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WO2004063394A2 - Verwendungen von an fabp4 bindenden substanzen zur diagnose und behandlung des harnblasenkarzinoms - Google Patents

Verwendungen von an fabp4 bindenden substanzen zur diagnose und behandlung des harnblasenkarzinoms Download PDF

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WO2004063394A2
WO2004063394A2 PCT/DE2004/000029 DE2004000029W WO2004063394A2 WO 2004063394 A2 WO2004063394 A2 WO 2004063394A2 DE 2004000029 W DE2004000029 W DE 2004000029W WO 2004063394 A2 WO2004063394 A2 WO 2004063394A2
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WO
WIPO (PCT)
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fabp4
substance
protein
tumor
peptide
Prior art date
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PCT/DE2004/000029
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French (fr)
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Bernd Hinzmann
Edgar Dahl
Thomas Specht
Christian Pilarsky
Alexander Herr
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Individual
Original Assignee
Individual
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Publication of WO2004063394A3 publication Critical patent/WO2004063394A3/de
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Ceased legal-status Critical Current

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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12Q2600/158—Expression markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value

Definitions

  • the invention relates to new uses of FABP4 or sequences derived therefrom for screening for substances which bind to it, and to the use of substances which bind to FABP4 for the diagnosis and / or treatment of bladder carcinoma.
  • FABP4 stands for Fatty Acid Binding Protein 4.
  • FABP4 belongs to a family of homologous, cytosolic localized proteins.
  • FABP4 is also called adipocyte fatty acid binding protein (A-FABP), aP2 (in the mouse) or adipocyte lipid binding protein (ALBP).
  • A-FABP adipocyte fatty acid binding protein
  • ABP2 in the mouse
  • ABP adipocyte lipid binding protein
  • FABPs are characterized by largely tissue-specific expression.
  • FABP4 is expressed in normal tissue in adipocytes and accounts for approximately 1% of the total amount of cytosolic protein. By binding the. Fatty acids on FABPs can be transported and stored in the cell's aqueous environment.
  • FABP4 The expression of FABP4 in urothelial cells in normal and tumor tissues is very different.
  • a functional relationship between FABP expression and tumor development has not yet been elucidated. Overall, a very heterogeneous picture emerges for the expression ester, which is why it cannot be predicted whether or in which tumors overexpression will take place and what such overexpression ultimately means.
  • Bladder cancer is the second most common urological tumor. It occurs in men with a frequency of 245 to 100,000 and in women from 65 to 100,000. Among cancer deaths, bladder cancer ranks fourth in men and sixth in women. Treatment is usually through cystectomy, i.e. by partially or completely removing the bladder. This often leads to further complications for the sick person.
  • Bladder cancer develops through the degeneration of individual urothelial cells.
  • the urothelium is the layer of cells that shields the inside of the body from the urine that is formed. It lines the lumen of the renal pelvis, ureter, bladder and urethra.
  • Bladder cancer develops almost completely (> 93%) as adenocarcinoma and is characterized by the strong tendency to recurrence, the regular recurrence even after treatment.
  • the development of bladder cancer is mainly due to the influence of chemical noxae, such as aromatic amines, but mainly to smoking as a cause recycled. It can be diagnosed relatively early and take two forms.
  • the invasive forms grow into the tissue and, if left untreated, lead to the most severe symptoms, such as Ly. ⁇ ph node involvement and metastases. The deaths arise almost exclusively from this second group. It is characteristic of the course that the papillary tumors very often remain stable and therefore show no progress towards the dangerous invasive forms. In 10-20% of cases, however, there is a progression to the aggressive, muscle-invasive tumors within 5 years.
  • a number of genes have so far been examined for their suitability as a prognostic marker in bladder cancer. It is of primary interest whether a patient with non-invasive, papillary tumors remains stable at this stage or whether he will develop invasive forms.
  • the markers examined so far mainly include p53, p21 and the retinoblastoma gene Rb. However, none of the markers mentioned allows a prognosis for an individual patient with sufficient certainty (Marberger et al., Eur. Urol., 40/5, Curric Urol 1-9 (2001)). More recent, commercially available tests (BTA-STAT, NMP22) focus more on the detection of urothelioma than on the prognosis of the course.
  • the invention is therefore based on the technical problem of specifying pharmaceutical compositions for diagnosis, in particular for prognosis for progression or progression, and / or for treating bladder carcinoma and means for identifying them.
  • a nucleic acid coding for FABP4 and / or a FABP4 peptide or protein for the detection of bladder carcinoma or for the detection of a risk of the disease from such a carcinoma or for the detection of a risk of a progression of a papillary urinary carcinoma to one teaches invasive carcinoma, a urothelial cell tissue sample, in particular a urinary bladder urothelial cell tissue sample, being examined for transcription or over-transcription of FABP4 RNA or for expression or over-expression of a FABP4 protein.
  • a nucleic acid coding for FABP4 or a detector substance that binds to FABP4 protein or peptide, preferably containing a reporter group, can be used, whereby binding of said nucleic acid and / or said protein or peptide to the detector substance is detected semi-quantitatively or quantitatively.
  • the invention further teaches a Testsyste to the (in vitro) detection of an aforementioned cancer or risk of disease thereto or Progression- sprognose comprising, means for quantitative measurement of the expression of FABP4 in tissue samples, said means for example, means for Amplification and specific Detection of FABP4 RNA and / or a detector substance, in particular specific for FABP4 protein, can be.
  • the invention further teaches the use of a FABP4 RNA or a FABP4 protein or peptide for screening for substances which bind to it, in particular prospective active substances for modulating, in particular inhibiting, said RNA or said protein or peptide, or prospective detector substances, a prospective substance or a Mixture of such prospective substances is contacted with said RNA or said protein or peptide, binding events being determined using a binding assay, and a binding prospective substance being selected, if appropriate after deconvolution.
  • the invention further teaches a screening system for determining active substances suitable for the treatment of the above tumor diseases, comprising a FABP4 nucleic acid or a FABP4 protein or peptide, means for determining (in vitro) binding events to the FABP4 nucleic acid or to the FABP4 protein or peptide, and / or means for determining the (in vitro) activity of FABP4 protein.
  • FABP4 can be present in a cell-free or a cell-based system, the latter in particular having urothelial cells of the urogenital tract, in particular the urinary bladder, or a cell line developed therefrom.
  • Means for determining binding events can, for example, naturally include substances or association partners that bind naturally in normal cells or in tumor cells, for example to FABP4 protein, with their (free) concentration or concentration change when prospective active substances and / or detector substances are added, a competitive binding of a binding active substance or Detector substance is determined.
  • Such means can also include physical or physico-chemical methods, such as X-ray structure analysis and / or NMR, in particular two-dimensional 1H / 1H or 15N / 1H or 14C / 1H correlation spectroscopy.
  • spectra are compared with each other before and after the addition of a prospective active substance or detector substance, and in the event of changes, a binding event is determined.
  • Spectra or the like of either FABP4 or the prospective substance or a combination of both can be used.
  • all other standard methods of determining binding events and / or protein activities can also be used.
  • a prospective substance or several substances, spatially separated from one another
  • a binding event is then determined after application and subsequent rinsing by detection, possibly locally resolved, of the label-bound FABP4s.
  • FABP4 can be immobilized and a labeled prospective substance or a mixture thereof is applied. Binding events are determined analogously to the variant above.
  • the invention teaches the use of a substance that inhibits or binds to FABP4 for the production of a pharmaceutical composition for the treatment and / or diagnosis of bladder carcinoma or prognosis of progression in bladder carcinoma diseases.
  • the substance can be an antibody which can be obtained by immunizing a non-human mammal with an FABP4 peptide or protein with cDNA coding therefor transfected cells, with tumor cells expressing such a peptide or protein endogenously, or with recombinantly produced FABP4 peptides or proteins, or a phage display antibody.
  • the substance can also be a mimicry compound of an antibody against an FABP4 peptide or protein.
  • the substance can be an apta er, an antisense RNA, a ribozyme or an siRNA against FABP4 nucleic acids.
  • the substance can additionally carry a cytotoxic and / or immune-stimulating component.
  • the above substances binding to FABP4 protein specifically bind to the FABP4 protein when used for therapeutic purposes and modulate its biological activity. This is not necessary in the case of fusion or connection of the substance with a cytotoxic component. This is not necessary to continue when the substance of the extraction is used an anti-idiotypic antibody which 'will be recognized as foreign by the immune system of a patient due to its non-humanized form, and otherwise a FABP4 antigen presented to the immune system.
  • the pharmaceutical composition can be prepared for any application, for example iv or ip injection.
  • a fitting-out to the local Applika ⁇ tion in tumor cells containing tissue is recommended in the case of using a cytotoxic component.
  • the invention can be used in the context of a method for the diagnosis or prognosis of progression of a tumor disease of the bladder carcinoma, whereby one Detector substance is applied in one embodiment with a reporter group in the tissue to be examined, if appropriate in vitro after tissue removal, the tissue to be examined then being subjected to a detection method stage which is sensitive to the reporter group, and in the case of the detection of a defined one Minimum values of the reporter group in the tissue, the tissue is qualified as containing tumor cells or is classified as being at risk of progression or not at risk of progression, and a method for treating a bladder tumor disease, a pharmaceutical composition according to the invention being administered to a patient in a physiologically effective dose.
  • a tissue sample can additionally or alternatively be examined for FABP4 expression using a test system according to the invention.
  • the invention is based in particular on the finding that FABP4 is expressed differently in different papillary tumors of bladder carcinoma, ie in said tumor tissues the expression is higher in the case of such papillary carcinomas which later become invasive, compared to normal cells of the same tissue, and in the case of papillary carcinomas which remain stable, on the other hand, low, and the technical teaching which can be derived therefrom that FABP4 can be used as a target molecule in diagnosis, in particular prognosis of progression, and therapy or prophylaxis, in particular of invasive tumor diseases.
  • FABP4 can therefore serve as a specific marker for identifying tumor cells in said tumor tissues which have a risk of forming invasive tumor tissues.
  • the inhibition of FABP4 offers the opportunity to intervene in the tumor-specific FABP4 associations with other processes in the tumor cells and thus ultimately to disrupt the tumor cell-specific metabolism and to die or at least inhibit the growth of the tumor cells, but in particular inhibit the growth To contribute to progression to invasive tumors.
  • a sample from a tissue which is identified as tumor tissue by other methods in advance of a treatment with a pharmaceutical composition according to the invention and to examine the tissue sample for expression or overexpression of FABP4.
  • a detector substance according to the invention can be used to test in vivo for FABP4 dependency. If expression or overexpression of FABP4 compared to normal tissue of the same type is found, the use of the pharmaceutical composition according to the invention is indicated.
  • the substance binding to FABP4 additionally carries a cytotoxic and / or immunostimulating component. This then ultimately leads to the fact that almost exclusively tumor cells are killed, either by cytotoxicity or by attack by the stimulated immune system, while normal cells are practically completely preserved in the tissue.
  • the binding substance itself does not have to have an inhibitory effect on FABP4, since the binding substance then only has to function as a marker which carries the components to target tumor cells. If a cytotoxic component is used, it will be particularly recommended if the pharmaceutical composition is prepared for local application in tissue containing tumor cells, for example for injection.
  • FIGS. 1 and 2 The nucleic acid and protein sequence are shown in FIGS. 1 and 2 (SEQ ID NO. 1 and 2).
  • FABP4 is used for all human isoforms, known or new, based on nucleic acids or amino acids. These terms also include the short sequences disclosed in the context of this description, which originate from the isoforms, for example immunization sequences. Also included are homologs, the homology being at least 80%, preferably more than 90%, most preferably more than 95%, calculated with the program MEGALIGN (DNASTAR LASERGENE) in the version current at the time of the present application. In the case of the nucleic acid sequences, complementary or allelic variants are also included.
  • sequences comprises only partial sequences of the explicitly disclosed sequences, for example one or more exons, or sequences complementary thereto, with the proviso that, in the case of the nucleic acids, these partial sequences have a length sufficient for hybridization with a nucleic acid according to the invention, at least 50 bases , and, in the case of the proteins or peptides, bind to a protein- or peptide-specific target molecule with at least the same affinity.
  • all nucleic acids hybridizing with nucleic acids according to the invention are included, namely those which are under stringent conditions (5 ° C. to 25 ° C.
  • the invention also includes expression cassettes, ie one or more of the nucleic acid sequences according to the invention with at least one operatively linked control or regulatory sequence.
  • Such an expression cassette can also comprise a sequence for a known protein, a fusion protein being formed in the course of the translation from a known protein and a protein or peptide according to the invention.
  • Antisense sequences to the above nucleic acid sequences are also included.
  • RNA and correlating DNA and vice versa are included, as are genomic DNA and correlated cDNA and vice versa.
  • These partial sequences can be incorporated into nucleic acid or protein or peptide sequences that are otherwise different from FABP4.
  • treatment also includes prophylaxis, especially prophylaxis of progression to invasive tumors.
  • An inhibitor is a compound or substance which either inhibits the formation of FABP4 protein or reduces the activity of FABP4 protein formed, based on the FABP4 activity in the absence of the inhibitor.
  • an inhibitor can be a substance that interferes with the cascade of FABP4.
  • an inhibitor can be a substance which binds with the FABP4 formed, in such a way that further physiological interactions with endogenous substances are at least reduced.
  • Mimicry molecules are compounds that simulate the variable region, in particular the binding region of an antibody, and bind to a target molecule in the same place as the underlying antibody.
  • antibody includes polyclonal antibodies, monoclonal antibodies, non-human, humane and humanis ⁇ ated antibodies and phage display antibodies but also chimeric antibodies as well as specific fragments of the light and / or heavy chain of the variable region underlying antibodies of the above type and anti-idiotypic antibodies. The production or extraction of such antibodies with predetermined immunogens is well known to the average tachometer and need not be explained in more detail.
  • the term antibody also includes bispecific antibodies. Bispecific antibodies combine a defined immune cell activity with a specific tumor cell recognition, whereby tumor cells are killed. A bispecific antibody binds on the one hand to a trigger molecule of the immune effector cell (eg CD3, CD16, CD64) and on the other hand to antigens of the tumor target cell.
  • a trigger molecule of the immune effector cell eg CD3, CD16, CD64
  • Suitable counterions for ionic compounds are, for example, Na ", K Li or cyclohexylammonium.
  • Suitable solid or liquid pharmaceutical preparation forms are, for example, granules, powders, dragees, tablets, (micro) capsules, suppositories, syrups, juices, suspensions, emulsions, Drops or injectable solutions (iV, ip, im) as well as preparations with a protracted active ingredient release, in the production of which conventional auxiliaries such as carriers, explosives, binders, coating agents, swelling agents, lubricants or lubricants, flavors, sweeteners and solubilizers, Magnesium carbonate, titanium dioxide, lactose, mannitol and other sugars, talcum, milk protein, gelatin, starch, cellulose and its derivatives, animal and vegetable oils such as cod liver oil, sunflower, peanut or sesame oil
  • a pharmaceutical composition according to the invention can be produced by mixing at least one inhibitor used according to the invention in a defined dose with a pharmaceutically suitable and physiologically compatible carrier and, if appropriate, other suitable active ingredients, additives or auxiliaries with a defined inhibitor dose and preparing the desired dosage form.
  • Tumor cells express FABP4 differentially when normal cells of the same tissue type (of the same or different volunteers) do not express it. Tumor cells overexpress FABP4 specifically or differentially if FABP4 is expressed at least twice as much as normal cells of the same tissue type.
  • Cytotoxic components or groups are compounds which directly or indirectly induce apoptosis or lead to necrosis or at least inhibit growth.
  • radioisotopes for example 188Re, 213Bi, 99mTc, 90Y, 131J, 177Lu
  • such groups or compounds can in particular be cytostatics which are used in tumor therapy.
  • alkylating agents for example mechlorethamine, ifosfamide, chlorambucil, cyclophosphide, melphalan, alkylsulfonates, busulphan, nitrosoureas, carmustine, lomustine, semustin, triazenes, dacarbazine
  • antimetabolites for example folic acid antagonists, pyrididine
  • Analogs fluorouracil, fluorordesoxyuridine, cytarabine, gemcitabine, purine analogs, mercapturin
  • mitosis inhibitors e.g.
  • the coupling takes place in such a way that the affinity for FABP4 is reduced by no more than 90%, preferably 50%, based on the substance without a cytostatic group, and the cytostatic effect of the group is not reduced by more than 90%, preferably 50%, based on the compound without substance.
  • An immunostimulating component is usually a protein or an effective component thereof, which stimulates cells of the immune system.
  • cytokines such as M-CSF, GM-CSF, G-CSF, interferons, such as IFN-alpha, -beta, -gamma, interleukins such as IL-1 to -16 (except -8), human LIF, chemokines such as Rantes, MCAF, MIP-1-alpha, -beta, NAP-1 and IL-8.
  • a reporter group is an atom, molecule or a compound which, in conjunction with an assay based thereon, enables the detection of the reporter group and the compound or substance thus connected to the reporter group.
  • reporter groups and associated detection methods are: 32P labeling and intensity measurement using phosphoimager. Many other examples are known to the person skilled in the art and do not need to be listed in detail.
  • a substance that binds to FABP4 can be a substance that binds to a FABP4 protein or a FABP4 RNA.
  • Definitions expanded in the context of the above definition in relation to the narrow sense of the word also include the specific terms in the narrow sense of the word.
  • FIG. 1 FABP4 nucleic acid sequence
  • Example 1 The samples from Example 1 were subjected to an expression analysis on FABP4 using the GeneChip technology (Affimetrix). The results are shown in FIG. 3. The median expression values of different stages and subtypes of bladder cancer are shown. The values for the pTA tumors with and without subsequent progression are highlighted in dark. It can be seen that the median of the progressive tumors is 16x higher than that of the non-progressive tumors, i.e. Expression of the FABP4 gene is found almost exclusively in the tumor epithelium of patients in whom the tumor later took an invasive course. Specifically, FABP4 was strongly overexpressed in 17 of 21 tissues that showed progression to invasive tumors. In contrast, increased expression was only found in 3 of 24 tissues that showed a stable course.

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Abstract

Die Erfindung betrifft Verwendungen von FABP4 zur Diagnose und Behandlung von Urogenitaltumoren, insbesondere des Harnblasenkarzinoms, sowie zum Screenen nach Substanzen für solche Zwecke.

Description

Verwendungen von an FABP4 bindenden Substanzen zur Diagnose und Behandlung des Harnblasenkarzinoms.
Gebiet der Erfindung
Die Erfindung betrifft neue Verwendungen von FABP4 oder daraus abgeleiteten Sequenzen zum Screenen nach daran bindenden Substanzen, sowie die Verwendung von an FABP4 bin- denden Substanzen zur Diagnose und/oder Behandlung des Harnblasenkarzinoms .
Hintergrund der Erfindung und Stand der Technik
FABP4 steht für Fatty Acid Binding Protein 4. Die FABP4 gehört zu einer Familie homologer, cytosolisch lokalisierter Proteine. FABP4 wird auch Adipozyten Fatty Acid Binding Protein (A-FABP) , aP2 (in der Maus) oder Adi- pozyten Lipid Binding Protein (ALBP) genannt. FABPs zeichnen sich durch eine weitestgehend gewebespezifische Expression aus. FABP4 wird im Normalgewebe in Adipozyten exprimiert und macht dort ungefähr 1% der gesamten cy- tosolischen Proteinmenge aus. Durch die Bindung der. Fett- säuren an FABPs können sie im wässrigen Milieu der Zelle transportiert und gespeichert werden.
Die Expression von FABP4 in Urothelzellen in Normal- und Tumorgeweben ist sehr unterschiedlich. Man findet in Urothelnormalgewebe geringe Mengen an FABP4, einige, je¬ doch nicht alle papilläre Tumore weisen dagegen hohe Expressionswerte dieses Moleküls auf. In hochgradigen, invasiven Formen konnte dagegen überhaupt kein FABP4 mehr detektiert werden (Celis et al . , Cancer Res., 56 (20) : 4782-4790 (1996)). Ein funktioneller Zusammenhang zwischen einer FABP Expression und der Tumorentstehung ist noch nicht aufgeklärt. Insgesamt ergibt sich für die Ex- pressions uster ein sehr heterogenes Bild, weshalb es nicht prognostizierbar ist, ob oder in welchen Tumoren Überexpression stattfindet und was eine solche Überexpression letzlich bedeutet.
Das Harnblasenkarzinom ist der zweithäufigste urologische Tumor. Es tritt bei Männern mit einer Häufigkeit von 245 zu 100000 und bei Frauen von 65 zu 100000 auf. Unter den durch Krebs verursachten Todesfällen nimmt das Blasenkarzinom bei Männern die vierte und bei Frauen die sechste Position ein. Die Behandlung erfolgt zumeist durch Cystek- to ie, d.h. durch teilweise oder vollständige Entfernung der Harnblase. Dadurch ergeben sich nicht selten weitere Komplikationen für die erkrankte Person.
Das Harnblasenkarzinom entwickelt sich durch Entartung einzelner Zellen des Urothels. Das Urothel ist die Zellschicht, die das Körperinnere gegen den gebildeten Urin abschirmt. Es kleidet das Lumen des Nierenbeckens, der Harnleiter, der Harnblase und der Harnröhre aus.
Blasenkrebs entwickelt sich fast vollständig (>93%) als Adenokarzinom und ist gekennzeichnet durch die starke Tendenz zur Rezidivität, dem regelmäßigen Wiederauftreten auch nach erfolgter Behandlung. In den Industrieländern wird in die Entsteheung von Blasenkrebs vor allem auf den Einfluss von chemischen Noxen, wie aromatischen Aminen, hauptsächlich aber auf das Rauchen als Ursache zurückgeführt. Er kann relativ früh diagnostiziert werden und zwei Verlaufsformen annehmen.
Die häufigere Variante, die der papillären oder oberfläch- liehen pTa-Tumoren, hat eine gute Prognose, da sie nicht invasiv ist und sich gut operativ entfernen läßt. Die in- vasiven Formen wachsen dagegen in das Gewebe hinein und führen unbehandelt zu schwerster Symptomatik, wie Ly.αphknotenbefall und Metastasen. Die Todesfälle entsprin- gen fast ausschließlich dieser zweiten Gruppe. Kennzeichnend für den Verlauf ist, dass die papillären Tumoren sehr häufig stabil bleiben und somit keinen Progress zu den gefährlichen invasiven Formen zeigen. In 10-20% der Fälle kommt es aber im Verlauf von 5 Jahren zu einem Progress zu den aggressiven, muskelinvasiven Tumoren.
Eine Reihe von Genen wurde bisher auf die Eignung als prognostischer Marker im Harnblasenkarzinom untersucht. Hierbei ist vorrangig von Interesse, ob ein Patient mit nichtinvasiven, papillären Tumoren stabil in diesem Stadium verbleibt, oder ob er invasive Formen entwickeln wird. Zu den bisher untersuchten Markern gehören vor allem p53, p21 und das Retinoblastomgen Rb . Keiner der genannten Marker ermöglicht jedoch eine Prognose für einen individu- eilen Patienten mit ausreichender Sicherheit (Marberger et al., Eur. Urol., 40/5, Curric Urol 1-9 (2001)). Neuere, kommerziell erhältliche Tests (BTA-STAT, NMP22) fokussieren sich eher auf den Nachweis eines Urothelioms als auf die Prognose des Verlaufes.
Technisches Problem der Erfindung Der Erfindung liegt daher das technische Problem zugrunde, pharmazeutische Zusammensetzungen zur Diagnose, insbesondere zur Verlaufs- bzw. Progressionsprognose, und/oder zur Behandlung des Harnblasenkarzinoms anzugeben sowie Mittel zu deren Identifizierung.
Grundzüge der Erfindung und bevorzugte Ausführungsformen.
Zur Lösung dieses technischen Problems lehrt die Verwendung einer für FABP4 codierenden Nukleinsäure und/oder eines FABP4 Peptids oder Proteins zur Detektion des Harnblasenkarzinoms oder zur Detektion eines Risikos der Erkrankung an einem solchen Karzinom oder zur Detektion eines Risikos einer Progression eines papillären Harn- balsenkarzinoms zu einem invasiven Karzinom, wobei eine Urothelzellen-Gewebeprobe, insbesondere eine Harnblasen- Urothelzellen-Gewebeprobe, auf Transkription oder Übertranskription von FABP4 RNA oder auf Expression oder Über- expression eines FABP4 Proteins untersucht wird. Eine an für FABP4 codierende Nukleinsäure oder eine an FABP4 Protein oder Peptid bindende Detektorsubstanz, vorzugsweise enthaltend eine Reportergruppe, kann verwendet werden, wobei Bindung besagter Nukleinsäure und/oder besagten Pro- teins oder Peptids an die Detektorsubstanz halbquantitativ oder quantitativ detektiert wird. In diesem Zusammenhang lehrt die Erfindung weiterhin ein Testsyste zur (in vitro) Detektion eines vorstehend genannten Karzinoms oder eines Risikos der Erkrankung hieran oder der Progression- sprognose, enthaltend, Mittel zur quantitativen Messung der Expression von FABP4 in Gewebeproben, wobei diese Mittel beispielsweise Mittel zur Amplifikation und spezifischen Detektion von FABP4 RNA und/oder eine Detektorsubstanz, insbesondere spezifisch für FABP4 Protein, sein können.
Die Erfindung lehrt weiterhin die Verwendung einer FABP4 RNA oder eines FABP4 Proteins oder Peptids zum Screenen nach daran bindenden Substanzen, insbesondere prospektiven Wirkstoffen zur Modulierung, insbesondere Inhibierung, von besagter RNA oder besagtem Protein oder Peptid, oder prospektiven Detektorsubstanzen, wobei eine prospektive Substanz oder eine Mischung solcher prospektiver Substanzen mit besagter RNA oder besagtem Protein oder Peptid kontaktiert wird, wobei mit einem Bindungsassay Bindungsereignisse festgestellt werden, und wobei eine bindende prospektive Substanz, ggf. nach Dekonvolutierung, selek- tiert wird. In diesen Zusammenhängen lehrt die Erfindung weiterhin ein Screeningsystem zur Ermittlung von für die Behandlung von vorstehenden Tumorerkrankungen geeigneten Wirksubstanzen enthaltend eine FABP4 Nukleinsäure oder ein FABP4 Protein bzw. Peptid, Mittel zur Bestimmung von (in vitro) Bindungsereignissen an die FABP4 Nukleinsäure oder an das FABP4 Protein bzw. Peptid, und/oder Mittel zur Bestimmung der (in vitro) Aktivität von FABP4 Protein. Hierbei kann FABP4 in einem zellfreien oder einem zeilbasierten System, letzteres insbesondere aufweisend Urothelzellen des Urogenitaltraktes, insbesondere der Harnblase, bzw. eine hieraus entwickelte Zelllinie, vorliegen. Mittel zur Bestimmung von Bindungsereignissen können beispielsweise natürlicherweise in normalen oder in Tumorzellen z.B. an FABP4 Protein bindende Substanzen bzw. Assoziationspartner umfassen, wobei über deren (freie) Konzentration bzw. Konzentrationsänderung bei Zugabe prospektiver Wirksubstanzen und/oder Detektorsubstanzen eine kompetitive Bindung einer bindenden Wirk- oder Detektorsubstanz bestimmt wird. Solche Mittel können aber auch physikalische bzw. physikalisch-chemische Methoden umfassen, wie beispielsweise Röntgenstrukturanalyse und/oder NMR, insbesondere zweidirαensionale 1H/1H oder 15N/1H oder 14C/1H Korrelationsspektroskopie. Hierbei werden Spektren vor und nach der Zugabe einer prospektiven Wirk- oder Detektorsubstanz miteinander verglichen und im Falle von Änderungen ist ein Bindungsereignis festgestellt. Es kann mit Spektren oder dergleichen entweder von FABP4 oder der prospektiven Substanz oder mit einer Kombination aus beidem gearbeitet werden. Selbstverständlich sind auch alle anderen fachüblichen Methoden der Bestimmung von Bindungsereignissen und/oder Proteinaktivitäten einsetzbar. Beispielsweise kann eine prospektive Substanz (oder mehrere Substanzen, räumlich voneinander getrennt) immobilisiert sein, wobei dann markiertes FABP4 aufgetragen wird. Ein Bindungsereignis wird dann nach Auftrag und folgender Spülung durch Detektion, ggf. ortlich aufgelöst, der Markierung gebundenen FABP4s festgestellt. Umgekehrt kann FABP4 immobilisiert sein und es wird eine markierte prospektive Substanz oder eine Mischung hieraus aufgetragen. Bindungsereignisse werden analog der vorstehenden Variante festgestellt.
Die Erfindung lehrt schließlich die Verwendung einer FABP4 inhibierenden oder daran bindenden Substanz zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung und/oder Diagnose des Harnblasenkarzinoms bzw. der Progressionsprognose bei Harnblasenkarzinom-Erkrankungen.
Die Substanz kann ein Antikörper sein, welcher durch Immunisierung eines nicht-menschlichen Säugetiers mit einem FABP4 Peptid oder Protein, mit hierfür codierender cDNA transfizierte Zellen, mit endogen ein solches Peptid oder Protein exprimierenden Tumorzellen, oder mit rekombinant hergestellten FABP4 Peptiden oder Proteinen, erhältlich ist, oder ein Phage-Display-Antikörper sein. Die Substanz kann aber auch eine Mimikryverbindung eines Antikörpers gegen ein FABP4 Peptid oder Protein sein. Die Substanz kann schließlich ein Apta er, eine antisense RNA, ein Ri- bozym oder eine siRNA gegen FABP4 Nukleinsäuren sein. Die Substanz kann zusätzlich eine zytotoxische und/oder immun- stimulierende Komponente tragen.
Bevorzugt ist es, wenn die vorstehenden, an FABP4 Protein bindenden Substanzen in der Verwendung zu therapeutischen Zwecken spezifisch an das FABP4 Protein binden und es in seiner biologischen Aktivität modulieren. Dies ist nicht erforderlich im Falle der Fusion bzw. Verbindung der Substanz mit einer zytotoxischen Komponente. Dies ist weiterhin nicht erforderlich, wenn die Substanz der Gewinnung eines anti-idiotypischen Antikörpers dient, welcher' vom Immunsystem eines Patienten aufgrund seiner nicht- humanisierten Form als körperfremd erkannt wird und dem Immunsystem ansonsten ein FABP4-Antigen präsentiert.
Die pharmazeutische Zusammensetzung kann zur beliebigen Applikation, beispielsweise i.v. oder i.p. Injektion, hergerichtet sein. Eine Herrichtung zur lokalen Applika¬ tion in Tumorzellen enthaltendem Gewebe wird sich empfehlen im Falle des Einsatzes einer zytotoxischen Komponente.
Die Erfindung läßt sich im Rahmen eines Verfahrens zur Diagnose bzw. Progressionsprognose einer Tumorerkrankung des Harnblasenkarzinoms verwenden, wobei eine Detektorsubstanz in einer Ausführungsform mit einer Reportergruppe in zu untersuchendes Gewebe, ggf. in vitro nach Gewebeentnahme, appliziert wird, wobei das zu untersuchende Gewebe dann einer Detektionsverfahrenstufe unter- worfen wird, welche sensitiv für die Reportergruppe ist, und wobei im Fall der Detektion eines definierten Mindestwertes der Reportergruppe im Gewebe das Gewebe als Tumorzellen enthaltend qualifiziert bzw. als progressionsgefährdet oder nicht progressionsgefährdet eingestuft wird, sowie eines Verfahrens zur Behandlung einer Harnblasentumor-Erkrankung, wobei eine erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzung in einer physiologisch wirksamen Dosis einem Patienten dargereicht wird. Im Falle der Diagnose bzw. Progressionsprognose kann zusätzlich oder alternativ eine Gewebeprobe mit einem erfindungsgemäßen Testsystem auf FABP4 Expression untersucht werden.
Die Erfindung beruht insbesondere auf der Erkenntnis, daß FABP4 in verschiedenen papillären Tumoren des Harnblasenkarzinoms unterschiedlich exprimiert wird, i.e. in besagten Tumorgeweben ist die Expression im Falle solcher papillären Karzinome, die in späteren Verlauf invasiv werden, höher, verglichen mit normalen Zellen gleichen Gewebes, und im Falle solcher papillärer Karzinome, die stabil bleiben, dagegen niedrig, und der daraus herleitbaren technische Lehre, daß FABP4 als Zielmolekül bei der Diagnostik, insbesondere Progressionsprognose, und Therapie bzw. Prophylaxe insbesondere der invasiven Tumorer- krankungen eingesetzt werden kann. FABP4 kann also als spezifischer Marker zur Identifizierung von Tumorzellen in den besagten Tumorgeweben dienen, welche ein Risiko aufweisen, invasive Tumorgewebe zu bilden. Auf der anderen Seite bietet die Inhibierung von FABP4 die Möglichkeit, in die Tumor-spezifischen FABP4 Assoziationen mit anderen Prozessen in den Tumorzellen einzugreifen und somit letztendlich den tumorzellenspezifisch veränderten Stoffwech- sei zu stören und zu einem Absterben oder zumindest einer Wachstumshemmung der Tumorzellen, insbsondere aber einer Hemmung der Progression zu invasiven Tumoren, beizutragen.
Im Rahmen der Efindung kann es sich empfehlen, im Vorfeld einer Behandlung mit einer erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzung eine Probe aus einem Gewebe, welches als Tumorgewebe mit anderen Methoden identifiziert ist, zu entnehmen und die Gewebeprobe auf Expression bzw. Überexpression von FABP4 zu untersuchen. Alternativ kann mit einer erfindungsgemäßen Detektorsubstanz zur Diagnose in vivo auf FABP4 Abhängigkeit getestet werden. Wird eine Expression bzw. Überexpression von FABP4 gegenüber Normalgewebe gleichen Typs festgestellt, so ist die Anwendung der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzung indiziert.
Generell ist es im Rahmen der Erfindung möglich, patientenspezifisch auf differentielle Expression zu untersuchen, wobei Normalgewebeprobe und Tumorgewebeproben bzw. • tumorverdächtige Gewebeproben dem (gleichen) Patienten entnommen und vergleichend auf Werte der FABP4 Expression untersucht werden.
Handelt es sich bei dem Tumor um einem Typus, bei welchem Tumorzellen FABP4 exprimieren, Normalzellen gleichen Gewebetyps jedoch nicht, so ist es besonders bevorzugt, wenn die an FABP4 bindende Substanz zusätzlich eine zytotox- ische und/oder immunstimulierende Komponente trägt. Dies führt dann letztendlich dazu, dass praktisch ausschließlich Tumorzellen getötet werden, sei es durch die Zy- totoxizität, sei es durch Angriff durch das stimulierte Immunsystem, während Normalzellen in dem Gewebe praktisch vollständig erhalten bleiben. In dieser Ausführungsform braucht die bindende Substanz selbst nicht inhibierend auf FABP4 zu wirken, da die bindende Substanz dann lediglich als Marker funktionieren muß, welcher die Komponenten zu Ziel-Tumorzellen trägt. Im Falle des Einsatzes einer zyto- toxischen Komponente wird es sich besonders empfehlen, wenn die pharmazeutische Zusammensetzung zur lokalen Applikation in Tumorzellen enthaltendem Gewebe hergerichtet ist, beispielsweise zur Injektion.
Definitionen und weitere Ausführungsformen der Erfindung.
Die Nukleinsäure- sowie Proteinsequenz sind in den Figuren 1 und 2 dargestellt (Seq.-ID No . 1 und 2) .
Im Rahmen dieser Beschreibung wird die Bezeichnung FABP4 für alle humanen Isoformen, bekannt oder neu, auf Nukleinsäuren- oder Aminosäurenbasis, verwendet. Mit diesen Begriffen mit umfaßt sind auch die im Rahmen dieser Beschreibung offenbarten kurzen Sequenzen, welche aus den Isoformen stammen, beispielsweise Immunisierungssequenzen. Weiterhin mit umfaßt sind auch Homologe, wobei die Homologie zumindest 80%, vorzugsweise mehr als 90%, höchstvor- zugsweise mehr als 95%, beträgt, berechnet mit dem Programm MEGALIGN (DNASTAR LASERGENE) in der zum Zeitpunkt der vorliegenden Anmeldung aktuellen Fassung. Im Falle der Nukleinsäuresequenzen sind auch komplementäre oder al- lelische Varianten mit umfaßt. Weiterhin sind Sequenzen umfaßt, welche lediglich Teilsequenzen der explizit offenbarten Sequenzen, beispielsweise ein Exon oder mehrere Exons, oder komplementärer Sequenzen hierzu darstellen, mit der Maßgabe, daß diese Teilsequenzen im Falle der Nuk- leinsäuren eine für eine Hybridisierung mit einer erfindungsgemäßen Nukleinsäure hinreichende Länge, zumindest 50 Basen, aufweisen und im Falle der Proteine bzw. Peptide mit zumindest gleicher Affinität an ein protein- oder pep- tidspezifisches Zielmolekül binden. Weiterhin sind alle mit erfindungsgemäßen Nukleinsäuren hybridisierende Nukleinsäuren umfaßt, nämlich solche, die unter stringenten Bedingungen (5°C bis 25°C unterhalb der AufSchmelztemperatur; siehe ergänzend J.M. Sambrook et al . , A laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989) und E.M. Southern, J Mol Biol, 98:503ff (1975)) hybridisieren. Es versteht sich, daß die Erfindung auch Expressionskassetten umfaßt, i.e. eine oder mehrere der erfindungsgemäßen Nukleinsäuresequenzen mit mindestens einer operativ verbundenen Kontroll- oder regulatorischen Se- quenz. Eine solche Expressionskassette kann auch eine Sequenz für ein bekanntes Protein umfassen, wobei im Zuge der Translation ein Fusionsprotein aus einem bekannten Protein und einem erfindungsgemäßen Protein oder Peptid entsteht. Ebenso sind auch antisense Sequenzen zu den vor- stehenden Nukleinsäuresequenzen umfaßt. Schließlich sind RNA sowie damit korrelierende DNA und umgekehrt umfaßt, ebenso wie genomische DNA als auch korrelierte cDNA und umgekehrt .
Im Zusammenhang mit erfindungsgemäßen Verwendungen umfas¬ sen die Begriffe der FABP4 Nukleinsäuren oder Protein bzw. Peptide neben den Volllängen der offenbarten Sequenzen (siehe auch vorstehender Absatz) auch Teilsequenzen hieraus, und zwar mit einer Mindestlänge von 12 bis 30 Nukleotiden, vorzugsweise 30 bis 90 Nukleotiden, im Falle der Nukleinsäuren und einer Mindestlänge von 4 bis 10 Aminosäuren, vorzugsweise 10 bis 30 Aminosäuren, im Falle der Peptide oder Proteine. Diese Teilsequenzen können in ansonsten von FABP4 verschiedene Nukleinsäuren- oder Protein- bzw. Peptidsequenzen eingebaut sein.
Der Begriff der Behandlung umfaßt auch die Prophylaxe, insbesondere die Prophylaxe der Progression zu invasiven Tumoren.
Als Inhibitor ist eine Verbindung oder Substanz bezeichnet, welche entweder die Bildung von FABP4 Protein in- hibiert oder gebildetes FABP4 Protein in der Aktivität reduziert, bezogen auf die FABP4 Aktivität in Abwesenheit des Inhibitors. Insofern kann ein Inhibitor einerseits eine Substanz sein, welche in der Entstehungskaskade von FABP4 inhibierend eingreift. Auf der anderen Seite kann ein Inhibitor eine Substanz sein, welche mit gebildetem FABP4 eine Bindung eingeht, und zwar dergestalt, dass weitere physiologische Wechselwirkungen mit endogenen Substanzen zumindest reduziert sind.
Mimikry-Moleküle sind Verbindungen, die den variablen Bereich, insbesondere den Bindungsbereich eines Antikörpers, nachbilden und an gleicher Stelle eines Zielmoleküls binden, wie der zu Grunde liegende Antikörper.
Der Begriff der Antikörper umfaßt polyklonale Antikörper, monoklonale Antikörper, nicht-humane, humane und humanis¬ ierte Antikörper, sowie Phage-Display-Antikörper, aber auch chimäre Antikörper sowie spezifische Fragmente der leichten und/oder der schweren Kette des variablen Bereiches zu Grunde liegender Antikörper vorstehender Art sowie anti-idiotypische Antikörper. Die Herstellung bzw. Gewinnung solcher Antikörper mit vorgegebenen Immunogenen ist dem Durchschnittstachmann wohl vertraut und braucht nicht näher erläutert zu werden. Weiterhin umfaßt der Begriff der Antikörper bispezifische Antikörper. Bispezifische Antikörper kombinieren eine definierte Immunzellaktivität mit einer spezifischen Tumorzellerken- nung, wodurch Tumorzellen getötet werden. Ein bispezifischer Antikörper bindet einerseits an ein Auslösemolekül der Immun-Effektorzelle (z.B. CD3, CD16, CD64) und andererseits an Antigene der Tumorzielzelle.
Die galenische Herrichtung einer erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzung kann in fachüblicher Weise erfolgen. Als Gegenionen für ionische Verbindungen kommen beispielsweise Na", K Li oder Cyclohexylammonium infrage . Geeigente feste oder flüssige galenische Zubereitungsfor- men sind beispielsweise Granulate, Pulver, Dragees, Tabletten, (Mikro-) Kapseln, Suppositorien, Sirupe, Säfte, Suspensionen, Emulsionen, Tropfen oder injizierbare Lösungen (i.V., i.p., i.m.) sowie Präparate mit protrahierter Wirkstoff-Freigabe, bei deren Herstellung übliche Hilfsmittel wie Trägerstoffe, Spreng-, Binde-, Überzugs-, Quellungs-, Gleit- oder Schmiermittel, Geschmacksstoffe, Süßungsmittel und Lösungsvermittler, Verwendung finden. Als Hilfsstoffe sei Magnesiumcarbonat, Titandioxyd, Lac- tose, Mannit und andere Zucker, Talcum, Milcheiweiß, Gela- tine, Stärke, Zellulose und ihre Derivate, tierische und pflanzliche Öle wie Lebertran, Sonnenblumen-, Erdnuss- oder Sesamöl, Polyethylenglycole und Lösungsmittel, wie etwa steriles Wasser und ein- oder mehrwertige Alkohole, beispielsweise Glycerin, genannt. Eine erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzung ist dadurch herstellbar,, dass mindestens ein erfindungsgemäß verwendeter Inhibitor in definierter Dosis mit einem pharmazeutisch geeigneten und physiologisch verträglichen Träger und ggf. weiteren geeigneten Wirk-, Zusatz- oder Hilfsstoffen mit definierter Inhibitordosis gemischt und zu der gewünschten Darreichungsform hergerichtet ist.
Tumorzellen exprimieren FABP4 differenziell, wenn Normalzellen des gleichen Gewebetyps (des gleichen oder verschiedener Probanden) dieses nicht exprimieren. Tumorzellen überexprimieren FABP4 spezifisch bzw. differ- enziell, wenn FABP4 im Vergleich zu Normalzellen des gleichen Gewebetyps zumindest in doppelter Menge exprim- iert wird.
Zytotoxische Komponenten bzw. Gruppen sind Verbindungen, welche direkt oder indirekt Apoptose einleiten bzw. zu Nekrose führen oder zumindest wachstumshemmend wirken. Solche Gruppen bzw. Verbindungen können neben Radioisotopen (z.B. 188Re, 213Bi, 99mTc, 90Y, 131J, 177Lu) insbesondere Zytostatika sein, welche in der Tumortherapie eingesetzt werden. Beispiele hierfür sind: Alkylantien (z.B. Mechlorethamin, Ifosfamid, Chlorambucil, Cyclophos- pha id, Melphalan, Alkylsulfonate, Busulphan, Nitroso- harnstoffe, Carmustin, Lomustin, Semustin, Triazene, Dacarbazin) , Antimetaboliten (z.B. Folsäure-Antagonisten, Methotrexat, Pyri idin-Analoga, Fluoruracil, Fluord- esoxyuridin, Cytarabin, Gemcitabin, Purin-Analoga, Mercap- topurin) , Mitosehemmer (z.B. Vincaalkaloide, Voncristin, Vinblastin, Paclitaxal, Docetaxel, Protaxel) , Epipodophyl- lotoxine (z.B. Etoposid, Teniposid) , Antibiotika (z.B. Dactinomycin, Daunorubicin, Idarubicin, Anthracycline, Bleomycin, L-Asparaginase) , Platinkomplexverbindungen (z.B. Cisplatin) , Hormone und verwandte Verbindungen (z.B. Nebennierenrindensteroide, Aminogluthetimid, Gestagene, Östrogene, Androgene, Antiöstrogene, Tamoxifen, Sterio- danaloga, Flutamid) . Bei Bindung einer solchen Verbindung mit einer an FABP4 bindenden Substanz erfolgt die Kopplung dergestalt, daß die Affinität zu FABP4 um nicht mehr als 90%, vorzugsweise 50%, bezogen auf die Substanz ohne zyto- statische Gruppe, reduziert ist und die zytostatische Wirkung der Gruppe um nicht mehr als 90%, vorzugsweise 50%, bezogen auf die Verbindung ohne Substanz, reduziert ist.
Eine immunstimulierende Komponente ist meist ein Protein oder ein wirksamer Bestandteil hiervon, welches Zellen des Immunsystems stimuliert. Beispiele hierfür sind: Zytokine, wie M-CSF, GM-CSF, G-CSF, Interferone, wie IFN-alpha, -beta, -gamma, Interleukine wie IL-1 bis -16 (außer -8), human LIF, Chemokine wie Rantes, MCAF, MIP-1-alpha, -beta, NAP-1 und IL-8.
Eine Reportergruppe ist ein Atom, Molekül oder eine Verbindung, welche in Verbindung mit einem hierauf abgestell- ten Assay den Nachweis der Reportergruppe und der somit mit der Reportergruppe verbundenen Verbindung oder Substanz ermöglicht. Beispiele für Reportergruppen und hiermit assoziierte Detektions ethoden sind: 32P-Labeling und Intensitätsmessung mittels Phosphoimager . Viele weitere Beispiele sind dem Durchschnittsfachmann bekannt und bedürfen nicht der detaillierten Aufzählung. Eine an FABP4 bindende Substanz kann eine Substanz sein, welche an ein FABP4 Protein oder eine FABP4 RNA bindet. .
Im Rahmen der vorstehenden Definition gegenüber dem engen Wortsinn erweiterte Begriffsbestimmungen umfassen auch die bestimmten Begriffe im engen Wortsinn.
Beispiele .
Im Folgenden wird die Erfindung anhand von lediglich bevorzugte Ausführungsformen darstellenden Beispielen und Figuren näher erläutert. Es zeigen:
Fig. 1: Nukleinsäuresequenz von FABP4
Fig. 2: Aminosäurensequenz von FABP4
Fig. 3: Expressionsanalyse von FABP4 in verschiedenen Stadien und Subtypen des Harnblasenkarzinoms,
Beispiel 1: Untersuchte Gewebeproben
Es wurden 46 Gewebe von 17 Patienten mit zum Zeitpunkt der Erhebung nichtinvasiven, papillären pTA-Tumoren entnommen. Der weitere Krankheitsverlauf aller Patienten wurde in den folgenden drei Jahren überwacht und den Gewebeproben zugeordnet. 21 der Gewebe stammten dabei von Patienten, die innerhalb der drei Jahre Progress zu einer invasiven Form des Harnblasenkarzinoms zeigten. Die verbliebenen 24 Gewebe gehörten zu Patienten, deren Blasentumor in gleichen Zeitraum stabil im pTa-Stadium verblieb.
Beispiel 2: Expressionsprofile der untersuchten Gewebe
Die Proben aus Beispiel 1 wurden einer Expressionsanalyse auf FABP4 mittels der GeneChip-Technologie (Affimetrix) unterworfen. Die Ergebnisse sind in der Figur 3 dargestellt. Dargestellt sind die medianen Expressionswerte verschiedener Stadien und Subtypen des Harnblasenkarzinoms. Die Werte für die pTA Tumoren mit und ohne späterer Progradienz sind dunkel hervorgehoben. Man erkennt, dass der Mediän der Progradienten Tumoren 16x höher als der der nicht-progradienten Tumoren ist, i.e. Expression des Gens FABP4 fast ausschließlich im Tumorepithel von Patienten gefunden wird, bei denen der Tumor zu einem späteren Zeitpunkt einen invasiven Verlauf nahm. Im Einzelnen wurde in 17 von 21 Geweben, die Progression zu in- vasiven Tumoren zeigten, FABP4 stark überexprimiert . Demgegenüber wurde erhöhte Expression nur in 3 von 24 Geweben gefunden, die stabilen Verlauf zeigten.

Claims

Patentansprüche :
1. Verwendung einer für FABP4 codierenden Nukleinsäure und/oder eines FABP4 Peptids oder Proteins zur Detektion von Tumoren des Urogenitaltraktes, insbesondere des Harnblasenkarzinoms, oder zur Detektion eines Risikos der Erkrankung an einem solchen Tumor oder zur Detektion eines Risikos einer Progression eines papillären Uro- genitaltumors zu einem invasiven Karzinom, wobei eine
Urothelzellen-Gewebeprobe, insbesondere eine Harnblasen- Urothelzellen-Gewebeprobe, auf Transkription oder Übertranskription von FABP4 RNA oder auf Expression oder Überexpression eines FABP4 Proteins untersucht wird.
2. Verwendung nach Anspruch 1, wobei eine an für FABP4 codierende Nukleinsäure oder eine an FABP4 Protein oder Peptid bindende Detektorsubstanz, vorzugsweise enthal- tend eine Reportergruppe, verwendet wird, wobei Bindung besagter Nukleinsäure und/oder besagten Proteins oder Peptids an die Detektorsubstanz halbquantitativ oder quantitativ detektiert wird.
3. Verwendung einer FABP4 RNA oder eines FABP4 Proteins oder Peptids zum Screenen nach daran bindenden Substanzen, insbesondere nach prospektiven Wirkstoffen zur Inhibierung von besagter RNA oder besagtem Protein oder Peptid oder nach prospektiven Detektorsubstanzen, wobei eine prospektive Substanz oder eine Mischung solcher prospektiver Substanzen mit besagter RNA oder besagtem Protein oder Peptid kontaktiert wird, wobei mit einem Bindungsassay Bindungsereignisse festgestellt werden, und wobei eine bindende prospektive Substanz, ggf. nach Dekonvolutierung, selektiert wird.
4. Verwendung einer FABP4 inhibierenden oder daran bindenden Substanz zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung von Urogenitaltumoren, insbesondere des Harnblasenkarzinoms oder zur Herstel- lung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Diagnose eines solchen Tumors oder zur Diagnose eines Progressionsrisikos eines nicht invasiven solchen Tumors zu einer invasiven Form.
5. Verwendung nach Anspruch 4, wobei die Substanz ein Antikörper ist, welcher beispielsweise durch Immunisierung eines nicht-menschlichen Säugetiers mit einem FABP4 Peptid oder Protein, mit FABP4 transfizierten Zellen, oder einer hierfür für codierenden cDNA, erhältlich ist, oder ein Phage-Display Antikörper ist.
6. Verwendung nach Anspruch 4, wobei die Substanz eine Mimikriverbindung eines Antikörpers gegen ein FABP4 Pep¬ tid oder Protein ist.
7. Verwendung nach Anspruch 4, wobei die Substanz, ein Aptamer, eine antisense RNA, eine siRNA, oder ein Ri- bozym ist.
8. Verwendung nach einem der Ansprüche 4 bis 7, wobei die Substanz zusätzlich eine zytotoxische und/oder immun-- sti ulierende Komponente trägt.
9. Verwendung nach einem der Ansprüche 4 bis 8, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung zur lokalen Applikation in Tumorzellen enthaltendem Gewebe hergerichtet ist.
10. Verfahren zur Diagnose einer Urogenitaltumorerkrankung, insbesondere eines Harnblasenkarzinoms, oder des Risikos der Progression eines solchen Tumors zu einer invasiven Form wobei eine Detektorsubstanz in einer Ausführungsform mit einer Reportergruppe in zu untersuchendes Gewebe appliziert wird, wobei das zu untersuchende Gewebe dann einer Detektionsverfahren- stufe unterworfen wird, welche sensitiv für die Reportergruppe ist, und wobei im Fall der Detektion eines definierten Mindestwertes der Reportergruppe im Gewebe das Gewebe als Tumorzellen enthaltend qualifiziert oder als progressionsgefährdet wird.
11. Verfahren zur Behandlung einer Urogenitaltumorerkrankung, insbesondere eines Harnblasenkarzinoms, wobei eine pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 4 bis 9 in. einer physiologisch v/irksamen Dosis und galenisch für die anzuwendende Dar- reichungsform hergerichtet einem Patienten dargereicht wird.
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