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TWI838261B - 用於治療肺癌的中藥組合物及其製備抑制或減少肺癌細胞活性的用途 - Google Patents

用於治療肺癌的中藥組合物及其製備抑制或減少肺癌細胞活性的用途 Download PDF

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Abstract

一種用於治療肺癌的中藥組合物及其製備抑制或減少肺癌細胞活性的用途，該中藥組合物當中包含白芷、黃芩、葶藶子、杏仁及芒硝，其中該中藥組合物的含量以重量份計，該白芷含量介於3~30重量份，該黃芩含量介於3~30重量份，該葶藶子含量介於8~35重量份，該杏仁含量介於5~30重量份，該芒硝含量介於0.3~5重量份，且經細胞實驗證實，該中藥組合物係以一有效劑量介於1~100μg/ml施予該肺癌細胞，以誘導LC3-I/LC3-II的蛋白表現，引發該肺癌細胞之自噬作用進而抑制或減少該肺癌細胞活性。

Description

用於治療肺癌的中藥組合物及其製備抑制或減少肺癌細胞活性的用途
本發明係關於治療肺癌的中藥；特別是指一種用於治療肺癌的中藥組合物及其製備抑制或減少肺癌細胞活性的用途。
肺癌具有較高的死亡率，因肺癌早期難以診斷，當患者被發現罹有肺癌細胞時，大多該肺癌細胞已發生轉移，治療效果實屬有限；目前對應肺癌常見的治療方法，包含：肺功能切除手術、放射治療，及化學療法，其中就以化學療法說明，係利用對患者施予標靶藥物，抑制肺癌細胞的生長，以減緩肺癌細胞擴散，並能預防癌症復發。
然而，目前化學療法所使用的標靶藥物會對人體產生明顯副作用；為了改善癌症用藥的副作用，有部分相關業者開發天然化合物，如中草藥，許多研究指出有許多特定中草藥在晚期非小細胞肺癌(NSCLC)治療，可作為輔助治療的效果。
舉例說明，黃芩（ Scutellariae radix）與白芷（Angelica dahurica）在許多研究文獻中均對癌症醫療具有一定功效；簡單來說，黃芩除了能促進患者的免疫球蛋白數量，以提升患者的免疫力，且該黃岑萃取物被證實對非小細胞肺癌細胞具細胞毒性，可顯著抑制非小細胞肺癌細胞的轉移能力；白芷當中具有呋喃香豆素的有效成分，可促進人類肺癌細胞的凋亡，確實具有治療癌症的效果。
然而，前述研究雖證實特定中草藥的天然成分具有抑制肺癌細胞的功效，但個別中草藥對應肺癌療效仍然有限。因此，如何選用中草藥組合以有效治療肺癌的技術課題，實為本發明所欲解決之目的。
有鑑於此，本發明之目的在於提供一種用於治療肺癌的中藥組合物及其製備抑制或減少肺癌細胞活性的用途，該中藥組合物選用白芷、黃芩、葶藶子、杏仁及芒硝，能有效地引發該非小細胞肺癌及小細胞肺癌之自噬作用，進而抑制或減少對應該非小細胞肺癌及小細胞肺癌的活性數量。
緣以達成上述目的，本發明提供的用於治療肺癌的中藥組合物，包含白芷、黃芩、葶藶子、杏仁及芒硝，其中該中藥組合物的含量以重量份計，該白芷含量介於3~30重量份，該黃芩含量介於3~30重量份，該葶藶子含量介於8~35重量份，該杏仁含量介於5~30重量份，該芒硝含量介於0.3~5重量份。
在其中一項實施例中，該白芷與該黃芩的含量總合為一第一組份量，該葶藶子、該杏仁與該芒硝的含量總合為一第二組份量，該第一組份量大於該第二組份量。
在其中一項實施例中，該白芷含量介於5~10重量份，該黃芩含量介於10~15重量份，該葶藶子含量介於10~15重量份，該杏仁含量介於8~12重量份，該芒硝含量介於0.5~1.5重量份。
在其中一項實施例中，該白芷含量介於8~10重量份，該黃芩含量介於13~15重量份，該葶藶子含量介於10~12重量份，該杏仁含量介於8~10重量份，該芒硝含量介於1~1.5重量份。
在其中一項實施例中，該黃芩與該葶藶子的含量總合為一第三組份量，該白芷、該杏仁與該芒硝的含量總合為一第四組份量，該第三組份量大於該第四組份量。
在其中一項實施例中，該白芷含量介於5~10重量份，該黃芩含量介於20~30重量份，該葶藶子含量介於20~30重量份，該杏仁含量介於8~12重量份，該芒硝含量介於0.5~1.5重量份。
在其中一項實施例中，該白芷與該黃芩的含量總合為一第一組份量，該葶藶子、該杏仁與該芒硝的含量總合為一第二組份量，該第二組份量大於該第一組份量。
在其中一項實施例中，該白芷含量介於15~25重量份，該黃芩含量介於10~15重量份，該葶藶子含量介於20~30重量份，該杏仁含量介於15~25重量份，該芒硝含量介於2~4重量份。
本發明提供另一實施例提供的前述中藥組合物用於製備抑制或減少肺癌細胞活性的用途，該中藥組合物係以一有效劑量介於1~100μg/ml施予該肺癌細胞，以誘導LC3-I/LC3-II的蛋白表現，引發該肺癌細胞之自噬作用。
在其中一項實施例中，該中藥組合物的有效劑量介於25~100μg/ml，且該肺癌細胞包含非小細胞肺癌細胞或小細胞肺癌細胞
本發明之效果在於，該中藥組合物藉由白芷、黃芩、葶藶子、杏仁及芒硝的特定重量份及中藥複方組成，，經細胞實驗證實，該中藥組合物當中白芷、黃芩、葶藶子、杏仁及芒硝的藥理加減作用，確實能在短時間內，更為有效地抑制及減少非小細胞肺癌細胞及小細胞肺癌細胞的活性數量，且該中藥組合物在施予25~100μg/ml的有效劑量條件下，能明顯誘導非小細胞肺癌細胞及小細胞肺癌細胞當中的LC3-I/LC3-II蛋白表現，進而引發該肺癌細胞之自噬作用，所欲達到治療或改善肺癌之療效。
本發明一較佳實施例提供一種用於治療肺癌的中藥組合物，基本成分包含白芷、黃芩、葶藶子、杏仁及芒硝，其中該中藥組合物當中白芷、黃芩、葶藶子及杏仁均係由天然植株所萃取獲得。
說明中藥組合物中之各成分的藥理特性如下：
白芷：活性成分含有白芷素、白絲醚及白芷香豆素，具有解熱鎮痛、抗菌抗炎、抗氧化等作用，且對細菌、黴菌和酵母菌都有一定的抑制作用。
黃芩：活性成分含有金合歡素（acacetin）、芹菜素（apigenin）、黃芩苷（baicalin）、白楊素（chrysin）及漢黃芩素（wogonin） 等成份，該等活性成分個別具有某些特殊療效，如抗癌、保肝、抗心血管疾病、抗過敏及抗發炎作用等，亦為擁有抗腫瘤的效用。
葶藶子：主要活性成分有異硫氰酸及其苷類成分和黃酮類成分，其中硫氰酸及其硫苷類成分為十字花科植物共有成分，具有止咳平喘作用。
杏仁：有效成分包括苦杏仁（amygadalin）、杏仁油（amygadalic acid）、多種遊離胺基酸（amino acid）、綠原酸（chlorogenic acid）、苯甲酸（benzoic acid）等，其中苦杏仁口服後會分解產生少量氫氰酸，能抑制咳嗽中樞達到鎮咳平喘作用，且杏仁在臨床上更可用於多種治咳喘之用藥。
芒硝：藥理作用包含瀉熱通便，潤燥軟堅，清火消腫，治咽喉腫痛，口舌生瘡，牙齦腫痛，目赤癱腫，赤毒。
該中藥組合物當中白芷、黃芩、葶藶子、杏仁及芒硝等含量可視癌細胞擴散情況進行配置，該中藥組合物的各成分以重量份計，該白芷含量介於3~30重量份，該黃芩含量介於3~30重量份，該葶藶子含量介於8~35重量份，該杏仁含量介於5~30重量份，該芒硝含量介於0.3~5重量份。
在第一較佳實施例中，該中藥組合物的含量配置參考下列組合：該白芷與該黃芩的含量總合為一第一組份量，該葶藶子、該杏仁與該芒硝的含量總合為一第二組份量，該第一組份量大於該第二組份量；進一步說明，該白芷含量介於5~10重量份，該黃芩含量介於10~15重量份，該葶藶子含量介於10~15重量份，該杏仁含量介於8~12重量份，該芒硝含量介於0.5~1.5重量份；在一優選實施例中，該白芷含量介於8~10重量份，該黃芩含量介於13~15重量份，該葶藶子含量介於10~12重量份，該杏仁含量介於8~10重量份，該芒硝含量介於1~1.5重量份；在實際中藥臨床上，若該患者的體內肺癌細胞未擴散轉移其他器官時，該第一實施例之中藥組合物藉由白芷、黃芩、葶藶子、杏仁及芒硝的特定重量份及中藥複方組成，確實能在短時間內，有效地抑制及減少肺癌細胞的活性數量。
在第二較佳實施例中，該中藥組合物的配置相較於前述第一實施例，增加該黃芩與該葶藶子的含量，以參考下列組合：該黃芩與該葶藶子的含量總合為一第三組份量，該白芷、該杏仁與該芒硝的含量總合為一第四組份量，該第三組份量大於該第四組份量；進一步說明，該白芷含量介於5~10重量份，該黃芩含量介於20~30重量份，該葶藶子含量介於20~30重量份，該杏仁含量介於8~12重量份，該芒硝含量介於0.5~1.5重量份；在實際中藥臨床上，若該患者的體內肺癌細胞未擴散轉移其他器官且合併具有肺積水症狀時，該第二實施例之中藥組合物藉由調整該黃芩及該葶藶子的含量增加，且該患者定期服用該中藥組合物後，不僅能抑制及減少肺癌細胞的活性數量，更為對應改善該患者的肺部積水的症狀。
在第三較佳實施例中，該中藥組合物的配置相較於前述第一實施例，增加該白芷、該葶藶子、該杏仁與該芒硝的含量，以參考下列組合：該葶藶子、該杏仁與該芒硝的含量總合之第二組份量大於該白芷與該黃芩的含量總合之第一組份量，其中該白芷含量介於15~25重量份，該黃芩含量介於10~15重量份，該葶藶子含量介於20~30重量份，該杏仁含量介於15~25重量份，該芒硝含量介於2~4重量份；在實際中藥臨床上，若該患者的體內肺癌細胞已擴散轉移其他器官時，該第三實施例之中藥組合物藉由調整該白芷、該葶藶子、該杏仁與該芒硝的含量增加，且該患者定期服用該中藥組合物後，確實能有效調控及改善該患者體內的癌細胞擴散轉移狀況。
此外，前述第一至第三實施例當中所述中藥組合物之細胞實驗證實能用於製備抑制或減少肺癌細胞活性的用途，該中藥組合物的試驗過程，係以一有效劑量介於1~100μg/ml施予該肺癌細胞，試驗發現該中藥組合物之有效劑量能有效誘導非小細胞肺癌細胞及小細胞肺癌細胞當中的LC3-I/LC3-II蛋白表現，引發該肺癌細胞之自噬作用，其中該中藥組合物的有效劑量較佳介於25~100μg/ml，非小細胞肺癌細胞及小細胞肺癌細胞當中的LC3-I/LC3-II蛋白表現更為顯著，相應明顯抑制及減少肺癌細胞的活性數量，所欲達到治療或改善肺癌之療效。
為充分瞭解本發明之目的、特徵及功效，茲提供前述第一實施例所述中藥組合物的實施含量，並分別以不同有效劑量分別施予非小細胞肺癌細胞及小細胞肺癌細胞，其中本試驗該非小細胞肺癌細胞係以肺腺癌細胞（H460）作為細胞實驗，該小細胞肺癌細胞係以小細胞肺癌細胞（H1355）作為細胞實驗，對應分析肺癌細胞的生長及存活率，藉以說明本實施該中藥組合物確實提供抑制或減少肺癌細胞活性的效果。
下述具體實施例可進一步證明本發明可實際應用範圍，且任何所屬技術領域中具有通常知識者在參照本發明之後，當可對其參數或設定作適當的更動，惟其仍應屬於本發明之範疇內。
本試驗之組別分別包含對照組1~3及實驗組：
對照組1：係單獨使用黃芩，該黃芩的有效劑量分別調配為0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml，且將各該黃芩之有效劑量分別施予肺腺癌細胞（H460）及小細胞肺癌細胞（H1355）。
對照組2：係單獨使用白芷，該白芷的有效劑量分別調配為0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml，且將各該白芷之有效劑量分別施予肺腺癌細胞（H460）及小細胞肺癌細胞（H1355）。
對照組3：係使用該黃芩與該白芷以1:1的含量比例調配組合，該黃芩與該白芷組合的有效劑量調配為0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml，該黃芩與該白芷的組合之有效劑量分別施予肺腺癌細胞（H460）及小細胞肺癌細胞（H1355）。
實驗組：該中藥組合物當中該白芷含量為10重量份，該黃芩含量為15重量份，該葶藶子含量為12重量份，該杏仁含量為10重量份，該芒硝含量為1.5重量份，該中藥組合物調配為0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml，該中藥組合物的有效劑量分別施予肺腺癌細胞（H460）及小細胞肺癌細胞（H1355）。
細胞存活率分析（MTT）：
本試驗是將肺腺癌細胞（H460）及小細胞肺癌細胞（H1355）以每孔置入5×10 3個細胞量分別培養於96孔培養皿中，培養24小時，待該肺腺癌細胞（H460）及該小細胞肺癌細胞（H1355）貼附在孔中後，移除細胞培養液；接著將各該對照組1~3及實驗組分別以調配1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml及100μg/ml之有效劑量個別注入對應該肺腺癌細胞（H460）及該小細胞肺癌細胞（H1355）之孔盤中，使得各該對照組1~3及實驗組之不同有效劑量分別在對應該肺腺癌細胞（H460）及該小細胞肺癌細胞（H1355）的孔中作用1天及2天，後續移除培養液，以滅菌磷酸鹽緩衝生理鹽水（PBS）清洗2次，並在對應各該對照組1~3及實驗組之該肺腺癌細胞（H460）與該小細胞肺癌細胞（H1355）的孔加入0.2毫升MTT的培養液，置入恆溫培養箱2小時，移除MTT培養液，以未滅菌之磷酸鹽緩衝生理鹽水（PBS）清洗1次，最後加入0.2毫升DMSO溶解晶體後，使用酵素免疫分析儀（Enzyme-linked Immuno-sorbent Assay，ELISA reader）分析儀以570nm波長測量光密度（Optical density，OD）值，計算相對的細胞存活率。
各該對照組1~3之試驗數據，係依據未加藥物處理之0μg/ml作為控制組，且將該控制組測得之吸光值量化100%之百分比，再以各該對照組1~3的OD值除以該控制組，計算相對的肺腺癌細胞（H460）存活率百分比，及小細胞肺癌細胞（H1355）存活率百分比；該實驗組試驗數據，係依據未加藥物處理之0μg/ml作為控制組，且將該控制組測得之吸光值量化100%之百分比，再以該實驗組的OD值除以該控制組，計算相對的肺腺癌細胞（H460）存活率百分比，及小細胞肺癌細胞（H1355）存活率百分比。
自噬細胞作用試驗-西方墨點（Western blot）：
偵測抗體LC3-I、LC3-II及B-Actin對應自噬作用（autophagy）的表現。首先，將硝酸纖維素膜（nitrocellulose filter membrane，NC）與所述抗體培養在含有2.5%牛血清白蛋白（Bovine serum albumin，BSA）的磷酸鹽緩衝生理鹽水（PBS）3小時，再以磷酸鹽緩衝生理鹽水（PBS）沖洗3次後，加入過氧化物酶（horse-radish peroxidase，HRP）抗體再培養1小時。最後以 Immobilion Western HRP酵素冷光試劑偵測抗原抗體複合物，使用光密度儀器（Appraise, Beckman-Coulter, Brea, California，USA）量化蛋白印漬（blotting）。
特別說明地，細胞自噬作用是細胞內的一生理作用，其主要為分解細胞內的老舊蛋白質、代謝失去作用的胞器與外來的微生物。自噬作用的過程中有許多蛋白質參與調控，位於細胞質中的Microtubule-associated protein 1A/1B-light chain 3（簡稱LC3）常被作為自噬作用活化的螢光標記。當細胞自噬作用活化時，LC3會與脂質phosphatidyl-ethanolamine結合形成LC3-II，以使LC3-II鑲嵌於吞噬泡的膜上。因此，LC3-II在細泡內的生成量可作為自噬作用的活化指標。
一、探討該肺腺癌細胞（H460）對應施予各該對照組1~3及實驗組的細胞存活率及自噬作用：
1.該肺腺癌細胞（H460）存活率測試（cell viability）：分析該對照組1~3與該實驗組對應肺腺癌細胞（H460）的存活狀況，其中該對照組1~3與該實驗組係於施予該肺腺癌細胞（H460）後，分別對應檢測該對照組1~3與該實驗組之不同有效劑量，對應該肺腺癌細胞（H460）施予後第1天，及第2天的細胞存活率。
觀察結果參如圖1A、2A、3A及4A，其中圖1A係為該對照組1在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應肺腺癌細胞（H460）於第1天及第2天的細胞存活率數據；圖2A係為該對照組2在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應肺腺癌細胞（H460）於第1天及第2天的細胞存活率數據；圖3A係為該對照組3在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應肺腺癌細胞（H460）於第1天及第2天的細胞存活率數據；圖4A係為該實驗組在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應肺腺癌細胞（H460）於第1天及第2天的細胞存活率數據。
圖1A、2A、3A及4A當中顯示該對照組1~3及實驗組試驗所得數據的標準誤差(Standard Error, SE)數據結果，係由各組細胞試驗進行三個獨立實驗(n=3)的檢測數值，其中「*」表示該對照組1~3及實驗組的數值比較，p＜0.05。
如圖1A所示，由該對照組1在第1天分析得知，該對照組1施予不同有效劑量對應該肺腺癌細胞（H460）的細胞存活率均沒有顯著下降；由該對照組1在第2天分析得知，該對照組1在100μg/ml之有效劑量對應該肺腺癌細胞（H460）的細胞存活率顯著下降至約略50%，表示該對照組1單獨黃芩使用100μg/ml之有效劑量具有一定抑制肺腺癌細胞（H460）活性，及減少該肺腺癌細胞（H460）數量的能力。
如圖2A所示，由該對照組2在第1天及第2天分析得知，該對照組2施予不同有效劑量對應該肺腺癌細胞（H460）的細胞存活率均沒有顯著下降，表示該對照組2單獨施予白芷，無法提供有效抑制及減少肺腺癌細胞（H460）活性的能力。
如圖3A所示，由該對照組3在第1天分析得知，該對照組3施予不同有效劑量對應該肺腺癌細胞（H460）的細胞存活率均沒有顯著下降；由該對照組3在第2天分析得知，該對照組3在100μg/ml之有效劑量對應該肺腺癌細胞（H460）的細胞存活率顯著下降至約略20~30%，亦即該對照組3使用黃芩與該白芷的組合相較於對照組1單獨使用黃芩，該對照組3更為明顯抑制肺腺癌細胞（H460）活性，相應減少該肺腺癌細胞（H460）數量。
如圖4A所示，由該實驗組在第1天分析得知，該實驗組在25μg/ml、50μg/ml及100μg/ml之有效劑量對應該肺腺癌細胞（H460）的細胞存活率顯著下降至約略5~20%，其中該實驗組以100μg/ml之有效劑量對應該肺腺癌細胞（H460）顯著下降細胞存活率；由該實驗組在第2天分析得知，該實驗組在25μg/ml、50μg/ml及100μg/ml之有效劑量對應該肺腺癌細胞（H460）的細胞存活率更顯著下降至約略1~10%，同樣該實驗組以100μg/ml之有效劑量對應該肺腺癌細胞（H460）更為顯著下降細胞存活率，亦即該實驗組之中藥組合物相較於對照組3使用該黃芩與該白芷的組合，更為顯著抑制肺腺癌細胞（H460）活性，相應減少肺腺癌細胞（H460）數量，且該實驗組在第1天施予25μg/ml、50μg/ml及100μg/ml之有效劑量時，即能獲得顯著性減少肺腺癌細胞（H460）數量的效能。
2.該肺腺癌細胞（H460）自噬能力：分析該對照組1~3與該實驗組分別以調配1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml及100μg/ml之有效劑量個別注入對應肺腺癌細胞（H460）的LC3-I/LC3-II蛋白質表現，其中該對照組1~3與該實驗組係於施予該肺腺癌細胞（H460）後分別進行電泳檢測該肺腺癌細胞（H460）當中LC3-I/LC3-II的蛋白質表現。
觀察結果參如圖1B、2B、3B及4B，其中圖1B係為該對照組1在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應肺腺癌細胞（H460）當中LC3-I/LC3-II蛋白質電泳；圖2B係為該對照組2在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應肺腺癌細胞（H460）當中LC3-I/LC3-II蛋白質電泳；圖3B係為該對照組3在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應肺腺癌細胞（H460）當中LC3-I/LC3-II蛋白質電泳；圖4B係為該實驗組在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應肺腺癌細胞（H460）當中LC3-I/LC3-II蛋白質電泳。
如圖1B、2B、3B及4B所示，該實驗組在25μg/ml、50μg/ml及100μg/ml之有效劑量對應該肺腺癌細胞（H460）相較於該對照組1~3能明顯提高LC3-II蛋白表現量，表示該實驗組在25μg/ml、50μg/ml及100μg/ml之有效劑量能顯著誘導該肺腺癌細胞（H460）當中LC3-I/LC3-II的蛋白表現，進而引發該肺腺癌細胞（H460）之自噬作用，以達到有效抑制及減少該肺腺癌細胞（H460）活性的效能。
二、探討該小細胞肺癌細胞（H1355）對應施予各該對照組1~3及實驗組的細胞存活率及自噬作用：
1.該小細胞肺癌細胞（H1355）存活率測試（cell viability）：分析該對照組1~3與該實驗組對應小細胞肺癌細胞（H1355）的存活狀況，其中該對照組1~3與該實驗組係於施予該小細胞肺癌細胞（H1355）後，分別對應檢測該對照組1~3與該實驗組之不同有效劑量，對應該小細胞肺癌細胞（H1355）施予後第1天，及第2天的細胞存活率。
觀察結果參如圖5A、6A、7A及8A，其中圖5A係為該對照組1在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應小細胞肺癌細胞（H1355）於第1天及第2天的細胞存活率數據；圖6A係為該對照組2在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應小細胞肺癌細胞（H1355）於第1天及第2天的細胞存活率數據；圖7A係為該對照組3在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應小細胞肺癌細胞（H1355）於第1天及第2天的細胞存活率數據；圖8A係為該實驗組在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應小細胞肺癌細胞（H1355）於第1天及第2天的細胞存活率數據。
圖5A、6A、7A及8A當中顯示該對照組1~3及實驗組試驗所得數據的標準誤差(Standard Error, SE)數據結果，係由各組細胞試驗進行三個獨立實驗(n=3)的檢測數值，其中「*」表示該對照組1~3及實驗組的數值比較，p＜0.05。
如圖5A所示，由該對照組1在第1天及第2天分析得知，該對照組1施予不同有效劑量對應該小細胞肺癌細胞（H1355）的細胞存活率均沒有顯著下降，表示該對照組1單獨施予黃芩，無法提供有效抑制及減少小細胞肺癌細胞（H1355）活性數量的效能。
如圖6A所示，由該對照組2在第1天及第2天分析得知，該對照組2施予不同有效劑量對應該小細胞肺癌細胞（H1355）的細胞存活率均沒有顯著下降，表示該對照組2單獨施予白芷同樣於對照組1，亦即無法提供有效抑制及減少小細胞肺癌細胞（H1355）活性的效能。
如圖7A所示，由該對照組3在第1天及第2天分析得知，該對照組3施予不同有效劑量對應該小細胞肺癌細胞（H1355）的細胞存活率同樣均沒有顯著下降，表示該對照組3使用黃芩與該白芷的組合同樣於對照組1、2，亦即無法提供有效抑制及減少小細胞肺癌細胞（H1355）活性的效能。
如圖8A所示，由該實驗組在第1天分析得知，該實驗組在25μg/ml、50μg/ml及100μg/ml之有效劑量對應該小細胞肺癌細胞（H1355）的細胞存活率顯著下降至約略20~60%，其中該實驗組以100μg/ml之有效劑量對應該小細胞肺癌細胞（H1355）顯示下降細胞存活率；由該實驗組在第2天分析得知，該實驗組在25μg/ml、50μg/ml及100μg/ml之有效劑量對應該小細胞肺癌細胞（H1355）的細胞存活率更顯著下降至約略10~50%，同樣該實驗組以100μg/ml之有效劑量對應該小細胞肺癌細胞（H1355）更為顯著下降細胞存活率，亦即該實驗組之中藥組合物相較於對照組1~3，確實顯著抑制小細胞肺癌細胞（H1355）活性，相應減少該小細胞肺癌細胞（H1355）的數量，且該實驗組在第1天施予25μg/ml、50μg/ml及100μg/ml之有效劑量時，即能獲得顯著性減少小細胞肺癌細胞（H1355）數量的效能。
2.該小細胞肺癌細胞（H1355）自噬能力：分析該對照組1~3與該實驗組對應小細胞肺癌細胞（H1355）的LC3-I/LC3-II蛋白質表現量，其中該對照組1~3與該實驗組係於施予該小細胞肺癌細胞（H1355）後，分別對應檢測該對照組1~3與該實驗組之不同有效劑量，電泳檢測對應該小細胞肺癌細胞（H1355）當中LC3-I/LC3-II蛋白質表現。
觀察結果參如圖5B、6B、7B及8B，其中圖5B係為該對照組1在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應小細胞肺癌細胞（H1355）的LC3-I/LC3-II蛋白質電泳；圖6B係為該對照組2在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應小細胞肺癌細胞（H1355）的LC3-I/LC3-II蛋白質電泳；圖7B係為該對照組3在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應小細胞肺癌細胞（H1355）的LC3-I/LC3-II蛋白質電泳；圖8B係為該實驗組在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應小細胞肺癌細胞（H1355）的LC3-I/LC3-II蛋白質電泳。
如圖5B、6B、7B及8B所示，該實驗組在50μg/ml及100μg/ml之有效劑量對應該小細胞肺癌細胞（H1355）相較於該對照組1~3能明顯提高LC3-II蛋白表現量，表示該實驗組在50μg/ml及100μg/ml之有效劑量能顯著誘導該小細胞肺癌細胞（H1355）當中LC3-I/LC3-II的蛋白表現，進而引發該小細胞肺癌細胞（H1355）之自噬作用，以達到有效抑制及減少該小細胞肺癌細胞（H1355）活性的效能。
歸納上述試驗，本實施例該中藥組合物藉由白芷、黃芩、葶藶子、杏仁及芒硝的特定重量份及中藥複方組成，經細胞實驗證實，該中藥組合物當中白芷、黃芩、葶藶子、杏仁及芒硝的藥理加減作用，相較於單獨使用白芷或黃芩，以及白芷與黃芩的組合，該中藥組合物施予特定有效劑量對應肺腺癌細胞（H460）及小細胞肺癌細胞（H1355），確實能在短時間內有效地抑制該肺腺癌細胞（H460）及小細胞肺癌細胞（H1355）的活性，且相應減少該肺腺癌細胞（H460）與小細胞肺癌細胞（H1355）的數量，其中該中藥組合物施予25μg/ml、50μg/ml及100μg/ml之有效劑量具有較佳抑制及減少肺腺癌細胞（H460）及小細胞肺癌細胞（H1355）活性數量的效果，在一較佳實施例中，該中藥組合物施予50μg/ml及100μg/ml之有效劑量對應抑制及減少肺腺癌細胞（H460）及小細胞肺癌細胞（H1355）活性數量的效果最為優異，並能有效誘導該肺腺癌細胞（H460）及小細胞肺癌細胞（H1355）當中LC3-I/LC3-II的蛋白表現，進而引發該肺腺癌細胞（H460）及小細胞肺癌細胞（H1355）產生自噬作用，所欲達到治療或改善肺癌之療效。
以上所述僅為本發明較佳可行實施例而已，並非用以限制本發明，本發明之技術領域的通常知識者，於參酌以上教示後，當能對上述實施例的內容做適當的修改或根據不同的實驗方法，達成本發明所主張的技術功效。
［本發明］ 無
圖1A係為單獨使用黃芩在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應肺腺癌細胞（H460）的細胞存活率數據圖。 圖1B係為單獨使用黃芩在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應肺腺癌細胞（H460）的LC3-I/LC3-II蛋白質電泳圖。 圖2A係為單獨使用白芷在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應肺腺癌細胞（H460）的細胞存活率數據圖。 圖2B係為單獨使用白芷在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應肺腺癌細胞（H460）的LC3-I/LC3-II蛋白質電泳圖。 圖3A係為使用黃芩與白芷組合在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應肺腺癌細胞（H460）的細胞存活率數據圖。 圖3B係為使用黃芩與白芷組合在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應肺腺癌細胞（H460）的LC3-I/LC3-II蛋白質電泳圖。 圖4A係為本發明一較佳實施例中藥組合物在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應肺腺癌細胞（H460）的細胞存活率數據圖。 圖4B係為本發明一較佳實施例中藥組合物在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應肺腺癌細胞（H460）的LC3-I/LC3-II蛋白質電泳圖。 圖5A係為單獨使用黃芩在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應小細胞肺癌細胞（H1355）的細胞存活率數據圖。 圖5B係為單獨使用黃芩在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應小細胞肺癌細胞（H1355）的LC3-I/LC3-II蛋白質電泳圖。 圖6A係為單獨使用白芷在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應小細胞肺癌細胞（H1355）的細胞存活率數據圖。 圖6B係為單獨使用白芷在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應小細胞肺癌細胞（H1355）的LC3-I/LC3-II蛋白質電泳圖。 圖7A係為使用黃芩與白芷組合在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應小細胞肺癌細胞（H1355）的細胞存活率數據圖。 圖7B係為使用黃芩與白芷組合在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應小細胞肺癌細胞（H1355）的LC3-I/LC3-II蛋白質電泳圖。 圖8A係為本發明一較佳實施例中藥組合物在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應小細胞肺癌細胞（H1355）的細胞存活率數據圖。 圖8B係為本發明一較佳實施例中藥組合物在施予0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml，及100μg/ml之不同有效劑量對應小細胞肺癌細胞（H1355）的LC3-I/LC3-II蛋白質電泳圖。

Claims (10)

  1. 一種用於治療肺癌的中藥組合物，包含白芷、黃芩、葶藶子、杏仁及芒硝，其中該中藥組合物的含量以重量份計，該白芷含量介於3~30重量份，該黃芩含量介於3~30重量份，該葶藶子含量介於8~35重量份，該杏仁含量介於5~30重量份，該芒硝含量介於0.3~5重量份。
  2. 如請求項1所述之用於治療肺癌的中藥組合物，其中該白芷與該黃芩的含量總合為一第一組份量，該葶藶子、該杏仁與該芒硝的含量總合為一第二組份量，該第一組份量大於該第二組份量。
  3. 如請求項2所述之用於治療肺癌的中藥組合物，其中該白芷含量介於5~10重量份，該黃芩含量介於10~15重量份，該葶藶子含量介於10~15重量份，該杏仁含量介於8~12重量份，該芒硝含量介於0.5~1.5重量份。
  4. 如請求項3所述之用於治療肺癌的中藥組合物，其中該白芷含量介於8~10重量份，該黃芩含量介於13~15重量份，該葶藶子含量介於10~12重量份，該杏仁含量介於8~10重量份，該芒硝含量介於1~1.5重量份。
  5. 如請求項1所述之用於治療肺癌的中藥組合物，其中該黃芩與該葶藶子的含量總合為一第三組份量，該白芷、該杏仁與該芒硝的含量總合為一第四組份量，該第三組份量大於該第四組份量。
  6. 如請求項5所述之用於治療肺癌的中藥組合物，其中該白芷含量介於5~10重量份，該黃芩含量介於20~30重量份，該葶藶子含量介於20~30重量份，該杏仁含量介於8~12重量份，該芒硝含量介於0.5~1.5重量份。
  7. 如請求項1所述之用於治療肺癌的中藥組合物，其中該白芷與該黃芩的含量總合為一第五組份量，該葶藶子、該杏仁與該芒硝的含量總合為一第六組份量，該第六組份量大於該第五組份量。
  8. 如請求項7所述之用於治療肺癌的中藥組合物，其中該白芷含量介於15~25重量份，該黃芩含量介於10~15重量份，該葶藶子含量介於20~30重量份，該杏仁含量介於15~25重量份，該芒硝含量介於2~4重量份。
  9. 一種如請求項1~8中任一項所述之中藥組合物用於製備抑制或減少肺癌細胞活性的用途，該中藥組合物係以一有效劑量介於1~100μg/ml施予該肺癌細胞，以誘導LC3-I/LC3-II的蛋白表現，引發該肺癌細胞之自噬作用。
  10. 如請求項9所述之中藥組合物用於製備抑制或減少肺癌細胞活性的用途，其中該中藥組合物的有效劑量介於25~100μg/ml，且該肺癌細胞包含非小細胞肺癌細胞或小細胞肺癌細胞。
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