WO2003035090A1 - Agents soulageant les reactions allergiques anaphylactiques, et leur procede de production - Google Patents

Description

明 細 書 シー型アレルギー症状改善物質およびその製造方法

技術分野

本発明は、 花粉症、 羲麻疹、 気管支喘息、 アトピー症等の病因とされるァナフ イラキシー型アレルギー症状改善物質及ぴその製造方法に関する。

アナフィラキシーとは、 一般に免疫学的機序によって惹起される全身性のァレ ルギー反応をさす。 近年、 アレルギー疾患の中で I g E抗体を介する I型すなわ ちアナフィラキシー型のアレルギー反応により、 肥満細胞あるいは好塩基球から ヒスタミンやロイコ トリェンが全身に遊離されるため、 花粉症、 蓴麻疹、 気管支 喘息などを発症すると考えられている。 背景技術

アトピー症皮膚炎等に有効とされる外用皮膚病治療剤として、 あるいは胃炎、 胃カイョゥ等に有効とされる消化器系疾患治療用内服薬として、 ステビア茎部の 発酵濃縮液を有効成分とするものが知られている （特公平 6— 9 2 3 1 4号、 特 公平 7 _ 1 3 0 2 1号）。

さらに、 花粉症等のアレルギー症状に有効とされる抗ヒスタミン作用を有する 物質として、 ステビアの植物組織の抽出液を発酵させたものが知られている （特 開平 1 0— 3 3 0 2 7 9号）。

上記ステビアの植物組織を発酵させて得た治療剤、 内服薬剤、 抗ヒスタミン作 用を有する物質は、 それぞれその植物組織の発酵に 9 0日以上の長期の期間が必 要である。

本発明は、 ステビアの植物組織から抽出したステビアエキスの発酵に要する期 間を短縮して、 新規なアナフィラキシー型アレルギーの症状を改善させる物質を 得ることを目的とするとともに、 該新規な物質を得る新規な製造方法を提供する ことを目的とするものである。 発明の開示

そのために本発明アナフィラキシー型アレルギー症状改善物質は、 ステビアの 植物組織から抽出したステビアエキスにイース ト菌を加えて発酵させてなるもの である。

そして、 上記ステビアの植物組織がステビアの葉と茎である。

また、 本発明アナフィラキシー型アレルギー症状改善物質の製造方法は、 ステ ビアの植物組織を粉砕、 混合し、 これを精製水に入れて加熱、 攪拌、 冷却、 ろ過 してろ液を得、 このろ液を減圧濃縮してステビアエキスを得て、 このステビアェ キスにィースト菌を加えて発酵させてなるものである。

上記製造方法において、 ステビアの植物組織がステビアの葉と茎である。 また、 上記ろ液の減圧濃度は糖度 8程度である。

さらに、 上記発酵期間が 1 0日以上である。 図面の簡単な説明

第 1図 本発明物質の製造工程を示すフローチャート。

第 2図 モルモッ ト摘出回腸標本においてヒスタミン （10—⁶M) により誘発 される収縮反応に及ぼすステビアの影響を示す図。 それぞれの値は 5例の平均値 土標準誤差を示す。 ステビアエキスは低い濃度から 1 0— ³ g/rnlまでの範囲で適 用した。

第 3図 モルモッ ト摘出回腸標本においてヒスタミン （10— ⁶M) により誘発 される収縮反応に及ぼすステビア 1 0— ⁵ M、 1 0— ⁴ M、 1 0— ³ g/mlの影響を 示す図。 発明を実施するための最良の形態

本発明のアナフィラキシー型アレルギーの症状を改善させる物質は、 その原料 を南米のステビァ · レノ ウディ了ナ -ベノレトニ (Stevia rebaudiana Bertoni) とする。

先ず、 ステビアの地上部、 地面からおよそ 1 5 cm程から上部の葉と茎を用い、 これを乾燥させて乾燥させた葉部、 茎部を双方とも 1 0ミクロンメートル以下に 粉砕する。

粉砕したステビアの葉部と茎部を 3 ： 1 0の割合で混合し、 ステビア混合物を 得て、 このステビア混合物 1 O kgを精製水 1 2 0リツトルに入れ、 常温より加熱 して、 しばしば穏やかに撹拌しながら数時間抽出を続ける。

その後常温まで冷却し、 その後 1 4 0メッシュの大きさでろ過を行ないろ液を 得る。

このろ液を取り出し、 これをさらに 8 0 °Cほどの温度で 1時間ほど加熱撹拌を 行なう。

上記ろ液を加熱撹拌後、 糖度 8度ほど （固形物濃度およそ 8w/vtt まで減圧濃 縮を行なう。

濃縮された溶液をさらにほぼ 0 . 4 5マイクロメートル以下の大きさにてろ過 する。 得られたろ液をステビアエキスとし、 これを原料とする。

上記工程で得たステビアエキス 1リットルにっき、 およそ 2 . 0 gの乾燥ィー ス ト菌を加え、 常温にて穏やかに撹拌し、 他の微生物の侵入を認めない条件下に て、 発酵を行なう。 乾燥イース ト菌はサッカロマイセス （Saccharomyces) 類を 用いる。

この発酵期間は 1 0日間以上とするが、 望ましくは 1 0日〜 1 4日間とする。 1 0 S程発酵させた液を 0 . 4 5マイクロメーター以下の大きさにてろ過を行な レ、、 完全に溶液状態とする。 以上の方法で精製された液体が抗ヒスタミン作用を 有する。

このようにして得た本発明物質によってモルモッ ト摘出回腸標本における、 抗 ヒスタミン作用に関し薬理学的実験を行った。 実験では、 上記製法にて得られた 液体を試験液 （ステビア試験液という） とし、 この試験液を凍結乾燥処理し、 得 られた固形物 （ステビア固形物という） を、 ロックリ ンガー液 （Lock-Ringer液） に溶解して用いた。

実験には雄性モルモット （Hartley系、 3 0 0〜3 5 0 g) 2 0匹を用いた。 モルモットより回腸を摘出しマグヌス法によりヒスタミンによって誘発される等 尺性収縮を測定した。 収縮は張力トランスジューサー （BG- 10，Kulite Semicon ductor、 U.S. A) を介し直流増幅器 （AM 20、 Unipulse) にて記録した。 ステビア 固形物 （1 0— ⁶ 、 1 0— ⁵、 1 0— ⁴、 1 0— ³g/ml) をあらかじめモルモッ ト摘 出回腸に適用し、 ヒスタミン 1 0— ⁶ M (histamine 1 0—⁶ M) による収縮反 応を検討した。 抗ヒスタミン薬であるジフェインヒドラミンを対照薬として比較 検討した。 栄養液はロックリンガー液 （mM) (Lock- Ringer液 （mM)) を用い、 組成は N a C 1 1 5 4、 KC 1 5. 6、 C a C l ₂ 2. 2、 Mg C l ₂ 2. 1、 N a H C O 3 5. 9、 Glucose 2. 8 (pH 7.4) であった。 栄養液 は 9 5 %0₂と 5 %C 0₂の混合ガスを通気した。 実験は室温 （2 3〜24°C) で行なった。 使用した薬物は、 ステビア試験液、 ヒスタミン （ヮコ） （histamin e (Wako) )、 ジフェインヒ ドラミン （ヮコ） (diphenhydramine (Wako) ) であつ た。 ステビア固形物はロックリンガー液 （Lock-Ringer液） に溶解させマグヌス 管に直接適用した。 得られた成績はダネット （Dunnett' s) のマルチプル コン パリソン テスト （multiple comparison test) により危険率 5 %をもって有意 差ありとした。 - その結果、 ヒスタミンの収縮反応の及ぼすステビアの影響を観た。

ヒスタミン 1 0— ⁶ M (Histamine 1 0— ⁶ M) をモノレモッ ト摘出回腸標本に適 用すると収縮が誘発される。 ヒスタミン （Histamine) は 2回適用して定常状態 になったことを確認してコントロールとした。 図 1は 5例のヒスタミン （histam ine) 収縮反応に及ぼすステビア固形物の影響を検討したものである。 ヒスタミ ン （Histamine) の収縮反応はステビア固形物 1 0— ⁶ g/mlはその収縮反応に対し て影響を及ぼさなかった。 ステビア固形物 1 0—⁵、 1 0— ⁴、 1 0— ³g/mlでは ヒスタミン （histamine) による収縮反応をそれぞれコントロールの 9 3 %、 7 8 %、 5 5 %に減少させた （図 1， 2 )。 ステビア固形物 1 0 - ³ g/mlは有意な抑 制を示した。 これらステビア固形物による反応はステビア固形物を洗浄すること により回復したことから可逆性であった。

上記本発明物質をクリーム状 （ステビアクリームと云う） とエキス状 （ステビ ァエキスと云う） にして、 このステビアク リーム及びステビアエキスの皮膚安全 試験として、 皮膚貼付試験をした。

この試験は、 富山県富山巿杉谷 2 6 3 0番地の富山医科薬科大学医学部皮膚科 学教室 （医学博士、 諸橋正昭教授） にて豊田雅彦講師が試験責任者となって行わ れた。

この試験は、 健常人 1 8名 （男性 1 2名、 女性 6名、 年齢 2 1〜4 3歳、 平均 年齢 3 2 . 5歳) を対象に行われた。 その方法は、 ステビアクリーム及びステビ ァエキスを両者とも _as isにてフィンチャンバ一を用いて上腕内側あるいは背部 に貼付し、 4 8時間後および 7 2時間後に貼付試験の評価を行った。 評価判定は I C D R G基準の評価法にのっとって行った。

結果は、 ステビアクリーム及びステビアエキスの貼付試験を施行した 1 8名全 例において、 貼付後 4 8時間後及び 7 2時間後ともいずれの物質も陽性反応 （一 時刺激、 接触皮膚炎） を示さなかった。 産業上の利用の可能性

本発明は、ステビア抽出エキスをィースト菌にて発酵させて生成された液体が、 抗ヒスタミン作用を有することを初めて明らかにした。 この作用はステビア固形 物 1 0— ⁵ g/ral以上の濃度より観察され可逆的であった。 ステビア固形物の抗 ヒスタミン作用はヒスタミン H i (histamineH i )受容体の遮断作用と結論した。 この作用機序はステビア固形物がヒスタミンの H i受容体に結合し、 ヒスタミン の発現作用を抑制すると考えられる。 ステビア抽出エキスをイース ト菌にて発酵 させて生成された液体 （ステビア試験液） の中に抗ヒスタミン作用を示す化合物 が含まれていることが示された。 本発明物質がアナフィラキシー型アレルギーで ある、 花粉症、 奪麻疹、 気管支喘息あるいはアトピーなどの疾患に対する症状の 軽減に有効であることが示された。

さらに本発明方法では、 ステビアエキスにィースト菌を加えて発酵させること により、 比較的短期間でアナフィラキシー型アレルギーの症状を改善させる物質 を得ることができた。

Claims

請 求 の 範 囲

1 . ステビアの植物組織から抽出したステビアエキスにィースト菌を加えて発酵 させ生成されるアナフィラキシー型ァレルギ一症状改善物質。

2 . 上記ステビアの植物組織がステビアの葉と茎である上記請求項 1に記載のァ ナフイラキシー型アレルギー症状改善物質。

3 . ステビアの植物組織を粉碎、 混合し精製水に入れて加熱、 攪袢、 冷却、 ろ過 してろ液を得、 このろ液を減圧濃縮してステビアエキスを得て、 このステビアェ キスにィースト菌を加えて発酵させてなるアナフィラキシー型アレルギー症状改 善物質の製造方法。

4 . ステビアの植物組織がステビアの葉と茎である上記請求項 3に記载のァナフ ィラキシー型ァレルギ一症状改善物質の製造方法。

5 . 上記減圧濃縮して得られたろ液の濃度が糖度 8程度である上記請求項 3又は 4に記載のアナフィラキシー型アレルギー症状改善物質の製造方法。

6 . 上記発酵期間が 1 0日以上である上記請求項 3〜5の何れかに記載のァナフ ィラキシー型ァレルギ一症状改善物質の製造方法。