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TWI859033B - 一種診斷犬科動物胰臟炎的方法與試劑組與一種使用醯基肉鹼作為診斷犬科動物胰臟炎之用途 - Google Patents

一種診斷犬科動物胰臟炎的方法與試劑組與一種使用醯基肉鹼作為診斷犬科動物胰臟炎之用途 Download PDF

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TWI859033B
TWI859033B TW112149334A TW112149334A TWI859033B TW I859033 B TWI859033 B TW I859033B TW 112149334 A TW112149334 A TW 112149334A TW 112149334 A TW112149334 A TW 112149334A TW I859033 B TWI859033 B TW I859033B
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林雲蓮
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郭鴻志
詹昆衛
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安益藥業股份有限公司
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Abstract

本發明提供了一種診斷犬科動物胰臟炎的方法。首先，提供一犬科動物之一檢體。然後，偵測該檢體之一生物標記物之一濃度，若該濃度高於一預定值，則判定該犬科動物具有高度胰臟炎風險，該生物標記係指中鏈醯基肉鹼、長鏈醯基肉鹼或其組合，其中中鏈醯基係指具有6-12個碳原子鏈長者，而長鏈醯基係指大於12個碳原子鏈長者。本發明還另外提供了一種診斷犬科動物胰臟炎之試劑組，以及一種使用醯基肉鹼作為診斷犬科動物胰臟炎之用途。

Description

一種診斷犬科動物胰臟炎的方法與試劑組與一種使用醯基肉鹼作為診斷犬科動物胰臟炎之用途
本發明係關於一種診斷犬科動物胰臟炎的方法與一種診斷犬科動物胰臟炎之試劑組，特別來說，是一種利用偵測特殊生物標記來診斷犬科動物胰臟炎的方法或試劑組。
急性胰臟炎是由於胰腺內胰蛋白酶原(Trypsinogen)異常活化造成胰腺腺泡細胞內的胰蛋白酶抑制無法有效運作而引發自體消化導致發炎，是犬隻消化道最嚴重的疾病之一。輕微的胰臟炎通常伴隨輕至中度厭食、腹痛和嘔吐等臨床症狀，給予適當的對症治療通常可完全康復，然而嚴重的急性胰臟炎帶有明顯胰臟壞死，通常伴隨嚴重全身性發炎反應及多重器官功能異常，致死率可接近50%。
目前犬急性胰臟炎在臨床診斷上仍是具有難度，特別是在嚴重度的判斷。目前常用的診斷標的為血清犬特異性胰脂肪酶(canine pancreatic-specific lipase,cPL)，但其專一性及敏感性仍有改進之處，也無法明顯區分急性胰臟炎之嚴重度，在實際診斷上仍要納入病史、臨床症狀以及腹部超音波的結果。
本發明於是提供了一種診斷或偵測犬科動物胰臟炎的方法與一種偵測犬科動物胰臟炎或其偵測之試劑組，藉由偵測特殊生物標記在檢體中的濃度，可快速協助診斷犬科動物胰臟炎的可能性，或協助區分犬科動物急性胰臟炎之嚴重度。
根據本發明之一實施例，本發明係提供了一種診斷犬科動物胰臟炎的方法。首先，提供一犬科動物之一檢體。然後，偵測該檢體之一生物標記物(biomarker)之一濃度，若該濃度高於一預定值，則判定該犬科動物具有高度胰臟炎風險，且該生物標記係指中鏈醯基肉鹼(acylcarnitine)、長鏈醯基肉鹼或其組合，中鏈醯基係指具有6-12個碳原子鏈長者，而長鏈醯基則指具有大於12個碳原子鏈長者。
根據本發明之另一實施例，本發明是提供了一種診斷犬科動物胰臟炎的試劑組(kit)。該試劑組包含一偵測劑，該偵測劑與一犬科動物之一檢體混合後，可用於偵測該檢體中生物標記之濃度，該生物標記係指中鏈醯基肉鹼(acylcarnitine)、長鏈醯基肉鹼或其組合，其中中鏈醯基指具有6-12個碳原子鏈長者，長鏈醯基指具有大於12個碳原子鏈長者。
根據本發明之又一實施例，本發明是提供了一種使用中鏈醯基肉鹼、長鏈醯基肉鹼或其組合作為診斷犬科動物胰臟炎之用途，其中中鏈醯基指具有6-12個碳原子鏈長者，長鏈醯基指具有大於12個碳原子鏈長者。
於本發明之一實施例中，前述之生物標記所指之中鏈醯基肉鹼係指L-癸醯基肉鹼(Decanoyl-L-carnitine,C10)、L-十二烷(或月桂)醯基肉鹼(Dodecanoyl-L-carnitine,C12)或L-十二碳烯醯基肉鹼(Dodecenoyl-L-carnitine,C12：1)，且該檢體包含尿液或血液。
於本發明另一實施例中，前述之該生物標記所指之長鏈肉鹼係指L-十四碳二烯醯基肉鹼(Tetradecadienoyl-L-carnitine,C14：2)，且該檢體包含尿液或血液。
藉由偵測本發明所提供之特殊生物標記，即中鏈醯基肉鹼、長鏈醯基肉鹼或其組合，可用於幫助診斷犬科動物是否發生胰臟炎，一旦發現犬科動物具有高度胰臟炎可能性，即可立即進行治療，可大幅提高其存活率。
第1圖是本發明分析健康犬與胰臟炎犬血清中15組不同碳長度之醯基肉鹼之相對含量之長條圖。
第2圖是本發明分析健康犬與胰臟炎犬尿液中13組不同碳長度之醯基肉鹼之相對含量之長條圖。
為使本發明所屬技術領域中具有通常知識者可以進一步了解本發明，在以下的描述中會列出本發明的較佳實施例，並配合圖式，詳細說明本發明的構成內容及所欲實現之效果。
目前引起急性胰臟炎的主要原因尚未明確，常見推測原因為：高脂肪飲食、飲食不當、肥胖、藥物和毒素、內分泌疾病、遺傳。以犬為例，胰臟炎多發生於中老年犬隻，少數則為好發犬種，如：迷你雪納瑞。醯基肉鹼為脂肪酸代謝的中間產物之一，由脂肪酸和L-肉鹼(L-carnitine)酯化產生，因脂肪酸代謝的調節會改變醯基肉鹼的含量，所以醯基肉鹼可反應出脂肪酸氧化障礙和代謝紊亂相關疾病，如果脂肪酸的β氧化途徑受到影響，醯基肉鹼會顯著升高。醯基肉鹼作為脂肪酸代謝路徑產物，存在於血清與尿液等體液中，同時醯基肉鹼具 有活化炎症反應相關訊息傳導，在高含量的狀況下，可直接影響細胞之正常生理功能。
為解決先前技術中欠缺良好生物標記以檢測犬科動物胰臟炎的方法，本發明提供了一種診斷犬科動物胰臟炎的方法。首先，提供一犬科動物之一檢體。於本發明之一實施例中，犬科動物例如是：狗、狼、豺或狐狸等，但並不以此為限。於較佳實施例中，犬科是指狗。另一方面，檢體可以透過各種方式從犬科動物中取得，而使該檢體脫離犬科動物而得作為獨立於犬科動物外而得檢測之標的。於一實施例中，檢體可以為各種組織液或體液。於一較佳實施例中，檢體是指血液，特別是血清，可以透過例如抽血方式取得。於另一較佳實施例中，檢體是指尿液，可以透過犬科動物自體排尿，或是以其他侵入式方式如設置導尿管或以膀胱穿刺法取得。
然後，偵測該檢體之一生物標記物之一濃度，若該濃度高於一預定值，則判定該犬科動物具有高度胰臟炎風險。於本發明之一實施例中，生物標記係指中鏈醯基肉鹼(acylcarnitine)、長鏈醯基肉鹼或其組合，其中中鏈醯基指具有6-12個碳原子鏈長者，而長鏈醯基指具大於12個碳原子鏈長者。於本發明較佳實施例中，生物標記是指中鏈醯基肉鹼，若檢體同時檢測血液與尿液，該生物標記較佳者為L-癸醯基肉鹼(Decanoyl-L-carnitine,C10)、L-十二烷(或月桂)醯基肉鹼(Dodecanoyl-L-carnitine,C12)或L-十二碳烯醯基肉鹼(Dodecenoyl-L-carnitine,C12：1)。於另一最佳實施例中，生物標記是指長鏈醯基肉鹼，若該檢體同時檢測血液與尿液，則該生物標記較佳者是指L-十四碳二烯醯基肉鹼(Tetradecadienoyl-L-carnitine,C14：2)。
另一方面，前述所稱偵測該生物標記之濃度，是利用液相層析質譜儀(LC/MS)來偵測。於此情況下，若該濃度高於一預定值，則可認為該犬科動物具有高度胰臟炎風險。前述預定值是指健康犬科動物的檢體中生物標記的濃度， 理論上若同一犬科動物，該預定值則應為固(預)定。此預定值是透過以下方法取得：首先，提供一健康犬科動物，該健康犬科動物與待檢測有病犬科動物為同一種生物(例如同樣為家犬)，接著採集健康犬科動物之一健康檢體，例如是血液中的血清或是尿液，利用儀器測得該健康檢體中同一個生物標記(例如是十二烷醯基肉鹼)的濃度。最後，將健康檢體中生物標記的濃度與待測檢體中生物標記的濃度比較，若待測檢體中生物標記的濃度大於健康檢體中生物標記的濃度(意即大於該預定值)於一定比例時，則認為待測犬科動物具有高度胰臟炎風險。於本發明之一實施例中，當檢體為血清，且待測檢體中生物標記的濃度為健康檢體中生物標記的濃度的2倍以上時，則認為待測犬科動物具有高度胰臟炎風險。於本發明之一實施例中，當檢體為尿液，且待測檢體中生物標記的濃度為健康檢體中生物標記的濃度的20倍以上時，則認為待測犬科動物具有高度胰臟炎風險。藉由比對預定值，即可確定該犬科動物是否具有高度胰臟炎風險。又，本發明所指具有高度胰臟炎風險，是指在犬科動物中依傳統診斷方法已可被診斷為胰臟炎，例如：臨床症狀具有嘔吐、下痢、食慾不振、腹痛(症狀至少符合其中兩項)；犬特異性脂肪酶(cPL)數值：>200μg/L，或者全腹腔超音波檢測：低迴聲胰臟實質、胰腺增厚、胰臟邊緣模糊、周圍有高迴聲脂肪組織以及其他異常如胰管/膽管擴張和腹水等，但並不以此為限，也包含其他足以代表患有胰臟炎的診斷指標。
於本發明另一實施例中，本發明還進一步提供一種診斷犬科動物胰臟炎的試劑組(kit)。該試劑組包含一偵測試劑。偵測試劑與一犬科動物之一檢體混合後，可用於偵測一生物標記之一濃度，該生物標記係指中鏈醯基肉鹼、長鏈醯基肉鹼或其組合，其中中鏈醯基指具有6-12個碳原子鏈長者，長鏈醯基指具有大於12個碳原子鏈長者。其中偵測試劑包含有可偵測中/長鏈醯基肉鹼的濃度所需的內標物。量測中/長鏈醯基肉鹼的濃度可以是各種本領域已知 之方法，例如透過液相層析質譜儀或高效液相層析儀來偵測其內部生物標記之濃度。於一實施例中，本發明之試劑套組也可利用酵素免疫分析法(ELISA)、親和層析管柱純化法或修改型試管結合性分析法等方式，以非侵犯性方式診斷中/長鏈醯基肉鹼。例如，本發明之使用ELISA法來檢測犬科動物胰臟炎。首先，將本發明之中/長鏈醯基肉鹼連結上一標定物質，包括，但不限於，生物素(Biotin)、His tag、螢光物質(Cy3或Cy5)或Dig(Digoxigenin)等，並藉由偵測吸光值或螢光強度，分析樣本中的中/長鏈醯基肉鹼的量，來判斷是否為犬胰臟炎風險。本實施例的相關實施方式與前述實施例相同之處，例如犬科動物、檢體、生物標記等，在此不再贅述。
於本發明又一實施例中，是提供了一種使用中鏈醯基肉鹼、長鏈醯基肉鹼或其組合作為診斷犬科動物中胰臟炎之用途，其中中鏈醯基指具有6-12個碳原子鏈長者，長鏈醯基指具有大於12個碳原子鏈長者。本實施例的相關實施方式與前述實施例相同之處，例如犬科動物、檢體、生物標記等，在此不再贅述。
為了更清楚敘述本發明之實施方式與功效，以下將舉實施例以及相關實驗，並說明其詳細步驟。
實施例
本實施例的實驗流程如下：
(一)本研究經國立嘉義大學(台灣)實驗動物照護及使用委員會審查通過，同意書編號111026。
(二)病例收集
(1)病犬納入條件(Inclusion criteria)
A.臨床症狀：包括嘔吐、下痢、食慾不振、腹痛(症狀至少符合其中 兩項)
B.犬胰臟特異性脂肪酶(cPL)數值：>200μg/L
C.全腹腔超音波檢測：低迴聲胰臟實質、胰腺增厚、胰臟邊緣模糊、周圍有高迴聲脂肪組織以及其他異常如胰管/膽管擴張和腹水
(2)病犬排除條件(Exclusion criteria)
A.病史存在原發腸胃、肝膽及泌尿系統疾病
B.胰臟超音波沒有明顯異常，以及超音波無法明顯觀察胰臟影像
C.臨床症狀持續超過7天
(3)健康犬納入條件
無異常臨床症狀，血檢、腹部超音波以及cPL數值正常
(三)血液及尿液收集
(1)健康犬：於健檢門診頭靜脈採血，尿液經由自然排尿採集，各採集一次。
(2)病犬：於門診時頭靜脈採血，若無法自然排尿則使用膀胱穿刺採尿，必要時鎮靜(Alfaxalone,0.3mL/kg)。
(四)樣品檢測
血液與尿液之代謝體和脂體分析使用安捷倫1290 UPLC串聯6540-QTOF質譜(Agilent 1290 UHPLC coupled with 6540-QTOF(UHPLC-QTOF)(Agilent Technologies，Santa Clara,CA)，按照已經發表的方法加以分析[1]。為了管控分析的品質，在每個批次的開始和每五個樣本都插入空白樣本和混合之分析品質管控樣本進行分析校準，以確保分析品質。同時在每次開始分析時，都用含有40種合成的標準品測試儀器的性能。每個樣本重複分析三次，並且用手動檢查總離子色譜圖。分析數據使用MZmine3[2]和ADAP演算法[3]進行圖譜峰的偵測。圖譜峰的確認係藉由對自建之代謝物數據庫[4]配對確認之。經配 對選出的潛在代謝物特徵，藉由預處理去除那些>50%缺失值者後，取剩餘特徵當作為原始數據中最小正值的一半。預處理過的數據在進行MetaboAnalyst統計分析之前，再對總峰面積之和進行標準化後，對數轉換(log transform)，和自動縮放後，再以MetaboAnalyst 5.0進行分析[5]。本段落所引用方法的可以
參考以下文獻：
1. Liu CT, Raghu R, Lin SH, Wang SY, Kuo CH, Tseng Y, Sheen LY. Metabolomics of Ginger Essential Oil against Alcoholic Fatty Liver in Mice. J. Agric. Food Chem. 2013; 61:11231-11240.
2. Schmid, R., Heuckeroth, S., Korf, A. et al. “Integrative analysis of multimodal mass spectrometry data in MZmine 3.” Nature Biotechnology (2023); https://mzmine.github.io/.
3. https://mzmine.github.io/mzmine_documentation/module_docs/lc-ms_featdet/featdet_adap_chromatogram_builder/adap-chromatogram-builder.html
4. In-house database: the National Taiwan University MetaCore Metabolomics Chemical Standard Library.
5. https://www.metaboanalyst.ca/docs/About.xhtml
實驗一：犬科動物血清檢測
將健康犬科動物與有胰臟炎之犬科動物之血清進行比較，分別偵測十五組不同碳長度之醯基肉鹼在血清中的含量。請參考第1圖，所繪示為本發明健康犬與胰臟炎犬血清中十五組不同碳長度之醯基肉鹼之相對含量的長條圖，其中該十五組碳長度醯基肉鹼分別為：L-己醯基肉鹼(Hexanoyl L-carnitine,C6)、L-辛烯醯基肉鹼(Octenoyl-L-carnitine,C8：1)、L-辛醯基肉鹼(Octanoyl-L-carnitine,C8)、L-癸醯基肉鹼(Decanoyl-L-carnitine,C10)、L-十二碳烯醯基肉 鹼(Dodecenoyl L-carnitine,C12：1)、L-十二烷(或月桂)醯基肉鹼(Dodecanoyl-L-carnitine,C12)、L-十四碳二烯醯基肉鹼(Tetradecadienoyl-L-carnitine,C14：2)、L-十四碳烯醯基肉鹼(Tetradecenoyl-L-carnitine,C14：1)、L-十四烷醯基肉鹼(Tetradecanoyl-L-carnitine,C14)、L-十六碳烯醯基肉鹼(Hexadecenoyl-L-carnitine,C16：1)、L-十六烷醯基肉鹼(Hexadecanoyl-L-carnitine,C16)、L-十八碳二烯(或亞麻油)醯基肉鹼(Linoleyl-L-carnitine,C18：2)、L-十八碳烯醯基肉鹼(Oleyl-L-carnitine,C18：1)、L-十八正烷(或硬脂)醯基肉鹼(Stearoyl-L-carnitine,C18)、L-二十烷醯基肉鹼(Eicosanoyl-L-carnitine,C20)。如第1圖所示，可知相較於健康犬，罹患有胰臟炎之犬的血清中，上述不同碳長度組別之醯基肉鹼都有增加的趨勢。其中，在C6的組別中，胰臟炎犬為健康犬的2.04倍；在C8：1的組別中，胰臟炎犬為健康犬的1.42倍；在C8的組別中，胰臟炎犬為健康犬的3.89倍；在C10的組別中，胰臟炎犬為健康犬的2.29倍；在C12：1的組別中，胰臟炎犬為健康犬的2.85倍；在C12的組別中，胰臟炎犬為健康犬的2.07倍；在C14：2的組別中，胰臟炎犬為健康犬的2.11倍；在C14：1的組別中，胰臟炎犬為健康犬的1.83倍；在C14的組別中，胰臟炎犬為健康犬的1.94倍；在C16：1的組別中，胰臟炎犬為健康犬的2.57倍；在C16的組別中，胰臟炎犬為健康犬的1.53倍；在C18：2的組別中，胰臟炎犬為健康犬的1.72倍；在C18：1的組別中，胰臟炎犬為健康犬的1.73倍；在C18的組別中，胰臟炎犬為健康犬的1.79倍；在C20的組別中，胰臟炎犬為健康犬的1.42倍。由實驗一的數據顯示不論是中鏈醯基肉鹼(6-12個碳原子)或是長鏈醯基肉鹼(大於12個碳原子)都能有效區別健康犬與胰臟炎犬因此。推測醯基肉鹼可作為胰臟犬之生物標記。
實驗二：犬科動物尿液檢測。
將健康犬科與有胰臟炎之犬科之尿液進行比較，分別偵測十三組不同碳長度之醯基肉鹼在尿液中的含量。請參考第2圖，所繪示為本發明健康犬與胰臟炎犬尿液中十三組不同碳長度之醯基肉鹼之長條圖，其中該十三組碳長度醯基肉鹼分別為：L-己醯基肉鹼(Hexanoyl L-carnitine,C6)、L-辛烯醯基肉鹼(Octenoyl-L-carnitine,C8：1)、L-辛醯基肉鹼(Octanoyl-L-carnitine,C8)、L-癸烯醯基肉鹼(Decenoyl-L-carnitine,C10：1)、L-癸醯基肉鹼(Decanoyl-L-carnitine,C10)、L-十二碳烯醯基肉鹼(Dodecenoyl-carnitine,C12：1)、L-十二烷醯基肉鹼(Dodecanoyl-L-carnitine,C12)、L-十四碳二烯醯基肉鹼(Tetradecadienoyl-L-carnitine,C14：2)、L-十四碳烯醯基肉鹼(Tetradecenoyl-L-carnitine,C14：1)、L-十四烷醯基肉鹼(Tetradecanoyl-L-carnitine,C14)、L-十六烷醯基肉鹼(Hexadecanoyl-L-carnitine,C16)、L-十六碳烯醯基肉鹼(Hexadecenoyl-L-carnitine,C16：1)、L-十八碳二烯(或亞麻油)醯基肉鹼(Linoleyl-L-carnitine,C18：2)。如第2圖所示，可知相較於健康犬，罹患有胰臟炎之犬的尿液中醯基肉鹼都有增加的趨勢，其中C10、C12：1、C12、C14：2組別之醯基肉鹼有顯著增加(p<0.05)。各組別的具體數據如下：在C6的組別中，胰臟炎犬為健康犬的6.08倍；在C8：1的組別中，胰臟炎犬為健康犬的9.40倍；在C8的組別中，胰臟炎犬為健康犬的14.19倍；在C10：1的組別中，胰臟炎犬為健康犬的8.28倍；在C10的組別中，胰臟炎犬為健康犬的23.35倍；在C12：1的組別中，胰臟炎犬為健康犬的24.38倍；在C12的組別中，胰臟炎犬為健康犬的23.61倍；在C14：2的組別中，胰臟炎犬為健康犬的75.23倍；在C14：1的組別中，胰臟炎犬為健康犬的120.14倍；在C14的組別中，胰臟炎犬為健康犬的2086.68倍；在C16的組別中，胰臟炎犬為健康犬的7.30倍；在C16：1的組別中，胰臟炎犬為健康犬的114.01倍；在C18：2的組別中，胰臟炎犬為健康犬的4.08倍。顯示不論是中鏈醯基肉鹼(6-12個碳原子)或是長鏈醯基肉鹼(大於12個碳原子)都能有效區別健康犬與胰臟炎犬，且在尿液中，胰臟 炎犬的中/長鏈醯基肉鹼的濃度為健康犬濃度至少約20倍以上，因此確實可作為犬胰臟炎之生物標記。
而根據上述實驗一與實驗二，可得知中鏈醯基肉鹼在健康犬與胰臟炎犬中的血清以及尿液濃度有明顯的差異，特別是L-癸醯基肉鹼(Decanoyl-L-carnitine,C10)、L-十二碳烯醯基肉鹼(Dodecenoyl-L-carnitine,C12：1)與-L-十二烷(或月桂)醯基肉鹼(Dodecanoyl-L-carnitine,C12)可用來當作檢測尿液與血清的指標，因此最適合作為診斷犬胰臟炎的生物標記。於另一實施例中，長鏈醯基肉鹼中的L-十四碳二烯醯基肉鹼(Tetradecadienoyl-L-carnitine,C14：2)也適合作為尿液與血液的篩檢標記。並且，尿液相較於血液更容易從生物體中取得，不需要以侵入方式取得血液。因此做為試劑組可更方便居家操作而無須至醫療採集院所，相較於習知量測cPL需採血的技術，本發明所提供的量測方法或是試劑組更適合在居家階段即可預先操作。
綜上所述，本發明提供了一種特殊生物標記，即中鏈醯基肉鹼、長鏈醯基肉鹼或其組合，可正確診斷犬科動物例如犬科中胰臟炎發生的機率。

Claims (9)

  1. 一種診斷犬科動物胰臟炎的方法，包含：提供一犬科動物之一檢體；以及偵測該檢體中一生物標記物(biomarker)之一濃度，若該濃度高於一預定值，則判定該犬科動物具有高度胰臟炎風險，其中該預定值涉及一健康犬科動物的該生物標記物的濃度，且該生物標記係指中鏈醯基肉鹼(acylcarnitine)、長鏈醯基肉鹼或其組合，其中中鏈醯基指具有6-12個碳原子鏈長者，長鏈醯基指具有大於12個碳原子鏈長者，其中當該檢體為血清時，該生物標記物之該濃度高於該預定值的2倍以上，或當該檢體為尿液時，該生物標記物之該濃度高於該預定值的20倍以上。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該生物標記所指之中鏈肉鹼係指L-癸醯基肉鹼(Decanoyl-L-carnitine,C10)、L-十二烷(或月桂)醯基肉鹼(Dodecanoyl-L-carnitine,C12)或L-十二碳烯醯基肉鹼(Dodecenoyl-L-carnitine,C12：1)，且該檢體包含尿液或血液。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該生物標記所指之長鏈肉鹼係指L-十四碳二烯醯基肉鹼(Tetradecadienoyl-L-carnitine,C14：2)，且該檢體包含尿液或血液。
  4. 一種診斷犬科動物中胰臟炎的試劑組(kit)，包含一偵測試劑，該偵測試劑與一犬科動物之一檢體混合後，可用以偵測檢體中一生物標記之濃度，該生物標記係指中鏈醯基肉鹼、長鏈醯基肉鹼或其組合，其中中鏈醯基指具 有6-12個碳原子鏈長者，長鏈醯基指具有大於12個碳原子鏈長者。
  5. 如申請專利範圍第4項所述之試劑組，其中該生物標記所指之中鏈肉鹼係指L-癸醯基肉鹼(Decanoyl-L-carnitine,C10)、L-十二烷(或月桂)醯基肉鹼(Dodecanoyl-L-carnitine,C12)、L-十二碳烯醯基肉鹼(Dodecenoyl-L-carnitine,C12：1)，且該檢體包含尿液或血液。
  6. 如申請專利範圍第4項所述之試劑組，其中該生物標記所指之長鏈肉鹼係指L-十四碳二烯醯基肉鹼(Tetradecadienoyl-L-carnitine,C14：2)，且該檢體包含尿液或血液。
  7. 一種使用中鏈醯基肉鹼、長鏈醯基肉鹼或其組合作為診斷犬科動物中胰臟炎之用途，其中中鏈醯基係指具有6-12個碳原子鏈長者，長鏈醯基係指具有大於12個碳原子鏈長者，且該診斷是採犬科動物的尿液或血液為檢體。
  8. 如申請專利範圍第7項所述之用途，是指使用L-癸醯基肉鹼(Decanoyl-L-carnitine,C10)、L-十二烷(或月桂)醯基肉鹼(Dodecanoyl-L-carnitine,C12)或L-十二碳烯醯基肉鹼(Dodecenoyl-L-carnitine,C12：1)作為診斷犬科動物中胰臟炎之用途。
  9. 如申請專利範圍第7項所述之用途，是指使用L-十四碳二烯醯基肉鹼(Tetradecadienoyl-L-carnitine,C14：2)作為診斷犬科動物中胰臟炎之用途。
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