WO1996034872A1

WO1996034872A1 - Derives iodes de monosaccharides utilisables comme produits radiopharmaceutiques

Info

Publication number: WO1996034872A1
Application number: PCT/FR1996/000655
Authority: WO
Inventors: Gilles Bignan; Catherine Guezzi; Christel Henry; Françoise KOUMANOV; Christophe Morin; Lionel Ogier; Laurent Mauclaire
Original assignee: CIS Bio International SA
Current assignee: CIS Bio International SA
Priority date: 1995-05-02
Filing date: 1996-04-30
Publication date: 1996-11-07
Anticipated expiration: 1997-11-02
Also published as: FR2733753B1; EP0824537A1; FR2733753A1

Abstract

L'invention concerne des dérivés iodés de monosaccharides utilisables comme produits radiopharmaceutiques pour déterminer l'importance du transport membranaire du glucose. Ces dérivés répondent à la formule (I) dans laquelle l'un au moins des R?1, R2 et R3¿, porte un groupe CH¿2?CH2I ou l'un au moins des R?4 et R6¿ représente (I) ou le groupe OCH¿2?CH2I.

Description

DERIVES IODES DE MONOSACCHARIDES UTILISABLES COMME PRODUITS RADIOPHARMACEUTIQUES DESCRIPTION

La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés iodés de monosaccharides utilisables comme produits radiopharmaceutiques, en particulier pour déterminer l'importance du transport membranaire d'un monosaccharide tel que le glucose.

Le glucose est un substrat énergétique pour la totalité des tissus de l'organisme et l'appréciation de sa captation cellulaire revêt une grande importance en médecine.

Ainsi, dans les tissus musculaires, les acides gras sont le substrat énergétique le plus utilisé dans les conditions d'oxygénation normales. Par contre, en cas d'ischémie, le glucose devient le substrat prédominant. Un territoire myocardique akinétique ayant une captation de glucose augmentée par rapport à celle des territoires avoisinants peut être qualifié de viable et ischémique. En principe la revascularisation d'un tel territoire devrait entraîner sa récupération fonctionnelle.

Dans le cerveau, la captation cellulaire du glucose est perturbée dans différentes conditions pathologiques : maladie d'Alzheimer, maladie de Parkinson, démences etc.

Dans les cellules tumorales, la captation du glucose est augmentée par rapport à celle du tissu sain environnant. Dans le diabète, l'appréciation de la captation cellulaire du glucose devrait permettre de mieux adapter les thérapeutiques.

Aussi, des produits radiopharmaceutiques permettant d'apprécier la captation cellulaire du glucose présentent un grand intérêt pour le diagnostic de toutes les pathologies liées à des perturbations du métabolisme glucidique, ces pathologies étant caractérisées par une variation du nombre de transporteurs du glucose et/ou une variation de sa captation.

De telles molécules peuvent être utilisées dans un champ d'application extrêmement vaste puisqu'il concerne la cancérologie, les maladies dégénératives cérébrales, l'épilepsie, le diabète, l'ischémie myocardique, les cardiomyopathies non ischemiques et enfin les myopathies. ^"

La seule molécule utilisée actuellement pour apprécier chez l'homme la captation cellulaire du glucose est le [¹⁸F] fluorodésoxyglucose (FDG), mais elle présente certains inconvénients. En effet, elle ne peut être utilisée qu'à proximité du cyclotron produisant le ¹⁸F qui est un radioélément de courte période (110 min.). De plus, ¹⁸F étant un émetteur de positons, la caméra nécessaire à sa détection est d'un coût très élevée ; de ce fait il existe très peu de centres possédant cet appareillage et le nombre de patients susceptibles d'être explorés est donc très limité.

Aussi, de nombreuses recherches ont été entreprises pour utiliser dans ce but d'autres molécules ou d'autres techniques d'appréciation de la captation cellulaire du glucose.

Le document US-A-5 342 926 décrit l'utilisation d'analogues de cytochalasine B marqués par un radionucleide, pour apprécier le transport du glucose au travers des membranes cellulaires. Le document W0-A-94/14477 décrit l'utilisation d'analogues de la phlorétine, qui sont des composés du type polyphénol marqués par un halogène, pour détecter et repérer les tissus ayant un métabolisme du glucose perturbé.

Pour l'appréciation de la captation cellulaire du glucose, l'emploi de dérivés du glucose marqués à l'iode radioactif serait particulièrement intéressant, car l'iode est un émetteur γ facilement disponible et compatible avec une faible modification des propriétés biologiques.

Toutefois, les tentatives effectuées jusqu'à présent pour l'obtention de tels dérivés du glucose susceptibles d'être utilisés comme produits radiopharmaceutiques ont échoué.

Ainsi, comme il est décrit dans J. Neuro Surg., vol. 44, juin 1976, p. 668-676, Wassenaar et al ont préparé et testé le méthyl-6-I-désoxy-D-glucoside et le 6-I-désoxy-D-glucose comme marqueur des tumeurs cérébrales chez la souris, et ont constaté que le contraste obtenu entre le cerveau et la tumeur n'était pas suffisant pour une application clinique. Plus récemment, Lutz et al dans European J.

Nucl. Med., 21 (B), 1994, p. 785 n° 243, ont décrit la préparation d'un dérivé de glucose constitué par le 2-iodo-2-désoxy-l, 5-anhydro-D-glucitol, mais les biodistributions de ce dérivé ne sont pas très élevées. La présente invention a précisément pour objet d'autres dérivés de monosaccharides, marqués à l'iode, qui permettent justement d'apprécier l'importance du transport membranaire d'un onosaccharide tel que le glucose. Selon l'invention, le dérivé iodé de monosaccharide répond à la formule :

dans laquelle - R¹ représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle, un groupe de formule -C(0)R⁷ avec R⁷ étant un groupe alkyle, ou un groupe de formule

- (CH)₂- (OCH₂CH₂)_mI avec m égal à 0 ou à 1 ;

- R² et R³ qui peuvent être identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupe de formule -C(0)R⁷ ou C(0)OR⁷ avec R⁷ étant un groupe alkyle, ou un groupe de formule

- (CH₂)₂- (OCH₂CH₂)_mI avec m égal à 0 ou à 1 ;

- R⁴ et R⁶ qui peuvent être identiques ou différents, représentent I, OH, un groupe alkyle, un groupe de formule OR⁷, -OC(0)R⁷, ou -OC(0)OR⁷ avec R⁷ étant un groupe alkyle, ou un groupe de formule -(OCH₂CH₂)_nI avec n égal à 1 ou à 2 ; l'un au moins des R¹, R², R³, R⁴ et R⁶ représentant I ou un groupe comportant I.

De préférence, l'un seulement des R¹, R², R³, R⁴ et R⁶ représente I ou un groupe comportant I.

Avantageusement, le monosaccharide est le glucose, et le dérivé répond à la formule :

dans laquelle R¹, R², R³, R⁴ et R⁶ ont les significations données ci-dessus.

Dans les formules I et II données ci-dessus, les groupes alkyle utilisés pour R¹, R^ et R⁷ peuvent être linéaires ou ramifiés, et ont de préférence 1 à 18 atomes de carbone.

A titre d'exemples de tels groupes, on peut citer les groupes méthyle, tertiobutyle. Dans le dérivé de monosaccharide de formule

(I), l'iode peut occuper différentes positions, et il est de préférence introduit sous la forme du groupe

(CH₂)2 (OCH2CH2)_n ¹/ ^{avec n é(}?^al à 0 ou à 1.

En effet, l'introduction de l'iode sous la forme du groupe β-iodoéthoxy est intéressante en raison de la stabilité élevée de ce groupe et de son faible encombrement stérique.

Les dérivés iodés de monosaccharides conformes à 1 ' invention peuvent être préparés par des procédés classiques, choisis en fonction de la position occupée par l'iode sur la molécule de monosaccharide.

De préférence, selon l'invention on utilise la méthode Helferich en partant du dérivé pentacétylé du monosaccharide, par exemple du glucose. Lorsque l'iode est introduit en position 4 sous la forme I, on peut partir d'un dérivé de galactose dans lequel l'hydroxyle en position 1 est protégé par un groupe tert-butyle, et les hydroxyles en positions 2, 3 et 6 sont protégés par le groupe silyle, benzoyle ou acétyle, introduire un groupe triflyle CF3-SO2 sur l'hydroxyle en position 4 du dérivé de galactose, puis réaliser une substitution nucléophile avec inversion de configuration par action de l'iodure de sodium. Lorsque l'iode est introduit en position 6 sous la forme I, on peut utiliser la technique décrite par Wassenaar et coll. dans J. Neurosurg, vol. 44, juin 1976, p. 668-676.

L'invention a également pour objet un produit radiopharmaceutique comprenant un dérivé iodé de monosaccharide répondant à l'une des formules I et II données ci-dessus, dans lequel l'iode est sous la forme d'iode radioactif en particulier de ¹²³i, 125 _ou ^•*-31j[, qui ont des périodes respectives de 13 h, 60 jours et 8,05 jours et des énergies adaptées à une utilisation en médecine nucléaire pour le diagnostic ou la thérapie.

De préférence, on utilise 123j_ q_U__ _{est un} émetteur gamma d'une période de treize heures avec une principale émission γ de 159,5 keV.

L'iode radioactif peut être introduit dans le dérivé iodé par des méthodes classiques, par exemple par échange isotopique, par substitution nucléophile, halogènation électrophile ou iodo métallation. De préférence, on utilise la technique d'échange isotopique, qui consiste à porter une solution d'iodure de sodium radioactif dans l'acétone contenant le dérivé iodé de formule I à une température de 100 à 130°C pendant environ 30 minutes, puis à refroidir la solution et à la purifier par passage sur une résine anionique afin d'éliminer les iodures et les espèces chargées négativement telles que I^~, I~3, IO~ et IO~3. Après évaporation sous vide à la température ambiante, on peut récupérer le dérivé iodé radioactif pur dans du sérum physiologique en vue de son utilisation comme produit radiopharmaceutique, notamment pour apprécier la captation cellulaire du glucose in vivo.

Dans ce cas, on administre le produit radiopharmaceutique à un patient en quantité suffisante pour sa détection ultérieure, puis après avoir attendu le temps nécessaire pour que le dérivé du glucose puisse atteindre les tissus à étudier, on observe la rétention de celui-ci au moyen d'une caméra gamma. Le produit radiopharmaceutique peut être sous forme de solution aqueuse, notamment de solution dans du sérum physiologique comprenant éventuellement d'autres additifs.

Les concentrations en produit et les doses administrées peuvent varier en fonction du mode d'administration, de l'âge, du poids et de l'état du patient. L'administration peut être effectuée par voie parentérale, par exemple par injection intraveineuse.

La dose administrée se situe généralement dans la gamme allant de 70 à 100 μCi par kg de poids corporel. L'examen au moyen de la caméra gamma est généralement effectué dès l'administration du produit radiopharmaceutique.

D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples suivants, donnés bien entendu à titre illustratif et non limitatif, en référence aux dessins annexés.

Les figures 1 et 2 sont des diagrammes illustrant les résultats d'étude in vivo chez le chien de ^' deux dérivés de glucose marqués à l'iode 123. Sur ces figures, les courbes 1, 2, 3 et 4 illustrent l'évolution de la radioactivité (en coups/min.mCi.pixel) en fonction du temps (en min.) dans le coeur, le foie, le bruit de fond et les poumons.

Exemple 1 : Préparation du 2,3, ,6-tétra-O-acétyl- -D- glucopyranoside de 2'iodoéthyle (composé 1) a) Préparation du 2, 3, 4, 6-tétra-0-acétyl- jθ-D-glucopyranoside de 2'bromoéthyle.

la lb

Au 1 , 2 , 3 , 4 , 6-penta-O-acétyl-β-D-glucose

(0,39g-l mmol) , on ajoute successivement du dichlorométhane anhydre (2 ml), du 2-bromo-éthanol

(0,15 g - 1,2 mmol), puis sous agitation, sous argon et à -20°C, de l'éthérate de trifluorure de bore en solution dans du dichlorométhane (1 ml) (0,36 g - 2,5 mmol), goutte à goutte pendant 15 min. Après 7 heures d'agitation à température ambiante, le mélange réactionnel est hydrolyse avec de la glace. On extrait la phase aqueuse avec du dichlorométhane (3 x 5 ml), on rassemble les phases organiques pour les laver avec une solution de NaHCθ3 à 5 %, puis les neutraliser à l'eau et les sécher. Après évaporation sous pression réduite, des cristaux de 2,3, , 6-tétra-O-acétyl-β-D- glucopyranoside de 2'-bromoéthyle sont obtenus. La recristallisation à froid dans de l'acétate d'éthyle et du pentane donne le 2,3,4, 6-tétra-O-acétyl-β-D- glucopyranoside de 2'-bromoéthyle pur (363 mg, 80 %°) . F = 115°C.

RMN lH, 200 MHz, (CDCI3) : 5,25-4,8 (m, 3H, H-4, H-3 et H-2) ; 4,5 (d, J = 7,8, H-l) ; 4,2-3,9 (m, 3H, H-6, H- 6' et -OCH₂CH₂Br) ; 3,8-3,55 (m, 2H, H-5 et -OCH₂CH₂Br) ; 3,2-3,05 (m, 2H, -OCH₂CH₂Br) ; 2,0-1,9 (m, 12H, - CHCH3) .

RMN ¹³C, 50MHz, (CDCI3) : 170,5-170,1-169,3 (CO) ; 100,8 (C-l) ; 72,5-71,9-70,9-68,1 (C-2, C-5, C-3 et C- 4) ; 69,7 (C-l') ; 61,7 (C-6) ; 29,8 (C-2*) ; 20,7- 20,6-20,4 (COÇH3) . b) Préparation du composé 1

Au 2,3,4, 6-tétra-O-acétyl-β-D- glucopyranoside de 2'-bromoéthyle (0,91 g - 2 mmol), 3^ obtenu en a), on ajoute de l'acétone (10 ml), de l'iodure de sodium (0,6 g - 4 mmol), puis on chauffe à 60°C sous agitation pendant une heure. Après avoir refroidi le mélange reactionnel dans de la glace, on sépare le sel de NaBr par filtration, on le lave à l'acétone et on récupère le filtrat que l'on évapore sous pression réduite pour donner le composé 1_ sous forme de précipité : ce dernier est repris par du dichlorométhane. Après séparation du sel de NaBr par filtration, on évapore le filtrat sous pression réduite pour donner le 2, 3, 4, 6, -tétra-O-acétyl-β-D- glucopyranoside de 2'iodoéthyle pur (0,5 g, 50 %) .

F = 97°C.

[α]"=-12,l°(c=l;CH₂Cl₂)

I.R. (film) : 1750 cm^-1 (CO)

RMN ¹H, 200 MHz, (CDCI3) : 5,2-4,8 (m, 3H, H-4, H-3 et

H-2) ; 4,5 (d, 1H, J = 7.8, H-l) ; 4,2-3,9 (m, 3H, H-6,

H-6' et -OCH₂CH₂I) ; 3,8-3,55 (m, 2H, H-5 et -OÇH₂CH₂I)

3,2-3,0 (m, 2H, -OCH₂CH₂ÇH I_) ; 2,05-1,9 (m, 12H, -

COCH3) .

RMN ¹³C, 50 MHz, (CDCI3) : 170,5-170,1-169,3 (-COCH3) ;

100,6 (C-l) ; 72,5-71,8-70,9-68,2 (C-5, C-4, C-3 et C-

2) ; 69,6 (C-l*) ; 61,7 (C-6) ; 20,8-20,7-20,5 5(-

COÇH3) ; 2,0 (C-2') .

Exemple 2 : Préparation du {3-D-glucopyranoside de 2 '- iodoéthyle (composé 2)

composé 1 composé 2

Au 2,3,4, 6,-tétra-O-acétyl-β-D- glucopyranoside de 2 'iodoéthyle (0,25 g - 0,55 mmol) obtenu dans l'exemple 1, on ajoute successivement du chloroforme (2 ml) et du méthanol (2 ml), puis sous agitation et à -20°C, du méthylate de sodium en petites quantités (0,108 g - 2 mmol) . Après agitation pendant 2h30, le mélange reactionnel est neutralisé par une solution aqueuse à 5 % d'acide sulfurique. Après filtration et lavage au méthanol, le filtrat est évaporé à sec pour donner l' iodoéthyle glucoside brut. Le résidu est ensuite purifié à l'aide d'une chromatographie sur gel de silice prélablement lavée au méthanol et séchée en utilisant le méthanol/dichlorométhane (5/96) comme éluant. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le β- D(glucopyranoside de 2 'iodoéthyle pur est obtenu (132 mg, 72 %) .

F = 1190°C

[α]"=-21,2°(c=1;acétone) RMN ¹U, 300MHz, (D₂0) : 4,62, (d, 1H, J =

7,14, H-l) ; 4,3-4,02 (2m, 2H, -OCH₂CH₂l) ; 4,0-3,75 (2m, 2H, H-6 et H-6') ; 3,65-3,55 (m7 3H, H-3, H-4 et

H-5) ; 3,5 (t, J = 7, 2H, -OCH₂CH₂I) ; 3,4 (m, 1H, H-

2) . RMN ¹³C, 75 MHz, (D₂0) : 104,1 (C-l) ;

77,83 (C-5) ; 77,6 (C-3) ; 71,80 (C-l') ; 69,4 (C-4) ;

62,53 (C-6) ; 2,7 (C-2*) .

Les attributions ¹H et ¹³C ont été réalisées au moyen de COSYDQF 2D et COSY ^--^C.

Exemple 3 : Préparation du 2,3,4,6, tétra-O-acétyl-jî-D- glycopyranoside de (2"-iodoéthoxy)-2'-éthyle (composé 3). a) Préparation du 2,3,4, 6-tétra-0-acétyl-j3- D-glycopyranoside de (2"-iodotosyloxyéthoxy)-2'-éthyle 3b.

RHCH ) OCCH ) <"^"»

3b la 3a

A une solution de 1,2,3, 4, 6-penta-0-acétyl- β-D-glucose (1,95 g - 5mmol) dans de l'acétonitrile anhydre (20 ml), l'on ajoute successivement sous argon le 2- (2'-tosyloxy éthoxy)- éthanol (1,3 g - 4,99 mmol), puis sous agitation et à -20°C, du tétrachlorure d'étain (3,26 g - 12,5 mmol) en solution dans du dichlorométhane (1,50 ml) goutte à goutte pendant 20 min. Après agitation 2 heures à température ambiante, on hydrolyse avec une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium à 5 % (20 ml) . On extrait la phase aqueuse avec du dichlorométhane (3 x 10 ml), on rassemble les phases organiques pour les laver à l'eau puis les sécher. Après évaporation sous pression réduite, le composé brut est obtenu. Ce dernier est alors purifié par chromatographie liquide moyenne performance CLMP sur gel de silice avec l'éther comme éluant, puis une seconde fois au moyen d'une colonne chromatographique sur gel de silice avec l'éther pour donner 3b pur sous forme d'huile (0,7 g,

24 %) .

[a ¹ =- 12, 6° (c = 0,9;CH₂ Cl₂)

I.R. (film) : 1750 cm^-1 (CO) ; 1580 cπT¹ (Ar)

RMN ¹H, 200MHz, (CDCI3) : 7,6 et 7,2

(système AB, 4H, J_j^≈lO, H Ar) ; 5,1-5,0 (m, 1H, H-3) ;

4,9-4,8 (m, 1H, H-2) ; 4,5 (d, 1H, H = 7,8, H-l) ; 4,2-

3,9 (m, 4H, H-6 et H-6', -CH₂OTs) ; 3,8-3,7 (M, 1H, H- 5) ; 3,7-3,4 (M, 6H, OCH₂CH₂~ÔCH₂_) ; 2,3 (s, 3H, H3C-

Ar) ; 2,02-1,96,-1,94 ^'(4s, 12^~H, COCH3) .

RMN ¹³C, 50MHz, (CDCI3) ~ 170,4-170,0-169,2

(CO) ; 144,7 (C ipso) ; 132,0 (C para) ; 129,7 (C ortho) ; 127,7 (C meta) ; 100,5 (C-l) ; 72,6-71,5-71,0- 70,1 (C-2, C-3, C-4, C-5) ; 69,0-68,8-68,5-68,1 (C-l*,

C-2*, C-3*, C-4') ; 61,7 (C-6) ; 21,4-20,5-20,4 (ÇH₃-Ar et CH3CO) .

SM (D/CI ; NH₃-isobutane) : 608 (M + NH₄) ⁺ (100) ; 331 (590-O(CH₂ ⁾ ₂O(CH₂)₂OTs)⁺ ; 271 (331-AcOH)+ ; 211 (271-AcOH)⁺ ;169 (211-ÇH₂CO)⁺. b) Préparation du composé 3.

R=-<CH₂)₂θ(CH₂) OTs R= CH₂)₂θ(CH₂)₂I

3b composé 3

Au dérivé 3b (0,5g-0,85 mmol) , en solution dans dans de l'acétone (30 ml), l'on ajoute de l'iodure de sodium (0,63 g - 4,2 mmol) puis on chauffe à 60°C sous agitation durant une nuit. Après refroidissement du mélange reactionnel à température ambiante, on sépare les sels obtenus par filtration, les lave à l'acétone et récupère le filtrat que l'on évapore sous pression résuite pour donner un précipité du composé 3_. Ce dernier est alors purifié par CLMP sur gel de silice avec le méthanol/dichlorométhane (5/95) comme éluant puis purifié une deuxième fois au moyen d'une chromatographie sur colonne de gel de silice avec le méthanol/dichlorométhane (2/98) comme éluant pour donner le composé 3_ pur (0,436 g, 94 %) . F = 53°C [αj⁵ = - 17,9°(c= l;CH₂Cl₂) I.R. (film) : 1750 cm^-1 (CO)

RMH -T-H, 200MHz, (CDCI3) : 5,2-5,1 (m, 1H, H-4) ; 5,1-5,0 (m, 1H, H-3) ; 5,0-4,9 (m, 1H, H-2) ; 4,6 (d, 1H, J = 7,8, H-l) ; 4,3-4,0 (M, 2H, H-6 et H- 6') ; 4,0-3,8 (M, 1H, H-5) ; 3,8-3,55 (M, 6H, - OCH₂CH₂OCH₂CH₂) ; 3,2(t,J=6,7,2H,-CH₂I) ; . 2,02-2,0- 1,95-1,90 74 s, 12 H, -COCH3) .

RMN ¹³C, 50MHz, (CDCI3) : 170,5-170,0- 169,3-169,2 (CO) ; 100,6 (C-l) ; 72,6-71,7-71,1-68,2 (C-2, C-3, C-4, C-5); 71,8-68,8-68,25 (C-l', C-2', C- 3') ; 61,7 (C-6) ; 20,6-20,4 (H3ÇCO-) ; 2,8 (-ÇH₂I) . Analyse élémentaire : calculée C (39,57), H, 4,98 ; I (23,22), 0(32,21)

Obtenue C (39,86), H (5,07); I (22,95), O (32,00) Exemple 4 : Préparation du fi-D-glucopyranoside de (2^π- iodoéthoxy) -2 ' -éthyle (composé 4 )

R=-CH ₂ ) ₂ 0 (CH ₂ ) ₂ L R- CH ₂)₂θ(CH ₂)₂I

composé 3 composé 4

Au composé 3_ de l'exemple 3 (105 mg - 0,20 mmol), on ajoute successivement du chloroforme (3 ml) et du méthanol (3 ml), puis sous agitation et à -20°C, du méthylate de sodium (42 mg - 0,78 mmol). Après agitation 45 min à -20°C, puis 5 heures à température ambiante, le mélange reactionnel est neutralisé par une solution aqueuse à 5 % d'acide sulfurique. Après filration et lavage au méthanol du précipité, le filtrat est évaporé à sec pour donner le composé _ brut. Le résidu est ensuite purifié à l'aide d'une chromatographie sur gel de silice, préalablement lavé au méthanol et séché, en utilisant le méthanol/dichlorométhane (25/75) comme éluant. Après évaporation sous pression réduite, le composé _4 pur est obtenu (68 mg, 90 %) . F = 94°C

RMN ^λE, 200MHz, (CD3OD) : 4,25 (d, 1H, J = 7,1, H-l) ; 4,0-3,5 (M, 6H, H-6, H-6*, H-5, H-4, H-3, H-2) ; 3,4-3,0 (M, 8H, -OCH₂CH₂OCH₂CH₂I) . RMN ¹³C, 50MHz, (CD3OD) :104,3 (C-l) ; 77,8-74,9-71,5 (C-2, C-3,^' C-4, C-5) ; 72,9-71,0-69,6 (OCH₂CH₂OCH₂) ; 62,6 (C-6) ; 3,1 (-CH₂I) . Analyse élémentaire : Calculée C(31,76), H(5,06), 1(33,56)

Obtenue C(32,54), H(4,90), 1(32,39) Exemple 5 : Préparation du 3-0-(2'-iodoéthyl)-α et β-D- glucopyranoses (composé 5) a) Préparation du 1,2,5, 6-diisopropylidène 3-0-(2'-hydroxyéthyl)-α-D-glucofuranose

R-CH ₂Cθ₂ e R=-CH ₂ CH₂ 0H

5a 5b

A une solution d'éther anhydre, contenant du LiAlH (1,44 g - 38,0 mmol), est ajouté au goutte à goutte, sous argon, sous agitation et à 4°C, le

1,2:5, 6-di-0-isopropylidène-3-0- (acetatge de méthyle)-α

-D-glucofuranose (5,0 g - 15,06 mmol) en 15 min. Après avoir agité 30 min à 4°C et 60 min à température ambiante, l'excès d'hydrure est éliminé avec de l'acétate d'éthyle, puis de l'eau (l'addition d'eau doit être stoppée avant la formation de la phase aqueuse) . La filtration du réside obtenu sur célite et

1'évaporation sous pression réduite du solvant, donne 5b pur (4,0 g - 87 %) sous forme d'huile incolore.

[α]"=-42,5°(c=l,12;CH₂Cl₂)

I.R. (film) : 3500 cm^-1 (OH) RMN 1H, 200MHz, (CDCI3) : 5,95 (d, 1H, J_1/2 = 3.7, H-l) ; 4,5 (d, 1H, J_1/2 = 3.7, H-2) ; 4,35-4,2 (m, 1H, H5) ; 4,15-3,45 (2 M, 9H, H-3, H-4, H-6 et H- 6', -OCH₂CH₂OH) ; 1,35-1,30-1,20-1,15 (4 s, 12H, - C⁽CH3⁾ ₂ ⁾.^~

Le proton échangeable n'est pas visible sur le spectre. RMN ¹³C, 50MHz, (CDCI3) : 111,9-109,3 (-Ç(CH₃)₂) ; 105,6 (C-l) ; 82,6-82,2-81,2 (C-2, C-3, C- 4) ; 81,2 (C4) ; 72,8 (C-5) ; 71,5 (C-l') ; 67,7 (C-6) ; 60,9 (C-2') ; 26,8-26,7-26,1-25,0(-C(CH3)₂) . b) Préparation du 1,2:5, 6-diisopropylidène- 3-0-2'-iodoéthyl)-α-D-glucofuranose 5c

=-CH ₂ CH ₂ θH R-CH ₂ CH ₂ I

5b 5c

Au composé 5b obtenu en a) (900 mg - 2,96 mmol) en solution dans du toluène anhydre (80ml), on ajoute successivement sous argon et sous agitation, de la triphénylphosphine (1,18 g - 4,5 mmol) et du triiodoimidazole (1,0 g - 2,24 mmol). Après 3 heures d'agitation du mélange reactionnel à 120°C, on ajoute de la triphénylphoshine (0,78 g - 3 mmol) et du triiodoimidazole (0,66 g - 1,5 mmol). Après 90 minutes d'agitation à 120°C, le mélange reactionnel est refroidi et hydrolyse avec une solution aqueuse d'hydrogénosulfate de sodium saturée (80 ml); après 5 minutes d'agitation, de l'iode est ajouté jusqu'à obtention d'une coloration brune de la phase organique. Après 10 minutes d'agitation, l'excès d'iode est éliminé en ajoutant une solution aqueuse de thiosulfate de sodium saturée. La phase organique est ensuite diluée dans du toluène, extraite à l'eau (3 x 40 ml) puis séchée. Après évaporation sous pression réduite du toluène, le composé 5_c brut est obtenu. Il est alors purifié au moyen d'une chromatographie sur colonne de gel de silice avec le méthanol/dichlorométhane (2/98) comme éluant pour donner le composé 5_c pur (1,08 g, 88 %), sous forme d'huile dans un premier temps, puis sous forme cristalline après 3 mois. F = 31-33°C [α]"=-14,4°(c=l,125;CH₂Cl₂)

RMN ¹R, 200MHz, (CDC1₃) : 5,85 (d, 1H, J_1/2 = 4.5, H-l) ; 4,55 (d, 1H, J_1/2 = 4.5, H-2) ; 4,4-4,2 (M, lH,H-5) ; 4,15-3,75 (M, 6H, H-3, H-4, H-5, H-6 et H-6',

-OCH₂CH₂I) ; 3,3-1 (m, 2H, -OCH₂ÇH₂I) ; 1,5-1,0 (4 s,

RMN ¹³C, 50MHz, (CDCI3) : 111,9-109,0 (Ç(CH₃)₂) ; 105,2 (C-l) ; 82,7-82,3-81,1 (C-2, C-3, C- 4) ; 72,3 (C-5) ; 71,2 (C-l') ; 67,3 (C-6) ; 26,8-26,2- 25,4(-C(CH₃)₂) ; 2,6 (C2') . Analyse élémentaire :

Calculée C (40,59), H (5,60), I (30,63); O (23,18)

Obtenue C(40,75), H (5,48), I (30,57), 0(23,20)

c) Préparation du composé 5.

R=-CH CH I R=-CH.CH„I

2 2 •' •*

^5c composé 5

Au composé 5_c obtenu en b) (600 mg - 1,45 mmol) en solution dans un mélange THF-eau (1/1-lOml) , on ajoute de la résine Dowex 50 W x 8,50-100 mesh (11,6 g - 67,6 méq) et l'on agite à 60°C durant 8 heures. Après avoir filtré la résine et l'avoir lavée abondamment à l'eau et au tétrahydrofuranne (THF), le THF est éliminé sous pression réduite, puis la phase aqueuse est neutralisée au moyen d'une solution de soude (0, 05M) , extraite au dichlorométhane (3 x 20 ml) . L'évaporation de la phase aqueuse sous pression réduite donne le composé 5_ brut. Il est ensuite purifié au moyen d'une chromatographie sur colonne de gel de silice, préalablement lavée au méthanol et séchée, avec le méthanol/dichlorométhane (25/75) comme éluant pour donner le mélange d'anomères _5 purs qui cristallise (420 mg, 87 %) . F = 111-113°C [af_⁵ =+27,2°(après 60minutes)et+32,6°(après 4 heures)(c=0,5.H₂θ)

RMN ¹H, 200MHz, (D₂0) : 5,25 (s large, 1H, H-lα) ; 4,70 (d, J_1/2 = 7.4, 1H, H-lβ) ; 4,1 (t, J = 6,3, -OCH₂CH₂I) ; 4,0-3,25 (M, 20H, H-2, H-3, H-4, H-5, H-6 et H-6\ -0CH₂CH₂I) . RMN ¹³C, 50MHz, (D₂0) : 95,8 (C-lβ) ; 92,0 (C-lα) ; 84,5-81, 9-75,75-73,65-73,4-73,3-71,4-71,05- 69,1 (C-2,C-3,C-4,C-5 «x et β) , C-l*) ; 60,6 et 60,4 (C-6) ; 3,62 (C-2') . Analyse élémentaire :

Calculée C (28,76), H (4,53), 1(37,98), O (28,73)

Obtenue C (29,10), H (4,60), I (38,52), O (28,94) .

Exemple 6 ; Préparation du 4-désoxy-4-iodo-α et {î-D- glucopyranoses (composé 6) a) Préparation du 2,3,-6-tri-O-benzoyl-α-D- galactopyranoside de tert-butyle 6b

6a 6b

A l'α-D-galactopyranoside de tert-butyle _6a (413 mg- 1,75 mmol) en solution dans de la • pyridine anhydre (12,8 ml), sous argon, sous agitation et à -20°C, l'on ajoute du chlorure de benzolyle (0,67 ml - 5,78 mmol-3,3 équivalents) goutte à goutte en 20 minutes.

Après agitation sous argon, 18 heures à - 20°C, 8 heures à 0°C et 22 heures à température ambiante, la pyridine est évaporée sous pression réduite, sans chauffer. Le résidu obtenu est repris dans du dichlorométhane (30 ml) . La phase obtenue est lavée successivement avec une solution aqueuse froide d'acide chlorhydrique 3M (15 ml), une solution aqueuse d'hydrogènocarbonate de sodium saturée (15 ml) et de l'eau (15 ml). Après séchage de la phase organique sur sulfate anhydre et évaporation sous pression réduite, le composé 6b brut est obtenu. La purification par chromatographie sur colonne de gel de silice avec l'éluant acétate d'éthyle/hexane (20/80) donne le composé _6b pur (730 mg - 76 %), sous forme de solide amorphe.

RMN ¹K, 300MHz, (C₆D₆) : 8,2-8,0 (6H, M, H o benzoyles) ; 7,2-6/8 (9H, M, H m et p benzoyles) ; 6,05-5,97 (dd, 1H, J_3/ =2,2, J_3/2=10.7, H-3) 5, 97-5, 90 (dd, 1H, Jι,₂=3,l, J^3=10,7, H-2) ; 5,66 (d, 1H, J = 3.1, H-l) ; 4,7-4,55 (m, 2H, H-6 et H-6') ; 4,5-4,4 (M, 1H, H-5); 4,2-4,05 (s large, 1H, H-4) ; 2,1 (s large, 1H, -OH) ; 1,05 (s, 9H, -OC(CH₃)₃).

RMN ¹³C, 75MHz, (CDC1₃) : 166,4-166,1-165,8 (-CO) ; 133,2-133,0 (-C ipso benzoyles) ; 129,7-129,6- 129,4-128,3 (-C o, m et p benzoyles) : 90,9 (C-l) ; 75,6 (-ÇJCH₃)₃) , 71,05-69,1-68,2-67,5 (C-2, C-3, C-4 et.C-5) ; 63,7 (C-6) ; 28,3 (-C-(ÇH₃)₃). b) Préparation du 2,-3,-6-tri-0-benzoyl-4- O-trifluoro-méthanesulfonyl-α-D-galactopryranoside de tert-butyle 6c

6b 6c

Au dérivé 6b obtenu en a) (188 mg - 0,34 mmol), en solution dans de la pyridine anhydre (3,8 ml), est ajouté, sous agitation, sous argon et à -10°C, de l'anhydre triflurométhane sulfonique (141μl-0,84 mmol - 2,45 équivalents), goutte "à goutte en 5 minutes. Après avoir agité sous argon ,60 minutes à 0°C et 45 minutes à température ambiante, le mélange reactionnel est hydrolyse par addition d'un mélange eau-glace (12 ml) . La phase aqueμse est extraite avec du dichlorométhane (5 x 10 ml) . La phase organique est ensuite reprise pour être séchée et évaporée sous pression réduite pour donner le composé 6c brut.

La purification du brut ainsi obtenu par chromatographie sur colonne de gel de silice avec l'acétate d'éthyle/hexane (20/80) comme éluant, donne le composé 6c pur (143 mg - 61 %) . F = 109-111°C [αr]^=+102,6°(c=l;CH₂Cl₂)

RMN iH, 200MHz, (C₆D₆) : 8,25-7,95 (M, 6H, H o benzoyles) ; 7,1-6,75 (M, 9H, H m, p,benzoyles) ; 6,2 (dd, 1H, J₃,₄ = 2.9, J_{3 2} = 10.8, H-3) ; 5,8 (dd, 1H, 2,l = ³-⁷' J2,3 = ¹⁰'⁸' ^H_2^{) ;} 5,6 ⁽d, 1H, J = 3.7, H-

1);5,5 (d, 1H, J = 2.7, H-4) ; 4,7 (dd, partie A d'un

ABM..., 1H, J = 11.03, H-6) ; 4,4 (m, 1H, H-5) ; 4,2

(dd, partie B d'un ABM..., 1H, J = 11.05, H-6') ; 0,9 (s, 9H, C-(CH₃)₃) .

RMN ¹³C, 50MHz, (C₆D₆) : 165,8 (-CO) ; 133,7-133,4-133,3 (-C ipso benzoyles) ; 130,4-130,0- 129,9-129-128,7 (-Co, m et p benzoyles) ; 91,3 (C-l) ; 84,3 (C-(CH₃)₃) ; 76,3-69,2-68,0-66,2 (C-2, C-3, C-4, et C-5) ; 62,6 (C-6) ; 28,2 (C-(C_H₃)₃).

RMN ¹⁹F, 188MHz, (CDC1₃) : - 74,8 (- OS0₂CF₃) . c) Préparation du 4-désoxy-4-iodo-2,-3,-6- tri-O-benzoyl-α-D-glucopyranoside de tert-butyle 6d

6c 6à

Au dérivé __ c (62,5 mg - 0,092 mmol), est additionné de l'iodure de sodium (16,6 mg - 0,11 mmol - 1,2 équivalent) en solution dans de l'acétone (8ml). Après 16 heures d'agitation à 50°C, le solvant est évaporé sous pression réduite pour donner •od brut. Le résidu est ènsuie purifié sur colonne chromatographique sur gel de silice avec le dichlorométhane comme éluant et donne _6d pur (53 mg - 88 %) F = 114-115°C [α]" = + 93,2°(c = 0,5; CH₂C1₂)

RMN ¹H, 300MHz, (CζO₆) : 8,25-8,1 (M, 6H, H o benzoyles) ; 7,2-6,85 (M, 9H, H m et p benzoyles) ;

6,5 (t apparent, 1H, H, J = 10.5, H-3) ; 5,6 (d, 1H, J

= 3.4, H-l) ; 5,2 (dd, 1H, J_2/1 = 3.5, J_2/3 = 9.8, H- 2); 4,9 (m, 1H, H-6) ; 4,7 (M, 2H, H-5 et H-6') ; 4,05

(t apparent, 1H, J = 10.9, H-4) ; 0,95 (s, 9H,-

C(CH₃)₃).

RMN ¹³C, 75 MHz, (C₆D₆) : 165,9-165,4 (-CO)

; 133,3-133,1-133 (-C ipso benzoyles) ; 130,6-130- 129,8-128,6 (-C O, m et p benzoyles) ; 91,2 (C-l) ;

76,1 (-C(CH₃)₃) ; 73,6-73,4-70,9 (C-2, C-3 et C-5) ;

66,1 (C-6) ; 28,2 (-C(CH₃)₃) ; 25,5 (C-4). SM (D/IC ; NH₃-isobutane) : 676 (M+NH4)⁺ 658 (M)+; 585 (M-OtBu)⁺ ; 463 (585-HOCOC₆H₅)⁺ ; 341 (463-HOCOC₆H₅)+ ;336 (463-1)⁺ ; 187(314-1)+ ; 122(HOCOC₆H₅)⁺ ;105(122-OH)⁺(100) . Analyse élémentaire :

Calculée C(56,54) ; H(4,75) ; I (19,27) ; O (19,44)

Obtenue C (56,56) ; H (4,56) ; I (19,41) ; O (19,18) d) Préparation du 4-désoxy-4-iodo-α-D-glucopyranoside de tert-butyle 6e

6d 6e

Au composé foi (15 mg - 0,023 mmol) en solution dans du toluène (250μl) et du méthanol (250μl) anhydres, est ajouté sous argon, sous agitation et à température ambiante, une solution fraîchement préparée de méthylate de sodium dans du méthanol anhydre (1M- 5μl) . Après trois jours d'agitation sous argon et à l'abri de la lumière, le mélange reactionnel est neutralisé au moyen d'une résine cationique (Amberlite IR (+)120). Le mélange est ensuite filtré et dilué dans de l'eau (4ml). L'extraction de la phase aqueuse avec du toluène (3 x 4 ml) , donne, après évaporation de la phase aqueuse _6e brut. La purification sur plaque chromatographique sur gel de silice avec l'éthanol/dichlorométhane (10/90) comme éluant donne •Se pur (3,2 mg - 40 %) . [α]₀ = + 1, 3° (c = 0, 3 ; MeOH)

RMN ¹H, 300 MHz, (D₂0) : 5,35 (d, 1H, J = 3.8, H-l) ; 4,4-4,3 (M, 1H, H-5) ; 4,1-3,8 (M, 4H, H-3, H-4, H- 6 et H-6') ; 3,6 (dd, 1H, J_1/2 = 3,8, J₂,₃ = 9,3, H-2) ; 1,4 (s, 9H, -C(CH3_)₃) .

RMN¹³C, 75MHz, (D₂0) : 92, 7 (C-l) ;

74, 0-72, 2-72,0 (C-2, C-3 et C-5) ; 62,9(C-6) ; 31, 4 (C-4) ; 27,5(-C(ÇH₃)₃) .

SM (D/IC ; NH₃-isobutane) : 364

(M+NH₄) ⁺ (100) ; 347, (MH) ⁺ ; 346 (M) ⁺ ; 329 (M-OH) ⁺ ;

290 (MH->tBu)⁺ ;273 (364-OtBu)⁺ ; 255 (273-H20)⁺ ; 236

(364-HD+ ; 145 (273-HD+ ; 127 (I ou 255-HI ou 145-

H₂0)⁺. e) Préparation du composé 6

Au dérivé 6e (7 mg 0,02 mmol), en solution dans de l'eau distillée (2ml), est ajouté de l'Amberlite IR(+)120 (36 mg-8 équivalents) .Après une nuit d'agitation à reflux, le mélange reactionnel est refroidi. Il est ensuite filtré ; après lavage abondant de la résine à l'eau, le filtrat est évaporé à sec, sous pression réduite, sans chauffer, pour donner le composé •£ pur (4,6mg - 78 %), sous forme incolore.

[a] =-3°(après10minutes)et-ll,6°(après70minutes)(c=0,3.MeOH)

RMN ¹E, 500MHz, (D₂0) attributions effectuées à l'aide de TOCSY 1D, GHMQC. 1) Anomère α : 5,28 (d, 1H, J = 3.68, H-l) ; 4,24-4,20 (M, 1H, H-5) ; 4,00-3,98 (m, 2H, H-6 et H-6¹) ; 3,94- 3,92 (m, 1H, H-3) ; 3,88-3,85 (M, 1H, H-4) ; 3,53 (dd, 1H, J_1/2 = 3,68 et J_2/3 = 9.2, H-2) . 2) Anomère β : 4,67 (d, 1H, J = 7,95, H-l) ; 4,11-4,08 (m, 1H, H-6) ; 3,96-3,93 (m, 1H, H-6') ; 3,90-3,85 (M, 2H, H-4^"et H-5) ; 3,74 .(dd, 1H, J = 9,14 et J = 10.34, H-3) ; 3,23 (t apparent, 1H, J = 8,0 et J = 9.1, H-2) . RMN ¹³C, 125MHz, (D₂0) : 1) Anomère α : 92,2 (C-l) ; 73,71 (C-3) ; 72,70 (C-5) ; 72/1 (C-2) .

2) Anomère β : 95,9 (C-l) ; 77,2 (C-3) ; 76,8 (C-5) ; 75,15 (C-2) .

Les carbones C-4 et C-6, correspondant respectivement aux déplacements 30,3-30,9 (C-4) et 63,1-63,05 (C-6), n'ont pas été attribués pour chaque anomère.

SM (D/IC ; NH₃-isobutane) : 308 (M+NH )+ ; 290(M)⁺;273 (M-OH)⁺, 272 (M-H₂0) ⁺ ; 254 (272-H₂0) ⁺ ; 163 (29@-I) + ; 145 (163-H₂0)⁺ ; 127 (I ou 254-1)+ ; 109 (127-H₂0)+.

Exemple 7 : Préparation du 4-désoxy-4-iodo-l,-2,-3,-6- tétra-O-acétyl α et j3 -D-glucopyranosides (composé 7)

composé 6 composé 7

Au composé _5_ (2,3 mg - 7,9 μmol) , en solution dans de la pyridine anhydre (200μl) , on ajoute successivement sous argon, sous agitation et à -20°C, de l'anhydride acétique (16μl-0, 17mmol-21 équivalents) . Après un jour d'agitation à température ambiante, le mélange reactionnel est hydrolyse (0,5 ml d'eau) . On extrait alors la phase aqueuse au dichlorométhane (4fois 1ml), on rassemble les phases organiques pour les laver à l'eau puis les sécher. Après évaporation sous pression réduite, le composé 1_ est obtenu. Il est alors purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice avec le méthanol/dichlorométhane (2/98) comme éluant pour donner le composé 1_ pur (3 mg-82%), sous forme incolore.

RMN ¹H, 300MHz, (CDCI3) :

1) Anomère g: 6,35 (d, 1H, J = 3.4, H-l) ; 5,35-5,3 (m, 1H, H-3) ; 5,0-4,95 (m, 1H, H-2) ; 4,6-4,4 (M, 2H, H-6 et H-6*) ; 4,1-3,95 (M, 1H, H-4) .

2) Anomère β: 5,7 (d, 1H, J = 8.6, H-l) ; 5,6-5,5 (t apparent, 1H, J = 10.4, H-3) ; 5,0-4,95 (m, 1H, H-2) ; 4,6-4,4 (M, 2H, H-6 et H-6') ; 4,1-3,95 (M, 1H, H-4) . Les deux hydrogènes H-5 (4,3-4,2 (M) et 4,1-3,95 (M) ainsi que les singulets à 2,17-2,14-2,08-1,99-1,98 (COCH3) , n'ont pas été attribués pour chaque anomère.

Exemple 8 : Préparation du 3-0-(2 '-iodoéthyl)

1 ,2 , , 6-tétra-O-acétyl-g et {j-D-glucopyrano s i de (composé 8)

R=-CH ₂ CH₂ I

composé 5 composé 8 Au composé 5_ (63 mg-0,19 mmmol), en solution dans du dichlorométhane anhydre (6 ml) et de la pyridine (1 ml) , on ajoute successivement sous argon, sous agitation et à 0°C, un cristal de

4-diméthylaminopyridine et de l'anhydride acétique

(250 μl)-2,15 mmmol) au goutte à goutte. Après trois jours d'agitation à température ambiante, le mélange reactionnel est hydrolyse avec de l'eau (2 ml) . On extrait alors la phase aqueuse au dichlorométhane (3x2 ml) , on rassemble les^" phases organiques pour les laver à l'eau puis les sécher. Après évaporation sous pression réduite, les deux anomères bruts du composé _8 sont obtenus. Ils sont alors purifiés au moyen d'une chromatographie sur colonne de gel de silice avec le méthanol/dichlorométhane (1/99) comme éluant pour donner les composés 8_ purs (70 mg, 74 % ) .

RMN¹^ 300MHz, (CDCI3) : attribution effectuées à l'aide de TOCSY 2D-COSYDQF2D-COSY ¹H-¹³C 1) Anomère β : 5,5 (d, 1H, Jι^₂=8,H-l) ;

5,1-5,0 (M,2H, H-4 et H-2) ; 4, 2-4, 0 (M,2H, H-6 et H-6') ; 3, 9-3, 75 (M, 2H, -OCH₂CH₂I) ; 3,75-3,65 (M, 1H, H-5) ; 3,6(t, 1H, J_{2/ 3}=J_{3/ 4}=10,H-3) ; 3,2 (quadruplet apparent, 2H, J=7, 3-OCH₂CH₂D . 2) Anomère g : 6,2 (d, J_{1/ 2}=4,H-1) ; 5,1-5,0

(m,lH, H-4); 5,0-4,9 (m, lH,H-2) ; 4,2-4,0 (M,2H,H-6 et H-6') ; 4,0-3,9 (M, 4H, H-5, H-3 et -OCH₂CH₂I) ; 3,2 (quadruplet apparent, J=7, 3, -OCH₂CH₂I) .

Les 8 singulets (COCH3) à 2,11-2,07-2,06-2,05 (2 pics) -2,03-2,025 et 2,02 n'ont pas été attribués spécifiquement pour chaque anomère. RMN¹³C, 75MHz, (CDCI3) :

1) Anomère β : 91,8 (C-l) ; 80,25 (C-3) ; 72,8 (C-5) ; 71,1 (C-2); 61,55 (C-6) . 2) Anomèe α : 89,2 (C-l); 77,1 (C-3) ; 71,1 (C-2) ; 70,05 (C-5); 61,55 (C6) .

Les résonances suivantes n'ont pas été attribuées spécifiquement pour chaque anomère : 170,6-169,4-169, 1-168, 9-168, 6 (CO) , 73,0 et 72,3(-OCH₂CH₂I), 68,7 et 68, 6 (C-4), 20,9-20,7-20,6(-COCH₃) , 2,3 et 2, 05 (-OCH₂CH₂I) .

Analyse élémentaire :

Calculée C(38,26), H (4,62)

Obtenue C(38,49), H(4,91) Exemple 9 : Préparation du 2-Q-

(2 ' -iodoéthyl) -1 ,-3,-4, -6-tétra-O-acétyl-g et β -D-glucopyranoside (composé 9) a) préparation du

2-Q-(2'-hydroxyéthyl)-l,-3,-4,-6-tétra-0-acétyl-g et β -D-glucopyranoside (composé 9b)

9a 9b

Le mélange de

2-0-allyl,-l,-3,-4,-6-tétra-0-acétyl-α et β -D-glucopyranose (25 mg-0,064 mmol) en solution dans du dichlorométhane anhydre (7 ml) et du méthanol anhydre (2 -ml), est placé sous argon, sous agitation et à -78°C ; puis, on fait passer un courant d'ozone, "bulle à bulle", sous agitation à -78°C pendant 30 minutes.

Après persistance d'une coloration bleue durant vingt minutes, l'excès d'ozone est éliminé par un courant d'oxygène. Puis, on fait passer un courant d'argon. Du sulfure de diméthyle (600μl-8,18 mmol) est additionné à -90°C goutte à goutte. On enlève le bain réfrigérant. Lorsque le mélange est revenu à température ambiante, le solvant est évaporé sous pression réduite, pour donner l'aldéhyde intermédiaire, sous forme d'huile incolore.

RMN¹H, 300MHz, (CDC1₃) : 9,6(m, 1H, -CHO) ; 6,4 (d, 1H, J=3,4,H-1 α) ; 5,6 (d,lH,J=8,3, H-lβ) ; 5,4-4,95 (M, 4H) ; 4, 6-4, 4 (M, 1H) ; 4,3-3,2 (M, 11H) ; 2,14 ; 1,98 (s, -COCH3) .

Le brut obtenu est alors rapidement mis en solution dans du méthanol (4 ml) à 0°C et l'on ajoute du tetraborohydrure de sodium (18 mg-0,48 mmol) en deux portions. Après 30 min d'agitation à 0°C, l'excès d'hydrure est éliminé par addition d'acétone (1 ml) . Le mélange reactionnel est ensuite neutralisé avec une solution d'acide chlorhydrique 0,5N et concentré sous pression réduite. La phase aqueuse est alors extraite avec du dichlorométhane (4x5 ml), puis les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium anhydre. Après évaporation sous pression réduite du dichlorométhane, le mélange brut est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice avec le mélange éluant méthanol/dichlorométhane (2/98) pour donner 9b_ pur (20 mg-80 %), sous forme de résidu incolore.

IR : 3500 cm^-1 (OH) , 1750 cm_! (CO) RMN¹^ 500MHz, (CDCI3) : attributions effectuées par TOCSY 1D

1) Anomère g : 6,30(d, 1H, J=3.7, H-l) ; 5,28 (t, 1H,J=9.7, H-3) ; 5, 01 (t, 1H,J=9.8, H-4) 4,25-4, 0(M,3H, H-5, H-6 et H-6'); 3,8-3,5 (M, 5H, H-2,-OCH₂CH₂OH) . 2) Anomère β : 5,55 (d, 1H,J=8.2, H-l) 5,13 (t,lH, J=9.4, H-3); 4,98(t, 1H,J=9.8, H-4) 4,25-4,00 (M,2H, H-6 et H-6¹); 3,80-3,70 (M, 1H, H-5) 3, 8-3, 5 (M, 4H,-0CH₂CH₂0H) ; 3,44(t, 1H,J=8.2, H-2) . Les 8 singulets (3H chacun) à 2,118 ; 2,100

; 2,018 ; 2,013; 2,008; 2,003; 1,972 et 1,963 (-COCH3) n'ont pas été attribués pour chaque anomère.

RMN¹³C, 50MHz, (CDCI3) : 170,5-170,3-170,2-169,5-169,3-168,8 (ÇO) ; 93,3 (C-l anomère β) :89,6 (C-l anomère α) ; 78,9-77,4-74,0-72,4-71,7-69,7-67,7 (C-2, C-3, C-4, C-5 •des anomères α et β) ; 74,4 et 73,6 (C-l et C-2 des anomères α et β) ; 61,6-61,4 (C-6 de α et β) ; 20,9-20,8-20,6-20,5 (-COCH3) . _ SM(D/IC ; NH3~isobutane) : 410 (M+NH₄)+ (100); 350 (M-AcOH)+; 333 (392-OAc)+; 273 (333-AcOH) +; 255(273-H₂0)+ ; 213 (273-AcOH) +; 153 (213-C₂0₂H₄) +. SMHR :

Calculée : CιgH₂₄0ιι+Na: 415, 1216 Obtenue : C₁₆H₂₄0n+Na:415, 1219 b) préparation du composé 9

9b composé 9

Au composé 9b (18 mg-0,46 mmol) en solution dans du toluène (3 ml), l'on ajoute sous agitation, de la triphénylphosphine (18 mg-0, 069 mmol) et du triiodoimidazole (101) (16 mg-0,036 mmol) . Après 3 heures d'agitation à 120°C, on rajoute de la triphénylphosphine (12 mg-0,046 mmol) et du triiodoimidazole (12 mg-0,027 mmol) . Après 14 heures d'agitation à 120°C, le mélange réactionel est refroidi et hydrolyse avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénosulfate de sodium (3 ml) ; après 5 minutes d'agitation, de l'iode est ajouté jusqu'à obtention d'une coloration brune de la phase organique. On agite alors 10 minutes et l'excès d'iode est éliminé par addition d'une solution aqueuse saturée de thiosulfate de sodium. La phase organique est diluée dans un mélange toluène/acétone. La phase organique est ensuite lavée à l'eau (3x4 ml), puis séchée sur sulfate de sodium anhydre. Après évaporation de la phase organique sous pression réduite, le composé _9 brut est obtenu. Il est alors purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice avec le mélange méthanol/dichlorométhane (0,5/99,5) comme éluant pour donner 9_ pur (20 mg-86 %), sous forme d'huile.

IR : 1750 cm^-1 (CO)

RMN-H, 500MHz, (CDCI3) : attributions effectuées à l'aide de TOCSY 1D, COSY DQF

1) Anomère g : 6,38 (d, 1H, J=3,6,H-1) 5,38 (t, 1H,J=9.7, H-3) ; 5,04 (t, 1H, J=9.8, H-4) 4,32-4,27 (m,lH,H-6 ou H-6'); 4,1-4,05 (M, 2H, H-5 e H-6 ou H-6'); 3,94-3,60 (M, 2H, -0CH₂CH₂I); 3,65 (dd 1H, J=9.9, H-2); 3,18-3,14 (M, 2H, -0CH₂CH₂I) 2,19-2,10-2,08 et 2,04 (s, 12H, -COC-H3) . 2) Anomère β: 5,61 (d, 1H,J=8.1, H-l)

5,2(t, 1H,J=9.4, H-3); 5,02(t, 1H, J=9.7, H-4) 4,32-4,27 (m, 1H, H-6 ou H-6'); 4,1-4,05 (m, 1H, H-6 ou H-6'); 3,9-3,67 (M, 3H, H-5 et -0CH₂CH₂D ; 3,51 (dd 1H, J=8,5, H-2); 3,18-3,14 (M,2H, -0CH₂CH₂I) 2,18-2,09-2,07-2,03(s,12H,-COCH₃) . RMN¹³C, 50MHz, CDC1₃) : 170,5— 170,1-169, 6-169,0-168, 6(ÇO) ; 93,9 (C-lβ) ; 89,2 (C-l α ) ; 78,5-76,9-73,8-72,4-71,2-69,7-68,0-67,9 (C-2, C-3, C-4 et C-5 des anomères α et β) ; 73,2 et 71,9 (-0ÇH₂CH₂I de α et β) ; 61,52 (C-6 de α et β) ; 21, 1-21, 0-20,7-20, 6(-COCH3 des anomères α et β) ; 2,1 (-OCH₂CH₂I de α et β) .

SM(DCI) :520(M + NH4)⁺ , 443 (502-OCOCH₃)+ ; 442(502-AcOH)+; 383 (443-AcOH)+ ; 323 (383-AcOH)+; 197 (383-C₈H₁₀θ5)+; ¹⁸⁶ (383-C₄H₇IO)+; 168(323-CH₂CH₂I)+; 155(-CH₂CH₂I)+(100) ; ^' 127 (155-CH₂=CH₂ou I)+; 108(168-AcOH)+.

SMHR :

Calculée : Ci 6H₂3lOι o+Na : 525, 0233

Obtenue : Ci 6H₂3lθ! 0+Na : 525, 0247 Exemple 10 : Préparation du 2-0- (2 ' -iodoéthyl) -g et β -D-glucopyranose (composé 10)

composé 9 composé 10

Au composé 9 (44 mg-0, 088 mmol, mis en solution dans du méthanol anhydre (2,3 ml), est ajouté, sous agitation et à -30°C, une quantité catalytique de methylate de sodium en solution IM dans du méthanol anhydre (10,8 μl) . Après agitation pendant 14 jours à -30°C, le mélange reactionnel est dilué dans de l'eau (10 ml) et concentré sous pression réduite. La phase aqueuse est ensuite neutralisée au moyen d'acide sulfurique 0,012M. Après extraction de la phase aqueuse au dichlorométhane (3x10 ml) , la phase aqueuse est évaporée à sec pour donner 1JD brut. Le résidu ainsi obtenu est purifié au moyen d'une chromatographie sur gel de silice avec l'acétate d'éthyle/isopropanol (90/10) comme éluant pour conduire au composé 1_0 pur (23,4 mg-80 %) cristallisé.

F = 139-143°C [α]" = + 27, 6° (60 min utes)(c = 0, 25 ; H₂θ) RMN+1H, 500MHz, (D₂0) : attributions effectuées à l'aide de TOCSY 1D, GHMQC

1) Anomère β : 4,7 (d, 1H, J=7.9, H-l) ; 3,87 (partie A d'un ABM..., 1H, J_AB=12.3, H-6 ou H-6') ; 3,69 (partie B d'un ABM..., 1H, J_Aβ=12.3, H-6 ou H-6'); 3,53 (t apparent, 1H, J=9.0, H-3) ; 3,45-3,37 (M, 2H, H-5 et H-4); 3,34 (M,2H, -0CH₂CH₂I) . 3,12 (dd, 1H, J=9.3 et J=7.9, H-2) .

2) Anomère g : 5,4 (d, 1H, J=3.6, H-l) ; 3,82-3,60 (M, 4H, H-3, H-5, H-6 et H-6'); 3,4-3,37 (M, 2H, H-2 et H-4); 3,34 (M, 2H, -0CH₂CH₂I) .

Les deux massifs, respectivement, de 4,12-4,0 (M) et de 3,94-3,92 (t) , correspondant à -0CHCH₂I, n'ont pas été attribués pour chaque anomère. RMN¹³C, 125MHz, (D₂0) : 1) Anomère β : 95,7 (C-l); 82,6 (C-2); 75,8

(C-5); 75,2 (C-3) ; 73,1 ou 71,4 (C-l); 69,6 ou 69,5 (C-4) ; 60,7 (C-6) ; 3,3 (C*-2) .

2) Anomère g : 90, 2 (C-l); 79, 55 (C-2) ; 73,1 ou 71,4 (C-l); 72-71,2(C-3 et C-5); 69,6 ou 69,5(C-4) ; 60,5(C-6) ; 3,3(C-2) .

Les deux carbones, de chaque anomère, portant l'iode (C-2) sont confondus ; par conséquent, ils ont le même déplacement chimique.

SM(D/IC ; NH₃-isobutane) : 352 (M + NH )+ ; 334 (M)+; 317 (334-0H)+; 299 (334-2H₂0)+ ; 281 (334-3H₂0)+; 239 (299-H0CH₂-CH0) +; 171 (0=CH₂CH₂I) +155 (+CH₂CH₂I) + (100) ; 154(281-1)+; 146 (317-0CH₂CH₂D +; 144(299-CH₂CH₂D⁺; 127(1)+; 126 (144-H₂0) +. Exemple 11 : Préparation du composé t marqué par 123^ Ce marquage est réalisé en portant 1 ml d'une solution d'iodure de sodium radioactif Nal 3χ dans l'acétone, qui contient 5 mg de composé 1_,_ à une température de 105°C pendant 30 minutes. Après élimination des espèces iodées chargées négativement par passage sur une résine anionique, on évapore sous vide l'acétone sans chauffer, on reprend le dérivé iodé radioactif pur du glucose dans du sérum physiologique. Le -rendement de marquage R est calculé comme suit :

_{^ # n %} RAglc iodé

R (%) = —- xlOO

RA total avec RA glc iodé étant la radioactivité de l'éluat contenant le dérivé de glucose iodé pur et RA totale étant la radioactivité totale utilisée. L'activité spécifique AS est donnée par la formule :

RA glc iodé

AS = masse de dérivé de glu cos e iodé

Les résultats obtenus sont les suivnats :

R > 90 %

AS = 0,8 mCi/mg (~ 0,4 Ci/mmol) Exemple 12 :

Dans cet exemple, on teste les propriétés biologiques du composé _1 marqué par 123χ obtenu dans l'exemple 11 pour vérifier s'il convient pour l'appréciation de la captation cellulaire du glucose. Dans ce but, le dérivé marqué à l'iode doit traverser la membrane cellulaire grâce au même transporteur que le glucose. Par ailleurs, comme le nombre de transporteurs membranaires du glucose est augmenté sous l'influence de l'insuline et comme ces transporteurs sont inhibés par la phlorétine ou la cytochalasine B, le dérivé iodé doit avoir une captation cellulaire augmentée par l'insuline et diminuée par la phlorétine ou la cytochalasine B. Enfin, dans le cytoplasme, le dérivé iodé doit s'accumuler sans subir ni dégradation ni rétrodiffusion pour que l'étude en SPECT (Single Photon Emission Co puted Tomography) soit possible.

Son comportement biologique doit donc être très voisin de celui du 2-désoxy-D-glucose.

Pour tester ces propriétés on effectue les expériences suivantes.

A) Etude in vivo : bio-distribution chez la souris. Pour cette expérience, on utilise des souris femelles de souche S ISS d'un poids moyen de 20 g nourries avec un régime standard (type A04-UAR) . On injecte dans l'une des veines latérales de la queue des souris 100 μl de solutions du composé 1 marqué à l'iode 123 (148 kBq/mL de solution isotonique de D-glucose à 5 %) . Après 2 min, 5 min, 10 min ou 15 min, on sacrifie les souris par dislocation cervicale, on prélève leurs organes, on les rince et on les sèche. On pèse ensuite ces organes et on mesure la radioactivité captée par chacun d'eux. On exprime les résultats de la bio¬ distribution en % de la dose injectée par gramme d'organe, qui est définie de la façon suivante :

• • _^ . DPSpargdetissu ,_ΛΛ

% dosemjectée= - xlOO

DPSinjectée avecDPS=désintégrationsparseconde

Les résultats obtenus sont donnés dans le tableau 1 qui suit. B) Etude ex vivo : coeur isolé et perfusé de rat.

La méthode consiste à prélever le coeur d'un rat vivant et à le placer en perfusion. Après injection du dérivé iodé, on mesure l'évolution temporelle de la radioactivité cardiaque pendant 30 min, au moyen d'un détecteur externe de radioactivité placé en face du coeur.

Ce modèle offre l'avantage de permettre des variations des milieux de perfusion et d'apprécier notamment l'influence^" de l'insuline qui augmente le transport du glucose par augmentation du nombre de transporteurs, et de la phlorétine qui diminue sa captation en se fixant sur ces mêmes transporteurs. Aussi, si la captation du dérivé iodé est augmentée par l'insuline ou diminuée par la phlorétine, celui-ci répond aux critères fixés, à savoir qu'il entre dans la cellule grâce aux transporteurs du glucose. Pour cette étude, on utilise des rats mâles de souche WISTAR de 250 à 280 g nourris avec un régime standard (type A04/UAR) . On anesthésie les rats par injection péritonéale de Pentobarbital monosodique à 6 % (2 ml par kg de poids corporel) . Après une injection d'héparine (1000 Ul/kg) , le coeur est rapidement prélevé et perfusé par voie aortique, à un débit constant de 10,5 ml/min.

Le milieu de perfusion est dérivé de celui décrit par Krebs Henseleit : NaCl (118 mM) , KCI (5,6 mM) , CaCl₂ (1,5 mM) , NaHC0₃ (10 M) , MgCl₂ (l,2mM) et KH2P0₄ (1,2 mM) . Le milieu perfusé à 37°C est saturé par un mélange gazeux (95 % 02 - 5 % CO2) . Selon les protocoles expérimentaux, le milieu de perfusion est supplémenté en insuline (10 UI/1) ou en phlorétine (4 x 10^-5 M) . Après 20 minutes de préperfusion, le composé 1 radioactif iodé est injecté à l'entrée du réseau coronaire sous forme d'un embol de 0,1 ml (4 μmole/ml du milieu de perfusion) . La radioactivité myocardique est mesurée par détection externe en continu grâce à une sonde (Nal) couplée à un analyseur multicanaux fonctionnant en ultiéchelle (TRACOR NORTHERN TN7200) . Lors de l'étude de l'effet de la phlorétine, la perfusion de l'inhibiteur commence après les 20 minutes de préperfusion, et 5 minutes avant l'injection du composé iodé radioactif.

Les résultats obtenus sont donnés dans le tableau 2 qui suit.

Les résultats de ce tableau sont exprimés en % de la dose injectée par gramme de coeur. Ce tableau montre que l'insuline augmente la fixation du composé 1_ iodé alors que la phlorétine la diminue. C) Etude in vitro a) érythrocytes en suspension. On prépare une suspension d'érythrocytes humains à partir de sang frais selon la méthode décrite par Levine et al dans Biochim. Biophys. Acta Sci 225 : pages 291-300. Les érythrocytes sont mis en suspension dans un tampon isotonique (NaCl (1 %), phosphate de sodium (25 mM, pH 7,4) à un hématocrite de 10 % environ.

A 2,5 ml de suspension cellulaire, on ajoute 1,5 ml de tampon phosphate et les globules rouges sont incubés à 25°C ou 4°C selon le protocole choisi. Un mililitre de composé JL d'analogue iodé (42 nmol/ml de tampon phosphate) est ajouté à cette suspension. La captation est arrêtée à des temps variables par addition de 30 ml de solution de stoppage à 4°C (2mM HgCl₂, 1,25 mM Kl dans du NaCl à 1 %) . La suspension est centrifugée et le culot est lavé une seconde fois avec 10 ml de solution de stoppage. Le culot est repris avec 4 ml d'acide trichloroacétique (TCA) à 10 % P/V et, après centrifugation, 1 ml de surnageant est prélevé et compté. Un standard (témoin temps 0) est effectué par addition de la solution de stoppage avant le composé _1 iodé radioactif.

Lors de l'étude de l'effet de la concentration en D-glucose sur la captation des analogues iodés du glucose, les érythrocytes sont préincubés 15 minutes à 4°C avec du D-glucose à différentes concentrations (1-20 mM) et la captation est mesurée au bout^" d'une minute. Pour toutes les études en présence de cytochalasine B (5 x 10^~5 M) , la suspension cellulaire est préincubée pendant 20 minutes avec l'inhibiteur à 4°C. Les résultats obtenus sont donnés dans les tableaux 3 et 4 et ils sont exprimés en μmoles de composé capté par l de cellules. Le tableau 3 illustre la cinétique de fixation du composé 1 à 25°C, à 4°C et à 4°C en présence de 50 μmol/1 de cytochalasine B. Les résultats de ce tableau montrent que la fixation du composé 1_ iodé n'est pas modifiée par une diminution de température de 25°C à 4°C : ce résultat est en faveur d'une fixation de la molécule sur la face externe de la membrane cellulaire. Par ailleurs, on remarque que la fixation du composé _1 iodé est diminuée de façon significative en présence de cytochaline B, inhibiteur du transport du glucose.

Le composé 1_ iodé présente donc les caractéristiques d'un marqueur des transporteurs du glucose, sur la face externe de la membrane plasmique.

Dans le tableau 4, on a donné les résultats de captation du composé _1 en présence de concentrations de cytochalasine B allant de 0 à 500 μmol/1 après 20 minutes d'incubation à 4°C. Les résultats du tableau 4 montrent que la fixation du composé 1 est inhibé de façon significative (p<0,001) pour de faibles doses de cytochalasine B. b) Les cardiomyocytes de rats nouveau-nés en culture.

Les cultures de cardiomyocytes de rats nouveau-nés sont préparées à partir de coeurs de rats de souche ISTAR âgés de 1 à 4 jours selon la technique décrite par Harary et Farley (1963) et modifiée par Blondel et al. (1971) . Les ventricules sont broyés et soumis à des trypsinisations consécutives (Difco Trypsine 1 : 250 - 0,1 %) à 33°C. Les cellules isolées obtenues sont mises en suspension dans du milieu Ham's F10 (TechGen International) supplémenté de 20 % de sérum de veau foetal (TechGen International) et de 1% de pénicilline-streptomycine (500 x) (Boehringer) et ajusté à ImM de CaCl2.

Cette suspension cellulaire est soumise à 2 préensemencements de 30 et 90 minutes à 37°C, afin d'éliminer les cellules non musculaires. La suspension enrichie en cardiomyocytes est ensemencée à une densité de 10^ cellules/ml dans des boîtes de Pétri d'un diamètre de 35 mm et incubée à 37°C dans une atmosphère contenant 95 % air - 5 % CO2 • Les cardiomyocytes sont utilisés après 4 jours de mise en culture et incubés 2 heures auparavant dans du milieu Ham's F10 dépourvu de glucose et de sérum de veau foetal. Cinquante microlitres de composé 1_ iodé (840 nmoles/ml de milieu Ham's F10) sont ajoutés à chaque boîte. Après des temps variables, la captation est arrêtée en rinçant 3 fois les boîtes avec un tampon phosphate [NaCl (136,5 mM) , KCl (0,054 mM) , KH₂P0₄ (1,1 mM) et Na₂HP0₄ x 2H₂0 (1,8 mM) ; pH 7,4] à 4°C. Les cellules sont décollées avec une solution de sodium dodécyl sulfate à 1 % dans du borate de sodium à 10 mM. La suspension est prélevée et comptée. Un standard

(témoin temps 0) est effectué en arrêtant la captation immédiatement après l'injection du composé JL iodé. Pour étudier l'effet de la concentration en D-glucose sur la captation du composé iodé, les cardiomyocytes sont préincubés 30 minutes avec du D-glucose (1-20 mM) et la captation^' est mesurée au bout d'une minute. Dans toutes les études, les cellules sont préincubées une heure avec de l'insuline (100 UI/1) et 30 minutes avec la cytochalasine B ( 5 x 10^-5 M) .

La teneur^"en protéines de chaque boîte est mesurée par la méthode de Lowry et al. (1951), après chauffage pendant 15 minutes à 70°C de la solution de sodium dodécyl sulfate contenant les cardiomyocytes. Le comptage de l'émission γ est réalisée dans un compteur γ à scintillation (NOVELEC) .

Les résultats obtenus sont donnés dans le tableau 5. Les résultats de ce tableau sont exprimés en nmol de composé capté/ml de protéine. Les résultats de ce tableau montrent que la fixation du composé 1 est augmentée par l'insuline et diminuée par la cytochalasine B.

D. Etude scintigraphique chez le chien in vivo Le composé 1 marqué à l'Iode 123 (3mCi) a été injecté par voie intraveineuse à un chien soumis à une perfusion intraveineuse de glucose-insuline- potassium. L'acquisition des images scintigraphiques est réalisée grâce à une gamma caméra standard équipée d'un collimateur à haute résolution, et la spectro étrie est réglée sur 160 ke V avec une fenêtre de 20 %. L'évolution temporelle de la radioactivité est mesurée pendant 60 minutes, à raison d'une image par minute. Les résultats obtenus sont donnés dans le tableau 6, et sont exprimés en coups/minute.pixel.mCi injecté.

La figure 1 illustre également les résultats.

Cette figure représente l'évolution de la radioactivité (en coups/min.pixel.mCi) en fonction du temps (en min.). Sur cette figure, la courbe 1 se réfère au coeur, la courbe 2 se réfère au foie, la courbe 3 se réfère au bruit de fond et la courbe 4 se réfère aux poumons.

Les résultats du tableau 6 montrent que l'activité cardiaque est importante.

Les résultats biologiques des tableaux 1 à 6 concernant le composé 1 marqué à l'iode 123 montrent que ce composé a une fixation cellulaire, stimulée par l'insuline et inhibée par la phlorétine et la cytochalasine B.

Sur érythrocytes humains en suspension, sa fixation n'est pas affectée par des variations de température, ce qui indique que la molécule ne traverse pas la double couche lipidique.

Injecté au chien, son activité myocardique est très élevée et demeure stable pendant un temps suffisant pour que des scintigraphies d'excellente qualité soient effectuées. Ce composé 1 est donc un marqueur des transporteurs du glucose. Exemple 13 :

Dans cet exemple, on effectue les mêmes études biologiques sur le composé iodé, 6-désoxy-6- iodo-D-glucose de formule : composé 11

après l'avoir marqué par de l'iode 123 en utilisant la même technique que dans l'exemple 11. Les résultats obtenus avec ce composé sont donnés dans les tableaux 7 à 11.

Ce composé iodé a aussi une captation cellulaire stimulée par l'insuline et inhibée par la phlorétine et la cytochalasine B; il est en compétition avec le glucose pour son entrée cellulaire. Ce composé entre dans la cellule par le même transporteur que le glucose, et peut donc servir de marqueur de la captation cellulaire du glucose.

Ex-emple 14 : On suit le même mode opératoire que dans l'exemple 12, pour tester les propriétés biologiques du

6-désoxy-6-iodo-α-D-glucopyranoside de méthyle de formule :

composé 12

qui a été marquée à l'iode 123 comme le composé 1 dans l'exemple 11. Les résultats de ces études biologiques sont donnés dans les tableaux 12 à 17 et sur la figure 3.

La figure 2 illustre les résultats de l'étude in vivo chez le chien. Sur cette figure, la courbe 1 se réfère au coeur, la courbe 2 se réfère au foie, la courbe 3 se réfère au bruit de fond et la courbe 4 se réfère aux poumons.

Le composé 12 iodé se comporte de la même façon que les composés 1 et 11 décrits dans les exemples 12 et 13.

En effet, sa captation est augmentée par l'insuline et diminuée par la phlorétine et la cytochalasine B. Il entre en compétition avec le glucose pour l'entrée cellulaire et son activité cardiaque est importante.

Les dérivés iodés de l'invention présentent donc un intérêt dans le diagnostic de toutes les pathologies liées à des pertubations du métabolisme glucidique, ces pathologies étant caractérisées par une variation du nombre de transporteurs du glucose, et/ou une variation de la captation du glucose. Le champ d'application de ces dérivés est extrêmement vaste puisqu'il concerne la cancérologie, les maladies dégénératives cérébrales, l'épilepsie, le diabète, l'ischémie myocardique, les cardiomyopathies non ischemiques et enfin les myopathies.

TABLEAU 1 : Biodistribtion chez la souris (% de la dose injectée par g d'organe)

Temps Coeur Foie Poumons Reins Cerveau Sang

2 min 5,48+0,55 8,47+1,51 8,21+1,07 19,94+4,00 1,36+0,17 7,27+0,63

5 min 3,40+0,86 5,30+0,10 6,00+0,50 29,90+1,90 1.55+0,05 5,88+0.82

10 min 2,43+0,66 4,37+0,26 5,50+0.36 19,23+2,15 1,8 4,57+0,25

15 min 3,08+0,66 3,47+0,41 4,73+0,53 17,15+0,04 1.7 5,67+1,31

TABLEAU 2 : Coeur isolé de rat (% de la dose injectée par g de coeur)

Comparaison avec les valeurs contrôles ^rp<0,05. **p<0,01 TABLEAU 3 : Globules rouges (μmol de composé 1 par litre de cellules)

"p<0,01 ***p<0,001 25°Cvs4°C 4°Cvs4°C+cytoB

TABLEAU 4 : Globules rouges (umol de composé 1 par litre de cellules)

TABLEAU 5 : Cardiomyocytes de rats nouveau-nés (nmol/mg de protéines)

Temps (min) OmM glucose +100 Ul/I insuline +50μMcyt.B

1 0,10+0,02 0,13+0,01 0,09+0,03

15 0,23+0,03 0,33+0,04* 0,15+0,01^*

60 0,29+0,03 0,42+0,07^* 0,24+0,01

120 0,31+0,04 0,36+0,03 0,24+0,01

Comparaison avec les valeurs en l'absence de glucose.*p<0, 005

TABLEAU 6 :

TABLEAU 7: Biodistribution chez la souris (% de la dose injectée par g d'organe

Temps Coeur Foie Poumons Reins Cerveau Sang

2 min 7,97+0,18 11.1±0,51 7,80+0,49 8,97+0,68 2,70+0,14 11,9*0,10

5 min 7,00+0,77' 9,57+0,50' 8,30+0,57 6,97+0,54' 3,53+0,33' 10,2+0,6

10 min 6,99+0,62* 8,50+0,64* 7,37+0,66 6,90+0,59^* 3,97+0,57' 7,53+0,28

15 min 6,25+1,14^* 6,60+0,22^*** 6,40+0,14* 6,27+0,41" 3,80+0,25" 7,48+0,53

60 min 3,78+1 ,04*" 3,67+0,39^*** 3,90+0,37*** 3,77+0,33"^* 2,40+0,16 4,90+0,60

TABLEAU 8 : Coeur isolé de rat (% de la dose injectée par g de coeur)

TEMPS CONTROLES +lnsuline (10μl/^ ) + Phlorétine (min) (n=5) (n-5) (40μM) (n=4)

1 2,67+0,63 2,52+0,78 1,24+0,26"

2 1,08+0,15 0,57+0,18^** 0,72+0,2^*

3 0,60+0,06 0,25+0,07** 0,49+0,11

4 0,39+0,06 0,16+0,06" 0,43+0,09

5 0,26+0,06 0,10+0,02" 0,34+0,05

Comparaison avec les valeurs contrôles : *p<0,05; **p<0,01 TABLEAU 9 : Globules rouges (μmol de composé 11 par litre de cellules)

**p<0,05 **p<0,01***p<0,01 25°Cvs4°C

4°Cvs4°C+cytoB

TABLEAU 10 :

Globules rouges (μmol de composé 11 capté par litre de cellules)

Concentration en glucose Captation (μmol par litre) (mM) (n=6)

0 0,547+0,054

1 0,426+0,050*

2,5 0,357+0,011**

5 0,277+_0,015**

10 0,214+_0,008***

20 0,100+0,013***

40 0,038+0,002***

*p<0,05 **p<0,01 ***p<0,001 TABLEAU 11 : Cardiomyocytes de rats nouveau-nés (nmol/mg de protéines)

Temps (min) OmM glucose +100 UI/1 +50μMcγt.B insuline

1 0,046+0,006 0,068+0,004*** 0,035+0,008*

15 0,126+0,010 0,137+0,007* 0,070+0,014***

. 60 0,151 + 0,019 0,161+0,025* 0,103+0,005***

120 0,169+0,020 0,162+0,003** 0,128+0,011**

Comparaison avec les valeurs en l'absence de glucose.*p<0,05 **p<0,01 ***p<0,001

TABLEAU 12: Biodistribtion chez la souris (% de la dose injectée par g d'organe)

Temps Coeur Foie Poumons Reins Cerveau Sang

2 min 7.58+1.15 7,06+1,02 6,84+0,94 9,58+0,69 0,72+0,08 7,30+0,095

5 min 6,38+0.83 6,49+1,44 5,68+0,95 9,20+0,63 0,94 7,39+1,26

10 min 5,92+0,34 6,52+0,91 5,65+0,52 8,58+1,21 1,03+0,09 5,75+0,075

15 min 4,95+0,57 6,34+0,32 5,27+0,46 8,76+0,23 1,73+0,055 5,47+0,225

60 min 2,55+0,48 3,58+0,56 3,13+0,56 6,24+0,63 1,99+0,53 4,86+0,31

TABLEAU 13 : Coeur isolé de rat (% de la dose injectée par g de coeur)

TEMPS CONTROLES +Insuline + Phlorétine (min) (n=5) (10μl/n ( 0μM) (n=4 ) (n=5)

1 3,12+0,84 6,95+1 ,47*" 1 ,37+0,41"

2 0,97+0,19 1,94+0,56** 0,59+0,19*

5 0,21+0,04 0,30+0,12 0,17+0,03

10 0,10+0,02 0,13+0,06 0,08+0,01

15 0,07+0,01 0,09+0,03 0,06+0,004

20 0,07+0,01 0,07+0,03 0,04+0,004

25 0,05+0,01 0,05+0,01 0,04+0,01

30 0,06+0,005 0,04+0,005 0,04+0,01

TABLEAU 14 : Globules rouges (μmol de composé 12 par litre de cellules)

Temps 25 ° C 4 °C 4 °C + (min) (n=3) (n=3) cytochalasine B

(50μM) (n=3)

1 3,42+0,06 0,38+0,15*" 0,03+0,09^*

5 3,78+0,25 1 ,36+0,19^*" 1 ,50+0,08

15 4,04+0,09 2,86+0,05^*" 1,61+0,15*"

60 3,91+0,14 3,24+0,70 3,99+0,40

cytochalasiine B inhibe la captation. TABLEAU 15 : Globules rouges (μmol de composé 12 capté par litre de

Concentration en glucose Captation (μ ol par litre) (mM) (n=6)

0 0,74+0,19

1 0,28+0,15*"

2,5 0,49+0,14*

5 0,42+0,17*

10 0,44+0,20*

20 0,33+0,09^*"

40 0,26+0,07"*

TABLEAU 16 : Cardiomyocytes de rats nouveau-nés (nmol/mg de protéines)

Temps (min) OmM glucose +100 UI/1 +50μM-cyt.B insuline

1 0,08+0,025 0,09+0,02 0,04+0,01"

15 0,10+0,01 0,10+0,01 0,08+0,01*

60 0,10+0,01 0,11+0,01 0,09+0,01

120 0,11+0,01 0,13+0,01" 0,11+0,01

Comparaison avec les valeurs en l'absence de glucose, TABLEAU 17 : Etude chez le chien in vivo (coups /min . pixel . mCi)

Temps Coeur Poumons Foie Bruit de Fond

5 min 48,0 25,0 54,0 20,8 0 min 37,5 22,0 44,0 25,0 5 min 34,7 23,0 40,0 25,0 0 min 33,3 22,0 39,7 26,4 0 min 31,6 21,5 37,7 27,2 5 min 29,4 20,5 37,7 24,4

Claims

REVENDICATIONS

Dérivé iodé de monosaccharide de formule

dans laquelle

- R¹ représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle, un groupe de formule -C(0)R⁷ avec R⁷ étant un groupe alkyle, ou un groupe de formule -(CH)₂-(OCH₂CH₂)_mI avec m égal à 0 ou à 1 ;

- R² et R³ qui peuvent être identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupe de formule -C(0)R⁷ ou C(0)OR⁷ avec R⁷ étant un groupe alkyle, ou un groupe de formule -(CH₂)₂-(OCH₂CH₂)_mI avec m égal à 0 ou à 1 ;

- R⁴ et R⁶ qui peuvent être identiques ou différents, représentent I, OH, un groupe alkyle, un groupe de formule OR⁷, -OC(0)R⁷, ou -OC(0)OR⁷ avec R⁷ étant un groupe alkyle, ou un groupe de formule -(OCH₂CH₂)_nI avec n égal à 1 ou à 2 ; l'un seulement des R¹, R², R³, R⁴ et R⁶ représentant I ou un groupe comportant I, à condition que :

1) dans le cas où R³ représente -CH₂CH₂I, R¹ et R² ne représentent pas H ou COCH₃ et R⁴ et R⁶ ne représentent pas OH ou OCOCH₃,

- 2) dans le cas où R⁶ représente I, R¹ ne représente pas H ou CH₃, R² et R³ ne représentent pas H et R⁴ ne représente pas OH, et - 3) dans le cas où R représente I, R² et R³ ne représentent pas H, R¹ ne représente pas H ou C(CH₃)₃ et R⁶ ne représente pas OH.

2. Dérivé iodé du glucose selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il répond à la formule :

dans laquelle R¹, R², R³, R⁴ et R^δ ont les mêmes significations données dans la revendication 1,

3. Dérivé iodé selon la revendication 2, caractérisé en ce que R¹ représente -CH₂CH₂I ou

- (CH₂)₂OCH₂CH₂I, R² et R³ représentent un atome d'hydrogène, et R⁴ et R^δ représentent OH.

4. Dérivé iodé selon la revendication 2, caractérisé en ce que R¹, R² et R³ représentent un atome d'hydrogène ou -C(0)CH₃, R⁴ représente I et R⁶ représente OH ou -OC(0)CH₃. 5. Dérivé iodé selon la revendication 2, caractérisé en ce que RI représente -CH₂CH₂I ou

- (CH₂) ₂OCH₂CH₂I, R² et R³ représentent le groupe -C(0)CH₃, et R⁴ et R⁶ représentent le groupe -OC(0)CH₃. β. Dérivé iodé selon la revendication 2, caractérisé en ce que R¹ représente -CH₂CH₂I, R² et R³ représentent le groupe -C(0)CH₃, et R⁴ et R⁶ représentent le groupe 0C(0)CH₃.

7. Dérivé iodé du glucose selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que I est ¹²³I ou ¹³¹I. 8. Produit radiopharmaceutique, caractérisé en ce qu' il comprend un dérivé iodé de monosaccharide de formule :

dans laquelle

- R¹ représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle, un groupe de formule -C(0)R⁷ avec R⁷ étant un groupe alkyle, ou un groupe de formule - (CH)₂- (OCH₂CH₂)_mI avec m égal à 0 ou à 1 ;

- R² et R³ qui peuvent être identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupe de formule -C(0)R⁷ ou C(0)OR⁷ avec R⁷ étant un groupe alkyle, ou un groupe de formule - (CH₂) ₂- (OCH₂CH₂)_mI avec m égal à 0 ou à 1 ;

- R⁴ et R⁶ qui peuvent être identiques ou différents, représentent I, OH, un groupe alkyle, un groupe de formule OR⁷, -OC(0)R⁷, ou -OC(0)OR⁷ avec R⁷ étant un groupe alkyle, ou un groupe de formule -(OCH₂CH₂)_n I avec n égal à 1 ou à 2 ; l'un au moins des R¹, R², R³, R⁴ et R⁶ représentant I ou un groupe comportant I avec I étant

¹²³I ou ¹³¹I à condition que dans le cas où R³ représente -CH₂CH₂I, R¹ et R² ne représentent pas H ou COCH₃ et R⁴ et R⁶ ne représentent pas OH ou OCOCH₃.

9. Produit radiopharmaceutique pour déterminer l'importance du transport membranaire du glucose, caractérisé en ce qu'il comprend un produit radiopharmaceutique selon la revendication 8. 10. Produit radiopharmaceutique pour déterminer l'importance du transport membranaire du glucose, caractérisé en ce qu'il comprend un dérivé iodé du glucose de formule :

011,11 composé 1

dans laquelle I est ¹²³I ou ¹³¹I.

11. Produit radiopharmaceutique pour déterminer 15 l'importance du transport membranaire du glucose, caractérisé en ce qu'il comprend un dérivé iodé du glucose de formule :

compose 12

25 dans laquelle I est ¹²³I ou ¹³¹:

12 . Utilisation d' un dérivé iodé du glucose de

dans laquelle - R¹ représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle, un groupe de formule -C(0)R avec R⁷ étant un groupe alkyle, ou un groupe de formule -(CH)₂-(OCH₂CH₂)_raI avec m égal à 0 ou à 1 ; - R² et R³ qui peuvent être identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupe de formule -C(0)R⁷ ou C(0)OR⁷ avec R⁷ étant un groupe alkyle, ou un groupe de formule - (CH₂)₂- (OCH₂CH₂)mI avec m égal à 0 ou à 1 ; - R⁴ et R⁶ qui peuvent être identiques ou différents, représentent I, OH, un groupe alkyle, un groupe de formule OR⁷, -OC(0)R⁷, ou -OC(0)OR⁷ avec R⁷ étant un groupe alkyle, ou un groupe de formule -(OCH CH2)_n I avec n égal à 1 ou à 2 ; l'un au moins des R¹, R², R³, R⁴ et R⁶ représentant I ou un groupe comportant I, pour la préparation d'un produit radiopharmaceutique destiné à la détermination de l'importance du transport membranaire du glucose.