UA129819C2 - Комплект для оптимізованого одержання аутологічного фібринового гелю ех tempore для використання в хірургії - Google Patents

Abstract

Винахід належить до галузі медицини, а саме до хірургії, і може бути використаний для обробки поверхневих ран, герметизації лінії швів, забезпечення регенерації уражених кісткових і м'яких тканин і зниження інтенсивності прояву запальних процесів шляхом використання зручного при хірургічному застосуванні комплекту для оптимізованого одержання аутологічного фібринового гелю з власної крові пацієнта за допомогою розчину ензимного активатора згортання крові, строк зберігання ензиматичної активності якого за кімнатної температури становить 12 міс., що дає можливість його використання в хірургії ex tempore. Комплект складається зі стерильного шприца, заповненого сумішшю стерильних розчинів реагентів: ензимного активатора згортання крові та кальцію хлориду, і стандартної стерильної вакуумної системи для забору крові, що містить розчин натрію цитрату, для одержання аутологічної плазми крові пацієнта.

Description

Винахід належить до медицини, а саме до хірургії, і може бути використаний для обробки поверхневих ран, герметизації лінії швів, забезпечення регенерації уражених кісткових і м'яких тканин, а також для зниження інтенсивності прояву запальних процесів шляхом використання зручного при хірургічному застосуванні комплекту для оптимізованого одержання аутологічного фібринового гелю з наступним нанесенням його на уражену ділянку. При цьому гель одержують з власної крові пацієнта за допомогою ензимного активатора згортання крові.

Заключний етап згортання крові покладено в основу розробки та впровадження в клінічну практику багатьох синтетичних матеріалів та біологічних "клеїв". Біополімери використовують у різних галузях хірургії а також у ветеринарії для стимуляції остеосинтезу та зниження інтенсивності прояву запальних процесів при переломах кісток у тварин (|1-51|.

Відомо про використання гетерологічного "фібринового клею" як хірургічного адгезиву чи гемостатичного агента у вигляді спеціальних наборів, що містять концентрований фібриноген, одержаний з плазми крові донорів, у поєднанні з протеїновим активатором тваринного походження, таким як тромбін чи батроксобін, для одержання гетерологічного "фібринового клею" І6-131|.

Відомо про пристрій на основі "однокомпонентного" шприца для приготування та доставки/введення фібринового герметика шляхом гель-фільтрації через РО-10 розчину, що містить: (а) фібрин або (б) фібриноген та фактор ІІ (14). Після проходження розчину через РО-10 протягом часу від 5 с до 1 год. при температурі 21-25 С утворюється фібриновий гель.

Недоліками цього пристрою є складність стандартизації процесу утворення фібринового гелю, складність підтримання стерильності.

Відомо про використання комплекту для виготовлення фібринового гелю (15), який складається з трьох компонентів (кріопреципітат тваринного походження, тромбіноподібний ензим з отрути СтгоїаЇш5 дигіззив Тепійсив5, 25 ММ розчин кальцію хлориду), які поставляють в окремих флаконах і заморожують при -20 С до використання. Перед роботою флакони залишають за кімнатної температури (від 15 до 25 С) на 10-20 хв для розморожування. Для отримання фібринового композиту використовують три шприца. Розчин хлориду кальцію вводять у флакон з тромбіноподібним ензимом, струшують і потім відкладають убік. За допомогою іншого шприца аспірують весь вміст кріопреципітату і одночасно застосовують два о шприци паралельно і під кутом ділянки аплікації. За кілька секунд спостерігають утворення напівпрозорого згустка. Недоліками цього комплекту є використання компонентів тваринного походження, що може бути причиною інфікування; відсутність стабілізації згустка, утвореного під дією тромбіноподібного ензиму, фактором ХіШа; довготривалість процедури одержання фібринового гелю.

Відомо про комплект для одержання двокомпонентного фібринового "клею" МІЗТА5БЕАГ (161, що складається з двох окремих упаковок: 1) упаковка, що містить по одному шприцу зі стерильними замороженими розчинами фібриногену людини 80 мг/мл (компонент 1) та тромбіну людини 500 МО/мл (компонент 2), які зібрані у шприці; 2) упаковка, що містить подвійний аплікатор, МІЗТАБЕАЇ із двома додатковими насадками для безповітряного розпилення.

Недоліками використання цього комплекту є ризик розвитку реакції гіперчутливості (алергія, нудота, біль під час процедури), а також ризик передачі збудників інфекції - вірусів, збудника хвороби і варіанта хвороби Крейтцифельдта-Якоба (СО і мСОВ).

Відомо про комплект для виробництва двокомпонентного "фібринового клею", "Тіввисої Кі" (Вахіег), який складається з чотирьох флаконів, що містять: 1) фібриноген людини; 2) апротинін бичачий; 3) тромбін людини; 4) СасСі»; 5) аплікаційний набір "Система Дуплоджект" |171.

Недоліками застосування цього комплекту є наявність компонентів тваринного походження; швидке і ретельне змішування компонентів гелю перед внесенням їх у систему Дуплоджект, де відбувається їх безпосередня взаємодія; тривалий час полімеризації, залежність дії препарату від температури (найкращий результат досягається при підігріванні розчинів до 37 "С).

Загальними основними недоліками застосування гетерологічних препаратів "фібринового клею" є можливість передачі гематогенних інфекцій (насамперед гепатиту В, С та ВІЛ-інфекції), складність виконання та багатостадійність процесу одержання "фібринового клею", складність застосування (багатокомпонентність, необхідність дотримання часу полімеризації в залежності від концентрації тромбіну, можливість спонтанної полімеризації у флаконі з фібриногеном, утворення згустка безпосередньо в трубці для змішування компонентів наприкінці його застосування). Додатковим недоліком препаратів "фібринового клею" є необхідність місцевого введення високих доз екзогенного тромбіну тваринного або людського походження.

Відомо про системи для одержання аутологічного "фібринового клею" з власної крові пацієнта (18-20), які, на відміну від гетерологічних "фібринових клеїв", не містять екзогенного 60 тромбіну або компонентів плазми крові великої рогатої худоби. Аутологічна природа

"фібринового клею" дозволяє повністю уникнути ризику передачі вірусної або пріонної інфекції.

Проте їхнє застосування потребує спеціального обладнання.

Відомо про систему Стуозеа! Е5 Зузіет (Тпептодепезіз Согр. США), що складається з автоматизованого пристрою та супутніх стерильних одноразових матеріалів для обробки крові 181. Як вихідна сировина використовується свіжозаморожена аутологічна плазма крові (200-400 мл), з якої за одну годину можна одержати 4 дози по 2-4 мл кожна стерильного фібринового гелю у спеціальних двошприцевих системах, готових до застосування. В одному шприці знаходиться кріопреципітат, в іншому (спареному) - тромбін. Процес одержання фібринового гелю відбувається у закритій стерильній системі. Після нанесення фібриновий гель застигає за 3-5 секунд. Максимальна міцність фібринової плівки досягається через 1 годину. Недоліком системи Стуобеа! БЕ5 бБубзіет є забір великого об'єму крові пацієнта, використання кріопреципітату, короткий час застигання фібринової плівки, що ускладнює його аплікацію на місце хірургічного ураження.

Відомо про систему Мімовіаї (МімоІшіоп А/5, ВігКегод, Оептагк) - медичний пристрій для періопераційного одержання та нанесення аутологічного фібринового гелю, одержаного з плазми крові пацієнта (19). Складається з З основних компонентів: процесор; аплікатор; одноразовий комплект для пацієнта з аерозольним пристроєм, який містить усі необхідні компоненти для приготування та аплікації фібринового гелю. Полімеризаційний процес ініціюється батроксобіном (тромбіноподібний ензим із отрути Воїпгорз аїгох тоо|епі), який діє на фібриноген плазми крові пацієнта. Завершення процесу залежить від ендогенного тромбіну.

Мімовіаї зузієт готує 5-6 мл аутологічного фібринового гелю з 120 мл крові за 23-30 хв; кінцевий продукт може зберігатися при кімнатній температурі до 8 год. без втрати ефективності дії.

Недоліком цієї системи є використання великого об'єму крові пацієнта, а також те, що фібриновий згусток, утворений під дією батроксобіну, не стабілізується фактором ХППа.

Найближчим аналогом винаходу, що заявляється, є набір для одержання фібринового гелю з власної плазми крові пацієнта (21|Ї. До складу комплекту входять стерильні компоненти в окремих флаконах: аутологічна плазма крові, ліофілізований ензимний активатор, фізіологічний розчин, розчин кальцію хлориду. Аутологічний фібриновий гель одержують шляхом взаємодії аутологічної плазми крові пацієнта та ензимного активатора протромбіну, виділеного з отрути о ефи багатолускової (Еспіз тийіздциатайш5), за присутності іонів кальцію, що забезпечує утворення тромбіну в плазмі крові, який, у свою чергу, приводить до перетворення фібриногену на фібрин із утворенням фібринового гелю, що має адгезивні властивості. Швидкість утворення фібринового гелю залежить від кількості ензимного активатора, доданого до плазми крові, час його утворення триває від 50 до 100 с Недоліками найближчого аналога є використання ліофілізованого ензимного активатора, що передбачає додаткове введення до складу набору розчинника, а також обумовлює додаткові маніпуляції під час розчинення ензимного активатора протромбіну, що ускладнює використання комплекту, порушує стерильність при змішуванні інгредієнтів, подовжує тривалість процесу підготовки реагентів для приготування фібринового гелю.

Зважаючи на те, що ензимний активатор протромбіну не безпосередньо забезпечує формування фібрину, а діє опосередковано - через активацію протромбіну з утворенням тромбіну, то саме застосування ензимного активатора дає можливість регулювати час фібриноутворення.

Задачею винаходу, що заявляється, є створення зручного у використанні комплекту для оптимізованого одержання аутологічного фібринового гелю (далі - Комплекту) з можливістю одержання його ех (етроге для використання в хірургії.

Задачу винаходу, що заявляється, вирішують шляхом: - оптимізації приготування ензимного активатора згортання крові (далі - ензимного активатора) у вигляді розчину для тривалого зберігання, підбору умов приготування такого 5О розчину та визначення терміну збереження ензиматичної активності у ньому; - використання стерильного шприца як пристрою для одержання та нанесення аутологічного фібринового гелю на ділянку хірургічного втручання; такий стерильний шприц в стерильній герметичній упаковці містить стерильні розчини ензимного активатора та кальцію хлориду, що дає можливість використання цих реагентів для одержання аутологічного фібринового гелю ех етроге після їх змішування у цьому ж шприці з плазмою крові пацієнта безпосередньо перед застосуванням з наступною аплікацією на поверхню рани або в підшовний простір до застигання, що значно прискорює час його одержання порівняно з використанням ензимного активатора в ліофілізованому вигляді (21), забезпечує дотримання стерильності на всіх етапах виготовлення, відзначається зручністю його аплікації на уражену поверхню, швидким 60 утворенням водо - та повітронепроникної плівки, простотою застосування;

- використання у складі Комплекту стандартної стерильної вакуумної системи для забору крові пацієнта, що містить стерильний розчин натрію цитрату.

Характеристика компонентів Комплекту та реагентів. 1. Стандартний стерильний шприц в герметичній упаковці, який містить реагенти для одержання аутологічного фібринового гелю: суміш розчинів ензимного активатора та хлориду кальцію. Використання такого стерильного шприца забезпечує легке набирання до нього точної кількості плазми крові пацієнта та зручне перемішування плазми крові пацієнта з реагентами без порушення стерильності.

Ензимний активатор згортання крові (далі - ензимний активатор) - ензим, який одержують із отрути ефи багатолускової (Еспіз тийіздчатайив5). Він є продуктом секреції та не є компонентом тканин тваринного походження (|22|. Це - нефізіологічний активатор протромбіну, тому, по- перше, він не має фізіологічних інгібіторів, по-друге, - активує фізіологічно неактивні форми протромбіну. Процес перетворення протромбіну на тромбін під дією активатора є безпосереднім тому ензимний активатор, оминаючи весь каскад згортання крові, забезпечує специфічну активацію останньої ланки процесу коагуляції та утворення аутологічного фібринового гелю навіть за гепаринотерапії (231.

Кальцію хлорид необхідний для стабілізації структури протеїнових компонентів плазми крові, забезпечення стабільного гемостазу при утворенні аутологічного фібринового гелю. 2. Стандартна стерильна вакуумна система для забору крові, що містить стерильний розчин натрію цитрату, розрахована на взяття венозної крові шляхом дозованого вакууму. Такі стандартні системи для забору крові є закритими та стерильними. Ця система містить розчин натрію цитрату у співвідношенні 9 частин крові до 1 частини цитрату натрію. Відповідає міжнародним стандартам І5БО 6710:2017. Використання стандартної стерильної вакуумної системи забезпечує одержання стерильної аутологічної плазми крові пацієнта, стабілізованої натрію цитратом, яка може лишатись у рідкому стані впродовж підготовки й проведення хірургічного втручання. Стабілізація плазми крові натрію цитратом забезпечує утворення фібринового згустка лише після активації її при змішуванні з ензимним активатором у шприці.

Для Комплекту підібрано умови зберігання ензимного активатора в розчиненому стані за кімнатної температури та визначено термін його зберігання. о Комплект відзначається можливістю його використання ех (етроге при хірургічному втручанні для одержання аутологічного фібринового гелю завдяки наявності в Комплекті стерильного шприца із заздалегідь приготованими стерильними розчинами реагентів, що не потребує додаткового часу на їх підготовку, є простим і зручним у застосуванні безпосередньо під час хірургічного втручання, аплікації його на уражену поверхню з швидким утворенням водо -та повітронепроникної плівки, не впливаючи на гемостаз у загальному кровотоці.

Створення компонентів Комплекту та умов використання наведено в наступних прикладах.

Приклад 1. Визначення оптимального складу розчину ензимного активатора для оптимізованого одержання аутологічного фібринового гелю та строку його зберігання в складі

Комплекту.

Для визначення оптимального складу розчину для зберігання ензимного активатора використовують наступні розчини: водний розчин ензимного активатора, розчин ензимного активатора в 1095 і 30 95 розчині глюкози та в 20 95 і 50 95 розчині гліцерину. Усі розчини стерилізують шляхом фільтрації. Аліквоти розчинів зберігають за кімнатної температури в захищеному від потрапляння сонячних променів місці. Строки збереження активності ензимного активатора визначають за часом, протягом якого він зберігає свою активність, тобто згортає плазму крові за певний час. Для цього 100 мкл розчину ензимного активатора в концентрації 0, 7 мкг/мл змішують із 100 мкл 0,025 М розчину СаСі» та 100 мкл пулу цитратної плазми крові донора, перемішують та візуально визначають час згортання плазми крові. Вимірювання часу згортання проводять через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12 місяців зберігання кожного розчину (фіг. 1).

Ензимний активатор після зберігання в 3095 розчині глюкози та 50 95 розчині гліцерину протягом 1-4 місяців зберігання втрачає свою ензиматичну активність; після зберігання в 10 95 розчині глюкози ензимний активатор не втрачає своєї активності впродовж 12 місяців. Однак, використання розчину глюкози не надає переваги в збереженні активності ензимного активатора порівняно з водним розчином при строку зберігання 12 місяців (фіг. 1.).

Отже, для зберігання ензимного активатора згортання крові в складі Комплекту оптимальним є його водний розчин, у якому його активність зберігається протягом 12 місяців.

Приклад 2. Визначення оптимальної концентрації ензимного активатора для оптимізованого одержання аутологічного фібринового гелю.

Для підбору оптимальної концентрації ензимного активатора для оптимізованого одержання 60 аутологічного фібринового гелю у шприци набирають по 50 мкл розчину ензимного активатора концентрацій 140, 360 ї 720 мкг/мл, до кожного шприца додають по 180 мкл розчину кальцію хлориду концентрації 34,2 мМ та 1 мл цитратної плазми крові, суміш перемішують у шприцах, переносять на чашки Петрі і спостерігають за зміною консистенції гелю у кожній з них. Візуально відзначають початок формування фібринового згустка, що проявляється окресленням чітких меж суміші, та момент формування щільного згустка, який проявляється формуванням желеподібної речовини, яка не рухається відносно чашки Петрі та тримається при її перевертанні (табл.).

Таблиця

Формування фібринового згустка за різних концентрацій ензимного активатора за використання Комплекту активатора, мкг/мл фібриноутворення, с фібринового згустка, с

Використання розчинів ензимного активатора в концентраціях 360 і 720 мкг/мл призводить до утворення щільних згустків менш як за хвилину, що ускладнює якісну рівномірну аплікацію утвореного аутологічного фібринового гелю в підшовний простір та на поверхню рани під час хірургічного втручання (табл.). Експериментально визначено, що оптимальною концентрацією розчину ензимного активатора для оптимізованого одержання аутологічного фібринового гелю є 140 мкг/мл, за якої час утворення стабільного аутологічного фібринового гелю становить 86:57 с (п-4) (фіг.1).

Таким чином, для оптимізованого одержання 1 мл аутологічного фібринового гелю з використанням Комплекту необхідно 50 мкл розчину ензимного активатора концентрації 140 мкг/мл (що відповідає 7 мкг ензимного активатора на 1 мл гелю), 180 мкл розчину 34,22 мМ кальцію хлориду та 1 мл аутологічної цитратної плазми крові. Відповідно, для оптимізованого одержання 2 мл аутологічного фібринового гелю з використанням Комплекту необхідно 50 мкл розчину ензимного активатора концентрації 280 мкг/мл (що відповідає 14 мкг ензимного активатора на 1 мл гелю), 180 мкл розчину 34,2 мМ кальцію хлориду та 2 мл аутологічної цитратної плазми крові.

Час утворення стабільного аутологічного фібринового гелю становить 86:57 с.

Приклад 3. Стерилізація розчину ензимного активатора для оптимізованого одержання аутологічного фібринового гелю.

В асептичних умовах (ламінарна шафа) стерилізують розчин ензимного активатора через стерилізаційний РЕ5 або СА фільтр з розміром пор 0,22 мкм, збираючи розчин у стерильну о пробірку. Перевірку стерильності проводять згідно з Методичними вказівками МВ-1-2004 "Контроль стерильності виробів медичного призначення" (Наказ Мо З МОЗ України Мо 322/1 від 07.12.2004 р.). Стерилізований таким чином розчин ензимного активатора відповідає вимогам "Дезінфеція, передстерилізаційне очищення та стерилізація медичних виробів в закладах охорони здоров'я" (Наказ Мо 552 МОЗ України від 10.08.2014 р.).

Розчин кальцію хлориду застосовують стандартний стерильний.

Приклад 4. Результати клінічних випробувань Комплекту за хірургічного втручання.

Проводять рандомізоване, відкрите, контрольоване, паралельне, одноцентрове, проспективне клінічне дослідження безпечності та ефективності Комплекту для стимуляції загоєння ран первинним натягом. До випробувань залучають пацієнтів, що страждають на гострі та хронічні форми комбінованого геморою та потребують проведення тотальної циркулярної гемороїдектомії зі шматковою анопластикою. Групі пацієнтів із 15 осіб після накладання швів проводять аплікацію фібринового гелю, одержаного за допомогою Комплекту, в підшматковий простір. Групі порівняння із 15 осіб Комплект не застосовують. Результати клінічних випробувань вказують на те, що Комплект є безпечним для застосування в хірургії, зокрема в проктології. Серйозних побічних явищ, а також серйозних побічних реакцій при використанні Комплекту для оптимізованого одержання фібринового гелю не зафіксовано. Крім того, оцінка частоти діастазу (фіг. 2) вказує на позитивний ефект використання Комплекту для попередження діастазу загоєння ран первинним натягом. Для одержання фібринового гелю:

А

- набирають венозну кров пацієнта об'ємом не менше ніж 2 мл у стандартну стерильну вакуумну систему для забору крові, що містить розчин натрію цитрату, для одержання аутологічної плазми крові центрифугуванням при 1000 уд впродовж 15 хв; - 1 мл одержаної аутологічної плазми крові обережно, не збовтуючи, стерильно набирають через голку шприца зі стерильними розчинами ензимного активатора згортання крові та кальцію хлориду, де відбувається утворення аутологічного гелю; - плавно перемішують утворену реакційну суміш у шприці протягом 30 с; - аплікують реакційну суміш із шприца на ранньому етапі утворення аутологічного фібринового гелю на місце хірургічного втручання (у міжшовний та/або підшматковий простір); - у місці контакту через 10:55 с утворюється фібриновий гель у вигляді желеподібної плівки; - ковалентно прошитий стабільний згусток аутологічного фібринового гелю у вигляді плівки, яка фізіологічно герметизує місце хірургічного втручання, утворюється в процесі гелеутворення за 86.7 с.

Комплект для одержання аутологічного фібринового гелю дозволяє швидко та ефективно утворити аутологічний фібриновий гель та забезпечує простоту його нанесення. Формування фібринового гелю із використанням аутологічної плазми крові пацієнта виключає небезпеку інфікування чи відторгнення, усуває загрозу алергічних реакцій, забезпечує неантигенність та відсутність подразнюючої дії. Фібриновий гель є матрицею для міграції та адгезії клітин, що сприяє регенерації м'яких тканин, знижує інтенсивність запальних процесів, забезпечує ефективне ремоделювання ураженої поверхні тканин та високу щільність прилягання до них.

Таким чином, результати клінічних випробувань Комплекту показують можливість і необхідність його використання для стимуляції загоєння ран первинним натягом у хірургії.

Приклад 5. Склад Комплекту.

До складу Комплекту входять наступні компоненти: 1) Стандартний стерильний шприц об'ємом 2 мл, призначений для отримання 1 мл аутологічного фібринового гелю - 50 мкл розчину ензимного активатора у концентрації 140 мкг/мл, 180 мкл розчину 34,2 мМ кальцію хлориду - кількість об'єктів 1 або відповідно до опису вмісту Комплекту; 2) Стандартний стерильний шприц об'ємом 2 мл, призначений для отримання 2 мл о аутологічного фібринового гелю - 50 мкл розчину ензимного активатора у концентрації 280 мкг/мл, 180 мкл розчину 34,2 мМ кальцію хлориду - кількість об'єктів 1 або відповідно до опису вмісту Комплекту; 3) Стандартна стерильна вакуумна система для забору крові, що містить розчин натрію цитрату - кількість об'єктів 1 або відповідно до опису вмісту Комплекту; 4) Інструкція "Комплект для одержання аутологічного фібринового гелю" - у кількості 1.

За потреби отримання більшого об'єму фібринового гелю співвідношення компонентів можуть бути масштабовані пропорційно.

Таким чином, створено Комплект, що заявляється, використанням якого досягають наступних переваг над найближчим аналогом, а саме: - можливість застосування Комплекту при хірургічному втручанні ех їетроге з розділенням у часі різних етапів процесу підготовки до одержання та одержання аутологічного фібринового гелю; - використання стерильного розчину ензимного активатора концентрації 140 мкг/мл, який не втрачає ензиматичну активність впродовж 12 місяців за кімнатної температури; - зменшення часу підготовки для одержання фібринового гелю безпосередньо під час хірургічного втручання, завдяки використанню стандартного стерильного шприца, який містить готові стерильні розчини реагентів - ензимного активатора й кальцію хлориду, у якому відбувається змішування цих розчинів з аутологічною плазмою крові з утворенням аутологічного фібринового гелю та нанесення його шприцом на поверхню хірургічного втручання; - наявність стерильної вакуумної системи об'ємом не менш ніж 2 мл, що містить стерильний розчин натрію цитрату, для забору крові пацієнта; - можливість і зручність використання стерильного шприца для одержання аутологічного фібринового гелю за рахунок наявності на шприці поділок, що вказують об'єм.

Застосування аутологічного фібринового гелю виключає небезпеку інфікування чи відторгнення, усуває загрозу алергічних реакцій, відзначається неантигенністю та відсутністю подразнюючої дії на прилеглі тканини, сприяє регенерації м'яких тканин, знижує інтенсивність запальних процесів, забезпечує ефективне ремоделювання ураженої поверхні тканин та високу щільність прилягання до них. Комплект, що заявляється, може бути рекомендований для широкого клінічного використання в хірургії, ортопедії, травматології, комбустіології, акушерстві, бо гінекології, косметології, ветеринарії.

Комплект, що заявляється, розроблено в відділі структури і функції білка Інституту біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України. Клінічні дослідження проведено на базі ТОВ "Мед Сервіс

Консалтинг".

Підписи до фігур креслень 1. Фіг. 1. Залежність часу початкового етапу згортання плазми крові за дії ензимного активатора від часу його зберігання за кімнатної температури протягом періоду до 12 міс. у різних розчинах: у водному розчині, у 10 95 та 30 95 розчинах глюкози та в 20 95 й 50 95 розчинах гліцерину. 2. Фіг. 2. Частота появів діастазу у пацієнтів, яким застосовували Комплект (б) та у пацієнтів групи порівняння (К) на 1-7 та 8-14 добу після проведення шматкової анопластики.

Перелік джерел посилання: 1. бопоз, М., ОеєгекКа, Х., Саїсіоїагі, Е. Те изе ої Біоасіїме Тасіог5 0 еппапсе ропе гедепегаїйіоп:

А паїтаїйїме геміем/ // 9. Сііп. Реподопіо!. 2019-46(Зиррі. 21). Р. 124-161. 2. МіпКІег Т., Заз5 Б.А., Юда О.М., 5сптіаєВієек К. А геміеєм ої ріотаїгегіаіє5 іп Ббопе аегтесі

Пеаїїпоу, гетаїпіпд 5погісотіпд5 апа їшшге орропипйевз Тог ропе їїззце епдіпеегіпуд // Вопе Ооїіпі

Кез. - 2018. - 7(3). - Р. 232-24. 3. ОІеуа, М.С., Азади! ІвІать, А., Нацас, М., Нагародеї, М. ЕПесів ої ріаїеІейтісп ріазта апа сагропаїед пудгохуарашйе сотБіпайоп оп сгапіа! детесїі Вопе Кедепегайоп: Ап апітаї! вішду //

УМоцпа Меадісіпе. - 2018. -21. - Р. 12-15. 4. Кокибо Т, едійог. Віосегатісз апа іНеїг сіїпіса! арріїісайоп5. Абіпаїоп: Ууосапеай Рибіїзпіпа. - 2008. - 784 р. 5. ОПітіге 5.Р. Загкаг, Маап К.К.А., МиКНегее 5., Стаулога К.Е., апа МиКпораднуау К.

Роїутегіс Магегіа!І5 Тог Нетозіаїййс М/ошипа Неаїпао // Рнагтасецшіісв.- 2021-13(12).-Р. 2127. б. Веремеенко К.Н., Кизим А.И., Мошковский Г.Ю., Соломко А.В., Фурманов Ю.А. "Применение композиций фибрина в хирургии (обзор литературь)" // Клин. Хирургия. - 1989. - 10. - Є. 48-52. 7. УаскКзоп МЕ, Тапег ММ, Вигде УК, еї аі.: Нетозіайс ейісасу ої а ПбБгіп зеаїапі агезвзіпд іп ап апіта! тоадеї! ої Кідпеу іп)игу // 9. Тгацта. - 1998. - 45. Р. 662-5. 8. Кгат, Н.В., Сагсез М.А., КіІвіп 5.К., ЗпоетаКег М.С. Соттоп бБііе дисі апазіотовів изіпд о Тргіп діне // Агсп. 5ига. - 1985-1200. - Р. 1250-6). 9. Кобетпіз І. М., ОЮ. ВиКнагу, С Ми. Г.. Маїадіміезо, апа М. Тігеїйй. Рібгіп Маїйгісез аз (Іпіесіабіє)

Віотагегіа!в: Рогтайоп, СіїіпісаІ! Ове, апа МоіІесшаг Епдіпеегіпуд // Масготої. Віовсі. - 2020. - 20(1) - е1900283. 10. Міп: Р.О., Мауегїз І., Амегу М., Нападап Н.С., Вигк5 5.0., Зроїпії; М.О. Рібгіп зеаїІапі: сіїпіса! изе апа (Пте демеІортепі ої те Опімегейу ої Мігдіпіа Тіззвце АдПевзіме Сепіег //Апп. Сііп. І аб.

Зсі. -2001. - 31(1). -108. -Р. 1824-27. 11. Мгизпаїї Внпадай апа Майнем Г. ВесКег. ЮОедгадаріє Дапевімез Тог Зигдегу апа Тіззце

Епдіпеегіпд //Віотасготоїесціев. -2017. - 18.- Р. 3009-39. 12. Тареіе С, М. Мопіапа, С Сипі, Ти. Тепте, Р. Каїпеїої, 5. СепзоїІеп, Р. Мапеїе. Огдапіс

Сіцез ог Рібгіп Сіцебз їот Рооіед Ріазта: ЕйПісасу, Заїегу апа Роїепійа!І аз 5сайпоЇй Оеїїмегу

Зузіетзв //У. Рпагт. Рпагтасецйі. 5сі. - 201 -515(1).-124-40. 13. Майніаз В., зштапп М., Гиптапп Т., Меїпеї! Ї.. Ріргіп ЗеаїІапів: СпаПепдез апа БоїЇшіоп5 //

АС5З Віотаїгег. Зсі. Епд. - 2022. - 8(6). - 2220-2231. дої: 10.1021/ас5ріотагегіа!5.1с01437). 14. 05 2015/0272562 А1. 15. ММО2015172215, 2015. 16. НІСН'ІСНТ5 ОЕ РКЕЗСКІВІМО ІМЕОКМАТІОМ, 12/2021) МІЗТАЗЕАЇ. 17. ЕопеІпу Кепе Н, АІехападег Н Рецег-Рисппег, Кагі 5 СІазег, Неїіп7 Кеаї. Ове ої Яргіп зеаїІапі (Тіззеє|/Тіззисої) іп пепіа гераїг: а зувіетаїйіс геміем/ // Бигд. Епдовзс. -2012 ди. -26(7). -Р. 1803-12. дої: 10.1007/500464-012-2156-0. Ериб 2012 дап 26). 18. Виспйа С, ОейКе М, Рипомісв РТ, НосКег Р, КпоріІ Р, Маспег М, еї аї. Рібгіп зеаїапі ргодисей ру Ше Стуобеаів Е5 Зузіет: ргодисі сПпетівігу, таїегіа! ргорепіе5, апа розвзіріе ргерагайоп іп Те ашоіодоиз ргеорегаїйме зеціпд // Мох запо. - 2004. - 86. - Р.257-62. 19. Каегдага Н.К., У.Е. Раїгбгоїйег, 5/А/ СедегпоЇ!т-УМіШате5, Р.А.О. Едулагазоп, О.А.

Ноїїїпозбее, Н.-Е. Ноїт. Те Мімовіаї Зузіет ог Ше Ашотаїйей Ргерагайоп ої Ашоіодоив Рібгіп зеаїапі // СМЕ. - 1997. -2(3). -Р. 204-6. 20. 05 6592599 В2, ці. 15, 2003. 21. ОА 113094 С2, 12.12.2016, Бюл. Мо23. 22. БоІомем О.А, Ріаїопома Т.М., Одагома Т.Р. ІзоЇїайоп апа сНагасієгівзіс5 ої еКкатиїїп-а ргоїйготбіп асіїмаєог їот тийізсаіейд мірег (Еспіз типіздцатацйив5) мепот // ВіоКпітіїа (Мозсому, бо Киззіа). - 1996. - 61(6). - Р. 1094-1105.

23. Когоїома О0.5., СпегпузпепКо Т.М., Согпйї5Ка О.М., СпегпузпепКо М.О., Ріаїопома Т.М.

Меїігоїйготрбіп ргерагайоп апа йїї5 гоїЇе іп Ябгіп Топпайоп апа ріаїееї аддгедайоп // Адмапс. Віовсі.

Віоїесп. - 2014. - 5. - Р. 588-95. 24. Чернишенко В.О. Пошук та вивчення механізмів дії нових біологічно активних сполук та біоматеріалівб, що впливають на згортання крові. Автореф. дис, ... д.б.н. 03.00.20 - біотехнологія. - Київ, 2021.-48 с.

Claims (3)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Комплект для оптимізованого одержання аутологічного фібринового гелю ех Їетроге для використання в хірургії, до складу якого входять: ензимний активатор згортання крові, виділений із отрути ефи багатолускової (Еспівє тийіздциатайшв5), та розчин кальцію хлориду, який відрізняється тим, що комплект містить наступні компоненти: стандартний стерильний шприц, що містить стерильні водні розчини ензимного активатора згортання крові та кальцію хлориду - кількість об'єктів 1 або відповідно до опису вмісту комплекту; стандартну стерильну вакуумну систему для забору крові пацієнта, яка містить стерильний розчин натрію цитрату - кількість об'єктів 1 або відповідно до опису вмісту комплекту.

2. Комплект за п. 1, який відрізняється тим, що стерильний шприц містить 50 мкл розчину ензимного активатора згортання крові в концентрації 140 мкг/мл і 180 мкл розчину кальцію хлориду концентрації 34,2 мМ або 50 мл розчину ензимного активатора згортання крові в концентрації 280 мкг/мл і 180 мкл стерильного розчину кальцію хлориду концентрації 34,2 мМ.

3. Комплект за будь-яким з пп. 1, 2, який відрізняється тим, що його використовують ех Іетроге під час хірургічного втручання шляхом: додавання аутологічної плазми крові пацієнта до стерильного шприца, що містить готові стерильні розчини ензимного активатора та кальцію хлориду, перемішування у шприці до однорідного стану утвореної реакційної суміші, інкубації її протягом ЗО с та наступної аплікації на ділянку хірургічного втручання й рівномірного розподілення на ній, утворення ковалентно прошитого стабільного гелю, який фізіологічно герметизує місце хірургічного втручання. т Ж кети

У . в ї пилюки ТИКИ х й Ех ЩІ -

що. їх я зеофе ри КИМ 7 М А зе Же тлихцлиики и ШКТ З 2 ї ЖЕ свимпиилоютик я ца МІВ . . ї сошнт т Диня дня ни ж рана Кн фена й освулАклнд КК совет ососссиці, г час, ВКА ЦІ

Фіг.

вт дане СЯ зма Кк с . в Щ У ПИПЕИННИН НН х ї ї о їв 2 З я ще не Я дмаєтач ть

Фіг.»