WO1998038198A1

WO1998038198A1 - Saponarin derivatives

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Publication number: WO1998038198A1
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Authority: WO
Inventors: Yoshihide Hagiwara; Hideaki Hagiwara; Toshihiro Nohara; Junei Kinjo; Hideo Ueyama; Masafumi Ohkawa
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Priority date: 1997-02-26
Filing date: 1998-02-25
Publication date: 1998-09-03
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Description

明細書

サボナリン誘導体 .

技術分野 -.

本発明はサポナリン誘導体並びにその製造法及び抗酸化剤としての利用に関する。

背景技術

本発明者らは、先に、麦類植物の緑葉、殊に大麦の若い緑葉中に強い酸化防止活性を有する物質が含まれていることをつきとめ、その物質を抽出精製し、それが 2' — 0—グルコシル一イソビテキシン及びルトナリンであることを明らかにした（特開平 5— 65480号公報、米国特許第 5 346, 890号明細書、 E P— A— 471, 584 ；及び特開平 9一 235549号公報参照）。

本発明者らは、麦類植物の緑葉中に含まれる抗酸化活性物質についてさらに研究をすすめた結果、麦類植物の緑葉中には、ルトナリンが含まれる画分とは別の画分にも強力な抗酸化活性を示す画分が存在することを発見し、その画分から抗酸化活性を示す本体を分離し同定を行なった結果、それが下記式

式中、

R¹は水素原子、シナピル（sinapyl) 基、フェルリル（ferulyl) 基又はラムノシル（rhamnosyl) 基を表わし、そして R ²は水素原子又はダルコシル基を表わす、

で示されるサボナリン誘導体であることが判明した。そして、 R¹及び R²が共に水素原子である場合の式（ I ) の化合物を除き、上記式（ I ) のサポナリン誘導体は従来の文献に未載の新規な化合物であることがわ力、つた。

発明の開示

しかして、本発明は、上記式（ I ) で示されるサボナリン誘導体 [ただし、 R¹と R²は同時に水素原子を表わすことはない] を提供するものである。

本発明はまた、麦類植物の緑葉から上記式（ I ) で示されるサボナリン誘導体を抽出 ·単離する方法を提供するものである。

本発明はさらに、上記式（ I ) で示されるサポナリン誘導体の抗酸化剤としての利用法を提供するものである。

図面の簡単な説明

図 1は、抗酸化活性物質 AOK— I Iの positive FAB— MS法によるマススぺクトルである。

図 2は、抗酸化活性物質 AOK— I Iの紫外線吸収スぺクトルである。図 3は、抗酸化活性物質 AO K— I I ©¹!!— NMRスぺクトル（5 0 OMH z ) である。

図 4は、抗酸化活性物質 AO K— I Iの¹³ C— NMRスぺクトル（1 0 OMH z ) である。

図 5は、抗酸化活性物質 AOK_ I Iの化学構造を¹ H— NMRのシグナルの帰属と併せて記載したものである。

図 6は、抗酸化活性物質 AOK— I Iの化学構造を¹³ C— NMRのシグナルの帰属と併せて記載したものである。

図 7は、抗酸化活性物質 AO K— I I I aの positive FAB—— MS 法によるマスぺクトルである。

図 8は、抗酸化活性物質 AOK— I I I aの¹ H— NMRスぺクトル (50 OMH z) である。

図 9は、抗酸化活性物質 AOK— I I I aの¹³ C— NMRスぺクトル (10 OMH z) である。

図 10は、抗酸化活性物質 AOK— I I I aの化学構造を¹ H— NM Rのシグナルの帰属と併せて記載したものである。

図 11は、抗酸化活性物質 AO K— I l i aの化学構造を¹³ C— NM Rのシグナルの帰属と併せて記載したものである。

図 12は、抗酸化活性物質 A OK - I aの positive F A B— MS法によるマススぺクトルである。

図 13は、抗酸化活性物質 AO K— I aの¹ H— NMRスぺクトル（5 0 OMH z ) である。

図 14は、抗酸化活性物質 AOK— I aの¹³ C— NMRスぺクトル（1 0 OMH z ) である。

図 15は、抗酸化活性物質 AOK— I aの化学構造を¹ H— NMRのシグナルの帰属と併せて記載したものである。

図 16は、抗酸化活性物質 AO K— I aの化学構造を¹³ C— NMRのシグナルの帰属と併せて記載したものである。

図 17は、抗酸化活性物質 A OK— I わの positive FAB— MS法によるマススぺクトルである。

図 18は、抗酸化活性物質 AOK— I bの¹ H— NMRスぺクトル（5 0 OMH z ) である。

図 1 9は、抗酸化活性物質 A OK— I bの¹³ C— NMRスペクトル（1 0 OMH z ) ある。

図 2 0は、抗酸化活性物質 Aひ K_ I bの化学構造を¹ H— NMRのシグナルの帰属と併せて記載したものである。

図 2 1は、抗酸化活性物質 AO K— I bの化学構造を¹³ C— NMRのシグナルの帰属と併せて記載したものである。

図 2 2は、抗酸化活性物質 AO K— I Vの赤外線吸収スぺクトルである。

図 2 3は、抗酸化活性物質 AO K— I Vの¹ H— NMRスぺクトル（5 0 OMH z ) である。

図 2 4は、抗酸化活性物質 AO K— I Vの¹³ C— NMRスぺクトル（1 0 OMH z ) である。

図 2 5は、抗酸化活性物質 AO K— I Vの化学構造を¹³ C— NMRのシグナルの帰属と併せて記載したものである。

図 2 6は、抗酸化活性物質 AO K— I I I bの赤外線吸収スぺクトルである。

図 2 7は、抗酸化活性物質 A OK- I I I bの positive F AB -M S法によるマススぺクトルである。

図 2 8は、抗酸化活性物質 AO K— I I I bの¹ H— NMRスぺクトル（5 0 OMH z ) である。

図 2 9は、抗酸化活性物質 AO K— I I I bの¹³ C— NMRスぺクトル（1 0 OMH z ) である。

図 3 0は、抗酸化活性物質 AO K— I I I bの化学構造を¹³ C— NM Rのシグナルの帰属と併せて記載したものである。

発明の実施の形態

以下、麦類耀物の緑葉からの前記式（ I ) のサボナリン誘導体の抽出 ' 単離の方法及びその抗酸化剤としての用途についてさらに詳細に説明する。

上記式（ I ) のサボナリン誘導体の抽出原料として使用される麦類植物としては、大麦、小麦、裸麦、ェン麦、ハト麦、トウモロコキシ、キビ、イタリアンダイグラスなどが挙げられるが、中でも、大麦及び裸麦が好適であり、殊に大麦が最適である。

本発明では、これら麦類植物の中でも成熟期前に収穫した若い植物の新鮮な茎及び Z又は葉の部分（本明細書ではこれらを総称して「緑葉」という）が特に適している。

麦類植物の緑葉はまず、ミキサー、ジューサー、等の機械的破砕手段によって搾汁し、必要に応じて、篩別、濾過等の手段によって粗固形分を除去することにより搾汁液（以下、これを「青汁」という）を調製する。

次いで、この青汁をそのまま、或いはそれを凍結乾燥、噴霧乾燥等の適当な乾燥手段で乾燥することにより得られる青汁粉末又はそれを無水のアルコールで抽出処理して得られる抽出エキスを充分量の水（好ましくは熱水）又は含水アルコール（本明細書において、アルコールとしてはメタノールもしくはエタノール、殊にメタノールが好適である）或いは n —へキサンで抽出処理する。この抽出処理は通常室温で行なうことができ、場合によっては 2回又はそれ以上繰り返し行なってもよく、それによって、水又は含水アルコールに可溶性の成分（以下、これを「水可溶性成分」という）或いは n—へキサンに実質的に不溶性の成分（以下、これを「n—へキサン不溶性成分」という）を分離回収する。回収された n—へ- サン不溶性成分はこの段階で前記と同様にして乾燥し固形化することができる。

かくして得られる n—へキサン不溶性成分を次いで含水率が 5 ~80

%、好ましくは 10〜 70%、さらに好ましくは 15〜 50%の含水ァルコール、例えば含水率 20 %の含水メタノールで抽出処理を行ない、該含水アルコールに可溶性の成分を分離回収する。なお、本明細書において含水率の％は vZ _v%である。

この含水アルコールによる抽出処理は、前記の如くして調製される青汁もしくはそれから水不溶性成分を実質的に完全に除去した緑葉の水溶性成分又はそれらを凍結乾燥、噴霧乾燥等の適当な乾燥手段で乾燥して得られる粉末に対して直接行なうこともできる。

このようにして回収された含水アルコール可溶性成分は、そのまま使用することができ或いは濃縮又は溶媒を留去することができる。

以上の如くして得られる水可溶性成分及び含水アルコール可溶性成分は、次いで、多孔性樹脂吸着剤で処理する。この吸着処理に使用しうる多孔性樹脂吸着剤としては、多孔性で大きな吸着表面積を有する非ィォン性（好ましくは疎水性）の樹脂、例えば、スチレン一ジビニルペンゼン重合体、フヱノール一ホルムアルデヒド樹脂、アクリル系樹脂をべ一スとするものが挙げられ、具体的には例えば、アンバーライト XAD— 1、アンバーライト XAD_ 2、アンバーライト XAD— 4、アンバーライト XAD— 7、アンバーライト XAD— 8、アンバーライト XAD — 1 1、アンバーライト XAD— 12 (以上、ローム ' アンド .ハース社製）、ダイヤイオン HP— 10、ダイヤイオン HP— 20、ダイヤィオン HP— 30、ダイヤイオン HP— 40、ダイヤイオン HP— 50 (以上、三菱化学株）製）、イマクティ S y n— 42、イマクティ S y n — 44、イマクティ S y n— 46 (以上、 Imacti 社製）等を挙げることができる。

吸着処理された多孔性樹脂吸着剤は、次いで、含水率が 10〜70%、好ましくは 15〜 60%の含水アルコールで溶離処理を行なう。これにより、溶離に用いた含水アルコールの含水率に応じて、前記式（I )の化合物の 1種又は 2種もしくはそれ以上を含有する溶出液が得られる。例えば、溶離に含水率が 60 %の含水メタノールを用いた場合には、 R¹ 及び R ²が共に水素原子である式（ I ) の化合物と R¹がラムノシル基であり且つ R²が水素原子である式（ I ) の化合物及びさらに場合により R¹が水素原子であり且つ R ²がダルコシル基である式（ I ) の化合物を含有する溶出液が得られ、また、含水率が 20〜 40%の含水メタノールを用いた場合には、 R¹がシナピル基であり且つ R²が水素原子である式（ I ) の化合物と R¹がフェルリル基であり且つ R ²が水素原子である式（ I ) の化合物及びさらに場合により R¹がシナピル基であり且つ R² がダルコシル基である式（ I ) の化合物を含有する溶出液が得られる。これらの溶出液はそのまま又は濃縮後、或いは凍結乾燥、噴霧乾燥等の乾燥手段で乾燥した後に本発明の抗酸化剤としては使用することができる o

上記の如く溶離処理して得られる含水メタノール可溶性成分は、必要に応じて、例えば、シリカゲルによる薄層クロマトグラフィー、逆相シリ力ゲル（O D S、ァンバ一ライト X A D等）クロマトグラフィ一等により精製することにより、式（ I ) の個々の化合物を結晶として回収することができる。回収された結晶は、必要に応じてさらに、例えば、メタノール又は-含水率が 90%以下の含水メ夕ノールを用いて再結晶精製することができる。このようにして前記式（ I ) のサボナリン誘導体、すなわち、

サポナリン： R¹及び R ²が共に水素原子である式（ I ) の化合物、 6" ' —シナピルサポナリン： R¹がシナピル基であり且つ R ²が水素原子である式（ I ) の化合物、

6" ' 一フェルリルサボナリン： R ¹がフェルリル基であり且つ R ² が水素原子である式（ I ) の化合物、

6" ' —ラムノシルサポナリン： R¹がラムノシル基であり且つ R ² が水素原子である式（ I ) の化合物、

4' —0—グルコシル—サボナリン： R¹が水素原子であり且つ R² がグルコシル基である式（ I ) の化合物、

4' —0—ダルコシル一 6〃 ' 一シナピルサポナリン： R¹がシナピル基であり且つ R²がグルコシル基である式（ I ) の化合物、 4' —0—ダルコシル一 6" ' —フェルリルサポナリン： R¹がフエルリル基であり且つ R ²がダルコシル基である式（ I ) の化合物、 4' —0—グルコシル一 6" ' —ラムノシルサポナリン： R¹がラムノシル基であり且つ R ²がグルコシル基である式（ I ) の化合物を黄色の結晶の形態で単離することができる。なお、ダルコシル基、シナピル基、フエルリル基及びラムノシル基はそれぞれ下記式で示される基である。グルコシル基

シナピル基：

フエルリル基

ラムノシル基

上記式（ I ) の化合物のうち、 R¹と R²が共に水素原子である式（ I ) の化合物（サボナリン）を除き、従来の文献に未載の新規化合物である。このようにして麦類植物の緑葉から抽出される式（ I ) の化合物は、後記実施例から明らかなように強力な酸化防止活性を有しており、しかも、天然由来であって毒性がなく安全であり、例えば、飲食品類、化粧料、医薬品等の分野における酸化防止剤として有用である。

しかして、本発明によれば、式（ I ) のサポナリン誘導体の少なくとも 1種を有効成分として含有することを特徴とする抗酸化剤が提供される。

上記の如くして製造される式（ I ) の化合物は、原料の緑葉中に通常含まれる各種金属元素や食品の変性を促進する物質等が除去されており、抗酸化剤として、抗酸化性が要求される飲食品類、化粧料、医薬品等の分野における各種の無機又は有機（組成）物に有利に配合することができる。特に、本発明の式（ I ) の化合物は、配合した組成物の水溶性、透明性に実質的に悪影響を与えることがなく、また、水性の組成物にあ- ては、濾過滅菌が可能である。その際、式（ I ) の化合物は、必要により、シクロデキストリン、クラウンエーテル等による包接を行なった後、果糖、ブドウ糖、デキストリン、デンプン等の糖類；アミノ酸類：クェン酸、リンゴ酸、酒石酸、コハク酸等の有機酸；各種ビタミン類；着色料、香料、各種增粘剤等と混合することができる。

また、本発明の式（ I ) の化合物は、タルク、亜鉛華、炭酸ナトリゥム、重炭酸ナトリウム、二酸化チタン、カオリン、リン酸カルシウム等の医薬、塗料、化粧料、発泡剤等の原料に混合しまたは噴霧乾燥、真空乾燥等により粉末として配合することにより、新規な工業製品の製造が可能となり、しかも製品の品質にも変化を起こさせない等の利点を有する。さらに、水溶性で、更にアルコール可溶性を有する本発明の抗酸化剤は、無機および有機組成物の安定化にも役立ち、優れた新規製品、例えば、ボリマ一製造用酸化防止剤；ェマルジョン塗料；香粧料；紙製品；飲食品類；医薬品；医療用材料等の製造を可能にするものである。しかして、本発明の式（ I ) の化合物は、例えば、飲食品類の鮮度保持、品質維持、保存性の向上等を目的として、各種の飲食品類、例えば、果実及びその加工食品（例えば果物缶詰、ビン詰、ジャム、ママレード、果汁など）、魚貝類、肉類及びそれらの加工食品（例えば、ハム、ソーセージ、コンビーフなど）、パン類、麵類（うどん、そば、ラーメン、スパゲティ、マカロニなど）、菓子類、クッキー類、各種ドリンク、乳製品（例えば、バター、チーズ、マーガリンなど）、各種調味料、レトルト食品、冷凍食品、食用植物油脂、植物性タンパク、アルコール性飲料（例えば、ビール、果実酒、日本酒など）等に配合することにより、これら飲食品 J の鮮度及び Z又は品質を長期にわたってもとの状態に保持することができる。

本発明の式（ I ) の化合物は、淡黄色ないし無色であり、水溶性かつアルコール可溶性であって、しかも生体への吸収性にも優れており、上記飲食品に対して、それらの組成成分や外観等に対して実質的に影響を与えることなく容易に配合することができる。例えば、飲食品類においては屢々使用される果糖、ブドウ糖、水飴等の甘味料；クェン酸、リンゴ酸、酒石酸、コハク酸等の有機酸又はその塩：各種ビタミン類、着色料、香料、各種可食性增粘剤等と自由に混合することができ、それらの水溶性、透明性等に何ら影響を与えず、また濾過、滅菌等の処理が可能である。

しかして、本発明の式（ I ) の化合物は、飲食品類の鮮度又は品質の保持剤として有利に使用することができ、また、該化合物を含む飲食品類の摂取により健康の維持にも役立つ。

本発明の式（ I ) の化合物は単独で又は 2種もしくはそれ以上を組合わせて飲食品類に添加することができる。

本発明の式（ I ) の化合物の上記の如き飲食品類に対する配合量は、特に制限されるものではなく、配合すべき飲食品類の種類、用途等に応じて広い範囲にわたって変えることができるが、一般には、飲食品類の重量を基準にして、式（ I ) の化合物の量として 0.0001~0.2重量％、好ましくは 0.0005〜0. 1重量％の割合で配合することができる。また、本発明の式（ I ) の化合物は、上記のとおり、淡黄色ないし無色であり、水溶性かつアルコール可溶性であ όて、しかも生体べの吸収性にも優れてり、しかも、シミ、ソバカス、肌荒れ、紫外線焼け（曰焼け）等の予防に対して極めて優れた効果を発揮し、しかも安全であるので、皮膚及び毛髪化粧料、例えば、水、アルコール、アルコール水溶液、ローション、クリーム、クリーム乳液、ヘアトニック、育毛剤、浴用剤、石けん、軟膏等に対し、それらの組成成分や外観等に対し実質的に影響を与えることなく容易に配合することができ、それによつて、シミ、ソバカス、肌荒れ、紫外線焼け（日焼け）等の予防効果、毛髪の保護効果等に優れた化粧料を提供することができる。

本発明の式（ I ) の化合物は化粧料に対し単独で又は 2種もしくはそれ以上を組合わせ配合することができ、その化粧料への配合量は、化粧料の種類、用途等に応じて広い範囲で変えることができるが、一般には、化粧料基剤に対して 0 . 0 0 1 ~ 1重量％、好ましくは 0 . 0 0 5〜0 . 5重量％の範囲内で配合するのが適当である。

上記の皮膚及び毛髪化粧料に使用しうる化粧料基剤は、何ら制限されるものではなく、例えば、水、アルコール、プロピレングリコール、ステアリン酸、グリセリン、セチルアルコール、流動パラフィン等の従来から皮膚及び毛髪化粧料に使用されているものが同様に使用できる。また、上記化粧料には、通常行われているように、必要により、ビタミン類、生薬抽出エキス、ホルモン類、その他外用可能な薬品等を配合することもできる。

本発明の式（ I ) の化合物を配合した皮膚及び毛髪化粧料は、シミ、ソバカス、肌荒れ、紫外線焼け（日焼け）等の予防に有効であり、美容上価値あるものである。

次に実施例により本発明をさらに具体的に説明する。

実施例 1

成熟期前の大麦の青汁の凍結乾燥粉末 100 gに n—へキサン 500 m 1を加え、常温で約 5分間よく撹拌した後、不溶分を遠心分離（80 00 r pm、 l Om i n) により分離し、さらに分離した不溶分に n— へキサン 500m lを加え、同様の操作を繰り返し n—へキサン不溶性成分を得た。

この n—へキサン不溶性成分に、含水率 20 %の含水メタノール 50 0m lを加え、常温で約 5分間よく撹拌した後、不溶分を濾別する。濾液にメタノールを加えて含水率が 60 %のメタノール溶液を調製し、その含水メタノ一ル溶液を酢酸ェチルとの間で分配し、含水メタノール層を回収する。

回収した含水メタノール層から減圧下に溶媒を留去し、含水メタノール抽出物（A) 27 gを得た。

この含水メタノール抽出物（A) をダイヤイオン HP— 20カラムに吸着させた後、含水率が 70、 60、 40もしくは 20 %の含水メタノール又はメタノールで溶離処理し、溶出液を得た。

このうち、抗酸化活性を示す含水率 60%の含水メタノールによる溶出液をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メルク社製）にかけ、 1 ーブタノ一ル/酢酸水（容量比 4 : 1 : 2) 混合溶媒で展開して抗酸化活性物質 AO K— I I I aを、そしてクロロホルムメタノールノ水（容量比 6 : 4 : 1) 混合溶媒で展開して抗酸化活性物質 A OK— I Iを得た。また、抗酸化活性を示す含水率 40%及び 20%の含水メタノールによる溶出液をそれぞれシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メルク社製）にかけ、クロ口ホルムメタノール/水（容量比 7 : 3 : 0.5) 混合溶媒で展開して抗酸化活性物質 AOK— Iを得た。

この抗酸化活性物質 AOK— Iを、クロマトレックス OD S (DU3 050MT) (富士シリシァ化学（株）製）を用いたシリ力ゲルクロマトグラフィーにかけ、含水率 35%の含水メタノールで展開することにより、抗酸化活性物質 A OK— I aと AOK— I bに分別した。

次に、上記で得られた各抗酸化活性物質の同定を以下のようにして行なった。

(1) AOK- I Iの構造決定

質量分析は F A B— MS ： J MS - S X 102 A型質量分析装置（日本電子（株）製）を用いて、本物質を positive FAB (Fast Atom Bo mbertment) — M Sにて測定したところ、図 1に示すように、 mZ z = 595に [MH] のピークが観測され、分子量は 594であることが明カ、になつた。

AOK- I Iの結晶の紫外線吸収スぺクトルを H ₂0及びメタノール中で測定したところ、フラボノイドグルコシドの吸収を示した。 J AS CO FT/ I R- 7000 Sを用い KB r法により測定した紫外線吸収スペクトルを図 2に示す。

AOK- I Iの結晶の¹ H— NMRスぺクトル（500MH z) を J EOL GSX— 500型核磁気共鳴スぺクトル吸収測定装置（日本電子（株）製）により溶媒として DMS Oを用い 90°Cまで昇温して測定し、図 3に示す結果を得た。また、その各シグナルの帰厲を図 5に示す < さらに、 A OK— I Iの結晶の¹³ C— NMRスぺクトル（ 10 OMH z) を、 J EOL GX_ 400型核磁気共鳴スペクトル吸収測定装置 (日本電子（）製）により溶媒として DMS 0を用いて測定し、図 4 に示す結果を得た。また、その各シグナルの帰属を図 6に示す。

本物質は、 DMSO— d₆中で 27炭素原子に対するシグナルを与え、サポナリンの¹³ C— NMRの標準値 [Mabry.T, ； Markham, K. R. ； Chavi, V. M. ； The Flavonoids： Aduances in Research； Harborne, J. B. , Mabry, T. J. , Eds. ： Chapman and Hall： New York, 1982： p 19-134] と比較すると完全に一致した。

以上の分析結果を総合すると、 AOK— I Iは、図 5及び図 6に示す構造をもつサボナリンであると同定される。

(2) AOK- I I I aの構造決定

上記（1) の場合と同様にして、 AOK— I I I aの質量スぺクトル、 ¹H— NMR及び¹³ C— NMRを測定した。その結果を図 7、図 8及び図 9に示す。

AOK- I I I aも 90 °Cにまで昇温し¹ H _ N M Rを測定した。サポナリンと比較したところ、フラボノィド部分はほぼ同一であつたが、糖部に由来するシグナルがより多く観察された。そこで¹³ C— NMRを測定したところ、新たにラムノースのシグナルが認められた。ラムノースの結合位置に関しては、 7位のグルコースの 6位が低磁場に（568. 0) 、そして 5位は高磁場に（575.7) にグリコシル化シフトとして観測されたことより、 7位のグルコースの 6位に結合位しているものと口 6冊した。

以上の知見より、 AOK— I I I aは、図 10及び図 1 1に示す構造をもつ 6〃 ' 一ラムノシルサポナリンと決定した。

(3) AOK- I aの構造決定

上記（1) の場合と同様にして、 AOK— I aの質量スぺクトル、 ¹H— NMR及び¹³ C— NMRを測定した。その結果を図 12、図 13 及び図 14に示す。

AOK— I aは、 Positive F A V— MSで mZ z 801に [M + H] ⁺ に基づくピークを与え、分子量は 800と決定された。 AOK— I aの 'H— NMRは常温では複雑なシグナルが観測された。そこで 90°Cにまで昇温し観測したところ、シグナルの帰属が可能となった。そのシグナルバターンからフラボノイド骨格を有することが推定されたが、まず低磁場からフエノール性水酸基が 3個観測され、最も低磁場の 13. 42のシグナルは、キレート結合した 5位の水酸基に帰属された。次に、フラボノィド B環に相当する 57.78、 6.85の互いに力ップリングした 2 H分のシグナルのはサポナリンとほぼ同一であった。また、 3、 8位のシグナルもサポナリンと同様であった。しかし、他の芳香族化合物のものと考えられるシグナルが新たに 1モル分観測されたので¹³ C— NMRを測定した。その結果、新たに出現したシグナルはシナピル基と同定された。また、一部の糖部を除き、その他の AOK_ I aのシグナルはサポナリンと一致することが判明した。シナピル基の結合位置に関しては、 7位のグルコースの 6位が低磁場に（563. 1) 、そして 5 位は高磁場に（573.8) に観測されたことより、 7位のグルコースの 6位に結合しているものと結論した。

以上の知見より、 AOK— I aは、図 15及び図 16に示す構造を有する 6〃 ' 一シナピルサポナリンと決定した _n (4) A OK— I bの構造決定

上記（1) の場合と同様にして、 AOK— I bの質量スぺクトル、 iH— NMR及 _び¹³ C— NMRを測定した。その結果を図 17、図 18 及び図 19に示す。

AOK— I bは、 Positive FAB— MSで mZz 771に [M+H]

+に基づくピークを与え、分子量は 770と決定された。この分子量は AOK- I aに比べ、 30マスュニッ卜少ない。 AOK— I bも 90°C にまで昇温し、 iH— NMRを測定したところ、シグナルの帰属が可能となった。そのシグナルパターンは AOK— I aとほぼ同一であったが、シナピル基由来のシグナルが認められず、代わりに別の芳香族化合物のシグナルが観測された。そこで¹³ C— NMRを測定したところ、その芳香族化合物はフェルリル基と同定された。また、その他のシグナルは A OK- I aと一致することより、 AOK— I bは図 20及び図 21に示す構造をもつ 6〃 ' 一フェルリルサポナリンと決定した。

実施例 2

成熟期前の裸麦の青汁の噴霧乾燥物 500 gを含水率 20%のェタノール水溶液 3 1で抽出を行ない、得られる含水ェタノール抽出液の n— へキサン不溶分をアンバーライト XAD— 2カラムクロマトグラフィー (1 1容）に通した後、含水率が 70、 60、 40又は 20%の含水メタノールで溶離処理を行ない、得られた各含水メタノール溶液について, 実施例 1と同様にしてシリカゲルクロマトグラフィー処理を行ない、抗酸化活性物質 AO K— I I I a. AOK- I I . AOK- I a及び AO K一 l bを各々 500mg、 2500mg、 2401118及び2001118 を得た。実施例 3

p H 7. 4の 0. 0 5M KH₂P 0₄-N a ₂H P O₄ 緩衝液（A) 、 7 80 /zM N ADHの緩衝液（A) 溶液及び 1 0 0〃M二トロブル— テトラゾリゥム（N B T) の緩衝液（A) 溶液の 6 ： 1 ： 1の混合溶液を、 1. 5 m 1容プラスティックディスポセルに 0. 8 m 1注加した。この系に 7 5 0 /zMの AOK— I I I a、 AOK— I I、 AOK- I a又は AOK— I bを加え、撹拌後、 1 0 0〃Mフエナジンメトサルフエ一ト（PMS) 水溶液 0. 1 m 1注加し、分光光度計 H I TA CH I U—

3 0 0 0にセットして経時的に 5 6 0 n mの吸光度を測定した。この結果、 AOK— I I I a、 AOK_ I I、 AOK— I a及び A OK— I b は 1 0 0〃Mの濃度においてそれぞれ 2 2. 5、 2 7. 8、 4 2. 5及び

4 3. 2 %の阻害率で、 NADHとN B Tにょるスーパーォキサィドア二オンの生成を抑制した。

実施例 4

ビタミン B ₂の 2 0 0〃M溶液を T r i s -Η C L緩衝液（p H 7) を用いて調製し、この溶液 2. 0 m 1 と各種の抗酸化剤の 2 0 0 M溶液 2. 0 m 1の混合溶液を石英セルに注加し、これに光安定性試験装置ライトトロン L T— 1 2 0 (ナガノ科学機械製作所）を用いて、紫外線強度 3 0 0 / c m²、 2 0°Cの条件下で紫外線を照射し、経時的にサンプリングし、 S h i mp a c— C L C— OD S (M) (5〃m、 4. 6 mmx 1 5 0mm) カラムを装備した島津高速液体ク口マトグラフ T L C— 6 Aにより、移動相： 1 0 mM N a H₂P 0₄ (p H 5. 5) /メタノ一ル= 6 5/3 5 流速： 0. 5m lノ分、カラム温度： 40°Cで展開し、蛍光（E x 4 4 5 nm, Em 5 3 0 n m) でビタミン B ₂の濃度を測定した。この測定値より前記混合溶液中のビタミン B ₂の半減期を計算した。この結果を表 1に示す。各抗酸化剤を添加した場合のリボフラビンの残存率（％)

実施例 5

ビタミン Β_βの 200 溶液を T r i s— H C L緩衝液（p H 7) を用いて調製し、この溶液 2.0 m 1 と各種の抗酸化剤の 200 /M溶液 2. Om 1の混合溶液を石英セルに注加し、これに光安定性試験装置ライトトロン LT— 120 (ナガノ科学機械製作所）を用いて、紫外線強度 300 W/ c m²、 20 °Cの条件下で紫外線を照射し、経時的にサンプリングし、 S h i mp a c— C L C— OD S (M) (5〃m、 4. 6 mmx 150 mm) カラムを装備した島津高速液体ク口マトグラフ T LC— 6Aにより、移動相： 5mM N a H₂P 0₄ (p H 2.6) /5 m M 1—ペン夕ンスルホン酸ナトリウム Z 10%容量％メタノール、流速： 1.5m l 分、カラム温度： 50°Cで展開し、 290 nmでビタミン B₆の濃度を測定した。この結果を表 2に示す。表 2

各抗酸化剤を添加した場合の塩酸ピリドキシンの残存率（％)

実施例 6

ビタミン K, 45. 1 mgをエタノールに溶解し、正確に 5 Om 1に調節した。この溶液 5m lを分取し、 S D S 0.25 gを添加して溶解し、トリス— HC 1緩衝液（p H 7) で 5 Om 1に調節した。この溶液 2.0m l と各種の抗酸化剤の 200 /M溶液 2.0 m 1の混合溶液を石英セルに注加し、実施例 5と同様にして紫外線照射を行い、 I n e r t s i 1 OD S 5〃m (4.6 x 15 Omm) カラムを装備した島津高速液体ク口マトグラフ L C— 6 Aにより、移動相：メタノール Z酢酸 = 99/1. 流速： 1.0m l Z分、 30°Cで展開し、 270 nmの吸光度を島津マルチパーパス目記分光光度計 MP S - 200により測定してビタミン！の濃度を測定した。その結果を表 3に示す。 ¾ _ 3

各抗酸化剤を添加した場合のフィ口キノンの残存率（％)

実施例 7

実施例 1で得られた含水メタノール抽出物（A) 5 g及びタルク 50 0 gを水 2 1に添加して懸濁液を調製し、吸気温度 190°C、排気温度 120°Cにおいて噴霧乾燥を行い、 450 gの粉体原料を製造した。実施例 8

実施例 1と同様の方法で得られた AOK— I I 5 g及びデキストリン 400 gを水 1 1に添加した溶液を調製し、吸気温度 190°C、排気温度 120°Cにおいて噴霧乾燥を行ない、 370 gの粉体原料を得た。実施例 9

リンテックス一 P (三楽株式会社製サイクロデキストリン） 20 gに水 5 Om 1に加えて混和してスラリーを形成させ、これに実施例 1と同様の方法で得られた AOK— I I I a 1 gを加えて常温で 90分間撹拌後、凍結乾燥を行い、 18.7 gの凍結乾燥物を調製した。

実施例 10

実施例 1と同様の方法で得られた AO K— I a 1 g及びデキストリン l O O gを水 500m lに添加した溶液を調製し、吸気温度 190°C、排気温度 120°Cにおいて噴霧乾燥し、 82 gの粉体原料を得た。

実施例 1 1

リンテックス— P (三楽株式会社製サイクロデキストリン） 20 gを水 50m 1に加えて混和してスラリーを形成させ、これに実施例 1と同様の方法により製造した AOK— I b 0.5 gを加えて常温で 90分間撹拌後、凍結乾燥を行い、 19 gの凍結乾燥物を調製した。

実施例 12

実施例 1と同様の方法で得られた AO K— I aと AOK— I bの各 0. 1 の混合物を大麦若葉の搾汁液 1 1に溶解して 30 %懸濁液を調製し、吸気温度 170°C、排気温度 1 10°Cにおいて噴霧乾燥して 75 gの粉体原料を製造した。

実施例 13

実施例 1と同様の方法で得られた A OK— 1 &と八01：— 1 13の各0. 1 gの混合物をデキストリン 80 g、魚油精製物 150 g及びミッロウ 25 gと混合して常法により各 27 Omgを軟カプセルに充填して魚油製品を製造した。

実施例 14

成熟期前の大麦の青汁の凍結乾燥粉末 100 gを 500m lのメ夕ノ —ルで抽出して得たメタノール抽出エキスに含水率 20 %のメタノール水溶液 500m lを加え、常温で約 5分間よく撹拌した後、不溶分を遠心分離（8000 r pm、 l Om i n) により分離し、含水率 20%メタノール水溶液に可溶な抽出エキス粉末（B) を 40 g得た。この抽出エキス粉末（B) に、含水率 20 %の含水メタノール 500 m lを加え、常温で約 5分間よく撹拌した後、不溶分を濾別する。含水率 20%のメタ _ノールに溶かした溶液を n—へキサンにて分配した。この操作を数回繰返し、含水率 20%メタノール可溶部を得た。この含水率 20 %メタノール可溶部に水を加えて含水率が 60 %のメタノール溶液を調製し、その含水メタノール溶液を酢酸ェチルとの間で分配し、含水メタノ一ル層を回収する。

回収した含水メタノール層から減圧下に溶媒を留去し、含水メタノ一ル抽出物 35 gを得た。

この含水メタノール抽出物（C) をダイヤイオン HP— 20カラムに吸着させた後、含水率が 60、 40もしくは 20%の含水メタノール又は無水メタノールで溶離処理し、溶出液を得た。

このうち、抗酸化活性を示す含水率 60%の含水メタノ一ルによる溶出液をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メルク社製）にかけ、 1 ーブタノール/酢酸水（容量比 4 : 1 : 2) 混合溶媒で展開して抗酸化活性物質 A OK— I V 45mgを得た。

また、抗酸化活性を示す含水率 40%の含水メタノールによる溶出液をそれぞれシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メルク社製）にかけ、クロ口ホルムメタノール Z水（容量比 6 : 4 : 1) 混合溶媒で展開して抗酸化活性物質 AO K— Iを含む画分と AO K— I I I aを含む画分に分けた。

この抗酸化活性物質 AO K— Iを含む画分と AO K— I I I aを含む画分を、クロマトレックス ODS (DU 3050MT) (富士シリシァ化学（株）製）を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、 1ーブ夕ノール Z酢酸水（溶量比 4 ： 1 ： 2) の混合溶媒で展開することにより、抗酸化活性物質 AO K— V 5 Omgと AOK— I I I b 4 Om gを得た。 .

(1) A OK— I Vの構造決定

J AS CO FTZ I R— 7000 Sを用い KB r法により測定した赤外線吸収スぺクトルを図 22に示す。

AOK- I Vの結晶の¹ H— NMRスぺクトル（500MH z) を J E 0 L GX— 400型核磁気共鳴スペクトル吸収測定装置（日本電子 (株）製）により溶媒として DMS 0を用い 90°Cまで昇温して測定し、図 23に示す結果を得た。また、その各シグナルの帰属を図 25に示す。この結果をサポナリンのデータ（図 3参照）と比較したところ、フラボノィド部分はほぼ同一であつたが、糖部に由来するシグナルがより多く観測された。

さらに、 AOK— I Vの結晶の¹³ C— NMRスぺクトル（ 100MH z) を、 J EOL GX— 400型核磁気共鳴スペクトル吸収測定装置 (日本電子（株）製）により溶媒として DMS 0を用いて測定し、図 2 4に示す結果を得た。また、その各シグナルの帰属を図 25に示す。この結果、サポナリンの¹³ C— NMRスペクトル（100MH z) のデータ（図 4参照）に比べて、新たにグルコースのシグナルが認められた。本物質は、 DMS 0— d ₆中において、グルコースの結合位置に関しては、糖部にグルコシル化シフトが観測されないこと、 B環 4' 位が高磁場に（5160.2) 、グルコースの 1位が低磁場に 100. 1) シフトしていること等の理由により、 4' 位に結合しているものと考えられる。

以上の分析結果を総合すると、八01：— 1 ¥は、図 25に示す構造をもつ 4' 一 O—グルコシルサポナリンであると同定される。

(2) AOK- I I I bの構造決定

上記（1) の場合と同様にして、 AOK— I I I bの赤外線吸収スぺクトル、質量スぺクトル（下記参照）、 'H— NMR及び¹³ C— NMR を測定した。その結果を図 26、図 27、図 28及び図 29に示す。なお、質量分析は、 FAB—MS ： J MS - S X 102 A型質量分析装置（日本電子（株）製）を用いて positive FAB (Fast Atom Bomb ertment) 一 MS にて測定した。その結果、 mZ z = 963に [M H ] ⁺ のピークが観測され、分子量は 962であった。

AOK- I I I bも 90°Cにまで昇温し¹ H— NMRを測定した。 6" ' シナピルサボナリン（図 7参照）と比較したところ、フラボノィド部分はほぼ同一であつたが、糖部に由来するシグナルがより多く観察された。そこで¹³ C— NMRを測定したところ、新たにグルコースのシグナルが認められた。グルコースの結合位置に関しては、 B環 4' 位が高磁場に（5160.2) シフトしていることにより、 4' 位に結合しているものと考えられる。

以上の所見より、 AOK— I I I bは、図 30に示す構造をもつ 4' —0—ダルコシル一 6〃 ' 一シナピルサポナリンと決定した。

実施例 15

成熟期前の裸麦の青汁の噴霧乾燥物 100 gを含水率 20%のェタノ —ル水溶液 500m lで抽出を行ない、得られる含水エタノール抽出液の n—へキサン不溶分をアンバーライト XAD— 2カラムクロマトグラフィー（500m l容）に通した後、含水率が 70、 60、 40又は 2 0 %の含水メタノ一ルで溶離処理を行ない（含水率が 40 %の含水メタノ一ルで溶離処理し、得られる画分から減圧下に溶媒を留去することにより得られる粉末を含水メタノール抽出物（D) という）、得られた各含水メタノール溶液について、実施例 14と同様にしてシリカゲルクロマトグラフィ一処理を行ない、抗酸化活性物質 A OK— I I I b及び A OK— Vを各々 52mg及び 55mg得た。

実施例 16

p H 7. 4の 0.05M KH₂P 0₄— N a ₂H P 0₄ 緩衝液（A) 、 780 / M N ADHの緩衝液（A) 溶液及び 100 二トロブルーテトラゾリゥム（NBT) の緩衝液（A) 溶液の 6 ： 1 ： 1の混合溶液を、 1.5m 1容プラスティックディスポセルに 0.8m 1注加した。この系に 750 Mの AOK— I I l b又は AOK— I Vを加え、撹拌後、 100 /Mフヱナジンメトサルフヱート（PMS) 水溶液 0.1 m 1注加し、分光光度計 H I TACH I U— 3000にセットして経時的に 560 nmの吸光度を測定した。この結果、 AOK— I I l b及び AO K一 I Vは 100 Mの濃度においてそれぞれ 30.0及び 26.5%の阻害率で、 NADHと NBTによるスーパーォキサイドア二オンの生成を抑制した。

実施例 1 Ί

ビタミン B ₂の 200〃M溶液を T r i s— HC L緩衝液（pH7) を用いて調製し、この溶液 2.0 m 1 と各種の抗酸化剤の 200 ίΜ溶液 2.0 m 1の混合溶液を石英セルに注加し、これに光安定性試験装置ライトトロン LT一 120 (ナガノ科学機械製作所）を用いて、紫外線強度300 ノ0：11 ²、 20°Cの条件下で紫外線を照射し、経時的にサンプリングし、 S h i mp a c— C LC— OD S (M) (5 /zm、 4. 6 mmx 150 mm) カラムを装備した島津高速液体ク口マトグラフ T L C— 6 Λにより、移動相： 10mM N a H ₂ P O ₄ ( p H 5.5 ) Zメ夕ノ一ル = 65/35. 流速： 0.5m l /"分、力ラム温度： 40°Cで展開し、蛍光（E X 445 nm、 Em 530 n m) でビタミン B ₂の濃度を測定した。この測定値より前記混合溶液中のビタミン B ₂の半減期を計算した。この結果を表 4に示す。

表 4

各抗酸化剤を添加した場台の塩酸リボフラビンの残存率（％)

実施例 18

ビタミン Β ₆の 200 μΜ溶液を T r i s— II C L緩衝液（ p H 7) を用いて調製し、この溶液 2. Om 1 と各種の抗酸化剤の 200 M溶液 2.0 m 1の混合溶液を石英セルに注加し、これに光安定性試験装置ライトトロン LT一 120 (ナガノ科学機械製作所）を用いて、紫外線強度 300 /W/cm²、 20°Cの条件下で紫外線を照射し、経時的にサンプリングし、 S h i mp a c— CLC— ODS (M) (5〃m、 4. 6 mmx 15 Omm) カラムを装備した島津高速液体ク口マトグラフ T LC— 6Aにより、移動相： 5mM N a H₂P O₄ (p H 2.6) Z5m M 1—ペンタンスルホン酸ナ卜リゥム 10 %容量％メ夕ノ一ル、流速： 1.5m l / カラム温度： 50°Cで展開し、 290 nmでビタミン Β_βの濃度を測定した。この結果を表 5に示す。

表 5

実施例 19

ビタミン K, 45. lmgをエタノールに溶解し、正確に 5 Om 1に調節した。この溶液 5m lを分取し、 SDS 0.25 gを添加して溶解し、トリスー H C 1緩衝液（p H 7) で 50 m 1に調節した。この溶液 2.0m l と各種の抗酸化剤の 200 M溶液 2.0 m 1の混合溶液を石英セルに注加し、実施例 5と同様にして紫外線照射を行い、 I n e r t s i 1 ODS 5 / m (4.6 x 15 Omm) カラムを装備した島津高速液体ク口マトグラフ LC— 6 Aにより、移動相：メタノール酢酸 = 99 Z1、流速： 1. Om 1ノ分、 30°Cで展開し、 270 nmの吸光度を島津マルチパーパス目記分光光度計 MP S - 200により測定してビタミン!^,の濃度を測定した。その結果を表 6に示す。 ¾ 6

各抗酸化剤を添加した場合のフィ口キノンの残存率（％)

実施例 20

実施例 14で得られた抽出エキス粉末（A) 5 g及びタルク 500 g を水 2 1に添加して懸濁液を調製し、吸気温度 190°C、排気温度 12 0°Cにおいて噴霧乾燥を行い、 450 gの粉体原料を製造した。

実施例 21

実施例 14と同様の方法で得られた AO K— I I I b 5 g及びデキストリン 400 gを水 1 1に添加した溶液を調製し、吸気温度 190°C、排気温度 120°Cにおいて噴霧乾燥を行ない、 350 gの粉体原料を得た。

実施例 22

リンテックス一 P (三楽株式会社製サイクロデキストリン） 20 gに水 5 Om 1に加えて混和してスラリ一を形成させ、これに実施例 14と同様の方法で得られた AOK— I I I b 1 gを加えて常温で 90分間撹拌後、凍結乾燥を行い、 17 gの凍結乾燥物を調製した。

実施例 23

実施例 14と同様の方法で得られた抽出エキス粉末（A) 1 g及びデキストリン l O O gを水 500m lに添加した溶液を調製し、吸気温度 190°C、排気温度 120°Cにおいて噴霧乾燥し、 87 gの粉体原料を得た。

実施例 24

リンテックス一 P (三楽株式会社製サイクロデキストリン） 20 gを水 5 Om 1に加えて混和してスラリーを形成させ、これに実施例 14と同様の方法により製造した A OK— I V 0.5 gを加えて常温で 90分間撹拌後、凍結乾燥を行い、 18 gの凍結乾燥物を調製した。

実施例 25

実施例 14と同様の方法で得られた含水メタノ一ル抽出物（C) 0. 5 gを大麦若葉の搾汁液の濃縮液 1 1に溶解してデキストリンを添加して 30%懸濁液を調製し、吸気温度 170°C、排気温度 110°Cにおいて噴霧乾燥して 270 gの粉体原料を製造した。

実施例 26

実施例 14と同様の方法で得られた A OK— I I I bと AOK— I V の各 0. 1 gの混合物をデキストリン 80 g、魚油精製物 150 g及びミツロウ 25 gと混合して常法により各 27 Omgを軟カプセルに充填して魚油製品を製造した。

実施例 27

実施例 1と同様の方法で得られた AO K— I aと AOK— I bの等量混合物 0. 1 gを用いて次の処方のローションを調製した。

AOK— I a + AOK— I b ( 1 ： 1 ) 0.1 g

95 %ェタノール 100 g パラォキシ安息香酸メチル 0.05 g 香料 0.5 g 着色料 0.005 g 精製水適量

全量 000 g

施用例

実施例 27で得られたローションを毎日顔の洗顔後及び就寝前に使用して、シミ、ソバカスの改善を試験した。女性 30名による試験結果は表 7に示すとおりであった。試験は 6ヶ月間行った。評価は次の基準で行った。

シミ、ソバカスの色について

褐色：無効

淡褐色：稍効

殆んど目立たない：有効

シミ、ソバカス部分と他の部分との境界について

有り：無効

不鮮明：稍効

殆んど判別不能：有効

表 7

実施例 28

実施例 1と同様の方法で得られた AO K— I a、 AOK— I b、 AO K一 I I及び A 0 K _ I I I aの等量混合物を実施例 27に記載の口一ション処方に対し、 AOK_ I a+AOK— l b (1 ： 1) の代りに 0. 1 %の濃度で添加してローションを製造する。

実施例 29 -.

クリームの処方

ステアリン酸 10 g

イソプロピルミリステート 5 g

セチルアルコール 5 g

流動バラフイン 7 g

グリセリールモノステアレート 2 g

ポリオキンエチレンステアレート 5 g

パラォキシ安息香酸メチル 0. l g

を混和し、さらにこれにグリセリン 3 g、プロピレングリコール 1 g、及び水 50 gを混合して乳化し、乳化液の温度が 60°Cになったとき、実施例 1と同様の方法で得られた AO K— I a、 AOK— I b、 AOK — I I及び A OK— I I I aの等量混合物 0. 3 gを加えて撹拌しさらに香料を少々を加え、クリームを調製した。

施用例 2

実施例 29で得られたクリームを毎日洗顔後及び就寝前に使用して、シミ、ソバカス、肌荒れに対する効果を男性 30名、女性 30名に対して 6ヶ月間にわたり試験を行った。シミ、ソバカスに対する判定は施用例 1に準じて行い、肌荒れは皮膚上でのクリームのすベり度合を感触により次の基準で判定した。

無効：皮膚表面のザラツキあり。

稍効：わずかにザラツキは残るが、クリームののびは良い。有効：皮膚表面にクリームはよくのびる。

この結果を総合し表 8及び表 9に示す。

表 8

男性

表 9

女性

実施例 30

実施例 2と同様の方法で得られた裸麦の青汁の噴霧乾燥物から製造した含水率 20 %のエタノール水溶液に可溶な抽出エキス粉末（E) を用いて次の処方の養毛剤を調製した。

抽出エキス粉末（E) 1 gを 50%エタノール水溶液 95m 1に溶解し、プロピレングリコール 5m 1、香料 0. 18及び着色料0. l gを加えて養毛剤を調製した。

施用例 3

実施例 3 0で:得られた養毛剤の効果を男性 2 0名、女性 2 0名について検討した。養毛剤を毎日使用した場合の効果を 6ヶ月後に下記の基準

5 で判定した。

〈フケ〉ぐ薄毛状態〉

aj 能 , 能休

^！^^^こ名ヽ一 Q ¾fr 1ノしヽ一 ο Q 名し、 ― 9 名い ― οム丄1/ ― 丄 1 ― 1丄

通 0 通 0

少ない + 3 少ない + 3

〈色、艷〉

15 級（状態）採点

一 3

普通 0

良好 + 3

20 上記の判定基準に基づき、施用前と施用後の状態を下記表 1 0に示す ₍ 表 10

施用前施用後性別年齢フケ薄毛色、艷フケ »¾ 色、艷男性 21 -2 -1 0 0 0 +1 男性 24 -1 -1.5 0 0 0 +1 男性 27 - 1.5 - 1 0 -1 0 +1.5 男性 31 - 1.5 -1 0 -1 0 +1 男性 32 -1.5 -1.5 0 0 0 +1 男性 35 -2 -3 0 - 1 -1 0 男性 35 - 2 -1.5 0 -1 -1 +1 男性 37 -1.5 -1.5 -1 -1 0 +1 男性 38 -1.5 -2 0 0 -1 0 男性 38 -2 -1.5 -1 -1 0 0 男性 40 -1 -3 -1.5 0 -1.5 0 男性 43 -1.5 -1.5 -1.5 - 1 -1 0 男性 45 - 1 -3 -2 0 -1 +1 男性 45 -1 -2 - 2 0 - 1 +1 男性 47 - 1.5 -1.5 -2 0 -1 +1 男性 51 - 2 -1.5 -2 -1 0 +1 男性 51 -2 - 1.5 -3 -1 - 1 -1 男性 53 - 1.5 -1 - 1.5 0 0 -1 男性 54 -2 -2 -1.5 - 1 -1 0 男性 57 - 1.5 -2 - 2 0 -1 -1 表 10 (つづき）施用前施用後性別年齢フケ薄毛色、艷フケ薄毛色、艷女性 22 -1 0 - +2 0 +1 +2 女性 22 -1 0 +2 0 0 +3 女性 24 -1 0 +1.5 0 +1 +3 女性 32 -1 0 +1 0 +1 +2 女性 34 - 1 -1 0 +1 +1 +2 女性 37 -2 0 -1 0 +1 + 1.5 女性 38 - 1.5 0 0 0 0 + 1.5 女性 38 - 1 -1 - 2 0 0 0 女性 40 -2.5 -1 0 -1 0 +1 女性 41 -2 0 -1 0 +1 0 女性 43 -2 0 -1 0 +1 +1 女性 45 -1.5 -1 -1.5 0 0 +1 女性 45 -3 0 - 1 -1 +1 +1 女性 48 -2 - 1 -1 0 +1 +1 女性 48 -1.5 -1 0 0 0 +1 女性 51 -1.5 - 1 -2 0 0 0 女性 51 - 1 -1 -1 0 +1 +1.5 女性 53 - 2 -1 -1 -1 0 0 女性 54 -2 - 1 -1.5 0 0 0 女性 57 -1.5 -1.5 - 1 0 0 0 実施例 31

実施例 14と同様の方法で得られた含水メタノール抽出物（C) を用いて次の処方の _ローンョンを調製した。

含水メタノール抽出物（C) 5 g

95 %ェタノール 100 g パラォキシ安息香酸メチル 0.05 g 香料 0.5 g 着色料 0.005 g 精製水 mm

全量 1000 g

施用例 4

実施例 3 1で得られたローションを毎曰顔の洗顔後及び就寝前に使用して、シミ、ソバカスの改善を試験した。女性 30名による試験結果は表 1 1に示すとおりであった。試験は 6ヶ月間行った。評価は施用例 1 と同じ基準で行った。

表 1 1

実施例 32

実施例 14と同様の方法で得られた AO K— I I I bと AOK_ I V の等量混合物を実施例 31に記載の口一ション処方に対し、含水メ夕ノール抽出物（C) の代りに 0. 1 %の濃度で添加してローションを製造する。

実施例 33

クリームの処方.

ステアリン酸 10 g

イソプロピルミリステ一ト 5 g

セチノレアノレコーノレ 5 g

流動バラフイン 7 g

グリセリールモノステアレート 2 g

ポリオキシエチレンステアレート 5 g

パラォキシ安息香酸メチル 0. l g

を混和し、さらにこれにグリセリン 3 g、プロピレングリコール 1 g、及び水 50 gを混合して乳化し、乳化液の温度が 60°Cになったとき、実施例 14と同様の方法で得られた AO K— I I l bと AOK— I Vの等量混合物 0. 3 gを加えて撹拌しさらに香料を少々を加え、クリームを調製した。

施用例 5

実施例 33で得られたクリームを毎日洗顔後及び就寝前に使用して、シミ、ソバカス、肌荒れに対する効果を男性 30名、女性 30名に対して 6ヶ月間にわたり試験を行った。シミ、ソバカスに対する判定は施用例 4に準じて行い、肌荒れは皮膚上でのクリームのすべり度合を感触により施用例 2と同じ基準で判定した。

この結果を総合し表 12及び表 13に示す。 2

男性

表 13

女性

実施例 34

実施例 14と同様の方法で得られた含水メタノール抽出物（C) を用いて次の処方の養毛剤を調製した。

含水メタノール抽出物（C) 1 gを 50%エタノール水溶液 95m 1 に溶解し、プロピレングリコール 5m 1、香料 0. 1 g及び着色料 0. 1 gを加えて養毛剤を調製した。

施用例 6

実施例 34で得られた養毛剤の効果を男性 20名、女性 20名について検討した。養毛剤を毎日使用した場合の効果を 6ヶ月後に施用例 3と同じ基準で判定し、施用前と施用後の状態を下記表 1.4に示す。 - - 表 14

施用前施用後

性別年齢フケ薄毛色、艷フケ薄毛色、艷男性 22 -1.5 -1 0 0 0 +1 男性 25 -1.5 -1 0 0 0 +1.5 男性 27 -2 -1 0 -1 0 +1.5 男性 30 -1 - 1.5 0 0 -1 +1.5 男性 32 -2 -1 0 -1 - 1 0 男性 34 -1.5 - 2 0 0 -1 0 男性 35 -2 -2 - 2 -1 -1 +1 男性 37 -1 - 1 - 2 0 -1 0 男性 38 -1 -1.5 0 0 -1 0 男性 38 - 1 -1 -2 0 +1 男性 40 0 -2 -1.5 0 -1 0 男性 41 - 1 -2 -2 0 -1.5 +1 男性 41 -1 -2 -2 0 -1.5 +1.5 男性 46 -1 -3 -2 +1 +1 男性 47 -2 - 2 - 3 -1 - 1.5 0 男性 50 -1 - 2 -2 0 0 男性 51 -2 -1 0 -1 0 男性 52 -1 -2 -2 0 - 1.5 +2 男性 52 - 2 -2 -2 - 1 -1.5 -1 男性 55 - 1 - 2 -3 0 -1 4 (つづき）施用前施用後性別年齢 . フケ薄毛色、艷フケ薄毛色、艷女性 25 -1 0 +2 0 0 +2 女性 27 - 2 0 0 -1 0 +1 女性 32 - 1 0 0 0 0 +2 女性 35 -2 0 0 -1 0 +2 女性 35 -1 -1 0 +1.5 0 +1 女性 35 0 0 0 0 0 +1.5 女性 38 - 2 0 0 - 1 0 +1 女性 41 -1 0 - 2 0 0 0 女性 43 -3 -1 0 - 1 0 +1 女性 45 -1 0 -1 0 0 0 女性 45 -2 0 -1 -1 0 +1 女性 48 -2 0 -2 0 0 0 女性 48 -2 -1 -1 -1 0 +1 女性 48 -1 - 1 - 2 0 0 +1 女性 48 - 2 - 1 -1 -1.5 0 0 女性 51 - 2 - 2 -1 0 0 女性 51 - 1 - 2 0 +1 +1.5 女性 52 -2 -1 -1 0 0 女性 55 -2 -2 0 0 0 女性 57 -2 -2 - 1 -1 0 実施例 35

キヤロット 100 gを洗浄後、搾汁してキヤ口ッ卜の搾汁液を得た。この搾汁液に蜂蜜 5 g、水飴 5 g及びレモン果汁 2m 1を加え、さらに AOK- I I I a 5 Omgを添加してキヤ口ットジュース（A) 50 0 m 1を製造した。

また、比較のため、 AOK— I I I aを添加しない以外は上記と全く同様にしてキヤロットジュース（B) を製造した。

キヤロットジュース（A) 及びキヤロットジュース（B) を 120。C、 20分間の加圧殺菌後、室温で 150日間保存したところ、ジュース（A ) はジュース（B) に比べて退色が少なく、ジュース（A) は鮮やかなオレンジ色であり、味、香りとも新鮮な風味を保っていたが、ジュース (B) は少し褐色化したオレンジ色を呈し、味も少し新鮮さが乏しく、キヤロット特有の香りがジュース（A) よりも著しく低下していた。実施例 36

前記実施例 1におけると同様にして製造した含水メタノール抽出物（A ) を次の処方で配合して清涼飲料水を調製した。調製後、清涼飲料水を 85°Cで 30分間加熱殺菌した。

グラニュー糖 20 g

果糖 35 g

クェン酸 3 g

コハク酸 0. 1

含水メ夕ノール抽出物（A) 5 g

香料

水全容 1 1 となる量本製品は特有の好ましい香味を有する口臭の抑制に効果的な飲料であつた。 . — 実施例 37 -- 実施例 14におけると同様にして製造した含水メ夕ノ一ル抽出物（C) を次の処方で配合して清涼飲料水を調製した。調製後、清涼飲料水を 8 5°Cで 30分間加熱殺菌した。

グラニュー糖 20 g

果糖 35 g

クェン酸 3 g

酒石酸 0. 1 g

リボフラビン 50 m g

ピリドキシン 25 m g

含水メ夕ノール抽出物（C) 0.5 g

香料適量

水全量 1 1 となる量本製品を自然光のもとで 15日間放置後、リボフラビン及びピリドキシンの残存率を測定したところ、残存率はそれぞれ 75%及び 71%であった。一方、含水メタノール抽出物（C) を添加しなかったもののリボフラビン及びピリドキシンの残存率はそれぞれ 27%及び 18%であつた。

実施例 38

市販ビール Bubsch (Sudwerk 社製）を開栓後、 4つの 1000m 1容エルレンマイヤーフラスコに 1000m lずつ注加して閉栓し、 50°C の恒温槽中で加速試験を行った。各フラスコに AOK— I I、 AOK- I a及び AO K— I I I bの等量混合物を 1、 5、 1 0及び 20 g/ m 1になるように添加し、対照として何も加えないものと比較した。そして 2、 5及び 1 0曰後にビール 1 5 0 m lをサンプリングして Tamura et al. [J. Agric. Food Chem. , 439-442(1991)]の方法に準じて生成したァセトアルデヒドを測定した。

得られた結果を表 1 5に示す。

表 1 5

実施例 3 9

実施例 3 6において含水メタノール抽出物（A) の代わりに AOK— I I、 AOK- I a及び AOK— I bの等量混合物を 0. 0 1重量％となるように添加して清涼飲料水を調製した。本製品を自然光のもと 1 5 日間放置後のリボフラビン及びピリドキシンの残存率はそれぞれ 7 5% 及び 7 2 %であったが、 AOK— I I、 AOK— I a及び AOK— l b の等量混合物無添加の清涼飲料水では、リボフラビン及びピリドキシンの残存率はそれぞれ 2 3 %及び 1 5 %であった。実施例 40

牛肉の脂肪を除去し、食塩を加え、 5日間漬けこみ、その後煮-熟して肉繊維をほぐし _、食塩、香辛料、脂肪、調味料と共に、実施例 15と同様にして得られた含水メタノール抽出物（D) を 0. 1重量％になるように添加してコンビーフを製造し、冷蔵庫で 10日間保存した。その結果、含水メタノール抽出物（D) 無添加のものは酸化により著るしく変色したが、本製品は製造時のピンク色を保持していた。

実施例 41

通常の方法によりマ一ガリンを製造する際に、 AOK— I I I a、 A OK- I I I b及び A OK— I Vの等量混合物 1 O Omg/l O O O g の割合で添加し、約 3ヶ月室温保存した。該抽出物無添加のものは香味が変性し食用に適さない状態となったが、本製品は香味に殆ど変化がなカヽつた。

実施例 42

大麦若葉 10 k gを水で洗浄し、殺菌後、さらに水洗いし、搾汁して、大麦若葉エキス約 9.5リットル（固形分 4%) を得た。この大麦若葉エキスに小麦強力粉を加えて 3倍散として噴霧乾燥し、強力粉青汁粉末約 1000 gを得た。得られた青汁粉末をパン原料（強力粉 300 g、グラニュー糖 20 g、イースト 3.4 g、食塩 5 g、水 250 g、バタ - 20 g) の固形分の 2%になるように添加し、さらに AOK— I I I a、 AOK— l a及び AOK— I bの等量混合物 35mgを加え、通常の方法でロールパンをつくつた。得られたパンは鮮やかな緑色を呈し、芳香を有する上質の製品であった。得られたパンは、水を除くパン原料 100 gあたり、 AOK— I I 5.8mg、 AOK— I l i a 4.5 mg、 AOK— l a 4.1mg、 A0K— l b 4.0 m g . AOK- I I l b 0.6mg及び AOK— I V 0.7 m gを含有していた。実施例 43

食用油脂 45 g、脱脂粉乳 4 g及びモノグリレシチン 1 gに実施例 4 2で得た大麦若葉エキスの乾燥粉末 2 g及び AOK_ I I I a 5 m g 及び A OK— I a 5mgを添加し、水を 48 g注加して乳化する。得られた乳化物を高圧均質機で 120 k gZc m²の圧力により均質化し、 90°Cで 15秒間殺菌後、冷却してケーキ用のクリームを製造した。このクリームは鮮やかな緑色を呈しており、 100 gあたり AOK— I I 1 1.3mg. AOK- I I I a 1.4mg、 AOK— l a 2.8 mg、 AOK— l b 0.7mg, AOK- I I l b 5.6 m g及び A OK— I V 5.7mgを含有していた。このクリームを温度約 20°C、相対湿度約 55%の部屋に 15日間置いておいたが、品質の変化は殆んどなかった。

実施例 44

小麦粉 90 g、コーンスターチ 10 g、グラニュー糖 25 g、バタ一 5 g、ショートニング 10 g、重曹 1 g、食塩 7 g及び水 22 gに、 A OK- I I 7.5 m g及び AOK— I b 7.5 m g並びに実施例 15 で得られた大麦若葉エキスの乾燥粉末 5 gを添加し、 240°C、 5分間乾燥してビスケットを製造した。ビスケットはその 100 g中に AOK — I I 25mg、 AOK— I I I a 2. 1mg、 AOK— l a 1. 4mg、 AOK— I b 7.3mg、 AOK— I l l b 3.0mg及び AOK- I V 3.2mgを含有していた。

実施例 45 実施例 42と同様にして得た大麦若葉エキスを中力粉で 3倍散として中力粉青汁粉末を得た。中力粉 2.5 k gに食塩 50 g及び水 1リットルを添加し、これに原料固形分の 2.5%になるように上記の中力粉青汁粉末を添加し、さらに、 AOK— I l l b 10111₈及び八01^— I V 1 Omgを添加して常法に従い手延べ麵を製造した。

得られたうどんは鮮やかな緑色を呈し、風味の佳い製品であった。得られたうどんは乾燥物 100 gあたり AOK— I I 7.5mg、 AO K一 I l i a 2.3mg、 AOK— I a 1. Omg. AOK- I b 0.7 m g、 AOK— I I I b 1.2 m g及び A 0 K— I V 1.2m gを含有しており、温度約 20°C、相対湿度約 57%の部屋に 180曰間放置しておいたが、品質の変化は殆んどなかった。

実施例 46

実施例 42で得た大麦若葉の青汁粉末 5 g、 AOK— I I I b 2m g及び AOK— I V 2mgを、アイスクリーム用原料である無塩バタ一 7.0 g、脱脂粉乳 10.0 g、脱脂練乳 10.0 g、生クリーム 10. 0 g、ショ糖 7.0 g、 CMC 0.3 g及び水 55.7 gに添加して、通常のアイスクリームの製造工程によりアイスクリームを製造した。得られたアイスクリームは鮮やかな緑色を呈していた。このアイスクリームはその 100 g中に AOK— I I 28.8mg、 AOK- I I I a 3. Omg、 AOK— l a 2.0mg、 AOK— l b 1.5mg、 A OK- I I l b 3.5 m g及び AOK— I V 3.7mgを含有しており、家庭用冷蔵庫の冷凍室（約一 18°C) に 150日間放置しておいたが、その品質には殆んど変化はなかった。

実施例 47 クツキ一の原料である小麦粉 100 g、マ一ガリン 20 g、砂糖 30 g、牛乳 10 g、脱脂粉乳 5 g、食塩 0.2 g、ベ一キングパウダー 1 g及び水 10 gに、実施例 14と同様にして得られた含水メタノ一ル抽出物（C) 10 gを添加して混合し、成型して 200°Cでオーブンにより焙焼した。得られたクツキ一はその 100 g中に、 AOK— I I 7 0mg、 AOK— I l i a 10.2 m g、 A 0 K— I a 5.2mg、 AOK— l b 4.1 m g、 AOK— I I I b 8.0mg及び AOK— I V l Omgを含有していた。

Claims

求の範囲

式 R⁵

式中、

R¹は水素原子、シナピル基、フェルリル基又はラムノシル基を表わし、そして

R ²は水素原子又はグルコシル基を表わす、

ただし、 R¹と R²は同時に水素原子を表わすことはない、で示されるサボナリン誘導体。

2. 麦類植物の緑葉の搾汁液水可溶性成分又は n—へキサン不溶性成分から抽出されたものである請求の範囲第 1項記載のサポナリン誘導体

3. 麦類植物が大麦又は裸麦である請求の範囲第 2項記載のサポナリン誘導体。

4. 麦類植物の緑葉の搾汁液の水可溶性成分を多孔性樹脂吸着剤で処理し、次いで含水率が 10~ 70 %の含水メタノ一ルで溶出することを特徴とする式

式中. R¹は水素原子、シナピル基、フェルリル基又はラムノシル基を表わし、そして

R ²は水素原子又はグルコシル基を表わす、

で示されるサボナリン誘導体の製造方法。

5. 麦類植物の緑葉の搾汁液の n—へキサンに実質的に不溶性で且つ含水率が 5〜 80 %の含水アルコールに可溶性の成分を多孔性樹脂吸着剤で処理し、次いで含水率が 10〜70 %の含水メタノ一ルで溶出することを特徴とする請求の範囲第 4項記載の式（ I ) のサポナリン誘導体の製造方法。

6. 式

式中、

R ²は水素原子又はグルコシル基を表わす、

で示されるサボナリン誘導体の少なくとも 1種を有効成分として含有することを特徴とする抗酸化剤。

7. 請求の範囲第 6項記載の式（ I ) のサポナリン誘導体の抗酸化剤としての使用。

8. 請求の範囲第 6項記載の式（ I ) のサポナリン誘導体の少なくとも 1種を有効成分として含有する飲食品類の鮮度又は品質の保持剤。

9 . 請求の範囲第 6項記載の式（ I ) のサボナリン誘導体の飲食品類の鮮度又は品質の保持のための使用。

1 0 . 請求の範囲第 6項記載の式（ I ) のサボナリン誘導体の少なくとも 1種を飲食品類に添加することを特徴とする飲食品類の鮮度又は品質の保持方法。

1 1 . 請求の範囲第 6項記載の式（ I ) のサポナリン誘導体の少なくとも 1種を添加することにより鮮度又は品質の保持性が改善された飲食品類。

1 2 . 請求の範囲第 6項記載の式（ I ) のサポナリン誘導体の少なくとも 1種が配合されていることを特徴とする皮膚及び毛髪化粧料。