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WO1998043665A1 - Agent preventif et/ou therapeutique pour les maladies des reins - Google Patents

Agent preventif et/ou therapeutique pour les maladies des reins Download PDF

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WO1998043665A1
WO1998043665A1 PCT/JP1998/001221 JP9801221W WO9843665A1 WO 1998043665 A1 WO1998043665 A1 WO 1998043665A1 JP 9801221 W JP9801221 W JP 9801221W WO 9843665 A1 WO9843665 A1 WO 9843665A1
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WO
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ala
tcf
mutant
lys
arg
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PCT/JP1998/001221
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English (en)
French (fr)
Inventor
Masahiko Kinosaki
Hiromi Ogawa
Hiroaki Masunaga
Fumie Kobayashi
Kyoji Yamaguchi
Kanji Higashio
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Snow Brand Milk Products Co Ltd
Original Assignee
Snow Brand Milk Products Co Ltd
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Publication date
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Priority to AU64208/98A priority patent/AU734794B2/en
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Ceased legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
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    • C07K14/4753—Hepatocyte growth factor; Scatter factor; Tumor cytotoxic factor II
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to a prophylactic and / or therapeutic agent for renal disease comprising a tumor cell-damaging factor-IKTumor Cytotoxic Factor-II (TCF-II) mutant into which point mutation is introduced as an active ingredient.
  • TCF-II tumor cell-damaging factor-IKTumor Cytotoxic Factor-II
  • the prophylactic and / or therapeutic agent for renal disease of the present invention comprises ischemic renal disorder, drug-induced renal disorder, diabetic nephropathy, glomerulonephropathy, glomerulosclerosis, membranous nephropathy, and chronic diseases related to autoimmune diseases. It is useful for preventing and / or treating renal diseases such as nephropathy and nephrosis, or renal failure caused by these diseases. Background art
  • renal diseases such as ischemic nephropathy, drug-induced nephropathy, diabetic nephropathy, glomerulonephropathy, glomerulosclerosis, membranous nephropathy, chronic nephropathy related to autoimmune diseases, and nephrosis, or No effective remedy has been found for renal insufficiency caused by these factors, and conservative therapy is performed in clinical practice, namely, dialysis, nutritional management, symptomatic administration of diuretics or cardiotonic agents to remove exacerbating factors, Alternatively, steady therapy and the like have been performed, and there has been a keen need for an effective drug in the renal disease area.
  • TCF- ⁇ is a glycoprotein known as a tumor cytotoxic factor produced by human fibroblast IMR-90 discovered by the present inventors (W0 90/10651), and is an excellent liver cell. It is known to have pharmacological activities such as proliferation activity, kidney cell proliferation activity, and antitumor activity.
  • TCF-II natural TCF-II or TCF-II obtained by genetic recombination is known.
  • a TCF-II mutant such as a sugar chain deletion mutant of this protein (Japanese Patent Application Laid-Open No. 7-507328) or a mutant into which point mutation is introduced (W096 / 20214) is known. Disclosure of the invention
  • an object of the present invention is to provide a novel agent for preventing and / or treating renal diseases comprising a TCF-II mutant as an active ingredient.
  • the present invention relates to a TCF-II mutant into which a point mutation has been introduced, in particular, the amino acid sequence Arg-Lys-Arg-Arg from the N-terminal second position of TCF-II is mutated to Ala-Ala-Ala-Ala.
  • the present invention relates to an agent for preventing and treating renal diseases, which is an active ingredient.
  • the renal disease and / or therapeutic agent of the present invention may be used for the treatment of ischemic renal disorder, drug-induced renal disorder, diabetes mellitus, glomerulonephropathy, glomerulosclerosis, membranous nephropathy, and chronic diseases related to autoimmune diseases. It is useful for the prevention and / or treatment of renal diseases such as nephropathy and nephrosis, or renal failure caused by these diseases.
  • the mutant into which the void introduction, which is the active ingredient of the present invention, is synthesized by synthesizing an oligonucleotide in which the nucleotide sequence corresponding to the mutation introduction site of the TCF-II mutant has been synthesized, and converting the TCF-II cDNA into type III. It can be prepared by the site-directed mutagenesis method using the PCR (polymerase reaction) method.
  • the cDNA obtained in this manner can be expressed in an appropriate expression promoter (cytomegalovirus (CMV), SR (Mole. Cell. Biol, vol. 8, No. 1, pp.
  • CMV cytomegalovirus
  • SR Mole. Cell. Biol, vol. 8, No. 1, pp.
  • TCF-II mutants can be recovered and prepared. Used As the TCF-II mutant, any TCF-II mutant can be used as long as it is artificially mutated. Particularly preferably, the NCF of TCF_11 disclosed in W096 / 20214 is used.
  • Amino acid sequence from terminal 2nd Arg-Lys-Arg-Arg is mutated to Ala-Ala-Ala-Ala or amino acid sequence from N-terminal 27th position ys- [le-Lys-Tr- A mutant in which Lys-Lys is mutated to Ala-Ile-Ala-Thr-Ala-Ala is used.
  • the agent for preventing and / or treating a disease of the present invention can be administered intravenously, intramuscularly, or subcutaneously as an injection. These preparations are manufactured according to a known pharmaceutical manufacturing method, and a pH adjuster, a buffer, a stabilizer and the like can be added as necessary.
  • a pH adjuster, a buffer, a stabilizer and the like can be added as necessary.
  • the formulation of the present invention is administered to a patient, it varies depending on conditions such as the degree of symptoms, health condition, age, and body weight of the administered patient, and is not particularly limited.
  • Adults 0.6 mg to 600 mg of purified TCF-II mutant per day per adult
  • the preparation containing preferably 6 mg to 60 mg may be administered once a day or more.
  • FIG. 1 shows the protective effect of the TCF-II mutant (RKRR2AAAA) against renal failure death caused by mercuric chloride in Example 3.
  • FIG. 2 shows the protective effect of the TCF-II mutant (KIKTKK27AIATAA) against renal failure death caused by mercuric chloride in Example 3.
  • coli containing KIKTKK27AIATAA cDNA (FERM BP-5265) were shaken at 37 ° C in L medium (400 ml) containing 50 g / ml ampicillin. The cells were cultured, and when 0D600 became 1.0, Spectinomycin (Sigma) was added so that the final concentration became 0.3 mg / ml, and the cells were cultured.
  • plasmid DNA was separated by Aldrich SDS method, and each mutant was expressed by cesium chloride density gradient centrifugation. Plasmid was purified.
  • expression plasmids were introduced into CHO cells. 200 ⁇ g of expression plasmid and 10 ⁇ g of blasticidin resistance gene expression plasmid pSV2 bsr (Funa) previously dissolved in 251 TE (10 mM Tris-HCl (pH 8.0) -lmM EDTA) The DNA was transfected into 2 ⁇ 10 6 CHO cells suspended in 0.8 ml of IDMM medium (Gibco) containing 10% fetal bovine serum (Gibco) by electoporation.
  • IDMM medium Gibco
  • fetal bovine serum Gibco
  • the cell suspension was left at room temperature for 10 minutes, suspended in 10 ml of IMDM medium containing 10% fetal bovine serum, and incubated at 37 ° C for 2 days. They were cultured in a carbon dioxide incubator (5% C0 2). Two days later, the cells were removed from the bottom of the flask by trypsin (Gibco) treatment, the number of viable cells was counted, and then spread on a 96-well plate (Nunc) at 10,000 cells / well, and 5 g The cells were cultured in a selective medium containing 200 ml / ml blasticidin (Funakoshi) at 200 ° C. in a 37 ° C.
  • the above composition was dissolved in a citrate buffer solution of pH 6.03 to make a total volume of 20 ml, sterilized, dispensed in 2 ml portions into vials, lyophilized and sealed.
  • the above composition was dissolved in physiological saline for injection to prepare a total volume of 20 ml, sterilized, dispensed in 2 ml portions into vials, lyophilized and sealed.
  • the above composition was dissolved in a citrate buffer solution of pH 6.03 to make a total volume of 20 ml, sterilized, dispensed in 2 ml portions into vials, lyophilized and sealed.
  • the above composition was dissolved in physiological saline for injection to prepare a total volume of 20 ml, sterilized, dispensed in 2 ml portions into vials, lyophilized and sealed.
  • the above composition was dissolved in a pH 6.03 citrate buffer to make a total volume of 20 ml. After sterilization, 2 ml was dispensed into vials and freeze-dried and sealed.
  • the above composition was dissolved in physiological saline for injection to prepare a total volume of 20 ml, sterilized, dispensed in 2 ml portions into vials, lyophilized and sealed.
  • the above composition was dissolved in a citrate buffer solution of pH 6.03 to make a total volume of 20 ml. After sterilization, the mixture was dispensed into vials in 2 ml portions, freeze-dried and sealed.
  • freeze-dried products are used after dissolving in sterile distilled water at the time of use.
  • TCF-II mutant-administered group showed the same activity at lower doses as compared to the TCF-II-administered group (in RKRR2AAAA, a quarter of natural TCF_11, and in KIKTKK27AIATAA, 1/2 the amount).
  • the present invention provides an excellent renal disease preventive and / or therapeutic agent.
  • the present invention relates to a TCF-II mutant in which a point mutation is introduced, in particular, a TCF-II amino acid sequence from the N-terminal second position of Arg-Lys-Arg-Arg is mutated to Ala-Ala-Ala-Ala.
  • a prophylactic and therapeutic agent for renal disease comprising ischemic renal disorder, drug-induced renal disorder, diabetic nephropathy, glomerulonephropathy, glomerulosclerosis, membranous nephropathy, and autoimmune disease. It is useful for the prevention and / or treatment of related chronic nephropathy and renal diseases such as nephrosis, and renal failure caused by these diseases.

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Description

明 細 腎疾患予防及び Z又は治療剤 技術分野
本発明は、 ポイントミユーテ一ションを導入した腫瘍細胞障害因子一 IKTumor Cytotoxic Factor-II； TCF-II) 変異体を有効成分とする、 腎疾患予防及び Z又は治療剤に関する。 本発明の腎疾患予防及び Z又は治療剤は、 虚血性腎障害、 薬物性腎障害、 糖尿病性腎症、 糸球体腎症、 糸球体硬化症、 膜性腎症、 自己免疫 疾患に関連した慢性腎症、 及びネフローゼなどの腎疾患、 あるいはこれらの疾患 を原因とする腎不全の予防及び Z又は治療に有用である。 背景技術
従来、 虚血性腎障害、 薬物性腎障害、 糖尿病性腎症、 糸球体腎症、 糸球体硬化 症、 膜性腎症、 自己免疫疾患に関連した慢性腎症、 及びネフローゼなどの腎疾患、 あるいはこれらを原因とする腎不全などに対する有効な治療剤は見つかっておら ず、 臨床の現場では保存療法、 即ち症状に合わせた透析、 栄養管理、 利尿剤ある いは強心剤の投与による悪化因子の除去、 あるいはステ αィド療法などが行われ ており、 腎臓疾患領域での有効な薬剤が切望されていた。
TCF— Πは、 本発明者らにより見出された、 ヒト線維芽細胞 I MR— 90の産 生する腫瘍細胞障害因子として知られる糖蛋白質であり（W0 90/10651号） 、 優れ た肝臓細胞増殖活性、 腎臓細胞増殖活性、 抗腫瘍活性などの薬理活性を有するこ とが知られている。 TCF - IIは、 天然型 TCF— IIあるいは遺伝子組換えによ る TCF- Π等が知られている。 さらに、 この蛋白質の糖鎖欠失変異体 （特表平 7- 507328号）、 あるいはポイントミュ一テーションを導入した変異体（W096/20214 号） などの TCF— II変異体が知られている。 発明の開示
本発明者らは、 上述の状況に鑑み、 これらの腎臓疾患に対し有効な物質を求め 鋭意探索した結果、 TCF— II変異体、 特にポイントミューテーシヨンを導入し た変異体である TCF— Πの N末端 2番目からのァミノ酸配列 Arg- Lys-Arg-Arg を Ala -Ala-Ala- Alaに変異させた TCF - Π変異体、 又は Ν末端 27番目からの アミノ酸配列 Lys- lie- Lys - Thr- Lys-Lys を Ala- lie- Ala- Thr-Ala- Ala に変異させ た T C F— 11変異体が腎臓疾患の予防または治療に対して有効であることを見出 した。 従って、 本発明は、 TCF— II変異体を有効成分とする新規な腎疾患予防 及び 又は治療剤を提供することを課題とする。
本発明は、 ポイントミューテ一シヨンを導入した TCF— II変異体、 特に TC F— IIの N末端 2番目からのァミノ酸配列 Arg- Lys-Arg-Arg を Ala- Ala- Ala- Ala に変異させた TCF— II変異体、 又は N末端 27番目からのァミノ酸配列 Lys- Ile- Lys- Thr- Lys-Lys を Ala- lie- Ala- Thr- Ala- Ala に変異させた T C F - 11変異体を 有効成分とする、 腎疾患予防及びノ又は治療剤に関する。 本発明の腎疾患及ぴ 又は治療剤は、 虚血性腎障害、 薬物性腎障害、 糖尿病性肾症、 糸球体腎症、 糸球 体硬化症、 膜性腎症、 自己免疫疾患に関連した慢性腎症、 及びネフローゼなどの 腎疾患、 あるいはこれらの疾患を原因とする腎不全の予防及び 又は治療に有用 である。
本発明の有効成分であるボイントミユーテーシヨンを導入した変異体は、 TC F— II変異体の変異導入部位に対応する塩基配列に置き換えたオリゴヌクレオチ ドを合成し、 TCF— IIcDNAを铸型とした PCR (ポリメラ一ゼチヱ一ンリ アクション） 法による部位特異的変異法により調製することができる。 このよう にして得られた c DN Aは適当な発現プロモーター （サイ トメガロウィルス（CMV )，SRひ (Mole. Cell. Biol, vol.8, No.1 pp466- 472(1988) 及び特開平 1-277489 号公報））を有したベクター （例えば W092/01053号公報） に挿入し、 哺乳動物細 胞などの真核細胞をトランスフユク卜し、 この細胞を培養することにより、 培養 液から目的とする TCF— II変異体を回収、 調製することができる。 用いられる TC F— II変異体は、 TCF - IIに対し人為的に変異を加えたものであればどの ようなものでも用いられるカ 特に好ましくは、 W096/20214号公報に開示され る T C F _ 11の N末端 2番目からのァミノ酸配列 Arg-Lys- Arg- Arg を Ala- Ala- Ala- Ala に変異させた変異体、 又は N末端 27番目からのアミノ酸配列し ys-[le-Lys- T r-Lys-Lys を Ala-I le- Ala- Thr-Ala-Ala に変異させた変異体が用いられる。
本発明の肾疾患予防及び 又は治療剤は、 注射剤として静脈、 筋肉内、 あるい は皮下に投与することができる。 これらの製剤は公知の製剤学的製法に準じ製造 され、 必要に応じ pH調整剤、 緩衝剤、 安定化剤等を添加することができる。 本 発明の製剤を患者に投与する場合、 投与患者の症状の程度、 健康状態、 年齢、 体 重等の条件によって異なり、 特に限定されないが、 成人 1日当たり精製 TCF— II変異体として 0.6mg〜600mg、 好ましくは 6mg〜60mgを含有する製剤を 1日 1 回若しくはそれ以上投与すれば良い。 図面の簡単な説明
第 1図は、 実施例 3の塩化第二水銀による腎不全死に対する、 TCF - II変異 体 （RKRR2AAAA)の防御効果を示す。
第 2図は、 実施例 3の塩化第二水銀による腎不全死に対する、 TCF-II変異 体 （KIKTKK27AIATAA) の防御効果を示す。 発明を実施するための最良の形態
次に実施例を挙げて本発明を更に詳しく説明する。 しかし、 これらは単なる例 示であって、 本発明はこれらにより限定されるものではない。
〔実施例 1〕
TCF - Π変異体の調製
W096/20214号公報に開示される方法に従って、 天然型 T C F— 11の N末端 2 番目からのアミノ酸配列 Arg-Lys- Arg- Arg を Ala- Ala- Ala-Ala に変異させた変異 体 （以下、 RKRR2AAAA と表す） 、 及び N末端 27番目からのアミノ酸配列 Lys- 1 le- Lys-Thr- Lys- Lysを Ala- Ile-Ala-Thr- Ala- Ala (以下、 KIKTKK27AIATAAと表す） に変異させた変異体の点変異体 2種を調製した。 即ち、 RKRR2AAAA c DNAを含 む大腸菌（FERM BP- 5266)、 および KIKTKK27AIATAA c D N Aを含む大腸菌 (FERM BP - 5265)を 50 g/mlのアンピシリンを含む L培地（400ml) 中 3 7°Cで振盪培養し、 0D 600が 1.0になったところで終濃度が 0.3 mg/ml となるようにスぺクチノマイ シン （シグマ社） を添加し、 ー晚培養した。 Maniatisの方法（Molecular Cloning 2nd ed. pp 1.21-1.52(1989), Cold Spring Harbor Laboratory発行） に従い、 アル力リ SDS法によりプラスミ ド DNAを分離し、 塩化セシウム密度勾配遠心 法によりそれぞれの変異体発現プラスミ ドを精製した。
得られたこれらの発現プラスミ ドを CHO細胞に導入した。 あらかじめ 25 1 の TE (lOm Tris-HCl(pH8.0)-lmM EDTA)に溶かしておいた、 200〃g の発現プ ラスミ ドと 10〃g のブラストサイジン耐性遺伝子発現プラスミ ド pSV2 bsr (フナ コシ社） DNAを、 10%牛胎児血清 （ギブコ社） を含んだ I MDM培地 （ギブコ 社） 0.8ml に懸濁した 2X106 個の CHO細胞にエレクト口ポレーシヨン法で遺 伝子導入した。 330V.960 F の条件でエレクトロポレーシヨンを行った後、 細胞 懸濁液を 1 0分間室温で放置し、 10mlの 10%牛胎児血清を含む I MDM培地に懸 濁し 2日間 37°Cの炭酸ガスインキュベーター （5 %C02)中で培養した。 2日後細 胞をトリプシン （ギブコ社） 処理によりフラスコ底面より剝がし、 生細胞数を数 えた後、 10， 000個/ゥエルになるように 96ゥエルプレート （Nunc社） にまき、 5 g/mlのブラストサイジン （フナコシ社） を含んだ選択培地 200〃1 Zゥエル中 で 3 7°Cの炭酸ガスインキュベーター （5 %C02)中で培養した。 2— 3週間後、 ゥエルあたり 50〃 1の培養上清を取り、 ェンザィ厶ィ厶ノアッセィ （N.Shima 他、 Gastrpenterologia Japonica, Vol. 26, No.4， pp 477-482 (1991)) を行い TC F— Π変異体生産細胞を選びだした。 生産細胞を 1枚当たり 100ml の培地中、 50 -200枚の 225cm2フラスコを用い、 37°Cの炭酸ガスインキュベーター （5 %C02)中 で 4一 7日培養し、 5-20L の培養上清を回収した。 この培養上清から、 へパリン —セファロース - 6Bカラム （25mmxi20隱，フアルマシア社） 、 Mono Sカラム（5 mmx50瞧， フアルマシア社） 、 及びへパリン 5-PWカラム（8隱 X 75mm, 東ソ一社） により各変異体を精製した。 得られた TCF— II変異体は、 0.01% Tween20を含 むリン酸緩衝液 （P BS) に対して透析し最終精製品とした。 最終精製品につい ては、 ローリー法による蛋白質量定量、 SDS—ポリアクリルアミ ドゲル電気泳 動による純度検定、 及びァミノ酸シークェンサ一によるァミノ酸配列決定により 構造を確認した。
〔実施例 2〕
TC F - II変異体製剤の製造
前述の実施例 1で得られた TCF - II変異体の、 注射剤の製造例を示す。
(1) TCF— II変異体 20 a
ヒト血清アルブミ ン 100 mg
上記組成を pH6.03のクェン酸緩衝液に溶解し全量を 20mlに調製し、 滅菌後バイ ァル瓶に 2 mlづっ分注したものを凍結乾燥後密封した。
(2) TCF - II変異体 20 g
ツイ一ン 8 0 1 mg
ヒト血清アルブミ ン 100 mg
上記組成を注射用生理食塩水に溶解し全量を 20mlに調製し、 滅菌後バイアル瓶 に 2 mlづっ分注したものを凍結乾燥後密封した。
(3) TCF - II変異体 20 j g
ツイ一ン 8 0 2 mg
ソルビトール 4 g
上記組成を pH6.03のクェン酸緩衝液に溶解し全量を 20mlに調製し、 滅菌後バイ ァル瓶に 2 mlづっ分注したものを凍結乾燥後密封した。
(4) TCF— [I変異体 20 g
ツイーン 8 0 1 mg
グリシン 2 g
上記組成を注射用生理食塩水に溶解し全量を 20mlに調製し、 滅菌後バイアル瓶 に 2 mlづっ分注したものを凍結乾燥後密封した。
(5) TCF— II変異体 20 g
ツイーン 80 1 mg
ソルビトール 2 g
グリシン 1 g
上記組成を注射用生理食塩水に溶解し全量を 20mlに調製し、 滅菌後バイアル瓶 に 2 mlづっ分注したものを凍結乾燥後密封した。
(6) TCF— II変異体 20 a
ソルビトール 4 g
ヒト血清アルブミン 50 mg
上記組成を PH6.03 のクェン酸緩衝液に溶解し全量を 20mlに調製し、 滅菌後バ ィアル瓶に 2 mlづっ分注したものを凍結乾燥後密封した。
(7) TCF— II変異体 20 β
グリシン 2 g
ヒト血清アルブミン 50 mg
上記組成を注射用生理食塩水に溶解し全量を 20mlに調製し、 滅菌後バイァル瓶 に 2 mlづっ分注したものを凍結乾燥後密封した。
(8) TCF— II変異体 20
ヒト血清アルブミン 50 mg
上記組成を pH6.03のクェン酸緩衝液に溶解し全量を 20mlに調製し、 滅菌後バイ アル瓶に 2mlづっ分注したものを凍結乾燥後密封した。
これらの凍結乾燥品は、 使用時に滅菌蒸留水に溶解して用いられる。
〔実施例 3〕
塩化第二水銀による肾不全死防御効果
実施例 1に従って得られた、 TCF— IIの 2番目からのァミノ酸を変異させた RKRR2AAAA. 及び 27番目からのアミノ酸を変異させた KIKTKK27AIATAAを用いて、 塩化第二水銀による腎不全死に対する防御効果を試験した。 即ち、 I CR系雄マウス （体重 30〜35g；一群 20匹） に 1日 2回、 計 9回各 T CF-II 変異体 （それぞれ 25 z g 匹 回） 、 陽性対照として TCF— 11(25, 50， 100 ug/匹 Z回） 、 及び溶媒を静脈内投与した。 最終投与の 6時間後、 5mg/kgの 塩化第二水銀 （和光純薬社） を静脈内投与し、 塩化第二水銀による腎不全死に対 する T C F _ Π変異体の防御効果を生存匹数として経時的に観察した。 結果を第 1図及び第 2図に示す。 この結果より、 溶媒投与群と比較して、 TCF— II及び T C F - 11変異体投与群は、 明らかに塩化第二水銀による腎不全死を防御した。 さらに、 TCF— II変異体投与群は TCF— II投与群と比較して、 低用量で同等 の活性を示すことが確認された （RKRR2AAAAでは天然型 T C F _ 11の 4分の 1量、 KIKTKK27AIATAAでは 2分の 1量) 。 産業上の利用可能性
本発明により優れた腎疾患予防及び 又は治療剤が提供される。 本発明は、 ポ イントミユーテ一ションを導入した TCF— II変異体、 特に TCF— IIの N末端 2番目からのアミノ酸配列 Arg- Lys-Arg- Arg を Ala-Ala- Ala- Ala に変異させた T CF - [I変異体、 又は N末端 27番目からのァミノ酸配列 Lys- lie- Lys-Thr- Lys - Ly s を Ala-Ile- Ala- Thr- Ala-Ala に変異させた T C F _ II変異体を有効成分とする、 腎疾患予防及びノ又は治療剤に関し、 虚血性腎障害、 薬物性腎障害、 糖尿病性腎 症、 糸球体腎症、 糸球体硬化症、 膜性腎症、 自己免疫疾患に関連した慢性腎症、 及びネフローゼなどの腎疾患、 さらにこれらの疾患を原因とする腎不全の予防及 び/又は治療に有用である。
微生物への言及
1) 寄託機関 通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所
住 所 日本国茨城県つくば市東 1丁目 1番 3号
寄託日 平成 6年 11月 10日
(平成 6年 11月 10日原寄託され、 平成 7年 10月 25日にブタぺスト条約に基づ く寄託へ移管） 受託番号 F ERM BP- 5265
寄託機関 通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所
住 所 日本国茨城県つくば巿東 1丁目 1番 3号
寄託曰 平成 6年 1 1月 1 0日
(平成 6年 11月 10日原寄託され、 平成 7年 10月 25日にブタぺスト条約に基づ く寄託へ移管）
受託番号 ： F ERM BP- 5266

Claims

請 求 の範 囲
1. ポイン トミューテ一シヨ ンを導入した腫瘍細胞障害因子— II (Tumor Cytoto xic Factor; TCF— II) 変異体を有効成分とする、 腎疾患予防及び Z又は治療 剤。
2. TCF— II変異体が、 TCF— IIの N末端 2番目からのアミノ酸配列 Arg - Ly s-Arg-Arg を Ala-Ala- Ala- Ala に変異させた T C F— II変異体である請求項 1 記載の腎疾患予防及び/又は治療剤。
3. TC F— II変異体が、 TCF— IIの N末端 2 7番目からのアミノ酸配列 Lys - lie- Lys- Thr- Lys- Lys を Ala- 1 le- Ala- Thr- Ala- Ala に変異させた T C F— 11変 異体である請求項 1記載の腎疾患予防及び Z又は治療剤。
4. 腎疾患が腎不全である、 請求項 1〜3のいずれかに記載の腎疾患予防及び/ 又は治療剤。
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