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TWI820605B - 抗菌化合物、其製備方法及其用途 - Google Patents

抗菌化合物、其製備方法及其用途 Download PDF

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TWI820605B
TWI820605B TW111106032A TW111106032A TWI820605B TW I820605 B TWI820605 B TW I820605B TW 111106032 A TW111106032 A TW 111106032A TW 111106032 A TW111106032 A TW 111106032A TW I820605 B TWI820605 B TW I820605B
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compound
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pharmaceutical composition
nmr
mhz
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TW111106032A
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English (en)
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Inventor
邱浩傑
蕭崇瑋
Original Assignee
國立臺灣大學
國立陽明交通大學
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  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

本發明提供一種抗菌化合物、其製備方法及其用途，其可作為抗菌劑用於治療以傳染性疾病為特徵的疾病或症狀，例如胃腸炎和侵襲性非傷寒沙門氏菌病，且亦為感染具抗生素耐藥性細菌的患者提供一種新的治療選擇。

Description

抗菌化合物、其製備方法及其用途
本發明涉及一種抗菌化合物、其製備方法及其用途。
細菌感染係危害人類的具高發病率和高死亡率的常見疾病，而多重抗藥性的出現進一步抑制了細菌感染的治療並增加了感染者的死亡率。
在感染的過程中，細菌會表達多種有毒因子以入侵宿主細胞以及逃避宿主細胞防禦機制的攻擊，例如，巨噬細胞可利用多亞單位NADPH依賴性吞噬細胞氧化酶(multi-subunit NADPH-dependent phagocytic oxidase)(Phox 或 NOX2)來產生活性氧物質(reactive oxygen species，ROS)，作為抵禦細菌入侵的關鍵防禦機制。NOX2可組裝在吞噬溶酶體的細胞膜上，將氧氣還原產生超氧陰離子，然後將該超氧陰離子透過酵素性地或自發性地還原產生不同種類的ROS，包含過氧化氫(hydrogen peroxide)以及羥基自由基(hydroxyl radicals)。
前述所有ROS都可控制侵入性微生物的入侵，但詳細機制尚未被完全闡明；相反地，細菌卻可通過外排泵(efflux pumps)分泌抗氧化劑，致使藉由小分子阻斷其外排泵成為控制細菌感染的潛在策略。
有鑑於上述原因，本案發明人於發展出一種基於細胞(cell-based)的檢測方法並鑑定出數種可通過毒力靶向(virulence-targeted)機制抑制細胞內細菌的化合物後，發現數個具特殊化學結構的化合物可減弱細菌對氧化壓力(oxidative stress)的抗性且有益於細菌感染的患者，由此，本案發明人完成了本發明抗菌化合物、其製備方法及其用途。
在一方面，本發明提供了一種化合物(I)及其藥學上可接受之鹽類具有下述結構： 其中，X 1為NH或O；X 2為N或CH；X 3為S或CHCH；R 1為H、CH 3或Cl；以及R 2為烷基、烷基胺或烷基芳環基團。
於一及多個實施例中，R 2為
在另一方面，本發明提供了一種藥物組合物，包含有效量之具有下述結構的化合物(I)及其藥學上可接受之鹽類， 其中，X 1為NH或O；X 2為N或CH；X 3為S或CHCH；R 1為H、CH 3或Cl；以及 R 2為烷基、烷基胺或烷基芳環基團。
於一及多個實施例中，R 2為
於一及多個實施例中，該化合物(I)為 。
於一及多個實施例中，該藥物組合物進一步包含一藥學上可接受之賦形劑。
於一及多個實施例中，該藥物組合物進一步包含一抗生素。
於一及多個實施例中，該藥物組合物係以細菌對宿主氧化壓力防禦的抗性為標靶。
於一及多個實施例中，該細菌為多重抗藥性菌株。
於一及多個實施例中，該細菌係選自由金黃色葡萄球菌( Staphylococcus aureus)、溶血性葡萄球菌( Staphylococcus haemolyticus)、表皮葡萄球菌( Staphylococcus hominis)、中間葡萄球菌( Staphylococcus intermedius)、腐生葡萄球菌( Staphylococcus saprophyticus)、葡萄球菌( Staphylococcus lugdunesis)、紅斑丹毒絲菌( Erysipelothrix rhusiopathiae)、糞腸球菌( Enterococcus faecalis)、糞腸球菌( Enterococcus faecium)、VR-糞腸球菌( VR- E. faecium)、蠟狀芽孢桿菌( Bacillus cereus)、枯草芽孢桿菌( Bacillus subtilis)、白喉棒狀桿菌( Corynebacterium diphtheriae)、李斯特菌( Listeria monocytogenes)、化膿性鏈球菌( Streptococcus pyogenes)、艱難梭菌( Clostridium difficile)、大腸桿菌( Escherichia coli)、鼠傷寒沙門氏菌( Salmonella Typhimurium)、鮑曼不動桿菌( Acinetobacter baumannii)及結核分枝桿菌( Mycobacterium tuberculosis)所組成之群組。
在另一方面，本發明提供了一種合成化合物(I)的方法，包含： (1)    將下述結構的化合物(VI)與POCl 3及R 2NH 2反應獲得該化合物(I)；或 (2)    將下述結構的化合物(XVI)與R 2NH 2反應獲得該化合物(I)； 其中，X 1、X 2、X 3、R 1以及R 2同前述所定義。
於一及多個實施例中，當該化合物(VI)中的X 1為O時，該化合物(VI)係通過以下方法獲得： (a)     在K 2CO 3存在的環境下，將如下述結構的化合物(II)與 如下述結構的化合物(III)反應 獲得如下述結構的化合物(IV)； (b)    將該化合物(IV)與SnCl 2反應獲得如下述結構的化合物(V)；以及 (c)     將該化合物(V)與H 2SO 4反應獲得該化合物(VI)；其中，X 2、X 3、R 1以及R 2同前述所定義。
於一及多個實施例中，當該化合物(VI)中的X 1為NH時，該化合物(VI)係通過以下方法獲得： (a)     在SOCl 2存在的環境下，將如下述結構的化合物(VII)與 如下述結構的化合物(VIII)反應 獲得如下述結構的化合物(IX)； (b)    將該化合物(IX)與SnCl 2反應獲得如下述結構的化合物(X)；以及
Figure 111106032-A0305-02-0008-1
(c)將該化合物(X)與二乙二醇單甲醚(DEGMME)反應獲得該化合物(VI)；其中，X2、X3、R1以及R2同前述所定義。
於一及多個實施例中，當該化合物(VI)中的X1為NH時，該化合物(VI)係通過以下方法獲得：
(a)將如下述結構的化合物(XI)與
Figure 111106032-A0305-02-0008-2
如下述結構的化合物(XII)與Cu及K2CO3反應
Figure 111106032-A0305-02-0008-3
獲得如下述結構的化合物(XIII)；以及
Figure 111106032-A0305-02-0008-4
(b)將該化合物(XIII)與H2SO4反應獲得該化合物(VI)；其中，X2、X3、R1以及R2同前述所定義。
於一及多個實施例中，當該化合物(VI)中的X 1為NH時，該化合物(XVI)係通過以下方法獲得： (a)     將如下述結構的化合物(II)與 如下述結構的化合物(XIV)反應 獲得如下述結構的化合物(XV)；以及 (b)    將該化合物(XV)與SnCl 2及HCl反應獲得該化合物(XVI)；其中，X 2、X 3、R 1以及R 2同前述所定義。
因此，本發明的化合物可作為抗菌劑用於治療以傳染性疾病為特徵的疾病或症狀，例如胃腸炎和侵襲性非傷寒沙門氏菌病，且亦為感染具抗生素耐藥性細菌的患者提供一種新的治療選擇。
為使本發明技術內涵更加詳盡與完備，以下針對本發明的實施態樣與具體實施例進行說明，但以下說明並非實施或運用本發明具體實施例的唯一形式，倘本領域中具通常知識者透過以下敘述可輕易明瞭此發明之必要技術內容，且在不違反其中的精神及範圍下多樣地改變及修飾此發明來適應不同用途及狀況，如此，該實施態樣亦屬於本發明的申請專利範圍。
於本文中，除非上下文另有載明，則術語「包含」、「包括」、「具有」或「含有」係包含性或開放性，並不排除其他未闡述之元素或方法步驟；術語「一」及「該」可解釋為單數亦可解釋為複數；術語「一個或多個」意旨「至少一個」，因此可以包括單個特徵或混合物/組合。
本發明提供一種化合物(I)及其藥學上可接受之鹽類具有下述結構： 其中，X 1為NH或O；X 2為N或CH；X 3為S或CHCH；R 1為H、CH 3或Cl；以及R 2為烷基、烷基胺或烷基芳環基團。
本發明亦提供一種藥物組合物，包含有效量之具有下述結構的化合物(I)及其藥學上可接受之鹽類， 其中，X 1為NH或O；X 2為N或CH；X 3為S或CHCH；R 1為H、CH 3或Cl；以及R 2為烷基、烷基胺或烷基芳環基團。
本發明亦提供一種合成化合物(I)的方法，包含： (1)  將下述結構的化合物(VI)與POCl3及R2NH2反應獲得該化合物(I)；或 (2)    將下述結構的化合物(XVI)與R 2NH 2反應獲得該化合物(I)； 其中，X 1、X 2、X 3、R 1以及R 2同前述所定義。
於本文中，術語「藥學上可接受之鹽類」，係指本發明化合物於藥學上可接受的有機或無機鹽類。例示性的鹽類包含但不限於硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸性磷酸鹽、異菸酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸性檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、鞣酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、龍膽酸鹽、富馬酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡醣醛酸鹽、蔗糖酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲磺酸甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽和雙羥萘酸鹽(即1,1-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽))鹽。藥學上可接受之鹽類可涉及包含另一種分子，例如乙酸根離子、琥珀酸根離子或其他相對離子(counter ion)。相對離子可為任何有機或無機部分，以穩定母體化合物的電荷。此外，藥學上可接受之鹽類在其結構中可具有多於一個的帶電原子，若藥學上可接受之鹽類具多個帶電原子的話，可使該藥學上可接受之鹽類具有多個相對離子，因此，藥學上可接受之鹽類可具有一種或多種帶電原子和/或一種或多種相對離子。
若本發明的化合物係呈鹼性，則該藥學上可接受之鹽類可通過本領域任何合適的方法進行製備，例如以無機酸處理游離鹼，無機酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸等；或以有機酸處理游離鹼，有機酸例如乙酸、馬來酸、琥珀酸、扁桃酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊酸、吡喃糖苷酸如葡萄醣醛酸或半乳醣醛酸、α羥基酸如檸檬酸酸或酒石酸、胺基酸如天冬氨酸或谷氨酸、芳族酸如苯甲酸或肉桂酸、磺酸如對甲苯磺酸或乙磺酸等。
若本發明的化合物係呈酸性，則可通過本領域任何合適的方法進行製備，例如以無機或有機鹼如胺(伯胺、仲胺或叔胺)、鹼金屬氫氧化物或鹼土金屬氫氧化物等處理游離酸。合適的鹽類例示性包含但不限於衍生自胺基酸的有機鹽類，例如甘氨酸和精氨酸、氨、伯胺、仲胺和叔胺，以及環狀胺，例如哌啶、嗎啉和哌嗪；以及衍生自無機鹽類的鈉、鈣、鉀、鎂、錳、鐵、銅、鋅、鋁和鋰的鹽類。
該藥學上可接受之鹽類可以通過本領域任何合適的方法進行製備。例如，以無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸等，或與有機酸如乙酸、馬來酸、琥珀酸、扁桃酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊酸、吡喃糖苷酸，如葡萄醣醛酸或半乳醣醛酸，α羥基酸，例如檸檬酸或酒石酸，氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸 酸、芳族酸如苯甲酸或肉桂酸、磺酸如對甲苯磺酸或乙磺酸等。
於本文中，術語「藥學上可接受的」，係指物質或組合物必須在化學和/或毒理學上與構成製劑的其他成分和/或用其治療的哺乳動物相容。
於本文中，術語「藥物組合物」，係指本發明的化合物或其藥學上可接受之鹽類，以及至少一種藥學上可接受之載體。在某些特定的實施例中，本發明之藥物組合物係適合以局部、腸胃外或注射給藥的形式提供。
於本文中，術語「賦形劑」，係指黏合劑、填充劑、潤滑劑、潤濕劑/表面活性劑、助流劑、調味劑、甜味劑和其他常用於藥物製造中之賦形劑。
黏合劑，例如阿拉伯膠粘液、海藻酸、聚乙烯吡咯烷酮(聚維酮)、明膠、蔗糖、澱粉粘液、預膠化澱粉、澱粉糊、海藻酸鈉、山梨糖醇、黃蓍膠、葡萄糖、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、矽酸鎂鋁、澱粉糊、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖維素鈉、糊精、乙基纖維素、聚乙二醇、瓜爾豆膠、玉米醇溶蛋白、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素、聚甲基丙烯酸酯和羧甲基纖維素鈣。
填充劑，例如水溶性填充劑，如可溶性乳糖、可壓縮糖、糖果糖、右旋糖、甘露醇、氯化鈉、山梨糖醇、木糖醇、氯化鈉F；和非水溶性填充劑，如碳酸鈣、碳酸鎂、磷酸鈣(例如二鹼和三鹼磷酸鈣)、硫酸鈣、高嶺土、微晶纖維素、粉狀纖維素、預糊化澱粉、澱粉、硫酸鋇、三矽酸鎂和氫氧化鋁。
潤滑劑，例如硬脂酸鹽(例如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣)、滑石粉、聚乙二醇、液體石蠟、十二烷基硫酸鈉、十二烷基硫酸鎂、膠體二氧化矽、棕櫚硬脂酸鹽、硬脂酸、硬脂酸鋅和氫化植物油。
潤濕劑/表面活性劑，例如十二烷基硫酸鈉、十二烷基硫酸鈉、聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯(Tweens)、聚氧乙烯硬脂酸酯以及脫水山梨糖醇脂肪酸酯(Spans)。
助流劑，例如滑石、澱粉、硬脂酸鎂和二氧化矽衍生物，例如膠體二氧化矽(例如 Aerosil)、熱解二氧化矽、水合矽鋁酸鈉以及膠體二氧化矽。
調味劑，例如橙子、櫻桃、草莓、覆盆子、葡萄以及百香果。
甜味劑，例如糖精鈉、阿斯巴甜、糖果糖、山梨糖醇、蔗糖以及木糖醇。
於本文中，術語「抗生素」，係指用於通過殺死細菌、抑制細菌生長或降低細菌活力來治療和/或預防細菌感染的物質。該抗生素可為阿莫西林(amoxicillin)、撲菌特(trimethoprim-sulfamethoxazole)以及紅黴素(erythromycin)等一線抗生素；或二線抗生素如阿奇黴素(azithromycin)、頭孢克肟(cefixime)、環丙沙星(ciprofloxacin)、勞拉卡頭(loracarbef)、左氧氟沙星(levofloxacin)以及甲硝唑(metronidazole)。
實施例
具化學結構 (I) 之化合物的合成
合成反應式 I
在合成反應式 I 的第一步中，在K 2CO 3的存在下，將化合物A與化合物B偶合生成化合物C。於該步驟中，首先將K 2CO 3加入含有化合物B之1,4-二噁烷溶液中。接著，將化合物A加到反應混合物中，將獲得的反應混合物攪拌並加熱至回流溫度16小時。將反應混合物冷卻至室溫後，向加入NaOH溶液經淬滅反應。將反應混合物以甲苯萃取。用無水MgSO 4乾燥收集有機相，最後過濾，並將濾液濃縮得到化合物C。
在步驟2中，將該化合物C與SnCl 2反應得到化合物D。在該步驟中，將經EtOH溶液乾燥之化合物C緩慢加入SnCl 2溶液中。將該混合物在氮氣環境下攪拌16小時並減壓濃縮。通過矽藻土過濾相關混合物並用EtOAc洗滌。將該濾液濃縮並以層析法純化後得到化合物D。
在步驟3中，將該化合物D溶解在DMF中並將濃H 2SO 4加入溶液中並在氮氣下回流16小時。將該反應混合物冷卻並倒入冷水中，過濾收集沉澱，再以冷水洗滌並真空乾燥，得到化合物E。
在步驟4中，該化合物E和POCl 3在室溫下快速混合。經10分鐘後，滴入二甲基乙醯胺，然後回流16小時。減壓蒸餾出過量的POCl 3，殘餘物用甲苯和水萃取。甲苯萃取物用無水硫酸鎂乾燥，減壓濃縮，得到粗化合物。將該粗化合物溶解於二甲苯中並在室溫且氮氣環境下攪拌。經10分鐘後，加入R 2NH 2然後回流16小時。將反應混合物倒入水中。所得溶液通過加入2N NaOH水溶液鹼化，然後用EtOAc和水萃取，該EtOAc萃取液用無水硫酸鎂乾燥並減壓濃縮，粗品經矽膠或氧化鋁柱層析純化，得到化合物F。
在合成反應式 I 中，R 2係為烷基或烷基胺或烷基芳環基團，其結構如前述所定義。
合成反應式 II
在合成反應式II的第一步中，化合物G在SOCl2存在下轉化為中間體醯氯。接著，將中間體與3-氨基-2-氯吡啶一起加入到反應混合物中。然後將獲得的反應混合物攪拌並加熱至回流溫度16小時。將反應混合物冷卻至室溫後，向其中加入NaOH溶液以淬滅反應。反應混合物用EtOAc萃取。用無水MgSO4乾燥收集的有機相，最後過濾。濾液濃縮得到化合物H。
在步驟2中，化合物H與SnCl2反應得到化合物I。在該步驟中，將化合物I的乾燥EtOH溶液緩慢加入到SnCl2溶液中。將混合物加熱至100℃保持30分鐘，冷卻，過濾並用水洗滌。濾液用2N水溶液鹼化並用DCM和水萃取。DCM萃取液用無水硫酸鎂乾燥，室溫減壓濃縮，得到化合物I。
在步驟3中，將二乙二醇單甲醚(DEGMME)中的化合物I在150℃和氮氣氛下攪拌16小時。將混合物在冰上冷卻，過濾收集沉澱，用MeOH洗滌，真空乾燥，得到化合物J。
在步驟4中，化合物J和POCl3在室溫下快速混合。10分鐘後，滴加二甲基乙醯胺，然後回流16小時。減壓蒸餾出過量的POCl3，殘餘物用甲苯和水萃取。甲苯萃取物用無水硫酸鎂乾燥，減壓濃縮，得到粗化合物。將粗化合物溶解在二甲苯中並在室溫下在氮氣氛下攪拌。10分鐘後，加入R2NH2然後回流16小時。將反應混合物倒入水中。所得溶液通過加入2N水溶液鹼化NaOH溶液，然後用EtOAc和水萃取，EtOAc萃取液用無水硫酸鎂乾燥，減壓濃縮，粗品經矽膠或氧化鋁柱層析純化，得到化合物K。
在合成方程式II中，R2係為烷基或烷基胺或烷基芳環基團，其結構如前述所定義。
合成反應式III
Figure 111106032-A0305-02-0020-5
在合成方案III的第一步中，將溶解在乾燥N,N-二甲基甲醯胺(DMF)中的化合物L、M、銅粉和K2CO3的混合物在氮氣氛下在170℃攪拌16小時。將混合物冷卻至室溫並過濾以除去銅粉。濾液減壓濃縮，粗品經矽膠柱層析純化，得化合物N。
在步驟2中，將DMF中的化合物N與H2SO4在氮氣氛下在150℃下逐滴攪拌16小時。將反應混合物倒入碎冰中，過濾收集沉澱，用冷水洗滌，真空乾燥，得到化合物O。
在步驟3中，化合物O和POCl3在室溫下快速混合10分鐘，然後回流16小時。減壓蒸餾出過量的POCl3，殘餘物用甲苯和水萃取。甲苯萃取物用無水硫酸鎂乾燥，減壓濃縮，得到粗化合物。將粗化合物溶解在二甲苯中並在室溫下在氮氣氛下攪拌。10分鐘後，加入R2NH2然後回流16小時。將反應混合物倒入水中。所得溶液通過加入2N水溶液鹼化NaOH溶液，然後用EtOAc和水萃取，EtOAc萃取液用無水硫酸鎂乾燥，減壓濃縮，粗品經矽膠或氧化鋁柱層析純化，得到化合物P。
在合成方程式III中，R 2係為烷基或烷基胺或烷基芳環基團，其結構如前述所定義。
合成反應式 IV
在合成方案IV的第一步中，將化合物R和S在無水THF中的溶液在氮氣氛下逐滴添加到在冰浴中攪拌的NaH在無水THF中的懸浮液中。將混合物在室溫下攪拌16小時，然後倒入冷水中。在用20% HCl水溶液將pH值調節至中性後，所得溶液用EtOAc萃取。EtOAc萃取液用無水硫酸鎂乾燥並減壓濃縮。粗 品經矽膠柱層析純化，得到化合物T。
在步驟2中，將攪拌的化合物T在乙醇中的懸浮液加入在濃HCl中的溶液的亞錫SnCl 2。將反應混合物回流攪拌3小時，然後減壓濃縮。然後將反應混合物倒入碎冰中，過濾收集沉澱，用冷水洗滌，真空乾燥，得到化合物U。
在步驟3中，將化合物U和R 2NH 2的混合物在密封的反應管中，於微波加熱下，160°C下攪拌30分鐘。冷卻至室溫後，反應混合物用DCM和水萃取。 DCM萃取物用無水硫酸鎂乾燥並減壓濃縮。 粗品經矽膠或氧化鋁柱層析純化，得到化合物V。
在合成方程式IV中，R 2係為烷基或烷基胺或烷基芳環基團，其結構如前述所定義。
通過合成方程式 I 合成之化合物其類型和對細菌的生物活性如下表1所示。
表1
  化合物編號   R 2  類型 EC 50(μM) IC 50(μM)   選擇性比 (IC 50/EC 50)
S. Typhimurium 14028 RAW264.7
SW1 3.6 34.6 9.5
SW2 4.9 26.6 5.4
SW3 4.3 22.2 5.1
SW4 32.0 84.7 2.6
SW5 38.2 74.0 1.9
SW6 1.2 23.0 18.9
SW7 21.2 56.3 2.7
SW8 54.1 72.7 1.3
SW9 19.7 60.8 3.1
SW10 N.A N.A N.A
SW11 44.0 74.0 1.7
SW12 33.5 52.1 1.6
SW13 56.0 111.7 2.0
SW14 0.4 28.7 80.6
SW15 31.1 82.7 2.7
SW16 18.5 51.1 2.8
SW17 28.5 72.8 2.6
SW18 55.1 70.1 1.3
SW19 61.5 112.2 1.8
SW20 45.1 91.6 2.0
SW22 1.1 16.3 14.8
SW23 ＞90 ＞90 ＞1.3
SW24 ＞90 ＞90 1.0
SW26 1.1 16.1 14.6
通過合成方程式II合成之化合物其類型和對細菌的生物活性如下表2所示。
表2
  化合物編號   R 2  類型 EC 50(μM) IC 50(μM)   選擇性比 (IC 50/EC 50)
S. Typhimurium 14028 RAW264.7
SW21 5.8 63.6 11.0
SW25 3.3 85.5 26.2
SW27 6.5 ＞90 ＞13.9
SW28 9.3 63.2 6.8
SW29 5.3 100.6 18.8
SW30 N.A N.A N.A
SW31 7.0 129.3 18.7
SW32 6.4 104.7 16.4
SW21 5.8 63.6 11.0
SW25 3.3 85.5 26.2
SW27 6.5 ＞90 ＞13.9
SW28 9.3 63.2 6.8
SW29 5.3 100.6 18.8
SW30 N.A N.A N.A
SW31 7.0 129.3 18.7
SW32 6.4 104.7 16.4
SW21 5.8 63.6 11.0
SW25 3.3 85.5 26.2
SW27 6.5 ＞90 ＞13.9
SW28 9.3 63.2 6.8
SW29 5.3 100.6 18.8
SW30 N.A N.A N.A
SW31 7.0 129.3 18.7
SW32 6.4 104.7 16.4
通過合成方程式III合成之化合物其類型和對細菌的生物活性如下表3所示。
表3
  化合物編號   R 2  類型 EC 50(μM) IC 50(μM)   選擇性比 (IC 50/EC 50)
S. Typhimurium 14028 RAW264.7
SW33 0.7 143.0 213.4
SW35 3.8 111.3 29.3
通過合成方程式IV合成之化合物其類型和對細菌的生物活性如下表4所示。
表4
  化合物編號   R 2  類型 EC 50(μM) IC 50(μM)   選擇性比 (IC 50/EC 50)
S. Typhimurium 14028 RAW264.7
SW38 1.6 36.5 22.4
SW39 1.7 121.6 72.5
SW41 3.9 104.6 26.8
SW42 0.9 76.4 82.6
SW43 1.2 101.8 82.1
上述合成化合物的光譜數據如下所示。
N1-(2-氯二苯並[b,f][1,4] 氧氮雜環庚烷-11-yl)-N2,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺(SW1) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.39 (s, 1H), 7.36 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.06 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 6.92 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.50 (brs, 1H), 3.58 (brs, 2H), 2.58 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.27 (s, 6H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.53, 155.69, 151.89, 141.27, 132.58, 130.58, 127.73, 127.50, 127.28, 126.03, 123.90, 122.48, 120.49, 57.62, 45.38, 39.09 ppm. 針對C 17H 18ON 3Cl (M+H) +計算的 HRMS：316.1211。 找到：316.1213。
2-氯-N-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)二苯並[b,f][1,4] 氧氮雜環庚烷-11-胺 (SW2) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.39 (s, 1H), 7.36 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.06 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 6.92 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 5.50 (brs, 1H), 3.61 (s, 2H), 2.77 (brs, 2H), 2.56 (s, 4H), 1.78 (s, 4H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.51, 155.78, 151.91, 141.24, 132.57, 130.57, 127.73, 127.63, 127.27, 126.03, 123.89, 122.46, 120.49, 54.55, 54.09, 40.47, 23.70 ppm. 針對 C 19H 20ON 3Cl (M+H) +計算的 HRMS：342.1368。 找到：342.1371。
2-氯-N-(2-(哌啶-1-基)乙基)二苯並[b,f][1,4] 氧氮雜環庚烷-11-胺(SW3) 1H NMR (400 MHz, CDCl 33-d) δ 7.38 – 7.35 (m, 2H), 7.15 – 7.12 (m, 2H), 7.05 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 6.92 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.60 (brs, 1H), 3.58 (s, 2H), 2.61 – 2.60 (m, 2H), 2.43 (brs, 4H), 1.57 – 1.56 (m, 4H), 1.44 (s, 2H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.48, 155.63, 151.87, 141.31, 132.55, 130.62, 127.85, 127.47, 127.31, 126.03, 123.85, 122.52, 120.49, 56.90, 54.47, 38.37, 26.26, 24.66 ppm. 針對 C 20H 22ON 3Cl (M+H) +計算的 HRMS：356.1524。 找到：356.1528。
2-氯-N-(2-嗎啉乙基二苯並[b,f][1,4] 氧氮雜環庚烷-11-胺 (SW4) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.39 – 7.37 (m, 2H), 7.16 – 7.04 (m, 4H), 6.93 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.41 (brs, 1H), 3.72 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 3.61 (q, J = 4.4 Hz, 2H), 2.67 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.51 (brs, 4H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.50, 155.54, 151.84, 141.13, 132.68, 130.65, 127.70, 127.35, 127.29, 126.07, 124.05, 122.60, 120.52, 67.20, 56.84, 53.56, 37.95 ppm. 針對 C 19H 20O 2N 3Cl (M+H) +計算的 HRMS：358.1317。 找到：358.1325。
2-氯-N-(2-(吡啶-3-基)乙基)二苯並[b,f][1,4]氧氮雜環庚烷-11-胺(SW5) 1H NMR (400 MHz, CDCl3 3-d) δ 8.53 (s, 1H), 8.48 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.26 – 7.24 (m, 2H), 7.14 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.10 – 7.07 (m, 2H), 6.95 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.80 (brs, 1H), 3.80 (q, J = 6.4 Hz, 2H), 3.06 (t, J = 6.8 Hz, 2H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.58, 155.05, 151.81, 150.45, 148.23, 140.96, 136.61, 135.05, 132.80, 130.69, 127.42, 127.35, 127.07, 126.10, 124.27, 123.72, 122.65, 120.56, 42.76, 32.53 ppm. 針對C 20H 16ON 3Cl (M+H) +計算的 HRMS：350.1055。 找到：350.1059。
2-氯-N-(2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙基)二苯並[b,f][1,4]氧氮雜環庚烷-11-胺 (SW6) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3d) δ 7.35 –7.32 (m, 2H), 7.12 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.07 – 6.99 (m, 3H), 6.90 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.74 – 3.72 (m, 1H), 3.55 – 3.54 (m, 1H), 3.04 – 3.02 (m, 1H), 2.42 (brs, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.17 (q, J = 8.0 Hz, 1H), 1.92 – 1.90 (m, 2H), 1.84 – 1.75 (m, 4H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.50, 155.51, 151.88, 141.54, 132.31, 130.45, 128.08, 127.34, 127.29, 126.00, 123.60, 122.47, 120.48, 65.25, 57.25, 40.83, 39.13, 29.10, 28.64, 22.74 ppm. 針對 C 20H 22ON3Cl (M+H) +計算的 HRMS：356.1524。 找到：356.1515。
2-氯-N-苯乙基二苯並[b,f][1,4]氧氮雜環庚烷-11-胺 (SW7) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.35 – 7.06 (m, 11H), 6.94 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.69 (brs, 1H), 3.80 (q, J = 6.4 Hz, 2H), 3.04 (t, J = 6.8 Hz, 2H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.54, 155.16, 151.84, 141.15, 139.51, 132.66, 130.62, 129.11, 128.91, 127.62, 127.37, 127.16, 126.76, 126.06, 124.07, 122.57, 120.52, 42.95, 35.20 ppm.  針對 C 21H 17ON 2Cl (M+H) +計算的 HRMS：349.1102。 找到：349.1103。
2-氯-N-戊基二苯並[b,f][1,4]氧氮雜環庚烷-11-胺 (SW8) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.35 (s, 2H), 7.13 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.07 – 7.06 (m, 2H), 6.92 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.67 (brs, 1H), 3.51 (s, 2H), 1.70 – 1.67 (m, 3H), 1.40 (brs, 4H), 0.93 (brs, 3H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.61, 155.49, 151.87, 141.23, 132.60, 130.60, 127.78, 127.30, 127.19, 126.04, 123.92, 122.57, 120.47, 42.01, 29.56, 29.14, 22.69, 14.24 ppm.針對 C 18H 19ON 2Cl (M+H) +計算的 HRMS：315.1259。 找到：315.1260。
N-芐基-2-氯二苯並[b,f][1,4] 氧氮雜環庚烷-11-胺 (SW9) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.45 – 7.29 (m, 7H), 7.16 (brs, 2H), 7.08 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 6.96 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.94 (brs, 1H), 4.72 (s, 2H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.63, 155.15, 151.91, 140.96, 138.69, 132.81, 130.68, 129.01, 128.54, 127.85, 127.43, 127.37, 127.18, 126.10, 124.26, 122.65, 120.55, 46.28 ppm. 針對 C 20H 15ON 2Cl (M+H) +計算的 HRMS：335.0946。 找到：335.0936。
2-氯-11-(哌啶-1-基) 二苯並[b,f][1,4] 氧氮雜環庚烷 (SW10) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.35 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.16 – 7.11 (m, 2H), 7.08 – 7.03 (m, 2H), 6.94 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.46 (s, 4H), 1.68 (s, 6H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.55, 159.37, 152.07, 140.70, 132.45, 130.33, 129.30, 127.24, 125.93, 125.73, 124.28, 122.77, 120.19, 48.70, 26.05, 25.10 ppm. 針對C 18H 17ON 2Cl (M+H) +計算的 HRMS：313.1102。 找到：313.1103。
2-氯-N-(環丙基甲基)二苯並[b,f][1,4] 氧氮雜環庚烷-11-胺 (SW11) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.41 (s, 1H), 7.37 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.15 – 7.04 (m, 4H), 6.93 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.84 (s, 1H), 3.37 (s, 2H), 1.15 – 1.13 (m, 1H), 0.58 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 0.30 (s, 2H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.64, 155.46, 151.90, 141.20, 132.64, 130.62, 127.71, 127.29, 126.05, 123.98, 122.57, 120.49, 47.16, 10.60, 3.83 ppm. 針對 C 17H 15ON 2Cl (M+H) +計算的 HRMS：299.0946。 找到：299.0949。
4-(2-((2-氯二苯並[b,f][1,4]氧氮雜環庚烷-11-基)氨基)乙基)苯酚(SW12) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.34 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.17 – 7.11 (m, 4H), 7.06 (brs, 2H), 6.94 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.97 (brs, 1H), 4.68 (brs, 1H), 3.76 – 3.75 (m, 2H), 2.95 (t, J = 7.2 Hz, 2H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.56, 155.31, 154.49, 151.89, 141.08, 132.69, 131.47, 130.64, 130.20, 127.62, 127.32, 127.18, 126.08, 124.11, 122.58, 120.53, 115.75, 43.16, 34.30 ppm. 針對 C 21H 17O 2N 2Cl (M+H) +計算的 HRMS：365.1051。 找到：365.1057。
2-氯-N-丙基二苯並[b,f][1,4] 氧氮雜環庚烷-11-胺 (SW13) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.36 – 7.35 (m, 2H), 7.14 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.06 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 6.92 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.69 (brs, 1H), 3.49 (q, J = 5.6 Hz, 2H), 1.72 (sextet, J = 7.2 Hz, 2H), 1.03 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.62, 155.50, 151.88, 141.24, 132.60, 130.61, 127.80, 127.30, 127.18, 126.05, 123.93, 122.58, 120.48, 43.74, 22.69, 11.94 ppm. 針對C 16H 15ON 2Cl (M+H) +計算的 HRMS：287.0946。 找到：287.0950。
2-氯-N-(2-(哌嗪-1-基)乙基)二苯並[b,f][1,4]氧氮雜環庚烷-11-胺(SW14) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.38 – 7.36 (m, 2H), 7.13 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.06 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 6.93 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 5.50 (brs, 1H), 3.60 (brs, 2H), 2.89 (s, 4H), 2.65 (brs, 2H), 2.48 (s, 4H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDC 33-d) δ 159.48, 155.56, 151.84, 141.20, 132.61, 130.62, 127.76, 127.39, 127.29, 126.04, 123.95, 122.55, 120.50, 56.87, 54.39, 46.33, 38.05 ppm. 針對 C 19H 21ON 4Cl (M+H) +計算的 HRMS：357.1477。 找到：357.1484。
2-氯-11-(3-(3,4-二氯苯基)丙基)二苯並[b,f][1,4]氧氮雜環庚烷(SW15) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.38 – 7.36 (brs, 3H), 7.24 (s, 1H), 7.17 – 7.07 (m, 5H), 6.97 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.75 (brs, 1H), 3.76 (s, 2H), 3.01 (t, J = 6.4 Hz, 2H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.57, 155.19, 151.85, 139.83, 132.93, 132.76, 131.05, 130.74, 128.57, 127.26, 127.16, 126.14, 124.41, 122.70, 120.59, 42.83, 34.45 ppm. 針對 C 21H 15ON 2Cl 3(M+H) +計算的 HRMS：417.0323。 找到：417.0327。
2-氯-N-(2-(吡啶-4-基)乙基)二苯並[b,f][1,4]氧氮雜環庚烷-11-胺  (SW16) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 8.50 (s, 2H), 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.24 – 7.06 (m, 7H), 6.97 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.92 (brs, 1H), 3.82 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.06 (t, J = 6.8 Hz, 2H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 33-d) δ 159.55, 155.18, 151.83, 150.04, 148.78, 140.62, 133.03, 132.91, 130.70, 127.25, 127.18, 126.13, 124.54, 124.42, 122.67, 120.59, 42.21, 34.68 ppm. 針對 C 20H 16ON 3Cl (M+H) +計算的 HRMS：350.10547。 找到：350.10550。
2-氯-N-(戊-3-基）二苯並[b,f][1,4]氧氮雜環庚烷-11-胺 (SW17) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.37 – 7.34 (m, 2H), 7.12 (t, J = 9.2 Hz, 2H), 7.05 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 6.91 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.44 (brs, 1H), 4.16 (brs, 1H), 1.77 – 1.67 (m, 2H), 1.62 – 1.52 (m, 2H), 0.99 (t, J = 7.6 Hz, 6H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.57, 155.10, 151.76, 141.36, 132.51, 130.55, 128.06, 127.27, 127.01, 125.98, 123.67, 122.61, 120.41, 53.14, 27.02, 10.44 ppm. 針對C 18H 19ON 2Cl (M+H) +計算的 HRMS：315.1259。 找到：315.1260。
2-氯-N-異戊基二苯並[b,f][1,4]氧氮雜環庚烷-11-胺 (SW18) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.37 – 7.35 (m, 2H), 7.14 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.08 – 7.06 (m, 2H), 6.92 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.60 (brs, 1H), 3.54 (q, J = 6.4 Hz, 2H), 1.79 – 1.69 (m, 1H), 1.61 – 1.56 (m, 2H), 0.98 (d, J = 6.4 Hz, 6H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.62, 155.47, 151.88, 141.27, 132.60, 130.61, 127.81, 127.34, 127.17, 126.05, 123.93, 122.59, 120.48, 40.27, 38.49, 26.35, 22.86 ppm. 針對 C 18H 19ON 2Cl (M+H) +計算的 HRMS：315.1259。 找到：315.1267。
2-氯-N-(4-氟苯乙基)二苯並[b,f][1,4]氧氮雜環庚烷-11-胺 (SW19) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.24 – 7.21 (m, 4H), 7.16 – 7.12 (m, 2H), 7.07 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 7.02 – 6.93 (m, 3H), 4.69 (brs, 1H), 3.77 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.01 (t, J = 6.4 Hz, 2H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 161.90 (d, J = 242.9 Hz), 159.55, 155.13, 151.83, 141.07, 135.16, 132.72, 130.65, 130.47 (d, J = 7.7 Hz), 127.55, 127.34, 127.10, 126.08, 124.16, 122.61, 120.54, 115.66 (d, J = 21.1 Hz), 43.07, 34.43 ppm. 針對 C 21H 16ON 2ClF (M+H) +計算的 HRMS：367.1008。 找到：367.1009。
2-氯-N-(4-氯苯乙基)二苯並[b,f][1,4]氧氮雜環庚烷-11-胺 (SW20) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3= 8.4 Hz, 2H), 7.09 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 6.95 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.70 (brs, 1H), 3.76 (q, J = 4.4 Hz, 2H), 3.01 (t, J = 7.6 Hz, 2H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.54, 155.16, 151.83, 140.96, 137.98, 132.79, 132.54, 130.68, 130.44, 128.98, 127.44, 127.30, 127.13, 126.10, 124.24, 122.64, 120.55, 42.95, 34.61 ppm. 針對 C 21H 16ON 2Cl 2(M+H) +計算的 HRMS：383.0712。 找到：383.0713。
8-氯-N-(2-(哌啶-1-基)乙基)-11H-苯並[e]吡啶並[3,2-b][1,4]二氮雜-6-胺  (SW21) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.74 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.29 (s, 2H), 7.22 (brs, 1H), 6.88 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.87 (s, 1H), 5.59 (brs, 1H), 3.54 (brs, 2H), 2.58 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.42 (brs, 4H), 1.58 – 1.55 (m, 4H), 1.44 (brs, 2H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 157.91, 152.24, 149.14, 141.36, 135.78, 134.61, 132.08, 128.01, 127.91, 127.20, 121.37, 120.57, 56.86, 54.46, 38.80, 26.27, 24.65 ppm. 針對 C 19H 22N 5Cl (M+H) +計算的 HRMS：356.1636。 找到：356.1626。
2-氯-N-(3-(吡咯烷-1-基)丙基)二苯並[b,f][1,4]氧氮雜環庚烷-11-胺(SW22) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.88 (brs, 1H), 7.33 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.12 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.05 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 6.89 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.63 (s, 2H), 2.72 (brs, 2H), 2.54 (s, 4H), 1.86 (brs, 2H), 1.74 (s, 4H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.56, 155.79, 151.93, 141.71, 132.24, 130.33, 128.27, 127.23, 127.20, 125.99, 123.43, 122.45, 120.45, 56.37, 54.30, 43.32, 25.73, 23.57 ppm. 針對 C 20H 22ON 3Cl (M+H) +計算的 HRMS：356.1524。 找到：356.1533。
1-(3-((2-氯二苯並[b,f][1,4]氧氮雜環庚烷-11-基)氨基)丙基)吡咯烷-2-酮 (SW23) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.52 (s, 1H), 7.34 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.12 – 7.02 (m, 4H), 6.90 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 5.97 (brs, 1H), 3.51 (q, J = 5.6 Hz, 2H), 3.42 (s, 4H), 2.39 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.04 (qui, J = 7.2 Hz, 2H), 1.91 – 1.88 (m, 2H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 176.08, 159.35, 155.34, 151.81, 141.35, 132.53, 130.77, 127.76, 127.54, 127.09, 125.92, 123.66, 122.31, 120.45, 47.54, 40.10, 37.81, 31.14, 25.81, 18.16 ppm. 針對 C 20H 20O 2N 3Cl (M+H) +計算的 HRMS：370.1317。 找到：370.1304。
2-((2-氯二苯並[b,f][1,4] 氮雜環庚烷-11-基)氨基)-1-(吡咯烷-1-基) 乙烷-1-酮 (SW24) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.49 (s, 1H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.14 – 7.04 (m, 4H), 6.94 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.07 (s, 1H), 4.24 (s, 2H), 3.55 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.50 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.02 (qui, J = 6.4 Hz, 2H), 1.91 (qui, J = 6.4 Hz, 2H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 167.19, 159.52, 155.00, 151.99, 141.03, 132.82, 130.85, 127.61, 127.30, 127.23, 126.03, 124.22, 122.43, 120.65, 46.27, 45.78, 44.28, 26.17, 24.42 ppm. 針對 C 19H 18O 2N 3Cl (M+H) +計算的 HRMS：356.1160。 找到：356.1165。
8-氯-N-(2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙基)-11H-苯並[e]吡啶並[3,2-b][1,4]二氮雜-6-胺  (SW25) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.72 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 7.29 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.20 (dd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 7.11 (brs, 1H), 6.88 (dd, J = 7.6, 4.8 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.89 (s, 1H), 3.70 – 3.65 (m, 1H), 3.54 – 3.46 (m, 1H), 3.05 – 3.01 (m, 1H), 2.44 – 2.38 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.16 (q, J = 8.4 Hz, 1H), 1.96 – 1.87 (m, 2H), 1.82 – 1.72 (m, 4H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 157.78, 152.22, 149.07, 141.10, 136.02, 134.52, 131.84, 127.85, 127.71, 127.36, 121.23, 120.52, 65.20, 57.21, 40.80, 39.51, 28.84, 28.50, 22.77 ppm. 針對 C 19H 22N 5Cl (M+H) +計算的 HRMS：356.1636。 找到：356.1650。
2-氯-N-(3-(哌啶-1-基)丙基)二苯並[b,f][1,4] 氧氮雜環庚烷-11-胺  (SW26) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.85 (brs, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 9.6 Hz, 2H), 7.05 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 6.90 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.62 (brs, 2H), 2.55 – 2.42 (m, 6H), 1.84 – 1.81 (m, 2H), 1.49 (s, 4H), 1.41 (s, 2H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 159.60, 155.95, 151.95, 141.73, 132.28, 130.37, 128.09, 127.75, 127.26, 126.00, 123.43, 122.38, 120.46, 59.66, 54.95, 43.49, 26.10, 24.47, 23.66 ppm. 針對C 21H 24ON 3Cl (M+H) +計算的 HRMS：370.1681。 找到：370.1693。
N1-(8- 氯-11H-苯並[e]吡啶並[3,2-b][1,4]二氮雜-6-基)-N2,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺  (SW27) 1H NMR (400 MHz, MeOD- d 4 ) δ 7.80 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.39 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.03 – 6.98 (m, 2H), 3.82 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.43 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.99 (s, 6H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 158.04, 152.46, 148.85, 141.93, 134.97, 134.46, 132.61, 128.65, 128.49, 126.07, 121.34, 120.44, 58.01, 44.46, 37.96 ppm. 針對 C 16H 18N 5Cl (M+H) +計算的 HRMS：316.1323。 找到：316.1334。
8-氯-N-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-11H-苯並[e]吡啶並[3,2-b][1,4]二氮雜-6-胺  (SW28) 1H NMR (400 MHz, CDCl 3-d) δ 7.75 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.24 – 7.22 (m, 2H), 6.88 (dd, J = 7.6, 4.8 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.86 (s, 1H), 3.84 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.21 (brs, 2H), 3.11 (brs, 4H), 2.02 (brs, 4H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl 3-d) δ 157.99, 152.44, 148.92, 141.77, 135.25, 134.47, 132.48, 128.49, 128.40, 126.32, 121.31, 120.45, 55.12, 54.60, 39.29, 23.64 ppm. 針對 C 18H 20N 5Cl (M+H) +計算的 HRMS：342.1480。 找到：342.1493。
8-氯-N-(3-(吡咯烷-1-基) 丙基)-11H-苯並[e]吡啶並[3,2-b][1,4] 地氮平-6-胺  (SW29) 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.71 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.34 – 7.29 (m, 2H), 6.98 – 6.93 (m, 2H), 3.49 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.69 – 2.63(m, 6H), 1.97 – 1.90(m, 2H), 1.83-1.79 (m, 4H). 13C NMR (100 MHz, CDCl 3) δ 157.84, 152.10, 148.88, 140.67, 135.91, 134.15, 131.56, 127.43, 127.42, 127.35, 121.01, 120.29, 56.17, 54.06, 43.58, 25.37, 23.30. 針對 C 19H 22N 5Cl (M+H) +計算的 HRMS：356.1636。 找到：356.1637。
8-氯-N-(2-(哌嗪-1-基)乙基)-11H-苯並[e]吡啶並[3,2-b][1,4]二氮雜-6-胺  (SW30) 1H NMR (400 MHz, MeOD- d 4 ) δ 8.15 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H),7.73 (s, 1H), 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.23 – 7.17 (m, 2H), 3.92 (t, J = 6 Hz, 2H), 3.39 (brs, 4H), 3.12 (brs, 6H). 13C NMR (100 MHz, MeOD- d 4 ) δ 163.83, 156.05, 150.65, 147.36, 136.82, 134.84, 131.69, 129.76, 124.89, 124.02, 121.22, 120.29, 55.89, 50.51, 43.99, 41.61. 針對 C 18H 21N 6Cl (M+H) +計算的 HRMS：357.1589。 找到：357.1589。
8-氯-N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基)-11H-苯並[e]吡啶並[3,2-b][1,4] 地氮平-6-胺  (SW31) 1H NMR (400 MHz, CDCl 33) δ 7.69 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.20 – 7.18 (m, 1H), 6.84 (dd, J =7.2, 4.8 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.89 (s, 1H), 3.55 (q, J = 5.2 Hz, 2H), 2.53 – 2.19 (m, 13H), 1.79 – 1.74 (m, 2H). 13C NMR (100 MHz, CDC 3) δ 158.02, 152.12, 149.07, 140.75, 135.84, 134.22, 131.67, 127.92, 127.27, 127.22, 121.09, 120.31, 58.80, 54.85, 53.33, 45.68, 43.72, 23.38. 針對 C 10H 25N 6Cl (M+H) +計算的 HRMS：385.1902。 找到：385.1902。
8-氯-N-(3-(哌啶-1-基)丙基)-11H-苯並[e]吡啶並[3,2-b][1,4] 地氮平-6-胺  (SW32) 1H NMR (400 MHz, MeOD- d 4 ) δ 7.71 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.34 – 7.30 (m, 2H), 6.99 – 6.95 (m, 2H), 3.49 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.52 – 2.50 (m, 6H), 2.52 – 2.50 (m, 2H), 1.58 (brs, 4H), 1.47 (brs, 2H). 13C NMR (100 MHz, MeOD- d 4 ) δ 160.45, 154.47, 150.87, 141.74, 137.25, 135.31, 133.01, 129.33, 128.59, 128.11, 122.47, 121.14, 58.63, 55.51, 42.04, 26.55, 26.17, 25.15.
N-(3-(吡咯烷-1-yl)丙基)-5H-二苯並[b,e][1,4] 地氮平-11-胺 (SW33) 1H NMR (400 MHz, MeOD- d 4 ) δ 7.36 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.29 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.02 – 6.85 (m, 4H), 6.85 – 6.77 (m, 2H), 3.50 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.68 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.62 (brs, 4H), 1.98 – 1.91 (m, 2H), 1.80 (brs, 4H). 13C NMR (100 MHz, CDCl 3) δ 158.68, 152.90, 141.64, 141.04, 131.44, 127.77, 127.07, 126.58, 124.19, 122.62, 122.38, 119.27, 119.07, 55.70, 54.04, 42.59, 26.37, 23.37.
N-(2-(哌啶-1-基)乙基)-5H-二苯並[b,e][1,4] 地氮平-11-胺  (SW35) 1H NMR (400 MHz, MeOD- d 4 ) δ 7.38 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.28 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.99 – 6.81 (m, 6H), 3.60 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.69 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.54 (s, 4H), 1.63 – 1.61 (m, 4H), 1.48 (brs, 2H). 13C NMR (100 MHz, MeOD- d 4 ) δ 158.58, 152.81, 141.11, 141.07, 131.70, 127.94, 127.02, 126.09, 124.22, 123.00, 122.85, 119.39, 119.29, 56.96, 54.22, 38.37, 25.93, 24.33. 針對 C 20H 24N 4(M+H) +計算的 HRMS：321.2070。 找到：321.2074。
2-甲基-N-(2-(哌啶-1-基)乙基)-10H-苯並[b]噻吩並[2,3-e][1,4] 地氮平-4-胺  (SW38) 11H NMR (400 MHz, MeOD- d 4 ) δ 6.90 – 6.84 (m, 1H), 6.66 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.53 (brs, 1H), 3.57 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.68 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.58 (brs, 4H), 2.30 (s, 3H), 1.66– 1.61 (m, 4H), 1.49 (brs, 2H). NMR (100 MHz, CDCl 3) δ 158.51, 157.08, 145.26, 140.94, 128.58, 128.49, 125.25, 123.06, 120.22, 118.54, 59.69, 54.27, 38.63, 26.08, 24.45, 15.25. 針對 C 19H 24N 4S (M+H) +計算的 HRMS：341.1793。找到：341.1794。
N1,N1-二甲基-N2-( 2-甲基-10H-苯並[b]噻吩並[2,3-e][1,4]地氮平-4-基)乙烷-1,2-二胺  (SW39) 1H NMR (400 MHz, MeOD- d 4 ) δ 6.90 – 6.83 (m, 2H), 6.83 – 6.78 (m, 1H), 6.63 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.53 (brs, 1H), 3.53 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.63 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.32 (s, 6H), 2.28 (s, 3H). 13C NMR (100 MHz, MeOD- d 4 ) δ 158.30, 156.87, 145.05, 140.73, 128.37, 128.29, 125.04, 122.85, 120.01, 118.34, 59.36, 48.36, 45.36, 40.18, 15.04. 針對 C 19H 20N 4S (M+H) +計算的 HRMS：301.1479。 找到：301.1481。
2-甲基-N-(2-(哌嗪-1-基)乙基)-10H-苯並[b]噻吩並[2,3-e][1,4]地氮平-4-胺  (SW41) 1H NMR (400 MHz, MeOD- d 4 ) δ 6.97 – 6.92 (m, 2H), 6.92 – 6.87 (m, 2H), 6.69 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.54 (brs, 1H), 3.58 (t, J = 6 Hz, 2H), 2.85 (brs, 4H), 2.69 (t, J = 6.0 Hz, 4H), 2.59 (brs, 4H), 2.29 (s, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl 3) δ 158.58, 157.09, 145.12, 140.18, 128.58, 128.10, 125.25, 122.75, 120.17, 117.97, 56.08, 53.48, 45.38, 37.22, 15.14. 針對 C 18H 23N 5S (M+H) +計算的 HRMS：342.1745。 找到：342.1747。
2-甲基-N-(3-(吡咯烷 -1-yl)丙基)-10H-苯並[b]噻吩並[2,3-e][1,4] 地氮平-4-胺 (SW42) 1H NMR (400 MHz, MeOD- d 4 ) δ 6.90 – 6.86 (m, 2H), 6.86 – 6.80 (m, 1H), 6.64 (d, J = 8 Hz, 1H), 6.49 (brs, 1H), 3.46 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.68 – 2.64 (m, 6H), 2.28 (s, 3H), 1.90 (quin, J = 7.2 Hz, 2H), 1.80 (brs, 4H). 13C NMR (100 MHz, CDCl 3) δ 158.60, 157.17, 145.35, 141.55, 128.67, 128.58, 125.34, 123.15, 120.31, 118.63, 56.94, 54.89, 44.31, 26.27, 24.14, 15.34. 針對 C 19H 24N 4S (M+H) +計算的 HRMS：341.1793。 找到：341.1791。
N1,N1-二甲基-N3-(2-甲基-10H-苯並[b]噻吩並[2,3-e][1,4]二氮雜-4-基)丙烷-1,3-二胺  (SW43) 1H NMR (400 MHz, MeOD- d 4 ) δ 6.94 – 6.89 (m, 2H), 6.89 – 6.84 (m, 1H), 6.68 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.51 (brs, 1H), 3.44 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.48 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.28 (s, 9H), 1.88 – 1.85 (m, 2H). 13C NMR (100 MHz, MeOD- d 4 ) δ 158.50, 157.01, 145.04, 140.10, 128.75, 128.02, 125.34, 125.17, 122.68, 120.10, 117.90, 57.48, 48.36, 44.99, 40.63, 27.50, 15.06.
SW14 的抗細胞內 Salmonella 活性和細胞毒性
SW14的抗胞內 Salmonella活性和細胞毒性分別通過集落形成單位測定和MTT細胞活力測定得到證實，結果如圖1和圖2所示。與 HCA 的發現一致，SW14 在亞微莫耳濃度下對細胞內沙門氏菌的活力表現出有效的抑制作用，表明從 HCA 觀察到的 SW14 的抗細胞內沙門氏菌活性不是由於干擾 RFP 表達所致。
SW14對細胞內 Salmonella的影響的更密切的時間依賴性檢驗顯示在圖3。圖3顯示SW14處理1小時後，感染細胞內細菌相對數量有顯著差異，隨後一段時間內細胞內細菌數量沒有明顯增加，代表SW14透過限制細胞內 Salmonella增殖而發揮作用。
SW14 使細胞內 Salmonella 對 ciprofloxacin 和 cefixime 敏感
為觀察SW14對頭孢克肟(CFM)和環丙沙星(CIP)抗生素的敏感性增加，使用表達RFP的沙門氏菌感染RAW264.7細胞進行實驗。受感染的細胞用CFM、CIP或上述抗生素與SW14的組合處理24小時，結果顯示，CFM和CIP以劑量依賴性方式抑制巨噬細胞內沙門氏菌的存活，尤其是當CFM和 CIP 與 0.5 μM SW14 結合使用。 因此，結果顯示SW14可以增強這些抗生素對細胞內沙門氏菌的抑制作用。
用 SW14 處理的巨噬細胞中的耐多藥和耐氟喹諾酮類 S. Typhimurium
為了研究SW14對細胞中耐藥沙門氏菌感染的抑制作用，將表達 RFP的質體轉化到兩個耐多藥的鼠傷寒沙門氏菌臨床分離株中，然後評估 SW14 對這四種多藥耐藥菌株類型感染的影響。
根據表5，與鼠傷寒沙門氏菌菌株ATCC 14028相比，多藥耐藥鼠傷寒沙門氏菌NL08.10和0911R分離株對抗生素具有高度抗性。另外如圖 5 (A) 所示，感染多藥耐藥菌株 S. Typhimurium NL08.10 和 0911R 的細胞中細菌的相對數量高於感染 S. Typhimurium 菌株 ATCC 14028 的細胞。儘管在抗生素耐藥性和感染性方面存在差異，兩種耐多藥鼠傷寒沙門氏菌的細胞內複製仍然容易受到 SW14 的抑制活性的影響。
表5
抗生素 MIC (mg/L)
鼠傷寒沙門氏菌( SalmonellaTyphimurium)
ATCC 14028 NL08.10 0911R
慶大霉素(Gentamycin) 2 2 2
四環黴素(Tetracycline) 8 ＞64 ＞64
鏈黴素(Streptomycin) 32 ＞64 ＞64
氯黴素(Chloramphenicol) 16 32 32
氨芐青黴素(Ampicillin) 16 ＞64 ＞64
接著，將研究擴展到對環丙沙星耐藥的鼠傷寒沙門氏菌分離株。在表6中，耐環丙沙星菌株SA10和SB10表現出比鼠傷寒沙門氏菌菌株ATCC 14028更高的感染性。但是，耐環丙沙星菌株的細胞內增殖仍然對SW14具高度敏感。 這些結果表明，SW14的抗菌活性不受細菌感染性或對常見抗生素的耐藥機制的影響。
表6
抗生素 MIC (mg/L)
鼠傷寒沙門氏菌( SalmonellaTyphimurium)
ATCC 14028 SA10 SB10
慶大霉素(Gentamycin) 2 0.5 1
環丙沙星(Ciprofloxacin) ＜0.125 4 4
氧氟沙星(Ofloxacin) ＜0.125 8 8
SW14 的作用機制
為了闡明 SW14 的作用機制，首先檢驗 SW14 是否可以透過將細菌暴露於 LB 培養基和巨噬細胞培養基 (DMEM 補充有 10% FBS)中逐漸升高濃度的 SW14 來直接抑制培養基中的細菌生長，然後監測 24小時內不同時間點細菌培養物的密度（OD 600）。
如圖 6 所示，在濃度高達 64 μM 的任何一種培養基中，SW14 均未顯示出對細菌生長的顯著抑制作用。
接著，在模擬巨噬細胞吞噬體環境的酸性LPM培養基中測試SW14對沙門氏菌生長的影響。 與之前的結果一致，表明沙門氏菌的外膜在吞噬體微環境中受到損害，根據表 7，LPM 培養基中沙門氏菌對幾種抗生素的敏感性升高。
表7
抗生素 MIC (mg/L)
鼠傷寒沙門氏菌( SalmonellaTyphimurium)
CAMH LB LPM
萬古黴素(Vancomycin) 2048 512 128
氨芐青黴素(Ampicillin) 4 4 1
利福平(Rifampin) 16 16 4
自噬最初被表徵為對壓力的細胞反應，但已被認為是對抗細胞內沙門氏菌感染宿主細胞的防禦機制。因此，為了評估自噬在 SW14 抗細胞內沙門氏菌活性中的作用，感染細胞以 3-MA（一種自噬抑製劑以阻斷細胞自噬）處理，接著以 SW14 處理 24 小時。如圖7所示，3-MA處理的細胞中細胞內細菌的相對數量顯著增加，表示自噬防禦受到抑制。與模擬處理的細胞相比，用 SW14 或 3-MA 和 SW14 的組合處理的細胞中沙門氏菌的存活力分別為 45% 和 36.8%。
接下來，進一步利用shRNA抑制Atg7（參與自噬體形成的關鍵蛋白）的表達，得到兩個RAW264.7細胞複製體，Atg7表現量分別為空載體轉染細胞的15%和35%，如圖8所示。
與 3-MA 介導的自噬途徑阻斷類似，RAW264.7 細胞中 Atg7 的抑制也使細胞內沙門氏菌對 SW14 的抑製作用更敏感，如圖 9所示，表示自噬對 SW14 介導的細胞內沙門氏菌抑制沒有貢獻。
SW14 及細菌的氧化壓力
氧化壓力是宿主細胞中控制細胞內沙門氏菌感染的另一種先天防禦系統。如圖10(A)所示，在存在兩種ROS清除劑N-乙醯半胱氨酸(NAC)和穀胱甘肽(GSH)的情況下，SW14對巨噬細胞內鼠傷寒沙門氏菌的抑制作用受逆轉。
為了確定 SW14 的抗細胞內沙門氏菌活性是否由 ROS 誘導所介導，用 ROS 指示劑 H 2DCFDA 加入沙門氏菌感染的 RAW 264.7 細胞，並用SW14 或 PMA(已知的ROS 誘導劑)處理細胞 1 小時。如圖10(B)所示，H 2DCFDA 螢光訊號的增加，證明了PMA 顯著提高受感染巨噬細胞中的 ROS 表現量，這可以通過。相比之下，在濃度高達 8 μM (針對細胞內沙門氏菌的EC50 的 16 倍)的 SW14 處理細胞中，我們沒有觀察到 H 2DCFDA 信號的任何顯著變化，。
接下來，研究SW14 在細菌中對 ROS 抗性的影響。如圖 10 (C) 和 (D) 所示，在 SW14 處理後，鼠傷寒沙門氏菌對 H 2O 2的敏感性在 LPM 培養基中EC50 濃度 (0.5 μM)下顯著增加，而在 LB 培養基中則沒有。因此，這些結果表明 SW14 可以在損害外膜的條件下抑制沙門氏菌對氧化壓力的抵抗力。
鑑於上述，本發明所研發的抗菌化合物、其製備方法及其用途，從而提供了一種抗菌劑，可用於治療以傳染性疾病為特徵的疾病或病症，例如胃腸炎和侵襲性非傷寒沙門氏菌病，也為感染對抗生素產生耐藥性細菌的患者提供了新的治療選擇。
以上已將本創作做一詳細說明，惟以上所述僅為本創作之一較佳實施態樣與實施例，並非係用以限定本創作範圍，即任何本領域中具通常知識者，在不違反其精神及範圍下多樣地改變及修飾此創作來適應不同的用途及狀況，如此，該實施態樣亦屬於本創作的申請專利範圍。
無。
圖1係為以0、5、15和25 μM之SW14處理後，RAW264.7細胞的細胞活性。細胞活性係使用HCA及MTT細胞活性測定來進行評估，數據表示為相對於未處理對照組的百分比，並以平均值 ± SD(每組 n = 3)表示。
圖2係為在慶大霉素(gentamicin)(20 mg/L)存在的情況下，以0、0.25、0.5和1 μM之SW14處理24小時候，經鼠傷寒沙門氏菌( S. Typhimurium)感染之RAW264.7細胞的細胞內細菌的存活率。細胞內細菌的存活率係使用HCA及CFU測定來進行評估，數據表示為相對於未處理對照組的百分比，並以平均值 ± SD(每組 n = 3)表示。
圖3係為以0.5 μM之SW14與gentamicin(20 mg/L)共同處理經 S. Typhimurium感染之RAW264.7細胞。細胞內細菌的相對量係使用HCA在1、4、8、12、16和24小時進行測定，該結果以相對螢光單位(RFU)表示。數據表示為平均值 ± SD(每組 n = 3)。*P ＜ 0.05；**P ＜ 0.01；***P ＜ 0.001；****P ＜ 0.0001。
圖4係為(A)0.25、0.5、1、2 和 4 mg/L的頭孢克肟(cefixime，CFM) 和(B)0.03、0.06、0.125、0.25和0.5 mg/L的環丙沙星(ciprofloxacin，CIP)單獨使用或與0.5 μM之SW14共同處理經沙門氏菌( Salmonella)感染之RAW264.7細胞。於24小時後，使用HCA對細胞內細菌的相對量進行測定，該結果以相對螢光單位(RFU)表示。數據表示為平均值 ± SD(每組 n = 3)。ns：不顯著，P ＞ 0.05；*P ＜ 0.05；**P ＜ 0.01；***P ＜ 0.001；****P ＜ 0.0001。
圖5係為RAW264.7細胞經(A)多重抗藥性菌株之 SalmonellaATCC 14028、NL08.或100911R；或(B)CIP抗藥性菌株之 S. TyphimuriumATCC 14028、SA10或SB10感染後，以0、0.3、1、3和10 μM之SW14與20 mg/mL之gentamicin共同處理該等細胞24小時。使用HCA對細胞內細菌的相對量進行測定，該結果以相對螢光單位(RFU)表示。數據表示為平均值 ± SD (每組 n = 3)。*P ＜ 0.05；**P ＜ 0.01；****P ＜ 0.0001。
圖6係為透過在特定時間測量每種細菌培養環境的OD 600共24小時，來監測 S. Typhimurium在含有0、0.5和64 μM之SW14的LB培養基、細胞培養基(CCM)或LPM培養基中的生長情形。數據表示為平均值 ± SD (每組 n = 3)。
圖7係為經感染的RAW264.7細胞以10 mM之3-MA處理1小時候，再以0.5 μM之SW14或DMSO(作為對照組)處理24小時。使用HCA對細胞內細菌的活性進行評估，該結果以相對於對照組細胞的百分比表示。數據表示為平均值 ± SD (每組 n = 3)。****P ＜ 0.0001。
圖8係為經質粒轉染的RAW264.7細胞表現shRNA靶向Atg7，通過免疫點墨法(immunoblot)測定Atg7蛋白在穩定轉染子(transfectants)下的表現水平。Atg7的條帶透過光密度測定法進行定量，並以β-肌動蛋白進行標準化。百分比表示與載體轉染子相比，Atg7在shATG7轉染子中的相對表現水平。
圖9係為經SW14處理之RAW264.7細胞以shRNA介導(shRNA-mediated)基因敲落(knockdown)Atg7的表達中，細胞內細菌的存活率。以空載體(Vec)轉染RAW264.7細胞並經S. Typhimurium感染，再以0、0.3和1 μM之SW14與20 mg/mL之gentamicin共同處理24小時。細胞內存活的細菌量使用HCA進行評估，該結果以相對於對照組的百分比表示。數據表示為平均值；誤差線表示為SD(n = 3)。使用HCA對細胞內細菌的活性進行評估，該結果以相對於對照組細胞的百分比表示。數據表示為平均值；誤差線表示SD (n = 3)。ns：無顯著差異；P ＞ 0.05；*P ＜ 0.05表示藥物治療組與其各別對照組間的差異。
圖10係為SW14使外膜受損的 S. Typhimurium對氧化壓力敏感化。(A)ROS清除劑(scavengers)逆轉SW14對細胞內 S.Typhimurium的抑制作用。使用HCA評估經SW14與/未與ROS清除劑N-乙醯半胱氨酸(N-acetyl-cysteine，NAC；10 mM)或穀胱甘肽(glutathione，GSH；10 mM)共同處理之RAW264.7細胞內，Salmonella的存活率。數據表示為平均值 ± SD(每組 n = 3)。* P ＜ 0.05；*** P ＜ 0.001。(B)SW14不誘導巨噬細胞產生ROS。將25 μM之H 2DCFDA添加至經 Salmonella感染的RAW264.7細胞45分鐘，再以不同濃度的SW14或PMA處理。數據表示為相對於未處理對照組的百分比，並以平均值 ± SD(每組 n = 3)表示。ns：無顯著差異，P ＞ 0.05；*** P ＜ 0.001；****P ＜ 0.0001。S. Typhimurium ATCC 14028在(C)LB或(D)LPM中單獨使用水或與SW14 (0.5 μM)共同處理1小時，再透過CFU測定評估細菌活性。數據表示為相對於無水培養基中細菌量的百分比，並以平均值 ± SD(每組 n = 3)表示。ns：無顯著差異，P ＞ 0.05；* P ＜ 0.05。
無。
無。

Claims (9)

  1. 一種醫藥組合物，包含一抗生素及有效量之具有下述結構的化合物(I)及其藥學上可接受之鹽類，
    Figure 111106032-A0305-02-0043-6
     其中，X1為NH或O；X2為N或CH；X3為S或CHCH；R1為H、CH3或Cl；以及R2為烷基、烷基胺或烷基芳環基團。
  2. 如請求項1之醫藥組合物，其中，R2為
    Figure 111106032-A0305-02-0044-7
  3. 如請求項1之醫藥組合物，其中，該化合物(I)為
    Figure 111106032-A0305-02-0044-8
  4. 如請求項1之醫藥組合物，其中，該醫藥組合物進一步包含一藥學上可接受之賦形劑。
  5. 如請求項1之醫藥組合物，其中，該醫藥組合物係以細菌對宿主氧化壓力防禦的抗性為標靶。
  6. 如請求項5之醫藥組合物，其中，該細菌為多重抗藥性菌株。
  7. 如請求項5之醫藥組合物，其中，該細菌係選自由金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、溶血性葡萄球菌(Staphylococcus haemolyticus)、表皮 葡萄球菌(Staphylococcus hominis)、中間葡萄球菌(Staphylococcus intermedius)、腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)、葡萄球菌(Staphylococcus lugdunesis)、紅斑丹毒絲菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)、糞腸球菌(Enterococcus faecalis)、糞腸球菌(Enterococcus faecium)、VR-糞腸球菌(VR-E.faecium)、蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、白喉棒狀桿菌(Corynebacterium diphtheriae)、李斯特菌(Listeria monocytogenes)、化膿性鏈球菌(Streptococcus pyogenes)、艱難梭菌(Clostridium difficile)、大腸桿菌(Escherichia coli)、鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella Typhimurium)、鮑曼不動桿菌(Acinetobacter baumannii)及結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)所組成之群組。
  8. 一種如請求項1所述之醫藥組合物之化合物(I)的合成方法，其包含：(1)將下述結構的化合物(VI)與POCl3及R2NH2反應獲得該化合物(I)；或
    Figure 111106032-A0305-02-0045-9
     (2)將下述結構的化合物(XVI)與R2NH2反應獲得該化合物(I)；
    Figure 111106032-A0305-02-0045-10
     其中，該化合物(VI)中的X1為NH，且該化合物(VI)係通過以下方法獲得：(a)將如下述結構的化合物(XI)與
    Figure 111106032-A0305-02-0046-11
     如下述結構的化合物(XII)與Cu及K2CO3反應
    Figure 111106032-A0305-02-0046-13
     獲得如下述結構的化合物(XIII)；以及
    Figure 111106032-A0305-02-0046-14
     (b)將該化合物(XIII)與H2SO4反應獲得該化合物(VI)；其中，X2、X3、R1以及R2同請求項1所定義。
  9. 如請求項8之方法，其中，該化合物(XVI)係通過以下方法獲得：(a)將如下述結構的化合物(II)與
    Figure 111106032-A0305-02-0046-15
     如下述結構的化合物(XIV)反應
    Figure 111106032-A0305-02-0046-16
     獲得如下述結構的化合物(XV)；以及
    Figure 111106032-A0305-02-0047-17
     (b)將該化合物(XV)與SnCl2及HCl反應獲得該化合物(XVI)；其中，X2、X3、R1以及R2同請求項1所定義。
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