[go: up one dir, main page]

TWI867731B - 新的基因組安全港及其用途 - Google Patents

新的基因組安全港及其用途 Download PDF

Info

Publication number
TWI867731B
TWI867731B TW112133738A TW112133738A TWI867731B TW I867731 B TWI867731 B TW I867731B TW 112133738 A TW112133738 A TW 112133738A TW 112133738 A TW112133738 A TW 112133738A TW I867731 B TWI867731 B TW I867731B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
polynucleotide
nucleic acid
seq
cell
acid region
Prior art date
Application number
TW112133738A
Other languages
English (en)
Other versions
TW202419631A (zh
Inventor
崔用珍
金起撤
安炅勳
柳宗相
Original Assignee
南韓商大熊製藥股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 南韓商大熊製藥股份有限公司 filed Critical 南韓商大熊製藥股份有限公司
Publication of TW202419631A publication Critical patent/TW202419631A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI867731B publication Critical patent/TWI867731B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/102—Mutagenizing nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
    • C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
    • C12N15/907—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination in mammalian cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases [RNase]; Deoxyribonucleases [DNase]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases [RNase]; Deoxyribonucleases [DNase]
    • C12N9/222—Clustered regularly interspaced short palindromic repeats [CRISPR]-associated [CAS] enzymes
    • C12N9/226—Class 2 CAS enzyme complex, e.g. single CAS protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/20—Type of nucleic acid involving clustered regularly interspaced short palindromic repeats [CRISPR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/30—Vector systems comprising sequences for excision in presence of a recombinase, e.g. loxP or FRT
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/42—Vector systems having a special element relevant for transcription being an intron or intervening sequence for splicing and/or stability of RNA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/50—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating RNA stability, not being an intron, e.g. poly A signal

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本發明關於一種新的基因組安全港（GSH；genomic safe harbor）及透過使用其來表現外源基因的方法、以及透過所述方法使外源基因導入的細胞，使用本發明的新的基因組安全港來進行表現的方法在不干擾鄰近基因的轉錄的情況下使外源基因安全導入並長期穩定地表現外源基因，從而能夠使多種外源基因在細胞內表現而沒有安全問題。

Description

新的基因組安全港及其用途
本發明關於一種新的基因插入用基因組安全港（GSH；genomic safe harbor）及透過使用其來表現外源基因的方法。具體地，本發明的基因組安全港可使外源基因安全導入並穩定地表現外源基因，從而能夠使多種外源基因在細胞內表現而沒有安全問題。
作為治療人類疾病的有效手段之一，具有將外源基因（轉基因（transgene））插入至人類基因組中的方法。插入至人類細胞的基因可透過改變宿主細胞的特性來應用於疾病治療，但需要使用用於基因精確遞送和持續表現的技術。
在人類基因組中插入基因的最常見方法是使用反轉錄病毒或慢病毒載體。然而，這些載體傾向於插入轉錄啟動的基因周圍，因此宿主細胞發生突變的可能性高。若突變發生在癌症相關基因中導致其表現受到干擾，則可誘發多種癌症。
作為病毒載體的替代方案，正在使用基於CRISPR-Cas9和同源介導修復（homology-directed repair，HDR）的位點特異性基因插入系統。CRISPR是常間回文重複序列叢集（clustered regularly interspaced short palindromic repeats）的縮寫，是一種作為細菌適應性免疫系統的基因序列。當細菌感染病毒時，從CRISPR表現的引導RNA（guide RNA，gRNA）與作為核酸水解酶的Cas9結合，識別並切割病毒基因組中與引導RNA（gRNA）具有互補的序列的部分，以防止感染。而HDR是如下過程：即當DNA雙鏈斷裂（double strand break：DSB）發生時，透過使用與該位點序列具有同源性的DNA片段等來修復受損DNA的過程。若透過gRNA和Cas9在基因組中誘導雙鏈斷裂（DSB）並導入與外源基因具有同源序列的供體載體，則可誘導精確的基因插入。
隨著CRISPR-Cas9等技術的使用，亦對基因組上的適合導入外源基因的區域進行了研究。在不干擾相鄰基因轉錄的情況下，可維持外源基因表現的區域被稱為基因組安全港（genomic safe harbor：GSH）。已研究出的19號染色體上的腺相關病毒整合位點1（adeno-associated virus integration site 1，AAVS1）可被作為基因組安全港（GSH），但由於其位於基因密集的區域，有可能干擾鄰近基因的轉錄（Sadelain et al., 2012），且導入的外源基因的表現有被抑制的傾向（Ordovás et al., 2015）。因此，為了外源基因的安全導入和穩定地表現，需要發掘新的基因組安全港（GSH）候選物。
本發明人為了尋找適合新的基因組安全港的區域，進行了多種研究，結果尋找到不干擾鄰近基因的轉錄並穩定表現外源基因的新的基因組安全港區域，從而完成了本發明。
本發明要解決的技術問題 本發明的目的在於，提供一種新的基因組安全港，其使得外源基因安全導入並穩定地表現。 本發明提供一種使用新的基因組安全港在細胞中表現外源基因的方法。
技術手段 本發明提供一種在細胞中表現外源多核苷酸的方法，其包括如下的步驟：透過在細胞中導入編碼核酸酶的多核苷酸來表現核酸酶；透過所述核酸酶選自以下群組中的一種以上的核酸區域特異性結合來切割核酸區域，其中，所述群組由人基因組的9號染色體中的第24894446位至第24894525位的第一核酸區域、3號染色體中的第9064276位至第9064355位的第二核酸區域及4號染色體中的第120174229位至第120174308位的第三核酸區域組成；以及在所述細胞中導入外源多核苷酸，並插入至所述核酸區域的切割位點。
在一實施方式中，所述細胞可以是來源於人體血液、體液、組織、幹細胞或癌（carcinoma）的細胞。
在一實施方式中，所述細胞可以是體細胞、生殖細胞、幹細胞、癌細胞或細胞株。
在一實施方式中，所述核酸酶可以是選自鋅指核酸酶（Zinc Finger Nuclease）、因子類轉錄活化因子核酸酶（TALENs：Transcriptor Activator-Like Effector Nuclease）及RGEN（RNA-guided engineered nucleases）中的一種以上。
在一實施方式中，所述核酸酶可以是Cas9。
在一實施方式中，編碼所述核酸酶的多核苷酸可包含選自DNA結合結構域、引導RNA、切割結構域中的一種以上。
在一實施方式中，在所述透過在細胞中導入編碼核酸酶的多核苷酸來表現核酸酶的步驟之後，更可包括在所述細胞中導入編碼引導RNA的多核苷酸的步驟。
在一實施方式中，所述外源多核苷酸可包含編碼多胜肽的多核苷酸或編碼功能性多核糖核苷酸的多核苷酸。
在一實施方式中，所述功能性多核糖核苷酸可以是選自由微小RNA（miRNA）、短髮夾RNA（shRNA）、piwi相互作用RNA（piRNA）、核仁小分子RNA（snoRNA）、小核RNA（snRNA）、細胞外RNA（exRNA）組成的群組中的一種以上。
在一實施方式中，所述外源多核苷酸可編碼選自由抗體、酶、生長因子、受體、激素、淋巴因子、細胞因子、信號轉導因子、報導分子（reporter）及其片段組成的群組中的一種以上。
在一實施方式中，所述外源多核苷酸可以是音蝟因子（Sonic hedgehog；SHH）。
在一實施方式中，所述外源多核苷酸可包含選自由開放閱讀框（open reading frame）、多腺苷酸化序列、啟動子、操縱子、增強子、轉錄調節因子、信號序列及一種以上的同源性區域組成的群組中的一種以上。
在一實施方式中，在透過所述核酸酶與選自以下群組中的一種以上的核酸區域特異性結合來切割核酸區域的步驟之後（所述群組由人基因組的9號染色體中的第24894446位至第24894525位的第一核酸區域、3號染色體中的第9064276位至第9064355位的第二核酸區域及4號染色體中的第120174229位至第120174308位的第三核酸區域組成），更可包括將左同源臂（left homology arm；LHA）及右同源臂（right homology arm；RHA）導入外源多核苷酸中的步驟，其中，所述左同源臂是在第一至第三核酸區域的切割位點中的一種以上結合至從切割位點到左側1kb的區域的部位，所述右同源臂是在第一至第三核酸區域的切割位點中的一種以上結合至從切割位點到右側1kb的區域的部位。
在一實施方式中，在透過所述核酸酶與選自以下群組中的一種以上的核酸區域特異性結合來切割核酸區域的步驟之後（所述組由人基因組的9號染色體中的第24894446位至第24894525位的第一核酸區域、3號染色體中的第9064276位至第9064355位的第二核酸區域及4號染色體中的第120174229位至第120174308位的第三核酸區域組成），更可包括將左同源臂（left homology arm；LHA）及右同源臂（right homology arm；RHA）導入外源多核苷酸中的步驟，其中，所述左同源臂是在第一至第三核酸區域的切割位點中的一種以上結合至從切割位點到左側0.8kb的區域的部位，所述右同源臂是在第一至第三核酸區域的切割位點中的一種以上結合至從切割位點到右側0.8kb的區域的部位。
本發明提供一種透過一種以上的核酸酶將外源多核苷酸插入至細胞的基因組中的細胞，在所述細胞的基因組中，所述外源多核苷酸可以插入至選自人基因組的9號染色體中的第24894446位至第24894525位的第一核酸區域、3號染色體中的第9064276位至第9064355位的第二核酸區域及4號染色體中的第120174229位至第120174308位的第三核酸區域中的一種以上。
本發明提供一種用於在細胞中表現外源多核苷酸的組合物，其包含：編碼與選自人基因組的9號染色體中的第24894446位至第24894525位的第一核酸區域、3號染色體中的第9064276位至第9064355位的第二核酸區域及4號染色體中的第120174229位至第120174308位的第三核酸區域中的一種以上特異性結合的核酸酶的多核苷酸；以及外源多核苷酸。
在一實施方式中，所述組合物更可包含左同源臂（left homology arm；LHA）及右同源臂（right homology arm；RHA），所述左同源臂是在第一至第三核酸區域的切割位點中的一種以上結合至從切割位點到左側1kb的區域的部位，所述右同源臂是在第一至第三核酸區域的切割位點中的一種以上結合至從切割位點到右側1kb的區域的部位。
在一實施方式中，所述外源多核苷酸可以是音蝟因子（Sonic hedgehog；SHH）。
本發明提供一種多核苷酸，其包含與SEQ ID NO：3至SEQ ID NO：5的序列中的任一種序列具有90%、95%或99%以上的序列同源性的序列。
本發明提供一種多核苷酸，其包含SEQ ID NO：3至SEQ ID NO：5的序列中的任一種序列。
在一實施方式中，所述SEQ ID NO：3的序列可與人基因組的9號染色體中的第24894446位至第24894525位的核酸區域特異性結合。
在一實施方式中，所述SEQ ID NO：4的序列可與人基因組的3號染色體中的第9064276位至第9064355位的核酸區域特異性結合。
在一實施方式中，所述SEQ ID NO：5的序列可與人基因組的4號染色體中的第120174229位至第120174308位的核酸區域特異性結合。
本發明提供一種多核苷酸，其包含SEQ ID NO：14及SEQ ID NO：15的序列。
本發明提供一種多核苷酸，其包含SEQ ID NO：16及SEQ ID NO：17的序列。
本發明提供一種多核苷酸，其包含SEQ ID NO： 17及SEQ ID NO：18的序列。
本發明提供一種載體，其包含所述多核苷酸。
有益效果 本發明的基因組安全港的特徵在於，即使導入外源基因亦不干擾相鄰基因的轉錄，並能夠穩定維持外源基因的表現。因此，本發明的基因組安全港可用於多種外源基因的細胞內表現。
以下，將參照圖式，對本發明的實施方式及實施例進行詳細說明，以使本發明所屬技術領域中具有通常知識者能夠容易實施。然而，本發明可以以多種形式實現，並不限於在此說明的實施方式及實施例。
在整個本發明說明書中，當提及某部分「包括」其他部分時，只要沒有特別相反的記載，這意味著更可包括其他的構成要素，而並非意味著排除其他的構成要素。
本發明中使用的術語「基因組安全港」是指可在不干擾相鄰基因的轉錄的情況下，維持外源基因的表現的區域。
本發明中使用的術語「核酸酶」是指用於基因組編輯或基因編輯的蛋白質，例如，包含鋅指核酸酶（Zinc Finger Nuclease）、因子類轉錄活化因子核酸酶（TALENs：Transcriptor Activator-Like Effector Nuclease）、RGEN（RNA-guided engineered nucleases），但不限於此。
本發明中使用的術語「外源多核苷酸」是指人為導入的多核苷酸。
本發明中使用的術語「引導RNA」是指對標靶DNA具有特異性的RNA，可透過與標靶DNA的互補結合來使核酸酶切割標靶DNA。
本發明中使用的術語「左同源性 序列（left homology arm；LHA）」是指能夠與在人基因組DNA中被核酸酶切割的部位的左端結合的序列，較佳地，可以為1000個鹼基對，更佳地，可以為800個鹼基對。
本發明中使用的術語「右同源性 序列（right homology arm；RHA）」是指能夠與在人基因組DNA中被核酸酶切割的部位的右端結合的序列，較佳地，可以為1000個鹼基對，更佳地，可以為800個鹼基對。
本發明中使用的術語「載體」是指在宿主細胞內可遞送一種以上的關注基因（複數個）或序列（複數個）的構築體，且較佳為可表現其的構築體。例如，包含病毒載體、裸DNA或RNA表現載體、質粒、黏粒或噬菌體載體、與陽離子縮合劑締合的DNA或RNA表現載體、包裝（packaging）在脂質體中的DNA或RNA表現載體及特定真核細胞，例如生產細胞，但不限於此。
本發明中使用的術語「預防」是指透過施用組合物來抑制或延遲疾病的發病的所有行為，「治療」是指透過施用組合物來使疑似疾病及發病個體的症狀好轉或發生有利變化的所有行為。
以下，透過實施例，對本發明進行更詳細地說明，但以下實施例僅用於說明的目的，並不限定本發明的範圍。
[實施例1] 用於基因組安全港表現的載體的製備
準備SEQ ID NO：1的gRNA/Cas9表現載體，其包含gRNA序列，並可表現Cas9蛋白質，gRNA/Cas9表現載體可透過使Cas9作用於與gRNA互補的序列來誘導DNA雙鏈斷裂（Double-Strand Break；DSB）。
如圖1所示，gRNA/Cas9表現載體包含複製起點（origin of replication：ori）、U6啟動子、gRNA骨架（scaffold）、巨細胞病毒啟動子（CMV promoter）、雞β-肌動蛋白啟動子（chicken beta actin promoter）、Cas9基因、嘌呤黴素（puromycin）抗性基因、Poly（A）尾（tail）及氨苄西林（ampicillin）抗性基因。
準備SEQ ID NO：2的供體載體，其能使編碼標靶蛋白質的基因序列插入基因組安全港（GSH）中。在本研究中，透過插入編碼發出螢光的綠色螢光蛋白（green fluorescent protein，GFP）的基因序列來測定了系統的效率。如圖2所示，供體載體包含複製起點、基因組安全港同源性區域、嘌呤黴素（puromycin）抗性基因、雞β-肌動蛋白啟動子、巨細胞病毒啟動子、綠色螢光蛋白（GFP）基因、cHS4絕緣子、卡那黴素（kanamycin）抗性基因，並且所述同源性區域依據基因組安全港（GSH）位點的不同而以不同的方式製備。
[表1]
SEQ ID NO： 名稱 鹼基序列
1 gRNA/Cas9表現載體 GAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTGGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCGGGTCTTCGAGAAGACCTGTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAGTTAAAATAAGGCTAGTCCGTTATCAACTTGAAAAAGTGGCACCGAGTCGGTGCTTTTTTGTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAGTTAAAATAAGGCTAGTCCGTTTTTAGCGCGTGCGCCAATTCTGCAGACAAATGGCTCTAGAGGTACCCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTGTGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGCGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCTGAGCAAGAGGTAAGGGTTTAAGGGATGGTTGGTTGGTGGGGTATTAATGTTTAATTACCTGGAGCACCTGCCTGAAATCACTTTTTTTCAGGTTGGACCGGTGCCACCATGGACTATAAGGACCACGACGGAGACTACAAGGATCATGATATTGATTACAAAGACGATGACGATAAGATGGCCCCAAAGAAGAAGCGGAAGGTCGGTATCCACGGAGTCCCAGCAGCCGACAAGAAGTACAGCATCGGCCTGGACATCGGCACCAACTCTGTGGGCTGGGCCGTGATCACCGACGAGTACAAGGTGCCCAGCAAGAAATTCAAGGTGCTGGGCAACACCGACCGGCACAGCATCAAGAAGAACCTGATCGGAGCCCTGCTGTTCGACAGCGGCGAAACAGCCGAGGCCACCCGGCTGAAGAGAACCGCCAGAAGAAGATACACCAGACGGAAGAACCGGATCTGCTATCTGCAAGAGATCTTCAGCAACGAGATGGCCAAGGTGGACGACAGCTTCTTCCACAGACTGGAAGAGTCCTTCCTGGTGGAAGAGGATAAGAAGCACGAGCGGCACCCCATCTTCGGCAACATCGTGGACGAGGTGGCCTACCACGAGAAGTACCCCACCATCTACCACCTGAGAAAGAAACTGGTGGACAGCACCGACAAGGCCGACCTGCGGCTGATCTATCTGGCCCTGGCCCACATGATCAAGTTCCGGGGCCACTTCCTGATCGAGGGCGACCTGAACCCCGACAACAGCGACGTGGACAAGCTGTTCATCCAGCTGGTGCAGACCTACAACCAGCTGTTCGAGGAAAACCCCATCAACGCCAGCGGCGTGGACGCCAAGGCCATCCTGTCTGCCAGACTGAGCAAGAGCAGACGGCTGGAAAATCTGATCGCCCAGCTGCCCGGCGAGAAGAAGAATGGCCTGTTCGGAAACCTGATTGCCCTGAGCCTGGGCCTGACCCCCAACTTCAAGAGCAACTTCGACCTGGCCGAGGATGCCAAACTGCAGCTGAGCAAGGACACCTACGACGACGACCTGGACAACCTGCTGGCCCAGATCGGCGACCAGTACGCCGACCTGTTTCTGGCCGCCAAGAACCTGTCCGACGCCATCCTGCTGAGCGACATCCTGAGAGTGAACACCGAGATCACCAAGGCCCCCCTGAGCGCCTCTATGATCAAGAGATACGACGAGCACCACCAGGACCTGACCCTGCTGAAAGCTCTCGTGCGGCAGCAGCTGCCTGAGAAGTACAAAGAGATTTTCTTCGACCAGAGCAAGAACGGCTACGCCGGCTACATTGACGGCGGAGCCAGCCAGGAAGAGTTCTACAAGTTCATCAAGCCCATCCTGGAAAAGATGGACGGCACCGAGGAACTGCTCGTGAAGCTGAACAGAGAGGACCTGCTGCGGAAGCAGCGGACCTTCGACAACGGCAGCATCCCCCACCAGATCCACCTGGGAGAGCTGCACGCCATTCTGCGGCGGCAGGAAGATTTTTACCCATTCCTGAAGGACAACCGGGAAAAGATCGAGAAGATCCTGACCTTCCGCATCCCCTACTACGTGGGCCCTCTGGCCAGGGGAAACAGCAGATTCGCCTGGATGACCAGAAAGAGCGAGGAAACCATCACCCCCTGGAACTTCGAGGAAGTGGTGGACAAGGGCGCTTCCGCCCAGAGCTTCATCGAGCGGATGACCAACTTCGATAAGAACCTGCCCAACGAGAAGGTGCTGCCCAAGCACAGCCTGCTGTACGAGTACTTCACCGTGTATAACGAGCTGACCAAAGTGAAATACGTGACCGAGGGAATGAGAAAGCCCGCCTTCCTGAGCGGCGAGCAGAAAAAGGCCATCGTGGACCTGCTGTTCAAGACCAACCGGAAAGTGACCGTGAAGCAGCTGAAAGAGGACTACTTCAAGAAAATCGAGTGCTTCGACTCCGTGGAAATCTCCGGCGTGGAAGATCGGTTCAACGCCTCCCTGGGCACATACCACGATCTGCTGAAAATTATCAAGGACAAGGACTTCCTGGACAATGAGGAAAACGAGGACATTCTGGAAGATATCGTGCTGACCCTGACACTGTTTGAGGACAGAGAGATGATCGAGGAACGGCTGAAAACCTATGCCCACCTGTTCGACGACAAAGTGATGAAGCAGCTGAAGCGGCGGAGATACACCGGCTGGGGCAGGCTGAGCCGGAAGCTGATCAACGGCATCCGGGACAAGCAGTCCGGCAAGACAATCCTGGATTTCCTGAAGTCCGACGGCTTCGCCAACAGAAACTTCATGCAGCTGATCCACGACGACAGCCTGACCTTTAAAGAGGACATCCAGAAAGCCCAGGTGTCCGGCCAGGGCGATAGCCTGCACGAGCACATTGCCAATCTGGCCGGCAGCCCCGCCATTAAGAAGGGCATCCTGCAGACAGTGAAGGTGGTGGACGAGCTCGTGAAAGTGATGGGCCGGCACAAGCCCGAGAACATCGTGATCGAAATGGCCAGAGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGACAGAAGAACAGCCGCGAGAGAATGAAGCGGATCGAAGAGGGCATCAAAGAGCTGGGCAGCCAGATCCTGAAAGAACACCCCGTGGAAAACACCCAGCTGCAGAACGAGAAGCTGTACCTGTACTACCTGCAGAATGGGCGGGATATGTACGTGGACCAGGAACTGGACATCAACCGGCTGTCCGACTACGATGTGGACCATATCGTGCCTCAGAGCTTTCTGAAGGACGACTCCATCGACAACAAGGTGCTGACCAGAAGCGACAAGAACCGGGGCAAGAGCGACAACGTGCCCTCCGAAGAGGTCGTGAAGAAGATGAAGAACTACTGGCGGCAGCTGCTGAACGCCAAGCTGATTACCCAGAGAAAGTTCGACAATCTGACCAAGGCCGAGAGAGGCGGCCTGAGCGAACTGGATAAGGCCGGCTTCATCAAGAGACAGCTGGTGGAAACCCGGCAGATCACAAAGCACGTGGCACAGATCCTGGACTCCCGGATGAACACTAAGTACGACGAGAATGACAAGCTGATCCGGGAAGTGAAAGTGATCACCCTGAAGTCCAAGCTGGTGTCCGATTTCCGGAAGGATTTCCAGTTTTACAAAGTGCGCGAGATCAACAACTACCACCACGCCCACGACGCCTACCTGAACGCCGTCGTGGGAACCGCCCTGATCAAAAAGTACCCTAAGCTGGAAAGCGAGTTCGTGTACGGCGACTACAAGGTGTACGACGTGCGGAAGATGATCGCCAAGAGCGAGCAGGAAATCGGCAAGGCTACCGCCAAGTACTTCTTCTACAGCAACATCATGAACTTTTTCAAGACCGAGATTACCCTGGCCAACGGCGAGATCCGGAAGCGGCCTCTGATCGAGACAAACGGCGAAACCGGGGAGATCGTGTGGGATAAGGGCCGGGATTTTGCCACCGTGCGGAAAGTGCTGAGCATGCCCCAAGTGAATATCGTGAAAAAGACCGAGGTGCAGACAGGCGGCTTCAGCAAAGAGTCTATCCTGCCCAAGAGGAACAGCGATAAGCTGATCGCCAGAAAGAAGGACTGGGACCCTAAGAAGTACGGCGGCTTCGACAGCCCCACCGTGGCCTATTCTGTGCTGGTGGTGGCCAAAGTGGAAAAGGGCAAGTCCAAGAAACTGAAGAGTGTGAAAGAGCTGCTGGGGATCACCATCATGGAAAGAAGCAGCTTCGAGAAGAATCCCATCGACTTTCTGGAAGCCAAGGGCTACAAAGAAGTGAAAAAGGACCTGATCATCAAGCTGCCTAAGTACTCCCTGTTCGAGCTGGAAAACGGCCGGAAGAGAATGCTGGCCTCTGCCGGCGAACTGCAGAAGGGAAACGAACTGGCCCTGCCCTCCAAATATGTGAACTTCCTGTACCTGGCCAGCCACTATGAGAAGCTGAAGGGCTCCCCCGAGGATAATGAGCAGAAACAGCTGTTTGTGGAACAGCACAAGCACTACCTGGACGAGATCATCGAGCAGATCAGCGAGTTCTCCAAGAGAGTGATCCTGGCCGACGCTAATCTGGACAAAGTGCTGTCCGCCTACAACAAGCACCGGGATAAGCCCATCAGAGAGCAGGCCGAGAATATCATCCACCTGTTTACCCTGACCAATCTGGGAGCCCCTGCCGCCTTCAAGTACTTTGACACCACCATCGACCGGAAGAGGTACACCAGCACCAAAGAGGTGCTGGACGCCACCCTGATCCACCAGAGCATCACCGGCCTGTACGAGACACGGATCGACCTGTCTCAGCTGGGAGGCGACAAAAGGCCGGCGGCCACGAAAAAGGCCGGCCAGGCAAAAAAGAAAAAGGAATTCGGCAGTGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTGCTAACATGCGGTGACGTCGAGGAGAATCCTGGCCCAATGACCGAGTACAAGCCCACGGTGCGCCTCGCCACCCGCGACGACGTCCCCAGGGCCGTACGCACCCTCGCCGCCGCGTTCGCCGACTACCCCGCCACGCGCCACACCGTCGATCCGGACCGCCACATCGAGCGGGTCACCGAGCTGCAAGAACTCTTCCTCACGCGCGTCGGGCTCGACATCGGCAAGGTGTGGGTCGCGGACGACGGCGCCGCGGTGGCGGTCTGGACCACGCCGGAGAGCGTCGAAGCGGGGGCGGTGTTCGCCGAGATCGGCCCGCGCATGGCCGAGTTGAGCGGTTCCCGGCTGGCCGCGCAGCAACAGATGGAAGGCCTCCTGGCGCCGCACCGGCCCAAGGAGCCCGCGTGGTTCCTGGCCACCGTCGGAGTCTCGCCCGACCACCAGGGCAAGGGTCTGGGCAGCGCCGTCGTGCTCCCCGGAGTGGAGGCGGCCGAGCGCGCCGGGGTGCCCGCCTTCCTGGAGACCTCCGCGCCCCGCAACCTCCCCTTCTACGAGCGGCTCGGCTTCACCGTCACCGCCGACGTCGAGGTGCCCGAAGGACCGCGCACCTGGTGCATGACCCGCAAGCCCGGTGCCTGAGAATTCTAACTAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGAGAATAGCAGGCATGCTGGGGAGCGGCCGCAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGGGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATACGTCAAAGCAACCATAGTACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCTTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTTGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACTCTATCTCGGGCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGTCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTTATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGAAGCCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGT
2 供體載體 TGCAGCTCTGGCCCGTGTCTCAAAATCTCTGATGTTACATTGCACAAGATAAAAATATATCATCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCGAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGCTTGTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCATAAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCAGAATTGGTTAATTGGTTGTAACATTATTCAGATTGGGCTTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCGCGGCCGCTGCTTTCTCTGACCAGCATTCTCTCCCCTGGGCCTGTGCCGCTTTCTGTCTGCAGCTTGTGGCCTGGGTCACCTCTACGGCTGGCCCAGATCCTTCCCTGCCGCCTCCTTCAGGTTCCGTCTTCCTCCACTCCCTCTTCCCCTTGCTCTCTGCTGTGTTGCTGCCCAAGGATGCTCTTTCCGGAGCACTTCCTTCTCGGCGCTGCACCACGTGATGTCCTCTGAGCGGATCCTCCCCGTGTCTGGGTCCTCTCCGGGCATCTCTCCTCCCTCACCCAACCCCATGCCGTCTTCACTCGCTGGGTTCCCTTTTCCTTCTCCTTCTGGGGCCTGTGCCATCTCTCGTTTCTTAGGATGGCCTTCTCCGACGGATGTCTCCCTTGCGTCCCGCCTCCCCTTCTTGTAGGCCTGCATCATCACCGTTTTTCTGGACAACCCCAAAGTACCCCGTCTCCCTGGCTTTAGCCACCTCTCCATCCTCTTGCTTTCTTTGCCTGGACACCCCGTTCTCCTGTGGATTCGGGTCACCTCTCACTCCTTTCATTTGGGCAGCTCCCCTACCCCCCTTACCTCTCTAGTCTGTGCTAGCTCTTCCAGCCCCCTGTCATGGCATCTTCCAGGGGTCCGAGAGCTCAGCTAGTCTTCTTCCTCCAACCCGGGCCCCTATGTCCACTTCAGGACAGCATGTTTGCTGCCTCCAGGGATCCTGTGTCCCCGAGCTGGGACCACCTTATATTCCCAGGGCCGGTTAATGTGGCTCTGGTTCTGGGTACTTTTATCTGTCCCCTCCACCCCACAGTGGGGCGCGGCCGCATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTATCTGACCTCTTCTCTTCCTCCCACAGGGCCTCGAGAGATCTGGCAGCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTAGGATGACCGAGTACAAGCCCACGGTGCGCCTCGCCACCCGCGACGACGTCCCCAGGGCCGTACGCACCCTCGCCGCCGCGTTCGCCGACTACCCCGCCACGCGCCACACCGTCGATCCGGACCGCCACATCGAGCGGGTCACCGAGCTGCAAGAACTCTTCCTCACGCGCGTCGGGCTCGACATCGGCAAGGTGTGGGTCGCGGACGACGGCGCCGCGGTGGCGGTCTGGACCACGCCGGAGAGCGTCGAAGCGGGGGCGGTGTTCGCCGAGATCGGCCCGCGCATGGCCGAGTTGAGCGGTTCCCGGCTGGCCGCGCAGCAACAGATGGAAGGCCTCCTGGCGCCGCACCGGCCCAAGGAGCCCGCGTGGTTCCTGGCCACCGTCGGCGTCTCGCCCGACCACCAGGGCAAGGGTCTGGGCAGCGCCGTCGTGCTCCCCGGAGTGGAGGCGGCCGAGCGCGCCGGGGTGCCCGCCTTCCTGGAGACCTCCGCGCCCCGCAACCTCCCCTTCTACGAGCGGCTCGGCTTCACCGTCACCGCCGACGTCGAGGTGCCCGAAGGACCGCGCACCTGGTGCATGACCCGCAAGCCCGGTGCCTGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTATGAGCTCACGGGGACAGCCCCCCCCCAAAGCCCCCAGGGATGTAATTACGTCCCTCCCCCGCTAGGGGGCAGCAGCGAGCCGCCCGGGGCTCCGCTCCGGTCCGGCGCTCCCCCCGCATCCCCGAGCCGGCAGCGTGCGGGGACAGCCCGGGCACGGGGAAGGTGGCACGGGATCGCTTTCCTCTGAACGCTTCTCGCTGCTCTTTGAGCCTGCAGACACCTGGGGGGATACGGGGAAAAAGCTTTAGGCTGAAAGAGAGATTTAGAATGACAGAATCATAGAACGGCCTGGGTTGCAAAGGAGCACAGTGCTCATCCAGATCCAACCCCCTGCTATGTGCAGGGTCATCAACCAGCAGCCCAGGCTGCCCAGAGCCACATCCAGCCTGGCCTTGAATGCCTGCAGGGATGGGGCATCCACAGCCTCCTTGGGCAACCTGTTCAGTGCGTCACCACCCTCTGGGGGAAAAACTGCCTCCTCATATCCAACCCAAACCTCCCCTGTCTCAGTGTAAAGCCATTCCCCCTTGTCCTATCAAGGGGGAGTTTGCTGTGACATTGTTGGTCTGGGGTGACACATGTTTGCCAATTCAGTGCATCACGGAGAGGCAGATCTTGGGGATAAGGAAGTGCAGGACAGCATGGACGTGGGACATGCAGGTGTTGAGGGCTCTGGGACACTCTCCAAGTCACAGCGTTCAGAACAGCCTTAAGGATAAGAAGATAGGATAGAAGGACAAAGAGCAAGTTAAAACCCAGCATGGAGAGGAGCACAAAAAGGCCACAGACACTGCTGGTCCCTGTGTCTGAGCCTGCATGTTTGATGGTGTCTGGATGCAAGCAGAAGGGGTGGAAGAGCTTGCCTGGAGAGATACAGCTGGGTCAGTAGGACTGGGACAGGCAGCTGGAGAATTGCCATGTAGATGTTCATACAATCGTCAAATCATGAAGGCTGGAAAAGCCCTCCAAGATCCCCAAGACCAACCCCAACCCACCCACCGTGCCCACTGGCCATGTCCCTCAGTGCCACATCCCCACAGTTCTTCATCACCTCCAGGGACGGTGACCCCCCCACCTCCGTGGGCAGCTGTGCCACTGCAGCACCGCTCTTTGGAGAAGGTAAATCTTGCTAAATCCAGCCCGACCCTCCCCTGGCACAACGTAAGGCCATTATCTCTCATCCAACTCCAGGACGGAGTCAGTGAGAATATTGGCGCGCCGAATTCTCGCGACGATCGGTCGACATAACTTCGTATAGGATACTTTATACGAAGTTATCAATTCAGGCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGGAGTCGCTGCGACGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCTCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCAGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGTCGGTCGGGCTGCAACCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTACGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTGTGTACAACCATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCAAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCCCGCGCTCAGTCGTCCAATTCTGCCGTGGACGGCACCGCCGGACCCGGCTCCACCGGATCTCGCTAAACGCGTGAATTCACTCCTCAGGTGCAGGCTGCCTATCAGAAGGTGGTGGCTGGTGTGGCCAATGCCCTGGCTCACAAATACCACTGAGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCAACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAGGTCATCAGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAGAAAAGCCTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTTTTTTCTTTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATGGAGATCACCGGTATAACTTCGTATAATGTATACTATACGAAGTTATGGTACCTTAATTAAGTTAACATGCATAGTACTGAGCTCACGGGGACAGCCCCCCCCCAAAGCCCCCAGGGATGTAATTACGTCCCTCCCCCGCTAGGGGGCAGCAGCGAGCCGCCCGGGGCTCCGCTCCGGTCCGGCGCTCCCCCCGCATCCCCGAGCCGGCAGCGTGCGGGGACAGCCCGGGCACGGGGAAGGTGGCACGGGATCGCTTTCCTCTGAACGCTTCTCGCTGCTCTTTGAGCCTGCAGACACCTGGGGGGATACGGGGAAAAAGCTTTAGGCTGAAAGAGAGATTTAGAATGACAGAATCATAGAACGGCCTGGGTTGCAAAGGAGCACAGTGCTCATCCAGATCCAACCCCCTGCTATGTGCAGGGTCATCAACCAGCAGCCCAGGCTGCCCAGAGCCACATCCAGCCTGGCCTTGAATGCCTGCAGGGATGGGGCATCCACAGCCTCCTTGGGCAACCTGTTCAGTGCGTCACCACCCTCTGGGGGAAAAACTGCCTCCTCATATCCAACCCAAACCTCCCCTGTCTCAGTGTAAAGCCATTCCCCCTTGTCCTATCAAGGGGGAGTTTGCTGTGACATTGTTGGTCTGGGGTGACACATGTTTGCCAATTCAGTGCATCACGGAGAGGCAGATCTTGGGGATAAGGAAGTGCAGGACAGCATGGACGTGGGACATGCAGGTGTTGAGGGCTCTGGGACACTCTCCAAGTCACAGCGTTCAGAACAGCCTTAAGGATAAGAAGATAGGATAGAAGGACAAAGAGCAAGTTAAAACCCAGCATGGAGAGGAGCACAAAAAGGCCACAGACACTGCTGGTCCCTGTGTCTGAGCCTGCATGTTTGATGGTGTCTGGATGCAAGCAGAAGGGGTGGAAGAGCTTGCCTGGAGAGATACAGCTGGGTCAGTAGGACTGGGACAGGCAGCTGGAGAATTGCCATGTAGATGTTCATACAATCGTCAAATCATGAAGGCTGGAAAAGCCCTCCAAGATCCCCAAGACCAACCCCAACCCACCCACCGTGCCCACTGGCCATGTCCCTCAGTGCCACATCCCCACAGTTCTTCATCACCTCCAGGGACGGTGACCCCCCCACCTCCGTGGGCAGCTGTGCCACTGCAGCACCGCTCTTTGGAGAAGGTAAATCTTGCTAAATCCAGCCCGACCCTCCCCTGGCACAACGTAAGGCCATTATCTCTCATCCAACTCCAGGACGGAGTCAGTGAGAATATTGTTTAAACACTAGGGACAGGATTGGTGACAGAAAAGCCCCATCCTTAGGCCTCCTCCTTCCTAGTCTCCTGATATTGGGTCTAACCCCCACCTCCTGTTAGGCAGATTCCTTATCTGGTGACACACCCCCATTTCCTGGAGCCATCTCTCTCCTTGCCAGAACCTCTAAGGTTTGCTTACGATGGAGCCAGAGAGGATCCTGGGAGGGAGAGCTTGGCAGGGGGTGGGAGGGAAGGGGGGGATGCGTGACCTGCCCGGTTCTCAGTGGCCACCCTGCGCTACCCTCTCCCAGAACCTGAGCTGCTCTGACGCGGCTGTCTGGTGCGTTTCACTGATCCTGGTGCTGCAGCTTCCTTACACTTCCCAAGAGGAGAAGCAGTTTGGAAAAACAAAATCAGAATAAGTTGGTCCTGAGTTCTAACTTTGGCTCTTCACCTTTCTAGTCCCCAATTTATATTGTTCCTCCGTGCGTCAGTTTTACCTGTGAGATAAGGCCAGTAGCCAGCCCCGTCCTGGCAGGGCTGTGGTGAGGAGGGGGGTGTCCGTGTGGAAAACTCCCTTTGTGAGAATGGTGCGTCCTAGGTGTTCACCAGGTCGTGGCCGCCTCTACTCCCTTTCTCTTTCTCCATCCTTCTTTCCTTAAAGAGTCCCCAGTGCTATCTGGGACATATTCCTCCGCCCAGAGCAGGGTCCCGCTTCCCTAAGGCCCTGCTCTGGGCTTCTGGGTTTGAGTCCTTGGCAAGCCCAGGAGAGGCGCTCAGGCTTCCCTGTCCCCCTTCCTCGTCCACCATCTCATGCCCCTGGCTCTCCTGCCCCTTCCCTACAGGGGTTCCTGGCTCTGCTCTGTTTAAACACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGA
[實施例2] 基因組安全港候選區域的篩選
以如下基準篩選出了基因組安全港（GSH）候選區域：即其應是癌症相關基因，且應是微小RNA（miRNA），並且應在距功能性小RNA（functional small RNA）300kb以上的位點、距基因5’末端50kb以上的位點、距複製起點50kb以上的位點、距超保守（Ultra-conserved）區域50kb以上的位點，且應是表現出低轉錄活性的位點、不包括在複製數變異（copy number variation）區域的位點、不包括在開放染色質（Open chromatin）區域的位點、人類染色體上僅存在一個複製的序列及沒有TTAA序列（轉位子（transposon））的序列。
之後，如表1所示，使用gRNA設計工具（tool）的CRISPick、DeepSpCas9及RGEN確保了3個基因組安全港（GSH）候選區域及與其相應的gRNA序列。所述CRISPick（布洛德研究所（Broad institute））透過目標得分（on-target score）來表示gRNA對基因組上互補位點的特異性反應程度。DeepSpCas9透過插入/缺失頻率得分（indel frequency score）來表示基於gRNA的基因組編輯效率性。RGEN可確認染色體與gRNA之間是否存在錯配（mismatch）。
[表2]
SEQ ID NO： 名稱 染色體 起始 結束 gRNA序列
3 GSH1 9 24894446 24894525 CTTCAGTGCTCTACTCTTGT
4 GSH2 3 9064276 9064355 GTAAGCAAACCACAACGTCT
5 GSH3 4 120174229 120174308 TCTGAGACAGCTAATATCAT
[實施例3] 製備將基因組安全港及腺相關病毒整合位點1（AAVS1）作為標靶的gRNA/Cas9表現載體
將腺相關病毒整合位點1（AAVS1）、基因組安全港1（GSH1）、基因組安全港2（GSH2）及基因組安全港3（GSH3）作為標靶的gRNA插入片段（insert）以如下方式導入gRNA/Cas9表現載體（px459）中。
基於將腺相關病毒整合位點1（AAVS1）、基因組安全港1（GSH1）、基因組安全港2（GSH2）及基因組安全港3（GSH3）作為標靶的gRNA插入片段（insert）序列來合成寡核苷酸（DNA oligo）。然後，用限制性內切酶BbsI處理來切割gRNA/Cas9表現載體，在透過切割呈線性化的gRNA/Cas9表現載體中導入所述合成的寡核苷酸（DNA oligo）後，進行了連接（ligation）。然後，透過聚合酶鏈式反應（PCR）確認是否成功導入，之後透過桑格定序（Sanger sequencing）驗證導入載體中的gRNA序列。在圖3中示出所述過程的示意圖。
[表3]
SEQ ID NO： 名稱 鹼基序列
6 GSH1-正向引子 CACCGTTCAGTGCTCTACTCTTGT
7 GSH1-反向引子 AAACACAAGAGTAGAGCACTGAAC
8 GSH2-正向引子 CACCGTAAGCAAACCACAACGTCT
9 GSH2-反向引子 AAACAGACGTTGTGGTTTGCTTAC
10 GSH3-正向引子 CACCGTCTGAGACAGCTAATATCA
11 GSH3-反向引子 AAACTGATATTAGCTGTCTCAGAC
12 AAVS1-正向引子 ACCGTCCCCTCCACCCCACAGTG
13 AAVS1-反向引子 AACCACTGTGGGGTGGAGGGGAC
[實施例4] 供體載體的製備
為了促進有效的同源介導修復（HDR），將基於標靶的同源序列（≥800kb）以如下方式導入供體載體中。將透過CRISPR-Cas9系統產生雙鏈斷裂（DSB）的位點的上部或下部約800kb分別稱為左同源序列及右同源序列（left homology arm，right homology arm）。然後，透過聚合酶鏈式反應（PCR）基於從人脂肪幹細胞中獲取的基因組合成了依據腺相關病毒整合位點1（AAVS1）、基因組安全港1（GSH1）、基因組安全港2（GSH2）及基因組安全港3（GSH3）的基因組內位點的SEQ ID NO：14至SEQ ID NO：21的左同源序列及右同源序列。然後，用限制性內切酶PmeI及NotI處理來切割供體載體。利用吉布森組裝預混液（Gibson assembly master mix）（NEB）將同源序列導入到透過切割呈線性化的供體載體中，並透過聚合酶鏈式反應（PCR）確認是否成功導入，之後透過桑格定序（Sanger sequencing）驗證導入載體中的同源DNA序列。透過所述過程獲得SEQ ID NO：22至SEQ ID NO：25的供體載體，在圖4中示出了所述過程的示意圖。
[表4]
SEQ ID NO： 名稱 鹼基序列
14 GSH1-RHA TGTGGGAAGCTTCTTTCCAACTTGGTTCCTGTCCATACCCACGTAAAATATTAAAGAAAGAAGGATAGAAATATAGATTAAAAGAAGACCTGAAGTCGAAGGAAGGGACTAATTGTTGAGAGATTTGAAATGCAACCAATTTTCCATCAGATGTTTTATCGGTACTCTGTAGTTCTATTCCGTCCCAGTTTTCCATAAATTTATAGATAAAAAGAATATTTTATATTGCATTTTGTATGCATATATGCATACATACATATCACTTAAATATATATATATATAAAATTGCATGTTATGCACACTTTAAAATCTTTAAAATATTGAATGCTTAATTACTTAGGACAAAATAGCTTACATAGGAAACAATTATTTCGGACAGAATAATTTAGGAGACAATAGCATTTTTGTGCTGTTGCAGAGATGATAAAGAACTTCTGGTTTTATATGTAACTCTAAAACTGCAGGATAAATAGGTACGTAATACAAATGGCAGTTGCCTCACTGCAATTTTCTGAGCTGTGTTGCTAGTCTGACACTCCTGAAAATTAATATTTCAGACATCTCTGTAATTGTCCAGAGGGCCTGGAGTGCCTTCAAATTATATTCCCCCTCTATTTTAATCAACCATGTTAGTAATTTACTTTTCATTAGTTTATTGATAATTCTATAGGGAAAGTTTGCTAATCACTGTGTAAAATATAATTTTCAAACAGCCAAAATAACTGCCATAAAATATGGAAACTGTCTTAGTTTGTTTTCTCTTGCTATGAAAGAATACCACAGACTGGGTAATGTATAGAGAAGAG
15 GSH1-LHA GCAAATAGCAAGTCTTCTCTGGTTCTTTGAGCTCTGTTTTTGATGACTTCACCCTGGAGGTAACAGCTTTCCTAAGGCCTGACATGCAGGCCTGCTGCATTGCAAACTCCCTCTGCTCATTTTTGGCAGGTTGTGCTGATTTATGGGGCTATTTGATTTATTTAATGTACCATGCCTTTGATTGCATATACTCTATAGCAGTCACTCAAAATGCAAACAAACACATCATATGTTCTTTAATTACTCCCATCCCCCTTATTATCAATCACTGCCAATATCAGCAGAATGGCTGTGATTCATGCTATAAAATTAAGGTCAGCAAACTTGGGTTTTGCAGAAGTGAATAGCAGCAATTCTGTTTATATTCTTTAATGTTTCAATTCTAAAACTCATTATCAGAAAAATGGTATTTCAGATCAGTCTTGTTAGAAGAATGGGATGGGAAAAAAGATATAACAGTTGGGCAAAGAGAAGGAAAGCAAATGTAGCACTAGGGAAAAAGTTGTAGAAGAAAGTAAAAAAAAAAATAAAGATGAGAAGATAGTAGCTCTTAAGGATATTCATTCTGACTTATGAAAGACTGTAATGTTTAGCACACACAGACACATACACAAACACATGAACTTGTAAAATTCTCAAAGGTCCAGTTTTTATTCAAAATTCCTATACTTCAACTTCTTGAATCTCACTCCTTTTTTTTTCAAGTTCCTCATTTCTCTCCCTTAAAAAATGGATGCTAACCATTTTAAGCTTAGTAATTTTGTACATGCTTTTCTGGAAATACTACAAATATGATCAATGTCTGTGATCTCTTCAGTGCTCTACTCT
16 GSH2-RHA TCTAGGCCAAATCTGGCCTCCCAATTGTTTTATAAATAAAATTTTATTTAAACGTAACCACTCCCATTCATTTGCTTGTCTCTGGTTGTTTTTGCAATACAACAGTAGGGTTAGGTAGATAATACAGGCTGTGTGTCACATGATGAAGCCAAAAACATTTGCTCTCTGGCTCTTTACAGAATGAATTTGCTTATATTTCTTCTAGGATGTCAATTTGTCTGCTTAATTCACAGAAGGACAAATTTTAACATAACTTACTTCTATGGCCTGAATGTTTGCGTACACTGAAAATTGATTTGTTGAAATCGATCCCCAATTTGATAGTATTAGGAGGTAGGGCTTTGGAGATGTGATTAGATCATGAGGGTGTAACCTTTATTAATGGGATTAGTGCTTTTATATGGGGTTGAAGAGACCCGAGCTCCCCTTCCACCTTGTGAGGATGCAGAAAGAAGATACATTCTGTGAACTGGAAAGCCGGCCCTCACTAGACACCAAATATGCCAGTATTTTGATCTTGGGCTTCCCAGCCTTCAGAACTTACAGCAGTCCAGAAAGATTAAGACACCCACCTGAAATGTTAATTTTGTCCTAAAATAATCTTGCATTTAAGATCTGAAATATGACCTAAGTATTATCTGAGGAGTCAATGCTGATTTATTGGTGGTGGATACTGTGATTCTGTATTAAGAATGGATCTGAAGCCACATAAGATAACTGTGATTACTTAGTGCTATTTTCAATGGCTGTGAGAAGACAACCTTGTGACCAGAATTTGAAACCCTGCATAAACAAAACTCAACATGTTTTGAAGGCCTTTACACTCTTCCTCTCAGG
17 GSH2-LHA CAGACACATGTTCCCCAGAAGAGGATTTGCCATTCTGACAAATCTCCATCCAAGGAATGGGAAATTCATTATCCCTTCCACTAGAATTAAACTGTGAAATTATTTATGTAGGAAGAAGTAGTAGTAGAAAAGTTATGTTTGTCTTCTTCACTATAAGAAAAAAATGCAAAATCAGGAAAAATGTATCTAAACTATTACTTTTACAAAGGCAAAAACAGCCTGTTTGCTATCTAATCAGTCCTGTTGATAAAACTCAGGCTGTACTGTTCTCTTCAGAGAGAGGCAAATGGGGGGAGTTATAAGATTTGCGCCCTACTGCTGTTAGTAGAATGAACAAGACAGAGTAAAAGCCACAAGTGGAATTGTGCTAGTATTTCCTCTATAATTAACCCAACACTTAGGTAGCCTTTAAAGTGAAAGGAGCCCTCCAAATGATGGAGGCACACAGGAGGTAATTATGTGCTTTCAATAAATGCCTGAAAGCTCACAATTTCTTTGGGGAGATACAATCTCTGGAAAGGCTTGCATTGTCACTCCAATTTCATTTATTTATTTTAACAAATTGTATGTTCTGTGGAGGAACTTTATTTCCCAAAAAGATGAACGTATAATAAACCAGTTCTTTATTTTAAAACTTATGGTGAGAGAAATTTCAATTTTAGATAATTCCATTGTCTATAAAGAGTCTCTATTAAATTAGCTTAAGTTCCAAAAGATAATGCCACATTATTATTGTAGGTAGCCATTATAATTCTCAAATTTCTATTGTTACATTCTGCAAGACAGTGGTAAGCAAACCACAACG
18 GSH3-RHA TCATGGGCCAAAATGAATGGAATCAAAACCTGAGACACATTTCTGTTAATGGGGCTCTATTTGAGAAATGTGCATTATTTTATCAGCTTCCTTATTTTAACCATTCTACCCTGTCAATACTAATACCAAGTGTTCATTTTCTTTATTAGTTTAAATGGGAGAAAACAATGCAGAAAGCTTAATAACTGTTCTATTTTTAAAGCCTTTATAGAAAACATAATATAAAAAGTGATATGAACTAGGCACAAGACAAAACTGACTTTAATATGTTATATGTTAATCTGTTAAAATACAGTACATTTTACTGCAGAATGTTAGCAGGGTATATTTGTAGATAATAGATCATTGACATTTTTATCCTATATCCTTTTTACCTTTTATTCCTTTTAAACATTGATTACCTTTGTTATAAAAAGCAACAACAATAGTTTGTAAAAGATTAAGATATTTAAATATTTAAAAATTTTTCATAACTATATTAGTAAACAGTAGTACATAAGTCTTGATAGGTACAAATGATGTCTCAAAAGACAGATGAGGTGGAAAATTACCACTCTAGCTCATGGCATGACCCCAGCCGTGCAGAGGAAAGATTTCTTCTCCTCCCCTATTCACCTCCGGGTCCCAGCTATCACTAAATATATCGGGGGTCGCGTTGCTGATCAGCAGCCTTAAGCCTGAACATGGTGGGTCCTTTGCATTAGTTCTCAATTCCCACCACCCTCCTCCCTTCCTGTGTCACGAGGCTCACTCATTTCCTCAGTGCCCTTCCCAGTTACTGTCAAATCATATAAACTCATTTCTCTGCCTCCAGCCTTTTATTTCATC
19 GSH3-LHA GGCTTCCCTCTGTGATGGGTAGATAATTTTGCTTAATATGTAAACAGTCTTTTCAACACTCTGTGCTTAAATAATCATTGTTGGTTTGCTTTCTTCTAGTATTCCATATTAAGTAATGACTTGGCTAATGAGAAGGATGCTTGTAAGTATATTAGCATCAAGTTCAAATATAGAGAGATTAAATAACCTTCCCAAGGTCAACACACTGGTCATTGACAAATATGGACCAGATCTCATCTCCAAAACCCCACACAATTATACCAGGTTAGCTCATTCTTTCTTCCTAGACATCTTATTTTCCAGGGAGTAGTGAAGGTCTACAAAACTTTCCTACTAAATAGGAAATATATTTTGTTGTCAGATGTAAGCCCAGAAAAGCAATGGCTAAACTGCTATGTATCAAAAACTTTGCAAACTTATAACAGTTTAAAATTTACTTCTAGCTATGTTTAGAGCCCTAAGGAGATAATGGCAAGTCATTTTTTCTTCTTTATACATATGTCATCATTTATGGACAGAAAATAGTTCTCAATTGTAAAAAAATAGCTCTCTATAGGATTTGCTGAGTTTTTTATGGCTAGAGTTATTAAGTAAAATAAATGACATCTGAGAGCACTCTGCTTTGTCTTTGGCTTCAAATAATGTATTTTACTATATTTTTTCATTCTTCGCTGCCATAAGTGGCAGAAAGAAAACCGCTTTTCAAATGGCTAGTGCCTAAAAAGCAAATACTTTGTGGATCTTGGGGCCAGTGTAAACTCAGAATGCAAGATATCTTCCTCAGCTTCAGTACTTGCACAATGCCTGTCTTTATTAAACATGAGTGATTTGCAAATATGATGTTTCTGAGACAGCTAATA
20 AAVS1-RHA ACTAGGGACAGGATTGGTGACAGAAAAGCCCCATCCTTAGGCCTCCTCCTTCCTAGTCTCCTGATATTGGGTCTAACCCCCACCTCCTGTTAGGCAGATTCCTTATCTGGTGACACACCCCCATTTCCTGGAGCCATCTCTCTCCTTGCCAGAACCTCTAAGGTTTGCTTACGATGGAGCCAGAGAGGATCCTGGGAGGGAGAGCTTGGCAGGGGGTGGGAGGGAAGGGGGGGATGCGTGACCTGCCCGGTTCTCAGTGGCCACCCTGCGCTACCCTCTCCCAGAACCTGAGCTGCTCTGACGCGGCTGTCTGGTGCGTTTCACTGATCCTGGTGCTGCAGCTTCCTTACACTTCCCAAGAGGAGAAGCAGTTTGGAAAAACAAAATCAGAATAAGTTGGTCCTGAGTTCTAACTTTGGCTCTTCACCTTTCTAGTCCCCAATTTATATTGTTCCTCCGTGCGTCAGTTTTACCTGTGAGATAAGGCCAGTAGCCAGCCCCGTCCTGGCAGGGCTGTGGTGAGGAGGGGGGTGTCCGTGTGGAAAACTCCCTTTGTGAGAATGGTGCGTCCTAGGTGTTCACCAGGTCGTGGCCGCCTCTACTCCCTTTCTCTTTCTCCATCCTTCTTTCCTTAAAGAGTCCCCAGTGCTATCTGGGACATATTCCTCCGCCCAGAGCAGGGTCCCGCTTCCCTAAGGCCCTGCTCTGGGCTTCTGGGTTTGAGTCCTTGGCAAGCCCAGGAGAGGCGCTCAGGCTTCCCTGTCCCCCTTCCTCGTCCACCATCTCATGCCCCTGGCTCTCCTGCCCCTTCCCTACAGGGGTTCCTGGCTCTGCTCT
21 AAVS1-LHA TGCTTTCTCTGACCAGCATTCTCTCCCCTGGGCCTGTGCCGCTTTCTGTCTGCAGCTTGTGGCCTGGGTCACCTCTACGGCTGGCCCAGATCCTTCCCTGCCGCCTCCTTCAGGTTCCGTCTTCCTCCACTCCCTCTTCCCCTTGCTCTCTGCTGTGTTGCTGCCCAAGGATGCTCTTTCCGGAGCACTTCCTTCTCGGCGCTGCACCACGTGATGTCCTCTGAGCGGATCCTCCCCGTGTCTGGGTCCTCTCCGGGCATCTCTCCTCCCTCACCCAACCCCATGCCGTCTTCACTCGCTGGGTTCCCTTTTCCTTCTCCTTCTGGGGCCTGTGCCATCTCTCGTTTCTTAGGATGGCCTTCTCCGACGGATGTCTCCCTTGCGTCCCGCCTCCCCTTCTTGTAGGCCTGCATCATCACCGTTTTTCTGGACAACCCCAAAGTACCCCGTCTCCCTGGCTTTAGCCACCTCTCCATCCTCTTGCTTTCTTTGCCTGGACACCCCGTTCTCCTGTGGATTCGGGTCACCTCTCACTCCTTTCATTTGGGCAGCTCCCCTACCCCCCTTACCTCTCTAGTCTGTGCTAGCTCTTCCAGCCCCCTGTCATGGCATCTTCCAGGGGTCCGAGAGCTCAGCTAGTCTTCTTCCTCCAACCCGGGCCCCTATGTCCACTTCAGGACAGCATGTTTGCTGCCTCCAGGGATCCTGTGTCCCCGAGCTGGGACCACCTTATATTCCCAGGGCCGGTTAATGTGGCTCTGGTTCTGGGTACTTTTATCTGTCCCCTCCACCCCACAGTGGGGC
22 GSH1供體載體 TGCAGCTCTGGCCCGTGTCTCAAAATCTCTGATGTTACATTGCACAAGATAAAAATATATCATCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCGAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGCTTGTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCATAAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCAGAATTGGTTAATTGGTTGTAACATTATTCAGATTGGGCTTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCGCGGCCGCGCAAATAGCAAGTCTTCTCTGGTTCTTTGAGCTCTGTTTTTGATGACTTCACCCTGGAGGTAACAGCTTTCCTAAGGCCTGACATGCAGGCCTGCTGCATTGCAAACTCCCTCTGCTCATTTTTGGCAGGTTGTGCTGATTTATGGGGCTATTTGATTTATTTAATGTACCATGCCTTTGATTGCATATACTCTATAGCAGTCACTCAAAATGCAAACAAACACATCATATGTTCTTTAATTACTCCCATCCCCCTTATTATCAATCACTGCCAATATCAGCAGAATGGCTGTGATTCATGCTATAAAATTAAGGTCAGCAAACTTGGGTTTTGCAGAAGTGAATAGCAGCAATTCTGTTTATATTCTTTAATGTTTCAATTCTAAAACTCATTATCAGAAAAATGGTATTTCAGATCAGTCTTGTTAGAAGAATGGGATGGGAAAAAAGATATAACAGTTGGGCAAAGAGAAGGAAAGCAAATGTAGCACTAGGGAAAAAGTTGTAGAAGAAAGTAAAAAAAAAAATAAAGATGAGAAGATAGTAGCTCTTAAGGATATTCATTCTGACTTATGAAAGACTGTAATGTTTAGCACACACAGACACATACACAAACACATGAACTTGTAAAATTCTCAAAGGTCCAGTTTTTATTCAAAATTCCTATACTTCAACTTCTTGAATCTCACTCCTTTTTTTTTCAAGTTCCTCATTTCTCTCCCTTAAAAAATGGATGCTAACCATTTTAAGCTTAGTAATTTTGTACATGCTTTTCTGGAAATACTACAAATATGATCAATGTCTGTGATCTCTTCAGTGCTCTACTCTGCGGCCGCATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTATCTGACCTCTTCTCTTCCTCCCACAGGGCCTCGAGAGATCTGGCAGCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTAGGATGACCGAGTACAAGCCCACGGTGCGCCTCGCCACCCGCGACGACGTCCCCAGGGCCGTACGCACCCTCGCCGCCGCGTTCGCCGACTACCCCGCCACGCGCCACACCGTCGATCCGGACCGCCACATCGAGCGGGTCACCGAGCTGCAAGAACTCTTCCTCACGCGCGTCGGGCTCGACATCGGCAAGGTGTGGGTCGCGGACGACGGCGCCGCGGTGGCGGTCTGGACCACGCCGGAGAGCGTCGAAGCGGGGGCGGTGTTCGCCGAGATCGGCCCGCGCATGGCCGAGTTGAGCGGTTCCCGGCTGGCCGCGCAGCAACAGATGGAAGGCCTCCTGGCGCCGCACCGGCCCAAGGAGCCCGCGTGGTTCCTGGCCACCGTCGGCGTCTCGCCCGACCACCAGGGCAAGGGTCTGGGCAGCGCCGTCGTGCTCCCCGGAGTGGAGGCGGCCGAGCGCGCCGGGGTGCCCGCCTTCCTGGAGACCTCCGCGCCCCGCAACCTCCCCTTCTACGAGCGGCTCGGCTTCACCGTCACCGCCGACGTCGAGGTGCCCGAAGGACCGCGCACCTGGTGCATGACCCGCAAGCCCGGTGCCTGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTATGAGCTCACGGGGACAGCCCCCCCCCAAAGCCCCCAGGGATGTAATTACGTCCCTCCCCCGCTAGGGGGCAGCAGCGAGCCGCCCGGGGCTCCGCTCCGGTCCGGCGCTCCCCCCGCATCCCCGAGCCGGCAGCGTGCGGGGACAGCCCGGGCACGGGGAAGGTGGCACGGGATCGCTTTCCTCTGAACGCTTCTCGCTGCTCTTTGAGCCTGCAGACACCTGGGGGGATACGGGGAAAAAGCTTTAGGCTGAAAGAGAGATTTAGAATGACAGAATCATAGAACGGCCTGGGTTGCAAAGGAGCACAGTGCTCATCCAGATCCAACCCCCTGCTATGTGCAGGGTCATCAACCAGCAGCCCAGGCTGCCCAGAGCCACATCCAGCCTGGCCTTGAATGCCTGCAGGGATGGGGCATCCACAGCCTCCTTGGGCAACCTGTTCAGTGCGTCACCACCCTCTGGGGGAAAAACTGCCTCCTCATATCCAACCCAAACCTCCCCTGTCTCAGTGTAAAGCCATTCCCCCTTGTCCTATCAAGGGGGAGTTTGCTGTGACATTGTTGGTCTGGGGTGACACATGTTTGCCAATTCAGTGCATCACGGAGAGGCAGATCTTGGGGATAAGGAAGTGCAGGACAGCATGGACGTGGGACATGCAGGTGTTGAGGGCTCTGGGACACTCTCCAAGTCACAGCGTTCAGAACAGCCTTAAGGATAAGAAGATAGGATAGAAGGACAAAGAGCAAGTTAAAACCCAGCATGGAGAGGAGCACAAAAAGGCCACAGACACTGCTGGTCCCTGTGTCTGAGCCTGCATGTTTGATGGTGTCTGGATGCAAGCAGAAGGGGTGGAAGAGCTTGCCTGGAGAGATACAGCTGGGTCAGTAGGACTGGGACAGGCAGCTGGAGAATTGCCATGTAGATGTTCATACAATCGTCAAATCATGAAGGCTGGAAAAGCCCTCCAAGATCCCCAAGACCAACCCCAACCCACCCACCGTGCCCACTGGCCATGTCCCTCAGTGCCACATCCCCACAGTTCTTCATCACCTCCAGGGACGGTGACCCCCCCACCTCCGTGGGCAGCTGTGCCACTGCAGCACCGCTCTTTGGAGAAGGTAAATCTTGCTAAATCCAGCCCGACCCTCCCCTGGCACAACGTAAGGCCATTATCTCTCATCCAACTCCAGGACGGAGTCAGTGAGAATATTGGCGCGCCGAATTCTCGCGACGATCGGTCGACATAACTTCGTATAGGATACTTTATACGAAGTTATCAATTCAGGCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGGAGTCGCTGCGACGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCTCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCAGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGTCGGTCGGGCTGCAACCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTACGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTGTGTACAACCATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCAAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCCCGCGCTCAGTCGTCCAATTCTGCCGTGGACGGCACCGCCGGACCCGGCTCCACCGGATCTCGCTAAACGCGTGAATTCACTCCTCAGGTGCAGGCTGCCTATCAGAAGGTGGTGGCTGGTGTGGCCAATGCCCTGGCTCACAAATACCACTGAGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCAACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAGGTCATCAGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAGAAAAGCCTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTTTTTTCTTTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATGGAGATCACCGGTATAACTTCGTATAATGTATACTATACGAAGTTATGGTACCTTAATTAAGTTAACATGCATAGTACTGAGCTCACGGGGACAGCCCCCCCCCAAAGCCCCCAGGGATGTAATTACGTCCCTCCCCCGCTAGGGGGCAGCAGCGAGCCGCCCGGGGCTCCGCTCCGGTCCGGCGCTCCCCCCGCATCCCCGAGCCGGCAGCGTGCGGGGACAGCCCGGGCACGGGGAAGGTGGCACGGGATCGCTTTCCTCTGAACGCTTCTCGCTGCTCTTTGAGCCTGCAGACACCTGGGGGGATACGGGGAAAAAGCTTTAGGCTGAAAGAGAGATTTAGAATGACAGAATCATAGAACGGCCTGGGTTGCAAAGGAGCACAGTGCTCATCCAGATCCAACCCCCTGCTATGTGCAGGGTCATCAACCAGCAGCCCAGGCTGCCCAGAGCCACATCCAGCCTGGCCTTGAATGCCTGCAGGGATGGGGCATCCACAGCCTCCTTGGGCAACCTGTTCAGTGCGTCACCACCCTCTGGGGGAAAAACTGCCTCCTCATATCCAACCCAAACCTCCCCTGTCTCAGTGTAAAGCCATTCCCCCTTGTCCTATCAAGGGGGAGTTTGCTGTGACATTGTTGGTCTGGGGTGACACATGTTTGCCAATTCAGTGCATCACGGAGAGGCAGATCTTGGGGATAAGGAAGTGCAGGACAGCATGGACGTGGGACATGCAGGTGTTGAGGGCTCTGGGACACTCTCCAAGTCACAGCGTTCAGAACAGCCTTAAGGATAAGAAGATAGGATAGAAGGACAAAGAGCAAGTTAAAACCCAGCATGGAGAGGAGCACAAAAAGGCCACAGACACTGCTGGTCCCTGTGTCTGAGCCTGCATGTTTGATGGTGTCTGGATGCAAGCAGAAGGGGTGGAAGAGCTTGCCTGGAGAGATACAGCTGGGTCAGTAGGACTGGGACAGGCAGCTGGAGAATTGCCATGTAGATGTTCATACAATCGTCAAATCATGAAGGCTGGAAAAGCCCTCCAAGATCCCCAAGACCAACCCCAACCCACCCACCGTGCCCACTGGCCATGTCCCTCAGTGCCACATCCCCACAGTTCTTCATCACCTCCAGGGACGGTGACCCCCCCACCTCCGTGGGCAGCTGTGCCACTGCAGCACCGCTCTTTGGAGAAGGTAAATCTTGCTAAATCCAGCCCGACCCTCCCCTGGCACAACGTAAGGCCATTATCTCTCATCCAACTCCAGGACGGAGTCAGTGAGAATATTGTTTAAACTGTGGGAAGCTTCTTTCCAACTTGGTTCCTGTCCATACCCACGTAAAATATTAAAGAAAGAAGGATAGAAATATAGATTAAAAGAAGACCTGAAGTCGAAGGAAGGGACTAATTGTTGAGAGATTTGAAATGCAACCAATTTTCCATCAGATGTTTTATCGGTACTCTGTAGTTCTATTCCGTCCCAGTTTTCCATAAATTTATAGATAAAAAGAATATTTTATATTGCATTTTGTATGCATATATGCATACATACATATCACTTAAATATATATATATATAAAATTGCATGTTATGCACACTTTAAAATCTTTAAAATATTGAATGCTTAATTACTTAGGACAAAATAGCTTACATAGGAAACAATTATTTCGGACAGAATAATTTAGGAGACAATAGCATTTTTGTGCTGTTGCAGAGATGATAAAGAACTTCTGGTTTTATATGTAACTCTAAAACTGCAGGATAAATAGGTACGTAATACAAATGGCAGTTGCCTCACTGCAATTTTCTGAGCTGTGTTGCTAGTCTGACACTCCTGAAAATTAATATTTCAGACATCTCTGTAATTGTCCAGAGGGCCTGGAGTGCCTTCAAATTATATTCCCCCTCTATTTTAATCAACCATGTTAGTAATTTACTTTTCATTAGTTTATTGATAATTCTATAGGGAAAGTTTGCTAATCACTGTGTAAAATATAATTTTCAAACAGCCAAAATAACTGCCATAAAATATGGAAACTGTCTTAGTTTGTTTTCTCTTGCTATGAAAGAATACCACAGACTGGGTAATGTATAGAGAAGAGGTTTAAACACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGA
23 GSH2供體載體 TGCAGCTCTGGCCCGTGTCTCAAAATCTCTGATGTTACATTGCACAAGATAAAAATATATCATCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCGAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGCTTGTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCATAAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCAGAATTGGTTAATTGGTTGTAACATTATTCAGATTGGGCTTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCGCGGCCGCCAGACACATGTTCCCCAGAAGAGGATTTGCCATTCTGACAAATCTCCATCCAAGGAATGGGAAATTCATTATCCCTTCCACTAGAATTAAACTGTGAAATTATTTATGTAGGAAGAAGTAGTAGTAGAAAAGTTATGTTTGTCTTCTTCACTATAAGAAAAAAATGCAAAATCAGGAAAAATGTATCTAAACTATTACTTTTACAAAGGCAAAAACAGCCTGTTTGCTATCTAATCAGTCCTGTTGATAAAACTCAGGCTGTACTGTTCTCTTCAGAGAGAGGCAAATGGGGGGAGTTATAAGATTTGCGCCCTACTGCTGTTAGTAGAATGAACAAGACAGAGTAAAAGCCACAAGTGGAATTGTGCTAGTATTTCCTCTATAATTAACCCAACACTTAGGTAGCCTTTAAAGTGAAAGGAGCCCTCCAAATGATGGAGGCACACAGGAGGTAATTATGTGCTTTCAATAAATGCCTGAAAGCTCACAATTTCTTTGGGGAGATACAATCTCTGGAAAGGCTTGCATTGTCACTCCAATTTCATTTATTTATTTTAACAAATTGTATGTTCTGTGGAGGAACTTTATTTCCCAAAAAGATGAACGTATAATAAACCAGTTCTTTATTTTAAAACTTATGGTGAGAGAAATTTCAATTTTAGATAATTCCATTGTCTATAAAGAGTCTCTATTAAATTAGCTTAAGTTCCAAAAGATAATGCCACATTATTATTGTAGGTAGCCATTATAATTCTCAAATTTCTATTGTTACATTCTGCAAGACAGTGGTAAGCAAACCACAACGGCGGCCGCATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTATCTGACCTCTTCTCTTCCTCCCACAGGGCCTCGAGAGATCTGGCAGCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTAGGATGACCGAGTACAAGCCCACGGTGCGCCTCGCCACCCGCGACGACGTCCCCAGGGCCGTACGCACCCTCGCCGCCGCGTTCGCCGACTACCCCGCCACGCGCCACACCGTCGATCCGGACCGCCACATCGAGCGGGTCACCGAGCTGCAAGAACTCTTCCTCACGCGCGTCGGGCTCGACATCGGCAAGGTGTGGGTCGCGGACGACGGCGCCGCGGTGGCGGTCTGGACCACGCCGGAGAGCGTCGAAGCGGGGGCGGTGTTCGCCGAGATCGGCCCGCGCATGGCCGAGTTGAGCGGTTCCCGGCTGGCCGCGCAGCAACAGATGGAAGGCCTCCTGGCGCCGCACCGGCCCAAGGAGCCCGCGTGGTTCCTGGCCACCGTCGGCGTCTCGCCCGACCACCAGGGCAAGGGTCTGGGCAGCGCCGTCGTGCTCCCCGGAGTGGAGGCGGCCGAGCGCGCCGGGGTGCCCGCCTTCCTGGAGACCTCCGCGCCCCGCAACCTCCCCTTCTACGAGCGGCTCGGCTTCACCGTCACCGCCGACGTCGAGGTGCCCGAAGGACCGCGCACCTGGTGCATGACCCGCAAGCCCGGTGCCTGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTATGAGCTCACGGGGACAGCCCCCCCCCAAAGCCCCCAGGGATGTAATTACGTCCCTCCCCCGCTAGGGGGCAGCAGCGAGCCGCCCGGGGCTCCGCTCCGGTCCGGCGCTCCCCCCGCATCCCCGAGCCGGCAGCGTGCGGGGACAGCCCGGGCACGGGGAAGGTGGCACGGGATCGCTTTCCTCTGAACGCTTCTCGCTGCTCTTTGAGCCTGCAGACACCTGGGGGGATACGGGGAAAAAGCTTTAGGCTGAAAGAGAGATTTAGAATGACAGAATCATAGAACGGCCTGGGTTGCAAAGGAGCACAGTGCTCATCCAGATCCAACCCCCTGCTATGTGCAGGGTCATCAACCAGCAGCCCAGGCTGCCCAGAGCCACATCCAGCCTGGCCTTGAATGCCTGCAGGGATGGGGCATCCACAGCCTCCTTGGGCAACCTGTTCAGTGCGTCACCACCCTCTGGGGGAAAAACTGCCTCCTCATATCCAACCCAAACCTCCCCTGTCTCAGTGTAAAGCCATTCCCCCTTGTCCTATCAAGGGGGAGTTTGCTGTGACATTGTTGGTCTGGGGTGACACATGTTTGCCAATTCAGTGCATCACGGAGAGGCAGATCTTGGGGATAAGGAAGTGCAGGACAGCATGGACGTGGGACATGCAGGTGTTGAGGGCTCTGGGACACTCTCCAAGTCACAGCGTTCAGAACAGCCTTAAGGATAAGAAGATAGGATAGAAGGACAAAGAGCAAGTTAAAACCCAGCATGGAGAGGAGCACAAAAAGGCCACAGACACTGCTGGTCCCTGTGTCTGAGCCTGCATGTTTGATGGTGTCTGGATGCAAGCAGAAGGGGTGGAAGAGCTTGCCTGGAGAGATACAGCTGGGTCAGTAGGACTGGGACAGGCAGCTGGAGAATTGCCATGTAGATGTTCATACAATCGTCAAATCATGAAGGCTGGAAAAGCCCTCCAAGATCCCCAAGACCAACCCCAACCCACCCACCGTGCCCACTGGCCATGTCCCTCAGTGCCACATCCCCACAGTTCTTCATCACCTCCAGGGACGGTGACCCCCCCACCTCCGTGGGCAGCTGTGCCACTGCAGCACCGCTCTTTGGAGAAGGTAAATCTTGCTAAATCCAGCCCGACCCTCCCCTGGCACAACGTAAGGCCATTATCTCTCATCCAACTCCAGGACGGAGTCAGTGAGAATATTGGCGCGCCGAATTCTCGCGACGATCGGTCGACATAACTTCGTATAGGATACTTTATACGAAGTTATCAATTCAGGCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGGAGTCGCTGCGACGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCTCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCAGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGTCGGTCGGGCTGCAACCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTACGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTGTGTACAACCATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCAAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCCCGCGCTCAGTCGTCCAATTCTGCCGTGGACGGCACCGCCGGACCCGGCTCCACCGGATCTCGCTAAACGCGTGAATTCACTCCTCAGGTGCAGGCTGCCTATCAGAAGGTGGTGGCTGGTGTGGCCAATGCCCTGGCTCACAAATACCACTGAGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCAACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAGGTCATCAGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAGAAAAGCCTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTTTTTTCTTTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATGGAGATCACCGGTATAACTTCGTATAATGTATACTATACGAAGTTATGGTACCTTAATTAAGTTAACATGCATAGTACTGAGCTCACGGGGACAGCCCCCCCCCAAAGCCCCCAGGGATGTAATTACGTCCCTCCCCCGCTAGGGGGCAGCAGCGAGCCGCCCGGGGCTCCGCTCCGGTCCGGCGCTCCCCCCGCATCCCCGAGCCGGCAGCGTGCGGGGACAGCCCGGGCACGGGGAAGGTGGCACGGGATCGCTTTCCTCTGAACGCTTCTCGCTGCTCTTTGAGCCTGCAGACACCTGGGGGGATACGGGGAAAAAGCTTTAGGCTGAAAGAGAGATTTAGAATGACAGAATCATAGAACGGCCTGGGTTGCAAAGGAGCACAGTGCTCATCCAGATCCAACCCCCTGCTATGTGCAGGGTCATCAACCAGCAGCCCAGGCTGCCCAGAGCCACATCCAGCCTGGCCTTGAATGCCTGCAGGGATGGGGCATCCACAGCCTCCTTGGGCAACCTGTTCAGTGCGTCACCACCCTCTGGGGGAAAAACTGCCTCCTCATATCCAACCCAAACCTCCCCTGTCTCAGTGTAAAGCCATTCCCCCTTGTCCTATCAAGGGGGAGTTTGCTGTGACATTGTTGGTCTGGGGTGACACATGTTTGCCAATTCAGTGCATCACGGAGAGGCAGATCTTGGGGATAAGGAAGTGCAGGACAGCATGGACGTGGGACATGCAGGTGTTGAGGGCTCTGGGACACTCTCCAAGTCACAGCGTTCAGAACAGCCTTAAGGATAAGAAGATAGGATAGAAGGACAAAGAGCAAGTTAAAACCCAGCATGGAGAGGAGCACAAAAAGGCCACAGACACTGCTGGTCCCTGTGTCTGAGCCTGCATGTTTGATGGTGTCTGGATGCAAGCAGAAGGGGTGGAAGAGCTTGCCTGGAGAGATACAGCTGGGTCAGTAGGACTGGGACAGGCAGCTGGAGAATTGCCATGTAGATGTTCATACAATCGTCAAATCATGAAGGCTGGAAAAGCCCTCCAAGATCCCCAAGACCAACCCCAACCCACCCACCGTGCCCACTGGCCATGTCCCTCAGTGCCACATCCCCACAGTTCTTCATCACCTCCAGGGACGGTGACCCCCCCACCTCCGTGGGCAGCTGTGCCACTGCAGCACCGCTCTTTGGAGAAGGTAAATCTTGCTAAATCCAGCCCGACCCTCCCCTGGCACAACGTAAGGCCATTATCTCTCATCCAACTCCAGGACGGAGTCAGTGAGAATATTGTTTAAACTCTAGGCCAAATCTGGCCTCCCAATTGTTTTATAAATAAAATTTTATTTAAACGTAACCACTCCCATTCATTTGCTTGTCTCTGGTTGTTTTTGCAATACAACAGTAGGGTTAGGTAGATAATACAGGCTGTGTGTCACATGATGAAGCCAAAAACATTTGCTCTCTGGCTCTTTACAGAATGAATTTGCTTATATTTCTTCTAGGATGTCAATTTGTCTGCTTAATTCACAGAAGGACAAATTTTAACATAACTTACTTCTATGGCCTGAATGTTTGCGTACACTGAAAATTGATTTGTTGAAATCGATCCCCAATTTGATAGTATTAGGAGGTAGGGCTTTGGAGATGTGATTAGATCATGAGGGTGTAACCTTTATTAATGGGATTAGTGCTTTTATATGGGGTTGAAGAGACCCGAGCTCCCCTTCCACCTTGTGAGGATGCAGAAAGAAGATACATTCTGTGAACTGGAAAGCCGGCCCTCACTAGACACCAAATATGCCAGTATTTTGATCTTGGGCTTCCCAGCCTTCAGAACTTACAGCAGTCCAGAAAGATTAAGACACCCACCTGAAATGTTAATTTTGTCCTAAAATAATCTTGCATTTAAGATCTGAAATATGACCTAAGTATTATCTGAGGAGTCAATGCTGATTTATTGGTGGTGGATACTGTGATTCTGTATTAAGAATGGATCTGAAGCCACATAAGATAACTGTGATTACTTAGTGCTATTTTCAATGGCTGTGAGAAGACAACCTTGTGACCAGAATTTGAAACCCTGCATAAACAAAACTCAACATGTTTTGAAGGCCTTTACACTCTTCCTCTCAGGGTTTAAACACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGA
24 GSH3供體載體 TGCAGCTCTGGCCCGTGTCTCAAAATCTCTGATGTTACATTGCACAAGATAAAAATATATCATCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCGAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGCTTGTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCATAAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCAGAATTGGTTAATTGGTTGTAACATTATTCAGATTGGGCTTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCGCGGCCGCGGCTTCCCTCTGTGATGGGTAGATAATTTTGCTTAATATGTAAACAGTCTTTTCAACACTCTGTGCTTAAATAATCATTGTTGGTTTGCTTTCTTCTAGTATTCCATATTAAGTAATGACTTGGCTAATGAGAAGGATGCTTGTAAGTATATTAGCATCAAGTTCAAATATAGAGAGATTAAATAACCTTCCCAAGGTCAACACACTGGTCATTGACAAATATGGACCAGATCTCATCTCCAAAACCCCACACAATTATACCAGGTTAGCTCATTCTTTCTTCCTAGACATCTTATTTTCCAGGGAGTAGTGAAGGTCTACAAAACTTTCCTACTAAATAGGAAATATATTTTGTTGTCAGATGTAAGCCCAGAAAAGCAATGGCTAAACTGCTATGTATCAAAAACTTTGCAAACTTATAACAGTTTAAAATTTACTTCTAGCTATGTTTAGAGCCCTAAGGAGATAATGGCAAGTCATTTTTTCTTCTTTATACATATGTCATCATTTATGGACAGAAAATAGTTCTCAATTGTAAAAAAATAGCTCTCTATAGGATTTGCTGAGTTTTTTATGGCTAGAGTTATTAAGTAAAATAAATGACATCTGAGAGCACTCTGCTTTGTCTTTGGCTTCAAATAATGTATTTTACTATATTTTTTCATTCTTCGCTGCCATAAGTGGCAGAAAGAAAACCGCTTTTCAAATGGCTAGTGCCTAAAAAGCAAATACTTTGTGGATCTTGGGGCCAGTGTAAACTCAGAATGCAAGATATCTTCCTCAGCTTCAGTACTTGCACAATGCCTGTCTTTATTAAACATGAGTGATTTGCAAATATGATGTTTCTGAGACAGCTAATAGCGGCCGCATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTATCTGACCTCTTCTCTTCCTCCCACAGGGCCTCGAGAGATCTGGCAGCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTAGGATGACCGAGTACAAGCCCACGGTGCGCCTCGCCACCCGCGACGACGTCCCCAGGGCCGTACGCACCCTCGCCGCCGCGTTCGCCGACTACCCCGCCACGCGCCACACCGTCGATCCGGACCGCCACATCGAGCGGGTCACCGAGCTGCAAGAACTCTTCCTCACGCGCGTCGGGCTCGACATCGGCAAGGTGTGGGTCGCGGACGACGGCGCCGCGGTGGCGGTCTGGACCACGCCGGAGAGCGTCGAAGCGGGGGCGGTGTTCGCCGAGATCGGCCCGCGCATGGCCGAGTTGAGCGGTTCCCGGCTGGCCGCGCAGCAACAGATGGAAGGCCTCCTGGCGCCGCACCGGCCCAAGGAGCCCGCGTGGTTCCTGGCCACCGTCGGCGTCTCGCCCGACCACCAGGGCAAGGGTCTGGGCAGCGCCGTCGTGCTCCCCGGAGTGGAGGCGGCCGAGCGCGCCGGGGTGCCCGCCTTCCTGGAGACCTCCGCGCCCCGCAACCTCCCCTTCTACGAGCGGCTCGGCTTCACCGTCACCGCCGACGTCGAGGTGCCCGAAGGACCGCGCACCTGGTGCATGACCCGCAAGCCCGGTGCCTGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTATGAGCTCACGGGGACAGCCCCCCCCCAAAGCCCCCAGGGATGTAATTACGTCCCTCCCCCGCTAGGGGGCAGCAGCGAGCCGCCCGGGGCTCCGCTCCGGTCCGGCGCTCCCCCCGCATCCCCGAGCCGGCAGCGTGCGGGGACAGCCCGGGCACGGGGAAGGTGGCACGGGATCGCTTTCCTCTGAACGCTTCTCGCTGCTCTTTGAGCCTGCAGACACCTGGGGGGATACGGGGAAAAAGCTTTAGGCTGAAAGAGAGATTTAGAATGACAGAATCATAGAACGGCCTGGGTTGCAAAGGAGCACAGTGCTCATCCAGATCCAACCCCCTGCTATGTGCAGGGTCATCAACCAGCAGCCCAGGCTGCCCAGAGCCACATCCAGCCTGGCCTTGAATGCCTGCAGGGATGGGGCATCCACAGCCTCCTTGGGCAACCTGTTCAGTGCGTCACCACCCTCTGGGGGAAAAACTGCCTCCTCATATCCAACCCAAACCTCCCCTGTCTCAGTGTAAAGCCATTCCCCCTTGTCCTATCAAGGGGGAGTTTGCTGTGACATTGTTGGTCTGGGGTGACACATGTTTGCCAATTCAGTGCATCACGGAGAGGCAGATCTTGGGGATAAGGAAGTGCAGGACAGCATGGACGTGGGACATGCAGGTGTTGAGGGCTCTGGGACACTCTCCAAGTCACAGCGTTCAGAACAGCCTTAAGGATAAGAAGATAGGATAGAAGGACAAAGAGCAAGTTAAAACCCAGCATGGAGAGGAGCACAAAAAGGCCACAGACACTGCTGGTCCCTGTGTCTGAGCCTGCATGTTTGATGGTGTCTGGATGCAAGCAGAAGGGGTGGAAGAGCTTGCCTGGAGAGATACAGCTGGGTCAGTAGGACTGGGACAGGCAGCTGGAGAATTGCCATGTAGATGTTCATACAATCGTCAAATCATGAAGGCTGGAAAAGCCCTCCAAGATCCCCAAGACCAACCCCAACCCACCCACCGTGCCCACTGGCCATGTCCCTCAGTGCCACATCCCCACAGTTCTTCATCACCTCCAGGGACGGTGACCCCCCCACCTCCGTGGGCAGCTGTGCCACTGCAGCACCGCTCTTTGGAGAAGGTAAATCTTGCTAAATCCAGCCCGACCCTCCCCTGGCACAACGTAAGGCCATTATCTCTCATCCAACTCCAGGACGGAGTCAGTGAGAATATTGGCGCGCCGAATTCTCGCGACGATCGGTCGACATAACTTCGTATAGGATACTTTATACGAAGTTATCAATTCAGGCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGGAGTCGCTGCGACGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCTCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCAGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGTCGGTCGGGCTGCAACCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTACGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTGTGTACAACCATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCAAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCCCGCGCTCAGTCGTCCAATTCTGCCGTGGACGGCACCGCCGGACCCGGCTCCACCGGATCTCGCTAAACGCGTGAATTCACTCCTCAGGTGCAGGCTGCCTATCAGAAGGTGGTGGCTGGTGTGGCCAATGCCCTGGCTCACAAATACCACTGAGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCAACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAGGTCATCAGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAGAAAAGCCTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTTTTTTCTTTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATGGAGATCACCGGTATAACTTCGTATAATGTATACTATACGAAGTTATGGTACCTTAATTAAGTTAACATGCATAGTACTGAGCTCACGGGGACAGCCCCCCCCCAAAGCCCCCAGGGATGTAATTACGTCCCTCCCCCGCTAGGGGGCAGCAGCGAGCCGCCCGGGGCTCCGCTCCGGTCCGGCGCTCCCCCCGCATCCCCGAGCCGGCAGCGTGCGGGGACAGCCCGGGCACGGGGAAGGTGGCACGGGATCGCTTTCCTCTGAACGCTTCTCGCTGCTCTTTGAGCCTGCAGACACCTGGGGGGATACGGGGAAAAAGCTTTAGGCTGAAAGAGAGATTTAGAATGACAGAATCATAGAACGGCCTGGGTTGCAAAGGAGCACAGTGCTCATCCAGATCCAACCCCCTGCTATGTGCAGGGTCATCAACCAGCAGCCCAGGCTGCCCAGAGCCACATCCAGCCTGGCCTTGAATGCCTGCAGGGATGGGGCATCCACAGCCTCCTTGGGCAACCTGTTCAGTGCGTCACCACCCTCTGGGGGAAAAACTGCCTCCTCATATCCAACCCAAACCTCCCCTGTCTCAGTGTAAAGCCATTCCCCCTTGTCCTATCAAGGGGGAGTTTGCTGTGACATTGTTGGTCTGGGGTGACACATGTTTGCCAATTCAGTGCATCACGGAGAGGCAGATCTTGGGGATAAGGAAGTGCAGGACAGCATGGACGTGGGACATGCAGGTGTTGAGGGCTCTGGGACACTCTCCAAGTCACAGCGTTCAGAACAGCCTTAAGGATAAGAAGATAGGATAGAAGGACAAAGAGCAAGTTAAAACCCAGCATGGAGAGGAGCACAAAAAGGCCACAGACACTGCTGGTCCCTGTGTCTGAGCCTGCATGTTTGATGGTGTCTGGATGCAAGCAGAAGGGGTGGAAGAGCTTGCCTGGAGAGATACAGCTGGGTCAGTAGGACTGGGACAGGCAGCTGGAGAATTGCCATGTAGATGTTCATACAATCGTCAAATCATGAAGGCTGGAAAAGCCCTCCAAGATCCCCAAGACCAACCCCAACCCACCCACCGTGCCCACTGGCCATGTCCCTCAGTGCCACATCCCCACAGTTCTTCATCACCTCCAGGGACGGTGACCCCCCCACCTCCGTGGGCAGCTGTGCCACTGCAGCACCGCTCTTTGGAGAAGGTAAATCTTGCTAAATCCAGCCCGACCCTCCCCTGGCACAACGTAAGGCCATTATCTCTCATCCAACTCCAGGACGGAGTCAGTGAGAATATTGTTTAAACTCATGGGCCAAAATGAATGGAATCAAAACCTGAGACACATTTCTGTTAATGGGGCTCTATTTGAGAAATGTGCATTATTTTATCAGCTTCCTTATTTTAACCATTCTACCCTGTCAATACTAATACCAAGTGTTCATTTTCTTTATTAGTTTAAATGGGAGAAAACAATGCAGAAAGCTTAATAACTGTTCTATTTTTAAAGCCTTTATAGAAAACATAATATAAAAAGTGATATGAACTAGGCACAAGACAAAACTGACTTTAATATGTTATATGTTAATCTGTTAAAATACAGTACATTTTACTGCAGAATGTTAGCAGGGTATATTTGTAGATAATAGATCATTGACATTTTTATCCTATATCCTTTTTACCTTTTATTCCTTTTAAACATTGATTACCTTTGTTATAAAAAGCAACAACAATAGTTTGTAAAAGATTAAGATATTTAAATATTTAAAAATTTTTCATAACTATATTAGTAAACAGTAGTACATAAGTCTTGATAGGTACAAATGATGTCTCAAAAGACAGATGAGGTGGAAAATTACCACTCTAGCTCATGGCATGACCCCAGCCGTGCAGAGGAAAGATTTCTTCTCCTCCCCTATTCACCTCCGGGTCCCAGCTATCACTAAATATATCGGGGGTCGCGTTGCTGATCAGCAGCCTTAAGCCTGAACATGGTGGGTCCTTTGCATTAGTTCTCAATTCCCACCACCCTCCTCCCTTCCTGTGTCACGAGGCTCACTCATTTCCTCAGTGCCCTTCCCAGTTACTGTCAAATCATATAAACTCATTTCTCTGCCTCCAGCCTTTTATTTCATCGTTTAAACACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGA
25 AAVS1供體載體 TGCAGCTCTGGCCCGTGTCTCAAAATCTCTGATGTTACATTGCACAAGATAAAAATATATCATCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCGAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGCTTGTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCATAAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCAGAATTGGTTAATTGGTTGTAACATTATTCAGATTGGGCTTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCGCGGCCGCTGCTTTCTCTGACCAGCATTCTCTCCCCTGGGCCTGTGCCGCTTTCTGTCTGCAGCTTGTGGCCTGGGTCACCTCTACGGCTGGCCCAGATCCTTCCCTGCCGCCTCCTTCAGGTTCCGTCTTCCTCCACTCCCTCTTCCCCTTGCTCTCTGCTGTGTTGCTGCCCAAGGATGCTCTTTCCGGAGCACTTCCTTCTCGGCGCTGCACCACGTGATGTCCTCTGAGCGGATCCTCCCCGTGTCTGGGTCCTCTCCGGGCATCTCTCCTCCCTCACCCAACCCCATGCCGTCTTCACTCGCTGGGTTCCCTTTTCCTTCTCCTTCTGGGGCCTGTGCCATCTCTCGTTTCTTAGGATGGCCTTCTCCGACGGATGTCTCCCTTGCGTCCCGCCTCCCCTTCTTGTAGGCCTGCATCATCACCGTTTTTCTGGACAACCCCAAAGTACCCCGTCTCCCTGGCTTTAGCCACCTCTCCATCCTCTTGCTTTCTTTGCCTGGACACCCCGTTCTCCTGTGGATTCGGGTCACCTCTCACTCCTTTCATTTGGGCAGCTCCCCTACCCCCCTTACCTCTCTAGTCTGTGCTAGCTCTTCCAGCCCCCTGTCATGGCATCTTCCAGGGGTCCGAGAGCTCAGCTAGTCTTCTTCCTCCAACCCGGGCCCCTATGTCCACTTCAGGACAGCATGTTTGCTGCCTCCAGGGATCCTGTGTCCCCGAGCTGGGACCACCTTATATTCCCAGGGCCGGTTAATGTGGCTCTGGTTCTGGGTACTTTTATCTGTCCCCTCCACCCCACAGTGGGGCGCGGCCGCATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTATCTGACCTCTTCTCTTCCTCCCACAGGGCCTCGAGAGATCTGGCAGCGGAGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTAGGATGACCGAGTACAAGCCCACGGTGCGCCTCGCCACCCGCGACGACGTCCCCAGGGCCGTACGCACCCTCGCCGCCGCGTTCGCCGACTACCCCGCCACGCGCCACACCGTCGATCCGGACCGCCACATCGAGCGGGTCACCGAGCTGCAAGAACTCTTCCTCACGCGCGTCGGGCTCGACATCGGCAAGGTGTGGGTCGCGGACGACGGCGCCGCGGTGGCGGTCTGGACCACGCCGGAGAGCGTCGAAGCGGGGGCGGTGTTCGCCGAGATCGGCCCGCGCATGGCCGAGTTGAGCGGTTCCCGGCTGGCCGCGCAGCAACAGATGGAAGGCCTCCTGGCGCCGCACCGGCCCAAGGAGCCCGCGTGGTTCCTGGCCACCGTCGGCGTCTCGCCCGACCACCAGGGCAAGGGTCTGGGCAGCGCCGTCGTGCTCCCCGGAGTGGAGGCGGCCGAGCGCGCCGGGGTGCCCGCCTTCCTGGAGACCTCCGCGCCCCGCAACCTCCCCTTCTACGAGCGGCTCGGCTTCACCGTCACCGCCGACGTCGAGGTGCCCGAAGGACCGCGCACCTGGTGCATGACCCGCAAGCCCGGTGCCTGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTATGAGCTCACGGGGACAGCCCCCCCCCAAAGCCCCCAGGGATGTAATTACGTCCCTCCCCCGCTAGGGGGCAGCAGCGAGCCGCCCGGGGCTCCGCTCCGGTCCGGCGCTCCCCCCGCATCCCCGAGCCGGCAGCGTGCGGGGACAGCCCGGGCACGGGGAAGGTGGCACGGGATCGCTTTCCTCTGAACGCTTCTCGCTGCTCTTTGAGCCTGCAGACACCTGGGGGGATACGGGGAAAAAGCTTTAGGCTGAAAGAGAGATTTAGAATGACAGAATCATAGAACGGCCTGGGTTGCAAAGGAGCACAGTGCTCATCCAGATCCAACCCCCTGCTATGTGCAGGGTCATCAACCAGCAGCCCAGGCTGCCCAGAGCCACATCCAGCCTGGCCTTGAATGCCTGCAGGGATGGGGCATCCACAGCCTCCTTGGGCAACCTGTTCAGTGCGTCACCACCCTCTGGGGGAAAAACTGCCTCCTCATATCCAACCCAAACCTCCCCTGTCTCAGTGTAAAGCCATTCCCCCTTGTCCTATCAAGGGGGAGTTTGCTGTGACATTGTTGGTCTGGGGTGACACATGTTTGCCAATTCAGTGCATCACGGAGAGGCAGATCTTGGGGATAAGGAAGTGCAGGACAGCATGGACGTGGGACATGCAGGTGTTGAGGGCTCTGGGACACTCTCCAAGTCACAGCGTTCAGAACAGCCTTAAGGATAAGAAGATAGGATAGAAGGACAAAGAGCAAGTTAAAACCCAGCATGGAGAGGAGCACAAAAAGGCCACAGACACTGCTGGTCCCTGTGTCTGAGCCTGCATGTTTGATGGTGTCTGGATGCAAGCAGAAGGGGTGGAAGAGCTTGCCTGGAGAGATACAGCTGGGTCAGTAGGACTGGGACAGGCAGCTGGAGAATTGCCATGTAGATGTTCATACAATCGTCAAATCATGAAGGCTGGAAAAGCCCTCCAAGATCCCCAAGACCAACCCCAACCCACCCACCGTGCCCACTGGCCATGTCCCTCAGTGCCACATCCCCACAGTTCTTCATCACCTCCAGGGACGGTGACCCCCCCACCTCCGTGGGCAGCTGTGCCACTGCAGCACCGCTCTTTGGAGAAGGTAAATCTTGCTAAATCCAGCCCGACCCTCCCCTGGCACAACGTAAGGCCATTATCTCTCATCCAACTCCAGGACGGAGTCAGTGAGAATATTGGCGCGCCGAATTCTCGCGACGATCGGTCGACATAACTTCGTATAGGATACTTTATACGAAGTTATCAATTCAGGCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGGAGTCGCTGCGACGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCTCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCAGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGTCGGTCGGGCTGCAACCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTACGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTGTGTACAACCATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCAAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCCCGCGCTCAGTCGTCCAATTCTGCCGTGGACGGCACCGCCGGACCCGGCTCCACCGGATCTCGCTAAACGCGTGAATTCACTCCTCAGGTGCAGGCTGCCTATCAGAAGGTGGTGGCTGGTGTGGCCAATGCCCTGGCTCACAAATACCACTGAGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCAACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAGGTCATCAGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAGAAAAGCCTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTTTTTTCTTTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATGGAGATCACCGGTATAACTTCGTATAATGTATACTATACGAAGTTATGGTACCTTAATTAAGTTAACATGCATAGTACTGAGCTCACGGGGACAGCCCCCCCCCAAAGCCCCCAGGGATGTAATTACGTCCCTCCCCCGCTAGGGGGCAGCAGCGAGCCGCCCGGGGCTCCGCTCCGGTCCGGCGCTCCCCCCGCATCCCCGAGCCGGCAGCGTGCGGGGACAGCCCGGGCACGGGGAAGGTGGCACGGGATCGCTTTCCTCTGAACGCTTCTCGCTGCTCTTTGAGCCTGCAGACACCTGGGGGGATACGGGGAAAAAGCTTTAGGCTGAAAGAGAGATTTAGAATGACAGAATCATAGAACGGCCTGGGTTGCAAAGGAGCACAGTGCTCATCCAGATCCAACCCCCTGCTATGTGCAGGGTCATCAACCAGCAGCCCAGGCTGCCCAGAGCCACATCCAGCCTGGCCTTGAATGCCTGCAGGGATGGGGCATCCACAGCCTCCTTGGGCAACCTGTTCAGTGCGTCACCACCCTCTGGGGGAAAAACTGCCTCCTCATATCCAACCCAAACCTCCCCTGTCTCAGTGTAAAGCCATTCCCCCTTGTCCTATCAAGGGGGAGTTTGCTGTGACATTGTTGGTCTGGGGTGACACATGTTTGCCAATTCAGTGCATCACGGAGAGGCAGATCTTGGGGATAAGGAAGTGCAGGACAGCATGGACGTGGGACATGCAGGTGTTGAGGGCTCTGGGACACTCTCCAAGTCACAGCGTTCAGAACAGCCTTAAGGATAAGAAGATAGGATAGAAGGACAAAGAGCAAGTTAAAACCCAGCATGGAGAGGAGCACAAAAAGGCCACAGACACTGCTGGTCCCTGTGTCTGAGCCTGCATGTTTGATGGTGTCTGGATGCAAGCAGAAGGGGTGGAAGAGCTTGCCTGGAGAGATACAGCTGGGTCAGTAGGACTGGGACAGGCAGCTGGAGAATTGCCATGTAGATGTTCATACAATCGTCAAATCATGAAGGCTGGAAAAGCCCTCCAAGATCCCCAAGACCAACCCCAACCCACCCACCGTGCCCACTGGCCATGTCCCTCAGTGCCACATCCCCACAGTTCTTCATCACCTCCAGGGACGGTGACCCCCCCACCTCCGTGGGCAGCTGTGCCACTGCAGCACCGCTCTTTGGAGAAGGTAAATCTTGCTAAATCCAGCCCGACCCTCCCCTGGCACAACGTAAGGCCATTATCTCTCATCCAACTCCAGGACGGAGTCAGTGAGAATATTGTTTAAACACTAGGGACAGGATTGGTGACAGAAAAGCCCCATCCTTAGGCCTCCTCCTTCCTAGTCTCCTGATATTGGGTCTAACCCCCACCTCCTGTTAGGCAGATTCCTTATCTGGTGACACACCCCCATTTCCTGGAGCCATCTCTCTCCTTGCCAGAACCTCTAAGGTTTGCTTACGATGGAGCCAGAGAGGATCCTGGGAGGGAGAGCTTGGCAGGGGGTGGGAGGGAAGGGGGGGATGCGTGACCTGCCCGGTTCTCAGTGGCCACCCTGCGCTACCCTCTCCCAGAACCTGAGCTGCTCTGACGCGGCTGTCTGGTGCGTTTCACTGATCCTGGTGCTGCAGCTTCCTTACACTTCCCAAGAGGAGAAGCAGTTTGGAAAAACAAAATCAGAATAAGTTGGTCCTGAGTTCTAACTTTGGCTCTTCACCTTTCTAGTCCCCAATTTATATTGTTCCTCCGTGCGTCAGTTTTACCTGTGAGATAAGGCCAGTAGCCAGCCCCGTCCTGGCAGGGCTGTGGTGAGGAGGGGGGTGTCCGTGTGGAAAACTCCCTTTGTGAGAATGGTGCGTCCTAGGTGTTCACCAGGTCGTGGCCGCCTCTACTCCCTTTCTCTTTCTCCATCCTTCTTTCCTTAAAGAGTCCCCAGTGCTATCTGGGACATATTCCTCCGCCCAGAGCAGGGTCCCGCTTCCCTAAGGCCCTGCTCTGGGCTTCTGGGTTTGAGTCCTTGGCAAGCCCAGGAGAGGCGCTCAGGCTTCCCTGTCCCCCTTCCTCGTCCACCATCTCATGCCCCTGGCTCTCCTGCCCCTTCCCTACAGGGGTTCCTGGCTCTGCTCTGTTTAAACACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGA
[實施例5] 確認基因組內腺相關病毒整合位點1（AAVS1）、基因組安全港1（GSH1）、基因組安全港2（GSH2）及基因組安全港3（GSH3）位點的供體載體的綠色螢光蛋白（GFP）表現盒的導入及表現
為了驗證綠色螢光蛋白（GFP）基因的導入及表現，使用了293T細胞。所述293T細胞在添加10%的胎牛血清（fetal bovine serum）（v/v）、青黴素（penicillin）（100U/ml）、鏈黴素（streptomycin）（100μg/ml）的達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基（Dulbecco’s modified Eagle’s medium（Gibco））中培養。
轉染前一天，在24孔培養皿的每孔中接種5×10 4個293T細胞，並在二氧化碳培養箱（CO 2incubator）中培養24小時。24小時後，更換為不含抗生素的293T細胞培養液。在2個1.5ml管（tube）中分別加入25 μl的Opti-MEM（Gibco）。在1個管（tube）（1號管）中混合650 ng的gRNA/Cas9載體及1300 ng的供體載體。在剩餘的1個管（2號管）中混合2 μl的脂質體2000（Lipofectamine 2000）。將2號管的溶液移到1號管中並進行混合後，在室溫條件下孵育（incubation）10分鐘。10分鐘後，將約50 μl的含有載體的溶液添加到鋪在24孔培養皿中的293T細胞中進行轉染。在48小時後，更換為新培養液。
在每100mm培養皿中接種1000個所述轉染的細胞，2周後，篩選出綠色螢光蛋白（GFP）表現的單細胞源性集落。在腺相關病毒整合位點1（AAVS1）、基因組安全港1（GSH1）、基因組安全港2（GSH2）及基因組安全港3（GSH3）中導入綠色螢光蛋白（GFP）表現盒的293T細胞中分別篩選出6、7、6、6個集落後，如圖5的a所示，進行聚合酶鏈式反應（PCR），確認基於同源介導修復（HDR）的外源基因的導入，並在圖5的b至圖5的e中示出了結果。
另外，如下表5所示，確認基因導入的細胞株在腺相關病毒整合位點1（AAVS1）、基因組安全港1（GSH1）、基因組安全港2（GSH2）及基因組安全港3（GSH3）中分別顯示為16.67%、42.85%、50%及66.67%。
[表5]
GSH 敲入（Knonk-in）%
AAVS1 16.67
GSH1 42.85
GSH2 50.00
GSH3 66.67
為了確認導入的綠色螢光蛋白（GFP）基因表現的穩定性，透過流式細胞分析每週測定一次綠色螢光蛋白（GFP）的平均螢光強度（mean fluorescence intensity：MFI），持續測定4周。如圖6所示，在基因組安全港1（GSH1）、基因組安全港2（GSH2）及基因組安全港3（GSH3）中導入綠色螢光蛋白（GFP）的情況下，MFI值均高於在腺相關病毒整合位點1（AAVS1）導入綠色螢光蛋白（GFP）的情況下的MFI值。
[實施例6] 確認鄰近基因表現的變化
確認了在基因組安全港（GSH）位點中導入外源基因時，是否可在不干擾鄰近基因的轉錄的情況下誘導外源基因的穩定表現。透過即時聚合酶鏈式反應（real-time PCR）分析腺相關病毒整合位點1（AAVS1）中10個、GSH1中3個、GSH2中3個及GSH3中4個鄰近基因的表現變化。在表6中示出了腺相關病毒整合位點1（AAVS1）、基因組安全港1（GSH1）、基因組安全港2（GSH2）及基因組安全港3（GSH3）的位點與鄰近的基因之間的距離。
利用PureLink RNA迷你套組（mini kit）（Invitrogen）從腺相關病毒整合位點1（AAVS1）、基因組安全港1（GSH1）、基因組安全港2（GSH2）及基因組安全港3（GSH3）中導入綠色螢光蛋白（GFP）表現盒的293T細胞中提取總RNA（total RNA）。對提取的RNA進行定量，並使用AccuPower RT預混液（Master Mix）（BIONEER）合成了互補的DNA（complementary DNA）（cDNA）。在QuantStudio 1即時螢光定量（Real-time）PCR系統（Thermo Fisher（賽默飛世爾））中使用TB Green預混液Ex Taq Ⅱ（TB Green Premix Ex Taq Ⅱ）（Takara（寶生物））對100 ng的cDNA進行分析，測定各基因的相對表現。排出Ct值為37以上的基因（IZUMO3）。
如圖7的a所示，與腺相關病毒整合位點1（AAVS1）鄰近的10個基因中的5個（NLRP2、EPS8L1、TNNI3、SYT5及PTPRH）的表現顯著增加或減少。如圖7的b所示，與基因組安全港1（GSH1）鄰近的基因的表現沒有表現出顯著差異。如圖7的c所示，與基因組安全港2（GSH2）鄰近的基因NXPH1的表現沒有表現出顯著差異。如圖7的d所示，與基因組安全港3（GSH3）鄰近的4個基因的表現均沒有表現出顯著差異。
因此，與腺相關病毒整合位點1（AAVS1）相比，可知基因組安全港1（GSH1）、基因組安全港2（GSH2）及基因組安全港3（GSH3）的位點不僅基因表現效率高，而且不影響鄰近的基因轉錄，因此在導入外源基因時，具有優異的穩定性。
[表6]
候選 染色體 基因 起始 結束 距GSH的距離
AAVS1 19 NLRP2 54966374 55001138 114633
RDH13 55039108 55071291 44480
EPS8L1 55072020 55087923 27848
PPP1R12C 55090914 55117637 -
TNNT1 55132698 55149206 16909
TNNI3 55151767 55157773 35978
DNAAF3 55158661 55166722 42872
SYT5 55171196 55180289 55407
PTPRH 55181247 55209506 65458
BRSK1 5528207 5531256 16628
GSH1 9 ELAVL2 23690104 23826337 1136326
IZUMO3 24542952 24545946 416717
TUSC1 25676969 25678444 714234
GSH2 4 NXPH1 8433609 8752961 311315
GSH3 3 PDE5A 119494397 119628804 545425
MAD2L1 120055623 120066858 107371
PRDM5 120684919 120922870 510611
NDNF 121035613 121073021 861305
[實施例7] 在胚胎幹細胞來源間充質幹細胞（embryonic stem cell-derived mesenchymal stem cell：ES-MSC）的基因組安全港3（GSH3）位點導入音蝟因子（Sonic hedgehog，SHH）基因後，對毛囊是否新生進行評價。
7.1音蝟因子（SHH）表現盒的製備 為了在胚胎幹細胞來源間充質幹細胞（ES-MSC）的GSH3位點導入音蝟因子（SHH）基因，如圖8所示，製備了代替綠色螢光蛋白（GFP）插入音蝟因子（SHH）基因序列的供體載體。供體載體的製備以如下的方式進行。首先，利用限制性內切酶從供體載體中去除綠色螢光蛋白（GFP）基因序列。然後，透過PCR由音蝟因子（SHH）表現載體（OriGene）製備了音蝟因子（SHH）基因片段。透過吉布森組裝（Gibson assembly）技術，將所述音蝟因子（SHH）基因片段插入供體載體中。透過PCR驗證所述片段是否被導入至載體中，並透過桑格定序（Sanger sequencing）驗證導入至載體中的同源性DNA序列。
7.2將音蝟因子（SHH）表現盒導入基因組安全港3（GSH3） 將供體載體的音蝟因子（SHH）表現盒導入至基因組安全港3（GSH3）位點。然後，為了確認音蝟因子（SHH）表現盒是否表現而進行了實驗。利用在StemPro MSC SFM無血清培養基（StemPro MSC SFM XenoFree medium）（Gibco）中添加L-穀氨醯胺（L-glutamine）（2mM）、青黴素（penicillin）（100U/ml）及鏈黴素（streptomycin）（100μg/ml）的培養基來培養胚胎幹細胞來源間充質幹細胞（ES-MSC）。以1∶2的比例組合gRNA/Cas9表現載體與供體載體，並使用Neon電穿孔（electroporation）（Invitrogen）設備對2×10 6個胚胎幹細胞來源間充質幹細胞（ES-MSC）進行轉染。透過即時聚合酶鏈式反應（real-time PCR）來驗證音蝟因子（SHH）基因是否過表現，其結果如圖9的a所示，在轉染的細胞中音蝟因子（SHH）mRNA的表現增加了約13倍。
7.3音蝟因子（SHH）表現盒的毛囊新生能力評價 透過貼片測定（Patch assay），對音蝟因子（SHH）過表現胚胎幹細胞來源間充質幹細胞（ES-MSC）（SHH-ES-MSC）的毛囊新生能力進行了評價。從新生C57BL/6小鼠的皮膚上分離表皮細胞和真皮細胞。將100個在超低吸附圓底96孔培養盤（Ultra-low attachment 96-well round bottom plate）（S-Bio）中培養的ES-MSC球狀體（spheroid）（每個球為1×10 4個細胞）與1×10 6個表皮細胞混合並移植到6周齡的裸鼠（BALB/cAJcl-nu）的背部皮下。將表皮細胞和真皮細胞混合移植的組作為陽性對照組，僅移植表皮細胞的組作為陰性對照組。如圖9的b所示，移植3周後，確認移植SHH-ES-MSC的組中形成毛囊。
無
圖1是本發明的gRNA/Cas9表現載體的示意圖。 圖2是本發明的供體載體的示意圖。 圖3是將腺相關病毒整合位點1（AAVS1）及本發明的基因組安全港（GSH）1至3作為標靶的gRNA/Cas9表現載體製備過程的示意圖。 圖4是本發明的供體載體製備過程的示意圖。 圖5是使用本發明的gRNA/Cas9表現載體和供體載體的外源基因導入過程的示意圖。 圖6為示出導入綠色螢光蛋白（GFP）基因的細胞的平均螢光強度的曲線圖。 圖7為示出腺相關病毒整合位點（AAVS）及本發明的基因組安全港（GSH）1至3鄰近基因的表現變化的曲線圖。 圖8是在ES-MSC的基因組安全港3（GSH3）位點中導入音蝟因子（SHH）基因的過程的示意圖。 圖9為示出音蝟因子（SHH）過表現的ES-MSC（SHH-ES-MSC）的音蝟因子（SHH）mRNA表現的曲線圖及示出毛囊新生能力的圖片。
無
Figure 112133738-A0305-02-0051-1
Figure 112133738-A0305-02-0052-2
Figure 112133738-A0305-02-0053-4
Figure 112133738-A0305-02-0054-5
Figure 112133738-A0305-02-0055-6
Figure 112133738-A0305-02-0056-7
Figure 112133738-A0305-02-0057-8
Figure 112133738-A0305-02-0058-9
Figure 112133738-A0305-02-0059-10
Figure 112133738-A0305-02-0060-11
Figure 112133738-A0305-02-0061-12
Figure 112133738-A0305-02-0062-13
Figure 112133738-A0305-02-0063-14
Figure 112133738-A0305-02-0064-15
Figure 112133738-A0305-02-0065-16
Figure 112133738-A0305-02-0066-17
Figure 112133738-A0305-02-0067-18
Figure 112133738-A0305-02-0068-19
Figure 112133738-A0305-02-0069-20
Figure 112133738-A0305-02-0070-21
Figure 112133738-A0305-02-0071-22
Figure 112133738-A0305-02-0072-23
Figure 112133738-A0305-02-0073-24
Figure 112133738-A0305-02-0074-25
Figure 112133738-A0305-02-0075-26
Figure 112133738-A0305-02-0076-27
Figure 112133738-A0305-02-0077-28
Figure 112133738-A0305-02-0078-29
Figure 112133738-A0305-02-0079-30
Figure 112133738-A0305-02-0080-31
Figure 112133738-A0305-02-0081-32
Figure 112133738-A0305-02-0082-33
Figure 112133738-A0305-02-0083-34
Figure 112133738-A0305-02-0084-35
Figure 112133738-A0305-02-0085-36
Figure 112133738-A0305-02-0086-37
Figure 112133738-A0305-02-0087-38
Figure 112133738-A0305-02-0088-41

Claims (24)

  1. 一種在體外細胞中表現外源多核苷酸的方法，其中，包括如下的步驟：(1)透過在體外細胞中導入編碼核酸酶的多核苷酸來表現核酸酶；其中編碼所述核酸酶的多核苷酸包含選自DNA結合結構域、引導RNA及切割結構域中的一種以上；(2)透過所述核酸酶與選自以下群組中的一種以上的核酸區域特異性結合來切割核酸區域，其中，所述群組由人基因組的9號染色體中的第24894446位至第24894525位的第一核酸區域、3號染色體中的第9064276位至第9064355位的第二核酸區域及4號染色體中的第120174229位至第120174308位的第三核酸區域組成；以及(3)在所述體外細胞中導入外源多核苷酸並且將左同源臂及右同源臂導入所述外源多核苷酸中，其中，所述左同源臂是在所述第一核酸區域至所述第三核酸區域的切割位點中的一種以上結合至從所述切割位點到左側0.8kb的區域的部位，所述右同源臂是在所述第一核酸區域至所述第三核酸區域的切割位點中的一種以上結合至從所述切割位點到右側0.8kb的區域的部位，並將所述外源多核苷酸插入至所述核酸區域的切割位點。
  2. 如請求項1所述的在體外細胞中表現外源多核苷酸的方法，其中，所述細胞來源於人體血液、體液、組織、幹細胞或癌。
  3. 如請求項1所述的在體外細胞中表現外源多核苷酸的方法，其中， 所述細胞是體細胞、生殖細胞、幹細胞、癌細胞或細胞株。
  4. 如請求項1所述的在體外細胞中表現外源多核苷酸的方法，其中，所述核酸酶選自鋅指核酸酶、類轉錄活化因子核酸酶及RGEN中的一種以上。
  5. 如請求項4所述的在體外細胞中表現外源多核苷酸的方法，其中，所述核酸酶是Cas9。
  6. 如請求項1所述的在體外細胞中表現外源多核苷酸的方法，其中，所述外源多核苷酸包含編碼多胜肽的多核苷酸或編碼功能性多核糖核苷酸的多核苷酸。
  7. 如請求項6所述的在體外細胞中表現外源多核苷酸的方法，其中，所述功能性多核糖核苷酸選自由微小RNA、短髮夾RNA、piwi相互作用RNA、核仁小分子RNA、小核RNA及細胞外RNA組成的群組中的一種以上。
  8. 如請求項6所述的在體外細胞中表現外源多核苷酸的方法，其中，所述外源多核苷酸編碼選自由抗體、酶、生長因子、受體、激素、淋巴因子、細胞因子、信號轉導因子、報導分子及其片段組成的群組中的一種以上。
  9. 如請求項6所述的在體外細胞中表現外源多核苷酸的方法，其中， 所述外源多核苷酸是音蝟因子。
  10. 如請求項6所述的在體外細胞中表現外源多核苷酸的方法，其中，所述外源多核苷酸包含選自由開放閱讀框、多腺苷酸化序列、啟動子、操縱子、增強子、轉錄調節因子、信號序列及一種以上的同源性區域組成的群組中的一種以上。
  11. 一種透過一種以上的核酸酶將外源多核苷酸插入至細胞的基因組中的細胞，其中，在所述細胞的基因組中，所述外源多核苷酸插入至選自人基因組的9號染色體中的第24894446位至第24894525位的第一核酸區域、3號染色體中的第9064276位至第9064355位的第二核酸區域及4號染色體中的第120174229位至第120174308位的第三核酸區域中的一種以上。
  12. 一種用於在細胞中表現外源多核苷酸的組合物，其中，包含：編碼與選自人基因組的9號染色體中的第24894446位至第24894525位的第一核酸區域、3號染色體中的第9064276位至第9064355位的第二核酸區域及4號染色體中的第120174229位至第120174308位的第三核酸區域中的一種以上特異性結合的核酸酶的多核苷酸；編碼所述細胞中的引導RNA之多核苷酸；左同源臂及右同源臂，所述左同源臂是在所述第一核酸區域至所述第三核酸區域的切割位點中的一種以上結合至從所述切割位點到左側0.8kb的區域的部位，所述右同源臂是在所述第一核酸區域至所 述第三核酸區域的切割位點中的一種以上結合至從所述切割位點到右側0.8kb的區域的部位；以及外源多核苷酸。
  13. 如請求項12所述的用於在細胞中表現外源多核苷酸的組合物，其中，所述外源多核苷酸是音蝟因子。
  14. 一種用於在細胞中表現外源多核苷酸的多核苷酸，其中，包含與SEQ ID NO：3至SEQ ID NO：5的序列中的任一種序列具有90%以上的序列同源性的序列。
  15. 如請求項14所述的多核苷酸，其中，包含與SEQ ID NO：3至SEQ ID NO：5的序列中的任一種序列具有95%以上的序列同源性的序列。
  16. 如請求項14所述的多核苷酸，其中，包含與SEQ ID NO：3至SEQ ID NO：5的序列中的任一種序列具有99%以上的序列同源性的序列。
  17. 如請求項14所述的多核苷酸，其中，包含SEQ ID NO：3至SEQ ID NO：5的序列中的任一種序列。
  18. 如請求項14所述的多核苷酸，其中，所述SEQ ID NO：3的序列與人基因組的9號染色體中的第24894446位至第24894525位的核酸區域特異性結合。
  19. 如請求項14所述的多核苷酸，其中，所述SEQ ID NO：4的序列與人基因組的3號染色體中的第9064276位至第9064355位的核酸區域特異性結合。
  20. 如請求項14所述的多核苷酸，其中， 所述SEQ ID NO：5的序列與人基因組的4號染色體中的第120174229位至第120174308位的核酸區域特異性結合。
  21. 一種多核苷酸，其中，包含SEQ ID NO：14及SEQ ID NO：15的序列。
  22. 一種多核苷酸，其中，包含SEQ ID NO：16及SEQ ID NO：17的序列。
  23. 一種多核苷酸，其中，包含SEQ ID NO：18及SEQ ID NO：19的序列。
  24. 一種載體，其中，包含如請求項21至23中任一項所述的多核苷酸。
TW112133738A 2022-09-05 2023-09-05 新的基因組安全港及其用途 TWI867731B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20220112185 2022-09-05
KR10-2022-0112185 2022-09-05

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW202419631A TW202419631A (zh) 2024-05-16
TWI867731B true TWI867731B (zh) 2024-12-21

Family

ID=90191576

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW112133738A TWI867731B (zh) 2022-09-05 2023-09-05 新的基因組安全港及其用途

Country Status (6)

Country Link
EP (1) EP4585689A1 (zh)
JP (1) JP2025527935A (zh)
KR (1) KR20240034143A (zh)
CN (1) CN120077138A (zh)
TW (1) TWI867731B (zh)
WO (1) WO2024054006A1 (zh)

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9029523B2 (en) * 2000-04-26 2015-05-12 Ceres, Inc. Promoter, promoter control elements, and combinations, and uses thereof
CA2791116A1 (en) * 2010-02-26 2011-09-01 Olivier Danos Use of endonucleases for inserting transgenes into safe harbor loci
WO2014047432A1 (en) * 2012-09-21 2014-03-27 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Clinical predictors of weight loss
EP3945800A1 (en) * 2019-04-03 2022-02-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for insertion of antibody coding sequences into a safe harbor locus
KR102276940B1 (ko) * 2019-07-03 2021-07-14 대한민국(질병관리청장) 신규한 유전체 세이프 하버 및 이의 용도

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
期刊 Pellenz, Stefan et al. New Human Chromosomal Sites with "Safe Harbor" Potential for Targeted Transgene Insertion. Human gene therapy vol. 30 Mary Ann Liebert 2019 814-828

Also Published As

Publication number Publication date
EP4585689A1 (en) 2025-07-16
JP2025527935A (ja) 2025-08-22
TW202419631A (zh) 2024-05-16
KR20240034143A (ko) 2024-03-13
WO2024054006A1 (ko) 2024-03-14
CN120077138A (zh) 2025-05-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10760081B2 (en) Compositions and methods for enhancing CRISPR activity by POLQ inhibition
AU2017320901C1 (en) Chemically modified single-stranded RNA-editing oligonucleotides
JP6814155B2 (ja) 対象とする細胞を選択的に除去する方法及び組成物
AU2022271376A1 (en) CRISPR/CAS-related methods and compositions for treating herpes simplex virus
CA3136735A1 (en) Methods and compositions for editing rnas
JP2018533959A (ja) タイチン系ミオパチー及び他のタイチノパチーの治療のための材料及び方法
WO2016049024A2 (en) Delivery, use and therapeutic applications of the crispr-cas systems and compositions for modeling competition of multiple cancer mutations in vivo
CN101970664A (zh) 使用可诱导的重组核糖核酸因子生成不含肿瘤的类胚胎干细胞的多能性细胞
WO2022167009A1 (zh) 靶向Aqp1 mRNA的sgRNA及其载体与应用
TWI689308B (zh) 包含ｍｉｒ-３０２前驅體的組合物在製造用於肺癌治療之藥物上的用途
JP7410154B2 (ja) 遺伝的に変異された細胞の死滅誘導組成物及び該組成物を用いた遺伝的に変異された細胞の死滅誘導方法
KR20210151110A (ko) Scn9a 또는 scn10a 유전자를 변형시키기 위한 유전자-편집 시스템 및 이의 방법 및 용도
JP2025509392A (ja) 改変型ｃｒｉｓｐｒベースの遺伝子編集システムおよび使用方法
TWI867731B (zh) 新的基因組安全港及其用途
CN114144202A (zh) 用于载体的多重shRNA
JP2025517469A (ja) 増殖依存性の遺伝子発現を示す、核酸で改変された生体細胞
EP4466358A2 (en) Compositions and methods for editing genomes
WO2018018077A1 (en) Methods of treating breast cancer and reagents therefor
HK40123340A (zh) 新型基因组安全港及其用途
AU2023206493B2 (en) Nucleotide and use thereof
US20250222103A1 (en) Immune cells with combination gene perturbations
EP4491720A1 (en) Compositions and methods for increasing deletion efficiency of nucleic acid segment by modulation of nhej repair pathway
WO2025049877A1 (en) Chemo-sensitive dominant clone for adaptive therapy
WO2026006832A1 (en) Gene modulation for treating cancer
CN121195068A (zh) 靶向cd70表达的crispr相关方法和组合物