WO2004054600A1 - Compuesto farmacéutico que contiene silimarina y carbopol®, su proceso de fabricación y su uso como regenerador del tejido y células pancreáticas de secreción endógena dañados por diabetes mellitus - Google Patents
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Definitions
- insulin and groups of hypoglycemic drugs such as Sulfonylureas, Biguanides, inhibitors of -glucocidase and derivatives of Thiazolidinedione are used, whose mechanism of action is carried out either by stimulating the insulin secretion or by increasing the action of this hormone on body tissues.
- hypoglycemic drugs such as Sulfonylureas, Biguanides, inhibitors of -glucocidase and derivatives of Thiazolidinedione
- the half-life of these drugs varies from 1.5 to 48 hours.
- the duration of its effect is for a short period of time and none of them carries out the regeneration of ⁇ -cells. pancreatic that produce insulin and allow to restore the function of this hormone.
- both exogenous insulin and hypoglycemic drugs can cause side effects such as hypoglycemia, diarrhea, abdominal discomfort, nausea and anorexia (Davis, S. and Granner, D. Insulin, oral hypoglycemic drugs and pharmacological properties of the endogenous pancreas.
- Silymarin has been shown to have protective and regenerative activity on liver cells against damage caused by different toxic substances such as: phalloidin, ⁇ -amanitin, alcohol, galactosamine, heavy metals, carbon tetrachloride, toluene xylene or for some drugs such as: acetaminophen, indomethacin, isoniazid and tolbutamide (Wellington, K., Harvis, B., Silymarin: A review of its clinical properties in the management of hepatic disorders. Biodrugs.
- silymarin In human, silymarin has been used in the treatment of liver diseases such as cirrhosis, poisoning by the fungus Amanita phalloides and in exposure to toxic substances (Wellington, K., Harvis, B., Silymarin: A review of its clinical properties in the management of hepatic disorders, Biodrugs, 15: 465-489, 2001).
- silymarin increases pancreatic glutathione content , liver and therefore its blood level.
- the authors of the aforementioned work also found that silymarin prevented the elevation of free radicals in the pancreas during the induction of diabetes mellitus, which resulted in a decrease in blood glucose which is elevated in this disease.
- the compound of Silymarin and Carbopol was used as an antidiabetic agent which is intended to be protected by means of the present application since it presented an effect unknown as a pancreatic regenerator and controller of serum glucose concentration, which is not regulated in diabetic patients.
- the present invention corresponds to the use of Silymarin with Carbopol as a tissue regenerator and endogenous secretion pancreatic cells damaged by Diabetes Mellitus, which suppresses the side effects and inconveniences that occur with the administration of drugs currently used in the treatment of Diabetes Mellitus. .
- the Silymarin and Carbopol compound is obtained from the following steps: a) 0.5% dissolution of Carbopol in deionized water in a magnetic stirrer for one hour. b) Addition of Silymarin in a percentage of 5 to the previous solution and is stirred for a minimum period of one hour until a homogeneous mixture is achieved.
- the homogeneous mixture may be presented with any vehicle in formulations for oral administration such as: solution, suspension, emulsion, hard gelatin capsules, soft gelatin capsules, immediate-release tablets, sustained-release tablets, extended-release tablets, tablets. controlled release
- An illustrative but not limiting example to demonstrate the pancreatic regenerative activity of the compound of Silymarin and Carbopol is in which it was administered orally at a dose of 200 mg / Kg either simultaneously with the diaxhogenic agent Aloxana or separately .
- the joint treatment of the compound of Silymarin and Carbopol with Aloxana was carried out in two ways. In the first one, a dose of 200 mg / kg of the compound of Silymarin and Carbopol was administered orally at 6, 24 and 48 hours (two days) after a first dose. In the second, in addition to the doses mentioned in the first mode, the administration was extended every 24 hours after the last dose for another five days (seven days). In both cases, the dose of Aloxana was 150 mg / Kg, which was administered by route. subcutaneous one hour after the first dose of the compound of Silymarin and Carbopol.
- Another example that was also used to demonstrate the pancreatic regenerative effect of the compound of Silymarin and Carbopol is in which the effect of this compound was tested separately with the diabetogenic agent, that is, Aloxana was first administered and after 20 days The daily treatment with the compound of Silymarin and Carbopol was started at the same doses already mentioned in the two previous cases for a period of 4 to 7 weeks.
- the demonstration of the antidiabetic effect of this compound of Silymarin and Carbopol is described in the examples cited below.
- Blood glucose determination was carried out by the Baner method. This consisted of taking 50 ⁇ l of serum to which 3.0 ml of ortho-toluidine reagent that reacts with aldohexoses and glycosamine form and a Schiff base were added, the green color developed has a maximum absorption at 620 nm and is proportional to the amount of glucose present.
- the determination of serum glucose was performed before the administration of the drugs and at 3, 5, 15 and 30 days after the treatment.
- the determination of serum glucose was performed prior to the administration of any drug, 20 days after the application of Aloxana and later every week after treatment with the compound of Silymarin and Carbopol was started.
- the compound of Silymarin and Carbopol administered jointly with the Diabetogenic agent, Aloxana prevented the increase in serum glucose concentration that occurred with the administration of Aloxana in a unique way.
- the results obtained from the treatment with the compound of Silymarin and Carbopol initiated twenty days after the administration of Aloxana showed that the serum glucose concentration values were significantly elevated, approximately 400% above the normal value (before start treatment with the compound of Silymarin and Carbopol) were gradually decreasing until reaching normal levels in an average time of seven weeks. Treatment with the compound of Silymarin and Carbopol administered alone did not change the serum glucose concentration.
- Example 2 Determination of blood insulin concentration by the ELISA method (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay).
- the reaction was terminated by the addition of 50 ⁇ l of sulfuric acid and read at 450 nm in an ELISA reader in order to determine the concentration of insulin in each of the samples.
- the determination of serum insulin was carried out before the administration of the drugs and at 3, 5, 15 and 30 days after the treatment.
- the determination of serum insulin was performed prior to the administration of any drug, 20 days after the application of Aloxana and at the end of treatment with the compound of Silymarin and Carbopol (when glucose levels were in the range of normal values).
- HE hematoxylin and eosin
- pancreatic tissue corresponding to the head of the pancreas.
- cuts Once the cuts have been obtained (described in example 3), they are placed on slides and the tissue is dewaxed and rehydrated. It starts in pure xylol, with two changes of 10 minutes each. Subsequently the samples are passed to a mixture of ethanol-xylol for 10 minutes and then to alcohols of different percentages: 100, 90, 80 and 70% for five minutes in each. Finally, they are passed to a solution of PBS (phosphate buffered solution) for 30 minutes to subsequently carry out the immunostaining process.
- PBS phosphate buffered solution
- pancreatic activity of antioxidant enzymes was determined: superoxide dismutase, glutathione peroxidase and catalase. To perform such a determination, the pancreas was weighed, homogenized with 50mM phosphate buffer, centrifuged at 3000 rpm, the supernatant was removed. The activity of the enzymes mentioned was determined in this.
- Superoxide dismutase This quantification was carried out by the method of Prasad et al. (1992). Superoxide ions are formed by xanthine and xanthine oxidase. These ions react with tetrazolium blue and form a colorful compound that can be quantified spectrophotometrically to
- a unit of superoxide dismutase can inhibit the formation of this compound by 50%.
- Glutathione peroxidase This quantification was performed by the method of Prasad et al. (1992). This enzyme catalyzes the breakdown of H 2 O 2 by NADPH.
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Abstract
La presente invención se refiere a un nuevo compuesto que contiene Silimarina con Carbopol® para el tratamiento de la Diabetes Mellitus. Este compuesto regenera morfológica y estructuralmente el daño que se presenta en el tejido pancreático en la Diabetes Mellitus, regenera las células pancreáticas productoras de insulina (células β). Por lo tanto regula los niveles séricos de esta hormona. Así mismo, restaura y mantiene las concentraciones normales de la glucosa sanguínea.
Description
COMPUESTO FARMACÉUTICO QUE CONTIENE SILIMARINA Y CARBOPOL, SU PROCESO DE FABRICACIÓN Y SU USO COMO
REGENERADOR DEL TEJIDO Y CÉLULAS PANCREÁTICAS DE SECRECIÓN ENDÓGENA DAÑADOS POR DIABETES MELLITUS
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Actualmente, en el tratamiento farmacológico de la Diabetes Mellitus, se utilizan la insulina y grupos de fármacos hipoglucemiantes como las Sulfonilureas, las Biguanidas, inhibidores de la -glucocidasa y derivados de la Tiazolidinediona, cuyo mecanismo de acción se lleva a cabo ya sea estimulando la secreción de insulina o bien aumentando la acción de esta hormona sobre los tejidos corporales. La vida media de estos fármacos varía de 1.5 a 48 horas. Aunque todos estos fármacos, por diferentes mecanismos de acción regulan la concentración de glucosa sanguínea y/o la secreción de insulina, la duración de su efecto es por un período corto de tiempo y ninguno de ellos lleva a cabo la regeneración de las células β-pancreáticas que producen la insulina y que permitan restaurar la función de esta hormona. Por otro lado, tanto la insulina exógena como los fármacos hipoglucemiantes pueden causar efectos colaterales como: hipoglucemia, diarrea, malestares abdominales, náusea y anorexia (Davis, S. y Granner, D. Insulina, Fármacos hipoglucemiantes orales y propiedades farmacológicas del páncreas endógeno. En: Las Bases Farmacológicas de la Terapéutica. Eds.: Hardman, J.G., Limbird, LE., Molinoff, P.B., Ruddon, R.W., Goodman, R., 8a. Ed. pags. 1581- 1614, 1996). Ninguno de los medicamentos que se utilizan actualmente para el tratamiento de la Diabetes Mellitus regenera tejidos ni células de secreción endógena dañadas entre las que se encuentran las β -pancreáticas como lo hace el compuesto de Silimarina y Carbopol.
Tanto in vitro como in vivo, se ha demostrado que la Silimarina tiene actividad protectora y regenerativa sobre las células hepáticas contra el daño producido por diferentes substancias tóxicas como: faloidina, α-amanitina, alcohol, galactosamina, metales pesados, tetracloruro de carbono, tolueno, xileno, o
por algunos fármacos como: acetaminofén, indometacina, isoniazida y tolbutamida (Wellington, K., Harvis, B., Silymarin: A review of its clinical properties in the management of hepatic disorders. Biodrugs. 15: 465-489, 2001 ) ya que se ha demostrado que estabiliza a la membrana celular y la protege contra los radicales libres, es decir, que tiene propiedades antioxidativas por producir un aumento en el contenido de glutatión (captador de radicales libres) hepático (Valenzuela, A., Garrido, A. Biochemical basis of the pharmacological action of the flavonoid silymarin and of its structural isomer silibinin. Biol. Res. 27:105-112, 1994). En el humano la Silimarina se ha utilizado en el tratamiento de enfermedades hepáticas como la cirrosis, el envenenamiento por el hongo Amanita phalloides y en la exposición a substancias tóxicas (Wellington, K., Harvis, B., Silymarin: A review of its clinical properties in the management of hepatic disorders. Biodrugs. 15: 465-489, 2001). Se ha sugerido que los radicales libres participan de manera importante en la etiología de la Diabetes Mellitus ya que se han encontrado niveles séricos elevados de malondialdehído (producto final de la lipoperoxidación) en pacientes con esta enfermedad (Paolisso G, De Amore, A, Di Maro G, D' Onofrio F: Evidence for a relationship beetween free radicáis and insulin action in the elderly. Metabolism, 42:659-66, 1993). Dichos niveles de malondialdehído están en relación directa con el grado de complicaciones presentes en los pacientes con Diabetes Mellitus. Entre los mecanismos de defensa contra los radicales libres se encuentran el glutatión y enzimas antioxidantes como la supeóxido dismutasa, la glutatión peroxidasa y la catalasa. Soto y col. (Soto C, Pérez B, Favari L, Reyes J: Prevention of alloxan- induced diabetes mellitus in the rat by silymarin. Comp. Biochem. Physiol. 119C:125-129, 1998) reportaron que la Silimarina aumenta el contenido de glutatión pancreático, hepático y por lo tanto su nivel en sangre. Los autores del trabajo anteriormente citado también encontraron que la Silimarina impidió la elevación de radicales libres en el páncreas durante la inducción de la Diabetes Mellitus, lo que tuvo como consecuencia la disminución de la glucosa sanguínea la cual se encuentra elevada en esta enfermedad. Tomando en consideración los antecedentes descritos se utilizó al compuesto de Silimarina y Carbopol como agente antidiabético el cual se pretende proteger por medio de la presente solicitud ya que presentó un efecto
desconocido como regenerador pancreático y controlador de la concentración sérica de la glucosa, la cual no está regulada en los pacientes diabéticos.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
La presente invención corresponde al uso de Silimarina con Carbopol como regenerador del tejido y células pancreáticas de secreción endógena dañadas por Diabetes Mellitus, el cual suprime los efectos colaterales e inconvenientes que se presentan con la administración de fármacos utilizados actualmente en el tratamiento de la Diabetes Mellitus.
El compuesto de Silimarina y Carbopol se obtiene a partir de los siguientes pasos: a) Disolución al 0.5 % de Carbopol en agua desionizada en un agitador magnético durante una hora. b) Adición de Silimarina en un porcentaje de 5 a la disolución anterior y se somete a agitación por un período mínimo de una hora hasta lograr una mezcla homogénea.
La mezcla homogénea se podrá presentar con cualquier vehículo en formulaciones para administración oral como son: solución, suspensión, emulsión, cápsulas de gelatina dura, cápsulas de gelatina blanda, tabletas de liberación inmediata, tabletas de liberación sostenida, tabletas de liberación prolongada, tabletas de liberación controlada.
Un ejemplo ilustrativo pero no limitativo para demostrar la actividad regeneradora pancreática del compuesto de Silimarina y Carbopol es en el que este se administró por vía oral a una dosis de 200 mg/Kg ya sea en forma simultánea con el agente diabetogénico Aloxana o de manera separada. El tratamiento conjunto del compuesto de Silmarina y Carbopol con la Aloxana se realizó de dos modos. En el primero se administró oralmente una dosis de 200 mg/Kg del compuesto de Silimarina y Carbopol a las 6, 24 y 48 horas (dos días) posteriores a una primera dosis. En el segundo, además de las dosis mencionadas en el primer modo, se prolongó la administración cada 24 horas después de la última dosis durante cinco días más (siete días). En ambos casos, la dosis de Aloxana fue de 150 mg/Kg que se administró por vía
subcutánea una hora después de la primera dosis del compuesto de Silimarina y Carbopol.
Otro ejemplo que se utilizó también para demostrar el efecto regenerador pancreático del compuesto de Silimarina y Carbopol es en el que se probó el efecto de este compuesto de manera separada con el agente diabetogénico, es decir, primero se administró la Aloxana y después de 20 días se inició el tratamiento diario con el compuesto de Silimarina y Carbopol a las mismas dosis ya mencionadas en los dos casos anteriores por un período de tiempo de 4 a 7 semanas. La demostración del efecto antidiabético de este compuesto de Silimarina y Carbopol se describe en los ejemplos que se citan a continuación.
Ejemplo 1 Determinación de glucosa sérica
La determinación de glucosa en sangre se llevó a cabo por el método de Baner. Este consistió en tomar 50 μl de suero a los cuales se les adicionaron 3.0 mi de reactivo de orto-toluidina que reacciona con aldohexosas y forma glicosamina y una base de Schiff, el color verde desarrollado tiene una absorción máxima a 620 nm y es proporcional a la cantidad de glucosa presente.
En el caso de la administración conjunta del compuesto de Silimarina y Carbopol con Aloxana se realizó la determinación de glucosa sérica antes de la administración de los fármacos y a los 3, 5, 15 y 30 días posteriores al tratamiento. Para el caso en el que se inició el tratamiento del compuesto de Silimarina y Carbopol 20 días posteriores a la administración de la Aloxana, la determinación de la glucosa sérica se realizó previamente a la administración de algún fármaco, 20 días después la aplicación de la Aloxana y posteriormente cada semana después de que se inició el tratamiento con el compuesto de Silimarina y Carbopol.
Los resultados mostraron que en la Diabetes Mellitus (tratamiento con Aloxana en forma única) hubo un aumento del 100 al 400% en los niveles séricos de la glucosa con respecto a los valores normales que van de 80 a 120 mg/dl. El compuesto de Silimarina y Carbopol administrado en forma conjunta con el
agente diabetogénico, Aloxana, Impidió el aumento en la concentración de glucosa sérica que se presentó con la administración de Aloxana en forma única. Los resultados obtenidos del tratamiento con el compuesto de Silimarina y Carbopol iniciado veinte días posteriores a la administración de la Aloxana mostraron que los valores de la concentración de glucosa sérica que se encontraban significativamente elevados, aproximadamente en un 400% sobre el valor normal (antes de iniciar el tratamiento con el compuesto de Silimarina y Carbopol) fueron disminuyendo paulatinamente hasta alcanzar los niveles normales en un tiempo promedio de siete semanas. El tratamiento con el compuesto de Silimarina y Carbopol administrado en forma única no modificó la concentración de glucosa sérica.
Ejemplo 2 Determinación de la concentración de insulina en sangre por el método de ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay).
Esta determinación se llevó a cabo en 10 μl de suero, el cual se incubó durante dos horas con dos anticuerpos monoclonales dirigidos contra determinantes antigénicos separados en la molécula de insulina. Durante la incubación, la insulina de la muestra reaccionó con anticuerpos antiinsulina y con anticuerpos antiinsulina conjugados con peroxidasa. Después de este tiempo se hizo un lavado para eliminar al anticuerpo que no se unió a las moléculas de insulina de la muestra. Posteriormente se agregaron 200 μl de 3,3,5,5'- tetrametilbenzidina y las muestras permanecen con este reactivo durante 30 minutos para poder detectar el compuesto conjugado que es colorido y se puede cuantificar espectrofotométricamente. La reacción se finalizó mediante la adición 50 μl de ácido sulfúrico y se leyó a 450 nm en un lector de ELISA para poder determinar la concentración de insulina en cada una de las muestras. En el caso de la administración conjunta del compuesto de Silimarina y Carbopol y Aloxana, la determinación de insulina sérica se realizó antes de la administración de los fármacos y a los 3, 5, 15 y 30 días posteriores al tratamiento. Para el caso en el que se inició el tratamiento del compuesto de Silimarina y Carbopol 20 días posteriores a la administración de la Aloxana, la determinación de la insulina sérica se realizó previamente a la administración de algún fármaco, 20 días después la aplicación de la Aloxana y al término del
tratamiento con el compuesto de Silimarina y Carbopol (cuando los niveles de glucosa se encontraron en el rango de los valores normales). Los resultados mostraron que en la Diabetes Mellitus (tratamiento con Aloxana en forma única) hay una disminución del 80 al 90% en los niveles séricos de insulina con respecto al valor normal que es de 1 ηg/ml. Se observó que el tratamiento conjunto del compuesto de Silimarina y Carbopol y Aloxana impidió la disminución de los niveles séricos de insulina y los mantuvo dentro del rango del valor normal. En el caso del tratamiento con el compuesto de Silimarina y Carbopol 20 días posteriores a la administración de la Aloxana, se observó el nivel sérico de la insulina aumentó hasta el rango de los valores normales. Estos valores normales de insulina sérica correspondieron con los de glucosa (ejemplo 1).
Ejemplo 3: Análisis histopatológico del tejido pancreático
Este análisis se realizó en fragmentos transversales de páncreas de aproximadamente 0.7 cm de largo correspondientes a la cabeza del órgano. Posteriormente, mediante la técnica de inclusión en parafina se procedió a la obtención de los cortes de 5 μm los cuales se tiñeron con los colorantes hematoxilina y eosina (HE). Esta técnica consiste en: 1 ) deshidratación del tejido, la cual se realiza mediante el paso del tejido por diversas concentraciones de alcohol (de 25 hasta 100%) y posteriormente a una mezcla alcohol-tolueno, tolueno-parafina y parafina. Una vez deshidratados los tejidos se hacen bloques con parafina. 2) Corte del tejido. Este se realiza en un microtomo el cual se ajusta para el grosor adecuado de corte de 4 a 6 μm y se colocan en portaobjetos. 3) Tinción de los cortes. Esta se realizó mediante con los colorantes hematoxilina y eosina. En el caso de la administración conjunta del compuesto de Silimarina y Carbopol y Aloxana, el análisis histopatológico se realizó a los 3, 5, 15 y 30 días posteriores del tratamiento. Para el caso en el que se inició el tratamiento del compuesto de Silimarina y Carbopol 20 días posteriores a la administración de la Aloxana, el análisis histopatológico se realizó 20 días después la aplicación de la Aloxana y al término del tratamiento con el compuesto de
Silimarina y Carbopol (cuando los niveles de glucosa se encontraron en el rango de los valores normales, es decir de 80 a 120 mg/dl). En la Diabetes Mellitus (tratamiento con Aloxana en forma única) se presentó daño en el tejido pancreático que se observó como una desorganización celular con pérdida de los islotes de Langherhans. Se observaron también zonas de necrosis, de lisis celular, hemorrágicas, de infiltración de linfocitos, lisis de eritrocitos así como un aumento en el tejido adiposo que forma la cápsula del lobulillo. El tratamiento con el compuesto de Silimarina y Carbopol administrado en forma conjunta con la Aloxana, impidió el daño tisular en el páncreas que se presentó en la Diabetes Mellitus, es decir, que el tejido no presentó ninguna alteración. La administración del compuesto de Silimarina y Carbopol, 20 días posteriores a la administración de la Aloxana regeneró el tejido pancreático, es decir, que todo el daño observado en la Diabetes Mellitus fue revertido totalmente y se observó un tejido completamente normal.
Ejemplo 4 Análisis inmunohistoquímico para insulina y glucágon en los islotes de Langherhans por microscopía confocal
Este análisis se lleva a cabo en cortes de tejido pancreático (correspondientes a la cabeza del páncreas). Una vez obtenidos los cortes (descrito en el ejemplo 3) se colocan sobre portaobjetos y se procede a desparafinar y rehidratar el tejido. Se inicia en xilol puro, con dos cambios de 10 minutos cada uno. Posteriormente las muestras se pasan a una mezcla de etanol-xilol por 10 minutos y después a alcoholes de diferentes porcentajes: 100, 90, 80 y 70% durante cinco minutos en cada uno. Finalmente se pasan a una solución de PBS (solución amortiguada de fosfatos) durante 30 minutos para llevar a cabo posteriormente el proceso de inmunotinción. Esta se inicia con la incubación de las muestras en una solución de PBS-Tritón por 10 minutos a temperatura ambiente (20-22°C), se lavan con PBS sin tritón, y se bloquean las muestras con albúmina en PBS. Se lavan las muestras con PBS de 1 a 5 minutos. Posteriormente se hace una mezcla de anticuerpos primarios antiinsulina y antiglucágon en PBS y se dejan incubar aproximadamente 12 horas. Al cabo de este tiempo se lavan con PBS y se incuban en una mezcla de anticuerpos
secundarios acoplados a fluorocromos, fluoresceína y rodamina, durante una hora a temperatura ambiente y se montan en un medio específico para preservar la fluorescencia. Las muestras se analizan por microscopía confocal. En la Diabetes Mellitus (tratamiento con Aloxana en forma única) (figura 1 ) se presentó una destrucción del islote pancreático y se observaron solamente algunos fragmentos de este con una presencia muy escasa de insulina (β) y glucágon (α). En el tratamiento con el compuesto de Silimarina y Carbopol administrado en forma conjunta con la Aloxana (figura 2), se impidió la destrucción del islote pancreático y este presentó una imagen muy semejante a la de un islote en condiciones normales, es decir, que todas las células que lo conforman se mostraron conservadas. En la mayor parte de estas está presente la insulina (β), producto de las células β y solamente en las de la periferia se observó el glucágon (α) producto de las células α. La administración del compuesto de Silimarina y Carbopol veinte días posteriores a la Aloxana revirtió el daño observado en la Diabetes Mellitus, es decir, produjo la regeneración del islote pancreático destruido observándose un islote con las características normales (descritas en el párrafo anterior) lo que implica la recuperación del funcionamiento de las células β-pancreáticas y por lo tanto la producción de insulina. Esta metodología es equivalente para aplicarla en ser humano en cualquier tipo de Diabetes ya que el nivel de acción de esta composición es a nivel de la disfunción o destrucción de las células β pancreáticas y sus mecanismos contra el daño celular por radicales libres.
Ejemplo 5:
Determinación de la actividad de las enzimas antioxidantes pancreáticas
Se determinó la actividad pancreática de las enzimas antioxidantes: superóxido dismutasa, glutatión peroxidasa y catalasa. Para realizar tal determinación se pesó el páncreas, se homogenizó con amortiguador de fosfatos 50mM, se centrifugó a 3000 rpm, se separó el sobrenadante. La actividad de las enzimas mencionadas se determinó en este.
Superóxido dismutasa.- Esta cuantificación se llevó a cabo por el método de Prasad y col. (1992). Mediante xantina y xantina oxidasa se forman iones superóxido. Estos iones reaccionan con el azul de tetrazolio y forman un
compuesto colorido que puede cuantificarse espectrofotométricamente a
560nm. Una unidad de superóxido dismutasa puede inhibir la formación de este compuesto en un 50%.
Glutatión peroxidasa.- Esta cuantificación se realizó por el método de Prasad y col. (1992). Esta enzima cataliza el rompimiento del H2O2 mediante el NADPH.
Su actividad se mide por la velocidad de cambio de absorbancia durante la conversión de NADPH a NADP+ y esta se puede registrar espectrofotométricamente a 300 nm.
Catalasa.- Esta cuantificación se llevó a cabo por el método de Aebi (1995). Esta enzima cataliza el rompimiento del H2O2y la velocidad de descomposición del agua oxigenada se mide espectrofotométricamente a 240nm.
En la Diabetes Mellitus (tratamiento con Aloxana en forma única) hubo una disminución de un 70 a 75% en la actividad de las tres enzimas estudiadas: superóxido dismutasa, glutatión peroxidasa y catalasa. La administración conjunta del compuesto de Silimarina y Carbopol y Aloxana mostró un aumento en la actividad de las enzimas antioxidantes pancreáticas ya que esta no fue diferente de los valores control (normales).
La administración del compuesto de Silimarina y Carbopol veinte días posteriores a la Aloxana revirtió el daño observado en la Diabetes Mellitus en la actividad de las tres enzimas estudiadas e incluso se obtuvieron valores de las actividades enzimáticas superiores a los valores normales (ver tabla).
Claims
1.- Composición farmacéutica caracterizada porque contiene Silimarina y Carbopol y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
2.-Composición de acuerdo a la reivindicación 1 caracterizada por contener Silimarina del 3 al 7% y Carbopol del 0.2 al 0.6 %.
3.- Composición de acuerdo a la reivindicación 2 donde preferentemente contiene Silimarina en 5% y Carbopol en 0.5%.
4.- Composición de acuerdo a las reivindicaciones 1 a 3 donde la composición farmacéutica puede estar en forma de dosis oral.
5.- Composición de acuerdo a la reivindicación 4 donde como forma oral puede ser suspensión, solución oral, emulsión, gel, cápsula de gelatina dura, cápsula de gelatina blanda, tableta de liberación inmediata, tableta de liberación controlada, tableta de liberación prolongada, tableta de liberación sostenida.
6.- Composición de acuerdo a la reivindicación 5 donde se prefiere en forma de suspensión oral.
7.- El uso de la composición de la reinvindicación 1 a base de Silimarina y Carbopol para la fabricación de un medicamento útil en la recuperación del funcionamiento de las células β pancreáticas.
8.- El uso de acuerdo a la reivindicación 7 donde el funcionamiento de las células β pancreáticas provocan la producción de insulina.
9.- Procedimiento para la obtención de la composición de las reivindicaciones 1 a 3 que consta de los pasos: a) Disolución del 0.2 al 0.6 % de Carbopol en agua desionizada sometiéndola a agitación por un período de tiempo de 50 a 90 minutos.
b) Adición de Silimarina en un porcentaje del 3 al 7 a la disolución anterior y se somete a agitación por un período mínimo de una hora hasta lograr una mezcla homogénea.
10.- Procedimiento de acuerdo a la reivindicación 9 donde preferentemente se disuelve 0.5% de Carbopol y 5% de Silimarina.
11.- Proceso de acuerdo a la reivindicación 9 donde opcionalmente tiene un paso posterior de solubilización.
12.- Proceso de acuerdo a la reivindicación 9 donde opcionalmente tiene un paso posterior de emulsificación.
13.- Proceso de acuerdo a la reivindicación 9 donde opcionalmente tiene un proceso de gelificación.
14.- Proceso de acuerdo a la reivindicación 9 donde opcionalmente tiene un proceso de encapsulación.
15.- Proceso de acuerdo a la reivindicación 9 donde opcionalmente tiene un proceso de tableteado.
16.- El uso de acuerdo a las reivindicaciones 7 y 8 donde la dosis de administración va de 60 a 220 mg/Kg.
17.- Uso de acuerdo a la reivindicaciones 11 a la 15 donde la dosis preferida es de 200 mg/Kg.
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|---|---|---|---|---|
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|---|---|---|---|---|
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Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001261571A (ja) * | 2000-03-14 | 2001-09-26 | Api Co Ltd | プロポリス組成物 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4844883A (en) * | 1987-01-20 | 1989-07-04 | Florasynth, Inc. | Stabilization of wintergreen flavor in chalk-based dentifrice and method |
| US6524599B2 (en) * | 2001-02-21 | 2003-02-25 | Skinceuticals, Inc. | Use of milk thistle extract in skin care compositions |
| AUPR510001A0 (en) * | 2001-05-18 | 2001-06-14 | Jupitar Pty Ltd | Formulation and method |
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Patent Citations (1)
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|---|---|---|---|---|
| JP2001261571A (ja) * | 2000-03-14 | 2001-09-26 | Api Co Ltd | プロポリス組成物 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| DATABASE WPI Section Ch Week 200205, Derwent World Patents Index; Class B04, AN 2002-037628, XP002906017 * |
| SCHOENFELD VON J ET AL: "SILIBININ, A PLANT EXTRACT WITH ANTIOXIDANT AND MEMBRANE STABILIZING PROPERTIES, PROTECTS EXOCRINE PANCREAS FROM CYCLOSPORINA TOXICITY", CMLS, CELLULAR AND MOLECULAR LIFE SCIENCES, BIRKHAUSER VERLAG, BASEL, CH, vol. 53, no. 11/12, December 1997 (1997-12-01), pages 917 - 920, XP000965040, ISSN: 1420-682X * |
| SOTO C. ET AL: "Silymarin regenerates pancreatic tissue damaged by alloxan in hyperglycemic rats.", DIABETES & METABOLISM, 18TH INTERNATIONAL DIABETES FEDERATION CONGRESS ,PARIS, FRANCE, vol. 29 (hors serie 2), 24 August 2003 (2003-08-24) - 29 August 2003 (2003-08-29), pages 4S157, XP002906016, ISSN: 1262-3636 * |
| SOTO C. P. ET AL: "Prevention of alloxan-induced diabetes mellitus in the rat by silymarin.", COMPARATIVE BIOCHEMISTRY AND PHYSIOLOGY, PART C: PHARMACOLOGY & ENDOCRINOLOGY, vol. 119c, no. 2, 1998, Elsevier Science Inc., pages 125 - 129, XP002906015, ISSN: 0742-8413 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1327835C (zh) * | 2004-07-08 | 2007-07-25 | 北京科信必成医药科技发展有限公司 | 水飞蓟素口腔崩解片及其制备方法 |
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