TWI814693B

TWI814693B - 高穩定性的驅除重金屬組合物及其用途、劑型和製備方法

Info

Publication number: TWI814693B
Application number: TW112117939A
Authority: TW
Inventors: 唐小江; 胡偉; 鍾志勇; 趙啟樂; 潘淑濤; 王雪梅; 黃曉; 麥冬梅; 任雪峰; 董光輝
Original assignee: 中國商健爾聖（珠海）醫藥科技有限公司
Priority date: 2022-05-17
Filing date: 2023-05-15
Publication date: 2023-09-01
Also published as: TW202346560A; CA3252670A1; KR20250011132A; US20250295628A1; CN114632076B; JP2025516821A; AR129139A1; CN114632076A; EP4527382A1; AU2022458803A1; AU2022458803B2; WO2023221338A1; EP4527382A4

Abstract

本發明在於提供一種高穩定性的驅除重金屬組合物及其用途、劑型和製備方法，屬於醫藥技術領域。組合物包含：A)70~95重量%的式(1)的化合物或其藥學可接受的鹽；B)1~25重量%的式(2)的化合物或其藥學可接受的鹽；0.001~5重量%的鹼性化合物，鹼性化合物為鹼金屬的氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽、磷酸氫鹽、羧酸鹽或氨水中的至少一種。本發明獲得的組合物，相對於現有GDTC類藥物，穩定性大幅提高，同時保持了優異的驅除重金屬功效；由於穩定性提高，在不改變藥效的情況下，使用劑量可降為原來的1/4左右，提高了藥物的使用安全性；同時由於藥物穩定性提高，可以有效地降低生產、運輸和存儲費用，延長有效期，有效降低藥物的成本。

Description

高穩定性的驅除重金屬組合物及其用途、劑型和製備方法

本發明屬於醫藥技術領域，涉及一種高穩定性的驅除重金屬組合物，該組合物用於製備驅除重金屬和自由基藥物、製備抗腫瘤藥物、製備預防和治療由重金屬引起的相關疾病藥物中的用途，由該組合物為主要成分獲得的藥物和相應劑型，以及該組合物的製備方法。

二硫代氨基甲酸酯類(DTC)是上世紀80年代研究的新型絡合劑，其結構通式為：

作為一類廣泛存在的有機分子，具有多種官能團和雜原子，使其具有較強的金屬鍵合能力，能夠有效地螯合重金屬和清除體內NO自由基。不同的DTC衍生物表現出諸多生物學和藥學等方面的特性，例如不僅具有優秀的抗炎、抗菌、抗氧化等活性，最近還被報導為有效的抗癌藥物和細胞凋亡的抑制劑。

GDTC(DTC中的R₂被葡萄糖基取代)作為一類能驅除腎細胞內重金屬藥物，一直以來是該領域研究的重點。1989年，Gale等用甲氧苄基取代R₁，得到4-甲氧苄基-D-葡萄糖胺-N-二硫代羧酸鈉(4-Me)，對慢性鎘中毒大鼠有較好的驅鎘效果；1995年，趙金垣教授等，用6種不同的氨基酸取代R₁得到6種新絡合物，經大鼠驅鎘實驗發現，6種新絡合物都有一定的驅鎘作用，均優於4-Me的驅鎘效果，但因其毒副作用，且注射後有很大的刺激性，嚴重時可引起死亡等原因，至今還無法應用於臨床。2005年，唐小江等用甲硫氨酸取代R₁，葡萄糖基取代R₂到新絡合物N-(2,3,4,5,6-五羥基己基)-(N-二取代甲酸鈉基)-L-甲硫氨酸鈉(GMDTC)，對腎臟中的鎘有很明顯的驅除作用，毒副作用小，並於2016年提出了作用機制，即GMDTC利用SGLT2-GLUT2這對葡萄糖轉運體自由進出腎小管上皮細胞，從而達到驅除腎細胞內重金屬的目的，為該類藥物的應用奠定了基礎[Xiaojiang Tang et al.Mobilization and removing of cadmium from kidney by GMDTC utilizing renal glucose reabsorption pathway,Toxicology and Applied Pharmacology 305(2016)143-152]。

然而GDTC類藥物的穩定性始終沒有解決，很難成藥，而且在配伍穩定性上也存在問題，會在溶劑中水解。因此在動物實驗中往往需要使用較高的劑量才能對重金屬的驅除有良好的作用。同時由於穩定性差，造成此類藥物生產、運輸和存儲成本高，製劑製備困難，有效期短，造成實際應用一直受限。

公開號為CN108546242A的中國發明申請，公開了一種氨基二硫代甲酸酯類化合物及其製備驅除重金屬藥物中的用途，通過改變分子結構提高穩定性，然而其穩定性的資料最長僅為14小時，仍然難以滿足臨床應用時的運輸和存儲需求。

公開號為CN108276319A的中國發明申請，公開了一種新型硫代化合物及其在製備驅除重金屬藥物中的用途，同樣通過改變分子結構提高穩定性，然而其穩定性的資料最長僅為24小時，依然難以滿足臨床應用時的運輸和存儲需求。

亟需解決GDTC類藥物的穩定性問題，使其能夠滿足臨床應用時的運輸和存儲需求，從而早日實現大規模臨床應用，解除病患痛苦，便成為本發明欲改進的課題。

發明人在對GDTC類藥物的長期不懈研究中，跳出通過改變分子結構提高穩定性的傳統思路，另闢蹊徑開發出一種組合物，該組合物在保持了GDTC類藥物驅除重金屬性能的前提下，穩定性大幅提高，可以實現在常規條件下長期儲存；同時由於穩定性提高，實現同樣的療效可以大幅降低藥物劑量，提高了藥物使用安全性，降低了治療成本。

本發明的目的就是提供一種高穩定性的驅除重金屬組合物，解決GDTC類藥物的穩定性問題，使GDTC類藥物能夠被製備成各種製劑，得以廣泛運用。本發明還提供了該組合物在製備驅除重金屬和自由基藥物、製備抗腫瘤藥物、製備預防和治療由重金屬引起的相關疾病藥物中的用途，由該組合物為主要成分獲得的藥物和相應劑型，以及該組合物的製備方法。為了實現上述目的，本發明具體採用的技術方案如下。

本發明提供一種高穩定性的驅除重金屬組合物，所述組合物包含：

A)70~95重量%的式(1)的化合物或其藥學可接受的鹽；

B)1~25重量%的式(2)的化合物或其藥學可接受的鹽；

C)0.001~5重量%的鹼性化合物，所述鹼性化合物為鹼金屬的氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽、磷酸氫鹽、羧酸鹽或氨水中的至少一種；

其中式(1)、式(2)的化合物選自表1中的一種。

表1：式(1)、式(2)的化合物分子結構

更優選的是，所述的組合物中式(1)的化合物為

式(2)的化合物為

更優選的是，所述的組合物中組分A)的含量為80~90重量 %，組分B)的含量為1~12重量%。

更優選的是，所述的組合物中組分A)在組合物中的品質分數與組分B)在組合物中的品質分數之比在90：1至9：1範圍內。更優選地，組分A)在組合物中的品質分數與組分B)在組合物中的品質分數之比在80：1至13：1範圍內。

更優選的是，所述的組合物中鹼性化合物為氫氧化鈉、氫氧化鉀、乙酸鈉、氨水、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫銨、碳酸鉀、碳酸氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉中的至少一種。

更優選的是，1mg所述組合物溶於1mL水中的pH值為9.0~11.0。

本發明提供前述組合物用於製備清除體內重金屬或自由基的藥物的用途，或用於製備預防或治療由重金屬超標和中毒引起的相關疾病的藥物的用途，所述重金屬為鉻、鈷、砷、錫、鎘、汞、錳、鎳、銅、鉈、鍀、鈾、鉍、鉛、碘、鈀和鉑中的至少一種。

本發明提供一種抗腫瘤藥物，以重量計，抗腫瘤藥物包含：含重金屬抗腫瘤藥物1份以及根據前述組合物5~200份。優選地，所述含重金屬抗腫瘤藥選自：鉑類抗腫瘤藥物、砷類抗腫瘤藥物、釕類抗腫瘤藥物或錫類抗腫瘤藥物。更優選地，所述含重金屬抗腫瘤藥選自：順鉑、奧沙利鉑、三氧化二砷或碘125。

本發明提供前述組合物用於製備減少含重金屬藥物毒副作用的藥物的用途，所述含重金屬藥物包括順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、奈達鉑、枸櫞酸鉍鉀、膠體果膠鉍、鍀99二甲基雙膦酸鹽、鍀99mTc、三氧化二砷、碘125、鈀103中的至少一種。優選地，所述含重金屬藥物包括順鉑、枸櫞酸鉍鉀、鍀99mTc中的至少一種。

本發明提供一種粉針劑，基於粉針劑的總重量計，包含：60~90%的前述組合物；9~40%的賦形劑；0.001~10%的絡合劑。優選地，其中賦形劑選自甘露醇、氨水、海藻糖、碳酸氫鈉、碳酸鈉、碳酸鉀、乙酸鈉、乙酸銨、磷酸氫二鉀中的至少一種；更優選地，其中賦形劑為甘露醇和氨水中的至少一種；進一步優選地，所述賦形劑為氨水，在粉針劑中氨以絡合物或氨合物的形式存在。優選地，所述絡合劑選自乙二胺四乙酸鹽(EDTA)、二巰基丙醇(BAL)、二巰基丁二酸鈉(DMSA)中的至少一種；更優選地，絡合劑為EDTA。

本發明提供一種口服製劑，基於口服製劑的總重量計，包含：35~65%的前述組合物；20~40%的崩解劑；0~5%的助流劑；0.1~5%的潤滑劑；0~10%的薄膜包衣預混劑；0.001~10%的絡合劑。優選地，所述崩解劑選自微晶纖維素、羧甲基纖維素鈉、羧甲基澱粉鈉、澱粉、聚乙烯吡咯烷酮中的至少一種，所述助流劑選自滑石粉、膠態二氧化矽中的至少一種；所述潤滑劑選自滑石粉、硬脂酸鎂中的至少一種；所述絡合劑選自EDTA、BAL、DMSA中的至少一種。更優選地，所述崩解劑為微晶纖維素，所述助流劑為膠態二氧化矽，所述潤滑劑為硬脂酸鎂，所述絡合劑為EDTA。優選地，所述口服製劑為腸溶片或腸溶膠囊。更有選地，所述腸溶片為腸溶緩釋片，所述腸溶膠囊為腸溶緩釋膠囊。

本發明提供一種透皮製劑，基於透皮製劑的總重量計，包含：20~65%的前述組合物；0.5~30%的透皮促進劑；0.5~25%的凝膠劑； 1~30%的溶劑。優選地，所述透皮促進劑選自月桂氮卓酮、冰片、油酸或薄荷油中的至少一種，所述凝膠劑選自卡波姆、羥丙纖維素鈉、乙基纖維素鈉、硬脂酸鎂、甘油和聚乙二醇中的至少一種，所述溶劑選自水、甲醇、乙醇、DMSO中的至少一種。

本發明提供前述組合物的製備方法，製備過程在惰性氣體保護下進行，包括以下步驟：

(1)合成組分B)；

(1-1)往溶劑甲中加入鹼性化合物、氨基酸和葡萄糖，充分溶解、反應；

(1-2)往(1-1)的反應產物中加入硼氫化鈉反應，然後酸化提純；

(1-3)往溶劑甲中加入鹼性化合物、(1-2)的反應產物，充分溶解、反應，反應產物為組分B)；

(2)合成組分A)；

(2-1)將鹼性化合物和(1-2)的反應產物溶于水中，得到溶液甲；

(2-2)將CS₂溶於溶劑乙中，得到溶液乙；

(2-3)將溶液甲和溶液乙混合、反應後過濾，用溶劑丙萃取，水層凍乾得到產物；控制溶液甲和溶液乙混合的比例，使產物僅為組分A)；

所述溶劑甲為甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、四氫呋喃和水中的至少一種，所述溶劑乙為丙酮、乙腈、四氫呋喃、二氧六環、DMF中的至少一種，所述溶劑丙為二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丙酯中的至少一種；

(3)將組分A)、組分B)和鹼性化合物按比例混合，得到組合物。

本發明提供前述組合物的另一種製備方法，製備過程在惰性氣體保護下進行，包括以下步驟：

(1)合成組分B)；

(1-2)往(1-1)的反應產物中加入硼氫化鈉反應，然後酸化提純；

(2)合成組合物；

(2-1)將鹼性化合物和組分B溶于水中，得到溶液甲；

(2-2)將CS₂溶於溶劑乙中，得到溶液乙；

(2-3)將溶液甲和溶液乙混合、反應後過濾，用溶劑丙萃取，水層凍乾得到產物；

控制(2-1)鹼性化合物加入量、(2-3)溶液甲和溶液乙混合的比例，使(2-3)的產物即為組合物。優選地，在步驟(2)中，所述鹼性化合物與組分B)的摩爾比例為1.05：1至1.5：1，CS₂與組分B)的摩爾比例為1.3：1至5：1。更優選地，所述鹼性化合物與組分B)的摩爾比例為1.05 ：1至1.3：1，CS₂與組分B)的摩爾比例為1.8：1至3：1。

所述溶劑甲為甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、四氫呋喃和水中的至少一種，溶劑乙為丙酮、乙腈、四氫呋喃、二氧六環、DMF中的至少一種，所述溶劑丙為二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丙酯中的至少一種。

本發明具有以下有益技術效果：

本發明獲得的組合物，相對于現有的GDTC類藥物，穩定性大幅提高，同時保持了優異的驅除重金屬功效；由於穩定性提高，在不改變藥效的情況下，使用劑量可降為原來的1/4左右，提高了藥物的使用安全性；同時由於藥物穩定性提高，可以有效地降低生產、運輸和存儲費用，延長有效期，有效降低藥物的成本。

〔圖1〕為本發明的組合物合成路線圖。。

〔圖2〕為實施例26中不同組別大鼠每日銅排出量。

〔圖3〕為實施例30中不同組別大鼠每日排出尿鉍的總量。

〔圖4〕為實施例31小鼠給藥前後相同刺激評率的ABR閾值偏移結果。

〔圖5〕為實施例35不同組別治療後腫瘤的體積。

〔圖6〕為實施例36不同組別藥物對U87惡性膠質瘤的細胞抑製作用。

下面結合說明書附圖，通過實施例對本發明的技術方案進行清楚、完整的描述。顯然，所描述的實施方式僅僅是本發明一部分實施方式，而不是全部的實施方式。基於本發明的實施方式，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施方式，都屬於本發明的保護範圍。

組合物的合成

組合物的合成路線如圖1所示。

方案一

(1)合成組分B)。

(1-1)往溶劑甲中加入鹼性化合物、氨基酸和葡萄糖，充分溶解、反應。

(1-2)滴加水，控溫0-15℃分批加入硼氫化鈉，溫度過高反應太過劇烈，造成反應失控。升溫至20~40℃反應，降溫至0~15℃加入溶劑甲，溫度過高反應失控，大量反應液溢出。酸化提純：加入水稀釋，滴加濃鹽酸，調節pH=1~5，pH過高或過低產物均不析出。

(1-3)往溶劑甲中加入鹼性化合物和(1-2)反應產物，得到組分B)。

(2)合成組分A)。

(2-1)將入鹼性化合物和(1-2)反應產物溶于水中，得到溶液甲。

(2-2)將CS₂溶於溶劑乙中，得到溶液乙。

(2-3)將溶液甲滴加入溶液乙中。滴畢，攪拌。0~15℃萃取、凍乾得到組分A)。

將組分A)、組分B)和鹼性化合物按比例混合得到組合物，組分A)、組分B)、鹼性化合物均可按需要控制其具體成分，組合物中陽離子可由同類型或不同類型陽離子構成。

方案二

(1)合成組分B)。

(1-2)滴加水，控溫0~15℃分批加入硼氫化鈉，溫度過高反應太過劇烈，造成反應失控。升溫至20~40℃反應，降溫至0~15℃加入溶劑甲，溫度過高反應失控，大量反應液溢出。酸化提純：加入水稀釋，滴加200mL濃鹽酸，調節pH=1~5，pH過高或過低產物均不析出。

(2)合成組合物。

(2-1)將入鹼性化合物和組分B)溶于水中，其中鹼性化合物的摩爾量為組分B)1.05~1.2倍，得到溶液甲。

(2-2)將CS₂溶於溶劑乙中，得到溶液乙。

(2-3)將溶液甲滴加入溶液乙中。0~15℃萃取，凍乾得到組合物。

通過控制反應過程添加鹼性化合物的量和反應時間，可以控制組合物各組分的比例，組合物中陽離子由同類型的陽離子構成。

實施例

以下，說明本申請的實施例。下面描述的實施例是示例性的，僅用於解釋本申請，而不能理解為對本申請的限制。實施例中未注明具體技術或條件的，按照本領域內的文獻所描述的技術或條件或者按照產品說明書進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為本領域通常使用的可以通過市購獲得的常規產品。本申請實施例中各成分的含量，如果沒有特別說明，均以不含結晶水的品質計。

組合物製備過程中所使用的關鍵原料與式(1)和式(2)化合物對照表如表2所示。

表2：關鍵原料與式(1)和式(2)化合物對照表：

實施例1：

本實施例關於表1中組合物3的製備，製備過程在惰性氣體保護下進行，具體步驟如下。

(1)合成化合物3B。

(1-1)10℃往500mL甲醇中加入48g氫氧化鈉、甲硫氨酸149g、葡萄糖200g，攪拌至澄清，升溫至30℃反應10h。

(1-2)滴加1000mL水，控溫5℃分5批加入1100g硼氫化鈉，反應12h。升溫至35℃反應24h後，控溫10℃滴加溶劑200mL甲醇，攪拌2h；降溫至4℃，加入500mL水稀釋，滴加200mL濃鹽酸；析晶、打漿、重結晶、收料得到純度大於99.6%的(2,3,4,5,6-五羥基己基)甲硫氨酸。

(1-3)將氫氧化鈉溶入甲醇中，加入等摩爾的(2,3,4,5,6-五羥基己基)甲硫氨酸攪拌至澄清，過濾，旋乾，重結晶得到純度大於99.9%的3B。

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物3B的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+H]⁺)336；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)4.02(m,1H),3.81-3.61(m,4H),3.46(t,1H),3.01~3.12(m,2H),2.26(m,2H),2.06~2.03(m,2H).2.02(s,3H),

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)168.83,72.20,71.07,70.22,70.71,64.76,60.15,49.43,30.05,29.10,14.94.

(2)合成化合物3A。

(2-1)將314g(2,3,4,5,6-五羥基己基)甲硫氨酸、216g碳酸鈉溶於1500mL純化水中，得到溶液甲，控溫20℃待用。

(2-2)將100mL CS₂溶於300mL甲醇中，得到溶液乙。

(2-3)將溶液甲滴加入溶液乙中。滴畢，攪拌8h。向反應體系中加入20mL CS₂/甲醇溶液。將體系降溫至5℃並保溫1h後過濾，用二氯甲烷萃取5次，凍乾得到純度大於99%的3A。

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物3A的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+Na]⁺)456；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)4.40(t,1H),3.96(m,1H),3.79(m,1H),3.56-3.59(m,2H),3.47(m,3H),2.42~2.29(m,2H),2.10(m,1H),2.06(s,3H),1.87(m,1H),

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)208.23,175.53,73.12,72.95,71.31,70.36,66.76,63.44,52.88,31.70,30.20,15.19.

(3)製備組合物3。

取3A 800g、3B 150g、碳酸氫銨50g溶于10L水中，然後凍乾，得到組合物3。

實施例2：

本實施例關於表1中組合物5的製備，製備過程在惰性氣體保護下進行，具體步驟如下。

(1)合成化合物5B。

(1-1)20℃往1000mL甲醇中加入98g氫氧化鈉、谷氨酸147g、葡萄糖200g，攪拌至澄清，升溫至30℃反應10h。

(1-2)滴加1000mL水，控溫8℃分5批加入80g硼氫化鈉，反應12h；升溫至40℃反應10h後，降溫至4℃，加入500mL水稀釋，滴加400mL濃鹽酸；析晶、打漿、重結晶、收料得到純度大於99.4%的中間體(2,3,4,5,6- 五羥基己基)谷氨酸。

(1-3)將氫氧化鈉溶入甲醇中，加入等摩爾的(2,3,4,5,6-五羥基己基)谷氨酸攪拌至澄清，過濾，旋乾，重結晶得到純度大於99.9%的5B。

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物5B的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+H]⁺)356；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)3.91~3.78(m,3H),3.72~3.48(m,4H),3.08~2.83(m,2H),2.60~2.40(m,2H),2.12~1.81(m,2H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)176.98,176.76,72.20,72.07,71.22,70.71,64.76,59.81,49.44,31.29,24.16.

(2)製備組合物5。

(2-1)將800g 5B、300g碳酸鈉溶於2500mL純化水中，得到溶液甲，控溫30℃待用。

(2-2)將95mL CS₂溶於300mL二氧六環中，得到溶液乙。

(2-3)將溶液甲滴加入溶液乙中。滴畢，攪拌8h。再加入1000mL二氧六環後過濾，用乙酸丁酯萃取5次，取水層，凍乾得到組合物5。

實施例3：

本實施例關於表1中組合物7的製備，製備過程在惰性氣體保護下進行，具體步驟如下。

(1)合成化合物7B。

(1-1)20℃往600mL中加入46g氫氧化鈉、4-甲氧基苯丙氨酸195g、葡萄糖220g，攪拌至澄清，升溫至35℃反應20h。

(1-2)滴加800mL水，控溫6℃分5批加入120g硼氫化鈉，反應12h；升溫至42℃反應10h後，滴加溶劑300mL乙腈，攪拌2h；滴加250mL濃鹽酸；降至室溫，析晶、打漿、重結晶、收料得到純度大於99.8%的中間體。

(1-3)將碳酸鈉溶入甲醇中，加入等摩爾的中間體攪拌至反應完全，過濾，旋乾，重結晶得到純度大於99.9%的7B。

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物7B的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+H]⁺)382；

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ(ppm)7.12(m,2H),6.80(m,2H),3.93(dt,1H),3.86(dd,J=8.5,7.5Hz,1H),3.78(s,3H),3.78~3.75(m,1H),3.72~3.61(m,4H),2.97~2.83(m,4H).

¹³C NMR(125MHz,CD₃OD)δ(ppm)171.24,158.51,131.11,130.27,113.64,73.20,73.07,72.22,71.71,64.76,62.47,55.33,49.39,36.42.

(2)合成化合物7A。

(2-1)將314g中間體、350g碳酸鈉溶於1500mL純化水中，得到溶液甲，控溫30℃待用。

(2-2)將100mL CS₂溶於300mL甲醇中，得到溶液乙。

(2-3)將溶液甲滴加入溶液乙中。滴畢，攪拌8h。將體系降溫至5℃並保溫1h後過濾，用乙酸乙酯萃取5次，取水層，凍乾得到純度大於99%的7A。

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物7A的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+H]⁺)480；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)7.08(m,2H),6.85(m,2H),4.48(t,1H),4.14~3.91(m,3H),3.83~3.72(m,4H),3.70~3.59(m,3H),3.16~3.03(m,2H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)204.05,171.96,153.51,134.04,127.90,113.64,73.12,72.95,72.31,70.48,65.76,64.61,55.33,53.06,33.03.

(3)製備組合物7。

取7A 900g、7B 85g、碳酸氫鈉15g溶于10L水中，然後凍乾，得到組合物7。

實施例4：

本實施例關於表1中組合物10的製備，製備過程在惰性氣體保護下進行，具體步驟如下。

(1)合成化合物10B。

(1-1)20℃往600mL四氫呋喃中加入60g氫氧化鉀、絲氨酸105g、葡萄糖200g，攪拌至澄清，升溫至35℃反應10h。

(1-2)滴加800mL水，控溫6℃分5批加入180g硼氫化鈉，反應12h；升溫至42℃反應18h後，控溫10℃滴加溶劑280mL四氫呋喃，攪拌2h；滴加250mL濃鹽酸；析晶、打漿、重結晶、收料得到純度大於99.8%的中間體。

(1-3)將氫氧化鈉加入乙腈中，加入等摩爾的中間體攪拌至反應完全，過濾，旋乾，重結晶得到純度大於99.9%的10B。

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物10B的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+H]⁺)292；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)3.86~3.72(m,4H),3.71~3.54(m,5H),2.97~2.85(m,2H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)170.57,73.20,73.07,72.22,71.77,64.76,61.95,61.95,49.47.

(2)合成化合物10A。

(2-1)將314g中間體、350g碳酸鉀溶於1500mL純化水中，得到溶液甲，控溫30℃待用。

(2-2)將100mL CS₂溶於300mL二氧六環中，得到溶液乙。

(2-3)將溶液甲滴加入溶液乙中。滴畢，攪拌8h。將體系降溫至5℃並保溫1h後過濾，用乙酸乙酯萃取8次，取水層，凍乾得到純度大於99%的10A。

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物10A的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+K]⁺)460；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)4.61(t,1H),4.15~4.06(m,2H),4.03~3.93(m,3H),3.89~3.75(m,2H),3.68~3.50(m,3H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)204.34,176.56,73.12,73.01,72.31,70.45,64.76,64.20,61.16,52.54.

(3)製備組合物10。

取10A 900g、10B 90g、碳酸氫鉀10g溶于10L水中，然後凍乾，得到組合物10。

實施例5：

本實施例關於表1中組合物11的製備，製備過程在惰性氣體保護下進行，具體步驟如下。

(1)合成化合物11B。

(1-1)30℃往200mL四氫呋喃中加入48g氫氧化鈉，S-烯丙基-半胱氨酸161g、葡萄糖210g，攪拌至澄清，30℃反應10h。

(1-2)滴加1000mL水，控溫10℃分5批加入100g硼氫化鈉，反應12h；升溫至30℃反應10h後，控溫10℃滴加200mL四氫呋喃，攪拌2h；降溫至10℃，加入500mL水稀釋，滴加240mL濃鹽酸；析晶、打漿、重結晶、收料得到純度大於99.2%的中間體。

(1-3)在氨水中加入適量的中間體攪拌至澄清，過濾，旋乾，重結晶得到純度大於99.9%的11B。

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物11B的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+H]⁺)343；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)5.80(m,1H),5.11(m,2H),3.85~3.52(m,7H),3.24~3.14(m,2H),3.03~2.85(m,4H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)168.82,133.38,117.29,73.20,73.07,72.22,71.57,64.76,59.06,49.65,35.65,33.52.

(2)合成化合物11A。

(2-1)將325g中間體、60ml氨水溶於1600ml純化水中，得到溶液甲，控溫30℃待用。

(2-2)將200ml CS₂溶於300ml甲醇中，得到溶液乙。

(2-3)將溶液甲滴加入溶液乙中。滴畢，攪拌8h。將體系降溫至5℃並保溫1h後過濾，用乙酸異丙酯萃取5次，取水層，凍乾得到純度大於99%的11A。

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物11A的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+H]⁺)437；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)5.80(m,1H),5.11(m,2H),4.68(t,1H),4.16~3.98(m,3H),3.89~3.75(m,2H),3.67~3.51(m,3H),3.27~3.07(m,4H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)210.45,170.18,133.45,117.25,73.12,73.01,72.31,70.31,64.76,61.31,52.70,35.82,33.58.

(3)製備組合物11。

取11A 910g、9B 80g、碳酸鈉10g溶于10L水中，然後凍乾，得到組合物11。

實施例6：

本實施例關於表1中組合物1、2、4、6、8、9的製備，製備過程的步驟(1)和步驟(2)與實施例1相同；僅將實施例1中的甲硫氨酸更換為相同物質的量的表2中組合物1、2、4、6、8、9對應的原料。

步驟(3)分別如下。

組合物1：取1A 860g、1B 132g、碳酸鉀8g溶于10L水中，然後凍乾，得到組合物1。

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物1A的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+Na]⁺)414；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)5.00(d,1H),4.90(d,1H),4.36(m,1H),4.17(m,1H),4.01(m,1H),3.95(m,1H),3.90(m,1H),3.72~3.68(m,1H),3.60~3.55(m,1H),3.50~3.42(m,1H),3.53(q,1H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)213.73,170.59,81.10,71.12,71.01,69.31,69.53,62.76,61.14,51.09.

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物1B的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+H]⁺)294；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)4.55(d,2H),3.82(t,1H),3.88(m,3H),3.53(m,1H),3.38(m,2H),2.63(t,2H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)175.12,82.47,75.20,74.07,71.22,70.76,65.76,64.97,47.39.

組合物2：取2A 900g、2B 90g、氨水10g溶于10L水中，然後凍乾，得到組合物2。

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物2A的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+Na]⁺)424；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)4.91(d,1H),4.26(m,1H),4.18(m,1H),4.04~3.93(m,2H),3.80~3.73(m,1H),3.71~3.58(m,3H),2.76~2.63(m,1H),0.96(m,6H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)205.08,173.50,73.12,72.95,72.31,70.47,67.97,64.76,53.25,29.26,18.31.

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物2B的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+Na]⁺)326；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)3.85~3.76(m,2H),3.80~3.73(m,1H),3.68~3.62(m,1H),3.62~3.54(m,2H),3.51(d,J1H),2.95~2.87(m,1H),2.83~2.74(m,1H),1.96(m,1H),0.93(d,3H),0.88(d,3H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)174.20,73.20,73.07,72.22,71.70,65.76,64.76,49.62,29.61,18.79.

組合物4：取4A 920g、4B 60g、磷酸氫二鉀20g溶于10L水中，然後凍乾，得到組合物4。

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物4A的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+Na]⁺)472；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)4.32(t,1H),4.22~3.94 (m,5H),3.88~3.75(m,2H),3.68~3.51(m,3H),2.88~2.74(m,2H),2.07(m,2H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)206.05,173.65,138.61,127.33,126.57,125.74,73.12,72.95,72.31,70.48,64.76,63.59,53.03,32.10.

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物4B的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+H]⁺)352；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)4.20(d,2H),3.85~3.74(m,3H),3.68~3.49(m,4H),2.99~2.67(m,4H),1.89(m,2H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)171.15,138.89,126.86,125.77,73.20,73.07,72.22,71.71,64.76,61.85,49.39,32.89.

組合物6：6A 910g、6B 75g、乙酸鈉15g溶于10L水中，然後凍乾，得到組合物6。

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物6A的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+Na]⁺)478；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)4.18~4.06(m,3H),3.63~3.44(m,3H),3.29~3.01(m,3H),2.10~1.83(m,3H),1.59~1.15(m,10H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)204.23,171.80,73.12,72.95,72.31,70.36,64.76,62.10,52.95,34.38,34.12,32.76,26.16,25.99.

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物6B的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+H]⁺)358；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)4.20(d,2H),3.84~3.72(m,3H),3.68~3.62(m,4H),2.98~2.68(m,3H),1.89~1.56(mm,10H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)172.04+73.14,72.22,71.71,64.76,59.63,49.51,35.56,33.61,33.11,26.16,25.99.

組合物8：取8A 900g、8B 85g、碳酸氫鈉15g溶于10L水中，然後凍乾，得到組合物8。

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物8A的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+Na]⁺)478；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)7.26(m,1H),6.92(m,1H),6.75(m,1H),4.64(t,1H),4.18~3.94(m,3H),3.89~3.76(m,2H),3.67~3.51(m,3H),3.43~3.27(m,2H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)211.05,178.68,152.88,142.18,133.53,73.12,72.95,72.31,70.48,64.76,64.29,53.03,28.99.

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物8B的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+H]⁺)358；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)7.26(d,1H),6.93(d,1H),6.72(dd,1H),3.86~3.56(m,7H),3.13~2.87(m,4H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)176.22,152.92,142.59,133.81,73.20,73.07,72.22,71.70,64.76,61.48,49.39,30.68.

組合物9：取9A 910g、9B 85g、碳酸氫鈉5g溶于10L水中，然後凍乾，得到組合物9。

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物9A的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+H]⁺)479；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)8.57(d,1H),7.42(d,1H),4.64(t,,1H),4.19~3.94(m,3H),3.90~3.75(m,2H),3.69~3.41(m,4H),3.29(m,1H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)206.05,170.68,152.88,142.18,133.53,73.12,72.95,72.31,70.48,64.76,64.29,53.03,28.99.

使用Bruker AV500MHz核磁共振譜儀測定化合物9B的氫譜和碳譜如下。

Ms(ES+,[M+H]⁺)359；

¹H NMR(500MHz,D₂O)δ(ppm)8.58(d,1H),7.43(d,1H),3.91~3.73(m,4H),3.72~3.53(m,3H),3.24~2.85(m,4H).

¹³C NMR(125MHz,D₂O)δ(ppm)171.22,152.92,142.59,133.81,73.20,73.07,72.22,71.70,64.76,61.48,49.39,30.68.

實施例7：

本實施例以實施例1製備的組合物3為主要成分，製備粉針劑。

取組合物1250g、ETDA 5g、甘露醇400g、氨水400g在氮氣氛圍中溶於15L冰水中，攪拌均勻，並自動分裝至20ml西林瓶中，每瓶7.5ml，預冷至-40℃，然後凍乾，得到含有3A 500mg/支的組合物3粉針劑。

實施例8：

本實施例以實施例2製備的組合物5為主要成分，製備粉針劑。

取組合物5 1111g、ETDA 10g、海藻糖300g、碳酸氫鈉50g在氮氣氛圍中溶於15L冰水中，攪拌均勻，並自動分裝至20ml西林瓶中，每瓶7.5ml，預冷至-40℃，然後凍乾，得到含有5A 500mg/支的組合物5製劑。

實施例9：

本實施例以實施例3製備的組合物7為主要成分，製備粉針劑。

取組合物7 1100g、BAL 1g、甘露醇200g、乙酸銨85g在氮氣氛圍中溶於15L冰水中，攪拌均勻，並自動分裝至20ml西林瓶中，每瓶7.5ml，預冷至-40℃，然後凍乾，得到含有7A 500mg/支的組合物7製劑。

實施例10：

本實施例以實施例1製備的組合物3為主要成分，製備腸溶顆粒(片)。

取組合物300g、EDTA 1g、微晶纖維素(PH102)287g、膠態二氧化矽6g、硬脂酸鎂MF-2-V 6g、薄膜包衣預混劑(胃溶型)17g、薄膜包衣預混劑(腸溶型)480g分別過40目篩網進行預處理，然後將微晶纖維素、組合物、EDTA、膠態二氧化矽、硬脂酸鎂一起過40目篩網，然後混合，加入乾法制粒機中，收集14~30目顆粒，經流化床按照5%濃度進行配製胃溶型包衣液進行隔離層包衣，然後20%濃度進行配製腸溶性包衣液，進行腸溶包衣，得到腸溶顆粒。壓片後再進行腸溶包衣得到腸溶片。

實施例11：

本實施例以實施例1製備的組合物3為主要成分，製備腸溶膠囊。

取組合物300g、EDTA 3g、微晶纖維素(PH102)285g、膠態二氧化矽6g、硬脂酸鎂MF-2-V 6g、分別過40目篩網進行預處理，然後將微晶纖維素、組合物、EDTA、膠態二氧化矽、硬脂酸鎂一起過40目篩網，然後混合，加入乾法制粒機中，收集14-30目顆粒，採用2號腸溶膠囊填充，300mg/顆，得到腸溶膠囊。

實施例12：

本實施例以實施例1製備的組合物3為主要成分，製備腸溶緩釋顆粒(片)。

取組合物300g、EDTA 6g、微晶纖維素(PH102)200g、羥丙甲纖維素84g、膠態二氧化矽5g、硬脂酸鎂MF-2-V 5g、薄膜包衣預混劑(胃溶型)17g、薄膜包衣預混劑(腸溶型)480g分別過40目篩網進行預處理，然後將微晶纖維素、組合物、EDTA、膠態二氧化矽、硬脂酸鎂一起過40目篩網，然後混合，加入乾法制粒機中，收集14~30目顆粒，經流化床按照5%濃度進行配製胃溶型包衣液進行隔離層包衣，然後20%濃度進行配製腸溶性包衣液，進行腸溶包衣，得到腸溶緩釋顆粒。壓片後再進行腸溶包衣得到腸溶緩釋片。

實施例13：

本實施例以實施例1製備的組合物3為主要成分，製備腸溶緩釋膠囊。

取組合物300g、EDTA 5g、微晶纖維素(PH102)200g、羥丙甲纖維素88g、膠態二氧化矽6g、硬脂酸鎂MF-2-V 6g、分別過40目篩網進行預處理，然後將微晶纖維素、組合物、EDTA、膠態二氧化矽、硬脂酸鎂一起過40目篩網，然後混合，加入乾法制粒機中，收集14~30目顆粒，採用2號腸溶膠囊填充，300mg/顆，得到腸溶緩釋膠囊。

實施例14：

本實施例以實施例1製備的組合物3為主要成分，製備透皮製劑。

取組合物200g、EDTA 10g、羥丙纖維素鈉80g、月桂氮卓酮100g、薄荷油200g、硬脂酸鎂80g、聚乙二醇400 40g、水290g混合，攪拌成凝膠狀，均勻塗抹在背襯材料上，面積10000cm²，按要求分割成所需大小，即得到以組合物3為主要成分的透皮製劑。

實施例15：

本實施例研究對比化合物3A、實施例1製備的組合物3、以80wt%3A和20wt%3B形成的組合物3-1、以80wt%3A和20wt%碳酸鈉形成的組合物3-2、實施例7製備的以組合物3為主要成分的粉針劑(以下簡稱組合物3製劑)的固體和配伍穩定性。

本發明中化合物3A，即中國專利2005100353771中的D3，也就是背景技術部分的GMDTC，在本實施例及後續實施例中均以D3表示，以示同中國專利2005100353771聯繫比較。

將D3與組合物3-1、組合物3-2、組合物3、組合物3製劑分別在-25℃、5±3℃、25±2℃/60±5%RH、40±2℃/75±5%RH環境中放置0d、5d、 10d、30d和180d(d指day，天)，測量主成分含量變化(0d主成分含量折算為100%)，如表3所示。

表3：不同組別在不同條件下主成分含量隨時間的變化

表格中含量超過100%的資料，為積分誤差所致(下同)。

將D3與組合物3-1、組合物3-2、組合物3、組合物3製劑均按照主成分濃度為2mg/ml配置成溶液，溶媒為生理鹽水和5%葡萄糖注射液，檢測pH，並在室溫條件下放置8小時，檢測主成分含量變化(0h含量折算為100%計)，如表4所示。

表4：不同組別在溶液中的主成分含量隨時間的變化

由表3可知，組合物3和組合物3製劑在5±3℃條件下180d均穩定，組合物3-1、組合物3-2在此條件下180d主成分含量約有9%左右的下降，而D3 180d則有18.8%的下降，當溫度升高到25±2℃時組合物3-1、組合物3-2穩定性下降，主成分180d下降17%左右，組合物3主成分下降5.8%，組合物3製劑則相對穩定。由此可見組合物3製劑、組合物3穩定性明顯優於組合物3-1、組合物3-2和D3，可以有效降低運輸和儲存成本，延長有效期。

由表4可知，組合物3製劑、組合物3在測試階段穩定性比較好，基本沒有變化，D3穩定性較差，8小時水解30%~50%，組合物3-1、組合物3-2則有10%~20的水解。由此可見組合物3製劑、組合物3的配伍穩定性明顯優於組合物3-1、組合物3-2和D3，可用於臨床。

實施例16：

本實施例研究實施例1製備的組合物3，實施例7製備的組合物3粉針劑，實施例10、11、13製備的組合物3口服製劑的急性毒性。

採用SPF級SD大鼠，180~220g，雌雄各半，均為70隻，分7組，每組雌雄10隻，組別1按照3g/kg靜脈注射D3，組別2按照3g/kg靜脈注射組合物3，組別3按照3g/kg靜脈注射組合物3粉針劑，組別4按照5g/kg口服給藥組合物3腸溶顆粒，組別5按照5g/kg口服組合物3腸溶膠囊，組別6按照5g/kg口服組合物3腸溶緩釋膠囊，組別7為空白組。給藥後每天觀察中毒情況，未發現明顯中毒反應。於第0、3、7、14天測量動物體重，結果顯示，動物體重正常，未見明顯毒性，解剖後各臟器無異樣。因此D3注射用時，大鼠MTD大於3g/kg；口服時，大鼠MTD大於5g/kg；各組毒性與D3相當，毒性極低。

採用普通級比格犬8~10kg，雌雄各半，均為10隻，分7組，組別1按照2g/kg靜脈注射D3，組別2按照2g/kg靜脈注射組合物3，組別3按照2g/kg靜脈注射組合物3粉針劑，組別4按照5g/kg口服給藥組合物3腸溶顆粒，組別5按照5g/kg口服組合物3腸溶膠囊，組別6按照5g/kg口服組合物3腸溶緩釋膠囊，組別7為空白組。給藥後每天觀察中毒情況，未發現明顯中毒反應。於第0、3、7、14天測量動物體重，結果顯示，動物體重正常，未見明顯毒性。因此D3注射用時，犬MTD大於2g/kg；口服時，犬MTD大於5g/kg，各組毒性與D3相當，毒性極低。

實施例17：

本實施例研究實施例1製備的組合物3、實施例7製備的組合物3粉針劑的長期毒性。

SPF級SD大鼠，180~220g，雌雄各半，均為105隻，分7組，每組雌雄各15隻，組別1按照200mg/kg靜脈注射組合物3粉針劑，組別2按照500mg/kg靜脈注射組合物3粉針劑，組別3按照1000mg/kg靜脈注射組合物3粉針劑，連續給藥28天；組別5按照200mg/kg靜脈注射組合物3，組別6按照500mg/kg靜脈注射組合物3，組別7按照1000mg/kg靜脈注射組合物3，連續給藥28天；組別4為空白組。每天觀察中毒情況，給藥結束後檢測血生化，組合物3和組合物3製劑無明顯區別，高劑量組均出現HGB略有下降，尾巴注射部位有輕微紅腫和潰爛。於第0、7、14、21、28天測量動物體重，結果顯示，動物體重正常；其中每組雌雄各10隻於第28天給藥後24h處死，並解剖，大體觀察各臟器，均無異常，臟器係數正常，鏡檢後各臟器均無異常；剩餘每組雌雄5隻恢復28天，檢測血生化，各項功能正常，解剖後，大體觀察各臟器，均無異常，臟器係數正常，鏡檢後各臟器均無異常。組合物3和組合物3粉針劑，大鼠NOAEL值均為500mg/kg。

實施例18：

本實施例研究D3、化合物3B、實施例1製備的組合物3、實施例7製備的組合物3粉針劑(簡稱組合物3製劑)的驅鎘效果。

取雄性紐西蘭兔205隻，1.8~2.2kg/隻，隨機分為空白對照組25隻，慢性鎘中毒模型組180隻。模型兔耳緣靜脈注射含有1.5μmol/kg CdCl₂與30μmol/kg巰基乙醇(ME)混合液體重，1次/d，連續5d，觀察35d。35天後將合格的兔子按體重挑選，其中空白組18隻，模型組162隻，將模型組兔隨機分為模型對照組18隻、D3高劑量組18隻，D3低劑量組18隻，化合物3B高劑量組18隻、化合物3B低劑量組18隻、組合物3高劑量組18隻，組合物3低劑量組18隻，組合物3粉針劑高劑量組18隻，組合物3粉針劑低劑量組18隻，空白組、模型組使用生理鹽水同體積靜脈滴注給藥，30滴/min，滴注時間約2h，1次/d，5d/周，分組和給藥劑量如表5所示。1周、2周、4周的最後一天給藥後，分別收集計畫中兔子的0~6h和7~24h的尿液，測定血、尿、腎中鎘的含量，血鎘和腎鎘中的驅鎘率，結果如表6所示。

表5：實施例18紐西蘭兔分組和給藥劑量

表6：GMDTC組合物不同劑型對兔子模型中血鎘和腎鎘中的驅鎘率

本表格及後續表格中，*表示與同一治療時間的模型組對比p<0.05；**表示與同一治療時間的模型組對比p<0.01。

通過腎鎘含量的測定可以看出：與同一治療時間的模型組相比，給藥第1周時，D3低劑量、D3高劑量、組合物3低劑量組、組合物3高劑量組、組合物3製劑低劑量組、組合物製劑3高劑量組腎鎘與模型組相比，腎鎘含量均顯著降低，均具有統計學差異，D3、組合物和組合物製劑各組高劑量腎驅鎘率分別為47.8%、49.4%、51.4%；給藥第2周腎驅鎘率分別為77.0%、77.6%、78.8%；給藥第4周時，各組腎鎘驅鎘率為91.7%、94.0%、95.1%。組合物和組合物製劑劑量為中國專利申請號CN200510035377.1中化合物D3劑量的1/4，但驅鎘率相當。而化合物3B與模型組相比無顯著性差異，說明化合物3B沒有驅鎘效果。

D3、組合物和組合物製劑在108mg/kg相同劑量下，組合物和組合物製劑四周驅鎘率明顯高於化合物D3。

同時我們還檢測了給藥四周D3低劑量、D3高劑量、化合物3B低劑量組、化合物3B高劑量組、組合物3低劑量組、組合物3高劑量組、組合物3製劑低劑量組、組合物3製劑高劑量組尿β₂-微球蛋白數據，如表7所示。

表7：四周給藥各組尿β₂-微球蛋白值

通過對腎損傷標記物β₂-微球蛋白的檢測，組合物3和組合物3製劑高劑量組均能有效降低β₂-微球蛋白含量，提示腎損傷得到修復。

因此，組合物3和組合物3製劑可在不影響療效的情況下，降低藥物的使用量，從而降低了藥物在人體的暴露量，減低藥物的使用風險，並且修復腎損傷。其次由於藥物使用量的降低，可有效地降低藥物使用成本，減輕患者的負擔。

實施例19：

本實施例研究組合物3口服製劑的驅鎘效果。

按照實施例10、11、13中的製備方法製備一批口服製劑，並通過動物實驗檢測其驅鎘效果。

取雄性紐西蘭兔48隻，隨機分為空白對照組6隻，慢性鎘中毒模型組42隻。模型組兔耳緣靜脈注射含有1.5μmol/kg CdCl₂與30μmol/kg巰基乙醇(ME)體重混合液，1次/天，連續5天，觀察35天。造模成功後，將模型組兔隨機分為模型對照組18隻、腸溶顆粒、腸溶膠囊、腸溶緩釋膠囊高低劑量組各6隻，腸溶顆粒、腸溶膠囊、腸溶緩釋膠囊分別按照低劑量300mg/天，高劑量900mg/天，連續給藥14天。腸溶顆粒/腸溶膠囊/腸溶緩釋膠囊高劑量兩周治療分別為45.0%、53.6%、66.0%，實驗結果如表8所示。

表8：口服製劑連續服用14天的腎鎘驅除導

從表8可以看出：組合物3口服製劑均有一定的驅鎘作用，且緩釋膠囊效果優於腸溶顆粒和腸溶膠囊。說明藥物作用時間越長對驅鎘效果越好。

實施例20：

本實施例研究實施例14製備的組合物3透皮製劑的驅鎘效果。

取雄性紐西蘭兔24隻，隨機分為空白組6隻，模型組18隻。模型組兔耳緣靜脈注射含有1.5μmol/kg CdCl₂與30μmol/kg巰基乙醇(ME)體重混合液，1次/天，連續5天，觀察49天。造模成功後，模型組18隻分為對照組、低劑量組和高劑量組，每組6隻。所有兔子剔除腹部毛髮，空白組和對照組貼不載組合物3的透皮製劑，規格4cm×4cm，低劑量組貼組合物3透皮製劑，規格4cm×4cm，高劑量組貼組合物3透皮製劑，規格8cm×8cm，每天早晚各更換1次，連續28天。收集第28天尿液檢測尿鎘和β₂-微球蛋白，並於第29天處死，取腎臟，檢測腎鎘，如表9所示。

表9：組合物3透皮製劑連續治療28天的治療效果

從表9可以看出：組合物3透皮製劑高、低劑量組與模型組對比尿鎘有顯著上升，腎鎘顯著下降，說明組合物3透皮製劑有明顯的驅鎘效果，且有劑量依賴關係。而且高劑量組β₂-微球蛋白與模型組對比有顯著下降，說明腎損傷得以恢復。

實施例21：

本實施例研究實施例7製備的組合物3粉針劑(簡稱組合物3製劑)對汞中毒的治療作用。

取30隻體重1.5~2.0kg家兔，雌雄各半，每天皮下注射1%氯化汞，每隻0.8mL，連續3d，β₂-微球蛋白顯著性增加，提示形成腎臟損害症狀，造模成功。

造模成功後，其中空白組6隻，模型組24隻，將模型組兔隨機分為模型對照組6隻、組合物3製劑低劑量組6隻，組合物3製劑中劑量組6隻，組合物3製劑高劑量6隻，空白組、模型組使用生理鹽水靜脈滴注給藥，給藥組給對應藥物的生理鹽水溶液，所有組別給藥體積相同，滴速為30滴 /min，滴注時間約2h，1次/天，5天/周，共計4周。分組及給藥劑量如表10所示，分別於第0、1、5、12、19、26天採集血液和尿液，檢測血汞濃度和尿汞濃度，並計算尿汞含量，檢測尿β₂-微球蛋。

血汞濃度如表11所示，尿汞含量如表12所示，尿β₂-微球蛋如表13所示。

表10：實施例21紐西蘭兔分組和給藥劑量

表11：不同組別血汞濃度檢測(ng/ml)

表12：不同組別24小時尿汞總量檢測(ng)

表13：四周給藥不同組別尿β₂-微球蛋白值

從上述實驗結果可以看出：與模型組對比，中、高劑量組血汞濃度顯著降低，尿汞排出顯著增加，說明組合物3製劑可以增加汞的排出，同時β₂-微球蛋白含量顯著下降，說明組合物3製劑可治療由汞造成的腎損傷。

實施例22：

本實施例研究實施例7製備的組合物3粉針劑(簡稱組合物3製劑)對鉛中毒的治療作用。

取30隻SD大鼠，體重為180~200g，對照組自由飲用含12.5μL．醋酸的去離子水3周。鉛中毒組自由飲用2.5g/L醋酸鉛水溶液(含12.5μL/L醋酸)3周造成大鼠實驗性鉛中毒。對照組大鼠全血中鉛含量為(35.16±0.78)μg/L。大鼠染毒3周血鉛含量(2459.12±38.27)ug/L(P<0.01)，表明經腸道吸收的鉛已經使大鼠造成鉛中毒。

造模成功後，選取空白組6隻，模型組30隻。所有組別每天給藥一次，5天/周，共計4周。空白組、模型組使用生理鹽水靜脈滴注給藥，給藥組給對應藥物的生理鹽水溶液，所有組別給藥體積相同，滴速為30滴/min，滴注時間約1h，1次/天，5天/周，SD大鼠分組和給藥劑量如表14所示。

最後一天給藥後24h處死大鼠，取血、腎、腦和肝，並ICP-MS檢測這些臟器的鉛含量，檢測結果如表15所示，同時檢測血中鈣、鎂、鐵、銅、鋅的濃度，檢測結果如表16所示。

表14：實施例22 SD大鼠分組和給藥劑量

表15：不同組別血液以及臟器中鉛含量

^△表示與同一治療時間的EDTA組對比p<0.05；^△△表示與同一治療時間的EDTA組對比p<0.01。

表16：不同組別血液中鈣、鎂、鐵、銅、鋅的濃度

^△表示與同一治療時間的空白組對比p<0.05；^△△表示與同一治療時間的空白組對比p<0.01。

從上述實驗結果可以看出：與模型組對比，EDTA、組合物3製劑中、高劑量組血鉛濃度顯著降低，說明EDTA、組合物3製劑均能降低血鉛含量，但組合物3製劑高劑量組明顯優於EDTA；與模型組和EDTA組對比，組合物3製劑中、高劑量腎鉛顯著性降低，說明組合物3製劑可以增加腎鉛的排出。同時在此劑量下，組合物3製劑治療組與空白組和模型組相比均無顯著性差異，說明該實驗劑量下組合物3製劑對血中鈣、鎂、鐵、銅、鋅無影響。

實施例23：

本實施例研究實施例7製備的組合物3粉針劑(簡稱組合物3製劑)對砷中毒的治療作用。

取60隻Wistar大鼠，體重為180~200g，空白組自由飲用去離子水3個月。砷中毒組自由飲用100mg/L．As₂O₃水溶液，每天飲水約20ml，相當於口服劑量10mg/kg，持續餵養3個月，造成大鼠飲水型砷中毒。

造模成功後，選取空白組10隻，模型組50隻。所有組別每天給藥一次，5天/周，共計4周。空白組、模型組使用生理鹽水靜脈滴注給藥，給藥組給對應藥物的生理鹽水溶液，所有組別給藥體積相同，滴速為30滴/min，滴注時間約1h，1次/d，5d/周，共計四周，Wistar大鼠分組和給藥劑量如表17所示。

收集第一天和第26天尿液，檢測砷排出量，給藥第26天24小時後取大鼠的血和腎，用ICPMS檢測血砷和腎砷濃度，結果如表18所示。

表17：實施例23 Wistar大鼠分組和給藥劑量

表18：不同組別血砷和腎砷的濃度以及尿砷的含量

從上述實驗結果可以看出：與模型組相比，組合物3製劑中、高劑量均能顯著性的降低血砷和腎砷的濃度，第一天尿砷含量顯著性增高，說明組合物3製劑對砷的排出有明顯的促進作用。

實施例24：

本實施例研究實施例7製備的組合物3粉針劑(簡稱組合物3製劑)對鉈中毒的治療作用。

取60隻Wistar大鼠，體重為180~200g，空白組自由飲用去離子水1個月。鉈中毒組自由飲用40mg/L．Tl₂SO₄水溶液，每天飲水約20ml，相當於口服劑量4mg/kg，持續餵養1個月，造成大鼠飲水型鉈中毒。

造模成功後，選取空白組10隻，模型組50隻，分組與給藥劑量如表19所示，所有組別每天給藥一次，5天/周，共計4周。空白組、模型組使用生理鹽水靜脈滴注給藥，給藥組給對應藥物的生理鹽水溶液，所有組別給藥體積相同，滴速為30滴/min，滴注時間約1h，1次/天，5天/周，共計四周。

最後一天給藥後24h處死大鼠，取血、腎、腦和肝，並ICP-MS檢測這些臟器的鉈含量，檢測結果如表20所示。

表19：實施例24 Wistar大鼠分組和給藥劑量

表20：不同組別血液以及臟器中鉈含量

從上述實驗結果可以看出：與模型組相比，組合物3製劑中、高劑量均能顯著性的降低血鉈、腎鉈、肝鉈的濃度，而EDTA則不能降低腎鉈、肝鉈的濃度。說明組合物3製劑對鉈的排出有明顯的促進作用。

實施例25：

本實施例研究實施例7製備的組合物3粉針劑(簡稱組合物3製劑)對銅中毒的治療作用。

取30隻SD大鼠，體重為80~100g，分為A、B、C三組。A組為空白組，自由飲食。B、C組為銅中毒組，飼料中添加1.60g/kg的CuSO₄。每天在SPF環境中自由飲食，持續餵養2個月，造成大鼠銅中毒模型。

造模成功後，所有組別每天給藥一次，5天/周，共計4周。A組、B組使用生理鹽水腹腔注射給藥；C組給433mg/kg組合物3製劑的生理鹽水溶液，腹腔注射給藥，所有組別給藥體積相同，1次/d，給藥5天，每天收集給藥後24小時尿液，ICP-MS檢測尿銅的濃度，計算排出量，如圖2所示。

從圖2可以看出：組合物3製劑在433mg/kg的給藥劑量，可顯著提高銅離子的排出。

實施例26：

本實施例研究實施例7製備的組合物3粉針劑(簡稱組合物3製劑)對鉻、鈷、鎳、錳混合中毒的治療作用。

取40隻紐西蘭兔，體重為1.5~2.0kg，空白組耳緣靜脈注射生理鹽水5天。中毒組耳緣靜脈注射5mg/ml CrCl₃、3mg/ml CoCl₂、1mg/ml NiCl₂、2mg/ml MnCl₂混合溶液，給藥劑量為2ml/kg，持續5天，觀察25天後造成紐西蘭兔鉻、鈷、鎳、錳混合中毒模型。

造模成功後，選取空白組8隻，模型組24隻。所有組別每天給藥一次，共計3天。空白組、模型組使用生理鹽水靜脈滴注給藥，給藥組給對應藥物的生理鹽水溶液，所有組別給藥體積相同，滴速為30滴/min，滴注時間約2h，1次/天，共計3天，紐西蘭兔分組和給藥劑量如表21所示。每天收集24h尿液，共計3天，計算3天經尿液排出鉻、鈷、鎳、錳總量，如表22所示。

表21：實施例26紐西蘭兔分組和給藥劑量

表22：紐西蘭兔治療3天經尿液排出鉻、鈷、鎳、錳總量

從上述實驗結果可以看出：與模型組和EDTA組相比，組合物3製劑組經尿排出鉻、鈷、鎳、錳總量均顯著性增加，說明組合物3製劑對鉻、鈷、鎳、錳的排出有促進作用，且優於EDTA。

實施例27：

本實施例研究實施例7製備的組合物3粉針劑(簡稱組合物3製劑)對錫驅除作用以及對錫類化合物引起的氧化損傷的保護作用。

將ICR小鼠36隻，隨機分成三組，每組12隻，空白組腹腔注射生理鹽水，模型組和給藥組腹腔注射三甲基氯化錫0.5mg/kg，染毒三天後，空白組和模型組給予生理鹽水，給藥組給予252.2mg/kg的組合物3製劑生理鹽水溶液，均採用腹腔注射，給藥3天。收集三天尿液，檢測尿錫總量，三天後處死小鼠，取小鼠肝臟，置於液氮中保存，檢測活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)含量，檢測結果如表23所示。

表23：不同組別小鼠尿錫含量以及(ROS)和(MDA)含量

從上述實驗結果可以看出：治療組與模型組對比，尿錫排出顯著增加，說明組合物3製劑能夠有效促進錫的排出，同時ROS和MDA顯著下降體內的氧化應激反應的已恢復，因此組合物3製劑對錫的排出有促進作用以及對錫類化合物引起的氧化損傷的保護作用。

實施例28：

本實施例研究實施例7製備的組合物3粉針劑(簡稱組合物3 製劑)對自由基的清除作用。

Wistar大鼠40隻，體質量200~230g，雌雄各半。置於清潔級動物室中，大鼠進行稱重、編號，隨機分為A、B、C、D組各40隻。D-半乳糖用生理鹽水配成濃度為5%的注射液，B、C、D組大鼠腹部皮下注射D-半乳糖500mg/(kg．d)製備衰老模型，A組空白組大鼠腹部注射相同劑量的生理鹽水，連續注射56天。造模成功後第1天，C、D組治療組分別腹腔給予108、216mg/kg組合物3製劑，A、B組給予10mL/kg生理鹽水，自由進食水，連續30天。最後一次給藥8h後，以3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，暴露腹部，下腔靜脈取血，離心後取上清液作為待測血清，檢測血清羥自由基(OH^-．)清除率、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)，如表24所示。

表24：不同組別大鼠(OH^-．)清除率、SOD、GSH-PX、MDA的含量

從上述實驗結果可以看出：與模型B組相比，治療組SOD、GSH-PX活性均顯著提高，MDA含量顯著，說明組合物3製劑對體內自由基有明顯的清除作用。

實施例29：

本實施例研究實施例7製備的組合物3粉針劑(簡稱組合物3製劑)對鉍的清除作用。

取40隻Wistar大鼠，體重為180~200g，空白組自由飲用去離子水1個月。鉍中毒組自由飲用100mg/L．枸櫞酸鉍鉀水溶液，每天飲水約20ml，持續餵養3個月，造成大鼠鉍中毒。

造模成功後，選取空白組10隻，模型組30隻，模型組分成對照組、低劑量組、高劑量組，每組10隻，所有組別每天給藥一次，連續5天。空白組、對照組腹腔注射生理鹽水，給藥組低劑量組給予27mg/kg組合物3製劑的生理鹽水溶液，給藥組低劑量組給予108mg/kg組合物3製劑的生理鹽水溶液，所有組別給藥體積相同，腹腔注射，1次/天，5天/周，收集每天尿液檢測鉍濃度，計算每天排出鉍含量。如圖3所示。

從圖3可以看出，與對照組相比，組合物3製劑高低劑量組均可顯著提高尿鉍的排出，且有劑量反應關係。

實施例30：

本實施例研究實施例7製備的組合物3粉針劑(簡稱組合物3製劑)降低由順鉑引起的耳毒性。

選取60隻SPF級NIH小鼠，經過3天的檢疫後，隨機分為6組，分組及給藥情況於表25所示，所有組別給藥體積相同，腹腔注射，1次/天，5天/周，共計2周。給藥時間如表26所示。小鼠腹腔注射給藥前後利用“智慧EP”聽覺誘發電位診斷系統進行聽腦乾反應(ABR)試驗，評價聽力功能。

表25：實施例30 NIH小鼠分組及給藥劑量情況

表26：實施例30不同組別小鼠給藥時間表

小鼠給藥前和給藥12天結束後，通過腹膜內注射用氯胺酮(90mg/kg)麻醉小鼠，在受控聲學室內測試，其中接地電極位於後側，正電極直接插於顱骨頂部的兩耳之間，負電極位於耳郭下方，使用高頻探頭在8、16和32KHz頻率上聲刺激強度從80dB SPL開始，以5dB依次降低。給藥前後相同刺激頻率的反應閾差記錄為ABR閾值偏移。結果如圖4所示。

從圖4可以看出，組合物3製劑組和空白組比較無顯著性差異，說明組合物3製劑本身並不會引起耳毒性，聯合治療組與順鉑組對比呈顯著差異，說明聯合治療組能夠顯著降低順鉑引起的耳毒性，且與劑量成明顯的依賴關係。

實施例31：

本實施例研究實施例1製備的組合物3對順鉑的減毒作用。

選用SPF級紐西蘭兔，4~8周齡，1.8~2.2kg，40隻，標準飲食，隨意飲水，隨機分為A、B、C、D四組。A組為空白組，耳靜脈注射0.9%氯化鈉注射液；B組為順鉑組，耳靜脈注射4mg/kg順鉑注射液，每週兩次，剩餘3天注射生理鹽水。C組為順鉑-D3組，耳靜脈注射4mg/kg，每週兩次，每天耳靜脈滴注433mg/kg D3；D組為順鉑-組合物3組，耳靜脈注射4mg/kg順鉑注射液，每週兩次，耳靜脈滴注433mg/kg組合物3，每週5次，所有紐西蘭兔均給藥3周，每週5天，觀察兔子的行為活動。分組及給藥劑量如表27所示，給藥時間表如表28所示。

表27：實施例31分組及給藥劑量情況

表28：實施例31給藥時間表

實驗結果：B組在1周後，體重減輕，脫毛，稀便；所有兔子兩周期間，體重減輕超過20%，明顯消瘦，萎靡不振，脫毛，稀便、鼻腔出血，口腔出血，呼吸微弱，達到倫理終點，進行安樂死。C組1周後，體重減輕，脫毛，稀便，鼻腔出血，口腔出血，在第二周和第三周期間所有兔子體重減輕超過20%，明顯消瘦，萎靡不振，呼吸微弱，達到倫理終點，進行安樂死。D組在給藥三周，體重減輕5%~15%，輕微消瘦，停止給藥後，體重開始恢復。

上述實驗結果表明，在同等劑量下，組合物3對順鉑的減毒作用優於D3。

實施例32：

本實施例研究實施例1製備的組合物3降低放射性元素對裸鼠胰腺癌模型副作用。

選用胰腺癌模型裸鼠，4周齡，16~20g，將動物麻醉，分為四組，監測裸鼠14天，檢測腫瘤大小，根據腫瘤大小和體重隨機分成A、B、C、D、E 5組，A組自由飲食，B、C植入碘-125，D、E組植入鈀-103，B組和D組每天給予108mg/kg組合物3，連續14天，分別在D0、7、14天檢測腫瘤的大小，如表29所示，第14天收集尿液和血液，採用液體閃爍計數儀測定放射強度。

液體閃爍計數結果：與C組相比，B組血液放射強度小於C組，p<0.05；尿液放射性B組放射強度大於C組，與E組相比，E組血液放射性強度小於D組，p<0.05；尿液放射性E組放射強度大於D組。

表29：裸鼠腫瘤體積的大小cm³(x±s)

從上述結果可以看出：使用組合物3並不會影響碘-125和鈀-103的抗腫瘤作用。且組合物3能與碘-125和鈀-103絡合，並排出體外。

實施例33：

本實施例研究實施例1製備的組合物3對Tc的排出作用。

取16隻體重1.5~2.0kg紐西蘭兔，分為A、B兩組，A組靜脈推注高鍀[99mTc]酸鈉注射液，3小時給予生理鹽水；B組脈推注高鍀[99mTc]酸鈉注射液，3小時後給予433mg/kg組合物3。所有組別給藥體積相同，滴速為15滴/min，每次滴注時間約3h。收集前12h尿液，ICP-MS檢測尿Tc濃度，計算Tc總排出量。

實驗結果：A組鍀經尿排出量為注射劑量的42.3%，B組鍀經尿排出量為注射劑量的74.5%，說明使用組合物3可顯著增加鍀的排出，與A組相比，鍀經尿排出量提高了76.1%。

實施例34：

本實施例研究實施例7製備的組合物3粉針劑(簡稱組合物3製劑)與順鉑組成的抗腫瘤藥物對兔子VX2肝腫瘤動物模型治療作用。

選用SPF級紐西蘭兔，4~8周齡，1.8~2.2kg，標準飲食，隨意飲水，將動物維持在12小時光/暗迴圈中，恒溫(23±2℃)和濕度(55±15%)。將動物麻醉，通過超聲引導，將VX2肝癌細胞微創導入肝臟，監測紐西蘭兔14天後，用B超監測腫瘤大小，根據腫瘤大小和體重隨機分成4組，每組10隻動物，藥物治療在第15天開始。對照組耳靜脈注射0.9%氯化鈉注射液。順鉑治療組耳靜脈注射，每週1次，使用4mg/kg順鉑。治療組A(藥物組合中順鉑：組合物3製劑=1：20)每週1次注射4mg/kg順鉑，耳靜脈注射順鉑2小時後注射60mg/kg組合物3製劑；治療組B(藥物組合中順鉑：組合物製劑=1：100)每週1次注射4mg/kg順鉑耳靜脈注射順鉑2小時後注射400mg/kg組合物3製劑，所有紐西蘭兔均治療4周。

使用公式V=π(a×b²)/6估計腫瘤體積，其中a和b是使用卡尺測量的腫瘤的最長和最短直徑。在實驗期間每3~4天監測紐西蘭兔體重，並在治療結束時處死紐西蘭兔，收集血液，檢測AST、ALT、CREA，結果如表30所示。使用舒泰50+速眠新各0.1ml/kg麻醉兔子後，頸動脈放血作為終止程式。此外，在處死後立即取腫瘤記錄體積，如圖5所示。

表30：不同組別兔子AST、ALT、CREA檢測值(x±s)

從上述實驗結果可以看出：順鉑、組合物3製劑與順鉑組成的抗腫瘤藥物對腫瘤的抑制作用無明顯區別，均能有效抑制腫瘤細胞的生長並殺死腫瘤細胞。與單獨使用順鉑相比，聯合用藥組可明顯降低由順鉑帶來的肝毒性和腎毒性，且該抗腫瘤藥物中治療組B降低由順鉑帶來的肝毒性和腎毒性優於治療組A。

實施例35：

本實施例研究實施例7製備的組合物3粉針劑(簡稱組合物3製劑)和PENAO(結構式如下)組成的抗腫瘤藥物對腫瘤的抑制作用。

其中，組別A抗腫瘤藥物為PENAO：組合物3製劑=1：20。

組別B抗腫瘤藥物為PENAO：組合物3製劑=1：50。

組別C抗腫瘤藥物為PENAO：組合物3製劑=1：125。

組別D抗腫瘤藥物為PENAO：組合物3製劑=1：312。

取U87惡性膠質瘤細胞，分別測試PENAO、組合物3製劑以及PENAO與組合物3組合成的抗腫瘤藥物的IC₅₀，不同組別使用的藥物原始濃度相同。結果如圖6所示。

從圖6可以看出：組合物3製劑對U87惡性膠質瘤細胞無明顯抑制作用；PENAO對U87惡性膠質瘤細胞抑制作用比較明顯；PENAO與組合物3組合成的抗腫瘤藥物對膠質瘤細胞的抑制作用明顯加強，優於PENAO單獨用藥。

實施例36：

本實施例研究組合物1-11的驅鎘效果。

取雄性紐西蘭兔150隻，1.8~2.2kg/隻，隨機分為空白對照組15隻，慢性鎘中毒模型組135隻。模型兔耳緣靜脈注射含有1.5μmol/kg CdCl₂與30μmol/kg巰基乙醇(ME)混合液體重，1次/d，連續5 d，觀察35 d。35天後將合格的兔子按體重挑選，其中空白組10隻，模型組110隻，將模型組兔隨機分為模型對照組10隻、組合物1~11製劑組每組10隻，空白組、模型組使用生理鹽水同體積靜脈滴注給藥，30滴/min，滴注時間約2h，1次/d，5d/周，共2周；給藥組給藥劑量為0.25mmol/kg，30滴/min，滴注時間約2h，1次/d，5d/周，共2周。2周後檢測腎中鎘的含量，結果如表31所示。

表31：組合物1~11相同給藥濃度的對腎鎘的驅除能力

通過腎鎘含量的測定可以看出：與同一治療時間的模型組相比，給藥2周時，組合物1~11對兔子腎臟中的鎘均有良好的驅除作用，組合物3驅鎘效率高於其他10組化合物。

需要說明以下幾點：

(1)目前已有的驅除重金屬藥物，例如EDTA類絡合劑、二巰基丙醇、二巰基丙磺酸鈉均無法驅除腎臟內的重金屬，並且在使用這些藥物時會增加腎臟的負擔。因此組合物1、6、7的腎鎘驅除率雖然明顯低於其他組，但是這幾組組合物仍然有臨床價值。

(2)本實施例所給出的藥效結果是針對特定實驗動物、特定給藥條件下完成的。組合物1、6、7的腎鎘驅除率雖然明顯低於其他組，但延長給藥時間和增加給藥量可以提高其腎鎘驅除率；另外藥物在不同的種屬之間，其驅除腎鎘的能力可能存在差異。

(3)化合物1、6、7具有較好的脂溶性，在做口服製劑時，有利於腸道對其吸收，在生物利用度上具有優勢。

實施例37：

將組合物1-11及化合物1A-11A分別在-25℃、5±3℃、25±2℃/60±5%RH、40±2℃/75±5%RH、60℃環境中放置0d、5d和10d(d指day，天)，測量主成分含量變化(0d主成分含量折算為100%)，結果如表32所示。

表32：組合物1-11及化合物1A-11A在不同條件下主成分含量隨時間的變化

表32中的各種溫度條件：-25℃對應的冷鏈儲存運輸成本很高，5℃對應的冷鏈儲存運輸成本較高，25℃對應的常溫儲存運輸成本較低；40℃和60℃為節省實驗時間的加速分解條件，通常不會在這樣的溫度下儲存運輸。

從表32的實驗結果可以看出：在25℃時，5d、10d後，組合物1-11的穩定性都優於化合物1-11A，表明在常溫下、10天內各組合物的穩定性都優於單一化合物；在加速條件下(40℃和60℃)，5d、10d後，組合物1-11的穩定性都顯著優於化合物1-11A，預示著常溫下、超過10天的更長時間內各組合物的穩定性更加優於單一化合物。

以上依據圖式所示的實施例詳細說明本發明的構造、特徵及作用效果；惟以上所述僅為本發明之較佳實施例，但本發明不以圖面所示限定實施範圍，因此舉凡與本發明意旨相符的修飾性變化，只要在均等效果的範圍內都應涵屬於本發明專利範圍內。

Claims

一種高穩定性的驅除重金屬組合物，其特徵在於，所述組合物包含：A)70~95重量%的式(1)的化合物或其藥學可接受的鹽；B)1~25重量%的式(2)的化合物或其藥學可接受的鹽；C)0.001~5重量%的鹼性化合物，所述鹼性化合物為鹼金屬的氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽、磷酸氫鹽、羧酸鹽或氨水中的至少一種；其中式(1)、式(2)的化合物選自下表中的一種：
如請求項1所述的組合物，其中：所述式(1)的化合物為：
所述式(2)的化合物為：
如請求項1所述的組合物，其中：所述組分A)的含量為80~90重量%，所述組分B)的含量為1~12重量%。
如請求項1所述的組合物，其中：所述組分A)在組合物中的質量分數與所述組分B)在組合物中的質量分數之比在90：1至9：1範圍內。
如請求項4所述的組合物，其中：所述組分A)在組合物中的質量分數與所述組分B)在組合物中的質量分數之比在80：1至13：1範圍內。
如請求項1所述的組合物，其中：所述鹼性化合物為氫氧化鈉、氫氧化鉀、乙酸鈉、氨水、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫銨、碳酸鉀、碳酸氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉中的至少一種。
如請求項1所述的組合物，其中：1mg所述組合物溶於1ml水中的pH值為9.0~11.0。
如請求項1~7中任一項所述的組合物的用途，為用於製備清除體內重金屬或自由基的藥物，或用於製備預防或治療由重金屬超標和中毒引起的相關疾病的藥物，所述重金屬為鉻、鈷、砷、錫、鎘、汞、錳、鎳、銅、鉈、鍀、鈾、鉍、鉛、碘、鈀和鉑中的至少一種。
一種抗腫瘤藥物，其特徵在於，以重量計，抗腫瘤藥物包含：含重金屬抗腫瘤藥物1份以及如請求項1~7中任一項所述的組合物5~200份。
如請求項9所述的抗腫瘤藥物，其中：所述含重金屬抗腫瘤藥選自：鉑類抗腫瘤藥物、砷類抗腫瘤藥物、釕類抗腫瘤藥物或錫類抗腫瘤藥物。
如請求項10所述的抗腫瘤藥物，其中：所述含重金屬抗腫瘤藥選自：順鉑、奧沙利鉑、三氧化二砷或碘125。
如請求項1~7中任一項所述的組合物的用途，為用於製備減少含重金屬藥物毒副作用的藥物，其特徵在於，所述含重金屬藥物包括順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、奈達鉑、枸櫞酸鉍鉀、膠體果膠鉍、鍀99二甲基雙膦酸鹽、鍀99mTc、三氧化二砷、碘125、鈀103中的至少一種。
如請求項12所述的用途，其中：所述含重金屬藥物包括順鉑、枸櫞酸鉍鉀、鍀99mTc中的至少一種。
一種粉針劑，其特徵在於，基於粉針劑的總重量計，包含：60~90%的如請求項1~7任一項所述的組合物；9~40%的賦形劑；0.001~10%的絡合劑。
如請求項14所述的粉針劑，其中：所述賦形劑選自甘露醇、氨水、海藻糖、碳酸氫鈉、碳酸鈉、碳酸鉀、乙酸鈉、乙酸銨、磷酸氫二鉀中的至少一種。
如請求項15所述的粉針劑，其中：所述賦形劑為甘露醇和氨水中的至少一種。
如請求項15所述的粉針劑，其中：所述賦形劑為氨水，在粉針劑中氨以絡合物或氨合物的形式存在。
如請求項14~17任一項所述的粉針劑，其中：所述絡合劑選自乙二胺四乙酸鹽、二巰基丙醇、二巰基丁二酸鈉中的至少一種。
如請求項18所述的粉針劑，其中：所述絡合劑為乙二胺四乙酸鹽。
一種口服製劑，其特徵在於，基於口服製劑的總重量計，包含：35~65%的如請求項1~7任一項所述的組合物；20~40%的崩解劑；0~5%的助流劑；0.1~5%的潤滑劑；0~10%的薄膜包衣預混劑；0.001~10%的絡合劑。
如請求項20所述的口服製劑，其中：所述崩解劑選自微晶纖維素、羧甲基纖維素鈉、羧甲基澱粉鈉、澱粉、聚乙烯吡咯烷酮中的至少一種，所述助流劑選自滑石粉、膠態二氧化矽中的至少一種，所述潤滑劑選自滑石粉、硬脂酸鎂中的至少一種，所述絡合劑選自乙二胺四乙酸鹽、二巰基丙醇、二巰基丁二酸鈉中的至少一種。
如請求項21所述的口服製劑，其中：所述崩解劑為微晶纖維素，所述助流劑為膠態二氧化矽，所述潤滑劑為硬脂酸鎂，所述絡合劑為乙二胺四乙酸鹽。
如請求項22所述的口服製劑，其中：所述口服製劑為腸溶片或腸溶膠囊。
如請求項23所述的口服製劑，其中：所述腸溶片為腸溶緩釋片，所述腸溶膠囊為腸溶緩釋膠囊。
一種透皮製劑，其特徵在於，基於透皮製劑的總重量計，包含：20~65%的如請求項1~7任一項所述的組合物；0.5~30%的透皮促進劑；0.5~25%的凝膠劑；1~30%的溶劑。
如請求項25所述的透皮製劑，其中：所述透皮促進劑選自月桂氮卓酮、冰片、油酸或薄荷油中的至少一種，所述凝膠劑選自卡波姆、羥丙纖維素鈉、乙基纖維素鈉、硬脂酸鎂、甘油和聚乙二醇中的至少一種，所述溶劑選自水、甲醇、乙醇、DMSO中的至少一種。
一種如請求項1~7任一項所述的組合物的製備方法，其特徵在於，製備過程在惰性氣體保護下進行，包括以下步驟：(1)合成組分B)：(1-1)往溶劑甲中加入鹼性化合物、氨基酸和葡萄糖，充分溶解、反應； (1-2)往(1-1)的反應產物中加入硼氫化鈉反應，然後酸化提純；(1-3)往溶劑甲中加入鹼性化合物、(1-2)的反應產物，充分溶解、反應，反應產物為組分B)；(2)合成組分A)：(2-1)將鹼性化合物和(1-2)的反應產物溶于水中，得到溶液甲；(2-2)將CS₂溶於溶劑乙中，得到溶液乙；(2-3)將溶液甲和溶液乙混合、反應後過濾，用溶劑丙萃取，水層凍乾得到產物；控制溶液甲和溶液乙混合的比例，使產物僅為組分A)；所述溶劑甲為甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、四氫呋喃和水中的至少一種，所述溶劑乙為丙酮、乙腈、四氫呋喃、二氧六環、DMF中的至少一種，所述溶劑丙為二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丙酯中的至少一種；(3)將組分A)、組分B)和鹼性化合物按比例混合，得到組合物；所述氨基酸為β-氟-丙氨酸、異丙氨酸、甲硫氨酸、S-(羥甲基)-同型半胱氨酸、谷氨酸、環己基丙氨酸、4-甲氧基苯丙氨酸、3-(2-噻吩基)-丙氨酸、2-氨基-3-(噻唑-5-基)丙酸、絲氨酸、S-烯丙基-半胱氨酸中的至少一種。
一種如請求項1~7任一項所述的組合物的製備方法，其特徵在於，製備過程在惰性氣體保護下進行，包括以下步驟： (1)合成組分B)：(1-1)往溶劑甲中加入鹼性化合物、氨基酸和葡萄糖，充分溶解、反應；(1-2)往(1-1)的反應產物中加入硼氫化鈉反應，然後酸化提純；(1-3)往溶劑甲中加入鹼性化合物、(1-2)的反應產物，充分溶解、反應，反應產物為組分B)；(2)合成組合物：(2-1)將鹼性化合物和組分B)溶于水中，得到溶液甲；(2-2)將CS₂溶於溶劑乙中，得到溶液乙；(2-3)將溶液甲和溶液乙混合、反應後過濾，用溶劑丙萃取，水層凍乾得到產物；控制(2-1)鹼性化合物加入量、(2-3)溶液甲和溶液乙混合的比例，使(2-3)的產物即為組合物；溶劑甲為甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、四氫呋喃和水中的至少一種，溶劑乙為丙酮、乙腈、四氫呋喃、二氧六環、DMF中的至少一種，溶劑丙為二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丙酯中的至少一種；所述氨基酸為β-氟-丙氨酸、異丙氨酸、甲硫氨酸、S-(羥甲基)-同型半胱氨酸、谷氨酸、環己基丙氨酸、4-甲氧基苯丙氨酸、3-(2-噻吩基)-丙氨酸、2-氨基-3-(噻唑-5-基)丙酸、絲氨酸、S-烯丙基-半胱氨酸中的至少一種。
如請求項28所述的製備方法，其中：在步驟(2)中，鹼性化合物與組分B)的摩爾比例為1.05：1至1.5：1，CS₂與組分B)的摩爾比例為1.3：1至5：1。
如請求項29所述的製備方法，其中：所述鹼性化合物與組分B)的摩爾比例為1.05：1至1.3：1，CS₂與組分B)的摩爾比例為1.8：1至3：1。