TWI721327B - 樹突細胞疫苗與抗t細胞免疫檢查點蛋白抗體之併用藥物組合及其於製備治療腦腫瘤併用藥物之用途 - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種併用藥物組合，其係包括樹突細胞疫苗以及抗T細胞免疫檢查點蛋白抗體，藉由前述藥物之組合施用，可有效利用於腦腫瘤病患之治療，其中該樹突細胞疫苗包括經放射線處理之抗原所刺激之樹突細胞。本發明亦提供一種利用樹突細胞疫苗與抗T細胞免疫檢查點蛋白抗體於製備治療腦腫瘤併用藥物之用途，其中該樹突細胞疫苗包括經放射線處理之抗原所刺激之樹突細胞。
Description
本發明係關於一種治療腦腫瘤之併用藥物組合及其於製備治療腦腫瘤併用藥物之用途，尤其是關於一種利用樹突細胞疫苗結合抗T細胞免疫檢查點蛋白抗體而用以治療腦腫瘤的併用藥物組合，以及將其利用於製備治療腦腫瘤併用藥物之用途。
由於腦中有不同種類的細胞，惡性腦腫瘤依其細胞類型可分成不同的形態，例如膠質母細胞瘤(glioblastoma)與髓母細胞瘤(medulloblastoma)。傳統腦腫瘤之治療方式包括手術、放射線治療與化學治療。由於許多腫瘤細胞會擴散至周圍組織，因此無法以傳統手術方式加以治療，此時僅能藉由放射線治療與化學治療的結方式進行治療。然而，腦部若以放射線治療可能產生副作用，例如神經元受損，而以化學治療時，由於血腦屏障(blood brain barrier)的存在，也無法使用大分子的藥物，因為大分子的藥物並無法循環進入腦部。此外，腦腫瘤中例如膠質母細胞瘤，對傳統療法也可能產生抗性。因此，需要開發一種能夠完全根除腦腫瘤的治療新策略。
目前研究中之一潛在治療方式為利用樹突細胞(dendritic cells)之免疫療法。樹突細胞在免疫系統中係一最有效的抗原呈現細胞(antigen-presenting cells)，並能夠誘導產生具腫瘤特異性的作用性T細胞。藉由樹突細胞此特徵，使他們可作為一疫苗而引發T細胞反應以破壞腫瘤細胞。最近的研究亦指出，樹突細胞疫苗(以下稱之為「DC疫苗」)可以延長患有癌症受試者之存活時間。
然而，在癌症作用機轉上，目前已知有許多腫瘤細胞能夠透過表現特定的表面蛋白，藉由其與T細胞上免疫檢查點蛋白(immune checkpoint proteins)的結合作用，而躲避免疫系統的攻擊。例如，當T細胞上的免疫檢查點蛋白PD-1(programmed cell death protein 1)與腫瘤細胞上的PD-L1(programmed death-ligand 1)配體相結合後，T細胞的的擴增繁殖、存活與作用性，例如細胞激素(cytokine)的釋放與細胞毒性作用，即會受到抑制，且此結合亦會誘發具腫瘤特異性的作用性T細胞的凋亡。此種躲避免疫系統攻擊的作用，降低了免疫療法於治療癌症上的療效。
因此，為了在以DC疫苗方式治療腦腫瘤時能徹底消滅腦腫瘤細胞，需要開發一種新的治療策略，使其一方面能夠促進DC疫苗的療效，且一方面能抑制腫瘤細胞在免疫反應中的逃避作用。
本發明目的之一在於提供一種新的醫藥組合，再藉由其中DC疫苗與抗T細胞免疫檢查點蛋白抗體的組合治療，達到比以往更具療效之腦腫瘤治療結果。
為了達成前述的目的，本發明提供一種樹突細胞疫苗與抗T細胞免疫檢查點蛋白抗體於製備治療腦腫瘤併用藥物之用途，其中，該樹突細胞疫苗可包括經放射線處理之抗原所刺激之樹突細胞。
在本發明的一實施例中，該樹突細胞疫苗包括能呈現腦神經質瘤細胞(glioma)抗原的樹突細胞，而該樹突細胞係以經放射線處理之腦神經質瘤細胞之裂解物進一步與一骨髓細胞共同培養並使其分化後所獲得。
在本發明的一實施例中，該腦神經質瘤細胞可經以10~30Gy劑量之X射線處理。在本發明的一實施例中，該腦神經質瘤細胞之裂解物可於將該腦神經質瘤細胞以循環凍融方式處理後所獲得，而該樹突細胞可以脂多醣(lipopolysaccharide)將該骨髓細胞分化所獲得。
在本發明的一實施例中，該抗T細胞免疫檢查點蛋白抗體可為anti-PD1抗體、anti-CTLA-4抗體或anti-CD25抗體。
在本發明的一實施例中，該anti-PD1抗體或該anti-CD25抗體之施用劑量可為每兩天一劑200μg，共4劑。
在本發明的另一實施例中，該anti-CTLA-4抗體之施用劑量可為每三天一劑100μg，共3劑。
在本發明的再一實施例中，該樹突細胞疫苗可包括至少1x106個樹突細胞。
本發明同時提供一種用以治療腦腫瘤之併用藥物組合，包括：一樹突細胞疫苗與一抗T細胞免疫檢查點蛋白抗體，其中，該樹突細胞疫苗可包括經放射線處理之抗原所刺激之樹突細胞。
在本發明的一實施例中，該樹突細胞疫苗包括能呈現腦神經質瘤細胞(glioma)抗原的樹突細胞，而該樹突細胞係以經放射線處理之腦神經質瘤細胞之裂解物進一步與一骨髓細胞共同培養並使其分化後所獲得。
在本發明的一實施例中，該腦神經質瘤細胞可經以10~30Gy劑量之X射線處理。
在本發明的一實施例中，該腦神經質瘤細胞之裂解物可於將該腦神經質瘤細胞以循環凍融方式處理後所獲得。
在本發明的一實施例中，該樹突細胞可以脂多醣(lipopolysaccharide)將該骨髓細胞分化所獲得。
在本發明的另一實施例中，該抗T細胞免疫檢查點蛋白抗體可為anti-PD1抗體、anti-CTLA-4抗體或anti-CD25抗體。
在本發明的一實施例中，該anti-PD1抗體或該anti-CD25抗體之劑量可至少為200μg。
在本發明的一實施例中，該anti-CTLA-4抗體之劑量可至少為100μg。
在本發明的另一實施例中，該樹突細胞疫苗可包括至少1x106
個樹突細胞。
藉由本發明，DC疫苗之抗腫瘤細胞效果，經結合抗T細胞免疫檢查點蛋白抗體的作用，可避免癌細胞躲避相關T細胞之清除、毒殺作用，因而可增加其治療效果。特別的是，本發明藉由其中經放射顯處理抗原後所製備之樹突細胞所製造的DC疫苗，更能有效且顯著提高患有腦腫瘤個體的存活率。
以下將進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
本發明於一實施例中，利用一具有人類多種膠質母細胞瘤特徵之動物模式，即老鼠原位腦神經質瘤細胞 261(即GL261)模式進行試驗，發現結合樹突細胞疫苗(即DC疫苗)治療與免疫檢查點抗體的治療，具有優秀抗癌之效果。為建立腫瘤並可藉由生物螢光影像直接觀察體內的腫瘤狀況，係先對所使用動物模式之C57BL/6JNarl小鼠，顱內植入GL261細胞，而該細胞係被改造而能穩定表現螢光素酶(GL261-Luc2)。接著，對具有GL261腫瘤之小鼠週期性施打DC疫苗與抗T細胞免疫檢查點之抗體，並觀察分析其存活率。 實施例 細胞培養
將老鼠腦神經質瘤細胞株GL261-Luc2 (Bioware® Ultra, PerkinElmer, Waltham, MA, USA)，於37°C下、含有5%二氧化碳之加濕空氣中，培養於添加有10%胎牛血清蛋白(fetal bovine serum)、麩醯胺酸(glutamine)、丙酮酸鈉 (sodium pyruvate)與非必需胺基酸之Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)( (GIBCO/Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA))培養液中。 腦神經質瘤細胞凍融裂解物之製備
將前述老鼠腦神經質瘤細胞株GL261-Luc2以10-30Gy之X射線進行照射，較佳為20Gy，之後再繼續培養24小時。接著將細胞濃度調整至1x107
細胞/ml後進行六次循環的凍融(freeze-thaw) 反應，每次反應係將之置於液態氮中3分鐘後，再置於56°C水浴槽3分鐘。前述經由凍融反應所獲得的裂解物(lysate)，於500g下離心5分鐘，回收上清液，並保存於-80°C中備用。 刺激以腫瘤特異性抗原之成熟樹突細胞之製備
首先將C57BL/6JNarl小鼠股骨浸泡在75%的乙醇中，利用Hank’s平衡鹽溶液(HBSS)從骨中將骨髓細胞沖洗出來，並將其中之紅血球去除。之後將骨髓細胞培養於含有10%胎牛血清蛋白、麩醯胺酸、丙酮酸鈉、非必需胺基酸、20ng / mL小鼠重組顆粒球巨噬細胞株刺激因子（GM-CSF）與10 ng /mL小鼠重組介白素-4（IL-4）之樹突細胞培養液中。培養4天後，於前述培養液中加入10 ml新鮮的樹突細胞培養液。在第6天時，將未附著的細胞，亦即未成熟的樹突細胞輕輕地吸出，將其與前述凍融腫瘤細胞裂解物(100 μg)的上清液共同培養30分鐘。之後，利用脂多醣(lipopolysaccharides，LPS)進行分化24小時。由此所獲得的樹突細胞即為成熟樹突細胞，利用流式細胞儀(flow cytometry)分析，該些細胞可表現CD11c、CD40、CD80與CD86等表面抗原。這些刺激以GL261抗原的成熟樹突細胞係用作以下試驗所利用之DC疫苗。 動物實驗
動物實驗係依據中國醫藥大學「動物照護及使用流程」規範進行。由國家實驗動物育種中心取得6週齡雌性C57BL / 6JNar1小鼠（n = 99）。為了建構原位腫瘤模型，每隻C57BL / 6JNar1小鼠被顱內植入以2x104
之GL261-luc2細胞。 以下，將進行植入的日期稱為第0天，於之後向小鼠進行任何治療的日期稱為第0天後的特定日期。腫瘤細胞植入後的每週，以體內影像系統（IVIS Spectrum，PerkinElmer，Waltham，MA，USA），估計小鼠腦中的腫瘤的大小。 此外，具GL261腫瘤小鼠的存活率係以Kaplan-Meier存活曲線和對數等級檢定(log-rank test)進行分析，計算腫瘤植入後的平均存活時間和存活時間中位數。 施打DC疫苗
於腫瘤植入後的第7、10與14天，對具有GL261腫瘤的小鼠分別皮下注射以前述經腫瘤特異性抗原刺激或未經刺激的樹突細胞(1x106
個細胞)。 施打抗體
對具有GL261腫瘤的小鼠進一步腹腔注射以下能阻斷免疫檢查點之抗T細胞免疫檢查點蛋白抗體 (以下稱「免疫檢查點抗體」)：大鼠的抗小鼠PD-1單株抗體，例如RMP1-14株（BioXcell）、倉鼠的抗小鼠CTLA-4單株抗體，例如9H10株（BioXcell）以及大鼠的抗小鼠CD25單株抗體，例如PC-61.5.3株（BioXcell）。對於施打anti-PD-1抗體或大鼠IgG2a同型對照抗體的小鼠，係從第15天起每2天給予200 μg的劑量，共4次。 對於施打anti-CTLA-4抗體或倉鼠IgG同型對照抗體的小鼠，則從第7天起，每3天給予100 μg的劑量，總共3次。 對於施打anti-CD25抗體或大鼠IgG1同型對照抗體的小鼠，從第15天起每2天給予200 μg劑量，共4次。 前述給藥條件的試驗時間軸係顯示於圖1。 實施例1 結合DC疫苗和anti-PD-1抗體治療對具GL261腫瘤小鼠存活率的增強作用
為了評估DC疫苗和anti-PD-1抗體的組合治療對存活率的影響，將植入有小鼠腦神經質瘤細胞GL261-luc2的C57BL / 6JNar1小鼠隨機分組，並分別腹膜注射以下成分：未經刺激的樹突細胞（僅DC疫苗）、anti-PD-1抗體、大鼠IgG2a同型對照抗體、DC疫苗與anti-PD-1抗體的組合，或DC疫苗和大鼠IgG2a同型對照抗體的組合。之後對每組繪製Kaplan-Meier存活曲線，結果如圖2所示。依該數據顯示，接受DC疫苗和anti-PD-1抗體組合治療的所有小鼠均存活至少58天，而接受其他治療的小鼠，例如僅DC疫苗或DC疫苗和大鼠IgG2a同型對照抗體的組合治療，均僅顯示相當短暫的存活狀態。接受DC疫苗和anti-PD-1抗體組合治療的小鼠的120天存活率為88.9%，而僅DC疫苗治療的120天存活率則為16.67%。
根據圖2的結果可估計經治療後小鼠的平均存活時間和中位存活時間，其結果如表1所示。此外，上述任兩組間的存活差異係利用對數等級檢定基於中位存活時間或存活率進行比較。如表2所示，相較於僅DC疫苗的治療（p ＜0.001），或是DC疫苗和大鼠IgG2a同型對照抗體的組合治療（p= 0.002），以DC疫苗和anti-PD-1抗體組合治療的小鼠顯示出具有更高的存活率。此結果證明，DC疫苗和anti-PD-1抗體的組合治療的確能有效地提高了DC疫苗的抗腫瘤效果。 表1 
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: 當估計值係由設限數據所獲得時，所觀察到的最長存活時間即為設限值。 表2 
實施例2 結合DC疫苗和anti-CTLA-4抗體治療對具GL261腫瘤小鼠存活率的增強作用
CTLA-4為T細胞上的蛋白受體，其抑制調控免疫反應之進行而作為一免疫檢查點。為了進一步評估DC疫苗和anti-CTLA-4抗體的組合治療對存活率的影響，將植入有小鼠腦神經質瘤細胞GL261-luc2的C57BL / 6JNar1小鼠隨機分組，並分別腹膜注射以下成分：未經刺激的樹突細胞（僅DC疫苗）、anti-CTLA-4抗體、倉鼠IgG同型對照抗體、DC疫苗與anti-PD-1抗體的組合，或DC疫苗和倉鼠IgG同型對照抗體的組合。之後對每組繪製Kaplan-Meier存活曲線，結果如圖3所示。依該數據顯示，接受DC疫苗和anti-CTLA-4抗體組合治療的所有小鼠均存活至少41天，而接受其他治療的小鼠，例如僅DC疫苗或DC疫苗和倉鼠IgG同型對照抗體組合治療則相對較短。接受DC疫苗和anti-CTLA-4抗體組合治療的小鼠的120天存活率為62.5%，而僅DC疫苗治療的120天存活率為14.29%。
根據圖2的結果可估計經治療後小鼠的平均存活時間和中位存活時間，其結果如表3所示。此外，上述任兩組間的存活差異係利用對數等級檢定基於中位存活時間或存活率進行比較。如表4所示，相較於僅DC疫苗的治療（p ＜0.001），或是DC疫苗和倉鼠IgG同型對照抗體的組合治療（p= 0.024），以DC疫苗和anti-CTLA-4抗體組合治療的小鼠顯示出具有更高的存活率。此結果證明，DC疫苗和anti-CTLA-4抗體的組合治療的確能有效地提高了DC疫苗的抗腫瘤效果。 表3 
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: 當估計值係由設限數據所獲得時，所觀察到的最長存活時間即為設限值。 表4 
實施例3 結合DC疫苗和anti-CD25抗體治療對具GL261腫瘤小鼠存活率的增強作用
CD25為IL-2受體蛋白中的a鏈，影響著其與IR-2結合的親和力，其存在於調節T細胞(regulatory T cell)上。為了進一步評估DC疫苗和anti-CD25抗體的組合治療對存活率的影響，將植入有小鼠腦神經質瘤細胞GL261-luc2的C57BL / 6JNar1小鼠隨機分組，並分別腹膜注射以下成分：未經刺激的樹突細胞（僅DC疫苗）、anti-CD25抗體、大鼠IgG1同型對照抗體、DC疫苗與anti-CD25抗體的組合，或DC疫苗和大鼠IgG1同型對照抗體的組合。之後對每組繪製Kaplan-Meier存活曲線，結果如圖4所示。數據顯示，接受DC疫苗和anti-CD25抗體組合治療的所有小鼠均存活至少39天，而接受其他治療的小鼠，例如僅DC疫苗或DC疫苗和大鼠IgG1同型對照抗體組合治療則相對較短。接受DC疫苗和anti-CD25抗體組合治療的小鼠的120天存活率為16.67%。
根據圖4的結果可估計經治療後小鼠的平均存活時間和中位存活時間，其結果如表5所示。此外，上述任兩組間的存活差異係利用對數等級檢定基於中位存活時間或存活率進行比較。如表6所示，相較於僅DC疫苗的治療（p ＜0.001），或是DC疫苗和大鼠IgG1同型對照抗體的組合治療（p= 0.005），以DC疫苗和anti-CD25抗體組合治療的小鼠顯示出具有更高的存活率。此結果證明，DC疫苗和anti-CD25抗體的組合治療能有效地提高了DC疫苗的抗腫瘤效果。 表5 
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: 當估計值係由設限數據所獲得時，所觀察到的最長存活時間即為設限值。 表6 
實施例1至3已經顯示了DC疫苗以及利用抗免疫檢查點蛋白抗體以阻斷免疫檢查點的組合治療策略。 根據表7，本發明的組合治療大幅提高了小鼠的存活率。 例如，腫瘤細胞植入後，結合DC疫苗和抗免疫檢查點蛋白抗體的組合治療於45天、60天和120天的存活率，相較於結合DC疫苗與同型抗體的組合治療，分別提高了157%~314%，275%~489%以及183 %~978%。 表7 
實施例4 經放射線處理之抗原於經抗原刺激DC疫苗的抗腫瘤療效之促進作用
於本實施例中，對於DC疫苗治療療效之促進係來自於前述於製備樹突細胞時所需腫瘤抗原先經放射線處理後，再經凍融反應所獲裂解物以進一步製備DC疫苗的結果。為確認經放射線處理之抗原對於DC疫苗抗癌療效的影響，將植入有小鼠腦神經質瘤細胞GL261-luc2的C57BL / 6JNar1小鼠隨機分組，並分別腹膜注射以下成分：未經抗原刺激的樹突細胞(僅DC疫苗)、未經放射線處理之腦神經質瘤細胞裂解物刺激後所製備之DC疫苗(即：GBM裂解物刺激之DC疫苗)、經放射線處理之腦神經質瘤細胞裂解物刺激後所製備之DC疫苗(即：放射線處理之GBM裂解物刺激之DC疫苗)、或空白載體控制組(施打生理食鹽水)。之後對每組繪製Kaplan-Meier存活曲線，結果如圖5所示，並根據圖5的結果估計經治療後小鼠的平均存活時間和存活時間的中位數，其結果如表8所示。依該數據顯示，以放射線處理之GBM裂解物所刺激之DC疫苗治療的小鼠，其存活時間的中位數為46±6.547天，而未經放射線處理之GBM裂解物所刺激之DC疫苗治療的小鼠其存活時間的中位數為32±4.472天。
上述任兩組間的存活差異係利用對數等級檢定基於中位存活時間或存活率進行比較。如表9所示，相較於以未經放射線處理之腦神經質瘤細胞裂解物刺激後所製備之DC疫苗（p = 0.035）進行治療，以經放射線處理之腦神經質瘤細胞裂解物刺激後所製備之DC疫苗治療的小鼠顯示出具有更高的存活率。此結果證明，對於經抗原刺激的DC疫苗而言，利用於誘導樹突細胞的腫瘤抗原若先進行放射線處理，將能製備出更具療效的DC疫苗。 表8 
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: 當估計值係由設限數據所獲得時，所觀察到的最長存活時間即為設限值。 表9 
實施例5 以經放射線或未經放射線處理抗原所刺激之DC疫苗結合anti-PD-1抗體組合治療的抗腫瘤作用評估
為了進一步研究經放射線或未經放射線處理抗原所刺激之DC疫苗結合anti-PD-1抗體組合治療所產生抗腫瘤作用的差異性，將植入有小鼠腦神經質瘤細胞GL261-luc2的C57BL / 6JNar1小鼠隨機分組，並分別腹膜注射以下成分：未經抗原刺激的樹突細胞(僅DC疫苗)、anti-PD-1抗體、未經放射線處理GBM裂解物刺激之DC疫苗（以下簡稱為DCv）、經放射線處理之GBM裂解物刺激之DC疫苗（以下簡稱為IR-DCv）、經放射線處理GBM裂解物刺激之DC疫苗與anti-PD-1抗體的組合、經放射線處理之GBM裂解物刺激之DC疫苗與anti-PD-1抗體的組合、或空白載體控制組(施打生理食鹽水)。之後對每組繪製Kaplan-Meier存活曲線，結果如圖6所示，並根據圖6的結果估計經治療後小鼠的平均存活時間和存活時間的中位數，其結果如表10所示。依該數據顯示，以anti-PD-1抗體治療的小鼠其存活時間之中位數為31±1.309天，以未經放射線處理GBM裂解物刺激之DC疫苗和anti-PD-1抗體組合治療的小鼠其存活時間之中位數為31±2.858天，而經放射線處理之GBM裂解物刺激之DC疫苗與anti-PD-1抗體的組合治療的所有小鼠存活至少58天，該組100天生存率更高達88.89%。
上述任兩組間的存活差異係利用對數等級檢定基於中位存活時間或存活率進行比較。如表11所示，相較於未經放射線處理GBM裂解物刺激之DC疫苗和anti-PD-1抗體組合治療（p ＜ 0.0001），以經放射線處理之GBM裂解物刺激之DC疫苗與anti-PD-1抗體組合治療的小鼠顯示出具有更高的存活率。此結果證明，對於以經抗原刺激之DC疫苗結合anti-PD-1抗體進行組合治療的治療策略中，將腫瘤抗原經過放射線處理的程序在提升抗腫瘤的療效上扮演了一種要角色。 表10 
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: 當估計值係由設限數據所獲得時，所觀察到的最長存活時間即為設限值。 表11 
實施例6 以經放射線或未經放射線處理抗原所刺激之DC疫苗結合anti-CTLA-4抗體組合治療的抗腫瘤作用評估
為了進一步研究經放射線或未經放射線處理抗原所刺激之DC疫苗結合anti-CTLA-4抗體組合治療所產生抗腫瘤作用的差異性，將植入有小鼠腦神經質瘤細胞GL261-luc2的C57BL / 6JNar1小鼠隨機分組，並分別腹膜注射以下成分：未經抗原刺激的樹突細胞(僅DC疫苗)、anti-CTLA-4抗體、未經放射線處理GBM裂解物刺激之DC疫苗（以下簡稱為DCv）、經放射線處理之GBM裂解物刺激之DC疫苗（以下簡稱為IR-DCv）、經放射線處理GBM裂解物刺激之DC疫苗與anti-CTLA-4抗體的組合、經放射線處理之GBM裂解物刺激之DC疫苗與anti-CTLA-4抗體的組合、或空白載體控制組(施打生理食鹽水)。之後對每組繪製Kaplan-Meier存活曲線，結果如圖7所示，並根據圖7的結果估計經治療後小鼠的平均存活時間和存活時間的中位數，其結果如表12所示。依該數據顯示，以anti-CTLA-4抗體治療的小鼠其存活時間之中位數為28±1.837天，以未經放射線處理GBM裂解物刺激之DC疫苗和anti-CTLA-4抗體組合治療的小鼠其存活時間之中位數為32±1.837天，而經放射線處理之GBM裂解物刺激之DC疫苗與anti-CTLA-4抗體的組合治療的所有小鼠存活至少41天，該組100天生存率為62.5%。
上述任兩組間的存活差異係利用對數等級檢定基於中位存活時間或存活率進行比較。如表13所示，相較於未經放射線處理GBM裂解物刺激之DC疫苗和anti-CTLA-4抗體的組合治療（p ＜ 0.0001），以經放射線處理之GBM裂解物刺激之DC疫苗與anti-CTLA-4抗體組合治療的小鼠顯示出具有更高的存活率。此結果證明，對於以經抗原刺激之DC疫苗結合anti-CTLA-4抗體進行組合治療的治療策略中，將腫瘤抗原經過放射線處理的程序在提升抗腫瘤的療效上扮演了一種要角色。 表12 
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: 當估計值係由設限數據所獲得時，所觀察到的最長存活時間即為設限值。 表13 
綜之，本發明利用於治療腦腫瘤的併用藥物組合，包括抗免疫檢查點蛋白的抗體，例如anti-PD-1、anti-CTLA-4與anti-CD25抗體，並結合經放射線處理的的腫瘤抗原來增強DC疫苗的抗腫瘤療效，使得具有腫瘤的小鼠能顯著延長其存活期間，而優於以往治療策略所生之療效。因此，藉由本發明包括DC疫苗以及抗T細胞免疫檢查點蛋白抗體的併用藥物組合，可結合DC疫苗優秀的搜尋、辨識腫瘤抗原的效果，以及抗T細胞免疫檢查點蛋白抗體對抑制調整性質的免疫檢查點產生之阻斷效果，使腫瘤細胞無法躲避免疫系統之作用，達到徹底消滅腫瘤細胞的目的。且特別的是，本發明之DC疫苗，其製備過程中所使用之腫瘤抗原，係先經放射線處理，使得所製備的DC疫苗，於本發明中與抗T細胞免疫檢查點蛋白抗體併用治療之情況下，能更進一步顯著提升抗腫瘤之療效。
無
圖1係本發明實施例於移植有GL261-luc2細胞的小鼠施打DC疫苗與免疫檢查點蛋白抗體之時間軸流程示意圖。 圖2 係本發明實施例於具GL261腫瘤的小鼠中分別施打未經抗原刺激的DC疫苗(即：僅DC疫苗)、anti-PD-1抗體、大鼠IgG2a同型對照抗體、結合DC疫苗與anti-PD-1抗體、或結合DC疫苗與大鼠IgG2a同型對照抗體之Kaplan-Meier 存活曲線圖。 圖3係本發明實施例於具GL261腫瘤的小鼠中分別施打未經抗原刺激的DC疫苗(即：僅DC疫苗)、anti-CTLA-4抗體、倉鼠IgG同型對照抗體、結合DC疫苗與anti-CTLA-4抗體、或結合DC疫苗與倉鼠IgG同型對照抗體之Kaplan-Meier 存活曲線圖。 圖4係本發明實施例於具GL261腫瘤的小鼠中分別施打未經抗原刺激的DC疫苗(即：僅DC疫苗)、anti-CD25抗體、大鼠IgG1同型對照抗體、結合DC疫苗與anti-CD25抗體、或結合DC疫苗與大鼠IgG1同型對照抗體之Kaplan-Meier 存活曲線圖。 圖5 係本發明實施例於具GL261腫瘤的小鼠中分別施打未經抗原刺激的DC疫苗(即：僅DC疫苗)、未經放射線處理之腦神經質瘤細胞裂解物刺激後所製備之DC疫苗(即：GBM裂解物刺激之DC疫苗)、經放射線處理之腦神經質瘤細胞裂解物刺激後所製備之DC疫苗(即：放射線處理之GBM裂解物刺激之DC疫苗)、或空白載體控制組之Kaplan-Meier 存活曲線圖。 圖6係本發明實施例係本發明實施例於具GL261腫瘤的小鼠中分別施打未經抗原刺激的DC疫苗(即：僅DC疫苗) 、anti-PD-1抗體、未經放射線處理之腦神經質瘤細胞裂解物刺激後所製備之DC疫苗(即：GBM裂解物刺激之DC疫苗，簡稱DCv)、經放射線處理之腦神經質瘤細胞裂解物刺激後所製備之DC疫苗(即：放射線處理之GBM裂解物刺激之DC疫苗，簡稱IR-DCv)、結合GBM裂解物刺激之DC疫苗(DCv)與anti-PD-1抗體、結合放射線處理之GBM裂解物刺激之DC疫苗(IR-DCv)與anti-PD-1抗體、或空白載體控制組之Kaplan-Meier 存活曲線圖。 圖7係本發明實施例係本發明實施例於具GL261腫瘤的小鼠中分別施打未經抗原刺激的DC疫苗(即：僅DC疫苗) 、anti-CTLA-4抗體、未經放射線處理之腦神經質瘤細胞裂解物刺激後所製備之DC疫苗(即：GBM裂解物刺激之DC疫苗，簡稱DCv)、經放射線處理之腦神經質瘤細胞裂解物刺激後所製備之DC疫苗(即：放射線處理之GBM裂解物刺激之DC疫苗，簡稱IR-DCv)、結合GBM裂解物刺激之DC疫苗(DCv)與anti- CTLA-41抗體、結合放射線處理之GBM裂解物刺激之DC疫苗(IR-DCv)與anti- CTLA-4抗體、或空白載體控制組之Kaplan-Meier 存活曲線圖。
Claims (16)
- 一種樹突細胞疫苗與抗T細胞免疫檢查點蛋白抗體於製備治療腦腫瘤併用藥物之用途，其中，該樹突細胞疫苗包括經放射線處理之抗原所刺激之樹突細胞，且該放射線之劑量為20Gy。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該樹突細胞疫苗包括能呈現腦神經質瘤細胞(glioma)抗原的樹突細胞，而該樹突細胞係以經放射線處理之腦神經質瘤細胞之裂解物與一骨髓細胞共同培養並使其分化後所獲得。
- 如申請專利範圍第2項所述之用途，其中該腦神經質瘤細胞之裂解物係將該腦神經質瘤細胞以循環凍融方式處理後所獲得。
- 如申請專利範圍第2項所述之用途，其中該樹突細胞係以脂多醣(lipopolysaccharide)將該骨髓細胞分化所獲得。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該抗T細胞免疫檢查點蛋白抗體係anti-PD1抗體、anti-CTLA-4抗體或anti-CD25抗體。
- 如申請專利範圍第5項所述之用途，其中該anti-PD1抗體或該anti-CD25抗體之施用劑量係每兩天一劑200μg，共4劑。
- 如申請專利範圍第5項所述之用途，其中該anti-CTLA-4抗體之施用劑量係每三天一劑100μg，共3劑。
- 如申請專利範圍第1至7項中任一項所述之用途，其中該樹突細胞疫苗包括至少1x106個樹突細胞。
- 一種用以治療腦腫瘤之併用藥物組合，包括：一樹突細胞疫苗與一抗T細胞免疫檢查點蛋白抗體，其中，該樹突細胞疫苗包括經放射線處理之抗原所刺激之樹突細胞，且該放射線之劑量為20Gy。
- 如申請專利範圍第9項所述之併用藥物組合，其中該樹突細胞疫苗包括能呈現腦神經質瘤細胞(glioma)抗原的樹突細胞，而該樹突細胞係以經放 射線處理之腦神經質瘤細胞之裂解物與一骨髓細胞共同培養並使其分化後所獲得。
- 如申請專利範圍第10項所述之併用藥物組合，其中該腦神經質瘤細胞之裂解物係將該腦神經質瘤細胞以循環凍融方式處理後所獲得。
- 如申請專利範圍第10項所述之併用藥物組合，其中該樹突細胞係以脂多醣(lipopolysaccharide)將該骨髓細胞分化所獲得。
- 如申請專利範圍第9項所述之併用藥物組合，其中該抗T細胞免疫檢查點蛋白抗體係anti-PD1抗體、anti-CTLA-4抗體或anti-CD25抗體。
- 如申請專利範圍第13項所述之併用藥物組合，其中該anti-PD1抗體或該anti-CD25抗體之劑量係至少200μg。
- 如申請專利範圍第13項所述之併用藥物組合，其中該anti-CTLA-4抗體之劑量係至少100μg。
- 如申請專利範圍第9至15項中任一項所述之併用藥物組合，其中該樹突細胞疫苗包括至少1x106個樹突細胞。
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