[go: up one dir, main page]

UA129521C2 - Аналог кон'югата анти-сеа антитілo-ексатекан та його фармацевтичне застосування - Google Patents

Аналог кон'югата анти-сеа антитілo-ексатекан та його фармацевтичне застосування Download PDF

Info

Publication number
UA129521C2
UA129521C2 UAA202202371A UAA202202371A UA129521C2 UA 129521 C2 UA129521 C2 UA 129521C2 UA A202202371 A UAA202202371 A UA A202202371A UA A202202371 A UAA202202371 A UA A202202371A UA 129521 C2 UA129521 C2 UA 129521C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
variable region
cancer
drug conjugate
light chain
Prior art date
Application number
UAA202202371A
Other languages
English (en)
Inventor
Гуа Йінг
Лангьон Мао
Сіджіа Ванг
Original Assignee
Джянгсу Хенгруй Медісін Ко., Лтд.
Шанхай Хенгруй Фармасьютікал Ко., Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Джянгсу Хенгруй Медісін Ко., Лтд., Шанхай Хенгруй Фармасьютікал Ко., Лтд. filed Critical Джянгсу Хенгруй Медісін Ко., Лтд.
Publication of UA129521C2 publication Critical patent/UA129521C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68037—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a camptothecin [CPT] or derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6853—Carcino-embryonic antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3007—Carcino-embryonic Antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

Винахід стосується кон'югата антитіло-лікарського засобу, що містить: анти-CEA-антитіло, або його антигензв'язуючий фрагмент, кон'юговане з токсинним лікарським засобом за допомогою лінкера, де анти-CEA-антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга та варіабельну ділянку легкого ланцюга антитіла, при цьому кон'югат антитіло-лікарський засіб являє собою кон’югат антитіло-лікарський засіб загальної формули (Pc-L-Y-D): , в якій: Y є -O-(CRaRb)m-CR1R2-C(O)-; Ra та Rb є однаковими або різними та кожний є незалежно вибраним з групи, що складається з водню, дейтерію, галогену та С1-6алкілу; R1 являє собою С1-6галогеналкіл або C3-6циклоалкіл; R2 є вибраним з групи, що складається з водню, С1-6галогеналкілу та C3-6циклоалкілу; або R1 та R2, разом з атомами вуглецю, що до нього приєднані, утворюють C3-6циклоалкіл; m являє собою 0 або 1; n є десятковим або цілим числом від 1 до 10; L є лінкерною одиницею; Pc являє собою анти-CEA-антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга та варіабельну ділянку легкого ланцюга, де: варіабельна ділянка важкого ланцюга включає HCDR1, HCDR2 та HCDR3, представлені у SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 та SEQ ID NO: 23, відповідно, та варіабельна ділянка легкого ланцюга включає LCDR1, LCDR2 та LCDR3, представлені у SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25 та SEQ ID NO: 26, відповідно; або варіабельна ділянка важкого ланцюга включає HCDR1, HCDR2 та HCDR3, представлені у SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 47 та SEQ ID NO: 23, відповідно, та варіабельна ділянка легкого ланцюга включає LCDR1, LCDR2 та LCDR3, представлені у SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25 та SEQ ID NO: 26, відповідно.

Description

(54) АНАЛОГ КОН'ЮГАТА АНТИ-СЕА АНТИТІЛО-ЕКСАТЕКАН ТА його ФАРМАЦЕВТИЧНЕ
ЗАСТОСУВАННЯ
(57) Реферат:
Винахід стосується кон'югата антитіло-лікарського засобу, що містить: анти-СЕА-антитіло, або його антигензв'язуючий фрагмент, кон'юговане з токсинним лікарським засобом за допомогою лінкера, де анти-СЕА-антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга та варіабельну ділянку легкого ланцюга антитіла, при цьому кон'югат антитіло-лікарський засіб являє собою кон'югат антитіло-лікарський засіб загальної формули (Рео-І-х-0):
Н
Ре ГГ - У - М сн. п - о М Х й г
М
ЧІ о оон о (Ро-І-у-0) , в якій:
М є -О-(СВаВе)т-СВН?-С(О)-;
Ваг та Р? є однаковими або різними та кожний є незалежно вибраним з групи, що складається з водню, дейтерію, галогену та Сі-валкілу;
ВА' являє собою С: вгалогеналкіл або Сзєциклоалкіл;
В: є вибраним з групи, що складається з водню, С:-вгалогеналкілу та Сзєциклоалкілу; або
Е! та Б-, разом з атомами вуглецю, що до нього приєднані, утворюють Сз-єциклоалкіл; т являє собою 0 або 1; п є десятковим або цілим числом від 1 до 10;
Ї є лінкерною одиницею;
Рс являє собою анти-СЕА-антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга та варіабельну ділянку легкого ланцюга, де: варіабельна ділянка важкого ланцюга включає НСОКІ1, НСОК2 та НСОКЗ, представлені у БЗЕО
ІО МО: 21, 5ЕО ІЮО МО: 22 та 5ЕО ІО МО: 23, відповідно, та варіабельна ділянка легкого ланцюга включає ГСОКІ1, І СОК2 та І СОКЗ, представлені у 5Е0 ІЮО МО: 24, 5ЕО ІО МО: 25 та 5ЕО І
МО: 26, відповідно; або варіабельна ділянка важкого ланцюга включає НСОКІ1, НСОК2 та НСОКЗ, представлені у ЗЕО
ІО МО: 21, БЕО ІЮ МО: 47 та 5ЕО ІО МО: 23, відповідно, та варіабельна ділянка легкого ланцюга включає ГСОКІ1, ЇСОК2 та І СОКЗ, представлені у 5Е0 ІЮО МО: 24, 5ЕО ІО МО: 25 та 5ЕО І
МО: 26, відповідно.
Представлена заявка заявляє пріоритет китайської заявки на патент (заявка на патент Мо
СМ201911294912.3) поданої 16 грудня 2019 року.
ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ
Представлений винахід стосується аналогу кон'югату анти-СЕА антитіло-ексатекан, способу його отримання, фармацевтичних композицій, що його містять, та його застосування для отримання лікарського засобу для лікування захворювання або стану, опосередкованого СЕА, особливо його застосування в отриманні протипухлинного лікарського засобу.
ПЕРЕДУМОВИ СТВОРЕННЯ ВИНАХОДУ
Наведені в даному документі твердження лише надають довідкову інформацію, що стосується представленого розкриття, та не обов'язково є попереднім рівнем техніки.
Карциноембріональний антиген (СЕА, також відомий як СЕАСАМ-5 або СОббе), глікопротеїн з молекулярною масою приблизно 180 кДа, є одним з перших виявлених опухолеасоційованих антигенів. СЕА є членом суперродини імуноглобулінів та містить 7 доменів, прикріплених до клітинної мембрани через глікозилфосфатидилінозитоловий (СРІ) якір (Тпотрзоп -.А., у Сіїп
І аб Апаї!. 5:344-366, 1991). Спочатку СЕА був виявлений в екстрактах тканин раку товстої кишки та описаний СоЇїй Р та Егеєдтап 50 (Соїй апа Егеєдтап 1965; Соїй апа Егеєдтап, 1965), та згодом повідомлялося, що СЕА виявлений у сироватці пацієнтів з раком товстої кишки та іншими пухлинами із використанням чутливих способів радіоіїмуноаналізу, тоді як вміст СЕА у сироватці здорової людини або пацієнтів з іншими захворюваннями є вкрай низьким (Ппотзоп,
Киреу евї аї!., 1969). Експресія СЕА збільшується в ракових клітинах, та підвищений рівень СЕА сприяє міжклітинній адгезії та подальшому метастазуванню клітин (Маїзпаї! у)., 5етіп Опсо).,
ЗО(Биррі. 8):30-6, 2003). СЕА, як правило, експресується в епітеліальних тканинах, включаючи клітини шлунково-кишкового тракту, дихальних та сечостатевих шляхів, та також клітини товстої кишки, шийки матки, потових залоз та передміхурової залози (Мар еї а!Ї, Титоик бБіо!., 9(2-3): 145- 53, 1988; Мар еї аЇ, Сапсег Вевз., 52(8):2329-23339, 1992). Кон'югат антитіло-лікарський засіб (АОС) зв'язує моноклональне антитіло або фрагмент антитіла з біологічно активним цитотоксином за допомогою стабільної хімічної лінкерної сполуки, повністю використовуючи специфічність зв'язування антитіла з поверхневими антигенами нормальних клітин та пухлинних клітин, та високу ефективність цитотоксичної речовини, та також уникнення першого недоліку, що полягає в слабкому терапевтичному ефекті, другого недоліку, що полягає в наявності серйозних токсичних побічних ефектів тощо. Це означає, що кон'югат антитіло- лікарський засіб може більш точно зв'язуватися з пухлинними клітинами та менше впливати на нормальні клітини в порівнянні зі звичайними хіміотерапевтичними препаратами в минулому.
На даний час у патентах, таких як МО2015069430, повідомляється про деякі антитіла, націлені на СЕА, та препарати АБС. Проте, як і раніше, існує потреба в розробці більш ефективного та безпечного кон'югату анти-СЕА антитіло-лікарський засіб для більш ефективного застосування при лікуванні пухлин, пов'язаних з СЕА.
СУТЬ ВИНАХОДУ
Представлений винахід стосується кон'югату анти-СЕА антитіло-лікарський засіб та його фармацевтичного застосування, де кон'югат анти-СЕА антитіло-лікарський засіб містить анти-
СЕА антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, кон'югований з токсинним лікарським засобом, необов'язково за допомогою лінкеру, де анти-СЕА антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент містять варіабельну ділянку важкого ланцюга та варіабельну ділянку легкого ланцюга антитіла, де:
Її НСОВІ та НСОВЗ варіабельної ділянки важкого ланцюга є однаковими з НСОВІ та
НОСОНЗ варіабельної ділянки важкого ланцюга представлені у 5ЕО ІО МО: 7, та НСОВ2 варіабельної ділянки важкого ланцюга є ідентичним до НСОН2 варіабельної ділянки важкого ланцюга представленого у 5ЕО ІЮО МО: 7, або відрізняється від нього на одну амінокислоту;
ІСОВ1, І СОВ2 та І СОВЗ варіабельної ділянки легкого ланцюга є однаковими з СОН, І! СОв2 та! СОВЗ варіабельної ділянки легкого ланцюга представлені у 5ЕО ІО МО: 8; її) НСОВІ та НСОВЗ варіабельної ділянки важкого ланцюга є однаковими з НСОВІ та
НОСОВЗ варіабельної ділянки важкого ланцюга представленим у 5ЕО ІО МО: 9, та НСОВ2 варіабельної ділянки важкого ланцюга є ідентичним до НСОН2 варіабельної ділянки важкого ланцюга представленому у 5ЕО ІЮ МО: 9 або відрізняється від нього на одну амінокислоту;
ІСОВ1, І СОВ2 та І СОВЗ варіабельної ділянки легкого ланцюга є однаковими з СОН, І! СОв2 та | СОВЗ варіабельної ділянки легкого ланцюга представленими у 5ЕО ІЮ МО: 10; ії) НСОВІТ, НСОВа2 та НСОВЗ варіабельної ділянки важкого ланцюга є однаковими з НСОНІ,
НООН2 та НСОВЗ варіабельної ділянки важкого ланцюга представленими у 5ЕО ІЮ МО: 11;
ІСОВ1, І СОВ2 та І СОВЗ варіабельної ділянки легкого ланцюга є однаковими з СОН, І! СОв2 60 та! СОВЗ варіабельної ділянки легкого ланцюга представленими у 5ЕО ІЮОМО: 12; або їм) НСОВІ та НСОВЗ варіабельної ділянки важкого ланцюга є однаковими з НСОВІ та
НОСОВЗ варіабельної ділянки важкого ланцюга представленими у 5ЕО ІЮО МО: 13, та НСОВ2 варіабельної ділянки важкого ланцюга є ідентичним до НСОН2 варіабельної ділянки важкого ланцюга представленому у 5ЕО ІЮ МО: 13 або відрізняється від нього на одну амінокислоту;
ЇСОВ1 та І СОВАЗ варіабельної ділянки легкого ланцюга є однаковими з СОН та / СОВЗ3 варіабельної ділянки легкого ланцюга представленими у 5ЕО ІО МО: 14, та І СОВ2 варіабельної ділянки легкого ланцюга є ідентичним до ЇСОН2 варіабельної ділянки легкого ланцюга представленому у 5ЕО ІЮ МО: 14 або відрізняється від нього на одну амінокислоту.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, анти-СЕА антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент в кон'югаті антитіло-лікарський засіб містить варіабельну ділянку важкого ланцюга та варіабельну ділянку легкого ланцюга, де: м) варіабельна ділянка важкого ланцюга включає НСОВІ, НСОВ2 та НСОВЗ представлені у
ЗЕО ІО МО: 15, 5ЕО ІО МО: 16 та 5ЕО ІО МО: 17, відповідно, та варіабельна ділянка легкого ланцюга включає І! СОН, І СОНВ2 та І! СОВЗ представлені у 5ЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІО МО: 19 та
ЗЕО ІО МО: 20, відповідно; або варіабельна ділянка важкого ланцюга включає НСОВІ, НСОН2 та НСОВЗ представлені у 5ЕО І МО: 15, 5ЕО ІО МО: 38 та 5ЕО ІО МО: 17, відповідно, та варіабельна ділянка легкого ланцюга включає І СОР, І СОВ2 та І СОВЗ представлені у 5ЕО ІЮ
МО: 18, 5ЕО ІО МО: 19 та 5ЕО ІЮО МО: 20, відповідно; мі) варіабельна ділянка важкого ланцюга включає НСОВІ, НСОВ2 та НСОВЗ представлені у
ЗЕО ІО МО: 21, 5ЕО ІО МО: 22 та 5ЕО ІО МО: 23, відповідно, та варіабельна ділянка легкого ланцюга включає І! СОН, І СОНВ2 та І! СОВЗ представлені у 5ЕО ІЮ МО: 24, 5ЕО ІО МО: 25 та
ЗЕО ІО МО: 26, відповідно; або варіабельна ділянка важкого ланцюга включає НСОВІ, НСОН2 та НСОВЗ представлені у 5ЕО І МО: 21, 5ЕО ІО МО: 47 та 5ЕО ІО МО: 23, відповідно, та варіабельна ділянка легкого ланцюга включає І СОР, І СОВ2 та І СОВЗ представлені у 5ЕО ІЮ
МО: 24, 5ЕО І МО: 25 та 5ЕО ІЮО МО: 26, відповідно; мії) варіабельна ділянка важкого ланцюга включає НСОНВІ, НСОВ2 та НСОВЗ представлені у
ЗЕО ІО МО: 27, 5ЕО ІО МО: 28 та 5ЕО ІО МО: 29, відповідно, та варіабельна ділянка легкого ланцюга включає І! СОН, І СОНВ2 та І! СОВЗ представлені у 5ЕО І МО: 30, 5ЕО ІО МО: 31 та
ЗЕО ІЮ МО: 32, відповідно; або мії) варіабельна ділянка важкого ланцюга включає НСОНВІ та НСОВЗ представлені у 5ЕО ІЮ
МО: 33 та 5ЕО ІО МО: 34, відповідно, та НСОВ2 представлені у БЕО ІО МО: 16 або 5ЕО ІО МО: 38; варіабельна ділянка легкого ланцюга включає І СОВА та І СОВЗ представлені у БЕО ІО МО: та БЕО ІО МО: 37, та І СОВ2 представлені у БЕО ІЮ МО: 36 або 5ЕО ІО МО: 64.
В деяких варіантах здійснення, анти-СЕА антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент в 35 кон'югаті антитіло-лікарський засіб містить варіабельну ділянку важкого ланцюга та варіабельну ділянку легкого ланцюга, де: варіабельна ділянка важкого ланцюга включає НОСОВІ, НСОВ2 та НСОВЗ представлені у
ЗЕО ІО МО: 33, 5ЕО ІО МО: 16 та 5ЕО ІО МО: 34, відповідно, та варіабельна ділянка легкого ланцюга включає І! СОН, І СОНВ2 та І! СОВЗ представлені у 5ЕО І МО: 35, 5ЕО ІО МО: 36 та
ЗЕО ІЮ МО: 37, відповідно; або варіабельна ділянка важкого ланцюга включає НОСОВІ, НСОВ2 та НСОВЗ представлені у
ЗЕО ІО МО: 33, 5ЕО ІО МО: 38 та 5ЕО ІО МО: 34, відповідно, та варіабельна ділянка легкого ланцюга включає І! СОН, І СОНВ2 та І! СОВЗ представлені у 5ЕО І МО: 35, 5ЕО ІО МО: 36 та
ЗЕО ІЮ МО: 37, відповідно; або варіабельна ділянка важкого ланцюга включає НОСОВІ, НСОВ2 та НСОВЗ представлені у
ЗЕО ІО МО: 33, 5ЕО ІО МО: 16 та 5ЕО ІО МО: 34, відповідно, та варіабельна ділянка легкого ланцюга включає І! СОН, І СОНВ2 та І! СОВЗ представлені у 5ЕО ІЮ МО: 35, 5ЕО ІО МО: 64 та
ЗЕО ІЮ МО: 37, відповідно; або переважно, варіабельна ділянка важкого ланцюга включає НОСОВІ, НСОВ2 та НСОВЗ
БО представлені у 5ЕО ІЮО МО: 33, 5ЕО ІО МО: 38 та 5ЕО ІЮО МО: 34, відповідно, та варіабельна ділянка легкого ланцюга включає І СОН, І СОР2 та І СОВЗ представлені у 5ЕО ІЮО МО: 35, 5ЕО
ІО МО: 64 та 5ЕО ІО МО: 37, відповідно.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, анти-СЕА антитіло в кон'югаті антитіло-лікарський засіб являє собою мишаче антитіло, химерне антитіло або гуманізоване антитіло.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, анти-СЕА антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, відповідно до будь-якого з вищезазначених варіантів здійснення, в кон'югаті антитіло-лікарський засіб містить варіабельну ділянку важкого ланцюга та варіабельну ділянку легкого ланцюга, де:
(а) варіабельна ділянка важкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у
ЗЕО ІО МО: 7, або амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 95 ідентичність амінокислотній послідовності представленій у 5ЕО ІО МО: 7; та/або варіабельна ділянка легкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 8, або амінокислотну послідовність що має щонайменше 9095 ідентичність амінокислотній послідовності представленій у 5ЕО ІЮО МО: 8; або (б) варіабельна ділянка важкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у
ЗЕО ІО МО: 9, або амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 95 ідентичність амінокислотній послідовності представленій у 5ЕО ІЮО МО: 9; та/або варіабельна ділянка легкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 10, або амінокислотну послідовність що має щонайменше 9095 ідентичність амінокислотній послідовності представленій у БЕО ІО МО: 10; або (с) варіабельна ділянка важкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у
ЗЕО ІЮО МО: 11, або амінокислотну послідовність що має щонайменше 90 95 ідентичність амінокислотній послідовності представленій у 5ЕО ІО МО: 11; та/або варіабельна ділянка легкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 12, або амінокислотну послідовність, що має щонайменше 9095 ідентичність амінокислотній послідовності представленій у 5ЕО ІО МО: 12; або (4) варіабельна ділянка важкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у
ЗЕО ІЮ МО: 13, або амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 95 ідентичність амінокислотній послідовності представленій у 5ЕО ІО МО: 13; та/або варіабельна ділянка легкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 14, або амінокислотну послідовність, що має щонайменше 9095 ідентичність амінокислотній послідовності представленій у 5ЕО І МО: 14.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, анти-СЕА антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент в кон'югаті антитіло-лікарський засіб містить варіабельну ділянку важкого ланцюга та варіабельну ділянку легкого ланцюга, де: (є) варіабельна ділянка важкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 39, 40, 41 або 42, або амінокислотну послідовність, що має щонайменше 9095 ідентичність будь-якій одній
Зо амінокислотній послідовності представленій у 5ЕО ІЮО МО: 39, 40, 41 або 42; та/або варіабельна ділянка легкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у БЕО ІО МО: 43, 44, 45 або 46, або амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 95 ідентичність будь-якій одній амінокислотній послідовності представленій у 5ЕО ІЮ МО: 43, 44, 45 або 46; переважно, варіабельна ділянка важкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у 5ЕО ІЮО МО: 42, та варіабельна ділянка легкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 44; або (Її) варіабельна ділянка важкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у
ЗЕО ІО МО: 48, 49, 50, 51 або 52, або амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 95 ідентичність будь-якій одній амінокислотній послідовності представленій у 5ЕО І МО: 48, 49, 50, 51 або 52; та/(або варіабельна ділянка легкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 53, 54 або 55, або амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 95 ідентичність будь-якій одній амінокислотній послідовності представленій у
ЗЕО ІЮО МО: 53, 54 або 55; переважно, варіабельна ділянка важкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 52, та варіабельна ділянка легкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 53; або (9) варіабельна ділянка важкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у
ЗЕО ІО МО: 56, 57 або 58, або амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 95 ідентичність будь-якій одній амінокислотній послідовності представленій у 5ЕО І МО: 56, 57 або 58; та/або варіабельна ділянка легкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 59, 60, 61, 62 або 63, або амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 95 ідентичність будь-якій одній амінокислотній послідовності представленій у
ЗЕО ІЮО МО: 59, 60, 61, 62 або 63; переважно, варіабельна ділянка важкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 58, та варіабельна ділянка легкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 62; або (п) варіабельна ділянка важкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у
ЗЕО ІО МО: 65, 66, 67 або 68, або амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 95 ідентичність будь-якій одній амінокислотній послідовності представленій у 5ЕО І МО: 65, 66, 67 60 або 68; та/або варіабельна ділянка легкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у 5ЕО ІЮО МО: 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75 або 76, або амінокислотну послідовність, що має щонайменше 9095 ідентичність будь-якій одній амінокислотній послідовності представленій у 5ЕО ІО МО: 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75 або 76; переважно, варіабельна ділянка важкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у 5ЕО І МО: 68, та варіабельна ділянка легкого ланцюга має амінокислотну послідовність представлену у 5ЕО ІЮ
МО: 76.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, анти-СЕА антитіло відповідно до будь-якого із вищезазначених варіантів здійснення в кон'югаті антитіло-лікарський засіб являє собою гуманізоване антитіло, що містить каркасну ділянку, отриману з антитіла людини, або його варіанту каркасної ділянки, та варіант каркасної ділянки має зворотні мутації до 10 амінокислот у каркасній ділянці легкого ланцюга та/або каркасній ділянці важкого ланцюга антитіла людини; переважно, варіант каркасної ділянки є вибраним з будь-якого одного з наступних (Її) - (1): () каркасної ділянки варіабельної ділянки легкого ланцюга, що містить СОВА, І СОР2 та
ІЇСОВЗ, що мають послідовності представлені у 560 ІЮ МО: 18, 5ЕО ІО МО: 19 та 5ЕО ІЮ МО: 20, відповідно, що включають одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з 46Р, 47М/, 49У, 705 та 71У, та/або каркасної ділянки варіабельної ділянки важкого ланцюга, що містить НСОВІ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 15, НСОН2, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮО МО: 16 або 5ЕО ІО МО: 38 та НСОВЗ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮО МО: 17, що включає одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з З8К та 4АбК; (Ї) каркасної ділянки варіабельної ділянки легкого ланцюга, що містить | СОВІ1, І СОР2 та
ІЇСОВ3, що мають послідовності представлені у 560 ІЮ МО: 24, 5ЕБЕО ІО МО: 25 та 5ЕО ІЮ МО: 26, відповідно, що включають одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з 2У, 420, 44М та 7/1У, та/або каркасної ділянки варіабельної ділянки важкого ланцюга, що містить НСОВІ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 21,
НООНа, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮО МО: 22 або 5ЕО ІО МО: 47 та НСОВЗ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 23, що включає одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з 481, 66К, 67А, 691, 71М, 7ЗК, 82Е та
Зо 82А В; (К) каркасної ділянки варіабельної ділянки легкого ланцюга, що містить І СОВ1, І СОР2 та
ІЇСОВЗ, що мають послідовності представлені у 560 ІЮ МО: 30, 5ЕО ІО МО: 31 та 5ЕО ІЮ МО: 32, відповідно, що включають одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з ЗУ, 43Р та 58У, та/або каркасної ділянки варіабельної ділянки важкого ланцюга, що містить НСОВІ, НСОН2 та НСОВЗ, що мають послідовності представлені у 5ЕО ІЮ
МО: 27, ЗЕО ІЮ МО: 28 та 5ЕО ІО МО: 29, що включають одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з З8К, 66К та 71У; та () каркасної ділянки варіабельної ділянки легкого ланцюга, що містить ЇСОВІ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 35, І! СОР2, що має послідовність представлену у
БЕОІО МО: 36 або 5ЕО ІО МО: 64 та І СОВЗ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 37, що включає одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з 4М, З6У, 4ЗР, 47М, 49Е, 700 та 871; та/або каркасної ділянки варіабельної ділянки важкого ланцюга, що містить НСОВІ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 33,
НООНа, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮО МО: 16 або 5ЕО ІО МО: 38 та НСОВЗ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 34, що включає одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з 21, З8К та 46К; (т) каркасної ділянки варіабельної ділянки легкого ланцюга, що містить СОН, 1СО0Н2 та /СОВЗ, що мають послідовності представлені у 5ЕО ІЮ МО: 24, 5ЕО ІО МО: 25 та 5ЕО ІО МО: 26, відповідно, що включають одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з 2М, 420, 44М та 71У, та/або каркасної ділянки варіабельної ділянки важкого ланцюга, що містить
НООНЇ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 21, НСОН2, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 22 або 5ЕО ІО МО: 47 та НСОВЗ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 23, що включає одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з 66К, 67А, 691, 71М, 7ЗК, 82Е та 82А В; де сайти зворотних мутацій є пронумерованими відповідно до системи нумерації Кабата.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, анти-СЕА антитіло, відповідно до будь-якого із вищезазначених варіантів здійснення, в кон'югаті антитіло-лікарський засіб являє собою гуманізоване антитіло, що містить каркасну ділянку, отриману з антитіла людини, або його варіанту каркасної ділянки, та варіант каркасної ділянки має зворотні мутації до 10 амінокислот у каркасній ділянці легкого ланцюга та/або каркасній ділянці важкого ланцюга антитіла людини; переважно, варіант каркасної ділянки є вибраним з будь-якого одного з наступних (Її) - (1): () каркасної ділянки варіабельної ділянки легкого ланцюга, що містить СОВА, І СОР2 та
ІЇСОВЗ, що мають послідовності представлені у 560 ІЮ МО: 18, 5ЕО ІО МО: 19 та 5ЕО ІЮ МО: 20, відповідно, що включають одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з 46Р, 47МУ, 49У, 705 та 7/1У, та/або каркасної ділянки варіабельної ділянки важкого ланцюга, що містить НОСОВІ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮО МО: 15, НСОР2, що має послідовність представлену у 5ЕОІЮО МО: 16 або 5ЕО ІО МО: 38 та НСОВЗ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 17, що включає одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з З8К та 46К; (Ї) каркасної ділянки варіабельної ділянки легкого ланцюга, що містить | СОВІ1, І СОР2 та
ІЇСОВ3, що мають послідовності представлені у 560 ІЮ МО: 24, 5ЕБЕО ІО МО: 25 та 5ЕО ІЮ МО: 26, відповідно, що включають одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з 2У, 420, 44М та 7/1У, та/або каркасної ділянки варіабельної ділянки важкого ланцюга, що містить НОСОВІ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 21, НСОР2, що має послідовність представлену у
ЗЕО ІЮО МО: 22 або 5ЕО ІО МО: 47 та НСОРВЗ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮО МО: 23, що включає одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з 481, 66К, 67А, 691, 71, 7ЗК, 82Е та 82А В; (К) каркасної ділянки варіабельної ділянки легкого ланцюга, що містить І СОВ1, І СОР2 та
ІЇСОВЗ, що мають послідовності представлені у 560 ІЮ МО: 30, 5ЕО ІО МО: 31 та 5ЕО ІЮ МО: 32, відповідно, що включають одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з ЗУ, 4ЗР та 58У, та/або каркасної ділянки варіабельної ділянки важкого ланцюга, що містить НСОНВІ, НСОНО2 та
НООРВЗ, що мають послідовності представлені у 5БЕО ІЮО МО: 27, 5ЕО ІО МО: 28 та 5ЕО ІО МО: 29, відповідно, що включають одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з З8К, 66К та 71У; та () каркасної ділянки варіабельної ділянки легкого ланцюга, що містить ЇСОВІ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 35, І! СОР2, що має послідовність представлену у
ЗЕО І МО: 36 або 5ЕО ІО МО: 64 та І СОВЗ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 37, що включають одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з 4У, З6У, 4З3Р, 47, 49Е, 700 та 871; та/або каркасної ділянки варіабельної ділянки важкого ланцюга, що містить НОСОВІ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮО МО: 33, НСОР2, що має послідовність представлену у
ЗЕО ІЮО МО: 16 або 5ЕО ІО МО: 38 та НСОРВЗ, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮО МО: 34, що включає одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з 21, З8К та АбК; де сайти зворотних мутацій є пронумерованими відповідно до системи нумерації Кабата.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, анти-СЕА антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, відповідно до будь-якого із вищезазначених варіантів здійснення, в кон'югаті антитіло-лікарський засіб містить константну ділянку важкого ланцюга та легкого ланцюга антитіла; переважно, константна ділянка важкого ланцюга є вибраною з групи, що складається з константних ділянок ІДС, Ідс2, 403 та ІД24 людини, та константна ділянка легкого ланцюга є вибраною з групи, що складається з константних ділянок к та Х ланцюга антитіла людини; більш переважно, антитіло містить константну ділянку важкого ланцюга, що має послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 77 та константну ділянку легкого ланцюга, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮО МО: 78 або 5ЕО ІЮ МО: 79; найбільш переважно, анти-СЕА антитіло, що використовується в представленому винаході, містить: (т) важкий ланцюг, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮО МО: 80 або послідовність, що має щонайменше 85 95 ідентичність з нею, та/"або легкий ланцюг, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 81 або послідовність, що має щонайменше 85 95 ідентичність з нею; (п) важкий ланцюг, що має послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 82 або послідовність, що має щонайменше 85 95 ідентичність з нею, та/"або легкий ланцюг, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 83 або послідовність, що має щонайменше 85 95 ідентичність з нею; (о) важкий ланцюг, що має послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 84 або послідовність, що має щонайменше 85 95 ідентичність з нею, та/"або легкий ланцюг, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 85 або послідовність, що має щонайменше 85 9» ідентичність з нею; або (р) важкий ланцюг, що має послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 86 або послідовність, що має щонайменше 85 95 ідентичність з нею, та/"або легкий ланцюг, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 87 або послідовність, що має щонайменше 85 95 ідентичність з нею.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, антигензв'язуючий фрагмент відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, є вибраним з групи, що складається з Раф, Раб, К(ар)2, одноланцюгового антитіла (5сЕм), димеризованої М-ділянки (діатіла) та М-ділянки стабілізованої дисульфідом (азгем).
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, кон'югат антитіло-лікарський засіб відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, являє собою кон'югат антитіло-лікарський засіб загальної формули (Ре-Ї -м-0):
Н
-- сн. п --- о М Х й г
М че о Гл ОН о (Рео-І-у-0) де:
У є вибраним з групи, що складається з -0О-(СВаве)т-СВ/-Н2-С(0)-, -0-СВ!-82-(СВаВ) т-, -О-
Св'ве-, -МмнН-(СвВаве)т-СВ-Н2-С(0)- та -5-(СВаВе)т-СВ1-Н2-С(0)-;
На та В? є однаковими або різними та кожний є незалежно вибраним з групи, що складається з водню, дейтерію, галогену, алкіл, галогеналкілу, дейтерованого алкілу, алкокси, гідрокси, аміно, ціано, нітро, гідроксиалкілу, циклоалкілу та гетероциклілу; або, В2 та Р", разом з атомами вуглецю, що до них приєднані, утворюють циклоалкіл та гетероцикліл;
А! є вибраним з групи, що складається з галогену, галогеналкілу, дейтерованого алкілу, циклоалкілу, циклоалкілалкілу, алкоксиалкілу, гетероциклілу, арилу та гетероарилу; В? є вибраним з групи, що складається з водню, галогену, галогеналкілу, дейтерованого алкілу, циклоалкілу, циклоалкілалкілу, алкоксиалкілу, гетероциклілу, арилу та гетероарилу; або, В! та
В2, разом з атомами вуглецю, що до них приєднані, утворюють циклоалкіл або гетероцикліл; або, Ваг та Е, разом з атомами вуглецю, що до них приєднані, утворюють циклоалкіл або гетероцикліл; т є цілим числом від 0 до 4; п є десятковим або цілим числом від 1 до 10;
Ї є лінкерною одиницею;
Ре являє собою антитіло СЕА або його антигензв'язуючий фрагмент, як описано вище.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, в кон'югаті антитіло-лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, п являє собою ціле або десяткове число від 0 до 10, п може бути середнім значенням 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10, переважно від 1 до 8, більш переважно від 2 до 8, та найбільш переважно від 4 до 6, та п являє собою середнє десяткове або ціле число.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, в кон'югаті антитіло-лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, п являє собою середнє десяткове або ціле число від З до 5.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, в кон'югаті антитіло-лікарський засіб відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, п являє собою середнє десяткове або ціле число від 6 до 7.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, кон'югат антитіло-лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, є таким, як показано в загальній формулі (Ро-І -у-О), де:
У являє собою -0О-(СНаВ)п-САВ?-С(0)-;
Ва та В? є однаковими або різними та кожний є незалежно вибраним з групи, що складається з водню, дейтерію, галогену та алкілу;
ВЕ" являє собою галогеналкіл або Сз.єциклоалкіл;
В: є вибраним з групи, що складається з водню, галогеналкілу та Сзєциклоалкілу; або, ВЕ! та Не, разом з атомами вуглецю, що до них приєднані, утворюють Сз-єциклоалкіл; т являє собою 0 або 1.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, в кон'югаті антитіло-лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, У є вибраним з групи, що складається з: о о Зо ЕзС
Зо о о Адо
Я 4» о о р ня ох ох о та о ; де О-кінець У є з'єднаним з лінкерною одиницею І.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, в кон'югаті антитіло-лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, У являє собою: о п ; де О-кінець У є з'єднаним з лінкерною одиницею І.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, кон'югат антитіло-лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, є вибраним з:
І Н
А М
Ре -г о / Е о М М
Ж м он о іх п о
Ре-І-0 де:
Ї є лінкерною одиницею;
Ре являє собою анти-СЕА антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент;
п є десятковим або цілим числом від 1 до 10.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, кон'югат антитіло-лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, є вибраним з:
І Н
А М но о й Е о М ЕМ чу а он о к п о Ро-І-0 де:
Ї є лінкерною одиницею;
Ре являє собою анти-СЕА антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент; п є десятковим або цілим числом від 1 до 10.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, в кон'югаті антитіло-лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, лінкерна одиниця -І- являє собою --1 1-| 2-| 3-|4-. де
Ї" є вибраним з групи, що складається з -(сукцинімідил-З-іл-М)-М/-С(0)-, -СН2-С(О)-МАЗ-Му-
Ф(0)- та -С(0)-М/-С(0)-, де М/ є вибраним з групи, що складається з Сі-в алкілу, Сі-в алкілциклоалкілу та лінійного гетероалкілу, з від 1 до 8 атомами, та гетероалкіл містить від 1 до
З гетероатомів вибраних з групи, що складається з М, О та 5, де Сі-в алкіл, циклоалкіл та лінійний гетероалкіл, кожний є незалежно необов'язково додатково заміщеним одним або більше замісниками вибраними з групи, що складається з галогену, гідрокси, ціано, аміно, алкілу, хлоралкілу, дейтерованого алкілу, алкокси та циклоалкілу;
І2 є вибраним з групи, що складається з -МАСНагСНгО)р'ЄНгСНегС(О)-, -МАЧСНгСНгО)р'СНегС(О)-, -Б(СНег)р'С(О)- та хімічного зв'язку, де р' являє собою ціле число від 1 до 20;
ЇЗ являє собою пептидний залишок, що складається з від 2 до 7 амінокислот, де амінокислоти є вибраними з амінокислотних залишків, утворених з амінокислот з фенілаланіну, гліцину, валіну, лізину, цитруліну, серину, глутамінової кислоти та аспаргінової кислоти, та є необов'язково додатково заміщеними одним або більше замісниками вибраними з групи, що складається з галогену, гідрокси, ціано, аміно, алкілу, хлоралкілу, дейтерованого алкілу, алкокси та циклоалкілу;
Її є вибраним з групи, що складається з -МАХ(СВЯВ7, -С(О)МА», -С(О)МАХ(СНг)- та хімічного зв'язку, де ї являє собою ціле число від 1 до 6;
ВАЗ, В? та ВЗ є однаковими або різними та кожний, є незалежно вибраним з групи, що складається з водню, алкілу, галогеналкілу, дейтерованого алкілу та гідроксиалкілу;
АНЯ та В" є однаковими або різними та кожний, є незалежно вибраним з групи, що складається з водню, галогену, алкілу, галогеналкілу, дейтерованого алкілу та гідроксиалкілу.
В деяких варіантах здійснення, І" є вибраним з групи, що складається з -(сукцинімідил-З-іл-
М)-М/-С(0)-, -СН2-С(0)-МАЗ-М/-С(0)- та -С(0)-М/-С(0О)-, де М/ є вибраним з групи, що складається з Сі-валкілу, Сі-залкіл-Сз-єциклоалкілу та лінійного гетероалкілу з від 1 до 8 атомами ланцюга, та гетероалкіл містить від 1 до З гетероатомів вибраних з групи, що складається з М, О та 5, де С- валкіл, С:-валкіл-Сзєциклоалкіл або лінійний гетероалкіл з від 1 до 8 атомами ланцюга є незалежно необов'язково додатково заміщеним одним або більше замісниками, вибраними з групи, що складається з галогену, гідрокси, ціано, аміно, алкілу, хлоралкілу, дейтерованого алкілу, алюокси та циклоалкілу. В деяких варіантах здійснення, 2 є вибраним з групи, що складається з -МАВЯСНгСНгО)р'ЄнНгсСнНгс(О0)-,. -МАСНгСНгО)р'ЄНгС(О)-, -5(СНег)р'С(0)- та хімічного зв'язку, де р' являє собою ціле число від 1 до 20.
В деяких варіантах здійснення, ІЗ являє собою пептидний залишок, що складається з від 2 до 7 амінокислот, де амінокислоти є вибраними з групи, що складається з амінокислотних залишків утворених з амінокислот з фенілаланіну, гліцину, валіну, лізину, цитруліну, серину, глутамінової кислоти та аспаргінової кислоти, та є необов'язково додатково заміщеними одним або більше замісниками вибраними з групи, що складається з галогену, гідрокси, ціано, аміно, алкілу, хлоралкілу, дейтерованого алкілу, алкокси та циклоалкілу. В деяких варіантах здійснення, І" є вибраним з групи, що складається з -МАХСВеВЛе, -С(О)МА-, -С(О)МАХСНги- та хімічного зв'язку, де Її являє собою ціле число від 1 до 6. В деяких варіантах здійснення, НУ,
В" та В: є однаковими або різними та кожний є незалежно вибраним з групи, що складається з водню, алкілу, галогеналкілу, дейтерованого алкілу та гідроксиалкілу.
В деяких варіантах здійснення, Не та В" є однаковими або різними та кожний є незалежно вибраним з групи, що складається з водню, галогену, алкілу, галогеналкілу, дейтерованого алкілу та гідроксиалкілу.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, в кон'югаті антитіло-лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, лінкерна одиниця -І- являє собою --іІ 1-І| 2- | 3-| 4-. де о о ск )в! являє собою о ; та 5! являє собою ціле число від 2 до 8;
І? являє собою хімічний зв'язок;
ЇЗ являє собою тетрапептидний залишок; переважно, З являє собою тетрапептидний залишок гліцин-гліцин-фенілаланін-гліцин (3С1РС, 5ЕО ІО МО: 92);
Її являє собою -МАХ(СВУВ")-, де В», В? та В" є однаковими або різними та кожний, незалежно являє собою водень або алкіл, та ї являє собою 1 або 2; де кінець І" є з'єднаним з Ре, та кінець І 7 є з'єднаним з У.
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, кон'югат антитіло-лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення є таким, як показано в загальній формулі (Ро-І-ху-О) або загальній формулі Ро-І -0, де -І - являє собою: о о о о
Н Н ть, ОХ лк
Н Н Н о о о ,
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, кон'югат антитіло-лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення є таким, як показано в загальній формулі (Ре-І -у-О) або загальній формулі Ро-І -0О, де І-М-необов'язково є вибраним з групи, що складається з: о о о о о тр М М7 о
Н Н Н о о о о о о о о
М М мо
Н Н Н о о о о та о о о о Я
М М Мо
Н Н Н о о о о
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, кон'югат антитіло-лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення являє собою кон'югат антитіло-лікарський засіб загальної формули (Ре-Ї 3-у-0): о в? в" о ї Мо
З к Х однин
Ше І. | в в? во о
М / 7 сн. о М /Й ч- п чпОоНн ЕР о (Ре-Г.-у-0) де:
М, 12,13, ІД», А та ВД" є такими, як визначено в лінкерній одиниці І;
Ре, п, В", В2 та т є такими, як визначено в загальній формулі (Ро-І -У-0).
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, кон'югат антитіло-лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, являє собою кон'югат антитіло-лікарський засіб загальної формули (Ре-І 6-у-0): о о о о вд о
Щ «АЖ «Ж с
М М М сут М и
Н Н І, вв? о о о т сн, о ех
КТ
/ М
М п о ачОНн (Ре-Ц-У-0) о де: 5! являє собою ціле число від 2 до 8;
Ре, В", 82, ВР-В", т та п є такими, як визначено в загальній формулі (Ре-і 4-у-0).
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, кон'югат антитіло-лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення є вибраним з групи, що складається з: о о о о те соч ЖД КАК в М
М М М М. й М мо
Н Н Н Е о о о о /й о М що
У п мон і - о (в) о о о
Те сли «ДЖ КА М
М М М М. тр М мо
Н Н Н Е о о о о / о, М що
У п
Коші і . о та о о о 600 М т чив Ж Ж :
М М М М. р ту
Н Нн Н Е о о о о І о, М що
Сх п мон і я о де Ре та п є такими, як визначено в загальній формулі (Ро-І -у-0).
В деяких варіантах здійснення представленого винаходу, кон'югат антитіло-лікарський засіб є вибраним з групи, що складається з:
Ниб3-13-2-А о Ми о о о У ше пори Ж СХ в : М й м тез
Н Н Н о о о о й о Е
М ше
М хі о Он о
Ни47-14-2-А о т о о У
Ни47-14 Н Н : Н ки, с Але
Н Н Н о о о о й о Е
М шо
М хі о "ОН о або
Ниб7-14-2-А о
Нибт-14 ком Ж Ч Ч А : н о о о о й о Е
М Ем хі о Он п о
Ни103-32-2-А о 9 о о У
Ни1о3-32. Н Н : Н ки, АКулет
Н Н Н о о о о й о Е
М ше,
М хі о мон о де п є таким, як визначено в загальній формулі (Ро-Ї -У-0); антитіла є описаними наступним чином:
Ниб63-13 містить важкий ланцюг, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 80, та легкий ланцюг, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 81;
Ни47-14 містить важкий ланцюг, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 82, та легкий ланцюг, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 83;
Ниб7-14 містить важкий ланцюг, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 84, та легкий ланцюг, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 85;
Ни103-32 містить важкий ланцюг, що має послідовність представлену у 5ЕО ІО МО: 86, та легкий ланцюг, що має послідовність представлену у 5ЕО ІЮ МО: 87.
Необов'язково, п може бути цілим числом, відмінним від нуля або десятковим числом від 0 до 10, переважно цілим або десятковим числом від 1 до 10; більш переважно цілим або десятковим числом від 2 до 8; та найбільш переважно цілим або десятковим числом від З до 8; необов'язково, п може бути десятковим або цілим числом від З до 5; необов'язково, по є десятковим або цілим числом від 6 до 7.
Представлений винахід додатково передбачає спосіб отримання кон'югату антитіло- лікарський засіб загальної формули (Ре-І а-У-0), де спосіб включає наступні стадії:
о "в о / у Мово 3
М А ан о МН теуу Ї в" в2
Ре к во о о
М
Ї 7 сн» о Х Й М »
Е оон (ав) о о «З в о ї Ми
З
Ре ХМ ян то ММ
М І 2 у І в" ве по о
М / 7 сн. о Х / "- п пон Е о (Ре-іА-у-0) піддавання відновленого Рс та загальної формули (Іа-У-Ю) рекції сполучення з отриманням сполуки загальної формули (Ро-І 4-У-0); в якій:
Ре являє собою анти-СЕА антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент;
М,12,13, В, 82, В5-ВУ, т та п є такими, як визначено в загальній формулі (Ро-і 4-У-0).
Представлений винахід додатково передбачає спосіб отримання кон'югату антитіло- лікарський засіб загальної формули (Ро-І"-О), де спосіб включає наступні стадії: о о о 600 М ех х коли Ж Ж Ж : і єр стр н н н о о о о / Е о М --м -
ОН о. -З-о о о о о о т ще Ж М куті м м мо М н н Нн Е о о о о / о м и
Ж п
УОн її д
Ре-Г-О о піддавання відновленого Ре та загальної формули (Га-О) рекції сполучення з отриманням сполуки; в якій:
Ре являє собою анти-СЕА антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, як описано вище; п є таким, як визначено в загальній формулі (Ро-І -У-0).
В іншому аспекті, представлений винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить кон'югат антитіло-лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення та один або більше фармацевтично прийнятних ексципієнтів, розріджувачів або носіїв.
В іншому аспекті, представлений винахід передбачає застосування кон'югату антитіло- лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, або фармацевтичної композиції, що містить теж саме, що й лікарський засіб.
В іншому аспекті, представлений винахід передбачає застосування кон'югату антитіло- лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, або фармацевтичної композиції, що містить теж саме, для отримання лікарського засобу для лікування захворювання або стану, опосередкованого СЕА. Захворювання або стан, опосередкований СЕА являє собою рак з високою експресією СЕА, або захворювання або стан, опосередкований СЕА являє собою рак з помірною експресією СЕА.
В іншому аспекті, представлений винахід передбачає застосування кон'югату антитіло- лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, або фармацевтичної композиції, що містить теж саме, для отримання лікарського засобу для лікування або попередження пухлини; де пухлина та рак переважно являє собою плоскоклітинну карциному голови та шиї, рак голови та шиї, рак мозку, нейрогліому, мультиформну гліобластому, нейробластому, карциному центральної нервової системи, нейроендокринну пухлину, рак горла, рак носоглотки, рак стравоходу, рак щитоподібної залози, злоякісну плевральну мезотеліому, рак легенів, рак молочної залози, рак печінки, гепатобіліарний рак, рак підшлункової залози, рак шлунку, рак шлунково-кишкового тракту, рак кишечника, рак товстої кишки, колоректальний рак, рак нирки, нирково-клітинну карциному, рак яєчників, рак ендометрію, рак шийки матки, рак сечового міхура, рак передміхурової залози, рак яєчка, рак шкіри, меланому, лейкемію, лімфому, рак кістки, хондросаркому, мієлому, множинну мієлому, мієлодиспластичний синдром, Пухлину Крукенберга, мієлопроліферативну пухлину, плоскоклітинний рак, Саркому Юінга, системний амілоїдоз легких ланцюгів або клітинну карциному Меркеля; більш переважно, лімфома є вибраною з групи, що складається з: лімфоми
Ходжкіна, неходжкінської лімфоми, дифузної В-великоклітинної лімфоми, фолікулярної лімфоми, первинної медіастинальної В-великоклітинної лімфоми, мантійно-клітинної лімфоми, малої лімфоцитарної лімфоми, В-великоклітинної лімфоми багатої Т-клітинами/гістіоцитами та лімфоплазмацитарної лімфоми, рак легенів є вибраним з недрібноклітинного раку легенів або дрібноклітинного раку легенів, та лейкемія є вибраною з групи, що складається з: хронічної мієлоїдної лейкемії, гострої мієлоїдної лейкемії, лімфоцитарної лейкемії, лімфобластної лейкемії, гострої лімфобластної лейкемії, хронічної лімфобластної лейкемії та мієлоіїдно- клітинної лейкемії.
В іншому аспекті, представлений винахід додатково стосується способу лікування та/або запобігання пухлині, де спосіб включає введення пацієнту, який цього потребує, терапевтично ефективної кількості кон'югату антитіло-лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, або фармацевтичної композиції, що його містить; де пухлина переважно являє собою рак пов'язаний з високою експресією СЕА.
В іншому аспекті, представлений винахід додатково стосується способу лікування або запобігання раку, де спосіб включає введення пацієнту, який цього потребує, терапевтично ефективної кількості кон'югату антитіло-лікарський засіб, відповідно до будь-якого одного з вищезазначених варіантів здійснення, або фармацевтичної композиції, що його містить; де пухлина та рак переважно являють собою плоскоклітинну карциному голови та шиї, рак голови та шиї, рак мозку, нейрогліому, мультиформну гліобластому, нейробластому, карциному центральної нервової системи, нейроендокринну пухлину, рак горла, рак носоглотки, рак стравоходу, рак щитоподібної залози, злоякісну плевральну мезотеліому, рак легенів, рак молочної залози, рак печінки, гепатобілі«арний рак, рак підшлункової залози, рак шлунку, рак шлунково-кишкового тракту, рак кишечника, рак товстої кишки, колоректальний рак, рак нирки, нирково-клітинну карциному, рак яєчників, рак ендометрію, рак шийки матки, рак сечового міхура, рак передміхурової залози, рак яєчка, рак шкіри, меланому, лейкемію, лімфому, рак кістки, хондросаркому, мієлому, множинну мієлому, мієлодиспластичний синдром, пухлину
Крукенберга, мієлопроліферативну пухлину, плоскоклітинний рак, саркому Юінга, системний амілоїдоз легких ланцюгів або клітинну карциному Меркеля; більш переважно, лімфома є вибраною з групи, що складається з: лімфоми Ходжкіна, неходжкінської лімфоми, дифузної В- 60 великоклітинної лімфоми, фолікулярної лімфоми, первинної медіастинальної В-великоклітинної лімфоми, мантійно-клітинної лімфоми, малої лімфоцитарної лімфоми, В-великоклітинної лімфоми багатої Т-клітинами/гістіоцитами та лімфоплазмацитарної лімфоми, рак легенів є вибраним з недрібноклітинного раку легенів або дрібноклітинного раку легенів, та лейкемія є вибраною з групи, що складається з: хронічної мієлоїдної лейкемії, гострої мієлоїдної лейкемії, лімфоцитарної лейкемії, лімфобластної лейкемії, гострої лімфобластної лейкемії, хронічної лімфобластної лейкемії та мієлоіїдно-клітинної лейкемії. Активна сполука (наприклад, кон'югат ліганд-лікарський засіб, відповідно до представленого винаходу, або його фармацевтично прийнятна сіль) може бути сформульованою у формі, прийнятній для введення за будь-яким прийнятним способом, переважно у формі стандартної дози або у формі одноразової дози, яка може бути введена суб'єктом самостійно. Стандартна доза, за представленим винаходом може бути у вигляді таблетки, капсули, облатки, флакону, порошку, гранули, пастилки, супозиторію, регенеруючого порошку або у рідкій лікарській формі.
Доза введення активної сполуки або композиції, що використовується у способі лікування за представленим виноходом, як правило, варіюватиметься залежно від тяжкості захворювання, ваги суб'єкта та ефективності активної сполуки. Проте, як загальне керівництво, прийнятна стандартна доза може становити від 0,1 до 1000 мг. Фармацевтична композиція за представленим винаходом, на додаток до активної сполуки, може містити один або більше ексципієнтів вибраних з групи, що складається з: наповнювача, розріджувача, зв'язуючої речовини, змочуючого агенту, дезінтегруючого агенту, ексципієнту тощо. В залежності від способу введення, композиція може містити від 0,1 до 99 мас. 95 активної сполуки.
Антитіло СЕА та кон'югат антитіло-лікарський засіб передбачені в представленому винаході, мають гарну афінність до антигенів клітинної поверхні, гарну ефективність ендоцитозу та високу ефективність інгібування пухлини, а також більш широкі можливості застосування лікарського засобу, та є прийнятними для клінічного застосування лікарського засобу.
КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ
На Фігурі 1 представлені результати ЕАС5-детектування зв'язування гуманізованих антитіл з
СЕА людини на клітинному рівні.
Фігура 2 демонтрує байстендер ефект та цитотоксичність молекул АОС; дані демонструють, що всі молекули АОС мають сильний байстендер ефект та цитотоксичність, і при спільному культивуванні МКМА5 та НСТ116, молекули АОС можуть інгібувати проліферацію обох типів клітин, в той час як при культивуванні НСТ116 окремо, молекули АЮС в поєднанні з 2-А принципово не є токсичними для клітин.
Фігура З демонструє вплив молекул АОС на об'єм пухлини в моделі пухлини ксенотрансплантата І 51747; дані демонструють, що всі молекули АЮС мають вплив на інгібування збільшення об'єму пухлин порівняно з контрольною групою (РВ5), та інгібуючі ефекти на пухлини в групах 3-мпк є кращими, ніж у групах 1-мпк; серед груп З-мпк найкращий інгібуючий ефект на пухлини має Ниб3-13-2-А, за ним слідує Ни47-14-2-А та потім Ниб7-14-2-А, та І тар-СІ 2А-5М38 має найгірший інгібуючий ефект на пухлини.
Фігура 4 демонструє вплив молекул АОС на масу пухлини в моделі пухлини ксенотрансплантата І 51747; дані демонструють, що всі молекули АЮС мають вплив на інгібування збільшення маси пухлин, як при низьких, так і при високих дозах порівняно з контрольною групою (РВ5); серед груп 3-мпк найкращий інгібуючий ефект на пухлини має Ниб3- 13-2-А, за ним слідує Ни47-14-2-А та потім Ниб7-14-2-А, та | тар-СІ 2А-5М38 має найгірший інгібуючий ефект на пухлини.
Фігура 5 демонструє вплив молекул АОС на об'єм пухлини в моделі пухлини ксенотрансплантата МКМА45; дані демонструють, що всі молекули АЮС мають вплив на інгібування збільшення об'єму пухлин порівняно з контрольною групою (РВ5), та інгібуючі ефекти на пухлини в групах З3-мпк є кращими, ніж у групах 1-мпк; серед груп З-мпк найкращий інгібуючий ефект на пухлини має Ниб7-14-2-А, за ним слідує Ни103-32-2-А та потім Ниб63-13-2-А, та! тар-СІ 2А-5М38 має найгірший інгібуючий ефект на пухлини.
Фігура б демонструє вплив молекул АОС на масу пухлини в моделі пухлини ксенотрансплантата МКМА45; дані демонструють, що всі молекули АЮС мають вплив на інгібування збільшення маси пухлин, як при низьких, так і при високих дозах порівняно з контрольною групою (РВ5); серед груп З-мпк, найкращий інгібуючий ефект на пухлини має
Ниб7-14-2-А, за ним слідує Ни103-32-2-А та потім Ниб3-13-2-А, та І тар-СІ2А-5М38 має найгірший інгібуючий ефект на пухлини.
ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
1. Термінологія
Якщо не визначено інше, всі технічні та наукові терміни, що використовуються в даному 60 документі, мають те саме значення, яке, як правило, розуміють спеціалісти в даній галузі техніки, до якої належить представлений винахід. Хоча будь-які способи та матеріали, подібні або еквівалентні тим, що описані в даному документі, можуть бути використані для реалізації або дослідження представленого винаходу, в даному документі є описаними переважні способи та матеріали. В описі та формулі представленого винаходу, наступні терміни є використаними відповідно до наведених нижче визначень.
Коли в представленому винаході використовується торгове найменування, передбачається, що воно включає склад комерційного продукту під торговим найменуванням, а також непатентований лікарський засіб та активний лікарський компонент комерційного продукту під торговим найменуванням.
Якщо не зазначено інше, терміни, використані в описі та формулі винаходу, мають наступне значення.
Термін "лікарський засіб" стосується хімічної речовини, яка може змінювати або визначати фізіологію та патологічний стан організму та може застосовуватись для профілактики, діагностики та лікування захворювань. До складу лікарського засобу входить цитотоксичний препарат. Немає чіткої межі між лікарським засобом та токсичною речовиною. Токсична речовина стосується хімічної речовини, яка має токсичну дію на організми та здатна заподіяти шкоду здоров'ю людини навіть у невеликих дозах.
Будь-який лікарський засіб у великих дозах може викликати токсичні реакції.
Цитотоксичний препарат стосується речовини, яка інгібує або перешкоджає функціонуванню клітин та/або спричиняє загибель або руйнування клітин. Цитотоксичний препарат, в принципі може вбивати пухлинні клітини при досить високій концентрації; проте, через відсутність специфічності, цитотоксичний препарат може викликати апоптоз нормальних клітин, вбиваючи при цьому пухлинні клітини, що призводить до серйозних побічних ефектів. Цитотоксичний препарат включає токсини, такі як низькомолекулярні токсини або ферментативно активні токсини бактеріального, грибкового, рослинного або тваринного походження, радіоізотопи (наприклад, А", 1191, 1125, 90 Де!86, Де!88, 5рт!зз, Ві2!2, рзг та радіоактивні ізотопи І и), токсичні препарати, хіміотерапевтичні препарати, антибіотики та нуклеолітичні ферменти. Термін "лінкерна одиниця", "лінкері" або "фрагмент лінкера" стосується хімічного структурного фрагменту або зв'язку, який є зв'язаним з лігандом на одному кінці та зв'язаним з лікарським засобом на іншому кінці, та також може бути зв'язаним з іншими лінкерами, та потім зв'язаним з лікарським засобом.
Лінкер може містити один або більше компонентів лінкера. Приклади компонентів лінкера включають б-малеїімідокапроїл ("МС"), малеімідопропіоніл ("МР"), валін-цитрулін ("маІ-сйї" або "Ус"), аланін-фенілаланін ("аіа-рпе"), п-амінобензилоксикарбоніл ("РАВ"), М-сукцинімідил 4-(2- піридилтіо)пентаноат ("5РР"), М-сукцинімідил. 4-(М-малеімідометил)циклогексан-1ї карбоксилат (ЗМОС", також згадується в даному документі як "МОСС") та /М-сукцинімідил(4- йодоацетил)амінобензоат ("ЗІАВ")М. Лінкер може включати екстендери, спейсери та амінокислотні ланки та може бути синтезований з використанням способів, відомих у даній галузі техніки, такі як описані в документі 5 2005-0238649А1. Лінкер може бути "розщеплюваним лінкером", що сприяє вивільненню лікарських засобів у клітинах. Наприклад, можуть бути використані кислотолабільні лінкери (наприклад, гідразони), чутливі до протеази лінкери (наприклад, чутливі до пептидази), фотолабільні лінкери, диметиллінкер або дисульфідвмісні лінкери. (СНагі еї аіІ., Сапсег Везеагсй 52: 127-131(1992); Патент США Мо 5,208,020).
Скорочення
Компоненти лінкера включають, але не обмежуються цим: МС-б-малеїімідокапроїл, що має структуру: о тити о о 5О0
Ма!-Сії або "ус"-валін-цитрулін (приклад дипептиду в розщеплюваному протеазою лінкері), цитрулін-2-аміно-5-уреідопентова кислота,
РАВ:р-амінобензилоксикарбоніл (приклад "саморуйнівних" компонентів лінкера),
Ме-МаІ-Сц-М-метил-валін-цитрулін (де лінкерний пептидний зв'язок був модифікований.
для запобігання його розщепленню катепсином В),
МСО(РЕС)6-ОН-малеїімідокапроїл-поліетиленгліколь (приєднується до цистеїну антитіла),
ЗРРАМ-сукцинімідил 4-(2-піридилтіо)валерат,
ЗРОР-М-сукцинімідил 3-(2-піридилдитіо)пропіонат,
ЗМОС-сукцинімідил-4-(М-малеіїмідометил)циклогексан-1-карбоксилат,
ІТ -імінотіолан.
Термін "кон'югат антитіло-лікарський засіб" означає, що антитіло є зв'язаним з біологічно активним лікарським засобом за допомогою стабільної зв'язуючої одиниці. В представленому винаході, "кон'югат антитіло-лікарський засіб" або кон'югат антитіло лікарський засіб (АОС) означає, що моноклональне антитіло або фрагмент антитіла є зв'язаними з біологічно активним токсичним лікарським засобом за допомогою стабільної зв'язуючої одиниці. Антитіло може бути кон'юговане з лікарським засобом безпосередньо або через лінкер. Середня кількість модулів лікарського засобу, кон'югованих з кожним антитілом (середнє навантаження лікарського засобу або навантаження лікарського засобу, яке може бути представлене як п), може знаходитися в діапазоні, наприклад, від приблизно 0 до приблизно 20 модулів лікарського засобу; в деяких варіантах здійснення від 1 до приблизно 10 модулів лікарського засобу; та в деяких варіантах здійснення від 1 до приблизно 8 модулів лікарського засобу.
Термін "середнє навантаження лікарським засобом" або "лікарське навантаження" стосується середньої кількості цитотоксичного лікарського засобу, навантаженого на ліганд у молекулах кон'югату антитіло-лікарський засіб, та може також бути представлений як співвідношення лікарського засобу до антитіла. Навантаження лікарським засобом може варіюватися від 0-12, переважно 1-10 цитотоксичних препаратів на ліганд (Рс). У варіантах здійснення представленого винаходу, навантаження лікарським засобом є представленим як п, що також може називатися значенням БАК (співвідношення лікарський засіб-антитіло), та приблизні значення можуть являти собою середнє значення 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 та 10.
Середня кількість лікарських засобів на молекулу АОС після реакцій зв'язування може бути охарактеризована за допомогою звичайних способів, таких як УФ/видима спектроскопія, мас- спектрометрія, аналізи ЕЇ І5А та ВЕРХ.
Трилітерні та однолітерні коди амінокислот, що використовуються в представленому винаході, є описаними в У. Біо!. спет, 243, р3з558 (1968).
Термін "антитіло" стосується імуноглобуліну, який має структуру тетрапептидного ланцюга, утвореного шляхом з'єднання двох важких ланцюгів та двох легких ланцюгів за допомогою міжланцюгових дисульфідних зв'язків. Відповідно до відмінностей в амінокислотній композиції та порядку розташування константних ділянок важкого ланцюга, імуноглобуліни можуть бути розділені на п'ять класів, що інакше називаються ізотипами імуноглобулінів, а саме ІМ, дО,
Ідс, ідА та ІЧЕ, з їх відповідними важкими ланцюгами, що являють собою н-ланцюг, 5-ланцюг, у- ланцюг, сх-ланцюг та є-ланцюг, відповідно. Їд одного класу може бути розділений на різні підкласи відповідно до відмінностей в амінокислотній композиції шарнірних ділянок та кількості і положеннях дисульфідних зв'язків важких ланцюгів; наприклад, ДС; може бути розділений на
ІС, Ідс2, ІдО3 та Ідсяі. Легкі ланцюги класифікуються на к- або Х- ланцюги за відмінностями в константних ділянках. Кожний з п'яти класів Ід може мати к-ланцюг або 7-ланцюг.
У важких талегких ланцюгах повнорозмірних антитіл, послідовності приблизно зі 110 амінокислот поблизу М-кінця значно відрізняються і тому називаються варіабельними ділянками (Еу-ділянками); решта амінокислотних послідовностей поблизу С-кінця є відносно стабільними і тому називаються константними ділянками. Варіабельні ділянки включають 3 гіперваріабельні ділянки (НМА) та 4 каркасні ділянки (ЕН) з відносно консервативними послідовностями. З гіперваріабельні ділянки визначають специфічність антитіла і тому також є відомими як ділянки, що визначають комплементарність (СОН). Кожна варіабельна ділянка легкого ланцюга (І СУМ) або варіабельна ділянка важкого ланцюга (НСУР) складається з З СОВ та 4 ЕЕ, розташованих
БО від аміно-кінця до карбокси-кінця в наступному порядку: ЕВТ, СОН, ЕН2г, СОН2, ЕВЗ, СОВЗ та
ЕН4. з СО легкого ланцюга відносяться до СОН, 1 СОН2 та І СОВ3, та З СОВ важкого ланцюга відносяться до НСОВІ, НСОНР2 та НСОНВЗ.
Терміни "повністю гуманізоване антитіло", "повністю людське антитіло" або "абсолютно людське антитіло", також відомі як "повністю гуманізоване моноклональне антитіло", мають як гуманізовану варіабельну ділянку, так і константну ділянку, для усунення імуногенності та токсичних побічних ефектів. Розвиток моноклональних антитіл має чотири стадії, а саме мишачі моноклональні антитіла, химерні моноклональні антитіла, гуманізовані моноклональні антитіла та повністю гуманізовані моноклональні антитіла. Основні релевантні технології отримання повністю людських антитіл включають: технологію отримання гібридоми людини, технологію 60 отримання В-лімфоцитів, трансформованих ЕВМ, технологію фагового дисплея, технологію отримання антитіл трансгенних мишей, технологію отримання В-одноклітинного антитіла тощо.
Термін антигензв'язуючий фрагмент стосується одного або більше фрагментів антитіла, які зберігають здатність зв'язуватися з антигеном. Демонструє, що фрагмент повнорозмірного антитіла може бути використаний для виконання антигензв'язуючої функції антитіла. Зв'язуючий фрагмент, що входить до складу "антигензв'язуючого фрагмента" є вибраним з групи, що складається з Рар, Раб", К(абр)г, одно ланцюгово го антитіла (5сЕРм), димеризованої М-ділянки (діатіло), дисульфід-стабілізованої М-ділянки (а5Ем) та антигензв'язуючих фрагментів пептидів, що містять СОВА; приклади включають (ї) фрагменти Раб, моновалентні фрагменти, що складаються з доменів МІ, МН, Сі та СНІ; (ї) фрагменти К(аб)2, двовалентні фрагменти, що містять два фрагменти Раб, з'єднані за допомогою дисульфідних містків в шарнірних ділянках; (її) фрагменти Га, що складаються з доменів МН та СНІ; (ім) фрагменти Гм, що складаються з доменів УН та Мі одного плеча антитіла; (м) окремі домени або фрагменти АБ (Мага еї аї., (1989) Маїште 341: 544-546), що складаються з доменів МН; та (мі) виділені ділянки, що визначають комплементарність (СОН) або (мії) комбінації двох або більше виділених СОН, які можуть бути необов'язково зв'язані синтетичними лінкерами. Крім того, хоча два домени фрагмента Ем, Мі та МН, кодуються окремими генами, вони можуть бути зв'язаними синтетичним лінкером шляхом рекомбінації, таким чином, що він є здатним продукувати єдиний протеїновий ланцюг, в якому ділянки МІ та МН поєднані та утворюють моновалентну молекулу (що називається одноланцюговим Ем (5сЕм); дивіться, наприклад, Віга єї аїЇ. (1988) бсієпсе 242:423-426; та Низіоп евї а!. (1988) Ргос. Маї! Асайд. сі ОБА 85:5879-5883). Такі одноланцюгові антитіла також є включениийми в термін "антигензв'язуючий фрагмент" антитіла. Такі фрагменти антитіл є отриманими з використанням звичайних способів, відомих фахівцям в даній галузі, та підданими скринінгу на придатність таким самим чином, як і інтактні антитіла. Антигензв'язуючі частини можуть бути отримані з використанням технології рекомбінантної ДНК або шляхом ферментативного або хімічного розщеплення інтактних імуноглобулінів. Антитіла можуть бути різних ізотипів, наприклад, ІДС (наприклад, підтип Ідасі, Іде, їСаЗ або Ідса), ІдАЇ, ІдАг, ІдО, І9ЧЕ або ІДМ антитіла. Як правило, Раб являє собою фрагмент антитіла, що має молекулярну масу приблизно 50 000 та має антигензв'язуючу активність, серед фрагментів, отриманих шляхом обробки молекули антитіла Ід протеаза папаїном (наприклад, розщеплення амінокислотного залишку в положенні 224 Н-ланцюга), в якому частина на М-кінці Н-ланцюга є з'єднаною з | - ланцюгом за допомогою дисульфідного зв'язку.
В цілому, К(ар')г являє собою фрагмент антитіла, отриманий шляхом розщеплення частини нижче дисульфідного зв'язку в шарнірній ділянці (ДС за допомогою ферменту пепсину. Він має молекулярну масу приблизно 100 000, має антигензв'язуючу активність та містить дві ділянки
Еаб, з'єднані в шарнірному положенні.
В цілому, Раб" являє собою фрагмент антитіла, що має молекулярну масу приблизно 50 000 та має антигензв'язуючу активність, отриманий шляхом розщеплення дисульфідного зв'язку в шарнірній ділянці К(аб')г, описаної вище.
Крім того, Гар' може бути отриманий шляхом вставки ДНК, що кодує фрагмент Раб", у прокаріотичний або еукаріотичний вектор експресії та введення вектора в прокаріот або еукаріот для експресії Баб'.
Термін "одноланцюгове антитіло", "одноланцюговий Ем" або "5сЕм" означає молекулу, що містить варіабельний домен важкого ланцюга антитіла (або МН) та варіабельний домен легкого ланцюга антитіла (або МІ), зв'язані лінкером. Такі 5сЕм молекули можуть мати загальну структуру: МНо-МІ -ліннер-УН-СООН або МНо-МН-лінкер-НІ-СООН. Прийнятні лінкери в попередньому рівні техніки складаються з повторюваних амінокислотних послідовностей саасц5 або їх варіантів, наприклад, 1-4 повторюваних варіантів (НоїЇїдег еї а. (1993), Ргос. Маї!
Асай. осі. ОБА 90:6444-6448). Інші лінкери, які можуть бути використаними в представленому винаході, є описаними АїЇйНап еї аї. (1995), Ргоївїп Епд. 8:725-731; Спої еї аї. (2001), Ет 9.
Іттипої. 31:94-106; Ни еї аї. (1996), Сапсег Ве5. 56:3055-3061, Кіргпуапом еї аї. (1999), 9. Мої.
Віо!. 293:41-56; та Воомегз еїа!. (2001), Сапсег Іттипої.
Термін "СОВ" стосується однієї з 6 гіперваріабельних ділянок в межах варіабельного домену антитіла, які переважно сприяють зв'язуванню антигену, В цілому, є три СОВА (НСОВІ1, НСОВ2 та НСОРВЗ) в кожній варіабельній ділянці важкого ланцюга та три СОВ (І СОВІ1, 1 СОНв2 та
ЇСОВЗ) в кожній варіабельній ділянці легкого ланцюга. Кордони амінокислотної СОВ послідовності можуть бути визначеними з використанням будь-якої з безлічі добре відомих схем. Одне з найпоширеніших визначень 6 СОВА є представленим в Кабаї Е.А. еї аї., (1991) зЗедиепсев ої ргоївїп5 ої іттипоіодіса! іпіегезі. МІН Рибіїсайоп 91-3242. Визначення СОВА за методом Кабата, що використовується в даному документі, застосовується лише до СОВІ1, бо СОР2 та СОВЗ варіабельного домену легкого ланцюга та до СОВ2 та СОВЗ варіабельного домену важкого ланцюга. Також є включеними схема нумерації "Чотія", схема нумерації "АВМ", схема нумерації контакт" (дивіться Мапіп, АСА. Ргоївіп Зедиепсе апа бігисіцге Апаїувзів ої
Апіїроду Мапаріе Ботаїіп5|Л|. 2001), схема нумерації ІтМипосСьеп Гіс5(ІМаСт) (І еїтапс М.Р., Оєу.
Сотр. Іттипої., 27, 55-7 7(2003)) тощо.
Термін "каркас антитіла" стосується частини варіабельного домену Мі або МН, який служить каркасом для антигензв'язуючих петель (СОВ) варіабельного домену. По суті це варіабельний домен без СОН.
Термін "епітоп" або "антигенна детермінанта" стосується ділянки на антигені, з яким зв'язується імуноглобулін або антитіло. Епітопи, як правило, містять щонайменше 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 або 15 суміжних або несуміжних амінокислот в унікальній просторовій конформації, дивіться, наприклад, Еріїоре Марріпа Ргоїосої!5 іп Меїйоавз іп Моїесшіаг Віоіоду, Мої. 66, а.Е.Моттів, Еа. (1996).
Терміни "специфічне зв'язування", "селективне зв'язування", "селективно зв'язуватися з" та "специфічно зв'язуватися 3" стосується зв'язування антитіла з епітопом на заздалегідь визначеному антигені. Як правило, антитіло зв'язується з афінністю (КО) менше ніж приблизно 107 М, наприклад, менше ніж приблизно 109 М, 109 М або 1079 М або менше. Термін "КО" стосується константи рівноваги дисоціації для взаємодії антитіло-антиген. Як правило, антитіло (або антигензв'язуючий фрагмент) за представленим винаходом, зв'язується з СЕА (або його епітопом) з константою рівноваги дисоціації (КО) менше ніж приблизно 10-77 М, наприклад, менше ніж приблизно 1093 М або 109 М; наприклад, значення КО визначають за допомогою способу ГАС5 для афінності антитіла за представленим винаходом, до антигену клітинної поверхні.
Термін "конкурувати" при використанні у випадку, коли антигензв'язуючі протеїни (наприклад, нейтралізуючі антигензв'язуючі протеїни або нейтралізуючі антитіла) конкурують за один й той самий епітоп, стосується конкуренції між антигензв'язуючими протеїнами, аналізованої за допомогою наступного аналізу в якому аналізований антигензв'язуючий протеїн (наприклад, антитіло або його імунологічно функціональний фрагмент) запобігає або інгібує (наприклад, зменшує) специфічне зв'язування еталонного антигензв'язуючого протеїну (наприклад, ліганду або еталонного антитіла) з загальним антигеном (наприклад, антигеном
СЕА або його фрагментом). Для визначення того, чи конкурує антигензв'язуючий протеїн з іншим, є доступними численні типи аналізів конкурентного зв'язування, такі як твердофазний прямий або непрямий радіоїмунний аналіз (РІА), твердофазний прямий або непрямий імуноферментний аналіз (ІФА) та сендвіч-конкурентний аналіз (дивіться, наприклад, їапйії еї аї., 1983, Меїпоаз іп Епгутоіоду 9:242-253), твердофазний прямий біотин-авідин ІФА (дивіться, наприклад, Кіжіапа еї аї!., 1986, 9. Іттипої. 137:3614-3619), твердофазний аналіз з прямий міченням та твердофазний сендвіч-аналіз з прямим міченням (дивіться, наприклад Нагом апа
І апе, 1988, Апііродієз, А І арогаїогу Мапиаї, Соій бргіпа Нагбог Ргезз), твердофазний прямий
РІА з міткою 1-125 (дивіться, наприклад, Моге! еї аї., 1988, Моїес. Іттипої. 25:7-15), твердофазний прямий біотин-авідін ІФА (дивіться, наприклад, Спецпа, еї аї, 1990, МігоІоду 176:546-552) та прямий мічений РІА (Моідепнацег сеї аї, 1990, 5сапа. 9. Іттипої. 32:77-82). Як правило, аналіз стосується використання очищеного антигену, що зв'язується з твердою поверхнею або клітиною, що несе будь-який з немічених аналізованих антигензв'язуючих протеїнів та мічених еталонних антигензв'язуючих протеїнів. Конкурентне інгібування вимірюють шляхом вимірювання кількості мітки, зв'язаної з твердою поверхнею або клітиною в присутності аналізованого антигензв'язуючого протешу. Як правило, аналізований антигензв'язуючий протеїн є присутнім у надмірній кількості. Антигензв'язуючі протеїни, ідентифіковані за допомогою конкурентного аналізу (конкурентні антигензв'язуючі протеїни), включають: антигензв'язуючий протеїн, що зв'язується з таким самим оепітопом, що й еталонний антигензв'язуючий протеїн та антигензв'язуючий протеїн, що зв'язується з сусіднім епітопом досить близько до зв'язуючого епітопу антигензв'язуючого протеїну, та два епітопи просторово інтерферують один з одним для запобігання зв'язуванню. В цілому, коли конкурентний антигензв'язуючий протеїн присутній у надмірній кількості, специфічне зв'язування еталонного антигензв'язуючого протеїну із загальним антигеном інгібуватиметься (наприклад, знижуватись) щонайменше на 4(М5 95, 45-50 95, 50-55 95, 55-60 95, 60-65 95, 65-70 95, 70-75 96 або 75 95 або більше. В деяких випадках зв'язування інгібується щонайменше на 80-85 95, 85-90 95, 90-95 95, 95-97 95 або 97 95 або більше.
Термін "молекула нуклеїнової кислоти" стосується молекули ДНК або молекули РНК.
Молекула нуклеїнової кислоти може бути одноланцюговою або дволанцюговою, але переважно являє собою дволанцюгову ДНК. Нуклеїнова кислота є "функціонально зв'язаною", коли вона є 60 розміщеною у функціональному взаємозв'язку з іншою послідовністю нуклеїнової кислоти.
Наприклад, промотор або енхансер є функціонально зв'язаним з кодуючою послідовністю, якщо він впливає на транскрипцію кодуючої послідовності. "Ідентичність" амінокислотної послідовності стосується відсотка амінокислотних залишків, спільних для першої послідовності та другої послідовності, де при вирівнюванні амінокислотних послідовностей вводяться пропуски, якщо це необхідно для досягнення максимальної відсоткової ідентичності послідовності, та будь-яке консервативне заміщення не розглядається як частина ідентичності послідовності. З метою визначення відсоткової ідентичності амінокислотної послідовності, вирівнювання може бути досягнуто різними шляхами, відомими фахівцям у даній галузі техніки, наприклад, з використанням загальнодоступного програмного забезпечення, такого як ВІАЄТ, ВІ А5Т-2, АПОМ, АГПІОМ-2 або програмного забезпечення
Меадаїїдп (ОМА5ТАВ). Спеціалісти в даній галузі техніки можуть визначити параметри, прийнятні для вимірювання вирівнювання, включаючи будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального вирівнювання повної довжини вирівняних послідовностей.
Термін "вектор експресії" стосується молекули нуклеїнової кислоти, здатної транспортувати іншу нуклеїнову кислоту, з якою вона зв'язана. В одному варіанті здійснення, вектор являє собою "плазміду", яка стосується кільцевої дволанцюгової петлі ДНК, в яку можуть бути ліговані додаткові сегменти ДНК. В іншому варіанті здійснення, вектор являє собою вірусний вектор, в якому додаткові сегменти ДНК можуть бути ліговані у вірусний геном. Вектори, розкриті в даному документі, є здатними до автономної реплікації в клітині-господарі, в яку вони є введеними (наприклад, бактеріальні вектори, що мають бактеріальний початок реплікації, та епісомальні вектори ссавців) або здатні до інтеграції в геном клітини-господаря після введення в клітину-господар і, таким чином, реплікуватися з сгеномом господаря (наприклад, нееписомальні вектори ссавців).
Способи одержання та очищення антитіл та антигензв'язуючих фрагментів є добре відомими в даній галузі техніки, наприклад, способи, описані в спарієг5 5-8 апа 15 "Е Апііродієв:
А І арогаїюгу Мапиаї, Соїа 5ргіпд Натог Ргез5. Антигензв'язуючі фрагменти також можуть бути отримані з використанням звичайних способів. Антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, описані в представленому винаході, є генетично сконструйованими таким чином, щоб вони містили одну або більше додаткових ЕН-ділянок людини в нелюдських ділянках СОВ.
Зо Послідовності зародкової лінії ЕЕ людини можуть бути отримані на сайті НИр//Ітді.сіпев. її ої
ІтМипосСепетісз (ІМСТ) або з іттиподіобиїп іоцгпаї, І езапс, с, Ше Іттиподіобиїййп РасізВоок,
Асадетіс Ргезз, 2001І58М012441351, шляхом порівняння бази даних генів зародкової лінії варіабельної ділянки з програмним забезпеченням МОЕ
Термін "клітина-господар" стосується клітини, в яку був введений вектор експресії. Клітини- господарі можуть включати бактеріальні, мікробні, рослинні або тваринні клітини. Схильні до трансформації бактерії включають представників родини Епіегобрасієгіасеає, таких як штами
ЕзсПегісніа соїї або бЗаЇтопеПйа, членів родини Васійасеає, таких як Васійшє 5иИБі ів;
Рпеитососсив; Зігеріососсиз та Наеторніше іпіцеплає. Прийнятні мікроорганізми включають засспаготусез сегемізіає та Ріспіа разіогіз. Прийнятні лінії клітин-господарів тварин включають клітини СНО (лінія клітин яєчника китайського хом'ячка) та клітини М50.
Сконструйоване антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, за представленим винаходом, можуть бути отримані та очищені з використанням звичайних способів. Наприклад, послідовності КДНК, що кодують важкий та легкей ланцюги, можуть бути клонованими та рекомбінованими у вектор експресії. Вектори експресії рекомбінантних імуноглобулінів можуть бути стабільно трансфіковані в клітини-господарі. Як більш рекомендований попередній рівень техніки, системи експресії ссавців призводитимуть до глікозилювання антитіла, особливо на М- кінці сайту Ес-ділянки. Позитивні клони розмножуються в середовищі в біореакторі для отримання антитіл. Культура з секретованим антитілом може бути очищеною за допомогою звичайних методик, наприклад, за допомогою колонки А або Сі Зерпагозе ЕЕ. Неспецифічно зв'язані фракції вимиваються. Зв'язане антитіло елююють, використовуючи спосіб градієнту рН, фрагменти антитіл виявляють за допомогою 505-РАСЕ та збирають. Антитіло може бути відфільтрованим та сконцентрованим з використанням звичайних способів. Розчинні суміші та полімери також можуть бути видаленими за допомогою традиційних способів, таких як молекулярні сита та іонний обмін. Отриманий продукт необхідно негайно заморозити, наприклад, при -70 "С, або ліофілізувати.
Термін "пептид" стосується фрагменту сполуки між амінокислотою та протеїном.
Утворюється шляхом з'єднання 2 і більше молекул пептидними зв'язками амінокислот та є структурно-функціональним фрагментом протеїну. Термін "цукор" стосується біомакромолекул, що складаються з елементів С, Н та О. Вони можуть бути розділеними на моносахариди, 60 дисахариди, полісахариди тощо.
Термін "алкіл" стосується насиченої аліфатичної вуглеводневої групи, яка являє собою лінійну або розгалужену групу, що містить від 1 до 20 атомів вуглецю, переважно алкіл, що містить від 1 до 12 атомів вуглецю, більш переважно алкіл, що містить від 1 до 10 атомів вуглецю, та найбільш переважно алкіл, що містить від 1 до б атомів вуглецю (що містять 1, 2, 3, 4, 5 або 6 атомів вуглецю). Необмежуючі приклади включають метил, етил, н-пропіл, ізопропіл, н-бутил, ізобутил, трет-бутил, втор-бутил, н-пентил, 1,1-диметилпропіл, 1,2-диметилпропіл, 2,2- диметилпропіл, 1-етилпропіл, 2-метилбутил, З3-метилбутил, н-гексил, 1-етил-2-метилпропіл, 1,1,2-триметилпропіл, 1,1-диметилбутил, 1,2-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 1,3- диметилбутил, 2-етилбутил, 2-метилпентил, З-метилпентил, 4-метилпентил, 2,3-диметилбутил, н-гептил, 2-метилгексил, З-метилгексил, 4-метилгексил, 5-метилгексил, 2,3-диметилпентил, 2,4- диметилпентил, 2,2-диметилпентил, 3,3-диметилпентил, 2-етилпентил, З-етилпентил, н-окитл, 2,3-диметилгексил, 2,4-диметилгексил, 2,5-диметилгексил, 2,2-диметилгексил, 3,3- диметилгексил, 4,4-диметилгексил, 2-етилгексил, З-етилгексил, 4-етилгексил, 2-метил-2- етилпентил, 2-метил-З-етилпентил, н-ноніл, 2-метил-2-етилгексил, 2-метил-З-етилгексил, 2,2- диетилпентил, н-децил, З,З-диетилгексил, 2,2-диетилгексил, та їх різні ізомери бічного ланцюга тощо. Більш переважним є нижчий алкіл, що має від 1 до 6 атомів вуглецю, та необмежуючі приклади включають метил, етил, н-пропіл, ізопропіл, н-бутил, ізобутил, трет-бутил, втор-бутил, н-пентил, 1,1-диметилпропіл, 1,2-диметилпропіл, 2,2-диметилпропіл, 1-етилпропіл, 2- метилбутил, З-метилбутил, н-гексил, 1-етил-2-метилпропіл, 1,1,2-триметилпропіл, 1,1- диметилбутил, 1,2-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 1,3-диметилбутил, 2-етилбутил, 2- метилпентил, З-метилпентил, 4-метилпентил, 2,3-диметилбутил тощо. Алкіл може бути заміщеним або незаміщеним. При заміщенні, замісник може бути заміщений в будь-якому доступному місці з'єднання, де замісник переважно являє собою одну або більше з наступних груп незалежно вибраних з групи, що складається з алкілу, алкенілу, алкінілу, алкокси, алкілтіо, алкіламіно, галогену, меркапто, гідрокси, нітро, ціано, циклоалкілу, гетероциклоалкілу, арилу, гетероарилу, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкілтіо, гетероциклоалкілтіо та оксо.
Термін "гетероалкіл" стосується алкілу, що містить один або більше гетероатомів, що вибрані з групи, що складається з М, О та 5, де алкіл є таким, як визначено вище. Термін "алкілен" стосується насиченої лінійної або розгалуженої аліфатичної вуглеводневої групи, що має 2 залишки, отримані з вихідного алкану шляхом видалення двох атомів водню від одного й того самого атома вуглецю або двох різних атомів вуглецю. Це лінійна або розгалужена група, що містить від 1 до 20 атомів вуглецю, переважно алкілен, що містить від 1 до 12 атомів вуглецю, більш переважно алкілен, що містить від 1 до 6 атомів вуглецю (що містить 1, 2, 3, 4, 5 або 6 атомів вуглецю). Необмежуючі приклади алкілену включають, але не обмежуються цим, метилен(-СнНе-), 1,1-етиліден(-СН(СНз)-), 1,2-етил іден(-СНегСнН?2)-, 1,1-пропіліден(-СН(СНеСНЗ)-), 1,2-пропіліден(-СНаСН(СНз)-), 1,3-пропіліден(-СНаСНоСнН»-), / 1,4-бутиліден(-СНаСНагСНесСнН ег-), 1,5-бутиліден(і-СНаСНг.СНСНоСнН»-) тощо. Алкілен може бути заміщеним або незаміщеним. При заміщенні, замісник може бути заміщений в будь-якому доступному місці з'єднання, де замісник переважно незалежно вибраний з групи, що складається з алкілу, алкенілу, алкінілу, алкокси, алкілтіо, алкіламіно, галогену, меркапто, гідрокси, нітро, ціано, циклоалкілу, гетеро циклі лу, арилу, гетероарилу, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкілтіо, гетероциклоалкілтіо та оксо.
Термін "алкокси" стосується -О-(алкілу) та -О-(незаміщеного циклоалкілу), де алкіл або циклоалкіл є таким як визначено вище. Необмежуючі приклади алкокси включають: метокси, етокси, пропокси, бутокси, циклопропілокси, циклобутокси, циклопентилокси (та циклогексилокси. Алкокси може бути необов'язково заміщеним або незаміщеним, та при заміщенні, замісник переважно являє собою одну або більше з наступних груп незалежно вибраних з групи, що складається з: алкілу, алкенілу, алкінілу, алкокси, алкілтіо, алкіламіно, галогену, меркапто, гідрокси, нітро, ціано, циклоалкілу, гетероциклоалкілу, арилу, гетероарилу, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкілтіо та гетероциклоалкілтіо.
Термін "галогеналкіл" стосується алкільної групи, в якій водень є заміщеним одним або більше галогенами, де алкіл є таким, як визначено вище.
Термін "дейтерований алкіл" стосується алкільної групи, в якій водень є заміщеним одним або більше атомами дейтерію, де алкіл є таким, як визначено вище.
Термін "гідроксиалкіл" стосується алкільної групи, в якій водень є заміщеним однією або більше гідрокси групами, де алкіл є таким, як визначено вище.
Термін "гідрокси" стосується групи -ОН.
Термін "галоген" стосується фтору, хлору, брому або йоду.
Термін "аміно" стосується -МН». 60 Термін "нітро" стосується -МО».
Термін "ціано" стосується -СМ.
Представлений винахід також включає різні дейтеровані форми сполук формули (1).
Кожний доступний атом водню, зв'язаний з атомом вуглецю, може бути незалежно заміщений атомом дейтерію. Спеціалісти в даній галузі техніки можуть синтезувати сполуки формули (І) у дейтерованій формі з посиланням на відповідну літературу.
Комерційно доступні дейтеровані вихідні матеріали можуть бути використаними для отримання дейтерованих форм сполук формули (І), або вони можуть бути синтезованими з використанням звичайних способів з дейтерованими реагентами, включаючи, але не обмежуючись цим, дейтерований боран, тридейтерований боран в тетрагідрофурані, дейтерований алюмогідрид літію, дейтерований йодетан, дейтерований йодметан тощо.
Термін "необов'язковий" або "необов'язково" означає, що подія або обставина, що описані пізніше, можуть, але не обов'язково, мати місце, та що опис включає випадки, коли подія чи обставина відбуваються або не відбуваються. Наприклад, "гетероциклічна група необов'язково заміщена алкілом" означає, що алкіл може бути присутнім, але не обов'язково, та що опис включає випадки, коли гетероциклічна група є заміщеною або не заміщеною алкілом.
Термін "заміщений" означає, що один або більше, переважно до 5, більш переважно 1, 2 або
З атоми водню в групі є незалежно заміщеними замісниками. Замісник знаходиться лише у своєму можливому хімічному положенні, та спеціалісти в даній галузі зможуть визначити (експериментально або теоретично) можливе чи неможливе заміщення без надмірних зусиль.
Наприклад, він може бути нестабільним, коли аміно або гідрокси, що мають вільний водень, зв'язаний з атомом вуглецю, що має ненасичений (наприклад, олефіновий) зв'язок.
Термін "фармацевтична композиція" стосується суміші, що містить одну або більше сполук, описаних у даному документі, або їх фізіологічно/фармацевтично прийнятні солі або проліки, та інші хімічні компоненти, наприклад, фізіологічно/фармацевтично прийнятні носії та ексципієнти.
Призначення фармацевтичної композиції полягає в тому, щоб сприяти введенню в організм, що полегшує абсорбцію активного інгредієнта, тим самим виявляючи біологічну активність.
Термін "фармацевтично прийнятна сіль" стосується солі кон'югатів антитіло-лікарський засіб за представленим винаходом, або солі активної сполуки, описаної в представленому винаході.
Такі солі є безпечними та ефективними при застосуванні у суб'єкта та мають необхідну біологічну активність. Кон'югат ліганд-лікарський засіб за представленим виноходом, містить щонайменше одну аміногрупу і, таким чином може утворювати сіль з кислотою. Необмежуючі приклади фармацевтично прийнятних солей включають: гідрохлорид, гідробромід, гідріодат, сульфат, бісульфат, цитрат, ацетат, сукцинат, аскорбат, оксалат, нітрат, сорбат, гідрофосфат, дигідрофосфат, саліцилат, гідро цитрат, тартрат, малеат, фумарат, форміат, бензоат, мезилат, етансульфонат, бензолсульфонат та п-толуолсульфонат.
В одному варіанті здійснення представленого винаходу, цитотоксичний препарат є кон'югованим з меркаптогрупою антитіла за допомогою лінкерної одиниці. Навантаження кон'югату ліганд-цитотоксичний препарат може бути контрольоване за наступними необмежуючими способами, включаючи: (1) контроль молярного співвідношення зв'язуючого реагенту до моноклонального антитіла, (2) контроль часу реакції та температури, та (3) вибір різних реагентів.
Для отримання традиційних фармацевтичних композицій робиться посилання на СПіпезе
Рпаптасоровіа.
Термін "фармацевтично прийнятний носій" для лікарського засобу за представленим винаходом, стосується системи, яка може змінювати спосіб попадання лікарського засобу в суб'єкт та розподіл лікарського засобу в суб'єкті, контролювати швидкість вивільнення лікарського засобу та доставляти лікарський засіб до цільового органу. Вивільнення носія лікарського засобу та цільової системи, може зменшити деградацію та втрату лікарського засобу, зменшити побічні ефекти та покращити біодоступність. Наприклад, полімерні поверхнево-активні речовини, які можуть бути використані як носії, можуть самозбиратися завдяки своїй унікальній амфіфільній структурі з утворенням різних форм агрегатів, таких як міцели, мікроемульсії, гелі, рідкі кристали та везикули, як переважні приклади. Агрегати мають здатність інкапсулювати молекули лікарського засобу та мають гарну проникність для мембран, тому вони можуть бути використані як чудові носії лікарських засобів.
Термін "ексципієнт" являє собою добавку, крім діючої речовини, до фармацевтичної композиції. Його також можна назвати ад'ювантом. Наприклад, зв'язуючі речовини, наповнювачі, розпушувачі, лубриканти в таблетках; основа у напівтвердих мазевих та кремових препаратах; консерванти, антиоксиданти, коригенти, ароматизатори, співрозчинники, бо емульгатори, солюбілізатори, агенти, що регулюють тонічність, барвники тощо у рідких формуляціях, всі можуть бути віднесені до ексципієнтів. Термін "розріджувач", також відомий як наповнювач, використовується в першу чергу для збільшення ваги та об'єму таблетки.
Додавання розріджувача не лише забезпечує певний об'єм, але також зменшує відхилення дози основних інгредієнтів, покращує пресування лікарського засобу тощо. Коли лікарські засоби в таблетованій формі містять олійні компоненти, обов'язково додають абсорбент для поглинання олійних компонентів, для підтримування "сухого" стану та полегшення приготування таблетки.
Приклади включають крохмаль, лактозу, неорганічні солі кальцію, мікрокристалічну целюлозу тощо. Фармацевтична композиція може бути у формі стерильного водного розчину для ін'єкцій.
Доступні та прийнятні носії або розчинники включають воду, розчин Рінгера та ізотонічний розчин хлориду натрію. Стерильний розчин для ін'єкцій може бути стерильною мікроемульсією олія-у-воді для ін'єкцій, в якій активний інгредієнт розчинений в олійній фазі. Наприклад, активний інгредієнт розчиняють у суміші соєвої олії та лецитину. Потім олійний розчин додають до суміші води та гліцерину та обробляють для утворення мікроемульсії. Ін'єкція або мікроемульсія можуть бути локально введені в кровотік суб'єкта у великих кількостях. Як альтернатива, може бути бажаним вводити розчин та мікроемульсію таким чином, щоб підтримувати постійну циркулюючу концентрації сполуки за представленим винаходом. Для підтримання такої постійної концентрації, може бути використаний безперервний пристрій внутрішньовенної доставки. Прикладом такого пристрою є насос для внутрішньовенних ін'єкцій
Репйес САБО-РІ 0О5.ТМ.5400
Фармацевтична композиція може бути у формі стерильної ін'єкційної водної або олійної суспензії для внутрішньом'язового та підшкірного введення. Суспензія може бути отримана відповідно до попереднього рівня техніки з використанням згаданих вище відповідних диспергаторів або змочуючих агентів та суспендуючих агентів. Стерильна ін'єкційна композиція також може являти собою стерильну ін'єкцію або суспензію, отриману в прийнятному для парентерального введення нетоксичному розріджувачі або розчиннику, наприклад, розчині, приготованому в 1,3-бутандіолі. Крім того, як розчинник або суспендуюче середовище, як правило, може бути використним стерильна нелетка олія. Для зазначеної мети, може бути використаною будь-яка суміш нелетких олій, включаючи синтетичні моногліцериди або дигліцериди. Крім того, жирні кислоти, такі як олеїнова кислота, можуть бути використані при приготуванні ін'єкцій.
Представлений винахід стосується розщеплюваного зв'язуючого плеча з певною структурою, активної речовини з певною структурою та кон'югату антитіло-лікарський засіб (АС), що складається зі зв'язуючого плеча, активної речовини та антитіла. Такий АОС являє собою комплекс, утвореним шляхом зв'язування токсичної речовини з антитілом через спейсер.
Кон'югат антитіло-лікарський засіб (АОС) розщеплюється іп мімо з вивільненням активних молекул, тим самим відіграючи протипухлинну роль. 2. Способи синтезу
Для цілей синтезу прийняті наступні технічні схеми синтезу.
Спосіб отримання сполуки загальної формули (Ре-І а-у-Ю)) включає наступні стадії:
о ев о / у мое
З ї А аия о МН ту | в в2
Ре к Го о о
М / в: сн. о М Й - -- --
Е чнпОоНн (са-0) о о ев о ї ие
З
Ре ХМ емо то Щх
М І | їв?
Мі в в в о о
М
Ї 7 сн. о Х / к- п чнпОоНн Е о (Ре-Г-х-0) піддавання відновленого Рс та загальної формули (Іа-У-О) рекції сполучення з отриманням сполуки загальної формули (Ре-І 4-7-Ю), де відновлюючий агент переважно являє собою ТСЕР; зокрема, дисульфідні зв'язки в антитілі переважно зменшуються; де:
Ре, М, 12, 18, В", В, ВР-В", т та п є такими як визначено в загальній формулі (Ре-І а-У-0).
Один або більше варіантів здійснення представленого винаходу є детально описаними в описі вище. Хоча будь-які способи та матеріали, аналогічні або ідентичні тим, що описані в даному документі, також можуть бути використані для реалізації або дослідження представленого винаходу, переважні способи та матеріали є описаними нижче. Інші ознаки, об'єкти та переваги представленого винаходу будуть очивидними з опису та формули винаходу. В описі та формулі винаходу, форми однини включають посилання на множину, якщо в контексті явно не зазначено інше. Якщо не зазначено інше, всі технічні та наукові терміни, що використовуються в даному документі мають значення, як правило, зрозумілі спеціалістам в галузі техніки, до якої належить представлений винахід. Всі патенти та публікації, які цитуються в описі, Є включеними шляхом посилання. Наступні приклади є представленими для того, щоб більш повно проілюструвати переважні варіанти здійснення представленого винаходу. Зазначені приклади жодним чином не повинні тлумачитися як такі, що обмежують обсяг представленого винаходу, який визначається формулою винаходу.
Приклад 1: Отримання рекомбінантного протеїну СЕА та стабільно трансфікованої клітини
Ї. Послідовності рекомбінантного антигену СЕА та протеїну СЕА, експресовані на поверхні клітини
Амінокислотні послідовності СЕА людини з Ес- та Ніз-мітками клонували у вектори експресії клітин ссавців, після експресії та очищення в клітинах 293 Е отримували рекомбінантний протеїн, який потім використовували в дослідженнях наступних прикладів. Тим часом, ген СЕА людини без мітки, ген СЕАСАМ'І людини та ген СЕА мавпи трансфікували в клітини СНО з утворенням клітинного штаму СНО, що експресує протеїн СЕА на поверхні клітин, для подальшого скринінгу та ідентифікації антитіл. Амінокислотні послідовності споріднених протеїнів є наступними: 1. Амінокислотна послідовність СЕА-Ніз людини (НСЕА-НІв):
ВІПЛІЕЗІРЕМУАБОКЕУІі І ІУНТІ РО СУХУ ТКС ТОК УГТ ОЮАТРОСВРА
ВСЕ ЕРМАЗ ЛО МИОМО ТС НУТУ МН УМБЕБАТСООКЕКУ УРЕ КРУ ММОКРУ
БІОЖБАУАРІСЕРЕТОПАТУ ДЛУУММС РУХРЕТ СІ ЗМСОСМЕТІ ТІ ЕМУТАМІОТА ВСЕ тТОКРУ5АКЕОЗУЦІЯУІ УСРЛАРІЗРІМІБУКСЕМЕ МІ БСНААЗКРЕА ОУН ВУ МС
ЕС ІБІВІРОТІ У Мм АНМОУСОІ МКУ ХАБРРЕКРВІТЗУМОМРУ БЕ
ПАУАЛІТСБРЕКИТІЗІЛАЛИ УВО РУЗРКЕ СМ ЯМІ ЗУ ТАКОУСРУВСОВОМЕ
ТБУМНЗОРМУП МУ УСРОПРІБРОК ТУ УКРОУКІ ВІ АСНА АЗМРРА СТЕК ПОСТІВ
ЗБЕРІ БЕМчч У ТО ОА МАНКУ КТТУЗАБІЇ РКРУОЕУМЧУЗЕРУБІКАУА ГЕ
ТІСБРБЕАСОМТТІ АЛЛУ І РУБ ОМ ОМОМКІІІ МУ АМОАКАУ УСНО МУ ЗАМ
ВРУ ГІ ТСРЮОТРНЗРРОБОТІ САМІ МАСА КРаРОТ КК РОЮНТОЧІ ЕІ
АКІТРММОНІТАСВУМЧ АТОМ РУККТУВАаА ЗІ ЗРО МА НННННЕ
ЕОМ І
(ЗЕОІО МО: 1) 2. Амінокислотна послідовність СЕА-Ес людини (ПСЕА-Ес):
КРПІВВІРЕМУАВОКЕУТІТЕУНМ РОБ КОСУ КОКС КО АТРОРА
УБОКЕПУРМАКІ КХП ОМЕ СУ НУ ОН 5 МЕБАТООВКУ УВГ РЕКРУІЗУМКМАРУ
ЕПКЛАУАКІСЕРЕТООАТТІАУ УМО РУЗРЕ ОБЗМОМКІЛІЕМУТКМОТАУУ СЕ.
ТОМРУЗА ВЕ УП МУ УСРІАРІББРІ КТС МСА АЗМРЕАСТ ВИК УКИТГ г ОБЕКІВНЧ УМО ОСА ЧЕТ УТ УТАВРРКРВРІТЗМКУМРУБЕВ
ПАУАГІСБРЕЮМТТ ТІК УМОВ РЗК ЗМЕН КТІЛ1ГУУ КМУ ЄСРУВОСЮЧЕ
ІЗУБНУОРУЦ ЧУ ОРІ РІБРУТУІУУКРОУМІ ОТ АСПА АУРА НК КН
ЗЕБРЕМИ ВМС ТО АММяОАБОНЗВТ ГУК УЗА В РКРЕБВОМУБЕРУВІКВАУАР
ТСБРВАСМТІхІ у УК РУБРКІ ОЇ ЗМОСМеКТІТЕЕМУТИМОАКАХУ УКОСУ ВАМ
КОРУ БУТ ЗР РПОРРОЗаТі БА МЕМ СН ВАМКРЕРОТ У КК РОСНІСУКРІ
АКПТРУКМСІхАСРУІ АТОМ УКГ УВАБТОРОЇ ЗАРАБОТОК
КОСУ АВРАРКЛТАЛУКТЕ КС КО КУЛЕРИ АК АКТ ТРЕСТ КТКРИКЕСУ
УГТ НОСТІ ЛКК РАК Я Я ВАТА КОС ОРКЕРОГУТЕЕВ ЛЕ ТА
АЮ СТАС РАЮ ЕТО СОРТАХ ВЕ ЕК ТО КАНТОЮСКА
ЗОБУ ТОК Ос 5 ПМ 3. Амінокислотна послідовність СЕА-Ніх яванської макаки (супоСЕА-НІв): «ІДЕ ЗАРЕМУАВОКЕУТ БАНКУ ЕС ПУТ СЕКСУ ЧТРОРАН аКБІШЕМАМ ТОМУ ТОБТО ІВІУКЕБУКЕБАГТОСЕКУХРЕЕРКРУТТ МІОМІ
БОКБАУАТТСЕРЕТОБ ГТУ А УМ ЗІ РУЗРКЕБІ ЗДМУ МІР МО ІяТ СВ
ОМРУЗУКЕЗОРУТ МУ ОСРБАРІЇЗРІ МТРУКАСЕТІМІЛСНА А5КМРТА СУБ УРУ МО
ГОСТРУ ММС МОСА НМА МК ТУТАТУТАБІЕРКРЕУ ТЯМ ЗМРІБОК
ПАУТІТСБРЕТОБТІ ЗІ У ММК УВК ВЕЗМЕЧКТІТУМ РКК ТЕХ ЕСЕТОМР
5УККЗІРУ ТОМУ ТОСРОАРІІЗРІМІВУКАСВМІ МСА АОМРА АСУ БУБУ МОТРЯ
ЗІБ ВІВМИ УМСА НМВАТОЇ МКІТУТАТУУВЕРКРУ ОМАРА,
УТІТСЕРУАЕМТІІ У У КМУ СО МОСК ІЕЕ УТМР СОМ ЕВ
АККЗПРУЗЕМУТЖСРІМРПОРВРІМ БУКА ОСНО ОМРОРОЗч КИ ТІ КОНТО
І РІЗКО ММУМОСАУАСвУМЕ Атоми У зо АРІ ЗаАННННІНІ
СаО НОМ Зі 4. Амінокислотна послідовність СЕА людини, експресована на поверхні клітин СНО (НСЕА-
СНО):
МЕ5РЗАРРНЮУСТР УС ЕЕ ЕТАМІТЕКУМРРІТАКІ ТЕЗ ТРЕКМУАБСКЕУТ ТІ УНМЕ РОН ікс МКУ КОСА ТРОСРАЖа КЕНЕ РМАІ ПОМ МЕТ СВУТЬН
УЖКНХУМЕБАТССЕКУУРЕЕРЕРОТОКМУМЗЕРУБЛКПАСАРТСВРЕТОПАТ УЮ УММКИ
5ЕБРВУБЗРКІДМ БМОСМВІЗРЕМУТЕМІНАВТКСЕТОМРУБАККОЗУН МУ У СРВА РІВ 1МіІБтКяОВІ МОСТА АЗМРРАСТТ УВУ МОТО ОБЕРТУ ММС ОА НМ
БІСКВІТУ ТІТГУТАБРРЕЮРРТТЗМКУМРУБЕЕВАМАТТСБРЕІМТТ ТІ ЛУ УМО РУ
ЗРК ЗМЕЛУКТІІ 1 5У ТЕМПУС УСС УУ ПНР УН МУ КСРООВГЕРЗЕ ТУ
КРОСУ З ОСНААЗМРРАОУ МА ОМП ЕБОТЕКЕМОСТТСОАКМВА
ЗВГ УКІТТУЗАБЕРКРЕБОММЧОКРУВИКПАУАВТСБРЕАСОМІ ГУ КУ МОСС РУК
ПИиЗМОМКпІТЕМУ ЕМ АКАТУССПОМУЗАКЕБОРУ ГУБУ СР РНОРРОМОТІ 5
СоАМІІЗСНАБМРОРОКЗУ ВІСІ РООНІОУ ІА КПТ РиММОоТАСРУузМ АТОМ
УК УБАС ІРО АСАД У САНУ АТУАТІ
СЗЕС БО 4 5. Амінокислотна послідовність СЕА мавпи, експресована на поверхні клітин СНО (супоСЕА-
СНО):
Я МЕРСІЗЖТЕ ІХАПКСУСССИІЛІБЗКРЕМУАВСКЕМІТ ТА НМУВО МВС КСЕКУ В
АВК СУНВТООГРОРАНОСОКЕІО МАКОМ ОТО ІЗ У КЕ УМЕБАТО
ОБЕУТРЕЕРКРЕУТІ ЗМУ ХРІН ОКА ТС ТОП ІЛЕ УМО РУБКИ
ВІІТГУРМІРЕМОТІЗЖКСЕТОМРУУВАПРУТІ МУ УСРЮАРІФУРІ МІРУ КАСЕУР МІГ
СНААХМРІАДСЖЕЖЕУМОТБОЮЗТОБЕБІРІ ГУ ММС КАЧА МЕ ТУТАТГУ
ЗАБЕРЕРУГПЕММЕОМРІБ КО АУ ТІ СЕРЕ ГІ АЛИ У МОКІЯ УЗА МИХ.
ТУБМІРЕМІЕНТЕТЕСБТОМРУБУККВОРУТ МУ СРОАРІБРІЕМІРУКАСЕМІ МЕС
ААБМРААСУУБУРУМСІКОЗЕОСЕЕРМНУКеа МОАНМЗАТОРЕ МКУ ГАТГУХ
УБІЕРЕРТІСВМЧМОЧРЕЕНКИОЛУТІЛСЕРУА МІГ АУБ УРЕ СМ ЯМОК ТІ, 15УТЕМІТСРУБСОСКИЕЗАККОМРУТІ МУТУСРВІРНОВКНМИ ТКА МІ М ЗСНЯЛВ
МРС ОТ КОНТСУТ РІЗКІ ЗМ МОСАУАСРУЄМ АТОМ УКМУ КИ ВА
Розі зЗААГУуСІНСМІ АСУ І
ГБО НМ 5 6. Амінокислотна послідовність СЕАСАМІ людини, експресована на поверхні клітин
СНО БАСАМРЬСНО
МОлЛИХАРІНКУКУРАННЧЯТІТАМІТЕУМРРІТАСІТЛІБЗМРЕМУА СКЕЛІ УНМІ Я
ПОГРОМ ста ОЗАТРОРБАМОЗКЕТРМАК І ОМУТОМЕОМО
ЕЗТОУ ОМ УМЕБАТОЕНУТРБІ ВЕРЗІЗЯММаУМРУБОЖПАМАКТСЕВЕТОЮТІЧІ У
УНМОБРУБРКЕСМ МОМ УТМР У СБК У МАМ ПРУТІ МУТ УСЕ
ТРІО ТУВРААМІ ЧЕ СУА А МРС ЧТО ТОБІ У ММС
АММУТОСМКАТІУКІНУТЕЕЗРУУА КРОК АКТТУ ГООКОБУМІ ТС ОТО НЛУВЕ
МКОЗІРОЗБЕКМКТОСКІМІТІ ЗЕРУКЕЕПАСТ МУСЕМЕМРІЗКМОЗИРВИ МУМУМА ТВ
МІРРМЕММЕУТТВТІМРЕАСКВТОРІЗАХРЯЇ ТАТУ ККО
(ЗЕ На о
ІЇ. Очищення споріднених протеїнів 1. Очищення протеїну з Нібз-міткою
Зразок супернатанту експресії клітин центрифугували на високій швидкості видалення домішок. Нікелеву колонку врівноважували буфером РВ5 (рН 7,4), промивали 2-5 об'ємами колонки, та зразок супернатанту наносили на колонку Мі Зерпагозе ехсеї зі швидкістю потоку.
Колонку промивали буфером РВ5 до тих під, поки показник Агво не знижувався до вихідного рівня. Потім хроматографічну колонку промивали РВОш-1О мМ імідазолу для видалення неспецифічно зв'язаних домішкових протеїнів та рідину, що витікла збирали. Назавершення,
цільовий протеїн елюювали розчином РВ5, що містить 300 мМ імідазолу, та збирали пік елюювання. Зібраний елюат концентрували, та буфер зразка замінювали на РВ5 розчин за допомогою знесолюючої колонки, для отримання суміші для застосування в наступних дослідженнях. 2. Очищення протеїну, що містить Ес, химерне антитіло та гібридомне антитіло
Зразок супернатанту експресії клітин центрифугували при високій швидкості для видалення домішок, рекомбінантний протеїн, що містить Ес, супернатант експресії химерного антитіла очищували з використанням колонки з протеїном А, та супернатант експресії гібридоми очищували з використанням колонки з протеїном (3. Супернатант наносили на колонку зі швидкістю потоку. Колонку промивали РВ5 до тих пір, поки показник А280 не знижувався до вихідного рівня. Цільовий протеїн елюювали 100 мМ оцтової кислоти при рН 3,0 та нейтралізували 1 М Трис-НСІ при рН 8,0. Елюйований зразок концентрували, та буфер зразка замінювали РВ5 з отриманням суміші, яку ділили на аліквоти для подальшого застосування.
Приклад 2: Отримання мишачого моноклонального анти-СЕА антитіла людини 1. Імунізація та злиття
Мишей імунізували протеїном ПСЕА-Ніх та протеїном супо-СЕА-Ніз або перехресно імунізували клітинами НСЕА-СНО та клітинами супоСЕА-СНО. Кількість протеїну для імунізації становила 50 мкг для першої імунізації та 25 мкг для подальших імунізацій, клітинна імунізація становила 107 клітин на імунізацію, та імунізацію проводили один раз кожні два тижні. Після 3-х імунізацій, відбирали кров для визначення активності антитіл в сироватці. Мишей, у яких титр антитіл у сироватці був високим та досягав плато, відбирали для злиття спленоцитів.
Лімфоцити селезінки та клітини мієломи, клітини бр2г/0 (АТСС? СВІ-8287"7М) зливали за допомогою процедури злиття, опосередкованої ПЕГ, з отриманням гібридомних клітин. Злиті гіоридомні клітини ресуспендували в напівтвердому повному середовищі МС (середовище
АРМІ-1640, що містить 20 95 ЕВ5, 1хНАТ, 1хОРІ та 2 95 метилцелюлози) при щільності 0,5-1х106 клітин/мл, суспензію аліквоти поміщали в чашки для культивування клітин діаметром 35 мм та інкубували при 37 "С з 5 95 СО» протягом 7-9 днів. На 7-9 день після злиття, залежно від розміру клітинного клону, окремі клітинні клони збирали в 9б-лунковий планшет для культивування клітин, додаючи 200 мкл/лунку повного середовища НТ (середовище АРМІ-1640, що містить 2095 ЕВ5, 1хНТ та 1хОРІ), культивували при 37 С з 595 СО» протягом З днів, та потім детектували. 2. Скринінг клітин гібридоми
Первинний скринінг антитіл проводили на основі імуноферментного аналізу (ІФА) антигенів клітинної поверхні. Клітини наносили на планшет для ІФА (Согпіпод, Саї Я 3599) та культивували протягом ночі в інкубаторі при 37 "С. Коли клітини повністю прилипли до стінки та майже заповнювали всю лунку, супернатант видаляли. Клітини один раз промивали РВ5, та потім фіксували буфером для фіксації клітин (Веуоійте, Саї Ж РО0О98) при кімнатній температурі протягом 45 хвилин. Фіксуючий буфер видаляли, планшет промивали З рази за допомогою пристрою для промивання планшетів та блокували 5 95 сухим знежиреним молоком при 37 С протягом більше ніж З годин. Блокуючий буфер видаляли, та планшет промивали 3 рази за допомогою пристрою для промивання планшетів. Планшет з блокованими клітинами зберігали при -20 "С використовували безпосередньо. При використанні планшета, додавали супернатант культури клітин гібридоми, розведеної в градієнті, та інкубували планшет при 37 "С протягом 1 години та промивали З рази з використанням пристрою для промивання планшетів. Додавали 100 мкл 10 000-кратно розведеного козиного антимишачого ІдСсї На. (НАР) вторинного антитіла (Абеат, Саї 7 ар205719), та планшет інкубували при 37 "С протягом 1 години та промивали З рази за допомогою пристроюдля промивання планшетів. Додавали 100 мкл ТМВ (КРІ, Саї Ж 5120-0077) та планшет поміщали на 10 хвилин при 37 "С для прояву забарвлення. Реакцію зупиняли шляхом додавання 100 мкл 1 М сірчаної кислоти та зчитували оптичну густину при 450 нм за допомогою ридера для мікропланшетів. Коли антитіло, що досліджується, зв'язувалося з СЕА на клітинній поверхні без конкурентного зв'язування з розчинним СЕА (рСЕА), антитіло інкубували з рСЕА протягом 30 хвилин, та потім додавали в клітинний планшет. Відібрані позитивні клони розмножували, заморожували для збереження посівного матеріалу та субклонували від два до трьох разів до тих пір, поки не отримували одноклітинні клони. Відібрані гібридомні клони додатково отримували та очищували безсироватковою клітинною культурою. Зв'язування отриманого гібридомного антитіла з протеїном СЕА на клітинній поверхні визначали за допомогою проточного цитометра (спосіб є наведеним у
Прикладі дослідження 1 представленого виноходу), та відбирали штами клітин гібридоми з гарною зв'язуючою активністю. Результати визначення зв'язуючої активності моноклональних 60 гіоридомних клітинних штамів тАб47, тАбБб3, тАбБб7 та тАбБ103 є наведеними в Таблиці 1:
Таблиця 1
Результати дослідження щодо зв'язування мишачих антитіл СЕА з протеїнами клітинної поверхні тАрб7 77777777 |7717117190 |... 600 | Зв'язування відсутнє 3. Секвенування гібридомних антитіл
Були відібрані моноклональні гібридомні клітинні штами тАбБ47, тАбБбЗ3, тАбБб7 та тАбБІ103, та послідовності моноклональних антитіл були клоновані. Процес клонування відбувався наступним чином: клітини гібридоми, що ростуть у логарифмічній фазі, збирали, та РНК екстрагували використовуючи Ттгі2о! (Іпийтодеп, Саї 415596-018) та піддавали зворотній транскрипції КДНК. Після ПЛР-ампліфікації з використанням КДНК як матрицю, кКДНК була секвенована компанією, що займається секвенуванням, та амінокислотні послідовності антитіл, що відповідають отриманим послідовностям ДНК, є наведеними в Таблиці 2 нижче:
Таблиця 2
Послідовності варіабельної ділянки мишачих анти-СЕА антитіл нтитіла важкого ланцюга МІ. легкого ланцюга
ОЇ МОБОРЕЇ ККРОЕТУКІЗСКАВЗО МТ ЕІМГТО5РАЇ МААЗРОЕКМТІТО5М
ЕТ Мам5БУУКОАРОИКаИїЇ КУ/МСОСУММТ ЗЗТІЗЗЗМІ НУ МООКЗЕТЗРКРУЛУ тАбі47 УОМУРТУАВОЕКОаВЕАЕБІ ЕТЗА5ЗТАМХІ СТ5М АБМРУПЕЗИОаЗОБОТ5УБІТ
ОІММІ КМЕОТАТУЕЄСАВНОМУСАМ ОБ ІЗЗМЕАЕСААТУУСООСМУБІМРІ ТЕ ружататтутмоев (5ЕО ІО МО: 7 САСТКІ ЕК (ЗЕО ІО МО: 8
ЕМО ООБОРЕЇ МУКРОАЗБУКМЗСОСКАВОа ОМОМТОТРБАЇІ БАБІ СОВМТІЗСВ
УТЕТОЕМММУУВОЗНаТкві ЕМЛОИВІЕР ТБОВІМІМІ ММ МООКРОИ,ТУКИ І тАБбЗ кмамМмтруУМАКЕКОоКАТІ ТМОК5ОМТМ УуУвзагї5аУРзАЕЗОЗОБИТОМБІ.
УМЕЕВ5БІ ТТ ЕОБЗАІМЕСАНЗУаМаТмМУМЕ ТІЗМГЕРЕПІАТУРСООСМТІ РРТЕРС рУМмаОСстІЕТМ55 (ЗЕО ІЮ МО: 9 а,аткКГ ЕК (ЗЕО ІО МО: 10
ЕМО ООБОРЕЇ МКРОАБУКІМСКАБОСУ РІММТО5РАБІ АМ5І аКкКеАТІЗСВА
ТЕТОУНММУУКОЗНОИКОІ ЕУМІИОІМР ЗЕЗУБІТМИ НУ МООКРООРРКІ. тАБб7 рІССТЗУМОМЕКОКАТІ ТМОКЗОЗТАМУ ПУНАБЗБМГЕТОУРАВЕЗОаЗИБИАОЕ
МЕ! 5" Т5ЕОБАУУУСЗАУМОБОБЕАММУ Т ТІОРМЕСООМАЇ УСІ ОАКІРУ
СОСТІ МТМУ5А (5ЕО ІЮ МО: 11 ТтЕсаатТКкМмЕїК (ЗЕ ІЮ Мо: 12
ОІО! УО5ОРЕІККРОЕТУКІЗСКАВОУтТ | РЕУУТОЗЗЗАЗЕЗІОАЗАКСТОТІ З
ЗОНЗТУИПЕММОСОРІ КРРКМУМЕ
ЕТТУМамІМУКОАРОКИЇ КМ/МОУМІМТУ тАБІТОЗ ЗаУРТУАООЕКОВЕАРЕЗІ ЕТ5А5ТАН О Г ккразнзторсілрнгоЗвоА
ВАМ ТІЗМІОРЕСЕАІМІСС МИаМТІК
ІММІ КМЕОТАТМЕСАВККТІ ТТМТРУУБА ЕОРУУУРСОСТКУТМІ. (ЗО 10. МО:
УМ СОСТІ МТУ5А (5ЕО ІО МО: 13) ІА !
Таблиця З
Послідовності СОВ анти-СЕА антитіл
Послідовність СОВ важкого ланцюга СОВ легкого ланцюга . ЗУ55ГІ5З55МІ Н нНСОВІ1 ТМам5 (5ЕО ІО МО: 153 ПІ СОВ1 ЗЕО ІЮ МО: 18
МІМТ У5аУРТУАВОРКа СТ5МІ А5 тарі, НСрна ЗЕО ІЮ МО: 16 (Срна ЗЕО О МО: 19 вамуУсеМрЕрху ООМУБІМРІ Т носоНЗ ЗЕОЮ МО: 17 і сонЗ ЗЕОО МО: 20 рЕМММ ВАТЗОБІМІМІ М неон! ЗЕО ІЮ МО: 21 ГсоН! ЗЕОО МО: 24
БІЕРКМОаМТОММАКЕКО УвБа 5 тарб3 Норна ЗЕО Ю МО: 22 (Срна ЗЕО О МО: 25 заУамиУвру ООСМТІ РРТ нооНЗ ЗЕО Ю МО: 23 Гсонз ЗЕО О МО: 26 рУнмм ВАБЕЗУБНОИТМИ ІН неон! ЗЕО ІЮ МО: 27 ГсоН! 5ЕОО МО: 30
РІМРОТШИаТтОУМОМЕКа НА5БМІ ЕТ тАрбу НСрна ЗЕО О МО: 28 (Срна ЗЕО ІЮ МО: 31
МОБОБЕАМ ГОЗАКІРУТ нооНЗ ЗЕО ІЮ МО: 29 Гсонз ЗЕО Ю МО: 32 , ТІ 55ОНЗТМТІЕ нНСОВІ1 ТМОМІ (ЗЕОІЮ МО: 33) (І СОВІ1 ФЕО І МО: 35
МІМТ У5аУРТУАВОРКа І ккразнеітар таріо3 Нонна ЗЕО ІО МО: 16 (Срна ЗЕО ІО МО: 36
ККТТТУТРУ/ГАУ СМамтІКЕОєУМУМ нооНЗ ЗЕО ІО МО: 34 Гсонз ЗЕО ІО МО: 37
Примітка: послідовності СОВ антитіл у таблиці були визначені відповідно до системи нумерації Кабата. 4. Отримання химерного антитіла ІДСІ людини
Послідовності генів, що кодують варіабельну ділянку, були отримані шляхом ампліфікації та секвенування молекул-кандидатів тАбБ47, тАБбЗ3, тАБбУ та тАБІ103, отриманих шляхом скринінгу гібридом, праймер "голова-хвіст" був сконструйований з використанням послідовностей, отриманих шляхом секвенування, фрагменти генів МН/УК були сконструйовані для кожного антитіла за допомогою ПЛР з використанням секвенованого гену, як матриці та гомологічної рекомбінації з вектором експресії рНг (з сигнальним пептидом та фрагментом гена константної ділянки ПідсСі/йКарра/ліатраа (СНІ-Рс/СІ)) для конструювання повнорозмірної експресійної плазміди рекомбінантного химерного антитіла МН-СНІ-Ес-рНІ/МІ -СІ -рНг, та для подальшого отримання химерних антитіл СП47, СПбЗ, СПб7 та СНП103.
Приклад 3: Гуманізація мишачих моноклональних анти-СЕА антитіл людини
Шляхом порівняння бази даних генів зародкової лінії варіабельної ділянки важкого та легкого ланцюга антитіла ІМТ людини та програмного забезпечення МОЕ, як матриці були вибрані гени зародкової лінії варіабельної ділянки важкого та легкого ланцюга з високим ступенем гомології та СОВА мишачого антитіла були прищеплені у відповідні гуманізовані матриці з утворенням послідовності варіабельної ділянки в послідовності ЕВ1-СО81-ЕН2-СОН2-
ЕВЗ3-СОВЗ3-ЕН4. Амінокислотні залишки СОВ антитіл в наступних прикладах були визначені та анотовані за системою нумерації Кабата. 1. Гуманізація мишачого антитіла тАБ47
Як матриці були вибрані гени зародкової лінії варіабельних ділянок важкого та легкого ланцюгів з високим ступенем гомологіїї наприклад, для мишачого антитіла тАБр47 як гуманізовані матриці легкого ланцюга були вибрані ІКМ6-21701 та ІЯКО2"01, та як гуманізовані матриці важкого ланцюга були вибрані І2НМ7-4-1702 та ІНУЄ"01. СОВА мишачого антитіла тАр47 були прищеплені у відповідні гуманізовані матриці для гуманізації, та конструкція гуманізованих зворотних мутацій для мишачого антитіла тАБр47 є наведеною в Таблиці 4 нижче:
Таблиця 4
Конструкція гуманізації для мишачого антитіла тАБ47
Варіабельна ділянка легкого ланцюга Варіабельна ділянка важкого ланцюга гуманізованого антитіла тАбБі47 гуманізованого антитіла тАбБі47
Прищеплені Прищеплені
МИМО ЦІоКкув-21701нОКугої пЕТУНТДіснм?-4-10241оНУВОЇ
Прищеплені Прищеплені па47МІ2 ов лак 01)--Ї. 46Р пН47УН2 (ІЗНУ7-4-170241ОНУв"01)4Е46К
Прищеплені Прищеплені па47МІ З (пКМб6-21701-4ІаКО2701)-4. 46Р| НА7УНЗ їж ж
І47М, КУ, Е71У (панНМ7-4-1702-42НУ6"01)-838К, Е46К
Прищеплені Прищеплені п47МІ4 (пКМб6-21701-4аКО2701)-. 46Р| нН47УНаА їж х
І47М, Ка9У, 0705, Е71У (панНМ7-4-1702-42НУ6"01)-838К, Е46К
Примітка: положення амінокислот у таблиці пронумеровані із застосуванням системи нумерації Кабата; наприклад, І 46Р означає, що І у положенні 46 мутує у зворотному напрямку до Р, відповідно до системи нумерації Кабата; "Прищеплені" означає, що СОВ мишачих антитіл прищеплені до послідовностей ділянки ЕЕ зародкової лінії людини. Крім того, мутацію О615 додатково вводили у варіабельну ділянку важкого ланцюга НА7УНЗ (тобто, вводили амінокислотну мутацію в антитіло НСОН2 так, що послідовність антитіла
НОСОВ була змінена з МІМГУ5ОаМУРТМАВОЕКИ (5ЕО ІО МО: 16) на ІМТ У5ОУРТМАБОЕКа (З5ЕО ІО МО: 38)) для отримання варіабельної ділянки важкого ланцюга П47УНА зі збереженням гарної активності антитіла.
Специфічні послідовності гуманізованого мишачого антитіла тАБб47 є наведеними в Таблиці 5:
Зо
Таблиця 5
Послідовності варіабельної ділянки гуманізованого мишачого антитіла тАбБ47
Параввльна Послідовності варіабельної ділянки гуманізованого антитіла тАБ47
ЕМОЇ МО5О5ЕЇ ККРаОАБЗБУКУЗСКАБИОУ ТЕТ МОМЗУУВОАРООСІЇ ЕМ МОМ паТУн!І1 МТУБаМуРТМАВОРКОаВЕМЕ5І ОТ5УЗТАМІ ОІ55І КАЕОТАУУ СА вамМмУа А
М рЕрУМС,ОС,ТТУТМ55 (ЗЕО І МО: 39
ЕМОЇ МО5О5ЕЇ ККРаОАБЗБУКУЗСКАБИОУ ТЕТ МОМЗУУВОАРИОСІЇ КУМОММІ па7Унаг МТУБамуРТМАВОЕКОВЕМЕ5І ОТ5УЗТАМІ ОІ55І КАЕОТАУУУСАВ НОМУ, А
М ОЕрУМССОСТТУТМ55 (ЗЕО І МО: 40
ЕМОЇ МО5О5ЕЇ ККРОАБЗБУКУЗСКАБИОУ ТЕТ МОМЗУУКОАРООСІ КУМИУМІ пА7УНнЗ МТУБаМуРТМАВОРКОаВЕМЕ5І ОТ5УЗТАМІ ОІ55І КАЕОТАУУ СА вамМмУа А
М ОЕОУМ аОСТТУТМ55 (ЗЕО ІЮ МО: 41
ЕМОЇ МО5О5ЕЇ ККРОАБЗБУКУЗСКАБОМ ТЕТ ТМаМУМУУКОАРООІ КМУМОУМІ па7Уна МТУБамуРТМАБОЕКОВЕМЕБ5І ОТ5УЗТАМІ ОІ551І КАЕОТАУУУСА В НОМУ, А
М ОЕрУМСОСТТУТМ55 (З5ЕО І МО: 42
ЕІМГТО5РОБРОБЗМУТРКЕКМТІТО5У55ТІЗ5ЗМІ НУ МООКРООБРКИ ІКатМІ А п47МІ1 ЗаУРБЗАЕЗИаБаБаТОгЕТІ ТІМ ЕАЕОААТУУСООМ/5ІУРІ ТЕС ОСТКІ ЕК (ЗЕО І
МО: 43
ЕІМГТО5РОБРОЗМУТРКЕКМТІТО5У55ТІЗ5ЗМІ НУ МООКРООБРКРИМОТОМІ А па47МІ2 заУРБЗАЕЗИаБаБОаТОМмТтІ ТІМ ЕАЕСААТУМСООМУБІМРІ ТРаОСТКІ ЕК (5ЕО І
МО: 44
ЕІМГТО5РОБРОЗМУТРКЕКМТІТО5У55ТІЗ5ЗМІ НУ МООКРООБРКРУЛУС,ТОМІ. па47МІ З АБОУРЗНЕЗОЗИаБИаТОМТІ ТІМ ЕАЕСАДАТУУСООМУБІМРІ ТЕСОСТКІ ЕК (5ЕО
ІО МО: 45
ЕІМГТО5РОБРОЗМУТРКЕКМТІТО5У55ТІЗ5ЗМІ НУ МООКРООБРКРУЛУС,ТОМІ. п47МІ4 АБОУРОНЕЗОБЗИаБИаТОМУТІ ТІМ5І ЕАЕСААТУМСООМУБІМРІ ТЕСОСТКІ ЕІК (5ЕО
ІО МО: 46
Примітка: ділянки СОВ (визначені за системою нумерації Кабата) є підкресленими в таблиці, та сайти мутацій є виділеними жирним курсивом. 2. Гуманізація мишачого антитіла тАбБбЗ3
Як матриці були вибрані гени зародкової лінії варіабельних ділянок важкого та легкого ланцюгів з високим ступенем гомологіїї наприклад, для мишачого антитіла тАБбЗ3, як гуманізовані матриці легкого ланцюга були вибрані ІЯКМ 1-39701 та ІЯКО4"О1, та як гуманізовані матриці важкого ланцюга були вибрані І2НМ1-46701 та НОТ 01. СОВА мишачого антитіла тАБбЗ були прищеплені у відповідні гуманізовані матриці для гуманізації, та конструкція гуманізованих зворотних мутацій для мишачого антитіла тАбБб3 є наведеною в Таблиці 6 нижче:
Таблиця 6
Конструкція гуманізації для мишачого антитіла тАбБбЗ3
Варіабельна ділянка легкого ланцюга Варіабельна ділянка важкого ланцюга гуманізованого антитіла тАббЗ3 гуманізованого антитіла тАббЗ3
Прищеплені Прищеплені пБЗМСТ ОС іоКМ-3901410Ку401 ПБЗУНТ | пднмі-46х0141оНУ101
Прищеплені Прищеплені п6ЗМІ2 (СКМІ-39701-4аКОУ4701)-НІ2У, ябЗУНа | (ЮНМ1-46701-4НУ 701)-М691, ВУ,
ЕЙ Т7ЗК
Прищеплені Прищеплені пеЗМІ З (С КМІ-39701-4аКОУ4701) 2, ябЗУНЗ | Пе НМ1-46701-42НУ1701)-М48І, М67А,
Кка42а, РАЯМ, Е71У М69І., В71М, Т7ЗК, 82
Прищеплені ябЗУНа | НнМ1-46701-4С2НУ1 "01)-М48І, ВебК,
У67А, М69Г, В71М, Т7ЗК, І 82Е, 5 82А В
Примітка: положення амінокислот у таблиці пронумеровані із застосуванням системи нумерації Кабата; наприклад, 582АВЕ означає, що 5 у положенні 82А мутує у зворотному напрямку до В, відповідно до системи нумерації Кабата; "Прищеплені" означає, що СОВ мишачих антитіл прищеплені до послідовностей ділянки ЕЕ зародкової лінії людини. Крім того, мутацію М545 додатково вводили у варіабельну ділянку важкого ланцюга НЄЗУНІ (тобто, вводили амінокислотну мутацію в антитіло НСОН2 так, що послідовність антитіла
НОСОВ була змінена з ОІЕРКМЕМТОММАКЕКО (5ЕО ІО МО: 22) на ІЕРКбО МТ ОУМАКЕКО (З5ЕО ІО МО: 47)) для отримання варіабельної ділянки важкого ланцюга НЄЗУН5 зі збереженням гарної активності антитіла.
Специфічні послідовності гуманізованого та мутованого мишачого антитіла тАбБбЗ є наведеними у Таблиці 7:
Таблиця 7
Послідовності варіабельної ділянки гуманізованого мишачого антитіла тАБбЗ
Параввльна Послідовності варіабельної ділянки гуманізованого антитіла тАБбЗ3
ЕМОЇ МХО5БСАЕУККРОАБУКУЗСКАБОаМ ТЕТОРУММУУВОАРООССІ ЕМ МаОІЕР пеЗУнІ1 КМаМТОУМАКЕКОАУТМТАОТЗТЗТУММЕЇ 55І А5ЕОТАУУМСАнЗОМОаМУМЕр
УМ СсОСсТІМТУ55 (ЗЕО ІЮ МО: 48
ЕМОЇ МХО5БСАЕУККРОАБУКУЗСКАБОаМ ТЕТОРУММУУВОАРООССІ ЕМ МаОІЕР пвзУнаг КкМамМТОоУМАКЕКОАМУТТМОКЗТЗТУММЕЇ 551 В5ЕОТАУУУСАнЗОМаМУМЕр
УМ СсОСТІМТУ55 (ЗЕО ІЮ МО: 49
ЕМОЇ МХОБСАЕУККРОАБУКУЗСКАБИОМ ТЕТОЕУММУУВОАРОССІ ЕМЛаВІЕР пвЗУнЗ КМаМТОУМАКЕКОВАТІ ТМОК5ТЗТУУМЕБЕ55І АЗЕОТАУУУСАНОЗИаМСМУУЕО
УМ соті МТУ55 (ЗЕО ІЮ МО: 50
ЕМОЇ МХОБСАЕУККРОАБУКУЗСКАБИОМ ТЕТОРУММУУВОАРОССІ ЕМЛаВІЕР пвзУНА КМаМТОУМАКЕКОКАТІ ТМОКЗТЗТУУМЕРЕВБЗІ АВЗБЕОТАУУУСАНОЗИаМСМУМУЕО
УМ сОСсТІМТУ55 (ЗЕО ІО МО: 51
ЕМОЇ МХО5БСАЕУККРОАБУКУЗСКАБИОаМ ТЕТОРУММУУВОА РОСС ЕУУМаІЕР пвЗУНнЬ кБамМтоУМАКЕКОВУТМТАОТ5ТЗТУММЕЇІ 551 В5ЕОТАУУУСАВнЗОМОаМУМЕр
УМ сОСсТІМТУ55 (ЗЕО ІЮ МО: 52
РІОМТО5РБОБІ БАБМООАМТІТСВТБОВІМІМІ МИ МООКРОКАРКІ ПУМАБЗИ І 5
ЗМІ 1 ауРЗАЕЗИаБаБаТтТОгЕТІ ТЗІ ОРЕОБАТУМСООСМТІ РРТРЕаССИТКУЕЇїК (5ЕО І
МО: 53
РМОМТО5РББІ БАБМООВМТІТСАТЗОВІМІМ МУИМООКРОКАРКИ ІМУАаИп 5 п6ЗМ12 ауРЗАЕЗИаБИаБаТОМТтІ ТІЗ5І ОРЕОБАТУМСООСМТІ РРТЕЯСОИТКУЕЇІК (5ЕО І
МО: 54
РОМОМТО5РББІ БАБМООВМТІТСАТЗОВІМІМ МУИМООКРОСАМУКІ ПУУВЗаИгІ 5 пеЗМІ З ауРЗАЕЗИаБИаБаТОМмТтІ ТІЗ5І ОРЕОБАТУМСООСМТІ РРТЕЯСОИТКУЕЇІК (5ЕО І
МО: 55
Примітка: ділянки СОВ (визначені за системою нумерації Кабата) є підкресленими в таблиці, та сайти мутацій є виділеними жирним курсивом. 3. Гуманізація мишачого антитіла тАБб7
Як матриці були вибрані гени зародкової лінії варіабельних ділянок важкого та легкого ланцюгів з високим ступенем гомологіїї наприклад, для мишачого антитіла тАБб7, як гуманізовані матриці легкого ланцюга були вибрані М3КМ4-1701 та І2КО4А"01, І2КМ3-15701 та
І2КУО4"01, або І1КМ1-39701 та І2КО4"О1, та як гуманізовані матриці важкого ланцюга були вибрані ІСНМ1-3701 та ІСНУ1Т"О1, або І12НМ5-51701 та ІСНО1Т"01. СОВ мишачого антитіла тАБб7 були прищеплені у відповідні гуманізовані матриці для гуманізації, та конструкція гуманізованих зворотних мутацій для мишачого антитіла тАБбБб7 є наведеною в Таблиці 8 нижче:
Таблиця 8
Конструкція гуманізації для мишачого антитіла тАбБб7
Варіабельна ділянка легкого ланцюга Варіабельна ділянка важкого ланцюга гуманізованого антитіла тАБб7 гуманізованого антитіла тАБб7 пвб7Мі1 00 |Прищеплені (СКУ4-1701-410Ку4"01) | пб7уні | Прищеплені
ІСНМІ-3701 4НУ"О1 : ж ж Прищеплені пб7МІ2 Прищеплені (КМ 3-15701-4К94701). |нб7Унаг ІСНУБ-51201-44С НО
Прищеплені Прищеплені ж пб7МІ З (СКУЗ-15701410К4701)1АЯЗР, ІБВУ пб7УнЗ чу 01-4СН у 1701)-83 8К, пб7Мі4 |Прищеплені пскмуі-зе нок УгО | 711
Прищеплені пбМ ОО ДоКМ-39701-441ОК4701)303М, АХЗР и
Примітка: положення амінокислот у таблиці пронумеровані із застосуванням системи нумерації Кабата; наприклад, А4ЗР означає, що А у положенні 43 мутує у зворотному напрямку до Р, відповідно до системи нумерації Кабата; "Прищеплені" означає, що СОВ мишачих антитіл прищеплені до послідовностей ділянки ЕЕ зародкової лінії людини.
Специфічні послідовності гуманізованого мишачого антитіла тАБб7 є наведеними у Таблиці 9:
Таблиця 9
Послідовності варіабельної ділянки гуманізованого мишачого антитіла тАБб7 рераввльна Послідовності варіабельної ділянки гуманізованого антитіла тАБб7
ЕМОЇ МХО5БСАЕУККРОАБУКУЗСКАБОаМ ТЕТОУНММУУВОАРСОВІ. п6б7УНІ ЕМ МОабІМРОТВСТЗУМОМЕКОаВМУТІТАОТЗАЗТАУМЕЇ 551 А5ЕОТАМ
УУСАВМ ОБОЗБЕАМУСОСТІ МТУ55 (5ЕО І МО: 56
ЕМОЇ МОБСОАЕУККРОЕБІ КІЗСКОАБОУЗЕТОУНММУМУВОМРОКИЇ Е пв7Унаг МмМарІМмРОИатТ5УМОМЕКОСОМТІЗАРКБІЗТАМІ ОМ/551 КАБОТАМ
УУСАВМ ОБОЗБЕАМУСОСТІ МТУ55 (5ЕО І МО: 57
ЕМОЇ МОБСОАЕУККРОЕБІ КІЗСКОАБОУЗЕТОУНММУУКОМРОКИЇ Е пб7УнЗ МмарІМРОИаТ5УМОМЕКакКМтТІЗМОКБІЗТАМІ ОМ/55І КАБОТАМ
УУСАВМ ОБОЗБЕАМУСОСТІ МТУ55 (5ЕО І МО: 58
РІММТО5РОБІ АУБІ ЧЕВАТІМСВАЗЕЗУЗНИ ТМ ІННУ МООКРООРРК пб7МІ ГИМНАЗМГЕТаУРОВЕЗабЗазатовТІ ІІ ОАЕОМАМУМУСІ ОАКІ
РУТЕСОСТКМУЕ ІК (ЗЕО ІО МО: 59
ЕІММТО5РАТІ БМ5РОЕВАТІ ЗСВАБЗЕЗУБНО ТМ НУ МООКРООСАРА пб7МІ2 ГИМНАЗМІГ ЕТИаІРАВЕЗаЗаЗатЕНТІ ТІЗ5І ОБЕОБГАУМУСІ ОБАКІРУ
ТЕсасТткКМЕЇїК (ЗЕО Ір Мо: 60
ЕІММТО5РАТІ БМ5РОЕВАТІ ЗСВАЗЕЗУБНО ТМ ІНУМУМООКРООРРВАЇГ. пб7МІ З ПУНА5БМГЕТИОУМРАВНЕЗОаЗОЗОТЕНЕТІ ТІЗ5І О5БЕОБАМУМСІ ОБАКІРУ
ТЕСасТткКМЕЇїК (ЗЕО Ір Мо: 61
РІОМТО5РБОБІ БАБМОО ВМТ СВАБЗЕЗУЗНО ТМ НУ УООКРОКАРК пб7МІ 4 ГИМНАЗМГЕТаУРБЗАЕЗаБавзатТОвТІ ТІ ОРЕОБАТУМСІ ОАКІР
УутТЕвааткмеїКк (ЗЕО І МО: 62
РІММТО5РББІ БАБМООВМТІТСВАБЕЗУЗБНИ ТМ ІНУМООКРОКРРК пб7МІ 5 ГИМНАЗМГЕТаУРБЗАЕЗаБавзатТОвТІ ТІ ОРЕОБАТУМСІ ОАКІР
УутТЕвааткмЕїКк (ЗЕО І МО: 63
Примітка: ділянки СОВ (визначені за системою нумерації Кабата) є підкресленими в таблиці, та сайти мутацій є виділеними жирним курсивом.
4. Гуманізація мишачого антитіла тАб1о3
Як матриці були вибрані гени зародкової лінії варіабельних ділянок важкого та легкого ланцюгів з високим ступенем гомологіїї наприклад, для мишачого антитіла тАбБІ103, як гуманізовані матриці легкого ланцюга були вибрані ІСІ М4-69701 та ІСІ 92701, та як гуманізовані матриці важкого ланцюга були вибрані І2НМ7-4-1702 та І4НУТ01. СОВА мишачого антитіла тАбБт03 були прищеплені у відповідні гуманізовані матриці для гуманізації, та конструкція гуманізованих зворотних мутацій для мишачого антитіла тАБбБ103 є наведеною в Таблиці 10 нижче:
Таблиця 10
Конструкція гуманізації для мишачого антитіла тАб10о3
Варіабельна ділянка легкого ланцюга гуманізованого | Варіабельна ділянка важкого ланцюга антитіла тАБб1о3 гуманізованого антитіла тАбб7 . до» я Прищеплені (ПСНМ7-4-
ИТОЗМІ1 |Прищеплені (ІСІ М4-69701-4(31 92701) -К4А9Е| НТОЗУНІ1 1:02-СН 03
Прищеплені (ІІ М4- Прищеплені (ПСНМ7-4-
МОЗМ вох0141с102701)5НЗвУ, КАОЕ тоЗУНе | ухо24оНО) УВК, абК . Прищеплені (ПСНМ7-4-
Прищеплені (ІСІ М4- ж ж птТОЗМІ З 69701101 02701)4НЗ6У, 147У, КА9Е нІоЗУНнЗ иа 01)--М2І, АЗ8К,
Прищеплені (ІІ М4-69701-4ІС2І д2701)-4 М,
МОЗМіЯ |нЗву,147У, КА9Е
Прищеплені (ІІ М4-
ИТОЗМІ 5 |69701-4СІ Од2701)--НЗ36У, С4ЗР, І 47МУ, К4А9Е,
Ув71 пом в Прищеплені (ІІ М4-69701-4ІС2І д2701)-4 М,
НЗбУ, С4ЗР, І 47М, К49Е, 871 пІ03М17 Прищеплені (31 М4-69701--1231 д2701)-4 4У,
НЗбУ, С4ЗР, І 47МУ, К49Е, Е70О0, х871
Примітка: положення амінокислот у таблиці пронумеровані із застосуванням системи нумерації Кабата, наприклад, К49Е означає, що К в положенні 49 мутує в зворотному напрямку до Е, відповідно до системи нумерації Кабата; "Прищеплені" означає, що СОВ мишачих антитіл прищеплені до послідовностей ділянки ЕЕ зародкової лінії людини.
Крім того, мутацію Юб15 додатково вводили у важкий ланцюг НЙТОЗУНІ (тобто, вводили амінокислотну мутацію в антитіло НСОВаО так, що послідовність антитіла НСОВ2 була змінена з
МІМТУБаМУРТМАВОРКИ (5ЕО ІО МО: 16) на МІМТУ5аУРТМАБОРКО (5ЕБЕО ІО МО: 38)); та мутація О56Е була введеною у легкий ланцюг НТОЗМІ З (тобто, вводили амінокислотну мутацію в антитіло І! СОВА так, що послідовність антитіла І! СОВ2 була змінена з | ККОСЗНОТОО (5ЕО
ІО МО: 36) на ККОС5Н5ТИЕ (5ЕО ІО МО: 64)), зі зререженням гарної активності антитіла.
Специфічні послідовності гуманізованого мишачого антитіла тАБбБ103 є наведеними у
Таблиці 11:
Таблиця 11
Послідовності варіабельної ділянки гуманізованого мишачого антитіла тАб1оЗ
ЕМОЇ МО5О5ЕЇ ККРОАБУКУЗСКАБИОУ ТЕТ МОМІМУВОАРООСІ Е позу ММСОУЛМГУБамМРТМАВОЕКОВЕМЕ5І ОТ5УЗТАМІ ОІ55І КАЕОТАУ
ХУУСАВККТІТТУТРУБАММ/ ОСТІ МТУ55 (ЗЕО ІО МО: 65
ЕМОЇ МО5О5ЕЇ ККРОАБУКУЗСКАБИОУ ТЕТ МОМІМУКОАРООСІ К птоОзУНн2 ММСОУЛМГУБамМРТМАВОЕКОВЕМЕ5І ОТ5УЗТАМІ ОІ55І КАЕОТАУ
ХУУСАВККТІТТУТРУБАММ/ ОСТІ МТУ55 (ЗЕО І МО: 66
ЕІ МО5а5ЗЕЇ ККРОАБУКУЗСКАБИаМУ ТЕТ ТУСМІМУКОАРИОСІ КМУ птоЗУнЗ МОаУмМТи5аМРТМАВОЕКОаВЕМЕБ5І ОТ5УЗТАМІ 01551 КАЕОТАУМУУ
САВККТТТУТРМИГАММ/СОСТІ МТУ55 (ЗЕО І МО: 67
ЕМОЇ МО5О5ЕЇ ККРОАБУКУЗСКАБИОУ ТЕТ МОМІМУВОАРООСІ Е позУНнаА ММОаУЛМГУБауУРТМАБОЕКаТВеЕМЕ5І ОТ5УЗТАМІ 01551 КАЕОТАМУ
УСАВККТІТТУТРУ/УРАУУУСОСТІ МТ У55 (5ЕО І МО: 68
ЕГМГТО5РБАБАБІ САБЗУКІ ТСТІ 5БОНЗТМ ПЕУНОСОРЕКОРАМІ М птТОЗМІ 1 Е ККОСЗНОЗТОарСІРОВЕ5ЗавзвзоаАЕВТМІ ТІЗ5І ОБЕОЕАрУУССМОМ
ТІКЕОРММУРОСОсаткіи- ТМ. (5ЕО Ір Мо: 69
ЕГМГТО5РБАБАБІ САБЗУКІ ТСТІ 5БОНЗТМ ПЕМУМОСОРЕКОРВАМІ М птОоЗМІ2 Е ККОСЗНОЗТОарСІРОВЕ5ЗавзвзоаАЕВТМІ ТІЗ5І ОБЕОЕАрУУССМОМ
ТІКЕОРММУРОСОСаткиі ТМ. (5ЕО Ір Мо: 70
ЕГМГТО5РБАБАБІ САБЗУКІ ТСТІ 5БОНЗТМ ПЕУМОСОРЕКОРАУУМ птТОЗМІ З Е ККОСЗНОЗТОарСІРОВЕ5ЗавзвзоаАЕВТМІ ТІЗ5І ОБЕОЕАрУУССМОМ
ТІКЕОЕРММУРОСОаИткіи- ТМ. (ЗЕО Ір Мо: 71
ЕГУМТО5РБАБАБІ САБУКІ ТСТІ ББОНЗТУПЕМУОСОРЕКаРАУУМ птТОоЗМІ4 Е ККОСЗНОЗТОарСІРОВЕ5ЗавзвзоаАЕВТМІ ТІЗ5І ОБЕОЕАрУУССМОМ
ТІКЕОРММУРОСОсаткі ТМ. (5ЕО Ір Мо: 72
ЕГМГТО5РБАБАБІ САБЗУКІ ТСТІ 5ББОНЗТМ ПЕУМОСОРЕКРРАУУМ птТОоЗМІ 5 Е ККОСЗНОЗТОараіРОВЕЗазвваАЕВТІ ТІЗ5І ОБЕОЕАрМІССМОаМТ
ІКЕОЕМУУМРаСсатки ТМ. (5ЕО І МО: 73
ЕГУМТО5РБАБАБІ САБУКІ ТСТІ ББОНЗТУПЕМ УОСОРЕКРРА УМ птТОЗМІ 6 Е ККОСЗНОЗТОарСаІРОВЕЗавзвзваАЕВТМІ ТІЗ5І ОБЕОЕАОМІСОСМОМТ
ІКЕОЕМУМРаСсатки ТМ. (5ЕО І МО: 74
ЕГУМТО5РБАБАБІ САБУКІ ТСТІ ББОНЗТУПЕМ УОСОРЕКРРА УМ пТОЗМІ 7 Е кККОСЗНЗТОарСІРОВЕЗавзБоаАОВМІ ТЗІ ОБЕОЕАОМІССМОМТ
ІКЕОЕМУУМРаСсатки ТМ. (5ЕО І МО: 75
ЕГМГТО5РБАБАБІ САБЗУКІ ТСТІ 5ББОНЗТМ ПЕУМОСОРЕКОРАМУМ птТОЗМІ 8 Е ККОСЗНОТОЕСІРОВЕ5Оа555.01АЕНВТХІ ТЗІ О5БЕОЕАрУУСИа Мам 45
ТІКЕОРММУРОСОаткі ТМ. (5ЕО Ір Мо: 76
Примітка: ділянки СОВ (визначені за системою нумерації Кабата) є підкресленими в таблиці, та сайти мутацій є виділеними жирним курсивом. 5. Отримання гуманізованих антитіл
Вектори експресії легкого ланцюга та важкого ланцюга антитіла були сконструйовані відповідним чином; комбінацію перехресного спарювання проводили на легкому ланцюгу та важкому ланцюзі гуманізованого антитіла, культуральний супернатант збирали та очищували після трансфекції клітин 293Е з отриманням повнорозмірного гуманізованого антитіла.
Константна ділянка важкого ланцюга гуманізованого антитіла може бути вибрана з групи, що складається з константних ділянок ІДС, Іде, 403 Тай Ідс4, та їх варіантів; ілюстративно, константна ділянка важкого ланцюга ІДСі людини (як представлено у 5ЕО ІО МО: 77) була поєднана з вищезазначеною гуманізованою варіабельною ділянкою важкого ланцюга з утворенням повнорозмірного важкого ланцюга антитіла. Константна ділянка легкого ланцюга гуманізованого антитіла може бути вибрана з групи, що складається з константних ділянок ланцюгів к та /Х людини або їх варіантів; ілюстративно, константна ділянка легкого ланцюга к людини (як представлено у 5ЕО ІО МО: 78) або константна ділянка легкого ланцюга У. людини (як представлено у 5ЕО ІЮ МО: 79) була поєднана з вищезазначеною гуманізованою варіабельною ділянкою легкого ланцюга з утворенням повнорозмірного легкого ланцюга антитіла. Послідовності константної ділянки типових антитіл є наступними: Константна ділянка важкого ланцюга ІдсіІ людини:
АБІКОСРУУЕРІАРВОКЗІЗОСІААТ КІ УКОЖЕРЕРАУ ТУМАНУ СО
Сі УУ ТУР ГТ СМУЧНЕРУМІВУПЕКУВРЕЗСІКТНІСРРОРАВЕРІ СЯ
Р5УБІЕВРКРКЕНІ ІКТ УТСУУУПУВНЕПРЕУКЕМУТУТЮУВУНЧАКТЕРКЕВО У
КОТУ ПОЛУ МОКЕТКО КУБКА РАРІЕКТІКА КС РКВРОУУТЕВРЕК
ПЕТ КМОУБЛОІ УКОСУ РЗІЛАУВУВМОСРЕММУКТІВРУТ ПЕРІ ЗКУ КУ
БОКУ МИпЕАТНМНУ ТОК РОК зБО ПМ;
Константна ділянка легкого ланцюга к-ланцюга людини:
ЕТУАДАРЕЖУКІЕРРОЗІБО КОТА УСІЕММЕУРЕБА КУКА ОКИС У ТЕС
Бк ЗІКА ЕКНКУТАСЕУ НОСІ ОБРУТКВЕМАСНС 5 МК В
Константна ділянка легкого ланцюга Х-ланцюга людини: сОРКАМРІТУТІЕРРОЗЕЕЕОАМКАТ УСТ УРОАУТУАЖКАГТЮЗРУКАСУВТРКРК свт ЕТО У НЕО ГУБКТТАРТЕСЬ
БО ПО ЩО У
Ілюстративно, вищезазначена варіабельна ділянка важкого ланцюга гуманізованого антитіла, отриманого з тАБр47, як наведено в Таблиці 5, була приєднана до аміно-кінця константної ділянки важкого ланцюга Ідсі людини, що має послідовність представлену в 5ЕО ІЮ
МО: 77, з утворенням повнорозмірного важкого ланцюга антитіла та варіабельна ділянка легкого ланцюга гуманізованого антитіла, як наведено в Таблиці 5, була приєднана до аміно-кінця константної ділянки легкого ланцюга к людини, що має послідовність представлену в 5ЕО ІЮ
МО: 78, з утворенням повнорозмірного легкого ланцюга антитіла, що призводить до ряду гуманізованих антитіл тАБб47, наведених у Таблиці 12 нижче:
Таблиця 12
Гуманізовані антитіла тАб47
УН
М НА7УНІ па7Унаг пАТУНЗ паАТУна пА7МІ 1 Ни47-1 Ни47-5 Ни47-9 Ни47-13 пА7МІ 2 Ни47-2 Ни47-6 Ни47-10 Ни47-14 пА7МІ З Ни47-3 Ни47-7 Ни47-11 Ни47-15 пА7МІ 4 Ни47-4 Ни47-8 Ни47-12 Ни47-16
Примітка: в таблиці, наприклад, "Ни47-14" означає, що варіабельна ділянка легкого ланцюга гуманізованого антитіла під номером Ни47-14 являє собою П47МІі 2, та варіабельна ділянка важкого ланцюга являє собою Н47МУНА; та послідовність константної ділянки важкого ланцюга є представленою в 5ЕО ІЮО МО: 77, та послідовність константної ділянки легкого ланцюга є представленою в 5ЕО ІЮ МО: 78.
Ілюстративно, вищезазначена варіабельна ділянка важкого ланцюга гуманізованого антитіла, отриманого з тАБбЗ3, як наведено в Таблиці 7, була приєднана до аміно-кінця константної ділянки важкого ланцюга ІдсІ людини, що має послідовність представлену в 5ЕО ІЮО МО: 77, з утворенням повнорозмірного важкого ланцюга антитіла та варіабельна ділянка легкого ланцюга гуманізованого антитіла, як наведено в Таблиці 7, була приєднана до аміно-кінця константної ділянки легкого ланцюга к людини, що має послідовність представлену в 5ЕО ІЮ
МО: 78, з утворенням повнорозмірного легкого ланцюга антитіла, що призводить до ряду гуманізованих антитіл тАБбЗ наведених в Таблиці 13 нижче:
Таблиця 13
Гуманізовані антитіла тАБб3
М ун пеЗУнІ пезУна2 пеЗУНнЗ пеЗзУна пеЗУНЬ пеЗМ1 Ниб3-1 Ниб3-4 Ниб3-7 Ниб3-10 Ниб3-13 пеЗМІ 2 Ниб3-2 Ниб63-5 Ниб3-8 Ниб3-11 Ниб3-14 пеЗМІ З Ниб3-3 Ниб3-6 Ниб3-9 Ниб3-12 Ниб3-15
Примітка: в таблиці, наприклад, "Ниб3-13" означає, що варіабельна ділянка легкого ланцюга гуманізованого антитіла під номером Ниб3-13 являє собою ПбЗМІ І, та варіабельна ділянка важкого ланцюга являє собою НЄЗМУН5; та послідовність константної ділянки важкого ланцюга є представленою в 5ЕО ІЮО МО: 77, та послідовність константної ділянки легкого ланцюга є представленою в 5ЕО ІЮ МО: 78.
Ілюстративно, вищезазначена варіабельна ділянка важкого ланцюга гуманізованого антитіла, отриманого з тАБб7, як наведено в Таблиці 9, була приєднана до аміно-кінця константної ділянки важкого ланцюга ІдсІ людини, що має послідовність представлену в 5ЕО ІЮО МО: 77, з утворенням повнорозмірного важкого ланцюга антитіла та варіабельна ділянка легкого ланцюга гуманізованого антитіла, як наведено в Таблиці 9, була приєднана до аміно-кінця константної ділянки легкого ланцюга к людини, що має послідовність представлену в 5ЕО ІЮ
МО: 78, з утворенням повнорозмірного легкого ланцюга антитіла, що призводить до ряду гуманізованих антитіл тАБб7 наведених в Таблиці 14 нижче:
Таблиця 14
Гуманізовані антитіла тАБб7
УН
М п67УНІ1 пвб7Унаг пб7УНнЗ пб7МІ 1 Ниб7-1 Ниб7-6 Ниб7-11 пб7МІ 2 Ниб7-2 Ниб7-7 Ниб7-12 пб7МІ З Ниб7-3 Ниб7-8 Ниб7-13 пб7МІ 4 Ниб7-4 Ниб7-9 Ниб7-14 пб7МІ 5 Ниб7-5 Ниб7-10 Ниб7-15
Примітка: в таблиці, наприклад, "Ниб7-14" означає, що варіабельна ділянка легкого ланцюга гуманізованого антитіла під номером Ниб7-14 являє собою Пб7МІі 4, та варіабельна ділянка важкого ланцюга являє собою Нб7МНЗ; та послідовність константної ділянки важкого ланцюга є представленою в 5ЕО ІЮО МО: 77, та послідовність константної ділянки легкого ланцюга є представленою в 5ЕО ІЮ МО: 78.
Ілюстративно, вищезазначена варіабельна ділянка важкого ланцюга гуманізованого антитіла, отриманого з тАбБІ103, як наведено в Таблиці 11, була приєднана до аміно-кінця константної ділянки важкого ланцюга ІДСі людини, що має послідовність представлену в ХЕО
ІО МО: 77, з утворенням повнорозмірного важкого ланцюга антитіла та варіабельна ділянка легкого ланцюга гуманізованого антитіла, як наведено в Таблиці 11, була приєднана до аміно- кінця константної ділянки легкого ланцюга /, людини, що має послідовність представлену в 5ХЕО
ІО МО: 79, з утворенням повнорозмірного легкого ланцюга антитіла, що призводить до ряду гуманізованих антитіл тАб103 наведених в Таблиці 15 нижче:
Таблиця 15
Гуманізовані антитіла тАб10о3
УН
М. пТОЗУНІ птоОзЗУН2 пОоЗзУНнЗ позУНнаА пОЗМ І Ни103-Ї Ни103-9 Ни103-17 Ни103-25 птОоЗМІ 2 Ни103-2 Ни103-10 Ни103-18 Ни103-26 птТОЗМІ З Ни103-3 Ни103-11 Ни103-19 Ни103-27 пТОЗМІ 4 Ни103-4 Ни103-12 Ни103-20 Ни103-28 птОЗМІ 5 Ни103-5 Ни103-13 Ни103-21 Ни103-29
ТОМІ 6 Ни103-6 Ни103-14 Ни103-22 Ни103-30 п1ОЗМІ 7 Ни103-7 Ни103-15 Ни103-23 Ни103-31 птоз 8 Ни103-8 Ни103-16 Ни103-24 Ни103-32
Примітка: в таблиці, наприклад, "Ни!103-32" означає, що варіабельна ділянка легкого ланцюга гуманізованого антитіла під номером Ни103-32 являє собою НП10ОЗМІ 8, та варіабельна ділянка важкого ланцюга являє собою пП1ОЗМУНА; та послідовність константної ділянки важкого ланцюга є представленою в 5ЕО ІО МО: 77, та послідовність константної ділянки легкого ланцюга є представленою в 5ЕО ІО МО: 79.
Ілюстративно, повнорозмірні послідовності легкого/важкого ланцюга гуманізованих антитіл є наведеними в Таблиці 16 нижче:
Таблиця 16
Послідовності легкого та важкого ланцюга гуманізованих антитіІ/л
Антитіло Послідовність важкого ланцюга Послідовність легкого ланцюга
ЕКО УСОСАБУККРОСАчУКУКАВУЄЕ те І Іти Бут пт пусте ок чих
ТЕТ ММ У ВОАРОСНЯ БУК НЕВКВСХ ІПОМТОБРЕМ БАВУСБН х. Е г - -- к. г МІ ИїКЕ ник а и В аль таке ую ти р Кл зл ле у тот з й
ТІБЕМЕКЕКОКУІ МІКОЗУ МЕ Б. УТІТСВІКОРІМТІ МКУ
Ж ЕТ ЛКІ КІ ук УК потуг а пет тую
Ех ДУУСАВЕС СВУ ОСТІ, гизж тка вутІІУ УВО етно дж ТЕ ЮСТНІК с пости Ува тити ОСЮКРОКАРКТІТІЖ УВС,
УБУВАЄ их ВТК ТУ ЕВ Я фо дм стою г лЕнтя петртствлхя дт тет ТС УКБА ЕСЕ,
Інтурист ат окт
БРКБКТВЕАвртІрьН ГЕН КРАгІОх ТЗІ ОРЕПЕДТТТСООЄ бе дк х К. же ... кі,
ОСТРОВИ МУУНЕРЯМТ ЗЕ АУБ В Я залою аа ета ля ІІІ МТІРРТвОпОотТКуУНІКАТЕ . їі . УСТА Ж У Ба ЮК
ЕСТУТ ВШ СЕТТлЮ ЕТ От ВЕ ТЕТУ Оу ШТ Би ШЕТ
Нибв3-13 КРОККТЕРК МУЖНІ РОСБЯЕЕБЕСНЛРУЕ завсиртІвевоствум рота - Ки мінета ті и т ЕРРКРЕПІІМЛСВІТРЕУТСрЕТОУУНЕПРЕ дати вІви гово кот піки Люсі КК КІлК ІНВ, СЕЛІ ММЕУвВЕаКрЕ шик ое ат ьк юКя тт тт Вт тлу пт три тот КК х М
КЕН НЕНМа ТКАЧ ТІКТЕ кепУузнесУуєО як а нстте - КІВ АШАТУВОоВМ г сети тих же - тики ув Я т дя те ж ще дж гіпРіневні чекав ПоКТлеТЕссті ля
СЕ зе Ко Ані 3 ОО ст пу отити т Ве ІНТТ КЕ АЗОТ
ТАЛА ЮЧАЕ дну БУВР ЕКЛЕТІ ЕР Те ЕЕБЕРТАСЕНТННЦ дв ект тити Фе тили т топити гкшьий й кажу хи ін У
КЕКС БРІМАЕНТЕАСОРЕКМІКТТРР Рі сект тех 7 хх АТ
ТАКЖЕ те ЕІ КТ ТХ л пу Іти т тт
ПОЕМУ ВІ ІА ТЕН ОО МА ЗЕОІВ МО: 8
СО сш аж. кати КІ їй ях яхті чив ілі КТ
ЕС УстОЗ ві ККРОдУВУ КАК тІсМеМУКОАРОІ КУМ МІМІ БРЕУІ БОБЕР ОЗУТРЕЕКУ
УРІтТАхОрЕСИВУКВІВІМУМІАХІ ВМ Кк ТЕС УувТ МІН о пптАаруУуУ С ДВВОМУСТТИ ТрП ул Кт ух пт тю Вт реле Вт
АБПТАТУУСАКНОСМТ СЕБЕ ОКРІСБРЕРІТТСІЯМІ А тити ВО КЕУДОСІУЦЗЮК З ЕСЕ ТУ вТИУ ти тет -. - й с. пою лот
ТУБАХ ЯКЕ Ес ОсІ Я УЄ СИРО ВЕКОЯСТЕТІ
БТЕКОІКРЕРРІСянТа Тен врЯ гі ТІМЧ БАББААТУ СМ постиж ЖесУж СТУ влив Тек жит ЖЕО - ШЕ У и всі СТОР УНАРЕМХ турки тити етят тт п п ПІТ БІЖРІТЕООСТКІІКЯ
Ний7-14 «РЕОККРЕРКСВКТНІСКРОСТЕЕБЛЮСРУЄ ті попити тьте Кору нат: ЕГЕРРЕРКРІТІМІЗЕТРЕКТСТКТОЕСНЕРРЕ ГАРУММЕТРИЖОКИ
ВБЕРЕ К Р БА ТЕЕКТСТ КЕНЕ ЗЕІТСТІММЕУРВЕЯ кро тод третє рт тт ж кати тити вах кісок Коль М "
ЕКЕВНІгЮСТЕТВХЯАМІКККЕЕО КУТІВ тт ні матем сювсо Ск с жЕовжутИ ст оди ктів сорти БК хе ЕХ
РОТІ НІ АСКЕТКСАРЕМАЯБРаРІНАТ ЯК тю х шву яким тот ПУТІ ги ПЕВ Ти рт УСЕ вч пертеттктоститсвагую
БКАКСОРЕЕРОБІТРРЖЕОВІТЕМОРБКТС КРУТО ТЕТЬОКЯВІ ж. шт тофтиляттт пити г п ти: т кал ЕтиКлтИи ас тЕжУ ти
ІРКОКЕРБІМАКЕТЕОМООРЕММУКІТЕРТЇ ЕКНЕТТАСЕУТНОСТ ЯРУ соту ти тв тую тхтЕт у тити ТЕСТИ
ОВНА ОКА ОДА ГА ІК МКСЕС
«БОонпРщОо я
ЕЕ ит ютер
БУС ЗОБА УККРОВБОУ КІС СЗТ кури прита ту шк уУсту тру м
ПЕНММУУКОМЕЗКОЇЕУМОГІЧРЕНСНІ ТІОМТОдРЕЧІ КАВУ СІВ
КУ з ЕК
ТЕУМОМЕКОСКУТІКИПЕЧІТАч ОМВК ЕОМТОБРУЗЕЗАВУСІЖ
ІМ БІ ЧЕТ х ЗІ ЛЕН ЕІ І БУ ВЕ У СТВ АКЕ ст ІВаТМИ тн сх х Я да Та КЕ в ститя ж вити я тт: пох втерти ут ІІ ть У ІТ,
АЧлЛАМЕУЗСАКУМРОКАМУСсОСІТУТУ ЖтУООКРОКАВКТІТНА чу ЕРА ТУ З с вт Еулл туту ЗО У ве Ує іч жк ж Ех
ЗТ АСУ ІРОК ХУСТ СС ФМ ЕТО УРІВЕЕОсИПщОсТ
ПРЕРЕВЕТКеП Ку ЛІТОЗиНнТЕВе ЕТО ЗМЬЕТЧУГЗКЕЗОЗОВСЯ піти Уу как: ст ікрі ак Волт, теж тт ст тя - ткач
ТЕ СЮ КПТ ЕТ Би ТИРЕ КТІАТЕТЕ КЕР ПЕТЛІ РЕП РАТ Є
ТЕРЕН СТОК РУУТК ГО - ж ІОЗЕКпТУуУТЕСОСІКУВІ
КЕрЕРЕУСпЕТНТЄРррЄВІРКІТСНІВЕТНТЕ із Я ВОЛОТІ РЬУ БЕ
Кк ДАІ ІК НІ галі «втра вок вслИ г
Ниб67 1 4 еЕКРЕБПТІЗИСЕТЕЕЕТСЕКВОЕЕЕВРВЕКК Кк іх гені Оле й, птІивиКхІіміи карі вра КЛІ ТСТІ МКРУреКЯ . - - дет . сел пк млютід видам тити Іл тит І ЕТ шиття а ЕХ мая аск вано
ВЕБЕРА МаАКТККЕЕСОСТУЄТ ТЕ ЕХЕ УРОШЕУПМлОМсНве тет гарт хлут титри тлу кт я вт тих сю Кри ОКА
РЕНО АСК БРА РІЕКТЕВ тк пок ст сет п е . ст - ще кін АТКМІ Іо Ех
І фр мтс ПІСТ ТЕЛ ТюТЕ ех
КАК ОРКЕЕРСВІТЕРРУКДОВЕ ТАКОГО ТС ра ПТЕКНЕЇ пасЕртНнОоє трун тт р ЕЕ тт еВ Мих у Тут ту межу ту жк мазі АНЕІЯ ЕІ
ЕКС УРКНЯЕНВУУСОРЕМКУАКТІВВКЕО гот тЕсЕМвив т сетер тет ря третя дттхтлух - іме КіІКагІюА стислу ут дуть дл Ее Ту УКТу КИ УВІ ТЛТ ОСА ОТ ж їх
ЕМВ ТАТ ТАЛАН ОС РО ЕЕ МНЕ ких т нут. о
І ІП ут СК КЕН ї БО п ЗМ 53
В ЕТО Я й ЛК ЕЕ МЖА,
БОГУШ СОВІККРСсаАТУКУВОКАОСКІ ттїТОБУБрУМОАРЗОСЕ ВУ КНУ х ніс кох троп уколРоОЄсьЕ УМО огевех БІХЛІТОБРІАЗАЖІСАВУ
РТТАЗПЕКОВЕУБЧЕ ОТЗУВТАУ ОВ КА кРТРСТІ сс НеруУТТУ
ЕПІДУХУСАВККТЕТТУТРІЖМЕАУХОСОЮТІ лив жтят ут тент яті дО БЕ СТЕ З пкт Ута вет сСООвЕКсВАТ УМ КК туту ЯРУ ут ннрх утуттт тут тт ня топку кер ук Ко ТЕТ тю Ж В РУ пт их ЕК уся СЗНЕТОВОІОБЕса
ТРЕК ЕРЕРЕГТЕО НЯ ТОН гЕО хо птічут тет ет а го пиютт чл чук усьо у яп ким три тт лтться АБЕЛІТІКЕ ОВЕН АТТХ ит ЗІЗ ТАТ ЕН АКАКЕ тина твоє т -
КРОАКРЕРЕЗСВЕТНІСРРСВІРЕІТ СЮ ТОСУСМІКЕОБУХУРО
Нит03-82 | вгеРРЕРКОТІМІСЕТРЕРТСТТТОТЗНЕРВЕ ЕІ осо ТЕ,
ЕЕТІТАТІД ТТ ІМ а ТЕ УкТОТВТТУ ТЕРРІ СЯ ХК СТІ
КЕНІЯ АТАРНЕКОУКОУТІКР спттреЯ Тр пКагнтви
ФТУЕ БУР ГТУ ТУТ ТКУ овто вт т тв дк тт де КІРА КА
ЕРВІТЕТЕПІЮНІМОСКЕТКСКІЗМКЯЕВЯРІВКТ звгті я ІБНГАЯМЮМІ сво вв дить пірат рт тс т КАСГЕТТКРЕІКОХММАКТЯ А
ІБАЗКССРЕЕРОБУІТЕВРЕ ТКА ств пуп тет
ІГЕСЕУРЛІМЯКЕТЕОМСЮРЕММЕКІТЕЕ ТІ, зо тЕТяет стіп б
Примітка: в таблиці послідовності константної ділянки виділені курсивом, та послідовності варіабельної ділянки позначені вертикальними літерами.
На даний час, відомі дві молекули АЮОС-мішені СЕА це БАВ-408701 та лабетузумаб говітекан (також відомий як І тар-Сі 2А-5М38), в яких послідовності легкого та важкого ланцюгів антитіл є наступними
Послідовність важкого ланцюга антитіла в БАН-408701 (Запоїї):
БУС ОБОР УКР ВСАА КУРВ ПО УКОГТРЕНСТ ЕКЗ ТА
РЯТУКОСКРЕТУВКИМАЮМІГТТ ОМП АУУТСААНнУРСВУСРРАХ ОО ТУВ
ЗАМІКОСРЗУБРІ АРКА ОС УКПОУВРЕВУ ГУБУ МасА ТУ ПІКРАУТ ОБ сіб УУТУРН СТУ СМУМАИКРОМІКУПЛКЕУБВРЕОСПКТНІСРРСРТАРЕБЕ сих
РУУКІГЕРРКРЕОТІ МПК ТРЕУ ТС У У5НЕОРБУ КРУ БУНМАКІКРКБЕОТУ
МЗзітКУУВУТ ТУ НОБЕМОКЕУКОСЕУВМКА РАБ АБО КЕВУ ТРК
ПЕТ ЕМОУБ СТ УКОСУ РАТАУ У БЕКОССРЕММУКТІРРУТ ПОГ ОЕРІаК ТУ ПК
АСТМА ХНУ ТОК КЕ РОК
ЗБО ШМК ВЕ
Послідовність легкого ланцюга антитіла в БАН-408701 (Запоїї для скорочення)
ПЕТ ОЗРАІ ЗА УСІКУТІСКАЗЕМІБТБАХТООКРОКЗРЕТ І УУМІКТАРОУРЬ
Красою ТЕБЕ СРЕОГБАТ УСНІ УСІ РВС ВІ КК ЕТУЛ А РЗУБІЕРРЗЕСЕ
КЗ СОСТАЗУУСІІ МКРУРКВАК УСТА КУММАТ ССЗ УТЕСЮВКІВ І ІІТ
КАПУ ЕКНКУХАСБУТНОСІ БРУС
ЗБК МС 5
Послідовність важкого ланцюга антитіла Лабетузумаб в І тар-Сі2А-5М438 (тар для скорочення)
ВАМ УБммиУ УРОК САС ОКТг У УКОАРОКСІ ЕКО ЗІМ
ХАР КОКО КЕАЕМІР Р ОМ КРЕМ СУТРСАЗЕУБСЕРУВАУ АК ІвУ ГУ
ЗАЖІКОРЗУКРІ АРОК ААУ КОТЕРЕвУ ТУМБА ТБ УНІБРАУР Ск сілзіззУуУ Ура ТГК МУМНКРОУМІКУПЛККУВРКЗСІКІНКТСРРСРАРЕРІ Сх
РЗУРІБГРРЕКРЕКОТІ БМІЗЕТРЕУТСУУУБЛУБНЕПРЕУ ВЕУ УС УБУНЧАКТЕРКЕЕСТУ
МІТКУ ЗУТІУ ПОП СКУ МКАГРАРІНКТІКАКСОРВБЕРОУ ТВЕР
БЕМІБКОСУВЕТІУВБСКУРМЛАУВА ВУС ОРЕММЕУКТІ РУТ ПЕК ЗК ТУ Пе
ВАКУУМ НЕАТ ХУ ТОК І ОРОС
БО МОСК 0
Послідовність легкого ланцюга Лабетузумабу в І тар-Сі 2А-5М38 (І таб)
ПМ ТОЗРУБІЗАБУСОКУТТ СКАЗ УСІЗУАЖХТООБРОМКАРЕЮТ ТАТІ ВНІСУ РЕ
КЕ ОСТЕТБІТІББіОРЕІЛАТУ ОО УКОСУ БЕК УА АРЕУЕТВРОБВО і ТАУУСІЕМУКУРЕБАКУСКУКУВЮМАТ Юм ВИК Ті
АЇБЕКНКУТАСЕУТНСОСІ О5РУ ТКС
ЗВО ЩО ЗІ
Вищезазначені антитіла були клоновані, експресовані та очищені за допомогою звичайних способів клонування генів та рекомбінантної експресії.
Приклад 4: Отримання сполук
Експериментальні процедури без умов, зазначених в прикладах за представленим винаходом, як правило, проводять відповідно до стандартних умов або відповідно до умов, рекомендованих виробником вихідних матеріалів або комерційних продуктів. Реагенти без зазначення походження є комерційно доступними стандартними реагентами.
Структура сполук була визначеною за допомогою ядерного магнітного резонансу (ЯМР) або мас-спектрометрії (МС). Спектри ЯМР були виміряними з використанням приладу для ядерного магнітного резонансу Вгикег АМАМСЕ-400 з дейтерованим диметилсульфоксидом (ДМСО-ав), дейтерованим хлороформом (СОСіз) та дейтерованим метанолом (СОзО0) як розчинники та тетраметилсиланом (ТМ) як внутрішній стандарт.
Хімічні зсуви дані в одиницях 105 (м.ч.).
Аналіз МС проводили з використанням мас-спектрометра РІММІСАМ І Сода (Е5І) (виробник:
Тпепто, модель: Ріппідап І СО адмапіаде МАХ).
Аналіз ОРІ С проводили з використанням системи рідинної хромато-мас-спектрометрії
Маїег5 Асдийу ОРІ С 500.
Аналіз ВЕРХ проводили з використанням рідинного хроматографа високого тиску Ааіепі 1200БАЮ (хроматографічна колонка 150х4,6 мм ЗБипіїте С18) та рідинного хроматографа високого тиску Улаїег5 2695-2996 (хроматографічна колонка 150х4,6 мм Сітіпі С18).
Аналіз УФ-ВЕРХ проводили з використанням ультрафіолетового спектрофотометра Гпепто паподгор2г000. Швидкість інгібування проліферації та значення ІСзхо вимірювали за допомогою пристрою для зчитування мікропланшетів РНЕВА зіагЕ5 (ВМГ, Німеччина)
Силікагелеві пластини Ниапднаії НИ 254 або Оіпдадао СЕ254 зі специфікаціями від 0,15 мм до 0,2 мм були прийняті для аналізу тонкошарової хроматографії (ТШХ) та від 0,4 мм до 0,5 мм для розділення та очищення за допомогою ТШХ.
Силікагель Мапіаії МеПйом 5еа розміром 200-300 меш, як правило, використовується як носій у колонковій хроматографії.
Відомі вихідні матеріали за представленим винаходом можуть бути синтезовані з використанням або відповідно до способів, відомих в даній галузі, або можуть бути придбані у
АВСВА стрН 45 Со.КО, Асгоз Огдаппісв, Аіапйсйи Спетіса! Сотрапу, Ассеіа СпетвВіо Іпс, Спетреєе
СПетіса!Ї5 тощо.
В прикладах, реакції проводили в атмосфері аргону або азоту, якщо не зазначено інше.
Атмосфера аргону або азоту означає, що реакційна колба є з'єднаною з балоном, що містить приблизно 1 л аргону або азоту.
Атмосфера водню означає, що реакційна колба є з'єднаною з балоном, що містить приблизно 1 л водню.
Гідрогенізатор Ра 3916ЕКХ, гідрогенізатор Оіпдіап 01 -500 або гідрогенізатор. НС2-55 використовували для реакцій гідрування під тиском.
Реакція гідрування, як правило, включала З цикли вакуумування та продування воднем.
Для мікрохвильової реакції використовували мікрохвильовий реактор СЕМ Оівсоме!- 5908860.
В прикладах, розчин реакції стосується водного розчину, якщо не зазначено інше.
В прикладах, температура реакції являє собою кімнатну температуру, якщо не зазначено інше.
Кімнатна температура являє собою оптимальну температуру реакції, яка коливається від 20 "С до 30 76.
Отримання буферу РВ5 з рН 6,5 в прикладах: в колбу додавали 8,5 г КНогРО», 8,56 г
КаНРО ЗНО, 5,85 г Масі та 1,5 г ЕДТА, та об'єм доводили до 2 л. Всі добавки розчиняли ультразвуком, та розчин добре перемішували шляхом струшування з отриманням бажаного буферу.
Система елюенту для колонкової хроматографії та система проявляючого розчинника для тонкошарової хроматографії, що використовуються для очищення сполук, включають: А: систему дихлорметану та ізопропанолу, В: систему дихлорметану та метанолу та С: систему петролейного ефіру та етилацетату. Об'ємне співвідношення розчинників регулювали відповідно до полярності сполуки або шляхом додавання невеликої кількості триетиламіну та кислотного або основного реагенту.
Деякі зі сполук представленого винаходу характеризуються за допомогою О-ТОЕ І С/М5.
В аналізі О-ТОЕ І С/М5 використовували квадрупольний часпролітний мас-спектрометр
Адііепі 6530 з точним визначенням маси та надвисокоефективний рідинний хроматограф Адіїепі 1290-Іпіпйу (хроматографічна колонка Адііепі РогозНеї!! 30058-С8 5 мкм, 2,1х75 мм).
Лікарська частина У-О кон'югату антитіло-лікарський засіб за представленим винаходом, є описаною в РСТ/СМ2019/107873, та синтез та випробування відповідних сполук є включеними в даний документ шляхом посилання. Необмежуючі приклади синтезу є включеними як посилання наступним чином: 1. Синтез токсинових лікарських засобів за представленим винаходом (5)-2-циклопропіл-М-((15,95)-9-етил-5-фтор-9-гідрокси-4-метил-10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15- гексагідро-1Н,12Н-бензо|де|піраної|3",4"6,7|індолізиної1,2-Бб|хінолін-1-іл)-2-гідроксиацетамід 1-А (8)-2-циклопропіл-М-(15,95)-9-етил-5-фтор-9-пдрокси-4-метил-10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15- гексагідро-1Н,12Нбензоїде|піраноїЇ34"6,7|ндолізино|1,2-б)хінолін-1-іл)-2-гідроксиацетамід 1-8 о Е о Е ню. но, м
А А Ж о і З о і З -щ- он -8- он о о 1-А о 1-8 о о о -д но. м но. м но. м
Ал у, є ФВ т" Щ Є ФІ но я и ХХ и ми нш .
Ї Сі Б г
До 16 (4 мг, 7,53 мкмоль) додавали 2 мл етанолу та 0,4 мл М.М-диметилформаміду. Систему тричі продували аргоном, та суміш охолоджували до 0-5 "С на бані крига-вода, з подальшим додаванням по краплях 0,3 мл М-метилморфоліну. Реакційну суміш перемішували, поки вона не ставала прозорою. До реакційної суміші послідовно додавали 2-циклопропіл-2-гідроксиоцтову кислоту Та (2,3 мг, 19,8 мкмоль, отримана, як описано в заявці на патент "Л/020131067177), 1- гідроксибензотриазол (3 мг, 22,4 мкмоль) та 1-(3З-диметиламінопропіл)-З-етилкарбодіїміду гідрохлорид (4,3 мг, 22,4 мкмоль). Після додавання, реакційну суміш перемішували при 0-57 протягом 1 год. Баню крига-вода видаляли, реакційну суміш нагрівали до 30 "С, перемішували протягом 2 годин та концентрували при зниженому тиску. Отриману неочищену сполуку 1 очищували за допомогою високоефективної рідинної хроматографії (умови розділення: хроматографічна колонка: ХВгідде Ргер С18 ОВО 5 мкм 19х250 мм; рухома фаза: А-вода (10 ммоль МНаОАс), В-ацетонітрил, градієнтне елюювання, швидкість потоку: Тмл/хв.), та відповідні фракції збирали та концентрували при зниженому тиску з отриманням названого продукту (1-А: 1,5 мг, 1-В: 1,5 мг).
МО т/АЕБ51): 534.0 |М-1Ї.
Однокомпонентна сполука 1-В (більш короткий час утримання)
Аналіз ОРІ С: час утримання: 1,06 хв.; чистота: 88 95 (хроматографічна колонка: АСОШІТУ
ОРІ С ВЕНСІ8 1,7 мкм 2,1х50 мм; рухома фаза: А-вода (5 ммоль МНаОАс), В-ацетонитріл).
ІН ЯМР (400 МГц, ДМСоО-ав): 6 8,37 (д, 1Н), 7,76 (д, 1Н), 7,30 (с, 1Н), 6,51 (с, 1Н), 5,58-5,56 (м, 1Н), 5,48 (д, 1Н), 5,41 (с, 2Н), 5,32-5,29 (м, 2Н), 3,60 (т, 1Н), 3,19-3,13 (м, 1Н), 2,38 (с, ЗН), 10.2,20-2,14 (м, 1Н), 1,98 (кв, 2Н), 1,87-1,83 (м, 1Н), 1,50-1,40 (м, 1Н), 1,34-1,28 (м, 1Н), 0,86 (т, ЗН), 0,50-0,39 (м, 4Н).
Однокомпонентна сполука 1-А (більш довший час утримання)
Аналіз ОРІ С: час утримання: 1,10 хв.; чистота: 86 95 (хроматографічна колонка: АСОШІТУ
ОРІ С ВЕНСТІВ8 1,7 мкм 2,1х50 мм; рухома фаза: А-вода (5 ммоль МНаОАс), В-ацетонитріл).
ІН ЯМР (400 МГц, ДМСО-4бв): 6 8,35 (д, 1Н), 7,78 (д, 1Н), 7,31 (с, 1Н), 6,52 (с, 1Н), 5,58-5,53 (м, 1Н), 5,42 (с, 2Н), 5,37 (д, 1Н), 5,32 (т, 1Н), 3,62 (т, 1Н), 3,20-3,15 (м, 2Н), 2,40 (с, ЗН), 2,25-2,16 (м, 1Н), 1,98 (кв, 2Н), 1,87-1,82 (м, 1Н), 1,50-1,40 (м, 1Н), 1,21-1,14 (м, 1Н), 0,67 (т, ЗН), 0,47-0,35 (м, 4Н). 2. Синтез лікарських засобів лінкерного токсину за представленим винаходом М-(28,105)- 10-бензил-2-циклопропіл-1-((15,95)-9-етил-5-фтор-9-гідрокси-4-метил-10,13-диоксо- 2,3,9,10,13,15-гексагідро-1Н,12Н-бензо|де|піраної3",4":6,7|індолізино|1,2-б)хінолін-1-іл)аміно)- 1,6,9,12,15-пентаоксо-3-окса-5,8,11,14-тетраазагексадекан-16-іл)-6-(2,5-диоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іл)угексанамід 2-А
М-(25,105)-10-бензил-2-циклопропіл-1-((15,95)-9-етил-5-фтор-9-гідрокси-4-метил-10,13- диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро-1Н,12Н-бензо|де|піраної3",4"6,7|індолізиної/1,2-б|хінолін-1- іл)аміно)-1,6,9,12,15-пентаоксо-3-окса-5,8,11,14-тетраазагексадекан-16-іл)-6-(2,5-диоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексанамід 2-В
Стадія 1
Бензил 2-циклопропіл-2-гідроксиацетат 2а / й о 9 с о У / 7 о о с о Є.
АХА рА, | вав Ар Х Ї злу ї М.
ГУ ух : гу ух : в я Ж т в чо, я, АЛ АМД КО - втост Що он я х / Б в адія те -- у тадія о о он М т 9 іо г хх
І о -В- он 2а Я о І - ) вир І он Й й у Т Й о Її А о Фо я ; х/ ся ;
тд ї дух 1а (1,3 г, 11.2 ммоль; отримана, як описано в заявці на патент "/О2013/106717") розчиняли у 50 мл ацетонитрілу, та послідовно додавали карбонат калію (6,18 г, 44,8 ммоль), бензилбромід (1,33 мл, 11,2 ммол) та йодид тетрабутиламонію (413 мг, 1,1 ммоль). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 48 год. та фільтрували через целіт, та осад на фільтрі промивали етилацетатом (10 мл). Фільтрати об'єднували та концентрували при зниженому тиску, та отриманий залишок очищували за допомогою колонкової хроматографії на силікагелі з проявляючою системою розчинників С отримаючи названий продукт 2а (2 г, вихід 86,9 95).
Стадія 2
Бензил 10-циклопропіл-1-(9Н-флуорен-9-іл)-3,6-диоксо-2,9-диокса-4,7-диазаундекан-11-оат 20
До реакційної колби додавали га (120,9 мг, 0,586 ммоль) 24 (180 мг, 0,489 ммоль, отримана, як описано в заявці на патент "СМ105829346А"), та додавали 4 мл тетрагідрофурану. Систему тричі продували аргоном, та реакційну суміш охолоджували на бані крига-вода до 0-5 С, з подальшим додаванням трет-бутоксиду калію (109 мг, 0,98 ммоль). Крижану баню видаляли та реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури та перемішували протягом 40 хв., потім додавали 10 мл крижаної води та екстагували етилацетатом (20 млхг2) та хлороформом (10 млх5). Органічні фази об'єднували та концентрували. Отриманий залишок розчиняли в 4 мл діоксану та додавали 2 мл води, бікарбонат натрію (49,2 мг, 0,586 ммоль) та 9- флуоренілметилхлорформіат (126 мг, 0,49 ммоль). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 2 год. Додавали 20 мл води, з подальшою екстракцією етилацетатом (10 млх3). Органічну фазу промивали насиченим розчином хлорида натрія (20 мл), сушили над безводним сульфатом натрію та фільтрували. Фільтрат концентрували при зниженому тиску.
Отриманий залишок очищували за допомогою колонкової хроматографії на силікагелі з проявляючою системою розчинників С отримуючи названий продукт 265 (48 мг, вихід 19 95).
МСт/А(Е5І): 515,0 |(М--1Ї.
Стадія З 10-Циклопропіл-1Н-(9Н-флуорен-9-іл)-3,6-диоксо-2,9-диокса-4,7-диазаундекан-11-ова кислота 2с 25 (20 мг, 0,038 ммоль) розчиняли в 4,5 мл суміші розчинників тетрагідрофурану та етилацетату (0б.юб.-2:1) та додавали паладій-на-вугіллі (12 мг, 10 95 завантаження, суха основа). Систему тричі продували воднем, та реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 1 год. Реакційну суміш фільтрували через целіт та осад на фільтрі промивали етилацетатом. Фільтрат концентрували з одержанням неочищеного названого продукту 2с (13 мг), який безпосередньо використовували на наступній стадії без очищення.
МСт/А(Е5І): 424,9 |М--1Ї.
Стадія 4 (9Н-флуорен-9-іл)уметил(2-((1-циклопропіл-2-((15,95)-9-етил-5-фтор-9-гідрокси-4-метил- 10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро-1Н,12Н-бензої|де|пірано/3',4":6,7|індолізиної|1,2-6б|хінолін- 1-іляаміно)-2-оксоетокси)метил)аміно)-2-оксоетил)карбамат 2а 15 (10 мг, 18.8 мкмоль) додавали до реакційної колби, та додавали 1 мл М,М- диметилформаміду. Систему тричі продували аргоном, та суміш охолоджували на бані крига- вода до 0-5 "С, з подальшим додаванням по краплям триетиламіну, неочищеного 5с (13 мг, 30,6 мкмоль), та хлориду 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-іл)-4-метилморфолінія (16,9 мг, 61,2 мкмоль). Реакційну суміш перемішували на крижаній бані протягом 40 хв. Додавали 10 мл води з подальшим екстрагуванням етилацетатом (10 мл/ 3). Органічні фази об'єднували, промивали насиченим розчином натрію хлориду (10 мл/"2), сушили над безводним сульфатом натрію та фільтрували. Фільтрат концентрували при зниженому тиску. Отриманий залишок очищували за допомогою тонкошарової хроматографії з проявляючою системою розчинників В з отриманням названого продукту 2а (19 мг, вихід 73,6 95). МС п/з (ЕБІ): 8421 |М1|.
Стадія 5
2-(2-Аміноацетамідо)метокси)-2-циклопропіл-М-((15,95)-9-етил-5-фтор-9-гідрокси-4-метил- 10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро-1Н,12Н-бензої|де|пірано/34"6,7|індолізино (|1,2-Б| хінолін- 1-іл)ацетамід 2е 2а (19 мг, 22,6 мкмоль) розчиняли у 2 мл дихлорметану, та додавали 1 мл диетиламіну.
Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 2 год. та концентрували при зниженому тиску. Додавали 1 мл толуолу, з подальшою концентрацією при зниженому тиску; процедури повторювали двічі. Залишок суспендували з 3 мл н-гексану та залишали відстоюватись. Потім, супернатант видаляли, та тверда речовина була збережена. Твердий залишок концентрували при зниженому тиску та висушували за допомогою масляного насосу з отриманням неочищеного названого продукту 2е (17 мг), який безпосередньо використовували на наступній стадії без очищення. МО п/2 (ЕБІ):638,0 (М--181І.
Стадія 6
М-(2А,105)-10-бензил-2-циклопропіл-1-((15,95)-9-етил-5-фтор-9-гідрокси-4-метил-10,13- диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро-1Н,12Н-бензо|де|піраної3",4":6,7|індолізино|1,2-б|хінолін-1- іл)аміно)-1,6,9,12,15-пентаоксо-3-окса-5,8,11,14-тетраазагексадекан-16-іл)-6-(2,5-диоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-іл)угексанамід 2-А
М-(25,105)-10-бензил-2-циклопропіл-1-(((15,95)-9-етил-5-фтор-9-гідрокси-4-метил-10,13- диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагідро-1Н,12Н-бензо|де|піраної3",4"6,7|індолізиної/1,2-б|хінолін-1- іл)аміно)-1,6,9,12,15-пентаоксо-3-окса-5,8,11,14-тетраазагексадекан-16-іл)-6-(2,5-диоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексанамід 2-В
Неочищений 2е (13,9 мг, 22,4 мкмоль) розчиняли у 0,6 мл М,.М-диметил формам іду.
Систему тричі продували аргоном, та розчин охолоджували на бані крига-вода до 0-5 2с.
Розчин 2 (21,2 мг, 44,8 мкмоль, отриманий, як описано в заявці на патент "ЕР29078247) додавали у 0,3 мл М,М-диметил формам іду, з подальшим додаванням хлориду 4-(4,6- диметокси-1,3,5-триазин-2-іл)-4-метилморфолін (18,5 мг, 67,3 мкмоль). Реакційну суміш перемішували на крижаній бані протягом 10 хв. Потім крижану баню видаляли та реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури та перемішували протягом 1 год. Отримуючи сполуку 2. Реакційну суміш очищували за допомогою високоефективної рідинної хроматографії (умови розділення: хроматографічна колонка: ХВгідде Ргер С18 ОВО 5 мкм 19х250 мм; рухома фаза: А- вода (10 ммоль МНаАОАС), В-ацетонитріл, градієнт елюювання, швидкість потоку: 18 мл/хв.). відповідні фракції збирали та концентрували при зниженому тиску з отриманням названого продукту (2-А: 2,4 мг, 2-В: 1,7 мг).
МСт/А(Е5БІ): 10744 (М--Н1|.
Однокомпонентна сполука 2-А (більш короткий час утримання):
Аналіз ОРІ С: час утримання: 1.14 хв.; чистота: 85 95 (хроматографічна колонка: АСОШІТУ
ОРІ С ВЕНСТІ8 1,7 мкм 2,1х50 мм; рухома фаза: А-вода (5 ммоль МНа.ОАС),
В-ацетонитріл).
ІН ЯМР (400 МГц, ДМСО-дбв): 5 8,60 (т, 1Н), 8,51-8,49 (д, 1Н), 8,32-8,24 (м, 1Н), 8,13-8,02 (м, 2Н), 8,02-7,96 (м, 1Н), 7,82-7,75 (м, 1Н), 7,31 (с, 1Н), 7,26-7,15 (м, 4Н), 6,99 (с, 1Н), 6,55-6,48 (м, 1Н), 5,65-5,54 (м, 1Н), 5,41 (с, 2Н), 5,35-5,15 (м, ЗН), 4,74-4,62 (м, 1Н), 4,54-4,40 (м, 2Н), 3,76-3,64 (м, 4Н), 3,62-3,48 (м, 2Н), 3,20-3,07 (м, 2Н), 3,04-2,94 (м, 1Н), 2,80-2,62 (м, 12Н), 2,45-2,30 (м,
ЗН), 2,25-2,15 (м, 2Н), 2,15-2,04 (м, 2Н), 1,93-1,78 (м, 2Н), 1,52-1,39 (м, ЗН), 1,34-1,12 (м, 5Н), 0,67 (т, ЗН), 0,64-0,38 (м, 4Н).
Однокомпонентна сполука 2-В (більш довший час утримання):
Аналіз ОРІ С: час утримання: 1,16 хв.; чистота: 89 95 (хроматографічна колонка: АСОШІТУ
ОРІ С ВЕНСТІВ8 1,7 мкм 2,1х50 мм; рухома фаза: А-вода (5 ммоль МНаОАс), В-ацетонитріл).
ІН ЯМР (400 МГц, ДМСоО-ав): 6 8,68-8,60 (м, 1Н), 8,58-8,50 (м, 1Н), 8,32-8,24 (м, 1Н), 8,13- 8,02 (м, 2Н), 8,02-7,94 (м, 1Н), 7,82-7,75 (м, 1Н), 7,31 (с, 1Н), 7,26-7,13 (м, ЗН), 6,99 (с, 1Н), 6,55- 6,48 (м, 1Н), 5,60-5,50 (м, 1Н), 5,41 (с, 2Н), 5,35-5,15 (м, 2Н), 4,78-4,68 (м, 1Н), 4,60-4,40 (м, 2Н),
З3,76-3,58 (м, 4Н), 3,58-3,48 (м, 1Н), 3,20-3,10 (м, 2Н), 3,08-2,97 (м, 2Н), 2,80-2,72 (м, 2Н), 2,45- 2,30 (м, ЗН), 2,25-2,13 (м, 2Н), 2,13-2,04 (м, 2Н), 2,03-1,94 (м, 2Н), 1,91-1,78 (м, 2Н), 1,52-1,39 (м,
ЗН), 1,34-1,12 (м, 4Н), 0,91-0,79 (м, ЗН), 0,53-0,34 (м, 4Н).
Приклад 5: Отримання кон'югату антитіло-лікарський засіб (АОС)
Аналіз навантаження лікарського засобу базового розчину АОС Мета та принцип дослідження
Базовий розчин АЮС являє собою лікарський засіб, перехресно зшитий з антитілом, та механізм лікування захворювань з його допомогою полягає в транспортуванні молекул токсину в клітини, в залежності від здатності антитіла націлювати дію з метою знищення клітин.
Навантаження лікарського засобу відіграє вирішальну роль в ефективності лікарського засобу.
Навантаження лікарського засобу базового розчину АЮС визначали з використанням УФф- способу. Процедури дослідження
Кювети, що містять натрій-сукцинатний буфер, поміщали в еталонну лунку та лунку для зразка та віднімали оптичну щільність холостого розчину. Потім кювету, що містить досліджуваний розчин, поміщали в лунку для зразка та визначали оптичну щільність при 280 нм та 370 нм.
Розрахунок результатів: здатність до навантаження базового розчину АЮС визначали за допомогою ультрафіолетової спектрофотометрії (прилад: ультрафіолетовий спектрофотометр
ТНнегто папоагор2000), виходячи з принципу, згідно з яким загальна оптична щільність базового розчину АОС при певній довжині хвилі являє собою суму значень оптичної щільності лікарського засобу та моноклонального антитіла на зазначеній довжині хвилі, а саме: (І) Агво нм-«Єтар-28001 /пар--Єлікарський засіб-2800 С лікарський засіб
Елікарський засіб-гво: середній молярний коефіцієнт екстинкції лікарського засобу при 280 нм становить 5100;
Слікарський засіб: КОНЦенТтрація лікарського засобу;
Єтаь-гво: середній молярний коефіцієнт екстинкції базового розчину моноклоналтного антитіла при 280 нм становить 214,600;
Ста»: концентрація базового розчину моноклонального антитіла; р: довжина оптичного шляху становить 1 см.
Подібним чином, рівняння для загальної оптичної щільності зразка при 370 нм може бути представлене як: (2) Азто нм-хЄ таб-3700А таь-- лікарський засіб-3700С лікарський засіб
Єлікарський засіб 37: середній молярний коефіцієнт екстинкції лікарського засобу при 370 нм становив 19,000;
Слікарський засіб: КОНЦенТтрація лікарського засобу;
ЄтАь-37о: МОЛЯрнИиЙ коефіцієнт екстинкції базового розчину моноклоналтного антитіла при 370 нм становить 0;
Стдь: концентрація базового розчину моноклонального антитіла; р: довжина оптичного шляху становить 1 см.
Навантаження лікарського засобу може бути розрахованим, використовуючи обидва рівняння (1) та (2), та також коефіцієнти екстинкції моноклонального антитіла та лікарського засобу при обох довжинах хвиль та їх концентраціях.
Навантаження лікарського засобу: Слікарський засіб/Став. 1. Отримання кон'югату антитіло-лікарський засіб (АОС) за представленим винаходом
Сполука токсину 1-В являє собою інгібітор ДНК-топоіїзомерази І, та комплекс, утворений сполукою токсину, топоізомеразою І та ДНК, може викликати одноланцюгові розриви в ДНК, запобігаючи реплікації ДНК та ефективно інгібуючи клітинну проліферацію в клітинах.
АрсС отримували наступним чином: гуманізоване антитіло (вибране з групи, що складається з Ниб3-13, Ни47-14, Ниб7-14 та Ни103-32) поміщали в 0,05 М водного буферу РВ5 (з концентрацією антитіла 10 мг/мл) при рН б,5 та 10 мМ водного розчину трис(2- карбоксиетил)фосфіну (ТСЕР) (Іппоспет, САБ5: 51805-45-9, Саї Я В45573) додавали в молярній кількості, яка в 5,3 рази перевищувала кількість антитіла; суміші давали реагувати у струшуючому інкубаторі при постійній температурі 37 "С протягом З годин. Зазначену реакційну суміш охолоджували на крижаній бані до 25 "С.
Сполуку токсину 2-А розчиняли в диметилсульфоксиді в молярній кількості, яка в 15 разів перевищувала кількість антитіла, та отриманий розчин додавали до вищезазначеної реакційної суміші, яку потім залишали реагувати на шейкері при кімнатній температурі протягом З годин до завершення реакції. Реакційну суміш знесолювали та очищували на гелевій колонці з сефадексом (25 (фаза елюювання: 0,05 М буфер РВ5 з рН 6,5, що містить 0,01 М ЕДТА) з отриманням цільового кон'югату антитіло-лікарський засіб молекули із співвідношенням лікарського засобу до антитіла (САН, значення п) 6-8. Спеціалісти в даній галузі техніки можуть отримувати кон'югати з різними значеннями ОАБ, шляхом регулювання умов реакції та реагентів. Наприклад, молекули АЮС з молярним співвідношенням лікарського засобу до антитіла (ВАВ, значення п) 3-5 були отримані шляхом регулювання молярного співвідношення антитіла до ТСЕР до сполуки токсину шляхом додавання 10 мМ водного розчину трис(2- карбоксиетил)фосфіну (ТСЕР) у молярній кількості, яка у 2,5 рази перевищує кількість антитіла, та додавання сполуки токсину 2-А у молярній кількості, яка у 10 разів перевищує кількість антитіла. Конкретні отримані АОС є наступними:
Зразки АОС
Но асогА Нота вв
Ниб3-13-2-А Ниб3-13
Ниб7-14-2-А Ниб7-14
Нит03-32-2-А Нит03-32
Ниб3-13-2-А Ниб63-13
Ниб7-14-2-А Ниб7-14
Нит03-32-2-А Нит03-32
Ниб3-13-2-А о
С ААЖХХ хх ї ниб3-13 ко Ж Ч М А : н о о о о й о М - Е м хі о кон п о
Ни47-14-2-А о
Ї Ж Ж у
Ниа7-14 ком Ж М | Ч АЙ Ч
М М' ви М о о й " о " ще й о Е
М м хі о он о
Ниб7-14-2-А о
Ї Ж Ж ї
Ниб?-14 по Ж М М у ; М о о о о й о К щ Е
М хі о мон п о або
Ни103-32-2-А
7 о о о У
Ни103-352. н н І Нн кит, Акули о о о о й о М - Е
М хі о МОН п о
В представленому винаході також отримують АЮС з іншими значеннями РАВ, як цього вимагають приклади дослідження, деталі дивіться в наступних прикладах досліджень. 2. Отримання контрольного АОС І тар-СІ 2А-5М38 (АОС-4)
Для оцінки відмінності між сконструйованим АОС у представленому винаході та контрольною молекулою АОС І тар-СІ 2А-5М38, синтезували токсин СІ 2А-5М38 з посиланням на структуру, описану в М/НО Огид Іптоптаїйоп Мої. 30, Мо. 1, 2016 та спосіб, описаний у Мої! рпапт. 2015 дип 1; 12(6): 1836-47, та кон'югували І таб з утворенням молекул АОС І тар-СіІ 2А-
ЗМ38 з різними значеннями САН, регулюючи умови реакції, як описано вище при отриманні
АОС. Отримані молекули АОС зберігали при -20 "С для подальшого застосування.
Приклади дослідження Приклад дослідження 1: Аналіз зв'язування ЕАС5
Для виявлення зв'язування антитіла з протеїном СЕА на клітинній поверхні, зв'язуючу активність антитіла визначали за допомогою БАС5 з використанням клітин, що експресують
СЕА на клітинній поверхні. Клітини збирали та центрифугували при 400 4 при 4 "С протягом 5 хв. Додавали попередньо охолоджений РВ5, що містить ЕВ5 в кінцевій концентрації 10 95, та центрифугували суміш при 400 9 при 4 "С протягом 5 хв; процедури повторювали двічі. Клітини висівали в 96-лунковий планшет в кількості 105 клітин/лунку, та в кожну лунку додавали 100 мкл градієнтно розведеного розчину антитіла. Планшет інкубували при 4 С протягом 60 хв., центрифугували та супернатант видаляли. Для ресуспендування клітин, в кожну лунку додавали по 250 мкл попередньо охолодженого РВ5, що містить ЕВ5 в кінцевій концентрації 10 95, суспензію центрифугували при 400 4 при 4 "С протягом 5 хв. з подальшим видаленням супернатанту; процедури повторювали двічі. Додавали 50 мкл розведеного 1:200 вторинного антитіла кози Аїеха РійомФ488 антилюдського ІдСх (Н-) (І ПТегеспоіодіех, Саї Ж А11013).
Планшет інкубували в темряві при 4 "С протягом 45 хв., центрифугували та супернатант видаляли. Для ресуспендування клітин, в кожну лунку додавали по 250 мкл попередньо охолодженого РВ5, що містить ЕВ5 в кінцевій концентрації 10 95, та суспензію центрифугували при 400 9 при 4 "С протягом 5 хв.; процедури повторювали двічі. Для ресуспендування клітин, в кожну лунку додавали по 100 мкл попередньо охолодженого РВ5. Планшет аналізували за допомогою проточного цитометра (ВО, РАС5бмег!зе) на значення сигналу флуоресценції. Більш високі значення вказують на більш високу зв'язуючі активність антитіла з протеїном на клітинній поверхні. Криві зв'язування будували з використанням програмного забезпечення для аналізу
РВІЗМ на основі результатів аналізу та значень ЕСво для зв'язуючої активності антитіла з протеїнами СЕА клітинної поверхні людини (клітини раку шлунка МКМА5, Мапімпу Кебаї
З5 Віоїесппоіоду Со., 4., Саї я СВРбБО488), супоСЕА-СНО та СЕАСАМ1-СНО були отримані шляхом підгонки. Зв'язуюча активність гуманізованих антитіл є наведеною в Таблиця 17 та 18 нижче:
Таблиця 17
Зв'язуюча активність гуманізованих антитіл з протеїнами СЕА клітинної поверхні різних видів
Результати зв'язуючої активності інших гуманізованих антитіл з протеїнами СЕА клітинної поверхні (МКМ4А5 та супоСЕА-СНО) є наведеними в Таблиці 18 нижче:
Таблиця 18
Зв'язуюча активність гуманізованих антитіл з протеїнами СЕА клітинної поверхні ншозл | 242 | 096 |Ниб/-7 | 388 | 780
Результати дослідження демонструють, що скринінговані гуманізовані антитіла за представленим винаходом зберігали зв'язуючу активність, подібну до активності мишачих антитіл, та всі вони могли зв'язуватися з протеїнами СЕА людини на поверхні клітини; та що скринінговані гуманізовані антитіла за представленим винаходом можуть зв'язуватися з протеїнами СЕА мавпи на клітинній поверхні, та зв'язуюча активність гуманізованих антитіл з протеїнами СЕА мавпи була кращою, ніж у антитіла позитивного контролю.
Приклад дослідження 2: Дослідження на конкуренцію з розчинним СЕА (5СЕА)
Щоб перевірити, чи антитіла переважно зв'язуються з СЕА на поверхні клітинної мембрани в присутності 5СЕА, градієнтно-розбавлене антитіло та певну розчинність 5СЕА (5 мкг/мл) попередньо інкубували протягом 30 хв., та потім клітини МКМА45 збирали та висівали в 96- лунковий планшет. В кожну лунку додавали градієнтно-розбавлене антитіло, попередньо інкубований змішаний розчин антитіла та 5СЕА. Планшет інкубували при 4 "С протягом 60 хв. та центрифугували, та супернатант видаляли. Клітини двічі промивали попередньо охолодженим
РВ5, що містить ЕВ5 з кінцевою концентрацією 10 95. Додавали 50 мкл розведеного 1:200 5О0 вторинного антитіла кози Аіеха РійомФ488 антилюдського ІДС (Ні) (І їТетеспоіодіє5, Саї Я
АО13). Планшет інкубували в темряві при 4 "С протягом 45 хв., центрифугували та супернатант видаляли. Клітини двічі промивали 250 мкл попередньо охолодженого РВ5 з ЕВ5 при кінцевій концентрації 10 95. Для ресуспендування клітин, в кожну лунку додавали 100 мкл попередньо охолодженого РВ5. Суспензію аналізували за допомогою проточного цитометра (ЕАС5) (ВО,
ЕАСбуегзе) на значення сигналів флуоресценції. Якщо співвідношення значення сигналу, отриманого за відсутності 5СЕА, до значення, отриманого в присутності 5СЕА, становить менше 2 для кожної концентрації антитіла, це вказує на те, що крива зв'язування антитіла не сильно змінюється у присутності 5СЕА, та, що антитіло, як і раніше, переважно зв'язується з СЕА на поверхні клітинної мембрани. Результати дослідження є наведеними в таблицях 19 та 20, де співвідношення значень сигналу флуоресценції, отриманих за відсутності 5СЕА, до значень, отриманих в присутності 5СЕА для різних концентрацій Ниб3-13, Ни47-14, Ниб7-14, Ни103-32 та позитивні контрольні антитіла І тар є наведеними в таблиці 19 нижче, та максимальні співвідношення значень сигналу флуоресценції, отриманих за відсутності 5СЕА, до значень отриманих в присутності 5СЕА є наведеними в таблиці 20 нижче:
Таблиця 19
Співвідношення значення сигналу флуоресценції, отриманого за відсутності 5СЕА, до значення, отриманого у присутності 5СЕА для гуманізованих антитіл 11111111 | Співвідношеннязначеньсигналу флуоресценції. З
Таблиця 20
Максимальні співвідношення значення сигналу флуоресценції, отриманого за відсутності 5СЕА, до значення отриманого в присутності 5СЕА для антитіл
Максимальне о. - сигналів флуоресценції флуоресценції ния?2 | 77777771 71117104 177 ншоЗзї Її 17190 ни473 | 77777771 1ло 17 ншозае 77777777 11 ни474 77777771 л1и8 17 ншозЗ 17777777 1714 ни4746 | 77777771 77111126 1771 ншоз4 17777777 11 ни47-7. 77777771 1 ншозє 77777777 1715 ни47-48. | 77777171 |71117104 177 ншоЗзЄє (77777777 1715 ни47о ЇЇ л1я8 17 ншозу 77777777 17107 ни4712 77777771 7711708 177 ншозе (77777777 171570 ниб3-ї 77777771 171111911 11 ншозмо Її 1719 ниб3-43. | 17111144 17 ншозі Її 17 л1иб нив 77777771 171111955 171 ншозма 17777771 1711124 нибулла | 77777771 7111т21 11 ншозиз 17777771 116 ниву4 77777771 7111725 17 ншозля 17777771 нив75 | 77777771 1 ншозв 17777771 1713 нивевб | 77777777 7111т22 17 ншоз 17777771 112 нивб7-7 | 77777771 17111103 11 ншозв 17777771 11120 нивб79 77777777 л1ло 1 ншозля 17777771 1711960 нивио 77777771 ,17111754 17 ншозго 77777777 17120 ниві 17777771 лив 17 ншозаї 17777771 1127 нива 77777771 71111811 11 ншозег || 193 нив715 77777771 ,7111705 1 ншозаез 77777777 1711 тАрб3 ЇЇ 77777771 77111143 177 таз 17777771 1711102 тАр47 | 77777777 Ї77117708 17771 балої// | 77777777 | 265
Результати дослідження демонструють, що всі співвідношення значення сигналу флуоресценції, отриманого за відсутності 5СЕА, до значення, отриманого в присутності 5СЕА, для різних концентрацій гуманізованих антитіл Ниб3-13, Ни47-14, Ниб7-14 та Ни103-32 є меншими, ніж 2; наприклад, максимальне співвідношення Ниб3-13 становить 1,59, тоді як максимальне співвідношення для позитивного контролю І тар становить 5,18. Скринінговані антитіла за представленим винаходом перевершують контрольне антитіло. Всі максимальні співвідношення значення сигналу флуоресценції, отриманого за відсутності 5СЕА, до значення, отриманого в присутності 5СЕА, для скринінгованих гуманізованих антитіл за представленим винаходом є меншими ніж 2 та меншими, ніж у антитіла позитивного контролю, що вказує на те, що скринінговані гуманізовані антитіла за представленим винаходом, як і раніше, переважно зв'язуються з СЕА на поверхні клітинної мембрани в присутності 5СЕА та перевершують позитивне контрольне антитіло.
Приклад дослідження 3: Визначення афінності антитіл до розчинного СЕА з використанням
Віасоге
Афінність досліджуваного гуманізованого антитіла до розчинного СЕА людини та мавпи визначали з використанням приладу Віасоге (СЕ, Т200). Відповідно до способу, наведеного в інструкціях до набору для захоплення людських антитіл (СЯЕ, Саї Ж ВА-1008-39), антитіла для захоплення людських антитіл ковалентно кон'югували з біосенсорним чіпом СМ5 (СЕ, Саї 7 ВВ- 1005-30) приладу Віасоге для афінного захоплення певної кількості досліджуваного антитіла, потім серії градієнтів концентрації розчинних СЕА антигенів пропускали через поверхню чіпа, та сигнали реакції реєстрували в режимі реального часу використовуючи Віасоге, так що була отримана крива асоціації та дисоціації. Після завершення кожного циклу дисоціації, біочип промивали та регенерували регенеруючим розчином, приготованим у наборі для захоплення людських антитіл. Дані, отримані в ході дослідження, були зіставлені з моделлю Ленгмюр (1:1) з використанням програмного забезпечення ВіАемаїЇцайоп версії 4.1 для отримання значень афінності. Оскільки є бажаним, щоб зв'язуюча активність скринінгованих антитіл за
Б2 представленим винаходом з СЕА на поверхні клітинної мембрани була вищою, ніж з розчинним
СЕА, бажаною є нижча афінність антитіл до розчинного СЕА. Результати аналізу афінності гуманізованих антитіл до розчинного СЕА є наведеними у таблиці 21 нижче:
Таблиця 21
Афінність гуманізованих антитіл до розчинного СЕА людини 11001111 НитапвошіесЕА.Д///:2/ССССССССССССС
Результати дослідження демонструють, що гуманізовані антитіла Ниб3-13, Ни47-14 та Ниб7- 14 мають нижчу афінність до розчинного протеїну СЕА, значно нижчу, ніж контрольні антитіла
Запоїї та Ітар. Зазначене вказує на те, що Ниб3-13, Ни47-14 та Ниб7-14 нелегко нейтралізуються розчинним СЕА у крові іп мімо, та велика кількість антитіл може зв'язуватися з клітинами, які експресують СЕА на поверхні клітинної мембрани.
Приклад дослідження 4: Ендоцитарна активність анти-СЕА антитіла в СЕА- високоекспресуючих клітинах МКМ4А5
Після ендоцитозу клітинами кон'югату анти-СЕА-антитіла в представленому винаході, кон'юЮюгат може вивільняти токсин, що вбиває клітини. Таким чином, ендоцитарна активність антитіла СЕА у клітинах, що експресують СЕА, може сприяти прояву активності АОС. Для оцінки ендоцитарної активності гуманізованих антитіл у клітинах МКМ45, клітини МКМ45 поміщали в 9б-лунковий планшет (согпіпу, Саї Ж 3795) та культивували протягом ночі; гуманізовані СЕА антитіла Ниб3-13, Ни47-14, Ниб7-14 та Ни 103-32 попередньо інкубували наступного дня з реагентом для мічення ігІ. Стееп Нитап ІдС (Іпмігодеп, Саї 2 225611) протягом 15 хв., протягом яких реагент іР!. зв'язувався з Ес гуманізованих антитіл; потім в планшет для культури клітин додавали комплекси антитіл з ігЇ, культуральний розчин видаляли через б год. та 24 год.; клітини двічі промивали РВ5О, розщеплювали та збирали, та інтенсивність флуоресцентних сигналів у клітинах визначали за допомогою ЕАС5Б. ігІ, зв'язаний з Ес антитіл, переносили в клітини після ендоцитозу антитіл, та флуоресцентні сигнали можна було виявити лише в кислому середовищі після ендоцитозу ІРЇ клітинами; отже, виявлені сильніші сигнали вказують на більш високу ендоцитотичну активність антитіл. Ендоцитарна активність гуманізованих антитіл є наведеною на фігурі 1: всі гуманізовані антитіла можуть бути ендоцитовані клітинами
МКМ, та з часом було ендоцитовано більше антитіл.
Приклад дослідження 5: Цитотоксичність АЮС для ракових клітин з різними рівнями експресії СЕА
Після кон'югації гуманізованих антитіл СЕА з токсином 2-А оцінювали цитотоксичність кожного АЮС по відношенню до ліній ракових клітин з різними рівнями експресії СЕА. СЕДА- високоекспресуючі клітини МКМ45, СЕА-помірноекспресуючі клітини 1517417 та СЕА- експресуючі негативні клітини НСТ116 поміщали у 9б-лункові планшети; Наступного дня до клітин додавали градієнтно розведені зразки АОС та культивували клітини при 37 "С протягом 5 днів. В кожну лунку додавали по 50 мкл реагенту Сеї! Тіег-с1іо (Рготеда, Саї 7 29242) та після інкубування протягом 10 хв. у темряві сигнали люмінесценції реєстрували за допомогою детектора візуалізації клітин (ВіоТек, Суїайоп5). Крива інгібування була побудована з результатами виявлення за допомогою програмного забезпечення для аналізу РВІЗМ та підігнана для отримання значення ІСзхо для інгібуючої активності АОС проти проліферації клітин.
Цитотоксичність кожного АОС є представленою наступним чином:
Таблиця 22
Цитотоксичність АОС до клітин з різними рівнями експресії СЕА 77771111 іСвю(нМ)у 77771717 | Співвідношення ІСво рАВ МКІМ45 (з І 51741(3 НСТІ116 (без | НСТ116/ НСТ116/
Зразки АОС високою помірною експресії І 51747 МКІМм45 експресією експресією СЕА)
СЕА СЕА
Ни47-142-А...Й.Й. | 66 | 658 | 7103 | 1063 | 1032 | 66 ітар-Сі2А-5М38 | 415 | 1,595 | 06618 | 1059 | 160 | 066
Молекули АОС, конюговані з токсином 2-А, демонструють цитотоксичність, яка залежить від рівня експресії СЕА: чим вищий рівень експресії СЕА, тим більш токсичні АОС для клітин. Тим часом, АОС з високими значеннями ЮСАК та низькими значеннями САК мають більш сильну цитотоксичність по відношенню до клітин, що експресують СЕА, та більш слабку цитотоксичність по відношенню до клітин, які не експресують СЕА. Контрольна молекула АОС
І тар-СІ 2А-5М38 має подібну цитотоксичність по відношенню до всіх трьох клітинних ліній, демонструючи неспецифічну цитотоксичність. Співвідношення ІС5о може опосередковано відбивати безпеку молекули АВС. Більше співвідношення вказує на те, що молекула АОС є менш токсичною для клітин, які не експресують СЕА, та може бути безпечнішою іп мімо.
Приклад дослідження 6: Байстендер ефект та цитотоксичність АОС
Після ендоцитозу АОС у клітину, токсин вивільняється з АОС, продукуючи токсичну дію на клітину. Після загибелі та лізису клітини, токсин вивільняється з клітини та може далі проникати у прилеглі клітини, продукуючи на них токсичну дію.
Для оцінки байстендер ефекту та цитотоксичності АОС, СЕА-експресуючу клітинну лінію
МКМ45 та СЕА-експресуючу клітинну лінію НСТ116 культивували в б-лунковому планшеті для культивування клітин протягом 24 год., та потім додавали зразок АОС з кінцевою концентрацією 4 НМ. Клітини культивували в клітинному інкубаторі при 37 "С протягом додаткових 5 днів.
Клітини розщеплювали панкреатином та збирали та додавали моноклональне СЕА антитіло
ІТС (ТнептоРїізНег, Саї Я МА 1-80578) з кінцевою концентрацією 10 мкг/мл. Клітини інкубували на кризі в темряві протягом 1 год., двічі промивали РВ5 та підраховували на проточному цитометрі. Клітини, які продукували флуоресцентні сигнали, являли собою клітини МКМ45, що експресують СЕА, та клітини, які не продукували сигнал, являли собою клітини НСТ116, які не експресують СЕА. Результати байстендер ефекту та цитотоксичності зразків АОС є наведеними на фігурі 2: всі молекули АОС мають сильні байстендерні ефекти та цитотоксичність. При спільному культивуванні МКМА5 та НСТ116, молекули АОС можуть інгібувати проліферацію обох типів клітин, в той час, як при культивуванні окремо, НСТ116 молекули АОС, зв'язані з 2-А, принципово не є токсичними для клітин. Контрольна молекула АОС І тар-СІ 2А-5М38 є дуже токсичною, як для клітин, що спільно культивуються, так і для клітин, що культивуються окремо.
Значення САВ молекул АОС, що використовуються в дослідженнях, були наступними: Ниб3- 13-2-А САН 6,29; Ни47-14-2-А ВАВ 6,6; Ниб7-14-2-А ВАВ 6,41; | тар-СІі 2А-5М38 ВАВ 7,0.
Приклад дослідження 7: Іп мімо інгібуюча активність молекул АОС проти пухлин
Ефективність молекул АОС іп мімо оцінювали з використанням моделей пухлин ксенотрансплантатів І 51747 та МКМ45. Безтимусних мишей ВАЇ В/с (ступінь РЕ, Зпапапаї 5іас
І абогаїогу Апіта! Со., (4., сертифікат Мо: 201833814, ліцензія Ме: 5СХК (іапдзи) 2016-0010) утримували в умовах 12/12-годинного циклу світло/темрява 23:41 "С при вологості 40-50 905, корм (стандартний стерилізований корм для мишей) та вода ай Ірішт. Перед початком дослідження, мишей акліматизували протягом 10 днів у лабораторних умовах, та потім інокулювали підшкірно у правий бік клітинами І 51747 (5х105 клітин/миша) або клітинами МКМ45 (4х105 клітин/миша).
Пухлини давали вирости до розміру близько 150 мм3, та потім мишей випадково розподіляли на групи по 8 особин. Після груповання, мишам дослідних груп внутрішньочеревно вводили зразки
АрсС у дозі 1 мг/кг або З мг/кг, та мишам контрольної групи внутрішньочеревно одноразово вводили РВ5. Розміри пухлин у мишей спостерігали, вимірювали та записували. Об'єм пухлини (М) розраховували як: М-1/2хі довгийхі коротий; Відносний об'єм пухлини (АТМ)-Мт/Мо; швидкість інгібування пухлини (95)-:(Свту- Гиту)/Свтм (96); де Мо та Мт являють собою об'єми пухлини на початку та наприкінці дослідження, відповідно; та Свту та Твту являють собою відносні об'єми пухлин контрольної групи та дослідних груп, відповідно, наприкінці дослідження.
З точки зору ефективності іп мімо, в порівнянні з РВ5 в контрольній групі, всі молекули АОС мають ефекти інгібування збільшення об'єму та ваги пухлин дозозалежним чином: інгібуючі ефекти на пухлини у групи З-трк є кращими, ніж у групи 1-прк. В моделі пухлини ксенотрансплантату І 5174Т, результати є наведеними на фігурі З (зміна об'єму пухлини) та фігурі 4 (вага пухлини в останній день): серед груп З3З-тпрк, Ниб3-13-2-А має найкращий інгібуючий ефект на пухлини, за нею слідує Ни47-14-2-А, та потім Ниб7-14-2-А, та І тар-СІ 2А-
ЗІМ38 має найгірший інгібуючий ефект на пухлини. В моделі пухлини ксенотрансплантату
МКМа5, результати є наведеними на фігурі 5 (зміна об'єму пухлини) та фігурі 6 (вага пухлини в останній день): серед груп 3-трк, Ниб7-14-2-А має найкращий інгібуючий ефект на пухлини, за нею слідує Ни103-32-2-А та потім Ниб3-13-2-А, та І тар-СІі 2А-5М38 має найгірший інгібуючий ефект на пухлини. Швидкості інгібування пухлини іп мімо молекулами АЮС є наведеними у таблицях 23 та 24 нижче: швидкості інгібування пухлин АОС демонструють значний ефект дози; зокрема, в моделі пухлини ксенотрансплантату І 5174Т, серед груп з низькими дозами (1 тркК),
Ниб3-13-2-А має найвищу швидкість інгібування пухлини (55,95 95), за нею слідує Ниб7-14-2-А (43, 71 95), та Ни47-14-2-А має найнижчу швидкість інгібування пухлини (23,04 95); серед груп з високими дозами (З І'прКк), Ниб3-13-2-А має найвищу швидкість інгібування пухлини (77,13 95), за нею слідує Ни47-14-2-А (66,87 95), та потім Ниб7-14-2-А (47,66 95), та І тар-Сі 2А-51|5І38 має найнижчу швидкість інгібування пухлини (33,44 95); в моделі пухлини ксенотрансплантату
МКМ, серед груп з низькими дозами (1 ІіпрКк), Ниб7-14-2-А має найвищу швидкість інгібування пухлини (15,88 95), за нею слідує Ни103-32-2-А (11,39 95), та Ниб3-13-2-А має найнижчу швидкість інгібування пухлини (9,89 95); серед груп з високими дозами (3 трК), Ниб7-14-2-А має найвищу швидкість інгібування пухлини (79,51 95), за нею слідує Ни103-32-2-А (74,66 95), та потім Ниб3-13-2-А (60,26 95), та | тар-СІі 2А-5М38 має найнижчу швидкість інгібування пухлини
Зо (13,51 95).
Таблиця 23
Швидкості інгібування пухлини АОС іп мімо
Швидкість Значення Р (порівняно з
Група рАВ Доза інгібування пухлини в/, контрольною групою) ни47-142 А 77777///Н/0Л17166 | тре | 230496 | -: 045904.ШщЦАС
Ни47-142А 7777///0Л17166 | Зтре | 6687967 | - 00052
Примітка: " означає, що Р « 0,05, "7" означає, що Р « 0,01, та МА означає, що не застосовувалось.
Таблиця 24
Швидкість інгібування пухлини АОС іп мімо в моделі пухлини ксенотрансплантату МКМ45
Група рАВ Доза Швидкість інгібування Значення Р (порівняно з пухлини (5) контрольною групою) група
Ниб3-13-2-А 9,89 95 0,6492
Ниб3-13-2-А 60,26 ор" 0,0124
Ниб7-14-2-А 15,88 95 0,5336
Ниб7-14-2-А 79,51 9рхх 0,0087
Ни103-32-2-А 11,39 95 0,219
Ни103-32-2-А 74,66 9БУх 0,0033
Ї тар-СІ 2А-5М38 13,51 95 0,4980
Примітка: " означає, що Р « 0,05, "7" означає, що Р « 0,01, та МА означає, що не застосовувалось.
Приклад дослідження 8: Фармокінетичне дослідження молекул АБС іп Мімо
Фармакокінетичне дослідження іп мімо проводили на щурах 50. Щурів 50 (Зпапогаї бірр/-ВК
І арогаїогу Апіта! Со. ЦЯ.) рандомізували на групи по З особи та лікарські засоби вводили внутрішньовенно у дозі З мг/кг. 0,3 мл зразків цільної крові збирали у груп введення в наступні моменти часу: перед введенням та через 5 хв., 8 год., 1 день, 2 дні, 4 дні, 7 днів, 10 днів, 14 днів, 21 день та 28 днів після введення, та антикоагулянт не додавався. Зібраний зразок цільної крові залишали при 4 "С протягом 30 хв та центрифугували при 1000 д протягом 15 хв., супернатант збирали, поміщали в пробірку для ВП та зберігали при -80 "С. Концентрацію крові в сироватці визначали за способом ІФА, та фармакокінетичні параметри досліджуваних лікарських засобів розраховували за допомогою програмного забезпечення М/іппоїїп.результати є наведеними наступним чином:
Таблиця 25
Фармакокінетичні параметри молекул АОС іп мімо
Ниб3-13-2-А Ни47-14-2-А (ВАК | Ниб7-14-2-А (САН Ни103-32-2-А рднвб,в 6,72 6,7 рданб.91
Непош- Не-
Зразки Непош- Непош- пош- . . кодже- . . кодже- | Антитіла| кодже- | Антитіла ний Антитіла | кодже-| Антитіла ний АОС ний АОС АОС ний
АрС
Серед- Серед- Се-
Параметри нє Середнє | Середнє| Середнє нє зна- Середнє | реднє| Середнє значен- | значення | значення значення| ення | Значення) зна- | значення ня чення
Н/г(год.) 169,7 192,7 158,5 188,8 170,8 180,6 135,19| 157,67
М/2 (д) 71 | 80 | 66 | 79 | 71 | Й ЮД75 |563| 658
Стах(мкг/мл) 64,94 | 66,35 4280 4949 3283 З444 4037 4038 3609 з2г35 мкг/мг"год.)
АОС а600 | ваві | з4Бб | 3741 | 4309 | 4356 | 3699 | 3357 (мкг/мл"год.)
Уд(мл/кг) 159,8 155,0 198,3 218,8 171,9 179,9 160,09| 206,29
СЦ(мл/день/кг) 19,70 | 21,75
МАТ 0-о (год. 2121 239,0 184,7 216,6 226,6 237,7 |144,63| 160,14
Всі молекули АЮС мають гарні фармакокінетичні властивості, та період напіввиведення антитіл є трохи більшим, ніж у молекул АБС. Період напіввиведення Ниб3-13-2-А іп мімо становить 7,1 днів, та період напіввиведення антитіла становить 8 днів; період напіввиведення
Ни47-14-2-А іп мімо становить 6,6 днів, та період напіввиведення антитіла становить 7,9 днів; період напіввиведення Ниб7-14-2-А іп мімо становить 7,1 днів, та період напіввиведення антитіла становить 7,5 днів; період напіввиведення Ни103-32-2-А іп мімо становить 5,63 днів, та період напіввиведення антитіла становить 6,58 днів.
Приклад дослідження 9: Дослідження стабільності молекул АОС в плазмі іп Міо
Для оцінки стабільності молекул АОС у плазмі іп мйго, молекули АОС додавали до плазми людини та мавпи в концентрації 100 мкг/мл, та суміші залишали відстоюватись при 37 "С протягом 21 дня. Зразки суміші відбирали один раз на тиждень та аналізували за допомогою
РХ/МС/МС (5пітай?и, система надвисокоефективної рідинної хроматографії І С-З0АО; Арріїєй
Віозузієт5, потрійний квадрупольний тандемний мас-спектрометр АРІ4000) на вміст вільного токсину в плазмі. Результати виявлення є наведеними наступним чином:
Таблиця 26
Відсоток токсинів у плазмі 11111111 Відсотоктоксинівуплазмі(ф).д/ 77777711 ормеодеин и |про ет 7,24 6,85 рАН 6,7 6,05 див вел Ла" | Мавпа вел Туди Мевпа/ ВВА Туди Мавля ВВА Тра" | Мавта 01001010 00 000101 о | о 71001 01010 | 0 00 | 0 о 10,93 098 14010211 0 | о01|028| 0 о 018 021 о 0,78 092 21 | о | 032) 04 | о | 034 | 029 | 0 | 04 | 024 | 0 | лиз | 096
Результат виявлення 0 вказує на те, що вміст вільного токсину в плазмі є нижчим нижньої межі виявлення та не може бути виявленим. Всі молекули АОС мають гарну стабільність в плазмі людини та мавпи. Вміст вільного токсину в плазмі людини та мавпи для Ниб3-13-2-А становив 0,32 95 та 0,4 95 відповідно, після інкубування при 37 "С протягом 21 дня; вміст вільного токсину в плазмі людини та мавпи для Ни47-14-2-А становив 0,34 95 та 0,29 9б, відповідно; вміст вільного токсину в плазмі людини та мавпи для Ниб7-14-2-А становив 0,4 95 та 0,24 95, відповідно; вміст вільного токсину в плазмі людини та мавпи для Ни103-32-2-А становив 1,13 У та 0,96 95, відповідно.
Приклад дослідження 10: Дослідження на інгібування іп міго проліферації пухлинних клітин за допомогою сполук
І. Мета
Зазначене дослідження було призначене для перевірки інгібуючої активності фармацевтичних сполук за представленим винаходом щодо проліферації іп міто клітин О087Ма (Сеї| ВапК, Спіпезе Асадету ої бсіепсев, Саї Ж ТОНИиЇ38) та пухлинних клітин 5К-ВВА-3 (клітини раку молочної залози людини, АТСС, Саї Ж НТВ-30). Клітини обробляли іп міго сполукою в різних концентраціях. Після б днів культивування, проліферацію клітин досліджували з використанням СТО реагентів (СеПТйег-Сіо? | утіпезсепі Се! Міарійу Аззау, Рготеда, Саї Я 7573), та активність сполуки іп міго оцінювали відповідно до значення ІСво.
ІЇ. Спосіб
Дослідження на інгібування проліферації клітин О87МОИ іп мйго було взято як приклад для ілюстрації способу за представленим винаходом для дослідження інгібуючої активності сполук за представленим винаходом щодо проліферації пухлинних клітин іп мйто. Спосіб також був застосований, але не обмежуючись цим, до дослідження на інгібуючу активність щодо проліферації іп міо інших пухлинних клітин. 1. Культура клітин: клітини Ш87Ма та 5К-ВВ-3 культивували в середовищі ЕМЕМ (СЕ, Саї Ж
ЗНЗОО24.01), що містить 10 95 ЕВ5, та в середовищі МеСоу5 5А (Сірсо, Саї й 16600-108), що містить 10 95 ЕВО, відповідно. 2. Отримання клітин: клітини О87МО та 5К-ВНА-3, що ростуть у логарифмічній фазі, одноразово промивали РВ5 (фосфатний буфер, 5Напагнаї ВазаІМедіа Тесппоїодієз Со., І. ТО.), та потім розщеплювали 2-3 мл трипсину (0,25 95 трипсин-ЕДТА (їх), Сірісо, І Ше Тесппоіодієв) протягом 2-3 хв. Після повного розщеплення клітин, додавали 10-15 мл середовища для культивування клітин для елюювання розщеплених клітин. Суміші центрифугували при 1000 об./хв. протягом 5 хв., супернатанти відкидали. Потім клітини ресуспендували в 10-20 мл середовища для культивування клітин з одержанням суспензії одиночних клітин. 3. Висівання клітин: кожну суспензію одиночних клітин О87МО та 5К-ВВ8-3 ретельно перемішували та доводили до щільності клітин 2,75х103 клітин/мл та 8,25х103 клітин/мл, відповідно. Скориговані клітинні суспензії ретельно перемішували та додавали в 96-лункові планшети для культивування клітин у кількості 180 мкл/лунку. В периферійні лунки 96-лункового планшета додавали лише 200 мкл середовища. Планшет інкубували в інкубаторі протягом 24 годин (37 "С, 5 95 СОз). 4. Отримання сполуки: сполуку розчиняли у ДМСО (диметилсульфоксид, Зпапоапаії Тпап
Зсіепіййс Сбо., 14.) для отримання базового розчину з вихідною концентрацією 10 мМ.
Низькомолекулярні сполуки отримували у вихідній концентрації 500 нМ в наступний спосіб.
В першу колонку 96-лункового планшета з О-подібним дном додавали різні дослідні зразки в концентрації 100 мкМ (30 мкл), та в кожну лунку другої колонки через одинадцяту колонку додавали по 20 мкл ДМСО. Зразки в першій колонці (10 мкл) додавали до 20 мкл ДМСО у другій колонці, суміші добре перемішували. В третю колонку додавали 10 мкл сумішей і так далі до десятої колонки. Лікарські засоби в планшеті (5 мкл на лунку) переносили в середовище ЕМЕМ (95 мкл) та суміші добре перемішували для подальшого використання.
АРрсС отримували у вихідній концентрації 10 нМ або 500 нМ в наступний спосіб. Різні дослідні зразки при концентрації 100 нМ або 5 мкМ (100 мкл) додавали в першу колонку 96-лункового планшета, та по 100 мкл РВ5 додавали в кожну лунку другої колонки через одинадцяту колонку.
Зразки з першої колонки (50 мкл) додавали до 100 мкл РВ5 у другій колонці, суміші добре перемішували. В третю колонку додавали по 50 мкл сумішей і так далі, в З-кратному розведенні, десяту колонку. 5. Додавання зразка: дослідні зразки, отримані в різних концентраціях (20 мкл), додавали в культуральний планшет, при цьому для кожного зразка встановлювали дві лунки-дублікати.
Планшет інкубували в інкубаторі протягом 6 днів (37 "С, 5 95 СОз). 6. Прояв забарвлення: 9б-лунковий планшет для культивування клітин виймали та в кожну лунку додавали по 90 мкл розчину СТО з подальшим інкубуванням протягом 10 хв. при кімнатній температурі. 7. Зчитування планшету: 9б-лунковий планшет для культивування клітин виймали та досліджували на хемілюмінесценцію у пристрої для зчитування мікропланшетів (ВМС Іабтеси,
РНЕВАвЗіаг Е5).
ІП. Аналіз даних
Дані обробляли та аналізували з використанням Місгозоїї Ехсе! та Старнраа Ргізт 5.
Результати дослідження є представленими в таблиці нижче.
Таблиця 27
Значення ІСво невеликих молекулярних фрагментів, за представленим винаходом, при інгібуванні проліферації іп міто клітин 5К-ВВ-3 та клітин 087
Висновок: невеликі молекулярні фрагменти, за представленим винаходом, мають значну інгібуючу активність щодо проліферації клітин 5К-ВВ-3 та клітин 087, та хіральні центри мають певний вплив на інгібуючу активність сполук.
пЕшЕйтту бецпт нищим ще
АЖ ТЬШО. Здмитиє в АВ Е тю ШУ стик ля щук (З . 5 ЗХ лі пт тон ях гюх хх коми Пити Зк ос ум т то
КАШІ Ж ДБХБУВи джина Ай ЖДЕ МІХ їм. у ШО шШуалтума ях ПШиасуомеучиї ПМ шинки т тож яеехіатищк ах ше ХКТшмІ ваті шо, М. хм дет гіч ВІВ ТРУ ги для МЛ, шо Хуст т пе. Шерех ЖВУЄти дув тил УТ пот тішО» анАЛОГ ОКОЛО ЖЕВтТУ АНІМ-СЕЬ ВНТМТІЛС-ЕКСАТЕКАН ТВ МСГО БАЕМАЦЬАТИчНЕ двсУтЕМО ИН ЦІ ласі шт секту ялини «лу тілі дощит рн
За шиМЯ ие ї Жаль т шт що
ПФК Дух веи ї шв тах ХО
Ме пе АЖ Тит І І ЕЛЬ 20 лих з
Кеш и і пкт і шт
Зола ян ж пня тре чаш ЖК «шлю Пбеохчохху що стріт лижі й ут т шойш тА штучна потлідсшниісих ковим шву «ін пЕфЕТТМИя зшкійнт МІ ХУНА є Щю 0 Птсзиутрх преувоукх от пт Ж іх СИКОТуняошо слруттедуюту ТИ Дон Ди ток пошшЮЯ мппштІдлЕшлЕНИСТтЬ пртшвІнНе Ов ліВ лю: сприша НЕ:
Є ДТ х хв у т т - т -еет Фото т т тот ті В тт пляж т сте
Тижщо То тк т рік Ши Яд суєту ін у 2 Ві ся спла Тл лях шнув ін їх їде січ ЕЕ ІДЕ ЕЕ) Кур Уж хла Між слі ща БУВ ОСА ч т хг чо ї г. І тов я ш іс ль ля т7 я Поу, т пт. х тя скол то- ешкня т шт з х « пі. - о с м
Га отоу Ток зт т жо Ву Тошах ких 073 6 Шо Тов ІК пут стихи бр х-- шо М іпвЕУ ЇсвО ща па АБИ ШЕ о вшс мІВБ щшаіБ Ух вла ста ІМК ВЕ т сОЖ, и яехане «Чіа тя тях тон тт то -2 жк т -л тт -к стою ек
Туш тТеш о тууж сб січ пут Ущі деюв пім дДаемх дет ій тІсе тів что іїБ їі пПжЕш сві Бій Еш УДО яю ЗАМ БЕХ ДЕС Зі їде 118 ЗхУу 19 «А щі ж тва ло тло літ лердомо 07 жо блю до тн фени узято ня Бл що Тазує од (Тк дух ха аа ості спи о -2опозІАілп ій Їж ОБУ жіч ЖІ: вів ік пе о зЗітТ ви -щ щЕ я -щ За м поза Ті т Се ен Бщєе Ві ве Тан шт іх ВщеУя ТІ те «тло ш-щ ії 118 ІіІКЖЕ КІС лпБО лов ші А Шк м зпБ стіл БТ діє дат сам с -4 т сх шо НУ ТЕ ВЕ сум Фреш ббррян ЇТ ли ПУ бтТяюм бує Я що Щя шо лущ тат чну щм фшні тощія пащі яежІ ЛАжЖи ІТЕЕЖ свіСб же їгЕ іїійЕ цех пі Бі сс ЦПОУЖ се дж пцещхп са «Че от «
І жо по
Жде Ша Лях Вл лм (ті сп ях ЦЕ дому Мдо Пл рн Ля Тодхло Шуту Ттд
ЖТЕ зх АТ св ІТК бі хіт вл ЕФ хв їЖш жшЕШОосиІ ШНМ Кит ІЛ їх чле зм як я Мал
Тени ЧУ Тіш о бдвтк бах блю о Вих Ла Тлаш о Пен Мило їн о ббшю їз Вщу Ві ш вже шеЕх ді жех шеї вжи в Беж МУ КІ твІі Осій пев пт АвмМ вів ж тож хи
От оо шо туш 5 що Ли Струс сяк ті хо Шум іє фр лтв о бше Вл тва Тек Товт ля чві вов о Еще ійпжЖ Ся 53 КЕ ІС їіпЕ ЗАп ось пі ПЕ УЖЕ пе ЗШ і їж 4 теж шо Мшк Вдтя ля дм тло Лек 7 дж Тем пн Тл лу ло що іш Зщі 0ьБІУ БІ -5 2 шеїш ше Мм шо ті ле КІФ ЛЖХЩ 0 ЗаУ Це о ше чаш «шт хУЕЖ «жу ях чн ШМ я «М
Хщт пл пе бе Тл те Трах Тв ба боту 7 тю Вп бат де тур ит; зжАУ Влюм Еш ІБВЕЖ Б Є :їлЕІ їв о кпе вжЙй охяа БЕ вІЦ вал овзв ІЕЕ «ЖЕ ж тт
Од ря Яд вів Баш ЇІтЕ ГУуш СУБ 51 Тйх Сів АБ Бкс Уві Зах ВАВ джу Ах Ше хто ах з ї15. 155 їі
Ж дек дл ти Яодеко бе ЗЕ Тов Пе ста» Жімия, Вашу Мо уні им тд,
Еш тжх т-щі іа шцШешодЕШЛ сві Шви їчЕ ЗА гБшО БЕ лів ГЕ ПЕ її чат тт пктв іх ши ша
Шия Лічу Тих фур ЛМл б лежу бе Ша птн млн Вк Ток М тихі Жах шввт жит Бей вах ІМЖЕЖ леж їУш ЖЕ Б5еї 151 Зій мВ ів пал осв вЕег тал З ззЗи
Ам ко яшокнсю бує Бі бів бів Бех де» ЩБЕСО Еко вів сів туї Бек ТБ Бе З7ві Бап
СБ 2 ТІЇ Я іУ ТБл о ЕМае біз біз бек їйх зів бій Бей Бе її: Еко йдем тів ТЛЕ «кт. «кошт тд ки Ех «ВМ ях хг о Вщет Бще бак їїтях Жде С--охє Ти сх б. Від ше шо бе Єр ше Ух «ша БІ: Зв щшеї зіу зЗетгт їЇІ9УЖ Їж ОоКЕ зі від дів дехмх слеш вЕШ ІЕЕ
«кис те ля ше ох о п їй» тощо То СТ їмо Лтд бо бно Ж що Ті ЗХ іє Вл шо ста Тк їх У шож 8 вЖчЧ ІБЕ ле ща їлЖ п жЖ щаАя ЗМ ква .уУш пищ ам Ещ те лу ше кос сж Шо Я СТАХ
КІЗ БУ Еїс Бе Тів» ТМї бвї зп джхп о бет Авт Бус Уві сій бю сій тп ОО Е, пліт ши ож ЛЕ
ЧЕ т щі ОО т, под бод як сш їх дя от, кт тп -- Тож Фо стер ня пох - Зв дет дів Тщі Бл сви Ши Слшщ осі: БшоО іс т1і5Б ік дей ТБх Тйу жу -жю ді . - ше ШТЬШ МЕ и БШО жі і1з- зів о дЕехл БЕ їлЛЕ ІЧ: ст рт ті дет жо З 515 ЗЕК под дян одну и р-н ТУсдон г од тод ви тощо сш лит Фен Тому Її шт і- їхт їшю Уві вБвЩЛ бот схіс же їж шт ЗА шо БшО сМжЖе ів сват дж ат ЕЕ
ЖЕ Я жк
Тошчі Щтшу Бе Мше» Батон СТ Тоавіхо МЖіє бар ЛЧошоїо Ям Зло їх Ст дуух бокт оте о шех сл БЕ ваг ЕЛЗЖ Шеф: їж Сем їоя же та ІЕЕ Кс Вот «тт лах «ших ж «ж ле божу Тіщ лях літо Теж сія їдою Тло сім бал ллє лок що ТРА бод
ФажЖш ВІ У жо ШЕ ал Уж ЗА іде ІТ ЛЬ сх: МО ШЕ шЯХ Уа ви
ЕЕ пд жи же ж я ше що Ще шк Пет ЧІ тд ло км Ат ти зх Же Зщу ду Те пав 'шжЕ сви гЕшшШ щі ї3їФ ЕМ дей сша шШЕМ Кш У ко сгУБШш льш шо) ші 7 ШЕ ях ве т Женя т, її ко чи тп се ся ле, - Х щиит, ж ваше о т чн МЕ ту чих з т Порше Дж те тр - т тис Пт лох То з ще «Шов їмї їії4- ше КБїшШ швІ Ї1УЮ ІїІЩК О2УїЇ її ЗЕ КІС щі УА -УБЛл 0 ше за дн та пгт хх ри ХОЛІ Му - ж те шою шо шен т- те - пед аж бод тнє точ
Тан Шок Сб Ша 38 Бл Шия ВвщуУ Пхт с Зо т їх тую ше
Ме ше ЗУ паю 5 іш ши НВО БгГЕШ КЕсб Бі зі УЮ ШЕ ЕМ Се
Зо5 ЧА ЗІ5 тів деш свіч вжи її сім іє Щів ТБУу фі січ їТво Не Хі85 бдевУу аю - в осві вЕБп о дів осім кіт міх їж фіто Зі швед ЕЕ її хе Ве м шт сх т я 25 ЗО т -пян б Лат бшму Шошем 0 Лях То би Урок Тл у Вт у шо Хуст Пд її- ї1ПпЕ осві ву АЖ ле су шецщ аїіщш ІБЖ ЗУ сім міш ВжЖВ сем оте кох лот ак шх зм ча ау ох ПТО ож по пс ужити СТУХ т в Ша пох, пе т ТЕ Сх поло ді Бех Січ Ні Бех Бут ЕМ ІпйК о Заї БУуж ТІБЖ бі ТЕХ Уві бек Біш до ЗЕ хо а ж ЕМ поті Тон Лі Лев Ду да тло док док п Ва да Тижня ЗКщло ст ші рем жшшст пу Кут пеїжш сії: дщшеї пшеї ДдЕЩ: йвпП ле БУВ жЖшслт сві а «шо шт сте сп ях шо зв ши божу СЛ вад шлд лу Мі шо ща лю сх зр фани ллм о віш ст пет стю пев му дат БдтІв сбві вії пе тТБх Су Шіц Дж піз Ав дій Блю жщМХ за5 ям аж тиж сх Тон Жест лем ПадЗ бщде сах ло Шев Ло ТМ Жща Пк В
МлпЕ ЇУЕ їм 2шш ЗЕ Ю жк А скБІ У ді ше ше КЕ ха лдЕш БІШшОЛЬшОШ шаг; щлЕ шЯ ди ШИ ХЕ поь жона пошко Що о Шо сну Томи Тон тт тещі б т лях гецосій Бех швх деп біУу дп вІч ЇЇ Тез ТІ Гзб5 Ббе Дв» Уві їпЕ г: щЩЗУ ших да шк дО пит б ж тет яр Б що ббетє ЛІшо лящ сля ТЗ пл башт Яд лиш п акч ве овеюв пла о вшиш Мово її ЗвБІіІ ОМ о ЗАУ 11е сій ЕЕ сег са леЕ я т що ших -щ-ещ«5г хх шеЖи сх т - Фон т- ж мо То шкі що пу тт шо бно Хе дів Азподла Шев Аве Бксо Зі ІВ їЇс-с дев зві їшш тїук іч Ехо: Бжщ що Ех Ех ЕТ пря ж щощОдД ше - - т тк 2 - - т 8 якова ші Федя п Жодна іх ЕЕО 1їі- х1ї8в бах БЕЗ Рекс бе йех ет їх і-й шШет зі вів дев г шт шт
ОО що ЖК В оч ХХ для сту х. сл Се ков, Кажу и Мі х да Чо Ел, сш ХХ рю ож ра І м ївч Азп оБбезя щет Суз Пі: ЩїежЖ дів Бех дев ЕЖЕО шех РБЕФБ Зімй ТУШ ше ї ж дал БЕ шЩ
ШО МА М шим пою Точних Тл що од їх ті до т сім пл шя є сти пт сл лодня бо т шЖТ ща БТ ау дж БЕХ хіт сСсдії пал ОР слот ха шов ЕЛ БЖ п ЩЕ лих шт лиже шо ших т тощо Ті тах лік ту буде Ве бод сту дою тяиую Лют до стеж ТІ та т-ащ ше яшж І1МЛЖ ох шо АЛЬ Лют Ум кі ШЛЕ Їж сьїшж щЕ в УА ле дя т шує дет кої и Ас Ху бат Тв і жк піл бе бщше Вшви вах тів лі Тв о Шах ті тк птщії шт; швжхл ось 155 жду БЖ БІ ЗБ шжїш ії щі ШУ сСжЕш 20 20ЩЇ І
ЗЕ що: де шої
Ей м МД шо за -ї «ПДшчн С лриу СТіяю Фишяи Пуми М ж т шен У жо Ще сш іш Ша шо мл. - що ще тях т : поки -щут Шрек М ше що ос з - шевї під їшжш ті Ї1ДЛЕ Заш ргІЩ Зі бец бЕеЄжЖ дів Дів МІ НІіБ лів пі
Біє аа -Е чав я Тл пил
З п ит пути
ЧЕ ті лих мо рве стих соти ще ЮК т
У штична посліІдсвкоть дл ту м засн шик ПІДТРИ т зи Водах А те
Ох 00 Жилет зт б пчилути клуку ЕВ--ио люручи хм ПИТ такої МмосглідстЕвнаств пюсттесїнге сСшд-вс людини лова Ето зд - ап с тя Ти фо Ті (її вх Лаяу фе» т без б Від ст пт Лис тт ств БОещ іпжш діб І шеї шМмтІ КО БП БЕХ БА ЗіжЖ сті ша шу А ї що ТТ пд ї ш їх Ії тт Товлу Тивт Ло лі Как б Тавче Пн пл ча ж тд п тя лак бл хі Шещцо їз пед сві нії вх ес кг СЗіМ пі вм тпе ЗУ У ХЕ й МЕ зп лтяяу СТекке Жошо слі (ті я уст лід) долу ПЗ бал бот лік ті ті що зх лях іЖф ІК БЖ схі Ж ЩІ Еш ві вв ЗаАУ МпЖМ ОСЬ схіхл Ів сш щік ІЕЕ ж п хе як че ож пуд тощо бін кт У Уют сто п Тозях о бін Мі х бек Лу ж мо зт Аж шу їйЕ ам ті БЗів :ПЖ БІЙ БА Бо БВЗоаж Іі сш А М Ед шт -ї хе щя ВЕ о тп тощо т що чем Пеня ші ЛЬ ун дя Точно лу до ТК з міМм 156 30 ЮК Кут опт БІ Оеш Бей їж сш сзІіт о зжЖжвВ їде дів сію
Хще В фею ПТ я ТК тр Ло Тошеє Ша шо Лящ То Тео а бшк бод бл адтояжО пу слу вле їЖ 25 СМ пів сі їдшж 2 сСеЖ слюьБЕ ше Ба с: сх пе реж Ж а
Мам бій л5із Бів тних пі сімй Бе о дих ві Тахо Фут (8515 Тов Шу Тех вій свій вів їпЕ нік Слім Блпе БЕ ЗБІі ЇЇ ГІ: Ії ІНВ Еш ше жпго 18 1
Аа ши 3 кет, уч То я шо а: пух їі х Тов кре, лі То Фон тов туш пул. кт -еш їії5-в щшвЕ щЕет вЕТ ЗВТ. шеЖ ПУ БЖжО УВІ шій йБШшШ Пуш ВЗБШ БІБ ств чотту зле її5 її Мпа лі тот тУмаш Лю (літо пи Лема тлу бі пл пш В'до тю стем Ту пл чад гав тла ши ОУуВв ошна шо Заіщш ї1йпЕЖ С3л ЗЕМ мі І1Б5Ж УЖ шва І1шЕ ол З тк п ше ю ІОВ Ех
Тбяяняну я с Жош Ох ос Ток Ти пн Чу Жотн, Тенти ит ПТО Товт п - шле ва Ам вжи олій беж бе Бко Зі Зеї БЕЗ ДЕ ж Ве а ше ХЕ тах р чще Ех че ши шах а
Тов ля бшх бок Леою Тшах Лк То Бім. бал ло тю кут да пт
Же - у сЬБХИ ЛШ ЛШ шже .Мш ве кшЕ -5жМ хна ї1ПЖ лпЕЩ лап дво ІМЕ лу ги че ах ЕН ж
БВ що Фідреяю біт Те себжвж ТЛ ах и што Тіні Іа Жду Тло хом мит шт вів йеї Туш Штв шт Бій ТП біб; Ват Біб Уві Шеї: Ві Ака вкс ех хх лот. Я що їж ал х, ФО тн Ох т - «дос ХЕ, ех лю ки Тек, ХУ МОЖ, ТО для ті лож дви шеж Ті їІїі- бец дев сеї Геї ТУух Бі БЕс Аве бів Бхе ЇВУ Ті ч5Е птн за ж шо шив
Фк Пигу Ток й тою Шодрхує бЛ7еасчя бомот До ся. ПЗ бат Тих бощу Лодлх Ср ше БЕ дво пл їЛлЕЖ леж аМжЖ Еш шт і АЦП вам ше ль шо лжЕ еп т-Е етх кн ВС! шодо х шим пу Біє Ві Вів швїІ й БЕЗ Бо дів ій Тух Бех ТІ Бгбв о Уді дев
Пі бю др 213 б Же лю сті є 0735: Тому Фо. То Ше бшу а. сту мі МЕЖ ЕЛЬ бота леж ІЛИК їхіт ім Шев Бе їде лих 2»2ЕХ пз ІТК теж: тод те ки шо шжж тд тах Жак (лях бу тера рах сни пл Зі Шіс Здя би й яд
Ж льш ТАБЛ ДІ У швЕІ ЇУШ ЇДЕ ЗМУ ай лів піш лаБЩщ жеї дю ІідЕ я меж т
М -Ж М пл о Тошту бля фіни Лю Пеня пущі бан ру т пн Ті Тер Б що дія дя шу їдєвц ль мл В .:ПЖ ІП. щі ПЕ ЩЕ ге 101 за ШЕ о ва мл тт ет сте шо ли -
Же. Тож ис ЛУющо тощо Тех й блю Всем Ша бшу фс ЛХщло 753 Баш сти якЖйжЖот Оу жшс же 225 їлЕЖ ші вм во; се сь ж Зі сіб Вт аю ат ее запи шо шлях яю авт Вів Уві Вів ей ТйжЖ Су БІР Рез Сів ї1їіз бій дей ТБ Тк ЇУК тп: ти че авг
ЕФ ААУ ші М ох ложка ню, 7, 1 х в Ту КТ нм, Же окт Фе ля ща ек Туно Тотурх, ФК ях
ІжМ ЗЕШ ЕТ жі ЖЕ зт сЗіщ5ОоОБЕш БеМ БЕ од ШУ БЕ 3Зшщ шещй о іг люк, сту зле «ЛЕ ве лок тав Фа Вт ще х толк СТ Тошє Же Тдваі; Тов Щах і тбМе бл буще ії теї зап даю вех шо ІМ МБО о ІїІМЖ в о мец шеї УщІ ІЇІпт Вис ни
За аа ши
Ж шу и тям и кт «т т ваше хну м вк пЕш ві а кКшІШ ЗУ За о Су ЗіУу її5- зії АБ ім ск хЕ щі пЕЮ ев Б ит
ТЕЖ а ЕЕ плід ди 5 т ящк тя кош Фщше тло Тов беж тах В то т тд
Фа бе Литі та лох ще 7 Ту сТаюж Пас Шео Вашко бим Пк пів о лш АБ ке УЖ ді-ш ШЕ М с ща ше кУш ЗУ шо св ню БІ зла лотЕ дит я шк Ж шим ті ТІ Фуршет бою ЛОажує біда СТетує Талон Шеууу їЗ3ч лящ б тирі ЖШідях ж Іі бе Ріс дек Туш ЖВІ ТУг ТУуїх Вк о Бкс обі Уві Вей оїбеи дет
За5 и 55 3 тот од сля Чі Ву Ма дамо шт бунту тн В Ятх Тед Шшемо лм Хоче іні ве сот пів І Вдіф о лех гивт КЕ БІ с сід осімХ .ш ше ФЕЯ дл жо ух ах за ій Зіщ т Ттшжу СМ о Вщх То пе с Під Фі слу тн Тім щюь- о Ті щу дм їАт- ПЕ скі У ВЛ да літню па ЛЕ схід сі М іш ж дод шов лих доз аз: али жа Жоля ж
Ті ТУ 5іЗ БУВ дей бек БЕ бе; ТУжш ТБ пу бій Бі йжхл дю бе вет хо пол
ДЕК В ил «1 Ждан ла Ма шо Шоу фл лає б7ном тд Те птн ту трон ха втя мід шу слі пІішЖ леви их ІЗ 0пж сУщі ув їх 2118 пЖЕ ща сем ід щошсх тт хх шодое ХЕ ше
ТП окт рент Женя Тут ж и. око я жо дих щит спи Ля Тов теку Та СТ ж ш-і ЕМО КБшшШ БУВ БЖ пеЖ ІБ ЛЕ шяш 8 сМБІ леш БУ о гжшОт Уж. І що шт ат аг ил ям пол чл рат В, Ж пул лен кі тю Луки т піс т тех дохо 5 ту ях см щем Від бла що ЕН Гіди ібеушо 0131 яму (1736 ут см Бод пух киш Бу даю мії са під ХВ ІЛ БЮ сх тів ЗА гл схід ЗВТ ІМ зх еВ 5 дн бан он Я он п, оч ов Мат я, и юн чн, нат п - тн Тур тіж Ти Ту У оЛут еру. 13 і люк Тавлу феиту бл ШвуУу буд ситу іп: 1 0 їш зго оУді НЕК ЗМ схільЬ І Ше БЖ сві лЗІ Кшш АТ
Ах шле шт їх -й шлх шу ша АС
Хоч ТЕТ од, т - Моне Шк ГП жа Ту ивом, ую с тож Певно т от Б То ве лек м їйезт о с5іп бе сет пал щі Беп БТ ІБ пем їТвБжЕ Пец Еля Вел УВІ їх щі дент шт, іх вп ше ж у ША Не фі допиту що їкждо т яю Тл у дтп лох ви ек Авш Вів Бк іа ТУх Уві Сев СіУу Ті сій» деп Жах бі дах їх - шах шу м Я то Тчи Вегр ща Шоу ме: Лрло пає Тов бору З Ложки Пажк пл аж бімех щу зів БТ МЗІЩщ шеї пЕБ о жЖис хі МЕ ге о вдяю ха шШЕМч УЖЕ ЗА У ШК СУКИ ща ди шЕБ -щргх дж «КД ХЛ. М - - тот 1 - т п д т т Фон т-з я -ооте твІ вжшо Іїе Ті Хеї БІ Бео АБ ех Бех Тут Бейш ШеЕш суб бів бе з Е 7 х - я у я що ях ше щих зи т шо в ш шОХ щ- - - т - ях т - КУ т їх Ян тому тан Шо м їв о Бапо їв Жак сте Мі ЖлЛех Б'я йву вам гЕхст Шах бу йШі»я Тож Шех
ЕЕ ше ЕІ ОУЄ Бу шеш іх ж вей тил ФІ Еш сіл ІІ ШЕ ал жд ЕТ жд -З5 ЗО баян усу ТТ бо сп тощо у я Том хащі ПТ то под Ст ті
МІЖ жЖщо їде АБУ Зі да КЕ Заг бас мав БпшЖ зе похжі ЦЕ шПпже дає к-т дл сот,
З. ск Я
МОЖОЖ ми ли ХЕ що таз тіш Тв Ме Ви бще Ват Шіл тв Лос Вів бмщо 7 па Жодя -ищ КЕ дош ЗЛЕ КЖО суки: сиші сЬБІ -Зешх їі1йЖ ОО їУЖш іш МЕ ШВУ Лех тат че пет
БА -іш пе ся Тшч Вл шо Тіу сті поко Бошеї Бош Жах ТЗ що ла щу Тл бір пт
А- бес Віз ТБх слі вхо йо дев деї Тіз сві Бу ех жів ТВ Уві пт шо шт кат ш шоу шов ОК рак У: я їх т я ХУ Яр, ті т чи а чл ря Ля ут Тоястх пе - Лозко
Пул т Шамо СТ У Лоу тя піку Я ку т ї их ач то су Локом шввЕш Бад ЖЕ і ПЕ ХЕ КшО -З-і і ЗІ від ЗАД ГЕС Шув сю :З: шо вл жов
Жошяео Жов Ли ля шо УпЛрвяє сах Шен. Лю, (тк пляму Молоко нн ств одн Тон СХ ях двжш Іштв іМмЕ па ПЕ ЮБ КЕ К'шТОл СщМЖ ЖЕО МОБ ЖЕ А ше ЦеЕУ ра пох ти поту» ши дет ях поч Фан др 7 бтУроо Лех ПИ Тени. Жеже: Тлюдо ет Зв щує Жабо: Мат шу шт ся хі ШЛЕ щей ме кшт БЕ МмУБ гшО Ш0УБ сь .ПШ ж мВ пт ко дтп т о у ші ше ша ті т 5 тн ст ля лето та стаж ях тло їх бод пт ши сі: тт Прок Бетро Ті брету ста Ло ТЗ стю лЯдої щої лящ де пт дах ї- іїїФв ше мтЩщ ЩЕ вЖО сві схВІі ї1МЕ СВ ЗІ ха щі т Уві Бех нІіє шок «ВЕ ТІНІ пл йди биту 73. Я бан бю бат б. Ле А бЗдую блю ж сім пущі жа Еш шій НА УЖ вКгЕ зеЕп ЗШ ЗУ ві ВЕ Ам ха Ам Бі -к- - хх - яежм
ТЕ 1 ТЕ ту
МЕ ке га тк я є Вжх Воло Тажщо том Ло Єюуї Мо ЇХ я Мая тлу Петя дя Ду фу Пвкн плов ольЕТ іш Буш .ІрЖЕ Шев -ЖО МмЕФ сві Сало са ІЧЖЕЖ дЕшІ леж ЇїлЛЕ ІК те тд чт
КОЛЕ ях соскд х птах лях Ж дк т -х пт жо 14 т-ох т т « хе т ших Лждої лях Же ЗКщо Тв по ЦЕ Ж щ пі --о Тек лок боях Її ях
КІЩ сві ха севжш сві ШЄ ШІ УшаА СМ мів іт лю ШЕ швч лЕБЕ У тат та тв їжу сх «ДЕ т т т Тахо її тона я Ши бшяо Тихщшо тоді Люк 5 що бен Ст
Тижщо птах Тер Тахш пещо Туижщо ЛЛї а бше Тжщо Б що Тощчо Леку 5 шо беж т
Шв шАМм аЖЕ ШУшЖ Зув шуУув жа шшжи АБО ШУв5 звід О0емл КЕ от КО дах
ЕЕ -т -х ж т ТЕЖ
Плач о Тождо ти т Ше Тек То Толти шіля пам фут Бут ле Жемт лу пт мій ПУБ о ІЩЕ 1ї1Зз БЖ ШО МміБ ШУ СІіУу ЗАМ вис мЕЖщ ЗІЗ жо АЮ Бі т тт ---х
Ти ГІ ЩЕ
Ябуяж СТіяно тощо Фен Шен дує нач Мін УЗ я Толя ЛИ Лов Міші 07 тд одн іш ї1плосшест о жу Кот сеї БЕХ АБЕТ сві їх ім ВБщшжЕ ЕТ і ЗУжщі 21855 тих ВЕ 75Е Що
Жов п їж То лих това (тю По бТюжах Тече Хати В поло Бл тла ЄП шал аїЕ Аж ІН УА ж щі Кл СУМжЕ же сшежш мБІ дош ВАВ ха Зі щи ш віт БІ ту пох Жак вбщх (піч піт Ще плї15 щеня Вдчя ажж Зитв о ТвВе бе бу Ше
Мт мам осжш 2ВУ бІМ ст Ел їі дЕБХ ВЕТ .їУшЖ ву ІБ БЕ Би ОБЕт ща аж у пут Жодач Можно ПЛдмо Луна 7. я ХЖоушак БВ, те Таж Панч Шо яе о Тякщ То Льв стих заї Бех пЕшШ шяї яЕБФ о -щ- У ше ЕД впЕ ил Ії ОК СУ ше іїілпЕ хі
БЖ ож ше с т се т - сет се - яушо т ш пе 2 жхшсто ж
Ав Був Бех Бл Іжхш сів біп Зіс вжи Уві ЕББе бяжх сСуж дах ЗЧеі Мет х х х. ї У У З ї мив щодо сш Ж М ша МОВ ше шля сут Ву тод Ши до ші Ша шо аєюмо ню ток Фодяео Тошим Мк Товт их піз тім ліш ін пов Ей ЛІ ШУшШ їіБЕ ЗА О0кЕБ шяеш цШЕд лвІ пам їх сш пог щотт, тод аж ші шІБ шою хо січ бує хЕЕрж БЕХ
ЧЕДдШО ЕТІ
СЕ ЛПдхеоаюіюв пит питво тт чаш шщжручна посліІшсВвна те пЕшщх кт пнвнлчхт туда НАМІР
Сп 0 Пот литва то тиж уки ТО що зкшвод сини лі шо боти ж тої
Здаше" мМмтшпадІвВнЕсте пгс:тнідУ -шетпаЕ МББЕЛО УМО ШЕ Шут еШшН пав шину 71 Лот Пн СТ ТТ лось бу жхеажю о ж, пе Жюмо ю ож Тл Ко ллк пПожаю ( рк пів бево Ти ІТХе іш дах ве Ж шт Ба вжпо Уві Вів осі БІУ шу пі
І щ г 15 ї ж Ах т паї Теми Тшя Таз йів Шіш ве Лаз бами У Ваш Та Ша тіл Пехи т за ШвМХА жа їв оплІаВв пів лОп жВвА шов схАг лот зв БЕ бу ШЕ 18 «г т лу
М ки дя пу талу То т т ня ня УТ Мн шо дн бек Туя То ду 0 о щеня гаму іл ж ев са САМ вВЕШ Уті дЕШ о еббв о лееш селу лЕЩ Яд М ВЕ СУ
Ж к - БУ ж ж як Ж -к жк ж т зт п о па
Уві Іівз йто тп піп сій Її Тл Ріс бі ріс ВЕ ПЕ беш Іі ВЕ шк -е я. г т. їй ша деле ши салют, Мод ле бущех Щбщоо сти Єошух тт ду. Сток в пд пу уд піс тв Хе А ш жала вЕШ ів леї шжа шЕИи і1сж слі АЖ ті ІЛЛІ іт
ВЕ т ТЕ Зо
Звх дев ЇІМйх Зіу дах ТУХ Тйх Тіз біп бві їз Ге СІЙ дев ве Бі
Б хо А тод 35 тля щу кн т ою пшоно тку Тент пух Тоді Тл
ВІЇ мМ їм між ІЛ хі сі влж ЗЕ о та І шо си ше жшФ о шу зт зт тій
МУ Мих їх полях Пежи СТ тброшодуш вд шя Док беж нн Тло сля шу Тит шум Р шт їУх зів ілдх ле взяти зем освЕ дви БІТ зів сій дЕЮ О»УБ вБЕБоОЛІА зт чоти чл я щи їшщ тра Від тоди Уют Їх літу Її ті я ешуу Лерою тр аж од Пи чаї Вів Бей тп У тій Ж бів їйІ Біб дже ТБжх ТБ Тух цей їхц хат хг ххх
У шт шк тую, що В дж т деколи бант тв лм денну бро тощо т т бу
ВЖЕ хі БУ: Вот ЗІ шВЕ Шепокшш сві шевУ ЕФ вшщш с ЕЩО ЗАМ шо ОБ Е та хай зд ЗЕ 14 дз В Ж: вх шу Ме в'я
Фе паю б беж Лумяя ло Лех Ма твя- бат Ті лем уж Ва Ме т ж шо хо зва сь Зп ша сп ха Еш З з3Е во ЗЕМ ЗЕМ ВЕБ ІЛЕ чих чех че
Не: о 18 трон да ПТ То тя 15 Па торт, шу Ліси що щу пл кан ие їп- бтї ТЕ Буш Ше ПІ ТпХх піз Аве» о Ббхт Уві бах Уві бо Ву Зах ря 15А і5п
Боже Щі лущЯ тв Лиш Вам ло Тоету Ту (ті Пет Б Зо лект лю м т що т ща ІДЕШ ше сш ша шжм УЖ АХ БЕ ЛО вою Ето ЛЕ 23 ї1щ5 пол ие, іст вл Ся
Фаше кни Тошео Вже іяту блки них М сплзк 0зу тяямо Тодн Вшю Ладля лу леж ЖлЛІт пло лив 20 ж МЕЖ Еш ді мам хім ІЕЕ ж ет БМ їЛЕ я те ж
Сме Ні Вів бів бат Ам БЕЗ ІБжІ віх біб Тут Газ її Ейзе Зві дж - в, т «кслд, я шов ом «А шт
Фони ПО чя вАх Я «ож Пошохт сті Ух с. Тех Я де, ст. тот сти Може Ж шу бю
МА ТАЖ жхиш слі са Лех ІлЛЕ біт ЗА Ім киш Іі жит вЕХ її 85 5 шах лящ Теж Вущех Шо лях Фея Лем Мшжо бзжш 07 В хо б бул КІ ст хі джу; т жЖеїІ Зде леУ У Мет С шш тії; 2 Ішов сьжтУ ля Ні ІТП ду ком ох с тодуя т Зовни Лую ти Тех бачило що ті тп ли щ пря З лох Сл піших їАШ дм свт лЕФОЇлІ ІПЖ хі ЛЕ ців діж ї1йпУ сві І1УЕ вІЕЖ САЛО ШИ ша 250 258 тота Тен вин дя у юн Лос Ху Ту пд жогх. ТПля я, не чо Тед Тоду кл їде ЕС ЮшЕ 1.5 ІЛ ШЕ Ав о бхп о деУ йбехп шко їТ.дв іш товщ шує
ЕВ 235 зо5
Тс Ві ат люка ли тим студ їі Лю пік тм їж бе Лв тм тах -З5ВюЮ пів хі ЗБЕ ше о шпжЖ ЗЕ м Кт ІМ І1йЕ літ ЗЕ ЗБЕ ЛЕ УЖ зи де дл сот ве ЗА іх ЖЕ
Фошяя яні Таж 7 Тож лм хни Ж дя ом що дн Дн учня ших я -емд ії ії Уді вЕБМ свт сім о вЕжш Ше шву Ві шевЕ шЕеш т шШещ є де я. яке
Еш хо -ї5 ти би ет Вщє Бе Зх СЛ Те тік лдл Же вд ТІ ФШонту бує Бош жу шжи сіл Бш сш Еш ІЛЕ шо ІМЖ щи о жаіж ЗІ а. Еш сш АВ вит вят зд за 25 зо шоу ля я Стрчен блшо ббтяе 7я стим «т ян (тн Фін тат лом ло уяния
Ако тВх ТНЕ ЕдЕ т ШЕ АХ ААТЕ бе отв іп дяки Б ті шех візі Вт зд Б «ЖЕ
ЗБЕ 35 шк
-- ду шу бони ли то башт ЛІВ Тані Тл сп нн -о що
Акт ш-жІ я БІ Ся ї тпх бец обла Уві і ж ша КЕ деоке Від ши ди хг соль т 375 ІЗ трон тощо до Пи тощо Жушах СТ Ту СТ бок т що сх М що т ошіх Бл іпш ії: ХХ КІ їв впЕи ЇпІ КІЗ ЇМІ виш вік ЗІ -Ззій аз Зец ват ши жид шт
ЧЕ ши ж ж М
Те Пощмо їяеш. шо Мт ХХ що лу ет Подих М. таж вен Лезо денну, Пд ід ажЕ шк пЕЕ Вів із Яшу Блжтя рез Віз пів СІ ОТ чЕ жд Еш Ж ях «от дл ав хі: ЗІ
Чаї обжт сі ТЇйх ЕБпе сій сію БЗвк ІБ біп ій Беб Бе Бі БШжо бат шт дош докт я що лю ті те хи бет вд дощ Сп щодо ба Міадюо лашо ля В пд, Ше що ще Яд ша І1МШ ба сь лелолеп зіу ожИш душ сш еМЕ за лпіш пі ЕКО лЕ хат. хо хх ях за ях
Віщ тв пі Тай вач бе ти Тв лудї ту Біщ ТІ тв лящ стеми лід пів їІпї СІ Ос овзап оНпашУ їлжЕЖ ї1дйІ зді ІпУ вів 2. ІБш са ша я а а
За Зх я піч Тай шт Тео дж ПЛягк Ті дих шу поем о Вщя Шах о бдх Літ Ті ли -щ-Щїм ОЕМ ЕІ МОУ ЕгшШш Ії зів БЗеїЖ дек вий яв сеї вав кт іє АК зи т ах дл шт ие сх зо божі тота ролючню ОТ пт нн т п а кі бе ли В шо тА Дух Тк чешжи їутбЕ ев діш ді ІПЛЖ о БВ ІїпЕ СУБ Зі БІТ с-щІі важ сві свт ІЛ з Во за
Тік ол Таело Тк Тео ЗлшЗ Ват щи ПЗ бе Ти Фа баЗ ши Шут ух іпж о їух ес їїшЖ ЇшЕф Уші - ЕФ о МЗапо ше Бей леї хі шет кт вих ел п ЕТЕ ВІЛ ши у ше т6іУ т п Тв ШШшяє уж т 3 мк бунт ом т що тд тіж оТошеу Товт Шан Лтд тях інн стіп ШВА ЛЕ Ол ста у ВТО хЕІЩ їІДж ША ї1МйЕК ло БА ЕТ хщті ІП
Б шт же ша шар мощів божих Вошея бета УМюле тає жу СЛатж 115 лхщ о іє ті іх беж сбдшає 7343 ше сей Ві: сою ЗШ ду ШО ЗЕ ім ЗУБ ші діл сшХуь го ж А ЕЕ що жо я вжи ШОК в хо Таж Чит Ши бони Шк Лідії нє тд й зт лим Там пл ят Пент Мк яка су ж Ж ле осв шо хі алпЖ ме АЕО хі ТЕ 15ЖХ хі жит во г тт тих шк ж жа шов шу тв дит ТЕ тіш Жах Шут Шеусту Дшт Та шко Тех бхщ Шах піс Від ше іпш гІТ 118 ії: ЗБЕ БІС кхтжІб вва бе шви Ії втІщ дві хі під ва ше ши ТЕ,
ЖК лх ші ж
Та ровом Тож Бі со вк ет шо Ок аю Твоя Ля, 2, се Товт, «Тож бак ос ад хв ЗО свя ЖЕ пов леж ет лов т ЕТ ОЇ Ж о сАтТЬ УК паї шах ще «пл
М жо ти - - тт - - - - -х жі т- ск т -х тод ти
ІжЖр о Пес Тїв би ті ІБК обецп Бжоу бій пів ІБ Сі Уа о їд ЕБе Ті х ї е
ЕІ каз до
Фе Точтк тла тптавх ФА Туш бух Фо ЇВ я ЩО шо ля СО ТОВ с тен ж - дод ше шву діФ ІЙ свят люта дл се» о міУ вів о УЖ сь УЖ каш жа ла кій тії І
Вих Тел о вВіш Тву пі бесп бас вши Дах Ті слі Тех бВає Ті о бпрех пли вет ред вів ТБ іє дет азс ши Бех Тіз Уді їв Алт Тіз шеш вх
ІВ ЕЕ т каб шо шк 00іх бет бдшиє Ві що фкт, піз о Дшех двух іх Та йше Злш Ппіє Щіш шж ЖІ сні маю тжЕї -»вАВ БІО бу дшеК ЗешШ ті сел сш с» пі ЛІ
БИ вх пів НБіє Ба БІ шт
Воля 4 ек ВИ 8 рю сти ве В ги
ШЕ» БЕБІ
Ота що ЛПорегаєтюо опоозтля лося буд штучна петлашшвнаЕ тт и «От пТют я телят ч«вші пПЕПТИ: хащі Міка Кід,
ОСІ Пулуті птщкцо пезер ох шк 17 ДО зтеуптахеть шиттю в до вдо пилв шої т пл дещо МотглідтсЕвніссть пестейвМ Сл олюдени, жеЕспиессвана ав птІВвяОинНна КлІДУНІУЯ сти ги сит
МК Клео е ЕМ
Дт 3 «асп 8 ет діє Шах Бут дах Від о Шет Бу Мі шо бот Тих бі Тішдо бут о бСею піє
Мет сій бек БІС бех Аів шко Еко ів душ Тр осСух Тіз рус ТЕв осі - е їх чт х д їх їх божа Тож Тож лю юки у поет ик бін ПМ з тоне а Вакня Пжт, туя
Акч Бей Гай їв тп зів бЕх Паб їз Тйх Епае їх АвБлй о Бк ШО ЇКЕ
ТИ ша а тот Щі що Таз Тв Лія т пія Шах Тех о бит Певшо дет ЗХ Б пі ллх їпжЖ важ муж іеЛОКлЛЕ пав о зіш щеї пя вкшо кпЕ Залосжкі пло ам вату ах ж Зх
Тл паї Зхщ Товт тошихо Лав Ж Я що Дощ Товт щен, плн шо Товт дб: лот) шнУужЖ пам осві вже см ШНМ та піж ме їж Іо сАТЬ між інв шк сАТу діт ж шт се деле ше я на С С бТевячи о Тов Фев КТ. Сунитчо Пбнх Ен «ж Люсі Тему Тло то ложок,
Тух ех ТЕ ШО ЖЖ Вже ІМ ЗОВ УвЕ аьшли сві У щи АК Іуда ш кг та ше сі ям Сея М пі бах лі т ств т (тім 011 53) шо Люк му; 2 жк Тк Во Ся Жду - і їж а 118 оса .4лШ Сім о шап піВ МЕ ші М ВЕ влв ІУї ЗвЕ шлю бухту Пл Тео тт стою ни, щу Ві во дя То Тов Топ цк т щАУ Жщш са іс2ЕБ 20Б МК БЕс ЗБЕ віжЖ сеї ем сво се З.п БЇ 23 їх лк, ТІ тд дано де Бде був (тт Шик. бу Ж Тоді Млд о слЕді т що Тлтюо Фр Мт ія АТ ЕТ лЕШ ЕЛЕ ні У БЛОаЄж Ії ЇгЛУ їн опа тстщі з-Бш І.Б лЖ БО
ЗЕ пот т
ОО м йод тошує Тл шле та но ВХ що бан ік я пед бом 7 Тяги Фін но Товх їшуи Зал вжи сіа від бів Так біс іп Ебе ака Зі Тек шжое Ка ба 13 і55 145 - - че х -х же ї з с т - -к яд ож т т
Ето Вуж Бхт бвї ІЇв дви дев Аве Ав оШех Беж вже Уді Іа Бже бо т45 їв з ха її іо ДОМІ Ол. ря та 5 чі БлшФ би тьми бл Па из м ТУ ім о дшст БлшФ Тв У Ти вюІв вав Уві вів Кл ІЩЕ СВ сіл иЕО ззіцй їм зіп о весФовов їх О.Є іжшх С їі
Ти Ши Тих лщі пе пем сім оду Тав Шут о біщі Ще Шк бщ Тай: Ех шви іЖшШшШ іхБ сві Ам нем о Зіп о швВІ ШМ ОкБІШ сщі ЖЕЖ вх дЕЧ іевщц Стів їдп од ї15ИйЗ а їх їз тощо Ж Ват спуляюк йо бли тако Таз Ж Тан ПМ бах біщя тла бус дя пем бек Вей піУу Векп бжт їх Бас ТЕ Шев ЕМе дек УЩїі ТЕ Ббжя бам 15Е тай лі,
МФ -- Бе шкі є я Жим лЛЛязко Тозтщшо їюшто уя Ун ї я Сосх іні ТА нм вм
АввВв отв Вів ех їУюх був Су іш ТМ пів ВБв о Бо Уаї дек Бів бує -й тт елух
А ка ож ж узи д С Туш, Ше дн лож Жоушсх Зоду т. пух бод кв ІТ сх пПьяя, бо Фе Солину ст о фщух Пд тк Я «пт ві т хо ЗХ Уго - Хеитх
ЕШ тЕїш аЕУ тЕЕш сві її - цей осьшмн зві сви їУш ЗІ КЕШ дЕшШ пів ГЕ те, Лоли ди пгт я Ід шОодзУ шоедле в п в т. то т т Ух за пов у д я ХХ че УТ. тео че тож
Тих Ті бе рхо їви: дей їВІ Зву їТхХу БЕ ш ших зі І демо пе Ав вплт дух тя к-щкш ям я ік йШеї Сув ПІБ Бі Вів бе АБИ бко ко Вів Сід їЇук бех ІБ БНе теж стр х к-т
ШВУ ЖОВ Ох сао бат піл бТбвьаи ст слі сті де Тіж 03 я 07341 Товкя ліво То ки; Бл яв Ти ша АТ ЕЛЕ Слід ста їх ше ЛЕ їз330 зам ОО вЕЛлЛЕ 20ШЕ ЕШО Ех зтЕ Ж и5
Здщо бно дл їде ше Єщ ті Жщу бфеу рн йетд ін іш Мі шт щу
Ті Тех Уві АБл дви» Шу і яЖ же їчЖЕ їшЕ СЕ мет І, Бі вва бах тал ле дух я М ЖЖ ашо
Ха Ля сл тн аю ух вк Ук ля бл тк Тх Фів лах тля ВІВ вви іпш о ш-іу Ме КВ ВЕ ІДЕ кова ти ЇБе Тї1а ТБ Сбві туш Бі ищ жі КН их
ОО. і якої ЛЕ ашся! пла о фт бнтн Тщ бут Са тТід Тв о баиє вшум йкху двух бе биту г 71 шАМОБЖО Е ЕТ БУВ КБІшт КпЕ дів їЩщб лет дяк ЗИ Овх втрокшт ха щі
ЗІ до зе де Ж ЖЕ х т хат М ле В тодих і беж й бами сн т пт За тк ке шу Сан Вашу Ві т я У божш с мит їх х ст емо тях
Наш чий пЕш дІіВв Уві дід цей ЇІйлЕш СУуш ЗА КЕ ЗІ це іх ж І:
За її ї-ш
Жахи Тих СЛиж Сем ла бем шиті блю Тов фут лі ша бро Тут лиж УЖ ше іЖю ІЖЮ щі дм т Ап шяХ швМ ше БА спеш Еш БЕлУ т ср Б плед Же Бі
Тошує УТ т ошту Жид о бєто дять Бош Хом ЛУвся Тошує ТП лощшлу Тошту Мох лтдої лифу я
ШЕУ ска ів ж ш лек в лот Лиш пЛШ мем ІПпЖш їм ії де Уа МЕ сут. лотт попух ща шТ5 ЗО
Туух бла біде МУщо тля бики, СТбедує 676 стадо 27 я хо нт дя тя там Жди
Бхо ойеп ваш уві січ Бо Ечх іс бує Пі тів Осбій йеп о стій ши Єву г: Е ї Її 3 Х ст. уд ще шиє с З площ пл
Зх шт Од. Ву п була шу іш шо іх, Ху м ощ Тож. Жоден ж бод вия ТТ о ох н оду чі йлхт Ківш ет йди Шет Чі Ті Тен беп о Уді Там: Таку сті Што ех «щі джиш міш Еш ЕЕ БЕЖО хжа їж і мап оожа Ше ЮТЕ сіб шо АЕВ апа орг 4: 5 жо а яд ше Шу бТвє т Жар Жере Жак ба Пам о блжк о Тім міх Шик СТ ла бхшм ав о жЕштшш їЇпт с1ї1е сет БЕ петї їУШ їлІ їх РУХ ДІ ЕФ свіУ Уа ем ші за: жо
То Щоб Гоше) Ше сблщо Мі 518 ла шдє Тбуеую Піч, Шен бло пі Тяхми де еп жеї Мей ш-шеїІ Су пі нів лів Зеї вл Бо Кшс вів ІВ ІЩЕ ле ах ЛОТ пи ях шо аз те тов Тло де січ лих Жов, 37 пі ЩяЯ добі пт т побу тошка С тв іЖш свв шо Еш сі я піФт біг 330 па ЗО ш ЗІ -Защ шО ЕЦж її ве З кш и
Ф те т т тт т х г - тошк т т т то т-х т
Шшля СВошх т Тк с Ти що Дам 3 тв дк по стаж Тло пт яю шяш о сЬшІ дев ІЛ сш ШУ ЛЬ шеЕш жі Шшем ІУш ІіПпЕЖ СУ ЗАМ ЛОВ ДИТ хшЕ ал їлтае аг
Од. КУ Ул У
Мо Можу В щу лк ле що п а Ж ЛУ кн ТІ тяг тім тТх лою лтш, З ваг сш зош -шІ -шУ ПИШЕ ЗЕ дЕШ :1ПЖ І1ПпшШ ЗВві УЖ їйх їза ТІ ТВі дл ких зах зи жи ЕЛЕ лх
Жак блідо пі Та От Тих Оу Ще Тів лад лик шт дет бах Тихш Ох шк ХА лу шлю шою ше КО шодо лю о ож ж жк ЛЮД Ж хулж ше ше КО Ж дм шен що. ії де вих щі ж Я дно Туш Тож Тому ТО я ди дн шо М янь шт ж зді стій пЕШ СЕ пЕВБ ПІВ УчіІ Від КМЕ Тихо МЕ ска Ж сі що під сам шотіух .їЗ5 жі: щу ше
Ель ТБПшІ ТвпЕ шїЗу Печ Тв ТшЗ Уві ви дім їіп Шах Гея Шх: Уві ї8вї вп їіпж о їЇпЖ І15Г ем 2155 ІЕС ЗВ ЕТ 51 їпошеїг б-ей кт зві дв лоз ж ат ше шовш шу
Яру Може от ту Жук Дн Тк ля Жак ін оду тм тон; нн шт лож ЕФ ОяжО слі ІЧ ЖЕК сект зма нт ЕФ ї10ЖХ їББУЯ ІЙ сш о жЖлЕ ВЕ зах еле ав во птщо т но Те Жде В до уми В що Лех ТТ що лях тт Тх Тощемо Фу «їі 4пЖ о Ешщ МЕМ зву впіД ЗЕ дід їж ва СУБ слі здаш сват ле
ЕЕ: вто ві пкт Фо То дощ реа док от дом, пкт ббіяю Толя бо тт Тоши Тед Спок «щі ше сь БА же шЕХ сю ЕІ УхвІ ЇМ БшЙЬ яБе Уді пеш ІУЖ ті шдг ша вл жу шо ву бен шу Піча дику Тлшо Ті додому бу шу Дал о Шдоє СТлумо Тошох бдром ст
ЕТ АБ ІЇ1пПЕ ЕТ 10 дів СшеЕ КО кут дЕО ох ле 1УЕ ШО СК слі у
ЗЕ що кВ що ВщУу Та щур Ті бро чт щі Ше Бі шк щу Чт шлак Лету 021 тав йяВИ в»еб ж срям же З»ув олій Зеї ів Є Бл ж же ЖЖ шій ді: де шт вій ж ше те г хоп Чем т шк Тл то банні сл т Ше во тк сля пит, ,
Її ЗЕШХх ІЖВ йтц дів Бт о тім Ті. Еко ія лів пів Так сів Уяєю Ов я ат охЕ пд шо ре дме шу
Яд то лот Тл би л ет вве Всем о балу лЛл тюх Тех Мід ля Па тПпж ї13є піш УЖ 38 їж хшо дп ЗЕМ о яшЕТ зі ївБЕ о Ії5ш вів о -уш ле жа БО аЕ5 ал о дошк шо Та В що том лм Бони Вами бод Шен т МТ шу т я ЖЕ Ел ШВА ті ІМ хз су лу ЕТ ат шах шдджш ува О»пш ле іш
БО ше Фй тлкнж Зах Шщнм БЖХ до Шон пла ТУ Дах ут. ПЗ цип Тву Шаду БМід плчх Вів тях т Уві шЕ її са ж шо с ву ЗІпЖ ОаеІ кшїс ау пяМ сшЇ пів о саАУ пів І1ЛЕ - сет ж
І М -ш5 п я вх тля З тлі, «о Зк То пу со овх РК З ош Тон Ж од.
Ме І я хів Ма Іі ПІ дж -і Бай УВА пі КУ тах вів Гео ТІ
ВО ВЕ ТЕ
«їй» сту т
Зах шля сдЕТЗ ОВ
СПЕ ОВІ 0 Пресв плієстжшуб и сша штучна плідна пллтх кон яти жа мана
СЯ Басділовність пеніитайії не Ед мати пилу шен амтпивотвдна на плузщіичмй шов мшеселадсвНОІстТЬ проте вт маВвИиМм СУК УвІіщЬ я Вот нНа Б ТобЕешИМНІ ект яву СНИ сок В - МИ
ЛЕМ НА сл МУ МОД аю ТЕМ У хи д
Мет (ін Шб7ш (іх Ти бе Тест о Тв Бра о Ту Уві бів Тїшо То Тв піс их кі ШЕ ЛУ шив ше ШОЮ 30. а - МЕ шсжЖУ Уві і шов іє шЛУ о сх У ї т ож ря уд 3 сто тав Лю те 1 о дак Жакет Лут люка бсет лящ Ві пів ха тай Оу шжаХл о сом пЗЖ о ЗЕ тім ож ДАЕ КУ ета сь са сок ніх
В ша а лою стТоняшо тА Лтд Тиша дово дя 7 дует УТ дрон а Пед її М ОО сід ХАІ шо сля спец оваВ між свт ва ж сблІМм сть Пец шЖде зе за ав пПоау тяжю лід ту Пат Толкщо ПП ме 0343 Мау Мих шу; Б шо Де Фо Вухо 7 жаУ 1іУШ діє ШТ ЩЕ ШУ жі ЗА КЕ хи АБ хьш лЕш ле ЕЙ її
ЕЙ ве Еш пу бек сив ді тлі шо бут ТУ пі пли тіш тку Фе: длм Шут Від Мі мжАУу зшх ЇВ хЖі 118 БвзЕщш ІП: зіТт жій їзіБ І:1Пт БІГ хіх КІС лід пі шХх тр ТЕ щІ
Фще слі Вже сті Тье Ттіш о Бщх ба дшя ВіщшоФщаи Тоді Том ТЗ сті Вам ше сам йпшш Ода їІБЕ її: вБО -ле дей вів шви Бей івжшж о ідевозій ВМ щ-Е чи о же вежу Ж
Ясла тн тм дХам бшиу м я ню дк об тк т, ха КМ жд тд тя я ІМЕЖ хіх Її лЕш ІїМЛЕ сі У СЕ ЖЖ ЇІМЕЖ да АТ сва їде ШК А
Ід зпа ії2 дих Тел о ллАЇ Бет ія ліц: ів тях піс піхйх па Бл Ма Тесу Шхл пл ц
ЗАЖІх їн слваА 2 сх Іл свя пів ілйт Ба б5Ап о км вЕЧ4 ва ШЕ БЕ са
З їЗг зе її: їм ія
Тоні боксу Тео бинт Тим Ті Тв Ше па шу Ду бпаем бує Та піс ЗУ ша ЕЕ ШОСЕ шт 1УШ біт ІіМЛЕ ле с» МЕР ож АБ БЕ іш ЗА вЕЮ чт кот «кт ж їіжт і-иш тихе Ббет Віщш аї хів Тай тьми Пен піч биз»з зі; ТнУу діє ев о Тви Тке пу спяЮ вів ві йпіш цей оіїпе о с»тЕ Зам ЕВ ЗІ І10пїЇ ЗІ впЕюЮ о ІпЖ ЇДЕ та їЕг У зд
Мох аю Ох КАСАХ леж тож лткю лбх пою Тож Тк лю Ток Як лук Пекун Тож
ІшЖЖ їм 1 ШТ Уді ЗЕ еВТУ зай ОЗЖЖш ад Кт УВА НЕ ЖИ ож шу і5Е Її їх пл т дод Ля Вшує Ваш хом Твоя То Промо пт дя Боня Лола пе кн стук з ХідохУ Лич» У те но Ти Та -- щі ОВ от ТІ шт хисту --Ммх мам Еш сш дЕШ дж Еш БЕ сем іпйпЕ соді ЕМ б 1015 БЖЕтоОвАІТУ хх под зи я і іш іш
Хще Воші Ла Фр бек о Таєм о ЛТдєш о блгш 03 б спін В Трето ЛЕ Жар тії а-тІ ш БЕ ЗБЕ леш ЇШУуї щмув оУув защ їішЕш Сай овамй ко ча лег А ча НЯ тих ле шля КЕ х
Фомсеж о щомоє Жде щу. Щрку: 77щ 1 Ловем Тоавчх де лЛтдої това Тіз (лу Шєт бст Від ешеж ьЕЩ БЕ Еш КЕ Ба :1ПЕ їі ее зАБІ сущі ши ВУЖ -АУ Кущ лиш під вчи тії лову ща шоїсхЕ км
Шосте тд бо ен Тв Би як Пеету СПеяя Шут М до ст сту Пен Хот
ІЗ ІїІйжш дів Ел КІЛ сеееєб ваз їЇМмІ КЕІт Її дО й ска У А МО ШЕ ШО те зап лк тії зад. ка ш- яю бує бує Лв б Міс 513 513 бах оби Пууу ру 5 шо сля ум ТУ бант
ЯУжМи ш.ьжм .ПЕ ЗеУЕ МІЖ пів вів їВвЕ АБ БІС ІІІ вІіБ -РрОЇМЕ КлЕ ЗШ чат дж шт
КК шоВш «ж
Тр ла ще сля тус лима. сім (т Шрем СТУ сбті- сії Ти бьш Тіщо пт кмтлжт ті лосАМ 1 Мт ЕЛЕ (бл ів би Три сп осзій і-й ЕББе Іф рЕш дп т сег ел кю ог т іо х Тоді шу ше ол. шт ко ну Хот «тОЖож Чо, я - Тс
Ак о Іів ТВ Сі Беж ВЕ ьо їм ПУ ще Е Ттх ші А ЗУ -е І У Вів пів дей ет зай Ед пет лузі Од
Щек В достівох сллаю Тиша дику бе Тім тю іш Ти Вл тло ть ЛІ тає
ЖІ ЗАВ ІЙЕ ска їм ось М Аш Ж їПш йпЖ о хсхва 01ПпШш лів ші ПЕ сві ЗУ вх тв тт шо От Кована площ о їх: Тадєї Фен Тузжшо Піх Тажує Ж Бо лю дя там сл Бош Же ті за ва Ше Еш СОУ Кіт їУш їз Їм ше Би пяЕлосшЕ пЕХх КшО спї1Е п І щі шли
М шо шах ша пли ща То пе тою лу тя Тощтх СТкує бах 073: држтт їжа тк ті т Ват
ШХ же ШУ о льВф сь хо ШЛЬЖ Шев й уж зЗіМ БшШш ІЙ 05 ато АБ ли жк поз яко ВХ УОЖот
Ток тЯамо Таям о Туоште бен Похему ЛР З б Важ (тім ща тод ше ЛИщло Фуко бач впжх імптІ І1ІУЖ ії ї1ШшБ 15 УЖО мл оАЖМм ЗіК ДАЕ ПяЕщЩ сш сві ЗЕ ше дат тхд ел ам пове ЗУ бе Ти плн о Тшк дош бут Ву беж божу Тк лЛощуї Шен ЛІ бі о 5дя Тіщ
ВУЖ УА ЗА БЖ НЕ саБІ: сУуБу аб: спжОщ апжЖ о шеМ БІ зві гіЛЕ авт да
ЕЕ зЕйЙ те
ШІ шо М тем Х трдатдя броня З -к -у т - пит т -ох бота т пт уст сх ще шт їх У Ощ так лим фе щі Тв лі шУ тм пуд
Бк: Втс бзп Бас ЇІБйЕ ЇйЕ Би ІїУуї Сі су іх ЇІБЕ сій дей ШЕ Уві
МН ОО Е МУ ж ше М
Фк То бони Моно Мщу. ШДх- ЛІдо ббйую о Тоді боту ло Товлу Пягуо й то Лілея жк Уві Ак Ахщ о бет вВБрорхо Уві ТБх обер бзоп хві Бей їум сід Еко ах що шЕ ІН ож дош от их пшатто Ві до дит тілу ТІ Фшеко Ше Том В мо бі Люмт. Татя бюкую Вл сті хі ст Ах -аеш вів КІТ іп 10 хвІ КЕШ цех: вжв іп БЕЗ :ІчЖ ДЕ по ві т зп хо де аа Б зії
Х щу лоша Тоштя дшею стляшо Ця що й що ді дм пат лет плоду лети авт шжМм дБ їв шешЖ СУушж паьБолЕеВв ово ше І кт свід вл АК ІЧ отих лох. Можу шою сао яти
Яд т пло т ве сти Лк пИш шо б М Док м ст т тиша ЛЕ де ти па - У Три ДИВ, 1 і Фо їх тях те Я .
ЕшХе їіЩОо вБпе хі лем сві ІЩФ1ЮЬЖШ шщце сії Зоато шеш ІїБЕ ЗІБ зіб Се Бле сх ОМ ж
Ко У чо х тіж т М т т дтя о Ж з 2 ех шодокто ст хм ут т - іо лани Вощох подо тою лІщ Я Бит брих ОН по Там Маджо ст пі Від
Між гшЩ дБ ІБ 205 ЮЖ З лБТ ЛОТ шщжЖш ЗАМ шжЖЕш 1УЖ сш ЗУЖ АХ ад ат дже пт пу шою У що ща Жду Тло Ля ПТ хо Лошахо Мод те фею Ті їхщ твуУ Бл то лу
Ні Вп Бех Акїа ТБ оті ей Азт Аку ТЕх ТЕІ Уві ТБ ЗіБ Іі ТйхЕ
Зв ям З: «85 якщо т тущло ти т т т т - пох щш ш т. - до - щої бах лищЯ п тишу Жєдо Сх б'яхжо ТЗ що ще то шле беж До вишу «ща шУш зві жі сш М КЕШ шУуБ БЕЖ їШшШ їж ше ся см сЬБХМ леж ливу шоці ХЕ
Зло ло чих о т пт з от та І ять Ти т стю бен пт І пе. ті пім пах «кт «ух ї щі Тв Таки з че та Шити т к жо 1485 А щ о дпЕД ІМ Ж БЮ тів сві ІіпЖ сій ІМмЕІ ЗУБ 05 КУ: о щі пі х вт щІж дії ще я ж пкт плат о бБдт лі м фу яги Лошії Лан Тан Туш Вс бік бан Тодило ШФршомо лЕщо З ш- ах вежі: їж ї1ЛХ їМЕ п ІТ її з Фа вЕБИЕ АБТЖТ слітТт ложе я шжешЖ жа що путі щих
МАХ сих Фадоте
Фон Туя, Мем Тож Тож Тошує дя бот ТЗ Меч мк Ллшо Ташже Ті Тиша Лов
Мат их хи Там ік Тавуї Шеми бощх їх Б их : Тшту Тік т ол чаш БЕ дАЖЩ їі ЩЧ Зій сем їшвЖ ВЛ ЗІіщЖ ват о дтІш 108 се ї5Е Сб ї185
ШЩіднє СбЖд твх о бета фошім СТЬ ст нт. Теля (узі: бю сі г То піт що
ЖІ ща ї10ЛХ жа сем 8 ІЛЖ зі ШЕ Ж о скіМм СощЕ слі 2 хіт. вт п Щи шЕБ щі ше шщ ЕЛЮФІ. шшОЄ
Жан таж ик Тов Ложка бумум о бач феод Поч ЛІщ ої тім То бле ЗІ тує Таж чаш лам сшЕ пі УЖ лЕш сшеЕ АБО РЕ Уві імпЕІ са В за ї1лЛЕ УЮ шт шт дк шов ЧНУ ТЕ пт ле Фени Шоту Шоу Літ ті до т ду ах фени Фени Вошу; Лошех Фін Тотем Дах
ША МО жЖжт шаф Ії1лХ кжс ії5ж її: БМ ЕЖО ЕЕ БІ псБ(р ложе ЩЕ Еш швЕ с ша те шу У щодня 0 Тов Те т дя «ав ЖЕ шо одн шо Шеошеоя ш ЯФлодян Фк Тоня пі жо зивть ісвб зт їшнНен шеї Су пл сзеїт дав ет дЕм жо де КЕ
ЗЕ шо ОВ ші лю ших Теж Тк три шу сю слвиж тТашчю Вт тік Мі шо бр піт пущі -Ш-ше2їїх Ї1щЕЖ вах ІБ із ії БИ ЗіІУ 2 ШЕ МХ ЗЕ сліт МІЖ 2бБЕЖ іт ода ша ЗЕ шу ща ня до
Іа Ре ІХі- бек Муз Іі ТпІ йЗеї бжв дж) вжп слі Афін ТУЖ Аів сиг
ІВ щу Ж ваш таз ля пд бат тод ВВ т я ому лк шу ше лтщо т атшо шум жПпзв о жі шеї йвт Мел о вів Їпх ті АЕЩБ вел ЗЕЙ Б дів ЗщІі ля БТ «ах Бо ши
Ті Ше Саї1 ща Щдиу піс бе о би Дід о шМИ біл бш ик (ті Ти дих їїіжш шях хаї сш Зег щі Аж ШЕ АВ о вЕшЄ САУ шЕЕ шеХ біл п ше ви ее йти хі бек МІ тіяк ВХ ле ті тд Тл стул: Мщдоо тя лів шк г Віа -іж ськ лі МУ са ЗА дішФ з зд ЗА Мат Бех УВІ Еш ста ві ші ше ач
Тех Ма ша
І
«вій є жи ШК сШАЕих ЖЕ «ТІ»: БЕІ ща шщшжучна лплтпадтвнасте хи сі яеттмит бло Млвнана єн, тт, жо ожежтри я . посту й жи ІТТ УМХ пдв я св ксжектву т я нок роти палю ких сІВЕе» пошпівОовНІіСтТЬ протвіну СЕАСОВАМІ людину, експраствана не поввдшині статти ПН пешВеЄ мл і
БЛЕІУНАХ сою ее дк те ДІЇ для ї зо
Мет сія ще Т-єч Чу МІ ето ІТ Щлщшо бух Мат вт ві фо СЛат сі у пет зі пів інн Зеї мів шо ії піз вІщч Заві ВІЧчЧ УВІ КЕФ .1ТП о зіх ї 5 12 ів пі лшч Тато Тщея Твх Мід дах шт Тел Тює БПршо Тем о бет лікоа Пбжхт тщж іїАшм мем Ббеб вл ЇЇ лів леї й Бе іп кщлЕ ШОВ вл шо КЕщШО ОБ Е
Ж. Ж ту У м п Он же ЛИХ д - Журн пт жк праг тт ТЗ зу кт г» лю
Іпх Він блілй їБесб ТпЕ ЇВ о шій Бех Мет Бкс Бе дет Укі Віношів сіє за 5 а
Тлхшо пл ах лхщЯ Тов тошия Тема ЛВ ще дя Талу дит 073 Толя па т сх
УЖ іїА М шва веб о сшвчУ сБеб са па ЕХ ШЕ КЕ О.Т їх Беж ЕЛЕ 350 що ЖЕ я
Ме шок У бан ау баня лам т г лк Ну ння що т що ян пт тт с-
Кт с-жЕ АЖ УЮ ШІ жЖ За іш ня За м сх У ва: внЖшЯ сет дія Уа хЕ тил те ді
БЕ Тш ТЕ ше піс Тек Вів ТІ піз Так о пйієб Пів ДЗ тре о Дхт піс Вус бі: Хм» Яву і ТУїх Вів ТЕ сі Тахо сій бів Аза ТБт Бо сліУ Ріо Вів ЯБИ бех зе з ЗЕ связи я Ан М шу Лют Ху ТО з Ж т чтотодх т, СТ ж т ма
МА АЕ сЛлО шт їі ІК жо АЕШК ав леж еВ ї108б дов о сгІХм БТ жд хт зе, зт
Ж ї1сСд її тют лін» бля дет тв шШбш Фне Фу ТВух о Талу 4 Чі 1 тус Ше пет іх сбхіХМ яп дЕШш ЇпПЕ зі кКЦце іш їмжЖ мец ошіатл ЗІ шїе шу ле лі 135 їЗи 15 її їжу іш жо Жодні т ит ж Моя птн тт т п шодо лин нт те
МЖК жк хьвІ лам св І ШІМХЛЕ сті ЗАТ ж пої та ї1УШ во ал шви опи ота ой їжа їх 14 бе тн бик Ши Тіш о Сву дах Ви» бле Же З од бен лящ (тлі щу б чт клад меж БІС лоеш іє еу шеЕ АБИ ляТ Леш БТ ЕТО ежщІ сі вв ОЇ 145 їБО і5Е іо
За Віз ат від З ти бттш піт Бе пли тих дія дет откх пах тую зар впів хві щі: кт ІПЖ СУ міщ БІ чіп 12ї сіхХ дав о :БЕ їм УЮ 1 зх 1ЗЕ ад віх АТ те пу Фалло шу нн дод ти м Та Дод Піни ми ті ТТ ух неви ії: ЖБ дає дБ ЗТ сім ше Е ше КЕ Зв ОЗшжЕ ЕВ ЗЕ це осі їде тд злух їли ВЗ то ту шко пе іх пе Мк Па Туш бібх Та Туовду ще Мві1 тТвє ет щу
Мед ошжях п зт до о яЕФ І1ЙЛЖ ей їмпл о шейц цей ше ді Мп НЕ АБИ ше злїг виш. іл УМ ШОЕ
Х шк лиж лою і бер так їй. ул лю Тлд стат В бут лам йлдо ит
Би о ї1пйжХ ліУ Ж ІЩЕ Зел ОуВ ал зд ЗАТ ЗЕМ КУшШ що шешЖ БіжЖж вт ж; пЗптЕ пет
А іх ше
Ж ях Фе ла тя тож Маяк пвх Фени Тк, пуд щи пе
Акт БЕХ дев Ех Узі ІБК дей бат Уві ТБ їУшх 5іУ Бте йБЕ ЇвЕ рЕс т в ти т тп как ОД кот ее порою СТ що Федосю Ліюнту Фошеню божу ру ббяду Тез Вус кт стілю Від дет оті Жах їзЗзЖ дія лет хмшт ше лез їх іш аУух вЕУЩ РІС Зі дід вп 2020 шевЕ ко КМ я
Ж Жде сію ПЛяг Бшо Вдо би шен, Пенн 5 Тл ок Жду сту т дах ши се Су їУш вав о піЖж Шеш вШЖМИ КЕО ЕшОт во сім їУуЄ пвяж о оїшжнв оце 25о зе 272 тіше діє Тву тТюьш лі піз Жах Тем палю Тл тебя ка тТіш Пк пет
Ася вел ні ШКО ЕМе сват бай шеш ЗпЖ сало ім БЗеЗ о Еле доє ЕЕО воВг -д ст тд я-о ж «У «я тів ТБх Уві Али Аз Яйву ЗІЇУ Жех Тут ТБ Су Ніж Бін авма Авт Жах чн ТЕ, шт шу Еш шу луш стіж іх, ство бод Доу Три бік лтшл о Тед Тих ті Ті о лтаї Теми лах жа І1ЩЖ -і У СОУ я сл ЗЗЖх 1лЛЕ Зжша ИдВ сПпЖ пс 318 зд ІПЖ сБ
ЗЕ зі ЗІ зго тще Ша Пл Ід Я ВХ до тв б ТЛ ж що тля шо є Туощо же ту ід шех ЕЖт хді сі вів іш КЕЛЩОЗіЙй їв ГУ вів лат ДУБ Їж ІМЛЕ пд З шле
Фо ех жу тя тією іх пет Тлх бе о бши Чаї дж Те; тю ев о Шшя ТвВу ще бат хі ї1пйЇ ті Ваш о пуУуш З жшеЖ сві вЕХ Це іїмжЖ МЗУужЖ я ІЇ1ПЕЖ пил во зд «вив дл рак же яд «я тт піц ті дах Ті о пе Ти бу па Того шу Літ Фдє Толі Пмсу Яд таж А дів сег де ж Шу ля ЕТ Су ВИ га ше т іл шт лаеЕ ко ЖЕ
Здди піц; Бущ М. Тихе Твої б-шми пі» піс пекм Тех ТУ Тед Шу ТТ Ваех
Зах піц ха Маб був фей: бек тіп Січ дал ТЕХ ЇВ Бас яву Іі дев дл лет вод
І іш ши
Тут ліщо Тнщо божу ся шу Луї що ст Ифею Теза Тячев 0 що буди жклошж та ШОУ ЗШ сш ЕМ сашкотьУ їімжш УЖ Іф УЖ -Ую сті кхмжЖ ЕК ше шт лад хи
Зх ж доп зи бус тя ее от бод тт лим вн Шу т Збрито Тодлтх бод ЛАЩ бут Лету кЕЖтТ дає ої 1 сет ік шщВЕ дЕЖЕЮ Кут д.д Бе в зап шва сок ІМ
ОБ 10 ЗІ5 тем Ві Тв тео лу спіл блю іх: Талу Ше ет іх пліш Тід Бі шо пі т-Е йі Ожю Кисть ім лат мі ше дшеК шт ті пов дІж еВ осі лот ово, осв
Зх З ал тя тд тлі сті: п тд тд тод ла Бі тд тло тд т тд тих їі хжі ді зЗІУ сша жі ІЖ ше Уві міш Шелл псів щі Уді піЖ ШІ пот, дат дж
ЯЕОт ОД ах тлщобахшо ШлЛюю Тих Шев ТП лає Тл Ти біб Щелх бів ау щує ім дих ваАВв'СмЕ пж пшжУ пав о Епе о с-ІіУ му Їй 5Зі виш пів сшеК яв о сшМ лих хо ща Мощ
Яд Зах я х, т то 2 пкт т Поля, «Дом ги «ою о: Ще щшо лю ях Ту м ля
Аше о бен їБ»х Ус НІВ Буш БЕто Зах Уа Зах ви Пів ЖК бай Авв о пів
ЗЕ ай ат що
Хеху Вп дво хш Шкло ву фс Моро дей піч бл те Ту б ТВУ ТЛвля жеї вет Зав БЕ Еш МВТ ШяЖ вл о А я за її ЗЕ т їй швля азш а жа
Мошех біо 013 ОХ шт у т ни, ун ту бу ля дм Мт я дм пінку ща
ЗЕ жа лам хв ск ІХ о свт шт Ї1лЛЕ зам ЗК 8пш ОЇ лі се Кт леЕ
Бе Іа БІЛЬ
Ту Твк Вів Тву пІім Тіш тів тех бод слі да т Тдхш їх ж ап ав ІЛ слі дів іде 0 Дш ВХ бі жи ШВАХ ста тч т тет щі до ше жо сті п сшїім їі сшЕш» о ВЕ тЕійт Ми шивсціче ис жати сшЕЕ» ДШМ ЕЕ
Олі Посол туту сеть ви отих жі важ воду зкшжсвхсуєтйх Вт дев МмстІліштаЕміїшть вишів льної ділянжи важиш т лаЕнщюКВ плрихя о «Я 7 пій тіш пі Тееч Чаї пі ШЖех піЄє Бж-ит- піч Пай Блушо Те Филь лся 1 іАМ дж світ ів. хв схіт лет ше вт Заш Бей ву їв кКшжшШ сте у І ї К М ї
ЛУ тт т Тов: я Флеш бю То: п що Слово ббадяю лом ви тю м ТМ, я яд таж Уха уж до ше шу ша ее» ше А Уш ІІ гПа ЇЙ :ПХ ІБ ет те хх я шж 3 піу й ех ТшІт ЗаЮ Бу тій Бів Бо біт бу біс їва Буш Тв оМет з за з пі пла ті о бет Тюле бЧ7-нягу ри сту лЛущо Лету тю Ту Від бет дощу; Зх -іУ І1ЖЮБ 218 щегпоО б Ії1УШ ше ЗаУ БА Ж 2пЖ Ії між сю ЛІ ХЕ ш 2 С ох ЗЕ Я пд Ток бе рю, Тло Тек их боті бі Фа 5 шо Федя том Хто яд їв ЗіШш дич ЕЕ лі кМдж лшежЖ еп озіц Їм дех вбоаш лет ІЇ1ЙХ вІіВ ІК
ЕЕ тла ТЕ щи
ТтшУу пі3ж ті о пем о бщуУ Тв Тихе бат п балу Ткт Щі Же Ся ТУ стек
ШшжМ сам ої118 деп о лвт ї1ей пит в»мй ЗМ ва їІйЖЕ лів Ії1БЕ ІЕЕ вів Оу пЕ ил кое
Мис як жо тож Фо ун ПТ ко р Фе Оп «тло Жожаяхю Л укю, жи пін. вах І-ї т нам, «ля луки я АЖ Ж слі У В ТЬ ЖЖ с-м А ЕШш іш ЕФ хМмЕ ЕВ хі ї:ШЇ: Бех І:ІБЖ зт з, зах
Ж І 15 іє обліюу Люк бл Же Ух бори ще -МУЖ 4иш о іїімтжї Ві їпЕ сві шен Зеш чув чт іш я «Еш Є сша АСЕ
ЕЕ» ОВЕТ ак. Жуля тт кс: шк шцхв пити Іе «МД лох плине сш ДОМЕН
КЕ Ти ря пис хи щі шт фопоцкхя дютитетиї ппзєучтов жан
ЧІ псбплішдожнастть ваші вСвВльвІї ділянкМ легкЕткс паниюгта плюса: «апп В сі. ті чі лшю бік о лі» вх Шк Ві Тшм Мат Віа Щі бщше бет ля
Ззаш іде кі Шшещ о ЇлЕ сім сежЖ вЕЕшОо ва зап оїїеїт вів ВЗів дж КЕ іх ії - їх ії
Штлаг Ля що тру т шо ую ся щу дл шт Дод ту то шен дум щу шия шу щі 2ПпЖ шІіш о шлЕ -Уш сеї Ущі дшеш ше ПЕ їж о лаЕш ше пЕХ шл се ШЕ башт Ле ШащоТухо бек о сіу піт Тим Ду ба Ті бще Шо Тдуш Ше бух вужі ше пав Еш ЕМ без са У пе са Їм о шжш Бл шу Еш БЕ
Тл 7 ОТ лю рює доми т тот он тю у «бл ті Ух Ху тт ВУ Ім, т сб їіш- ТУух пу ТБ дах БЕ цес о Аів Шеу СХ ш чаш Еш В Ещ Ева се: п ще г ж ШЕ ко йлах Шан лах ШЩшчу слу Ума Ж Лех фу СТ ті тА Хдож о Фе М, пля шу шежЖ Зі ЕЕ ІА ШЕ пек їЖ вх іп їпйїІ їде ше леї дей са ша ту тд ши ок КТ лочт Тс пот, Щолощ ли я ую лю дет слот ри. СТ ут Фадем що тує ет під о шаАй Ж гів ва їй ЖЕ УЖ Му сат стій ЇїХш ЕЕ Що ЕЧЕ БЕХ ж ее ЗЕ тошії Тени бан сли ол до г щу Туш Жах тТоаши Титш шец ів шля Зіш між сам ІПЛЕ УЖ вві зал Бец пу и їх «віп в сша 3 чаша ЕКІ п пхіхщ тих ке шк шцхв пити Іе «ЕД я сх ятки
Еш ДОМЕН але ик ті жив и жовту збуті тя жовгзи ле щура п шоусстю щ щих жо пШлпадовНнНістЕ БаДріВТЕлЬНОтїІ БІЛЕ БЕЖВОТО ЛШ до «Дю пла бл пл лоша іа бі вх пі Пет блю Тест о Зщ бТЛуск Ффусо пі Ма -Ащ ЕІ ЗзІТ ше Зігт бімл шеш сбхіМ БІ Зп Бе ех ЗУБ о кто Сію нів ії - їх ії
Шан ТІ тиж Хе о Ше о «Тяля Тих В до дн т кю тру плн тв Вот ЄЮ шящо ол шУЕ Мет пе: сш шУЕ спа ж ха У ЗМшШ ПЖ Клш Б и шпє й ТЕ їЕ
ТУух Мет беп ТІВ Уві Ак о сбію Шеї Ні зі Буз Беж Без осі тр тТіє -Е хг х 2. дж чо я
Пледи т лу п пул дошоех М В бебі фшжуЇ вне Вшх боутит топ лд. Те жхаіу вжш їїе пе шо Суш яЕєг Зо вело їм АЕС їі ВЕК ВУЩ ОО Цчж Кл п ще г ж ШЕ ко тощо бщуу Тоущо Бл тво бшух Лу лтщ бод Та бід о Душу шт УОрмя 7лю Лаухх їв омЕШ БУ мів шлйЕЖ СБУ ІМЛЖ сві вне оду цех тлштї лем о їв са У
Кая то ТЕ ши дно сл Щут Ж Лови Лу Тов спПлаи бле ЄЛщшеє Зі т тіж бик слу
Мет шуб ЕБе ду що Ж ше ЛЕ ДНЮ ха жов дЕХ сі 24 УЮ ЕЛ У ж 35 ЗЕ
Вл уст Жду сл тягу (11 што Лінн ла бод пбоулу сТятме Те За сті пт від вхх Жах бі ЖУК Бі деп Ту Уві ЕБае зло Тут Тжшв ім сіті вів нЕЩ СВЕ ЗІ ЕК сім АБО ВУЄ Зві Киев о ЗЕ УЖ ІБ сш смолі їі їх їм тв Тіло Ша стр 7аї дв Саду пл о зїідж жпле ї1пмЕ са шеЕ ЛЕ че
Ес сла яп че о «лю рт ше їс шику тот шо жі «ЕІ Мдшв ши жціЕ с
ШЕ ЛИ Їх «ЕРі» ДОМЕН «сля Плетпілтпвшієлть шасі вати шотя лм пет пансщт зе
Св моспашовнастив БашЕІВшелевНитІ шапянЕУ паегттшстгт пани пи само Еш дшуї Чаї ія Мат ль пл тьми Шохоу Вдо ВЗ Твея Шах Від ЖдвУ Тш 3 вва Уві зіт ме ІМПЕ сім їпЕ о яжшО щЕх дід Пей схаГг віЖ Зет сей у ч 2 чх хК ї х їх ло тд болта кв ле ТО, их «бек ш Ж мо бі а т Фешки СТО , хіх пд доти я дкх чді ЩЕ Іде бу Ше ЕФ їх о Жем СІіп ви ідє вл ІАЕ за сЕ роя шо ш Ж талу Бе Ля Тім т пл лев бух Ват іє те лу Тв Тим тай ті
Шпецї авт Ії1ЖЕ Ії1УЖ ім зій ШУ вІШЗО ВЕФ Бі ІМ Уві СВ іс се сс
ЗЕ хо з В ча - чжож бтедя Ода бони Федя лк тт п я шщчи сл Ущ З дит Федр по с - Спок іУуш ІУш сжщ шеш ду їБИи Шецщ ше Па Уа Ес леж лзжщ шле бЗех зі шим шо ще їеї сі Жвш сі ІПІ й ТУШ Швжх Бец Тих Тіз беї бЕлЛ ос свій Бшт - -х че що кох БУ З и
Пул яя ох тт в ш лю лях шШд, суч І пт 3 ат ля тов жу ен мМ о хежЖт діяв «АВ ІМ І УЖЕ д'є: ЗУ ха ЦЮ ЗАТ ті У сиві СПЕ ВА ЖЕО Ж пе щх до.
ШЕ я тк
Фо Олшо бтл яю ст тая тво бсшо Ток пл жтшотяю
Тв о бвЕ лі ШІС піз ТВ Беж Тв Зі Ті85 Бех
ВІ ЕМмяЕ АХ ІС І їЩЦХ Буш Ії сбхіц фа Шо
Іо 154 ер от 1х шле 1 и я ча х 11: тшЇЇМ о ЕЕ «ЛЕ Мк що дати і 7шЕЕмо Миє пшивоснзідяе сю
ФЕВЕ» ДОМЕБ
СП Петі тппвшсїсть «ж атідапимої піжами шщожжестт павомта вл чтше М Бослівсвниістть ЕЖшІАЛельної пІпЕМЕЙ БаЖжЕОгІ ланвшЕтга лю: етапи» 1 пли лі літ Та-д пі піб бах піс бет ш3ни Твевуи щі Теж Фут пл БІ.
ШАЦ чі скат і світ ій Зеш Зі кЖт БіЙя дмвц Уві їв ЕІ Ам ВІВ ї т їх дО де що боже тла тях тля под оо де МУ нм Ля уд яю т бле
ЗІ -вла О»Ууш дів ї1УЖ ОВ ШШуУш мів От ші ІК ББЖ ла ПЕ кю Ух
З зЕ жи що пе тиху Плащ Тиха сллм бе Ще ж ді Тло Ша Ту пртжі я тіш пів сптше ЗЕ шу са ШУ лам шт Мі ау ШУЖж дя сш ІЙ 05 іс
ЗЕ Ки 2 плас Вашу Ті щур биту шу т піс щас Тк дає блю беж спі Ве ден
Ам аВІ пе ХХ кт вЕЩШ ЗЕ Зі зАш жМмЕЖ СжІ УК ям літ шля ле шох зе й тя Зв Тягова Тех ЛУ пд Баш Ток де да Шдя ТвуУу Біщш плати шт Сі ДУ вів ІБЕ Їевєж ІВ Зі дже їУуБ леї ву леЕш ЇІВпУу вів іїхЕ дЕ Зп те ші да БЕ г м
Же ста Тодшею Мн фошен Товт спе до 14 балу сш площ слкщо СТ сах стєд
ЖЖ АЛЛУ ішЕУ сш ЖЖ ї1еб :пжЖ о веїг жі зЗаюЮ шнї сад Уві І1УЖ Її Му ше чи о же вежу Ж
Фідія бух таня шу ЛИН Що шу бно М жодну т М ха лу де леж елуш шлю виш в'чМма се Лех о Жля тід авт ш Ж АС сім сао ть ШК 100 155 1ї5 луш троє пл шах Мі хе-а .ИЖ сВвА де лів
З її: стелях сш й спек орту 17 чаш 14: «от ит
Зенон ж тега Ми шавшЦіЙВ сл шо ЕЛИ Їх «ло порту зекише є ЯЦИК ІШАТІ. у щих гот т летимо ет щоті ді срг ри і ятдлМли препа За ртещо тут зд МмтпттліщштвніІСсШв БВЕеЦЮІЖТЕЛЬьНОЇ ДІЛЯН лЛЕБЕШІС ЛЕНШЕЕВ ЛЬ
«аю 8 ли ж в Кт дл і, те Жах пот Ол Хор ло ух ст ня
Ах її: Сі Ме ТЕЖ Пій беж БЕо Дів Хе Тем пів Кеї бах ех іу я тФ уг :ї ї - с їх
Тьжех бик В ою т4п се поож «ба уже Ббелячих. Ж ож лик Ток дар лиш са ту т ну ськ вах ЇВт ХІв Хаїх У Ууш Вл БішЖ БЕЖ ЗАЙ де щі пЕЕЖ ЗіБ сії
БИ ТЕ г
Моя туш Жбодуєя ТщшО шо т шу Лу Фон Жов ш Ти 0 т тя ну Тон сі їпйУ БУ ївТА ша Пів ТУ БОоІУЕ ії зій УББ ЕЕ Зам саіпоОКЕО вт
КУ с ах пу Бей би Тіз їух Ніж дія Шеї Бвп ій Сів ТБЕ Сі Зі Ехо Вів -щ ва ее вх Ба шех січ шех сіу бек Бі дів А ЖЕ ТБж Гбец твЕ 1-8 ВЕБ т ТЕ шо
Фет бл їх бл дає вив вл Від Томмі Теж о Фіеу бю Тивхї т ве М хг
БчІш Уаї ПЕ Зі дес Ве Уві Вів бен ТУх ТУух Ск Бво сій вк дк а БІВ ЗЕ жожоба екю 7 м ША (ткя їх (тло Лео Тони Лише пок Ло ж лок -мув мів шт МУ І Бх о Епе сі доні У ііу МЛ Буд шяеб о скі А др о шожЕ зах ле ах о 125 її сх чол ша АВ сх жа кто ВО Яоянос шли тлвт чаш ЕКІ сут пу кт очкаех «ВИД дО кути 00 Тит пт тик т доли шій м Ол ту уолежлуєтуч пу штутт ан кош пуутпідтшнісстть ваш ЕСВЛлЛЬНІЇї ДділяВКУ: БІЖЕОПЕО лаНТА ЗВШшІ Ша чай 15 м т до вх тд ля т дено ст вх му т што Туш лу банних їз ки тт. с-їтТ з їж нау ВІТА бі сзАТХ ля А КЕ сі фр БУ Ше ЕЕ слі ах ч - У г ТЕ ї - я Її тд ля Тл ТА Шоеє бягшо Тихо Б до Дек (пх сТаюи СТУ Пішла тож Сстеву -мІ кві. душ з. шиї Зутх шу зів ше схіУу Туш ІПЕЖ гпЕ ПЕ ШЛЕ УШ г а ло о дл ж спікк щі тло Тум. ді ладу піт МІ Фет щі ТУщ для Толі Яд ТУФфр Мет -е-Щїу сві ТД Еш Ужі ШУ Ж Сп олів ЕТО сі ВУЖ ІМ їж шує ШЕ лу шк СУ ях сіє Тиж Ті-шо пе лок олег Ше піз ві бий Тв Том Віш Ве пд ДМ
Сі Тк Ті дЕюх ТБх ТУх йевх іч Сві Бко Ту ТЕЖ Вів Дю бод рве -щ кВ що ке Ж У
Ж юка 0732 бони Лоу утопленні б То (Та Ля ую т ом рю То Пуєуя
ГУБ літ вхо жна дів Бгле дах їеб Бій ТБ шеУ вів пах ТБ дів рлеЕ 5 ти тах Б
Тех: для Ті бе Мел Ялші Лиш ши іє баз Тв йдіш Ті бСЛТему Тая б ме сбкіхут її дЕМ о БвжВв о пШЕецщх Буш джий Са дж ій між ї1пЕ бУуш Бл Со
ВЕ їх пе пс я ж от Злато о Тов 7 - поши ян ле ти Перл іму ух, т ТУ Утят кют вів 'лЕШ шУш Уж ії йжх сем їйЕх Тйх сві ТКж о шжс ТЕ шо Ера він ТЕ ЗЕВ
ШЕ АБ ї1с ча щі ч-иУ ЗпЕ шещ хі :йЖЕЖ хі шеш піш 115 ІШ ско 34 «ВІ 18 «11 ЗЕ чшдіМмМ її
ВАШ ЕТ
«ЕВ ШМиє шизвтиїще «ШО кшЕ пОМЕЕ шкі: МАМ «ле Лін пілтувші ть шаті шт пів пелети пд і зт ЗМИВ тпІАіДдДсЕНІСТВ ваБіВсжлаентоІ ділян пЕашгРеогш ладно плиті сало 18 ди ТУ дві бі Тр сію й: Тше іш В'д Шу Ша ща Ябшмя біс Зід ваш ім о Уді сте ї1БІ сію швХх ЕЕ же під ше вів о шеїЇ шШещ ЦІ дів ч т іт 15 - Ж ях рану
Ст М що тям Тових См тяж Ток Тов уж ша ТЛ Ше що Си ту Теми ту штЕЖ вів 15 ш- ІМ о Суш ІБЕЖ Нед шеЖ Ззеї Зі пі шБш ІП І:ІУЖ 1ЗЕ г -к «т хи од ях тла їз от лякк о тім іт но би т ши Тежщо бЛиенитї БВж Теж Лех КН Ма зі с І ШО УЮ бі Х ат ій КЕЛО ШДд жЖя ЕШЄо КЕ о шУжЖ шУШ мА ЛИВО жа и шо пл Тощщілу Лезо Тоешо щу Тл хек Я що бен м стяг щоку сл чи т фіни шт іп вец и шу виш сі щей пт о шжежЖ ї1пІ Зі ЗЕ Зі дів ЕКО де
Зо ще ши дожи Біо б 305 Пше дах Ше спі ДІ тот Вар отак о Лоу тв тів ївх пЕЩ о жУяж ше САУ дшжЕ деШІ левЕ САУ лід вжш ЗЕШщ ЇХ їЕМЖ їслІ сі: ЗІ ах та те 5 дат т поляни тн Воші 1 В лдо тло тм т що сто сти лів лік вшн дове Їле іх Ж Іс пет сієл ді і с Зіс сві іс деп кт ія зії; вт -Ііл А АЖИ зЗісл дІіІЖ Ів ІІ їде СУ ЗУЄ сві зі ЕК пЕ щІх 2 ть ТЗ То-шо мо 0 т бПимаб бл Таз Ждї па о стлЗяу січ, лу тю Тисш лкш іпш 214 Ш-БХЕ їм Ап ЕЛ Зі МЕЖ Уві БП ЗА схіУ зд ПЛЖ БУ са пт ЗЕ іч їх
У си ру
Пеня 2 ОХ боших імпшожад шу «т «тісно Зк ша о ш спла ще ши КЕ «лід Мі: хулщтлуїмх
Машин ФО ХАОВШ І «ІК км плями буша ША КАЛХ кпк, Тана ятати у ки ля тут лом сту туги ух ; ти шах МмжстплідлЕвНІЕІСтВЬ БОіщі БЕЖЕОЕО ла;анітв те дл пох ї п же тім дон бод
ТБ Тех діє Мац Шяє іпж їі за Мас ля х -
А 2 «пійе 1 іх з сша і спро тих сша ЕКО ялин Меня душ туш їжи ТА МАВ ЛІ МЕ «Еш» як ля ПОМ пен 0 ДІВО «Я Пет тити и пит сютлти: отідошчІВт валка тож нпшслідсЕність пове Б БажЖЕсогс панцюЩа повз стала сапль ї1:
Тел ТА Що То сТаємо Фк сті ЗІ бе Жфик Тим Ві бе щу бо Тихе зжшш зі- БЕ Ії ЖЕ ше су ща вБшт ІїпЖ їіхш вів Баш о сливш шля шо і 5 М ї5 ау сорт яю чт пеш я ях хурт пшоно жа сао Жито зок Х код. тешо ЯМ ші АМОВ У ню ямі 00 тм зак ШІ АЛЬТИ «КА Тен пущі в сет шу скит ттдемттдаттв Мед
Хошеш о т шльашежнашшь песто БАК ЛЕВА ШВИ шли ж ох її пу лав Чек о лем М жи лк Вошжу Тв Мих, до
СЕ са БВ ЕЕ А вЕШ Їж ЕВ КК лЕД ті « ж їх - пк Я де Ох
МОП» ОМ зд ОЦЯ їх шрот садовий Мк ж топи
ТА ноя шк дО, Біжи махає т хх тео дошеє ШВОМ ВОЛІ В от три я Кі «киш. шт я пюКищ І сш Я ня трожулу. - : : поту . тощо доле М пото тити т акт ОТИТУ ятдхиттвк отут: т влозтучтщо сит
Кай ошю т митні дшвнІСТТв їі ДеКЕСЕОЄ леЕБЦІЮЕя п; доти, дж «Ул Ох
МЕ АЛЕ
Шок ж ШУ ОХ ше -к то Ко по - -к т : с підемо Щшою Фдемо бі То. сСезу Шшомо роя бл Лов Ше ж шаЕш щі шех сжш :пш 3івоспех се сови вепоец міх 4 - ке ї ш їі колек д щш -одшо ся ою дея -
Еш да 7 ет ту тртет кож ож ша кочоттух з -
ЕЕ Место дач мчить
ВМ да жд ших «ШК ож вне я и м. пити ак силу «кий ШІ АЖЬТИ стю тн тож к січки дес х тоочтть и. соски ; лу т ри В пр с и ет, КА т тилу: їж ди ЖИМ щі а МмтсСлпаіпшЕБЕвЕ ілдої щи Лето лаві я миня од т, чт
ЦИ іл тов т--х - т т що -
Пл ше б Моє шт ли ТУ їмо жаК сь ше під Ме ту - і т ї ш «пол мог
Зиождола и кол пк ж
ШУ ТЮ ле лит бход шк зт м - дк В нд дути т вх
Кк ВХ Не МА ЖУІХ дк ше сдштію опи хо шов шле шшеКо кеша Піст зтгуву й нету ТТ стрхтівестутих ос-чрдосує хво че Дт то миші пише ИЕ Бі дешеві км
Ши пк вих - сток то - у -к м - - - полк сх тод ше 77 о Лак Піняу Тоули Тв ш-і г -іТ їшеш Слеш 200185 Їж Еш ви оІпЕ . -
Ї х. ї КЗ
ЛЮ Отр ло чаш щі зм чо - «Ім кт мо тут пе ті долю, з. - т - «тя Же жалі иУрх ї тд туш жав ХІМІК ЖАВ ЛА Ж дит лу
Чл ОМ наш ше я сті опИМмЕЕ ші ШУМ ІШьКЕ ся ЧИ нію тити мо Тл ЯМ осо пудтаол тут св оч дея ЗИ ну В «ТВ Тичримтї тт вимові ШИ дедстртитити ТЕ зішУтТУ пода тп шо КВ ми лладсшжинлстьво оо шЗЖЕОТЕчІ рми пк и и ТТ -6тх а - ож ШИН бан Мощі под ваш ву І ш ЦЕ ОВ х - ї - ї ке ши у ек. зд ох шт ут шо тут ті жі
ЛЕО Фелов жидлметт я ко тд Ми шивеціЕ сот ктух ев літ пУДИВИЕ пах ЗАВІТ
ТЛО пер ті певністю ЩО ТуДОТ шеж ит ти дес т плн ж ІИпоепідсвніІСстТЬ Сів. ВщяКогОо ланцюга маше «душу т ж ще ба тощо ла Ттету ТЛ ся бе бл Бат Тк бе Тс вв Дт Лист ОХ Тиха ав о зїш ше БІШ шШМЗ паб обсіу вп о іпІ БЕ Шш їж вЕТ дит о НмувБ шив вує 1 ї У з ї хх Е я по тож «У п хай дит тет «х«від шЖта люту Хлехш .одстужи ТТ жяоде шо дк тд ВПС ІЕ ол
Бен «ші БД Е
МОЖ. 0 ТПчтет лівим вити ОТГ дими щи здо повів пушок пот підавнаЕсттв піша вЕЖЕОСТО паАВЦЕгя ПОООЄ «асо» 23
Флек ти Тех Ст Бош Та ТР бло Поу Ту ех бліх ЇТУКЕ ЗІ ВО Вош ха ЕТ не УЮ ч ЕЕ те ї Е о
Вол х Бош
Зк ст шосту шт чл ЕІ «КЛ ЩОом Шлтущо євурвтя клву ка ЖАВ МОВ ТУ ІТИ Ж ан а я ет Го пк ж ТАТІ сет зх і хо пОшлідожніттв шо ні пЕШпВКтІТ. лани маша «астию 05 дожсх Ту лшеє плм Вшую Тішобшу То Тех Туші фоеу
Еш ЗіпІ ШІ ЗІ лЕжш сс АЕБЙй Зі Ії зи ЕЙ 1 5 че ії х їс тож, -Е «Вій ЗУ «Втім т кое Хашо тдлі ше тт за Мих АК ВЛА «БО а Три ті пив хи толтуд плулуУтт Ві їж ЗИ ДОВІВ шок ДЖЕ ВОДЕ У МЛ нщУютух ОЛЕЖ, щи ші
Таж Люмує Срши Ух жо Тушки Зх з їух вищ шш зЗа4У ше ШЕ ООовЕ ї я тп ШЕ яю - чім їй хо тот
ЗШ ЕМ доли я Зхужже мкл мах м ж ши ЩЕ ЗАВ АТ ІЛ чи тЕвін ДюМЕЕ
Кб 0 Лечо плиті ет ЖИТ ПИЩОВ зтдтутути похумннво УВчт че ппОспідсвнІішшь сг що лекитЕс ланнцжих Ммших сдтх З чо ШЕ пля лля сах башт рю тод ие ТЛ яю сах іа У свт 225Ш ши жо шо їм ії т шллтм т сх В сх ш литво тупот тіше КЕ
Ж Кл ЛВ МІМЕ хх «ші» ДОМЕН «ТАТИ Ли жк пт і тк вищ вощок тут трдюфлминтя що ХВ зак ши тАШЕпМЛІ дж Св блоісбта БОМБ левів пт: дит т
В ШУ з Фати Міс Мат бе влши її піз МЕ Бл ч - ї - каш шо ху ут чім іт дон шт боже ван ж чаї Меа шизсвіде «пт гі «271» пОМЕн сш ДІАОТІЛЬТ янь т : :. пит хлушт «ЛИ ЩІ 0 Грет плувоух їсте От - питні що т Є боже киш ШИ ЕІ ВШ ВО дрменжо БАБИ ІЗИ тіше пи шя «ад» В пшж Тло ето Ле же лід ля піл пі дже тла о би ллмж Беж то Тих пЕш їв Ел КІ ав 214 ті ЗАМ ЇЇ шІ УЖ БПЕМ сам дм гл УЖЕ і іч их тд ї х 15 їж сах Зх
ОО їх алко щ ожшейи т У ло БВ
Ж Кл ЛВ МІМЕ «ПСО Ух «ші» ДОМЕН
ЛЮТ 0 Лічу стит тлі мет МИТТЯ вощюртути спали жовт зак ши пшепЛІішШОсжНОа сш блоісто БОМБ лаві пт: «далтлм ОВ пн Вот Пе Бу Ша ШюнНюв Б до зшш ляЕш Кпшж БО ле Е вля ло ЛОБ 3 ї їі з «ЕЕ В сяють «2
МЕ іш мете, чт ха жк ит лу шхі що халіщотух ту лот ВЖЕ ОЖКАБОСІВААЕ лим ек ЛК Є чий поІшщЕБ кий кун у ай хх поетові р а и ТИ др, шалятутт я и ВИ жа мтІПІДдсОтвнНАЧШшЖЬь соці декктЕш лЛанцуг а пал
Утт ВЗ хо Дону 0753 З ла ше ТЗ т Тл да бік Бще Лашжу 7 чт
Акс Ві Бек сСІЗ бех Уві Шеї Ті Тів Бі ТЕ БМ пес ГІ Ці ї Ес; ва ЛЮ «утім ЖІ ода дит ніж «ЕЕ 7 маш щі
Ку шт жи шу ов блеош Дкт ЕЛЕ БРАВО АЦЕ люту, пд ел т- а о о с суазтечтов олннО блшош Вт МЛШтІлЛЕШЛлЕНМІШТтТь іі плпегжЕсетс:Ї панцЕгпа шЬаАщше: или ях ем ж пав А ше СБ Я свій ІП ї х
ЕВ жа жі я лем лУут ложок шта ж аж чих ше їМАжЖ БМ ЖІ я ет
Ел «лим м 0 лм кош" ДИКО ЖТх
Пн Пере пілтв ну ТЗ стекти зміктт що УВА чшжю т М СстлЛІіІДсЕВНІСВвВв ІІ ОЇ лЕЕКК ОТ ЛАГ пу
Зо лих ж
Таж бля дин бур о Тииво Лов біду бек т і світ шиї Є ШщЩ -НУВ дов ше АК ІЛ 1 я ї м кт Вих ло
ТО само ш
Сак: ж плютт жртВ зда а «ТЕ Ж що салущіят т то В тіше оце дит хво «Для ТЯ еш о ВІАЛЕАТЬ ал ом 0 Жтоеотетрх питому БИТИ окт трх уко т полин КОТ пом шою пптІЛІвлЕНІТТЕВ пащі БаЖжЖЕШЕХ впавши а лм
Фр Пахия спі т лЕдло т пжЖ а оса СІ ШОЕ ї Ян 2
М - жк чо шій АЮ Х левом Ат
Мк ща яку т. я «Пи 0 ШЯїрещо жду чиї уд зав Де ки хм Іімх «Оле «Зі пом тушка яЕхКухльКо. поп т- к- пийте плуг х : дян дн ля тв, ткож п ми ж м сту Деми шк засл пИя те пптхлішсанІстть лова важжогІ ланцюиа шалі «ВИТ ж я ха
Тяжко Тотдо тв тод лЛУюає Яд ллдої бує лому Текух бод 5 що ПЛяюму
КО т пе ч Оле ох вдо т шо Ж хх Ж сю Ро шт отв їійпш Бел ІпЕ 2пЕЕ ві ЛЕ ШО ЕМ БгпЕ ваш їі ї ре ЇМ «лим ТЕ з дО «ШІ їх
Зк ит ох ше ол теру кока же ки кт Се клю вч тім Ме щивсМАвЕ «Оле я 3 ле Я тож ших
М лу ву я ет, ТИТУЛ жертв тутьх ев ут СК ВІН п В поІІлІдтлявнІсттв шо лего лпЕНЦИКаА Пп лим СЕ а «ОД жк т 4 Жан Фах ст Я до ди Лк вд я т я
Тв од Фошле шок 0 А Жде Ух тк Тл іпЖ о шжМ лжЕш шжжї ЗАМ піжЖх лсЕЖ ЛІ У їж п схід ї ре ЇМ «хг жона в м мор зи Ек тт техт ші щі «ТК бно Мулю сахті є тії хіх пул ТМЛЖ щи цІчЕ зр точку силам Тож олвую т ж, Ж ТУТВ ледштькотутьху тив тот ск ОТ шо пОолліІптшвнІ сть Іо лпетктиОо лаЕнцита пе
Ходи Тс Тлтв бе Пл де Мія бок Лю 073 о бою їв СШУБ Ше вже ау де ніш ше їщЕ ЗА ПЕД - д Є сн т пк Ж «Т2їімМ 1 сг ВН ша ЕІ «ТЛ бно Мулш сгахт шиї хі шаг ЖММЕ щу ние и кут уки тх «ШЕ М пи -2щі дІАНУ ТТ
От т. я пет ее т ГУ кт ди х ЗУ
ЛЯ М Пл т плоті я ти ІЖ т х ти: пав МОВ
Тек я Й мттпідсвкітштшь г сяжш лагклтт пакета пятІіц Я «апп дл стю Ед т Фуошю дом т Лото їтлах ля Плаш лЕщ с Тяея тля : т жа бля бщх Ту шо ЛТухкшо 41 15 їх УБашо ЛЯщої Тег Тл шу тва сви У Б ШІШБІ дош ШУ ЗА са вм сві ЗЕ ка сш ЖЕ «КіАї» 17 ви чит тов ЕМ шВ Мошя 0 Ледастдулів пити потому Хот ев штучна послідовна стЕ сх ситі поМЕЕ ші 0 ААТІМ «Ж ета нтнв о псслічлимість МОТО? єзжето паста ЇПшІ У сві тов зе путантнав плоілідстЕнастьв о плшище віеіажесешсОс панига ОиФ2ш воша соплі У «доп а
Тк ІЗш о Вщу Тіфх бою Жах спі лі бу ТвУу Лихо ід бе бето Со Блещ шо ї1ї1-шж вшХл ї112йХ У П.ШВЕ щі ща БЕСО їйпІшІ УЖ від сш ПЕ о гіш УЖ ії Е їх ії тт му пихи т
ЕД ЖЕ лиж п вини рН шк езжлой лчшшс жі «лю ша ях ік за ІМК АОТА
Сх том, оновив я -ощшо ни ду 5 лм о див, я перо рдждутитясв, щу те птн т жаль ділян БАЖМКИ пакиших М пі сеоміщоя шт довели лості діт гуманна всваншЕ о енлУєвАлвВ Куля о «ІД ж сім Заї зай Бе Уві іп беж сті бет тіц Бей БУ бує Бте сіє Від х - пох -ж ії їх о ї5
Фдеи Злдї бяхе Мі Ше сш Тис Біщшо о Шша птах Так Тв Два тів ство бах
ЖХеж Уві Пе Ві дж був Бу іш бек сіб Тук ТБх ББе їЇБбк ТЕ Тух зи а 12 бля Му Ще Ту лїдо о бою 01-25 Влдо и: стлах с3а стіл Лодля ут: бут ще тал Мет дах Ї шщ о ещі вЕШ зів вів КЕШ нау АТ схАЛУ ше ній Еш Мет жа я 5 сах т тіш о Ваш тіх сти Жах (с ладі бухт Тібу Тож Щіш щу йо пе: піт Ткхш Ті Вей ТВпх ТУжЖ Жах зі бві Брко ТБ ТУє бів дви бер Бе їх -Е шх ше дод важ
Тих їі Бут ЦД дл ба Жах Тоші Бл ТМ дю 7 ЩШдеє СТУ ді шо тТиу веУЖ са У ЖЩщ ЕП щі ша ле шо ожі: виш Ап о шбеш за ЗЕ ІП лов І ї8 та ТЕ зо тощо 7 тло дише Зах Пешує б чех 1 й: щу бін 53 лі Таке баку бук їн; бів Ії Ббжше Шех Сем їжи вів сі; вяше ТБ бів уві Ту Їжу СУ щЕ ви 5
Віщ йхло дет бл ващ Тек ліс вки Тем бшюе Бішо дам Мат Ти лі пі ват ЗЕЧЯ ВІШЩ за У БЕ БУ са нЕсЧч ЗХ оо Бл яш ві БЕК хіт ш 12 НН пів тв ту пд тину лІщло Сщшу Дах віу КХмдш о їБЕ тщі їпх Уві дех теї чх ях
РІ і «п хсгкМ о дії за я А ях х чт
Тео й бот ща кі
СК шою Лхктху що тити ті нитуронї ет «І Штучна послідсвниість «ЖЕД сут точних «ВдІїн дОМЕЕ «Еш люМ иптоІіІдсввіште вапідтшетпльниї ділянки ЖЕО пав пат сеоміщоя шт довели лості діт гуманна всваншЕ о енлУєвАлвВ Куля о ап ай са щі піт Ло сві спі ау піс дву лі Талі Тдиє Лиш Ох сії ЖІ -їм сша за ше до сам шеш и ех тій ве У ОБ КІС сі пів ії Е: її ї5
Даю іш Тоущо ліщ Деаєк (є Тон Вії Дах пл т ТМ Бінш ст тік сто ше аа УВА ШЕ сш О»УЖш Нішф леш -1У 1 Мп ле ї:БЕ ІїМІ ІК
ШОЇ т Зо -еУу пет ше їЕЖш ХВ ВЕЩ сг Зав шт З. схій зі пед шу спо плбготею ті пла бує Жов й Щдої шаниу ин тім 5 шт щу Ж ше Ещ і1сдж лем лШ МЕ ВЕ ті жі БЕФТ МНЕ ШЕ аз 8КЕЮО ЛЖО вХІЖ в ЕЕ м
Ти бі Б па лтдо щх Фо тами шу Ті Да біт Ддст тв БІ тату
У схіУ вІЩ шле Ущі -ЗлпрЕжФ сей пей вжи їіпх ше жі пшЕ Ії1йпйх вів І 2 -х т т а М СВ о талу дія ті сбше Шдх слов Тстш Від пли Бши тіж Від дл тему тТаєх (ех мМ тіх дж шЕ леї Ел о сОУувояїів зай о яЕоО ї1бпї дів о Уді ШУ шу ща
ЗЕ зи за т х болями бн 0ТТн Тут вк «лях Поомежо Л жж Мод пуб ож ля. З яр т жя ст кн, жа АЖ Ж хі У АВТ Ж -НАЄ ЕФ ЕШ ЗШ ш КЕ ЗБ ті ІЖБ За Є -3х
Іпо 128 112 пліт тв лхл тв Лк джу фе їлЗ4у іш І1йШш -:8і 1ПХ хі Зв ше тд тт іт ж «вва вії пла я
ЕВ іш "ж 0 Теядтяров пишні пусті здо мдУуБИ НО пшХлідсвнАсшь сег сЕ2І» ЛОМЕН яр у Пт пит у тА Фодестл що тв в єр стол щоповюитт ит теля смт з, КІ
Таж дви я так фей ях ло ДОВ де жо їж ко лк ашіщшепк тях лін бойки КК с ня «ТМ тиини зач жи ев і и, дан щуки я ти КН В тумтніжштваншго вила ду: «02» 81 шля т ще Ма птн Ям піч Ада ли був ятя бич Чт о Від
АЮ жа сет іс хі стій лдашШ зі соя зам сш п Се»чЕ КБшШо ААУ діж і ш її В дек Лі Тл тв дод ств Тлхуш В'що дню стлаю таки твоя лек тв У лива тату шжЕ ва ШОЕ ВА штЕ ХВ 1 піЖ ПЗяЖ зі ЮіЧЕ І10пЖ пе їш0ПЖ ШМЛЖ ЕЕ пл « г зле --ш Іели пліт Моє шдх бум бла тТисє піт Вів Пен сля її ут Тов лов Тує Мит іїАУ спе сек їж Зі Се сат мів шо зЗзіУ СіпозіУ Веб ше їЕ0погпЕх -ш хо г жеУ зу ох пам тує лід о б пбву Том о ШЖщшу бі сла бу тік стТлку дід щу. Що дн -ЖаУ ЗШ діє сві ПЕ іш псеЕ -У їваМ КЕШ 30ПпІ ЗУш під ви ЗЕ о КЕ по 5 о тТщо 3 п Фет слаюї в дах Том ет ТВ ща щі дах бе відо ст їв т-і БЖ Епе час жце Ззек сей ваш іпш сеї ви спвюІ МЕ пов ' Ії:
ЕЕ пл те щшл
Жах сот пл дідом дн, я ТолІт. тота: Тл лу р кя по 2 Лем Татуаж ду ж запо длів Зеї ше се 1 аж осі ж ОМ во зт УЖ ШЕ Су ша ЗЕ ЗЕ. кід Бус дж Іо ве У Ти піц дуп тт дах Бі Ваши Чі бух сілх тік під вІщЩ в -ІУ яЕУ 1УЄ тіУ Еш Бшш Лящ БП БЮ За Еш ОНА іт;
Ір ча зх щи їх Ах пі тією бкюює бла тю пПді бе Дах -Уу і1ШмЕ БЖ худі ПЖ Зді лЕвЖ шеї
З Іл ой зн «тій» аг слух дом тІїімн ії
І х ще еко Тіз хисту олтиить студе я уст жа штучна лтптлідтвнаісшть пови поМмКу
Зк ЯКІ ши тх Тоетті тут тіі ет сові ср: ту Х пої жешоредатх я дод подумки под
Зк мМтшлІштвнАшЕ шарізтЕЛлЛвьиті вЛлАЛЕВКХї ж ПІТ Е я по: яттлшв ї веувовжічти, щієстяхі три мен кумтніштстванлтіш сБлтвІлтьЖк сш: чаш ваш 173345 ж тА тд щу шу Ха буду ля щи Лу ли Шум стін ВІ щі хжі хім Оса Зате же це Бех зам шов ше ШУВ КЕШ САС вав ії З іт ї5
Фщ-шу лу Теж бл Шах схо Те 1 Шах блля Тех те Бе Те бу СТ їХет Ужі ГШУв Уві БЕЖвЕ Шу Бу ів бех сі ТУух ТЕ ББпе тм Ейк тує ї ї ї ї ет --к чт ші од ях
ЇЩ 3 я Мод Федос нтн и щ Тож ПЛ то дит сли Том Ж я тоаде пузеюо Олек Тату жіу сет шеш Ії1ЖКЕ Іі Шуш ій Бав ЕЕс па сбхій ссіж це СетуЕ ЇІЩО пе 3 І 5 заг отих, ті шу лм о сТаує ба пт Шдої о пфеми. Ифею баг 5 шо Флдою бод ПМ. аж Її 11 ЛЕМ їЙйпЇ їчУу 8ЗЖЕ зЗіУ хі Еш їЇмІї ІЇУЖ вів ше б ЕЕ вп в: ди
Тосяшо лу Щокг пльдо тд як дах оташи Бл; Тфуж Дддек Іще тв іш о бтбеу
ШЕ ха У ЕЩщо Ел Ужі ші шяш ши лящ апЖш СЕ ЗІ сожшІ 01ПптІ лів І ще їш т о тлі дія ті бшє Шду ти Тег Вів о їтли дшж тіж Вл ла там ПЛяюеу стос: ше ска дк лож жеї ШЕ Оу о лів Зав ово ЇПпЕ Мід ді ШУЇ 1УуШ Ск
ЗЕ зе ща
ТЗ щ о Вт бут ім ато босу біліє й бен шо Знщшо Вашу ді бае-щ іс пл ша КЗ в»вхщ ості вп ошЖЕ с-ще ВЕС зЕЩ АЕЄ ме дЕЕ УхдІі п ОК хі шо і 115 пл Тех Тв лу тв шах Ше їбАУ їіпЖ їж Ві ї10ПІ Уві ЗІ ВЕ чз тт мой. лю М «вїй» а пІдіх ї12п5 «оту щит
ІЩЕ
«лм Лядтянощ опис повіти
Задш пУБмчвоа иИВллаДшЕнаА С сл шт славі поМмЕИ сшЕвім пОМЕЕ сш А: шо «Іл хх ттизетх ттиов м ет тод що Єв свв я - подшететх ява танк та залита пока зшспПпадЕнісю. вашащленпьниді ділянЕШХ леЕшШЦОІЙ пАншЕга ХЕ аа ето т «ан щі тд КД туктиніштваншго внтиватх дили; «ідом аз й тла Мді Ти Слї-оинх пін Яах Шк бля БМа пік СЄше Мал жк кто їв
ЗА дів Уві ім їйпХ стій дет шо евш о ЕВЄ -дА дшЕЕ Уді ПІ КЕщ о сш ч г т хх і - Ве їх прото щі тн ті ту блуш Жшу Чді Шще де Ту ті ої ду дос СшУ
Біш пз Уві ТЕ Ме Ту пув ву Зві Хек беах ЇБх Іде ЖШех бек Єву по 28 22
Т-ат ложу Ше що Тем Лях си я Ту Те Дшжу ПЛ ом Фея Щфекто Ту Товт Тудщтх
ЕІ» мнжИа паж :шШ .УШ 5 пат ШУ шо Ж АТ ШЕ шо щДУшЖ ши -зЕ хі Е хід З п тя Тож сл лю лм дом ще Тши іа Шщу плат лат ВУ Пд бут п дах
Тіз пт сі тв Жах Б їеи; бів Шеї Січ Чві РЕ Хеху Вуц пе дв пд 5 жо пл бок 3111 бщое сті Те шт Бк тр Та тісну ТІ пет бо Тов сх
А ШЕ сб: ож САМ Їж ве о кКце їмБІ шсш о їЇ1пІ ї10е даполшеш це шій «5 то те зо хлдщ сгЗа: щу 5 Ві тям Та ПЛтсколбоя піт пі Фут Шу що бПбад Пемт лід чіп пЕЮ вої ніш ІМЛІ їж УК ЗУ ап осхаАаЙй ІУФш лек зд Ії КЕ
Ех ЗЕ ЗЕ товщу божі сх ст піт ту Туєю Толі бла Тло тям
Бей ТЕЖ Впв о сіє піп Фі ТЗЕ Бе Бец бій Тів Туз
М АС штж т 34
Еш ща «ЕЕ ВПК сало ВЕЖ сш Ева «ЕСЕ Лвуптжевощо печаті уві я
СВІ» шеучна послідтвність сш тжвЕїн ВОМЕБ «ли Торо тї поря пі шщиї зт піст поту Т єощошотватщо ЕТ теки млтлЕДОВЕЬ ваевіасвЕльниої палях плашки о ланки пт яечкчл вої т єітетиті щргтитятї тд се ДЛ тушжніштсттванцшіІсш НТІВ ХУ ч соди сови аа пла тів Мат Ту Слвху піз дах пкт. бл па пл Фе Ма лют бето Тло:
ЕМ шатж ва ім да ш іп ле ш Еш УЖ кіш АР ШЕ хі ПЕ КЕШ ШУ їі Х шк асо. пар о лЛияшо лі Лллум лід тьми дод 73 Дно ще твм лід Да Жщу дом жаМм ше ши іїДдЕї пІ15 ЇЩПЕЖ о -хв ше ш 5аваА ШЕ лшеш :БЕЖ сі1т5 сої пшшжш сеї
Вважав о лшу Ша що Тку Теу пі дім Тихш о Бет дшх Пп ж о бще ШЩекто Туш Шбето Тут; вЕвп о с»жи пав о ішШш .1УШХ іт см осо Іс да осаіпошЕ БЖ пУуж жо Оу
ЗЕ хх хх я ЗЕ т беж ст сю тлу о Фіщею боже Ташіх бої шо Шен зт ах бут ду бек ка бах
Тіз Тух злтіу їй Жат Авт іши вів Жеу па За: бус Жах бУц ЕБе дав ех ах КНУ піш Евшж світ Шяє іх Їж яв ТУК ТБ ши ІБ І1е Дам обдек Бе: СЕш ке ях -к ще о Ще з йЄс вВіщ лім дет вія піш бу Ск о Тахи Мед о бія пів ЖТеко шах Тішо о тТяету фл їз стаю Ве шк ьо ВІ Е ШУ АЕС ках Ал ЗШ сви ЗЕ МЕ БЕХ ще шт от ж пу 85
Таштр Твена 3 ія іш тя Тлюушо Таштр Пл тло Тит шва ІБЕШ Блпж ЗУ тім Ах ІЕЕ ШУ ШеаА ЗАЙ діт ШОУ іп І -аї1л» ЗЕ неп їм чл ші с «213 ВЕЖ ши жк ша дувучих плослідстЕністе «ал м вл пИеМмМЕЕ а ЩОоМІБІ сл Подолі и товсті щасті холери шкі парки шар шо зшспЕдивнісЕ вашівсельнші ділян ляешкившит лервицхЕюла люз ше сих оміщо ловив щориет дет с-ще шММБнІіБвсВвЕнНОюКоО ВЕ КОЗА «апп» ав пли; Ті Мі лу тву пі Ддвх бух. Ва да плм Ше Заї тю Зето Тире: -Ащ іде Ві шжМм о 4пЕ сніг ЗеЕЖ КЕшО пет вБЛлЛе сао ШЕ Уві ЗБІ кКшсе МУ і 5 їх їй
Ск лад. сор до кун «Єв ох пт ше оди лю хо. Фон ад дн
Сів без Уві їЗЕ їі ЇБЗуУ Су йШех ЗХві Жех ех ЇВЕ ІА Бех дек бвЕ
Зп па ли
Ват о Тшу Ша що Туху беху (т мо Тихе бЖбето шу 13 м дише лит Таж Пет Туж таж. йижм їв ЗАВ УМ за сві ша но Ам сиЖ Еш шШУуш жк Ба зе хі 2 5 о ж ож тя щоб лю тку Жах о боше Тв: Ва дае 015 дії ща шах о Му Зно ре ії 'ІхЖ ІМ 5пЕЖ о сег Би ій млі ля тіУ і гшс сеї ядпищ кля шк дол ЩЕ Кая дод ЗЕ І їтлак бод слу Ше сю Ля Вам фу СТфівоє Туш біб тло беж бднм Тов их пу шах слі ХЕ сті ІїЩЖЕ -Еш Юм І1пйш іїсБМ о ІїЇПпЖж їде дЕшли сшежЕ дей осо же ти з Во
От Тк бах МОХ їх поло пиву пп хя Зб їтог є ст 1 х То, ше ду лаки Лях пів чав лЕВЮ пів діш їлЛІ їчЖ ЇЖІ УюЗ зап отій ї1ЖжЕш шт де їх БЕ пе тт т шо пи т
Тдштур о Твосе о Щш ля: пря пі тям Тляушо Тдатр пл тла Тих
Бец ТЕЖ о ББе сі сім сіє ТйЕ Буш Беца Тіз Буш їщшМ сх суп тм 3 тн Ох ші чів леді с ша в шувучиа плолідтвність тету сш ШУ сві» ДОМЕЕ сл Пул лев и товсті щасті холери штоки парчі ща а
Ех ашспідлвність вашівсельнші діляним ляешисит пжвнцЕюла сь ятхтки ет і те доці: щілин тро се ДЛ тумканкаіажштЕанитгиш НУЛІВ ХОЛ
Ід г
Те що піп Тіш бат лу твх пін Ддвкопйхт Всем Ба плям Фше а лю ето Тихе пАЩВ діт Уві ШЕ БІ ії 39ешЖ шо ж ЕЛ (ЗАТ сш Ущі АБИ КЕ шмЕ ч г ях хх ії ще кля хо
Соки лад. сор що кує «Єв Ж ух пт Жошря полю ЛОТ ло Фони че дих
Сів без Уві їМЕ їі Ту Су Жах Зві Жех ех ЇВЕ ІА Жах дек бвЕ
Ват Тшм Ше що Тим беху пт ім Тиха БЖбее- дих Пл Фе лот Тлух Пе Тк
БЕемв іїсм пав і1шЖш .УХ -іт сам шУВ вБшОо вЕЄ о ЗіАй о шж ЕЖО Му Кш ЕС зе хі 25 м З ож т ад я третя ен и, Туші тла оч Тл т ут ен пол Пса х. з
Іїзвз Тух стіу Таж Шах Авт іїшои Аівз Жех Па ай туш Яви Бе ЕЗе бах шл ще Кая в БЕ І нау шжЖ сі швжЕ ті їЩщЕЖ Зешх її їпш ЇМ 2пшІ ї0є -вжЕшмл о шщеІ Мей обі щ
Е ЗИ ЗЕ ШЕ
М Тк: бах МОХ їх поло пиву пп хя Зб їтог є ст лм от ше Ту лих Лях пад си ЕВ пов лі ІїІлЛЕ ІК ЕОМ ЗАТ схаї 1Ш Лв зд: ІК ШО пе «- ж хо пу тс тові он що 0ТХ ля фл ти Тех Ток: ла тло от і ЕП БУВ ЗА ЗІБ хвіУу їм їі вені зп Іл 1йх їпа «Від ат зл т яв оту ху п сш ВЕ
ОТ Пт ртуті площ т жо штучна потгліщовмістае ба МАВ
Хто Мет аштид плоті чинвуї от БІТ жалдиенуте пдащшекмих шоу ся виш зшшо Во бушаншнв плоІлідсвність яогко важжоже лпаццитга спиш: тРОЖЕХ кхапйх аз дж ті- Ша бут б Зши сім о бет ТУ Ват о Том дет Вхщ лухщ ДЖ уч дО зі пе БТ шу Сех сам вепошпжЖ о веш о їщтш Зам) овЕщ ОуУуВв о окщве їх 1 5 пт 1 ї : ї5 їх
ИЖШ
«Вії 4 «пі» 318 «жу т ха ЕМ «Ж Літ хующо тет і печі тет, «шле» щЕЖучнав кплІлідтвні сть кт
ЕМ сотку х тонн те Я сті щої віушт чу пі пдаумих щиклтети столі дат щу - вени птн сша вВшІіЗЕЛлЬНОІ. ілі ЕЕ ВАЖКЕ СТАВІВ Ж попі зок кит дтоти мслита т я туканівлтвансттт дети тіла пмшшх «дп а «апа а січ: що тм ліві пі Жде Міс біщ іа З тлю Лисещо Шут (лінк 51 шт УВА са оцет о хжі сії пешх Зі віЖж зім сва пу їшМмБоКгуш іт вів 1 ї пт 1: ї - 5 їх дрож лящ тв Мало щу узащо лог Б3і| що Пр 073» Тек рве Шка бік бу Баш втеї сі Ше ді дЕЕ СУуш ше ВпоАЖ хвї ші АУЖ ЇїБлІ вгпе ї1ДлЕх аа кл га 28 29
Яку пит: пня ТЕ пух «То Ж хх ит, М ки Тон «ло ощуи для тех Тату
АХ по яп Тхш ха ВА піп бів Ехо 281 сам лі ва бо ШІ В ж я ї пл Баш Ті фішок Тихш о Вшем і де тах па Тих Вк перо ли б зі же зфїв о КлЕ хо Шу АЖМИ БУ впЕМмй їмІ дЕШБ ЇЇ вЕЛ ОНЖЩщ шШежЖ Кл
З БЕ ше че мож хх
Ти: Же Зужаг ТЕ ває Мдужо був блниє шу тлу Дн ТВ дише лю 17 ут виуЄ сь Еш бла ЕЕ Мат їпЕ гшШЛ Б агХ Еш ТВ дех ЖБЕ Уві Її МЕ вся то 7тЕ Еш жи Як ша Кн оно л. Ка один; Во Ж ту Тоня сет
Машу ПІ КО Шев Ж бфо Вс пам сій дя уп ї1щ щі йзиКо ше оз, якшо А іл швЕ джжж шШЄ вих ех схаім в ЇіМпмЖш зів ось Ук ЕФ ХЕ
ЖЕ зо зе хво бони МД их іже (тн Вже Лем длщл що бл Тег Ми су (Тіз їі (тях шов ось ж су ЗЕ сна БТ ЖЕ -ежа БІ що ІЕЕ си ЗТ са тт 1. 1-х
Мк Ах їх тех о Т-шу ді Те бі ше ЗЛву іпІ ї-щ ді ЇіПЕ хі леш СЕ чл
Кіт тод: 1118 оту тт тСїш іш ШЕ
ОВ ППечедкдо хто ї тих се по Вошоя штучна поліе наЕ шт ух яд ши лі З МАТИ ект ТПооепх птивні с водщутх щійвоть сих і «тд шостого св шт вп шах поста овНІСшЕ вщаетідшенльних діланки БЕК ВБАНІОЯ планцвВюгя там т- щуп тут вають дицитєт т тн тукзнівованликт анвлитаіль гео кан ав пла ді сла Товсї дії блієт бе атіїх 1 ста ла Тещо Тим Шет піє бід сім о Маї сій Ше Уві бів їеш сіу ваіїж сід бі був Був Бшх сім Біж
З г 2-х 5 їі ш- ях ах
Ша 7 Тон: 7 демо ся. Тож В до дл ст но дю тру лУунош пря Ддошут Сх, 8 я са ши ж шжш ож шу вій меш сах ВШ ШЛЕ кіж шш и ЕЛ їй дЕ Ех
Ти Му о бшм оТяча лЛищої Ван пі Вл до ши, спла лм птілу ТЛадах (тлі, бу; Му
Ат Мет А Її шВБ осі ВЕ сі віЖ Окис зі ат сх: ші сі ЕК Мех тізі«х вшх тд па буку ла пат пл Вбде ТВж о бле бтеєх пат В тм па шу сажу їде вії бо (іч вот біб ввпоїіБЖ днем ШЕ сь ЗЕФ ОВУ ЕТ що хщ т ж ХО жи
Жук лу Тоня ля тм лТошує м лоба т ОО поря од ря ЛІ Лях
Був о наш в щі их пе ШЛЕ сві ваш ст Бех їпйт пеех їм сво УЮ ще та ТЕ о
Має бле бли бше Мк лові ст Пр йзня Ашу Тьи в'яз Мало сте лм т; хв лт ім ія шжЕш шеш ШЕУ вЕШш ЖеЕЖ ЗІ:й лдЕВЮШ іпІ вів Уві У душ МЕ
В аг ЗЕ
ВЗ щем Жду с тн іх пато бін Ста леьд о бала став тя т птн тік під 'вЕЩ ВЕ Зам ЕЕ сам АЕКО МУ Зв Ка гпЕШ їШУЖ ІБ АХ там оса хтих ут ях
М ше 119
Фо Товлі бі стін ТР вх Шу
АЖ о ш-ем ска ЗМш ства ШЕ пи чі ошея «Ід В чані її «хек Вт пе шойю о шк «ПУ ом 0 Лтухсттеюв гчзитЯ плов їх ие зда шеЕжжжня поеспадшвнасУта сш тлі поМмЕ «ші БОМЕЕ ти посил потуж т сті діт тля вджщмин щит Ма ЛИ шо мс ДІДТЕНА ШЕ ващші асСбтеальнштії щаляНЕХІ ж ТЕ ЕІККЕ зазишл нь ложу дротом, шрот т, ат «ек тумжнаівтшевниїтз стві Му аль дл
МУ 7 лот тоди дод. ФС, Б ат ТИ я ор тла пд сот под Со «1 пл ог
ШІ св шт ШЕ УЖІ бах шШ схід вав сам щі шоу О»УЕ Шо -ЗаАУ пік 1 ї їй т їі з о їж даву паї Тлхщ ба ах со Тлешо ДІ даху бля Туєх тує Біне бе ет Ск дви сші ОВУ ТІ сВЕ СУ 1 дів пвх 21 15: вмпЕ Би сп деп гце
ЩО ва ШЕ
Же Ме пе тб пт кт літ Влада Тест сля а Пл Лв ім лк тв ії Мет дтп о ї шїЮБ ді ЗЕШшШ ат о мі КЕШ зІУ мат о схіуУ ве бі ШЕ 21
ЗЕ а 2 5 сла й тла пу Єна, Пана й піл Ват Тв ва сТевче Можно ус Ло чт ТУ -ї1Уу мЕш її: Ме ЕЖЖшл ШУ дек сім вЕеБпв о оІіБЖш Зпет їУЄ АВК ЗЕ ЦЕ кКщце
ВИ В що шо дог У тя Вл вжи іш тки Ту тку б щі башт Тизщшо Же прє Фдою Лтррю Лрш Лях іїУуз ваш жо вів ІїІПпЖЕЖ см їбйх Ущі йдеш о муш леви їпдЕЖ ше їЛЕ сі УЖ кт -т - ші 55 т зх ЯН
Мет жі ББеа Шя-ж дех ех ЗШ ше са о вжш о іпХ пі ЗІ ВУЖ ІІЧЕ СУ з зе т Те Же 0134) Тех стРях Бщує буєк бЛіша БПь-ш о Вшу тмжи Тим сту сх сті пав олпЕщЩш ШЕ сла ШІ А ВИ У Ш сша шжюж гавЕ ШУ ШО М іду ту чи чіх ши іс І
ЇБжх о їева Уві ЇВ Уві дек її зчЕ їх «лихсгкм ща шлю па
У 37 хх тша зії «РЕ ЕТ шах штжучниш плслідт-вніть «ЕМ злиття сптохвитІх тЕВІн ДОМА т Помтті подо ті шуй всбунтицот пілдржх за життх «ди шити МПа лиж мпттлЕІДОБНЕ СТЬ шашіасошльної діляншх: вЕфАЖжКтТКт ланцюга гпбуЗ ля стеку ші вт дн щнлидтях ла А тумані влсевнотго втЖЕТІ ЛЕ деку х кт що щи жі іх: лаз пік Лшу ліві сім Зах тім б'що сим їщ благ Тл Шк біт 1 -ій ві ЗІБ о ПЦещЩ Уві свій СХ бгіУ віш сбіц Уві цу Був кІС сіт вів ї ї Ех Зх КЕ жк м я ОМ блю ли що хто лиш йоги їТажт; лот Ж з Ялту У ху ле СТУ обєм ТУкч с,
Зех Уві їУуш Уві Хек дух ОК ЖХіа ех іч Т УХ ТБлошве ТБ Ж пе а шЕ о -ЖкжуУ М бек боку, щі жом ті І Фен я п жо Те схо тн т чем М оВ їхав УщІі Вп лієя А щх тім щі тоді їв сві М УА
Тух Мет баз Їх о Уві Вжхщ Піє Ата Бхт о свіу Фів сам бе сіє тролів
ЗЕ 43 ге
Флешки ТТ Лю д, и, Пас Тед, ЛО «бос. пев беру ляє шою Хуст т отит ПУк» у, пі двш їїз гГБе ко бух джип 5іУ Авп о їБт Ар їх Зп овВЕхщ ШЕ Епе
Ба ВХ що
Таро Буш Тхря бід бе Туш тнє ЛЯ де Тих ШЩишуу Ті ще тік біщша бу вуж леж ш Ше ва ІЩЕ Ше їй хі лЕБ ому ше Ї1пПЕ шЕшЕ ле сша шУЖ щі гу т жи
Мт піч: ВИ З ет Ж Лиш бл Зх (пт фе Тв 5здо ліщ стаею СТерує їж пет жім жав вІшщ лЕЕ шви ЗІшШ ше бід БЖ БК вів кі УК шІЮ Су їЕ ех БЕ
Том Ффраних о хе Так свя СТ ха тая сто бю т от «сх т ст ня нів виш шЕЕ Зах УЖ САУ вЕБИ ІУЖ ові БМ АЕШ їУЕ Еш СІУ бів у 13 125 115 тва ти лящ тв лі Єщк йдю їв о беи Уві ТБх Уві бдеїг сех зх 5 ії15 тля шОоМ те М чо слу Уч щ
Зоо я ох, «тут о ямі хшадех щшучна псслідсЕнІіште текти пав «МЛ ля 0 ртИ ЦЕ хай ДАЛТЛЕКІ
Ол Тит титри тт, -оц 1 зшиті и Х -а ушу пд летить, епелу дих дл т с шт ка ЕТ пгт вт ЕВШЩШІВТЯЛЬНИХ. В лЛІЯЛеОЖХ ВАЖКЕ ЛІВІ Ж їжа лох гуканівтвансого витжитіла щайях км щкк аа» БЕ са лящ тя Тон ТТ СА я я СВТ шо 3 Ту Ту тя ин стін І мо сі сатТЬ ШЕ жа кіт; паж сім між сім хв. ШЕ БУВ КЕШ Іі Вів 1 5 чт х
А хх ще ож
Є дяді Тов ло дю їх ля іш Шах ія Тех биим Шка сті Зах Баш ех щі ШУ щі дя МУуш шоеж ваш сеї зі Ж їМЕ вКпе їлЕ дж Бл щі шЕ жу бю ит. Я появ Ху мм «КТ М а кит, Ми Ин Толя тв Ся тя Тату
АХ піж шо сьЕТЬ ЗІш жо ВЕШ ап тів ж ВІ сх3П лі їв з ШО УВО же я ж: ті Вест ТЕв о Ббе о ШхОо уж Яеї Сі деп ТБІ дя Тук дл дтп беж ЕМ кл т пі
ЕВ, шов щи ботзкх Є Туя ТІМ бр Мід лиже Тіни Жоштм юу дат - мшеє тк лщоп Упятх вУш сьвф Еш а ІБЕ Мат їпЕ «шви алу леї їв дах ЖБх Уві ЕЕ я та та пт ши НВ т ши шо Як ша Кн шок ха м одн ун Вот що там там птах шу ПЛ і я-ло длевМ Же Сїеє швкс Ву см ел ТУ вав о СбщІі ЩфеУм То т меш оса іш оевЕ жшш шШве виш ех ска м в їпжОолаВ а ашЖЕ ВД СУ ж Во 25
Віз Бхо Бек стіу Туш схіуУу ВББ о їУх Уві Ей Авш о їуУух ТІБіу ців Зіу
ІТ 1 Кт їйш іх її тех Ту Мді Тех сблді СшуУ ду імІ Ши ді іпжЕ щі теш ШЕ чл іх ст рю г лящ А лу пт тшіши ЖК гл б Пітер ква по Я штучна полісі ссть корту я здох
ОКУ ов я пай БОЖЩВТЬ «том Тесля півонії твдщуєх щоовопт шиї І те шли пт ств гот д, тушу, хо птн внасш ВВЕДЕНІ ділки ЛІ ЕН ли ах посі петзкоууті ти УшоВатитутть дищшотУвАтт ОТ ли тгумшсзшнітвсотвазнтІт антютала тво
«абох 8
Фет То сл ша тує сте; шт пет Шви Ду Тов Шале В'ш ал Лідія (73 4х зар їі: са ЕВ ІЇІМпЕЖ лій леї БІЩ сдщЕеїЇ сеї БО сх Зав сви Ва ші ї Е 12 1:
Ще шо їі іх
Жшух о би ЕЩ тв т тк бик бана Твін щу Ж дош тло ал Ті тату явБУО сошш сві їйлжЖ де ЇІЙЛЕ Ст дтш ІПш ОеУ сій п їде лЕЩ дів ШЕ зх ж г - -ш У
Ту Бош то Тхую Тлху (т іє; бе Шретр 0135 Тих Вл шжє Па Тивк З шуму Хі іє вем ІїіЖв іїіМЕ сій о Зіп о с-ж кЕжЖйоіУ Буш мів КІФ 05 ше ЕМ діє з 45 ря вх Туз Му СП тов пошхжх сов жа Тих Том т, бо аа ТУ ШФаею (т ж
Туш ї1УХ вжЩщ лек щіМ шШей шви Ветї Сім в БЕЗ БЕ ВЕЩ та дет іу - ВЕ ШУ
Шах освіє Шах січ ТБ дав БЕмж ТБ ГБви ТКУ 112: Жах йШзЕ БЕ Злібз гг - Еш заіУу ї2ПЕЖ дж кле ІЙї Ммвм о ІіпЕ ї- жжеЕ шеЕЖ Ше оп о КО п та -Е л-х
Мод їх ж шо пі: ве льш Вл що тра сте блем (тая (З пи но 03 шт но тод Фмуу ан сім о сьшО дж сь ЗІ УК Буш ЗВ ІТ а ІМ ЛЬ 305 ша КІЩ ОБО а Б Ка
Тех Шива сля сій ля ТУ Лухшо о бІщл (ті Та Тотщ імш тла се сах ці ІшГШЖ ШЕ жа да Ів Іі ій пе ака Ва сл рю гу
ЗЕ т АХ
У клея тв»т хавшт ті «КИ В ЩОою СПлдхжтюв що тич ті пт т зо штучна пошсладтлвнЕста -еЕЕЩ «ВІ пом шій ДАМ
Сл точи пиві уст тут моти птн 0 пт паш та ташллиІт шо псеслАіпсовнІісшшь вщетішсельиЗї ділЕнки о пегисешс ланцюшта лес гумзнішщсованлітт автитапа сивий
ЖЖ КХ ке ше є ше еться юю МАВ ОЖОУксвожа лото вчи «асо Ба
Ж ла спі Мщшто Тра сію Васюк бШняу Дт ву Том бщше Злі о ще пло січ
ЕЖЕещ Уві ЗЕ Мет ТБ сів йех ЕшхоОо дах бех Гей ЗХех Вів ЛЕ Мед о свтіу ч Ф з г ї пе їх їх
Жошхо би лиш Ст тощо тік фак бяниє ЛУмосюя Жиуу 03 Вожя тщо ль ті тету
БІ льш сова ЇВ Іте тпх С уж шт пло шУ ІТ сь юЮ 12 ом зі ШЕ ха 28 зо
Тиви бшую Ти Тем пі сім Лиш биту іх Те віщо Ше Тео лом тиви ті -мви вЕйл їж ІЕЕ ЗіБ освімй Ш0уш -еЕШшО БІ Ше вів кКЕФ Буш шШеМм о СОтб пі 85 25 45
Та Ту кт Жах З бо Ту Шишка ни: Ж кт ТУ ад ті
АжЖш іх вищ лев сі ше Сум век зі ства Еш длвХ ЗЕЩ ла шеЖ сні У що ВЕ ко
Зех хіт Шах іх ТБх АБО ЕтуЕ ТМЕ бео ТБ Тія бе Ше Шещ о сіб хо х Е ; хЕ па ЩЕ Во (тд. б лоз п отак я уж То . ЗХ хх ен Мак З - Ппоше тя Пк їй вВжешв жа Ві їх Хукх їж Су піп шіт сі беж ТЕ Шем ЕХО БЕ щ к ді Ех ту ше бут сля (уллю блМнах Лото бІщ (тт: То Тлущ пІ ББае пе Шамо тп Суд уві ли тів Муз імх сте де сах ЗІ ПО ШУ УА ша Ів МУ із «ТЕ» БЕ лу ит кн А ект тет каш ЕКІ «с ОЩою Пижемеуущ о тить пет уст
Зк ОВО шипвуУучна послав «ВШ «Іллю ТИКИ ші Дю спря тони яти сота сени тк ду а хи жири у серии ет, стсвюрлж тот зошит чаю мІстніщдшвнішть вашжіашеньнцх паляннкм тв панцеЕа пет сової тут що теї шати хт ідо А гуманзжлваиного шЖЕтТОКВІЛВ БУХ ля БЕ ж ж ту шля ол жа лін (73 ж ж роли Флдю бажхж То Пи Мо км тт тя наш сві ЗІ Ммшт ІЛ сію шШВХ ЖЕО ше Зв їв ощеЕЖ дів ЛЕ М осві У я ш. ух :ї ї ХЕ їх їх ря ми та Лящ т тремо стчвх о божих Те дек Пляж щу ТТ Зще Ті що Лоу
Аве Вк Уві тТве ЇІїв ТБ Сух Бус ТБ Зах бів бзш Ії ба Тіз Тух тел ойшуя пс Лаки слу пі Тест рулу пла діє Від ЗящЯ Тв гряд Тай тів ш--м ЕХ ЖЕ УЖ са лій ШУжЖ вшО ла ші ЗаАжЖ ства УЖ Ши ше ж и Зах
Тихо ажж о дну Деу стояя Тивхх То Дод ко пло дл фут Дату дент бвшо о дшя й їх ЖЕ ТВ сеї сла ІН щШш ОК ха у хжа Біб сеї Еш да тшш А У ши шок ЩЕ
Жех ліс Жах сі тТахУ дво ТУ тях о Пец т» І1із й--е Жах шля лім Бут
МЕЖ вЕ її ї1пу аявО Ії їпжЕЖ цец о їляї пї1- ж леї пз орав се чл -2 Фо до г б Я плям бат пУ 5 шо ме тля Тагхе дтяєщо ТП пла біз бат кн ту ему Піт мА ль Еїна св ІТУШ І УЖЕ ШшЖЖ СУБ ха ЙО ЗАТ хі У ВТ ТУШ їн А КЕ Ж ша 2 хе пк іншо (Вч; бл сія тях Тл» бла бін то Тл іпЖ о жил зі У скАХ сш ІЛ УВУ ші М ддт МУ їм їх
ФЕП ВЕ слову лт сії 117 сшЕШмМо ВЕЖ шою. ЕЕ
МСЕ ще Торвугідіод птиеті сти ит хо Нд штучна птплідтЕнІшт
ФсЕЗО» сл поМмин лева ЩУКА мих Тут й пост ту щі йти т бод дудтит я щозеут 0ОВДМОщ жк МпттІЛЕДТУВНІА ТИ ваМміВтеЕльної дали ват лани поча ятедця лют ї тут сити: дрллаті пд МАТ тушмшжніштваншгш свт тТІла ЖУМУю сип шя БЕ пла лущл о лл Товея тал пт дом і Вл пт зт Таж о Тяхщо м беж БІ
АЛ жд сват іБУ Зі іш: -еї ЗіУ вАВ ім УдІі ШЕ СУБ ЕШШ САУ ві ї ш їх ш
Хех Чві їуж Уві бех Стуя Пух Вів Жех піт Тух Твт ве Твх дер Тух
Кк т дя вав о жеш зт їх птї ла їпПЕ вдвшв їЇУЕ щі Ма ду лек ЛК бе пі 5 ат мл: 3 жор Тиша йно ху Мідж пів хіжш ях Жю са сл сім АК ШО ША хіт с жи са шу ги 35 З зх пі башту ТІ Бе бинт вх ТІ пі Пл Пв дам ТоуУу Би біт щи Фее мах леж діт сиві БЕ М біш ЗАС хау ІБЖ пе 1УЮЕ яву сш ЕЕ КУМ
Еш ще я
Тдує Зло Вт Ма лют туш тюки бот дшу, Тв бек Щі о Даю ТвхУ Луї лету нич ААУ й Ущі ТУШ с 5ж їж ЖЕ ДЕ її ше сов шви 1 вів І1Уї я то -2 Фо до г б Я ще За отдил Жах о Ше Тоасєс бич дах Пл паст був п ш хх тадх о бат ст
Мет 21 Гео; беїх Шах Мас Еш ваш сід ня ю входів УВІ УЖЕ Еш СОУ с тії ж шк Ж я дів деп Тих пет сСюае пе Суши БК Віз пем Теж Лллеу пі лях тюки лох вів БЗшЩ і1їШш ваш ЕМпЕ дІЮ Ех вкл вів дей гО0 ААУ ІТ сваУу ЗПЖ ще їм їх ії тд ти М сбду йвУ «жі їПпПЖ хі лет ше 115 її: я СТБ 1 ш-її іх го Ух долих
Зашйш ЖЕ
ЕЕ феучна посліпшсвністть колл перу сша шви ситу Ттланетя пів сет воду ді ту и пі тотук щини вд т стос ую ютн -слтгя туш плотліПСВНІ ШИ ваЕарріашеньнаої Івах: аажишг: МВВ мес Упш туманішсванцит аншБТАЛВЕ Ще:
ЗШ од пПляр суд мл Тч Чаї бі Се пі Алтд о пля ла Тихо Те бує плсж ШІ
Ам Ужі біт ії сві Зі сеї Зі дід аАщш ві пу ів кІШ Зі І у г їх «о х яд їх їх
Еш Тв Тл Ті о Шашту блш о їн Пі Шишт піс Тож Ддву Ша ТУ Б б Ух шеЖж швец птжх дає шЕш шуш їж ат шежЖ Саш їуш пес кпе ї10пх вар ЇЇ те, зи
Ше в кож Лю Ат Фея ТТ я в поле Тов т поши тою С окжкхж, о пав Мат блтп ТЕ ш худі я Ж ЗАТ Мат БЕт 1 У шШМмЕ схіМ ше ІА ЕВ Мах - з т з т сх - п-т - ст ш т х -к я ні сСіт Агр ї11е Дим Бус бер Іде сі січ Тех Ббет ТУук Ве» бій бе» о Бйє ви -Е що
У МОЖ 5и
Тоді літ я тк тт дак тд мл То дж т Шан Тв Бі ту
МОЗу ААУ поті зва ЇМО дв ї1- с8вш лід ев МУЗ пе с2іеВ опеш ПЕ во ШЕ ща та т що т - теуу Фду бадм таші Тилуш Від о бдно Валу лвин Щлощо Моно тягу Тато (Татщ ши тів Тхш Хек джу їеос бо дів Шбет Аве ТЇБжЖ вів йеБ5 їх теЕ хе
В В 5
Зіщ дит Пет щу БВпшо Мах дах ба Біщ о дшия бує сумі ПЗ (тічк Л3х бо
Віз вкЕЗз ІхФ дви Ба дви дех ЕЕБе Вів АББ їКт сті пів о іуУу Шйх Бай
ЯН З он. 1 ключ іх її сто стік сш дну дм "в. аМмЖЕ ЗА сЖІ ЗЕ т її: «ВИМ 5 «вії» її сшїіМ їх дал вит за Я
ЩЕ штучна плоІпідсвністе. «пт ставі» дДюМЕБ ка ткож тр у и жовт ча пр жен я с леж шок чут, -кї -- злих пе ової зитІлЛІДдленІісСВь Ваші тецпьнихі ділжнкм ваш тТИ лпанцияИта й зимової вводи діуслинті тд мові ют гуманівсваного антитіла ше -ло ЕЕ тла тал тоді лтщ тн. дум тт ХЛ ля яд тяг Ли хни (71 хя ст шаль ява ІП їі ел хі сік сво о зіУ лів -іц ощі пек шує што ім в і 5 МЕ ї5 пд Ташчо Тхдщо Ті що дохо сяг Тигщо тіл дж пл ях стю Шрух Лера СТУ боях СТ
Заеї іїжшмУ Буш ї182 Зеї Ома їж зі шех сз.аУу ІЇУЖ лЕЖ КлЕ о ІЇПпЕЖ ВЕБЦ ІЕЕ тот ех п с ш- ми нія мл о Зшумя би ле Тлує тлі дм Поет сля о Лисщо ст о б7одту 73 с Тач бднк мії спро ЗЕМ Ії1штТ сб ШОЕ сію диВд о БштТ За БшВ ім ем осі шип гу зЕ Зп а.
ЖЕ я є плі обшиті о ВБщуУ ббето бу То 1 273 4х Тв ща Тех Щет сім бат ДУ їзЗаіУу ажш пів вЕИа вКжЖт яви 008 Її ЗА БЖ шеї ІЩЕ в9е5З оіМй взпокКлеЕ щ-а ще ші: дж ож и тх: сті Тягло Ед ня тт тушу Пд ділі Тон щук тд лою ТТ до тн ів зі їгчУжЖ о хді ІБ 118 лешї Уді Адешо був пех її: йлех їмЕ бів їує хе ч-х те ши а ти ТЕ шоу талу ді от шеше Жах о Тушуї Тут, 1 дах ши Тр Віш Мат сом Лбяху беж
Бей сіп їв бжї Жвху йес пух дів бЗеї йо ЇІБх Вів Ме тує Ешжк сСує п-д г пи
Кия Зо т
Ж Зк ложем рот, т-7-Ооки Фшт Жду Тут ТТ лото ож спе лі І ле т т о під с Жщ ШЕ лсьвм вшІТМа лиш шви Кл пад УТ І ШО сіл хім Ам ШЛЕ ооо їх їла На пі тік дії ау бдох хі 4пЖ о Ухщіїі ех се 135 її: еще ВЖЕ -дхі» 13: за А сЄшШЕЛІ ВЕ
Дві Дн Пюре посзні пев ти лк шдтучна поплЕДдосВвнош
СОТ
-тшВіз дОМьЕ тт т- : снедтя а : що ж с зт «З х плетпо площин ть ех. бовль пілижуши пути УниимЕ ща тні д я пстлЕідсвНИСТТЬ взвізсальна3ї палями пешКших леницюив паса стулок ії шум дого щем та НО шумаківтсвашш нта ЙО: ой оття - 5 чо в'я «те тТіш о Заї ше ту пі даху Бк башт ше Тел; В'щшо Мало бще Тур січе вав і1їіє Уі пят ІйІ зітпй Зетїх БЕІСО дяжш беж їец віж УЖі їш-Ж їв тім « - й хЕ - де чн я МЕ пл Чех від твх та пит бл ух Вл дм лін дин ТІВ дм т ті шу щі ее млі ї1МйІ 18 т Ощ Ес від ПШЯХ схам ше с ше сія ла « ЖЕ З піс Те дет тм ті Ні Фу Тех літ п Тижщо ект пл» (ТА Шут Шиг
У ОП ОоБЕВ ШмЕещ дів пішЖ а їУШ Зап оілй Душ ЕФ осо тік КЕШ КЕ з 42
Тхш Тових Тбошх ТІ ТтХінен Від Б) ще шт борщу 03 Св січ Ті хх Вих ву пем сем іде їУЮЖ НіЗ від БЕЖ БТ Ма зІіш РП міч ва КЕ ВжЮ
У дЕ ря
Вт Ба ех Січ пах сім пех біз Тк бе Бря ТУ вес ТБ тів бу : х - як т же а ТЕ З шву Ту піе Ал сл щи лід дл те бу бю Тивид т Шон бли дв Шемх СІ дів біз дер Хі дів ХВві Тх Туш Сув Пам сій Бех ВЕ ж 0 2 дошк дотянит шн т73 м ШУ ст ня 1 я тля ЛУ Том ЩО тля ту лтшх пев ї1іїв БиштотУух Їх р діт ші стіщш ТБ був ті спе ді пуд був Іра Бхт ТУ ЖБХх гпе КУ Бі бі ТБ Су ТВі БІ ЗА Шу зп ї1п 112: я МЕ 115 «вій» во «ах ж ші 121 іх тт а ЕІ «а ок ЛИдемщвоя пит поп ту
З и штучна посладшвнЕсте «ДОЩ шт пк тш- 0 ДАМ т Тип пивної сет щей щіволвшиї птн пишемо лввуєут вет, чаш плеса двнІстЕ вацЕВсВвивн діля лег лаЕщциЕта пи нпакв ов й теттдошееитт шагтиді до пу гуманні жстЕансог о жЖЕтТеКВІЛВ ДЮ ах г пін т чщї Мшж бЛви пім дек бан Біщш Тв Том: щу щі Яще Шут (ух -їМ ія ожЖі МЕ БІ бз3МмошеЕш - шо віЖ ІП меми пЕІ ожі ЛЕ КЕІЩ ніх ч є 1 те х пе ря їх
Тіз я во За т ління дм їла ян М ще лін Ж г тк ті тла -іМм льжЖщ І ТВБх Сем бах С уш ЗШ дів ЗУ Сім св сві швх дів сіє ж СЕ ЖЕ - «іх У піс Те бач лши лі Мія тлу Тег і ля Тижщо Ліміт ля» Ллл Бі б
ІМ іпЖХ о впяет цещ о ді Ніж ЕП їЖ ат іл Був го МІС сіл ВЕ Кшо ж У ЗЕ
Фото Тошачо Тоді То Лак Мішо вія дше бат Ташую слі ря тля тліщо лення Ух втш ЇХ ж її їМЖ паж ба ж о лиВш БП ШНМ сі МІЖ су ді о БЕтоВвів щі к о бутик лу дідок ТЕ дощ т по пл тлідюм пл тідшо бФрає о Туишх СТ Жрдшо бщя --о Ша Шо бле бу сті бу (із Так пі дещо Тв Тов Се тіш о бщх
ВІ ЖжЖПе сїеЕш зіУ ШВЕІ Біу ех Зі їмх о зіц Ел ЇБШІ ії ІПЕ пів ПЕ те то те ве шу Т-єя Піт дае По щу бе Біш Зах бат о Теу ПЕ Тк піни Жду Вхж щ-У Шем схітьотвЕЕш За овЕБИ ЕЛ Лія чаї шуш їУЮХ СЕ ше іп пек ВЕЩ 28 зо за тк т Тіни Тези еф ШИощю СТ пі полях ля Титщо що літі т я їлтшо Здаю шу ут БК ОЖИ тет сім фі БЖ Толі пе п їж
Був Тів о Ехо Теж ЇБг о бне іт Бім сі ТБ Буг Коші жАе уж зт чих ях ях АЛ. і хи до
Зам жа «131 311 ообйжон с болю «Віл вит ши шкі чо Де Пед пит пост ту з аимлю Ж сао бали т в КВ лю Кк ть ал тиМмЕТХ каш БОМВІВ лу туя трлужілу ії сет соді де ст лм ст полити што пертат ут пошли
Хо зитІлІДШЕІ СІЛО ваша абельнті ЖАЛО ВЕ ЛЕВІ Повія помах зкяжи сл лет т долити. шутищлх ох тт ск ЛО гумднішставного взвЖтитІіла пос чар ШУ ом и и хи
У ут дл Живе «Ту Шодеюо бул, Хо з У т. т ловом ло ою Пот ФС шіх ІТїв Уві Мет їх біз шбвежт Ешо вів ТБу вх дех Уві дах Ехх ау ї Е її їв ї 2 їі їх сіє Шфиуищшо бід бе ЛТизху бу ббхщо дсп Віщ о пишу пі: Щешу Ма бше іш Ті; чім мЕщч вів 'ЇпПЕЖ ШСвевз леї Су лЕФШ пав шеш сім о шеї Уді леж 00 218 зи За п пі тки Вдк тошм ті Бі що лк Та й я Тотжшо іт ПЗ Шу; біле -їч ІіпХх вах їшЩ дів Ні ЗЕщ ІЧЕ ІТ біл БУ вшо о міч іх БЕЗ ЕКО дк я з
Фах то тошях де Ніж піз пише Ват Тшає п Ман поляк лк ля В. вІШ їм опе їде шк пів піш жеш вет зем о зІЦц пЕ о ЗІ ощІі КЕШ вів еВ КЕ хо
Хонеу іншо Фі 013 ло Фі 015 щу тях Та 015: Дд о сптрує Тим тТлух Тло дах
ЗИЩФ жу левЕ З-ЗА лев зує ше са іх А па Ії1ЛЕ свя Ії сі1ж сеї ж же -ї до ка є ТЕ М
Фе Тов сл Шдим тлі Булу не ДТ ов Лтд Тем о Тясм о бчашо Тодту лек Фущу Бум ех їв осбхіщ ж ід нащо - п вів Зв їж Ії СУ Пед озІВ о ех вих
ША ВО що тд То фр Там тм дощ (7 ок 47 ях 01 яю лю лу щі доти мух їде Еш І ББЖ МЕ Зі ЗУ ЗУ 1МБЖ ШУ Уді -тіМм дає яті чте чів
РЕ іс 11 сім «хм шт пзшжди ох «ШІ бе літучна пттліпсвшнватть іх Пітучна послідтеність стих ша ях ПЕ лек М У ДАЄМІЛЬКОУ «ЛЕ дя Тетяті лтлутігі ті ові зт ту т те етотх дн ут ящур же. ло У МттІЛлЛІШ ВНІ ТтЬ вадіВвсЕвльнтгі палях ЛЕЖЕІЕИ лравщиюка піз; пухом ої ше щодіиєти. друк що сви тиМманадлшивяноІЯ СЕКОТТЮВІЖ БАД «сало шо м и чи тіщо ті мод о тя пі Шущу Пс Ше Др лов Дам ія бадм ла й:
Ашш о Іл свій 2-5 ЇїБЕ сі бек БЕп о ЕвУу дяжЖ Ммец беж дів дя та БУЄ 1 5 тлі р ї з І їй
Ват вх Мі тТює 1 ря стек хост Від оба 0711 бдде Зе1ї бе ті ТІ дав вт Уві ТвЕ її8 її Сх йо дід беж сі) шейї Уві шШя-л їТї2 Іів пп 5 ші: пута бериюо Вашу Лодля тло ші шо ему яд У у дя тк бен тім о То Хіт пет хіх їіКшШ МЕМ я гі пІЕБ ШИ АУЕ сім САТ ШУ ху схіУ СОУБ лі КЕшлу
ЗЕ З Е
Тещо Лов тоди Ті тлу міш ВЗ'д двуУ ВМ Там: 011 тром бля Лтд пет дру їв сти пед о їїш Ж пі нпіжЖж тех Ажшл ім сзіцЦ ІЇ1БЕ ЗАС Уді Бшт св
Ж ВЕ ШЕ
Х жи Шіншо о Фщшм Сіл ФШще с7і«х Шу пах Тс Вди па отак о Тщшу Твх тла, ах пт киш леж С аУ леж Соду же шцалУ їБЖ Баш о кла І1ЛЕ пЕМЖ ЇЙ се 5 я зе ше ща и Ж шМ
Сан тод т Пуядяан, 07 дя лою тив, Фото бек Пул т еяе йбявао Такт ТТ бачу Тоталі зЕЖ ВемМ іл Еш І нет ке від :МБЖ ІМ Ух ОошВ ІК О сгіУй ше ЕХ пе З В шо У -З
Тдте. Тло Джо Лех бТют Ббрш оте п лх її» Ті о Тдує Маї ді лішщо Ти» пте Іі- Бгто їЖХУук ТЕЖ Бош ФР Сім бі ТІ пса Уві біз Ті реє
ЕЕ З КЕ. зам
ВМ іс5 і15 «ши Ожо ча з: чі щит божа хною ших ба шВітУучна лтлліщшсвнаішл
ШЕ поч плити тп 0 ДОБА ди Пс повні ть вшуУї зшиті піст міх потетуте сш МД.
Ток дя мпсттІЛІДОоВЕІ ТИВ вчеріасЕльиої палашклі пато панки пл т тясак щу щі ово сти донтжтт є та ни
Кума лвавтт жаЕкИта ль шеми о ет ох чадом вх
Машу т в Мід тки іт Шющує нт Ши ддн точ лм Від дм лм их
Таж з Аж ба хи ЛШ сг. шЕЖЕ Кштш о шеш дж шМА ожш ліжЖж шу са су і 2 їх їх бля бус лі ть тлі тлвуУ с до Бхм Вл до ддеан пл Дощ 7 дду тіш ті вжЖш ЗЕщ зад Ії1Бжї ді ї1БПІ оС ож віЖж ОЗжЕ схід ож ва сшжЕІ спі 1 ех -к «т ши шо У путяя тім Ве товля лі Ше що сту чу Пул яу 0т3 м ляє Шен іх Тв пк, Мем -іУ ї1КбЖжЖ ЕХ жо її1Е ІБ ЗЕУ її Зам ЗАТ ШУ Ж тіУ БУ КЕ ЖИ
ЗЕ я з
Тако бод Та ТУ тіше Ше ш ВІВ Жах дам Тл, 3 ту ла: ла би дк шви мем сш дів У Бі: Атїв їех дять Бец зі ТЕ м У ха КЕШ ОЛву - ЕЕ щі що пож ШУ
Яка Бйе бет піс беж біс Сеж Сі ТБжх бер Ре ТїБпх Ге ІВ Іі Т8беї
Е ла та ЕЕ док Ме «сш що я т ЧА тлу Ох ва ПО сю Пи Ладо Її; т. бодуют 0 а - Толя бЗях цец сла шЖжт Ас ва о жде дів ТБ тТУх Тух сша бе зЗімй дек пшх дае Б п шт тих -З тощо ТІ тн СТР тт ДИМ ст 2-2 пах Же т луж ст тло т тич. Ті» ШУ о те тік шШща сік Прі ста ТВ їлещ щі іє ті тес зу іде Бшщ ЕЕ шУМЖ ТВ АК су МАЄ БЖ БУВ свя сій п1І0І8 ОЦУу зи ЗЕ їх їм ясиу її шелМ В Ж ух шиє А «пі2з РЕ
МЛК 0 Пісохетує єр сти ск до штучна поплін тету бош М
Ялом 0 путі
Тож 0 шві К
УМ джкжнхеултуюи пит руди нив пошани п милчв ТІТТ стшещУ те З задо пмутанчтнв лтїлідтпвийиштьв лешесІЩщ лен іде ие МеУЖІ со «ап Я іїіш-и Був їз беш скіу Жек Біє Язвху ТБх піФ тій ї - дт їі шо Еч «ші 5 лою ром
Ме Яошоше «лику Ст шо Ех щі" штучна птІЛіДдТтТВнЕІятЬ «сш ясно поджшіІЇ ше ВИЛКІБИ
ЯЛТИ Поло пот т я дат ри їі подестлотя шодо утуУТ. стовдлглитих те шле шов свиті дви варіасбельнощї ділянки ви І панни піцшла нь ложу дротом, шрот т, зм, «ее тумжнаівтешниїтз сшлаевІіа пу ам вх
ФІ ля до Тож тшн Хв т Жоьу Уж Жук Я я Толя тяг Фанні Тл я Та міц ті по шши ЗА ат шелосах Бех пам о шец вує пз киш сіл іа. 1 щЩ тп їж, я Ж о ж
Шіщек о бле Тожщо лущ Ху сх Тех, т Ше бля Там Луч Же Твоє пі тах звх Бі був уві Шев сСує Бу Вів Зех сі Тут ТБ Бпе твБЕ Тйх ТК - - «кт й яд х пек лидт т ее ТВ уки сту Ж що рн ул ті тля я тод 07 тнняу де жаУу ті їі ЗУ сті ВЕ Аг жо шт ВАШ схаМй ше шва бо Ж ВО
ЗЕ з 5 пла т тт Зах то ин щу тн ств пу тн чн плід ду В те. -іу ЮЕш її ВЕУ їІЛлЕ їУЖ ЗеХїХ ЗІ 9тві кКЕЗ Ї10пХ їУуїЖ вів БУ дп ЕДда щі що шт спе шоОЖ шо
Тео З Зяв Вл Ля ТРА дб Фщоу То башти Ло Жид до Фо тім БЛодо бПях мух маш вищ щлдЕ ві ЕлпЕш о хлЕх дес дер ід ле зді шешх їй дів ІЇ15ї
Ен. та ЗЕ «г т т-ох х - 2 т. Тих З пт Фошле Лвк Щлшо пд бас Лееучя стхкд
Те М Шію Тбе бах ее Фан бог Віш Слмх дет ТБх дів Уві Же Теж Тл с чат шах ляже Цеб пов веж оса вет ім 'ї пішВ УВІ ТЕ ВУЄ ЗУБ ж щї ЗЕ дл ТЗеті б Тищо тм Товт тля бак іш бр дк Тето Шжюма бл'ошо стою б7я пав опЕщЩ шт шеУуш шпшЖ шжое БЖ 3лШ с. 3пІ БЕС ЗЕ ЕП дя МЕ ЕЕ пої 1пЕ їх
Вп ісь 115 ля: що с ЯЗ як Тіою Лодлч Лтд три леї бод Жду січ шій зі ТБх сем Маї Тпх о Са«ії Заат Хе чає 12 1:55 шо «ШЕ ше сяк жу ят хх їшш іш шкі стек т : : «сТІЇб Штучна пог пожЖнастиь
ОІВ Штучна послідсвнітть «ля ше М
ІЛ Ол ЛИ ше ВО Е т
КОЛИ Фет пев тт «жі зд тт се тк пожсотулх 0 стомкирч т ледасрюттдо ОТ
Пи поестліпсвнІсттТь Баріазбельніаїі діланкиМм о БажееогоО паенсжшта пішолЕ ямі в дати щити ст ВМ тумані всевносго дНтЕтІтля ши дл ше
Ма шах пла о лущш ї3 5 7 Лтд му дах сіє аж п Товлу Лях Тео Фі ях МІ
МАУ жа ЗАТ жу ді біг 3ешї зі пеї зі Овен пух УББ КІС ЗАС лів з г т Р
У мк ве ох ра ШІ Єлена Фо стат Та ш пото ав Тел няня Ор у ря п вки шяш аа шШУш ша ше Її ЗОЗ Оу ві ЗШ заУ ЗМУЖ 2пЕЖ кМмЕ бл їі КЕ шоу -х ше пла ля Тіт паї тир пі Вів бето пі лю іч Тдх Тих Сет Щд
ЗА Уа її- їшш ЗВ СЕ СІЮ лів БЕшОст -5 Ал тім БЗеб су ЕТ СЕ ще хі 25 вони З ох «лох, т бух лим тує бок тот б шин тбіеня ббкднн ш дощ Туш, тд, цАш ІШеЕ зІ26 АжХмл їЛІ ШЕ Ж сі жі ШО З ВУЖ о у ВТ ЕТ о ВЕ Ж тен біс бест Ома лев ок демо Товля Ват Тк Жду 9 Шах блю бід Тл
ХВ ші ВО БЕБе 5ві Бце 28Ш і-й дев іМмх жеш ві ЩешІ їБЕ під Ії же та те во тош т т Шамо де ТЛивхх Таня ЩО щ 3 бак ню шо щу тує хх
МЕ о шАТ дів ЗЕ лЕвш шХ ШУжЖ ов ста В п пон о сваА УЖ ЕК МВ а 2 ве
Площу тео Тихо ло Тут Лу ом т Прим Тряну тпуує Лв ДТ що Пбату бик вад 'яжщ пла -»Ууш ІПпЖ ес І:1ПЖШЖ пе Зві вмщжЖ о БО ї1ЕФШ пе вів ІУЮЕ 1ЕШ їщи сх 15 плям січе тім тод Чад божу шля Шу дах ма о АлЛЮ за У ах шж м Уа ОК о Ущі дЕщ отЕ пе тт сЕВПМоО шт «ХЕЖ» ЕБІ сш й штучна послідсстЕнасшие сл
ШЕ кл о плАМЖЕу еко ВУ дІеМІШЛОУ ис Ля птн ет яхту лють дух і поета пу пед тут. жевадутжит, х тк Кр ЕлЕ хо й ит пишеш варі «беальнтї ділян шал тх лані щпішаЕчпл стлтм вом ої возв доми. щістидтї тд мийної ІД пУМАНІішТВІАНОГО ВКлІеІШмЖ гід сдитенх шт ее є
Пляє тло слі Тк г тя тушу М шу тод Ли Ти Фен: пт Б З іа їде схіЩщ іл хі сать ЗЕ ЗІ пех баш о цец шу ів КІ сі пів шШам лі тин лі ду си Тех Віз Шах Пібсб Тим тТм- ле тку Ту тТлує ет Ті Був ТВі Зах сує їв дів ет 51 Туш ТМ Епе їкБЕ Тйх ТУ -- ту т аж шия як
ТТ яю тт т енуту тлу Ти Пх Тула яти, Те; То у и Тиша Мн -їУУ тжІі дів їж схвА ШУ зі ав тт ЗА ста о дл Ов о пшжІ ж з 45 48 пла тик тів бщу ТвУ Те Шах сіє Чаї бут Ту бТоху Бідш щу бет Сх -3У ЗШ її вшБУ І1ПпІ :УЖШ 28Ш З-:5 Зв. шт: ї1бШ їУЖ лів ДмБшШ РИ БІ ж ШОЕ КУ тає За: Вл Зно лк Збщшо Шууає Тв Вшж бе ЧФше Мді Фа Славу бід ол му ша ш п хмЕ аа тую шжЕЖ ВЕ пЕШФ їм леж хві ля їйІ лдіжЖ Ії ях чех -ї де ва ТЕ БУ
Тшу плію ТІ Шах бо Тові Тих Віщо п бе тТкок Що шо лущдЯ ПЛ Ту стеж пемл сіп їїе Сех сяї їес; осв від зЗіц АЕЮ ІіІпйпх Вів «ВА ШШХ КУ
А о ВЕ дл щих Тяхж о Тео Ж Тома Пе бе ЧК бірж тиху. Те Па бло сте б7-км під ВЕш пт У «Пт шб :ЗЖ їі1лЛЕ 3 Ї1йБЕ кБЕшОЗ ІКТ вгпа вв 'ІЩчЖ 15 їх в 19 ля: пл с тв Тахо лід ль ТУ дня пд - зій ші .пЕЖ б Зо їЩщЕ Св сш пеш ле 1Зп її Вам «Діпе шх вен дя сша шк
ФЖЕШМ БЕК
Клин Преса етлутетрй тич хі лі штучна поплішоевнНо «ЕЕ» «ла поМмтВ тиша 0 ДІЛЕОЬ ТІ
СО тот полив т - тоже єго і оплатили 0 тоди ти «нижтд о міпочмна тая пстснідсшвнІшть БашБІЖОЕЛлЬНОЇ ділянКУ важкотгІ оляеннЕтТа пісечпа склер істо діти щеглиоютх та. ДМ ТК шукані всванишїго щнтВтЕваЕ ХОМ Е ОЇ ап БЕ пл тва ст тодся лІщо ст я бозчя 0Т ж бр Ту Тоде Тако Тихо Тр, пла т що чаш ваш іх Ов щі сіпо хеш -АУ ше Зац о шжм св о шДУуш Еш І тд х т їх тт
Ах р ш шо
Фше ді лаг Мат о Ша сбхшо тла Б'дш Шше дт3 Тахи Ті два тлщаху бу тех шежЖ зві шт Уві лЕЖ СУБ Ії віВ шеЖ За вк І1ЛЕ ЕМпае їй їж її
В Моя ЖЕ піч Заї Ііїів тв Зві дез пі віх БЕЗ Біу 5іп піУу Геш о пій Тк Мех хЕ я 35 пит тя тів обет лює бС-тиіях Шо слу З берет Тут ПЛек о Віз Жах щу ббуш сі їжхо Тіз Беп їх туї Шех сіє Уві Бус ТЕЖ Ії Віз дак БИ Бах
Ей ж дп
Тхшо брід» бут Ле тд В дах оливи Бдлу ТУ бах ба Дащшу ТтТкУ дід Тех шмЕ хАУ БЕ що шу жі БТ ж Ш їйшш о вяш о аш ш--Е в джІ .:ПЖШ б І: шк а сх Б тел облі ТішоСбще Жах би Тстш дів піп ши ті Від Ма стою чити чл) ше схіх 10 дж сеї БО Оу ояів ЗіБ о вЕЄ ї12Бї ів Уді МІ І1УШ ОМ ав ЗЕ А онов и І нки а НИ кн КН НН Я НН ен Зо Бі Там люм мав шщ Оу пшжж мл цей о їІМмЕ аж хі І1ПЖ Ел ЖІ ке іш ї1УЄ Еш 120 125 М піс ля піл тюх Тай бля тях 73 Шах Штх піт тій сі ЇМЕ бес УА ТІВк Уві беї Шех ут чт мат япещіх «діл ша «вх хм вит пзшжд ях "ВА цшвучна посліпсвність «рі» ДОМЕН з ше їх «ТЕХ, понти рик Я тету -ощоии Я щу т мото Ці тору дети тут птдомієсмутя зе ге педа мІстлідсЕнішь Е: звідови шви вББаіляккл ЛЕ ЕІ паніка піл
АЮ щи т вл тн люте но А КЕ тІУуМзЗзнІівЦнваІАМОКТтТ ВНЕКшЕла МеВ І «адм З
Мол о тТошлу до тТодту "ем сті дам о бочт Яд Влд о Дт ідо Дам тов піс вВтІд яю ЗАЗЕЖА поча вл ох яті ж шою жо льш Уж хат У вс СХ Ен х Е тт хщ ї ке їш їв
Фбд-е Мат тд Лов тв си Тв Тей Шбшо лах дія Б'шо об бтЛву Тех Ту ше Ж -жваі ШУ веб їж су їіщш Зецшщ ше пех тій пов ої 1ПГОЇЕ ІЛ п ЗЕ ла тд ліх тує дя ло т с н.у беж. ул сти ГЛ; ря бут бЛбаегує Товях Хв іде хім у Між бів тій сіл Ето СА ШВОМ ШО ее ШК ВІ Ме а Б ші ях т Тихо тя Хщує 0774-х о бчя Щі хо Дим ТІ ж Тоше ті о хо пл 1 ІК 1 МЛ ст пе п х НН і1Е я - Й поЦде. ши ОО сій Бей бує їжа Ази сі бек Ні ВЗет Ту сіс дев сі Кіз Бко дев їх т дп шо дИД. ох пет ща долю сс дк о Фщшу Ям по відо СЯ; опуут Ту То тку тішо ду
БЕ о Еле оеш зтіуУу сеї леЕх 2звЕ зі Бблв тій Бхщ о їЕ Бе їБї зї5 шу ак а т ВО
Шк лЛошує Пл бом сті дощу ЗТ 1 Щале Тахо Ту бах лях ЗІ ші ще ех Пи сіцп ВжЕ сліз з сій дів Аж їУЖ Туш сСУш сті Уві сіу бат
В ВІ ВА тро Тіщо лоша ля ба лтд Тари слді пд стзлу З; пл тю Тлрщо То іпш гія ве ЗМ Зап ЕТ Є ЗщоаА З МЖ жі вЛПяє -АМ І сш ТМ ШУ Б
РЕ їпл5 112 зпжЖ ті шву те -еаїйм о ти «пі 1
ШО Ах кл вт «МОХ Ж 0 Піудлуєвощо терито туї шо дувБучая лляллацтЕнасте. «пли гі БОМБИ - «ЛЕ Пситлі чивуоі тка вакідйвпиних піплянах дет тт» подолу мап тки Кох змити лідсвнІ вашівшеньних піляанкх РЕЖ ВОДІВО паницюта під ттТмЗБЕІвсвІНОлгО ВадлитілЕ ДИ І ЙО оди твки Ш МО О ЖіТитя Фут ють. ІВ аск ху «апп» то лк: т ошаю Ід тм тн пл хо пня ду З пд ЗЕ Фр лоша ст ку Б іс ТБви Мі Їесй ТЖТБх сію сек Бко бех Бія йех Аїв пак пем сіб бів ч - тк її - х ва ям дет Уві БуБ їй ЇБІ Су ІБК ї-ои беї Жеїх ій Біз вк оїне Тїух ТВЕ а Ії о тло лає Пбучшу Пар уж ді ть шому: «Ті4: Тлмшо флак Лкіу о Мчу бЛаке бо дня ідш свім Її КУЖ СІАЩБ біт РБЕО за СУБ о зІіУу КЕ ЗИЗ Фут цер со шк С ах сі ТУ Тл Тяга (ті Хе Біш Дошу Тв о пілах пек сля Ті бік йщу
М Сем Буш шт вна озіу швх нпіжЖ шеї Іі1ПБЖ ЗІіЄ дЕЮ Сі іа о КЕЩ о Аве до що щи
Бочемх ЛІВ з З, се плов о Шо у жа В ХХ ке о. Тв у ее т г ше
ВЕ ЕПа шу -їщ Ваш лех пек іє діжЖж сім Ве ТУут Бей ТБх ЇІїТ2а сеї ти Що Б дою Товт: СТ Шает плн вв сіб Бі пе бжу Теж птуєщо б ла сті дет веж мем іл о шеш зіщЩ ваш осіб вошЕ впЕждфД їуш ІЇЖ СУБ зу ді сбіу дог
Б т щЕ по У ТЕ ж т бо по Ку ПУХ» р. тил бак В па ЯлТонн ХП лот То бе лот т не аМШ міш ШУ ш жи шим ше лж А МУШОК ш сх. У сх. сх У ЗІБ щи ШОУ пт чи ГЛЬежя іш іа о тв ла Тих іп о хві ШЕ 115 «ШЕ ТІ
ХХ їх ші її «піт БЕЖ тлу Прпичндо плід і та ха шим чЗна мптІлідтвнІіште «ШЕ тІЛЕз ДОМЕН ал лух Тит пошти з іт т - їсти трете тя, теж те пет
Мои пттІЛІДОВНАОСТТЬ варіацельнитї ділянки пешжшюеко палшнижтга Іл лем вус дет шуиловіпщ св лд туманів ОогоО жЖЕтТеКВІЛВ ДА З пла То ТІ Ток тік іє дк Пк щу Кіз щу З Ж лодя (ті ВІ тій Бен Хві Пем жЖйх зів дах РхОЗ Бех віз Шеу Біх бах ем Ам віт і ж іс а
Шіаву лтщ я Титщо Тим б3іу бу тв Тем Шу бони літ Ма бу Увє беру Сюроя ех сві ВУЖ і-й дІПх С-УжЖ Іл Іі свх шеш Зап омі5 пвбх о І:БЕЖ СЕ ПЕ тлу -- до кю -- ре
Тло пз: Тату Тату ж ї31 3 т семи (41 Тлхшо ут аю Ле Ворони Тр Ма її- -ІйЖ ШЕ УМХ сам осла хіп КЕ сім ШУ са У КЕШ ТУШ УЖ А ХВ ах я 25 сп тощо Ж Товожу Ту ко щш3З ос ле Кім ду вн ля шому ТТ: тощо ян Бах: с-ще дом БУ Ж шу ж с ска у пшЖ ла ш УВУ БЖ саду вЕИш сх ші жит лвЕ «Ж ж шо
ЕВ, Я ши ху Тео лашу сія» шк би Єв пі В'д пі ди тм юх Ло тім 7 дак
БЗІЩШ ЕМлжЖ о шеЕ ЗІ лЕЕ хе лЕІ Зі під дій ЗЕщ ЇїУш Ше їж 218 ЗЕ ж ТЕ та щи
Шйехм їдви їж лак сім дев ік Від Ба ТУУ бух Щеив пієч Обі піс дет по іі сешУр ев са сувою зі- АБ УЖ Ж у ех а лі АП т сл пе
ШЕ ло па тв то Теж пли ІТ тро ло тал и слух» 3» суч Лімо лова Тим їж о іїї- Мов СІ Бій БМ Уві Жук УВІ Беж біУ ШЕУ іх ЇЛйЕ ШУує ЩЦеб кит Ід, Іл
Ре аа їїУ дню ха Тон шпПш о Ха ШІ 3
ЗІ плоту -х пох г хжїіх ії пелена тт сш щем ші с Пітт зр уч з п т жо штучна потгліщовмістае нти хе башжшох ВІКНО «КД и Ат вліз тес хе леї тт подктриит, темахтхлтощо 3122
Ся ШО ПпПотлідсовність Баріазсбельнщиії одіпянкм о пегжого памиютга Віста звіті ул що ти шив пд дО гукманішлшЕщногоО шнНлІвіла кашах сдУтуат лек г щі лтодя пущі тт лдаю стю удаю о Теж Ди СО що Фа ух що Фе Тодтх т В щ -їм Бе ві хі їІБЕ Сб» ше шо леж Вів о шви пов о лавЕ 1 хіт вав т 5 їй я Е ня жд іх ах т зх т - - - т т ж - їх Ф - - -
Ше УЖЕ фе б ТВЕ пу ТВХ Пед Хек Ошх зів Піш Жах їйх ТУух ТЙйх а ТЕ дю тів лзу Тут Теу піт пів ші Без Піч їсв діє Ше Вус Ту З Мат
ШЕ ска Ж ІК с шТЬ сват сії шо Зам ши АК ЕТ о лЕщ УЖ Ба г
Еш я Яд
ХУ яя тож борт: бжет дош «ТЛлота до МЖолодшо фщея бі 03 я он ПОТ ТО шо, Пежо от щжім зши УЖ ОУБ дОВШ ше Еш пів Ооложш ІК схіУ хи слі де юс мо ща ще І тод Лов (боями тля пт у 5 лі тя шля тут в
ВІс Ба цех біу бяеї беї Ше сім вів Бій Віз ТУ Гея ІН Іі беї жх за те за жає о ТошуУ бл Шен хан щі ДІ. Теля бала Таж сто стю У тт М дщоех, аж М ст ж са ЕШ АХ пів НЕ шУш Ії1ШЖЕ ЖЖ зАШ сві ЗА ВЕД ге ах тд
ШОК тх -
ЯЧажк о ба що Тихе; 37 лях п, лтщої Пятує ло бло 033 лу я тв Тиха То тих ів Бу бій сій Шйг ЗУві Тех Укі Ейпе сіб лі» С2о ТВ ПУБ бец тин ЗЕ ут ад я жали жрек катод їм за 115 хіт кн 3 жах одойчто кт, пт
МЕШШ ЕЕ кхЕВШ дума посліІдсЕВІттТЕ яп пе тиші: ВИК ТяшК от Птнестя тії три у Я ил, - ще щось --- жажлєтиня шрот диті ит тут голи т д ад де миталіДсСЕТІШТЕ ВвЕІБВвІВльНнШХ цпалишилї даткштти пани ЕОМ "хх ди с шо тшо ду стттия. зу лит тт. що ин п гУМаМлсжаЮт СЕКТ: ЛЬВО КИ Х дали ТА тях. їх ста т тн тож лін Лоу м Флокио т Ск ш я Мт дум т щи тн
Зап о Пем Уві село ЇЛПЕ ім щей вїО Зжх лід ЗвЕ лід -ш МейозіЄ від
Кк вки їх реч
Фо Мао Тато Та ЛЬ ба Те Те) ше Жах Дія Бі в дат Ту СЛахи тку ях Уві Ммуш Сей о їлЕ зу їй Зец ше Зеї зтіп пів сш 1ПЖХ їУЖ ІДЕ а ЕЕ І т т ля тн лоно іт т ну чо тхУ би Жння божа аг пт мМ іїівБ'хій ТЕЖ ТУЮ САп сій САТ ЕХО СА Ше Рут Бжшт вхо ТУух ді Ме т їй шЕ
ЕЕ и ож пін Та Тдяо Тв щу пл брами ЩІ ЯЗдое ТвУу іє пек пі тів бут В вій цем му шшв лш су шеш пі жк їй зі дЕмК СІ пе Еш Оо Р
З те --х
У дед щи
Яких Шви ддгок пл ят Яд шу Яд ою п В щу бони ер тод Ум т шо ля жо шт спеЇ хі пехї шЕЖХ леї схтіУ ав осхім сш МЕ вел ІПЕ 10 ТЕХ 5Е ТЕ та аз дах о Бпвєя для ше піз бат піц: 515 дев Там Тім о Слхш дл лі діл вах вешЖ мя ба я свій пт сАцщ о вів пев Куй пі- Су зЗаУ ді свїіУ пвт 18 во а тіж 7 Тяущо а лож п т Ту дпа лаг бля стаю лУюяя Тсящо Туш їмЖшЖ дів о У сам оса ша А УЖ ха вп сім сні У АХ ЛЕ ШУ ших «от чт чт ши їх5 їБО тв суді Та
ІпшЖ жа Ще ту іт еко -ка долю кий хОтіх 1535
Едіт іт «Вій дит чЕдшот ЕІ ша шжлУучнаВ пошліадсвнаіст. ту сл пив зав МІ 0 ВАЛУ ЩЕЯ «осях Потліпсвністть тд щем пілдимх там литтх ее ННЯ
Кв вчтиІлидсшнітнь вашідшельнихХ ділян ЛЕО о пана пісі япохещеї вговощт т, зестедті що слі гуманБівпЕВнНОого витеютіля паща «апр о та іш Зец Ущі Зжі ТЕ Сів їет БїшЗ БЗат дів бет Від бе Без осі від х я їх че ії Б о ї5
Фе Ед тТхе Товка СПЛмч сто ЛМм яю Товіх бух біди ТА Ше що Флуєб тім там пік»
Жежх Уві Бо беб Те душ ТВЖ Бас да ех сій Ні бше ЖТБЕх тТуУук ІВЕ пл ж да шУ шо шо - -От - - сх - - Фтшниуо бя ут Стожято люто Піни б; бат лтщої хащі
Та осіц Тхв о Їїмк аа ів сів Без Сім Дбух РЕ Бжшт БУущ їЇшЕ Сбві Мет за а 5
Тула Туелі Твю Тещо щу Р бе я шо Ше Фр сля Ще ті Око вет -ім мецх цу Ов 'АВЕ сім хе пла сшеЄжш їімпІ ЗМ де У Ів БЕФ пе -щ 5 о пет Ма дн бля Шах дує дра спис і щ льно чан тм Тоня ля ті ту
І жит ШЕ сх шНВШІ еЕ шеЕ сід маш сім пІЩ ІЕЕ ОЗ ПЕ дов св век т ТЕ жо шу Ло іт Ше 035 щу піс 5та бю Том Тло Сами стіл ЗІЩ стьіх Фщу швІ ПЕ И оЗзЗІБ жшЕшЖ ЗіЗ Аве ОСА міва ов Ж 15 ОК ЗІ УВІ САС БІ
Ор Ви Ж пря Тлідо Титв Пуїшх 073 -; ща ллд ло Татує Мдло па стат суттю 273: ую Тлешо Тед імжйш дя 20жЕ схі й оо о шОЄ За їжи Ущаі ЕТО ЗАМ сі Сам шо шу ШІ
Мо іп її імш сві ми улЕ зі «віп тк шт ух зшщіг 115 «їж вит чаш? ЕкІ
ЛО М іже пет пев їх ст з замах ла їх іалиуті ва и вк КВ. ль Ми Ос ши
ШЕ ситіх поМЕЕ шт ЩБАМІВМ «т ох бтспетлух тує мк Я пек воду щось ної після шт 00 тд тут мертве р чЗшшв ил дл вБВШЕЕОЛЖНИ піляввм фІЕЕУВИ ланшюшта пам стлузкщак с тоутова отит оденсттієтої тож ТАТУ ХВ тукзнівОВацнлтиІс антитіла тпвевіше «ІДИ» ТЕ бло лошн ліщини тн мо ни дн В Шан й'дшо дю тод тк тв шал ше жі ба ЗІЖ баіпй о шВШЇ шо сеї лід пеї лід ЗШ па Зо У лів ч Ж тт й ї - о їх дош То Твшо Тодлту Левом статдо Лв Тошіх Яд Шу Зк Ме шо дм ву тлі тку ей зад ши ЕЄ пе! ВЕЖ У ШІ вБоєкл дшеш сех зт пі ож Пп ЕМ ІБ й 2 12 тів пли Тит Тех піз лі» діт Без іє Бо Шут о ВпуО бух Сех ді Мат їшЕ сх Х МЕТ І УЖ ст нах сот ж шо са МУЗ Еш Еш сКщО ШЕ жа мех те хі Б
Ж п кож бач дя 7 лиш шу сл дн ля дян т гля: В глав т тут бишх шаль цей іл шо воша ше пів шеш аж сла АЕШВ ЗА дів КЕШ НЕ - ВЕ жо
Бус ШУ ша сл Шах о Сашу вх піс Біщ о джу. Що Ту Тувт тюУ Тішо Ше
ЕХ о жпе шеш зіУу швеш лЕї Ж Зі вів о лдЕВ ВІЩ їж Веб їБмБж ді хе та ть о ду тей спот о Дият ті) бу слі: бів ше Ток 15 Паршй біл» Чді сті: дат ж шен шій шжЕ ІА ВЕ ть лова Бпжш АУЖ їж СУ сі ЖІ сі ит па ви я твх Тл о тТлущ см 0731 Фа пла Тахи бла б2фба для мч спіл Ту Тлєшо Тут імшІ зфІ1в о Б6БхБ о з-Ііщ ЗІЗ ке д2 її ві вПпе о сСа3Уу Зі ЗІ ІїІМБЖ Цув ШЕ її: ї05 112 вКЖ бі їв чл ії15 «вій ЗЕ хх чі ша їх
ХК пкрит
Задщшсе жі ши шужучня полслпідсвнастть «лит ша є «ІК щОМЕК со Поеулед туші ті дет для пілдитхмх честю пн Міла вик зптІлІдлвнІ ть вашьшшеньнвши БіланшМ лет лавцеЕта мпішшУнЕ жоміщ я ші шоком етих содтітв мані гуманні ВЦВЕЯМ ОЇ о ВВвЯтМтІілЕ АІС О «ас те піє Там ді Тши Тву Дік даху Бк) дру пів дву Вів Ше Тшму біс 51; ваш іл о хді сшшп о їлх сім пвх о кЕО щшвх міш о сОвІ мів ся ШепоСІіУу ві 4 т в те ї є о ї5 дек Уві Буш Тед ІБ обу ЇМ Бес ех бех Сіє Мі Шех ТБЕ Тук ТЇВЕ а 25 жо їАв ім ТЕТ Туш бЕп обі біп вх біб Був бБіу Ехо Ак Тут Мі МЕЖ
БЖ ад я іє Тву Тих: бою бе сл ши іш шко ТВ ші У піч» Ті Фут Вих --іш Сем мух ше веспйб-іу шви лі ше іп ЗІ зла зі 1:18 БгГшоО вв че ше щі у шщх -кх
Жкеиж ЛІВ з З, с. плов о пожче ост, жа - ЗХ ке ою важ Стоун Хв Под
ЖЕО їйв Шах щі ш шах шех пак ті бів БІч ж т ЖЕ ше ЛА пе жі Сех
ТИ та З
Фдоє Товч: ЗТ ж ШЩоене пут Бош ТЛ Б боту Сб Те ж ЛУ лещ ллх б
Жеї Гежо сіло бек іш баці: Віз дер Тух ТУх су сіу Уві сі Взпй ме тд бот по Ко ПУХ» р. Худо блю Ли ьо ТО я ПП я ую тен окт пиши акЕж іш ЦУБ жі шим шпж о жі ШУуш о хш Кпш о зі жи пишу 5 Ш ШО ши ї1чЕш їцЕ і1ї15 тре Жаі Та іп ві Шшх чук о «ДЕ «ВІ1»м дим «пІітз БЕЖ оЛОЖшУ 0 Ліследієщо лого тя пруток сот хх шЕичЗиВ пПпІлідтствнІісшт
ДВ
«ШК ле Ше щитшя плов шоу спдшчіютВ СТІ пут іш оиттавнтна пІляниках БаАаЖЕТО пІанЦцЮГа їі ПДМ кт т а ії; що аю лк бохо 017» лох Доесе ла Ше о Ши Таня в'я Шут Шо бщи бе іш їевї їпПЕш пз зі ХЕ шВЕ тві КМЕш БЖ івеУ дів БІСШ ЗБІ ШЕ 125 і Ж 15 а ду Те дау сля пло тих відш ДІ Тдвч; пі о бшо Тши ЗЕ Тур о Щовл Те
ЕЕ КТУЖ сеї АХ А БІО МА Ж ля іа сті ОВ і жі шЛУЖ АВ їтУ
Ж 25 ШУ яко пот ст Лімо Лтщ лю тр дк Тату Шячт сМдою тв дл туш СТ еле жаж КЕШ шМ гШшш ох вА шлпЖ тА шЖЕ їйЮ овитЖії сшжш щ-ІУ паж штя ШЛЕ СТЕ
ЗЕ а ще свя лих я ле - пох, тв ол щот Зохдт. ЇХ ХУ шин лк Тошео Летх Поле м-іУу сві паЕ ТБ о жве гЕО Віз Уві сн БІБ Жеу Жах їх шу шещй її шеЕ г -Е пи ни ж у тожаж Фо Таах ЛЕ тт тд лід бут пужяує До лахю Ти СТ я іл (тлом та іїємй сеї спшеї ді ва їли са кКЕЩоО сеї шеш дже п о зіаУ ї1лЛЕ зіМ ЇлЕ 5 т тд й ем км п ФІ тк Тіш облив Зах зі Зщя Чл що Луляо ббет Дах белоьи благв ді Ве Тл
АУЇ лів СУБ вл хі АЙ із нуш Мт шеш Ел ЗБЕ ОУБ тщі гпжф шу
ЖЕ хо Ех
Тире лящ тлі. усу Зорю бо сю бето Та Так Шіш Фвх бере фФуту Штесу блхщ муж Уа са шо шу штЕ СУжЖ ль їж їм пів о ІїІДпПЕ ЗУ БІШ ВгяО СУ ій 115 її ше жов Фах «лю тіше бл оьт У кт ще. Жак ли расу я Тошеио ою пкт я
КЕжт свід шЕИШ схАЗА ше ша заіУ Її КЕШ ШЖжУ бі Дт шящ о Ж па гло ЕХ яхт ля ху. її и ль т Фін Ті Вк пра Лов Шошко то подаю Ву Твоя фіни ст Ло лину ст
Гу Б о Бте бат ТЕ ви Мет Бі бек БУ о ТБжЖоБшт Зі Уді ТПх Її У
АЗИ ше я: мі ла сл лщ дет ллді Жах Ці 03 щур бчето іч лів Тато ЦД ушу тя
Уущі МаАї Укі дер Уві даеаї Ніш піц бе: о Бжо бід ХМаї пує Бе Б» Тр їах ї1Б5О ї55 ії яз ж дк, піду лиш путч. ліщ ще що Те. Бо що Толі СТ. у Торо Фунт мух Фу: шЖш ха яви сАУ Бі са Уа пів лей віждЖж шуЕБ ЇДЕ ШЕ ЖЕ ВЕ АХ їі о їх іє ллє тлі де Шоею СТУ оТтТаєю обои лдої бЩ З Шо бо Тошжі Троу лев ли ша тій МУШ льжл ж ШЛЕ УКХ пЕш ща сві шеЕшї каш ше ШІПЕ жі ши сш 1пЕ пах шк ал тлУ -- що пл брат сти Лодлі шує 17 Тло (17: Тез Тоядо бі Тл лі лик Вау пІшШ слі зжш їж ов» вЕИ За ЩщижЖ ШІ ВУЖ о вуш Зщжа Був стві УВЕ АБИ
ТЕ ши - же
Ку Вів Пи шко Вів ЖКО її Біб Пме ТБУ 11їі8: Шах Був дів бує тіу вт ЗЕ т ей тях шо шко ю
Флоту СВТ А ТР баню я То Ліни Льнеоя Жщм М чн Женя (71 мої Ж ЕВ сЬЗж А ЖЕ хі щі ЇефЕш МЕ Нм ЕТ ЖЕО сУВюІ ВЕЩ УКВ са 22 230 пк ШЯО жо б ти ик ст жу лиш Фощоу Тбодумко ТЯ й вяшо щу ТЕ Ж с лих тт їв ЮК жЖ пУв о аВвОа сім Уа шехкх реву ї1гпПІ ЕВ А РЖІ Ії са шля ІЇ1УШ
Зк 82 ши жен Жшк ше т Щодо лІіщя сті Фу дта.: бшк ща І плода ст бут тЕжтЛ шжяЕшЖ пжЖе зіе пІіБ зві ств ЗБК ЗАМ ШЕ дай ті сі КЕФ сів лжхХ
Ех хх вто жом кі КВ ші
Фо беж Тяг бро тки мих биту лящ тона пл Шщу Чад лі дм тва ба авЕєВ УУш їв ЗпЕ ПЕ КЕШ Ето ха се ежш лег вл о схіУ шешї впе жпж
ЗЕ. ЗЕ пк шт еВ ВЕ
Тта»до Ток дату лю Фу ТВ Чаї бал пса бах Деу Тум піт пік сід Бах вмецо іш швея шу Цаеб їЩщЕЖ с-жо вВш о БЕ БЕЖ ЕВ Еш А ЩМ ІТ слі У ТЕ защ ж лит о з сх а тво Жщок пло Жде бЇщл о Мр-ш 3Лєщ пли 53 ли МА шо йшхя Ме щобеду б7Зфви чад ші лак С-ЩЕ лЛаш УЖІі мЕВ піш шій вав ПцЕЙ о поЕ АЕЛ пІБ їЩУ ЇДЕ
Ви А тіх ша сів Буш дет шШесйп дя Цеб беж БЕт о біж Блюж їх ї Х «ОД Сх шаг А «вій» РЕТ
УЛ Пічкдєдо путі пут сті од я штучна поплін шиь «СД ля «Жаль пУЧЯНІЇ ов ШИК ЬХ
МС Лиття помсіюттв ого щонов шито я і пон дет доеловт дети
Тож тащшиль»ллвМНасСТв панни БодіІтетВнянвой щіпланБЕзі лек шшто ланка лЕюШшННА ян фер о тв щі Вл іш бич Ж 7 бр Тл біо Дуто Пет Фе шо спх -Щкш іп оЗКі вії Біб КЕ ЗЕ сі пЕ зів БМ БІС БЖ лЕж в Зх ч 2 хг. х
КУ хк яю од. пло 7 Ля ню (тля ю аю В о Ло Ту пт тюлю Ло тощо ян юю Пи змій Беж їм шщех зіУу ЇХ дід шат ЗвоА Сді суз сем цаа зп ойпЕлй ЕЛЕ
ВН 5 НК
Стих Шк Дут бл Бід бло бла пл Те Тлує Чаї Ву еп Бі Те пл зУш жк. в о зіщ ні пт ба сть ЗШ У зві вЕШш вАЕЖМА міш Цей іт
І дг ЗЕ «В ки я
Жрдіує плям (пі 0158 Шу лящ тво а сут хв Фо Туз боюту Яд ж схАсу сажЖМ дяЖш ам А ТЕХ Уа АЖ ла ста соеш шЕш шОУЕ МЕУ сш щи БЕ о тво Тем Ще Товху Ше Жах СТ Твої ТВум Тв; о бШедех Ти ВІ о Ще тах Ті: іп оїутх шЕшЖ ец ше спшвЕ їіпЖїЖ Бе: іп о сец пшежш З вів дБ І ІВ «5 73 75 жо
Тк Ма що бли ІЛ сте пі си я. рел та дж 3 іч там ду Жах
МУ дплв о іш ді ж ве о Сошае ша ува їЇМмш пі Ст с зї1У сожо леЕЖ павЕ шщ т под.
А а ЕЕ
Тож, ЛЕ бр тащо Дон Че бує Вяум Млає сталі: км
ЕЖЛю За ЮБІБЕ БВ лож -шМш ВІ ВЕ сша щі є хтл зп5 їх іс чаю ла ша А
ЕЕ ЕК
ОЛИ2 ле Дів ситі пащі од штучна лпоплідтевни ше «ДТ» «ПЛ ло пУЧЯНІЇ шви ВИК ЬХ
МЛ ллє тї жтитеух ия пост ом що вит тя пра тд, рез гот тт пошу лащшихпадлвнІістьв пані Бон тевнтнтї діпянвЕЕ о лек тЕо ланцюЕка лиюцмнжх сталях пл Фет лЛоеує Б ко боерую бут Тіяяє ЛЕ Жим Товалу ДК. пет бус Жах бю ш-їУ іл БШШ 15 дід яБвМ Бшй їБЕ Зві ЗзпЖ о сец кгпе Бе КІФ Зеї хв і 5 12 ів тла дл тую 0 ЕТ я ух токти Ху тю То Тр сш тод тп що фу ує о щу під оша пе жзІіт Від о вБЕ Ії ч5 Віа ЛжЕХ еп зва СУує ША іс де ВВЕ спе ЗЕ Уж я-я ж У
Ядро бує брнну Щодо тю ллщя влщ т то Ві ке іє ду б веж Тож Бтт обі В'д ЗІ Ту щі і Тх- їх т «щшовієс ех хо
ЕМжЖ УЖ ЕШЄ зі пів о УБАІ дЛлЕ Сі вів о вЕЖ Ома вів ваш осі пе КЕ т хг хк мжня а жд та Та Від лі лін тку Жак тов бу шу Лулшй ля Дах бе Дят ча-ї шм- Та А Ам жа аю впЕ АпПЕ СУ КЕШ ЛК ОС скІіХ Ж ха УТ; щи БЕ о їув Тут Зіва Зі бах шШек ІК беб Беї Бех ІБІ РІЗ зі) жів їж Буг ж ти та я
Зех Бівг бхс Бет Тух Шех їж жів Мві ТБх Біз бі: пл ях ЇІЙйЕк Уві щЕ зо хх тій Бгхе Тпх Укі дів БЕшО ТЕ бів ПШє бех її пе
ХЕ ШО хвіїм жа вій ЕКІ «ЕЇШУ Щтучеав пзолідсвність хв чїгіз панништг «Еш» ПоЗзспліпсвність важкого паншюта пПашІ-Ї ап піс Уві шій Бей о Уві са пек освіу Бі пзій Уві Бея бує Ето Січ Вів 1 5 15 ї5
Зех УВА Гу УЕ бек Су шШув о Аїв Зах сі Тух ТНЕУ ЕБе о ТБЕ вва бле
З СЕ ж
Тух Мет дай Їхо Уві Ак бій Вів Бей осіу Ст сіУу Їм сій ТЕЩ Мет
ЗЕ -й ше пі йшБвВ Її Те ЖУт ув дах Б1У Беп о Тх бею ТЕ бал овхщ Шев ге
БО щЕ ко їв ж Ввку Укі Ін Мет їй дис дер ЇКхІ деїх ТБл о дех їЇБх уві Ту
ЕВ ту тах ЗЕ
Мет тім Бач ше дах йти ВЕ ошет іс Аве Ту Аіш бі ТУю ЖУК Му
БЕ о Ех
Зїв о Втс бек ЩЕе ТЕ бі Вяюм» тТук Уві БК баб Тух Тхо бі тів піт їіЗхш ї1па її тиж о Бей УВІ їВх Уві дах ех бід ех ЇБУ Був пліу фхт Хек УВІ ЕК 115 Ід і
Еко Бес ойів Бшт Яет 0вк Шеє Звєк ЇВ Зех слі Піо ТКУ вів вів цес ї85 ІБ ї4о
Бі ПУБ Га Заї сте Вжро їух Емпе БшоОоскій БЕсз хХаї ТБх ові Бех їшр а5 РЕ ї15а іщш
Ан» беї Зі Вів Шепй ЇКЕ Жех Ро бві Пл ТБ о Еде Ех вів Уві цес 1:55 ї75 їх іп шШеї шет спіу Шец ІУуї Шекх Мей ех Зех їві Маї їБх о баі БЕЗ бе 155 і із5 двух Жежх Гб сім ТБ Бій ЖЕ Тож Із Сує Беп СЕ Ап Ні їчш ТСхОУ і шо шле дек бай ТБх пз УВкі дер Буш Бу Уві сій БІш Без Шек СУуз бвдпо бле
ЕВ 21: сяк ївх о Бів Твх Сея Жито Ехо був ВЕхо Вів Рез осіш Гео Ше січ Пі хх
ТЕ 850 п шо ввх УВА ЕВ їх ББе жо Бшш Гея БЕФ ої Ат ТЇБУ Ше о меї Хі беш че їІВС шБЕ
Вжшо ТБ ЕЕ сій Хаі Тпх був Уві Заї УЗА Бар уві бах Ні біб; ВЕК
ШЕ ди ЖИ
ЕБшз бін Ов) ув ЕБе йжп Тшв о тТУух Зві бат освіу Уві стій Уві Ні дп
ВЕ, че 5-х
ТА 25 т зів Бу ТВ Буш Ко ВЕК бій бів бів Туш баелодах ТВБху Тух кл о Маії
ВО 5 ас
Уві бех зі Пе ТБ Мі Сей Пів бів беш Тк їй АБИ ФЕУ ше СЕС виш 310 15 КО
Яляяо Тоді сао Тв ЗЛА Фшу бля Ті Б'шо о Ти Вул хід бук: лід о тіях т іУЕЖ їпщЕ СУБ їв Уді лот ВТ. Ммсж же їжи між ЖЖ вів сві ІЛ тот ат п дя яю жи
Же Тло ша Тихо Мі що Лях 1 тім Шум. Вар 1 Щеннто іх платах ту їйх Іївз о бес Бо дів Бех СЕУ пік Ехо дка сій Вжо сій Уві тТУжЖ ТЕ пив жа зап шу ше шу товщ рн інн Ше Фет Фущач 04 Тоашлм бе Бдає бот б - до шою Ти Ту йши жЕт жжЖт шет ежш вЕУИ (АЖ пи їм 1 джпотіМй хі Еш їевс ІЗ
Лж шо жк
Спевшо То щі тати бл па Пеєу ом, адек Вшх т що площ лящ тля лм КІ
Су Сем Ущді їжа ЗУ шжцпв їУК ЖЕО шжЕ дж 1206 Звід Ві сх: ЗЕ слі зт 378 зве аж бод сплає іх Літ пі блем де Тджо Тдхе тіж ЖМох Лжн біжи Лтд тот
ВЕЖ БТ щу ніж КУ Ме ос» пФ 1Е му І10Ж БЕ ЕТ КІС Ущі ШЕ зд дат де хіт ж ж Я Я шк умо шому я шен СЛижнх Тут ПТ дето Тожа Тдшат м тт В Таку тп о -вх дЕш ЗАС ет Це -певоЇїе ії ЗЕ їз БМ І1ПпХІ Уві вав аа НИ 5 пвх жо За
Швож бро Тео пік пл піс баем ЕЛ Біош об ство Фу Мал Зб Ше що зеї вищ їЇЖшШ Зі віл о іт Ажшкн о Ущі Блпшж шяжї Зсув сш Уді МмжЕ Ніш су пе ще вла шо дан жи 1 Тож. шт «г. р аж ТК г. ЛТяжмо сплу ух Тож ожи ад. т од Том тах од Сі пк -іж ші мі сьВть МІ ШЇУЕ ІЇПлОоЗАТУ МВ ж шецд о сожЕ св швяжюІ шо ЗІ кт хо дл ах я ох
НУЄ
«сс Ж еліт іш «ТЕТ» ВрЕ ща щшшжучна плісе стю. «Дух ту 00 тцухетктя сша панцЕшг
ЩИХ 0 Поні сив ство тести них педомтратх М - 3
Зк МмоипмІЛлІіШЩдстЕНІЕШв ЛШ ІШ ЛОЖІ ОлЛДшЬВ пдплиєюо па часи ші пет Ті лл Ме Тк Пієб дах Бу Шах бе Талу бе Щіш Се пд пі
Агов 11: бій пет ТБ сій дах рус бЗехї Шах Бе) сш бів бе Чаї сіє ї я м ок мож юних лк п тлі була дтп уожжажи ок Од зе Її Товт, пла пути пл тям
ВБІ сежжш сві ї1їйях 2012 ї1МлЕ СУ ел 1ПЖ ОХ схаї ваш сі ей сів 1У г ХЕ їх ши -Е ши од т. - ля про Тихо Теми Х Тихе ЩІ Фан тт тод т -я
Кк --ч МО, їх і ЖЕ оц І ШИ Ж, ши А ЕД -щЩад ст їх паж. ї щ їде їв бехт ТжюЮ Тук ім сіб БУЄ Бхш оті Був бід бкхс Бе ех Бей: Ті я дол х о -й з
Та Тане Кт Жах пт Тов Тшм о дощ 1 до ли дк хх ВЗншо щу хх іш іУї йди сеї піч щшеб шви веї зіУ хвІі БшІО Зеї йІФ Кде шЕХ іх ше ЩЕ ші и ЗЕ о бшу Пі Шату піс Тк-е бля Шев ТВу Пе, Тв ЇЇ Доу Жах Туш стій Шут шетї гі шек сісС Гн вв о жлпе ІЇіМЛЕжІ Шмец їмжшЕж Лів ожЕ лек шо тій Кий
ЕЕ за те во піч дез ка Бідшд Тви Легко сТоуми ст дія пйплм діє Бет Тк Пас обко Вел шій лю Еш За. ПЕ .УШ УК ЗУБ о аАХЬ АБ ка У с»ешт МЕЖ ЗО Кшс БЕ щі ци щорд. шл о КЕ дляу шину 7 Тл щує Лк лі тт Тож Млянту Плюм г Ба Вл до іпІ ять сАУ сі Сас шПплоО ШУ Уа ЗАЛ о шіт От вЕВЗ 1йї спі лів під зл зх, 17 я їх 15 тя шен ЛХщЯ бо Тлщо щох ення Лешлчо бдехо Вел 31 т тав Тече дошк стріх вЕхІЗ Беї Уві пе ті Жив ЕшоО Бо» Бк Дер сій бів Пес ув ше сту
ТІ їх 155 пін ВТ беж ли ла їнся лох тод Мат ші бчахє бек донині пла ішІ жіж сяжЇ са хі -щшж ше шШШЕЦ о -ежтТ ВЖЕ ЩІ жхулж ЩЕ ко А Еш ЗМ ді їй хе хг
Жов ло тт Те лих бли Во Щі т ще пк Тщає вто Фа ІТ їСЖЕ ВА ЗАТ їЖш 12 Уу5щ ові сВш дЕМ мов цец сп вк ЗІ АБУ Че ІТ 135 185 і55 ї85 план Фет бід бля ста пт б бе Тоежщшо Хшху аж ТМою Тахо Фощеє То Фр іі джем хі БЕЖ са ій ше дем ЗУ дб БЗеї Ії1ІМБЖ І1УЮЖ леж ії шЕЕ
Аж ЕН Я лю ше пі тож тлюмо тож бли Тех що лом пт тло Таж Таж лі Таучи пат Тих Бас ТАх їв бех Бе вів двеоб Тух сі) Бу Нів Буш Хаї ТУЄ хг чипд т дФцт
БУ її5 ве ті до бл ллЛі лящ тк Міс блю піс Талур о бшк Жду Литі Мало лю Теєюо Фо вік Сув слі: Уві ІЇІБх Ні дію бі Пец Шякх бЗеї БІС: Уві ТБЕ Кужх Швх їше пот тот, асп МИ що ле
Епе зп дже сш ва пу іп чЕїсп п
Зшшіт ваш «охоту шт ож ка ит ТПядлтекцт що пиття тв я
Зах дУБуне ИШЛІ дж СТЬ сл щ- пуття ше паницит «Ех Плиетя пгіовелоть осшщрюжттих стдостлвутов Ше й т-
Еш птІсладосІвВвНаАСИВв Ба КОС лани пи: тіа щі тал іх Та ліщі бл бшща стю Фе 07 лу о Тошя То Тло Лрито Піх Від ша ва там ів ВА шк ше ЗДУ ж АЛ шоу Му пшжЕЖ Кт ошчІ В чі г ч-х т ї л- М їх
Фен ЖЖ М щук пт Тон т Фен Тл яю ня чн Ж ун мо аву -жЕ ва ШОУ ВА я -щЕ ІЕЕ пі ОЗтЕ бхаУ ІЧЕ .ПБЖ о Зхиж БЕ ІїіІМмЕ І ш п ЖЕ пл Мод шдх бух лат тире: пі діабет 1 лм пі Тов тих Пе Хр їАш пре сСеш їж ві пе сю ІВ кіт щі баАгпо ті бе осєштЕ 05 сх
ЗЕ хл пе хх сх ож пів оте тіш о йщуя тв би бах 135 дол шк лі би бло ше Бош пе. пАшЖ ЕВ до Бл ЇЙ І: ЗЕ сліУ Зі Ето 11 ш УЖ во ШЕ еВ пе що 55 жо
Тліщо д3жр п спюешо лтщі шк дах То бе Тех Шу ЛУщі Жду вх віщо тім ув ІВ БЕ ЕП сі Бе Зетїт сей вЕЮ їж сег сві хеГг іпЕ ніж ІЧ ж -7 те шт кох М З У т лі 03 тт Ше що їрнлх Тк ХІІ пз Дшж тією Від ла стани Пляж їх
Ше шій дош леж деК ї1БМ їж дів СА де Іі1йБЇї дід хі їшЕ Ї1УК СУ
Фе щи жк
ТЕ що їх
Мо дн Тон сти то Птаучи ШТ ж бус ни Щи ЛИкшюо балу Зк яю ну щ-аад'овзЕсщ За ша Ел ІЇЗЖ стіУу виш шо зьБЛУ ші ов УВА ІшУ У сть тич з лок тал шт шля а пл лін Тк Мді ль ла дише йду Ха Дає я Лулщо Пізя боту Шрі Лтд -іУ іїімЕшЖ БЖ хі :БШ ді дж пеКш Мід З 0пш ЗУБ зжіУу кт леж хжі
ЗЕ їх іч 115 ішУ іс ту Фут Товт БТ що лін, Демо Фу Тло Шщою ЄМ о Шшщшо с0Т1ч: т ях тм вів М шле БОШ ШВА же БЖ шШш лшшї ШУ о леш їБЕЖ деш се хі їІМЕ під сш. хи УкЕ заг
А ОХ ре
Тишумр 0Злю бах Тов ліщЯ Тчтш бущу; бЛояєх Ба бен (83154 Же лхщі твну пл Жах пи САУ ож во шжВваі Ото ВУ іш БІВ Б ім ЕТ сві ЇДУ Ба бе хз ТЕ 1Е5 ТЕО
Тут о йшу дду бля Блщ ти ль Шу іч; ла мя що тя Спашо ян, Бл лиш
Ж о Е І О5жЕЇ слхіУ вав оцей їЩцЕ пе Зо Уві ПІВ І1ПпЇ Е Де КЕЖО вів о ока шо 7 їх
Ташчч 013 ж Фе ідо їж Тов Таки Щарає Тошо шШае ба ал лящ т лу
Пам бій бе Бах сі їв їУх Беї Плх беї шах Уді Ві їВУу тві Бех чо чо зах ам а їде т Ф сг т сет т- -еох т летідня т хів бошя ТАТ хшу пед Тов джжх Хах бдех Тез зі ТВБх У їх їх Кіз був Ам хі ЯМ пі ев їх пп па
Фе Ждою що ПТ Тихщо пт хо Теж Тихо Ла сухо ям Тихо Фо слу ет
КЕ пеш взБ о Ії1пЕ ву са ою ШУ ШУ Уві са Еш му шви сю АШЕ г -к п жу ях шк тожщдо бек Ше що ляє жу що Пи Піно ня бен Кл нні т дян жа ск -зтв 'епш паші пли ШУ БЕШт кшш ЗУжЖ Кшш ті о Кл мам Шо мМ МУ сті есте тт -т ат дет шк шою шо
Фтяєтуо дк лта уко Тоді С Фет ем Тло Шу Тло Бу Ту Тихі Мат ТІ тЖО ше Уві ЕЛЕ цЦцвлпоЕце кт шоб БУВ Ес ШВУ вш шо сне мет її лат тв пе ж ЕМ шо
ШЩоаеж о бокс тіюх жо Лія лк бух бо дії лу бллд ло Ваш ла Шан Штат чх
ЗІ ІС 1ЙПї гїт Зал о свшА ЇДЕ СОУ УВІ сша Ущі АБИ хі Еш ПЕВ іш «жо за ати
Мод Хе лк ж тож тв, тах стдккю Пен Лето тоже Лія лк тя пух лях дат КЕ слі Ущі В кКщце -вЕМО ІЕЕ УщА АВО ЗУ УВІ За сова пі сть сх СЕ
БЇем Азія тю Тев о бут пт 15 пло бйія Стик бвУ ШЖаду СТкж о бС-еу йхєх щЗЕшп омів вуж її шУВ о КшсС п іш сад о Заій Ії жу сеї їіБш о І1УїЇ Вп
Вл її Ж «тал тло шия лщт тоді тем и оч ЩА тот теку ут тод дует То зад хжі лек хі шило Ід сі їв Мміз сій дЕО їж їв Авт ті 1ГУЕ
Вих Ваш кі: та щ-ЩІ1 Стеж Тахо сто Тит Та що бах Тлдує Ві що лом ет Від бет ТтІ тла -ім .Ш шУуш ув шуш два ше м муж АВ ШУ шо лпІФ кт дж с «кт нету ярд
Кн її її тд Лін лід Дах латте що тдяе 43 пл бен док 011 дин то Зв тк питво іїімжшЕ дів ве: шк вав св АШ тій ЖЕ ЕФ со шості са ШІ УЕ заг дк о теж ол бут Лех. бом бе щур 031 Там Тіу Тахо Бех пік ла би тай пк ве кг шжЖтОт шо АЖ ЗВвш о МЗАЩ ІН мл ШУ вл зЗітл аа жшеж пех ож м ке тв о бяхє Тивиу лІщ Ту сті Біо Тами Теблі Ше З тів Бі ЛІЩЯ лі би
ЇБтІт Су Без уеї був осі Ббяе ТУЖ БЕ Шех беб Тіз БіБ ові біс ЕЕ шле т, пд бл Жук Мт сля т бін тяж Дошку Тез Ло м рю біжи, Шен Ллш
АЛЬ ЕХ сет схі УЖ сот БТ Зал ВЕБ сжпл ах Шев о Ііпш ї1ДЕ Бшс КЕшШоО тА лот свт тат атл
ВШ Ви М -
Тел о беж. Шах бщу плблх Фея Щі бе Там: Лаки ща о Тдуш бТувс бЛокєе ба щу ш-Зйец яв Сетеї авЕЮ Сі стей шля БІ Змец УК Бех шУ5 їел їв до я дош дач Зх ош мож ж Зах
Тсеха о Як бут Тит ля сін сті дш ді Біба дек о бхоло ЩШедом ЛІЯ Ман мл г му лшжх -Вхщ шо Зап шій Зі паж Уві ВПе пеї зош БЗеш ства еб піт пли вів о Тасч Шіє йшемя Біш Тех Теми Пів Тло дах Тшумху Шах о Те ЖШву Сбхо -їм пів ваз піш АЕп опіІіш ІЩЕ впЕ зімй шу ех пен ех ізн сек КЕ сте дих дл за: яки зва -082жх толк су ше як сх им 0 «хім В у хх порот шишка сша Ви шшжучна плтлідтЕнусшть сту х ле стежу св М лами «Жабо Посдпідсшнкість пегЕТГО паниюта Найт -13
Ходи ШО поОхлалшдІжшнісшь пі ш людниюшЕш паза «алое ШЗ ех по пл т яд тод ум (тн Жак ми бле Шк. поз -я Ждя Мдлолняя т кх т кв.
ЗА іі8в тщі їх їМЕ стій ВЕ ЕЕЖОт Баш ЕП зіп лах щі ІїІБш ОРЕ Ж В і Е 12ї їх ї ж Ох їх патлоляме Мат тме лів тю сзтжш Ше СбХдї бше дає ТМе тТіш Се Шах бр -їщ5 мтя ді ІїіМЖ 3 ІЩЕ сСуш ля сві шеЖ Бех ІМ 2125 хв ЗЕ ЗЕ -х «з то пл лоша ША що бблаяду Улемо (1 он, я Жов Тени Машу й дн ут ложа жо Теж тот
Яй»лет.о па паіш ШШЮ ШїУЖ сій ЗАТ МУЗ БЕ дю САТ де Бут шу КБЕЩО ШО 85 За аа
Тї15- Тух іх» ІБЕ їве: АБ» Бей; йів беї Сі Уві Риб їеє дід Бйсе сеї -х - яп шщУ ші и
Тл ле ден УТ я. Фе (прі дет жд Тк Тоде кю т дощу од т я ста я о схі У ОЖЕ ті ШЛЕ ВИ ї УЖ ап ше Б о їле чл бек Бецпосіл ж -т -ї де ща Й ТЕ шо
Влощо сл де 53 м Вл лева бує Жтюм ої лік пл тм дух ті теми пи пів зіцй ЗпЕВБ бі пів ОІВ о їчЕ УЖ о шУвВ Зола Йй їх БЕК дії: ЕКЕХ ККХх хЕ зга -5
М ЗУ т
Тато піз ДМ пе сті із нує Тляшо Тоши тя т Туя Вутсу Ттуюк бл іх мех їм о ЕПпе сам о звіхл ов У БОЖУ ш о Шем САщ дів О»УуЕ ЗШ ДЕ ска ЛЕ іо Не: їх вів РкхФ Шах Уві ЕБВае Іі Бпшж РЕб Бо Заатх Ашш січ сій бе ї хв дав ле її 125 115 М ет пла три Віз шах ліщЯ сла о стооєї Тс їшу Бест вштя Бішо Тому уст М 01 -іУ МЕЖ Мід сш ва щі МЕ Ше ШшИц о »жп Аж тож ЗУш БЖ о вЕд ше їй зе хдтт їж ад кож ло торт лящ ля ту бат лід Вшмо Мще В'лд лов сл щрдм сяє Душу Жущшу мів шхВ БІ схіЩщ шт Цих УжЖі вЕЕ о озяВО лід шив схіАіЩОЖУ сі вої пшех 145 ВО 15 ІБ пі тла Фл ю лю стія пи Во Фу Злато Ву Жжк о бТікє бТябм бдою Товдх шлю АЛЛО ж Уві МБ са іт: Вт шжеЖ БВ о яЕЮ Беш ІїБт ШК ше Ше ши іх ше л дн Ж рт де лита Лощші ду Тов Тулі М ші няня ТТ Хосяшо Щі шо Ток ау шЗя-ш лек їБпЖ Ффех їмЕ іс шеш мВ Баш АЕЮ Їж стій Ду іх шу ха їшУ іп З щх
Та Від осяє іа ді б7)аеху іш сім бля Бато бає бах Дт Ма ти Тлтш її вад Ум сі УдІ пл па сет сли шщелу же пак Ес аа ЩЕ І 125 гав хо
Щек діа лото Моне лу ИрІВ слу: я Бі сп МШФ шу с СЕ піт тех а яд кіло Б «лі а беж вх т запас шЖща
ДТЕК т. гажсеї ти тиви ж ст шо штЕшнА пСІлідІшНЕсь селян, пошле ля 0 пд пожошоїє 0 ЛВНЕІКИ
МЛ З Життя сут тор ст, с-одидилучтитит. пилу длетдлиттосвю и шо я пшстлпздслвнаісшть Бетсі т поразасутєх спиш а сала а стз пл пт Ллошиух пл тн дж пл ся ШО щ Пил Яд бСщхтя Лиш ліки ЇТілУ (пі
АШш сала міт шШЕХх УдІіІ бій шех сі вІіш стіМ Ві ше ШУБ КІФ ЗА У 3 у 1 - пл хх і г ї5 МЕ
Хву Баехм їв ті лах сПош пул ліс Жеу сім ТсУ Шежш Бфрв о бттТх Вепотож зах їемцм їшїуУувБ іще пвх су їж сі авЕ рам ІВЕ БЕЖ Бле їпЕЖ депо КУЄ л за І ях ше ше ша Мат Ве тет бів Тур лів Мото би Шіє Бо піст бом пі Тез» Мат пах ші ЕМ ЗЕ А швуш базі млесбло виш ЗІ Бе ЗІіщ пе Зо шо пет со. ї з 1 25 піу Аж Ії ба Бжшст ВЕВ Ті зі шіу ТБж пек Туш Ал біз Вжл Бе а ВЕ шо тож ха як тля Мввлотке лі шах У» Віші товщ Же То Чак лік В до тяж мух ша ШЕ УІ п іш шви Удіа лЕжЖв У дж 12065 дшеш шлшІ пів 1УЄ 2 ту 1 ши
Та пуття Тем, Ж Ди Лови ТСТдем о В'д о Ддя ват Тв щлщо фею тям Таню (тат
Гм осів ТЕ ш й ек тятш цап Пух дід Еш їнт Вів пев Її ЖЕ ЕЕ Ух
ТЕ т пори:
ВЕта Ах Тхо дао ЕМе Ап ба Бйе дів бл Їх піУ тій Піо ЕМЕЖ во
НИ Оп че сю яю якою пт тя пл Сб Дрю Що бен Ту Тл 01Тл а Пн Жду пл тя щи «і ЇБрх ові йве сеш дід ше ЇХ ру шВіу ЖЕ: пах щі Е Ля БЕ їв 17 з15пх 1258 ї5 шу ЕЕ 1 Ше Ще бом лися Жву СТще Дву сл пл ях ть від Ві тТуасі сіл сш
Зіж Бїт Ше Пак пує йШех тцпЕ Зехк сві бі ТБжш бів Вів Сб січ уж
Ул «та дж кю ОД їз тод 7 Тон Во слвляжю ЦК Фі ФТІ: ден; р Кн 7 дно тн дя Шу
Ме Я хе шу лАЖЮ ЗШ шля КЕШ ОМ КЕШ са м о жа дж ШО БОЖТ ле і45 ІБ ії5а -е сів Вів бе ТБж ак отіу Уві дія ТвІ БбБе вїс дів Уві бемх біб бе че дв дж їх Ями її
Щи тло То бах Дю лову Дю Ша що еф То Же Шо ЩлУух Фк шавш сзаУ шстщ ШЖ -аЕ пий шЕВХ о ЗеЖ Уві Уві Їдш що КЕШ лЕЖ шЕВХ ле
МЕ 135 ж шо ВЕ ши поля Троя ятфожо Пбчав Лорд хо б шт М Тато Шут Ло -
Ген віч Тв Бій ЖБпх Теж Ті Св Вей Зі Аев Бі Був Гхс Шек ЯБЕ їі гад го8 у Тов 70 бод Тов Лук ля, Хол хо Же Тов Ж йно оо Туніс
Ап о шу жа же ші шеуш жа шал ЕЖО ЛИШ леви СмЕ ЛлжЮ сСешЕ ШЛЕ па Е тт че то
КУ ші шо тву пош« бут о ДФусЗз бух хз дід Буш сій Тем Тазц сл пл Буш Жау лІді змш ув о жш Еш СІ КЕО під КЕО ша ЕМ о шец нам спі КЕШ сшШеЕ УБІ таж ект хе жах ши ще шо ВЧІХ ще т. что Ин жи Ше пу плече То: вто Ти т Ще лей лож
Жпеа пен шле її КІ ру вЕїсЗ Ммуш джш імйш ем пет їгї1еа свУ вЕЗ їпЕ о, чех те ях ях ЖЕ М
Же й 72 пюре тяги пт гу пт ва 6-7 Жди Мі ш ллє Пан я
ЖЖ АЛЬ жа ЗІ ш оч Ва сша Уа п Ущі ХОЛІ Е схі о вБш шт ЗК ше Еш ах с- Тез Дбна пет Ту Ту Ми бою пл бла бли Уді ЩШіє Ще З3і а Туз
ВА Буш шле пет шукав сім ові св. о ежКі па БО лів вуж де ет звЕ
ШІ «ОВ сш
ТТН о Був РЕхш Ах ім Фі бів Їх Аше йех ТБ о ТУуг ВкЕщ о Збві Мві Хек
Ви «ш зо «тшоо Тидеи Пл сто лоша Я що сур фречяо Тляму Ток дош стих лЛяує сті стем ЛТаєш ті мем іпт ші шШяЕМ пів сів Аз іш о безе олхЕОлй Зі Шу сів ЖЖ У чид ях Сх дм
МОМ рек ож «Ло ї"вяші 7 для ло Фошихт ж лот 51. Ж Кан т Фся, т я ток лю тд жу Му Тві дах ВЕтл їжа Вів Бей БІз дів Жуш ТГТів о бій беж їпе сіє шов СВ ОК - т 5 т пі щен т з пі Яну то тез Піх о Тошух Прм тт ШОК вих 1 кв г ода В з яті ША І ше т
Ж п УБВ ві ШУ сі Зап кКЕО БЕШ сім Еш т Зат жі ї1Ууш шйпЕ п Еш ж СЮ Ху Вщх
Тноя, У бунт о Вошо Тая тот лен Ж оту оту Тон яд Жак Тоня тя уж Лот
КЕШ леву вІШ З ді ше І ЗШ ит; зай оУжа лах сш шпЖ ув дови жа ШИ кВ баї ПБуе щі БМме їУух ШБхо бек Ави о тІїі- Абе Заіїі зі ТЕб тій Шве ше 2 ї ї Е ї в лет заг шк ші Ехо зх я ану МТ м З т юдому та єю Стих, пт Тюю ли яит и жниу Лдт У Що дух
АУ само КІШ схід вя вашими УЖ дея їмшІ ЗП кош жо жі ше вп лЕш -Е дих жАЕ лі ша зво ВЕ а бле сля Жде бле о лашує ббату обом То Ташує Те ля ет Ту Шщу хх
Вжщо лат швЕ пе кл ШшШеМ ІЕЕ ер БУ М о ї1пл ові ВЗеЩщ о ошує с.швЕ вих дит, зх ах
Аж КУ пи
Тит іє ля пі щем лу шу Фк сло Дак бут шин лою ї27 55 що тов
ІЖЮ -АТ са хіх см ша шЛжЖ ше МУ шеш хщша ше Ма зб вішж Ов пот пл дО т сш кож
Ж шт - Лиш вд 3 ТД Чоатщ Фо дк Фо То, ши Ліни ПОЛ о то Ат пів дкЕКТ пав УЖЕ ІЛЕХ схіг шжж лоВш ів шеш зав ж ЕШЛІ ШО Жж «ух п
У шо леді шій
МЕдЕШО ЕІ «ЩІ пік оюх поет пове лтх пе де штучна посла штвнасште лшошЮ пк лІіДдДслВНИТЬ ЛЕНІ ЛЕНІ пово чтіЗ «п ля Ол
Шхєт тів о діє Мат Тв пік бвхех БкЗ)з дв Пюх о Тан: ШЕУ Біш о бе Сві дім
Блтш Тів сі Мет ІЇІБк о сбійп бек БЕо ех леї Гей Шех вів о їшЕ Хі сві х т ти ЕЕ ї ш вже Її: джшж Фони ЧКЩЯ тр тод про сто божу Шо) до Ше до Жах Лящ Шок ті о т
ВШ си стві ІПЕ дІБ ІЛЛІ ЗУШ со Від лжЕ сій СШеЇ жі лЕЖ діє її р І о спон няно бно тощо Тл Мі мшо тТичу бчлню «тіт л Томкщо Дек. Щуутялх болт іш ШУ ші ї1ПЖоватТ іл ЗІ лІіЖ ІБ О:ФТЕ ЗАЛ зіУуї ПУБ ЖЕО сі шує іш КЕ
З С я
Бу Бей обл Їїів о їУух Ні дів БЗаї деп фу піс ТУ Пі щі вБЕй бах вл - ЕЙ ше дж Мох чт т п їж Мод СП я ух по кя У У іш ни Жду Ля - Ше
БУ Бле бах лі йех сіу пет бі їй Жяш ЕББя СБУ Без ТБ Її Сех
ТЕ тЕ до дет БГемосійл о Его сій: Ав о жав Біжх ЇБІ Тух Тух су їв: Пів Їаї дух хе хо ЗЕ
Жобтд т Як вили - ПУ р, «Тов. У я «т з ток що ЛТх пт лот Тому
ГПУ ї11ш жЖЕшт Тшш ЇБх Блпжос0іУ фі йші ТК Гуз Уві сіцЩ дів їдеш БЕХ ї ї 2 ї Ї ї ї 2 зт ЧЕ тій іч іа о
ІвІ Уві Бі Аів шЖхо Шев Чаї Бйяе Тіз Ббш Бхо БІС Жетї деботій Сів чук чотки чт
І їі їш
Єшух «кад Модно Тл тя до поши ЛЕ, лиш тт т что пут хат ток: пе р, Упятх ши Був Жах сіу ТБ о бів Ше Ха ва С ув о нем ої АБ УМ Ел ТЕ
ХУ ЕЕ у из бут дл Атшо бою Чі лів» ТУєяр Тея баі баз й іш Тс пі» Лву
ЖЖ ЖЕ сало ьо ше ші сію ІТИ ії щі БО СЕТ МЕ їсв'/ стіл шШВЕ і45 ї5О ї55 її іє ват ша лЛля тпм Яд лящ тих ім плн ваш Жах о Титв о бшя Док Лк шіУ хьшіх ж сит жи леї ті ЛЕ -5іУ са слжщ се ш мЕ сою сеЖ шле чи чт де ї-шО їз 118
ВЕЖ Еш ло штІ ЕЕ їіІЛИШ шейп їІЛЕЖ ї-х ШІ ПУБ Зі вондЕШ ІМК сіра
Ід 135 1шО еко дня шо лю щі шо Тит кщЯ Техн Вл до стер ї135 Лящ брюк шля оо пліт тяж Тож Жде ших Шк мів ОДУ -78Іі ІУЖ пі Су лід УВА МЕ па ІП су шо лжЕш шжЕ КЕ т яти яхт, іл ни ЕЕ в я ше бе шу Туш Лруєия 071 ку «т ту чі ТЕ Вуж ет кл вЕнй БУШ іх її о я --їх тк щ-еВїт ша ш «піт ПЕ зі «хр й шт вот слот ЩВИт лав ЖЕ ща шОЖжу чна пошли ях «ОЛІЮ Пзиеті пон кт щшоеклітз спщденіхюутв Шу п -Х п мопліщеІвниттв вЕЖЖЩІЗ ЛІНІЮ пі мап пд па тА ТЖодшиє ли щу шах «ну пшоно Тут тож тен п ВТ їхі М ха сур ів Ха ІТ леш ЗЕД сш За см Бу ште кУШЩ сіє віжЖ 1 т че Ії ї з їс їх дви ба Тл ба ба яю Тихе Вії щ о бшя Пплсгх бП7'цсми Твко бка тбЛву беж бЛ7вих ше хв; їУш хв) шЕш ЗУБ шу Вів шяеЖ зЗаУу УЖ Ії1ЛПЕ ЕМе ї1ПІ їІБЖ УЄШ аг -е зт м ших ях щі ла тла Тент лЕЩ Ті що шт пін Зі спіл Том бл тем Має -іУ хаїг ліФ іш ста сш сій АК ШО АЖ о схіХЬ ам їв ва ШУ лив а ад ве піс Тийз тів пам Тв Тех брам сім ЕІ Бест Тв о Тех Бі Шах бущує Щі іт ТЕЖ їде Яви Твпх ТУїш Шек ті Ущі Еко їКї ІК Вів Шву айви Ба еВ ве я
Таж ле бут я яхжщ Зиешо фрдще Тов: Дшхж лік Ше ато Ше тв Блодо лях шу шщіМ йпЕЖщ дат Ві жмля дя Баш одн їй дяк Уві шжж їй пі 1УЇ не 75 ть що толь мл тлш дя дв ли Лич вів й вашу тік плдо яд тя стТіюм спек іпвц сбха тп зе шет шву ШейпосуУуш дів За дер о ійжЕ лі кді ІК МД ОХ хе щі под тощо бесв Тошо Тих бів башт СТ Те Удї ТУ Шеит бТбф?жж іш Мід Лу би від я-Еш ОВ ше І1пжЕ см І1МлїІ їх зві їПп8Е ЖИ ІС -клж ії ї1Уг шу
Вл зле. І
Я ся а с С лк ян т нут ЖІ стуку шт сплем шя п Ух Фдрє Лвем ложа 7 я зт
У жі А Твжх їбесп УВА Їйх Уві дах ЖХех Біз Жах їТВЕ її шоу што
У г Зх їх їше їшт
Шадж лхщої ОД пкт Таб Бі Шет бю Щах Том ах ТМе дах сік лі ту беї Уві Ей БІ їес діа БО Шев Беї Бує бБаеї ТМ Зак сі сіУ ІЗЕ
М я шк хі ло То тях їй Лов лу Тяшто М шхч ПЛоеяю ЩУ Яке Тк Теж Му лою -іж о сьі В ЕЛ са У СЕ їв св ШУ ОАЕЕ ЇЖЖ ЕгпВ кЕшШ хім КЕШ сша ІМ 1435 її 155 Ви
Уві бах Тхо бат Яви Сі вів Ге ТБх о бжшх біу УВІ Бів ТЕ Бпз о Бко ї
АЖ Її 115
Ж 7 тощо лин шин дон т ск Толі Те дим тн домо Жде Мді лу тних -ів хві іш бат шт 2еї Зі Зецщ їж Зеї їши Зег ше зді ха Ії1ДЛЕ їщО 155 іо тоб Фшян щмо Пощяе Тощирко 7 мя щу я СТА ЛИЯееня бжин шо ся ренні ЛЮ Жуля
Уска ж ЛлТЯЕЕШ «(УВІ ж ше бі ЇІЛЕ Сам їмжЖ п. дош о Уж ВІ ХА ИВТЮ ії й ше іє Те о БП Жах Мще Ля Тих Ма шу Тлящо Тлхє Мет ді Беж їл»є Швх міш ШУ кшОт сш лпБтТл шМЛШ шу а МДЕ шШбВ дух хви тім кКЖл шмш лвЕ хро тт тт ші У А якіх
Стеля бе То Пн ша що брус тяж ему Шу їх: Вкину п'я до би: лю Тих та: -у пЕщш СУБ ПІ пішБ ї:ІПІШ С6УЕ БЕ КІТ ЗУ ЕТ ліЖ БШшшШ сті ше ше гл 2 25 ва їі сл бут шах плащі Шо Тех Шиешо Шуєе Ше Луджшо Шамо Тдує Шоу Три Твої -ві слі в шеш Уві ле ше дво овІт в пу шт муж вже іцЗЕжшж це: 245 го ІББ
Ман тло дамо би мо ни я лк бро їх тато дл дя па ля пт о ліш ЗІ АЕФОІЇЛЕ Ес СА ЗІ 1МмМЕЖ Ок кі жі хі вла хі ле шо ЖЕ што
Ві Шієс Щек бут слі лтві Зак Шу о бен Лу Ту лудії бе прі: пла іх пі зас дю кІШ скайп УА ШОВ ЕлЄе Б!ЕМЛО ЕС ІК ВІ вЕЮ сіб хо І 278 го 2 тіло шо беж Бо То мя Ло поеми, Веуу Пі 03 лросую Сянмо Хощх ЖШаумо ж хе каш МІ сить а ІСУВ Оп Ж ШУ о еШЖО ЕЛ шжіМм СА озІіх 1УЖ ява ЗеШш ІВЕ
М Зап для а 25 Зх
Та баса пл яд б тн тм Ті тат Тишхя я жо сл ож тих тів Дт
Еш ж са Уді зежш хі дШейщЩіщпЕ ЗвВі їсвбя пів Зі дЕШ їшЖУ Цей Вт іш. жи хід пл шт щїУ іш вку пос Тлхщо Тіз сбтжю Тоді Тв Іл дк Хм Тл Вт Тв Обхи Віш бия ліУу Був лій Туш б Шев Шу Уві Сбеїг БЕВ уз Віз Беб БІ: біз РЕФс жит М жа тло тлі тяг тв тлі им тд що зт 074 ун: Мн М Піни М жа сх іл ІБ дод е хек шк ою ШК ЗАЛУ хат КЕШ А (ЗАЛА шт ЗА тТЬ
З 215 я вії Тек бю Там Фут то шо бет дшж 31 Лошм тік Тлоє щем сі сла ві ІУуї ТБжЖ їв БЇс Бо Шек Бу АБО Сі їйемз їЇББЕ Беж о Ббепосімй ві шо дам ие
Фо Товт СТ бу що Тиша б що3 лин 0 ра Пежо дім Дак йди пло Млд лтді ше шо веж ВШ ЗУ шжм хі шежЖ ЗАМ ЕПж Її БШшСО сОжШ АД о псож під ді та Ії БО піч Тихе піч Шах йавт ліз пі Бер піч д«м Би Сяє Тахо Ліву ть ох ша Ел шеш свт же У МАТ ЕЖО да ЗЕ ма Еш ШОУшЖ Ії: ШІ ШЕ зе за 285 за ше бід Те бета бБем сіє шах ше о бі Лоу тк Фе Туихщшо тушу тах
КІЩШ ХВвЕ и даю дж сл» Зі Зеї впе і пжа І1УШ сЕЖ ВУД СО їМЕ п, хо й жи і зі то Зх Тло Ше бро Лем піт і піл Вшм пуд що Фан лиж Док лі хі ЕОМ МУуш жет вІШ :5Еш ЗАЛ зЗійш За дЕЙ вїді ле ж Св ше са я ЗІ зах тт Ша що ллі Віз Там Шісє блем діло Теж Тур 073 м Тахо Жим о Тощту Шах тот
Мет Бі Пій дії Те піз дла дія Ж вп Ж за УЖ БЕЖ шШпжУ Зеш ШЕ я лит дхх под. ак кох
ЖІ ІТ СА УЖ
52 «дО шт ші я шо:
хі ЕІ
Ин, тот сш щем ші тя пічних пост яти отих, ка учня послідтвниішть осях «шля хш-ій» паннют
ДИЛИ Тит літ в сет тет жтуттину ттуутучнтщо я 1 и ЖЕ хдашот пзУшпідтстЕНЕ Еш ПпжЖЕЖшЬ ше лах пліт «ат т січ: Тшує щі тшум бурим пі Я Шк ду іш Жишу З'.ш щи лбодхх сіл Бі ш- Шем хі ше їЇгХ вію сек кКхЗ цех вів ех піІіЖ пвх пем Су вів
З : тги х 4 - но в «де ївех Ві Буш їй ЇБЕ СУ Їйх Бас о беї беуУ Щіб Кіз зви ЇВ Жух ЇВЕ
Бе па яд ож - ЖЕ же тот З тя Явно ж яю ТА ст у Фе 471 Товя шу йо Лют, Дунту о А зятх л Лду її- хім зшЕш БЕ ЗАЙ ат Зп КО Ну су КЕШ БАХ УЖ жа гл я я 5 пла Тов Тв Тощцо Зої Ша Мі шо Фр бу Луїзи ст сяк Тео тя п зад мем сш Буш аю СО шжеш пошЖ се їмйш за. ЗІіІй зу дош ЖЕО оо
В Ех шо
Фони Лу од Жюля що дин ум Мк Во т вою. уже оку ери т Фк теж шіма ле сли дже шеш лжї ЗА пі ІМ ЗІБ ЗУ цем шлш її шт
Я М ТЕ щі шеї Бен сім шШех тій: дз освіс Вів дю ТУх Тух ув сін Уді сі деп
Б їх п пог хо же твж Ті тя пі щі то Ло бас Лів Шфощшо бут» 073 бут тім бордо Тих аж АІш ШУ зжІіЩщ їм ЕМлЕ ща ААУ Ва КИш сх У ла М сх уУ БЖ шля ОО пи ле Іл їй іх 11 жк ст танк птлях т тенту Тан В «- пкен ж ТЕ тях ше чу
ІБж Уві Бей сі Бій БЕ Пе Вів о Ажу» Бис ТБ Зві ТвЕЖ бе рве БЕс з16 злих ої оон ре зоною
Тр Ж Дшяє сбтлаї Пл ло 3 тло жує Та Влщо тво Тошидо Лу фа тот
КЕ СХ ше сх най ше ат о вЗзіжЖ ж мул вл ТВЕх баз З Шу ви зай тд ож ди дод їз тл-о літу шу, Фішер блем нт пі Від о лтщл тину лід Влщ тет лад БІ Хе тів бех йвш ЕББйе СТуш БЕт о щіУ Вів УВА ТвБІ Таі Вів ТЕхшШ Уж Віа ж зак тод зд тп ог шле ап Мо пі Шах фит лохі Тиущ Вл що 04 ша пі тю ть бою Шжетр бщ То (іх ш-їУ ше Еш ва шУВ вав о щіУ сві шжІіМ І0Б5Е їімшІ ШУ БкІйЩ лях шуш ій
З ЕВ гм ІЕЕ
Зк є "ж
Фа о бщмо болі Тлгш Тая Ві щі до дня Да Тл Там Дим То) СПИ Фени (71 ух ех ЕХ хЗж Шу ІУХ вів пад о леш шех РУШ цецовяЕтжЖ ше БУ Еш а ш зх тах вих
М МЕ шо -х - т дош т сподкщю ТК. - го стела кт тих т шодо -е- діл ТЕ пе о Жшє МШящо вуст Ще Тр с зе дл лі тТівх Міш спри (ші -їп іЖш Буш джежЖ пів о яЕш шВХ ІУЖ шешї ЗУ зак оса ї1пЖІ НІ З сі
ННЯ тв роки сю кля ж ди дн ії полк т жа лю Тл щі оре, Певно ТТ зт пов ло
ЕЕ МЕ хі міЩ ШУ їЇПЖш о ЗшжА ів БЖ Ж сха А ЛУ пах
СДН п оІї шо ші шо хх п: леви ж бкшкО СЕ ЛЕК як тугу бів ЖІ мою Пілмеіщо тири тя питво ут зе дю штучна пл лаАЮВШВНЕ те ут ках тів кошт Празі тЖЕ «Ед погпідошність важки ланцюта звтитілаі дать Ех ст а: ам плає сх лм лодки см ув Дає суттю Фу (так отошеч ТЕ Тк Фе фі утік по ха У ВЗА су ХО ВЕ іа М КЕ сі У ШО жа ШОЕ ЕЕ АК а ї 5 17 Ех ї У іс З
Ша Тов Шок бо дає «ле БІ пл До стю што 73 ро ше Доу СтТетух шеї ОЙ о шжяеш Ше о шжш ЗУуш дія лів шт біУ шмлжЖж о ха жЖЛлЕ ля ХЕ ІМ за зе зо тоди ди дя Теж пд сних Її жа Шен тла бриття одн (лі лику лу
Жожух тес лЕш Ззїшф ті Еш іп о ІЛлЕ Кіш ЕЩ схіУ сл ІД ЕМО ста шк С ах шіш Те тів о шШшеє бдшщку бал м о йіФ ліз тіш ТУ Тиу Аіш Бут Шщшє тЛвх бла і їУЖ її ЖшЖеЖ Шш-Ї Зіу ЗУ Зі 1:21: Ії1БЖ її лів БІС Оле їІлХ сві. - -Е дого мя жд Мо тв 032 бо птн тм ло Сде йкм вх Ж бла Тлук Бе ер Чо Таж
МУ тів вищ о КбЕ її п Уві дех дус бею Ето лід мшЕ сь МЕ ше ЗУЄ пк -- -е шо ти їж Нм
Ж зон шу Хм То ія шен «7 Ж лу лу ТВ ка Тая гу завіх слу тТтми с АБУ пж шви ШЛЕ лож і лЕУ Їй іш Зжі І: ІДЕ СЕ шЕ еп пт бло ях -- бло З що ож би ІВ піФ Жди бак (3 мо Пхт Ша міш Тех бує сх 1 зів пів мів їСш жЖпе іт леї ше біУ КІШ гів вів ІЇЕ її о сбвзіу Заст їаш ше ї17 пл ж тод пд тм чл дин да відо дя ту Тато бла пет Жущшня лІщї шщіУ МлЕШ їж сві 1 БІ ві дек йет Вів Бех ТУ м Ж су ЕЖшШ леї ві їх хг з, її я їж тпншщо б ти влішо шко, Зди Сбшеє Таєшо Пд бСЛОяк о ла пт ЛО тк іш кі киев окІШ іп вів кКЕО сви леї цу сеї їіцщІ сеї ЗІ зЗ3у ЛІ вів 3
Її шоу я
Тощшало стляж тт Ст ошутх ЗЕ лож ду лат Пужлу биту ПЗ Зо бін пт тк пт ух внем ос-таіу ЗМ ше сві пЦУВОВБИМ ІЕЕ вп - Ж хім о яЖШ У са ї вх Уві дах 145 тож З ЕВ тд ж шлУм ВЕЖ іх сля бе Ши птл«х В То Люмає дрож 71 3 т лі що тя п Тен ПУТ тт-ї ів о вЕш шеш ЗАС ва о шн ІГїЖ зе сім стві пів Ї1ЙлЕ пе кт пів «ти її їх їх
Ту Лллно Дшяз Жах зло бо Тан шко у шу ди ів щі тк лящ т ням сх дж леХ січ шуй ше пеМ жу те хві ді ї ВБх Мі БЕЖо их 3 її дах Шах Шах Те со тСтТвУу піс Тех Тх Ії1в о бзш Бех сді Вам Міш пох
ЕЕ же ж Е ши За ІЙЛШ ЗАС І0ПЕЖ їУЖ їв Су МЕМ Уді лем пшЕ ШУ Ж лину плов
А: що ше
Пет Жиху Вбще ТМ Тит бід Бо Тед Тлдує Сі 3 Фет Тлоте Жщ сто Ва кІШ сЕеІЇ вЕпОЇлЛЕ ШеУжЕ жі ву 55 му сві Ім вит су леї уж ЕВ е«тх я дж ша шо ше М "ЧЕ тя Еш пок с ли пд ке уаку кт те они, У, Товт пон ст ку
Буш ТБЖ Ні ТБ Пиво шу ЕЕ Су Бхс дїв шт о Зіш їв ем ШЕУ БІ У їх 2. Ж як ях те етту сулрв, С як Ст шов ее --кя
Фен Ж лІщ пу Туш ЩИХ Тед Пе Тдшш Пен. Тож Беж бр б шк ляща СТ кІШ леї ді жде С»тещ хлве кБІЩ ЕШшО Му вЕЖО Му дЕш їЇпЕ пШем об сгет сів
ШОУ шо дек аю Молот ТЯ о Людину, 7 жня Ж тії у м ТО ТА я щої шжжЕ АЕЩ ІДЕ ЖЕО сВАМ і ШЛЕ ЕЕ МА Уі хв яЕШш жі ж пів іх шви ших што пе Тент сл щі Ж тю Шев о ба Лк Теж Мая пт прот ло їх лі ці т
ЗЕД ОКІШ ба ш Уа щу Бле дЕжМм ОЇЕДО ІїФУЇ хі мЕФ ЗІ ства хі хі пі те шу: шк шо ТОсая ШЕ
Сеод.с. т. з 7 пе Лог пох, Ер "СО хх с 4 ЇХ хх пек у шк аю тля тя Ту хх
Ел оліФф тлу - ТБ ШУ КІ виш ті біс сіб ї УХ впЕлОоОляеХ : пе ЖЕ ВЕХ шви їй шо чаї лящ шу лі Зоашм бюри Ліш З Тв Міжш літ Беж Ту Лу бл спі Тиха "ві щі шеї щі цпШЕщоїля са рес ніж Со до 1 іБЩ лап сві Уу шу житах зу щі тої ши 45 Іі5 ж ля стеку Товт стяги Тс ТРя. Ти бен, Пбтамо БВО5 що Тощеуто біт Ту ля біжу ду «т з-ім ІУХ шШщжЖ ОМВО шУує У-і шеш нг Уж від емо кЖшо -іош жит дів а ях селом лк жЖ-от лм ша
Тане Ли Тл шт х тв (жу Пл жо бічне фолиуж (тя ежну я лщо Лях з Уе їіМмхшх 118 ВЕ шу ВБІіБ шШеж ЕС тій БІТ ДЕЛ со ЖЕ зів Ві шу ї ї ї ї г 5 хг еле зт шоу АХ. шо а ЛЬ ем нях, аж, ФАшее СБ ТУ «сб ту ж Топ Я п и М Фони то ап оО ОХ о шишшо жшт ше ш смт вус іа шу дл уж сь хіх ха ше шх
ЕЕ ла я першо тв Тоні ТТ лову ст ня пу бат Пеня Вау шу шу ТА тн їпш Су іш хі шШУв ЗаАУ ЕЖІПВв ЇІЖЕ БЕ ОЗеЕІ АБО ЗІ ніж Уві стат ПЕ сх тот щі шш ші ше бік ше ще бут їз Че пйзє Вим о фдшея Тея Тохщ о Тіє бро лЗікот Шут, Лід ї -зімд сеї ал скдУу жі Жшт мій впжЕмй вЕТ ІЖ Му ІіпЕ БЕ ЖЕО КІ ВІ я ШЕ за НЕ
Тож, бе Бо я Туш сля лох Тек пи у Тож, Сбєюзян Жук Товт. бо я ТІ т іс АБО свя АБ ЗА У леж ЕЛЕ ЕТ ів ВУЖ ех злу св їпж Мі ЕЕ лиж ші г ах г
Ух же ЗІ
Тита Лак дит о Тиво Піч пі іс ам лі ба шах сво Шале 7 де Щі т ду сшевІ вит ішв зі ій Зі вАзлп о Зді вв освІїІ ЗУ шШЕш хі Кв ніх по сі, ОВ тк шех спожи ст. КОЛУ т я т г бо 4 баня бю «ТО дн Ужзш Ду пошщх Хі Тодиох Лос мен мох і іожх ідо сет між ШЕ ФТЛЕЖ АТ Уж (ОБУ І севВЕ шт лев КА же ши дж
БЕ кас За пшіє Те
МАК МУ
ЕЙ
«ера ОБОВ ких іш чі я пу поля тт ж вно КОЖ
КОС Ох 0 СЛелвкстяєтв сти ет ств ол т здо Дд вил ши шал яв на ва Кн В МК «ШОЮ ет : «ВІ тануциат
М лани их, тт тт т сли дадуть зятя чо Жах туш ВІТИ допо ть лрЕ ЖИЛЕТ лі ЮТЬ жави ЛЬ Ла «ап» ща
Хшх 7 лю Ми блУюу б ша Тент ХЛ шах їшуи Жах В'яд Жах лі ле
Еш ол АЖ ах с ТМ сват шжеХ мя під оеш пи ЗЕ ліж де Ї са са 4 2 їх їх
М бу ЛІ мо ло тя 0 Шу В'я дщ тл1ч щ то бля ту'ющ у Лтюх
БЗЕШ Фгжщ жа 1 шІіс5 І1ПШ Ж Еш паж ЖЕ схід вп і КЕ птшш 19 -х як -рт у шою У тож ідо отих тех сік пт Ти: Бех їла; Тед Є Шу Тл; о Тувлло Тишт; Та пи вав .шщ І1УЇ іх Ат ОВ жи ау ШУВ ше ло муж їв БУ ді
ЗЕ п хх я ЗА толком лм о Ду тім оті Біла сім ла та ВУ дм битва ладом тім іш вЕшЖМп оОіБї яАжЕщбЩ їІпЕ оцей мів сій зач УвІ ЖЕ пек віщ шпе сб осі у
КОР -Е ЕІ
Фо 013 лж дод слау тю пж тк ша тт тик Ті Жак бле То пт пе
ША У шЕЖ са ІїІБТЇ В Б ле ех їм о ї1йлж їде сСеш шт їв іл кшо п Зх ва т дж їх с шо б Ву башту Ля бевує о ням вд дл щі Шо ошо ба 0 ди лен Пеня Пк,
Шш-щЬшенЕШ МЕ ліф Ії1МДЮІ ЖЖ Ії Оошж Зат мів пав о .шЕ А ІТ КЕшщО ТЕ дае щг п
Фо тУ -З тру Ша ст3лУ Фо стіл Му Теж Тошя ла Тіш о лЛухд ду тіву лІщі піщ Мі іпш вле са У дж ЗАУ їж шШУушЖ сен Ззащ зов ву ах ї1пІ Уві під лів пог ЗЕ, ІЕЕ шли СИЛУ пу берет Же щі ща т) на б ЗЗжин Шмня де дшх, 3: й Тк тат бом шжЛош леж хі БЕТА дош шт кКшл Ето шяш АВАЛЬ міМ ее жк ВЕ сті
Е г лк її: іже іш
Тісш В Шах лУщ бла бак Та Тл Вам ди Що Тахе Ще фомся ті: Б іпІ вів сеї ві чао сш ев і дЕжп вал о БУля Ії Еш мІЩ сад мів ча чик ча
РЕ А о тТокдо ло т Лем Тед лк пет дв Влщотошум лм Фе стлях пд дом Пх ув жд ст І1ШЖБ Оу са БЮ Ей ВАВ о шем ЗА ОошЕЕЖ слу яви ле ій 145 ї5Е іже їЩО їйлалаз дек біо мом сті я Ваш ри о Тло хх Жди фак обєм бднм Тошжіх бе ча ошщех ві ї1БЕ ій зІіт НЕБО Їх о жеви пет іїБї ІїЧУЖ сдшеї Мей осв лит ї-- у ї-Е Її іг5
Фея фін боді лю точ Жах о сїня що Ху беж 1 ин Мі шо Тед ЛК лк ля ВУ св 1 ЖЇ сс же ш 00УБ бо дО ЇЇ ха м У діх УББ са їіУЕ їжи 15 СУ ся еежшо їтл:8 блд тям ші шо ті ія тощо щу; б тям баг бдох під УЖЕ сіл хі ІїІПЖ. пІшЖ зЗіщш5оЗшУу ША ЖЕ пшеш КЕШ Уа їІДдЮ Це сш шт лит тт
От ж шоу пещо щоерт Вокер сту спі тк
ЕП ВЕ МЕЧ сх хім ШУ сш их «оту ет чем шах
Є 0 Ж атд длту отити т тити ми Я ус хай зптучна пттліщтвнаштюь. сли тем сло пдщрмрют бшшт паеншЕЕ
Мить бт т туту т т ет до дути то роту дра тю Тлащі хе мшплідсжвністшв швоалотІ о поашішего Еш тіва слава ся ОС тлу та ож Тож тт Сп ХЕ, со ТЛ ою Тл вх ж тло от Стлююом, лях божих
ША жд сват ім Хі сі сеї зі ЗУ тіУ Уві ЗА ст БІС ЗАТ ЕХ ї - їх їх
Фрдом о Лодея бу Тадшує Шдож бах Ша М Же бля: іш о 5щух ЛЗ пед Під учи теж їм вЗшщ іже ву Ст Ззеї вів геї Зіч Бпж- ваз пе іп ій ї1УЖ теє Мште Шах о бує Паї их піт дів о лбет 1 Туищо січ Тов січ ТеУт ТІ їхо Мат ек ТІБ Заї до сію діа Бжхо сі Був сіУ Бе осі їБр о їі 35 я «5 пла пі т ші що Ян ду СшУу Яд бро т що фам о Лант Вл бу ушу Тиваух мах шАЛ діт ПпІШ БЖ ЗВ лвш Б5Ш 1пш їж пЕЙ 1Уї піш БКшШ пе І пд 5 ВІ
Тдтє Ще Вт біню тю туш Ши Вет дшу, бем Віз Лето щу пу тиштх я мит льжК йо дж ТМ дв ше ешш мн с мів Оув о йляхХ І Б ЕБхрЕ ях ях -е до їх РЕ я ше ток лою ЗД бря одяю ТокнМома Пе їх боже бю с дю ТЕХ тако Піка бух ем осів Мат совїш лашжш їв Еш Мшло сад же ІТ А Уа Ії1УЖ Б ВЕ ШУ с хіх В
ШЕ Еш -
Віз Ша Лиш Ту Ска сптях СК Пет обокжу Біо Віз лек о Ту тах пт пл дів сеї шжм ІїУШ ЕББае с ЕЦПе шт Ж еп ів Ії1УЮ РЕМА са ПА її її 11 тре ліки. Мало те бат сш ших ДІ Дах Те Лолщо пліч ето Ше сла бма іпш ЕТ Ужі ІПпжЖ ЗІ ШЕ ШІ лів шеш Пп Шут ау хто ШЕ ва ЕЕ уч хист че щАаАш же яошод. ет: лох Зі -У щи ам о шлущу Тло Шу б шу с Пл пью хто і тя
КЕШ ше во шшсб шешЖ лех сОошЕ ЛвЕК їм ле сАЩШ сті Ії1ДЕ ді вив жо ав шт я плах бе Товку лХщ Лу Бу бЗзжум о іа Тебе ЛІ Шяте лу тік щі дах тку зіУу с-ще Бей Уві шУув о яви о .0УЖ ке Її Зім Бїт УВІ І1лж Уві ЗеЕ ШЕ ча чових І щш хг іа їі ід їі тд Же сі В'до Тдм тЛкуУ Жах спле пдл ля я тлр щУ бе Від щі отв
Вт лм ші пів сечо п ЗШ зі Ужі мі їімІ Кпе хг о ліж жі Шви їжа 170 і75 пан оШесх ЯХах с Тивсоо Ток Шах Тов даху Дам Чаї лі тім ЗІ бто Пд шип о ше жеЕ зу Шез їшУЖ спеш іл сеї ше Ж ві сві ї10пЕ Бі БЕ ся зп зп тдп
Еш 5 о
Же Ман о тод Зк лю т кує як Тло ей шм Ми йшх Ме що лк лит ше шящ їв шу шпЕ Со т ЗХ ААУ ісп ж АБ ті ЯМ пов о ОЦшжКЕ КЕ а пл зл. і5Е ШЕ ОВ
Фе Ваше Ті Тишу б бу Татд о дом Лід лом Тит Ти Ши хо бами Ват Тлук вІ АБ ІЇІйпХх їує уві БЮ ії ха йдхс Уві Зій Бшт Пує пвЕ суш яшп МУ заг зч пк --У щі -ш-й теж ша тк сю Ли Тумба ух ДЛ Беж Тала Лошує сах стік пох дпЕЖ о дпаво'іпйш -»ОЮшЕ вБшс КЕШ ше КЕ під КЕ схі М іш М Її У хі КЕШ «ет сект тет, -т тхІ5 жЗО Ж шо ж тт х я - . - - т ту т х. - г
Таж Маїі бе ївз Бе БЕ о БЕс Бе БЕФОЗ Бл Ваш ТБк Беб Ме хів ї8вЕ ше Ж- о БЛІЖ ЗБЕ ш4лх ех В ів сх ла Тл 55 дожи тіьк фут 11353 Згщо тм старе б її лад Ваши Маї Фе Шлов ся бе паяецх кпш КІФ с: 5 сві їйШ МЕ ва Ук УщіІ АБО Ко хжш паж хім шив
Е- ЕЕ ШО
Фу, й.ллю що Тяещшо Фшо йшт тлу Тегу їде сля Ло 03 а ші шо ут
КЕШ лїхд ЖІ ШК Кпе АЕК ЇЖІ щЮЕ Уді ВЕЖІ зоіщ ЗІ ЗІ сжа пі дЕКЙ що То ютер Таж тя Чл В х Ж Ре Лех б пт пів Був ім ПУБ о кКшФ дж сіл ЗАС с.ахуХ їУЖ вдЕТЇТ жеІ ЇМ І яЕФОозВа щи ТЕ. ЖІН
М код же ок Ху до тод Ст Тл Тодзито л т. ло М одул пусто лдт Зфашеі 1ТОт яко Тов яшу ЛО» ч--щі вх тЖжі це їпЕ с-жаі сем пі Зібл АШшЕ їх пе вва -еіУ ОУЖ тій 055 ЗЕй 15 32
Тзжж Лодзі Пи що тях Маї Сх бет Тл» Від Тшм без віз Шш-то Ті ії Ти» іУуш ШУ соУуш шт ві леж дп ме вав ін БІТ вів Ж п18е са чуть пози лохт. ад яю «ШОЕ
Пе т шию лит В ол опт тя тою, я, Малих Тс лини Тпт тр щ Лелюк ую іш 1 шеЕЖ пЦжВ во о шжЕ сю ігр КЕШ ВЕК со кшсТ ост ства Ії ІП
Сх си ог
Оу же шо
Тел дис ето Ще боуту 115 ТР: Мщ- тів Тл бен ім Ме бе Тов стих
Мей жит виш У ВЛ ім 35 сів ї1мйХ Сом вжем зі УВІ ше ї1еБ ІцЕ
ЗБЕ ЗЕ з
Тл єе тод ті бле (тля Пи гу Ти Жук пути ТО пот. 7 я дя теє ж -еМа шеяль ж шеУЕ -ІіУ еп ЖЕ КЕ леж Наш я вон сша са ЕЕ Зал ти ат аа де Ви пллх А бен лає шт хо бач Тахо ПЛ бе Принт би ЛТ Тшя їех Автосвіт зі Ежште сій бек АБУ їЇ І ву 4плжІ іпжї втЖт КІШ ЖІ Шх
ЕХ ЗВО їв виш
Мат, Мат й стіл ще Поащо ЄП т. зоотехнік хо рю М бошнуі тхт вЕш Шеї лЕЮ сі лавЕ де ЕЗЕ дова ВУХ Шет гУуз ПУ ІБЕ зді яЕр о Оу ке, дій пів ж зіш іт їехї бЕЩ Ітв зіп сім сіє вжи З-ІЇ Бе бЗет сувз бек уві геЖ Ніж І шт для дол ж шо ЗХ пт Твлі ші є бЧет Біо там тк ст т Даю лошу ЩЖоко лошу: Ждх Село Мт ах під мен піз вл пі їУЖшЖ їЗЖ ЗіБ ії щеї сїс55 Б5еш пйшМм о сеї КЕЕЖО А дж ша дах жд Екс чо
НЕ подо ті
Дт став ща пох тлет сша ЕК чав штучна плолпідстЕністеЕ «ДОВ
ДЕ А нову учт в лпавишЕт
Шут Птн сти ит пи нт песня деле тра То шо млтпіІдлеЕна ств пегВУІ пранмОиКш ник шІі а ХХ дою ді «дата щі
Толя т поля Тошлх тім пл Жщу Пий; дом бр Тодлу бдшеу Що бшем о ллаї план го 5 с: шик ШУ аг пет Іс пі сЕЖ зем ож від о сш ЗУкі І ії 5 МЕ І ват Бкт Уві ТЕ Іжіє ТВІ ств бух Віз деш бій Агро Уві тім ТІБкобвхЕ чвї вів тишо туУк лій лів чи пі Був дів пкт Те Бай о деи Ті тя я Код я ит ще я жу му Е я яд ся зм кгя ж ско їж Їше ІМмшІ Жеї Ткпхї дЕш пів ЇцУ сі УА Рус ек ВЕщ ЕБНае ех тіу
Ват сіу Вежш світ ЇВЕ дер Епе ЇВйІ БЕкМе тв: т1їі5: Баг йех їз бів шЕо пуп двББ Іл дів ІДх ТУХх їУк Св Піп осів; тух Яавх Її Те Ак шШех
Епе сі іп 51 ТЕ ПУ Ха3і сій Тіз Бує Акт ївх Уаїі бів Аїв БкоО
Зет ві бле Ті Бе БЕжс Ето беж Баш ій Біб їви Був Евх спі Тпх
Зід бах Уві Уві їв еш бек: дп о Зжп БМЕеЄ ІУШш ЕШшО джу сій дів ШУ
У дів їжа Був Уаї Візв вВЕп Вів пец Піп Же сі АБИ дех тів ПІ ех Уві ІБх 51 віл ази жїехш іс Ар Зах ІБ Тух Жеж їз Яек ШЕ
Сеа іш УВА Тих Мов осіт; ті Пеє Жех ЗшЕ Ехо Хі ТЕ Був Же ЕМЛЕ ап оби о тіу сів СУ таоше ВІ

Claims (26)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Кон'югат антитіло-лікарський засіб, що містить: анти-СЕА-антитіло, або його антигензв'язуючий фрагмент, кон'юговане з токсинним лікарським засобом за допомогою лінкера, де анти-СЕА-антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга та варіабельну ділянку легкого ланцюга антитіла, при цьому кон'югат антитіло-лікарський засіб являє собою кон'югат антитіло-лікарський засіб загальної формули (Ре-І-У-0): Н Ре Г- х- М сн. п -жЖфш Е в, М о ГеОоН о ;(Ро-І-у-0) в якій: у є -О-(СВаВе)и-СВ'В2-С(О)-;
Ва та Е? є однаковими або різними та кожний є незалежно вибраним з групи, що складається з водню, дейтерію, галогену та С.-валкілу; ВЕ" являє собою С -вгалогеналкіл або Сз.єциклоалкіл; В: є вибраним з групи, що складається з водню, С:-вгалогеналкілу та Сзєциклоалкілу; або Е" та Б, разом з атомами вуглецю, що до нього приєднані, утворюють Сз-єциклоалкіл; т являє собою 0 або 1; п є десятковим або цілим числом від 1 до 10; Ї є лінкерною одиницею; Рс являє собою анти-СЕА-антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга та варіабельну ділянку легкого ланцюга, де: варіабельна ділянка важкого ланцюга включає НСОКІ, НСОК2 та НСОКЗ, представлені у ЗЕО ІО МО: 21, БЕО ІО МО: 22 та 5ЕО ІО МО: 23, відповідно, та варіабельна ділянка легкого ланцюга включає І СОК1, ГСОКа2 та І СОКЗ, представлені у зхЕО ІО МО: 24, 5ЕО ІО МО: 25 та 5ЕО ІЮ МО: 26, відповідно; або варіабельна ділянка важкого ланцюга включає НСОКІ, НСОК2 та НСОКЗ, представлені у ЗЕО ІО МО: 21, БЕО ІО МО: 47 та 5ЕО ІО МО: 23, відповідно, та варіабельна ділянка легкого ланцюга включає І СОК1, ГСОКа2 та І СОКЗ, представлені у зЕО ІО МО: 24, 5ЕО ІЮО МО: 25 та 5ЕО ІЮ МО: 26, відповідно.
2. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 1, де анти-СЕА-антитіло являє собою мишаче антитіло, химерне антитіло або гуманізоване антитіло.
3. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 1 або 2, де анти-СЕА-антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга та варіабельну ділянку легкого ланцюга, де: варіабельна ділянка важкого ланцюга має амінокислотну послідовність, представлену у ЗЕО ІЮ МО: 9, та варіабельна ділянка легкого ланцюга має амінокислотну послідовність, представлену у ЗЕО ІЮО МО: 10.
4. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-3, де анти-СЕА-антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга та варіабельну ділянку легкого ланцюга, де: варіабельна ділянка важкого ланцюга має амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІЮ МО: 48, 49, 50, 51 або 52, та варіабельна ділянка легкого ланцюга має амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІЮО МО: 53, 54 або 55.
5. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-4, де анти-СЕА-антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга та варіабельну ділянку легкого ланцюга, де варіабельна ділянка важкого ланцюга має амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІЮО МО: 52; та варіабельна ділянка легкого ланцюга має амінокислотну послідовність, представлену у 5ЕО ІО МО: 53.
6. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-5, де анти-СЕА-антитіло являє собою гуманізоване антитіло, що містить каркасну ділянку, отриману з антитіла людини.
7. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-6, де анти-СЕА-антитіло являє собою гуманізоване антитіло, що містить каркасну ділянку, отриману з антитіла людини, де каркасна ділянка варіабельної ділянки легкого ланцюга включає одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з 2У, 420, 44М та 71У, та/або каркасна ділянка варіабельної ділянки важкого ланцюга включає одну або більше зворотних мутацій амінокислот, вибраних з групи, що складається з 481, 66К, 67А, 691, 71М, 7ЗК, 82Е та 82А кг; де сайти зворотних мутацій є пронумерованими відповідно до схеми нумерації Кабата.
8. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-7, де анти-СЕА-антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент містить константну ділянку важкого ланцюга та константну ділянку легкого ланцюга антитіла; при цьому константна ділянка важкого ланцюга є вибраною з групи, що складається з константних ділянок ІдС1, Ідо2, ІдДОЗ та Ідс4 людини та їх звичайних варіантів, та константна ділянка легкого ланцюга є вибраною з групи, що складається з константних ділянок к та А ланцюга антитіла людини та їх звичайних варіантів.
9. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-8, де антитіло містить константну ділянку важкого ланцюга, що має послідовність, представлену в ЗЕО ІО МО: 77, та константну ділянку легкого ланцюга, що має послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 78 або ЗЕО ІЮ МО: 79.
10. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-9, де анти-СЕА-антитіло містить важкий ланцюг, що має послідовність, представлену в 5ЕО ІЮО МО: 80, та легкий ланцюг, що має послідовність, представлену в 5ЕО ІЮ МО: 81.
11. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-10, де п є цілим або десятковим числом від 2 до 8.
12. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-11, де п є цілим або десятковим числом від 4 до 6.
13. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-12, де У є вибраним з групи, що складається з: о о Зо ЕС о о о Зо зе о о о я ех не о та о ; де О-кінець У є з'єднаним з лінкерною одиницею Ї.
14. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-13, де лінкерна одиниця -Ї - являє собою -1 1-І 2-| 3-| 4-. де Ї" є вибраним з групи, що складається з -(сукцинімідил-З3-іл-М)-М/-С(0)-, -СНа-С(0)-МАЗ-М/-С(0)- та -С(0)-МУ-С(0)-, де МУ є вибраним з групи, що складається з Сі-валкілу і Сі-валкіл-Сз- вциклоалкілу; 2 є вибраним з групи, що складається з -МАЧСН»СНгО)р'СНаСнНегС(О)-, С- МАчЧСНгСНгО)р'ЄНгС(О)-, -5(СНег)р'С(О)- та хімічного зв'язку, де р' являє собою ціле число від 1 до 20; ЇЗ являє собою пептидний залишок, що складається з від 2 до 7 амінокислот, де амінокислоти є вибраними з групи, що складається з амінокислотного залишку, утвореного з амінокислот з фенілаланіну, гліцину, валіну, лізину, цитруліну, серину, глутамінової кислоти та аспаргінової кислоти; І" є вибраним з групи, що складається з -МАХ(СВАЛ, -С(О)МА-, -С(О)МА(СнНе)- та хімічного зв'язку, де Її являє собою ціле число від 1 до 6; ВЗ, В" та 2: є однаковими або різними та кожний є незалежно вибраним з групи, що складається з водню, С:-валкілу, С:-вєгалогеналкілу, дейтерованого С'-валкілу та С:-вгідроксіалкілу; Ве та ЕК" є однаковими або різними та кожний є незалежно вибраним з групи, що складається з водню, галогену, С:-валкілу, Сі-єгалогеналкілу, дейтерованого Сз-валкілу та С.-вгідроксіалкілу.
15. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-14, де лінкерна одиниця -Ї - являє собою -1 1-І 2-| 3-| 4-, де о о хх )в! Ї! являє собою о , та 5 являє собою ціле число від 2 до 8; І? являє собою хімічний зв'язок; ІЗ являє собою тетрапептидний залишок; Її являє собою -МАХ(СВУВ)-, де ЕР», НЄ та К" є однаковими або різними та кожний незалежно являє собою водень або С-валкіл, та ї являє собою 1 або 2; де кінець І" є з'єднаним з Ре, та кінець І" є з'єднаним з У.
16. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 15, де ЇЗ являє собою тетрапептидний залишок гліцину-гліцину-фенілаланіну-гліцину (53, ЗЕО ІЮО МО: 92).
17. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-16, де -І - являє собою о о о о Н Н М М м. Н Н Н о о о ,
18. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з п. 1-17, де кон'югат антитіло- лікарський засіб являє собою кон'югат антитіло-лікарський засіб загальної формули (Ре-і а2-М-0): о е9 в о ї Мо З Ре ХМ як о Ми Ше І. | в во о М Ї 7 сн, о М /Й ц- п чнпОон Е о ; (Рео-Г 4-у-0) де: М, 12,13, ІД», А та ЕК" є такими, як визначено у п. 14; Рос, п, В", В2 та т є такими, як визначено у п. 1.
19. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-18, де кон'югат антитіло- лікарський засіб є вибраним з групи, що складається з: о о о о Ре Н Нн Нн ки А, КАХ, М Н Н Н Е о о о о / о М що І Ж п КОН і о з о о о о Ре Н Н Н кит, АКА, М Н Н Н Е о о о о / о М що і с п кон ї й о та о о о о У
Р. Н Н : Н 7 ки, АК Н Н Н Е о о о о / о М що і с п кон і й о з де Рс і п є такими, як визначено у п. 1.
20. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-19, де кон'югат антитіло- лікарський засіб є наступним: о о о о У шо ори Ж МА М зр тр Н Н Н о о о о Й о Е М О- М і о мон о де п є таким, як визначено у п. 1; Ниб3-13 містить важкий ланцюг, що має послідовність, представлену в 5ЕО ІО МО: 80, та легкий ланцюг, що має послідовність, представлену в 5ЕО ІЮО МО: 81.
21. Спосіб отримання кон'югата антитіло-лікарський засіб загальної формули (Рео-І а-у-О), що включає наступні стадії:
о в? в' о ие З Шк - | в Ре Ж во о о М / в: сн, ОМ Иттая -- Е чнпОоНн (са-у-о) о о ев о ї ие З Хаос и | вв в оо о М І 7 сн, о М /Й ч- п ЧОН Е о (Ро-ї-х-0) піддавання відновленого Рс та загальної формули (І 4-у-Ю) реакції сполучення з отриманням сполуки загальної формули (Рео-І 4-У-0); де: Ре являє собою анти-СЕА-антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, визначені в будь- якому одному з пп. 1-10; М, 12,13, В, Ве, ВР-ВУ, т та п є такими, як визначену у п. 14.
22. Фармацевтична композиція, що містить кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-20 та один або більше фармацевтично прийнятних ексципієнтів, розріджувачів або носіїв.
23. Лікарський засіб для лікування захворювання або стану, опосередкованого СЕА, що містить кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-20 або фармацевтичну композицію за п. 22.
24. Лікарський засіб за п. 23, де захворювання або стан, опосередкований СЕА, являє собою рак з високою експресією СЕА.
25. Лікарський засіб, виготовлений для лікування та/або попередження пухлини та раку, що містить кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким одним з пп. 1-20 або фармацевтичну композицію за п. 22, де пухлина та рак вибрані з групи, що включає: плоскоклітинну карциному голови та шиї, рак голови та шиї, рак мозку, нейрогліому, мультиформну гліобластому, нейробластому, карциному центральної нервової системи, нейроендокринну пухлину, рак горла, рак носоглотки, рак стравоходу, рак щитоподібної залози, злоякісну плевральну мезотеліому, рак легенів, рак молочної залози, рак печінки, гепатобіліарний рак, рак підшлункової залози, рак шлунка, рак шлунково-кишкового тракту, рак кишечнику, рак товстої кишки, колоректальний рак, рак нирки, нирковоклітинну карциному, рак яєчників, рак ендометрію, рак шийки матки, рак сечового міхура, рак передміхурової залози, рак яєчка, рак шкіри, меланому, лейкемію, лімфому, рак кістки, хондросаркому, мієлому, множинну мієлому, мієлодиспластичний синдром, пухлину Крукенберга, мієлопроліферативну пухлину, плоскоклітинний рак, саркому Ютїнга, системний амілоїдоз легких ланцюгів або клітинну карциному Меркеля.
26. Лікарський засіб за п. 25, де лімфома вибрана з групи, що складається з: лімфоми Ходжкіна, неходжкінської лімфоми, дифузної В-великоклітинної лімфоми, фолікулярної лімфоми,
первинної медіастинальної В-великоклітинної лімфоми, мантійно-клітинної лімфоми, малої лімфоцитарної лімфоми, В-великоклітинної лімфоми багатої Т-клітинами/гістіоцитами та лімфоплазмацитарної лімфоми; рак легенів є вибраним з групи, що складається з: недрібноклітинного раку легенів та дрібноклітинного раку легенів; та лейкемія є вибраною з групи, що складається 3: хронічної мієлоїдної лейкемії, гострої мієлоїдної лейкемії, лімфоцитарної лейкемії, лімфобластної лейкемії, гострої лімфобластної лейкемії, хронічної лімфобластної лейкемії та мієлоїдноклітинної лейкемії. -0 БО ; дея - Нив3-13 Х винен «Жов О4003 вин НиєЙля ; - я Ниб?7-14 5 ул х Нато8-32 ай З о 10 20 30 ЗЧасіголі
Фіг. 1 с яв ЩІК МЯХ познтннний ШКО - КЕ НСТІб негативи СА) ; 5 Зв . . - . о. ж ой, о яв ЯК Же Я -
Фіг. 2 Хбхетесь кер жени; кеенстрзношплянката ІТТ -- ВН - Псрожнін зиетральсЕ НОЇ З зваа ди НИТОК о я во лк ко седан в: Нет 1 АТ А Ттпре їв ор Ат о я Як «аю НОБІЛЯ. вати
М. аінайий --- Мері ЗА-щМЗВ Пре в 5 за 35 хо Хат їлвів)
Фіг. З
Модель пули коеетрзвстантята ІТК и - З я х - х їх І ча т г т ж її . т іні жав вв ху, а І Ек пай « в ще «й - який ий я я щі щит т і Їх Я й жу Щи до -ї Я в дит г. я 7 КА а, я 7 ще а ШО Си Б ооо Кх ще че Зк чех ке че З й Я
Фіг. 4 Й 00 Порожній вопттоль ЕН) Модель пуюлинв коснотизноплянтака МЕАТЯЕ чо ВЖК Я А пк ко о з. НЕБУ. 13 В Вк Ж зво дження ож ВИТ. тр Ж т сш Ви т-14-2.А тій х й тал зайве 148 е ВТНХ. М вве. Кот з я ЖЕ ож х ж - МНК ЮК х рій я ше дат е каб Й до т ай ВОНКЯ Я А, яв к т пт сосен - ряді ЗА ЯМІ ЗЕ В тру тт а в 15 т о 85 Фріг. 5 Міолежь пуслини ксонотранотлантята ЗК ОУЯХ
Я. ж . .
1.5 Е В й В ; - ; й х 1.0 ї ж : г т 705 У, т й Фе койок ; М а ж х з й ке о, й т енер оон В туя ях де з дк ще ж як мк ож ж й ки їх ЩІ 7 х їк пох ще и , - , я ях ких ях К че А щи дії КИ ; х ще ї ща - А ек Фе А З
Фіг. 6
UAA202202371A 2019-12-16 2020-12-15 Аналог кон'югата анти-сеа антитілo-ексатекан та його фармацевтичне застосування UA129521C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911294912 2019-12-16
PCT/CN2020/136396 WO2021121204A1 (zh) 2019-12-16 2020-12-15 抗cea抗体-依喜替康类似物偶联物及其医药用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA129521C2 true UA129521C2 (uk) 2025-05-21

Family

ID=76478217

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA202202371A UA129521C2 (uk) 2019-12-16 2020-12-15 Аналог кон'югата анти-сеа антитілo-ексатекан та його фармацевтичне застосування

Country Status (13)

Country Link
US (1) US20230055408A1 (uk)
EP (1) EP4079761A4 (uk)
JP (1) JP2023506805A (uk)
KR (1) KR20220113747A (uk)
CN (2) CN118453897A (uk)
AU (1) AU2020410460A1 (uk)
BR (1) BR112022011632A2 (uk)
CA (1) CA3163130A1 (uk)
MX (1) MX2022007312A (uk)
MY (1) MY209735A (uk)
TW (1) TWI887316B (uk)
UA (1) UA129521C2 (uk)
WO (1) WO2021121204A1 (uk)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2025509334A (ja) * 2022-03-09 2025-04-11 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 抗体への抱合のための方法およびツール
WO2025106278A1 (en) 2023-11-17 2025-05-22 Mersana Therapeutics, Inc. Treatment of cancer using b7-h4-targeted antibody-drug conjugates
CN120504738B (zh) * 2025-07-21 2025-10-21 南京滴力生物科技有限公司 一种抗δ样配体3的单克隆抗体及其应用

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CN101658672B (zh) * 2002-10-08 2017-09-26 免疫医疗公司 用iii类抗cea单克隆抗体和治疗剂进行联合治疗
PT1725249E (pt) 2003-11-06 2014-04-10 Seattle Genetics Inc Compostos de monometilvalina capazes de conjugação a ligandos
CN102850400A (zh) * 2011-06-30 2013-01-02 周文强 喜树碱衍生物及其制备方法、药物组合物与用途
IN2014DN06132A (uk) 2012-01-13 2015-08-14 Gen Hospital Corp
US10195288B2 (en) * 2012-10-11 2019-02-05 Daiichi Sankyo Company, Limited Antibody-drug conjugate
DK2900277T3 (da) * 2012-12-13 2022-04-04 Immunomedics Inc Doser af immunokonjugater af antistoffer og sn-38 til forbedret effektivitet og reduceret toksicitet
FR3008408B1 (fr) * 2013-07-11 2018-03-09 Mc Saf Nouveaux conjugues anticorps-medicament et leur utilisation en therapie
JP6427789B2 (ja) * 2013-07-23 2018-11-28 イミューノメディクス、インコーポレイテッドＩｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ， Ｉｎｃ． Ｃｌ２ａリンカーを有する抗体−ｓｎ−３８免疫複合体
WO2015069430A2 (en) * 2013-11-05 2015-05-14 Immunomedics, Inc. Humanized anti-ceacam5 antibody and uses thereof
EP3973995A1 (en) 2014-01-31 2022-03-30 Daiichi Sankyo Company, Limited Anti-her2 antibody-drug conjugate
JP2020518655A (ja) * 2017-03-30 2020-06-25 江▲蘇▼恒瑞医▲薬▼股▲フン▼有限公司Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈｅｎｇｒｕｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｏ．， Ｌｔｄ． 抗体−薬物コンジュゲートの製造方法
EP3606964A4 (en) * 2017-04-03 2020-12-09 Immunomedics, Inc. SUBCUTANE ADMINISTRATION OF ANTIBODY DRUG CONJUGATES FOR CANCER THERAPY
CN113906053B (zh) * 2019-06-26 2022-10-25 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗cea抗体及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
MY209735A (en) 2025-07-31
CA3163130A1 (en) 2021-06-24
BR112022011632A2 (pt) 2022-10-04
MX2022007312A (es) 2022-07-13
KR20220113747A (ko) 2022-08-16
JP2023506805A (ja) 2023-02-20
CN118453897A (zh) 2024-08-09
AU2020410460A1 (en) 2022-06-16
EP4079761A4 (en) 2024-02-07
CN114729035A (zh) 2022-07-08
US20230055408A1 (en) 2023-02-23
TW202128228A (zh) 2021-08-01
WO2021121204A1 (zh) 2021-06-24
EP4079761A1 (en) 2022-10-26
TWI887316B (zh) 2025-06-21
CN114729035B (zh) 2024-04-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6817288B2 (ja) 新規な連結体及び生体分子と薬物との特異的共役におけるその使用
UA127450C2 (uk) Рекомбінантний поліпептид, що зв'язується з cd123
TWI609887B (zh) 新穎的抗原結合蛋白及其作爲治療癌症之定址產物的用途
UA125382C2 (uk) Антитіла проти людського vista та їх застосування
JP2024037832A (ja) 細胞の枯渇のための組成物および方法
ES2795818T3 (es) Anticuerpos CD48 y conjugados de los mismos
UA126441C2 (uk) Химерні антигенні рецептори, націлені на bcma, та способи їх застосування
CN109661400A (zh) 用于耗尽cd117+细胞的组合物和方法
ES2489641T3 (es) Nuevo anticuerpo anti-CD98
KR20210066833A (ko) 엑사테칸 유사체의 리간드-약물 접합체, 이를 위한 제조 방법, 및 이의 적용
UA125575C2 (uk) Кон'югат, що містить антитіло проти egfr та лікарський засіб
UA98762C2 (uk) Моноклональне антитіло, яке зв'язується з tat226, та імунокон'югат
CN106084053A (zh) 针对组织因子的人抗体药物缀合物
UA118950C2 (uk) Поліпептид, який зв'язує специфічний мембранний антиген простати та комплекс т-клітинного рецептора
CA2934617A1 (en) Antibody drug conjugates (adcs) with kinesin spindle protein (ksp)
CN109414428A (zh) 靶向血液恶性肿瘤之嵌合抗原受体（car），其组合物及使用方法
HU229776B1 (hu) Interleukin 15-re (IL-15-re) specifikus emberi antitestek
CA2990076A1 (en) Antibody drug conjugates (adcs) and antibody prodrug conjugates (apdcs) with enzymatically cleavable groups
UA119226C2 (uk) Антитіло, яке специфічно зв'язується з axl, та його застосування як продукту для адресної доставки при лікуванні раку
UA128906C2 (uk) Поліспецифічні антитіла, що містять тільки важкі ланцюги, які зв'язуються з cd22 та cd3
UA129521C2 (uk) Аналог кон'югата анти-сеа антитілo-ексатекан та його фармацевтичне застосування
UA118961C2 (uk) Антитіло, яке зв'язується з tl1a, та його застосування
TW202300525A (zh) 具有酶裂解基團之抗體-藥劑結合物
UA119167C2 (uk) Біспецифічне антитіло, яке зв'язується з cd38 та cd3
HU230586B1 (hu) Anti-ErbB antitest/maytansinoid konjugátumok alkalmazása rákos betegségek kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására