WO1994001577A1

WO1994001577A1 - Procede de production d'un d-aminoacide optiquement actif

Info

Publication number: WO1994001577A1
Application number: PCT/JP1993/000910
Authority: WO
Inventors: Michito Tagawa; Eiko Okamoto; Sachiko Akutsu; Masao Kuwahara
Original assignee: Research Association for Biotechnology of Agricultural Chemicals
Current assignee: Research Association for Biotechnology of Agricultural Chemicals
Priority date: 1992-07-03
Filing date: 1993-07-02
Publication date: 1994-01-20
Anticipated expiration: 1995-01-03
Also published as: JPH0622789A

Description

明細書光学活性な D -ァミノ酸の製造法技術分野

本発明は安価な化学的合成法で得られる N -置換カルボニル -D レアミノ酸及び/又はその塩に微生物の培養菌体及びノ又はその培養処理物を作用させて酵素的に D-ァミノ酸と N -置換カルボ二ル-ぃァミノ酸とに光学分割する方法に関するものである。背景技術

農薬、医薬等の生理活性物質には、 D-体をもつものが多い。 D- フェニルァラニンは鎮痛剤、抗生物質の合成原料として最近注目を集めている。 D-フヱ二ルァラニンの生産については、最近、宮原等が分離方法（特開昭 6 3 - 9 1 0 9 7号、三井東圧株式会社）を発表しているが、 N—ベンゾィル _Dぃフヱ二ルァラニンの D-ァシラーゼについての報告は少ない。

N—ァシル -DL-ァミノ酸のうち D-体のみのァシル基を選択的に脱ァシル化し、 D-アミノ酸を製造する方法は従来より知られている。 Pseudomonas 属、 Alcaligenes 属、 Streptomyces属の各菌株について D-ァミノアシラーゼ活性が報告されているが、これらは何れも N—ァセチルアミノ酸に作用するアミノアシラーゼである (Tsai. Y.C.， P.Tseng, et al； Appl. Environ. Microbiol.54 984(1988). M. モリグチ， K. ィケダ； ibid. 54 2767(1988) 、 K. クボ， et. al； Agri c. Bi o l . Chem. 42 107(1987)、 i bi d. 44 1089(1980) )。しかし、何れも活性は弱く、いアミノアシラーゼ活性も併せて保持していることから、高活性の D-体のみを生成する D-アミノアシラーゼ生産菌株は少ないと考えられる。発明の開示

本発明等は上記問題点を解決すべく鋭意努力検討した結果、 N -置換カルボニル- Dぃァミノ酸のうち、 D-体だけを選択的に脱置換カルボニル化（例えば脱ァセチル化）して D-アミノ酸に変換することの出来る微生物を見い出し、本発明を完成するに至った。即ち、本発明はアミドカルボニル化反応等により安価に製造できる一般式 [ I ]

0

RCH₂CHCOH [ I ]

HNR¹

(式中、 Rは水素原子、炭素原子数 1 ないし 1 0のアルキル基、ハロゲン原子により置換された炭素原子数 1 ないし 1 0のアルキル基又はフヱ二ル基を表し、

R ¹ は炭素原子数 1 ないし 1 0のアルカノィル基、ベンゾィル基、ハロゲン原子により置換された炭素原子数 1〜 5のアルカノィル基、又はハロゲン原子により置換されたベンゾィル基を表す。）で表される N —置換カルボニル- Dいアミノ酸及び又はその塩に、ロドコッカス（Rhodococcus) 属とピメロバクタ一（Pimelo bacter) 属の細菌から選ばれた微生物の培養菌体及びノ又はその培養処理物を作用させることにより、光学分割を行うことを特徵とする D-アミノ酸及び N —置換カルボニル -L- ァミノ酸の製造方法に関するものである。

以下、本発明を詳細に説明する。

一般式 [ I ] の N—置換カルボニル -DL-ァミノ酸及び Z又はその塩において、置換基 Rである炭素原子数 1 ないし 1 0のアルキル基の具体例としてはメチル基、ェチル基、 n —プロピル基、 i —プロピル基、 n—ブチル基、 i 一ブチル基、 t 一ブチル基、ぺンチル基、へキシル基、ヘプチル基、ォクチル基、ノニル基、デシル基及びフヱニル基等が挙げられる。

置換カルボニル基 R ¹ である炭素原子数 1ないし 5のアルカノィル基の具体例としてはホルミル基、ァセチル基、プロピオニル基、 n -プチリル基、 i 一プチリル基、 n —ペンタノィル基、 i —ペンタノィル基等が挙げられる。

置換カルボニル基 R ¹ であるハロゲン原子により置換された炭素数 1 ないし 5のアルカノィル基におけるハロゲン原子としては塩素、臭素原子等が挙げられ、ハロゲン原子により置換された炭素数 1 ないし 5のアルカノィル基の具体例としてはクロロアセチル基、クロ口プロピオニル基、クロロブチリル基等が挙げられる。置換カルボニル基 R 1 であるハロゲン原子により置換されたべンゾィル基におけるハロゲンとしては、塩素、臭素原子等が挙げられ、ハロゲン原子により置換されたベンゾィル基の具体例としては、クロ口ベンゾィル基、ブ口モベンゾィル基等が挙げられる。しかしながら、置換カルボニル基 R ¹ は本微生物酵素で離脱されて D-ァミノ酸を生成し得る置換カルボニル基であればどの様な基あつもよレ、。

一般式 [ I ] の N —置換カルボニル基- Dレアミノ酸の塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニゥム塩、カルシウム塩等が挙げられる。

本発明に使用される微生物としては口ドコッカス（Rhodococcus) 属、ピメロバクタ一（Pimel obacter) 属から選ばれる細菌から選ばれた微生物のうち N —置換カルボニル -DL-ァミノ酸及び Z又はその塩の D-体だけを選択的に脱置換カルボニル化（例えば、脱ァシル化）して D-アミノ酸に変換することの出来る微生物であればよい。

この様な微生物は一般に入手又は購入が容易である保存株から選択することも出来るし、又は自然界から分離することもできる。

尚、これらの菌株に変異を生じさせて一層生産性の高い菌株を得ることも出来る。

又、これら菌株の細胞中に存在する酵素の生産に関与する遺伝子を切り出し、これを適切なベクター、例えばプラスミドに揷入し、このべクタ一を用いて適当な宿主、例えば大腸菌

( Escheri chia co l i ) や枯草菌（Bac i l lus subt i l i s ) 或いは放線菌のごとき異種宿主又は同種宿主を形質転換することにより、本発明の酵素生産株を人為的に創製することも出来る。本発明に使用する微生物として埼玉県白岡町の土壌より分離した口ドコッカス · 口ドク。ス (Rhodococcus rhodochrous) 、ピメロノくクタ— · シンプレックス (Pimelobacter simplex) 力挙げらレ 00

これらの微生物の菌学的性質を示すと以下の通りである。

表 1 ：ロドコッカス ' ロドクロス 2 0 3 0 — 2 (Rhodococcus rhodochrous 2 0 3 0 - 2 ) 株の菌学的性状

試験項目結果

形態多形性桿菌グラム染色性 +

芽胞

運動性

ォキシラーゼ

力タラ一ゼ +

rod-coccus cycle +

集落の周辺細胞の伸長認める

集落の色調オレンジ形酸素に対する態度好気性

細胞壁のジァミノ酸 meso-ジアミノピメリン酸グリコリル試験 + (グリコリル型）細胞壁の糖組成

ァラビノース +

ガラクト一ス + 表 1続き：

試験項目結果

キノン系 K - 8 ( H ₂ ) チロシン分解 +

尿素分解 +

0, 02%ァジ化ナトリゥム存在下での生育

0 % N a C 1存在下での生育 +

5 % N a C 1存在下での生育 +

1 0 ^eCでの生育 +

4 0 ^eCでの生育

資化性

グルコース +

マルトース

m—ヒドロキシ安息香酸 +

安息香酸ナトリウム +

乳酸ナトリウム +

テストステロン +

L-チ口シン +

2 0 3 0 - 2株の菌学的性質を、バ一ジーズ * マニュアル · ォブ ' システマテイク 'パクテリォロジ一の記載に照合すると、培養性状、生理学的性質及び糖類から酸の生成の特徴から 2 0 3 0 一 2株は、ロドコッカス ' ロドクロスの種に属するー菌株と認められる。本菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所（あて名：〒 3 0 5 日本国茨城県つくぱ市東 1丁目 1番 3号）に 1 9 9 1 年 8月 1 日付で、微生物受託番号微ェ研菌寄第 1 2 4 0 1号（ F ERM P— 1 2 4 0 1 ) として寄託されている。

表 2. ピメ πバクタ一，シンプレックス 1 5 9 8— 1 (Piraelobacter simplex 1 5 9 8 - 1 ) 株の菌学的性状

試験項目結果

形態多形性桿菌グラム染色性 +

芽胞

運動性 +

ォキシラーゼ

カタラーゼ +

集落の色調特徴的色素を産生せず rod-coccus cycle +

集落の周辺細胞の伸長認めず

気生菌系の存在

酸素に対する態度好気性

グルコースからの酸の産生

細胞壁のジァミノ酸 LL-ジアミノビメリン酸細胞壁中のグリシンの存在 +

グリコリル試験一（ァセチル型）細胞壁の糖組成

ァラビノース

ガラクトース + ■¾ 2 さ：試験項目結果

キノン系 MK - 8 (H₄ ) 菌体内 DNAの G C含量（モル％) 7 0

ゼラチン液化 +

カゼィン分解 +

DN A分解 +

尿素分解

栄養要求性資化性

グルコース +

D-マンニトール

L-ラムノ一ス +

クェン酸塩

コハク酸塩

馬尿酸塩

1 5 9 8 - 1株の菌学的性質を、パージ一ズ ' マニュアル · ォブ ' システマテイク 'バクテリオ口ジ一の記載に照合すると、培養性状、生理学的性質及び糖類からの酸の生成の特徴等から 1 5 9 8 — 1株は、ピメロパクター · シンプレックスの種に属する一菌株と認められる。本菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所

(あて名：〒 3 0 5 日本国茨城県つくば市東 1丁目 1番 3号）に 1 9 9 1年 8月 1 日付けで微生物受託番号微ェ研菌寄第 1 2 4

0 0号（F E RM P— 1 2 4 0 0 ) として寄託されている。尚、本発明に使用できる微生物株は上記の例に限定されるものではない。本発明に用いる微生物の培養は通常、振盪培養或いは通気攪拌深部培養等の好気的条件下で行う。

培養温度は 2 0〜 3 7てで、培養 p Hは 6〜 9で 1〜 7 日間培養する。

培地には、使用菌が資化し得る炭素源、窒素源、無機塩及び微量有機栄養源が含まれる。即ち、炭素源としてはグルコース、マルトース、デンプン加水分解液、糖蜜等の炭水化物等も使用でき窒素源としてはアンモニア、硫安アンモニゥム、塩化アンモニゥム等の各種の無機及び有機のァンモニゥム塩類又は肉エキス、酵母エキス、ポリペプトン、コーン ' スチープ . リカー、カゼィン加水分解物等の天然有機窒素源も使用可能である。

無機塩としては、マグネシウム、鉄、マンガン、カリウム、ナトリウム、カルシウム、コバルト等の塩が適宜用いられる。

又、目的変換酵素活性を誘導或いは酵素活性を高めるために、培養初期或いは培養途中に本酵素の基質となる一般式 [ I ] の N -置換カルボニル -Dレアミノ酸及びノ又はその塩、或いは本酵素の基質となる一般式 [ I ] の N —置換カルボニル -Dぃァミノ酸及び Z又はその塩の構造類似体等を微生物の生育を妨げない程度添加し培養することも出来る。

上記の方法で得られた培養菌体及び Z又はその培養処理物を用いて本発明の光学分割を行う。

培養物を遠心分離等により培養菌体と培養ろ液に分け、置換力ルポニル基分解酵素（例えば、脱ァシル基酵素）が菌体内に存在する場合は、この培養菌体及びノ又は菌体処理物を用いる。

ここでいぅ菌体処理物とは、培養菌体の超音波処理物、ゴ一リン、ホモジナイザー破砕や培養菌体のァセトンゃトルェン等の有機溶媒による処理物、更には培養菌体をトライトン X - 1 0 0等の界面活性剤処理した物等を示す。

又、公知の方法を適宜組合わせて培養菌体より酵素を精製し、各々異なる精製度の酵素標品を用いることも出来る。

置換力ルポニル基分解酵素（例えば、脱ァシル基酵素）が菌体外に存在する場合は、培養ろ液より酵素を精製採取して用いる。

又、培養菌体、菌体処理物又は異なる精製度の酵素標品を、公知の方法により担体に固定化し、これを反応に用いることも本発明の好ましい一形態である。

担体としては、固定化処理により酵素が失活しない限り、どのような担体でもよく、アルギン酸、カラギーナン、キトサン、ポリアクリルアミド、光架橋性樹脂等が挙げられる。

又、本発明の基質となる一般式 [ I ] の N -置換カルボ二ル- D いアミノ酸及び又はその塩の濃度には制限ないが、通常 0 . 0 5〜 2 0 %で使用する。

反応温度は 1 0〜 6 0 ^eC、好ましくは 2 0〜 5 0でである。反応 p Hは 4〜： 1 0、好ましくは 6〜 9の範囲で 0 . 5〜 2 4 時間反応する。

反応液から D-アミノ酸と N —置換カルボニル—いアミノ酸を分離するには、例えば濃縮、等電点沈澱等による直接晶析法や、ィオン交換樹脂処理、膜分離等の公知の方法により行うことが出来生成した D-ァミノ酸の定性と定量は薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィ一による方法を用いることが出来る。又、光学的異性体は、旋光度分析、光学異性体分離カラムを用いた高速液体クロマトグラフィ一により判別することが出来る。

尚、未反応の N -置換カルボ二ル-いァミノ酸は常法により化学的にラセミ化し、再び上述の反応に供することが出来る。

本発明によれば、アミドカルボニル反応を行い容易に化学合成出来る N -置換カルボニル -DL-ァミノ酸及びノ又はその塩から光学活性体である D-ァミノ酸及び N —置換カルボ二ルーいァミノ酸を簡単な工程で、且つ温和な条件で選択的に製造することができる

本発明に用いる置換カルボニル基分解酵素は、パリン、メチォニン、フヱニルァラニン等の N -置換カルボニル体の D-体の置換カルボニル基のみを効率よく分解し、高い光学純度を持つ D-アミノ酸を生成する。発明を実施するための最良の形態 ―

以下、本発明を実施例に基づいて詳細に説明するが、本発明はこれによつて限定されるものではない。

実施例 1

ロドコッカス ' 口ドクロス 2 0 3 0 - 2株を下記の組成の培地 5 m 1 を入れた ø 1 8 m mの試験管に 1 白金耳接種し、 2 5でで 4 8〜 7 2時間振盪培養した

表 3 ：培地組成

N—べンゾィル -DL-フェニルァラ二ン 5 g

N a C 1 0. 1

H₃ B 0₃ 0 3 m g Z n C 1 2 0. 7 5 m g

F e C 1 3 · 6 H 2 0 2. 5 m g (NH₄ ) Μθ 7 0₂₄ · 4 H₂ 0 0. 1 m g K₂ H P 0₄ 3 g

C a C 1 2 2 H₂ 0 0 1 g

M n C 1 2 4 H₂ 0 0 2 m g C u S 0₄ 5 H₂ 0 0 2 m g

蒸留水 1 0 0 0m l H 0 培養液を TL Cにスポットし、展開して変換活性を調べた。安息香酸の検出は培養液を酢酸ェチルで抽出後、酢酸ェチル層をメルク社製薄層シリ力ゲルプレート 6 0 F₂₅₄ にスポットし、 n— へキサン：酢酸ェチル = 7 ： 3の系で展開後、 UVランプを照射してその生成を確認した。又、生成したフヱニルァラニンの D-体. い体の分析はシリ力ゲル— HPTL Cプレート（メルク社製キラルプレート Art.14285)を用いて行った（展開溶媒 M e 0 H : H 2 0 : C H 3 CN= 5 0 ： 5 0 ： 3 0 ) 。ニンヒドリン試薬をかけてその位置を確認した所、 D-フヱニルァラニンの生成が認められた。

実施例 2

ロドコッカス ' ロドクロス 2 0 3 0— 2株を NB培地が 5 m 1入った ø 1 8 mmの試験管に 1 白金耳接種し、 2 5でで一夜振盪培養した。これを前接種菌として下記の組成の培地 1 0 0m l を入れた 5 0 0 m l容の三角フラスコに 1 %となるように植菌し. 2 5でで 7 2時間、 1分間 1 5 0回転で旋回振盪培養を行った。この際、培養開始 2 4時間後に酵素生産を誘導する意味で N -べンゾィル -Dぃフェニルァラニンを終濃度 0. 0 5 %となるように添加し、更に 4 8時間培養を行った。

表 4 ：培地組成ガラクト一ス 3 %

肉ペプトン 1 %

K C 1 0. 3 7 g

蒸留水 1 0 0 0 m l

P H 7. 0 培養液を遠心分離（ 1 0， 0 0 0 r pm、 2 0分間）し、菌体を得た。得られた菌体を用いて下記の反応条件に従って変換反応 ¾行った 0 反応条件；菌体 1 0 %、基質（N—ベンゾィル- Dぃフヱニルァラニン） 0. 1 4 %、 1 0 mM リン酸塩緩衝液 p H 7. 5、 3 7 °C

所定時間培養後の反応液の分析は下記の条件に従って行った。 —表 5 _:

A. 基質及び生成物の定量分析条件

カラム； CHIRAし CEL 0D-R (ダイセル化学社製）

0. 4 6 2 5 c m

溶離液； CH₃ CN/ 0. 5 M N a C 1 0₄

-HC 1 0₄ P H 3. 0 ( 6 0 / 4 0 )

流量； 0. 5 m 1 / m i n .

力ラム温度； 2 5て

検出器； U V検出器（ 2 5 4 nm)

B. 光学活性物質の定量分析条件

カラム； MCI-GEし GRS10W (三菱化成社製）

4. 6 5 0 mm

溶離液； 2mM C u S 04 , 5 % M e OH

流量； 1 m 1 /m i n .

力ラム温度； 3 0で

検出器； U V検出器（ 2 5 4 nm) 測定結果を下記する表 6 ：測定結果；

1. 5時間後変換率 2 2 %

D -フエ二ルァラニン L-フヱ二ルァラニン

= 8 3 : 1 7

1 9時間後変換率 4 4. 5 %

D-フヱニルァラニン L-フエ二ルァラニン

= 8 9 : 1 1

* DMS 0を 5 %含有する場合も同様の結果を与えた, 実施例 3

ピメロバクタ一 · シンプレックス 1 5 9 8— 1株を下記の培地 5 m 1を入れた ø 1 8 mmの試験管に 1白金耳接種し、 2 5 °C で 4 8〜 7 2時間振盪培養した。

表 7 ：培地組成

N—ベンゾィル- DL-フェニルァラニン 5 g

g S 0₄ · 7 H 2 0 0. 2 g 蒸留水 1 0 0 0m l

P H 7. 0 培養液を TL Cにスポットし、展開して変換活性を調べた。安息香酸の検出は培養液を酢酸ェチルで抽出後、酢酸ェチル層をメルク社製薄層シリカゲルプレート 6 0 F ₂₅₄ にスポットし、 n— へキサン：酢酸ェチル = 7 ： 3の系で展開後、 UVランプを照射してその生成を確認した。又生成したフヱ二ルァラニンの D-体、い体の分析はメルク社のキラルプレートを用いて行った（展開溶媒 M e OH : H₂ O : C H₃ C N= 5 0 : 5 0 : 3 0 ) 。ニンヒドリン試薬をかけてその位置を確認した所 D-フヱニルァラニンの生成が確認された。

培養温度を 3 0で、培養時間を 7 2時間にした以外は上記の手順に従って培養し、実施例 2に記載の分析条件に従って測定した結果を下記する。

表 8 : 測定結果

変換率 4 % (フヱ二ルァラニン生成濃度 0. 0 2 %) 含有割.合 D-フエ二ルァラニン：いフエ二ルァラニン

= 1 0 0 : 0 実施例 4

ピメロパクター ' シンプレックス 1 5 9 8 — 1株を N B培地が 5 m 1入った ø 1 8 mmの試験管に 1 白金耳接種し、 2 5 で一夜振盪培養した。これを前接種菌として下記の組成の培地 1 0 0 m l を入れた 5 0 0 m l容の三角フラスコに 1 %となるように植菌し、 2 5 °Cで 7 2時間、 1分間 1 5 0回転で旋回振盪培養を行った。表 9 ：培地組成

N—ベンゾィル -Dレフヱ二ルァラニン 1

M g S 0₄ · 7 H 2 0 0. 5 g

(ΝΗ₄ ) 2 S 0₄ 3 g

酵母抽出物 5 0 m g

Μη S 0₄ · 4〜5 Η₂ 0 8 m g

蒸留水 1 0 0 0 m l Ρ Η 7. 0 培養液を遠心分離（ 1 0, 0 0 0 r pm、 2 0分間）し、菌体を得た。得られた菌体を使用し、下記の反応条件により所定の時間反応を行った。

反応条件；菌体 1 0 %、基質（N—ベンゾィル -Dぃフヱニルァラニン） 0. 1 4 %、 1 0 mM リン酸塩緩衝液 pH 7. 5. 3 7 °C

培養液の分析は、実施例 2に記載の分析条件に従って測定した,

— 表 1 0 _:

1時間後変換率 2 3. 6 %

D-フエ二ルァラニン： L-フエ二ルァラニン

= 8 5 : 1 5 D S 0 5 %含有

1 時間後変換率 2 6. 1 %

D-フュ . ルァラニン： L-フヱニルァラニン

= 9 0 1 0 実施例 5

ロドコッカス ' ロドクロス 2 0 3 0 — 2株の粗酵素液を用いてァセチル体、ベンゾィル体の数種類のァミノ酸について基質特異性を調べた。

用いた基質を下記する：

N—ァセチル- DL-ァラニン、 N—ベンゾィル -DL-ァラニン、 N ーァセチル -Dし-バリン、 N—ベンゾィル - DL-バリン、 N—ァセチル- Dいロイシン、 N—ベンゾィル -Dいロイシン、 N—ァセチル -D L-メチォニン、 N—ベンゾィル -DL-メチォニン、 N—ァセチル -D L-フヱニルァラニン、 N—ベンゾィル -DL-フヱニルァラニン。

それぞれの基質について 0. 2 %濃度の 5 0 % DMS O液を調製し、粗酵素液 1 0 0 1 に同量の基質を添加し、 3 0 、 1 6 時間変換反応を行いキラルプレートで活性を調べた結果、 N -べンゾィル -Dぃバリン、 N—ベンゾィル -DL-メチォニン、 N—ベンゾィル -Dレフヱ二ルァラニンに対して D-体特異性が顕著に認められ、ァセチル体よりもベンゾィル体に特異性が高い結果が得られた。産業上の利用可能性

以上のように、本発明の方法によれば、アミドカルボニル反応を行い容易に化学合成出来る N -置換カルボニル -Dぃァミノ酸及び Z又はその塩から光学活性体である D-ァミノ酸及び N—置換力ルポ二ル- L-ァミノ酸を簡単な工程で、且つ温和な条件で選択的に製造することができる。

また、本発明に用いる置換カルボニル基分解酵素は、パリン、メチォニン、フエ二ルァラニン等の N —置換カルボニル体の D-体の置換カルボニル基のみを効率よく分解し、高い光学純度を持つ D-ァミノ酸を生成する。

Claims

請求の範囲一般式 [ I ]

0

RCH₂CHC0H [ I ]

HNR¹

(式中、 Rは水素原子、炭素原子数 1 ないし 1 0のアルキル基、ハロゲン原子により置換された炭素原子数 1 ないし 1 0のアルキル基又はフュニル基を表し、

R ¹ は炭素原子数 1 ないし 1 0のアルカノィル基、ベンゾィル基、ハロゲン原子により置換された炭素原子数 1〜 5のアルカノィル基、又はハロゲン原子により置換されたベンゾィル基を表す。）で表される N -置換カルボニル -DL-ァミノ酸及びノ又はその塩に、ロドコッカス（Rhodococcus) 属とピメロバクタ一（Pime l o bac ter) 属の細菌から選ばれた微生物の培養菌体及び/又はその培養処理物を作用させることにより、光学分割を行うことを特徴とする D-アミノ酸及び N —置換カルボニル -L- ァミノ酸の製造方法。

2 . ロドコッカス（Rhodococcus) 属から選ばれる細菌が口ドコッカスロドクロス 2 0 3 0 — 2株である請求項 1記載の製造方法。

3. ピメロバクタ一（Pimelobacter) 属から選ばれる細菌がピメロバクタ一 ' シンプレックス 1 5 9 8 — 1株である請求項 1記載の製造方法。