞期胚 (受精後 2. 5日目頃の 8細胞期胚が好ましい）を 採卵し胚盤胞まで培養して用いることにより効率よく多数の初期胚を取得する ことができる。  When establishing ES cells, blastocysts 3.5 days after fertilization are generally used, but 8-cell stage embryos (preferably 8 cell stage embryos 2.5 days after fertilization) By collecting eggs and culturing to blastocysts, a large number of early embryos can be efficiently obtained.

また第二次セレクションは、 G—バンディング法などを用いた核型分析等に より行うことができる。 得られる ES細胞の染色体数は正常数の 100%が望 ましいが、 樹立の際の物理的操作等の関係上困難な場合は、 ES細胞の遺伝子 をノックアウトした後、 正常細胞 （例えばマウスでは染色体数が 2 n = 40で ある細胞） に再びクローニングすることが望ましい。  The second selection can be performed by karyotype analysis using G-banding method or the like. It is desirable that the number of chromosomes in the obtained ES cells is 100% of the normal number. However, if it is difficult due to physical manipulations at the time of establishment, after knocking out the gene of the ES cells, normal cells (for example, mouse It is desirable to clone again into cells with 2 n = 40 chromosomes.

このようにして得られた ES細胞株は、 通常その増殖性は大変良いが、 個体 発生できる再生能を失いやすいので、 注意深く継代培養することが必要である。 例えば、 STO繊維芽細胞のような適当なフィーダ一細胞上で L I F (1〜1 000 OU/ml) 存在下に炭酸ガス培養器内 （好ましくは、 5%炭酸ガス、 95 %空気または 5%酸素、 5%炭酸ガス、 90%空気） で約 37^で培養するな どの方法で培養し、 継代時には、 例えば、 トリプシン ZED T A溶液 （通 0. 001〜0.5%トリプシン 0. l〜5mM EDTA、 好ましくは約 0. 1 % トリプシン/ ^lmM EDTA) 処理により単細胞化し、 新たに用意したフィー ダー細胞上に播種する方法などがとられる。 このような継代は、 通常 1—3日 毎に行なうが、 この際に細胞の観察を行い、 形態的に異常な細胞が見受けられ た場合は、 その培養細胞は放棄することが望まれる。  The ES cell line obtained in this way usually has very good growth potential, but it must be carefully subcultured because it tends to lose its regenerative ability to develop into individuals. For example, on a suitable feeder cell, such as STO fibroblasts, in a carbon dioxide incubator (preferably 5% carbon dioxide, 95% air or 5% oxygen) in the presence of LIF (1-1 000 OU / ml) , 5% CO 2, 90% air) at about 37 ^, and at the time of subculture, for example, trypsin ZEDTA solution (typically 0.001-0.5% trypsin 0.1-5 mM EDTA, Preferably, a method is employed in which cells are made into single cells by treatment with about 0.1% trypsin / ^ lmM EDTA) and seeded on freshly prepared feeder cells. Such subculture is usually performed every 1 to 3 days. At this time, it is desirable to observe the cells, and if morphologically abnormal cells are found, discard the cultured cells.

. ES細胞は、 適当な条件により、 高密度に至るまで単層培養するか、 または 細胞集塊を形成するまで浮遊培養することにより、 頭頂筋、 内臓筋、 心筋など の種々のタイプの細胞に分化させることが可能であり 〔M. J. Evans及び M. H. Kaufman, ネイチヤー （Nature) 第 292巻、 154頁、 1981年； G. R. Martin プロ シ一ディングス ·ォブ ·ナショナル ·アカデミー ·ォブ ·サイエンス ·ユーェ スェ一 （Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.) 第 78巻、 7634頁、 1981年； T. C. Doetschman ら、 ジャーナル'ォブ ·ェンブリオ口ジー 'アンド 'ェクスぺリメ ンタル ·モルフォロジ一、 第 87巻、 27頁、 1985年〕 、 本発明の ES細胞を分化 させて得られる OT 7 TO 22遺伝子発現不全細胞は、 in vitroにおける OT 7T022の細胞生物学的検討において有用である。 ES cells can be cultured in monolayer to high density or in suspension culture to form cell clumps, depending on the appropriate conditions, for example, parietal muscle, visceral muscle, myocardium, etc. [MJ Evans and MH Kaufman, Nature, 292, 154, 1981; GR Martin Proceding of National Institute of Technology. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 78, pp. 7634, 1981; TC Doetschman et al., Journals 'Ob Embrio Gösig' and 'Exeperimental Morphology 1'. 87, 27, 1985], and the OT7TO22 gene-deficient cells obtained by differentiating the ES cells of the present invention are useful in in vitro cell biological studies of OT7T022.

また、 ES細胞を保存する場合には、 適当な凍結用培地 （例えば、 10%DM SO、 10%牛胎児血清を含むダルベッコ変法イーグル培地 （DMEM) などを 用いて、 約— 80 以下で凍結保存する。  When storing ES cells, use an appropriate freezing medium (eg, Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) containing 10% DMSO and 10% fetal bovine serum) and freeze at about -80 or less. save.

本発明の〇T 7Τ022遺伝子発現不全非ヒト動物 （以下、 遺伝子発現不全 非ヒト動物と称す場合がある） とは、 例えば、 前記の ΟΤ7Τ022遺伝子が 不活性化された哺乳動物 ES細胞由来の細胞を用いて遺伝子工学的に作出され たものであり、 例えば、 生殖細胞および体細胞に胚形成初期に不活性化 ΟΤ 7 Τ 022遺伝子配列を導入された非ヒト動物である。  The non-human animal deficient in 〇T7〇022 gene expression of the present invention (hereinafter sometimes referred to as a non-human animal deficient in gene expression) may be, for example, a cell derived from a mammalian ES cell in which the ΟΤ7Τ022 gene is inactivated. It is a non-human animal in which germline and somatic cells have been introduced with the inactivated ΟΤ7Τ022 gene sequence in the early stage of embryogenesis.

該非ヒト動物としては、 前記と同様のものが用いられる。  As the non-human animal, the same one as described above is used.

OT7T022遺伝子をノックアウトさせるには、 前記のターゲティングべ クタ一を非ヒト動物 ES細胞または非ヒト動物卵細胞に公知の方法 （例えば、 エレクト口ポレーシヨン法、 マイクロインジェクション法、 リン酸カルシウム 法、 リポフエクシヨン法、 凝集法、 パーティクルガン法、 DEAE—デキスト ラン法など） によって導入し （好ましい導入法としては、 ES細胞に導入する 場合にはエレクトロボレ一シヨン法、 卵細胞に導入する場合にはマイクロイン ジェクシヨン法などがあげられる） 、 夕一ゲティングベクタ一の不活性化され た OT7T022遺伝子配列を相同組換えにより、 非ヒト動物 ES細胞または 非ヒト動物卵細胞の染色体上の OT7T 022遺伝子と入れ換えることにより 行うことができる。  To knock out the OT7T022 gene, a method known in the art can be used to apply the targeting vector to a non-human animal ES cell or non-human animal egg cell (e.g., electoral poration, microinjection, calcium phosphate, lipofection, agglutination, Introduced by particle gun method, DEAE-Dextran method, etc. (Preferred methods of introduction include the electroinjection method when introduced into ES cells, and the microinjection method when introduced into egg cells) This can be achieved by homologous recombination of the inactivated OT7T022 gene sequence of the targeting vector with the OT7T022 gene on the chromosome of a non-human animal ES cell or non-human animal egg cell.

. OT7T 022遺伝子がノックアウトされた細胞は、 OT7T022遺伝子 上またはその近傍の D N A配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーショ ン解析またはターゲティングベクタ一上の DN A配列と、 夕ーゲティングべク ターに使用したマウス由来の OT 7 TO 22遺伝子以外の近傍領域の DN A配 列とをプライマーとした PC R法による解析で判定することができる。 Cells in which the OT7T022 gene was knocked out were subjected to Southern hybridization using a DNA sequence on or near the OT7T022 gene as a probe. DNA analysis on the targeting vector and the DNA sequence in the neighboring region other than the mouse-derived OT7TO22 gene used in the targeting vector and PCR analysis using primers can do.

非ヒト動物 ES細胞を用いた場合は、 相同組換えにより、 OT7T022遺 伝子が不活性化された細胞株をクローニングし、 その細胞を胚形成の初期の適 当な時期、 例えば、 8細胞期の非ヒト動物胚または胚盤胞に注入し （注入法） 、 または OT7T022遺伝子が不活性化された ES細胞塊を 2個の 8細胞期胚 ではさみ込む （集合キメラ法） ことにより作製したキメラ胚を偽妊娠させた該 非ヒト動物の子宮に移植する。  When non-human animal ES cells are used, a cell line in which the OT7T022 gene has been inactivated by homologous recombination is cloned, and the cells are used at an appropriate time in the early stage of embryogenesis, for example, in the 8-cell stage. Chimera prepared by injecting into non-human animal embryos or blastocysts (injection method), or sandwiching the OT7T022 gene-inactivated ES cell mass between two 8-cell stage embryos (assembly chimera method) The embryo is implanted into the uterus of the pseudopregnant non-human animal.

作出された動物は正常な OT7T 022遺伝子座をもつ細胞と人為的に変異 した OT7T022遺伝子座をもつ細胞との両者から構成されるキメラ動物で ある。  The animals produced are chimeric animals composed of both cells with the normal OT7T022 locus and cells with the artificially mutated OT7T022 locus.

該キメラ動物の生殖細胞の一部が変異した OT 7 TO 22遺伝子座をもつ場 合、 このようなキメラ個体と正常個体を交配することにより得られた個体群よ り、 全ての組織が人為的に変異を加えた OT 7T022遺伝子座をもつ細胞で 構成された個体を、 例えば、 コートカラーの判定等により選別することにより 得られる。 このようにして得られた個体は、 通常、 OT 7 TO 22ヘテロ発現 不全個体であり、 OT 7 TO 22ヘテロ発現不全個体同志を交配し、 それらの 産仔から OT7T 022ホモ発現不全個体を得ることができる。  When a part of the germ cells of the chimeric animal has a mutated OT7TO22 locus, all tissues are artificially obtained from the population obtained by crossing such a chimeric individual with a normal individual. It can be obtained by selecting individuals composed of cells having the OT7T022 gene locus obtained by adding a mutation to, for example, by judging coat color or the like. The individuals obtained in this manner are usually OT7TO22 heterozygous expression-deficient individuals, and OT7T22 heterozygous expression-deficient individuals are crossed to obtain OT7T022 homo-expression-insensitive individuals from their offspring. Can be.

卵細胞を使用する場合は、 例えば、 卵細胞核内にマイクロインジェクション 法で遺伝子溶液を注入することによりターゲティングベクターを染色体内に導 入したトランスジエニック非ヒト動物を得ることができ、 これらのトランスジ エニック非ヒト動物を比較することにより、 相同組換えにより〇T 7 TO 22 遺伝子座に変異のあるものを選択することにより得られる。  When an egg cell is used, for example, a transgenic non-human animal having a targeting vector introduced into a chromosome can be obtained by injecting a gene solution into the nucleus of an egg cell by a microinjection method. It can be obtained by comparing human animals and selecting those having a mutation in the ΔT 7 TO 22 locus by homologous recombination.

OT7T022遺伝子発現不全非ヒト動物は、 該動物の mRNA量を公知の 方法を用いて測定して間接的にその発現量を比較することにより、 正常動物と 区別することが可能である。  A non-human animal deficient in OT7T022 gene expression can be distinguished from a normal animal by measuring the mRNA level of the animal using a known method and indirectly comparing the expression level.

. このようにして OT7T022遺伝子がノックアウトされている個体は、 交 配により得られた動物個体も該遺伝子がノックアウトされていることを確認し て通常の飼育環境で飼育継代を行なうことができる。 . If the OT7T022 gene was knocked out in this way, it was confirmed that the animal obtained by the cross also had the gene knocked out. Breeding in a normal breeding environment. .

さらに、 生殖系列の取得および保持についても常法に従って行うことができ る。 即ち、 該不活化遺伝子配列の保有する雌雄の動物を交配することにより、 該不活化遺伝子配列を相同染色体の両方に持つホモザィゴート動物を取得する ことができる。 得られたホモザィゴート動物は、 母親動物に対して、 正常個体 1， ホモザィゴート複数になるような状態で飼育することにより効率的に得る ことができる。 ヘテロザィゴ一ト動物の雌雄を交配することにより、 該不活化 遺伝子配列を有するホモザィゴー卜およびへテロザィゴート動物を繁殖継代す ることができる。 このようにして得られた該不活化遺伝子配列を有する動物の 子孫も本発明の OT7T022遺伝子発現不全非ヒト動物に含まれる。  In addition, germline acquisition and retention can be performed according to standard methods. That is, by mating male and female animals having the inactivated gene sequence, a homozygous animal having the inactivated gene sequence on both homologous chromosomes can be obtained. The obtained homozygous animal can be efficiently obtained by rearing the mother animal in such a manner that one normal individual and a plurality of homozygous animals are obtained. By mating male and female heterozygous animals, homozygous and heterozygous animals having the inactivated gene sequence can be bred and subcultured. The progeny of the animal having the inactivated gene sequence thus obtained is also included in the OT7T022 gene expression-deficient non-human animal of the present invention.

このように OT7T022遺伝子が不活性化された哺乳動物 ES細胞は、 O T7T022遺伝子発現不全非ヒト動物を作出する上で、 非常に有用である。 また、 OT 7 T 022遺伝子発現不全非ヒト動物、 該動物に対する薬剤誘発あ るいはストレス負荷によって生じる病態モデル動物、 OT7T022遺伝子発 現不全非ヒト動物と他の病態モデル動物との交配によって生じるより良い病態 モデル動物、 OT 7 T 022遺伝子発現不全非ヒト動物と他の病態モデル動物 との交配によって生じる病態モデル動物に対する薬剤誘発あるいはストレス負 荷によって生じる病態モデル動物および OT 7 TO 22遺伝子発現不全非ヒト 動物と他の病態モデル動物を用いた骨髄移植動物、 もしくはそれらの組織また はそれらに由来する細胞は、 OT 7 TO 22の欠損に起因する疾病、 例えば、 OT7T022により誘導され得る種々の生物活性の欠失に基づく、 OT7T 022の生物活性の不活性化に起因する疾病 （例えば、 肥満、 高脂血症、 2型 糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜 症、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インスリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性、 癌など） のより良いモデルとなり得るので、 これらの疾病の原因究明及び治療 法の検討に有用である。 ここで、 他の病態モデル動物としては、 例えば、 血液 細胞側のみの遺伝子発現の欠損あるいは上昇に限局させた骨髄移植を用いたモ デルマウスも挙げられる [Linton, M. F. , et al.， Science 267: 1034-1037 (1995) ] 。 骨髄移植マウスは遺伝子機能の変化が限局されることで、 より適し た病態モデル動物となる可能性を秘めている。 例えば、 上記された OT7T0 22遺伝子発現不全非ヒト動物から得られた病態モデル動物をドナー動物とし て、 その骨髄を採取し、 あらかじめ放射線照射で骨髄を破壊した他のレシピエ ント動物に移植したマウス、 あるいは、 他の病態モデル動物をドナ一動物とし て、 その骨髄を採取し、 あらかじめ放射線照射で骨髄を破壊した OT7T02 2遺伝子発現不全非ヒト動物から得られた病態モデル動物をレシピエント動物 として移植した骨髄移植マウスなども含まれる。 Mammalian ES cells in which the OT7T022 gene has been inactivated in this way are extremely useful for creating a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression. In addition, a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression, a pathological model animal caused by drug induction or stress load on the animal, and a better model produced by crossing a non-human animal lacking OT7T022 gene expression with another pathological model animal Disease model animals, non-human OT7T022 gene expression-deficient non-human animals, and disease-state model animals caused by drug-induced or stress-loading of disease-state model animals caused by mating with other disease-state model animals, and OT7TO22 gene-deficient non-human genes Bone marrow transplanted animals using animals and other disease state model animals, or their tissues or cells derived therefrom can be used for diseases caused by OT7TO22 deficiency, such as various biological activities that can be induced by OT7T022. Diseases resulting from inactivation of the biological activity of OT7T 022, based on the deletion (eg, obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, Glycemia, hypertension, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, It can be a better model for lipotoxicity, cancer, etc., and is useful for investigating the causes of these diseases and studying treatments. Here, as another disease model animal, for example, a model mouse using bone marrow transplantation limited to deficiency or elevation of gene expression only on the blood cell side can be mentioned [Linton, MF, et al., Science 267: 1034-1037 (1995)]. Bone marrow transplanted mice have the potential to become more suitable disease models because of the limited changes in gene function. For example, as a donor animal, a disease model animal obtained from the non-human animal deficient in OT7T022 gene expression described above is used as a donor animal, and its bone marrow is collected and transplanted into another recipient animal whose bone marrow has been destroyed by irradiation in advance. Alternatively, a bone marrow was collected from another pathological model animal as a donor animal, and a pathological model animal obtained from a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression in which bone marrow was previously destroyed by irradiation was transplanted as a recipient animal. Bone marrow transplanted mice are also included.

このように、 本発明の OT7T 022遺伝子発現不全非ヒト動物、 該動物に 対する薬剤誘発あるいはストレス負荷によって生じる病態モデル動物、 OT7 TO 22遺伝子発現不全非ヒト動物と他の病態モデル動物との交配によって生 じる病態モデル動物、 OT7T022遺伝子発現不全非ヒト動物と他の病態モ デル動物との交配によって生じる病態モデル動物に対する薬剤誘発あるいはス トレス負荷によって生じる病態モデル動物、 OT7T022遺伝子発現不全非 ヒト動物から得られた病態モデル動物と他の病態モデル動物を用いて骨髄移植 して得られた病態モデル動物、 もしくはそれらの組織またはそれらに由来する 細胞を、該疾病の予防 ·治療 ·改善薬のスクリ一二ングに用いることができる。 ここで、 上記組織やそれに由来する細胞の例としては、 肝臓や腎臓などのホモ ジネートを用いて特定の活性を測定する、 あるいは、 腹腔マクロファージを用 いて特定産物の活性や産生量を測定することでスクリ一二ングに用いることが できる。  As described above, the non-human animal deficient in expression of the OT7T022 gene of the present invention, a disease model animal caused by drug induction or stress load on the animal, and a cross between a non-human animal lacking the OT7TO22 gene expression and another disease model animal Disease model animal that occurs, OT7T022 gene expression deficient non-human animal, disease model animal caused by crossing of other disease model animal with drug-induced or stress-induced stress model animal, OT7T022 gene expression non-human animal The pathological model animals obtained by bone marrow transplantation using the obtained pathological model animals and other pathological model animals, or their tissues or cells derived therefrom, are screened as a preventive, therapeutic or ameliorating drug for the disease. Can be used for ling. Here, examples of the above-mentioned tissues and cells derived therefrom include measuring the specific activity using a homogenate such as liver or kidney, or measuring the activity or production amount of a specific product using peritoneal macrophages. Can be used for screening.

[本発明のスクリーニング方法 A]  [Screening method A of the present invention]

本発明のスクリーニング方法において用いられる OT7T 022遺伝子発現 不全非ヒト動物、 該動物の薬剤誘発あるいはストレス負荷によって生じる病態 モデル動物、 OT 7 T 022遺伝子発現不全非ヒト動物と他の病態モデル動物 との交配によって生じる病態モデル動物、 OT7T022遺伝子発現不全非ヒ 卜動物と他の病態モデル動物との交配によって生じる病態モデル動物に対する 薬剤誘発あるいはストレス負荷によって生じる病態モデル動物、 OT7T02 2遺伝子発現不全非ヒト動物から得られた病態モデル動物と他の病態モデル動 物を用いて骨髄移植して得られた病態モデル動物、 もしくはそれらの組織また はそれらに由来する細胞としては、 前記と同様のものが挙げられる。 Non-human animal deficient in OT7T022 gene expression used in the screening method of the present invention, a pathological model animal caused by drug induction or stress load of the animal, a cross between a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression and another pathological model animal A disease model animal caused by OT7T022 gene expression, a non-human animal lacking OT7T022 gene expression, a disease model animal caused by drug induction or stress loading on a disease model animal caused by mating with another disease model animal, or a non-human animal lacking OT7T022 gene expression Animal model and other disease model Examples of the disease state model animal obtained by bone marrow transplantation using the product, or their tissues or cells derived therefrom include the same ones as described above.

試験化合物としては、 例えば、 ペプチド、 蛋白質、 非ペプチド性化合物、 合 成化合物、 発酵生産物、 細胞抽出液、 植物抽出液、 動物組織抽出液、 血漿など が挙げられ、 これら化合物は新規な化合物であってもよいし、 公知の化合物で あってもよい。  Test compounds include, for example, peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, and plasma.These compounds are novel compounds. Or a known compound.

試験化合物は塩を形成していてもよく、 試験化合物の塩としては、 生理学的 に許容される酸 （例、 無機酸など） や塩基 （例、 有機酸など） などとの塩が用 いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。 この様な塩とし ては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水素酸、 硫酸など） との 塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイ ン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスル ホン酸、 ベンゼンスルホン酸など） との塩などが用いられる。  The test compound may form a salt, and a salt with a physiologically acceptable acid (eg, an inorganic acid) or a base (eg, an organic acid) is used as the salt of the test compound. Particularly preferred are physiologically acceptable acid addition salts. Examples of such salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) and organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, etc.). Acid, succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.).

具体的には、 本発明の O T 7 T 0 2 2遺伝子発現不全非ヒト動物、 該動物の 薬剤誘発あるいはストレス負荷によって生じる病態モデル動物、 O T 7 T 0 2 2遺伝子発現不全非ヒト動物と他の病態モデル動物との交配によって生じる病 態モデル動物、 O T 7 T 0 2 2遺伝子発現不全非ヒト動物と他の病態モデル動 物との交配によつて生じる病態モデル動物に対する薬剤誘発あるいはストレス 負荷によって生じる病態モデル動物および〇T 7 T O 2 2遺伝子発現不全非ヒ ト動物から得られた病態モデル動物と他の病態モデル動物を用いて骨髄移植し て得られた病態モデル動物 （以下、 O T 7 T 0 2 2遺伝子発現不全非ヒト動物 等と称する場合がある） 、 もしくはそれらの組織またはそれらに由来する細胞 を、試験化合物で処理し、 無処理の対照動物と比較し、 該動物の各器官、 組織、 細胞、 疾病の症状等の変化を指標として試験化合物の予防 ·治療 ·改善効果を 試験することができる。  Specifically, the OT7T022 gene expression-deficient non-human animal of the present invention, a disease model animal caused by drug induction or stress load of the animal, a OT7T022 gene expression-deficient non-human animal and other A disease model animal resulting from crossing with a disease model animal, which is caused by drug induction or stress load on a disease model animal caused by crossing a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression with another disease model animal A pathological model animal obtained from bone marrow transplantation using a pathological model animal, a non-human animal deficient in ΔT7TO22 gene expression, and another pathological model animal (hereinafter referred to as OT7T0) Or a non-human animal deficient in gene expression), or their tissues or cells derived therefrom, are treated with a test compound and compared with untreated control animals. The preventive, therapeutic, and ameliorating effects of the test compound can be tested using the changes in animal organs, tissues, cells, disease symptoms, and the like as indices.

試験動物 （O T 7 T 0 2 2遺伝子発現不全非ヒト動物等） を試験化合物で処 理する方法としては、 例えば、 経口投与、 静脈注射などが用いられ、 試験動物 の症状、 試験化合物の性質などにあわせて適宜選択することができる。 また、 試験化合物の投与量は、 投与方法、 試験化合物の性質などにあわせて適宜選択 することができる。 Methods for treating test animals (such as OT7T022 gene expression-deficient non-human animals) with test compounds include, for example, oral administration and intravenous injection. Can be selected appropriately according to The dose of the test compound is appropriately selected according to the administration method and the properties of the test compound. can do.

例えば、 肥満の予防 ·治療薬をスクリーニングする場合、 本発明の O T 7 T 0 2 2遺伝子発現不全非ヒト動物等にコレステロール負荷処置を行い、 コレス テロール負荷処置前または処置後に試験化合物を投与し、 該動物の血中コレス テロール値および体重変化などを経時的に測定することによりスクリーニング することができる。 また、 本発明の O T 7 T O 2 2遺伝子発現不全非ヒト動物 等に S T Zあるいはァロキサンなどの薬剤投与を行い、 糖負荷処置前または処 置後に試験化合物を投与し、 該動物の血糖値および体重変化などを経時的に測 定することによりスクリーニングすることができる。  For example, when screening for a prophylactic / therapeutic agent for obesity, a cholesterol-loading treatment is performed on a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression of the present invention, and a test compound is administered before or after cholesterol-loading treatment. The animal can be screened by measuring the blood cholesterol level, body weight change, and the like over time. In addition, a drug such as STZ or aloxane is administered to a non-human animal or the like in which the OT7TO22 gene expression of the present invention is deficient, and a test compound is administered before or after the glucose load treatment, and the blood glucose level and body weight change of the animal are administered. Screening can be performed by measuring such factors over time.

例えば、 該スクリーニング方法において、 試験動物に試験化合物を投与した 場合、 該試験動物の体重が約 1 0 %以上、 好ましくは約 3 0 %以上、 より好ま しくは約 5 0 %以上減少した場合、 該試験化合物を肥満に対して治療，予防効 果を有する物質として選択することができる。  For example, in the screening method, when a test compound is administered to a test animal, when the body weight of the test animal decreases by about 10% or more, preferably about 30% or more, more preferably about 50% or more, The test compound can be selected as a substance having a therapeutic or preventive effect on obesity.

本発明のスクリーニング方法を用いて得られる予防 ·治療薬は、 上記した試 験化合物から選ばれた化合物を含有するものであり、 O T 7 T 0 2 2欠損によ つて引き起こされる疾患の予防 ·治療 ·改善効果を有するので、 O T 7 T 0 2 2の欠損によって引き起こされる疾病に対する安全で低毒性な治療 ·予防薬な どの医薬として有用である。 また、 該化合物から誘導される化合物も同様に用 いることができる。  The preventive / therapeutic agent obtained by using the screening method of the present invention contains a compound selected from the test compounds described above, and is used for the prevention / treatment of a disease caused by OT7T022 deficiency. · It has an improving effect, so it is useful as a safe and low-toxic treatment for diseases caused by OT7T022 deficiency, and as a medicament such as a preventive drug. Further, a compound derived from the compound can be used in the same manner.

該スクリーニング方法で得られた化合物は塩を形成していてもよく、 該化合 物の塩としては、 例えば、 無機塩基との塩、 有機塩基との塩、 無機酸との塩、 有機酸との塩、 塩基性または酸性アミノ酸との塩などの薬学的に許容し得る塩 などがあげられる。  The compound obtained by the screening method may form a salt. Examples of the salt of the compound include a salt with an inorganic base, a salt with an organic base, a salt with an inorganic acid, and a salt with an organic acid. And pharmaceutically acceptable salts such as salts and salts with basic or acidic amino acids.

無機塩基との塩の好適な例としては、 例えばナトリウム塩、 カリウム塩など のアル力リ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、 並びにアルミニウム塩、 アンモニゥム塩などがあげられる。  Preferable examples of the salt with an inorganic base include, for example, alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt, alkaline earth metal salts such as calcium salt and magnesium salt, and aluminum salt and ammonium salt.

有機塩基との塩の好適な例としては、 例えばトリメチルァミン、 トリェチル ァミン、 ピリジン、 ピコリン、 2， 6—ルチジン、 エタノールァミン、 ジエタ ノールァミン、 トリエタノールァミン、 シクロへキシルァミン、 ジシクロへキ シルァミン、 N, N ' —ジベンジルエチレンジァミンなどとの塩あげられる。 無機酸との塩の好適な例としては、 例えば塩酸、 臭化水素酸、 硫酸、 リン酸 などとの塩があげられる。 Preferred examples of salts with organic bases include, for example, trimethylamine, triethylamine, pyridine, picoline, 2,6-lutidine, ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, cyclohexylamine, dicyclohexylamine. Salts with silamine, N, N'-dibenzylethylenediamine and the like. Preferable examples of salts with inorganic acids include salts with hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, and the like.

有機酸との塩の好適な例としては、 例えばギ酸、 酢酸、 プロピオン酸、 フマ ル酸、 シユウ酸、 酒石酸、 マレイン酸、 クェン酸、 コハク酸、 リンゴ酸、 メタ ンスルホン酸、 ベンゼンスルホン酸、 安息香酸などとの塩があげられる。 塩基性アミノ酸との塩の好適な例としては、 例えばアルギニン、 リジン、 ォ ルチニンなどとの塩があげられ、 酸性アミノ酸との好適な例としては、 例えば ァスパラギン酸、 グルタミン酸などとの塩があげられる。  Preferred examples of the salt with an organic acid include, for example, formic acid, acetic acid, propionic acid, fumaric acid, oxalic acid, tartaric acid, maleic acid, citric acid, succinic acid, malic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, and benzoic acid And salts with acids and the like. Preferred examples of the salt with a basic amino acid include salts with, for example, arginine, lysine, and oltinine. Preferred examples of the salt with an acidic amino acid include, for example, salts with aspartic acid, glutamic acid, and the like. .

本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩を上述の 治療 ·予防薬として使用する場合、 常套手段に従って実施することができ、 例 えば、 必要に応じて糖衣を施した錠剤、 カプセル剤、 エリキシル剤、 マイクロ カプセル剤などとして経口的に、 あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容 し得る液との無菌性溶液、 または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用 できる。 例えば、 該化合物またはその塩を薬学的に認められる担体、 香味剤、 賦形剤、 べヒクル、 防腐剤、 安定剤、 結合剤などとともに一般に認められた製 薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができ る。 これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られる ようにするものである。  When the compound or its salt obtained by using the screening method of the present invention is used as the above-mentioned therapeutic or prophylactic agent, it can be carried out in a conventional manner, for example, sugar-coated tablets and capsules as necessary. It can be used orally as an elixir, microcapsule or the like, or parenterally in the form of an injection such as a sterile solution with water or another pharmaceutically acceptable liquid, or a suspension. For example, the compound or a salt thereof may be combined with a pharmaceutically acceptable carrier, flavoring agent, excipient, vehicle, preservative, stabilizer, binder, and the like in a unit dosage form required for generally accepted drug practice. It can be manufactured by mixing. The amount of the active ingredient in these preparations is such that an appropriate dose in the specified range can be obtained.

錠剤、 カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、 例えば、 ゼ ラチン、 コーンスターチ、 トラガントゴム、 アラビアゴムのような結合剤、 結 晶性セルロースのような賦形剤、 コーンスターチ、 ゼラチン、 アルギン酸など のような膨化剤、 ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、 ショ糖、 乳糖ま たはサッカリンのような甘味剤、 ペパーミント、 ァカモノ油またはチェリーの ような香味剤などが用いられる。 調剤単位形態がカプセルである場合には、 前 記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。 注射 のための無菌組成物は注射用水のようなべヒクル中の活性物質、 胡麻油、 椰子 油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤 実施に従って処方することができる。 注射用の水溶液としては、 例えば、 生理食塩水、 ブドウ糖やその他の補助薬 を含む等張液 （例えば、 D—ソルビトール、 D—マンニトール、 塩化ナトリウ ムなど） などが挙げられ、 適当な溶解補助剤、 例えば、 アルコール （例えば、 エタノールなど） 、 ポリアルコール （例えば、 プロピレングリコール、 ポリエ チレングリコールなど） 、 非イオン性界面活性剤 （例えば、 ポリソルべ一ト 8 0™、 HCO— 50など） などと併用してもよい。 油性液としては、 例えば、 ゴ マ油、 大豆油などが挙げられ、 溶解補助剤として安息香酸ベンジル、 ベンジル アルコールなどと併用してもよい。 また、 :緩衝剤 （例えば、 リン酸塩緩衝液、 酢酸ナトリウム緩衝液など） 、 無痛化剤 （例えば、 塩化ベンザルコニゥム、 塩 酸プロ力インなど） 、 安定剤 （例えば、 ヒト血清アルブミン、 ポリエチレング リコールなど） 、 保存剤 （例えば、 ベンジルアルコール、 フエノールなど） 、 酸化防止剤などと配合してもよい。 調製された注射液は通常、 適当なアンプル に充填される。 Additives that can be incorporated into tablets, capsules, etc. And a lubricating agent such as magnesium stearate, a sweetening agent such as sucrose, lactose or saccharin, and a flavoring agent such as peppermint, cocoa oil or cherry. When the unit dosage form is a capsule, the above-mentioned type of material may further contain a liquid carrier such as an oil or fat. Sterile compositions for injection can be formulated according to normal pharmaceutical practice such as dissolving or suspending the active substance in vehicles such as water for injection, and naturally occurring vegetable oils such as sesame oil, coconut oil and the like. Aqueous solutions for injection include, for example, physiological saline, isotonic solutions containing glucose and other adjuvants (eg, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride, etc.). , For example, alcohol (eg, ethanol, etc.), polyalcohol (eg, propylene glycol, polyethylene glycol, etc.), non-ionic surfactant (eg, Polysorbate 80 ™, HCO-50, etc.) May be. Examples of the oily liquid include sesame oil and soybean oil, and may be used in combination with a solubilizing agent such as benzyl benzoate or benzyl alcohol. Also, a buffer (eg, phosphate buffer, sodium acetate buffer, etc.), a soothing agent (eg, benzalkonium chloride, proprochlorinate, etc.), a stabilizer (eg, human serum albumin, polyethylene glycol) Etc.), preservatives (eg, benzyl alcohol, phenol, etc.), antioxidants and the like. The prepared injection solution is usually filled in a suitable ampoule.

このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、 例えば、 ヒトまた は温血動物 （例えば、 マウス、 ラット、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブ夕、 ゥシ、 ゥマ、 トリ、 ネコ、 ィヌ、 サル、 チンパンジーなど） に対して投与することができる。 該化合物またはその塩の投与量は、 症状などにより差異はあるが、 経口投与 の場合、 一般的に成人 （体重 60 kgとして） の肥満患者においては、 一日に つき約 0.1〜 100mg、 好ましくは約 1. 0〜50mg、 より好ましくは約 1. 0〜2 Omgである。 非経口的に投与する場合は、 その 1回投与量は投与 対象、 対象臓器、 症状、 投与方法などによっても異なるが、 例えば、 注射剤の 形では通常成人 （体重 6 O kgとして） の肥満患者においては、 一日につき約 0. 01〜3 Omg程度、 好ましくは約 0. 1〜2 Omg程度、 より好ましく は約 0. 1〜1 Omg程度を静脈注射により投与するのが好都合である。 他の 動物の場合も、 体重 60 kg当たりに換算した量を投与することができる。  The preparations obtained in this way are safe and low toxic and can be used, for example, in humans or in warm-blooded animals (eg, mice, rats, puppies, higgs, bushus, puppies, pumas, birds, cats, dogs). , Monkeys, chimpanzees, etc.). The dose of the compound or a salt thereof varies depending on symptoms and the like. However, in the case of oral administration, generally in an adult (assuming a body weight of 60 kg) obese patient, about 0.1 to 100 mg / day, preferably It is about 1.0-50 mg, more preferably about 1.0-2 Omg. When administered parenterally, the single dose varies depending on the subject of administration, target organ, symptoms, administration method, etc. For example, in the case of parenteral injections, usually obese patients (body weight 6 O kg) In this case, it is convenient to administer about 0.01 to 3 Omg per day, preferably about 0.1 to 2 Omg, more preferably about 0.1 to 1 Omg by intravenous injection. In the case of other animals, the dose can be administered in terms of weight per 60 kg.

[本発明のスクリーニング方法 B]  [Screening method B of the present invention]

本発明は、 本発明の〇T 7Τ022遺伝子発現不全非ヒト動物に、 試験化合 物を投与し、 レポーター遺伝子の発現を検出することを特徴とする本発明の遺 伝子に対するプロモーターの活性を促進または阻害する物質のスクリーニング 方法を提供する。 The present invention relates to a method for administering a test compound to a non-human animal deficient in expression of the 〇T7Τ022 gene of the present invention, and detecting the expression of a reporter gene, which enhances the activity of a promoter for the gene of the present invention. Screening for inhibitors Provide a way.

上記スクリーニング方法において、 本発明の OT7T 022遺伝子発現不全 非ヒト動物としては、 前記した本発明の OT7T022遺伝子発現不全非ヒト 動物の中でも、 OT7T022遺伝子がレポ一ター遺伝子を導入することによ り不活性化され、 該レポーター遺伝子が OT 7 T 022遺伝子に対するプロモ —ターの制御下で発現しうるものが用いられる。  In the above-mentioned screening method, the non-human animal deficient in expression of the OT7T022 gene of the present invention may be the non-human animal deficient in expression of the OT7T022 gene of the present invention, wherein the OT7T022 gene is inactivated by introducing a reporter gene. A reporter gene which can be expressed under the control of a promoter for the OT7T022 gene is used.

試験化合物としては、 前記と同様のものがあげられる。  Examples of the test compound include the same compounds as described above.

レポーター遺伝子としては、 前記と同様のものが用いられ、 ）3—ガラクトシ ダーゼ遺伝子 （ 1 a c Z) 、 可溶性アルカリフォスファターゼ遺伝子またはル シフェラーゼ遺伝子などが好適である。  As the reporter gene, the same ones as described above are used, and (3) 3-galactosidase gene (1 ac Z), soluble alkaline phosphatase gene, luciferase gene and the like are preferable.

OT7T 022遺伝子をレポ一夕一遺伝子で置換された本発明の OT 7 TO 22遺伝子発現不全非ヒト動物では、 レポ一夕一遺伝子が OT 7 T 022遺伝 子に対するプロモータ一の支配下に存在するので、 レポ一夕一遺伝子がコ一ド する物質の発現をトレースすることにより、 プロモーターの活性を検出するこ とができる。  In the OT7TO22 gene-deficient non-human animal of the present invention in which the OT7T022 gene has been replaced with the repo-1 gene, the repo-1 gene is under the control of the promoter for the OT7T022 gene. By tracing the expression of a substance encoded by the repo overnight gene, the activity of the promoter can be detected.

例えば、 OT7T 022遺伝子領域の一部を大腸菌由来の /3_ガラクトシダ —ゼ遺伝子 （ l a c Z) で置換している場合、 本来、 OT 7 TO 22遺伝子の 発現する組織で、 OT7T 022の代わりに) 3—ガラクトシダーゼが発現する。 従って、 例えば、 5—ブロモ—4—クロ口— 3—インドリル—) 3_ガラクトビ ラノシド （X— g a l) のような /3—ガラクトシダ一ゼの基質となる試薬を用 いて染色することにより、 簡便に OT7T022の動物生体内における発現状 態を観察することができる。 具体的には、 OT 7 TO 22遺伝子欠損マウスま たはその組織切片をダルタルアルデヒドなどで固定し、 リン酸緩衝生理食塩液 (PBS) で洗浄後、 X— g a 1を含む染色液で、 室温または 37 付近で、 約 30分ないし 1時間反応させた後、 組織標本を ImM EDTA/PBS溶液 で洗浄することによって、 ）3—ガラクトシダーゼ反応を停止させ、 呈色を観察 すればよい。 また、 常法に従い、 1 a c Zをコードする mRNAを検出しても よい。  For example, if a part of the OT7T022 gene region is replaced with the / 3_galactosidase-lactide gene (lacZ) derived from Escherichia coli, it should be used instead of OT7T022 in the tissue that expresses the OT7TO22 gene. 3-galactosidase is expressed. Therefore, for example, by staining with a reagent that serves as a substrate for / 3-galactosidase, such as 5-bromo-4-chloro-3, -indolyl, 3_galacto-ylanoside (X-gal), In addition, the expression state of OT7T022 in the animal body can be observed. Specifically, the OT7TO22 gene-deficient mouse or its tissue section is fixed with dartalaldehyde or the like, washed with phosphate buffered saline (PBS), and stained with X-ga1. After reacting at room temperature or around 37 for about 30 minutes to 1 hour, the tissue sample may be washed with ImM EDTA / PBS solution to stop the 3) -galactosidase reaction and the color may be observed. Further, mRNA encoding 1acZ may be detected according to a conventional method.

例えば、 該スクリーニング方法において、 試験動物に試験化合物を投与した 場合、 レポーター蛋白質の発現が約 10%以上、 好ましくは約 30%以上、 よ り好ましくは約 50%以上増加した場合、 該試験化合物を OT7T 022遺伝 子に対するプロモーター活性を促進する物質として選択でき、 試験動物に試験 化合物を投与した場合、 レポーター蛋白質の発現が約 10%以上、 好ましくは 約 30%以上、 より好ましくは約 50%以上減少した場合、 該試験化合物を〇 T7T022遺伝子に対するプロモーター活性を阻害する物質として選択でき る。 For example, in the screening method, a test compound is administered to a test animal. In this case, when the expression of the reporter protein is increased by about 10% or more, preferably about 30% or more, more preferably about 50% or more, the test compound can be selected as a substance that promotes the promoter activity for the OT7T022 gene, When the test compound is administered to the test animal, if the expression of the reporter protein is reduced by about 10% or more, preferably about 30% or more, more preferably about 50% or more, the test compound inhibits the promoter activity of the T7T022 gene. Can be selected.

上記スクリーニング方法を用いて得られる物質は、 上記した試験化合物から 選ばれた物質であり、 OT7T 022遺伝子に対するプロモータ一活性を促進 または阻害する物質である。  The substance obtained by using the above-mentioned screening method is a substance selected from the above-mentioned test compounds, and is a substance that promotes or inhibits the promoter one activity for the OT7T022 gene.

該スクリーニング方法で得られた物質は塩を形成していてもよく、 該物質の 塩としては、 生理学的に許容される酸 （例、 無機酸など） や塩基 （例、 有機酸 など） などとの塩が用いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ま しい。 この様な塩としては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水 素酸、 硫酸など） との塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン 酸、 フマル酸、 マレイン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスルホン酸、 ベンゼンスルホン酸など） との塩などが用いら れる。  The substance obtained by the screening method may form a salt. Examples of the salt of the substance include physiologically acceptable acids (eg, inorganic acids) and bases (eg, organic acids). Are used, and physiologically acceptable acid addition salts are particularly preferable. Examples of such salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) and organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid) Succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.).

OT 7 T 022遺伝子に対するプロモーター活性を促進する物質は、 OT7 TO 22の発現を促進し、 〇T 7 TO 22の機能を促進することができるので、 例えば、 滕グルカゴン分泌促進剤、 血糖上昇剤、 尿生成促進剤、 記憶消去促進 剤 （嫌な記憶の消去促進剤） 、 または肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎 縮、 インスリンアレルギー、 インスリノ一マ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒 性、 癌などの予防 ·治療剤として使用することができる。  A substance that promotes the promoter activity of the OT7T022 gene can promote the expression of OT7TO22 and can promote the function of 〇T7TO22. Urine generation promoter, memory elimination promoter (disgusting memory elimination promoter), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity, cancer, etc.

一方、 〇T 7 T 022遺伝子に対するプロモーター活性を阻害する物質は、 ΟΤ 7 Τ 022の発現を阻害し、 ΟΤ7Τ022の機能を阻害することができ るので、 例えば、 塍グルカゴン分泌抑制剤、 血糖低下剤、 尿生成抑制剤、 記憶 学習低下抑制剤 （記憶低下抑制剤） 、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜 尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓 性疾患、 消化不良、 記憶学習障害などの予防 ·治療剤として使用することがで きる。 糖尿病には、 インスリン依存型 （I型） 糖尿病、 インスリン非依存型 （ II型） 糖尿病などが含まれる。 On the other hand, substances that inhibit the promoter activity of the 〇T7T022 gene can inhibit the expression of 0227Τ022 and inhibit the function of ΟΤ7Τ022, such as 塍 glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, etc. , Urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory decline inhibitor), or diabetes, glucose intolerance, ketosis, Acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, atherosclerosis, thrombotic disease, It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for dyspepsia, memory and learning disorders. Diabetes includes insulin-dependent (type I) diabetes and non-insulin-dependent (type II) diabetes.

さらに、 上記スクリーニングで得られた物質から誘導される物質も同様に用 いることができる。  Further, a substance derived from the substance obtained by the above screening can be used in the same manner.

該スクリーニング方法で得られた物質を含有する医薬は、 前記したスクリー ニング方法 Aで得られた化合物を含有する医薬と同様にして製造することがで きる。  The drug containing the substance obtained by the screening method can be produced in the same manner as the drug containing the compound obtained by the above-mentioned screening method A.

このようにして得られる製剤は、 安全で低毒性であるので、 例えば、 ヒトま たは哺乳動物 （例えば、 ラット、 マウス、 モルモット、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブ夕、 ゥシ、 ゥマ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど） に対して投与することができる。  The preparations obtained in this way are safe and have low toxicity, for example, in humans or mammals (for example, rats, mice, guinea pigs, egrets, sheep, sheep, bush, horses, horses, cats, animals And monkeys).

該物質の投与量は、 対象疾患、 投与対象、 投与ルートなどにより差異はある が、 例えば、 肥満の治療目的で OT 7 TO 22遺伝子に対するプロモータ一活 性を促進する物質を経口投与する場合、 一般的に成人患者 （体重 6 O kgとし て） においては、 一日につき該物質を約 0.1〜100mg、 好ましくは約 1. 0〜50mg、 より好ましくは約 1. 0〜20mg投与する。 非経口的に投与 する場合は、 該物質の 1回投与量は投与対象、 対象疾患などによっても異なる が、 例えば、 肥満の治療目的で OT 7 TO 22遺伝子に対するプロモータ一活 性を促進する物質を注射剤の形で通常成人患者 （体重 6 O kgとして） に投与 する場合、 一日につき該物質を約 0. 01〜30mg程度、 好ましくは約 0. l〜20mg程度、 より好ましくは約 0. 1〜1 Omg程度を静脈注射により 投与するのが好都合である。 他の動物の場合も、 体重 60 kg当たりに換算し た量を投与 "ることができる。  The dose of the substance varies depending on the target disease, the administration subject, the administration route, and the like.For example, when a substance that promotes the activity of the promoter for the OT7TO22 gene for the purpose of treating obesity is orally administered, Typically, in adult patients (assuming a body weight of 60 kg), the substance is administered at about 0.1 to 100 mg, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 20 mg per day. In the case of parenteral administration, the single dose of the substance may vary depending on the administration target, target disease, etc.For example, a substance that promotes the activity of the promoter for the OT7TO22 gene for the purpose of treating obesity may be used. When administered to an adult patient (with a body weight of 6 O kg) usually in the form of an injection, the substance is administered in an amount of about 0.01 to 30 mg, preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably about 0.1 to 30 mg per day. It is convenient to administer about 1 to 1 Omg by intravenous injection. In the case of other animals, the dose can be administered in terms of 60 kg of body weight.

このように、 本発明の OT 7 TO 22遺伝子発現不全非ヒト動物は、 OT7 TO 22遺伝子に対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物また はその塩をスクリーニングする上で極めて有用であり、 OT7T022遺伝子 発現不全に起因する各種疾患の原因究明または予防 ·治療 ·改善薬の開発に大 きく貢献することができる。 As described above, the OT7TO22 gene-deficient non-human animal of the present invention is extremely useful for screening for a compound or a salt thereof that promotes or inhibits the activity of the promoter for the OT7TO22 gene, and that the OT7T022 gene expression Investigating or preventing the causes of various diseases caused by insufficiency. I can make a contribution.

また、 OT7T022遺伝子のプロモー夕一領域を含有する DNAを使って、 その下流に種々の蛋白質をコードする遺伝子を連結し、 これを動物の卵細胞に 注入していわゆるトランスジエニック動物 （遺伝子移入動物） を作成すれば、 特異的にそのペプチドを合成させ、 その生体での作用を検討することも可能と なる。 さらに上記プロモーター部分に適当なレポーター遺伝子を結合させ、 こ れが発現するような細胞株を樹立すれば、 OT7T 022そのものの体内での 産生能力を特異的に促進もしくは抑制する作用を持つ低分子化合物の探索系と して使用できる。  In addition, using a DNA containing the promoter region of the OT7T022 gene, genes encoding various proteins are ligated downstream of the DNA and injected into egg cells of an animal to produce a so-called transgenic animal (transgenic animal). If it is prepared, it will be possible to specifically synthesize the peptide and examine its action in the living body. Furthermore, by linking an appropriate reporter gene to the above promoter and establishing a cell line in which this is expressed, a low-molecular-weight compound that specifically promotes or suppresses the production ability of OT7T022 itself in the body Can be used as a search system.

(10) 各種薬物の作用メカニズムの解明方法  (10) Elucidation of the mechanism of action of various drugs

OT 7 TO 22を用いることによって、 各種薬物が OT 7 TO 22を介して 薬理効果を発揮しているか否かを確認することができる。  By using OT7TO22, it is possible to confirm whether or not various drugs exert a pharmacological effect via OT7TO22.

すなわち、 本発明は、  That is, the present invention

(1) 滕グルカゴン分泌促進薬、 血糖上昇薬、 尿生成促進薬、 記憶消去促進 薬 （嫌な記憶の消去促進薬） 、 または肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎 縮、 インスリンアレルギー、 インスリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒 性、 癌などの予防 ·治療薬、 滕グルカゴン分泌抑制薬、 血糖低下薬、 尿生成抑 制薬、 記憶学習低下抑制薬 （記憶低下抑制薬） 、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜 症、 頻尿、 夜尿症、 髙脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動 脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良、 記憶学習障害などの予防 ·治療薬が OT 7 T 022に結合することを確認する方法、  (1) Teng glucagon secretagogue, hyperglycemic drug, urine production enhancer, memory erasure enhancer (an aversive memory erasure enhancer), or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, Prevention and treatment of edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxin, cancer, etc., Teng glucagon secretion inhibitor, blood sugar Hypoglycemic, urinary depressant, memory-learning depressant (memory-depressant), or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, Prevention and treatment of enuresis, hypolipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, dyspepsia, memory learning disorder, etc. are combined with OT7T022 How to make sure that

(2) OT7T022を用いることを特徴とする、 滕グルカゴン分泌促進薬、 血糖上昇薬、 尿生成促進薬、 記憶消去促進薬 （嫌な記憶の消去促進薬） 、 また は肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 イン スリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 イン スリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性、 癌などの予防 ·治療薬が OT 7T 022に対するァゴニストであることを確認する方法、 (3) OT7T022を用いることを特徴とする、滕グルカゴン分泌抑制薬、 血糖低下薬、 尿生成抑制薬、 記憶学習低下抑制薬 （記憶低下抑制薬） 、 または 糖尿病、 耐糖能障害、 ケト一シス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病 性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、.性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良、 記憶学習障害などの予 防 ·治療薬が OT7T 022に対するアン夕ゴニストであることを確認する方 法、 (2) Use of OT7T022, Teng-glucagon secretagogue, hyperglycemic drug, urine production enhancer, memory erasure enhancer (an aversive memory elimination enhancer), or obesity, hyperlipidemia, Prevention of type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic diseases, lipotoxicity, cancer, etc. How to confirm that the therapeutic is an agonist against OT 7T 022, (3) Use of OT7T022, Teng-glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory decrease inhibitor), or diabetes, glucose intolerance, ketolysis, Acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, digestion Prevention of poor, memory and learning disorders, etc.

(4) 各薬を OT 7 TO 22に接触させた場合における、 各薬と OT 7 TO 22との結合量を測定することを特徴とする上記 （1) 〜 （3) 記載のスクリ 一二ング方法を提供する。  (4) The screening according to the above (1) to (3), wherein the amount of binding between each drug and OT7TO22 when each drug is brought into contact with OT7TO22 is measured. Provide a method.

この確認方法は、 RFRPと OT7T022との結合性を変化させる化合物 のスクリーニング方法において、 試験化合物に代えて、 上記の薬物を使用する ことによって実施することができる。  This confirmation method can be performed by using the above-mentioned drug instead of a test compound in a method for screening a compound that changes the binding property between RFRP and OT7T022.

また、 本発明の確認方法用キットは： RFRPと OT7T 022との結合性 を変化させる化合物のスクリーニング用キットにおいて、 試験化合物に代えて、 上記の薬物を含有するものである。  The kit for the confirmation method of the present invention is a kit for screening a compound that alters the binding between RFRP and OT7T022, which contains the above drug in place of the test compound.

このように、 本発明の確認方法を用いることによって、 市販または開発途中 の各種薬物が OT 7 TO 22を介して薬理効果を発揮していることを確認する ことができる。  As described above, by using the confirmation method of the present invention, it is possible to confirm that various drugs on the market or under development exert a pharmacological effect via OT7TO22.

本明細書および図面において、 塩基やアミノ酸などを略号で表示する場合、 I UP AC— I UB Commission on Biochemical Nomenclatureによる略号あ るいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、 その例を下記する。 ま たアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、 特に明示しなければ L体を示 すものとする。  In the present specification and drawings, bases, amino acids, and the like are indicated by abbreviations based on the abbreviations by the IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature or commonly used abbreviations in the art, and examples thereof are described below. When amino acids may have optical isomers, L-form shall be indicated unless otherwise specified.

DNA デォキシリポ核酸  DNA Deoxylipo nucleic acid

cDNA 相補的デォキシリポ核酸  cDNA complementary deoxylipo nucleic acid

A アデニン  A adenine

T チミン  T thymine

G グァニン c G Guanin c

I  I

R アデニン （A) またはグァニン （G)  R adenine (A) or guanine (G)

Y チミン （T) またはシトシン （C)  Y thymine (T) or cytosine (C)

M アデニン （A) またはシトシン （C)  M adenine (A) or cytosine (C)

K グァニン （G) またはチミン （T)  K guanine (G) or thymine (T)

S グァニン （G) またはシトシン （C)  S guanine (G) or cytosine (C)

w アデニン （A) またはチミン （T)  w Adenine (A) or thymine (T)

B グァニン （G) 、 グァニン （G) またはチミン （T) D アデニン （A) 、 グァニン （G) またはチミン （T) V アデニン （A) 、 グァニン （G) またはシトシン （C) N アデニン （A) 、 グァニン （G) 、 シトシン （C) もしくはチミン （T) または不明もしくは他の塩基 B guanine (G), guanine (G) or thymine (T) D adenine (A), guanine (G) or thymine (T) V adenine (A), guanine (G) or cytosine (C) N adenine (A) , Guanine (G), cytosine (C) or thymine (T) or unknown or other base

RNA リポ核酸 RNA liponucleic acid

mRNA メッセンジャーリポ核酸 mRNA messenger liponucleic acid

d ATP デォキシアデノシン三リン酸 d ATP Deoxyadenosine triphosphate

dTTP デォキシチミジン三リン酸 dTTP Deoxythymidine triphosphate

dGTP デォキシグアノシン三リン酸 dGTP Deoxyguanosine triphosphate

dCTP デォキシシチジン三リン酸 dCTP Deoxycytidine triphosphate

ATP アデノシン三リン酸  ATP adenosine triphosphate

EDTA エチレンジァミン四酢酸  EDTA ethylenediaminetetraacetic acid

SDS ドデシル硫酸ナトリウム  SDS sodium dodecyl sulfate

BHA ベンズヒドリルァミン  BHA Benzhydrylamine

pMBHA P—メチルベンズヒドリルァミン pMBHA P—Methylbenzhydrylamine

T o s p—トルエンスルフォニル  T os p—toluenesulfonyl

B z 1  B z 1

Bom ベンジルォキシメチル  Bom benzyloxymethyl

B o c t一ブチルォキシカルポニル  B oc t-butyloxycarponyl

DCM ジクロロメタン HOB t 1ーヒドロキシベンズトリアゾール DCM dichloromethane HOB t 1-hydroxybenztriazole

DCC N, N' - Sド TFA トリフルォロ酢酸  DCC N, N'-S de TFA trifluoroacetic acid

D I EA ジィソプロピルェチルァミン  D I EA disopropylethylamine

G 1 y グリシン  G 1 y Glycine

A 1 aまたは A ァラニン  A 1 a or A alanine

Va 1または V バリン  Va 1 or V valine

L e uまたは L  L e u or L

I 1 eまたは I  I 1 e or I

S e rまたは S セリン  S e r or S serine

Th rまたは T スレオニン  Th r or T threonine

Cy sまたは C システィン  Cy s or C cysteine

Me tまたは M メチォニン  Me t or M methionine

G 1 uまたは E グルタミン酸  G 1 u or E glutamic acid

八3 または0 ァスパラギン酸  83 or 0 aspartic acid

Ly sまたは K リジン  Lys or K lysine

A r gまたは R アルギニン  A r g or R Arginine

H i sまたは H ヒスチジン  H is or H histidine

Ph eまたは F フエ二ルァラニン  Ph e or F phenylalanine

Ty rまたは Y チロシン  Ty r or Y tyrosine

T r pまたは W トリブトファン  T r p or W Tribute fan

P r oまたは P プロリン  Pro or P proline

A s nまたは N ァスパラギン  Asn or Nasparagine

G 1 nまたは Q グルタミン  G 1 n or Q glutamine

p G 1 u ピログルタミン酸  p G 1 u pyroglutamic acid

本願明細書の配列表の配列番号は、 以下の配列を示す。  The sequence numbers in the sequence listing in the present specification indicate the following sequences.

〔配列番号： 1〕 [SEQ ID NO: 1]

RFRPのアミノ酸配列 （ヒト型） を示す。  2 shows the amino acid sequence (human type) of RFRP.

〔配列番号： 2〕 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列を有する RFRPをコードする DN Aの塩基配列を示す。 [SEQ ID NO: 2] This shows the base sequence of DNA encoding RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.

〔配列番号： 3〕  [SEQ ID NO: 3]

RFRPのアミノ酸配列 （ヒト型） を示す。  2 shows the amino acid sequence (human type) of RFRP.

〔配列番号： 4〕  [SEQ ID NO: 4]

配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列を有する RFRPをコードする DN Aの塩基配列を示す。  This shows the nucleotide sequence of DNA encoding RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3.

〔配列番号： 5〕  [SEQ ID NO: 5]

RFRPのアミノ酸配列 （ゥシ型） を示す。  2 shows the amino acid sequence (ゥ type) of RFRP.

〔配列番号： 6〕  [SEQ ID NO: 6]

配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列を有する RFRPをコードする DN Aの塩基配列を示す。  This shows the base sequence of DNA encoding RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5.

〔配列番号： 7〕  [SEQ ID NO: 7]

RFRPのアミノ酸配列 （ラット型） を示す （リクローニング前） 。  2 shows the amino acid sequence (rat type) of RFRP (before recloning).

〔配列番号： 8〕  [SEQ ID NO: 8]

配列番号： 7で表わされるアミノ酸配列を有する RFRPをコードする DN Aの塩基配列を示す。  This shows the base sequence of DNA encoding RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7.

〔配列番号： 9〕  [SEQ ID NO: 9]

RFRPのアミノ酸配列 （マウス型） を示す。  2 shows the amino acid sequence (mouse type) of RFRP.

〔配列番号： 10〕  [SEQ ID NO: 10]

配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列を有する RFRPをコードする DN Aの塩基配列を示す。  This shows the nucleotide sequence of DNA encoding RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9.

〔配列番号： 11〕  [SEQ ID NO: 11]

ラット由来 G蛋白質共役型レセプター蛋白質 r〇T7 TO 22のアミノ酸配 列を示す。  1 shows the amino acid sequence of rat-derived G protein-coupled receptor protein r〇T7TO22.

〔配列番号： 12〕  [SEQ ID NO: 12]

ラット由来 G蛋白質共役型レセプター蛋白質 rOT 7 TO 22をコードする c DN Aの塩基配列を示す。  1 shows the nucleotide sequence of cDNA encoding rat-derived G protein-coupled receptor protein rOT7TO22.

〔配列番号： 13〕 RFRP部分べプチドのァミノ酸配列を示す。 [SEQ ID NO: 13] 2 shows the amino acid sequence of the RFRP partial peptide.

〔配列番号： 14〕  [SEQ ID NO: 14]

RFRP部分べプチドのァミノ酸配列を示す。  2 shows the amino acid sequence of the RFRP partial peptide.

〔配列番号： 15〕  [SEQ ID NO: 15]

RFRP部分ペプチドのアミノ酸配列を示す。  2 shows the amino acid sequence of an RFRP partial peptide.

〔配列番号： 16〕  [SEQ ID NO: 16]

配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 81番目 （Me t) 〜第 92番 目（Ph e)のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードする塩基配列を示す。 〔配列番号： 17〕  This shows the nucleotide sequence encoding the peptide containing the 81st (Met) to 92nd (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1. [SEQ ID NO: 17]

配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 101番目'（S e r) 〜第 1 1 2番目 （S e r) のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードする塩基配列を 示す。  This shows a base sequence encoding a peptide containing the 101st '(Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.

〔配列番号： 18〕  [SEQ ID NO: 18]

配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 124番目 （Va l) 〜第 13 1番目 （Ph e) のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードする塩基配列を 示す。  This shows the nucleotide sequence encoding the peptide containing the 124th amino acid sequence (Val) to 131st amino acid sequence (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.

〔配列番号： 19〕  [SEQ ID NO: 19]

配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Me t) 〜第 92番目 (Phe) のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードする塩基配列を示す。 〔配列番号： 20〕  This shows the base sequence encoding the peptide containing the 1st (Met) to 92nd (Phe) amino acid sequences of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1. [SEQ ID NO: 20]

配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の、 第 1番目 （Me t) 〜第 1 12 番目 （S e r) のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードする塩基配列を示 す。  This shows the nucleotide sequence encoding the peptide containing the 1st (Met) to 112th (Ser) amino acid sequences of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.

〔配列番号： 21〕  [SEQ ID NO: 21]

配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の、 第 1番目 （Me t) 〜第 131 番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードする塩基配列を示 す。  This shows the base sequence encoding the peptide containing the 1st (Met) to 131st (Phe) amino acid sequences of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.

.〔配列番号： 22〕  [SEQ ID NO: 22]

RFRPのアミノ酸配列 （ラット型） を示す （リクローニング後） 。 〔配列番号： 23〕 2 shows the amino acid sequence (rat type) of RFRP (after recloning). [SEQ ID NO: 23]

配列番号： 22で表わされるアミノ酸配列を有する RFRPをコードする D N Aの塩基配列を示す。  The nucleotide sequence of DNA encoding RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22 is shown.

〔配列番号： 24〕  [SEQ ID NO: 24]

ヒト由来 G蛋白質共役型レセプター蛋白質 hOT 7 TO 22をコードするァ ミノ酸配列を示す。  1 shows an amino acid sequence encoding human-derived G protein-coupled receptor protein hOT7TO22.

〔配列番号： 25〕  [SEQ ID NO: 25]

配列番号： 24で表されるアミノ酸配列を有する h〇T 7 TO 22をコード する DN Aの塩基配列を示す。  This shows the nucleotide sequence of DNA encoding h〇T7TO22 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 24.

〔配列番号： 26〕  [SEQ ID NO: 26]

配列番号： 24で表されるアミノ酸配列を有する hOT 7 TO 22をコード する DN Aの塩基配列を示す。 '  The nucleotide sequence of DNA encoding hOT7TO22 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 24 is shown. '

〔配列番号： 27〕  [SEQ ID NO: 27]

マウス由来 G蛋白質共役型レセプ夕一蛋白質 OT7T022の部分アミノ酸 配列を示す。  2 shows the partial amino acid sequence of mouse-derived G protein-coupled receptor protein OT7T022.

〔配列番号： 28〕  [SEQ ID NO: 28]

配列番号： 27で表されるアミノ酸配列を有するマウス由来〇T 7 TO 22 をコードするゲノム DN Aの塩基配列を示す。  This shows the nucleotide sequence of genomic DNA encoding mouse-derived ΔT 7 TO 22 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27.

〔配列番号： 29〕  [SEQ ID NO: 29]

参考例 3で使用したプライマーの塩基配列を示す。  The base sequence of the primer used in Reference Example 3 is shown.

〔配列番号： 30〕  [SEQ ID NO: 30]

参考例 3で使用したプライマーの塩基配列を示す。  The base sequence of the primer used in Reference Example 3 is shown.

〔配列番号： 31〕  [SEQ ID NO: 31]

参考例 3で使用したプライマーの塩基配列を示す。 実施例  The base sequence of the primer used in Reference Example 3 is shown. Example

以下に、 実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、 本発明はそれ に限定されるものではない。 なお、 大腸菌を用いての遺伝子操作法は、 モレキ ユラ— 'クロ—ニング （M0iecuiar cloning) に記載されている方法に従った。 参考例 1 マウス〇T 7 T 022のクローニング Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to Examples, but the present invention is not limited thereto. The gene manipulation using Escherichia coli Moreki Yura - 'black - in accordance with the method described in training (M 0 i ecu i a r cloning). Reference Example 1 Cloning of mouse 〇T 7 T 022

ラット ΟΤ 7 Τ 022 c DNA (配列番号： 12、 WO00/29441号 ) をプローブにした。 ラット c DNAの 580 _ 1 170 b ρの DNA断片を プローブとして作製した （PCR— D I Gプローブ合成キット、 ロシュダイァ ゴニスティックス社） 。 そのプローブを用いて、 マウス 129 S V Jラムダゲ ノムライブラリー （ストラタジーン社） に 1 s t プラークハイブリダィゼー シヨンを行った結果、 陽性プラークが 6個得られた。 1 s t プラークハイブ リダィゼーションで得られた 6個の陽性プラークに対して 2 n d プラークハ イブリダィゼーションを行い、 2個の陽性クローンを単離した。  Rat ΟΤ7Τ022 cDNA (SEQ ID NO: 12, WO00 / 29441) was used as a probe. A 580_1170 bρ DNA fragment of rat cDNA was prepared as a probe (PCR-DIG probe synthesis kit, Roche Diagnostics). Using the probe, 1 st plaque hybridization was performed on a mouse 129 SV J lambda genomic library (Stratagene), and as a result, six positive plaques were obtained. Six positive plaques obtained by 1 st plaque hybridization were subjected to 2 nd plaque hybridization, and two positive clones were isolated.

サザンハイブリダィゼ一シヨンを行った結果、 約 4. 5 kbpの BamH I 断片に OT7T022のコード領域が存在することが判明した。 常法によりク ローニングした DNA断片をシークェンサ一 （パーキンエルマ一社） により塩 基配列を調べた結果、 ラット OT7T022の 3， 側ェクソン （ 0. 9 k b p ) と 94%の相同性を有する断片であり、 マウス OT7T022ゲノム DNA であることを確認した。 さらに OT7T 022をコードする BamH I断片の 5， .側 3. 8 kbpおよび 3， 側 5. 5 k b pの B amH I断片をクロ一ニン グした。 サザン解析により 3' 側ェクソンから 1. 8 kbp以上はなれた上流 に一つのェクソンが存在することがわかった （配列番号： 28) 。  As a result of Southern hybridization, it was found that the coding region of OT7T022 was present in a BamHI fragment of about 4.5 kbp. The nucleotide sequence of the DNA fragment, which had been cloned by a conventional method, was examined by sequencing (PerkinElmer), and was found to be 94% homologous to the rat 3 OT7T022 3, 0.9 exon (0.9 kbp). The mouse was confirmed to be OT7T022 genomic DNA. Furthermore, the BamHI fragment encoding OT7T022 was cloned at the 3.8 kbp on the 5th and 3.8 kbp sides and 5.5 kbp on the 3rd side. Southern analysis revealed that there was one exon upstream of the 3 'exon by more than 1.8 kbp (SEQ ID NO: 28).

参考例 2 夕一ゲッティングベクターの構築および ES相同組み換えの作製 〇T 7 TO 22夕一ゲッティングベクタ一の構築は、 3， 側ェクソンの 5， 側 S a c I— B amH I断片 （3. 2 k b p) 、 3 ' 側 B s t E I I _X h o I断片 （5. 2 kbp) , ネオマイシン耐性遺伝子およびジフテリアトキシン 遺伝子を用いて行い、 3， 側ェクソン 1. 2 kbpを欠失させた OT7T02 2夕一ゲッティングベクタ一 p 022 Tgv— 2の構築を終了した。 OT7T 022ターゲッティングベクターをマウス 129 S vEv系統由来 ES細胞 （ AB 2. 2系統） にエレクトロボレ一シヨンにより導入した。 エレクトロボレ ーシヨンはジーンパルサーエレクトロポレーシヨンシステム （バイオラッド社 製） を用いて電圧 230V， 抵抗値 500 F, DNA溶液濃度 30 gZm 1の条件を設定して行った。 遺伝子導入実験は 3回行い、 それぞれ 1 Q 00株以上のネオマイシン耐性株 を得ることができた。 ターゲティングベクタ一 p 022Tg V— 2によって得 られた 739株のネオマイシン耐性株を 24ゥエルプレー卜で培養し、 一 70 で凍結融解、 P r o t e i n a s e K処理後、 エタノール沈殿により DN A を抽出した。 Reference Example 2 Construction of evening gettering vector and construction of ES homologous recombination 〇T7TO22 Construction of evening gettering vector was carried out on 3, side exon 5, side SacI—BamHI fragment (3. OT7T02 2 kbp), 3 'Bst EII _XhoI fragment (5.2 kbp), neomycin resistance gene and diphtheria toxin gene, ot7T02 1.2 kbp deleted Construction of Getting Vector 1 p022 Tgv-2 was completed. The OT7T 022 targeting vector was introduced into mouse 129 S vEv strain-derived ES cells (AB 2.2 strain) by electroporation. The electroporation was performed using a Gene Pulser electroporation system (manufactured by Bio-Rad) at a voltage of 230 V, a resistance of 500 F, and a DNA solution concentration of 30 gZm1. The gene transfer experiment was performed three times, and neomycin-resistant strains of 1 Q00 or more were obtained. The 739 neomycin-resistant strains obtained with the targeting vector p 022Tg V-2 were cultured in 24-well plates, frozen and thawed in 170, treated with proteinase K, and DNA was extracted by ethanol precipitation.

そのうち 595株のゲノムに対して 5， 側の B amH I— Xh o 1 600 b P断片 （夕一ゲティングベクタ一に用いたゲノムの外側の領域） をプローブと し、 サザンハイブリダィゼ一シヨンを行った。 その結果、 6株に相同組換え体 と推定される 5. 4 kbのバンドがみられた （野生型 3. 8 kb) 。  Among them, the BamHI-Xho1600bP fragment (outside the genome used for the evening targeting vector) on the 5th side of the genome of 595 strains was used as a probe, and the Southern hybridization was performed. Was done. As a result, a 5.4 kb band presumed to be a homologous recombinant was observed in 6 strains (wild-type 3.8 kb).

相同組換え体と考えられる DNA断片が検出された 6種の ES細胞株 （No. 126, 130， 283, 491, 532, 545 ) について、 再確認のため サザン解析を行った。 凍結保存しておいた各細胞を培養後、 DNAを抽出し、 B amH I— Xh o I切断後、 上記 600 b p断片をプローブとし、 サザンハ イブリダィゼーシヨンを行った。 その結果、 全ての細胞において 5. 4kb断 片 （野生型は 3. 8 kb断片のみが観察される） が再確認できた。 また、 プロ —ブをネオマイシン耐性遺伝子としてサザンハイプリダイゼ一ションを行った 結果、 2 kb付近に野生型、 組換え体共通に見られるバンドがあつたが、 組換 え体のみに 5. 4 k bのバンドが確認でき、 6種の ES細胞すべてが相同組換 え体であることが確認できた。  Southern analysis was performed on the six ES cell lines (No. 126, 130, 283, 491, 532, 545) in which DNA fragments considered to be homologous recombinants were detected for reconfirmation. After culturing each cryopreserved cell, DNA was extracted, cut with BamHI-XhoI, and subjected to Southern hybridization using the above 600 bp fragment as a probe. As a result, a 5.4 kb fragment (only the 3.8 kb fragment was observed in the wild type) was confirmed again in all cells. In addition, as a result of Southern hybridization using the probe as a neomycin resistance gene, a band common to wild-type and recombinant was found around 2 kb, but only 5.4 in the recombinant form. A kb band was confirmed, and it was confirmed that all six ES cells were homologous recombinants.

これら 6系統の相同組換え体のうち増殖が良好であった 3系統の相同組換え 体細胞株 （No. 130, 283, 532) について核型分析のためフィーダ —細胞存在下、 ES細胞を 25 cm2フラスコにコンフルェントになるまで培 養し、 コルセミドを添加 （最終細胞密度 0. l ^g/ml) し、 37 、 2時 間培養した。 PBSで洗浄後、 トリプシン処理し、 遠心 1000 r pm、 5分 した。ペレットに 0. 075M KC 1 4m 1を添加し室温で 20分放置後、 細胞浮遊液にカルノア液 （酢酸：メタノール比 =1 ： 3) を 1滴添加後穏やか に懸濁した。 室温放置 60分させ、 遠心し、 ペレットをカルノア液 4m 1で穏 やかに懸濁し、 さらに室温放置した。 30分 5回程度繰り返した。 遠心後ペレ ッ卜にカルノア液 2〜3mlを加え適度な濃度に調製し、 スライドグラス上に 細胞浮遊液を 2〜 3滴 滴下した。 風乾後、 3%ギムザ溶液で染色し、 顕微鏡 下で分裂期中期の染色体観察を行った。 結果、 正常核型を有する細胞の割合は 69〜61%であった。 3系統の相同組換え体細胞株の核型異常がみられなか つたので、 増殖性の良好な細胞株 No. 283を選抜した。 Of these six homologous recombinants, three of the homologous recombinant cell lines (No. 130, 283, 532) that showed good growth were used for karyotype analysis. The cells were cultured to confluence in a cm2 flask, and colcemide was added (final cell density: 0.1 lg / ml), and the cells were cultured for 37 to 2 hours. After washing with PBS, the cells were treated with trypsin and centrifuged at 1,000 rpm for 5 minutes. After adding 0.075M KC14m1 to the pellet and leaving it at room temperature for 20 minutes, one drop of Carnoy's solution (acetic acid: methanol ratio = 1: 3) was added to the cell suspension, followed by gentle suspension. The mixture was allowed to stand at room temperature for 60 minutes, centrifuged, and the pellet was gently suspended in 4 ml of Carnoy's solution, followed by standing at room temperature. Repeated about 30 times 5 times. After centrifugation, add 2-3 ml of Carnoy's solution to the pellet to adjust to an appropriate concentration, and place on a slide glass. Two to three drops of cell suspension were added. After air-drying, the cells were stained with a 3% Giemsa solution, and chromosomes in the metaphase were observed under a microscope. As a result, the ratio of cells having a normal karyotype was 69 to 61%. Since no karyotypic abnormalities were observed in the three homologous recombinant cell lines, a cell line No. 283 having good growth properties was selected.

参考例 3 ノックアウトマウスの作製 Reference Example 3 Preparation of knockout mouse

相同組み換え細胞株 No. 283を C 57 BLZ 6系統'マウス胚盤胞へのィ ンジェクシヨンを常法により行った。 インジェクションされた胚盤胞は別途精 管結紮マウスと交配することによって得られた偽妊娠マウス卵管に移植するこ とによって妊娠させた。 283株については移植胚の約半分が産仔として生ま れ、 75%がキメラマウスであった。 雄キメラマウスは C57BLZ6系統雌 マウスと交配し、 産仔での生殖系列移行およびへテロマウスの取得をおこなつ た。  The homologous recombinant cell line No. 283 was injected into C57BLZ 6 strain 'mouse blastocysts by a conventional method. The injected blastocysts were transplanted into the oviducts of pseudopregnant mice obtained by crossing with vasectomized mice separately. For 283 strains, about half of the transplanted embryos were born as offspring, and 75% were chimeric mice. Male chimeric mice were bred to C57BLZ6 strain female mice for germline transfer in offspring and heterozygous mice were obtained.

キメラと C 57 BL系統マウスとの交配によって 51匹の ES細胞由来マウ スが得られた。 マウス尾よりゲノム DNAを精製し、 まず PCRによる遺伝子 型判定の条件を検討した。 検討の結果プライマ一は夕ーゲティングした領域の 3 ' M (AGGTGCTCAGTGTGTAGAAGTGG (配列癌号： 29) )を共通とし、 また 5， 側 は野生型検出用として、 欠損させた領域内の終止コドン付近配列  By crossing the chimera with C57BL strain mice, 51 ES cell-derived mice were obtained. Genomic DNA was purified from the mouse tail, and the conditions for genotyping by PCR were examined first. As a result of the examination, the primers share the same 3'M (AGGTGCTCAGTGTGTAGAAGTGG (sequence cancer: 29)) in the evening-targeted region, and the 5th side is for the detection of wild-type, and the sequence near the stop codon in the deleted region

(ATCCCAGCCTGGAACATTTTGAGG (配列番号： 30) )、 変異型検出用としてネオマ イシン耐性遺伝子内配列 （TCATAGCCGAATACGGTCTCCAC (配列番号： 31) )とし、 ポリメラ一ゼは KOD— p 1 u s— (東洋紡株式会社製） を用いた。 野生型は 300 b p断片のみを検出し、 ヘテロ欠損個体であれば、 300 bpおよび 6 00 bp断片を検出できるように設計された PCRによる遺伝子判定の結果、 ヘテロ欠損マウスを得ることができた。 次に、 サザンハイブリダィゼーシヨン を行って、 遺伝子欠損の確認を行った。 (ATCCCAGCCTGGAACATTTTGAGG (SEQ ID NO: 30)), the neomycin resistance gene sequence (TCATAGCCGAATACGGTCTCCAC (SEQ ID NO: 31)) for mutant detection, and KOD—p 1 us— (Toyobo Co., Ltd.) for polymerase Was. For the wild type, only the 300 bp fragment was detected, and in the case of a hetero-deficient individual, a hetero-deficient mouse was obtained as a result of gene determination by PCR designed to detect the 300 bp and 600 bp fragments. Next, Southern hybridization was performed to confirm gene deficiency.

実施例 1 R F R Pの血糖上昇作用 Example 1 Blood glucose increasing effect of RFRP

RFRPとして、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 56番目 （Ser ) 〜第 92番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるヒト RFRP— 1 (37ァミノ 酸） を用いた。 以下、 このペプチドを RFRP— 1と略記する。  As RFRP, human RFRP-1 (37 amino acid) consisting of the 56th (Ser) to 92nd (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 was used. Hereinafter, this peptide is abbreviated as RFRP-1.

RFRP— 1の末梢投与による血糖値に及ぼす影響を検討するため、 自由行 動下採血用の手術を行った。 成熟 Wi s t a r系雄性ラット （手術時体重 31 0〜350 g) をペントバルビタール 5 Omg/k gの腹腔内投与にて麻酔し た。 解剖用パッドの上に背位に固定し、 左側の頷静脈を露出させた。 ポリェチ レンチューブ SP 35 (内径 0. 5mm、 外径 9 mm、 夏目製作所） を約 30 c mの長さに切り、 200単位/ m 1のへパリン含有生理食塩水で満たし た後、 類静脈に約 4. 5 cm挿入し固定した。 チューブのもう一端は背側の皮 下を通して類部 （背側） より露出させた。 To evaluate the effect of peripheral administration of RFRP-1 on blood glucose, An operation for blood collection under movement was performed. Adult Wistar male rats (body weight at surgery 310-350 g) were anesthetized by intraperitoneal administration of pentobarbital 5 Omg / kg. It was fixed on the dissection pad in a dorsal position, exposing the left nod vein. Cut a polyethylene tube SP 35 (0.5 mm inside diameter, 9 mm outside diameter, Natsume Seisakusho) into a length of about 30 cm, fill it with saline containing 200 units / m1 of heparin, and place it in a venous vein. 4. 5 cm was inserted and fixed. The other end of the tube was exposed through the dorsal subcutaneous area from the anterior part (dorsal side).

術後一晩待ってから、 R F R P— 1投与前に用量 1 m 1のッベルクリン用注 射筒と 25ゲージ注射針 （いずれもテルモ社） を用いて 300 a 1の血液を採 取した。 血液凝固を防止するため、 注射筒には予め 3mgZm 1 EDTAを 含む 30 OK I U/m 1 a ρ r o t i n i n溶液を 3 1入れておいた。 大 塚生理食塩水または RFRP— 1 ( (株） ペプチド研究所） （17， 80, 170 nmo 1 ) ) の 1 m.L生理食塩水溶解液をチューブより 1 mLZK gで 静脈投与した。 静脈投与の開始時点から 0、 5、 15、 30、 60分後に顏静 脈より 300 1ずつ採血した。 採血した血液は微量高速冷却遠心機 （MR - 150、 トミー精ェ） を用いて遠心 （13, 000 r pm、 5分間） し、 上 清 （血漿） を回収した。 血中グルコース濃度は、 フジドライケム 3500 (F UJ I F I LM社） を用いて測定した。 図 1に示すごとく RFRP— 1 10 nmo lZkg投与群は対象群に比し、 静脈投与 5分および 15分後に有意な (p<0. 05， n = 4) 血中グルコース濃度の上昇作用を示した。  After waiting overnight after the operation, 300 a1 blood was collected using a 1 ml dose of tuberculin syringe and a 25-gauge needle (both from Terumo) before administration of RFRP-1. In order to prevent blood coagulation, the syringe was previously filled with 30 OKI U / m1a ρrotinin solution containing 3 mg Zm1EDTA. Otsuka physiological saline or a 1 mL solution of RFRP-1 (Peptide Research Laboratories) (17, 80, 170 nmo 1)) was injected intravenously at 1 mL ZK g from a tube. At 0, 5, 15, 30, and 60 minutes after the start of intravenous administration, 3001 blood samples were collected from the face vein. The collected blood was centrifuged (13,000 rpm, 5 minutes) using a micro high-speed refrigerated centrifuge (MR-150, Tommy Seie), and supernatant (plasma) was collected. The blood glucose concentration was measured using Fuji Dry Chem 3500 (FUJI FILM). As shown in Fig. 1, the RFRP-1 10 nmolZkg group showed a significant (p <0.05, n = 4) increase in blood glucose levels 5 and 15 minutes after intravenous administration compared to the control group. Was.

実施例 2 RFRPの滕グルカゴン分泌促進作用 Example 2 Effect of RFRP on promotion of Tenguru glucagon secretion

RFRP- 1の血中グルコース濃度上昇作用についてそのメカニズムを検討 するため、 血中グルコース濃度に変動を与えるホルモンとして知られている血 中グルカゴンおよびィンスリン濃度に対する R F R P— 1の影響について検討 した。 成熟 W i s t a r系雄性ラット （手術時体重 310〜350 g) に対し 自由行動下採血用の手術を行った。 術後ー晚待ってから、 RFRP— 1投与前 に用量 lmlのッベルクリン用注射筒と 25ゲージ注射針 （いずれもテルモ社 ). を用いて 300 ^ 1の血液を採取した。 血液凝固を防止するため、 注射筒に は予め SmgZm l EDTAを含む 30 OK I UZm 1 a p r o t i n i n溶液を 3 ti 1入れておいた。 大塚生理食塩水または R FRP- 1の生理食塩 水溶解液（80 nmo 1 /mL)をチューブより 1 mLZK gで静脈投与した。 静脈投与の開始時点から 1、 3、 5、 1 5分後に頷静脈より 3 0 O 1ずつ採 血した。 採血した血液は微量高速冷却遠心機 （MR— 150、 トミ一精ェ） を 用いて遠心 （13， 000 r pm、 5分間） し、 上清 （血漿） を回収した。 血 中グルカゴン濃度はグルカゴンキット 「第一」 （第一ラジオアイソトープ研究 所） 、 血中インスリン濃度はラットインスリン [1251] 、 アツセィシステム （ Ame r s h am B i o s c i e nc e s) を用いて測定した。 図 2に示す ごとく RFRP— 1投与群は対象群に比し、 投与 2分後で有意 （p<0. 01 ) な血中グルカゴン濃度の上昇が認められ、 投与 5分後においても有意 （P< 0. 01) な上昇は持続した。 一方、 血中インスリン濃度は RFRP— 1投与 による変動は認められなかった （図 3) 。 これらの結果および RFRP— 1投 与群では、 血中グルカゴン濃度の上昇の後に血中グルコース濃度の上昇が見ら れることから、 RFRP— 1静脈投与による血中グルコース濃度の上昇作用は、 RFRP- 1によるグルカゴン分泌刺激によって引き起こされるものと考えら れた。 In order to investigate the mechanism of the effect of RFRP-1 on blood glucose concentration, the effect of RFRP-1 on blood glucagon and insulin levels, which are known hormones that change blood glucose level, was examined. Adult Wistar male rats (body weight 310-350 g at the time of surgery) were subjected to surgery for blood sampling under free movement. After the operation, and before RFRP-1 administration, 300 ^ 1 blood was collected using a 1-ml injection syringe for tuberculin and a 25-gauge needle (both from Terumo). Syringe should contain SmgZml EDTA in advance to prevent blood clotting 30 OK I UZm 1 aprotini 3 ti 1 of the n solution was stored. Otsuka physiological saline or a physiological saline solution of R FRP-1 (80 nmo 1 / mL) was intravenously administered at 1 mL ZK g from the tube. Blood was collected from the nod vein by 30 O 1 at 1, 3, 5, and 15 minutes after the start of intravenous administration. The collected blood was centrifuged (13,000 rpm, 5 minutes) using a micro high-speed refrigerated centrifuge (MR-150, Tomi Issei), and the supernatant (plasma) was collected. Blood glucagon levels Glucagon kit "Daiichi" (Daiichi Radioisotope Laboratories), blood insulin levels rat insulin [125 1] was measured using a thickness Si system (Ame rsh am B ioscie nc es ). As shown in Fig. 2, the RFRP-1 administration group showed a significant (p <0.01) increase in blood glucagon concentration 2 minutes after administration and a significant increase 5 minutes after administration compared to the control group. <0.01) The rise continued. On the other hand, blood insulin levels did not change with RFRP-1 administration (Fig. 3). These results and the fact that in the RFRP-1 administration group an increase in blood glucose concentration was observed after an increase in blood glucagon concentration, the effect of intravenous administration of RFRP-1 was associated with an increase in blood glucose concentration. It was thought to be caused by stimulation of glucagon secretion by 1.

実施例 3 RFRPの記憶消去促進作用 Example 3 RFRP memory erase function

RFRP神経が扁桃体に投射していることから、 RFRPの扁桃体依存性 の記憶 ·学習能力への関与を検討するため、 R F R P— 1の脳室内投与によ る音手がかり試験 （c u e d f e a r c on d i t i on i n g) での 影響を検討した。 成熟 Wi s t a r系雄性ラット （手術時体重 280〜32 0 g) をペントバルビタール 5 OmgZk gの腹腔内投与にて麻酔し、 ラッ ト脳定位固定装置に固定した。切歯用バーはィン夕ーオーラルラインから 3. 3mm低くした。頭蓋骨を露出し、脳室内にガイドカニューレ AG— 12 (内 径 0. 4mm、 外径 0. 5mm、 エイコム） を埋め込むために歯科用ドリル を用いて骨に穴を開けた。 また、 その周囲 4箇所にアンカービスを埋めた。 ステンレス製ガイド力ニューレ、 AG— 12を、 その先端が側脳室の上部に 位置するように揷入した。 定位座標は、 P a X i n o sと Wa t s o n (1 986) のアトラスに従い、 ブレダマより、 AP ： - 0. 8 mm, L ： 1. 5mm、 H： 4. 5mmとした。 ガイド力ニューレは瞬間接着剤と歯科用セ メントおよびアンカービスで頭蓋骨に固定した。 ガイドカニューレにはステ ンレス製ダミー力ニューレ、 AD— 12 (外径 35mm、 エイコム社） を挿入し、 キヤブナイト （エイコム社） で固定した。 術後、 ラットは個別の ケージで飼育した。 回復期間を術後 1週間とし、 その間十分ハンドリングを 行った。 Since the RFRP nerves are projecting into the amygdala, a cue test by intraventricular administration of RFRP-1 (cuedfearc on diti on ing) was performed to examine the involvement of RFRP in amygdala-dependent memory and learning abilities. We examined the impact on Adult Wistar male rats (body weight 280-320 g at the time of surgery) were anesthetized by intraperitoneal administration of 5 OmgZkg of pentobarbital, and fixed on a rat stereotaxic apparatus. The incisor bar was 3.3 mm lower than the In-Oral line. The skull was exposed and a hole was drilled in the bone using a dental drill to implant a guide cannula AG-12 (inner diameter 0.4 mm, outer diameter 0.5 mm, Acom). In addition, anchor screws were buried in four places around the area. A stainless steel guide force neur, AG-12, was inserted so that its tip was located in the upper part of the lateral ventricle. According to the atlas of P a X inos and Watson (1 986), the localization coordinates are: AP: -0.8 mm, L: 1. 5 mm, H: 4.5 mm. The guide force neura was fixed to the skull with flash glue, dental cement and anchor screws. The guide cannula was inserted with a stainless steel dummy force cannula, AD-12 (outer diameter 35 mm, Acom), and fixed with Cabinite (Acom). After surgery, rats were housed in individual cages. The recovery period was one week after the operation, and handling was sufficiently performed during that period.

音手がかり試験は、 まずトレーニングセッションとしてラットをショックチ ヤンバーに入れ 2分間馴化した後、 30秒間の音刺激を与えた直後に電気刺激 2. 5mAを 2秒間与え 28秒間の休息を与えるサイクルを 5回繰り返した （ 計 5分間）。試験後、 2分間チャンバ一内に放置した後、元のケージに戻した。 次にテストセッションとして上記トレーニングの 24時間後 （1日目） および 48時間後 （2日目） に、 ラットをトレーニング時と同じチャンバ一に入れて 30秒間の音刺激を 5回トレーニング時と同じタイミングで与え、 チヤンバー に入れてから 5分間の行動を観察した。 行動解析は、 解析ソフト F r e e z e F r ame (Ac t i me t r i c社） を用いて行った。 音刺激により変化率 15以下の行動が観察された場合をフリージングと定義した。 RFRP— 1 ( 3 nmo 1) および生理食塩水 （大塚製薬） をトレーニング前後およびテスト 前に脳室内へ投与した。 実験匹数は、 各群とも 12匹づつで行った。 本試験の 条件として、 実験室に試験動物を連れてくる際の道順を毎回変更し、 実験動物 は実験を行う部屋と別の部屋に待機させた。 図 4に示すごとく R F R P— 1投 与群は生理食塩水投与群に比し、 フリージングの割合が 2日目において顕著に 低下した （生理食塩水投与群； 46. 5%、 RFRP投与群； 35. 5%) 。 これらの結果から、 RFRP— 1は記憶消去促進作用を示すことが分かった。 産業上の利用可能性  In the sound clue test, rats were placed in a shock chamber for 2 minutes as a training session, followed by 30 minutes of sound stimulation, followed immediately by electrical stimulation. Repeated (5 minutes in total). After the test, it was left in the chamber for 2 minutes and then returned to its original cage. Next, at 24 hours (day 1) and 48 hours (day 2) after the above training, the rats were placed in the same chamber as the training, and 30 seconds of sound stimulation were performed as in the training 5 times. They were given at the appropriate timing and placed in a chamber for 5 minutes. The behavior analysis was performed using analysis software FrezeFrame (Actimetric). Freezing was defined as the behavior with a change rate of 15 or less observed by sound stimulation. RFRP-1 (3 nmo 1) and saline (Otsuka Pharmaceutical) were administered intraventricularly before and after training and before testing. The number of experimental animals was 12 for each group. As a condition of this test, the directions for bringing the test animals to the laboratory were changed each time, and the experimental animals were kept in a room separate from the room where the experiment was performed. As shown in Fig. 4, the freezing rate was significantly reduced on the second day in the RFRP-1 administration group as compared to the saline administration group (saline administration group: 46.5%, RFRP administration group: 35). . Five%) . From these results, it was found that RFRP-1 has a memory erasure promoting effect. Industrial applicability

RFRPおよび OT7T 022またはそれらをコードする DN Aや〇T 7 T 022ァゴニストは、 例えば、 塍グルカゴン分泌促進剤、 血糖上昇剤、 尿生成 促進剤、 記憶消去促進剤 （嫌な記憶の消去促進剤） 、 または肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性 網膜症、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎 縮、 インスリンアレルギー、 インスリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒 性、 癌などの予防 ·治療剤として有用である。 RFRP and OT7T 022 or the DNA or 〇T 7 T 022 agonists that encode them are, for example, 塍 glucagon secretion enhancer, blood glucose increasing agent, urine production enhancer, memory erasure enhancer (an erasure enhancer for bad memories) Or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic It is useful as a prophylactic or therapeutic agent for retinopathy, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity, cancer, etc.

O T 7 T O 2 2アン夕ゴニストは、 例えば、 塍グルカゴン分泌抑制剤、 血 糖低下剤、 尿生成抑制剤、 記憶学習低下抑制剤 （記憶低下抑制剤） 、 または 糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿 病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 髙脂血症、 性機能障害、 皮膚疾 患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良、 記憶学習障害な どの予防 ·治療剤として使用することができる。  OT 7 TO 22 Angonist is, for example, 塍 glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, memory learning decrease inhibitor (memory decrease inhibitor), or diabetes, glucose intolerance, ketosis, acidosis , Diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturnal enuresis, hypolipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, digestion It can be used as a prophylactic / therapeutic agent for poor, memory and learning disorders.

Claims

請求の範囲 The scope of the claims 1 . 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミドもし くはそのエステルまたはその塩を含有してなる滕グルカゴン分泌促進剤、 血糖 上昇剤、 尿生成促進剤、 または肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血 圧、 浮腫、 排尿困難症、 ィンスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インスリノ一マ、 .動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性ま たは癌の予防 ·治療剤。 1. A polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, or an ester thereof or a salt thereof. Glucagon secretagogue, hyperglycemic agent, urine production enhancer, or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, high blood pressure, edema, difficulty urinating, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, fat Prevention and treatment of atrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic diseases, lipotoxicity or cancer. 2 . ポリペプチドが配列番号： 1、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配列番号： 9または配列番号： 2 2で表されるアミノ酸配列からなるポリ ぺプチドである請求項 1記載の剤。  2. The polypeptide is a polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22. The agent according to 1. 3 . 部分ペプチドが、  3. The partial peptide is ( i ) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 8 8番 目 （Leu) 〜第 9 2番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の (i) contains the 8th (Leu) to 92nd (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3; N末端側に、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 8 7番目 （Asn) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜8 7個のアミノ酸が付加 していてもよいアミノ酸配列からなるペプチド、 On the N-terminal side, 1 to 87 amino acids counted from the C-terminal of the 1st (Met) to 87th (Asn) amino acid sequences of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 are added. A peptide consisting of a good amino acid sequence, (i i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1 番目 （Ser) 〜第 1 1 2番目 （Ser) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配 列の N末端側に、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜 第 1 0 0番目 （Arg) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜1 0 0個のアミノ 酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるべプチド、  (ii) contains the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, and is N-terminal to the amino acid sequence In addition, 1 to 100 amino acids counted from the C-terminal of the first (Met) to 100th (Arg) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 are added. A peptide consisting of a good amino acid sequence, (i i i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 1 2 7 番目 （Leu) 〜第 1 3 1番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配 列の N末端側に、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜 第 1 2 6番目 （Asn) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜1 2 6個のアミノ 酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるペプチド、  (iii) contains the amino acid sequence of the 127th (Leu) to 131st (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, and is N-terminal to the amino acid sequence And 1 to 126 amino acids counted from the C-terminal of the first (Met) to 126th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1. A peptide consisting of a good amino acid sequence, (iv) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 8 8番目 （Leu) 〜第 9 2番 目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に、 配列番号 ： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 8 7番目 （Asn) のアミ ノ酸配列の C末端から数えて 1〜8 7個のアミノ酸が付加していてもよいアミ ノ酸配列からなるペプチド、 (iv) Nos. 8 to 8 (Leu) to No. 92 of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 The amino acid sequence of the first (Met) to 87th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 at the N-terminal side of the amino acid sequence. A peptide consisting of an amino acid sequence to which 1 to 87 amino acids counted from the C-terminal may be added, ( V ) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1番目 （Ser) 〜第 1 1 2番目 （Ser) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に、 配列 番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 1 0 0番目 （Arg) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜 1 0 0個のアミノ酸が付加していても よいアミノ酸配列からなるペプチド、  (V) contains the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, and has, on the N-terminal side of the amino acid sequence, SEQ ID NO: 1 A peptide consisting of an amino acid sequence to which 1 to 100 amino acids may be added, counting from the C-terminus of the 1st (Met) to 100th (Arg) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by , (vi) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1 2 7番目 （Leu) 〜第 1 3 1番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に、 配列 番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 1 2 6番目 （Asn) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜1 2 6個のアミノ酸が付加していても よいアミノ酸配列からなるペプチド、  (vi) It contains the 127th (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, and the N-terminal side of the amino acid sequence has SEQ ID NO: 1 A peptide consisting of an amino acid sequence that may have 1 to 126 amino acids counted from the C-terminal of the 1st (Met) to 126th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by , (vi i) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 9 0番目 （Leu) 〜第 9 4 番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に、 配列番 号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 8 9番目 （Asn) のァ ミノ酸配列の C末端から数えて 1〜 8 9個のアミノ酸が付加していてもよいァ ミノ酸配列からなるぺプチド、  (vi i) contains the 90th (Leu) to 94th (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9; From the amino acid sequence of the amino acid sequence of the first (Met) to 89th (Asn) of the amino acid sequence represented by Naru peptide, (vi i i) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 1 2 1番目 （Leu) 〜第 1 2 5番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に、 配 列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 1 2 0番目 （Ser ) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜1 2 0個のアミノ酸が付加していて もよいアミノ酸配列からなるペプチド、  (vi ii) contains the amino acid sequence from the 121st (Leu) to the 125th (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9; : From the amino acid sequence of the first (Met) to the 120th (Ser) of the amino acid sequence represented by 1, from 1 to 120 amino acids counted from the C-terminus, which may be added A peptide, (ix) 配列番号： 7または 2 2で表わされるアミノ酸配列の第 9 0番目 （Leu) 〜第 9 4番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端側に 、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 8 9番目 （Asn ) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜 8 9個のアミノ酸が付加していても よいアミノ酸配列からなるぺプチド、 (x) 配列番号： 7または 22で表わされるアミノ酸配列の第 121番目 （Leu ) 〜第 125番目 （Phe) のアミノ酸配列を含有し、 そのアミノ酸配列の N末端 側に、 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1番目 （Met) 〜第 120番 目 （Ser) のアミノ酸配列の C末端から数えて 1〜120個のアミノ酸が付加し ていてもよいアミノ酸配列からなるペプチド、 (ix) SEQ ID NO: contains the amino acid sequence of the 90th (Leu) to 94th (Phe) of the amino acid sequence represented by 7 or 22; N-terminal side of the amino acid sequence; A peptide consisting of an amino acid sequence which may have 1 to 89 amino acids counted from the C-terminal of the first (Met) to 89th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by 1 , (x) It contains the 121st (Leu) -125th (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22, and is represented by SEQ ID NO: 1 on the N-terminal side of the amino acid sequence. A peptide consisting of an amino acid sequence having 1 to 120 amino acids counted from the C-terminus of the first (Met) to 120th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence to be added; (xi) 上記 （i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が 付加したアミノ酸配列からなるぺプチド、  (xi) a peptide comprising an amino acid sequence obtained by adding 1 to 5 amino acids to the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X), (xii) 上記 （i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が 挿入されたアミノ酸配列からなるペプチド、  (xii) a peptide consisting of an amino acid sequence having 1 to 5 amino acids inserted into the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X), (xiii) 上記 （ i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のァミノ 酸で置換されたァミノ酸配列からなるぺプチド、 または  (xiii) a peptide comprising an amino acid sequence substituted with 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X), or (xiv) 上記 （xi) 〜 （xiii) の付加 ·挿入 ·置換を組み合わせたアミノ酸配列 からなるぺプチドである請求項 1記載の剤。  (xiv) The agent according to claim 1, which is a peptide comprising an amino acid sequence obtained by combining the addition, insertion and substitution of (xi) to (xiii). 4. 部分ペプチドが、 4. The partial peptide is ( i ) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 56番 目 （Ser) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 70番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 73番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 81番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe ) または第 84番目 （Ser) 〜第 92番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるぺプ チド、  (i) 56th (Ser) to 92nd (Phe), 70th (Met) to 92nd (Phe), 73rd position of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 A peptide consisting of the amino acid sequence of (Met) to 92nd (Phe), 81st (Met) to 92nd (Phe) or 84th (Ser) to 92nd (Phe); (ii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 101 番目 （Ser) 〜第 112番目 （Ser) のアミノ酸配列からなるペプチド、  (ii) a peptide consisting of the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, (iii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 101 番目 （Asn) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 104番目 （Asn) 〜第 131番目 （Phe ) 、 第 115番目 （Asn) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 124番目 （Val) 〜第 1 31番目 （Phe) 、 第 125番目 （Pro) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 126番目 (Asn) 〜第 131番目 （Phe) または第 127番目 （Leu) 〜第 131番目 （Phe ) のアミノ酸配列からなるペプチド、  (iii) 101st (Asn) to 131st (Phe), 104th (Asn) to 131st (Phe), 115th (As) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 Asn) to 131st (Phe), 124th (Val) to 131st (Phe), 125th (Pro) to 131st (Phe), 126th (Asn) to 131st ( Phe) or a peptide consisting of the 127th (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequence, .(iv) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 58番目 （Ser) 〜第 92番 目 （Phe) 、 第 70番目 （Lys) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 73番目 （Met) 〜第 9 2番目 （Phe) 、 第 8 1番目 （Met) 〜第 9 2番目 （Phe) または第 8 4番目 （ Ser) 〜第 9 2番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、 (iv) 58th (Ser) to 92nd (Phe), 70th (Lys) to 92nd (Phe), 73rd (Met) to 73rd amino acid (She) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 No. A peptide consisting of the 9th (Phe), 8th 1st (Met)-9th 2nd (Phe) or 8th 4th (Ser)-9th 2nd (Phe) amino acid sequence, (V) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1番目 （Ser) 〜第 1 1 2番目 （Ser) のアミノ酸配列からなるペプチド、  (V) a peptide consisting of the 101st (Ser) to the 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, (vi) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1番目 （Ser) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 0 4番目 （Al a) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 1 5番目 （ Asn) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 2 4番目 （Val) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 2 5番目 （Pro) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 2 6番目 （Asn) 〜第 1 3 1 番目 （Phe) または第 1 2 7番目 （Leu) 〜第 1 3 1番目 （Phe) のアミノ酸配列 からなるペプチド、  (vi) No. 101 (Ser) to No. 131 (Phe), No. 104 (Al a) to No. 131 (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, 1st 15th (Asn) to 13th 1st (Phe), 1st 24th (Val) to 1st 31st (Phe), 1st 25th (Pro) to 1st 31st (Phe), a peptide consisting of the amino acid sequence of the 126th (Asn) to the 131st (Phe) or the 127th (Leu) to the 131st (Phe), (vi i) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目 （Ser) 〜第 9 4 番目 （Phe) 、 第 7 2番目 （Val) 〜第 9 4番目 （Phe) 、 第 7 5番目 （Met) 〜 第 9 4番目 （Phe) 、 第 8 3番目 （Val) 〜第 9 4番目 （Phe) または第 8 4番目 (vi i) 58th (Ser)-94th (Phe), 72nd (Val)-94th (Phe), 75th of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 (Met)-94th (Phe), 83rd (Val)-94th (Phe) or 84th (Pro) 〜第 9 4番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、 A peptide consisting of the amino acid sequence of (Pro) to 94th (Phe), (vi i i) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 1 1 8番目 （Phe) 〜第 1 2 5番目 （Phe) 、 第 1 1 9番目 （Pro) 〜第 1 2 5番目 （Phe) 、 第 1 2 0番目 (vi ii) the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 from the 118th (Phe) to the 125th (Phe), the 119th (Pro) to the 125th (Phe), 1st 20th (Ser) 〜第 1 2 5番目 （Phe) または第 1 2 1番目 （Leu) 〜第 1 2 5番目 （Phe ) のアミノ酸配列からなるペプチド、 A peptide consisting of the amino acid sequence of (Ser) to the 125th (Phe) or 121st (Leu) to the 125th (Phe), (ix) 配列番号： 7または 2 2で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目 （Ser) 〜第 9 4番目 （Phe) 、 第 7 2番目 （Asp) 〜第 9 4番目 （Phe) 、 第 7 5番目 （ Met) 〜第 9 4番目 （Phe) 、 第 8 3番目 （Val) 〜第 9 4番目 （Phe) または第 8 4番目 （Pro) 〜第 9 4番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、  (ix) The 58th (Ser) -94th (Phe), 72nd (Asp) -94th (Phe), and the 7th amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 Consists of the amino acid sequence of 5th (Met) to 94th (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) Peptide, ( X ) 配列番号： 7または 2 2で表わされるアミノ酸配列の第 1 1 8番目 （Phe ) 〜第 1 2 5番目 （Phe) 、 第 1 1 9番目 （Pro) 〜第 1 2 5番目 （Phe) 、 第 1 2 0番目 （Ser) 〜第 1 2 5番目 （Phe) または第 1 2 1番目 （Leu) 〜第 1 2 5 番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、  (X) SEQ ID NO: 11 or 18 (Phe) to 125th (Phe), 119th (Pro) to 125th (Phe) of the amino acid sequence represented by 7 or 22 ), A peptide consisting of the amino acid sequence of the 120th (Ser) to the 125th (Phe) or the 121st (Leu) to the 125th (Phe), (x i) 上記 （ i ) 〜 （X ) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のアミノ酸 が欠失したアミノ酸配列からなるぺプチド、  (xi) a peptide consisting of an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids have been deleted from the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X), (x i i ) 上記 （i ) 〜 （X ) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が 付加したアミノ酸配列からなるペプチド、 (xii) 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X) A peptide consisting of an added amino acid sequence, (xiii) 上記 （i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜5個のアミノ酸 が挿入されたアミノ酸配列からなるぺプチド、  (xiii) a peptide comprising an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids have been inserted into the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X), (xiv) 上記 （i) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のァ'ミノ酸 で置換されたアミノ酸配列からなるペプチド、 または  (xiv) a peptide consisting of an amino acid sequence substituted with 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptides (i) to (X), or (XV) 上記 （xi) 〜 （xiv) の欠失 ·付加 ·揷入 ·置換を組み合わせたアミノ酸 配列からなるぺプチドである請求項 1記載の剤。  (XV) The agent according to claim 1, which is a peptide comprising an amino acid sequence obtained by combining deletion, addition, insertion, and substitution of (xi) to (xiv). 5. 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードする D N A を含有してなる塍グルカゴン分泌促進剤、 血糖上昇剤、 尿生成促進剤、 または 肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インス リン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インス リノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性または癌の予防 ·治療剤。  5. A glucagon secretagogue comprising a polypeptide containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a DNA encoding a partial peptide thereof, an increase in blood glucose Agent, urine production enhancer or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, Prevention and treatment of arteriosclerosis, thrombotic diseases, lipotoxicity or cancer. 6. DN Aが配列番号： 1、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配 列番号： 9または配列番号： 22で表されるアミノ酸配列からなるポリべプチ ドをコードする DN Aである請求項 5記載の剤。  6. DNA encodes a polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22 6. The agent according to claim 5, which is DNA. 7. DNAが、  7. DNA is (i) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 56番 目 （Ser) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 70番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 73番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe) 、 第 81番目 （Met) 〜第 92番目 （Phe ) または第 84番目 （Ser) 〜第 92番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるぺプ チド、  (i) 56th (Ser) to 92nd (Phe), 70th (Met) to 92nd (Phe), 73rd position of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 A peptide consisting of the amino acid sequence of (Met) to 92nd (Phe), 81st (Met) to 92nd (Phe) or 84th (Ser) to 92nd (Phe); (ii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 101 番目 （Ser) 〜第 112番目 （Ser) のアミノ酸配列からなるペプチド、  (ii) a peptide consisting of the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, (iii) 配列番号： 1または配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の第 101 番目 （Asn) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 104番目 （Asn) 〜第 131番目 （Phe ) 、 第 1 15番目 （Asn) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 124番目 （Val) 〜第 1 31番目 （Phe) 、 第 125番目 （Pro) 〜第 131番目 （Phe) 、 第 126番目 (Asn) 〜第 131番目 （Phe) または第 127番目 （Leu) 〜第 131番目 （Phe ) のアミノ酸配列からなるペプチド、 (iii) 101st (Asn) to 131st (Phe), 104th (Asn) to 131st (Phe), 115th amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 (Asn)-131st (Phe), 124th (Val)-131st (Phe), 125th (Pro)-131st (Phe), 126th (Asn)-131st (Phe) or 127th (Leu)-131st (Phe A) a peptide consisting of the amino acid sequence of (iv) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目 （Ser) 〜第 9 2番 目 （Phe) 、 第 7 0番目 （Lys) 〜第 9 2番目 （Phe) 、 第 7 3番目 （Met) 〜第 9 2番目 （Phe) 、 第 8 1番目 （Met) 〜第 9 2番目 （Phe) または第 8 4番目 （ Ser) 〜第 9 2番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、  (iv) 58th (Ser)-92nd (Phe), 70th (Lys)-92nd (Phe), 73rd of amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 A peptide consisting of the amino acid sequence of (Met) to 92nd (Phe), 81st (Met) to 92nd (Phe) or 84th (Ser) to 92nd (Phe); ( V ) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1番目 （Ser) 〜第 1 1 2番目 （Ser) のアミノ酸配列からなるペプチド、  (V) a peptide consisting of the 101st (Ser) to the 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, (vi) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の第 1 0 1番目 （Ser) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 0 4番目 （Ala) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 1 5番目 （ Asn) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 2 4番目 （Val) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 2 5番目 （Pro) 〜第 1 3 1番目 （Phe) 、 第 1 2 6番目 （Asn) 〜第 1 3 1 番目 （Phe) または第 1 2 7番目 （Leu) 〜第 1 3 1番目 （Phe) のアミノ酸配列 からなるペプチド、  (vi) No. 101 (Ser) to No. 131 (Phe), No. 104 (Ala) to No. 131 (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 1 1 5th (Asn)-1st 3 1st (Phe), 1st 2nd 4th (Val)-13th 1st (Phe), 1st 25th (Pro)-13th 1st ( Phe), a peptide consisting of the amino acid sequence of the 126th (Asn) to the 131st (Phe) or the 127th (Leu) to the 131st (Phe), (vi i) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目 （Ser) 〜第 9 4 番目 （Phe) 、 第 7 2番目 （Val) 〜第 9 4番目 （Phe) 、 第 7 5番目 （Met) 〜 第 9 4番目 （Phe) 、 第 8 3番目 （Val) 〜第 9 4番目 （Phe) または第 8 4番目 (Pro) 〜第 9 4番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、  (vi i) 58th (Ser)-94th (Phe), 72nd (Val)-94th (Phe), 75th of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 A peptide consisting of the amino acid sequence of (Met) to 94th (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe); (vi i i) 配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列の第 1 1 8番目 （Phe) 〜第 1 2 5番目 （Phe) 、 第 1 1 9番目 （Pro) 〜第 1 2 5番目 （Phe) 、 第 1 2 0番目 (Ser) 〜第 1 2 5番目 （Phe) または第 1 2 1番目 （Leu) 〜第 1 2 5番目 （Phe ) のアミノ酸配列からなるペプチド、  (vi ii) the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 from the 118th (Phe) to the 125th (Phe), the 119th (Pro) to the 125th (Phe), A peptide consisting of the amino acid sequence of the 120th (Ser) to the 125th (Phe) or the 121st (Leu) to the 125th (Phe), (ix) 配列番号： 7または 2 2で表わされるアミノ酸配列の第 5 8番目 （Ser) 〜第 9 4番目 （Phe) 、 第 7 2番目 （Asp) 〜第 9 4番目 （Phe) 、 第 7 5番目 （ Met) 〜第 9 4番目 （Phe) 、 第 8 3番目 （Val) 〜第 9 4番目 （Phe) または第 8 4番目 （Pro) 〜第 9 4番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、 (ix) The 58th (Ser) -94th (Phe), 72nd (Asp) -94th (Phe), and the 7th amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 Consists of the amino acid sequence of 5th (Met) to 94th (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) peptide, ( x ) 配列番号： 7または 2 2で表わされるアミノ酸配列の第 1 1 8番目 （Phe ) 〜第 1 2 5番目 （Phe) 、 第 1 1 9番目 （Pro) 〜第 1 2 5番目 （Phe) 、 第 1 2 0番目 （Ser) 〜第 1 2 5番目 （Phe) または第 1 2 1番目 （Leu) 〜第 1 2 5 番目 （Phe) のアミノ酸配列からなるペプチド、 (xi) 上記 （i) 〜 （x) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のアミノ酸 が欠失したアミノ酸配列からなるぺプチド、 (x) SEQ ID NO: 11 or 18 (Phe) to 125 (Phe), 119 (Pro) to 125 (Phe) of the amino acid sequence represented by 7 or 22 ), A peptide consisting of the amino acid sequence of the 120th (Ser) to the 125th (Phe) or the 121st (Leu) to the 125th (Phe), (xi) a peptide comprising an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids have been deleted from the amino acid sequence of the peptides (i) to (x), (xii) 上記 （i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸が 付加したアミノ酸配列からなるぺプチド、  (xii) a peptide consisting of an amino acid sequence obtained by adding 1 to 5 amino acids to the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X) above, (xiii) 上記 （ i ) 〜 （X) のペプチドのアミノ酸配列に 1〜 5個のアミノ酸 が挿入されたァミノ酸配列からなるペプチド、  (xiii) a peptide consisting of an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids have been inserted into the amino acid sequence of the peptide of (i) to (X), ( iv) 上記 （i ) 〜 (X) のペプチドのアミノ酸配列中の 1〜 5個のアミノ酸 で置換されたアミノ酸配列からなるペプチド、 または  (iv) a peptide consisting of an amino acid sequence substituted with 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptides (i) to (X), or (XV) 上記 （xi) 〜 （xiv) の欠失 ·付加 ·挿入 ·置換を組み合わせたアミノ酸 配列からなるペプチド、  (XV) a peptide comprising an amino acid sequence obtained by combining deletion, addition, insertion, and substitution of the above (xi) to (xiv); をコードする DNAである請求項 5記載の剤。 6. The agent according to claim 5, which is a DNA encoding 8. 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードする D N A を含有してなる糖尿病、 耐糖能障害、 ケト一シス、 アシドーシス、 糖尿病性神 経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障 害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良、 記憶学 習障害、 肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インスリノーマ、 脂肪毒性または癌の診断剤。  8. Diabetes mellitus, impaired glucose tolerance, keto monosaccharide comprising a polypeptide containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a DNA encoding a partial peptide thereof Cis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturnal enuresis, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic Diseases, dyspepsia, memory learning disorders, obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, Diagnostic agent for lipotoxicity or cancer. 9. 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するポリぺプチド、 その部分べプチドもしくはそのアミドもし くはそのエステルまたはその塩に対する抗体を含有してなる滕グルカゴン分泌 抑制剤、 血糖低下剤、 尿生成抑制剤、 または糖尿病、 A 糖能障害、 ケト一シス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜 尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓 性疾患、 消化不良または記憶学習障害の予防 ·治療剤。 9. Includes an antibody against a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof. Tenguru glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor or diabetes, A-glucose disorder, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, Prevention and treatment of enuresis, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion or memory learning disorder. 10. 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミドも しくはそのエステルまたはその塩に対する抗体を含有してなる糖尿病、 耐糖能 障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病 性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少 症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良、 記憶学習障害、 肥満、 高脂血症、 2型 糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不 安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インスリノーマ、 脂肪毒性ま たは癌の診断剤。 10. Including an antibody against a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof. Diabetes, glucose tolerance Disorders, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturnal enuresis, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic Diseases, dyspepsia, memory and learning disorders, obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, instable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, fat Diagnostic agent for toxicity or cancer. 1 1 . 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードする D N Aに相補的な塩基配列またはその一部を含有するァンチセンス D N Aを含有し てなる塍グルカゴン分泌抑制剤、 血糖低下剤、 尿生成抑制剤、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケト一シス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良または記憶学習障害の予防 ·治療 剤。  11. A polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a base sequence complementary to DNA encoding a partial peptide thereof or a part thereof Glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, or diabetes, impaired glucose tolerance, ketolysis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy An agent for preventing and treating urinary frequency, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion or memory learning disorder. 1 2 . 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分べプチドの発現量を増加さ せる化合物またはその塩を含有してなる塍グルカゴン分泌促進剤、 血糖上昇剤、 尿生成促進剤、 または肥満、 髙脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリン アレルギー、 インスリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性または癌の予 防 ·治療剤。  12. A polypeptide containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a compound capable of increasing the expression level of a partial peptide thereof, or a salt thereof Glucagon secretagogue, hyperglycemic agent, urine production enhancer, or obesity, hypolipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, Prevention and treatment of lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer. 1 3 . 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を減少さ せる化合物またはその塩を含有してなる塍グルカゴン分泌抑制剤、 血糖低下剤、 尿生成抑制剤、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿 病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性 機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良ま たは記憶学習障害の予防 ·治療剤。  13. A polypeptide containing a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a compound capable of reducing the expression level of a partial peptide thereof, or a salt thereof塍 Glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturia, hyperlipidemia For the prevention and treatment of diseases, sexual dysfunction, skin diseases, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic diseases, indigestion or memory learning disorders. 1 4. 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 OT7T 022、 その部分ペプチド またはその塩を含有してなる塍グルカゴン分泌促進剤、 血糖上昇剤、 尿生成促 進剤、 または肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困 難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレル ギー、 インスリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性または癌の予防 ·治 療剤。 1 4. SEQ ID NO: 11 Identical or substantially identical to amino acid sequence represented by 1 Receptor Yuichi protein OT7T 022 containing an amino acid sequence, a glucagon secretion enhancer containing a partial peptide or a salt thereof, a hyperglycemic agent, a urine production enhancer, or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes , Hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer. 15. OT7T022が配列番号： 1 1、 配列番号： 24または配列番 ： 2 7で表されるアミノ酸配列からなるレセプ夕一蛋白質である請求項 14記載の 剤。  15. The agent according to claim 14, wherein OT7T022 is a receptor protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 27. 16. 配列番号： 11で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 OT 7 TO 22またはその部分ぺプ チドをコードする DNAを含有してなる塍グルカゴン分泌促進剤、 血糖上昇剤、 尿生成促進剤、 または肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリン アレルギー、 インスリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性または癌の予 防 ·治療剤。 16. Receptor protein OT7TO22 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, or glucagon comprising DNA encoding the partial peptide thereof Secretagogues, hyperglycemic agents, urine production enhancers or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin Prevention and treatment of allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer. 17. DN Aが配列番号： 1 1、 配列番号： 24または配列番号： 27で表さ れるアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質〇T 7 TO 22またはその部分べ プチドをコードする DN Aである請求項 16記載の剤。  17. The DNA according to claim 16, wherein the DNA is a receptor protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 27, or a DNA encoding T7TO22 or a partial peptide thereof. Agents as described. 18. 配列番号： 11で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 OT 7 TO 22またはその部分ぺプ チドをコードする DNAを含有してなる糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 ァ シドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿 症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性 疾患、 消化不良、 記憶学習障害、 肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高 血圧、 浮腫、 排尿困難症、 ィンスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インスリノーマ、 脂肪毒性または癌の診断剤。 18. A diabetes comprising a DNA encoding the receptor protein OT7TO22 or a partial peptide thereof comprising the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, Impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturnal enuresis, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, Arteriosclerosis, thrombotic disease, dyspepsia, memory and learning disorders, obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, Diagnostic agent for insulin allergy, insulinoma, lipotoxicity or cancer. 19. 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 OT 7 TO 22、 その部分ペプチド またはその塩に対する抗体を含有してなる滕グルカゴン分泌抑制剤、 血糖低下 剤、 尿生成抑制剤、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良 または記憶学習障害の予防 ·治療剤。 19. Receptor protein OT7TO22 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, its partial peptide Or an inhibitor of Teng-glucagon secretion, a hypoglycemic agent, an inhibitor of urine production, or an antibody against a salt thereof, or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy Prevention and treatment of frequent urination, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion or memory learning disorder. 2 0 . 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2、 その部分ペプチド またはその塩に対する抗体を含有してなる糖尿病、 耐糖能障害、 ケト一シス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜 尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓 性疾患、 消化不良、 記憶学習障害、 肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎 縮、 インスリンアレルギー、 インスリノーマ、 脂肪毒性または癌の診断剤。 20. Diabetes comprising an antibody against the receptor protein OT7T022, a partial peptide thereof or a salt thereof having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 , Glucose intolerance, ketolysis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent urination, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, bone loss Disease, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion, memory and learning disorders, obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipodystrophy Diagnostic agent for contraction, insulin allergy, insulinoma, lipotoxicity or cancer. 2 1 . 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 O T 7 T O 2 2またはその部分ぺプ チドをコードする D NAに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチ センス D NAを含有してなる塍グルカゴン分泌抑制剤、 血糖低下剤、 尿生成抑 制剤、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経 障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良または記憶学 習障害の予防 ·治療剤。 21. SEQ ID NO: 11 Receptor protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 11 Complementary to DNA encoding OT7TO22 or a partial peptide thereof Glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy containing antisense DNA containing a specific nucleotide sequence or a part thereof , Diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturnal enuresis, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, indigestion or memory learning disorders Prophylactic and therapeutic agents. 2 2 . 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2、 その部分ペプチド またはその塩に対するァゴニストを含有してなる塍グルカゴン分泌促進剤、 血 糖上昇剤、 尿生成促進剤、 または肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高 血圧、 浮腫、 排尿困難症、 ィンスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インスリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性ま たは癌の予防 ·治療剤。  22. Receptor protein OT7TO22 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, 塍 glucagon containing agonist for partial peptide or salt thereof Secretagogues, hyperglycemic agents, urine production enhancers, or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy Prevention and treatment of insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer. 2 3 . 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2、 その部分ペプチド またはその塩に対するアンタゴニストを含有してなる滕グルカゴン分泌抑制剤、 血糖低下剤、 尿生成抑制剤、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 ァシド 一シス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良または記憶学習障害の予防 ·治療剤。 23. Identical or substantially identical to amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 Receptor protein containing an amino acid sequence OT7T022, an inhibitor of its partial peptide or its salt, an inhibitor of Teng glucagon secretion, a hypoglycemic agent, an inhibitor of urine production, or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis , Acid cis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturnal enuresis, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease · Prevention and treatment of dyspepsia or memory learning disorders. 2 4 . 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 O T 7 T 0 2 2またはその部分ぺプ チドの発現量を増加させる化合物またはその塩を含有してなる塍グルカゴン分 泌促進剤、 血糖上昇剤、 尿生成促進剤、 または肥満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗性症候群、 不安定糖尿 病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インスリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾 患、 脂肪毒性または癌の予防 ·治療剤。  24. A compound that increases the expression level of receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 Or glucagon secretion enhancer, hyperglycemia, urine production enhancer, or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance Prevention and treatment of sexual syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer. 2 5 . 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 O T 7 T O 2 2またはその部分ぺプ チドの発現量を減少させる化合物またはその塩を含有してなる滕グルカゴン分 泌抑制剤、 血糖低下剤、 尿生成抑制剤、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシ ス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血 栓性疾患、 消化不良または記憶学習障害の予防 ·治療剤。  25. A compound that reduces the expression level of receptor protein OT7TO22 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 or Teng glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor or diabetic, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy containing the salt, Prevention and treatment of pollakiuria, nocturia, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disease, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disease, dyspepsia or memory learning disorder. 2 6 . 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミドも しくはそのエステルまたはその塩、 および （または） 配列番号： 1 1で表され るアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプ 夕一蛋白質 O T 7 T O 2 2、 その部分ペプチドまたはその塩を用いることを特 徴とする滕グルカゴン分泌調節薬、 血糖調節薬または尿生成調節薬のスクリー ニング方法。  26. A polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, its partial peptide, its amide or its ester or its salt, and / or SEQ ID NO: 11 A receptor containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by No. 1 Yuichi Protein OT7TO22, a partial peptide thereof or a Tengurugagon characterized by using a salt thereof How to screen for secretory, glycemic or urine production regulators. 2 7 . 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリぺプチド、 その部分べプチドもしくはそのアミドも しくはそのエステルまたはその塩、 および （または） 配列番号： 1 1で表され るアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプ 夕一蛋白質 O T 7 T 0 2 2、 その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる滕 グルカゴン分泌調節薬、 血糖調節薬または尿生成調節薬のスクリーニング用キ ッ卜。 27. A polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, its partial peptide or its amide Or an ester or a salt thereof, and / or a receptor containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, OT7T022, a partial peptide thereof Or a kit for screening for a Teng glucagon secretion regulator, a blood glucose regulator or a urine production regulator comprising a salt thereof. 2 8 . 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミドも しくはそのエステルまたはその塩、 および （または） 該ポリペプチド、 その部 分べプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と配列番号 ： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するレセプ夕一蛋白質 O T 7 T O 2 2、 その部分ペプチドまたはその塩と の結合性を変化させる化合物またはその塩を用いることを特徴とする塍グルカ ゴン分泌調節薬、 血糖調節薬または尿生成調節薬のスクリーニング方法。  28. A polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, its partial peptide, its amide or its ester or its salt, and / or Receptor protein OT 7 TO containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 with the polypeptide, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof or a salt thereof. 22. A method for screening a glucagon secretion regulator, a blood glucose regulator, or a urine production regulator, which comprises using a compound or a salt thereof that changes the binding property to a partial peptide or a salt thereof. 2 9 . 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミドも しくはそのエステルまたはその塩、 および （または） 該ポリペプチド、 その部 分べプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と配列番号 29. A polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, its partial peptide, its amide or its ester or its salt, and / or The polypeptide, its partial peptide or its amide or its ester or its salt and SEQ ID NO: ： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するレセプ夕一蛋白質 O T 7 T O 2 2、 その部分ペプチドまたはその塩を 含有してなる塍グルカゴン分泌調節薬、 血糖調節薬または尿生成調節薬のスク リーニング用キッ卜。 : Receptor protein OT7TO22 containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 11, glucagon secretion regulator containing a partial peptide or a salt thereof, blood sugar Screening kit for modulators or urine production regulators. 3 0 . 哺乳動物に対して、  30. For mammals, ( i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミドも しくはそのエステルまたはその塩、  (i) a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof; (i i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードする D N -A、  (ii) DN-A encoding a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof, (i i i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分べプチドの発現量を増加さ せる化合物またはその塩、 (iii) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 A compound or a salt thereof that increases the expression level of a polypeptide containing a amino acid sequence or a partial peptide thereof, (iv) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T O 2 2、 その部分ペプチド またはその塩、  (iv) a receptor protein OT7TO22 having an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof, or a salt thereof; ( V ) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 O T 7 T 0 2 2またはその部分ぺプ チドをコードする D NA、  (V) a DNA encoding the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11; (vi) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質〇T 7 T O 2 2、 その部分ペプチド またはその塩に対するァゴニスト、 または  (vi) an agonist against the receptor protein ΔT 7 T O 22, a partial peptide thereof or a salt thereof having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11; or (vi i) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 O T 7 T 0 2 2またはその部分ぺプ チドの発現量を増加させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴 とする滕グルカゴン分泌促進方法、 血糖上昇方法、 尿生成促進方法、 または肥 満、 高脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリ ン抵抗性症候群、 不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インスリ ノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性または癌の予防 ·治療方法。  (vi i) Increase the expression level of receptor protein OT7T022 or a partial peptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 A method of promoting secretion of Teng glucagon, a method of increasing blood sugar, a method of promoting urine production, or a method of increasing fat, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, which comprises administering an effective amount of a compound or a salt thereof. Dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer. 3 1 . 哺乳動物に対して、 3 1. For mammals, ( i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミドも しくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、  (i) a polypeptide containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, an antibody against a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof; (i i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードする D N Aに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンス D NA、 (ii) a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a nucleotide sequence complementary to DNA encoding a partial peptide thereof or a part thereof Antisense DNA, (i i i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を減少さ せる化合物またはその塩、 (iii) a compound or a salt thereof, which reduces the expression level of a polypeptide containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof, (iv) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 OT7 TO 22、 その部分ペプチド またはその塩に対する抗体、 (iv) identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 An antibody against the amino acid sequence-containing receptor protein OT7 TO 22, its partial peptide or its salt, (V) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 OT7T022またはその部分ぺプ チドをコードする DNAに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチ センス DNA、  (V) a nucleotide sequence complementary to the DNA encoding the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, or Antisense DNA containing a portion, (vi) 配列番号： 11で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 OT 7 TO 22、 その部分ペプチド またはその塩に対するアン夕ゴニスト、 または  (vi) a receptor protein OT7TO22 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, its partial peptide or a salt thereof, or an agonist. (vii) 配列番号： 11で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 OT7T022またはその部分ぺプ チドの発現量を減少させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴 とする滕グルカゴン分泌抑制方法、 血糖低下方法、 尿生成抑制方法、 または糖 尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性 腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関 節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良または記憶学習障害の予防 •治療方法。  (vii) administering an effective amount of a compound or a salt thereof that reduces the expression level of the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 Tenguru glucagon secretion suppressing method, blood glucose lowering method, urine production suppressing method, or glucoseuria, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, frequent How to prevent and treat urine, nocturnal enuresis, hyperlipidemia, sexual dysfunction, skin disorders, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic disorders, dyspepsia or memory learning disorders. 32. 滕グルカゴン分泌促進剤、 血糖上昇剤、 尿生成促進剤、 または肥満、 高 脂血症、 2型糖尿病、 低血糖症、 高血圧、 浮腫、 排尿困難症、 インスリン抵抗 性症候群、不安定糖尿病、 脂肪萎縮、 インスリンアレルギー、 インスリノーマ、 動脈硬化、 血栓性疾患、 脂肪毒性または癌の予防 ·治療剤を製造するための (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミドも しくはそのエステルまたはその塩、  32. Teng glucagon secretagogue, hyperglycemic agent, urine production enhancer, or obesity, hyperlipidemia, type 2 diabetes, hypoglycemia, hypertension, edema, dysuria, insulin resistance syndrome, unstable diabetes, (I) for producing a preventive or therapeutic agent for lipoatrophy, insulin allergy, insulinoma, arteriosclerosis, thrombotic disease, lipotoxicity or cancer; (i) identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 A polypeptide containing an amino acid sequence, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof; (ii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリぺプチドまたはその部分べプチドをコ一ドする DN (ii) a DN encoding a polypeptide containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof A、 A, (iii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を増加さ せる化合物またはその塩、 (iii) increasing the expression level of a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof; Compound or salt thereof, (iv) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 OT7T 022、 その部分ペプチド またはその塩、  (iv) a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof, or a salt thereof; (v) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 OT7T 022またはその部分ぺプ チドをコードする DNA、  (v) a DNA encoding the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof comprising the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11; (vi) 配列番号： 11で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 OT 7 TO 22、 その部分ペプチド またはその塩に対するァゴニスト、 または  (vi) an agonist against the receptor protein OT7TO22, a partial peptide thereof or a salt thereof, containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, or (vii) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 OT7T 022またはその部分ぺプ チドの発現量を増加させる化合物またはその塩の使用。  (vii) a compound or a salt thereof that increases the expression level of receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11; use. 33. 塍グルカゴン分泌抑制剤、 血糖低下剤、 尿生成抑制剤、 または糖尿病、 耐糖能障害、 ケトーシス、 アシドーシス、 糖尿病性神経障害、 糖尿病性腎症、 糖尿病性網膜症、 頻尿、 夜尿症、 高脂血症、 性機能障害、 皮膚疾患、 関節症、 骨減少症、 動脈硬化、 血栓性疾患、 消化不良または記憶学習障害の予防 ·治療 剤を製造するための  33. 塍 Glucagon secretion inhibitor, hypoglycemic agent, urine production inhibitor, or diabetes, impaired glucose tolerance, ketosis, acidosis, diabetic neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, pollakiuria, nocturia, high fat For the prevention and treatment of blood, sexual dysfunction, skin diseases, arthropathy, osteopenia, arteriosclerosis, thrombotic diseases, indigestion or memory learning disorders (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチド、 その部分ペプチドもしくはそのアミドも しくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、  (i) an antibody against a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof; (ii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードする D N Aに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンス DNA、  (ii) a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a nucleotide sequence complementary to DNA encoding a partial peptide thereof or a part thereof Antisense DNA, (iii) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するポリべプチドまたはその部分べプチドの発現量を減少さ せる化合物またはその塩、  (iii) a compound or a salt thereof that reduces the expression level of a polypeptide or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1; - (iv) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 OT 7 TO 22、 その部分ペプチド またはその塩に対する抗体、 -(iv) a receptor protein OT7TO22 containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof Or an antibody against a salt thereof, (V) 配列番号： 11で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質 OT 7 TO 22またはその部分ぺプ チドをコードする DNAに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチ センス DNA、  (V) a nucleotide sequence complementary to the DNA encoding the receptor protein OT7TO22 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, or Antisense DNA containing a portion, (vi) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 OT 7 TO 22、 その部分ペプチド またはその塩に対するアンタゴニスト、 または  (vi) an antagonist to the receptor protein OT7TO22, a partial peptide thereof or a salt thereof, containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11; or (vii) 配列番号： 11で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するレセプ夕一蛋白質 OT 7 TO 22またはその部分ぺプ チドの発現量を減少させる化合物またはその塩の使用。  (vii) a compound or a salt thereof that reduces the expression level of receptor protein OT7TO22 or a partial peptide thereof, which has the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11; Use of.
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