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WO1997013784A1 - Recepteur lactoferrine d'helicobacter - Google Patents

Recepteur lactoferrine d'helicobacter Download PDF

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WO1997013784A1
WO1997013784A1 PCT/FR1995/001317 FR9501317W WO9713784A1 WO 1997013784 A1 WO1997013784 A1 WO 1997013784A1 FR 9501317 W FR9501317 W FR 9501317W WO 9713784 A1 WO9713784 A1 WO 9713784A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
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helicobacter
protein
lactoferrin
column
approximately
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/FR1995/001317
Other languages
English (en)
Inventor
Monique Dupuy
Ling Lissolo
Marie-José Quentin-Millet
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sanofi Pasteur SA
Original Assignee
Pasteur Merieux Serum et Vaccines SA
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Filing date
Publication date
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Priority to US08/860,397 priority patent/US6086893A/en
Priority to EP95934192A priority patent/EP0797585A1/fr
Priority to JP9514751A priority patent/JPH11502418A/ja
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Ceased legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/205—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Campylobacter (G)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies

Definitions

  • the present invention relates to the prevention and treatment of gastric infections due to the Helicobacter bacteria. It relates to a newly identified surface protein purified from Helicobacter as well as its use as a vaccine. This protein has the ability to bind to lactoferrin of human origin.
  • Helicobacter pylori is a gram-negative bacterium found on the surface of the gastric mucosa in humans. This bacterium is associated with a certain number of gastroduodenal pathologies of which it is, at least for some, the pathogenic agent responsible. These are in particular acute or chronic gastritis (inflammation of the mucosa), ulcers (destruction of the mucosa), dyspepsia and certain cancers such as gastric adenocarcinoma.
  • antigens include urease (WO 90/4030), cytotoxin and heat-shock protein (WO 93/18150) and adhesins.
  • a helicobacter protein in substantially purified form said protein having an apparent molecular weight of approximately 98 kD or approximately 70 kD, as defined after migration on SDS-PAGE gel to approximately 10% polyacrylamide and capable of being substantially purified from a membrane extract of Helicobacter by affinity chromatography on a lactoferrin column; so
  • a pharmaceutical composition intended for the treatment or prevention of a Helicobacter infection which comprises, as a vaccinating principle, at least one protein according to the invention.
  • protein of 98 or 70 kD substantially purified means a preparation of this protein devoid of most of the cellular constituents of Helicobacter. Obviously, minor contaminants are not excluded.
  • a protein according to the invention can be obtained from Helicobacter or can be obtained by recombinant route by expression of the corresponding DNA fragment, in a heterologous system, bacteria,
  • J ⁇ yeast or mammalian cells J ⁇ yeast or mammalian cells.
  • a protein according to the invention can be obtained from H. pylori.
  • a composition according to the invention can be produced in a conventional manner.
  • a protein according to the invention is combined with an adjuvant, a diluent or a support which is acceptable from a point of view.
  • a composition according to the invention can be administered by any conventional route in use in the field of vaccines, in particular by oral or parenteral route.
  • the administration can take place in a single or repeated dose one or more times after a certain time interval.
  • the appropriate dosage will vary depending on various parameters, for example, the individual being treated or the mode of administration.
  • FIG. 1 presents the electrophoretic profile on SDS-PAGE gel (polyacrylamide 10%) of a preparation eluted from a column of Sepharose 4B-lactoferrin, after application a membrane extract of H. pylori, as revealed in Coomassie blue (column A) and silver nitrate (column B).
  • the molecular weight standards are phosphorylase B (94 kD), bovine albumin (67 kD), ovalbumin (43 kD), carbonic anhydrase (30 kD), trypsin inhibitor isolated from soybeans ( soybean trypsin inhibitor) (20.1 kD) and alpha-lactalbumin (14.4 kD).
  • the two-phase medium comprises a solid phase 0 consisting of 10 ml of Colombia agar (bioMérieux) supplemented with 6% fresh sheep blood and a liquid phase consisting of 3 ml Trypticase soy broth (Difco) containing 20% fetal calf serum.
  • the vials are placed in a sealed bag called “ generbag “(BBL) and 5 incubated with gentle rotary shaking at 37" C for 48 hours under microaerophilic conditions (8-10% CO_, 5-7% 0_ and 85-87% N2) obtained by the System Microaer (BBL) .
  • a subculture is produced by seeding from this liquid culture, Petri dishes containing a solid agar medium (Colombia agar supplemented with 6% fresh sheep blood). From a culture obtained in a 25 cm 2 flask, approximately 50 Petri dishes are inoculated. These boxes are placed in anaerobic jars under microaerophilic conditions obtained by the Anaerocult C system (Merck). The Petri dishes are thus incubated for 4 days at 37 ° C.
  • a solid agar medium Colombia agar supplemented with 6% fresh sheep blood
  • the bacterial layers are harvested by scraping in the presence of a small volume of PBS (bioMérieux) and by centrifugation. The germs are then washed with PBS in order to remove the residues of culture medium.
  • PBS bioMérieux
  • the washed bacterial pellet is suspended in distilled water and is subjected to vigorous stirring. This suspension is centrifuged at 18,000 x g for 30 min. A certain volume of 25% (w / v) N-Lauroyl Sarkosine is added to the collected supernatant so that the final concentration of Sarkosyl is 0.1% (w / v).
  • the fraction is placed in a dialysis hose (Spectrum, cutoff threshold 10,000 daltons) and dialyzed against 10 volumes of 50 mM Tris-HCl buffer pH 8.0 containing 0.15M NaCl, 10 mM EDTA, 0.1% Sarkosyl.
  • Sepharose 4B (Pharmacia) is prepared on which human lactoferrin (Sigma) has been immobilized.
  • the grafting of lactoferrin onto Sepharose 4B CNBr resin is carried out according to the manufacturer's recommendations.
  • the ligand density is approximately 5 mg of lactoferrin per ml of gel. The mixture is incubated overnight at 4 ° C with rotary agitation.
  • the gel is packaged in a 10 ml column; after decantation, the gel is washed with approximately 20 column volumes of buffer A (50 mM Tris-HCl pH 8.0 containing 10 mM EDTA, 0.1% Sarkosyl, 100 ⁇ M PMSF (phenyl methyl sulfonyl fluoride Sigma)) containing NaCl 0 , 15M, then approximately 6 5 column volumes of buffer A containing 0.5M NaCl, finally with approximately 6 column volumes of buffer A containing IM NaCl.
  • buffer A 50 mM Tris-HCl pH 8.0 containing 10 mM EDTA, 0.1% Sarkosyl, 100 ⁇ M PMSF (phenyl methyl sulfonyl fluoride Sigma)
  • the elution is carried out by applying to column 1 Q the 50 mM Tris-HCl buffer pH 8.0 containing 10 mM EDTA, 0.05% Sarkosyl, 100 ⁇ M PMSF and a gradient of guanidine HCl from 0 to 2M.
  • the fractions eluted in the guanidine • 1 range from 0.75 to 2M are pooled. This preparation is dialyzed against the 50 mM Tris-HCl buffer pH 8.0 and concentrated by rotary evaporation under vacuum.
  • the gel was stained with Coomassie blue.
  • This staining comprises several steps: (1) fixing step: incubation of the gel in a solution of methanol (50 ml), acetic acid (25 ml), trichloroacetic acid (25 ml) and distilled water (900 ml); (2) coloring step: incubation of the gel in a mixture of methanol: acetic acid: water (30:10:60) containing Coomassie blue R250 0.25% (w / v); (3) stage of discoloration in methanol: acetic acid: water (30:10:60).
  • column A this coloration reveals a certain number of bands, none being revealed around 100 kD.
  • the preparation obtained was analyzed by the staining method with silver nitrate.
  • column B the revelation with silver nitrate made it possible to highlight two additional bands, not revealed by the staining with Coomassie blue. However, among these bands, it was not possible to indicate whether one of them corresponded to the lactoferrin receptor.
  • An SDS-PAGE gel is prepared as above and, after electrophoresis, transferred to nitrocellulose.
  • Nitrocellulose is saturated in a blocking buffer (milk skimmed 1% (w / v), NaCl 0.9% (w / v) in 50 mM Tris-HCl pH 8), then incubated in a solution of antibodies against N. meningitidis transferrin receptor (25 ⁇ g IgG / ml in blocking buffer) for 1 hour at 37 ° C under stirring, then washed 3 times with blocking buffer and then incubated with a second antibody (anti-species of the first) conjugated to peroxidase. Nitrocellulose is finally revealed with a substrate which precipitates peroxidase: 4-chloro-1-naphthol in the presence of H2O2.
  • Example 2 Pharmaceutical composition intended for oral administration.
  • the 98 or 70 kD protein capable of being obtained as in Example 1 can be encapsulated alone or in the presence of other H. pylori proteins in gelatin capsules in order to protect the antigen against degradation by the juice. gastric or administered in the presence of sodium bicarbonate.
  • Such formulations have already been used for pharmaceutical compositions (Black et al, Dev. Biol. Stand. (1983) 53).
  • the protein can also be encapsulated in PLGA microspheres (copolymers of glycolic acid and lactic acid) according to the protocol described elsewhere (Eldridge et al, Curr. Top. Microbiol. Immunol. (1989) 146: 59).
  • the protein can also be included in liposomes prepared according to conventional methods widely described ("Liposomes: a practical approach, ed. RRC New, D. Rickwood & BD Hames, 1990, Oxford University 5- Press, ISBN 0-19-963077- 1).
  • the amount of protein administered to humans by the oral route is of the order of 1 to 10 mg per dose, and at least 10. 3 doses of 4 weeks apart are recommended.
  • Example 3 Pharmaceutical composition intended for parenteral administration.
  • the protein of 98 kD or 70 obtainable as in Example 1, is adsorbed on gel "alumina quite conventional.
  • the protein solution at 1 mg / ml in a buffer whose pH is around 6.5 is contacted for 1 hour with
  • the final composition of the preparation is as follows: a protein according to the invention 50 ⁇ g / ml, Al +++ 250 ⁇ g / ml, merthiolate 1/1000, all in PBS.

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Abstract

La présente invention concerne la prévention et le traitement des infections gastriques dues à la bactérie Hélicobacter. Elle a pour objet une protéine de surface nouvellement identifiée et purifiée à partir d'Hélicobacter ainsi que son usage à titre de vaccin. Cette protéine a la capacité de se lier à la lactoferrine d'origine humaine.

Description

"Récepteur lactoferrine d'Hélicobacter"
La présente invention concerne la prévention et le traitement des infections gastriques dues à la bactérie Helicobacter. Elle a pour objet une protéine de surface nouvellement identifiée et purifiée à partir d'Hélicobacter ainsi que son usage à titre de vaccin. Cette protéine a la capacité de se lier à la lactoferrine d'origine humaine.
Helicobacter pylori est une bactérie gram- négative retrouvée à la surface de la muqueuse gastrique chez l'homme. Cette bactérie est associée à un certain nombre de pathologies gastroduodénales dont elle serait, du moins pour certaines, l'agent pathogène responsable. Il s'agit en particulier des gastrites aiguës ou chroniques (inflammation de la muqueuse), des ulcères (destruction de la muqueuse), des dyspepsies et de certains cancers tel que 1 'adénocarcinome gastrique.
A cet égard, il est déjà apparu hautement souhaitable de mettre au point un vaccin pour prévenir et lutter contre les infections à Helicobacter.
Différents antigènes ont déjà été proposés comme agent vaccinal potentiel : il s'agit notamment de l'uréase (WO 90/4030), de la cytotoxine et de la protéine heat-shock (WO 93/18150) et des adhésines.
Néanmoins, on prévoit qu'un vaccin anti- Hélicobacter, pour atteindre un maximum d'efficacité, devra contenir plus d'un antigène. Il est donc nécessaire de poursuivre l'identification des protéines d'Hélicobacter susceptibles d'être employées à cet effet.
On a maintenant mis en évidence dans un extrait membranaire d'Hélicobacter, la présence d'une protéine capable de se lier à la lactoferrine humaine. De manière surprenante, cette protéine est constituée de deux sous- unités et peut être reconnue par des anticorps monoclonaux initialement dressés contre le récepteur transferrine de Neisseria meningitidis.
C'est pourquoi l'invention a pour objet :
(i) une protéine d'Hélicobacter sous forme substantiellement purifiée, ladite protéine ayant un poids moléculaire apparent d'environ 98 kD ou d'environ 70 kD, tel que défini après migration sur gel de SDS-PAGE à environ 10 % de polyacrylamide et susceptible d'être substantiellement purifiée à partir d'un extrait membranaire d'Hélicobacter par chromatographie d'affinité sur une colonne de lactoferrine ; ainsi
(ii) qu'une composition pharmaceutique destinée au traitement ou à la prévention d'une infection à Helicobacter qui comprend à titre de principe vaccinant, au moins une protéine selon l'invention.
Par "protéine de 98 ou 70 kD substantiellement purifiée", on entend une préparation de cette protéine dépourvue de la majeure partie des constituants cellulaires d'Hélicobacter. Bien évidemment, des contaminants mineurs ne sont pas exclus.
5.
Une protéine selon l'invention peut être obtenue à partir d'Hélicobacter ou être obtenue par voie recombinante par expression du fragment d'ADN correspondant, dans un système hétérologue, bactéries,
Jθ levures ou cellules de mammifères.
De manière avantageuse, une protéine selon l'invention est susceptible d'être obtenue à partir d'H. pylori.
15
Une composition selon l'invention peut être fabriquée de manière conventionnelle. En particulier, on associe une protéine selon l'invention avec un adjuvant, un diluant ou un support acceptable d'un point de vue
20 pharmaceutique. Une composition selon l'invention peut être administrée par n'importe quelle voie conventionnelle en usage dans le domaine des vaccins, en particulier par voie orale ou parentérale. L'administration peut avoir lieu en dose unique ou répétée une ou plusieurs fois après un 5 certain délai d'intervalle. Le dosage approprié varie en fonction de divers paramètres, par exemple, de l'individu traité ou du mode d'administration.
L'invention est illustrée ci-après, en se ° référant à la Figure 1 qui présente le profil électrophorétique sur gel de SDS-PAGE (polyacrylamide 10 %) d'une préparation éluée d'une colonne de Sépharose 4B- lactoferrine, après application d'un extrait membranaire d'H. pylori, tel que révélé au bleu de Coomassie (colonne A) et au nitrate d'argent (colonne B). Les étalons des poids moléculaires sont la phosphorylase B (94 kD), l'albumine bovine (67 kD), l'ovalbumine (43 kD), l'anhydrase carbonique (30 kD), l'inhibiteur de la trypsine isolé du soja ( soybean trypsin inhibitor) (20,1 kD) et 1 'alpha-lactalbumine (14,4 kD).
1D Exemple 1 Purification du récepteur de la lactoferrine à partir d'H. pylori.
1.1 Culture.
T5 A partir d'une souche d'H. pylori n" ATCC 43579
(disponible auprès de l'ATCC, 12301 Parklawn Drive, Rockville MD - U.S.A) conservée en glyeérol à - 70"C, on ensemence un flacon de 25 cm2 contenant un milieu biphasique. Le milieu biphasique comprend une phase solide 0 constituée de 10 ml de gélose Colombia (bioMérieux) additionnée de 6 % de sang de mouton frais et une phase liquide constituée de 3 ml de bouillon Trypticase soja (Difco) contenant 20 % de sérum de veau foetal. Les flacons sont placés dans un sac étanche dit "generbag" (BBL) et 5 incubés sous agitation rotative douce à 37 "C pendant 48 heures en condition de microaérophilie (8-10 % CO_, 5-7 % 0_ et 85-87 % N2 ) obtenu par le System Microaer (BBL).
Après 48 heures de culture, une sous-culture est 30 réalisée en ensemençant à partir de cette culture liquide, des boites de Pétri contenant un milieu solide gélose (gélose Colombia additionnée de 6 % de sang de mouton frais). A partir d'une culture obtenue dans un flacon de 25 cm2, on ensemence environ 50 boîtes de Pétri. Ces boîtes sont placées dans des jarres d'anaréobiose en conditions de microaérophilie obtenues par le système Anaérocult C (Merck). Les boîtes de Pétri sont ainsi incubées pendant 4 jours à 37*C.
Les nappes bactériennes sont récoltées par raclage en présence d'un faible volume de PBS (bioMérieux) et par centrifugation. Les germes sont ensuite lavés par du PBS dans le but d'éliminer les résidus de milieu de culture.
1.2 Purification.
Le culot bactérien lavé est mis en suspension dans de l'eau distillée et est soumis à une agitation vigoureuse. Cette suspension est centrifugée à 18 000 x g pendant 30 min. On rajoute au surnageant recueilli un certain volume de N-Lauroyl Sarkosine à 25 % (p/v) de façon que la concentration finale en Sarkosyl soit de 0,1 % (p/v).
La fraction est placée dans un boyau de dialyse (Spectrum, seuil de coupure 10 000 daltons) et dialysée contre 10 volumes du tampon Tris-HCl 50 mM pH 8,0 contenant NaCl 0,15M, EDTA lOmM, Sarkosyl 0,1 %.
En parallèle, on prépare une colonne de Sépharose 4B (Pharmacia) sur lequel a été immobilisée de la lactoferrine humaine (Sigma). Le greffage de la lactoferrine sur la résine de Sépharose 4B CNBr se fait selon les recommandations du fabricant. La densité de ligand est d'environ 5 mg de lactoferrine par ml de gel. Le mélange est incubé une nuit à +4*C sous agitation rotative. Le gel est conditionné dans une colonne de 10 ml; après décantation, le gel est lavé par environ 20 volumes de colonne de tampon A (Tris-HCl 50 mM pH 8,0 contenant EDTA 10 mM, Sarkosyl 0,1 %, PMSF lOOμM (phényl méthyl sulfonyl fluoride Sigma)) contenant du NaCl 0,15M, puis environ 6 5 volumes de colonne de tampon A contenant du NaCl 0,5M, enfin par environ 6 volumes de colonne de tampon A contenant du NaCl IM.
L'élution est réalisée en appliquant à la colonne 1Q le tampon Tris-HCl 50 mM pH 8,0 contenant EDTA 10 mM, Sarkosyl 0,05 %, PMSF 100 μM et un gradient de guanidine HCl de 0 à 2M.
Les fractions éluées dans la gamme de guanidine •15 de 0,75 à 2M sont regroupées. Cette préparation est dialysée contre le tampon Tris-HCl 50mM pH 8,0 et concentrée par évaporation rotative sous vide.
1.3 Analyse de la fraction purifiée.
20
La préparation obtenue après chromatographie d'affinité sur colonne de Sépharose 4B-lactoferrine humaine est analysée par électrophorèse sur gel de SDS-PAGE à 10 % d'acrylamide, selon la technique de Laemmli, Nature (1970),
25 227 : 680.
Après migration, le gel a été coloré au bleu de Coomassie. Cette coloration comprend plusieurs étapes : (1) étape de fixation : incubation du gel dans une solution de 30 méthanol (50 ml), acide acétique (25 ml), acide trichloroacétique (25 ml) et eau distillée (900 ml) ; (2) étape de coloration : incubation du gel dans un mélange de méthanol : acide acétique : eau (30:10:60) contenant du bleu de Coomassie R250 0,25% (p/v) ; (3) étape de décoloration dans le mélange méthanol : acide acétique : eau (30:10:60).
Tel que montré à la figure 1, colonne A, cette coloration révèle un certain nombre de bandes, aucune n'étant révélée aux alentours de 100 kD.
La préparation obtenue a été analysée par la méthode de coloration au nitrate d'argent.
Cette coloration s'effectue sur les protéines transférées préalablement sur nitrocellulose (Schleicher and Schuell BA 0,45), selon la méthode décrite par Kovarik et al, J. Folia Biologica (Praha) 1987, 33 : 253.
Tel que montré à la figure 1, colonne B, la révélation au nitrate d'argent a permis de mettre en évidence deux bandes supplémentaires, non révélées par la coloration au bleu de Coomassie. Néanmoins, parmi ces bandes, il n'était pas possible d'indiquer si l'une d'entre elles correspondait au récepteur lactoferrine.
Pour surmonter cette déficience, on a eu l'idée à tout hasard, de soumettre une préparation telle que précédemment obtenue à une révélation par immunoaffinité en utilisant des anticorps monoclonaux initialement dressés contre le récepteur transferrine de N. meningitidis. Pour ce faire, une préparation a été soumise à une électrophorèse sur gel de SDS-PAGE, puis transférée sur nitrocellulose.
Un gel de SDS-PAGE est préparé comme précédemment et, après électrophorèse, transféré sur nitrocellulose. La nitrocellulose est saturée dans un tampon bloquant (lait écrémé 1% (p/v), NaCl 0,9 % (p/v) dans Tris-HCl 50 mM pH 8), puis incubée dans une solution d'anticorps anti¬ récepteur de la transferrine de N. meningitidis (25 μg IgG/ml dans du tampon bloquant) pendant 1 heure à 37*C sous agitation, puis lavée 3 fois avec du tampon bloquant et enfin incubée avec un deuxième anticorps (anti-espèce du premier) conjugué à la péroxydase. La nitrocellulose est enfin révélée avec un subtrat précipitant de la péroxydase : le 4-chloro-l-naphtol en présence de H2O2.
De manière surprenante, deux bandes ont été ainsi révélées : l'une ayant un poids moléculaire apparent de 98 000 daltons, l'autre de 70 000 daltons. L'étude aux anticorps monoclonaux permet d'indiquer que ces deux bandes correspondent à deux sous-unités d'un même récepteur alors qu'il est connu que le récepteur lactoferrine de N. meningitidis est un récepteur simple chaîne (Schryvers & Morris, Infect. Immun. (1988) 56:1144).
Exemple 2 : Composition pharmaceutique destinée à une administration orale.
La protéine de 98 ou 70 kD susceptible d'être obtenue comme dans l'exemple 1 peut être encapsulée seule ou en présence d'autres protéines de H. pylori dans des capsules de gélatine afin de protéger l'antigène contre la dégradation par le suc gastrique ou bien administrée en présence de bicarbonate de sodium. De telles formulations ont déjà été utilisées pour des compositions pharmaceutiques (Black et al, Dev. Biol. Stand. (1983) 53). La protéine peut également être encapsulée dans des microsphères de PLGA (copolymères d'acide glycolique et acide lactique) selon le protocole décrit ailleurs (Eldridge et al, Curr. Top. Microbiol. Immunol. (1989) 146:59). La protéine peut également être incluse dans desliposomes préparés selon les méthodes conventionnelles largement décrites ("Liposomes: a practical approach, ed. RRC New, D. Rickwood & B.D. Hames, 1990, Oxford University 5- Press, ISBN 0-19-963077-1).
Indépendamment de la formulation, la quantité de protéine administrée à l'homme par voie orale est de l'ordre de 1 à 10 mg par prise, et l'on préconise au moins 10. 3 prises à intervalle de 4 semaines.
Exemple 3 : Composition pharmaceutique destinée à une administration parentérale.
15 La protéine de 98 ou 70 kD susceptible d'être obtenue comme dans l'exemple 1, est adsorbée sur gel d'"alumine de façon tout à fait conventionnelle. La protéine en solution à 1 mg/ml dans un tampon dont le pH est voisin de 6,5 est mise en contact pendant 1 heure avec de
20 l'hydroxyde d'aluminium à 10 mg/ml mesuré en Al+++. La composition finale de la préparation est la suivante : une protéine selon l'invention 50 μg/ml, Al+++ 250 μg/ml, merthiolate 1/1000, le tout en PBS.
25 Comme dans le cas de l'administration orale, 3 injections sont préconisées, chacune espacée de 4 semaines de la précédente.

Claims

REVENDICATIONS
1. Une protéine d'Hélicobacter sous forme substantiellement purifiée, ladite protéine ayant un poids moléculaire apparent d'environ 98 kD ou d'environ 70 kD, tel que défini après migration sur gel de SDS-PAGE à environ 10 % de polyacrylamide et susceptible d'être substantiellement purifiée à partir d'un extrait membranaire d'Hélicobacter par chromatographie d'affinité sur une colonne de lactoferrine.
2. Une protéine selon la revendication 1, susceptible d'être purifiée à partir d'un extrait membranaire d'H. pylori par chromatographie d'affinité sur une colonne de lactoferrine.
3. Une composition pharmaceutique destinée au traitement ou à la prévention d'une infection à Helicobacter qui comprend à titre de principe vaccinant une protéine selon la revendication 1 ou 2.
PCT/FR1995/001317 1995-10-09 1995-10-09 Recepteur lactoferrine d'helicobacter Ceased WO1997013784A1 (fr)

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US08/860,397 US6086893A (en) 1995-10-09 1995-10-09 Helicobacter lactoferrin receptor
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