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TWI891660B - 包含基於ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａｌｐｈａ的異二聚體蛋白複合物的免疫細胞因子及其用途 - Google Patents

包含基於ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａｌｐｈａ的異二聚體蛋白複合物的免疫細胞因子及其用途

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TWI891660B
TWI891660B TW109132634A TW109132634A TWI891660B TW I891660 B TWI891660 B TW I891660B TW 109132634 A TW109132634 A TW 109132634A TW 109132634 A TW109132634 A TW 109132634A TW I891660 B TWI891660 B TW I891660B
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seq
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cancer
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瓦帝米洛 柯諾夫
謝爾蓋 阿傑耶夫
亞歷山大 高迪夫
艾琳娜 維諾加多瓦
斯坦拉夫 伊多奇莫
亞歷山朵菈 夏瑪柯娃
伊萬 米卓辛
狄密崔 摩羅佐
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俄羅斯聯邦商拜奧卡德聯合股份公司
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Abstract

本發明涉及包含基於IL-15/IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物的免疫細胞因子，和涉及其作為治療劑，特別是作為用於治療癌症和自身免疫性疾病的藥物的用途。本發明進一步涉及包含基於IL-15/IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物和免疫調節抗體的免疫細胞因子，和涉及其作為治療劑，特別是作為用於治療癌症和自身免疫性疾病的藥物的用途。

Description

包含基於ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａｌｐｈａ的異二聚體蛋白複合物的免疫細胞因子及其用途
本發明涉及包含基於IL-15 /IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物的免疫細胞因子，和涉及其作為治療劑，特別是作為用於治療癌症和自身免疫性疾病的藥物的用途。本發明進一步涉及包含基於IL-15 /IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物和免疫調節抗體的免疫細胞因子，和涉及其作為治療劑，特別是作為用於治療癌症和自身免疫性疾病的藥物的用途。
細胞因子為一類信號蛋白和糖蛋白，其像激素和神經遞質一樣，廣泛用於細胞通訊中。儘管激素為從特定器官分泌到血液中，並且神經遞質與神經活動有關，但就起源和目的而言，細胞因子為一類更為多樣化的化合物。其由廣泛種類的造血和非造血細胞產生，並且可影響附近的細胞和整個生物體兩者，有時強烈依賴於其他化學物質的存在。細胞因子家族主要由質量範圍在8-30 kDa之間的小的水溶性蛋白和糖蛋白組成。細胞因子對於先天和適應性免疫反應兩者的發展和功能至關重要。它們通常由遇到病原體的免疫細胞分泌，從而進一步活化並募集免疫細胞以增強系統對病原體的反應。 在細胞因子當中，介白素15 (IL-15)為與IL-2具有結構相似性的細胞因子；前者為在病毒感染或由公認是“非自身”或弱化的細胞間接刺激後由單核吞噬細胞(和一些其他細胞)分泌。這種細胞因子誘導自然殺傷細胞的細胞增殖，自然殺傷細胞為先天免疫系統的細胞，其主要作用是殺死病毒感染的細胞。由該基因編碼的蛋白為調控T細胞和自然殺傷細胞活化和增殖的細胞因子。 介白素-15 (IL-15)為一種14-15 kDa的糖蛋白，被兩個小組同時鑒定為T細胞活化因子(Grabstein, K.H. et al., Science 1994, 264, 965; Burton, J.D. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1994, 91, 4935)。IL-15 mRNA在不同的細胞和組織中廣泛表現，然而，由於在轉譯和細胞內運輸水準上對其表現的強烈轉錄後控制，因此難以在這些細胞或細胞上清液中找到該蛋白(Bamford RN. et al., J. Immunol. 1998, 160: 4418-4426; Kurys G, et al., J. Biol. Chem. 2000, 275: 30653-30659)。此外，已經表明IL-15可以活性形式作為膜蛋白存在(Musso et al., Blood 1999, Vol. 93, No 10 (May 15): pp 3531-3539)，並且最近人們注意到其可通過該途徑誘導促炎性細胞因子的分泌而作為配體或受體起作用(Budalgian et al., JBC 2004, vol 279, No 40: pp 42192-42201)。可溶性蛋白的高表現水準與自身免疫性和炎性疾病的發病機制相關。已在幾種疾病中檢測到IL-15，包括克羅恩病(Kirman I., 1996, Am. J. Gastroenterol. 91, 1789)、銀屑病(Ruckert R. 2000, 165: 2240-2250)，白血病(Yamada Y. 1999, Leukemia and Lymphoma, 35(1-2): 37-45)和類風濕性關節炎(RA), (Mclnnes I.B. 1998, Immunology Today, 19, 75-79)。配體與T細胞受體的結合誘導IL-15Rα的表現和幾種活化抗原比如CD69、CD25和TNFRII的表現。此外，IL-15為人體血液T淋巴細胞的化學引誘劑(Wilkinson 1995, J. Exp. Med. 181, 1255-1259)。所有這些資料表明由抗原呈遞細胞表現的IL-15可能對炎症部位的早期T細胞活化很重要。 IL-15為小的4個α-螺旋束細胞因子家族的成員。IL-15的生物學作用為通過其與由3個次單元α、β和γ組成的細胞膜受體結合而介導的。IL-15Rα為對其以非常高的親和力Kd 10-11 結合的該細胞因子特異性的次單元，並且可作為膜受體或以可溶性形式存在(Budagian V. et al., JBC 2004, 279, 39: 40368-40375; Mortier et al., The Journal of Immunology, 2004, 173: 1681-1688)。IL-15Rα含有能夠與IL-15結合的Sushi結構域，並且對於結合之後IL-15的生物學功能至關重要。 IL-15具有分子量低、體內半衰期短、重複劑量難以控制相關的局限性，並且可能引起全身性免疫副作用。迫切需要發現可增加體內半衰期並促進或增強體內IL-15的生物活性的方法。 最近，發現由IL-15及其受體IL-15Rα形成的複合物可顯著增強IL-15的生物活性。研究表明，由IL-15和可溶性受體IL-15Rα形成的複合物在刺激記憶性CD8+ T淋巴細胞和NT/NKT細胞增殖方面明顯優於單獨的IL-15。IL-15/IL-15Rα複合物在刺激記憶性CD8+ T細胞增殖和維持其存活方面為單獨IL-15的超過10倍，並且其機制可能與順式呈遞相關。 國際申請WO2007046006、WO2016095642公開了旨在刺激IL-15Rβ/γ信號傳導途徑從而誘導和/或刺激IL-15Rβ/γ陽性細胞比如NK和/或T細胞的活化和/或增殖的融合蛋白(其特徵在於包含通過共價鍵間接連接於含有IL-15Rα的細胞外區域的sushi結構域的多肽的IL-15)及其在癌症治療中的用途。然而，WO2007046006僅提供經接頭肽通過N-和C-末端氨基酸連接於IL-15Rα的IL-15的超級激動劑的實驗資料和特性，而WO2016095642僅提供對通過由IL-15配體和IL-15Rα本身的Cys突變形成的嵌合S-S鍵連接的超級激動劑的實驗資料和特性。兩者均沒有提供關於包含通過S-S鍵連接的或沒有S-S橋的融合蛋白結構域的IL15超級激動劑變體的活性和理化特性的任何證據。 這些物件具有分子量低、體內半衰期短相關的局限性。它們具有有限的介白素15活性，並且其產生非常困難，特別是在中國倉鼠卵巢細胞中，並且伴隨產量低。 國際申請WO 2015103928、WO2018071919公開了上述問題的解決方案的變體，特別是包含蛋白(I)和蛋白(II)的異二聚體IL-15激動劑蛋白，其中所述蛋白(I)由與第一Fc變體融合的IL-15形成，第一Fc變體連接於IL-15的C-末端，和所述蛋白(II)為第二Fc變體或由與第二Fc變體融合的IL-15Rα或其變體形成，第二Fc變體連接於IL-15Rα的C-末端。蛋白(I)和蛋白(II)通過第一Fc變體和第二Fc變體之間的“鈕入孔(knobs-into-holes)”相互作用形成穩定的異二聚體蛋白。 基於IL-15的免疫細胞因子的產生對於將靶向腫瘤的腫瘤特異性抗體的有利特性與介白素15的免疫調節作用結合起來尤為重要。 國際申請WO2015018528、WO2018071918公開了一種免疫細胞因子，其包含綴合物和通過共價鍵直接或間接連接於所述綴合物的免疫調節抗體或其片段，其中所述綴合物包含含有介白素15或其衍生物的氨基酸序列的多肽，和IL-15Rα或其衍生物的sushi結構域的氨基酸序列。 國際申請WO 2012175222公開了一種用於治療癌症的免疫細胞因子，其包含綴合物和選自Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Facb、Fd和scFv的抗體或其片段，其中所述綴合物包含含有介白素15的氨基酸序列的多肽和含有IL-15Rα的sushi結構域的氨基酸序列的多肽。綴合物和抗體或其片段使用提供蛋白綴合的雙功能偶聯劑共價連接。 國際申請WO2019006472公開了一種雙功能異二聚體蛋白，其包含： 一種IL-15/IL-15Ra融合蛋白，其包含IL-15Ra蛋白、IL-15蛋白和第一Fc結構域；和 一種抗原結合結構域單體，其結合選自人類CD8、人類NKG2A和人類NKG2D的抗原，包含含有VH-CH1-鉸鏈-CH2-CH3單體的重鏈(其中VH為重鏈可變結構域和CH2-CH3為第二Fc結構域)和含有可變輕鏈(VL)和輕鏈恆定結構域(CL)的輕鏈， 其中所述第一和所述第二Fc結構域具有選自以下的氨基酸取代組： S267K/L368D/K370S: S267K/S364K/E357Q； S364K/E357Q: L368D/K370S; L368D/K370S: S364K; L368E/K370S: S364K; T411T/K360E/Q362E: D401K; L368D/K370S: S364K/E357L和 K370S:S364K/E357Q。 儘管有以上關於IL-15及其受體IL-15Rα的複合物的現有技術解決方案，但仍需要具有高的穩定性、延長的體內半衰期、提高的體內生物活性和哺乳動物細胞中提高的生產率的基於IL15的分子。 由本發明人開發的包含基於IL-15和IL-15Rα的異二聚體分子的新型免疫細胞因子形式表現出更高的穩定性、在哺乳動物細胞中提高的生產率、延長的體內半衰期和提高的體內生物活性。此外，其為具有IL15活性特性的雙特異性免疫細胞因子的通用形式。根據臨床前研究的結果，由本發明人開發的新型免疫細胞因子形式具有降低的毒性。
一方面，本發明涉及用於刺激IL-15Rβ/γ陽性細胞的活化和/或增殖的免疫細胞因子，其包含IL-15/IL-15Rα異二聚體蛋白複合物，所述異二聚體蛋白複合物包含： 1) IL-15Rα，其連接於 a) 抗體輕鏈恆定結構域，或 b) 包含第一(CH1)重鏈恆定結構域和Fc片段單體(包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域)的抗體重鏈恆定結構域； 2) IL-15，其連接於 a) 包含第一(CH1)重鏈恆定結構域和Fc片段單體(包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域)的抗體重鏈恆定結構域，或 b) 抗體輕鏈恆定結構域； 其中異二聚體複合物內的第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域有或沒有通過天然S-S橋的共價結合，和 其中，如果IL-15或IL-15Rα連接於抗體輕鏈恆定結構域，則異二聚體蛋白複合物的選自IL-15Rα或IL-15的另一部分連接於抗體重鏈恆定結構域。 在一些實施方案中，免疫細胞因子在異二聚體複合物內包含第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域，其具有通過天然S-S橋的共價結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子在異二聚體複合物內包含第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域，其沒有通過天然S-S橋的共價結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含選自CK或CL的抗體輕鏈恆定結構域。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含具有由SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列的IL-15Rα或具有相似生物活性的任何已知突變IL-15Rα變體。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含具有由SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列的IL-15或具有相似生物活性的任何已知突變IL-15變體。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15Rα。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15Rα，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含經鉸鏈連接的第一(CH1)重鏈恆定結構域和包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域的Fc片段單體。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於按以下順序排列的抗體重鏈恆定結構域的IL-15或IL-15Rα：CH1-鉸鏈-CH2-CH3。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15Rα。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15Rα，所述抗體重鏈恆定結構域具有由SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體重鏈恆定結構域具有由SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： 連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15Rα，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列，和 連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體重鏈恆定結構域具有由SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： 連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15Rα，所述抗體重鏈恆定結構域具有由SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列，和 連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子在Fc片段單體中包含突變，其引起所述免疫細胞因子中ADCC、CDC和/或ADCP特性的缺乏。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含屬於IgG的Fc片段。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含選自以下的Fc片段：人類IgG1、IgG2或IgG4。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含上述兩種IL-15/IL-15Rα異二聚體蛋白複合物。 在一些實施方案中，免疫細胞因子用作用於治療癌症或自身免疫性疾病的治療劑。 在一些實施方案中，免疫細胞因子用作用於治療癌症的治療劑。 一方面，本發明涉及用於刺激IL-15Rβ/γ陽性細胞的活化和/或增殖的免疫細胞因子，其包含基於IL-15/IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物和特異性地抑制PD-1途徑的免疫調節抗體或其抗原結合片段， 其中IL-15/IL-15Rα異二聚體蛋白複合物包含： 1) IL-15Rα，其連接於 a) 抗體輕鏈恆定結構域，或 b) 包含第一(CH1)重鏈恆定結構域和Fc片段單體(包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域)的抗體重鏈恆定結構域； 2) IL-15，其連接於 a) 包含第一(CH1)重鏈恆定結構域和Fc片段單體(包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域)的抗體重鏈恆定結構域，或 b) 抗體輕鏈恆定結構域； 其中異二聚體複合物內的第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域有或沒有通過天然S-S橋的共價結合，和 其中，如果IL-15或IL-15Rα連接於抗體輕鏈恆定結構域，則異二聚體蛋白複合物的選自IL-15Rα或IL-15的另一部分連接於抗體重鏈恆定結構域。 在一些實施方案中，免疫細胞因子在異二聚體複合物內包含第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域，其具有通過天然S-S橋的共價結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子在異二聚體複合物內包含第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域，其沒有通過天然S-S橋的共價結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含選自CK或CL的抗體輕鏈恆定結構域。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含具有由SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列的IL-15Rα或具有相似生物活性的任何已知突變IL-15Rα變體。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含具有由SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列的IL-15或具有相似生物活性的任何已知突變IL-15變體。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15Rα。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15Rα，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含經鉸鏈連接的第一(CH1)重鏈恆定結構域和包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域的Fc片段單體。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於按以下順序排列的抗體重鏈恆定結構域的IL-15或IL-15Rα：CH1-鉸鏈-CH2-CH3。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15Rα。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15Rα，所述抗體重鏈恆定結構域具有由SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體重鏈恆定結構域具有由SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:23表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含免疫調節抗體或其抗原結合片段，其特異性地抑制PD-1途徑，並且為特異性地結合於PD-1的抗體。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含免疫調節抗體，其包含： a) 輕鏈，其包含輕鏈可變結構域和輕鏈恆定結構域； b) 重鏈，其包含重鏈可變結構域和包含第一(CH1)重鏈恆定結構域以及Fc片段單體(包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域)的抗體重鏈恆定結構域。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含分別由SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16的氨基酸序列表示的LCDR 1、2和3 (高變區1、2和3)。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含由SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含分別由SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13的氨基酸序列表示的HCDR 1、2和3 (高變區1、2和3)。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含由SEQ ID NO:17表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： 1) 輕鏈可變結構域，其包含分別由SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16的氨基酸序列表示的LCDR 1、2和3 (高變區1、2和3)。 2) 重鏈可變結構域，其包含分別由SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13的氨基酸序列表示的HCDR 1、2和3 (高變區1、2和3)。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： 1) 包含由SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的輕鏈可變結構域。 2) 包含由SEQ ID NO:17表示的氨基酸序列的重鏈可變結構域。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含免疫調節抗體，所述免疫調節抗體包含含有由SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列的輕鏈。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含免疫調節抗體，所述免疫調節抗體包含含有由SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列的重鏈。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含含有以下的免疫調節抗體： 包含由SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列的重鏈； 包含由SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列的輕鏈。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含免疫調節抗體或其抗原結合片段，其特異性地抑制PD-1途徑，其為特異性地結合於PD-L1的抗體。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： a) 基於IL-15/IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物，其包含： 連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15Rα，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列，和 連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體重鏈恆定結構域具有由SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:23表示的氨基酸序列； b) 以下的免疫調節抗體，其包含： 包含由SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列的重鏈； 包含由SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列的輕鏈。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： a) 連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15Rα，其具有由SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列，和 連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15，其具有由SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列； b) 包含以下的免疫調節抗體： 包含由SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列的重鏈； 包含由SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列的輕鏈。 在一些實施方案中，免疫細胞因子在抗體恆定結構域中具有突變，所述突變誘導兩個不同部分的異二聚化，其中之一包含連接於抗體恆定結構域的共價或非共價結合的IL-15Rα和連接於抗體恆定結構域的IL-15，和另一部分包含抗體的共價或非共價結合的輕鏈和重鏈。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： 選自以下的第一Fc單體和第二Fc單體：第一Fc單體為鈕(Knob)修飾的Fc和第二Fc單體為孔(Hole)修飾的Fc，或者當第二Fc單體為鈕修飾的Fc和第一Fc單體為孔修飾的Fc。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含具有氨基酸取代S354C/T366W的第一Fc單體和具有氨基酸取代Y349C/T366S/L368A/Y407V的第二Fc單體。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含具有氨基酸取代Y349C/T366S/L368A/Y407的第一Fc單體和具有氨基酸取代S354C/T366W的第二Fc單體。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含屬於IgG的Fc片段。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含Fc片段，其中Fc片段同種型選自：人類IgG1、IgG2或IgG4。 在一些實施方案中，免疫細胞因子在Fc片段單體中包含突變，其引起所述免疫細胞因子中ADCC、CDC和/或ADCP特性的缺乏。 在一些實施方案中，免疫細胞因子用於治療腫瘤性或自身免疫性疾病。 在一些實施方案中，免疫細胞因子用於治療腫瘤性疾病。 一方面，本發明涉及編碼任何上述免疫細胞因子的分離的核酸。 在一些實施方案中，核酸為DNA。 一方面，本發明涉及包含上述核酸的表現載體。 一方面，本發明涉及用於產生宿主細胞以用於產生上述免疫細胞因子的方法，其包括用上述載體轉化細胞。 一方面，本發明涉及包含上述核酸的用於產生上述免疫細胞因子的宿主細胞。 一方面，本發明涉及用於產生包含上述免疫細胞因子的藥物的方法，其包括在足以產生所述免疫細胞因子的條件下，在培養基中培養上述宿主細胞，如果需要的話，隨後分離和純化所得免疫細胞因子。 一方面，本發明涉及用於刺激IL-15Rβ/γ陽性細胞的活化和/或增殖的藥用組合物，其包含治療有效量的上述免疫細胞因子與一種或多種藥學上可接受的賦形劑的組合。 在一些實施方案中，藥用組合物用於治療腫瘤性或自身免疫性疾病。 在一些實施方案中，藥用組合物用於治療腫瘤性疾病。 在一些實施方案中，藥用組合物用於治療選自以下的腫瘤性疾病：HNSCC (頭頸部鱗狀細胞癌)、子宮頸癌、原發性不明癌(cancer of unknown primary)、膠質母細胞瘤、食道癌、膀胱癌、TNBC (三陰性乳腺癌)、CRC (結直腸癌)、肝細胞癌、黑色素瘤、NSCLC (非小細胞肺癌)、腎癌、卵巢癌、MSI CRC (具有微衛星不穩定性的結直腸癌)、白血病(急性白血病或成髓細胞性白血病(myeloblastic leukemia))、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、黑色素瘤、乳腺癌、結直腸癌、前列腺癌、膀胱癌、肉瘤、肝細胞癌、膠質母細胞瘤、霍奇金淋巴瘤、T和B細胞型急性淋巴細胞白血病(T- and B-cell acute lymphoblastic leukemia)、小細胞肺癌、急性成髓細胞性白血病(acute myeloblastic leukemia)、難治性非霍奇金B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤(follicular lymphoma)、邊緣區B細胞淋巴瘤(marginal zone B-cell lymphoma)、彌漫性大B細胞淋巴瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、胰腺癌、卵巢癌、急性成髓細胞性白血病(acute myeloblastic leukemia)和高危骨髓增生異常症候群(higher-risk myelodysplastic syndrome)。 一方面，本發明涉及一種用於治療腫瘤性疾病的方法，其包括以治療有效量給予需要這種治療的受試者所述免疫細胞因子或所述藥用組合物。 在治療方法的一些實施方案中，腫瘤性疾病選自：HNSCC (頭頸部鱗狀細胞癌)、子宮頸癌、原發性不明癌、膠質母細胞瘤、食道癌、膀胱癌、TNBC (三陰性乳腺癌)、CRC (結直腸癌)、肝細胞癌、黑色素瘤、NSCLC (非小細胞肺癌)、腎癌、卵巢癌、MSI CRC (具有微衛星不穩定性的結直腸癌)、白血病(急性白血病或成髓細胞性白血病)、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、黑色素瘤、乳腺癌、結直腸癌、前列腺癌、膀胱癌、肉瘤、肝細胞癌、膠質母細胞瘤、霍奇金淋巴瘤、T和B細胞型急性淋巴細胞白血病、小細胞肺癌、急性成髓細胞性白血病、難治性非霍奇金B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、邊緣區B細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、胰腺癌、卵巢癌、急性成髓細胞性白血病和高危骨髓增生異常症候群。 一方面，本發明涉及用於在需要活化的受試者中活化T細胞群或NK細胞群的生物活性的方法，其包括給予受試者有效量的上述免疫細胞因子或上述藥用組合物。 一方面，本發明涉及所述免疫細胞因子或所述藥用組合物用於在需要這種腫瘤性疾病治療的受試者中進行治療的用途。 在某些用途中，腫瘤性疾病選自：HNSCC (頭頸部鱗狀細胞癌)、子宮頸癌、原發性不明癌、膠質母細胞瘤、食道癌、膀胱癌、TNBC (三陰性乳腺癌)、CRC (結直腸癌)、肝細胞癌、黑色素瘤、NSCLC (非小細胞肺癌)、腎癌、卵巢癌、MSI CRC (具有微衛星不穩定性的結直腸癌)、白血病(急性白血病或成髓細胞性白血病)、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、黑色素瘤、乳腺癌、結直腸癌、前列腺癌、膀胱癌、肉瘤、肝細胞癌、膠質母細胞瘤、霍奇金淋巴瘤、T和B細胞型急性淋巴細胞白血病、小細胞肺癌、急性成髓細胞性白血病、難治性非霍奇金B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、邊緣區B細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、胰腺癌、卵巢癌、急性成髓細胞性白血病和高危骨髓增生異常症候群。
一般定義和一般方法 除非另外定義，否則本文中使用的所有技術和科學術語具有與本領域普通技術人員通常理解的相同含義。 進一步地，除非上下文另外要求，否則單數術語應包括複數，和複數術語應包括單數。一般地，本文所述的細胞培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學、分析化學、有機合成化學、醫藥和藥物化學以及蛋白質和核酸的雜交和化學的分類和方法為眾所周知的，並且由本領域技術人員廣泛使用。酶反應和純化方法根據製造商的指南進行，如本領域中常見的或如本文所述。 除非另外說明，否則關於本發明的多肽的術語“生物活性的(biologically active)”和“生物活性(biological activity)”和“生物特性(biological characteristics)”意指具有結合於生物分子的能力。 術語“重組蛋白”意指在包含編碼所述蛋白的核苷酸序列的細胞或細胞系中表現的蛋白(多肽)，其中所述核苷酸序列與細胞不是天然相關的。 術語“雙特異性抗體”是指具有能夠與單個生物分子上的兩個不同表位特異性結合或者能夠與兩個不同生物分子上的表位特異性結合的抗原結合結構域的抗體。雙特異性抗體本文中也稱為具有“雙重特異性”或稱為“雙重特異性”抗體。 術語“單克隆抗體”或“mAb”是指由單獨的克隆細胞群合成和分離的抗體。克隆群可為永生化細胞的克隆群。在一些實施方案中，克隆群中的永生化細胞為雜交細胞-雜交瘤-一般地通過將來自免疫動物的單個B淋巴細胞與來自淋巴細胞性腫瘤的單個細胞融合而產生。雜交瘤為構建的細胞類型，並且在自然界中不存在。 本文使用的術語“Ka”是指特定抗體-抗原相互作用的締合(on)速率。 本文使用的術語“Kd”是指特定抗體-抗原相互作用的解離(off)速率。 “結合親和力”通常是指分子(例如抗體)的單個結合位點與其結合伴侶(例如抗原)之間的非共價相互作用的總和的強度。除非另外說明，否則“結合親和力”是指內在的(特徵性的，真實的)結合親和力，其反映結合對的成員(例如抗體和抗原)之間的1:1相互作用。分子X對其結合伴侶Y的親和力通常可用解離常數(Kd)表示。優選的Kd值為約200 nM、150 nM、100 nM、60 nM、50 nM、40 nM、30 nM、20 nM、10 nM、8 nM、6 nM、4 nM、2 nM、1 nM或更小。親和力可通過本領域已知的常用方法來測量，包括本文所述的那些。測量結合親和力的多種方法為本領域已知的，其任何一種均可用於本發明的目的。 本文使用的術語“肽接頭”旨在意指具有結合結構域的能力的任何肽，其長度取決於其彼此結合的結構域，並且包含任何氨基酸序列。優選地，肽接頭具有大於5個氨基酸的長度，並且由選自G、A、S、P、E、T、D、K的任何氨基酸組組成。 術語“體外”是指在人工條件下的體外生物實體、生物過程或生物反應。例如，體外生長的細胞應理解為體外環境，例如試管、培養小瓶或微量滴定板中生長的細胞。 本文使用的詞語“包含(comprise)”、“具有(have)”、“包括(include)”或變體比如“包含(comprises)”、“包含(comprising)”、“具有(has)”、“具有(having)”、“包括(includes)”或“包括(including)”及其所有語法變體應理解為意指包含所述整數或整數組，但不排除任何其他整數或整數組。 發明詳述 免疫細胞因子 一方面，本發明涉及用於刺激IL-15Rβ/γ陽性細胞的活化和/或增殖的免疫細胞因子，其包含基於IL-15/IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物，所述異二聚體蛋白複合物包含： 1) IL-15Rα，其連接於 a) 抗體輕鏈恆定結構域，或 b) 包含第一(CH1)重鏈恆定結構域和Fc片段單體(包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域)的抗體重鏈恆定結構域； 2) IL-15，其連接於 a) 包含第一(CH1)重鏈恆定結構域和Fc片段單體(包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域)的抗體重鏈恆定結構域，或 b) 抗體輕鏈恆定結構域； 其中異二聚體複合物內的第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域有或沒有通過天然S-S橋的共價結合，和 其中，如果IL-15或IL-15Rα連接於抗體輕鏈恆定結構域，則異二聚體蛋白複合物的選自IL-15Rα或IL-15的另一部分連接於抗體重鏈恆定結構域。 上述免疫細胞因子的形式如圖1和2所示。 術語“免疫細胞因子”意指包含通過共價鍵直接或間接連接於細胞因子或其衍生物的抗體或其片段的分子。所述抗體和所述細胞因子可通過接頭肽連接。 本發明的免疫細胞因子考慮是指分離的免疫細胞因子。 用於描述本說明書的各種免疫細胞因子的術語“分離的”意指已經從其中表現免疫細胞因子的細胞或細胞培養物中鑒定並分離和/或再生的免疫細胞因子。來自其自然環境的雜質(污染物成分)為會干擾多肽的診斷或治療用途的物質，並且可包括酶、激素和其他蛋白或非蛋白溶質。在優選的實施方案中，將免疫細胞因子純化(1)至足以通過使用旋杯式測序儀(Edman測序儀)獲得N-末端或內部氨基酸序列的至少15個殘基，或(2)通過在非還原或還原條件下使用考馬斯亮藍，或優選地使用銀染色的SDS-PAGE獲得均質性的程度。分離的免疫細胞因子包括重組細胞內原位的免疫細胞因子，因為多肽的自然環境的至少一種成分將不存在。分離的多肽一般地通過至少一個純化步驟來製備。 本文使用的“異二聚體蛋白複合物”是指從IL-15和IL-15Rα的組合形成的蛋白。 本文使用的“IL-15”或“IL-15肽"或“介白素-15"可為任何IL-15 (介白素-15)或其突變體，比如人類或非人類哺乳動物IL-15或非哺乳動物IL-15。示例性的非人類哺乳動物包括哺乳動物比如豬、兔、猴、黑猩猩、小鼠等；和非哺乳動物包括雞等。優選地，人類介白素-15成熟分子存在於資料庫UniProtKB中，登錄號為P40933、49-162aa。術語“IL-15變體”是指由於一種或多種氨基酸取代、添加或缺失，導致對其受體的親和力增加或減少，或在刺激T細胞或NK細胞方面活性增加或減少的變體分子。 “IL-15Rα”意指介白素15受體次單元α，並且根據本發明可為任何IL-15Rα化合物或其功能片段，比如人類IL-15Rα或非人類哺乳動物IL-15Rα或非哺乳動物IL-15Rα。示例性的非人類哺乳動物包括哺乳動物比如豬、兔、猴、黑猩猩、小鼠等；和非哺乳動物包括雞等。優選的IL-15Rα分子存在於資料庫UniProtKB中，登錄號為Q13261 (https://www.uniprot.org/uniprot/Q13261)。 免疫球蛋白的可結晶片段區域(“Fc區，Fc”)為與細胞表面Fc受體以及補體系統的某些蛋白相互作用的免疫球蛋白分子的“尾部”區域。該特性使得抗體能夠啟動免疫系統。在IgG、IgA和IgD同種型中，Fc區分別由來自兩條重鏈的第二和第三恆定結構域的兩個相同的蛋白片段組成；在IgM和IgE同種型中，Fc區在每條多肽鏈中含有3個重鏈恆定結構域(CH2、CH3和CH4結構域)。 “Fc片段單體”應理解為意指來自兩條重鏈之一的第二和第三恆定結構域的Fc區(對於IgG、IgA和IgD同種型)；對於IgM和IgE同種型，Fc單體包含兩條重鏈之一的3個恆定結構域(CH2、CH3和CH4結構域)。 在一些實施方案中，免疫細胞因子在異二聚體複合物內包含第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域，其具有通過天然S-S橋的共價結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子在異二聚體複合物內包含第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域，其沒有通過天然S-S橋的共價結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含選自CK或CL的抗體輕鏈恆定結構域。 在哺乳動物中，已知僅有兩種類型的輕鏈，由λ和κ表示。λ輕鏈的恆定結構域稱為CL，和κ輕鏈的恆定結構域稱為CK。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASS (SEQ ID NO:9)表示的氨基酸序列的IL-15Rα，或具有相似生物活性的含有突變的任何已知IL-15Rα變體。 突變IL-15Rα (具有相似生物活性的IL-15Rα)應理解為是指包含突變且與“野生型”IL-15Rα相比較具有相似生物活性的本領域已知的任何IL-15Rα。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (SEQ ID NO:10) 表示的氨基酸序列的IL-15，或具有相似生物活性的含有突變的任何已知IL-15變體。 突變IL-15 (具有相似生物活性的IL-15)意指包含突變且與“野生型”IL-15相比較具有相似生物活性的本領域已知的任何IL-15。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15Rα。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15Rα，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:1)表示的氨基酸序列的。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15Rα，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEA (SEQ ID NO:19)表示的氨基酸序列。 由SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列為由SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列通過將216位的半胱氨酸(C)經單個氨基酸取代為丙氨酸(A)而進行修飾。這種取代使得能夠產生免疫細胞因子，所述免疫細胞因子在異二聚體複合物內包含第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域，其沒有通過天然S-S橋的共價結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:3)表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEA (SEQ ID NO:21) 表示的氨基酸序列。 由SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列為由SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列通過將233位的半胱氨酸(C)經單個氨基酸取代為丙氨酸(A)而進行修飾。這種取代使得能夠產生免疫細胞因子，所述免疫細胞因子在異二聚體複合物內包含第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域，其沒有通過天然S-S橋的共價結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含經鉸鏈連接的第一(CH1)重鏈恆定結構域和包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域的Fc片段單體。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於按以下順序排列的抗體重鏈恆定結構域的IL-15或IL-15Rα：CH1-鉸鏈-CH2-CH3。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15Rα。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15α，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:4)表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15α，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSADKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:22)表示的氨基酸序列。 由SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列為由SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列通過將212位的半胱氨酸(C)經單個氨基酸取代為丙氨酸(A)而進行修飾。這種取代使得能夠產生免疫細胞因子，所述免疫細胞因子在異二聚體複合物內包含第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域，其沒有通過天然S-S橋的共價結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:2)表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSADKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:20)表示的氨基酸序列。 由SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列為由SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列通過將229位的半胱氨酸(C)經單個氨基酸取代為丙氨酸(A)而進行修飾。這種取代使得能夠產生免疫細胞因子，所述免疫細胞因子在異二聚體複合物內包含第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域，其沒有通過天然S-S橋的共價結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： 連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15α，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:1)或DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEA (SEQ ID NO:19)表示的氨基酸序列，和 連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:2)或DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSADKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:20)表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： 連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15α，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:1)表示的氨基酸序列，和 連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:2)表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： 連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15α，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEA (SEQ ID NO:19)表示的氨基酸序列，和 連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSADKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:20)表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： 連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15α，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:4)或DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSADKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:22)表示的氨基酸序列，和 連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:3)或DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEA (SEQ ID NO:21)表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： 連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15α，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:4)表示的氨基酸序列，和 連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:3)表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： 連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15α，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSADKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:22)表示的氨基酸序列，和 連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEA (SEQ ID NO:21)表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子在Fc片段單體中包含突變，其引起所述免疫細胞因子中ADCC、CDC和/或ADCP特性的缺乏。 Fc片段中的突變應理解為意指本文所述抗體的氨基酸序列的修飾。通過將適當的核苷酸變化引入到抗體核酸中或通過肽合成來產生抗體的氨基酸序列的變體。這種修飾包括例如抗體的氨基酸序列內殘基的缺失和/或插入和/或取代。只要最終構建體具有期望的特性，就可進行缺失、插入和取代的任何組合以獲得最終構建體。 使用氨基酸取代修飾抗體的氨基酸序列的變體為抗體分子中的至少一個氨基酸殘基用另一殘基取代。 保守性取代顯示在表A中的“優選取代”下。 術語抗體的“效應子功能”是指可歸因於抗體的Fc區(天然Fc區序列或Fc區氨基酸變體)的生物活性，其隨抗體同種型而變化。抗體效應子功能的實例包括：Clq 結合和補體依賴性細胞毒性；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體，BCR)的下調和B細胞活化。 “抗體依賴性細胞的細胞毒性”或“ADCC”是指細胞介導的反應，其中表現Fc受體(FcR)的非特異性細胞毒性細胞(例如自然殺傷(NK)細胞、嗜中性粒細胞和巨噬細胞)識別靶細胞上結合的抗體，並隨後引起靶細胞的溶解或吞噬作用。用於介導ADCC的主要細胞NK細胞僅表現FcγRJII，而單核細胞表現FcγRI、FcγRII和FcγRIII。造血細胞上的FcR表現概述於Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9: 457-92 (1991)的第464頁表3中。為了評價目標分子的ADCC活性，可進行體外ADCC測定，比如美國專利第5500362或5821337號中描述的測定。用於這種測定的有用的效應細胞包括外周血單核細胞(PBMC)和自然殺傷(NK)細胞。或者或另外地，可例如在動物模型中，比如在Clynes et al. PNAS (USA) 95: 652-656 (1998)中公開的模型，體內評價目標分子的ADCC活性。 “人類效應細胞”為表現一種或多種FcR並執行效應子功能的白血球。優選地，細胞至少表現FcγRIII並執行ADCC效應子功能。介導ADCC的人類白血球的實例包括外周血單核細胞(PBMC)、自然殺傷(NK)細胞、單核細胞、細胞毒性T細胞和嗜中性粒細胞，其中PBMC和NK細胞為優選的。效應細胞可從其天然來源例如從血液或PBMC中分離，如本公開中所述。 “補體依賴性細胞毒性”和“CDC”是指分子在存在補體的情況下裂解靶標的能力。補體啟動途徑為通過補體系統的第一成分(C1q)結合於與同源抗原複合的分子(例如抗體)而啟動。為了評價補體啟動，可進行CDC測定，例如如Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996)中所述。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含屬於IgG的Fc片段。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含選自以下的Fc片段：人類IgG1、IgG2或IgG4。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含基於IL-15/IL-15Rα的上述兩種異二聚體蛋白複合物。 本發明的IL15超級激動劑(也稱為BCD225或IL15SA或(IL15SA)2-Fc)應理解為是指CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA和CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcLALA。 在整個申請的文本中給出名稱CK，IL15Ra、IL15、CH1FcLALA的含義。 CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA為包含基於IL-15/IL-15Rα的兩個異二聚體蛋白複合物的上述免疫細胞因子，其包含連接於抗體輕鏈恆定結構域CK的IL15Ra和連接於包含第一(CH1)重鏈恆定結構域和Fc片段單體(包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域)的抗體重鏈恆定結構域的IL15，其中Fc包含LALA突變。 CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcLALA為包含基於IL-15/IL-15Rα的兩個異二聚體蛋白複合物的上述免疫細胞因子，其包含連接於抗體輕鏈恆定結構域CK的IL15和連接於包含第一(CH1)重鏈恆定結構域和Fc片段單體(包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域)的抗體重鏈恆定結構域的IL15a，其中Fc包含LALA突變。 上述免疫細胞因子既可以其中異二聚體複合物內的第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域具有通過天然S-S橋共價結合的形式，也可以其中異二聚體複合物內的第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域沒有通過天然S-S橋的共價結合的形式製備；為此，在特定情況下，兩個半胱氨酸均被丙氨酸替代。 上述免疫細胞因子(既可以其中異二聚體複合物內的第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域具有通過天然S-S橋共價結合的形式，也可以其中異二聚體複合物內的第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域沒有通過天然S-S橋的共價結合的形式製備)的實驗研究顯示上述免疫細胞因子的活性沒有顯著差異。 上述免疫細胞因子的形式如圖1和2所示。 在一些實施方案中，免疫細胞因子用作用於治療癌症或自身免疫性疾病的治療劑。 在一些實施方案中，免疫細胞因子用作用於治療癌症的治療劑。 一方面，本發明涉及用於刺激IL-15Rβ/γ陽性細胞的活化和/或增殖的免疫細胞因子，其包含基於IL-15/IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物和特異性地抑制PD-1途徑的免疫調節抗體或其抗原結合片段， 其中基於IL-15/IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物包含： 1) IL-15Rα，其連接於 a) 抗體輕鏈恆定結構域，或 b) 包含第一(CH1)重鏈恆定結構域和Fc片段單體(包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域)的抗體重鏈恆定結構域； 2) IL-15，其連接於 a) 包含第一(CH1)重鏈恆定結構域和Fc片段單體(包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域)的抗體重鏈恆定結構域，或 b) 抗體輕鏈恆定結構域； 其中異二聚體複合物內的第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域有或沒有通過天然S-S橋的共價結合，和 其中，如果IL-15或IL-15Rα連接於抗體輕鏈恆定結構域，則異二聚體蛋白複合物的選自IL-15Rα或IL-15的另一部分連接於抗體重鏈恆定結構域。 本文使用的術語“抗體”或“免疫球蛋白”(Ig)包括完整抗體及其任何抗原結合片段(即“抗原結合部分”)或單鏈。術語“抗體”是指包含通過二硫鍵相互連接的至少兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈的糖蛋白或其抗原結合部分。每條重鏈包含重鏈可變區(本文中簡稱為VH)和重鏈恆定區。已知有5種類型的哺乳動物Ig重鏈，用希臘字母表示為α、δ、ε、γ和μ。存在的重鏈的類型定義抗體的類別；這些鏈分別在IgA、IgD、IgE、IgG和IgM抗體中發現。不同的重鏈在大小和組成上不同；α和γ含有約450個氨基酸，而μ和ε具有約550個氨基酸。每條重鏈具有兩個區，即恆定區和可變區。恆定區在相同同種型的所有抗體中均相同，但在不同同種型的抗體中不同。重鏈γ、α和δ具有由3個恆定結構域CH1、СН2和CH3 (排成一條線)和用於增加柔性的鉸鏈區組成的恆定區(Woof J., Burton D., Nat Rev Immunol 4, 2004, cc.89-99)；重鏈μ和ε具有由4個恆定結構域CH1、СН2、CH3和CH4組成的恆定區。在哺乳動物中，已知僅有兩種類型的輕鏈，由λ和κ表示。每條輕鏈由輕鏈可變區(本文中簡稱為VL)和輕鏈恆定區組成。輕鏈的大約長度為211-217個氨基酸。優選地，輕鏈為κ輕鏈，和恆定結構域CL優選地為Cκ。 本發明的“抗體”可屬於任何類別(例如IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，優選地為IgG)或亞類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2，優選地為IgG1)。 VL和VH區可進一步細分為稱為互補決定區(CDR)的高變區，散佈在更保守的稱為框架區(FR)的區域之間。每條VH和VL由從氨基末端到羧基末端按以下順序排列的3個CDR和4個FR組成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈和輕鏈的可變區含有與抗原相互作用的結合結構域。抗體的恆定區可介導免疫球蛋白與宿主組織或因子的結合，所述宿主組織或因子包括免疫系統的各種細胞(例如效應細胞)和經典補體系統的第一成分(C1q)。 本文使用的術語抗體的“抗原結合部分”或“抗原結合片段”(或簡稱為“抗體部分”或“抗體片段”)是指保留特異性地結合於抗原的能力的抗體的一個或多個片段。已經顯示抗體的抗原結合功能可通過全長抗體的片段來執行。包括在術語抗體的“抗原結合部分”內的結合片段的實例包括：(i) 由VL、VH、CL和CH1結構域組成的Fab片段單價片段；(ii) F(ab’)2片段，一種包含在鉸鏈區通過二硫鍵連接的兩個Fab片段的二價片段；(iii) 由VH和CH1結構域組成的Fd片段；(iv) 由抗體單臂的VL和VH結構域組成的Fv片段；(v) 由VH/VHH結構域組成的dAb片段(Ward et al., (1989) Nature 341:544-546)；和(vi) 提取的互補決定區(CDR)。另外，Fv片段的兩個區域(VL和VH)由單獨的基因編碼，其可使用合成接頭採用重組方法連接，使其能夠接收單個蛋白質鏈，其中VL和VH區配對形成單價分子(稱為單鏈Fv (scFv)；參見例如Bird et al. (1988) Science 242: 423-426; 和Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883)。認為這種單鏈分子也包括在術語抗體的“抗原結合部分”內。使用本領域技術人員已知的常規技術獲得這些抗體片段，並以與完整抗體相同的方式篩選片段。 優選地，本發明抗體的抗原結合部分或整個抗原結合部分的CDR源自小鼠、羊駝或人類供體文庫或者基本上屬於人類來源，其中某些氨基酸殘基被改變，例如用不同的氨基酸殘基取代以優化抗體的特定特性，例如KD、koff、IC50、EC50、ED50。優選地，本發明抗體的框架區屬於人類來源或基本上屬於人類來源(至少80、85、90、95、96、97、98或99%的人類來源)。 在其他實施方案中，本發明抗體的抗原結合部分可源自其他非人類物種，包括小鼠、羊駝、兔、大鼠或倉鼠，但不限於此。或者，抗原結合區可源自人類物種。 術語“可變的”是指可變結構域的某些部分的序列在抗體中差異很大的事實。V結構域介導抗原結合並決定每種特定抗體對其特定抗原的特異性。然而，可變性並非在可變結構域的110個氨基酸跨度上均勻分佈。反而，V區由稱為15-30個氨基酸的框架區(FR)的不變片段組成，這些片段被稱為“高變區”或CDR的極度可變的較短區域隔開。天然重鏈和輕鏈的可變結構域各自包含4個FR，其主要採取β-折疊構型，通過3個高變區連接，形成環形，連接並在某些情況下形成β-折疊結構的一部分。每條鏈中的高變區通過FR緊密保持在一起，並且與另一條鏈的高變區一起，有助於形成抗體的抗原結合位點。恆定結構域不直接參與抗體與抗原的結合，而是表現出各種效應子功能，比如抗體參與抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC)。 本說明書中使用的術語“高變區”是指負責抗原結合的抗體的氨基酸殘基。高變區通常包含來自“互補決定區”或“CDR”的氨基酸殘基和/或來自“高變環”的那些殘基。 在某些情況下，可能還期望改變一個或多個CDR氨基酸殘基，以改善與靶表位的結合親和力。這稱為“親和力成熟”，並且可任選地結合人源化進行，例如在其中抗體的人源化導致結合特異性或親和力降低並且不能僅通過回復突變充分改善結合特異性或親和力的情況下。各種親和力成熟方法為本領域已知的，例如由Burks et al., Proc Natl Acad Sci USA, 94:412–417 (1997)描述的體外掃描飽和誘變方法以及Wu et al., Proc Natl Acad Sci USA 95:6037 6042 (1998)的逐步體外親和力成熟方法。 “框架區”(FR)為除CDR殘基以外的那些可變結構域殘基。每個可變結構域一般地具有4個FR，標識為FR1、FR2、FR3和FR4。如果根據Kabat定義CDR，則輕鏈FR殘基大約位於殘基1-23 (LCFR1)、35-49 (LCFR2)、57-88 (LCFR3)和98-107 (LCFR4)處，和重鏈FR殘基大約位於重鏈中的殘基1-30 (HCFR1)、36-49 (HCFR2)、66-94 (HCFR3)和103-113 (HCFR4)處。如果CDR包含來自高變環的氨基酸殘基，則輕鏈FR殘基大約位於輕鏈中的殘基1-25 (LCFR1)、33-49 (LCFR2)、53-90 (LCFR3)和97-107 (LCFR4)處，和重鏈FR殘基大約位於重鏈殘基中的殘基1-25 (HCFR1)、33-52 (HCFR2)、56-95 (HCFR3)和102-113 (HCFR4)處。在某些情況下，當CDR包含來自如Kabat定義的CDR和高變環的CDR兩者的氨基酸時，FR殘基將相應地調整。例如，當CDRH1包括氨基酸H26-H35時，重鏈FR1殘基在1-25位處和FR2殘基在36-49位處。 “結合”靶抗原的本發明抗體是指能夠以足夠的親和力結合抗原，使得抗體可用作靶向表現所述抗原的蛋白或細胞或組織的診斷劑和/或治療劑，並與其他蛋白發生輕微交叉反應的抗體。根據分析方法：螢光活化細胞分選(FACS)、放射免疫測定(RIA)或ELISA，在這種實施方案中，抗體與非靶蛋白結合的程度小於抗體與特異性靶蛋白結合的10%。關於抗體與靶分子的結合，術語“特異性結合”或“特異性地結合於”或對特定多肽或特定多肽靶標上的表位“具有特異性”意指與非特異性相互作用明顯不同的結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子在異二聚體複合物內包含第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域，其具有通過天然S-S橋的共價結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子在異二聚體複合物內包含第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域，其沒有通過天然S-S橋的共價結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含選自CK或CL的抗體輕鏈恆定結構域。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASS (SEQ ID NO:9)表示的氨基酸序列的IL-15Rα，或具有相似生物活性的含有突變的任何已知IL-15Rα變體。 突變IL-15Rα (具有相似生物活性的IL-15Rα)應理解為是指包含突變且與“野生型”IL-15Rα相比較具有相似生物活性的本領域已知的任何IL-15Rα。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (SEQ ID NO:10) 表示的氨基酸序列的IL-15，或具有相似生物活性的含有突變的任何已知IL-15變體。 突變IL-15 (具有相似生物活性的IL-15)意指包含突變且與“野生型”IL-15相比較具有相似生物活性的本領域已知的任何IL-15。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15Rα。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15Rα，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:1)表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15Rα，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEA (SEQ ID NO:19)表示的氨基酸序列。 由SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列為由SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列通過將216位的半胱氨酸(C)經單個氨基酸取代為丙氨酸(A)而進行修飾。這種取代使得能夠產生免疫細胞因子，其在異二聚體複合物內包含第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域，其沒有通過天然S-S橋的共價結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:3)表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEA (SEQ ID NO:21) 表示的氨基酸序列。 由SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列為由SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列通過將233位的半胱氨酸(C)經單個氨基酸取代為丙氨酸(A)而進行修飾。這種取代使得能夠產生免疫細胞因子，所述免疫細胞因子在異二聚體複合物內包含第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域，其沒有通過天然S-S橋的共價結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含經鉸鏈連接的第一(CH1)重鏈恆定結構域和包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域的Fc片段單體。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於按以下順序排列的抗體重鏈恆定結構域的IL-15或IL-15Rα：CH1-鉸鏈-CH2-CH3。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15Rα。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15α，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPСRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:6)表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15α，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSADKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPСRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:24)表示的氨基酸序列。 由SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列為由SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列通過將212位的半胱氨酸(C)經單個氨基酸取代為丙氨酸(A)而進行修飾。這種取代使得能夠產生免疫細胞因子，所述免疫細胞因子在異二聚體複合物內包含第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域，其沒有通過天然S-S橋的共價結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPСRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:5)表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSADKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPСRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:23)表示的氨基酸序列。 由SEQ ID NO:23表示的氨基酸序列為由SEQ ID NO:5表示的氨基酸序列通過將229位的半胱氨酸(C)經單個氨基酸取代為丙氨酸(A)而進行修飾。這種取代使得能夠產生免疫細胞因子，所述免疫細胞因子在異二聚體複合物內包含第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域，其沒有通過天然S-S橋的共價結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含免疫調節抗體或其抗原結合片段，其特異性地抑制PD-1途徑，並且為特異性地結合於PD-1的抗體。 特異性結合可例如通過測定與對照分子的結合相比較的分子的結合來測量。例如，特異性結合可通過與類似於靶標的對照分子(例如過量的非標記靶標)競爭來測定。在這種情況下，如果標記的靶標與探針的結合被過量的未標記靶標競爭性地抑制，則表明特異性結合。如本說明書中使用的術語“特異性結合(specific binding)”或“特異性地結合於(specifically binds to)”或對特定多肽或特定多肽靶標上的表位“具有特異性(specific for)”可由分子對靶標的Kd為至少約200 nM、或至少約150 nM、或至少約100 nM、或至少約60 nM、或至少約50 nM、或至少約40 nM、或至少約30 nM、或至少約20 nM、或至少約10 nM、或至少約8 nM、或至少約6 nM、或至少約4 nM、或至少約2 nM、或至少約1 nM或更大來描述。在一個實施方案中，術語“特異性結合”是指其中分子結合於特定多肽或特定多肽上的表位而基本上不結合於任何其他多肽或多肽表位的結合。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含免疫調節抗體，其包含： a) 輕鏈，其包含輕鏈可變結構域和輕鏈恆定結構域； b) 重鏈，其包含重鏈可變結構域和包含第一(CH1)重鏈恆定結構域以及Fc片段單體(包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域)的抗體重鏈恆定結構域。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含輕鏈可變結構域，輕鏈可變結構域包含分別由氨基酸序列GGNNIGSKNVH (SEQ ID NO:14)、RDSNRPS (SEQ ID NO:15)和CQVWDSSTAV (SEQ ID NO:16)表示的LCDR 1、2和3(高變區1、2和3)。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含輕鏈可變結構域，輕鏈可變結構域包含由QPVLTQPLSVSVALGQTARITCGGNNIGSKNVHWYQQKPGQAPVLVIYRDSNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRAQAGDEADYYCQVWDSSTAVFGTGTKLTVLQ (SEQ ID NO: 18)表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含重鏈可變結構域，重鏈可變結構域包含分別由氨基酸序列FTFSSYWMY (SEQ ID NO:11)、AIDTGGGRTYYADSVKG (SEQ ID NO:12)和CARDEGGGTGWGVLKDWPYGLDA (SEQ ID NO:13)表示的HCDR 1、2和3 (高變區1、2和3)。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含重鏈可變結構域，重鏈可變結構域包含由QVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMYWVRQVPGKGLEWVSAIDTGGGRTYYADSVKGRFAISRVNAKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCARDEGGGTGWGVLKDWPYGLDAWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 17)表示的氨基酸序列。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： 1) 輕鏈可變結構域，其包含分別由氨基酸序列GGNNIGSKNVH (SEQ ID NO: 14)、RDSNRPS (SEQ ID NO: 15)和CQVWDSSTAV (SEQ ID NO: 16)表示的LCDR 1、2和3 (高變區1、2和3)； 2) 重鏈可變結構域，其包含分別由氨基酸序列FTFSSYWMY (SEQ ID NO: 11)、AIDTGGGRTYYADSVKG (SEQ ID NO: 12)和CARDEGGGTGWGVLKDWPYGLDA (SEQ ID NO: 13)表示的HCDR 1、2和3 (高變區1、2和3)。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： 1) 包含由QPVLTQPLSVSVALGQTARITCGGNNIGSKNVHWYQQKPGQAPVLVIYRDSNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRAQAGDEADYYCQVWDSSTAVFGTGTKLTVLQ (SEQ ID NO:18)表示的氨基酸序列的輕鏈可變結構域； 2) 包含由QVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMYWVRQVPGKGLEWVSAIDTGGGRTYYADSVKGRFAISRVNAKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCARDEGGGTGWGVLKDWPYGLDAWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:17)表示的氨基酸序列的重鏈可變結構域。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含免疫調節抗體，所述免疫調節抗體包含含有由QPVLTQPLSVSVALGQTARITCGGNNIGSKNVHWYQQKPGQAPVLVIYRDSNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRAQAGDEADYYCQVWDSSTAVFGTGTKLTVLQRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO 8)表示的氨基酸序列的輕鏈。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含免疫調節抗體，所述免疫調節抗體包含含有由QVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMYWVRQVPGKGLEWVSAIDTGGGRTYYADSVKGRFAISRVNAKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCARDEGGGTGWGVLKDWPYGLDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO 7)表示的氨基酸序列的重鏈。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含含有以下的免疫調節抗體： 包含由QVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMYWVRQVPGKGLEWVSAIDTGGGRTYYADSVKGRFAISRVNAKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCARDEGGGTGWGVLKDWPYGLDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO 7)表示的氨基酸序列的重鏈； 包含由QPVLTQPLSVSVALGQTARITCGGNNIGSKNVHWYQQKPGQAPVLVIYRDSNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRAQAGDEADYYCQVWDSSTAVFGTGTKLTVLQRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO 8)表示的氨基酸序列的輕鏈。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含免疫調節抗體prolgolimab (BCD100，WO2018013017)。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含免疫調節抗體或其抗原結合片段，其特異性地抑制PD-1途徑，其為特異性地結合於PD-L1的抗體。 在一些實施方案中，特異性地結合於PD-L1的抗體為BCD135，其在RU2665790 (WO2018194496)中公開。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： a) 包含以下的基於IL-15/IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物： 連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15Rα，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:1)表示的氨基酸序列，和 連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPСRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:5)表示的氨基酸序列； b) 包含以下的免疫調節抗體： 包含由QVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMYWVRQVPGKGLEWVSAIDTGGGRTYYADSVKGRFAISRVNAKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCARDEGGGTGWGVLKDWPYGLDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO 7)表示的氨基酸序列的重鏈； 包含由QPVLTQPLSVSVALGQTARITCGGNNIGSKNVHWYQQKPGQAPVLVIYRDSNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRAQAGDEADYYCQVWDSSTAVFGTGTKLTVLQRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO 8)表示的氨基酸序列的輕鏈。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： a) 包含以下的基於IL-15/IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物： 連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15Rα，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEA (SEQ ID NO:19)表示的氨基酸序列，和 連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSADKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPСRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:23)表示的氨基酸序列； b) 包含以下的免疫調節抗體： 包含由QVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMYWVRQVPGKGLEWVSAIDTGGGRTYYADSVKGRFAISRVNAKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCARDEGGGTGWGVLKDWPYGLDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO 7)表示的氨基酸序列的重鏈； 包含由QPVLTQPLSVSVALGQTARITCGGNNIGSKNVHWYQQKPGQAPVLVIYRDSNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRAQAGDEADYYCQVWDSSTAVFGTGTKLTVLQRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO 8)表示的氨基酸序列的輕鏈。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： a) 連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15Rα，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPСRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:6)表示的氨基酸序列，和 連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:3)表示的氨基酸序列； b) 包含以下的免疫調節抗體： 包含由QVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMYWVRQVPGKGLEWVSAIDTGGGRTYYADSVKGRFAISRVNAKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCARDEGGGTGWGVLKDWPYGLDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO 7)表示的氨基酸序列的重鏈； 包含由QPVLTQPLSVSVALGQTARITCGGNNIGSKNVHWYQQKPGQAPVLVIYRDSNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRAQAGDEADYYCQVWDSSTAVFGTGTKLTVLQRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO 8)表示的氨基酸序列的輕鏈。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： a) 連接於抗體重鏈恆定結構域的IL-15Rα，所述抗體重鏈恆定結構域具有由DTCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSGAEGGGASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSADKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPСRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO:24)表示的氨基酸序列，和 連接於抗體輕鏈恆定結構域的IL-15，所述抗體輕鏈恆定結構域具有由DNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANDSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSAGGKPGGSAGGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEA (SEQ ID NO:21)表示的氨基酸序列； b) 包含以下的免疫調節抗體： 包含由QVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMYWVRQVPGKGLEWVSAIDTGGGRTYYADSVKGRFAISRVNAKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCARDEGGGTGWGVLKDWPYGLDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO 7)表示的氨基酸序列的重鏈； 包含由QPVLTQPLSVSVALGQTARITCGGNNIGSKNVHWYQQKPGQAPVLVIYRDSNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRAQAGDEADYYCQVWDSSTAVFGTGTKLTVLQRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO 8)表示的氨基酸序列的輕鏈。 在一些實施方案中，免疫細胞因子在抗體恆定結構域中具有突變，所述突變誘導兩個不同部分的異二聚化，其中之一包含連接於抗體恆定結構域的共價或非共價結合的IL-15Rα和連接於抗體恆定結構域的IL-15，和另一部分包含抗體的共價或非共價結合的輕鏈和重鏈。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含： 選自以下的第一Fc單體和第二Fc單體：第一Fc單體為鈕修飾的Fc和第二Fc單體為孔修飾的Fc，或者當第二Fc單體為鈕修飾的Fc和第一Fc單體為孔修飾的Fc。 “鈕入孔(Knobs -into-holes)”(鈕入孔型的相互作用)為一種使得能夠避免與錯配副產物相關的問題的方法。該方法旨在通過將突變引入到CH3結構域中以修飾接觸介面，從而迫使兩個不同的抗體重鏈配對。在一條鏈上，龐大的氨基酸被具有短側鏈的氨基酸替代以產生“孔”。相反，將具有大側鏈的氨基酸引入到另一個CH3結構域中以產生“鈕”。通過共表現這兩條重鏈，觀察到異二聚體形成(“鈕-孔”)相對於同二聚體形成(“孔-孔”或“鈕-鈕”)的高產率(Ridgway, J. B., Presta L G, Carter P；和WO 1996/027011)。通過使用噬菌體展示技術重建兩個CH3結構域的介面並引入二硫鍵以穩定異二聚體，可進一步提高異二聚體的百分比(Merchant, A. M., et al, Nature Biotech 16 (1998) 677-681; Atwell, S., Ridgway, J. B., Wells, J. A., Carter, P., J Mol Biol 270 (1997) 26-35)。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含具有氨基酸取代S354C/T366W的第一Fc單體和具有氨基酸取代Y349C/T366S/L368A/Y407V的第二Fc單體。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含具有氨基酸取代Y349C/T366S/L368A/Y407的第一Fc單體和具有氨基酸取代S354C/T366W的第二Fc單體。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含屬於IgG的Fc片段。 在一些實施方案中，免疫細胞因子包含Fc片段，其中Fc片段同種型選自：人類IgG1、IgG2或IgG4。 在一些實施方案中，免疫細胞因子在Fc片段單體中包含突變，其引起所述免疫細胞因子中ADCC、CDC和/或ADCP特性的缺乏。 進一步地，雙特異性IL15超級激動劑或雙特異性IL15免疫細胞因子或抗PD1/IL15SA免疫細胞因子(包含IL-15SA和抗PD-1 Fab片段的雙特異性單克隆抗體)應理解為意指： 抗PD-1 Fab-CK_IL15Ra_Hc _IL15CH1FcknobLALA， 抗PD-1 Fab- CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcknobLALA。 進一步地，抗PD-L1/IL15SA免疫細胞因子應理解為意指： 抗PD-L1 Fab-CK_IL15Ra_Hc _IL15CH1FcknobLALA， 抗PD-L1 Fab- CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcknobLALA。 在整個申請的文本中給出名稱抗PD-1 Fab、抗PD-L1 Fab、CK、IL15Ra、IL15、CH1FcLALA的含義。 抗PD-1 Fab-CK_IL15Ra_Hc _IL15CH1FcknobLALA為上述免疫細胞因子，其包含抗PD1抗體的抗原結合Fab片段、連接於抗體輕鏈恆定結構域CK的IL15Ra和連接於包含第一(CH1)重鏈恆定結構域和Fc片段單體(包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域)的抗體重鏈恆定結構域的IL15，其中Fc包含形成異二聚化的突變(例如鈕)和LALA。 抗PD-1 Fab- CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcknobLALA為上述免疫細胞因子，其包含抗PD1抗體的抗原結合Fab片段、連接於抗體輕鏈恆定結構域CK的IL15和連接於包含第一(CH1)重鏈恆定結構域和Fc片段單體(包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域)的抗體重鏈恆定結構域的IL15Ra，其中Fc包含形成異二聚化的突變(例如鈕)和LALA。 抗PD-L1 Fab-CK_IL15Ra_Hc _IL15CH1FcknobLALA為上述免疫細胞因子，其包含抗PD-L1抗體的抗原結合Fab片段、連接於抗體輕鏈恆定結構域CK的IL15Ra和連接於包含第一(CH1)重鏈恆定結構域和Fc片段單體(包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域)的抗體重鏈恆定結構域的IL15，其中Fc包含形成異二聚化的突變(例如鈕)和LALA。 抗PD-L1 Fab- CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcknobLALA為上述免疫細胞因子，其包含抗PD-L1抗體的抗原結合Fab片段、連接於抗體輕鏈恆定結構域CK的IL15和連接於包含第一(CH1)重鏈恆定結構域和Fc片段單體(包含第二(CH2)和第三(CH3)重鏈恆定結構域)的抗體重鏈恆定結構域的IL15Ra，其中Fc包含形成異二聚化的突變(例如鈕)和LALA。 上述免疫細胞因子既可以其中異二聚體複合物內的第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域具有通過天然S-S橋共價結合的形式，也可以其中異二聚體複合物內的第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域沒有通過天然S-S橋的共價結合的形式製備；為此，在特定情況下，兩個半胱氨酸均被丙氨酸替代。 上述免疫細胞因子(既可以其中異二聚體複合物內的第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域具有通過天然S-S橋共價結合的形式，也可以其中異二聚體複合物內的第一抗體重鏈恆定結構域和抗體輕鏈恆定結構域沒有通過天然S-S橋的共價結合的形式製備)的實驗研究顯示上述細胞因子的活性沒有顯著差異。 如上所述的“鈕”應理解為意指在CH3結構域中於第一Fc變體和第二Fc變體之間形成“鈕入孔”結構的突變。 上述免疫細胞因子的形式如圖3和4所示。 在一些實施方案中，免疫細胞因子用於治療腫瘤性或自身免疫性疾病。 在一些實施方案中，免疫細胞因子用於治療腫瘤性疾病。 核酸 一方面，本發明涉及編碼任何上述免疫細胞因子的分離的核酸。 在本說明書中可互換使用的術語“核酸(nucleic acid)”、“核酸序列(nucleic sequence)”、“核酸序列(nucleic acid sequence)”、“多核苷酸(polynucleotide)”、“寡核苷酸(oligonucleotide)”、“多核苷酸序列(polynucleotide sequence)”和“核苷酸序列(nucleotide sequence)”意指核苷酸的精確序列，修飾或不修飾，確定核酸的片段或區域，包含或不包含非天然核苷酸，並且為雙鏈DNA或RNA、單鏈DNA或RNA或者所述DNA的轉錄產物。 在此還應當包括，本發明不涉及處於其天然染色體環境中，即處於天然狀態的核苷酸序列。本發明的序列已經分離和/或純化，即例如通過拷貝直接或間接地對其進行採樣，其環境已至少部分地修飾。因此，在此還應當提及通過重組遺傳學(例如通過宿主細胞)獲得或通過化學合成獲得的分離的核酸。 “分離的”核酸分子為被鑒定並與至少一種核酸分子雜質分開的核酸分子，前者在天然來源中與核酸分子雜質結合。分離的核酸分子不同於在天然條件下發現的形式或設定。因此，分離的核酸分子不同於在天然條件下存在於細胞中的核酸分子。然而，分離的核酸分子包括位於其中正常表現免疫細胞因子的細胞中的核酸分子，例如如果核酸分子的染色體定位不同於其在天然條件下於細胞中的定位。 在一些實施方案中，核酸為DNA。 在一個實施方案中，本發明涉及一種核酸分子，其包含編碼選自SEQ ID NO: 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24的氨基酸序列的核苷酸序列。核酸分子也可包含上述核苷酸序列的任何組合。 如本領域技術人員理解的，由於遺傳密碼的冗餘，各種不同的DNA序列可編碼具有選自SEQ ID NOs: 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24的氨基酸序列的肽。創建編碼相同氨基酸序列的這些備選DNA序列完全處於本領域技術人員的技能範圍內。這種變體DNA序列處於本發明的範圍內。 表現載體 一方面，本發明涉及包含上述核酸的表現載體。 本文使用的術語“載體”意指能夠轉運已與其連接的另一核酸的核酸分子。在一些實施方案中，載體為質粒，即其中可連接另外的DNA節段的環狀雙鏈DNA片段。在一些實施方案中，載體為病毒載體，其中可將另外的DNA節段連接到病毒基因組中。在一些實施方案中，載體能夠在其中引入它們的宿主細胞中自主複製(例如具有細菌複製起始位點的細菌載體和游離型哺乳動物載體)。在進一步的實施方案中，載體(例如非游離型哺乳動物載體)可在引入到宿主細胞中後整合到宿主細胞的基因組中，從而與宿主基因一起複製。此外，某些載體能夠指導與其可操作地連接的基因的表現。這種載體本文中稱為“重組表現載體”(或簡稱為“表現載體”)。 本發明涉及包含編碼如本文所述的上述免疫細胞因子或其結構部分的任何氨基酸序列的上述核酸分子的載體。 在一些實施方案中，通過插入部分或全部編碼第一和第二免疫細胞因子結構域(例如包含連接於抗體恆定結構域和/或抗體輕鏈和重鏈的IL15或IL15Rα的結構域)的序列的DNA來表現本發明的免疫細胞因子，其如上所述在表現載體中產生，使得基因可操作地連接於期望的表現控制序列，比如轉錄和轉譯控制序列。表現載體包括質粒、逆轉錄病毒、腺病毒、腺伴隨病毒(AAV)、植物病毒(比如花椰菜花葉病毒、煙草花葉病毒)、黏粒、YAC、EBV衍生的游離體等。可將DNA分子連接到載體中，使得載體內的轉錄和轉譯控制序列發揮其預期的調控DNA的轉錄和轉譯的功能。可選擇表現載體和表現控制序列以與所使用的表現宿主細胞相容。可將部分或完全編碼第一和第二結合結構域的序列(例如重鏈和輕鏈序列，其中結合結構域包含重鏈和輕鏈序列)的DNA分子引入到單個載體中。在一個實施方案中，將所述DNA分子的任何組合引入到相同的表現載體中。可通過標準方法(例如抗體基因片段和載體上互補限制性位點的連接，或者如果不存在限制性位點的話則為平末端連接)將DNA分子引入到表現載體中。 合適的載體為編碼功能完整的人類CH或CL/CK免疫球蛋白序列的載體，具有適當的限制性位元點工程改造，使得如上所述的任何序列(VH或VL或IL15或IL15Rα)均可易於插入和表現。這種載體中的HC和LC編碼基因可含有內含子序列，導致通過穩定相應的mRNA來提高總抗體蛋白產量。內含子序列的側翼為剪接供體和剪接受體位點，它們決定RNA剪接將在何處發生。當使用多個內含子時，內含子序列的位置可在抗體鏈的可變或恆定區域中，或者在可變和恆定區域兩者中。多聚腺苷酸化和轉錄終止可發生在編碼區下游的天然染色體位點處。重組表現載體還可編碼促進從宿主細胞分泌抗體鏈的信號肽。可以信號肽與免疫球蛋白鏈的氨基末端的閱讀框相連接的這種方式將抗體鏈的基因或包含IL15或IL15Rα的鏈的基因克隆到載體中。信號肽可為免疫球蛋白信號肽或異源性信號肽(即來自非免疫球蛋白的信號肽)。 除抗體鏈的基因或包含IL15或IL15Rα的鏈的基因之外，本發明載體的重組表現還可包含調控序列，其控制基因在宿主細胞中的表現。本領域的技術人員將理解，表現載體的設計，包括調控序列的選擇，可取決於諸如要轉化的宿主細胞的選擇、期望的蛋白的表現水準等因素。用於哺乳動物中的表現宿主細胞的優選控制序列包括確保哺乳動物細胞中高水準蛋白表現的病毒元件，比如源自逆轉錄病毒LTR、巨細胞病毒(CMV) (比如CMV啟動子/增強子)、猿猴病毒40 (SV40) (比如SV40啟動子/增強子)、腺病毒(例如腺病毒的主要晚期啟動子(AdMLP))、多瘤病毒和強哺乳動物啟動子(比如天然免疫球蛋白啟動子或肌動蛋白啟動子)的啟動子和/或增強子。對於病毒控制元件及其序列的進一步描述，參見例如美國專利第5168062、4510245和4968615號。用於在細菌細胞或真菌細胞(例如酵母細胞)中表現多肽的方法也為本領域眾所周知的。 除上述基因和調控序列之外，本發明的重組表現載體還可攜帶另外的序列，比如調控載體在宿主細胞中複製的序列(例如複製起點)和選擇標記基因。選擇標記基因便於選擇其中引入載體的宿主細胞(參見例如美國專利第4399216、4634665和5179017號)。例如，選擇標記基因一般地賦予其中引入載體的宿主細胞對藥物(比如G418、潮黴素或甲氨蝶呤)的抗性。例如，選擇標記基因包括二氫葉酸還原酶(DHFR)基因(用於在甲氨蝶呤選擇/擴增期間的dhfr宿主細胞)、neo基因(用於G418選擇)和谷氨酸合成酶基因。 本說明書中使用的術語“表現控制序列”是指實現其連接的編碼序列的表現和加工必需的多核苷酸序列。表現控制序列包括適當的轉錄起始、終止、啟動子和增強子序列；有效的RNA加工信號，比如剪接和多聚腺苷酸化信號；穩定細胞質mRNA的序列；提高轉譯效率的序列(即Kozak共有序列)；提高蛋白穩定性的序列；以及在需要時增強蛋白分泌的序列。這種控制序列的性質取決於宿主生物體而異；在原核生物中，這種控制序列通常包括核糖體結合位點的啟動子和轉錄終止序列；在真核生物中，一般地這種控制序列包括啟動子和轉錄終止序列。術語“控制序列”旨在包括至少所有組件，其存在對於表現和加工至關重要，並且還可包括其存在為有利的另外的元件，例如前導序列和融合伴侶序列。 術語“控制序列”是指在特定宿主生物體中表現可操作地連接的編碼序列必需的DNA序列。適合於原核生物的控制序列例如包括啟動子，任選地為操縱子序列和核糖體結合位點。已知真核細胞利用啟動子、多聚腺苷酸化信號和增強子。 當核酸與另一核酸序列處於功能關係時，核酸為“可操作地連接的”。例如，如果前序列(presequence)或分泌前導序列的DNA作為參與多肽分泌的前蛋白(preprotein)表現，則其可操作地連接於多肽的DNA；如果啟動子或增強子影響序列的轉錄，則其可操作地連接於編碼序列；如果核糖體結合位點被放置以便於轉譯，則其可操作地連接於編碼序列。通常，“可操作地連接的”意指被連接的DNA序列為鄰接的，並且在分泌前導的情況下，為鄰接的並且處於閱讀相(reading phase)。然而，增強子不必為鄰接的。 宿主細胞及其產生方法 一方面，本發明涉及用於產生宿主細胞以產生上述免疫細胞因子的方法，其包括用上述載體轉化細胞。 編碼本發明的免疫細胞因子的核酸分子和包含這些核酸分子的載體可用於轉染合適的哺乳動物或其細胞、植物或其細胞、細菌或酵母宿主細胞。轉化可通過用於將多核苷酸引入到宿主細胞中的任何已知技術進行。用於將異源性多核苷酸引入到哺乳動物細胞中的方法為本領域眾所周知的，並且包括葡聚糖介導的轉染、陽離子聚合物-核酸複合物轉染、磷酸鈣沉澱、聚凝胺介導的轉染、原生質體融合、將多核苷酸包封在脂質體中，和將DNA直接顯微注射到細胞核中。另外，可通過病毒載體將核酸分子引入到哺乳動物細胞中。用於轉染細胞的方法為本領域眾所周知的。參見例如美國專利第4399216、4912040、4740461和4959455號。用於轉化植物細胞的方法為本領域眾所周知的，包括例如農桿菌介導的轉化、生物射彈轉化、直接注射、電穿孔和病毒轉化。用於轉化細菌和酵母細胞的方法也為本領域眾所周知的。 一方面，本發明涉及包含上述核酸的用於產生上述免疫細胞因子的宿主細胞。 一方面，本發明涉及用於產生包含上述免疫細胞因子的藥物的方法，其包括在足以產生所述免疫細胞因子的條件下，在培養基中培養上述宿主細胞，如果需要的話，隨後分離和純化所得免疫細胞因子。 本文使用的術語“重組宿主細胞”(或簡稱為“宿主細胞”)是指其中已引入重組表現載體的細胞。本發明涉及宿主細胞，其可包含例如上述本發明的載體。本發明進一步涉及包含例如編碼本發明的免疫細胞因子或其以上部分的核苷酸序列的宿主細胞。應當理解，“重組宿主細胞”和“宿主細胞”不僅是指特定的受試細胞，而且還指這種細胞的後代。因為由於突變或環境影響而可能在後代中發生修飾，因此實際上這種後代可能與親代細胞不同；然而，這種細胞仍然包括在本文使用的術語“宿主細胞”的範圍內。 用作用於轉化的宿主的哺乳動物細胞系為本領域眾所周知的，並且包括多個可獲得的永生化細胞系。這些包括例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、NS0細胞、SP2細胞、HEK-293T細胞、FreeStyle 293細胞(Invitrogen)、NIH-3T3細胞、HeLa細胞、幼倉鼠腎(BHK)細胞、非洲綠猴腎細胞(COS)、人肝細胞癌細胞(例如Hep G2)、A549細胞和許多其他細胞系。通過確定哪些細胞系具有高表現水準並提供所產生蛋白的必要特性來選擇細胞系。可使用的其他細胞系為昆蟲細胞系，比如Sf9或Sf21細胞。當將編碼本發明的免疫細胞因子或其一部分的重組表現載體引入到哺乳動物宿主細胞中時，通過將宿主細胞培養足以在宿主細胞中表現本發明的免疫細胞因子或其一部分的時間段來產生免疫細胞因子，或更優選地使免疫細胞因子分泌到其中培養宿主細胞的培養基中。可使用標準蛋白純化技術從培養基中分離免疫細胞因子。植物宿主細胞包括例如煙草屬(Nicotiana)、擬南芥屬(Arabidopsis)、浮萍(duckweed)、玉米、小麥、馬鈴薯等。細菌宿主細胞包括大腸桿菌(Escherichia)和鏈黴菌屬(Streptomyces)物種。酵母宿主細胞包括粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。 此外，可使用多種已知技術來提高從生產細胞系產生本發明免疫細胞因子的水準。例如，谷氨醯胺合成酶基因表現系統(GS系統)為用於在某些條件下增強表現的常用方法。GS系統結合ЕР 第1616846、0256055、0323997和0338841號全面或部分地進行討論。 本發明的免疫細胞因子或其一部分可能在不同的細胞系或宿主細胞中具有彼此不同的糖基化模式。然而，本文所述的免疫細胞因子或其包含本文提供的氨基酸序列的部分(結構域)為本發明的一部分，而與結合分子的糖基化無關，並且通常與是否存在轉譯後修飾無關。 藥用組合物 一方面，本發明涉及用於刺激IL-15Rβ/γ陽性細胞的活化和/或增殖的藥用組合物，其包含治療有效量的上述免疫細胞因子與一種或多種藥學上可接受的賦形劑的組合。 “藥用組合物”意指包含本發明的免疫細胞因子和至少一種選自以下的成分的組合物：藥學上可接受的和藥理學上相容的賦形劑比如填充劑、溶劑、稀釋劑、載體、助劑、分配劑(distributing agent)、遞送劑、防腐劑、穩定劑、乳化劑、助懸劑、增稠劑、延長遞送控制劑，其選擇和比例取決於給藥的類型和途徑以及劑量。本發明的藥用組合物及其製備方法對於本領域技術人員無疑是顯而易見的。藥用組合物應優選地按照GMP (良好生產規範(Good Manufacturing Practice))要求進行生產。組合物可包含緩衝劑組合物、張度劑、穩定劑和增溶劑。組合物的延長作用可通過減慢活性藥用成分吸收的試劑例如單硬脂酸鋁和明膠來實現。合適的載體、溶劑、稀釋劑和遞送劑的實例包括水、乙醇、多元醇及其混合物、油類和用於注射的有機酯類。 “治療有效量”是指將在某種程度上減輕所治療病症的一種或多種症狀的所給予治療劑的量。 “藥物(Medicament) (藥物(drug))”為作為藥用組合物以片劑、膠囊劑、粉劑、凍乾劑、注射劑、輸注劑、軟膏劑和其他旨在恢復、改善或改變人類和動物的生理功能以及用於治療和預防疾病、用於診斷、麻醉、避孕、美容等的現成形式存在的化合物或化合物混合物。本領域認可的用於給予肽、蛋白或抗體的任何方法均可適當地用於本發明的免疫細胞因子。 術語“藥學上可接受的”是指一種或多種適合於給予哺乳動物(優選地為人類)的相容的液體或固體成分。 本文使用術語“賦形劑”來描述除上述本發明成分以外的任何成分。這些為無機或有機性質的物質，其用於藥用生產中以賦予藥物產品必要的理化特性。 術語“緩衝劑(buffer)”、“緩衝劑組合物”、“緩衝劑(buffering agent)”是指能夠通過其酸鹼共軛(acid-base conjugate)成分的作用抵抗pH變化，並且使得本發明的免疫細胞因子產物能夠抵抗pH變化的溶液。通常，藥用組合物優選地具有4.0-8.0範圍內的pH。所用緩衝劑的實例包括(但不限於)醋酸鹽、磷酸鹽、枸櫞酸鹽、組氨酸、琥珀酸鹽等緩衝溶液。 本文使用的術語“張度劑(tonic agent)”、“滲透劑(osmolyte)”或“滲透劑(osmotic agent)”是指可增加液體抗體製劑的滲透壓的賦形劑。“等張”藥物為具有等同於人體血液的滲透壓的藥物。等張藥物一般地具有約250-350 mOsm/kg的滲透壓。使用的等張劑包括(但不限於)多元醇、糖和蔗糖、氨基酸、金屬鹽(例如氯化鈉)等。 “穩定劑”是指提供活性劑的物理和/或化學穩定性的賦形劑或者兩種或更多種賦形劑的混合物。穩定劑包括氨基酸，例如(但不限於)精氨酸、組氨酸、甘氨酸、賴氨酸、穀氨醯胺、脯氨酸；表面活性劑，例如(但不限於)聚山梨酯20 (商品名：Tween 20)、聚山梨酯80 (商品名：Tween 80)、聚乙二醇-聚丙二醇及其共聚物(商品名：Poloxamer)、Pluronic、十二烷基硫酸鈉(SDS)；抗氧化劑，例如(但不限於)甲硫氨酸、乙醯半胱氨酸、抗壞血酸、單硫代甘油、亞硫酸鹽等；螯合劑，例如(但不限於)乙二胺四乙酸(EDTA)、二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)、枸櫞酸鈉等。 如果活性劑在儲存溫度(例如2-8℃)下於規定的保存期期間保持其物理穩定性和/或化學穩定性和/或生物活性，則藥用組合物為“穩定的”。優選地，活性劑保持物理和化學穩定性兩者以及生物活性。基於加速或自然老化條件下的穩定性測試結果調整儲存期。 本發明的藥用組合物可以現成製劑形式的單一單位劑量或多個單一單位劑量的形式製造、包裝或廣泛銷售。本文使用的術語“單一單位劑量”是指含有預定量的活性成分的離散量的藥用組合物。活性成分的量一般地等於要在受試者中給予的活性成分的劑量，或這種劑量的方便部分，例如這種劑量的一半或三分之一。 本發明的藥用組合物一般地適合於作為無菌製劑非腸道給予，旨在通過皮膚或黏膜屏障的破壞經注射、輸注和植入繞過胃腸道而給予人體。例如，非腸道給予尤其旨在包括皮下、腹膜內、肌內、胸骨內、靜脈內、動脈內、鞘內、心室內、尿道內、顱內、滑膜內、經皮注射或輸注；和腎透析輸注技術。也可採用腫瘤內遞送，例如腫瘤內注射。還提供區域性灌注。優選的實施方案包括靜脈內和皮下途徑。本領域認可的任何給予肽或蛋白的方法均可適當地用於本發明的免疫細胞因子。 可注射製劑可非限制性地以單位劑型(比如以安瓿、小瓶、塑膠容器、預填充注射器、自動注射裝置)製備、包裝或銷售。用於非腸道給予的製劑尤其包括混懸劑、溶液劑、在油性或水性基質中的乳劑、糊劑等。 在另一個實施方案中，本發明提供用於非腸道給予的組合物，包括以乾燥(即粉末或顆粒)形式提供，以用於在給藥之前用合適的基質(例如無菌無熱原的水)重構的藥物組合物。這種製劑可通過例如凍乾法製備，其在本領域中稱為冷凍乾燥，並且涉及冷凍產物然後從冷凍的物質中去除溶劑。 本發明的免疫細胞因子還可單獨、作為來自吸入器(比如加壓氣霧劑容器、泵、噴霧器(spray)、霧化器(atomiser)或霧化器(nebuliser))的與合適的藥學上可接受的賦形劑的混合物(其中使用或不使用合適的推進劑)，或作為滴鼻劑或噴霧劑，鼻內或通過吸入給予。 用於非腸道給予的劑型可配製成立即或修飾釋放。修飾釋放製劑包括延遲、持續、脈衝、控制、靶向和程式釋放。 在一些實施方案中，藥用組合物用於治療腫瘤性或自身免疫性疾病。 在一些實施方案中，藥用組合物用於治療自身免疫性疾病。 在本說明書中使用的術語“自身免疫性疾病”是指由個體自己(自身)的抗原和/或組織引起並針對個體自己(自身)的抗原和/或組織的非惡性疾病或病症。 “自身免疫性疾病”的定義包括(但不限於)類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis)、骨關節炎(osteoarthritis)、幼年型慢性關節炎(juvenile chronic arthritis)、敗血性關節炎(septic arthritis)、萊姆骨關節炎(Lyme osteoarthritis)、銀屑病關節炎(psoriatic arthritis)、反應性關節炎(reactive arthritis)、脊柱關節病(spondyloarthropathy)、系統性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus)、克羅恩病(Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis)、炎症性腸病(inflammatory bowel diseases)、糖尿病(diabetes mellitus)、甲狀腺炎(thyroiditis)、哮喘(asthma)、過敏性疾病(allergic diseases)、銀屑病(psoriasis)、特應性皮炎(atopic dermatitis)、硬皮病(scleroderma)、“移植物抗宿主”反應(reaction “graft versus host”)、器官移植排斥(organ transplant rejection)、與移植有關的急性或慢性免疫性疾病(acute or chronic immune diseases associated with transplantation)、結節病(sarcoidosis)、川崎病(Kawasaki disease)、格雷夫斯病(Graves disease)、腎病症候群(nephrotic syndrome)、慢性疲勞症候群(chronic fatigue syndrome)、韋格納肉芽腫(Wegener's granulomatosis)、亨諾-許蘭紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、顯微鏡下腎臟血管炎(microscopic renal vasculitis)、慢性活動性肝炎(chronic active hepatitis)、uvenita、敗血性休克(septic shock)、中毒性休克症候群(toxic shock syndrome)、敗血症症候群(sepsis syndrome)、惡病質(cachexia)、獲得性免疫缺陷症候群(acquired immunodeficiency syndrome)、急性橫貫性脊髓炎(acute transverse myelitis)、亨廷頓舞蹈病(Huntington's chorea)、帕金森病(Parkinson's disease)、阿爾茨海默病(Alzheimer's disease)、中風(stroke)、原發性膽汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis)、溶血性貧血(hemolytic anemia)、成人(急性)呼吸窘迫症候群(adult (acute) respiratory distress syndrome)、脫髮(alopecia)、斑禿(alopecia areata)、血清陰性關節病(seronegative arthropathy)、關節病(arthropathy)、萊特爾病(Reiter's disease)、與潰瘍性結腸炎關節病相關的銀屑病關節病(psoriatic arthropathy associated with ulcerative colitis arthropathy)、特應性過敏(atopic allergies)、自身免疫性大皰病(autoimmune bullous diseases)、尋常性天皰瘡(pemphigus vulgaris)、片狀天皰瘡(sheet-like pemphigus)、類天皰瘡病(pemphigoid disease)、線性IgA (linear IgA)、自身免疫性溶血性貧血(autoimmune hemolytic anemia)、庫姆斯陽性溶血性貧血(Coombs-positive hemolytic anemia)、惡性貧血(pernicious anemia)、幼年型惡性貧血(juvenile pernicious anemia)、關節炎(arthritis)、原發性硬化性甲型肝炎(primary sclerosing hepatitis A)、隱源性自身免疫性肝炎(cryptogenic autoimmune hepatitis)、纖維化肺病(fibrosis lung disease)、隱源性纖維化肺泡炎(cryptogenic fibrosis alveolitis)、炎症後間質性肺病(post-inflammatory interstitial lung diseases)、間質性肺炎(interstitial pneumonitis)、慢性嗜酸性粒細胞性肺炎(chronic eosinophilic pneumonia)、感染後間質性肺病(post-infectious interstitial lung diseases)、痛風性關節炎(gouty arthritis)、自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis)、I型自身免疫性肝炎(經典的自身免疫性肝炎或類狼瘡(classical autoimmune hepatitis or lupoid))、II型自身免疫性肝炎、骨關節炎(osteoarthritis)、原發性硬化性膽管炎(primary sclerosing cholangitis)、I型銀屑病(psoriasis type I)、II型銀屑病(psoriasis type II)、特發性白血球減少症(idiopathic leucopenia)、自身免疫性中性粒細胞減少症(autoimmune neutropenia)、腎臟NOS病(renal NOS-diseases)、腎小球腎炎(glomerulonephritis)、顯微鏡下腎臟血管炎(microscopic renal vasculitis)、盤狀紅斑狼瘡(discoid lupus erythematosus)、特發性或NOS男性不育症(idiopathic or NOS-male infertility)、對精子自身免疫(autoimmunity to sperm)、多發性硬化(multiple sclerosis) (所有亞型)、交感性眼炎(sympathetic ophthalmia)、繼發於結締組織病的肺動脈高壓(pulmonary hypertension secondary to connective tissue disease)、肺出血-腎炎症候群(Goodpasture syndrome)、結節性多關節炎的肺部表現(pulmonary manifestations of polyarthritis nodosa)、急性風濕熱(acute rheumatic fever)、類風濕性脊柱炎(rheumatoid spondylitis)、強直性脊柱炎(ankylosing spondylitis)、斯蒂爾病(Still's disease)、全身性硬化(systemic sclerosis)、舍葛籣症候群(Sjögren syndrome)、高安病(Takayasu's disease)、自身免疫性血小板減少症(autoimmune thrombocytopenia)、特發性血小板減少症(idiopathic thrombocytopenia)、自身免疫性甲狀腺病(autoimmune thyroid disease)、甲狀腺功能亢進(hyperthyroidism)、橋本病(Hashimoto's disease)、自身免疫性萎縮性甲狀腺功能減退(autoimmune atrophic hypothyroidism)、原發性黏液水腫(primary myxedema)、晶狀體源性葡萄膜炎(phacogenic uveitis)、原發性血管炎(primary vasculitis)、白癜風、急性肝病、慢性肝病、過敏、哮喘、精神障礙(psychiatric disorder) (包括抑鬱症和精神分裂症)、Th2型/Th1型介導的疾病、結膜炎、過敏性接觸性皮炎(allergic contact dermatitis)、過敏性鼻炎(allergic rhinitis)、α-1-抗胰蛋白酶缺乏(deficiency of alpha-1-antitrypsin)、肌萎縮性側索硬化(amyotrophic lateral sclerosis)、貧血、囊性纖維化(cystic fibrosis)、與細胞因子治療相關的障礙(disorders associated with cytokine therapy)、脫髓鞘病(demyelinating disease)、皮炎、虹膜睫狀體炎(iridocyclitis)/葡萄膜炎(uveitis)/視神經炎(optic neuritis)、缺血-再灌注損傷(ischemia-reperfusion injury)、缺血性中風(ischemic stroke)、幼年型類風濕性關節炎(juvenile rheumatoid arthritis)、自身免疫性腸病(autoimmune enteropathy)、自身免疫性聽力喪失(autoimmune hearing loss)、自身免疫性淋巴增生症候群(autoimmune lymphoproliferative syndrome)、自身免疫性心肌炎(autoimmune myocarditis)、自身免疫性卵巢早衰(autoimmune premature ovarian failure)和瞼緣炎(blepharitis)。 在一些實施方案中，藥用組合物用於治療腫瘤性疾病。 術語“腫瘤性疾病(oncological disease)”、“癌症(cancer)”和“癌性(cancerous)”是指一般地其特徵為細胞的生長/增殖不受控制的哺乳動物中的生理病症或描述該生理病症。腫瘤性疾病的實例包括(但不限於)癌、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤和白血病。這種癌性疾病的更具體實例包括鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌和肺鱗癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌(包括胃腸道癌)、胰腺癌、膠質母細胞瘤、神經膠質瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、結腸癌、結直腸癌、子宮內膜或子宮癌、唾液腺癌、腎臟癌或腎癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、肛門癌、陰莖癌、黑色素瘤和各種頭頸癌。 在一些實施方案中，藥用組合物用於治療選自以下的腫瘤性疾病：HNSCC (頭頸部鱗狀細胞癌)、子宮頸癌、原發性不明癌、膠質母細胞瘤、食道癌、膀胱癌、TNBC (三陰性乳腺癌)、CRC (結直腸癌)、肝細胞癌、黑色素瘤、NSCLC (非小細胞肺癌)、腎癌、卵巢癌、MSI CRC (具有微衛星不穩定性的結直腸癌)、白血病(急性白血病或成髓細胞性白血病)、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、黑色素瘤、乳腺癌、結直腸癌、前列腺癌、膀胱癌、肉瘤、肝細胞癌、膠質母細胞瘤、霍奇金淋巴瘤、T和B細胞型急性淋巴細胞白血病、小細胞肺癌、急性成髓細胞性白血病、難治性非霍奇金B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、邊緣區B細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、胰腺癌、卵巢癌、急性成髓細胞性白血病和高危骨髓增生異常症候群。 術語“抗增殖活性”旨在指停止或抑制細胞(比如癌細胞)的生長。 術語“IC50 ”(50%抑制濃度)是指可測量的活性或反應例如細胞(比如腫瘤細胞)的生長/增殖被抑制50%的藥物濃度。可使用適當的劑量反應曲線，使用專門的統計軟體進行曲線擬合來計算IC50 值。 術語GI50 (50%生長抑制)是指細胞(比如腫瘤細胞)的增殖被抑制50%的藥物濃度。 術語“ED50 ”(EC50 ) (50%有效劑量/濃度)是指產生50%生物學效應(可包括細胞毒性)的藥物濃度。 治療方法/治療用途 一方面，本發明涉及用於治療腫瘤性疾病的方法，其包括以治療有效量給予需要這種治療的受試者所述免疫細胞因子或所述藥用組合物。 “治療(Treat)”、“治療(treatment)”和“治療(therapy)”是指減輕或消除生物學病症和/或其至少一種伴隨症狀的方法。本文使用的“減輕”疾病、病症或病況意指降低疾病、病症或病況的症狀的嚴重性和/或發生頻率。進一步地，本文提及“治療”包括提及治癒性、姑息性和預防性治療。 一方面，治療的物件或患者為哺乳動物，優選地為人類受試者。所述受試者可為任何年齡的男性或女性。 術語“疾病”意指將受益於本發明治療的任何病況。該術語的定義包括慢性和急性病症或疾病。 在用於治療的方法的一些實施方案中，腫瘤性疾病選自：HNSCC (頭頸部鱗狀細胞癌)、子宮頸癌、原發性不明癌、膠質母細胞瘤、食道癌、膀胱癌、TNBC (三陰性乳腺癌)、CRC (結直腸癌)、肝細胞癌、黑色素瘤、NSCLC (非小細胞肺癌)、腎癌、卵巢癌、MSI CRC (具有微衛星不穩定性的結直腸癌)、白血病(急性白血病或成髓細胞性白血病)、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、黑色素瘤、乳腺癌、結直腸癌、前列腺癌、膀胱癌、肉瘤、肝細胞癌、膠質母細胞瘤、霍奇金淋巴瘤、T和B細胞型急性淋巴細胞白血病、小細胞肺癌、急性成髓細胞性白血病、難治性非霍奇金B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、邊緣區B細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、胰腺癌、卵巢癌、急性成髓細胞性白血病和高危骨髓增生異常症候群。 一方面，本發明涉及用於在需要活化的受試者中活化T細胞群或NK細胞群的生物活性的方法，其包括給予受試者有效量的上述免疫細胞因子或上述藥用組合物。 一方面，本發明涉及所述免疫細胞因子或所述藥用組合物用於在需要這種腫瘤性疾病治療的受試者中進行治療的用途。 在某些用途中，腫瘤性疾病選自：HNSCC (頭頸部鱗狀細胞癌)、子宮頸癌、原發性不明癌、膠質母細胞瘤、食道癌、膀胱癌、TNBC (三陰性乳腺癌)、CRC (結直腸癌)、肝細胞癌、黑色素瘤、NSCLC (非小細胞肺癌)、腎癌、卵巢癌、MSI CRC (具有微衛星不穩定性的結直腸癌)、白血病(急性白血病或成髓細胞性白血病)、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、黑色素瘤、乳腺癌、結直腸癌、前列腺癌、膀胱癌、肉瘤、肝細胞癌、膠質母細胞瘤、霍奇金淋巴瘤、T和B細胞型急性淋巴細胞白血病、小細胞肺癌、急性成髓細胞性白血病、難治性非霍奇金B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、邊緣區B細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、胰腺癌、卵巢癌、急性成髓細胞性白血病和高危骨髓增生異常症候群。 在腫瘤(例如癌症)的情況下，治療有效量的本發明免疫細胞因子可減少癌細胞的數量；減少初始腫瘤的大小；抑制(即在某種程度上減慢並且優選地停止)癌細胞浸潤到外周器官中；抑制(即在某種程度上減慢並且優選地停止)腫瘤轉移；在某種程度上抑制腫瘤的生長；和/或在某種程度上減輕與病症相關的一種或多種症狀。本發明的免疫細胞因子可在某種程度上阻止生長和/或殺死現有的癌細胞，其可為抑制細胞生長和/或細胞毒性的。在癌症的治療中，可例如通過評價存活、腫瘤進展時間(TTP)、腫瘤對治療的反應率(RR)、反應的持續時間和/或生活品質來測量體內功效。 本發明的免疫細胞因子可不進行進一步的治療性治療即作為獨立療法給予。此外，通過本發明免疫細胞因子的治療可包括至少一種另外的治療性治療(組合療法)。在一些實施方案中，免疫細胞因子可與另一種藥物/製劑共同給予或一起配製用於治療癌症。 本文使用的提及本發明的免疫細胞因子和一種或多種其他治療劑的術語“共同給予”、“共同給予的”和“與...組合”考慮意指或包括以下： 1) 當將這種成分一起配製成單一劑型時，將本發明的免疫細胞因子和治療劑的這種組合同時給予需要治療的患者，其基本上同時向所述患者釋放所述成分， 2) 當將這種成分彼此分開配製成所述患者基本上同時服用的單獨劑型時，將本發明的免疫細胞因子和治療劑的這種組合同時給予需要治療的患者，因此所述成分基本上同時向所述患者釋放， 3) 當將這種成分彼此分開配製成所述患者以每次給予之間明顯的時間間隔連續服用的單獨劑型時，將本發明的免疫細胞因子和治療劑的這種組合依序給予需要治療的患者，因此所述成分在基本上不同的時間向所述患者釋放；和 4) 當將這種成分一起配製成以控制方式釋放所述成分的單一劑型時，將本發明的免疫細胞因子和治療劑的這種組合依序給予需要治療的患者，因此其同時、連續和/或重疊地在相同和/或不同的時間向所述患者釋放，其中每個部分可通過相同或不同的途徑給予。 本發明的免疫細胞因子可與選自以下的治療劑組合：細胞毒劑、化學治療劑、抗激素藥物或另一種治療性抗體。 本說明書中使用的術語“細胞毒劑”是指抑制或阻止細胞功能和/或引起細胞破壞的物質。該術語旨在包括放射性同位素(例如At211 、I131 、I125 、Y90 、Re186 、Re188 、Sm153 、Bi212 、P32 和Lu的放射性同位素)、化學治療劑和毒素，比如細菌、真菌、植物或動物來源的小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段和/或變體。 “化學治療劑”為可用於治療癌症的化合物。化學治療劑的實例包括烷化劑類，比如噻替呱(thiotepa)和環磷醯胺(CYTOXAN® )；烷基磺酸酯類，比如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和呱泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶類，比如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替呱(meturedopa)和烏瑞替呱(uredopa)；乙撐亞胺類和甲基蜜胺類(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三亞乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三亞乙基磷醯胺(triethylenephosphoramide)、三亞乙基硫代磷醯胺(triethylenethiophosphaoramide)和三甲蜜胺(trimethylmelamine)；聚乙酸類(acetogenins) (例如布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氫大麻酚(delta-9-tetrahydrocannabinol) (屈大麻酚(dronabinol)，MARINOL® )；β-拉帕醌(beta-lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙鹼(colchicines)；樺木酸(betulinic acid)；喜樹鹼(camptothecin) (包括合成類似物托泊替康(topotecan) (HYCAMTIN® )、CPT-11 (伊立替康(irinotecan)，CAMPTOSAR® )、乙醯基喜樹鹼(acetylcamptothecin)、莨菪亭(scopolectin)和9-氨基喜樹鹼(9-aminocamptothecin))；苔蘚抑素(bryostatin)；卡利他汀(callystatin)；CC-1065 (包括其合成類似物阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)和比折來新(bizelesin))；鬼臼毒素(podophyllotoxin)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；替尼泊苷(teniposide)；隱藻素類(cryptophycins) (例如隱藻素1和隱藻素8)；朵拉司他汀(dolastatin)；倍癌黴素(duocarmycin) (包括合成類似物KW-2189和CB1-TM1)；艾榴素(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海綿抑制素(spongistatin)；氮芥類比如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、鹽酸甲氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥膽甾醇(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亞硝基脲類(nitrosoureas)比如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素類比如烯二炔類(enediyne)抗生素(例如加利車黴素(calicheamicin)，比如加利車黴素γII和加利車黴素ωII (參見例如Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994))；代尼黴素(dynemicin)，包括代尼黴素A；埃斯培拉黴素(esperamicin)；以及新制癌菌素(neocarzinostatin)生色團和相關色素蛋白烯二炔類抗生素(chromoprotein enediyne antiobiotic)生色團)、阿克拉黴素(aclacinomysins)、放線菌素(actinomycin)、蒽黴素(authramycin)、偶氮絲氨酸(azaserine)、博來黴素(bleomycins)、放線菌素C (cactinomycin)、卡拉比星(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色黴素(chromomycinis)、放線菌素D (dactinomycin)、柔紅黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin) (包括ADRIAMYCIN® ，嗎啉代-多柔比星(morpholino-doxorubicin)、氰基嗎啉代-多柔比星(cyanomorpholino-doxorubicin)、2-吡咯啉-多柔比星(2-pyrrolino-doxorubicin)、鹽酸多柔比星脂質體注射劑(DOXOL® )、脂質體多柔比星(liposomal doxorubicin) TLC D-99 (MYOCET® )、聚乙二醇化脂質體多柔比星(peglylated liposomal doxorubicin) (CAELYX® )和去氧多柔比星(deoxydoxorubicin))、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、馬塞羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素類(mitomycins)比如絲裂黴素C (mitomycin C)、麥考酚酸(mycophenolic acid)、諾拉黴素(nogalamycin)、橄欖黴素類(olivomycins)、培洛黴素(peplomycin)、紫菜黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑黴素(streptonigrin)、鏈佐星(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物類比如甲氨蝶呤(methotrexate)、吉西他濱(gemcitabine) (GEMZAR® )、替加氟(tegafur) (UFTORAL® )、卡培他濱(capecitabine) (XELODA® )、埃坡黴素(epothilone)和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil) (5-FU)；葉酸類似物比如二甲葉酸(denopterin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物比如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤(6-mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物比如安西他濱(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮雜尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；抗腎上腺類比如氨魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑比如亞葉酸(frolinic acid)；醋葡醛內酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基酮戊酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；倍曲布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)；地磷醯胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟鳥氨酸(elfornithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵(gallium nitrate)；羥基脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼達明(lonidainine)；美登木素生物鹼類(maytansinoids)比如美登素(maytansine)和安絲菌素類(ansamitocins)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫呱達醇(mopidanmol)；尼曲吖啶(nitraerine)；噴司他丁(pentostatin)；異丙嗪(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基醯肼(2-ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK® 多糖複合物(JHS Natural Products，Eugene，OR)；雷佐生(razoxane)；利索新(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2’,2’-三氯三乙胺(2,2’,2”-trichlorotriethylamine)；單端孢黴烯族化合物(trichothecenes) (例如T-2毒素(toxin)、疣孢黴素A (verracurin A)、杆孢菌素A (roridin A)和蛇形菌素(anguidine))；烏拉坦(urethan)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；呱泊溴烷(pipobroman)；格塞圖辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷(arabinoside) (“Ara-C”)；塞替呱(thiotepa)；紫杉烷類化合物，例如紫杉醇(paclitaxel) (TAXOL® )、紫杉醇的白蛋白改造的納米顆粒製劑(albumin-engineered nanoparticle formulation of paclitaxel) (ABRAXANETM)和多西他塞(docetaxel) (TAXOTERE® )；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；6-硫鳥嘌呤(6-thioguanine)；巰嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；鉑類藥物比如順鉑(cisplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)和卡鉑(carboplatin)；防止微管蛋白聚合形成微管的長春花屬(vincas)，包括長春鹼(vinblastine) (VELBAN® )、長春新鹼(vincristine) (ONCOVIN® )、長春地辛(vindesine) (ELDISINE® 、FILDESIN® )和長春瑞濱(vinorelbine) (NAVELBINE® )；依託泊苷(etoposide) (VP-16)；異環磷醯胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；醛氫葉酸(leucovorin)；諾安托(novantrone)；依達曲沙(edatrexate)；道諾黴素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥氨酸(difluoromethylornithine) (DMFO)；類視黃醇類比如視黃酸，包括貝沙羅汀(bexarotene) (TARGRETIN® )；二膦酸鹽類(bisphosphonates)比如氯膦酸鹽(clodronate) (例如BONEFOS® 或OSTAC® )、依替膦酸鹽(etidronate) (DIDROCAL® )、NE-58095、唑來膦酸(zoledronic acid)/唑來膦酸鹽(zoledronate) (ZOMETA® )、阿侖膦酸鹽(alendronate) (FOSAMAJX® )、帕米膦酸鹽(pamidronate) (AREDIA® )、替魯膦酸鹽(tiludronate) (SKELID® )或利塞膦酸鹽(risedronate) (ACTONEL® )；曲沙他濱(troxacitabine) (1,3-二氧戊環核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸類，例如抑制與異常細胞增殖相關的信號傳導途徑中的基因表現的那些，比如PKC-α、Raf、H-Ras和表皮生長因子受體(EGF-R)；疫苗比如THERATOPE® 疫苗和基因治療疫苗，例如ALLOVECTIN® 疫苗、LEUVECTIN® 疫苗和VAXID® 疫苗；拓撲異構酶1抑制劑(例如LURTOTECAN® )；rmRH (例如ABARELIX® )；BAY439006 (索拉非尼(sorafenib)；Bayer)；SU-11248 (Pfizer)；呱立福辛(perifosine)；COX-2抑制劑(例如塞來考昔(celecoxib)或艾托考昔(etoricoxib))；蛋白酶體(proteosome)抑制劑(例如PS341)；硼替佐米(bortezomib) (VELCADE® )；CCI-779；替匹法尼(tipifarnib) (R11577)；索拉非尼(sorafenib)、ABT510；Bcl-2抑制劑比如奧利默森鈉(oblimersen sodium) (GENASENSE® )；匹杉瓊(pixantrone)；EGFR抑制劑(參見下文定義)；酪氨酸激酶抑制劑(參見下文定義)；和上述任何一種的藥學上可接受的鹽、酸或衍生物；以及上述兩種或更多種的組合，比如CHOP (即環磷醯胺(cyclophosphamide)、多柔比星(doxorubicin)、長春新鹼(vincristine)和潑尼松龍(prednisolone)的組合療法的縮寫)和FOLFOX (即關於奧沙利鉑(oxaliplatin) (ELOXATINTM)與5-FU和醛氫葉酸(leucovorin)組合的治療方案的縮寫)。 該定義中還包括用於調節或抑制激素對腫瘤的作用的抗激素藥物，比如具有混合的激動劑/拮抗劑特性的抗雌激素類，包括他莫昔芬(tamoxifen) (NOLVADEX® )、4-羥基他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen)、曲沃昔芬(trioxifene)、托瑞米芬(toremifene) (FARESTON® )、伊多昔芬(idoxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、雷洛昔芬(raloxifene) (EVTSTA® )、曲沃昔芬(trioxifene)、凱奧昔芬(keoxifene)和選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，比如SERM3；沒有激動劑特性的純的抗雌激素類，比如氟維司群(fulvestrant) (FASLODEX® )和EM800 (這種藥物可阻斷雌激素受體(ER)的二聚作用，抑制DNA結合，增加ER轉換和/或抑制ER水準)；芳香化酶抑制劑，包括甾體芳香化酶抑制劑(比如福美司坦(formestane)和依西美坦(exemestane) (AROMASIN® ))和非甾體芳香化酶抑制劑(比如阿那曲唑(anastrazole) (AREVIIDEX® )、來曲唑(letrozole) (FEMARA® )和氨格魯米特(aminoglutethimide))以及其他芳香化酶抑制劑(包括伏氯唑(vorozole) (RIVISOR® )、醋酸甲地孕酮(megestrol acetate) (MEGASE® )、法倔唑(fadrozole)、咪唑)；促黃體生成激素釋放激素激動劑(lutenizing hormone-releasing hormone agonists)，包括亮丙瑞林(leuprolide) (LUPRON® 和ELIGARD® )、戈舍瑞林(goserelin)、布塞瑞林(buserelin) 和tripterelin；性激素屬甾體(sex steroids)，包括孕激素類(progestines) (比如醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)和醋酸甲羥孕酮(medroxyprogesterone acetate))、雌激素類(比如己烯雌酚(diethylstilbestrol)和普力馬林(premarin))以及雄激素類/類視黃醇類(比如氟甲睪酮(fluoxymesterone)、全反式視黃酸(transretionic acid)和芬維A胺(fenretinide))；奧那司酮(onapristone)；抗孕激素類；雌激素受體下調劑類((ERD)；抗雄激素類(anti-androgens)，比如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)和比卡魯胺(bicalutamide)；睪內酯(testolactone)；和上述任何一種的藥學上可接受的鹽、酸或衍生物；以及上述兩種或更多種的組合。 可與本發明的免疫細胞因子組合使用的其他治療劑可為選自以下的治療性抗體：針對PD1的抗體(例如prolgolimab、派姆單抗(pembrolizumab)或納武單抗(nivolumab))、針對PD-L1的抗體、針對CTLA4的抗體、針對4-1BB的抗體、針對OX40的抗體、針對GITR的抗體、針對CD20的抗體(例如利妥昔單抗(rituximab))、針對HER2的抗體(例如曲妥珠單抗(trastuzumab)或帕妥珠單抗(pertuzumab))、針對VEGF的抗體(例如貝伐珠單抗(bevacizumab))或其組合。 可與本發明的免疫細胞因子組合使用的其他治療劑可為選自先天或適應性免疫的啟動劑的治療活性抗腫瘤化合物。 應當理解，本發明的免疫細胞因子可用於如上所述的治療方法、如上所述的治療和/或用於上述治療應用的藥物的製造中。 劑量和給藥途徑 本發明的免疫細胞因子將以有效治療所述病症的量，即以達到期望結果所需的劑量和時間範圍給予。治療有效量可根據因素比如待治療的具體病症、患者的年齡、性別和體重以及免疫細胞因子是單獨還是與一種或多種另外的藥物或治療技術組合給予而變化。 可以調整劑量方案以提供最佳期望的反應。例如，可給予單次推注，可隨著時間的推移給予數個分開的劑量，或者可根據治療情況的緊急程度需要，按比例減少或增加劑量。為了易於給予和劑量均勻，以單位劑型配製非腸道組合物為尤其有利的。本文使用的單位劑型是指作為適合作為待治療的患者/受試者的單位劑量的物理離散單位；每個單位含有經計算可與期望的藥用載體結合產生期望的治療效果的預定量的活性化合物。本發明單位劑型的規格一般地由以下因素決定，並直接取決於：(a) 化學治療劑的獨特特性和要實現的特定治療或預防作用，以及(b) 配混用於治療受試者的敏感性的這種活性化合物領域固有的局限性。 因此，基於本文提供的公開內容，技術人員將意識到根據治療領域中眾所周知的方法調整劑量和劑量方案。即，可易於確定最大耐受劑量，並且還可確定向患者提供可檢測的治療效果的有效量，以及可確定給予每種藥物以向患者提供可檢測治療效果的時間要求。因此，儘管本文示例了某些劑量和給藥方案，但是這些實例絕不限制可在實踐本發明的實施方案時提供給患者的劑量和給藥方案。 要注意的是，劑量值可隨要減輕的病症的類型和嚴重性而變化，並且可包括單劑量或多劑量。此外，應當理解，對於任何特定的受試者，應根據個體需要和給予或監督組合物給予的醫學專業人員的判斷隨著時間的推移調整具體劑量方案，並且本文所述的劑量範圍僅為示例性的，而不旨在限制要求保護的組合物的範圍或實踐。進一步地，本發明組合物的劑量方案可基於多種因素，包括疾病的類型、年齡、體重、性別、患者的醫學狀況、病症的嚴重性、給藥途徑以及所使用的本發明的特定免疫細胞因子。因此，劑量方案可以廣泛變化，但可使用標準方法常規確定。例如，可基於藥代動力學或藥效學參數(可包括臨床作用比如毒性作用和/或實驗室值)來調整劑量。因此，本發明包括由本領域技術人員確定的患者本身劑量遞增。用於確定合適劑量和方案的方法為本領域眾所周知的，並且一旦提供了本文公開的思想技術人員將會理解。 上文提供合適的給藥方法的實例。 考慮本發明免疫細胞因子的合適劑量將在0.1-200 mg/kg，優選地在0.1-100 mg/kg，包括約0.5-50 mg/kg，例如約1-20 mg/kg的範圍內。可例如以至少0.25 mg/kg，比如至少0.5 mg/kg，包括至少1 mg/kg，例如至少1.5 mg/kg，比如至少2 mg/kg，例如至少3 mg/kg，包括至少4 mg/kg，例如至少5 mg/kg；和例如最高50 mg/kg，包括最高30 mg/kg，例如最高20 mg/kg，包括最高15 mg/kg的劑量給予免疫細胞因子。一般地以適當的時間間隔重複給予，比如每週一次、每兩週一次、每三週一次或每四周一次，並在負責醫師認為適當的時間內重複給予，在某些情況下，醫師可在必要時增加或減少劑量。 實施例 提供以下實施例以更好地理解本發明。這些實施例僅出於說明的目的，而不應以任何方式解釋為限制本發明的範圍。 本說明書中引用的所有公開、專利和專利申請均通過參考結合至本文中。儘管出於清楚理解的目的已通過圖示和實例相當詳細地描述了前述發明，但是根據本發明的教導，對於本領域普通技術人員將易於顯而易見的是，可對其進行某些變化和修改而不背離所附實施方案的精神或範圍。 材料和一般方法 重組DNA技術 通過如Sambrook J. et al, Molecular cloning: A laboratory manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1989所述的標準技術進行DNA操作。根據製造商的方案使用分子生物學試劑。 基因合成 從通過化學合成製備的寡核苷酸製備期望的基因節段。通過寡核苷酸的退火和連接(包括PCR擴增)組裝300-4000 bp長的基因節段，其側翼為單個限制性位點，並隨後經指定的限制性位點進行克隆。通過DNA測序證實亞克隆基因片段的DNA序列。 DNA序列測定 通過Sanger測序測定DNA序列。 DNA和蛋白序列分析和序列資料管理 Infomax's Vector NTI Advance套件版本8.0和SnapGene Viewer用於序列創建、映射、分析、注釋和圖示。 實施例1 哺乳動物細胞懸浮培養物中重組蛋白的產生 為了產生圖1、圖2、圖3和圖4所示的重組IL15超級激動劑蛋白，我們合成了包含人類IL15配體(https://www.uniprot.org/uniprot/P40933)和IL15Rα (https://www.uniprot.org/uniprot/Q13261)序列的片段的構建體。使用PCR從寡核苷酸合成兩個基因的序列。 為了產生由圖1中的CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA和圖2中的CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcLALA表示的IL15超級激動劑變體(下文稱為IL15SA或BCD225)，將所述基因作為N-末端融合(融合蛋白)克隆到質粒中，抗體的κ輕鏈的第一恆定結構域在SalI/BsiWI限制性位元點處進入到載體pEE-IL15Ra-CK (或pEE-IL15-CK)中(圖5)和抗體重鏈的第一恆定結構域在SalI/NheI限制性位元點處進入到載體pEE-IL15-CH1-Fc-LALA (或pEE-IL15Ra-CH1-Fc-LALA) IgG1中(圖6)，並在轉染步驟將兩種載體合併。 為了產生由圖4中的Fab-CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcknobLALA (下文稱為IL15SA/PD1或抗PD1/IL15SA或IL15SA/PDL1或抗PDL1/IL15SA)和圖3中的Fab- CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcknobLALA表示的雙特異性IL15超級激動劑變體，將IL15配體和受體基因作為N-末端融合克隆到質粒中，抗體的κ輕鏈的第一恆定結構域在SalI/BsiWI限制性位元點處進入到載體pEE-IL15Ra-CK (或pEE-IL15-CK)中(圖5)，和抗體重鏈的第一恆定結構域在SalI/NheI限制性位元點處進入到載體pEE-IL15-CH1-Fc-knob-LALA (或pEE-IL15Ra-CH1-Fc-knob-LALA) IgG1中(圖9)。此外，為了形成如圖3和圖4所示的不對稱抗體的Fab部分，將抗PD1 (下文稱為IL15SA/PD1或抗PD1/IL15SA)或抗PDL1 (BCD-135)抗體(下文稱為IL15SA/PDL1或抗PDL1/IL15SA)的可變結構域的基因作為N-末端融合克隆到質粒中，抗體的κ輕鏈的第一恆定結構域在SalI/BsiWI限制性位元點處進入到載體pEE-BCD100-02-VL-CK中(圖7)和抗體重鏈的第一恆定結構域在SalI/NheI限制性位元點處進入到載體pEE-BCD100-02-VH-CH1-Fc-hole-LALA IgG1中(圖8)。結果，在轉染步驟將上述4種載體合併以在一個細胞中，以合成4種不同的多肽並形成雙特異性免疫細胞因子。 在大腸桿菌細胞中產生所需量的所有上述質粒，並使用Maxiprep Qiagen試劑盒進行純化。 將包含IL15SA的重組蛋白在根據已發表的方案[BiotechnolBioeng. 2005 Sep 20; 91(6):670-677, Liao Metal., 2004; Biotechnol Lett. 2006 Jun;28(11):843-848; BiotechnolBioeng. 2003 Nov 5;84(3):332-342]產生的中國倉鼠卵巢細胞系(CHO-K1)中進行暫態培養。使用組成型表現EBNA1 (EB病毒核抗原1)蛋白基因的細胞。懸浮培養使用來自Life Technologies Corporation的無血清培養基並根據製造商的說明，在定軌振盪器上的燒瓶中進行。為了暫態表現，通過線性聚乙烯亞胺(PEI MAX, Polysciences)轉染濃度為2x106 /ml的細胞。DNA/PEI比率為1:3-1:10。轉染之後5-7天，將細胞培養物以2000 g離心20分鐘，並通過0.22 µm篩檢程式過濾。通過親和HPLC從培養液中分離目標蛋白。 使用蛋白A親和色譜柱從培養液中分離和純化重組蛋白。使澄清的培養液通過用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS, pH 7.4)平衡的5 ml HiTraprProtein A Sepharose FF柱(GE Healthcare)。然後用5倍柱體積的PBS洗滌柱以去除非特異性結合的成分。使用0.1 M甘氨酸緩衝液(pH 3)洗脫結合的抗原。收集主要的蛋白洗脫峰，並用1 M Tris緩衝液(pH 8)調節至中性pH。所有階段均在110 cm/h的流速下進行。然後使用SnakeSkin Dialysis Tubing技術將蛋白透析到PBS (pH 7.4)中，過濾(0.22 µm)，轉移到管中並儲存於-70℃下。 通過SDS凝膠電泳評估所得蛋白溶液的純度(參見圖10中的實例)。 實施例2 (IL15SA)2-Fc與人類IL2βγ受體相互作用的動力學測定 根據ForteBio說明書，使用OctetRedBio儀器獲得(IL15SA)2-Fc (下文圖1中稱為CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA和圖2中稱為CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcLALA)與人類IL2βγ結合的親和常數。AR2G生物感測器在mQ中預再水合1小時。啟動生物感測器之後，將pH4醋酸鹽緩衝液中濃度為25 µg/ml的(IL15SA)2-Fc產品非特異性地(通過NH2 基團)固定到生物感測器上。然後將感測器浸入到在30℃下含有於補充有0.1% Tween-20和0.1% BSA的PBS緩衝液中的人類CD122/IL-2RB蛋白(Fc標籤)溶液(1和0.5 μg/ml)的孔中。IL15SA/IL2βγ複合物在該溶液中締合。然後將感測器浸入緩衝溶液中以進行後續的解離步驟。測定使用補充有0.1% Tween-20和0.1% BSA的PBS作為工作緩衝液在30℃下進行。 表1中給出CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA和CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcLALA的所得感應圖，其在根據標準程式和採用1:1相互作用模型，使用Octet Data Analysis軟體(版本8.0)減去參考信號之後進行分析。所得的親和常數如表1所示。所研究的兩種變體對人類IL2βγ均顯示出高親和力和特異性。 實施例3 雙特異性IL15超級激動劑與人類IL2βγ受體和其他免疫細胞的細胞受體之間相互作用的動力學測定 根據ForteBio說明書，使用OctetRed 96測量IL15SA雙特異性免疫細胞因子(下文稱為抗PD1-Fab-CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcknobLALA和抗PD-L1-Fab-CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcknobLALA)與IL2βγ和人類PD-1/PD-L1受體結合的親和常數。AR2G生物感測器在mQ中預再水合1小時。啟動生物感測器之後，將pH4醋酸鹽緩衝液中濃度為25 µg/ml的雙特異性免疫細胞因子非特異性地(通過NH2 基團)固定到生物感測器上。然後將感測器浸入到含有在補充有0.1% Tween-20和0.1% BSA的PBS緩衝液中的人類CD122/IL-2RB蛋白(Fc標籤)或PD-1-Fc受體或PD-L1-Fc受體(1和0.5 μg/ml)的孔中，以使雙特異性超級激動劑和受試受體締合。然後將感測器浸入緩衝溶液中以進行後續的解離步驟。 根據標準程式和採用1:1相互作用模型，使用Octet Data Analysis軟體(版本8.0)對減去參考信號之後的儀器資料進行分析。 所得的親和常數如表2所示。所研究的兩種變體對人類IL2βγ和配對受體兩者均顯示出高親和力和特異性，並且缺乏對其他受體的非特異性活性。 實施例4 用於測定IL15超級激動劑對NK92系的增殖活性的細胞測定 測定中使用NK-92細胞系。測定在96孔培養板中進行。懸浮液包含NK-92細胞、濃度如圖表所示的測試抗體。所有懸浮液成分均在補充有胎牛血清和穀氨醯胺的RPMI-1640培養基中製備。加入所有成分之後，將板在37℃和5% CO2 下進行溫育。然後將Alamar Blue添加到孔中。溫育後，測量孔中的螢光強度。對IL15SA產品(CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA)、IL15SA/PD1 (抗PD-1 Fab-CK_IL15Ra_Hc _IL15CH1FcLALA)和IL15SA/PDL1 (抗PDL-1 Fab-CK_IL15Ra_Hc _IL15CH1FcLALA)進行了比較研究。 相對於NK92系，上述免疫細胞因子的比活性測定結果顯示出高增殖活性。所有候選物的估計EC50 均相同，並且如上方平臺確定的啟動水準也完全相同(圖11)。應當注意的是，IL15SA部分的價數(valence)以及相應的不同親合力並未顯著影響該活性。 實施例5 用於測定IL15超級激動劑對自然殺傷系的增殖活性的細胞測定 測定使用通過陰性選擇從健康供體的PBMC中分離的分離的自然殺傷細胞。測定在96孔培養板中進行。懸浮液包含自然殺傷細胞、濃度如圖表所示的測試抗體。所有懸浮液成分均在補充有自體人體血漿的培養基中製備。加入所有成分之後，將板在37℃和5% CO2 下進行溫育。然後將Alamar Blue添加到孔中。溫育後，測量孔中的螢光強度。對IL15SA產品(CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA)、IL15SA/PD1 (抗PD-1 Fab-CK_IL15Ra_Hc _IL15CH1FcknobLALA)和人類介白素2 (IL2) (Ronleukin, PCI Biotech)對於自然殺傷細胞增殖活性的影響進行了比較研究。 相對於自然殺傷細胞，上述免疫細胞因子的比活性測定結果顯示出高增殖活性(圖12)。在誤差範圍內，所有候選物的估計EC50 均相同，並略低於IL2細胞因子。此外，如上方平臺定義的啟動水準也完全相同。應當注意的是，IL15SA部分的價數以及相應的不同親合力並未顯著影響該活性。 實施例6 用於測定IL15超級激動劑對報告基因系的抗PD1拮抗活性的細胞測定 對於該測定，我們使用基於Jurkat細胞系產生並在其表面穩定表現PD-1且含有在NFAT啟動子的控制下編碼螢火蟲螢光素酶的基因的Jurkat NFAT-FLuc PD-1細胞系；和基於Raji細胞系產生並在其表面穩定表現PDL1的Raji PDL1細胞系。對IL15SA產品(CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA)、抗PD1/IL15SA (抗PD-1 Fab-CK_IL15Ra_Hc _IL15CH1FcknobLALA)和抗PD1拮抗劑(prolgolimab)對於報告細胞系統的啟動能力的影響進行了比較研究。 測定在96孔培養板中進行。每孔中的懸浮液含有濃度為1 ng/ml的Jurkat NFAT-FLuc PD-1細胞、Raji PDL1細胞、aCD3/aTAA1細胞和濃度如圖表所示的測試抗體。加入所有成分之後，將板在37℃和5% CO2 下進行溫育，並然後使用發光測定試劑盒測量孔中的螢光素酶強度。 上述免疫細胞因子的比活性測定結果表明，與治療有效的抗PD1單克隆抗體prolgolimab相比較，抗PD1/IL15SA的比活性EC50 值低一個數量級(圖13)。另外，最大活性水準(上方平臺)降低30%。抗PD1/IL15SA與prolgolimab相比較的較低比活性僅能通過與經典抗體相比較在抗PD1/IL15SA分子內的單價Fab結合PD1來解釋。這也通過根據實施例3 (表2)中的資料和對prolgolimab所指定的數值，對PD-1受體的親和力幾乎相差一個數量級得到支持。應當注意的是，作為背景觀察到IL15SA的拮抗活性，即基本上不存在。 實施例7 用於測定IL15超級激動劑對報告基因系的抗PDL1拮抗活性的細胞測定 對於該測定，我們使用基於Jurkat細胞系產生並在其表面穩定表現PD-1且含有在NFAT啟動子的控制下編碼螢火蟲螢光素酶的基因的Jurkat NFAT-FLuc PD-1細胞系；和基於Raji細胞系產生並在其表面穩定表現PDL1的Raji PDL1細胞系。對IL15SA產品(CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA)、抗PDL1/IL15SA (抗PD-L1 Fab-CK_IL15Ra_Hc _IL15CH1FcknobLALA)和抗PDL1拮抗劑(阿特珠單抗(atezolizumab))對於報告細胞系統的啟動能力的影響進行了比較研究。 測定在96孔培養板中進行。每孔中的懸浮液含有濃度為1 ng/ml的Jurkat NFAT-FLuc PD-1細胞、Raji PDL1細胞、aCD3/aTAA1細胞和濃度如圖表所示的測試抗體。加入所有成分之後，將板在37℃和5% CO2 下進行溫育，並然後使用發光測定試劑盒測量孔中的螢光素酶強度。 上述免疫細胞因子的比活性測定結果表明，與治療有效的抗PDL1單克隆抗體阿特珠單抗相比較，抗PDL1/IL15SA的比活性EC50 值低30X (圖14)。然而，最大活性水準(上方平臺)僅降低10%。抗PDL1/IL15SA與阿特珠單抗相比較的較低比活性僅能通過與經典抗體相比較在抗PDL1/IL15SA分子內的單價Fab結合PD-L1來解釋。因此，未觀察到IL15SA的顯著拮抗活性。 實施例8 用於測定在存在對腫瘤相關抗原(TAA)特異性的抗體的情況下IL15超級激動劑對自然殺傷細胞針對TAA報告基因系的抗體依賴性細胞毒性(ADCC)的作用的細胞測定 測定使用通過陰性選擇從健康供體的PBMC中分離的自然殺傷細胞。測定在96孔培養板中進行。懸浮液含有自然殺傷細胞和Raji細胞、效應抗體利妥昔單抗和濃度如圖表所示的測試抗體。所有懸浮液成分均在補充有胎牛血清和穀氨醯胺的培養基中製備。加入所有成分之後，將板在37℃和5% CO2 下進行溫育。然後收集培養液，並使用LDH測定試劑盒測量乳酸脫氫酶含量。對IL15SA產品(CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA)、抗PD1/IL15SA (抗PD-1 Fab-CK_IL15Ra_Hc _IL15CH1FcknobLALA)對於利妥昔單抗在報告細胞系統中的ADCC能力的影響進行了比較研究。 相對於增強利妥昔單抗針對TAA報告基因系的ADCC能力，上述免疫細胞因子的比活性測定結果顯示出高活性(圖15和圖16)。與單獨的利妥昔單抗相比較，在存在每種研究的候選物的情況下，如通過在其表面上具有過表現的CD20受體的溶解的Raji細胞百分比測量的利妥昔單抗依賴性ADCC的功效提高30%。根據實施例4和5中給出的結果，該作用似乎通過測定中在IL15SA和抗PD1/IL15SA的影響下活性自然殺傷系的增殖來解釋。在誤差範圍內，所有候選物的估計EC50 均相同。應當注意的是，IL15SA部分的價數以及相應的不同親合力並未顯著影響該活性，實施例4和5進一步支持這一事實。 實施例9 用於測定IL15超級激動劑對來自健康供體全血的PBMC的細胞毒性的細胞測定 通過Ficoll密度梯度離心從健康供體的全血中分離PBMC。 測定在96孔培養板中進行。懸浮液含有(每孔)新鮮分離的PBMC和濃度為0.1 μg/ml的如圖表所示的抗體。混合PBMC和抗體之後，將板在37℃和5% CO2 下溫育16小時。然後，通過用針對相應CD的螢光標記抗體將懸浮液直接染色，並使用流式細胞儀進一步分析細胞來測量懸浮液中PBMC的CD56+、CD19+、CD3+、CD4+和CD8+亞群的比例。對於CD56+、CD19+、CD3+細胞，圖表顯示其相對於測試懸浮液的所有細胞的比例，而對於CD4+、CD8+細胞，圖表顯示其相對於CD3+細胞的比例。IL15SA產品(CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA)、抗PD1/IL15SA (抗PD-1 Fab-CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcknobLALA)、抗PD1 (prolgolimab)、抗PD1 (prolgolimab)+IL15SA的混合物、抗CD20 GA101抗體對人體PBMC的細胞毒性作用進行了比較研究。 如圖17-21所示的結果顯示候選物沒有明顯的細胞毒性作用，即免疫反應細胞的數量與AB陰性對照(即沒有任何外源性抗體)相比較減少不超過10%。因此，對照抗CD20抗體顯示出CD20+ B細胞群的持續完全耗盡。因此，所有所述候選物均未表現出對人體血細胞的任何明顯的非特異性體外細胞毒性。 實施例10 熱應激條件下IL15超級激動劑聚集穩定性的測定 將在PBS緩衝液中濃度為9 mg/ml的IL15超級激動劑產品在50℃的溫度下加熱12小時。熱應激之後的聚集通過高效凝膠過濾色譜測定。色譜在基於Tosoh TSK-Gel G3000SWXL柱(7.8 mm x 30 cm，訂單號08541，帶有Tosoh TSKgel Guard SWXL預柱，6.0 mm x 4.0 cm，粒徑7 μm，訂單號08543)的HPLC系統(Agilent)上進行。洗脫以等度模式進行，流動相：50 mM NaFb，0.3 M NaCl，pH 7.0，流速為0.5 ml/min。在214和280 nm的波長下進行檢測。用PBS緩衝液(pH 7.5)將抗體樣品稀釋至濃度為~1 mg/ml。注射體積為10微升。對凝膠過濾標準校準混合物(Bio-Rad) (訂單號151-1901)進行預色譜分離。圖22顯示色譜圖，其中IL15超級激動劑顯示出高均質性(溶液中的聚集物含量不超過5%)。 實施例11 IL15超級激動劑產品在同基因B16F10黑色素瘤模型中的抗腫瘤活性的評價 使用接種有B16F10腫瘤系的免疫活性C57BL/6小鼠評價功效。將15×105 個腫瘤細胞皮下注射到組中每只動物的右側。細胞接種之後第7天(實驗的第1天)，將動物分為如表3所示的組。使用一劑以下產品評估功效：BCD-225、IL15SA /а-mPD-1 (包含IL-15SA和小鼠PD-1的Fab片段的雙特異性單克隆抗體，小鼠RMP1-14抗體的衍生物)。RMP1-14抗體的可變結構域序列由Juntendo大學醫學院的Hideo Yagita博士提供。根據實施例1合成基因和RMP1-14抗體產品可變結構域。此外，我們合成了參考產品ALT-803 [Han KP et al, Cytokine. 2011 Dec;56(3):804-10.](陽性對照)和安慰劑(陰性對照)。還評價了產品與抗小鼠PD-1抗體(a-mPD-1)組合的抗腫瘤活性。 在實驗的第1、4、8和11天，以體積為0.2 ml腹膜內注射BCD-225 (IL15SA)、IL15SA/a-mPD-1和ALT-803產品。在實驗的第2、5、9和12天以體積為0.2 ml腹膜內注射抗mPD-1產品。陰性對照組在實驗的第1、2、4、5、8、9、11和12天以體積為0.2 ml注射醋酸鈉緩衝液(圖23)。 在整個實驗中測量小鼠體重和腫瘤的線性尺寸。使用下式計算腫瘤體積：V=L×W×W×π/6。通過腫瘤生長抑制(TGI)指數評價測試產品的功效，該指數考慮陰性對照組(Vc )和產品組(Vt )的中位腫瘤體積，並使用下式計算： 實驗結果如圖24和25所示。提供截至實驗第11天的資料，因為幾乎所有實驗組中的動物在第15天均死於腫瘤負荷，使得無法可靠地評價產品的抗腫瘤活性。 根據研究結果，BCD-225產品和參考ALT-803產品顯示出可比的抗腫瘤活性，其中TGI在BCD-225組中為52%和在ALT-803組中為53%。我們觀察到，與BCD-225和ALT-803組中的TGI值相比較，IL15SA/抗mPD-1雙特異性抗體組中的TGI值呈增加趨勢。在實驗的第11天，IL15SA/抗mPD-1組中的TGI為58%。 在實驗的第11天，產品組合BCD-225 +抗mPD-1和ALT-803 +抗mPD-1組的TGI值為72%，而對於產品組合IL15SA/a-mPD和抗mPD-1組為69%。與單一治療中的這些產品的活性相比較，所得TGI值表明測試產品和抗mPD-1的組合具有更明顯的抗腫瘤活性。 實施例12 在同基因B16F10黑色素瘤模型中用IL15超級激動劑和ALT803產品的小鼠的相對死亡率的評價和分析 使用如實施例11中所述的模型和動物對使用IL15超級激動劑產品後小鼠的死亡率進行了比較評價。通過計數處於痛苦狀態的死亡或安樂死的動物來評價存活。 結果如表4所示。從所得資料可以得出，就小鼠數量和存活時間而言，與IL15SA (BCD225)、IL15SA+抗mPD-1、ALT-803、ALT-803+抗mPD-1的那些相比較，IL15SA/a-mPD-1和IL15SA/a-mPD-1 +抗mPD-1產品組的死亡率平均較低。所得死亡率值表明，與單特異性二價IL15SA和ALT-803相比較，IL15SA/a-mPD-1雙特異性免疫細胞因子的毒性可能不太明顯。抗PD1抗體的存在與否對死亡率沒有統計學上的顯著影響。此外，對來自IL15SA和ALT-803批次的死亡小鼠器官的檢查顯示，肝臟中存在水腫性營養不良伴有肝細胞壞死、竇樣受壓；淋巴組織細胞浸潤實質和淋巴細胞竇中聚集。這些研究結果與先前報導的基於IL15的超級激動劑引起小鼠肝損傷的能力的文獻資料一致。
[圖1.]包含IL-15/IL-15Rα異二聚體蛋白複合物的免疫細胞因子形式(CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA)。 [圖2.]包含IL-15/IL-15Rα異二聚體蛋白複合物的免疫細胞因子形式(CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcLALA)。 [圖3.]包含IL-15/IL-15Rα異二聚體蛋白複合物和特異性地抑制PD-1途徑的免疫調節抗體的免疫細胞因子形式(Fab-CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcknobLALA)。 “鈕”應理解為意指在CH3結構域中於第一Fc變體和第二Fc變體之間形成“鈕入孔”結構的突變。 [圖4.]包含IL-15/IL-15Rα異二聚體蛋白複合物和特異性地抑制PD-1途徑的免疫調節抗體的免疫細胞因子形式(Fab-CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcknobLALA)。 “鈕”應理解為意指在CH3結構域中於第一Fc變體和第二Fc變體之間形成“鈕入孔”結構的突變。 [圖5.]pEE-IL15Ra-CK載體。 AmpR為提供對氨苄西林的抗性的β-內醯胺酶基因， pUC起點為細菌中的pUC複製起點， CMV啟動子為巨細胞病毒早期基因的啟動子， 前導為前導序列， IL15Ra為編碼介白素15受體次單元α的基因， CK為編碼輕鏈恆定結構域的基因， 多聚腺苷酸(Poly A)為多聚腺苷酸化信號序列，用於增加mRNA的穩定性， OriP為細菌中的複製起點，或 細菌細胞中的高拷貝數ColE1/pMB1/pBR322/pUC複製起點。 [圖6.]pEE-IL15-CH1-Fc-LALA載體。 AmpR為提供對氨苄西林的抗性的β-內醯胺酶基因， pUC起點為細菌中的pUC複製起點， CMV啟動子為巨細胞病毒早期基因的啟動子， 前導為前導序列， IL15為編碼介白素15的基因， CH1為編碼第一重鏈恆定結構域的基因， Fc-LALA為編碼攜帶LALA突變(Fc片段的CH2恆定結構域中的L234A和L235A突變)的Fc片段的基因， 多聚腺苷酸(Poly A)為多聚腺苷酸化信號序列，用於增加mRNA的穩定性， OriP為細菌中的複製起點，或 細菌細胞中的高拷貝數ColE1/pMB1/pBR322/pUC複製起點。 [圖7.]pEE-BCD100-02-VL-CK載體。 AmpR為提供對氨苄西林的抗性的β-內醯胺酶基因， pUC起點為細菌中的pUC複製起點， CMV啟動子為巨細胞病毒早期基因的啟動子， 前導為前導序列， aPD1-VL為編碼特異性地結合於PD1的抗體輕鏈的基因， CK為編碼輕鏈恆定結構域的基因， 多聚腺苷酸(Poly A)為多聚腺苷酸化信號序列，用於增加mRNA的穩定性， OriP為細菌中的複製起點，或 細菌細胞中的高拷貝數ColE1/pMB1/pBR322/pUC複製起點。 [圖8.]pEE-BCD100-02-VH-CH1-Fc-hole-LALA載體。 AmpR為提供對氨苄西林的抗性的β-內醯胺酶基因， pUC起點為細菌中的pUC複製起點， 啟動子為巨細胞病毒早期基因的啟動子， 前導為前導序列， aPD1-VH為編碼特異性地結合於PD1的抗體重鏈的可變結構域的基因， CH1為編碼第一重鏈恆定結構域的基因， Fc-hole-LALA為編碼攜帶形成“孔”的突變和LALA突變(Fc片段的CH2恆定結構域中的L234A和L235A突變)的Fc片段的基因， STOP為終止密碼子， OriP為細菌中的複製起點，或 細菌細胞中的高拷貝數ColE1/pMB1/pBR322/pUC複製起點。 [圖9.]pEE-IL15-CH1-Fc-knob-LALA載體。 AmpR為提供對氨苄西林的抗性的β-內醯胺酶基因， pUC起點為細菌中的pUC複製起點， CMV啟動子為巨細胞病毒早期基因的啟動子， 前導為前導序列， IL15為編碼介白素15的基因， CH1為編碼第一重鏈恆定結構域的基因， Fc-knob-LALA為編碼攜帶形成“鈕”的突變和LALA突變(Fc片段的CH2恆定結構域中的L234A和L235A突變)的Fc片段的基因， STOP為終止密碼子， OriP為細菌中的複製起點，或 細菌細胞中的高拷貝數ColE1/pMB1/pBR322/pUC複製起點。 [圖10A.]用β-巰基乙醇的SDS凝膠電泳 1. 對照抗體5 µl 2. Fermentas未染色標誌物 3. - 4. 純化之前含有CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA的生長培養基10 µl 5. 純化後含有CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA的生長培養基10 µl 6. 純化的CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA 10 µl 7. - 8. 純化之前含有CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcLALA的生長培養基10 µl 9. 純化後含有CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcLALA的生長培養基10 µl 10. 純化的CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcLALA 10 µl [圖10B.]未用β-巰基乙醇的SDS凝膠電泳 1. 純化的CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA 10 µl 2. 純化的CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcLALA 10 µl 3. Fermentas未染色標誌物10 µl 4. 對照抗體5 µl [圖11.]增殖活性的測量。測定中使用NK-92細胞系。測定在96孔培養板中進行。懸浮液包含NK-92細胞、濃度如圖表所示的測試抗體。所有懸浮液成分均在補充有胎牛血清和穀氨醯胺的RPMI-1640培養基中製備。加入所有成分之後，將板在37℃和5% CO2 下進行溫育。然後將Alamar Blue添加到孔中。溫育後，測量孔中的螢光強度。 [圖12.]增殖活性的測量。測定使用通過陰性選擇從健康供體的PBMC中分離的分離的自然殺傷細胞。測定在96孔培養板中進行。懸浮液包含自然殺傷細胞、濃度如圖表所示的測試抗體。所有懸浮液成分均在補充有自體人體血漿的培養基中製備。加入所有成分之後，將板在37℃和5% CO2 下進行溫育。然後將Alamar Blue添加到孔中。溫育後，測量孔中的螢光強度。 [圖13.]aPD1比活性的測量。對於該測定，我們使用基於Jurkat細胞系產生並在其表面穩定表現PD-1且含有在NFAT啟動子的控制下編碼螢火蟲螢光素酶的基因的Jurkat NFAT-FLuc PD-1細胞系；和基於Raji細胞系產生並在其表面穩定表現PDL1的Raji PDL1細胞系。測定在96孔培養板中進行。每孔中的懸浮液含有濃度為1 ng/ml的Jurkat NFAT-FLuc PD-1細胞、Raji PDL1細胞、aCD3/aTAA1細胞和濃度如圖表所示的測試抗體。加入所有成分之後，將板在37℃和5% CO2 下進行溫育，並然後使用發光測定試劑盒測量孔中的螢光素酶強度。 [圖14.]抗PDL1/IL15SA抗體對報告細胞系的比活性的測定。 [圖15.]自然殺傷細胞對ADCC的作用的測定。測定使用通過陰性選擇從健康供體的PBMC中分離的自然殺傷細胞。測定在96孔培養板中進行。懸浮液含有自然殺傷細胞和Raji細胞、效應抗體利妥昔單抗和濃度如圖表所示的測試抗體。所有懸浮液成分均在補充有胎牛血清和穀氨醯胺的培養基中製備。加入所有成分之後，將板在37℃和5% CO2 下進行溫育。然後收集培養液，並使用LDH測定試劑盒測量乳酸脫氫酶含量。 [圖16.]免疫細胞因子相對於增強利妥昔單抗針對TAA報告基因系的ADCC能力的比活性的測定結果。 [圖17.]包含IL-15/IL-15Rα (IL15SA)異二聚體蛋白複合物的免疫細胞因子變體對NK細胞的細胞毒性的研究。 結果顯示候選物沒有明顯的細胞毒性作用，即免疫反應細胞的數量與AB陰性對照(沒有任何外源性抗體)相比較減少不超過10%。 [圖18.]IL15SA變體對B細胞的細胞毒性的研究。 結果顯示候選物沒有明顯的細胞毒性作用，即免疫反應細胞的數量與AB陰性對照(沒有任何外源性抗體)相比較減少不超過10%。 [圖19.]IL15SA變體對CD3+細胞的細胞毒性的研究。 結果顯示候選物沒有明顯的細胞毒性作用，即免疫反應細胞的數量與AB陰性對照(沒有任何外源性抗體)相比較減少不超過10%。 [圖20.]IL15SA變體對CD4+細胞的細胞毒性的研究。 結果顯示候選物沒有明顯的細胞毒性作用，即免疫反應細胞的數量與AB陰性對照(沒有任何外源性抗體)相比較減少不超過10%。 [圖21.]IL15SA變體對CD8+細胞的細胞毒性的研究。 結果顯示候選物沒有明顯的細胞毒性作用，即免疫反應細胞的數量與AB陰性對照(沒有任何外源性抗體)相比較減少不超過10%。 [圖22.]色譜圖。該色譜圖顯示包含基於IL-15/IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物的免疫細胞因子(IL15超級激動劑)的高均質性(溶液中的聚集物含量不超過5%)。 [圖23.]用於測定免疫細胞因子產品在鼠體內腫瘤模型中的抗腫瘤活性的實驗方案，其免疫細胞因子包含基於IL-15/IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物(BCD-225)。 [圖24.]用於測定免疫細胞因子產品變體在鼠體內腫瘤模型中的抗腫瘤活性的實驗結果，其免疫細胞因子包含基於IL-15/IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物(BCD-225) (圖表)。 [圖25.]用於測定免疫細胞因子產品變體在鼠體內腫瘤模型中的抗腫瘤活性的實驗結果，其免疫細胞因子包含基於IL-15/IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物(BCD-225) (圖表)。

Claims (17)

  1. 一種用於刺激IL-15Rβ/γ陽性細胞的活化和/或增殖的免疫細胞因子，其包含基於IL-15/IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物，該異二聚體蛋白複合物包含：1)連接於該抗體輕鏈恆定結構域的IL-15Rα具有由SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：19表示的氨基酸序列，和連接於該抗體重鏈恆定結構域的IL-15具有由SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：20表示的氨基酸序列，或2)連接於該抗體重鏈恆定結構域的該IL-15Rα具有由SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：22表示的氨基酸序列，和連接於該抗體輕鏈恆定結構域的該IL-15具有由SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：21表示的氨基酸序列。
  2. 如請求項1的免疫細胞因子，其包含上述兩種基於IL-15/IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物。
  3. 如請求項1的免疫細胞因子，其用作用於治療癌症或自身免疫性疾病的治療劑。
  4. 如請求項3的免疫細胞因子，其用作用於治療癌症的治療劑。
  5. 一種用於刺激IL-15Rβ/γ陽性細胞的活化和/或增殖的免疫細胞因子，其包含基於IL-15/IL-15Rα的異二聚體蛋白複合物和特異性地抑制PD-1途徑的免疫調節抗體或其抗原結合片段，其中：1)a)基於IL-15/IL-15Rα的該異二聚體蛋白複合物包 含：連接於該抗體輕鏈恆定結構域的IL-15Rα具有由SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：19表示的氨基酸序列，和連接於該抗體重鏈恆定結構域的IL-15具有由SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：23表示的氨基酸序列；b)該免疫調節抗體包含：包含由SEQ ID NO：7表示的氨基酸序列的重鏈；包含由SEQ ID NO：8表示的氨基酸序列的輕鏈；或2)a)連接於該抗體重鏈恆定結構域的該IL-15Rα具有由SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：24表示的氨基酸序列，和連接於該抗體輕鏈恆定結構域的該IL-15具有由SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：21表示的氨基酸序列；b)該免疫調節抗體包含：包含由SEQ ID NO：7表示的氨基酸序列的重鏈；包含由SEQ ID NO：8表示的氨基酸序列的輕鏈。
  6. 如請求項5的免疫細胞因子，其用於治療腫瘤性或自身免疫性疾病。
  7. 如請求項6的免疫細胞因子，其用於治療腫瘤性疾病。
  8. 一種編碼如請求項1至7中任何一項的免疫細胞因子的分離的核酸。
  9. 如請求項8的核酸，其中該核酸為DNA。
  10. 一種包含如請求項8-9中任何一項的核 酸的表現載體。
  11. 一種用於產生宿主細胞以產生如請求項1至7中任何一項的免疫細胞因子的方法，其包括用如請求項10的載體轉化該細胞。
  12. 一種包含如請求項8-9中任何一項的核酸的用於產生如請求項1至7中任何一項的免疫細胞因子的宿主細胞。
  13. 一種用於產生包含如請求項1至7中任何一項的免疫細胞因子的產品的方法，其包括在足以產生該免疫細胞因子的條件下，在培養基中培養如請求項12的宿主細胞，如果需要的話，隨後分離和純化所產生的免疫細胞因子。
  14. 一種用於刺激IL-15Rβ/γ陽性細胞的活化和/或增殖的藥用組合物，其包含治療有效量的如請求項1至7中任何一項的免疫細胞因子與一種或多種藥學上可接受的賦形劑的組合。
  15. 如請求項14的藥用組合物，其用於治療腫瘤性或自身免疫性疾病。
  16. 如請求項15的藥用組合物，其用於治療腫瘤性疾病。
  17. 如請求項16的藥用組合物，其中該腫瘤性疾病選自：HNSCC(頭頸部鱗狀細胞癌)、子宮頸癌、原發性不明癌、膠質母細胞瘤、食道癌、膀胱癌、TNBC(三陰性乳腺癌)、CRC(結直腸癌)、肝細胞癌、黑色素瘤、 NSCLC(非小細胞肺癌)、腎癌、卵巢癌、MSI CRC(具有微衛星不穩定性的結直腸癌)、白血病(急性白血病或成髓細胞性白血病)、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、黑色素瘤、乳腺癌、結直腸癌、前列腺癌、膀胱癌、肉瘤、肝細胞癌、膠質母細胞瘤、霍奇金淋巴瘤、T和B細胞型急性淋巴細胞白血病、小細胞肺癌、急性成髓細胞性白血病、難治性非霍奇金B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、邊緣區B細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、胰腺癌、卵巢癌、急性成髓細胞性白血病和高危骨髓增生異常症候群。
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