WO2000008047A1

WO2000008047A1 - Depsipeptide derivatives bearing piperazinone rings

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Publication number: WO2000008047A1
Application number: PCT/JP1999/004205
Authority: WO
Inventors: Makoto Yanai; Masashi Suzuki; Norio Oshida; Koji Kawamura; Shigeru Hiramoto; Orie Yasuda; Nobuhiro Kinoshita; Akiko Shingai; Masako Takasu
Original assignee: Nisshin Seifun Group Inc
Current assignee: Nisshin Seifun Group Inc
Priority date: 1998-08-04
Filing date: 1999-08-04
Publication date: 2000-02-17
Anticipated expiration: 2001-02-04
Also published as: EP1028126A1; WO2000008047A8; EP1028126A4; US6288038B1

Description

明細書ピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体技術分野

本発明は、新規なピペラジノン環を分子内に有するデブシぺプチド誘導体およびこれを有効成分とする医薬に関する。本発明のピペラジノン環を含有するデプシペプチド誘導体は、アポリポプロテイン Eの産生促進作用を有し、高脂血症治療薬、さらには神経損傷治療薬およ呆症治療薬として有用である。背景技術

近年、アポリポプロテイン Eをヒ卜の家族性高コレステロール血症ホモ接合体のモデル動物である WHH Lゥサギに静脈投与すると、血漿コレステロール濃度の顕著な減少が認められることが報告され（Yamada, et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. , Vol. 86， p 665-669 (1989)参照）、また、マウス肝臓にラットァポリポプ口ティン Eの遺伝子を導入してアポリポプロテイン Eを大量に発現させると、血漿コレステロールとトリグリセリドが顕著に低下することが報告された (Shimano, H. et al. , Journal of Clinical Investigation, Vol. 90, p 2084-2091, (1992)参照）。

これらの報告されているように、血漿アポリポプロテイン E濃度を上昇させることは高脂血症、特に今までの薬剤では治療が困難であるとされてきた家族性高コレステロール血症ホモ接合体の治療法として極めて有効とされている。また、老人性痴呆症の治療薬として、脳循環代謝改善薬が主として使用されているが、これらの薬物は、老人性痴呆症の原因と考えられている中枢神経系の崩壊には何らの改善作用を示さない。他方、アポリポプロテイン Eは損傷し回復しつつある神経系部位で高レベルで発現しているということが報告されており（例えば、 M. JT. Ignatius et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. , 83: 1125 (1986) 参照）、神経系の修復に重要な役割を担うであろうことが示唆されている。

最近、アポリポプロテイン E欠損マウスと正常なマウスにおけるニューロンの代謝および機能の比較研究により、アポリポプロテイン E欠損マウスでは、中枢神経系の選択的脱落が認められ、これはァルツハイマーやパーキンソン病などの神経脱落性疾患にぉレ、て認められる神経系の選択的脱落と非常に似てレ、ること力明り力となり (S. Chapman and D. M. Michaelson, J. Neurochem. , vol.7, No.2, p 708-714 (1998)参照）、アポリポプロテイン Eは、中枢神経系の維持にとつて必須な働きを担っている考えられる。

また、アポリポプロテイン E欠損マウスにアポリポプロテイン Eを投与すると、マウスの学習能に顕著な回復およびニューロン構造の修復が認められることが報告されており、アポリポプロテイン Eは、生体内で神経系の維持および修復する、神経栄養（ニュートロフィック）因子としての作用を担っており、ヒトの神経脱落性疾患の治療に有用であることが示唆されている（E. Masliah et. a., Brain Res. 751, p 307- 314 (1997)参照）。

上述したところ力ら、高脂血症、とくにいままでの薬剤では治療が困難だとされてきた家族性高コレステロール血症ホモ接合体の治療法として血漿アポリポプロティン E濃度を上昇させる薬物の解明も求められているところである。また、新しいタイプの老人性痴呆症に治療薬として、神経系の修復、成長を促進し、中枢神経の崩壊を抑制する薬物の解明が求められているところ、アポリポプ口ティン Eの産生を促進することによりかかる効果を発現させることが考えられる。

かかる状況のもとにおし、て、本発明者らはアポリポプロテイン Eの産生を促進する薬物を提供するべく鋭意研究の結果、特定構造のデブシぺプチド誘導体力 Sこれらの作用を有することを見いだして本発明を完成した。

発明の開示

本発明は、つぎの一般式（ I )

O-CO-CH(R₂)-X,-CH(R₃)-A

I (1)

R,-CH-CH₂-B

〔式中、 X N (R₄) -CO, N (R₅) 一 CH₂、 CH₂— C〇、 CH₂-

CH₂、 CH = CH、 CH₂-CH (OH) または CH (OH) -CH (OH) を示し、 R ,は C₅〜C₂₀アルキル基または C₅〜C , 5アルコキシ C,〜C₄ァルキル基を示し、 R₂〜R₅は水素原子または C ,〜C₆アルキル基を示し、 Aはつぎの式（2)、式（3) または式（4)

-X₂-CH (Ri ,) -X₃-CH (R₁₂) -NH-R₁₃ (4) (式中、 X₂および X ₃はそれぞれ独立して、 N (R₁₄) -CO, N (R₁₅) — CH₂、 CH₂— CO、 CH₂— CH₂、 CH = CH、 CH₂— CH (OH) または CH (OH) 一 CH (OH) を示し、 R₆、 R₁₂、 R₁₄および R₁₅は水素原子または C₁〜C₆アルキル基を示し、 R₇、 R₉および RHは（CH₂) _ml -COOH (ここでは:！〜 3の整数を示す）または（CH₂) _{n l}— CON H₂ (ここで n ,は 2または 3を示す）を示し、 R₈、 R₁₃は水素原子もしくはペプチド化学で通常用いられるァミンの保護基を示し、 R₁₀は水素原子、〜C₆アルキル基、カルボキシル基または C i Ceアルコキシカルボ二ルを示す）を示し、

Bはカルボキシル基、 Ci Ceアルコキシカルボニルまたは式（5)

(式中、 R₁₆は（CH₂) _m2— COOH (ここで m₂は 1〜3の整数を示す）または（CH₂) _n2-CONH₂ (ここで n₂は 2または 3を示す）を示し、 R , ₇は水素原子、 C,〜C_fiアルキル基、カルボキシル基または C ,〜C ₆アルコキシカルボニルを示す）を示すものとする。

ただし上記した Aおよび Bにおけるカルボキシノレ基はぺプチド化学で通常用レ、られる保護基で保護されていてもよいものとし、そして、 Aが式（4) で示される基であるときには Bは式（5) で示される基であるものとする。〕で示されるピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体またはその薬理学的に許容される塩に関する。

好適実施態様において、本発明はつぎの式（1' )

0-CO-CH(R )-X₁-CH(R_a)-A^/

(1' )

R】一 CH— CH₂— B'

〔式中、 X N (R₄) -CO, N (R₅) — CH₂、 CH₂— CO、 CH₂- CH₂、 CH=CH、 CH₂-CH (OH) または CH (OH) -CH (OH) を示し、は C₅〜C₂₀アルキル基または C₅〜C₁₅アルコキシ Ci C T ルキル基を示し、 R ₂〜 R ₅は水素原子または C i〜 C _eアルキル基を示し、 Α' はつぎの式（2)

(式中、尺₆は水素原子またはじ₁〜〇₆ァルキル基を示し、 R₇は（CH₂) _ml -COOH (ここでは；！〜 3の整数を示す）または（CH₂) _{n l}-CON H₂ (ここで n ,は 2または 3を示す）を示し、 R₈は水素原子もしくはぺプチド化学で通常用いられるァミンの保護基を示す）を示し、

B' はカルボキシル基または C i Ceアルコキシカルボニルを示すものとする。

ただし上記したおよび B' におけるカルボキシル基はペプチド化学で通常用いられる保護基で保護されていてもよいものとする。〕で示されるピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体またはその薬理学的に許容される塩に関する。

他の実施態様において、本発明はつぎの式（1" )

0-CO-CH(R₂)-X,-CH(R₃)-A^/

I ( 1〃）

— CH— CH₂—

〔式中、 X N (R₄) -CO, N (R₅) — CH₂、 CH₂— CO、 CH₂— CH₂、 CH = CH、 CH₂-CH (OH) または CH (OH) — CH (OH) を示し、は C₅〜C₂₀アルキノレ基または C₅〜C₁₅アルコキシ C₁〜C₄ァルキル基を示し、 R ₂〜 R ₅は水素原子または C ,〜 C ₆アルキル基を示し、 A" はつぎの式 (3)

(式中、 R₉は (CH₂) _ml-COOH (ここでは 1〜3の整数を示す）または（CH₂) _nl-CONH₂ (ここで n ,は 2または 3を示す）を示し、 R₁₀ は水素原子、じ！〜 ^^アルキル基、カルボキシル基または Ci Ceアルコキシカルボニルを示す）を示し、

' はカルボキシル基または C i Ceアルコキシカルボニルを示すものとする。

ただし上記した A〃および B' におけるカルボキシル基はペプチド化学で通常用いられる保護基で保護されていてもよいものとする。〕

で示されるピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体またはその薬理学的に許容される塩にも関する。

式（1) 〜（1〃）で示されるピペラジノン環を含有するデプシペプチド誘導体において、アルキノレ基およびアルコキシル基は直鎖状もしくは分枝鎖状であり、 C₅〜C ₂。アルキル基は例えばペンチル、イソペンチル、 t—ペンチノレ、 1ーメチルブチノレ、へキシノレ、イソへキシル、ヘプチル、ネオペンチル、 1一メチルヘプチル、ォクチル、ノニル、デシル、ゥンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、へキサデシル、ヘプタデシル、オタタデシル、ノナデシルおよびエイコシル等を包含する。また、 C ₁ C ₆アルキル基は例えばメチル、ェチル、 n—プロピル、イソプロピル、 n—ブチル、イソブチル、 t—ブチル、 n—ペンチル、 n キシル等を包含し、 C t C 6アルコキシカルボニルは、例えばメトキシカルボニル、エトキシカルボニル、 t一ブトキシカルボ二ル等を包含する。尺₁の。₅〜 _{1 5}ァルコキシ〇₁〜0 ₄ アルキルは、例えば、ペンチルォキシメチル、へキシルォキシメチル、ぺプチルォキシメチル、ォクチルォキシメチル、ノエルォキシメチル、デシ二ルォキシメチル、ゥンデシニルォキシメチル、トリデシニルォキシメチル、テトラデシニルォキシメチノレ、ペンタデシニノレオキシメチノレ、ペンチノレォキシェチノレ、へキシルォキシェチル、ぺプチルォキシェチル、オタチルォキシェチル、ノニルォキシェチル、デシニルォキシェチル、ゥンデシニルォキシェチル、トリデシニルォキシェチル、テトラデシニルォキシェチル、ペンタデシニルォキシェチル、ペンチノレォキシプロピル、へキシルォキシプロピル、ぺプチルォキシプ口ピル、ォクチルォキシプロピル、ノニルォキシプロピル、デシニルォキシプ口ピル、ゥンデシ二ルォキシプロピル、トリデシニルォキシプロピル、テトラデシニルォキシプロピル、ペンタデシ二ルォキシプロピル、ペンチルォキシブチル、へキシルォキシブチル、ぺプチルォキシブチル、ォクチルォキシブチル、ノニルォキシブチル、デシニルォキシブチル、ゥンデシニルォキシブチル、トリデシ二ルォキシブチル、テトラデシ二ルォキシブチルぉよぴペンタデシュルォキシブチル等である。

本発明の一般式 ( 1 ) で示されるピペラジノン環を含有するデプシペプチド誘導体において用いるアミンの保護基およびカルボキシル基の保護基は、泉屋信夫他著「ペプチド合成の基礎と実験」（丸善（株） 1 9 8 5年）に記載されている。

ァミンの保護基には、 t一ブトキシカルボニル（以下、「B o c」という）基、ベンジルォキシカルボニル（以下、「C b z」という）基、 p—メトキシベンジルォキシカノレボニル基、 9—フルォレニルメトキシカノレポニル（以下、「Fmo c」とレ、う）基、 p—ニトロべンジルォキシカルボニル基、イソボノレニルォキシカルボニル基、 p―ビフエ二ルイソプロピルォキシカルボニル基、

3， 5—ジメトキシー α,ひ—ジメチルベンジルカルボニル基、メチルスルホニルォキシカルボニル基、イソニコチュルォキシカルボニル基、 2， 2， 2 - トリクロ口ェチルォキシカルボニル基、 2— (トリメチルシリノレ）一エトキシカルボニル基、ホルミル基、フタロイル基、ジチアスクシノィル基、 ρ—トルエンスノレホニノレ基、 ο—ニトロフエニノレスノレフエ二ノレ基、 2—二トロフエ二ノレチォ基、 3—ニトロ一 2 _ピリジンスルフエニル基、ジフエニルホスフィニノレ基、ジフエニルホスフイノチオイル基、ジメチルホスフイノチオイル基、トリフエニルメチル基および 2—べンゾィルー 1—メチルビニル基が包含されるが、 Bo c、 Cb z、 Fmo cおよび p—メトキシベンジルォキシカルボニル基が好ましい。

また、カルボキシル基の保護基には、エステル、例えばべンジルエステル（ベンジルォキシ基；以下、「OB z 1」という）、第三ブチルエステル（t—ブトキシ基；以下、「Ot Bu」という）、メチノレエステル、ェチルエステル、フエナシルエステル（フエナシルォキシ基；以下、「OPa c」とレ、う）、トリクロロェチノレエステノレ、 p—ニトロべンジノレエステノレ、ジフエニノレメチノレエステノレ、ベンス'ヒドリノレエステノレ、 p—メトキシベンジノレエステノレ、 4—ピコリノレエステルおよびシクロへキシルエステル等が包含されるが、 OB z 1、 O t Buおよび OP a c等が好ましい。

一般式（1' ) および（1〃）で示されるピペラジノン環を含有するデブシペプチド誘導体において、 B' はカルボキシル基が好ましい。

また、本発明は前記一般式（ 1 )、および好適実施態様における前記式（ 1 ' ) 〜（1〃）に示されるピペラジノン環を含有するデプシペプチド誘導体またはその薬理学的に許容される塩を有効成分とする医薬に関する。

さらに本発明はより具体的には、前記一般式（1)、および好適実施態様における前記式（1' ) 〜（1〃）に示されるピペラジノン環を含有するデブシペプチド誘導体またはその薬理学的に許容される塩を有効成分とするアポリポプ口ティン E産生促進剤、さらに神経損傷治療薬、痴呆症治療薬および高脂血症治療薬に関する。

本発明のピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体またはその薬理学的に許容される塩は、ペプチド合成において通常使用される方法、例えば泉屋信夫他著「ペプチド合成の基礎と実験」（丸善（株） 1 9 8 5年）に記載された縮合剤法、アジド法、クロリド法、酸無水物法、混合酸無水物法、活性エステル法、酸化還元法、酵素法などを用いて製造することができる。

例えば、本発明のピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体またはその薬理学的に許容される塩は、

O H

I

— C H— C H ₂— C O OH

(式中、 R ,は前述したものと同一意味を有する）を有するカルボキシル基を保護基でエステル結合により保護した後、この 3—ヒドロキシカルボン酸のヒドロキシル基に N—末端または C一末端を保護したァミノカルボン酸等のカルボキシル基を常法によって縮合させ、次いでアミノカルボン酸等の保護基の N 一末端または C—末端を脱保護した後、ぺプチド合成の常法に従って所望のピペラジノン環を含有するアミノカルボン酸等と縮合させることにより製造することができる。また、必要ならば 3—ヒドロキシカルボン酸のカルボキシル基の保護基を脱保護し、さらにピペラジノン環と縮合させてもよい。

あるいは、 3—ヒドロキシカルボン酸のカルボキシル基とピペラジノン環または C ,〜C ₆アルコールとを常法によって縮合させた後、 3—ヒドロキシカルボン酸のヒドロキシル基に N—末端または C—末端を保護したァミノカルボン酸等のカルボキシル基を常法によって縮合させ、次いでアミノカルボン酸の保護基の N—末端または C—末端を脱保護した後、ぺプチド合成の常法に従つて所望のピペラジノン環を含有するアミノカルボン酸等と縮合させることにより製造することができる。

また別法として、上記のァミノカルボン酸に先にあらかじめ必要なァミノ酸を縮合させ、次いで上記の 3—ヒドロキシカルボン酸のヒドロキシル基またはカルボキシル基にエステル結合またはアミド結合によつて結合させることにより製造することができる。

上記の 3—ヒドロキシカルボン酸のカルボキシル基の保護は、エーテル、メタノールなどの溶媒中、氷冷下なレ、し室温でジァゾメタンと反応させるメチルエステル化反応や、ジメチルホルムアミド（以下、「DM F」という）、ジメチルスルホキシド（以下、「DM S O」という）などの溶媒中、室温〜加熱下で、塩基性物質例えばトリェチルァミンの存在下、ベンジルブ口ミドを反応させるベンジルェステル化などによって行うことができる。

カルボキシル基が保護された化合物のヒドロキシル基へのアミノカルボン酸の縮合は、エーテル、アセトン、クロ口ホルム、ジクロロメタン、酢酸ェチル、 DM F、テトラヒドロフラン（以下、「T H F」という）、ァセトニトリル、 D M S Oなどの溶媒中において、氷冷下ないし室温で、好ましくはジメチルアミノビリジン（以下、「DMA P」という）のようなァシル化触媒の存在下で縮合試薬としての N， N ージシクロへキシノレカルボジイミド（以下、「D C CJ とレ、う）や、 1—ェチルー 3— （3 ' —ジメチルァミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、すなわち水溶性カルポジイミド（以下、「WS C I」という）を用いて行う。

本発明のピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体の出発原料となる 3—ヒドロキシカルボン酸の具体例としては、 3—ヒドロキシカプリル酸、 3 ーヒドロキシペラルゴン酸、 3—ヒドロキシカプリン酸、 3—ヒドロキシラウリン酸、 3—ヒドロキシミリスチン酸、 3—ヒドロキシパルミチン酸、 3—ヒドロキシマルガリン酸、 3—ヒドロキシステアリン酸、 4ーォクチルォキシ一 3—ヒドロキシ酪酸、 4—ノニルォキシー 3—ヒドロキシ酪酸、 4—デシルォキシー 3—ヒドロキシ酪酸、 4ーゥンデシルォキシ一 3—ヒドロキシ酪酸、 4 一ドデシルォキシ一 3—ヒドロキシ酷酸または 4一トリデシルォキシー 3—ヒドロキシ酪酸等が挙げられる。

これらの 3—ヒドロキシカルボン酸は光学活性体の R—体または S—体並びにラセミ体を用いることができるが、 R ,が C ₅〜C ₂。アルキル基の場合は R —体を用いることが好ましく、 1^が C ₅〜C _{1 5}アルコキシ〜。アルキル基である場合は S—体を用いることが好ましレ、。前記式（1) を有するピペラジノン環を含有するデプシペプチド誘導体を製造するに際して、縮合剤法を用いる場合は、 DCC、 WSC I、 O- (1 H- ベンゾトリァゾーノレ一 1一ィル）一 N， N, N' ， N' —テトラメチルゥ口二ゥムテトラフルォロボレ一ト、ベンゾトリアゾール一 1 Tル一ォキシ一トリス（ジメチノレアミノ）ホスホニゥムへキサフルォロホスフェート、 3— (ジメトキシホスホリルォキシ）一 1， 2， 3—べンゾトリアジン（以下、「DE PBT」という）または O— (7—ァザべンゾトリアゾール一 1一^ fル） _ 1， 2， 3—テトラメチルゥロニゥムへキサフルォロホスフェート（以下、「HA TU」という）等を用いることができる。また、同時に、ラセミ化を抑制するために通常用いられる添加剤、例えば N—ヒドロキシスクシンイミド、 1—ヒドロキシベンゾトリアゾール（以下、 ΓΗΟΒ ΐ」という）、 Ν—ヒドロキシー 5—ノルボネンー 2， 3—ジカルボジィミドべンゾトリァゾールまたは 1—ヒドロキシー 7—ァザべンゾトリアゾール（以下、「HOA t」という）等を加えることも好ましい。

また、アジド法で用レ、られる主な縮合剤としては、ジフエニルリン酸ァジド等が挙げられる。

なお、縮合反応を行う前に、通常公知の手段によって当該縮合反応に関与しないカルボキシル基、ァミノ基等へ保護手段を施すことが好ましい。

この、保護手段に用いる保護基としては、前述の各種保護基を用いることができる。

本発明のピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体の製造工程における保護基の脱離反応にはぺプチド結合に影響を与えずに保護基を脱離できることが要求され、用いる保護基の種類に応じて脱離反応を適宜選択すればよい。前記の各ペプチド合成に用いる溶媒には、例えばクロ口ホルム、ジクロロメタン、酢酸ェチル、 DMF、 DMSO、ピリジン、ジォキサン、 THF、ジメトキシェタン、ァセトニトリルまたはこれら 2種以上の混合物を用いてもよい。また、この縮合反応は約— 20〜50°Cの範囲で行われる。

また、ペプチド合成は、液相法および固相法のいずれによっても製造でき、更に力ラム法、バッチ法のレ、ずれを用いてもよレ、。このようにして製造された本発明のピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体が塩の形態の化合物である場合には、これを遊離の形態の化合物に変換することができ、また本発明のピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体が遊離の形態の化合物である場合にはこれをその薬理学的に許容される塩の形態の化合物に変換することができる。そして後者の場合において、このピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体がカルボキシル基の存在によつて,化合物である時には、薬理学的に許容される無機塩基との塩、例えばナトリウム塩、カリウム塩、カノレシゥム塩、アンモニゥム塩など、または有 ¾ 基との塩を形成させることができ、またこのデブシぺプチド誘導体がァミノ基の存在によって塩基性化合物である時には、無機酸との塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩など、または有機酸との塩、例えは酸塩、コハク酸塩、シユウ酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩などの薬理学的に許容される塩を形成させることができる。

本発明の式（1 ) に示されるピペラジノン環を含有するデプシペプチド誘導体は、種々の方法で製造することができ、これらの方法の例を、つぎの反応スキ一ム 1〜 4で示す。

すなわち反応スキーム 1による反応操作では、 p—メトキシ桂皮酸アルデヒドと L—ァスパラギン酸 α—べンジル /3— t—ブチルエステルとを反応させて中間体 1を生成させ、この中間体 1に F m o cグリシンを反応させて中間体 2を生成させ、これをオゾン酸化して中間体 3を生成させ、さらにこの中間体 3を戀虫還元して中間体 4を生成させた。

—方 3—ヒドロキシカルボン酸例えば 3—ヒドロキシミリスチン酸のカルボキシノレ基をフエナシルプロマイドで保護して得られた中間体 5と、 5—ァミノ —3—ペンテン酸のアミノ基を F m o c - C 1で保護して得られる中間体 6とを反応させて中間体 7を形成させ、ついでこの中間体 7のァミノ基の保護基 F m o cを脱保護して中間体 8を得た。

上記したようにして得た中間体 4と中間体 8とを反応させて目的の化合物 1 を得た。さらにこの化合物 1の保護基を順次脱離して化合物 2および化合物 3 を得た。反応スキーム 1

中間体 3 中間体 4

HO- H0₂C

^ NH, Fmoc

中間体 6

反応スキーム 1 (続き）

中間体 4 +中間体 8

CO

反応スキーム 2

BO

中間体 9 中間体 1 0 中間休 1

C0₂H CO Bzl

反応スキーム 2 (続き）

中間体 4 +中間体 16

また反応スキーム 2による反応操作では、 B o c— D—ロイシンを水素化ホゥ素ナトリゥムで還元して中間体 9を得、ついでこれを酸ィ匕して中間体 9のァルコールをアルデヒドに変換して中間体 1 0を得、これにカルボキシル基を保護したイソロイシンを付加して中間体 1 1とし、この中間体 1 1のカルボキシル基の脱保護により中間体 1 2とし、中間体 1 2のアミノ基を保護して中間体 1 3とした。

—方 3—ヒドロキシミリスチン酸のカルボキシル基を保護してえられた中間体 1 4を中間体 1 3とエステノレ化反応させて中間体 1 5とし、このアミノ基の保護基を脱保護して中間体 1 6を得た。ここで得た中間体 1 6を中間体 4と反応させて化合物 4とし、この化合物 4の保護基を順次はずして化合物 5及び化合物 6を得た。

また反応スキーム 3による反応操作では、 p—メトキシ桂皮酸アルデヒドと L—グリシン t e r t—ブチノレエステルとを反応させて中間体 1 7を得、これに F m o c _ D—ァスパラギン酸 /3 - t e r t 一ブチルエステルを反応させて中間体 1 8とし、この中間体 1 8にオゾンを反応させて二重結合を切断し、次いで環化して中間体 1 9を生成させ、この中間体 1 9のァミノ基の保護基を脱保護して中間体 2 0を得た。

一方 2—ブテン— 1， 4—ジカルボン酸の一方のカルボキシル基を保護して得られた中間体 2 1と、 3—ヒドロキシミリスチン酸のカルボキシル基を保護してえられた中間体 2 2とを反応させて中間体 2 3とし、得られた中間体 2 3 の一方のカルボキシル基の保護基を脱保護して中間体 2 4を得た。

ついでこの様にして得た中間体 2 0と中間体 2 4とを反応させて化合物 7を得、さらに化合物 7のカルボキシル基の保護基を脱保護して化合物 8を得た。反応スキーム 3

中間体 2 2

中間体 20 +中間体 24

反応スキーム 4

C CO,H

HOへ CO,Me TfO"^CO,Me

また反応スキーム 4による反応操作では、ァミノ基が保護された D—口イシンを出発原料として、中間体 2 5を生成させ、これを中間体 2 6に変換し、さらにカルボキシル基の保護基を脱離して中間体 2 7を得た。

ここに得られた中間体 2 7と反応スキーム 3の中間体 2 2とを反応させて中間体 2 8とし、この中間体 2 8のァミノ基の保護基を脱保護して中間体 2 9を得た。

この中間体 2 9と反応スキーム 1の中間体 4とを反応させて化合物 9を得た。さらにこの化合物 9のカルボキシル基の保護基を脱保護して化合物 1 0を得た。

上記の反応スキーム 1〜4にて得られる本発明の式（1 ) に示されるピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体またはその薬理学的に許容される塩は、アポリポプロテイン E産生細胞である H e p G 2細胞に作用してァポリポプ口ティン E産生を強力に促進することから、アポリポプロテイン E産生促進剤として、また神経損傷治療薬、痴呆症治療薬および高脂血症治療薬として有用である。

本発明のピペラジノン環を含有するデプシぺプチド誘導体またはその薬理学的に許容される塩は、種々の投与形態の製剤とすることができる。すなわちこの製剤は経口投与剤として、例えば、錠剤、硬質カプセル剤、軟質カプセル剤、顆粒剤、散剤のような固形製剤、および溶液、ェマルジヨンまたは懸濁液のような液体製剤などがあげられる。また非経口投与の剤形としては' ftli剤、坐剤などが挙げられる。

これらの製剤の調製に当たっては製剤化のための慣用の添加剤、例えば賦形剤、安定剤、防腐剤、溶解剤、湿潤剤、乳化剤、滑沢剤、甘味剤、着色剤、香味剤、張度調整剤、緩衝剤、酸化防止剤などを添加して製剤化することができる。

添加剤としては、例えば澱粉、白糖、果糖、乳糖、ブドウ糖、マンニトール、ソルビトール、沈降性炭酸カルシウム、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、デキストリン、ゼラチン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシゥム、タノレク、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等が挙げられる。本発明のピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体またはその薬理学的に許容される塩を液剤、 ait剤として用いるときは、慣用の希釈剤中に溶解又は懸濁して用いることができる。希釈剤としては、生理食塩水、リンゲル液、ブドウ糖水溶液、アルコール類、月旨肪酸エステル類、グリコール類、グリセリン、動植物由来の油脂、パラフィン類などが挙げられる。またこれらの製剤は通常の方法で製造することができる。

そして通常の臨床投与量は、経口の場合、成人一人 1日当たり 0. 5〜50 O Omg の範囲、好ましくは 5〜500mg の範囲であり、非経口の場合は成人一人 1日当たり 0.05〜500 Omgの範囲である。

実施例

本発明のピペラジノン環を含有するデプシぺプチド誘導体の製造方法の具体例を実施例にて、また本発明のピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体のアポリポプロティン E産生促進作用を試験例にて、さらに本発明のピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体を有効成分とする製剤の具体例を製剤例にて説明する。

実施例 1

実施例 1の反応操作過程は反応スキーム 1に示される。本実施例に於いて中間体番号、および化合物番号によって示される具体的な物質は反応スキーム 1 に示されたものと同じである。

i ) p—メトキシ桂皮酸アルデヒド（4. 86 g) と L—ァスパラギン酸 a 一べンジノレ /3— t—ブチノレエステノレ（8. 38 g) の 1， 2—ジクロロェタン

(80ml) 溶液に、室温で撹拌しながら水素化トリァセトキシホウ素ナトリウム（8.48 g) を加え、ー晚撹拌した。反応液をクロ口ホルムで希釈し、 5% 炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、中間体 1を 8. 04 g得た。

Ή-NMR (δ ppm, CDC1₃) 7.31-7.36 (5H, m), 7.25—7.28 (m， 2H), 6.81—6.85 (2H, m), 6.41 (1H, d, J=16Hz), 6.03—6.10 (1H， m), 5.17 (1H, d, J=12Hz) , 5.15 (1H， d, J=12Hz), 3.80 (3H, s), 3.68 (1H， t, J=6.3Hz), 3.43-3.48 (2H， m)， 2.59-2.71 (2H, m) , 1.41 (9H, s) ·

ii) 中間体 1 (8.02 g) と Fmo c—グリシン（6.74 g) の DMF (3 Oml) 溶液に、室温で撹拌しながら DE PBT (6.81 g) とトリエチルァミン（2.8/nl) を加え、 5時間撹拌した。反応液から溶媒を留去し、シリカゲル力ラムクロマトグラフィ一で精製し、中間体 2を 10.3 g得た。

Ή-NMR ( δ ppm, CDC1₃) 7.76 (2H, d, J=7.8Hz) , 7.61 (2H， d， J=7.3Hz) ,

7.38- 7.42 (2H, m), 7.22-7.33 (7H, m), 7.14 (2H, d, J=8.3Hz) , 6.80 (2H, d， J=8.3Hz), 6.55 (1H， d, J=16Hz)， 5.92-5.99 (IH, m), 5.73 (1H， br), 5.08-5.15 (2H， m), 4.60-4.63 (1H， ra), 4.38 (2H, d, J=7.3Hz), 4.04-4.24 (5H, m), 3.81 (3H, m), 3.21-3.26 (1H， m), 2.79-2.86 (IH, m), 1.41 (9H， s).

iii) 中間体 2 (10. 1 g) のジクロロメタン（10 Oml) とメタノール (2 50ml) 混合溶液を一 70°Cに冷却し、反応液が薄い青色になるまでオゾンを通気した。反応液にジメチルスルフィド（3.5ml) を加え、徐々に室温まで昇温させ、さらに一晚撹拌した。反応液から溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、中間体 3を 3.57 g得た。

^!H-NMR ( 6 ppm, CDC1₃) 7.88 (2H， d, J=7.8Hz), 7.64—7.66 (2H, m),

7.39- 7.44 (2H， m)， 7.30—7.36 (7H, m), 6.16 (1H， br), 5.61 (IH, br), 5.20-5.24 (IH, m), 5.12-5.15 (2H, m), 4.30-4.38 (3H, m), 4.03 (1H， d， J=17Hz)， 3.78 (1H， d, J=17Hz), 2.88-2.95 (IH, w), 2.61-2.73 (IH, ra), 1.36 (9H, s).

iv) 中間体 3 (l. O O g) のメタノーノレ（150ml) 溶液に、 10%パラジゥムーカ一ボン（0. 72 g) を加え、得られた懸濁液を水素雰囲気下に室温で 1時間撹拌した。触媒を濾別し、濾液から溶媒を留去した。残留物に炭酸ナトリウム（0.37 g) の水（4ml) 溶液を加え、得られた懸濁液に氷冷下で N— 9—フルロレニルメトキシカルボニルスクシンイミド（以下、「Fmo c _OSu」という）（0.58 g) の DMF (8ml) 溶液を加え、室温で 1時間撹拌した。反応液を水で希釈し、ジェチルエーテルおよび齚酸ェチルで洗浄した。水層を氷浴中で撹拌しながら、 6 N塩酸を加えて pH を 2に調整し、クロ口ホルムで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去した後、シリカゲノレカラムクロマトグラフィーで精製し、中間体 4を 0.55 g得た。

Ή-N R (δ ppm, d6-DMS0) 12.9 (1H, br), 7.87 (2H, d， J=7.3Hz) , 7.61 (2H， d, J=7.8Hz) , 7.39-7.43 (2H， m) , 7.31—7.35 (2H, m), 4,98—5.02 (1H， m), 4.39 (2H, d, 6.8Hz) , 4.29 (1H， t， 6.3Hz) , 3.94 (2H， s), 3.23-3.59 (4H, m), 2.85 (1H, dd, J=6.8Hz, 16Hz), 2.66 (1H, dd, J=8.3Hz, 16Hz), 1.37 (9H, s). v) (R)_3—ヒドロキシミリスチン酸（2.50 g) とトリェチルァミン（1. 43ml) の DMF (25ml)溶液にフエナシルブロマイド（2.04 g)を室温で加え一晩撹拌した。溶媒を留去した後、残留物を酢酸ェチルで希釈し、水洗し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトダラフィ一で精製し、中間体 5を 3.53 g得た。

-隨 (δ ppm, CDC1₃) 7.92 (2H, d, J=6.8Hz), 7.63 (1H, d， J=7.3Hz)， 7.50 (2H， d, J=7.6Hz) , 5.48 (1H， d， J-17Hz), 5.37 (1H, d， J-17Hz) , 4.09-4.18 (1H, m)， 3.41 (1H， br), 2.70 (1H， dd, J=2.9, 15Hz), 2.57 (1H, dd, J=9.3, 15Hz), 1.19-1.67 (20H, m)， 0.88 (3H， t, J=6.8Hz).

vi) 5—ァミノ— 3—ペンテン酸（1.00 g) の 10%炭酸ナトリウム水溶液（2 Oml) 及びジォキサン（1 Oml) 溶液に氷冷下、 Fmo c— C l (2.2 0 g) のジォキサン（1 Oml) 溶液を加え、一夜撹拌した。反応液を酢酸ェチルで希釈し、 10 %炭酸ナトリウム水溶液で 3回抽出した。水層を 1 N塩酸で酸性とした後、酢酸ェチルで抽出した。有機層を水、飽和食 ^ΤΚで順次洗浄し、無水硫酸ナトリゥムで乾燥した。溶媒を留去し、中間体 6を 2.44 g得た。

Ή- R (δ ppm, CDC1₃) 7.75-7.76 (2H, m), 7.57-7.59 (2H, m), 7.37-7.41 (2H, m), 7.28-7.32 (2H, m)， 5.50-5.70 (2H， m), 4.88 (1H， m)， 4.40-4.43 (2H, m), 4.20-4.30 (1H, m)， 3.60-3.82 (2H, m)， 3.00-3.12 (2H， m).

vii)中間体 5 (0.86 g)、中間体 6 (0.93 g) および DMAP (6 lmg) のジクロロメタン（30ml) 溶液に氷冷下、 DCC (0. 77 g) を加え、氷冷下で 2時間、続いて室温で一晩撹拌した。析出物を濾別した後、溶媒を留去した。残留物を酢酸ェチルで希釈し、 10%クェン酸水溶液、水、 5%炭酸水素ナトリゥム水溶液および水で順次洗浄後、無水硫酸ナトリゥムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、中間体 7 を 1.54 g得た。

Ή-N R ( δ ppm, CDC1₃) 7.88 (2H, d, J=6.8Hz), 7.75 (2H, d, J=7.8Hz), 7.58 (2H, d, J=7.3Hz) , 7.58 (IH, t, J=7.6Hz)， 7.45 (2H, t， J=7.6Hz), 7.39 (2H, t, J=7.6Hz) , 7.30 (2H， t， J=7.3Hz) , 5.69-5.80 (IH, m), 5.57-5.68 (IH, m), 5.27-38 (3H， m), 4.99 (1H， brs), 4.36 (2H， d, J=6.8 Hz) , 4.19 (IH, t, J=6.6 Hz), 3.81 (2H, brs)， 3.05—3.17 (2H, m), 2.77 (1H， dd, J=3.4Hz), 2.75 (1H， d, J=1.5Hz), 1.53-1.76 (2H, m), 1.18-1.41 (應， m), 0.88 (3H, t, J=6.8Hz) . viii) 中間体 7 (0.33 g) の DMF (5ml) 溶液に、ジェチルァミン（0. 5ml) を加え室温で 1時間撹拌した。反応液から溶媒を留去し、シリカゲル力ラムクロマトグラフィ一で精製して中間体 8を 0.38 g得た。

Ή-NMR ( δ ppm, CDC1₃) 7.89-7.91 (2H, m), 7.59—7.63 (1H， m)， 7.47—7.51 (2H， m), 5.70-5.72 (2H， m), 5.28-5.39 (3H, m), 3.30-3.31 (2H, m), 3.09-3.11 (2H, m)， 2.71-2.81 (2H, m), 2.17 (2H, br), 1.25-1.30 (20H, m)， 0.88 (3H, t, J=6.8Hz) .

ix) 中間体 4 (0.49 g)、中間体 8 (0.38 g) および HOB t '—水和物（0. 1 7 g) のジクロロメタン（15ml) 溶液に氷冷下、 WSC I (0.2 9 g) を加え、氷冷下で 10分間、続いて室温でー晚撹拌した。反応液をクロ口ホルムで希釈し、 5 %炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリゥムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物 1を 0.53 g得た。

Ή-N R ( δ ppm, CDC1₃) 7.30-7.90 (13H, m), 6.41 (1H， t, J=5.4Hz) , 5.67-5.72 (1H， m), 5.52-5.59 (IH, m)， 5.28-5.42 (4H， m), 2.58-4.45 (17H, m)， 1.42 (9H, s)， 1.25-1.37 (20H, m), 0.88 (3H， t， J=6.3Hz) .

x) 化合物 1 (0.49 g) の醉酸 (5ml) 溶液に、亜鉛粉末（1 g) を加え、 50°Cで 2時間撹拌した。不溶物を濾別し、濾液から溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィ一で精製し、化合物 2を 0.43 g得た。

Ή-NMR ( δ ppm, CD3OD) 7.78-7.83 (2H, m)， 7.59 (2H, d, J=7.3Hz) , 7.40 (2H, t， J=7.3Hz) , 7.30-7.34 (2H， m), 5.64-5.72 (1H， m)， 5.54-5.62 (1H， m), 5.31-5.36 (1H, m), 5.16—5.23 (1H, m), 4.50 (2H, d, J=6.3Hz), 4.25 (1H, t, J=6.3Hz)， 3.34-4.03 (8H， m)， 3.03 (2H, d， J=6.3Hz)， 2.92 (2H， dd, J=6.8Hz, 16Hz), 2.55-2.64 (1H， m), 2.53 (2H, d， J=7.3Hz) , 1.42 (9H, s), 1.26-1.38 (20H, m), 0.89 (3H， t， J=6.3Hz).

xi)化合物 2 (0.38 g) にトリフルォロ酢酸 (以下、「TFA」という） (1.

5 ml) を加え、室温で 1時間撹拌した。反応液をクロ口ホルムで希釈し、水洗し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムク口マトグラフィ一で精製し、化合物 3を 0 · 27 g得た。

■H-NMR ( δ ppm, d6- DMSO) 8.26 (1H, br), 7.86 (2H， d, J=7.8Hz) , 7.61 (2H, d, J=7.8Hz), 7.41 (2H, t, J=7.3Hz), 7.33 (2H， t, J=7.3Hz), 5.54-5.60 (2H, m)， 5.25-5.29 (1H, m)， 5.08-5.11 (1H, m), 4.25-4.38 (3H, m), 3.88-3.98 (2H, m), 3.33-3.81 (6H, m), 2.90-3.00 (2H, m), 2.73-2.79 (1H, m), 2.32-2.43 (3H, m), 1.21-1.37 (20H, m), 0.84 (3H， t， J=6.8Hz) .

実施例 2

実施例 2の反応操作過程は反応スキーム 2に示される。本実施例に於いて中間体番号、およびィ匕合物番号によって示される具体的な物質は反応スキーム 2 に示されたものと同じである。

i ) B o c— D—ロイシン ·一水和物（8.56 g) の THF (8 Oml) 溶液に、氷冷下でトリェチルァミン（6 ml) とクロロギ酸ェチル（3.6 ml) を加え、 45分間撹拌した。析出物を濾別した後、濾液を水素化ホウ素ナトリウム (3.24 g) の THF (8 Oml) —水（20ml) 混合溶液中に、氷冷下で 3 0分間かけて滴下し、さらに氷冷下で 1時間撹拌した。反応液を約 3 Oml まで減圧下に濃縮し、残留物をジェチルエーテルで希釈し、水洗し、無水硫酸マグネシゥムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィ一で精製し、中間体 9を 7. 14 g得た。

Ή- R (δ ppm, CDC1₃) 4.59 (1H, br), 3.64-3.72 (2H, m), 3.48-3.53 (1H, m), 2.59 (1H, br), 1.63—1.72 (1H， m), 1.45 (9H, s), 1.30—1.33 (2H, m),

0.92 - 0.94 (6H, m).

ii) 塩化ォキサリル（2.5 ml) を含むジクロロメタン（80ml) 溶液に、 D MSO (2.99 g) を含むジクロロメタン（8ml) 溶液を一 78 °Cで滴下し、 15分間撹拌した。反応液に中間体 9 (3. 14 g) を含むジクロロメタン（5 Oml) 溶液を 10分間で滴下し、一 78°Cで 30分間，一 50°Cで 1時間撹拌した後、反応液にジイソプロピルェチルァミン（12ml) を加え、 30分かけて室温まで徐々に昇温させた。反応液に飽和食塩水を加え、有機層を分離し、無水硫酸ナトリゥムで乾燥した。溶媒を留去し、中間体 10を 7.87 g得た。これを 1， 2—ジクロロェタン（20 Oml) に溶解し、 D—イソロイシン ' p—トルエンスルホン酸塩（3.27 g) および水素化トリァセトキシホウ素ナトリウム（2.29 g) を室温で加え、 2時間撹拌した。反応液を炭酸水素ナトリゥム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリゥムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、中間体 1 1を 3.46 g 得た。

'Η—隱 (δ ppm, CDC1₃) 7.31-7.39 (5H， m), 5.19 (1H， d, J=12Hz), 5.12 (1H, d, J=12Hz), 4.67 (1H, br), 3.69 (1H, br), 3.06 (1H, d, J=5.9Hz) , 2.56- 2.61 (1H， m), 2.41-2.44 (1H, m)， 1.49-1.70 (4H, m), 1.44 (9H， s), 1.11-1.22 (2H， m), 0.83-0.91 (12H, m).

iii) 中間体 1 1 (3.46 g) のメタノール（200ml) 溶液に、 10%パラジウム一カーボン（0.98 g) を加え、得られた懸濁液を水素雰囲気下に室温で 1時間撹拌した。触媒を濾別し、濾液を 2 Omlまで減圧下に濃縮して、析出した結晶を濾取し、エタノールで洗浄し、中間体 12を 1. 1 6 g得た。さらに残りの濾液を 1 Omlまで減圧下に濃縮して、析出した結晶を濾取し、エタノールで洗浄し、中間体 12を 0.46 g得た。

Ή-NMR ( 5 ppm, d6-DMS0) 6.46 (1H， br), 3.59 (1H， br), 2.94 (1H， d, J=5.4Hz)， 2.50-2.59 (2H, m), 1.49—1.64 (3H， m), 1.39 (9H， s), 1.15—1.32 (3H, m)， 0.83 - 0.87 (12H, m).

iv) 中間体 1 2 (1.59g) の THF (8 Oml) 溶液に、炭酸水素ナトリウム (2.65 g) の水（5 Oml) 溶液を加え、氷冷下で 10分間撹拌した後、 C b z -C 1 (3ml) を加え、さらに 3時間撹拌した。反応液を約 50ml まで減圧下に濃縮し、残留物にクロ口ホルムと水を加え、氷浴中で撹拌しながら 1 0%クェン酸水溶液を加え、 pH を 4に調整した。有機層を分離し、水層をクロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、中間体 1 3を 1. 9 6 g得た。

Ή-NMR ( δ ppm, CD30D) 7.29-7.42 (5H, m), 5.17 (1H, d, J=12Hz)， 5.08 (1H, d, J=12Hz)， 3.87-3.98 (2H， m)， 3.40—3.45 (1H， m), 3.14-3.19 (1H, m), 2.01

(1H, br), 1.62 (1H, br), 1.42 (9H， s)， 0.77—1.28 (16H, m).

v) (R)— 3—ヒドロキシミリスチン酸（3.42 g) の DMF (3 Oml) 溶液に室温下でトリェチルァミン（2.3 ml) と臭化べンジル（1.8 ml) を加え、

2日間撹拌した。反応液から溶媒を留去した。残留物を酢酸ェチルで希釈し、水洗し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、中間体 14 (2.68 g) を得た。

'H-N R ( δ ppm, CDC1₃) 7.32-7.39 (5H, m), 5.16 (2H， s), 4.01—4.05 (1H， m), 2.83 (1H, d， J=3.9 Hz) , 2.56 (1H， dd, J=3.4， 16.6 Hz), 2.46 (1H， dd, J=8.8, 16.6 Hz), 1.41-1.43 (2H, m), 1.25 - 1.56 (18H, m), 0.88 (3H， t, J=6.8 Hz).

vi) 中間体 13 (1.46 g)、中間体 14 ( 1.34 g )、および DMA P (4 Omg) のジクロロメタン（10ml) 溶液に氷冷下、 DCC (0. 97 g) を加え、氷冷下で 30分間、室温で一晩撹拌した。析出物を濾別し、 10%クェン酸水溶液および水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリゥムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、中間体 15を 1.0 9 g得た。

'H-NMR ( δ ppm, d6-DMS0) 7.27-7.37 (丽， m), 6.44 (1H, br), 4.98-5.13 (5H， m)， 4.06 (1H， br), 3.74 (1H, br), 3.25-3.31 (1H， m), 3.01-3.06 (1H, m), 2.59-2.64 (2H, m)， 2.00 (1H, br), 1.00-1.82 (32H， m), 0.82-0.87 (15H, m). vii) 中間体 15 (1.29 g) を TFA (5 ml) に溶解し、室温で 90分間撹拌した。反応液から溶媒を留去した後、残留物にクロ口ホルムと水を加え、水層を 5%炭酸水素ナトリゥム水溶液で pH 8に調整した。有機層を分離し、水層をクロ口ホルムで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去して中間体 1 6を 1.08 g得た。このうち◦.54 gをジクロロメタン (5 ml) に溶解し、氷冷下で HO A t (0. 1 2 g)、ジイソプロピノレエチノレアミン（0.22ml), HATU (0.37 g) および中間体 4 (0.41 g) のジクロロメタン（5 ml) 溶液を順次加えた後、徐々に室温に昇温させ、さらに一晚撹拌した。反応液をクロ口ホルムで希釈し、 10%クェン酸水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィ一で精製し、化合物 4を 0.79 g得た。

'H-NMR (δ pm, d6-DMS0) 7.86 (2H, d, J=7.8Hz), 7.71 (1H， br), 7.60 (2H, d， J=5.3Hz) , 7.31-7.42 (14H, m), 4.94-5.23 (6H， m), 4.25-4.37 (3H, m), 3.92-3.99 (3H， m)， 3.08-3.55 (7H, m), 2.41-2.80 (4H, m), 2.02 (1H， br), 0.97—1.51 (34H, m)， 0.75-0.86 (15H, m).

viii) ィ匕合物 4 (0.64 g) のメタノール（40ml) 溶液に、 10%パラジゥムーカ一ボン（138mg) を加え、得られた懸濁液を水素雰囲気下に室温で 5時間撹拌した。触媒を濾別し、濾液から溶媒を留去した。残留物をメタノーノレ（40ml) に溶解し、 10%パラジウム一カーボン（1 1 Omg) を加え、得られた懸濁液を水素雰囲気下に室温で 40分間撹拌した。触媒を濾別し、濾液カら溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ィ匕合物 5を 0.35 g得た。

Ή-NMR (δ ppm, d6- DMSO) 7.87 (2H， d, J=7.3Hz) , 7.61 (2H, d, J=7.8Hz) , 7.31-7.46 (5H， m), 5.09-5.22 (2H， m), 4.26-4.38 (3H, m), 3.90—4.01 (3H, m), 3.18-3.63 (5H, m), 2.76-2.93 (2H， m), 2.28-2.56 (4H, m), 1.02-1.54 (35H, m), 0.79-0.86 (15H， m).

ix) 化合物 5 (0.34 g) を TFA (3ml) 〖こ溶解し、室温で 90分間撹拌した。反応液から溶媒を留去した後、残留物にジェチルエーテル（2ml) を加え、均一溶液とした。この溶液を水冷したへキサン（15ml) 中に滴下し、沈殿を析出させた。上澄み液を除き、残った沈殿物を減圧下乾燥し、化合物 6のトリフノレオ口酢酸塩を 0.34 g得た。

Ή-N R ( 5 ppm, d6-DMS0) 12.3 (1H， br), 8.70 (1H， br), 7.87 (2H, d， J=7.3Hz), 7.62 (2H， d， J=7.3Hz) , 7.39-7.43 (2H, m), 7.31-7.35 (2H, m), 5.23-5.27 (1H, m)， 4.55—4.59 (1H, m), 3.50-4.39 (11H, m) , 2.85-3.02 (2H, m), 2.49-2.62 (4H, m) , 1.98-2.02 (1H, m)， 1.20—1.61 (34H, m)， 0.80-0.96 (15H， m).

実施例 3

実施例 3の反応操作過程は反応スキーム 3に示される。本実施例に於いて中間体番号、および化合物番号によって示される具体的な物質は反応スキーム 3 に示されたものと同じである

i ) p—メトキシ桂皮酸アルデヒド（7.00 g) と L一グリシン tert—ブチルエステル（7.25 g) の 1， 2—ジクロロェタン（40 Oral) 溶液に、室温で撹拌しながら水素化トリァセトキシホウ素ナトリウム（12.7 g) を加え、 1時間撹拌した。反応液を 5%炭酸水素ナトリゥム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリゥムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲル力ラムクロマトグラフィ一で精製し、中間体 17を 3.56 g得た。

'H-N R (δ ppm, CDC1₃) 7.28-7.32 (1H， m)， 6.83-6.86 (1H， m), 6.47 (1H, d， J=16Hz) , 6.11 (1H, td, J=6.3Hz, 16Hz), 3.80 (3H， s), 3.39 (2H， dd, J=l.5Hz, 6.3Hz) , 3.33 (2H， m), 1.46 (9H， m).

ii) 中間体 17 (6.02 g) と Fmo c— D—ァスパラギン酸 /3— tert— ブチルエステル（9.99 g) の DMF (3 Oml) 溶液に、室温で撹拌しながら DEPBT (7.4 O g) とトリェチルァミン（3.2ml) を加え、一晚撹拌した。反応液から溶媒を留去し、シリカゲノレカラムクロマトグラフィーで精製し、中間体 18を 14.2 g得た。

Ή-N R ( δ ppm, CDC1₃) 7.75 (2H, d, J=7.8Hz), 7.54-7.60 (2H， m), 7.37-7.41 (2H， m)， 7.26-7.32 (4H, m)， 6.77-6.83 (2H, m), 6.42-6.52 (1H, m), 5.90-6.07 (1H, m), 5.70-5.74 (1H， m), 4.83-5.14 (1H, m), 3.92-4.40 (7H, m), 3.76 (3H， m), 2.74-2.81 (1H, m)， 2.56-2.65 (1H， m), 1.43 (9H, s). iii) 中間体 18 ( 14.0 g) のジクロロメタン（100ml) とメタノール (25 Oml) 混合溶液を一 70°Cに冷却し、反応液が薄い青色になるまでォゾンを通気した。反応液にジメチルスルフィド（5ml) を加え、徐々に室温まで昇温し、さらに一晩撹拌した。反応液から溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィ一で精製し、中間体 1 9を 1 1.3 g得た。

Ή-NMR ( δ ppm, d6— DMSO) 7.81-7.87 (2H, m), 7.67 (2H, d， J=7.3Hz), 7.39-7.42 (2H, m), 7.30-7.35 (2H， m)， 4.89 (1H， br), 4.79 (1H, br), 4.53-4.61 (2H， m), 4.28-4.32 (2H， m), 3.58 (1H， d, J=13Hz), 3.49 (1H， d， J=13Hz), 2.43-2.61 (2H， m), 1.42 (9H， s)， 1.36 (9H, s).

iv) 中間体 19 (2.85 g) のメタノール（200ml) 溶液に、 10%パラジゥムーカ一ボン（2.66 g) を加え、得られた懸濁液を水素雰囲気下に室温で 7時間撹拌した。触媒を濾別し、濾液から溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、中間体 20を 0. 70 g得た。

'H-NMR (5 ppm, CDC1₃) 4.14 (1H, d, J=17Hz), 3.83 (1H， d, J=17Hz), 3.76 (1H， dd, J=2.9Hz, 9.3Hz), 3.52-3.58 (1H， m), 3.08-3.27 (3H， m), 2.98 (1H, dd， J=2.9Hz, 17Hz), 2.64 (1H, dd, J=9.3Hz, 17Hz), 1.47 (9H, s)， 1.45 (9H， s).

v) trans— 2—ブテン一 1, 4—ジカルボン酸（3.00 g) とトリエチルァミン（3.2ml) の DMF (5 Oml) 溶液にフエナシルブロマイド（4. 14 g) の DMF (20ml) 溶液を室温で加え一晩撹拌した。不溶物を濾別し、濾液から溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、中間体 21を 3.02 g得た。

Ή-N R (δ ppm, CDC1₃) 7.90-7.92 (2H, m)， 7.59-7.63 (1H, m), 7.47-7.51 (2H, m)， 5.72-5.83 (2H, m), 5.36 (2H， s), 3.29-3.31 (2H, m), 3.15—3.17 (2H, m).

vi) (R)— 3—ヒドロキシミリスチン酸（1.67 g) を酢酸 tert—ブチル (4 Oml) に懸濁させ、氷冷下で撹拌しながら三フッ化ボラン ·ジェチルエーテル錯体（3.5ml) を加え、 4時間 30分撹拌した。反応液に水を加え、有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、中間体 22を 1.35 g得た。

Ή-NMR (δ ppm, CDC1₃) 3.93-3.98 (1H, m), 3.07 (1H, d, J=3.9Hz) , 2.43 (1H, dd, J=2.9Hz, 17Hz), 2.31 (1H， dd, J=9.2Hz, 17Hz), 1.19一 1.52 (29H, m)， 0.88 (3H, t, J=6.8Hz). vii) 中間体 21 (0.31 g), 中間体 22 (0.30 g) および DMAP (2 5mg) のジクロロメタン（3ml) 溶液に氷冷下、 DCC(0.31 g) を加え、氷冷下で 5分間、続レ、て室温で 30分間撹拌した。析出物を濾別し、溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、中間体 23を 0· 46 g得た。

Ή-N (δ ppm, CDC1₃) 7.90-7.92 (2H, m), 7.59—7.64 (1H, m)， 7.47—7.51 (2H, m), 5.74-5.76 (2H, m), 5.35 (2H， s), 5.17-5.25 (1H， m), 3.27-3.29 (2H, m)， 3.08-3.09 (2H, m)， 2.42-2.53 (2H， m), 1.43 (9H， s)， 1.24-1.39 (20H, m), 0.87 (3H， t, J=6.8Hz).

viii) 中間体 23 (0.51 g) の酢酸（1 Oml) 溶液に、亜鉛粉末（1. 7 7 g) を加え 50°Cで 3時間 30分撹拌した。不溶物を濾別し、濾液を濃縮した後、シリカゲカラムクロマトグラフィーで精製し、中間体 24を 0.3 9 g得た。

'H-NMR ( δ ppm, CDC1₃) 5.63-5.76 (2H, m), 5.18—5.35 (1H， m)， 3.13 (2H， d, J=5.4Hz) , 3.07 (2H， d, J=5.4Hz)， 2.42-2.53 (2H, m), 1.43 (9H， s)， 1.24-1.36 (20H， m), 0.88 (3H, t， J=6.8Hz) .

ix) 中間体 24 (0.39 g) をジクロロメタン（5ml) に溶解し、水冷下で HOA t (0. 14 g)、ジイソプロピルェチルァミン（0.32ml)、 HATU

(0.42 g) および中間体 20 (0.40 g) のジクロロメタン（6ml) 溶液を順 ¾fc¾えた後、徐々に室温に昇温させ、さらに 6時間 30分撹拌した。反応液をクロ口ホルムで希釈し、 10 %タエン酸水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリゥムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲル力ラムクロマトグラフィーで精製し、化合物 7を 0.61 g得た。

Ή-NMR (δ ppm, CDC1₃) 5.67-5.70 (2H， m), 5.17-5.20 (1H， m), 4.82-4.86 (1H， m), 3.82-4.21 (3H, m), 3.52-3.68 (1H， m), 2.74-3.32 (8H， m), 2.41-2.52 (2H, m), 1.46 (9H， s)， 1.44 (9H, s), 1.42 (9H, s)， 1.24-1.27 (20H, m)， 0.87 (3H, t, J=6.8Hz) .

x) 化合物 7 (0.57 g) に TFA (4 ml) を加え、室温で 90分間撹拌した。反応液から溶媒を留去した後、残留物にジェチルエーテル（2ml) を加え、均一溶液とした。この溶液を氷冷したへキサン（1 5ml) 中に滴下し、沈殿を析出させた。上澄み液を除き、残った沈殿物を減圧乾燥し、化合物 8を 0.3 2 g得た。

Ή-NMR (6 ppm, d6— DMSO) 12.3 (3H, br), 5.57-5.67 (2H, m), 5.04-5.11 (1H， m), 4.90-4.93 (1H， m), 3.87-4.21 (3H， m), 2.66-3.66 (9H， m), 2.42-2.53 (2H， m), 1.23-1.30 (20H, m), 0.86 (3H， t, J=6.8Hz).

実施例 4

この実施例 4の反応操作過程は反応スキーム 4に示される。本実施例に於いて中間体番号、および化合物番号によって示される具体的な物質は反応スキーム 4に示されたものと同じである

i ) Z— D—口イシン（5.30 g) の THF (8 Oml) 溶液に 1 , I' —力ルポニルジイミダゾ一ル（3.41 g) を室温でカ卩え、 2時間撹拌した。

ジイソプロピルアミン（8.83ml) の THF (2 Oml) 溶液に n— BuL i (1.63M) へキサン溶液（38. 7ml) を一 20°Cで加え、 20分撹拌した。ここに一 78 °Cで酢酸 t—ブチルエステル（8.49ml) を加え 30分撹拌した。ここに、先に調製したイミダゾール溶液を一 78 °Cで加えた。この温度で 1時間撹拌した後、 1 N塩酸水を加え酢酸ェチルで 2回抽出した。有機相を水と飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲカラムクロマトグラフィーで精製し、中間体 25を 5.0 9 g得た。

Ή-NMR ( δ ppm, CDC1₃) 7.27-7.40 (5H, m), 5.21 (1H， d, J=8.8Hz), 5.11 (2H, s), 4.47 (1H， dt， J=3.7, 9.3Hz), 3.50 (1H, d, J=15Hz), 3.42 (1H, d， J=16Hz) , 1.46 (9H, s)， 1.35-1.80 (3H, m), 0.97 (3H， d， J=5.9Hz) , 0.94 (3H, d， J=6.3Hz) .

ii) N a H (60%, 0.39 g) の THF (5 Oml) 懸濁液に中間体 25 (3. 30 g) の THF (13 Oml) 溶液を氷冷下滴下して加えた。 10分間撹拌した後、ブロモ酢酸メチル（1. 7ml) の THF (5ml) 溶液を加えた。この反応液を室温でー晚撹拌後、 1 N塩酸水を加え酢酸ェチルで抽出した。得られた有機相を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去した後、ジクロロメタン（50ml) に溶角した。 TFA ( 16ml) を加え室温で 2日間撹拌した。溶媒を留去した後、クロ口ホルムと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。得られた有機相を飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液と飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲル力ラムクロマトグラフィ一で精製し、中間体 26を 2.59 g得た。

Ή-NMR (δ ρρπι, CDC1₃) 7.28-7.41 (5H， m), 5.21 (1H， d, J=7.8Hz), 5.10 (2H， s), 4.42 (1H, dt, J=4.4, 9.3Hz)， 3.67 (3H， s), 2.85-2.96 (1H,. m), 2.72-2.83 (1H, m), 2.51-2.71 (2H, m)， 1.55 - 1.81 (2H, m)， 1.31-1.45 (1H， m), 0.98 (3H， d， J=6.3Hz)， 0.94 (3H， d, J=6.3Hz).

iii) 中間体 27 (2.50 g) の THF (45ml) と水（45ml) 混合溶液に水酸ィ匕リチウム ' 1水和物（0.63g) を加え室温で 30分間撹拌した。ジェチルエーテルと飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液を加え、得られた水相を 6 N塩酸水で pH 3とし酢酸ェチルで抽出した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、中間体 27を 2.40 g得た。

Ή— MR (δ ppm, CDC1₃) 7.28-7.40 (5H, m), 5.24 (1H， d， J-8.3Hz), 5.10 (2H， s), 4.42 (1H， dt, J=3.9, 8.8Hz) , 2.52-2.94 (4H, . m), 1.58-1.78 (2H， m), 1.34-1.42 (1H, m)， 0.97 (3H, d, J=6.3Hz), 0.93 (3H, d, J=6.3Hz). iv) 中間体 22 (0.80 g)、中間体 27 (0.94 g) と DMAP (22mg) のジクロロメタン（20ml) 溶液に DC C (0.82 g) を氷冷下加えた。この反応液を氷冷下で 2時間、室温で一晩撹拌した。濾過 .濃縮後、酢酸ェチノレと 10%クェン酸水溶液を加えた。得られた有機相を水、 5%炭酸水素ナトリゥム水溶液及び水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲカラムクロマトグラフィーで精製し、中間体 28を 1.31 g 得/こ。

Ή-NMR (δ ppm, CDC1₃) 7.28-7.41 (5H， m), 5.14-5.29 (2H, m), 5.10 (2H, s)， 4.36-4.46 (lH，m), 2.38-2.95 (6H， m), 1.50—1.80 (3H, m), 1.43 (9H， s), 1.17-1.45 (20H, m)， 0.98 (3H, d, J=5.9Hz), 0.94 (3H, d, J=6.3Hz)， 0.88 (3H, t, J=6.8Hz). v) 中間体 28 ( 1.20 g) のメタノール（30ml) 溶液に、 5%パラジゥムーカ一ボン（0.25 g) を加え、得られた懸濁液を水素雰囲気下に室温で 1時間撹拌した。触媒を濾別し、濾液から溶媒を留去し中間体 29を 0.86 g得た。

vi) 得られた中間体 29 (0.43 g)、中間体 4 (0.41 g) 及び HOB t —水和物（0. 1 2 g) のジクロロメタン（10ml) 溶液に氷冷下、 WSC I

(0. 15 g) を加え、氷冷下で 2時間、続いて室温で一晩撹拌した。醉酸ェチルと 10%クェン酸水溶液を加えた。得られた有機相を水、 5%炭酸水素ナトリウム水溶液及び水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物 9を 80rag 得た。

Ή-NMR (δ ppm, CDC1₃) 7.77 (2H, d, ]=7.8Hz), 7.56 (2H， d, J=7.3Hz), 7.41 (2H, t, J=7.3Hz)， 7.32 (2H, t, J=7.6Hz), 6.57 (1H， d， J=6.8Hz), 5.49-5.57 (1H, m), 5.16 (1H， quint. , J=6.1Hz), 4.33—4.58 (3H, m), 4.24 (1H, t, J=6.6Hz)， 3.96-4.16 (2H, m), 3.33-3.50 (2H, m), 3.10-3.29 (2H, m)， 2.78-2.98 (2H， m), 2.37-2.73 (6H， m)， 1.49—1.79 (3H， m), 1.42 (9H， s)， 1.41 (9H, s), 1.16-1.33 (20H, m), 0.95 (6H， d, J=6.8Hz) , 0.87 (3H， t, J=6.8Hz) . vii) 化合物 9 (8 Omg) に TFA (lml) を加え、室温で 1時間撹拌した。反応液から溶媒を留去し化合物 10を 7 lmg得た。

Ή-NMR (δ ppm, d6-DMS0) 8.22 (1H, d， J=7.8Hz), 7.88 (2H, d， J=7.3Hz) , 7.62 (2H, d, J=7.3Hz), 7.41 (2H, t, J=7.3Hz), 7.33 (2H, t, J=7.3Hz), 5.21 (1H， t， J=6.8Hz)， 5.03 (1H， quint. , J=6.2Hz), 4.37 (2H， d, J=6.3Hz) , 4.22-4.31 (2H, m), 3.94 (2H, s), 3.57-3.67 (1H， m), 3.42-3.55 (1H, m), 3.30 (2H, t, J=4.9Hz) , 2.86 (1H, dd, J=7.8， 16Hz)， 2.64-2.72 (2H, m)， 2.36- 2.54 (7H, m)， 1.41-1.66 (3H， ra), 1.11-1.30 (20H, m), 0.88 (3H， d, J=6.3Hz), 0.79-0.86 (6H, m).

試験例

次に本発明のピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体が H e p G 2細胞において、アポリポプ口ティン E産生能およびアポリポプロティン B産生能に与える影響を、試験方法とともに記す。

まず、 He p G2細胞 1 X 105個 Zml (ダルベッコ変法イーグル培地（日水製薬；以後「D— MEM培地」と呼ぶ）に 10%の牛胎児血清を加えたものに懸濁）を 24穴組織培養用プレートに lml ずつ注入し、 37°Cで炭酸ガス 5 %および空気 95 %の混合ガス雰囲気下で培養した。 3日後に、培地をピぺッターにて除去し、新たに D— MEM培地 1ml を加え、さらに表 1に示す濃度の、本発明のピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体である化合物 3、化合物 6の TF A塩、化合物 8およびィヒ合物 10の MeOH溶液 10 μΐ を加えた。 18時間後、培地（D— MEM培地）を再び交換し、このピぺラジノン環を含有するデプシぺプチド誘導体のメタノール溶液 10^1 を加え、さらに 37°Cで 8時間培養し、その上澄み液をサンプル溶液とした。培地中に生成したアポリポプロティン Eを以下に示すェンザィムィムノアッセィ法によって定量した。

なお、ェンザィムィムノアッセィ法で使用した緩衝液の組成を以下に示す。なお、 PB Sとはリン酸緩衝液を、 PBS— Tは Twe e n 20を添カロしたリン酸緩衝液を、ブロッキング液は大日本製薬の乳タンパク質由来の免疫用ブロック剤「B 1 o c k Ac e」を含むリン^^衝液を示す。

PB S (ρΗ7.2)

ΚΗ₂Ρ04 0.2 g

Na ₉ΗΡΟ, 2Η₅0 2.9 g

Ν a C 1 8.0 g

KC 1 0.2 g

蒸留水

1000ml

P B S— T (pH 7.2 )

KH₂P04 0.2 g

N a ₂ΗΡ0₄· 1 2H₂0 2.9 g

Na C 1 8.0 g KC 1 0. 2 g

T w e e n 20 0. 5 g

蒸留水

全量 1 00 Oml ブロッキング液（pH7. 2)

B l o c k Ac e 2 50 ml

KH₉P04 0. 2 g

N a ₂ΗΡ0₄· 1 2H₂0 2. 9 g

N a C 1 8. 0 g

KC 1 0. 2 g

蒸留水

000 ml

1) アポリポプロテイン Eの測定

マウス抗ヒトァポリポプ口ティン Eモノクローナル抗体（仏国 BYOSIS, S. A. 社製）を 0. 0 5M炭酸水素ナトリウム水溶液（pH9. 5) に 5 g/ml の濃度で溶解した。この 5 0 1をヌンクイムノプレートに分注し、 4°Cで 1 6 時間静置した。 PB S 3 00 1で 3回洗浄後、ブロッキング液 30 0 μ \ を加え、 3 7 °Cで 2時間静置し、その後 4 °Cで 1 6時間静置した。

再び P B S 3 00 μ 1で 3回洗浄し、サンプル溶液 5 0 μ 1 (H e p G 2細胞の培地）を加え、室温で 2時間静置した。 P B S— Τ 3 00 μ 1で 3 回洗浄後、ャギ抗アポリポプロテイン Εポリクローナル抗体（米国ケミコン社製）の 3 0 00倍希釈液（1 0% B l o c k A c e水溶液） 5 0 μ 1を加え、室温で 2時間静置した。 P B S— Τ 30 0 μ 1で 3回洗浄し、ペルォキシダーゼ標識抗ャギ I g Gポリク口一ナル抗体（英国バインディングサイト社製）の 5000倍希釈液（1 0% B l o c k A c e水溶液）を加え、室温で 2時間静置した。 P B S—T 3 00 1で 5回洗浄後、発色液（組成： 0. 1Mクェン酸カリウム ρΗ4. 5 lml、 3 0 %過酸ィ匕水素水 0. 4 μ しオノレトフエ二レンジァミン l mg) 1 0 0 μ 1を加え、そのまま 2分間放置した。 2 Ν硫酸 1 0 0 ί 1を加え反応を止め、 6 5 O nm を対照としたときの 4 9 O nm の吸光度を測定した。市販のアポリポプロテイン E (米国ケミコン社製）を標品とした場合の検量線より本発明のピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体のアポリポプロテイン Eの量を求めた。

本試験例にぉレ、て、本発明のピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体のメタノール溶液のかわりに単にメタノールをカ卩えた以外は本試験例と同様に行ない、アポリポプロテイン E量を測定し、これをコントロールとした。本発明のピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体の相対アポリポプロテイン E量はコントロールを 1 0 0とした^^の相対値 (%) で表した。

表 1に示すように、本発明のピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体は、 1ないし 5 の濃度でアポリポプロテイン Eの産生能を強力に促進することが認められた。

ピペラジノン環を含有する相対アポリプロ

デブシぺプチド誘導体濃度（； u M) ティン E量（％) 化合物 3 2 2 2

化合物 3 5 3 7 3

ィ匕合物 6の T F Α塩 1 2 8 0

化合物 6の T F A塩 5 4 5 8

化合物 8 1 5 6

化合物 1 0 1 2 2 8

化合物 1 0 5 4 5 8

コン卜口ール 0 1 0 0 製剤例

製剤例 1 錠剤（1錠）

化合物 1 0 2 O mg

珪酸マ： 2 O mg 乳糖 98.5mg

ヒドロキシプロピノレセノレロース 7.5mg

ステアリン酸マグネシウム lmg

植物硬化油 3mg

計 15 Omg

化合物 10、珪酸マグネシウムおよび乳糖を混合し、これにヒドロキシプロピルセルロースを溶解したアルコール液で練合し、次いで適当な粒度にし、乾燥、後さらにステアリン酸マグネシウム及び植物硬化油を添加混合し均 —な顆粒とする。ついでロータリー式打錠機により直径 7.0刚、重量 15 Omg, 硬度 6 kgの淀剤を調製した。

製剤例 2 顆粒剤

化合物 10 1 Omg

酸化マグネシウム 4 Omg

リン酸水素カルシゥム 38 mg

乳糖 1 Omg

ヒドロキシプロピルセルロース 2 Omg

上記処方中ヒドロキシプロピルセルロースを除いた各成分を均一に混合し、これにヒドロキシプロピルセルロースを溶解したアルコール溶液を加え練合したのち押出造粒機により造粒し、乾燥して顆粒を得た。この顆粒を整粒して 1 2メッシュの篩を通過し 48メッシュの篩上に残留するものを顆粒剤とした。製剤例 3 シロップ剤

化合物 6の TF A塩 l. O OO g

白糖 30.000 g

D—ソルビトール 70 w/v% 25.000 g

パラォキシ安息香酸ェチル 0.030 g

パラォキシ安息香酸プ口ピル 0.015 g

香味料 0.200 g

グリセリン 0. 150 g

96%エタノール 0.500 g 精製水適量

全量 10 Oml

白糖、 D—ソルビトール、パラォキシ安息香酸ェチル、パラォキシ安息香酸プロピル、及びィ匕合物 6の TF A塩を精製水 (？ ^ΤΚ) 6 O gに溶解した。冷却後香味料を溶解したグリセリンおよびエタノールの溶液を加えた。つぎにこの混合物に精製水を加えて 10 Omlにした。

製剤例 4 注射液

化合物 6の TFA塩 10. Omg

塩化ナトリウム 81.0mg

炭酸水素ナトリウム 8.4mg

¾l用蒸留水適量

全量 10. Oml

炭酸水素ナトリウム、塩ィヒナトリゥムおよびィヒ合物 6の TF A塩を蒸留水に加えて溶解し、全量を 10.0mlとした。

製剤例 5 坐剤

化合物 10 2 g

マクロゴール 4000 20 g

グリセリン 78 g

全量 100 g

化合物 10にグリセリンを加えて溶解した。これにマクロゴーノレ 4000を加えて溶解後、坐剤型に注入して冷却固化し 1個あたり 1.5 gの坐剤を製造した。

Claims

請求の範囲

-般式 (1)

0-CO-CH(R₂)-X,-CH(R₃)-A

I (1)

R,-CH-CH₂-B

〔式中、 X N (R₄) -CO, N (R₅) 一 CH₂、 CH₂— C〇、 CH₂-C H₂、 CH=CH、 CH₂-CH (OH) または CH (OH) 一 CH (OH) を示し、は C₅〜C₂₀アルキル基または C₅〜C₁₅アルコキシ C_I〜C₄アルキル基を示し、 R ₂〜 R ₅は水素原子または C ,〜 C ₆アルキル基を示し、

Aはつぎの式（2)、式（3) または式（4)

-X₂-CH (R, ,) 一 X₃— CH (R₁₂) -NH-R₁₃ (4) (式中、 X₂および X 3はそれぞれ独立して、 N (R₁₄) —CO、 N (R₁₅) 一 CH₂、 CH₂— CO、 CH₂_CH₂、 CH=CH、 CH₂— CH (OH) または CH (OH) 一 CH (OH) を示し、 R₆、 R₁₂、 R 1₄および R i ₅は水素原子、 Ci Ceアルキル基を示し、 R₇、 R₉および RHは（CH₂) _ml— COOH (ここでは 1〜3の整数を示す）または（CH₂) _{n l}-CONH₂ (ここで n ま 2または 3を示す）を示し、 R₈、 ₃は水素原子もしくはペプチド化学で通常用いられるァミンの保護基を示し、 R₁₀は水素原子、 C,〜C₆アルキル基、力ルボキシル基または C ,〜 C ₆アルコキシカルボニルを示す）を示し、

Bはカルボキシル基、カルボキシル基の C ,〜C ₆アルコキシ力ノレボニルまたは式 (5)

(式中、 R₁₆は（CH₂) _m2-COOH (ここで m₂は 1〜3の整数を示す）または（CH₂) _n2-CONH₂ (ここで n₂は 2または 3を示す）を示し、 R₁₇は水素原子、 C! Ceアルキル基、カルボキシル基または C ! Ceアルコキシ力ルボニルを示す）を示すものとする。

ただし上記した Aおよび Bにおけるカルボキシル基はぺプチド化学で通常用いられる保護基で保護されていてもよいものとし、そして、 Aが式（4) で示される基であるときには、 Bは式（5) で示される基であるものとする。〕で示されるピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体またはその薬理学的に許容される

2. 一般式（ )

0-CO-CH(R₂)-X₁-CH(R₃)-A

I (1' )

— CH— CH₂—

〔式中、 X ¾N (R₄) — CO、 N (R₅) 一 CH₂、 CH₂— CO、 CH₂— C H₂、 CH=CH、 CH₂-CH (OH) または CH (OH) — CH (OH) を示し、は C₅〜C₂₀アルキル基または C₅〜C₁₅アルコキシ C_I〜C₄アルキル基を示し、 R ₂〜 R ₅は水素原子または C ,〜 C ₆アルキル基を示し、

! はつぎの式（2)

(式中、 R₆は水素原子または C,〜C₆アルキノレ基を示し、 R₇は（CH₂) _mI- COOH (ここで m,は 1〜3の整数を示す）または（CH₂) _{n l}-CONH₂ { こで n ,は 2または 3を示す）を示し、 R ₈は水素原子もしくはペプチド化学で通常用いられるァミンの保護基を示す）を示し、

B' はカルボキシル基または C ₁〜C₆アルコキシカルボニルを示すものとする。

ただし上記した A' および B' におけるカルボキシル基はペプチド化学で通常用いられる保護基で保護されていてもよいものとする。〕

で示されることを特徴とするピペラジノン環を含有する請求項 1記載のデブシぺプチド誘導体またはその薬理学的に許容される

3. —般式 {1" )

0-CO-CH(R₂)-X₁-CH(R₃)-A

(1〃）

〔式中、 X iN (R₄) -CO, N (R₅) —CH₂、 CH. CO、 CH₂-C

H. CH=CH、 CH₂-CH (OH) または CH (OH) 一 CH (OH) を示し、 R 1は C₅〜C₂₀アルキル基または C₅〜C₁₅アルコキシ Ct C Tノレキル基を示し、 R ₂〜 R ₅は水素原子または C i〜 C ₆アルキル基を示し、

A" はつぎの式（3)

(CH₂) _{n l}-CONH₂ (ここで n ,は 2または 3を示す）を示し、 R₁₀は水素原子、 ϋ, ϋβアルキル基、カルボキシル基または C ,〜C ₆アルコキシカルボニルを示す）を示し、

B ' はカルボキシル基または C i〜 C ₆アルコキシ力ルボニルを示すものとする。

で示されることを特徴とする請求項 1記載のピペラジノン環を含有するデブシぺプチド誘導体またはその薬理学的に許容される塩。

4 . 請求項 1〜 3に記載のピペラジノン環を含有するデプシぺプチド誘導体またはその薬理学的に許容される塩を有効成分とする医薬。

5 . アポリポプロテイン E産生促進剤である請求項 4に記載の医薬。

6 . 神経損傷治療薬である請求項 4または 5記載の医薬。

7 . 痴呆症治療薬である請求項 4または 5記載の医薬。

8 . 高脂血症治療薬である請求項 4または 5記載の医薬。