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TWI786105B - 生體內酚化合物減低劑 - Google Patents

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TWI786105B
TWI786105B TW107112967A TW107112967A TWI786105B TW I786105 B TWI786105 B TW I786105B TW 107112967 A TW107112967 A TW 107112967A TW 107112967 A TW107112967 A TW 107112967A TW I786105 B TWI786105 B TW I786105B
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glucose
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高柹了大
谷口美文
櫻井岳夫
渡邊光
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日商林原股份有限公司
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Abstract

[課題]以提供生體內酚化合物減低劑及含有其而成之生體內酚化合物減低用之飲食物為課題。 　　[解決手段]藉由提供以具有下述(A)至(C)之特徵的分支α-葡聚糖混合物為有效成分之生體內酚化合物減低劑及含有其而成之生體內酚化合物減低用之飲食物，來解決上述課題： 　　(A)以葡萄糖為構成糖， 　　(B)具有於位於透過α-1,4鍵結連結之葡萄糖聚合度3以上之直鏈狀葡聚糖的一端之非還原末端葡萄糖殘基上，透過α-1,4鍵結以外之鍵結而連結之葡萄糖聚合度1以上的分支結構， 　　(C)藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化而生成異麥芽糖。

Description

生體內酚化合物減低劑
本發明係關於生體內酚化合物減低劑，詳細而言，係關於人類攝取後，會改善腸內菌叢，並且減低生體內之酚化合物的生體內酚化合物減低劑，與含有其而成之生體內酚化合物減低用之飲食物。
人類之腸內(特別是大腸)，係定居有各種各樣之細菌(腸內細菌)，形成稱作腸內菌叢(腸菌族)之細菌群。腸內菌叢被認為由100種類以上、100兆個之腸內細菌所構成，已知與人類(宿主)之健康有密切關係。腸內細菌，以人類無法消化之食物殘渣或來自消化道之分泌物等為餌食而增殖，成為糞便排出於體外。
作為構成腸內菌叢之細菌，已知有雙岐桿菌(Bifidobacterium)(比菲德氏菌)、類桿菌(Bacteroides)、真細菌(Eubacterium)、芽孢梭菌(Clostridium)、大腸菌、乳酸桿菌、腸球菌等。腸內菌叢中之細菌的平衡雖有個人差，但被認為其人自身之平衡，自新生兒時至成年，在健康時幾乎不變。但是，據指因為壓力、過勞、暴飲/暴食、偏食、氣候/溫度、藥、感染、年齡老化等各種要因，其平衡崩解，比菲德氏菌等之好菌減少，產氣莢膜芽孢梭菌(Clostridium perfringens)或大腸菌等之壞菌增加時，會成為下痢、便秘、免疫力降低所致之感染症、腸內腐敗產物之增加所致之致癌等之各種疾病的原因。
腸內環境不僅與各種疾病，可認為與老化亦有相關。高齡者中，被認為比菲德氏菌之細菌數減少，腸內菌叢混亂，據指腸內菌叢若惡化，則有促進老化之可能性。腸道內之壞菌會產生有害的腐敗產物(氨、胺化合物、酚化合物、吲哚化合物等)。此等腐敗產物被認為係對腸道直接造成損害，並且一部分被吸收入血中，循環體內而與各種疾病之發病、皮膚粗糙等亦相關。
作為改善腸內菌叢之方法，攝取益生菌(Probiotics)或益生質(Prebiotics)的方法係廣為人知。益生菌意指改善腸內環境，且具有整腸作用或免疫調節作用等之活的微生物群或以活的狀態含有該微生物群之食品，其係具有對人類有益的作用之以乳製品等的形式攝取之生菌劑。另一方面，益生質(Prebiotics)意指於消化道上部不被分解/吸收，且係於大腸共生之有益細菌之選擇性的營養源，促進該等之增殖，改善腸菌族之構成成為健康性的平衡，並有用於維持人的健康增進之食品成分。至目前為止，已知有寡糖(半乳糖寡糖、果寡糖、大豆寡糖、乳果寡糖、木寡糖、異麥芽寡糖、棉子糖、乳酮糖、咖啡豆甘露寡糖、葡萄糖酸等)或膳食纖維(聚右旋糖(polydextrose)、菊糖等)作為滿足為益生質之要件的食品成分。
可認為若攝取益生菌或益生質而改善腸內菌叢時，可減低前述有害的腸內腐敗產物(氨、胺化合物、酚化合物、吲哚化合物等)之量。非專利文獻1、4及5等中，報告了使用含有作為腸內腐敗產物之酚、p-甲酚之原料的酪胺酸之飼料來飼育大鼠/小鼠時，若使其攝取半乳糖寡糖及/或乳酸菌/比菲德氏菌發酵乳，則血清中之酚及p-甲酚會減低。又，非專利文獻2中，報告了由腸內細菌所產生之酚類對無毛小鼠之皮膚造成不良影響，非專利文獻3中，報告了由腸內細菌所產生之酚類會阻礙人類皮膚中之纖維母細胞的分化。又，非專利文獻6中，報告了使以含有酪胺酸之飼料飼育之大鼠一併攝取高直鏈澱粉時，生體內之p-甲酚增加被抑制，進一步地，非專利文獻7中，報告了比菲德氏菌發酵乳會發揮改善人類之腸內環境，減低血中酚化合物，並且維持皮膚之角質水分含量等之美容效果。
但是，非專利文獻6中，於使大鼠攝取已知作為膳食纖維及益生質之1的菊糖之試驗中，報告了菊糖未顯示p-甲酚之減低效果，故雖為可改善腸內菌叢之益生菌或益生質，並不一定可減低生體內之有害代謝產物的酚化合物。於如此狀況下，若提供作為低甜味或無味而利用範圍廣，可日常性地輕鬆且安全地持續攝取的益生質而發揮功能之水溶性膳食纖維素材，且為不僅改善腸內菌叢，且可減低作為腸內腐敗產物而產生之酚、p-甲酚等之生體內酚化合物的新穎素材的話，則極為有用。 [先前技術文獻] [非專利文獻]
[非專利文獻1] Kawakami等，「J.Nutr.Sci.Vitaminol.」，第51卷、182-186頁(2005年) 　　[非專利文獻2] Iizuka等，「Microbial Ecology in Health and Disease」,第21卷、50-56頁(2009年) 　　[非專利文獻3] Iizuka等，「Microbial Ecology in Health and Disease」,第21卷、221-227頁(2009年) 　　[非專利文獻4] 川上等，「養樂多研究所研究報告集」，第29號、15-26頁(2010年) 　　[非專利文獻5] 石井等，「FRAGRANCE JOURNAL」，第5號(2014年) 　　[非專利文獻6] 陳(Chen)等，「luminacoid研究」，第20卷、1號、31-38頁、(2016年) 　　[非專利文獻7] 養樂多股份有限公司總公司，新聞稿，「比菲德氏菌發酵乳改善皮膚粗糙」，2013年2月4日
[發明所欲解決之課題]
本發明之課題為提供人類攝取後，發揮改善腸內菌叢，並且減低生體內酚化合物之效果，以其本身為低甜味或無味而利用範圍廣，可日常性地輕鬆且安全地持續攝取的物質為有效成分之生體內酚化合物減低劑，與含有其而成之生體內酚化合物減低用之飲食物。 [用以解決課題之手段]
為了解決上述課題而重複努力研究之結果，本發明者等發現，本案申請人先前於國際公開第WO2008/136331號小冊中所揭示之分支α-葡聚糖混合物，具體而言係以葡萄糖為構成糖，具有於透過α-1,4鍵結連結之葡萄糖聚合度3以上之直鏈狀葡聚糖(glucan)的非還原末端葡萄糖殘基上，透過α-1,4鍵結以外之鍵結而連結之葡萄糖聚合度1以上的分支結構，且藉由異麥芽糖葡聚糖酶(isomaltodextranase)消化而生成異麥芽糖之分支α-葡聚糖混合物，當將之攝取後，發揮不僅改善腸內菌叢，且使生體內之酚化合物顯著減低之效果。基於此新穎見解，本發明者等確立了以其本身為低甜味或無味而利用範圍廣之該分支α-葡聚糖混合物為有效成分的生體內酚化合物減低劑，與含有其而成之生體內酚化合物減低用之飲食物，完成了本發明。
亦即，本發明藉由提供以具有下述(A)至(C)之特徵的分支α-葡聚糖混合物為有效成分的生體內酚化合物減低劑，而解決上述課題。 　　(A)以葡萄糖為構成糖， 　　(B)具有於位於透過α-1,4鍵結連結之葡萄糖聚合度3以上之直鏈狀葡聚糖的一端之非還原末端葡萄糖殘基上，透過α-1,4鍵結以外之鍵結而連結之葡萄糖聚合度1以上的分支結構， 　　(C)藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化而生成異麥芽糖。
具有上述特徵之分支α-葡聚糖混合物，為以澱粉等為原料所得到之α-葡聚糖，不僅為安全的可食性素材，且係低甜味或無味，將其攝取時，會發揮改善腸內菌叢，並且顯著減低生體內酚化合物之效果。因此，具有上述特徵(A)至(C)之分支α-葡聚糖混合物，作為生體內酚化合物減低劑之有效成分而極為有用。
進一步地，本發明藉由提供含有上述生體內酚化合物減低劑而成之生體內酚化合物減低用之飲食物，來解決上述課題。 [發明之效果]
本發明之生體內酚化合物減低劑，其有效成分之分支α-葡聚糖混合物為低甜味或無味，因此利用範圍廣，人類攝取時，不僅改善腸內菌叢，且可於生體內減低已知作為腸內腐敗產物之酚化合物，故有用於皮膚之健康、美容之維持、進而生體之健康維持。又，含有本發明之生體內酚化合物減低劑而成之飲食物，藉由將其攝取，可簡便且安全有效果地減低生體內之酚化合物。
本發明係關於以具有下述(A)至(C)之特徵的分支α-葡聚糖混合物為有效成分的生體內酚化合物減低劑之發明。 　　(A)以葡萄糖為構成糖， 　　(B)具有於位於透過α-1,4鍵結連結之葡萄糖聚合度3以上之直鏈狀葡聚糖的一端之非還原末端葡萄糖殘基上，透過α-1,4鍵結以外之鍵結而連結之葡萄糖聚合度1以上的分支結構， 　　(C)藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化而生成異麥芽糖。
本說明書中所稱之生體內酚化合物減低劑，意指人類經口或經管攝取後增加腸內之所謂好菌，改善腸內菌叢，並且相較於未攝取該劑的情況，減低了生體內所含有的酚化合物之量之劑，例如，可藉由在攝取該劑與未攝取之間比較盲腸內容物、血清、尿、糞便、皮膚等之生體試樣中所含有的酚化合物之量來進行確認。再者，此處所稱之「酚化合物」，意指酚、p-甲酚(p-甲基酚)等。再者，此等「酚化合物」，被認為係來自人類攝取之蛋白質的胺基酸之酪胺酸，藉由腸內細菌等被代謝而作為腸內腐敗產物所生成。
如非專利文獻7所教示，若可減低生體內之酚化合物，特別是血中或皮膚中之酚化合物，於皮膚中角質水分含量之維持或表皮角化之正常化等受到期待，進而期待造成皮膚之健康、美容之維持。此外，生體內之酚化合物被報告與大腸之致癌相關(參照非專利文獻6)，若可將其減低，則期待亦造成減低致癌或各種疾病風險。
本發明之生體內酚化合物減低劑，為含有前述分支α-葡聚糖混合物(以下稱為「本分支α-葡聚糖混合物」)作為有效成分而成者。本分支α-葡聚糖混合物，如後述般可藉由各種之製造方法得到，所得到之本分支α-葡聚糖混合物，通常為具有各種分支結構以及葡萄糖聚合度(分子量)之多數的分支α-葡聚糖之混合物的形態，現行的技術下，進行一個一個的分支α-葡聚糖之單離或定量是不可能的。因此，雖無法對每個分支α-葡聚糖之分子決定各個分支α-葡聚糖之結構，亦即構成單位之葡萄糖殘基的鍵結樣式及鍵結順序，但本分支α-葡聚糖混合物之結構，可藉由該領域中一般所用之各種物理手法、化學手法或酵素手法，就混合物全體來賦予特徵。
具體而言，本分支α-葡聚糖混合物之結構，作為混合物全體，係以上述(A)至(C)之特徵來賦予特徵。亦即，本分支α-葡聚糖混合物，為以葡萄糖為構成糖之葡聚糖(特徵(A))，具有於位於透過α-1,4鍵結連結之葡萄糖聚合度3以上之直鏈狀葡聚糖的一端之非還原末端葡萄糖殘基上，透過α-1,4鍵結以外之鍵結而連結之葡萄糖聚合度1以上的分支結構(特徵(B))。再者，特徵(B)所稱之「非還原末端葡萄糖殘基」，意指透過α-1,4鍵結連結之葡聚糖鏈當中，位於不顯示還原性之末端的葡萄糖殘基，「α-1,4鍵結以外之鍵結」，如字面上敘述，意指α-1,4鍵結以外之鍵結。
進一步地，本分支α-葡聚糖混合物，藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化而生成異麥芽糖(特徵(C))。特徵(C)所稱之異麥芽糖葡聚糖酶消化，意指使異麥芽糖葡聚糖酶作用於本分支α-葡聚糖混合物，進行水解。異麥芽糖葡聚糖酶，為酵素編號(EC)3.2.1.94之酵素，其係不管α-葡聚糖中之異麥芽糖結構的還原末端側所鄰接之α-1,2、α-1,3、α-1,4，及α-1,6鍵結的所有鍵結樣式均具有會進行水解的特徵之酵素。適宜使用來自球形節桿菌(Arthrobacter globiformis)之異麥芽糖葡聚糖酶(例如參照Sawai等，Agricultural and Biological Chemistry、第52卷、第2號、第495頁-501頁(1988))。
藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化而生成異麥芽糖，係表示具有構成分支α-葡聚糖混合物之分支α-葡聚糖分子可被異麥芽糖葡聚糖酶水解的異麥芽糖結構，藉由特徵(C)，本分支α-葡聚糖混合物，當作為混合物全體來觀察時，可藉由酵素手法得知其特徵係具有含有可被異麥芽糖葡聚糖酶水解之異麥芽糖結構的結構性特徵。
本分支α-葡聚糖混合物，藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化，相對於消化物之固體物而言，通常生成5質量%以上70質量%以下、較佳為生成10質量%以上60質量%以下、更佳為生成20質量%以上50質量%以下之異麥芽糖者，可認為更適合於腸內菌叢之改善，減低生體內之酚化合物濃度的效果更優良，故適合使用。
亦即，如後述般，可認為本分支α-葡聚糖混合物所致之腸內菌叢之改善效果、減低生體內之酚化合物濃度的效果，與本分支α-葡聚糖混合物具有藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化而生成異麥芽糖之結構性特徵一事有深度相關。亦即，異麥芽糖葡聚糖酶消化之異麥芽糖生成量未達5質量%的分支α-葡聚糖混合物，具有與分支結構少之麥芽糊精接近的結構性特徵，相反地，異麥芽糖葡聚糖酶消化之異麥芽糖生成量超過70質量%的分支α-葡聚糖混合物，具有與以α-1,6鍵結連結的葡萄糖聚合物即聚葡萄糖(dextran)接近的結構性特徵，因為上述特徵(B)所規定之分支結構變少，故都不成為可認為與腸內菌叢之改善、進而生體內酚化合物減低相關的結構性特徵，異麥芽糖葡聚糖酶消化所生成的異麥芽糖量係存在著適當範圍。
又，本分支α-葡聚糖混合物之更適宜的一態樣，可列舉具有以高速液體層析(酵素-HPLC法)所求得的水溶性膳食纖維含量為40質量%以上之特徵(D)者。
求得水溶性膳食纖維含量之「高速液體層析法(酵素-HPLC法)」(以下僅稱為「酵素-HPLC法」)，係指平成8(1996)年5月厚生省告示第146號之營養表示基準，「營養成分等之分析方法等(營養表示基準類別表第1之第3欄所揭示方法)」中之第8項，「膳食纖維」所記載的方法，其概略說明係如下所述。亦即，將試樣藉由以熱穩定α-澱粉酶、蛋白酶及葡萄糖澱粉酶之一系列酵素處理來進行分解處理，藉由離子交換樹脂自處理液去除蛋白質、有機酸、無機鹽類，以調製凝膠過濾層析用之試樣溶液。接著，進行凝膠過濾層析，求得層析圖中未消化葡聚糖與葡萄糖之波峰面積，使用各自之波峰面積，與另外藉由一般方法，以葡萄糖/氧化酶法求得的試樣溶液中之葡萄糖量，來算出試樣之水溶性膳食纖維含量。再者，遍本說明書中，只要無特別說明，「水溶性膳食纖維含量」意指以前述「酵素-HPLC法」所求得的水溶性膳食纖維含量。
水溶性膳食纖維含量，為顯示未被α-澱粉酶及葡萄糖澱粉酶分解之α-葡聚糖的含量者，特徵(D)為以酵素手法對本分支α-葡聚糖混合物之結構，就混合物全體而言賦予特徵之指標之一。
再者，如上所述，可認為本分支α-葡聚糖混合物所致之腸內菌叢之改善效果、減低生體內酚化合物之效果，與藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化而生成異麥芽糖之結構性特徵深度相關，當然，可認為若本分支α-葡聚糖混合物之水溶性膳食纖維含量越高，換言之不被α-澱粉酶及葡萄糖澱粉酶分解之分支α-葡聚糖的含量越多，則該特徵性的結構部分越多，不被消化地到達大腸，而顯示腸內菌叢改善效果。因此，本發明之生體內酚化合物減低劑之有效成分的本分支α-葡聚糖混合物，水溶性膳食纖維含量越高則越佳，適合的水溶性膳食纖維含量，通常為40質量%以上、更佳為60質量%以上者、又更佳為75質量%以上。適合的水溶性膳食纖維含量並無特別的上限，在技術可及範圍內越高越佳，較佳為100質量%以下或未達100質量%。
進一步地，本分支α-葡聚糖混合物之更適合的一態樣，可列舉具有下述特徵(E)及(F)之分支α-葡聚糖混合物。 　　(E)α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基之比為1：0.6至1：4之範圍， 　　(F)α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基的合計占全部葡萄糖殘基之55%以上。
再者，分支α-葡聚糖混合物是否具有上述特徵(E)及(F)可藉由甲基化分析來確認。甲基化分析，如眾所周知的，係指於多糖或寡糖中，作為決定構成其之單糖的鍵結樣式之方法而一般所通用之方法(Ciucanu等，Carbohydrate Research、第131卷、第2號、第209-217頁(1984))。將甲基化分析應用於葡聚糖中之葡萄糖的鍵結樣式之分析時，首先將構成葡聚糖之葡萄糖殘基中全部的游離羥基予以甲基化，接著，將完全甲基化之葡聚糖水解。接著，將由水解所得之甲基化葡萄糖還原，成為消除變旋異構物型之甲基化山梨醇，進一步地，藉由將該甲基化山梨醇中之游離羥基乙醯化，得到部分甲基化山梨醇乙酸酯(再者，有將「部分甲基化山梨醇乙酸酯」僅總稱為「部分甲基化物」者)。藉由將所得之部分甲基化物藉由氣相層析進行分析，來自葡聚糖中鍵結樣式各異之葡萄糖殘基的各種部分甲基化物，能夠以氣相層析中波峰面積占全部的部分甲基化物之波峰面積之百分率(%)來表示。然後，可由該波峰面積%，決定該葡聚糖中鍵結樣式不同的葡萄糖殘基之存在比，亦即，各糖苷鍵之存在比率。關於部分甲基化物之「比」，意指甲基化分析之氣相層析中波峰面積之「比」，關於部分甲基化物之「%」意指甲基化分析之氣相層析中之「面積%」。
上述特徵(E)及(F)中之「α-1,4鍵結之葡萄糖殘基」，係指僅透過鍵結於1位及4位之碳原子的羥基而鍵結於其他葡萄糖殘基之葡萄糖殘基，於甲基化分析中，係作為2,3,6-三甲基-1,4,5-三乙醯基山梨醇而被檢測出。又，上述特徵(E)及(F)中之「α-1,6鍵結之葡萄糖殘基」，係指僅透過鍵結於1位及6位之碳原子的羥基而鍵結於其他葡萄糖殘基之葡萄糖殘基，於甲基化分析中，係作為2,3,4-三甲基-1,5,6-三乙醯基山梨醇而被檢測出。
藉由甲基化分析所得到之α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基之比率(特徵(E))，及α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基相對於全部葡萄糖殘基之比例(特徵(F))，可使用作為以化學手法對本分支α-葡聚糖混合物之結構，就混合物全體而言賦予特徵的指標之一。
上述特徵(E)之「α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基之比為1：0.6至1：4之範圍」的規定，意指將本分支α-葡聚糖混合物進行甲基化分析後，所檢測出之2,3,6-三甲基-1,4,5-三乙醯基山梨醇與2,3,4-三甲基-1,5,6-三乙醯基山梨醇之比為1：0.6至1：4的範圍。又，上述特徵(F)之「α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基的合計占全部葡萄糖殘基之55%以上」的規定，意指本分支α-葡聚糖混合物於甲基化分析中，2,3,6-三甲基-1,4,5-三乙醯基山梨醇與2,3,4-三甲基-1,5,6-三乙醯基山梨醇的合計係占部分甲基化山梨醇乙酸酯之55%以上。通常，澱粉不具有僅於1位與6位鍵結之葡萄糖殘基，且α-1,4鍵結之葡萄糖殘基占全部葡萄糖殘基中的大半，因此本分支α-葡聚糖混合物具有上述特徵(E)及特徵(F)，係意指本分支α-葡聚糖混合物具有與澱粉完全不同的結構。
如上述特徵(E)及(F)所規定，本分支α-葡聚糖混合物，於較佳的一態樣中，具有相當程度之通常不存在於澱粉中的「α-1,6鍵結之葡萄糖殘基」，但由於具有更複雜之分支結構者可期待較高之效果，故較佳除了α-1,4鍵結及α-1,6鍵結以外也具有α-1,3鍵結及/或α-1,3,6鍵結。此處，「α-1,3,6鍵結」意指「於1位、3位及6位之羥基的3個部位與其他葡萄糖鍵結(α-1,3,6鍵結)之葡萄糖殘基」。只要於α-1,4鍵結及α-1,6鍵結以外也具有α-1,3鍵結及/或α-1,3,6鍵結，則變得具有更複雜之分支結構，因此基本上來說，只要本分支α-葡聚糖混合物中包含α-1,3鍵結及/或α-1,3,6鍵結即可，其比例並無特殊限制，例如，α-1,3鍵結之葡萄糖殘基較佳為全部葡萄糖殘基之0.5%以上且未達10%、α-1,3,6鍵結之葡萄糖殘基較佳為全部葡萄糖殘基之0.5%以上。
上述「α-1,3鍵結之葡萄糖殘基為全部葡萄糖殘基之0.5%以上且未達10%」，可將本分支α-葡聚糖混合物進行甲基化分析，藉由存在部分甲基化山梨醇乙酸酯之0.5%以上且未達10%的2,4,6-三甲基-1,3,5-三乙醯基山梨醇來確認。又，上述「α-1,3,6鍵結之葡萄糖殘基為全部葡萄糖殘基之0.5%以上」，可將本分支α-葡聚糖混合物進行甲基化分析，藉由存在部分甲基化山梨醇乙酸酯之0.5%以上且未達10%之2,4-二甲基-1,3,5,6-四乙醯基山梨醇來確認。
本分支α-葡聚糖混合物，亦可藉由重量平均分子量(Mw)，及重量平均分子量(Mw)除以數平均分子量(Mn)之值(Mw/Mn)來賦予特徵。重量平均分子量(Mw)及數平均分子量(Mn)，例如可使用尺寸篩除層析等來求得。又，可基於重量平均分子量(Mw)來算出構成本分支α-葡聚糖混合物之分支α-葡聚糖的平均葡萄糖聚合度，因此本分支α-葡聚糖混合物亦可藉由平均葡萄糖聚合度來賦予特徵。平均葡萄糖聚合度可由重量平均分子量(Mw)減18，且除以相當於葡萄糖殘基量之分子量的162來求得。使用作為生體內酚化合物減低劑之有效成分的本分支α-葡聚糖混合物，其平均葡萄糖聚合度通常為8至500、較佳為15至400、更佳為20至300者為宜。再者，分支α-葡聚糖混合物，平均葡萄糖聚合度越大，黏度越增加，平均葡萄糖聚合度越小，黏度越小，此點係顯示與通常之葡聚糖相同的性質。因此，可依本發明之生體內酚化合物減低劑的實施態樣，適當選擇具有符合所要求黏度之平均葡萄糖聚合度的本分支α-葡聚糖混合物來使用。
重量平均分子量(Mw)除以數平均分子量(Mn)之值Mw/Mn，越接近1，意指構成分支α-葡聚糖混合物之分支α-葡聚糖分子的葡萄糖聚合度之偏差越小。使用作為生體內酚化合物減低劑之有效成分的本分支α-葡聚糖混合物，Mw/Mn通常只要20以下者則可無問題地使用，但較佳為10以下、更佳為5以下者為宜。再者，葡萄糖聚合度比較均勻之本分支α-葡聚糖混合物作為本發明之生體內酚化合物減低劑之有效成分而受到需求時，Mw/Mn較接近1、葡萄糖聚合度之偏差越小者越佳。
本分支α-葡聚糖混合物，只要具有上述(A)至(C)之特徵，則不管以何種方法製造者均可。例如，本發明之實施上可適合地利用使具有於透過α-1,4鍵結連結之葡萄糖聚合度3以上之直鏈狀葡聚糖的非還原末端葡萄糖殘基上，導入透過α-1,6鍵結連結之葡萄糖聚合度1以上的分支結構之作用的酵素，作用於澱粉質而得到之分支α-葡聚糖混合物，更適合的一例，可列舉國際公開第WO2008/136331號小冊中揭示之α-葡萄糖基轉移酵素作用於澱粉質而得到之分支α-葡聚糖混合物。又，若於前述α-葡萄糖基轉移酵素以外，一併使用麥芽四糖生成澱粉酶(EC 3.2.1.60)等之澱粉酶，或異澱粉酶(EC 3.2.1.68)等之澱粉去分支酵素，可使分支α-葡聚糖混合物低分子化，因此可將分子量、葡萄糖聚合度等調整為所期望之範圍。進一步地，藉由一併使用環麥芽糊精葡萄糖苷基轉移酶(cyclomaltodextrin glucanotransferase)(EC 2.4.1.19)，或澱粉分支酵素(EC 2.4.1.18)、日本特開2014-054221號公報揭示之具有將聚合度2以上之α-1,4葡聚糖予以α-1,6轉移於澱粉質內部之葡萄糖殘基的活性之酵素，會使構成分支α-葡聚糖混合物之分支α-葡聚糖更加高度地分支，亦可提高分支α-葡聚糖混合物之水溶性膳食纖維含量。亦可隨意進一步使葡萄糖澱粉酶等之糖質水解酵素作用於如此所得之分支α-葡聚糖混合物，成為更加提高了水溶性膳食纖維含量之分支α-葡聚糖混合物，亦可使糖苷基海藻糖生成酵素(EC 5.4.99.15)作用以於構成分支α-葡聚糖混合物之分支α-葡聚糖的還原末端導入海藻糖結構，或藉由氫化而使分支α-葡聚糖之還原末端還原等，來降低分支α-葡聚糖混合物之還原力，又，亦可隨意藉由以尺寸篩除層析等來進行區分，來取得具有所期望之分子量的分支α-葡聚糖混合物。
本發明之生體內酚化合物減低劑中所含有的本分支α-葡聚糖混合物之量，只要發揮所期望之生體內酚化合物減低效果，則無特殊限定，只要含有本分支α-葡聚糖混合物1至100質量%、較佳為3至100質量%、更佳為5至100質量%之範圍即可。又，本發明之生體內酚化合物減低劑，於本分支α-葡聚糖混合物以外，亦可依需要將由水、礦物質、香味料、安定劑、賦形劑、增量劑、pH調整劑等中選出的1種或2種以上之成分，以0.01至50質量%、較佳為0.1至40質量%之比例適當摻合予以利用。
本發明之生體內酚化合物減低劑，只要攝取會發揮減低生體內之酚化合物之量的效果之量即可，攝取量並無特殊限制，例如，作為有效成分之本分支α-葡聚糖混合物的攝取量，通常係以成人(體重60kg)每1次0.5至100g之範圍、較佳為1至50g之範圍、更佳為1.5至10g之範圍、又更佳為3至8g之範圍的方式，將本發明之生體內酚化合物減低劑直接或溶解於水、茶、咖啡等之飲料來攝取，或者添加於食品或飲料攝取即可。再者，無論於食品或飲料之攝取中、攝取前或後來攝取本發明之生體內酚化合物減低劑均可。
本發明之生體內酚化合物減低劑，可為粉末狀、粒狀、顆粒狀、液狀、糊狀、奶油狀、片劑狀、膠囊狀、膠囊型錠劑狀、軟膠囊狀、錠劑狀、棒狀、板狀、塊狀、丸藥狀、固體狀、凝膠狀、膠凍狀、軟糖狀、薄片狀、比司克餅乾(biscuit)狀、飴狀、咀嚼錠狀、糖漿狀、杖狀等之適當形態。又，本發明之生體內酚化合物減低劑，藉由含有於飲食物中，可成為特定保健用食品、功能性表示食品、營養輔助食品或健康食品等之以預防或改善生活習慣病為目的所攝取的飲食物之形態。
含有本發明之生體內酚化合物減低劑而成的生體內酚化合物減低用之飲食物的具體例子，可列舉碳酸飲料、乳飲料、膠凍飲料、運動飲料、醋飲料、豆乳飲料、含鐵飲料、乳酸菌飲料、綠茶、紅茶、可可、咖啡等之飲料；米飯、粥、麵包、麵類、湯、味噌湯、優格等之食品；軟糖、硬糖、甘貝糖、膠凍、餅乾、軟餅乾、仙貝、霰餅、米香、求肥(gyuhi，日式甜點原料之一)、麻糬類、蕨餅、日式饅頭、外郎餅、餡類、羊羹、水羊羹、錦玉、膠凍、果膠凍、蜂蜜蛋糕、比司克餅乾、蘇打餅、派、布丁、白脫奶油、卡士達奶油、泡芙、鬆餅、海綿蛋糕、美式鬆餅、瑪芬、甜甜圈、巧克力、甘納許、禾榖棒、口香糖、焦糖、牛軋糖、麵粉糊、花生糊、水果糊、果醬、果皮醬等之甜食；冰淇淋、雪果霜、義式冰淇淋等之冰甜點；還有醬油、粉末醬油、味噌、粉末味噌、醪、調味醬、香鬆、美乃滋、沙拉醬、食醋、三杯醋、粉末壽司醋、中華味素、天婦羅沾醬、麵沾醬、醬料、番茄調味醬、番茄醬、燒肉沾醬、烤雞沾醬、炸粉、天婦羅粉、咖哩露、燉菜味素、湯味素、高湯味素、複合調味料、味醂、新味醂、細砂糖、咖啡砂糖等之各種調味料或調理加工品。進一步地，本發明之生體內酚化合物減低劑，亦可摻合於用以預防或改善(治療)生活習慣病之液劑、糖漿劑、經管營養劑、錠劑、膠囊劑、口含錠劑、舌下劑、顆粒劑、散劑、粉劑、乳劑、噴霧劑等之形態的藥劑中。再進一步，本發明之生體內酚化合物減低劑，亦可摻合於人類以外之動物所攝取的寵物食品或飼料、餌料中。
本發明之生體內酚化合物減低劑及含有其而成之生體內酚化合物減低用之飲食物，亦可依需要，藉由經管投與等之非經口的投與方法對胃或消化道投與。
又，本發明之生體內酚化合物減低劑，如後述之實驗項目所示，可減低起因於飲食物，於生體內生成的酚化合物之量，因此會發揮減低酚化合物對皮膚造成的不良影響、皮膚健康狀態之維持或改善，具體而言，皮膚之週轉率(turnover)優化、改善的效果。
以下，基於實驗更詳細說明本發明。
以下之實驗中，係使用遵照國際公開第WO2008/136331號小冊之實施例5記載之方法所製造的分支α-葡聚糖混合物。亦即，根據前述實施例5記載之方法，於27.1質量%玉米澱粉液化液(水解率3.6%)中，添加亞硫酸氫鈉使最終濃度為0.3質量%，且添加氯化鈣使最終濃度為1mM後，冷卻至50℃，相對於每1克固體物，對其添加以國際公開第WO2008/136331號小冊之實施例1記載的方法所調製之來自環狀芽孢桿菌(Bacillus circulans)PP710(FERM BP-10771)之α-葡萄糖基轉移酵素之濃縮粗酵素液11.1單位，於50℃、pH6.0作用68小時。將該反應液於80℃保持60分鐘後冷卻，將過濾所得之濾液遵照一般方法以活性碳脫色，藉由H型及OH型離子樹脂脫鹽而純化，進一步濃縮、噴霧乾燥，將所製造之分支α-葡聚糖混合物使用於以下之實驗1。再者，將所得到之分支α-葡聚糖混合物，藉由國際公開第WO2008/136331號小冊之段落0079、0080記載的異麥芽糖葡聚糖酶消化試驗法、α-葡萄糖苷酶及葡萄糖澱粉酶消化試驗法、段落0076至0078記載的甲基化分析法進行分析後，係具有以下(a)至(c)之特徵。 　　(a)以葡萄糖為構成糖， 　　(b)具有於位於透過α-1,4鍵結連結之葡萄糖聚合度3以上之直鏈狀葡聚糖的一端之非還原末端葡萄糖殘基上，透過α-1,4鍵結以外之鍵結而連結之葡萄糖聚合度1以上的分支結構， 　　(c)相對於消化物之固體物而言，藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化，係生成異麥芽糖35質量%。
又，將所得到之分支α-葡聚糖混合物藉由前述酵素-HPLC法分析後，可知前述分支α-葡聚糖混合物，於上述特徵以外，且具有下述(d)之特徵，再者由上述甲基化分析法之分析結果，可知具有下述(e)至(h)之特徵。 　　(d)水溶性膳食纖維含量為82.9質量%， 　　(e)α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基之比為1：2.1， 　　(f)α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基之合計為全部葡萄糖殘基之73.8%。 　　(g)α-1,3鍵結之葡萄糖殘基為全部葡萄糖殘基之2.1%。 　　(h)α-1,3,6鍵結之葡萄糖殘基為全部葡萄糖殘基之5.6%。
進一步地，將該分支α-葡聚糖混合物，以國際公開第WO2008/136331號小冊之段落0081記載的凝膠過濾HPLC進行分子量分布分析後，其重量平均分子量(Mw)為5,000道耳頓(換算為平均葡萄糖聚合度為約30)、Mw/Mn為2.1。
如上所述，本實驗中使用之分支α-葡聚糖混合物，為具有：以葡萄糖為構成糖，具有於透過α-1,4鍵結連結之葡萄糖聚合度3以上之直鏈狀葡聚糖的非還原末端葡萄糖殘基上，透過α-1,4鍵結以外之鍵結而連結之葡萄糖聚合度1以上的分支結構，藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化而生成異麥芽糖的前述(A)至(C)之特徵者。又，本實驗中使用之分支α-葡聚糖混合物，為滿足：藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化，相對於消化物之固體物而言，生成5質量%以上且70質量%以下之異麥芽糖的特徵、水溶性膳食纖維含量為40質量%以上的前述(D)之特徵，及α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基之比為1：0.6至1：4之範圍，α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基的合計占全部葡萄糖殘基之55%以上的前述(E)、(F)之特徵者。
進一步地，前述分支α-葡聚糖混合物，為α-1,3鍵結之葡萄糖殘基為全部葡萄糖殘基之0.5%以上且未達10%之範圍，α-1,3,6鍵結之葡萄糖殘基為全部葡萄糖殘基之0.5%以上之範圍者。
再者，以下之實驗中，使用大鼠作為實驗動物，給予經強化/摻合作為生體內酚化合物之原料的胺基酸之酪胺酸的飼料(以下稱為「酪胺酸飼料」)作為飼料，又，給予水或於水中溶解有特定濃度的上述分支α-葡聚糖混合物的分支α-葡聚糖混合物水溶液作為飲用水，並且飼育一定期間後，測定由大鼠採取之各種生體試樣中之酚化合物之量。
＜實驗1：以酪胺酸飼料之給餌與分支α-葡聚糖混合物之飲水投與來飼育大鼠＞ 　　購入24隻Wistar大鼠(雄、6週齡、日本SLC股份有限公司販賣)，給予一般飼料(「CE-2」、飼育繁殖用、日本CLEA股份有限公司販賣)並且飼育5日使其馴化。接著，將經馴化之大鼠分為4群各6隻，對各群大鼠給予下述表1所示之飼料，亦即後述AIN-93G調整飼料及酪胺酸飼料之任一者，及同樣表1所示之飲用水，亦即水或於水中溶解有上述所得之分支α-葡聚糖混合物2%(w/v)或5%(w/v)之水溶液(以下分別稱為「2%分支α-葡聚糖混合物液」、「5%分支α-葡聚糖混合物液」)的任一者，各飼育3週。
Figure 02_image001
再者，表1所示之「AIN-93G調整飼料」及「酪胺酸飼料」，各為具有下述表2所示組成之飼料，係對日本CLEA股份有限公司訂購獲得。再者，AIN-93G調整飼料，除了於日本CLEA股份有限公司所販賣的標準飼料『AIN-93G』中，將玉米澱粉之組成由39.7486質量%改變為51.9486質量%，且將α-玉米澱粉之組成由13.2質量%改變為1質量%以外，係與AIN-93G為相同組成者。又，如表2所見，酪胺酸飼料為將AIN-93G調整飼料之玉米澱粉之5質量%取代為酪胺酸者。
Figure 02_image003
飼育期間中之各群大鼠的體重、攝餌量、飲水量示於表3。進一步地，於飼育19~20日之時間點，使用代謝籠測定由各大鼠1隻起分別採取的1日分之糞便與尿的量，各群6隻之平均值與標準差示於表4。
Figure 02_image005
Figure 02_image007
如表3所示，經試驗之4群大鼠，體重、攝餌量、飲水量均顯示同樣程度之值，各群間觀察不到顯著差。此說明了給予AIN-93G調整飼料作為餌料、給予水作為飲用水而飼育的通常食群之大鼠，與攝取酪胺酸飼料作為餌料之對照群之大鼠，再者攝取特定濃度的分支α-葡聚糖混合物液作為飲用水的試驗群之大鼠，係以各群間未產生大幅差異的穩定之試驗系而進行飼育。再者，由攝餌量計算，攝取酪胺酸飼料之大鼠中，每1日之酪胺酸攝取量約為4g/kg-體重。又，關於攝取分支α-葡聚糖混合物水溶液之大鼠，由飲水量計算，分支α-葡聚糖混合物之每1日的攝取量，於2%分支α-葡聚糖混合物群為1.9g/kg-體重、於5%分支α-葡聚糖混合物群為5.1g/kg-體重。
又，關於飼育中之糞便量與尿量，如表4所示，給予酪胺酸飼料，給予水作為飲用水而飼育之對照群，相較於其他群於糞便量顯示較高值，但各群間未觀察到顯著差。此結果與表3所示之體重、攝餌量、飲水量同樣地說明大鼠係以各群間未產生大幅差異的穩定之試驗系而進行飼育。
＜實驗2：自大鼠採取各種試樣、試樣之前處理及酚化合物之定量＞ 　　自實驗1飼育之各群大鼠中分別採取各種生體試樣，測定各自所含有的酚化合物之量。
＜實驗2-1.自大鼠採取各種試樣＞ 　　實驗1飼育之4群，共24隻大鼠，分別於戊巴比妥麻醉下自後大靜脈採取全血而使其安樂死。安樂死之後解剖並摘出、採取盲腸及肝臟，分別測定重量。又，將側腹剃毛後，以1cm見方的大小自2個部位採取皮膚，去除皮下組織作為皮膚試樣。所採取之肝臟、盲腸組織及盲腸內容物各自的重量，及盲腸內容物之pH，係彙整於表5。再者，盲腸內容物之pH係直接以pH計測定。
Figure 02_image009
如表5所示，盲腸組織及盲腸內容物之重量，相較於對照群而言，2%分支α-葡聚糖混合物群、5%分支α-葡聚糖混合物群係顯著地較重。通常食群與對照群之盲腸內容物係顯示帶綠色之色調，另一方面，5%分支α-葡聚糖混合物群之盲腸內容物係顯示帶黃色之色調。又，2%分支α-葡聚糖混合物群中，盲腸內容物帶黃色之色調者為顯示4隻、帶綠色之色調者為顯示2隻的比率，故暗示攝取了分支α-葡聚糖混合物的群中腸內菌叢有所變化。又，攝取了分支α-葡聚糖混合物之群的盲腸內容物之pH，相較於對照群而言，顯示顯著更低的值。
＜實驗2-2.用以測定生體內酚化合物之各採取試樣的前處理＞ 　　對於實驗1中採取之尿、糞便，以及實驗2-1中採取之各試樣，亦即盲腸內容物、血液(血清)、皮膚、肝臟，分別進行以下所示之處理，作為用以測定酚化合物之前處理。
＜盲腸內容物＞：將採取後於-80℃冷凍保存者解凍，秤取0.3g，添加0.1M磷酸緩衝液(pH5.5)3mL稀釋10倍，使用鐵氟龍均質機(5mL容積)均質化，離心分離(3,000rpm、800×g、10分)而調製粗萃取液，於-80℃冷凍保存。 　　＜血清＞：將採取之血液離心分離(3,000rpm、800×g、10分鐘)而分離血清，於-80℃冷凍保存。 　　＜尿＞：離心分離(3,000rpm、800×g、10分鐘)將沈澱(飼料等)去除後，於-80℃冷凍保存。 　　＜糞便＞：將採取後於-80℃冷凍保存者解凍，以0.1M磷酸緩衝液(pH5.5)稀釋10倍，攪拌5分鐘左右後，使用鐵氟龍均質機(10mL容積)均質化，離心分離(3,000rpm、800×g、10分鐘)而調製粗萃取液，於-80℃冷凍保存。 　　＜皮膚＞：將採取後於-80℃冷凍保存者解凍，秤取0.2g，以剪刀裁斷後，取至塑膠管中，添加磷酸緩衝液2mL，使用均質機(「Polytron PT10-35」型)均質化。之後，添加XIV蛋白酶(Sigma公司製)20mg，於55℃保持3小時。將XIV蛋白酶處理液離心分離(3,000rpm、800×g、10分鐘)，採取上清液，於-80℃冷凍保存。 　　＜肝臟＞：將採取後於-80℃冷凍保存者解凍，秤取肝臟之左外側葉0.2g，取至1.5mL塑膠管中，添加磷酸緩衝液1mL，以鐵氟龍製均質機均質化後離心分離(3,000rpm、800×g、10分鐘)，調製粗萃取液，於-80℃冷凍保存。
＜實驗2-3.各試樣中之酚化合物之定量＞ 　　實驗2-2調製之前處理試樣中的酚化合物大半為配糖體的形態，因此藉由將前處理試樣以鹽酸處理，將配糖體形態之酚化合物水解，變為游離型之形態，作為酚化合物而測定。亦即，本測定中，以酚與p-甲酚之2種酚化合物為測定對象，藉由將生體內以配糖體之形態存在的酚及p-甲酚，與以游離型之形態存在的酚及p-甲酚進行酸處理，分別作為游離型之酚及p-甲酚來一併定量。具體的操作，係將上述前處理試樣離心分離(4,700rpm、10分鐘)，採取上清液後，取0.8mL至附螺蓋之管中(惟，尿的情況為220倍稀釋液)，添加調製為100μg/mL濃度之內部標準物質4-乙基酚32μL與2N鹽酸0.8mL，煮沸60分鐘。將經煮沸處理之液體於室溫放冷後，添加2N氫氧化鈉約0.75mL進行中和。取中和液0.8mL至塑膠管中，添加乙腈0.8mL並攪拌，離心分離(12,000×g、5分鐘)去除不溶物，以0.45μm之濾器過濾0.3mL，作為HPLC試樣。
各種試樣中之酚及p-甲酚，係由下述條件以HPLC定量。 (HPLC條件) 　　管柱：Shodex ODSpak F-411(φ4.6×150mm、昭和電工股份有限公司製)； 　　裝置：『Prominence』系統(島津製作所股份有限公司製) 　　解析軟體使用「LabSolutions」； 　　泵：LC-20AD 2台； 　　管柱加熱器：『CTO-20AC』； 　　除氣機：『DGU-20A3R 』； 　　自動取樣器：『SIL-20AC』； 　　檢測器：螢光檢測器 RF-20A(激發波長：260nm，螢光波長：305nm) 　　移動相：以水/乙腈(70/30)等度沖提 　　管柱溫度：30℃ 　　試樣注入量：10μL 　　再者，酚及p-甲酚之定量中，均以酚及p-甲酚之試藥(Sigma-Aldrich製)為標準品，於HPLC中各自製成檢量線來定量。
各種試樣之酚化合物(酚及p-甲酚)之定量值分別示於表6及表7。
Figure 02_image011
Figure 02_image013
如表6及表7所示，以AIN-93G調整飼料與水飼育之通常食群之大鼠中，於盲腸內容物、血清、尿、糞便、皮膚及肝臟中均未檢測出酚，又，p-甲酚亦為於盲腸內容物、尿、糞便中少許檢測到的程度。相對於此，以酪胺酸飼料飼育之大鼠中，於皮膚與肝臟以外均檢測出酚，又，相較於通常食群而言，大量檢測出p-甲酚。
如表6所示，攝取AIN-93G調整飼料與水而飼育之通常食群之大鼠中，於盲腸內容物中未檢測出酚，每1g盲腸內容物之p-甲酚量亦為少許的40±28nmol，相對於此，攝取酪胺酸飼料與水而飼育之對照群之大鼠時，每1g盲腸內容物，酚量為812±443nmol、p-甲酚量為4522±1261nmol，觀察到大量酚化合物之生成。另一方面，攝取酪胺酸飼料與2%分支α-葡聚糖混合物水溶液而飼育之2%分支α-葡聚糖混合物群時，每1g盲腸內容物，酚量為334±435nmol、p-甲酚量為2866±1652nmol，相較於對照群而言，顯示顯著低之酚化合物量。又，攝取酪胺酸飼料與5%分支α-葡聚糖混合物水溶液而飼育之5%分支α-葡聚糖混合物群時，每1g盲腸內容物，酚量為12±3nmol、p-甲酚量為397±128nmol，相較於對照群而言，顯示顯著低之酚化合物量。此結果說明了因酪胺酸飼料之攝取，於盲腸內容物中產生酚化合物，及即使攝取容易產生酚化合物之酪胺酸飼料，只要一併攝取一定量以上的分支α-葡聚糖混合物，可顯著減低盲腸內容物中之酚化合物之量。
又，如表6所示，攝取AIN-93G調整飼料與水而飼育之通常食群之大鼠中，血清中皆未檢測出酚、p-甲酚，相對於此，攝取酪胺酸飼料與水而飼育之對照群之大鼠時，每1mL血清，酚量為27±30nmol、p-甲酚量為136±35nmol，觀察到酚化合物之生成。另一方面，攝取酪胺酸飼料與2%分支α-葡聚糖混合物水溶液而飼育之2%分支α-葡聚糖混合物群時，每1mL血清之酚量為16±15nmol、p-甲酚量為101±50nmol，係相較於對照群並無大差異的結果，但攝取酪胺酸飼料與5%分支α-葡聚糖混合物水溶液而飼育之5%分支α-葡聚糖混合物群時，每1mL血清之酚量為5±0nmol、p-甲酚量為15±4nmol，相較於對照群而言，顯示顯著低之酚化合物量。此結果說明了因酪胺酸飼料之攝取，血清中檢測出酚化合物，及即使攝取容易產生酚化合物之酪胺酸飼料，只要一併攝取一定量以上的分支α-葡聚糖混合物，亦可顯著減低血清中之酚化合物之量。
進一步地，於各群中，分析自大鼠1隻所採取之1日分的尿，作為酚化合物對尿之每1日的排泄量，以μmol/日表示。如表6所示，通常食群之大鼠中，尿中未檢測出酚，p-甲酚量亦為5±4μmol/日的少許量，相對於此，對照群之大鼠時，酚量為42±15μmol/日、p-甲酚量為208±41μmol/日，觀察到大量之酚化合物。另一方面，2%分支α-葡聚糖混合物群時，酚量為40±41μmol/日、p-甲酚量為196±87μmol/日，係相較於對照群並無大差異的結果，但5%分支α-葡聚糖混合物群時，酚量為4±7μmol/日、p-甲酚量為58±48μmol/日，相較於對照群而言顯示顯著少的量。此結果說明了因酪胺酸飼料之攝取，尿中檢測出酚化合物，及即使攝取容易產生酚化合物之酪胺酸飼料，只要一併攝取一定量以上的分支α-葡聚糖混合物，尿中所觀察到的酚化合物之量亦會顯著減低。
進一步地，於各群中，分析自大鼠1隻所採取之1日分的糞便，作為酚化合物對糞便之每1日的排泄量而以nmol/日表示。如表7所示，通常食群之大鼠中，糞便中未檢測出酚，p-甲酚量亦為130±64nmol/日之少許量，相對於此，對照群之大鼠時，酚量為240±247nmol/日、p-甲酚量為568±218nmol/日，觀察到大量之酚化合物。另一方面，2%分支α-葡聚糖混合物群時，酚量為80±113nmol/日、p-甲酚量為844±947nmol/日，係相較於對照群並無大差異的結果，但5%分支α-葡聚糖混合物群時，酚量為32±17nmol/日、p-甲酚量為533±326nmol/日，相較於對照群而言，雖p-甲酚量無差異，但酚係顯示顯著低之值。此結果說明了因酪胺酸飼料之攝取，糞便中檢測出酚化合物，及即使攝取容易產生酚化合物之酪胺酸飼料，只要一併攝取一定量以上的分支α-葡聚糖混合物，糞便中所觀察到的酚化合物之量亦會減低。
又，如表7所示，不管何種情況，自皮膚試樣均未檢測出酚。相對於此，就p-甲酚而言，自通常食群之皮膚試樣未檢測出，自對照群及2%分支α-葡聚糖混合物群之皮膚試樣，以皮膚每1g換算，分別檢測出與29nmol/g及27nmol/g大致同樣程度之p-甲酚。但是，自5%分支α-葡聚糖混合物群之皮膚試樣並未檢測出p-甲酚(以皮膚每1g換算係0nmol/g)，觀察到分支α-葡聚糖混合物攝取所致之p-甲酚之減低效果。
進一步地，如表7所示，不管何種情況，自肝臟試樣均未檢測出酚。相對於此，就p-甲酚而言，自通常食群之肝臟試樣未檢測出，自對照群及2%分支α-葡聚糖混合物群之肝臟試樣，以肝臟每1g換算，分別檢測出與26nmol/g及20nmol/g大致同樣程度之p-甲酚。但是，自5%分支α-葡聚糖混合物群之肝臟試樣並未檢測出p-甲酚(以肝臟每1g換算係0nmol/g)，觀察到分支α-葡聚糖混合物攝取所致之p-甲酚之減低效果。
如以上之實驗結果所示，自攝取一般飼料而飼育之通常食群之大鼠生體，幾乎檢測不到酚、p-甲酚等之酚化合物，相對於此，自攝取強化/摻合酪胺酸之酪胺酸飼料而飼育之對照群之大鼠生體，顯著地檢測到酚化合物，但自攝取溶解有5%濃度分支α-葡聚糖混合物之水溶液之5%分支α-葡聚糖混合物攝取群之大鼠生體，檢測出顯著少之量的酚化合物。此說明了人類即使攝取高蛋白食，容易生成來自該蛋白之構成胺基酸的酪胺酸之有害代謝產物的酚化合物的情況時，藉由攝取一定量的分支α-葡聚糖混合物，亦可顯著且有效果地減低生體內之酚化合物。
＜實驗3：分支α-葡聚糖混合物攝取對大鼠之腸內菌叢所造成的影響＞ 　　本實驗中，以作為好菌之雙岐桿菌屬細菌、類桿菌-普雷沃(Prevotella)吡咯單胞菌(Porphyromonas)屬細菌，及類桿菌門細菌3種類之菌群為標的，調查分支α-葡聚糖混合物之攝取，對腸內之此等菌種/菌群之菌數所造成的影響。
由分別自實驗1中所飼育之通常食群、對照群、2%分支α-葡聚糖混合物群，及5%分支α-葡聚糖混合物群之大鼠所採取之盲腸內容物，進行DNA萃取。以萃取之DNA為模板，使用以菌種/菌群之rRNA基因中包含之特異性序列部分為標的之引子，來進行PCR後，藉由檢測其放大產物之定量性PCR法(例如參照Matsui等，Applied and Enviromental Microbiology、第68卷、第11號、第5445頁-5451頁(2002年)參照)，測定雙岐桿菌屬細菌、類桿菌-普雷沃吡咯單胞菌屬細菌，及類桿菌門細菌各自的細菌數。
以上述方法求得之通常食群、對照群、2%分支α-葡聚糖混合物群及5%分支α-葡聚糖混合物群之盲腸內容物中各自的菌數(log(個/g-盲腸內容物))係示於表8。
Figure 02_image015
如表8所見，通常食群、對照群及2%分支α-葡聚糖混合物群之大鼠之盲腸內容物中的腸內菌叢，其雙岐桿菌屬細菌、類桿菌-普雷沃吡咯單胞菌屬細菌，及類桿菌門細菌之以10為底之對數表示的菌數(log(個/g-盲腸內容物))，各分布於6.4~6.7、10.3~10.4，及10.6~10.7之範圍(亦即，106.4~6.7 、1010.3~10.4 ，及、1010.6~10.7 之範圍)，各群間觀察不到大差異，相對於此，5%分支α-葡聚糖混合物群之大鼠之以10為底之對數表示的菌數(log(個/g-盲腸內容物))係8.0、11.1及11.4(亦即，108.0 、1011.1 ，及1011.4 )，各顯著增加為約10倍以上。
如此地，可知5%分支α-葡聚糖混合物群之大鼠中，盲腸內之雙岐桿菌屬細菌、類桿菌-普雷沃吡咯單胞菌屬細菌，及類桿菌門細菌之菌數顯著增加，腸內菌叢顯著改善。由此推測，實驗2中之生體內酚化合物減低效果，係起因於分支α-葡聚糖混合物之攝取所致於大鼠盲腸內之雙岐桿菌屬細菌、類桿菌-普雷沃吡咯單胞菌屬細菌，及類桿菌門細菌菌數的增加，亦即腸內菌叢之改善的作用效果。由使用大鼠之上述結果，可認為藉由攝取分支α-葡聚糖混合物，於人類亦發揮同樣的作用。
本分支α-葡聚糖混合物係如何地作用而改善腸內菌叢，減低生體內酚化合物，其詳情雖不明，但推測係本分支α-葡聚糖混合物之具有如下結構性特徵：具有於透過α-1,4鍵結連結之葡萄糖聚合度3以上之直鏈狀葡聚糖的非還原末端葡萄糖殘基上透過α-1,4鍵結以外之鍵結而連結之葡萄糖聚合度1以上的分支結構，且藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化而生成異麥芽糖；更佳為具有藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化，相對於消化物之固體物而言，生成5質量%以上且70質量%以下之異麥芽糖的結構性特徵，在發揮其功能上扮演重要的角色。
再者，異麥芽糖葡聚糖酶消化之異麥芽糖生成量未達5質量%的分支α-葡聚糖混合物，推測由於係接近分支結構少之麥芽糊精的結構，故腸內菌叢改善效果小。另一方面，異麥芽糖葡聚糖酶消化之異麥芽糖生成量超過70質量%的分支α-葡聚糖混合物，推測係成為接近以α-1,6鍵結連結之葡萄糖聚合物的聚葡萄糖之結構，反而分支結構變得單調，故腸內菌叢改善效果變小。又，本分支α-葡聚糖混合物當中藉由高速液體層析法(酵素-HPLC法)所求得之水溶性膳食纖維含量為40質量%以上者，推測其本身不易被消化，更容易到達大腸，故更佳。
＜實驗4：酪胺酸飼料之給餌與以分支α-葡聚糖混合物之飲水投與來飼育無毛大鼠＞ 　　以更詳細調查於生體內之酚化合物生成對皮膚之性狀所造成的影響與分支α-葡聚糖混合物之效果為目的，將實驗1所用之Wistar大鼠取代為無毛大鼠以外，係與實驗1幾乎同樣地進行無毛大鼠之飼育。
購入無毛大鼠(雄、6週齡、日本SLC股份有限公司販賣)24隻，給予AIN-93G調整飼料並且飼育5日使其馴化。接著，將經馴化之大鼠分為4群各6隻，作為與實驗1之表1所示者相同的4個試驗群，亦即通常食群、對照群、2%分支α-葡聚糖混合物群，及5%分支α-葡聚糖混合物群，分別飼育3週。
飼育期間中之各群的無毛大鼠之體重、攝餌量、飲水量示於表9。進一步地，於飼育19~20日之時間點使用代謝籠測定自各大鼠1隻所分別採取的1日分之糞便與尿的量，作為各群6隻之平均值與標準差而示於表10。
Figure 02_image017
Figure 02_image019
如表9所示，所試驗之4群無毛大鼠，於體重、飲水量係顯示相同程度之值，各群間觀察不到顯著差。但是，2%分支α-葡聚糖混合物群及5%分支α-葡聚糖混合物群之每一日之攝餌量，相對於對照群之每一日之攝餌量而言，分別為約95%及約90%，係顯著地少。自攝餌量計算，對照群之無毛大鼠中酪胺酸之每1日之攝取量為約4.4g/kg-體重。又，關於攝取分支α-葡聚糖混合物水溶液之大鼠，自飲水量計算，分支α-葡聚糖混合物之每1日之攝取量，於2%分支α-葡聚糖混合物群係2.0g/kg-體重、於5%分支α-葡聚糖混合物群係5.1g/kg-體重。
又，關於飼育中之糞便量與尿量，如表10所示，給予酪胺酸飼料，且給予分支α-葡聚糖混合物水溶液作為飲用水來飼育之2%分支α-葡聚糖混合物群及5%分支α-葡聚糖混合物群，顯示較他群糞便量更少、尿量更多之傾向，但各群間觀察不到顯著差。
表9及表10之結果，說明了於無毛大鼠，係與實驗1之Wistar大鼠的狀況不同地，於攝取分支α-葡聚糖混合物水溶液作為飲用水之群中雖攝餌量若干減少，但飼育結束時之體重、飲水量、糞便量及尿量並無顯著差，無毛大鼠係以各群間未產生大幅差異的穩定之試驗系而進行飼育。
＜實驗5：自無毛大鼠採取之各種生體試樣中之酚化合物之量＞ 　　本實驗中，除了不以糞便與肝臟為測定對象以外，係與實驗2同樣地調查自生體所採取之各種試樣中之酚化合物之生成量。亦即，與實驗1及實驗2-1的情況同樣地，自4群無毛大鼠分別採取盲腸內容物、血液(血清)、尿，及皮膚。盲腸組織及盲腸內容物之各自的重量，及盲腸內容物之pH係彙整於表11。
Figure 02_image021
如表11所示，盲腸內容物之重量，2%分支α-葡聚糖混合物群、5%分支α-葡聚糖混合物群，相較於對照群而言，係顯著為重。又，盲腸內容物之pH，於2%分支α-葡聚糖混合物群、5%分支α-葡聚糖混合物群係顯著為低。
接著，對於上述採取之盲腸內容物、血液(血清)、尿，及皮膚之各試樣，與實驗2-2同樣地定量各種試樣中之酚化合物(酚及p-甲酚)。測定結果彙整於表12。
Figure 02_image023
如表12所示，無毛大鼠中，於通常食群、對照群、2%分支α-葡聚糖混合物群及5%分支α-葡聚糖混合物群之所有的群，均於盲腸內容物、血清、尿、皮膚中檢測出酚與p-甲酚兩方。
如表12所示，攝取AIN-93G調整飼料與水而飼育之通常食群之大鼠中，盲腸內容物之每1g之酚量為76±33nmol、該p-甲酚量亦為14±11nmol，係少許的量，相對於此，攝取酪胺酸飼料與水而飼育之對照群之無毛大鼠時，每1g盲腸內容物，酚量為629±230nmol、p-甲酚量為165±164nmol，分別觀察到8倍以上及11倍以上之大量的酚化合物生成。另一方面，攝取酪胺酸飼料與2%分支α-葡聚糖混合物水溶液而飼育之2%分支α-葡聚糖混合物群時，每1g盲腸內容物，酚量為222±109nmol、p-甲酚量為70±92nmol，相較於對照群而言，顯示顯著低之酚化合物量。又，攝取酪胺酸飼料與5%分支α-葡聚糖混合物水溶液而飼育之5%分支α-葡聚糖混合物群時，每1g盲腸內容物，酚量為109±66nmol、p-甲酚量為89±55nmol，相較於對照群而言，顯示顯著低之酚化合物量。此結果說明了與實驗2之Wistar大鼠的情況同樣地，即使為無毛大鼠時，亦因酪胺酸飼料之攝取，於盲腸內容物中大量產生酚化合物，及即使攝取容易產生酚化合物之酪胺酸飼料，只要一併攝取一定量以上的分支α-葡聚糖混合物，亦可顯著減低盲腸內容物中之酚化合物之量。
又，如表12所示，無毛大鼠中，於血清、尿、皮膚，相較於通常食群而言，觀察到對照群中酚量、p-甲酚量亦均有增加，且於2%分支α-葡聚糖混合物群、5%分支α-葡聚糖混合物群觀察到均為降低之結果或傾向。此結果說明了即使攝取酪胺酸飼料，與盲腸內容物的情況同樣地，只要一併攝取一定量以上的分支α-葡聚糖混合物，亦可顯著降低血清中、尿中及皮膚中之酚化合物的量。
再者，實驗1及2之Wistar大鼠中，就酚化合物而言，p-甲酚較酚更大量地生成，相對於此，無毛大鼠中酚較p-甲酚更大量地生成。此結果可認為Wistar大鼠與無毛大鼠其腸內細菌叢不同，因此在酚化合物之生成產生差距。
＜實驗6：無毛大鼠之皮膚性狀之分析＞ 　　於皮膚，係藉由重複使接觸於外界之外側的細胞成為垢而剝離，內側的細胞增殖而供給新的細胞之週轉率(皮膚之新陳代謝)，以維持恆常性。皮膚之週轉率過快時，角層細胞未充分進行分化，而以小的尺寸出現於皮膚表面，故於化粧品領域中，角層細胞面積係被使用作為皮膚健康度之指標。非專利文獻2中，作為酚化合物對無毛小鼠之皮膚所造成的不良影響之指標，係測定皮膚之角層細胞面積，而報告了投與酚或p-甲酚之無毛小鼠中，角層細胞面積顯著地降低。本實驗中，係對於實驗4中飼育之無毛大鼠測定皮膚之角層細胞面積。
又，於皮膚之週轉率中，位於皮膚表皮之下的基底膜所鄰接之稱為基底細胞的未分化之細胞群的分裂若亢進時，對角化細胞之分化慢，而成為未成熟之角化細胞，故對於實驗4中飼育之無毛大鼠，亦調查皮膚之基底細胞的分裂。
＜實驗6-1：無毛大鼠之皮膚的角層細胞面積之測定＞ 　　對於實驗4中飼育之4群共計24隻之無毛大鼠，於安樂死之前之戊巴比妥麻醉下，採取皮膚之角層。對無毛大鼠之右背部強壓角質採取用之黏著性膠帶(商品名「角質檢驗器 AST-01」、25×25mm、日本ASCH股份有限公司販賣)數秒將之剝離，藉以於膠帶上採取角質，吹拂福馬林蒸氣予以固定後，以蘇木素/曙紅染色。接著，將經蘇木素/曙紅染色之角層細胞於顯微鏡下觀察，對於無毛大鼠每1個體為30個以上之角層細胞，使用顯微鏡用成像軟體(商品名『cellSens Dimension』、奧林巴斯股份有限公司製)測定細胞面積，算出其平均值。結果示於表13。
Figure 02_image025
如表13所見，攝取AIN-93G調整飼料與水而飼育之通常食群的無毛大鼠中，角層細胞面積為1303±96μm2 ，相對於此，攝取酪胺酸飼料與水而飼育之對照群之無毛大鼠中，顯示1159±97μm2 之顯著低值。另一方面，攝取酪胺酸飼料與2%分支α-葡聚糖混合物水溶液而飼育之2%分支α-葡聚糖混合物群時，角層細胞面積為1286±86μm2 ，相較於對照群而言，顯示增加傾向，攝取酪胺酸飼料與5%分支α-葡聚糖混合物水溶液而飼育之5%分支α-葡聚糖混合物群時，係1331±72μm2 ，相較於對照群而言，顯示顯著高之值，且顯示與通常食群同等之值。此結果顯示攝取了酪胺酸飼料之無毛大鼠中，於生體內生成之酚化合物在皮膚中阻礙角層細胞之分化，但藉由攝取分支α-葡聚糖混合物，於生體內之酚化合物的生成量降低，顯示不會對角層細胞之分化產生影響，可改善皮膚性狀。
＜實驗6-2：皮膚之基底細胞之分裂影像的測定＞ 　　對於實驗4中飼育之4群共24隻無毛大鼠，於安樂死之後採取左背部皮膚，浸漬於15%(v/v)福馬林液中保存，供組織分析。藉由一般方法將經石蠟包埋之組織切片以蘇木素/曙紅染色，於顯微鏡下計數基底細胞層之分裂影像。結果示於表14。
Figure 02_image027
如表14所見，攝取AIN-93G調整飼料與水而飼育之通常食群之無毛大鼠中，基底細胞之分裂影像為2.8±1.1個/cm，相對於此，攝取酪胺酸飼料與水而飼育之對照群之無毛大鼠中，顯示5.7±1.8個/cm之顯著大之值，可知因酪胺酸飼料之攝取，基底細胞之分裂亢進。另一方面，攝取酪胺酸飼料與2%分支α-葡聚糖混合物水溶液而飼育之2%分支α-葡聚糖混合物群時，係4.8±1.8個/cm，相較於對照群而言顯示降低傾向，攝取酪胺酸飼料與5%分支α-葡聚糖混合物水溶液而飼育之5%分支α-葡聚糖混合物群時，係3.2±0.8，相較於對照群而言，顯示顯著低值，且係與通常食群同等之值。此結果顯示攝取了酪胺酸飼料之無毛大鼠中，於生體內生成之酚化合物於皮膚中使基底細胞之分裂亢進，亦即，阻礙對角化細胞之分化，但即使為攝取了酪胺酸飼料之無毛大鼠，藉由攝取分支α-葡聚糖混合物，於生體內之酚化合物之生成量亦會降低，其結果顯示不會對角層細胞之分化造成影響，可改善皮膚性狀。
自實驗1至5之結果，可知攝取本分支α-葡聚糖混合物時，可改善腸內菌叢，並且顯著減低已知作為腸內腐敗產物之生體內之酚、p-甲酚等之酚化合物。此等實驗，說明了本分支α-葡聚糖混合物係作為生體內酚減低劑之有效成分而發揮顯著的作用效果。
又，由實驗6之結果，可知攝取本分支α-葡聚糖混合物時，即觀察不到已被報告作為酚化合物對皮膚之不良影響的角層細胞面積之降低，又，亦觀察不到基底細胞之分裂的亢進。其理由可認為係本分支α-葡聚糖混合物之攝取會抑制酚化合物於生體內之生成，因此減低了會吸收並移動至皮膚而造成不良影響的酚化合物之量之故。
上述結果說明了，本分支α-葡聚糖混合物，可有利地利用作為生體內酚化合物減低劑之有效成分，又，摻合有該生體內酚化合物減低劑之飲食物，可有利地利用作為生體內酚化合物減低用之飲食物。此外，實驗6之結果，顯示了上述生體內酚化合物減低劑，可藉由減低起因於飲食物而於生體內生成的酚化合物之量，而減低因酚化合物之影響而引起的對皮膚之不良影響，亦即阻礙角質細胞之成熟，而使角質細胞成熟化(使角層細胞之細胞面積增加)，因此可維持或改善皮膚之健康狀態，而利用於改善皮膚性狀之用途，更具體而言係皮膚週轉率之改善用途。
以下，基於實施例以更詳細說明本發明。但是，本發明不受此等實施例之任何限定。 [實施例1]
＜生體內酚化合物減低劑＞ 　　遵照國際公開第WO2008/136331號小冊之實施例5記載的方法，調製分支α-葡聚糖混合物粉末，作為生體內酚化合物減低劑。再者，所得到之分支α-葡聚糖混合物粉末，具有以下(a)至(g)之特徵。 　　(a)以葡萄糖為構成糖， 　　(b)具有於位於透過α-1,4鍵結連結之葡萄糖聚合度3以上之直鏈狀葡聚糖的一端之非還原末端葡萄糖殘基上，透過α-1,4鍵結以外之鍵結而連結之葡萄糖聚合度1以上的分支結構， 　　(c)藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化，相對於消化物之固體物而言，生成35質量%之異麥芽糖， 　　(d)水溶性膳食纖維含量為80.8質量%， 　　(e)α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基之比為1：2.2， 　　(f)α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基之合計為全部葡萄糖殘基之72.9%， 　　(g)平均葡萄糖聚合度為31，Mw/Mn為2.0。
本品為有效成分之分支α-葡聚糖混合物的含量100質量%之生體內酚化合物減低劑。本品其本身為低甜味或無味，無異臭，於室溫下亦不吸濕、變色，持續1年以上為穩定。本品係直接攝取或溶解於水、茶、咖啡等之飲料來攝取，或者添加於食品或飲料來攝取即可，藉由攝取本品，可減低生體內酚化合物。又，於本品中依需要摻合由水、礦物質、香味料、安定劑、賦形劑、增量劑、pH調整劑等中選出的1種或2種以上之成分亦可有利地實施。 [實施例2]
＜生體內酚化合物減低劑＞ 　　遵照國際公開第WO2008/136331號小冊之實驗2-2記載的方法，調製固體成分濃度30質量%的分支α-葡聚糖混合物溶液，之後，遵照一般方法噴霧乾燥而得到分支α-葡聚糖混合物粉末，將之作為生體內酚化合物減低劑。再者，所得到之分支α-葡聚糖混合物粉末，具有以下(a)至(g)之特徵。 　　(a)以葡萄糖為構成糖， 　　(b)具有於位於透過α-1,4鍵結連結之葡萄糖聚合度3以上之直鏈狀葡聚糖的一端之非還原末端葡萄糖殘基上，透過α-1,4鍵結以外之鍵結而連結之葡萄糖聚合度1以上的分支結構， 　　(c)藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化，相對於消化物之固體物而言，生成27.2質量%之異麥芽糖， 　　(d)水溶性膳食纖維含量為41.8質量%， 　　(e)α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基之比為1：0.6， 　　(f)α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基與之合計為全部葡萄糖殘基之83.0%， 　　(g)平均葡萄糖聚合度為405，Mw/Mn為16.2。
本品為有效成分之分支α-葡聚糖混合物的含量100質量%之生體內酚化合物減低劑。本品其本身為低甜味或無味，無異臭，於室溫下亦不吸濕、變色，持續1年以上為穩定。本品係直接攝取或溶解於水、茶、咖啡等之飲料來攝取，或者添加於食品或飲料來攝取即可，藉由攝取本品，可減低生體內酚化合物。又，於本品中依需要摻合由水、礦物質、香味料、安定劑、賦形劑、增量劑、pH調整劑等中選出的1種或2種以上之成分亦可有利地實施。 [實施例3]
＜生體內酚化合物減低劑＞ 　　遵照國際公開第WO2008/136331號小冊之實施例6記載的方法，調製分支α-葡聚糖混合物粉末，作為生體內酚化合物減低劑。再者，所得到之分支α-葡聚糖混合物粉末，具有(a)至(g)之特徵。 　　(a)以葡萄糖為構成糖， 　　(b)具有於位於透過α-1,4鍵結連結之葡萄糖聚合度3以上之直鏈狀葡聚糖的一端之非還原末端葡萄糖殘基上，透過α-1,4鍵結以外之鍵結而連結之葡萄糖聚合度1以上的分支結構， 　　(c)藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化，相對於消化物之固體物而言，生成40.6質量%之異麥芽糖， 　　(d)水溶性膳食纖維含量為77.0質量%， 　　(e)α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基之比為1：4， 　　(f)α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基與之合計為全部葡萄糖殘基之67.9%， 　　(g)平均葡萄糖聚合度為18，Mw/Mn為2.0。
本品為有效成分之分支α-葡聚糖混合物的含量100質量%之生體內酚化合物減低劑。本品其本身為低甜味或無味，無異臭，於室溫下亦不吸濕、變色，持續1年以上為穩定。本品係直接攝取或溶解於水、茶、咖啡等之飲料來攝取，或者添加於食品或飲料來攝取即可，藉由攝取本品，可減低生體內酚化合物。又，於本品中依需要摻合由水、礦物質、香味料、安定劑、賦形劑、增量劑、pH調整劑等中選出的1種或2種以上之成分亦可有利地實施。 [實施例4]
＜生體內酚化合物減低劑＞ 　　除了於玉米澱粉液化液中，每1克固體物進一步添加2單位麥芽四糖生成澱粉酶以外，係遵照國際公開第WO2008/136331號小冊之實施例5記載的方法，調製分支α-葡聚糖混合物粉末，作為生體內酚化合物減低劑。再者，所得到之分支α-葡聚糖混合物粉末，具有(a)至(g)之特徵。 　　(a)以葡萄糖為構成糖， 　　(b)具有於位於透過α-1,4鍵結連結之葡萄糖聚合度3以上之直鏈狀葡聚糖的一端之非還原末端葡萄糖殘基上，透過α-1,4鍵結以外之鍵結而連結之葡萄糖聚合度1以上的分支結構， 　　(c)藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化，相對於消化物之固體物而言，生成41.9質量%之異麥芽糖， 　　(d)水溶性膳食纖維含量為69.1質量%， 　　(e)α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基之比為1：2.4， 　　(f)α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基與之合計為全部葡萄糖殘基之64.2%， 　　(g)平均葡萄糖聚合度為13，Mw/Mn為2.0。
本品為有效成分之分支α-葡聚糖混合物的含量100質量%之生體內酚化合物減低劑。本品其本身為低甜味或無味，無異臭，於室溫下亦不吸濕、變色，持續1年以上為穩定。本品係直接攝取或溶解於水、茶、咖啡等之飲料來攝取，或者添加於食品或飲料來攝取即可，藉由攝取本品，可減低生體內酚化合物。又，於本品中依需要摻合由水、礦物質、香味料、安定劑、賦形劑、增量劑、pH調整劑等中選出的1種或2種以上之成分亦可有利地實施。 [實施例5]
＜生體內酚化合物減低劑＞ 　　使澱粉葡萄糖苷酶(葡萄糖澱粉酶)作用於以實施例1記載的方法所得到之分支α-葡聚糖混合物，使用凝膠過濾層析分取未分解之成分。之後，遵照一般方法純化及噴霧乾燥，調製分支α-葡聚糖混合物粉末，作為生體內酚化合物減低劑。再者，所得到之分支α-葡聚糖混合物，具有(a)至(g)之特徵。 　　(a)以葡萄糖為構成糖， 　　(b)具有於位於透過α-1,4鍵結連結之葡萄糖聚合度3以上之直鏈狀葡聚糖的一端之非還原末端葡萄糖殘基上，透過α-1,4鍵結以外之鍵結而連結之葡萄糖聚合度1以上的分支結構， 　　(c)藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化，相對於消化物之固體物而言，生成21質量%之異麥芽糖， 　　(d)水溶性膳食纖維含量為94.4質量%， 　　(e)α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基之比為1：1.9， 　　(f)α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基與之合計為全部葡萄糖殘基之64%， 　　(g)葡萄糖聚合度為22，Mw/Mn為1.7。
本品為有效成分之分支α-葡聚糖混合物的含量100質量%之生體內酚化合物減低劑。本品其本身為低甜味或無味，無異臭，於室溫下亦不吸濕、變色，持續1年以上為穩定。本品係直接攝取或溶解於水、茶、咖啡等之飲料來攝取，或者添加於食品或飲料來攝取即可，藉由攝取本品，可減低生體內酚化合物。又，於本品中依需要摻合由水、礦物質、香味料、安定劑、賦形劑、增量劑、pH調整劑等中選出的1種或2種以上之成分亦可有利地實施。 [實施例6]
＜經口組成物(粉末果汁)＞ 　　將以實施例5記載的方法得到之生體內酚化合物減低劑10質量份、葡萄糖20質量份、無水結晶麥芽糖醇20質量份、檸檬酸酐0.65質量份、蘋果酸0.1質量份、2-O-α-葡萄糖苷基-L-抗壞血酸0.2質量份、檸檬酸鈉0.1質量份，及適量粉末香料，對藉由噴霧乾燥所製造之柑橘果汁粉末33質量份進行充分混合攪拌、粉碎而成為微粉末，將其給入流動層造粒機，排風溫度設為40℃，對其適量噴霧將以實施例1之方法所得到之分支α-葡聚糖粉末溶解於水而得到的溶液作為黏合劑，造粒30分鐘，計量、包裝而得到產品。本品係果汁含有率約30%之粉末果汁。本品因含有生體內酚化合物減低劑，故為可改善腸內菌叢，並且減低生體內酚化合物之粉末果汁。又，本品為無異味、異臭，係作為果汁之商品價值高者。 [實施例7]
＜經口組成物(卡士達奶油)＞ 　　將玉米澱粉100質量份、以實施例4記載的方法所得到的生體內酚化合物減低劑30質量份、海藻糖含水結晶70質量份、葡萄糖40質量份，及食鹽1質量份予以充分混合，添加雞蛋280質量份並攪拌，對其慢慢添加沸騰之牛乳1,000質量份，進一步在火上持續攪拌，於玉米澱粉完全糊化，全體成為半透明時關火，將之冷卻，添加適量之香草香料，計量、填充、包裝而得到產品。本品因含有生體內酚化合物減低劑，故為可改善腸內菌叢，並且減低生體內酚化合物之卡士達奶油。又，本品為具有平滑的光澤，風味良好，且高品質之卡士達奶油。 [實施例8]
＜經口組成物(營養輔助食品)＞ 　　將葡萄糖247g、以實施例3記載的方法所得到的生體內酚化合物減低劑217g、焦磷酸鐵懸浮液(太陽化學公司製商品名SunActive FeM)8g、維生素預混物15g、抗壞血酸鈉3g、鋅酵母0.5g、鉻酵母0.3g、蔗糖素0.2g，作為造粒原料粉末而投入造粒裝置中。另一方面，於造粒調整用水100mL中溶解咖啡萃取粉末15g、硫酸鎂10g。在將造粒原料粉末一邊於裝置內混合時，將造粒調整液自噴嘴尖端少量少量地進行噴霧而顆粒化，以成為1包5.15g或1包10.3g的方式於鋁袋中氮氣填充。本品為含有生體內酚化合物減低劑之營養輔助食品，可改善腸內菌叢，並且減低生體內酚化合物。又，本品為無異味、異臭，係作為營養輔助食品之商品價值高者。 [實施例9]
＜經口組成物(紅茶飲料)＞ 　　使用以實施例1記載的方法所得到之生體內酚化合物減低劑來製造紅茶。對茶葉15g添加沸騰水1L，過濾茶葉得到紅茶萃取液1L。對紅茶萃取液1L添加異構化糖60g，進一步以重量比2%、3%、4%添加生體內酚化合物減低劑，將所得紅茶分別稱為紅茶飲料A、B、C。又，對照組係除了不添加生體內酚化合物減低劑之點以外，與上述相同方法所得之紅茶飲料。以20~50幾歲的男女10名進行官能評估後，可知係有遮蔽紅茶飲料中含有之多酚特有的苦味或澀味之效果。進一步地，可知紅茶飲料A、B、C即使在室溫保存，相較於對照組而言，亦會抑制冷後混濁(cream down)現象(將紅茶慢慢冷卻時呈白色混濁之現象)。
本品因含有生體內酚化合物減低劑，故為可改善腸內菌叢，並且減低生體內酚化合物之紅茶飲料。又，本品為無異味、異臭，係作為紅茶飲料之商品價值高者。 [產業上之可利用性]
如以上說明，依照以本分支α-葡聚糖混合物為有效成分的本發明之生體內酚化合物減低劑，由於有效成分之本分支α-葡聚糖混合物其本身為低甜味或無味，故利用範圍廣，又，藉由將之攝取，可改善腸內菌叢，並且顯著減低已知作為腸內腐敗產物的生體內之酚化合物，因此有用於皮膚之健康、美容之維持、進而生體之健康維持。又，含有本發明之生體內酚化合物減低劑而成之飲食物，藉由將之於日常的飲食生活中攝取，具有可改善腸內菌叢，有效地減低生體內之酚化合物的優點。本發明為對本領域有大幅貢獻，實具有意義之發明。

Claims (10)

  1. 一種生體內酚化合物減低劑，其係以具有下述(A)至(C)之特徵的分支α-葡聚糖混合物為有效成分：(A)以葡萄糖為構成糖，(B)具有於位於透過α-1,4鍵結連結之葡萄糖聚合度3以上之直鏈狀葡聚糖的一端之非還原末端葡萄糖殘基上，透過α-1,4鍵結以外之鍵結而連結之葡萄糖聚合度1以上的分支結構，(C)藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化而生成異麥芽糖。
  2. 如請求項1之生體內酚化合物減低劑，其中生體內酚化合物為酚及/或p-甲酚。
  3. 如請求項1或2之生體內酚化合物減低劑，其中前述分支α-葡聚糖混合物，為藉由異麥芽糖葡聚糖酶消化，相對於消化物之固體物而言，生成5質量%以上且70質量%以下之異麥芽糖的分支α-葡聚糖混合物。
  4. 如請求項1或2之生體內酚化合物減低劑，其中前述分支α-葡聚糖混合物，為具有下述(D)之特徵的分支α-葡聚糖混合物：(D)藉由高速液體層析法(酵素-HPLC法)所求得之水溶性膳食纖維含量為40質量%以上。
  5. 如請求項1或2之生體內酚化合物減低劑，其中前述分支α-葡聚糖混合物，為具有下述(E)及(F)之特徵的分支α-葡聚糖混合物：(E)α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基之比為1：0.6至1：4之範圍；及(F)α-1,4鍵結之葡萄糖殘基與α-1,6鍵結之葡萄糖殘基的合計占全部葡萄糖殘基之55%以上。
  6. 如請求項1或2之生體內酚化合物減低劑，其中前述分支α-葡聚糖混合物之平均葡萄糖聚合度為8至500。
  7. 如請求項1或2之生體內酚化合物減低劑，其具有改善腸內菌叢之作用。
  8. 如請求項1或2之生體內酚化合物減低劑，其係使用於皮膚性狀之改善。
  9. 如請求項8之生體內酚化合物減低劑，其中皮膚性狀之改善為皮膚週轉率之改善。
  10. 一種生體內酚化合物減低用之飲食物，其係含有如請求項1或2之生體內酚化合物減低劑而成。
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