TWI910785B

TWI910785B - 一種連接子-藥物的製備方法

Info

Publication number: TWI910785B
Application number: TW113131794A
Authority: TW
Inventors: 朱義; 萬維李; 張宜英; 朱貴莉; 肖捷
Original assignee: 大陸商成都精西藥業有限責任公司
Priority date: 2023-08-23
Filing date: 2024-08-23
Publication date: 2026-01-01

Abstract

本發明涉及一種連接子-藥物的製備方法，具體提供了目標化合物的製備方法，該製備方法包括：將式a所示的化合物與路易士酸發生反應，獲得粗產物；所述粗產物經過純化得到式A所示化合物。該製備方法能夠達到產品的品質控制標準。

Description

一種連接子-藥物的製備方法

本申請是以CN申請號為202311077479.4、申請日為2023年8月23日的申請，以及CN申請號為202411139357.8、申請日為2024年8月19日的申請為基礎，並主張其優先權，所有申請的內容在此作為整體引入本申請中。

本發明涉及醫藥領域，具體涉及一種連接子-藥物的製備方法。

抗體-藥物偶聯物(Antibody-Drug Conjugates，ADC)是將有細胞殺傷效果的小分子毒素通過連接子連接於抗體上得到的具有特異靶向性殺傷作用的分子，主要用於腫瘤的治療和其他疾病的治療。抗體-藥物偶聯藥物所使用的抗體能特異性地與腫瘤細胞表面的蛋白質結合，因此具有傳統藥物所達不到的腫瘤特異性和潛力。目前，全球已經有12款ADC藥物獲得上市批准，並有上百個專案正在進行臨床試驗。

連接子-藥物是連接子與小分子毒素連接形成的化合物，是製備ADC的中間體，在決定抗體-藥物偶聯物的整體成功方面起著關鍵作用。

本發明的目的在於提供一種式A所示的連接子-藥物的新的製備方法。

式A

具體地，在本發明的第一方面，本發明提供了一種製備式A所示化合物的方法，其包括：

式A

將式a所示的化合物與路易士酸發生反應，獲得粗產物；所述粗產物經過純化得到式A所示化合物；

式a。

在一些實施方案中，所述路易士酸為溴化物、TMSI（三甲基碘矽烷）或TMSOTf（三氟甲磺酸三甲基矽酯）。

在一些實施方案中，所述路易士酸為溴化鋅。

發明人發現，化合物a在酸性脫保護試劑作用下，可能產生的雜質包括：

1）單脫產物雜質；

2）化合物a雜質；

3）藥物單元雜質。

以上雜質的產生均會影響最終製備的ADC載藥量（DAR），由此，在目標化合物成品生產工序中，需嚴格控制以上雜質的含量（單脫產物需控制在10%以內，化合物a需控制在2%以內，藥物單元需控制在5%以內），方能保證目標化合物與抗體的偶聯效果。

本申請發明人通過實驗研究後發現，以上反應中，相比於非路易士酸（如三氟乙酸等）作為酸性脫保護試劑，路易士酸（如溴化鋅）作為酸性脫保護試劑時，雜質含量顯著降低，尤其是藥物單元雜質的含量，可以低至不超過5%，甚至低至不超過2%，滿足品質控制標準，甚至遠優於品質控制標準。尤其是，當溴化鋅作為酸性脫保護試劑時，雜質含量顯著降低，遠優於品質控制標準。

進一步地，以上反應結束後，所述粗產物進行純化時，發明人發現，可能產生的雜質包括：

1）藥物單元雜質；

2）連接頭開環產物雜質。

以上雜質的產生會顯著影響最終製備的ADC載藥量（DAR）（具體地，一方面，式A所示連接子-藥物的連接頭中含有的丁二醯亞胺結構通過雙鍵與抗體巰基發生邁克爾加成，形成ADC。可見，產生的開環產物雜質不能再與抗體偶聯，進而影響載藥量。另一方面，藥物單元雜質的產生使得其與連接子分離，分離的連接子仍然會與抗體進行偶聯但卻不再產生藥效，進而影響載藥量），由此，在目標化合物成品生產工序中，需嚴格控制以上雜質的含量（開環產物控制在10%以內，藥物單元需控制在5%以內），方能保證目標化合物與抗體的偶聯效果。

本申請發明人通過實驗研究後發現，以上純化中，通過將一定條件的製備型液相層析純化與奈米過濾步驟相結合，雜質含量顯著降低，能夠達到產品的品質控制標準(開環產物控制在10%以內，藥物單元控制在5%以內)，甚至遠優於該品質控制標準（開環產物低至3%以內，藥物單元低至2%以內）。

在一些實施方案中，所述純化包括以下步驟：

（2-1）將所述粗產物用製備型液相層析進行純化，獲得製備液；

（2-2）將所述製備液進行濃縮、乾燥，獲得式A所示化合物；

任選地，在步驟（2-1）獲得所述製備液之後，步驟（2-2）之前，還包括萃取的步驟；

任選地，在步驟（2-1）獲得所述製備液之後，步驟（2-2）之前，還包括以下步驟：

（2-i）採用有機溶劑萃取所述製備液，棄去有機相，獲得水相；

其中，步驟（2-1）中，用製備型液相層析進行純化時，流動相A為TFA/水，流動相B為TFA/乙腈；步驟（2-2）中，所述濃縮是奈米過濾濃縮。

本領域技術人員可以理解，步驟（2-i）獲得水相後，後續的步驟（2-2）便會適應性調整為：將所述水相進行濃縮、乾燥，獲得式A所示化合物。

在一些實施方案中，所述純化包括以下步驟：

（2-2）將所述製備液進行濃縮、乾燥，獲得式A所示化合物；

在一些實施方案中，所述純化包括以下步驟：

（2-2）將所述水相進行濃縮、乾燥，獲得式A所示化合物；

在一些實施方案中，步驟（2-1）中，用製備型液相層析進行純化時，流動相A為0.2%TFA/水，流動相B為0.1%TFA/乙腈；步驟（2-2）中，所述濃縮是奈米過濾濃縮。

在一些實施方案中，步驟（2-1）中，用製備型液相層析進行純化時，採用梯度洗脫。

在一些實施方案中，梯度條件為：

時間/min	流動相A/%	流動相B/%
0~5	90~75	10~25
5~32	75~60	25~40
32~39	10~0	90~100
39~50	90~75	10~25

。

在一些實施方案中，梯度條件為：

時間/min	流動相A/%	流動相B/%
0	80	20
3	80	20
6	75	25
10	75	25
15	70	30
15.5	63	37
25	63	37
29	62	38
31	62	38
31.5	2	98
39	2	98
39.5	80	20
43	80	20

。

在一些實施方案中，梯度條件為：

時間/min	流動相A/%	流動相B/%	流速/mL·min^-1
0	80	20	200
3	80	20	200
6	75	25	200
10	75	25	200
15	70	30	190
15.5	63	37	160
25	63	37	160
29	62	38	160
31	62	38	160
31.5	2	98	200
39	2	98	200
39.5	80	20	200
43	80	20	200

。

在一些實施方案中，步驟（2-1）中，用製備型液相層析進行純化時，層析柱為UniSil 10-100 C18 450mm*100mm。

在一些實施方案中，步驟（2-1）中，用製備型液相層析進行純化時，檢測波長為200-365nm，例如200 nm、220 nm、250 nm、270 nm、300 nm、350 nm或365nm，或者如200-230nm。

在一些實施方案中，步驟（2-1）中，用製備型液相層析進行純化時，檢測波長為214nm。

在一些實施方案中，步驟（2-2）中，所述奈米過濾是在溫度≤30℃的條件下進行的。

在一些實施方案中，所述奈米過濾是通過奈米過濾設備實現的。

在一些實施方案中，步驟（2-2）中，所述乾燥為凍乾。

在一些實施方案中，步驟（2-i）中，所述有機溶劑為混合溶劑1和/或混合溶劑2，所述混合溶劑1為乙酸乙酯和正己烷的混合溶劑，所述混合溶劑2為二氯甲烷和正己烷的混合溶劑。

在一些實施方案中，步驟（2-i）是通過如下方式進行的：依次採用混合溶劑1、混合溶劑2分別萃取所述製備液，棄去有機相，獲得水相。

在一些實施方案中，所述混合溶劑1與所述製備液的體積比為(1-5):1，例如1:1、2:1、3:1、4:1或5:1，優選為1:1。

在一些實施方案中，所述製備液與所述混合溶劑2的體積比為(1-5):1，例如1:1、2:1、3:1、4:1或5:1，優選為5:2。

在一些實施方案中，所述混合溶劑1中，所述乙酸乙酯與所述正己烷的體積比為(1-5):1，例如1:1、2:1、3:1、4:1或5:1，優選為3:1。

在一些實施方案中，所述混合溶劑2中，所述二氯甲烷和所述正己烷的體積比為(1-5):1，例如1:1、2:1、3:1、4:1或5:1，優選為3:1。

在一些實施方案中，所述路易士酸與式a所示的化合物的物質的量比不低於10:1，例如10:1、15:1、20:1、25:1、30:1、35:1、40:1或45:1，優選20:1。

在一些實施方案中，所述路易士酸與式a所示的化合物的物質的量比為（10-30）:1，例如10:1、15:1、20:1、25:1或30:1，優選20:1。

在一些實施方案中，所述反應是在溶劑存在的條件下進行的，所述溶劑選自硝基烷烴類（如硝基甲烷、硝基乙烷）、鹵代烷烴（如二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿）、水、酮類（如丙酮、丁酮等）、甲苯類（如甲苯、三氟甲苯）、酯類（如乙酸乙酯、碳酸二甲酯）、乙腈以及以上兩種或多種溶劑任意比例混合得到的混合溶劑，優選選自硝基甲烷、碳酸二甲酯、二氯甲烷、混合溶液二氯甲烷/酮類、混合溶液二氯甲烷/水、混合溶液二氯甲烷/酯類。

在一些實施方案中，所述溶劑選自硝基甲烷、二氯甲烷/水、碳酸二甲酯。其中，本領域技術人員可以理解，例如，“二氯甲烷/水”指的是二氯甲烷和水的混合物。

在一些實施方案中，式a所示的化合物的品質與所述溶劑的體積比為1g/(5-50mL)，例如1g/5mL、1g/10mL、1g/15mL、1g/20mL、1g/25mL、1g/30mL、1g/35mL、1g/40mL、1g/45mL或1g/50mL，優選為1g/(5-35mL)。

在一些實施方案中，所述溶劑為硝基甲烷。

在一些實施方案中，式a所示的化合物的品質與所述硝基甲烷的體積比為1g/(20-50mL)，例如1g/20mL、1g/25mL、1g/30mL、1g/35mL、1g/40mL、1g/45mL或1g/50mL，優選為1g/35mL。

在一些實施方案中，所述溶劑為二氯甲烷/水。

在一些實施方案中，式a所示的化合物的品質與所述二氯甲烷/水的體積比為1g/(10-30mL)，例如1g/10mL、1g/15mL、1g/16mL、1g/20mL、1g/25mL或1g/30mL，優選1g/(15-16mL)。

在一些實施方案中，所述二氯甲烷/水中，所述二氯甲烷和所述水的體積比為(500-1000):1，例如500:1、550:1、600:1、650:1、700:1、750:1、800:1、850:1、900:1、950:1或1000:1，優選為750:1。

在一些實施方案中，所述溶劑為碳酸二甲酯。

在一些實施方案中，式a所示的化合物的品質與所述碳酸二甲酯的體積比為1g/(5-30mL)，例如1g/5mL、1g/10mL、1g/15mL、1g/20mL、1g/25mL或1g/30mL，優選1g/(5-15mL)。

在一些實施方案中，所述反應是在溫度為20-110℃（如20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃或110℃）的條件下進行的。

在一些實施方案中，所述反應是在溫度為20-50℃（例如20℃、30℃、35℃、40℃、45℃或50℃，優選40℃）的條件下進行的。

在一些實施方案中，所述反應是在溫度為30-50℃（例如30℃、35℃、40℃、45℃或50℃，優選40℃）的條件下進行的。

在一些實施方案中，所述反應進行的時間為20min-24h（如20min、30min、40min、1h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h、7 h、8 h、9 h、10 h、11 h、12 h、13 h、14 h、15 h、16 h、17 h、18 h、19 h、20 h、21 h、22 h、23 h或24 h）。

在一些實施方案中，所述反應進行的時間為20-120min（例如20 min、25 min、30 min、35 min、40 min、45 min、50 min、55 min、60 min、70min、80min、90min、100min、110min或120min）。在一些實施方案中，所述反應進行的時間為20-60min。在一些實施方案中，所述反應進行的時間為30-60min。在一些實施方案中，所述反應進行的時間為30min。

在一些實施方案中，將式a所示的化合物與路易士酸發生反應後，純化前，還包括後處理的步驟。

在一些實施方案中，所述後處理包括：將獲得的反應物進行減壓濃縮，獲得粗產物。

在一些實施方案中，所述後處理包括：將獲得的反應物進行析晶、過濾、乾燥，獲得粗產物。

在一些實施方案中，所述減壓濃縮是在溫度為30-55℃（例如30℃、35℃、40℃、45℃、50℃或55℃，優選45℃）的條件下進行的。

在一些實施方案中，式a所示的化合物是通過如下方法製備得到的：

（3-1-1）將式b所示化合物與鹼（如三乙胺）進行反應，獲得化合物；

式b

（3-1-2）將化合物與化合物進行反應，獲得化合物；

（3-1-3）將化合物與依喜替康甲磺酸鹽進行反應，獲得式a所示的化合物；

或者，式a所示的化合物是通過如下方法製備得到的：

（3-2-1）將式b所示化合物與鹼（如三乙胺）進行反應，獲得化合物；

式b

（3-2-2）將化合物與五氟苯酚和DCC進行反應，獲得化合物；

（3-2-3）將化合物與化合物進行反應，獲得化合物；

（3-2-4）將化合物與依喜替康甲磺酸鹽進行反應，獲得式a所示的化合物。

在一些實施方案中，式b所示化合物是通過如下方法製備的：

（4-1）將化合物與氯化亞碸和苄醇進行反應，獲得化合物；

（4-2）將化合物與化合物進行反應，獲得化合物；

（4-3）將化合物與(Boc)₂O進行反應，獲得化合物；

（4-4）將化合物與氫氣在Pd/C存在的條件下進行反應，獲得化合物；

（4-5）將化合物與順丁烯二酸酐進行反應，獲得式b所示的化合物。

在一些實施方案中，步驟（4-1）是通過如下方式進行的：

（4-1-1）將氯化亞碸滴加至苄醇中，之後再加入化合物進行反應；

（4-1-2）向步驟（4-1-1）獲得的反應物中加入異丙醚析晶後過濾，將濾餅烘乾，獲得化合物。

在一些實施方案中，步驟（4-4）是通過如下方式進行的：

（4-4-1）將化合物與氫氣在Pd/C存在的條件下進行反應；

（4-4-2）將步驟（4-4-1）獲得的反應物進行過濾，將濾液減壓濃縮，獲得粗品；

（4-4-3）將所述粗品用異丙醇/水進行重結晶，晶體即化合物；

優選地，所述重結晶時，所述異丙醇和水的體積比為(1-5):1，優選3:1。

在一些實施方案中，步驟（4-5）是通過如下方式進行的：

（4-5-1）將化合物與順丁烯二酸酐進行反應；

（4-5-2）向步驟（4-5-1）獲得的反應物中加入正己烷析晶後過濾，將濾餅烘乾，獲得式b所示的化合物。

在本發明的另一方面，本發明還提供了一種製備式A所示化合物的方法，其包括：

式A

（1-1）將式a所示的化合物與硝基甲烷和溴化鋅進行混合後反應，獲得粗產物；

式a

（1-2）將所述粗產物用製備型液相層析進行純化，獲得製備液；

（1-3）採用有機溶劑萃取所述製備液，棄去有機相，獲得水相；

（1-4）將所述水相進行濃縮、乾燥，獲得式A所示化合物；

其中，步驟（1-2）中，用製備型液相層析進行純化時，流動相A為0.2%TFA/水，流動相B為0.1%TFA/乙腈；步驟（1-4）中，所述濃縮是奈米過濾濃縮。

在一些實施方案中，步驟（1-2）中，用製備型液相層析進行純化時，採用梯度洗脫。

在一些實施方案中，梯度條件為：

在一些實施方案中，步驟（1-2）中，用製備型液相層析進行純化時，層析柱為UniSil 10-100 C18 450mm*100mm。

在一些實施方案中，步驟（1-2）中，用製備型液相層析進行純化時，檢測波長為214nm。

在一些實施方案中，步驟（1-4）中，所述奈米過濾是在溫度≤30℃的條件下進行的。

在一些實施方案中，步驟（1-4）中，所述乾燥為凍乾。

在一些實施方案中，步驟（1-3）中，所述有機溶劑為混合溶劑1和/或混合溶劑2，所述混合溶劑1為乙酸乙酯和正己烷的混合溶劑，所述混合溶劑2為二氯甲烷和正己烷的混合溶劑。

在一些實施方案中，步驟（1-3）是通過如下方式進行的：依次採用混合溶劑1、混合溶劑2分別萃取所述製備液，棄去有機相，獲得水相。

在一些實施方案中，步驟（1-1）中，所述溴化鋅與式a所示的化合物的物質的量比為(10-30):1，例如10:1、15:1、20:1、25:1或30:1，優選20:1。

在一些實施方案中，步驟（1-1）中，式a所示的化合物的品質與所述硝基甲烷的體積比為1g/(20-50mL)，例如1g/20mL、1g/25mL、1g/30mL、1g/35mL、1g/40mL、1g/45mL或1g/50mL，優選為1g/35mL。

在一些實施方案中，步驟（1-1）中，所述反應是在溫度為30-50℃（例如30℃、35℃、40℃、45℃或50℃，優選40℃）的條件下進行的。

在一些實施方案中，步驟（1-1）中，所述反應進行的時間為20-60min（例如20 min、25 min、30 min、35 min、40 min、45 min、50 min、55 min或60 min，優選30min）。

在一些實施方案中，步驟（1-1）中，將式a所示的化合物與硝基甲烷和溴化鋅進行混合後反應是通過如下方式進行的：

（1-1-1）將式a所示化合物與硝基甲烷進行混合，溶解後再加入溴化鋅進行反應；

（1-1-2）將步驟（1-1-1）獲得的反應物進行減壓濃縮，獲得粗產物。

（2-1）將式b所示化合物與三乙胺進行反應，獲得化合物；

式b

（2-2）將化合物與五氟苯酚和DCC進行反應，獲得化合物；

（2-3）將化合物與化合物進行反應，獲得化合物；

（2-4）將化合物與依喜替康甲磺酸鹽進行反應，獲得式a所示的化合物。

在一些實施方案中，式b所示化合物是通過如下方法製備的：

（3-1）將化合物與氯化亞碸和苄醇進行反應，獲得化合物；

（3-2）將化合物與化合物進行反應，獲得化合物；

（3-3）將化合物與(Boc)₂O進行反應，獲得化合物；

（3-4）將化合物與氫氣在Pd/C存在的條件下進行反應，獲得化合物；

（3-5）將化合物與順丁烯二酸酐進行反應，獲得式b所示的化合物。

在一些實施方案中，步驟（3-1）是通過如下方式進行的：

（3-1-1）將氯化亞碸滴加至苄醇中，之後再加入化合物進行反應；

（3-1-2）向步驟（3-1-1）獲得的反應物中加入異丙醚析晶後過濾，將濾餅烘乾，獲得化合物。

在一些實施方案中，步驟（3-4）是通過如下方式進行的：

（3-4-1）將化合物與氫氣在Pd/C存在的條件下進行反應；

（3-4-2）將步驟（3-4-1）獲得的反應物進行過濾，將濾液減壓濃縮，獲得粗品；

（3-4-3）將所述粗品用異丙醇/水進行重結晶，晶體即化合物。

在一些實施方案中，所述重結晶時，所述異丙醇和水的體積比為(1-5):1，例如1:1、2:1、3:1、4:1或5:1，優選3:1。

在一些實施方案中，步驟（3-5）是通過如下方式進行的：

（3-5-1）將化合物與順丁烯二酸酐進行反應；

（3-5-2）向步驟（3-5-1）獲得的反應物中加入正己烷析晶後過濾，將濾餅烘乾，獲得式b所示的化合物。

下面將結合附圖和實施例對本發明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將理解，下列附圖和實施例僅用於說明本發明，而不是對本發明的範圍的限定。根據附圖和優選實施方案的下列詳細描述，本發明的各種目的和有利方面對於本領域技術人員來說將變得顯然。

以下實驗步驟中，沒有特別說明的原料均可以市購獲得。

預備例1：

化合物的製備

合成路線：

第一步：Ac002

向5L三口瓶中加入2.8L苄醇，降溫至10℃以下，滴加氯化亞碸（36mL，0.50mol，2.0eq）,滴畢升至室溫反應2h。再加入3-氨基-N-Cbz-L-丙氨酸（60g，0.25mol，1.0eq），室溫反應16h，TLC監測原料（Ac001）基本消失，結束反應。向體系中加入12L異丙醚，析晶2h，過濾，濾餅經過鼓風45℃乾燥，得55.2gAc001，收率60.2%。

第二步：Ac003

向1L反應瓶中加入Ac002（55g,0.15mol,1.0eq）,300mL乙腈，33mL純化水，攪拌溶解後，加入碳酸鉀（31.2g,0.225mol,1.5eq），滴加溴乙酸叔丁酯（26.42g,0.135mol,

0.9eq），滴畢室溫反應20h，TLC監測原料（Ac002））基本消失，結束反應。向體系中加入純化水（1.5L），用乙酸乙酯萃取（1L），分液，有機層經過10%氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾減壓濃縮得到粗品。粗品經過柱層析純化（石油醚/乙酸乙酯），得到44.4gAc003，收率66%。

第三步：Ac004

向500mL反應瓶中加入Ac003（44.2g,0.1mol,1.0eq），100mL二氯甲烷，攪拌溶解，加入三乙胺（15mL,0.11mol,1.1eq）,滴加Boc酸酐（22.9g,0.105mol,1.05eq）,室溫反應20h，TLC監測原料（Ac003））基本消失，結束反應。向體系中加入純化水（100mL），分液，水層用二氯甲烷萃取（40mL），合併有機層，用純化水洗滌、無水硫酸鈉乾燥、過濾，減壓濃縮得55.3g黃色油狀物，直接用於下一步。

第四步：Ac005

向1L單口瓶中加入第三步的黃色油狀物（55.3g），200mL甲醇，攪拌溶解，再加入5%Pd/C(8.3g,15%m/m)，氫化反應4h，TLC監測原料（Ac004））基本消失，結束反應。反應液過濾，濾液減壓濃縮得粗品。粗品經過異丙醇/水（體積3/1）重結晶，得到18.4g Ac005，收率58%（兩步）。

第五步：SM-2

向500mL單口瓶中加入Ac005（18g,0.056mol,1.0eq）,100mL二氯甲烷，17mL冰乙酸，攪拌溶解，加入順丁烯二酸酐（6g,0.062mol,1.1eq），室溫反應4h，TLC監測原料（Ac005）基本消失，結束反應。向體系中加入正己烷（80mL），降溫至10℃，析晶2h，過濾，濾餅經過50℃鼓風乾燥4h，得到20.6gSM-2，收率87%。

預備例2：

化合物的製備

1、化合物M3的合成：

合成路線：

第一步：化合物M2

于1000 mL單口瓶中加入化合物SM-2(40 g, 96 mmol, 1.0 eq)，三乙胺(26.7 mL, 2.0 eq)，甲苯(400 mL)，升溫至120 ℃下回流反應2h。TLC監測基本完全反應，降溫至50 ℃下減壓旋除溶劑。用乙酸乙酯(150 mL)，水(40 mL)溶解，冰浴攪拌下用1M HCl調pH至2-3，分液。水層用乙酸乙酯再萃取一次，合併有機層，加入無水硫酸鈉乾燥。過濾後，濃縮得到淡黃色油狀粗品，粗品經柱層析純化(DCM:MeOH=40:1)，得到化合物M2(26.6 g)；LC-MS：[M+H]⁺=399.3。

第二步：化合物M3

于1000 mL單口瓶，加入化合物M2(26.5 g， 60.5 mmol, 1.0eq)、五氟苯酚(12.2 g, 66.5 mmol, 1.1 eq)、DCC(13.7 g, 66.5 mmol, 1.1 eq)及THF(300 mL)，室溫反應30 min(採用TLC監測)，過濾濾去不溶物。反應液直接經製備純化，製備液水泵減壓水浴35 ℃濃縮除去乙腈，凍乾得到化合物M3(31.5g)，收率64%；LC-MS：[M+H]⁺=565.1。

2、化合物5e的合成：

合成路線：

方案一：

方案二：

第一步：化合物5a

于25mL單口瓶中加入M1(500mg，1.4mmol，1.0eq), 對甲苯磺酸一水合物(26mg，0.1mmol，0.1eq)及10 mL THF，攪拌均勻後，降至0 ℃，再緩慢加入L-乳酸苄酯(1.2 g, 7.0 mmol, 5 eq)，加完後升至室溫反應。TLC監控，反應結束後，加入飽和NaHCO₃溶液，用乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，殘餘物經反相柱純化得5a(400mg)；

LC-MS：[M+NH₄]⁺=506.2。

¹H NMR(400 Mz, CDCl₃/CD₃OD):1.39 (3H, d, J = 6.8 Hz), 3.78 (2H, t, J = 4.0 Hz), 4.17-4.27 (2H, m), 4.42 (2H, d, J = 4.0 Hz), 4.72-4.85 (2H, m), 5.11-5.58 (2H, m), 5.43 (1H, s), 7.06 (1H, t, J = 8.0 Hz), 7.25-7.33 (6H, m), 7.38 (2H, t, J=8.0 Hz), 7.57 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.75 (2H, d, J = 8.0 Hz).。

第二步：化合物5b

于25 mL單口瓶中加入化合物5a(400 mg, 0.8 mmol, 1.0 eq)和4 mL DMF，攪拌均勻後，降至0 ℃，再緩慢加入DBU(137 mg, 0.9 mmol, 1.1 eq)，加完後升至室溫反應。TLC監控，反應結束，記為反應液①；

另取25 mL單口瓶中加入M4(372 mg, 0.9 mmol, 1.1 eq），PyBOP(852 mg, 1.6 mmol, 2.0 eq)和3 mL DMF，室溫攪拌5分鐘，加入反應液①，室溫反應，HPLC監測。反應完畢，反應液經高效液相純化得化合物5b(326mg)；LC-MS：[M+NH₄]⁺=679.2。

第三步：化合物5c

于100mL單口瓶中加入5b（4.0 g, 6.05 mmol, 1.0 eq），DMF(60 mL)溶解，再加入5%Pd/C(4 g)，室溫氫化反應4 h(採用HPLC監測反應進程)。過濾Pd/C，濾液未經濃縮，直接置於冰水浴(約0 ℃)中，待用。

第四步：化合物5d

方案一：將粗產品5c置於冰水浴中，加入DIPEA(1.1 mL, 1.1 eq)，再加入化合物M3(3.4 g, 6.05 mmol)，加畢升至室溫反應2 h。HPLC監測反應完畢，反應液經高效液相純化，得製備液，製備液凍乾得到5d(3.15g)；LC-MS：[M-H]^-=816.3。

方案二：于單口瓶中加入化合物M2（2.4g，6.05mmol，1.0eq）,乙腈（24mL）溶解，降溫至-10±5℃，加入EEDQ（1.49g，6.05mmol,1.0eq），保溫反應2h，再將粗產品5c加至體系中，保溫反應1h，HPLC監測反應畢，反應液經過高效液相純化，得製備液，製備液經過二氯甲烷萃取，濃縮得到5d（3.0g）。

第五步：化合物5e

于100 mL單口瓶中加入5d(2.07 g, 2.53 mmol, 1.0 eq），依喜替康甲磺酸鹽M5(1.35 g, 2.53 mmol, 1.0 eq)，PyBOP(1.98 g, 3.79 mmol, 1.5 eq)，HOBt(0.51 g, 3.79 mmol, 1.5 eq)及DMF(40 mL)，冰水浴下加入DIPEA(1.05 mL, 1.5 eq)，升至室溫反應2 h(採用HPLC監測)。反應液直接經製備純化，製備液水泵減壓水浴35 ℃濃縮除去乙腈，凍乾得到化合物5e(1.92 g)，收率61%；LC-MS：[M+H]⁺=1235.4。

實施例1：

目標化合物的製備

合成路線：

第一步：于100mL單口瓶中加入化合物5e(1.0 g, 0.8 mmol, 1.0 eq)，35 mL硝基甲烷，溶解後再加入溴化鋅(3.64 g, 16 mmol, 20.0 eq)，油浴40 ℃(提前預熱穩定)反應30 min(採用HPLC監測)，水泵減壓水浴45 ℃濃縮除去硝基甲烷，得黃色殘餘物固體。

雜質檢測方法：

將目標化合物用HPLC進行雜質檢測，結果如下表1和圖1所示。

儀器：高效液相層析儀

層析柱：YMC-Triart C18-5µm-12nm 4.6mm*250mm

流動相：A—0.05%TFA/水（1L純化水中加入0.5mL TFA）

流動相：B—0.05% TFA/乙腈（1L乙腈中加入0.5mL TFA）

檢測波長：214nm

流速：1mL/min

柱溫：30℃

梯度條件：

時間/min	流動相A/%	流動相B/%
0	70	30
20	55	45
20.01	2	98
30	2	98
30.01	70	30
40	70	30

第二步：經酸法製備純化（流動相：0.2%TFA/水-0.1%TFA/乙腈），得到目標化合物的製備液（體積V），依次採用乙酸乙酯（0.75V）/正己烷（0.25V）、二氯甲烷（0.3V）/正己烷（0.1V）萃取製備液中的有機溶劑，棄去有機相，獲得水相，水相再利用奈米過濾設備進行低溫（≤30℃）濃縮，進行凍乾，得到目標化合物。

LC-MS：[M+H]⁺=1079.4；

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.39 – 9.02 (m, 1H), 8.70 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 8.64 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.34 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.01 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.28 – 7.15 (m, 4H), 7.14 (s, 2H), 5.53 (dd, J = 14.5, 6.4 Hz, 1H), 5.49 – 5.34 (m, 2H), 5.22 (d, J = 18.8 Hz, 1H), 5.09 (d, J = 18.7 Hz, 1H), 5.03 (dd, J = 9.6, 3.9 Hz, 1H), 4.73 (dd, J = 9.9, 6.9 Hz, 1H), 4.59 (dd, J = 10.1, 6.5 Hz, 1H), 4.49 (ddd, J = 13.2, 8.6, 4.4 Hz, 1H), 4.14 (dd, J = 13.3, 6.6 Hz, 2H), 3.93 (s, 2H), 3.84 (dd, J = 16.5, 6.3 Hz, 1H), 3.76 (dd, J = 16.9, 5.7 Hz, 2H), 3.70 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.60 (dd, J = 16.7, 5.4 Hz, 1H), 3.52 (dd, J = 16.4, 5.1 Hz, 1H), 3.45 (dd, J = 12.8, 10.1 Hz, 1H), 3.25 – 3.15 (m, 1H), 3.14 – 3.05 (m, 1H), 3.01 (dd, J = 13.7, 4.1 Hz, 1H), 2.73 (dd, J = 13.5, 9.8 Hz, 1H), 2.54 – 2.47 (m, 1H), 2.33 (s, 2H), 2.17 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 1.91 – 1.79 (m, 2H), 1.33 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 2H)。

製備純化具體條件如下：

儀器：製備液相層析儀

層析柱：UniSil 10-100 C18 450mm*100mm

流動相：A—0.2%TFA/水（1L純化水中加入2mL TFA）

流動相：B—0.1% TFA/乙腈（1L乙腈中加入1mL TFA）

檢測波長：214nm

梯度條件：

雜質檢測方法：

將目標化合物用HPLC進行雜質檢測，結果如下表2和圖5所示。

雜質檢測時HPLC檢測條件如下：

儀器：高效液相層析儀

層析柱：YMC-Triart C18-5µm-12nm 4.6mm*250mm

流動相：A—0.05%TFA/水（1L純化水中加入0.5mL TFA）

流動相：B—0.05% TFA/乙腈（1L乙腈中加入0.5mL TFA）

檢測波長：214nm

流速：1mL/min

柱溫：30℃

梯度條件：

實施例2：

合成路線：

相比於實施例1，區別僅在於第一步，第二步與實施例1相同。具體地，第一步：于100mL單口瓶中加入化合物5e(1.0 g, 0.8 mmol, 1.0 eq)，15 mL二氯甲烷，加入20uL水，溶解後再加入溴化鋅(3.64 g, 16 mmol, 20.0 eq)，油浴40 ℃(提前預熱穩定)反應1h(採用HPLC監測)，水泵減壓水浴45 ℃濃縮除去二氯甲烷，得黃色殘餘物固體。

第一步雜質檢測方法：

第一步的雜質檢測方法與實施例1相同，結果如下表1和圖2所示。

實施例3：

合成路線：

相比於實施例1，區別僅在於第一步，第二步與實施例1相同。具體地，第一步：于100mL單口瓶中加入化合物5e(1.0 g, 0.8 mmol, 1.0 eq)，15 mL碳酸二甲酯，溶解後再加入溴化鋅(3.64 g, 16 mmol, 20.0 eq)，油浴40 ℃(提前預熱穩定)反應30min(採用HPLC監測)，反應完畢後加入20mL二氯甲烷進行析晶，析晶後過濾，乾燥得到粗產物固體。

第一步雜質檢測方法：

第一步的雜質檢測方法與實施例1相同，結果如下表1和圖3所示。

對比例1：

合成路線：

相比於實施例1，區別僅在於第一步，第二步與實施例1相同。具體地，第一步：于100mL單口瓶中加入化合物5e(1.0 g, 0.8 mmol, 1.0 eq)，10 mL二氯甲烷，溶解後再加入1ml三氟乙酸，室溫反應30min(採用HPLC監測)，反應完畢後減壓濃縮得到粗產物。

第一步雜質檢測方法：

第一步的雜質檢測方法與實施例1相同，結果如下表1和圖4所示。

表1：雜質的檢測結果

編號	雜質情況（HPLC峰面積比）
目標化合物	單脫產物	式a	藥物單元
實施例1	96.91%	2.59%	0.09%	0.41%
實施例2	97.64%	1.92%	0.20%	0.25%
實施例3	99.24%	0.32%	0.08%	0.36%
對比例1	85.54%	0.22%	0.11%	14.14%

從以上實施例1-3和對比例1的結果對比可以直觀地看出，在目標化合物的生產工藝中，只有本申請請求保護的製備方法方能達到產品的品質標準(單脫產物需控制在10%以內，化合物a需控制在2%以內，藥物單元需控制在5%以內)，甚至遠優於該品質標準（藥物單元低至2%以內）。

對比例2：

合成路線：

相比於實施例1，第一步與實施例1相同，區別僅在於第二步。具體地，第二步：經製備純化（流動相：純水-乙腈），得到目標化合物的製備液。對於製備純化的具體條件，除將流動相A替換成純水，將流動相B替換成乙腈之外，製備純化的其餘具體條件與實施例1相同。

第二步雜質檢測方法：

第二步的雜質檢測方法與實施例1相同，結果如下表2和圖6所示。

對比例3：

合成路線：

相比於實施例1，第一步與實施例1相同，區別僅在於第二步。具體地，第二步：經酸法製備純化（流動相：0.1%TFA/水-乙腈），得到目標化合物的製備液（體積V），依次採用乙酸乙酯（0.75V）/正己烷（0.25V）、二氯甲烷（0.3V）/正己烷（0.1V）萃取製備液中的有機溶劑，棄去有機相，獲得水相，水相再利用奈米過濾設備進行低溫（≤30℃）濃縮，進行凍乾，得到目標化合物。對於製備純化的具體條件，除將流動相A替換成0.1%TFA/水，將流動相B替換成乙腈之外，製備純化的其餘具體條件與實施例1相同。

第二步雜質檢測方法：

第二步的雜質檢測方法與實施例1相同，結果如下表2和圖7所示。

對比例4：

合成路線：

相比於實施例1，第一步與實施例1相同，區別僅在於第二步。具體地，第二步：經酸法製備純化（流動相：0.1%TFA/水-乙腈），得到目標化合物的製備液（體積V），依次採用乙酸乙酯（0.75V）/正己烷（0.25V）、二氯甲烷（0.3V）/正己烷（0.1V）萃取製備液中的有機溶劑，棄去有機相，獲得水相，水相再經油泵減壓水浴35 ℃濃縮，進行凍乾，得到目標化合物。對於製備純化的具體條件，除將流動相A替換成0.1%TFA/水，將流動相B替換成乙腈之外，製備純化的其餘具體條件與實施例1相同。

第二步雜質檢測方法：

第二步的雜質檢測方法與實施例1相同，結果如下表2和圖8所示。

對比例5：

合成路線：

相比於實施例1，第一步與實施例1相同，區別僅在於第二步。具體地，第二步：經酸法製備純化（流動相：0.1%TFA/水-0.1%TFA/乙腈），得到目標化合物的製備液（體積V），依次採用乙酸乙酯（0.75V）/正己烷（0.25V）、二氯甲烷（0.3V）/正己烷（0.1V）萃取製備液中的有機溶劑，棄去有機相，獲得水相，水相再利用奈米過濾設備進行低溫（≤30℃）濃縮，進行凍乾，得到目標化合物。對於製備純化的具體條件，除將流動相A替換成0.1%TFA/水之外，製備純化的其餘具體條件與實施例1相同。

第二步雜質檢測方法：

第二步的雜質檢測方法與實施例1相同，結果如下表2和圖9所示。

對比例6：

合成路線：

相比於實施例1，第一步與實施例1相同，區別僅在於第二步。具體地，第二步：經酸法製備純化（流動相：0.1%TFA/水-0.1%TFA/乙腈），得到目標化合物的製備液（體積V），依次採用乙酸乙酯（0.75V）/正己烷（0.25V）、二氯甲烷（0.3V）/正己烷（0.1V）萃取製備液中的有機溶劑，棄去有機相，獲得水相，水相再經油泵減壓水浴35 ℃濃縮，進行凍乾，得到目標化合物。對於製備純化的具體條件，除將流動相A替換成0.1%TFA/水之外，製備純化的其餘具體條件與實施例1相同。

第二步雜質檢測方法：

第二步的雜質檢測方法與實施例1相同，結果如下表2和圖10所示。

對比例7：

合成路線：

相比於實施例1，第一步與實施例1相同，區別僅在於第二步。具體地，第二步：經酸法製備純化（流動相：0.2%TFA/水-0.1%TFA/乙腈），得到目標化合物的製備液（體積V），依次採用乙酸乙酯（0.75V）/正己烷（0.25V）、二氯甲烷（0.3V）/正己烷（0.1V）萃取製備液中的有機溶劑，棄去有機相，獲得水相，水相再經油泵減壓水浴35 ℃濃縮，進行凍乾，得到目標化合物。製備純化的具體條件與實施例1相同。

第二步雜質檢測方法：

第二步的雜質檢測方法與實施例1相同，結果如下表2和圖11所示。

對比例8：

合成路線：

相比於實施例1，第一步與實施例1相同，區別僅在於第二步。具體地，第二步：經酸法製備純化（流動相：0.2%TFA/水-0.2%TFA/乙腈），得到目標化合物的製備液（體積V），依次採用乙酸乙酯（0.75V）/正己烷（0.25V）、二氯甲烷（0.3V）/正己烷（0.1V）萃取製備液中的有機溶劑，棄去有機相，獲得水相，水相再利用奈米過濾設備進行低溫（≤30℃）濃縮，進行凍乾，得到目標化合物。對於製備純化的具體條件，除將流動相B替換成0.2%TFA/乙腈之外，製備純化的其餘具體條件與實施例1相同。

第二步雜質檢測方法：

第二步的雜質檢測方法與實施例1相同，結果如下表2和圖12所示。

對比例9：

合成路線：

相比於實施例1，第一步與實施例1相同，區別僅在於第二步。具體地，第二步：經酸法製備純化（流動相：0.2%TFA/水-0.2%TFA/乙腈），得到目標化合物的製備液（體積V），依次採用乙酸乙酯（0.75V）/正己烷（0.25V）、二氯甲烷（0.3V）/正己烷（0.1V）萃取製備液中的有機溶劑，棄去有機相，獲得水相，水相再經油泵減壓水浴35 ℃濃縮，進行凍乾，得到目標化合物。對於製備純化的具體條件，除將流動相B替換成0.2%TFA/乙腈之外，製備純化的其餘具體條件與實施例1相同。

第二步雜質檢測方法：

第二步的雜質檢測方法與實施例1相同，結果如下表2和圖13所示。

表2：雜質的檢測結果

流動相	濃縮操作	編號	雜質情況（HPLC峰面積比）
開環產物	目標化合物	藥物單元
純水-乙腈	/	對比例2	31.7%	65.1%	3.1%
0.1%TFA/水-乙腈	奈米過濾濃縮(≤30℃)	對比例3	16.5%	82.7%	0.83%
35℃減壓濃縮	對比例4	24.8%	73.5%	1.55%
0.1%TFA/水-0.1%TFA/乙腈	奈米過濾濃縮(≤30℃)	對比例5	12.9%	86.2%	0.87%
35℃減壓濃縮	對比例6	18.9%	80.3%	0.81%
0.2%TFA/水-0.1%TFA/乙腈	奈米過濾濃縮(≤30℃)	實施例1	2.1%	96.9%	1.01%
35℃減壓濃縮	對比例7	11.5%	87.6%	0.88%
0.2%TFA/水-0.2%TFA/乙腈	奈米過濾濃縮(≤30℃)	對比例8	4.0%	90.3%	5.7%
35℃減壓濃縮	對比例9	4.1%	86.1%	9.8%

從以上實施例1和對比例2-9的結果對比可以直觀地看出，在目標化合物的生產工藝中，只有本申請請求保護的製備方法方能達到產品的品質標準(開環產物控制在10%以內，藥物單元控制在5%以內)，甚至遠優於該品質標準（開環產物低至3%以內，藥物單元低至2%以內）。

應當理解的是，本文所述發明不限於特定的方法學、實驗方案或試劑，因為這些是可以變化的。本文所提供的論述和實例僅是為了描述特定的實施方案呈現而非意在限制本發明的範圍，本發明的範圍僅受到請求項的限定。

無。

圖1顯示了本發明實施例1的第一步的雜質檢測結果；圖2顯示了本發明實施例2的第一步的雜質檢測結果；圖3顯示了本發明實施例3的第一步的雜質檢測結果；圖4顯示了本發明對比例1的第一步的雜質檢測結果；圖5顯示了本發明實施例1的第二步的雜質檢測結果；圖6顯示了本發明對比例2的第二步的雜質檢測結果；圖7顯示了本發明對比例3的第二步的雜質檢測結果；圖8顯示了本發明對比例4的第二步的雜質檢測結果；圖9顯示了本發明對比例5的第二步的雜質檢測結果；圖10顯示了本發明對比例6的第二步的雜質檢測結果；圖11顯示了本發明對比例7的第二步的雜質檢測結果；圖12顯示了本發明對比例8的第二步的雜質檢測結果；圖13顯示了本發明對比例9的第二步的雜質檢測結果。

Claims

一種製備式A所示化合物的方法，其包括：式A 將式a所示的化合物與路易士酸發生反應，獲得粗產物；所述粗產物經過純化得到式A所示化合物；式a 所述純化包括以下步驟：（2-1）將所述粗產物用製備型液相層析進行純化，獲得製備液；（2-i）採用有機溶劑萃取所述製備液，棄去有機相，獲得水相；（2-2）將所述水相進行濃縮、乾燥，獲得式A所示化合物；其中，步驟（2-1）中，用製備型液相層析進行純化時，流動相A為0.2%TFA/水，流動相B為0.1%TFA/乙腈；步驟（2-2）中，所述濃縮是奈米過濾濃縮。
如請求項1所述的方法，其中，所述路易士酸為溴化物。
如請求項1所述的方法，其中，所述路易士酸為溴化鋅。
如請求項1所述的方法，其中，所述方法還具有選自以下（i）-（iii）中的一項或多項技術特徵: （i）步驟（2-1）中，用製備型液相層析進行純化時，採用梯度洗脫；梯度條件為：時間/min 流動相A/% 流動相B/% 0~5 90~75 10~25 5~32 75~60 25~40 32~39 10~0 90~100 39~50 90~75 10~25

（ii）步驟（2-1）中，用製備型液相層析進行純化時，檢測波長為200-365nm；（iii）步驟（2-2）中，所述奈米過濾是在溫度≤30℃的條件下進行的。
如請求項1所述的方法，其中，所述方法還具有選自以下（i）-（ii）中的一項或多項技術特徵：（i）步驟（2-2）中，所述乾燥為凍乾；（ii）步驟（2-i）中，所述有機溶劑為混合溶劑1和/或混合溶劑2，所述混合溶劑1為乙酸乙酯和正己烷的混合溶劑，所述混合溶劑2為二氯甲烷和正己烷的混合溶劑。
如請求項5所述的方法，其中，步驟（2-i）是通過如下方式進行的：依次採用所述混合溶劑1、所述混合溶劑2分別萃取所述製備液，棄去所述有機相，獲得所述水相；所述混合溶劑1與所述製備液的體積比為(1-5):1；所述製備液與所述混合溶劑2的體積比為(1-5):1；所述混合溶劑1中，所述乙酸乙酯與所述正己烷的體積比為(1-5):1；所述混合溶劑2中，所述二氯甲烷和所述正己烷的體積比為(1-5):1。
如請求項1所述的方法，其中，所述方法還具有選自以下（i）-（iv）中的一項或多項技術特徵：（i）所述路易士酸與式a所示的化合物的物質的量比不低於10:1；（ii）所述反應是在溶劑存在的條件下進行的，所述溶劑選自硝基烷烴類、鹵代烷烴、水、酮類、甲苯類、酯類、乙腈以及以上兩種或多種溶劑任意比例混合得到的混合溶劑；（iii）所述反應是在溫度為20-110℃的條件下進行的；（iv）所述反應進行的時間為20min-24h。
如請求項7所述的方法，其中，所述反應是在所述溶劑存在的條件下進行的，所述溶劑選自硝基甲烷、碳酸二甲酯、二氯甲烷、混合溶液二氯甲烷/酮類、混合溶液二氯甲烷/水、混合溶液二氯甲烷/酯類。
如請求項1所述的方法，其中，將式a所示的化合物與路易士酸發生反應後，純化前，還包括後處理的步驟；所述後處理包括（i）或（ii）：（i）將獲得的反應物進行減壓濃縮，獲得粗產物；（ii）將獲得的反應物進行析晶、過濾、乾燥，獲得粗產物。
如請求項1-9任一項所述的方法，其中，式a所示的化合物是通過如下方法製備得到的：（3-1-1）將式b所示化合物與鹼進行反應，獲得化合物；式b （3-1-2）將化合物與化合物進行反應，獲得化合物；（3-1-3）將化合物與依喜替康甲磺酸鹽進行反應，獲得式a所示的化合物；或者，式a所示的化合物是通過如下方法製備得到的：（3-2-1）將式b所示化合物與鹼進行反應，獲得化合物；式b （3-2-2）將化合物與五氟苯酚和DCC進行反應，獲得化合物；（3-2-3）將化合物與化合物進行反應，獲得化合物；（3-2-4）將化合物與依喜替康甲磺酸鹽進行反應，獲得式a所示的化合物。
如請求項10所述的方法，其中，式b所示化合物是通過如下方法製備的：（4-1）將化合物與氯化亞碸和苄醇進行反應，獲得化合物；（4-2）將化合物與化合物進行反應，獲得化合物；（4-3）將化合物與(Boc)₂O進行反應，獲得化合物；（4-4）將化合物與氫氣在Pd/C存在的條件下進行反應，獲得化合物；（4-5）將化合物與順丁烯二酸酐進行反應，獲得式b所示的化合物。
如請求項11所述的方法，其中，步驟（4-1）是通過如下方式進行的：（4-1-1）將氯化亞碸滴加至苄醇中，之後再加入化合物進行反應；（4-1-2）向步驟（4-1-1）獲得的反應物中加入異丙醚析晶後過濾，將濾餅烘乾，獲得化合物。
如請求項11所述的方法，其中，步驟（4-4）是通過如下方式進行的：（4-4-1）將化合物與氫氣在Pd/C存在的條件下進行反應；（4-4-2）將步驟（4-4-1）獲得的反應物進行過濾，將濾液減壓濃縮，獲得粗品；（4-4-3）將所述粗品用異丙醇/水進行重結晶，晶體即化合物。
如請求項11所述的方法，其中，步驟（4-5）是通過如下方式進行的：（4-5-1）將化合物與順丁烯二酸酐進行反應；（4-5-2）向步驟（4-5-1）獲得的反應物中加入正己烷析晶後過濾，將濾餅烘乾，獲得式b所示的化合物。