TWI776276B - 異種組織細胞組合物治療癌症之用途 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種從一特定組織分離擴增之異種組織細胞組合物之用途，所述異種組織細胞組合物藉由病灶內途徑給予至相似或相同組織學分級的腫瘤/癌症組織，可以誘發個體對所移植的異種組織細胞組合物的排斥反應，進而刺激免疫系統將異種組織細胞組合物和給予處的腫瘤/癌症組織排斥於體外，以達到抑制腫瘤生長的效果。藉此，所述異種組織細胞組合物可用於製備治療相似或相同組織學分級的癌症的醫藥品。

Description

異種組織細胞組合物治療癌症之用途

本發明是有關於一種異種組織細胞組合物之用途，特別是一種異種組織細胞組合物應用於治療癌症之用途。

癌症又名為惡性腫瘤，為細胞不正常增生，且這些增生的細胞可能侵犯身體的其他部分，為由控制細胞分裂增殖機制失常而引起的疾病。全世界罹患癌症的人口有不斷增加的趨勢，癌症係國人十大死因之一，且已連續二十七年為居十大死因之榜首。當前的癌症療法，例如外科手術、放射療法、化學療法和靶向療法，雖然有效，但卻伴隨著損害健康組織的附帶損害，並會引起許多併發症和不利影響。更令人絕望的是，即使有許多治療選擇，對於5年生存率低於10%的某些晚期癌症患者來說，癌症死亡率也僅略有下降且結果令人沮喪。不管治療策略有多廣泛，癌細胞都可以藉由複雜的相互連接的遺傳和信號通路找到逃避攻擊的方法，並發展出一種新的形式以茁壯成長。

癌症免疫療法最近已成為癌症治療的第四大支柱，先天免疫和適應性免疫都參與癌症免疫監測，因此特定的先天和適應性免疫細胞類型，例如T細胞、B細胞和自然殺傷T細胞、自然殺手細胞、樹突狀細胞、效應分子和調節途徑具有共同作用來抑制腫瘤形成。而癌症免疫療法是藉由免疫調節劑或基因改造的T細胞激活宿主免疫系統可以根除逃避免疫系統的腫瘤，其具有持久的持久反應。

不同類型的浸潤免疫細胞對腫瘤進展的影響不同，其取決於癌症類型和浸潤免疫細胞的具體情況。儘管臨床上免疫調節劑的細胞毒性T淋巴細胞相關蛋白4(CTLA4)和細胞程序死亡-1/細胞程式死亡-配體1(PD-1/PD-L1)的抗體具有優異的治療效果，但僅有一部分患者可以表現出持久的反應，顯示在癌症的治療上需要更廣泛的癌症免疫觀點。

有鑒於此，本發明之一目的是在提供一種異種組織細胞組合物的用途，其增強人體免疫系統根除腫瘤細胞，因此可用於製備治療癌症的藥物，特別是治療相似或相同組織學分級的癌症。

本發明之一態樣是在提供一種異種組織細胞組合物之用途，其係用於治療相似或相同組織學分級的癌症的醫藥品，其中異種組織細胞組合物不包含腫瘤細胞，且所述醫藥品是藉由病灶內途徑給予。

依據前述之異種組織細胞組合物之用途，其中病灶內途徑可包含腫瘤內施用和腫瘤周圍施用。

依據前述之異種組織細胞組合物之用途，其中異種組織細胞組合物可包含異種組織特異性幹細胞、異種組織前驅細胞、異種組織前體和異種組織成熟細胞。

依據前述之異種組織細胞組合物之用途，其中異種組織細胞組合物可更包含細胞質外基質分子和多醣。

依據前述之異種組織細胞組合物之用途，其中異種組織細胞組合物可分離自哺乳類動物之組織。較佳地，所述哺乳類動物可為人、豬、狗、貓、牛、馬、驢、鹿、山羊、綿羊、兔、小鼠、大鼠、豚鼠或猴。

依據前述之異種組織細胞組合物之用途，其中異種組織細胞組合物可更包含至少一化療藥物。較佳地，所述至少一化療藥物可選自由烷基化劑、亞硝基脲劑、抗代謝物、抗腫瘤抗生素、植物來源的生物鹼、拓撲異構酶抑製劑、激素治療藥、激素拮抗劑、芳香酶抑製劑、P-糖蛋白抑製劑和鉑絡合物衍生物所組成之群組。

依據前述之異種組織細胞組合物之用途，其中異種組織細胞組合物更包含一靶向治療藥物、一抗體藥物、一免疫調節劑及其組合。較佳地，靶向治療藥物可係選自由酪氨酸激酶抑制劑、裂原活化蛋白激酶抑制劑、間變性淋巴瘤激酶抑制劑、B細胞淋巴瘤-2抑制劑、聚ADP核糖聚合酶抑制劑、選擇性雌性激素受體調節劑、磷脂醯肌醇三激酶抑制劑、Braf抑制劑、周期蛋白依賴性激酶抑制劑和熱休克蛋白90抑制劑所組成之群組，抗體藥物可選自抗體和抗體藥物複合體，免疫調節劑可選自細胞因子和免疫檢查點抑制劑。

藉此，本發明之異種組織細胞組合物藉由病灶內途徑給予到相似或相同組織學分級的腫瘤部位來修復受損的組織，恢復免疫系統以治療癌症，並具有優異抑制腫瘤進展的效果，所述癌症包含但不限於乳癌、腎癌、肝癌、膀胱癌和胰臟癌等。本發明之異種組織細胞組合物更可與另一抗癌治療劑合併使用，以達到協同作用之功效。

上述發明內容旨在提供本揭示內容的簡化摘要，以使閱讀者對本揭示內容具備基本的理解。此發明內容並非本揭示內容的完整概述，且其用意並非在指出本發明實施例的重要/關鍵元件或界定本發明的範圍。

本說明書提供了一種治療癌症的新方法，所述方法藉由使用從異種來源分離和擴增的具有擴增潛能的異種組織細胞組合物，並使用擴增的異種組織細胞組合物來治療相似或相同組織學分級的相關癌症。具體地，本發明提供了一種新穎的用途，其使用異種組織細胞組合物藉由病灶內途徑給予到相似或相同組織學分級的腫瘤部位來修復受損的組織，並恢復免疫系統以治療癌症。異種組織細胞組合物可以作為一種增強人體免疫系統根除腫瘤細胞的免疫試劑，為癌症免疫療法提供了新的治療選擇。因此，本發明為利用宿主機體免疫系統對異種細胞的排斥免疫應答來引發抗腫瘤免疫的治療癌症方法。

請參照第1A圖至第1C圖，係繪示以本發明之異種組織細胞組合物治療相似或相同組織學分級的癌症的示意圖，其中第1A圖為以異種乳腺上皮細胞治療乳癌的示意圖，第1B圖為以異種腎臟細胞治療腎癌的示意圖，第1C圖為以異種肝臟細胞治療肝癌的示意圖，然本發明之異種組織細胞組合物可治療的癌症種類並不受限於第1A圖至第1C圖所示例。

如第1A圖所示，當以本發明之異種組織細胞組合物治療乳癌時，可自異種來源乳房組織，例如豬乳腺組織，分離異種乳腺細胞組合物，其中包含異種乳腺幹細胞、異種乳腺前驅細胞、異種乳腺前體和異種乳腺上皮細胞，並將所分離的異種組織細胞組合物進行擴增，再將擴增後的異種乳腺細胞組合物以病灶內注射至乳癌病變位置，利用免疫系統對異種乳腺細胞組合物的排斥免疫應答來引發抗腫瘤免疫達到治療乳癌的效果。

如第1B圖所示，當以本發明之異種組織細胞組合物治療腎癌時，可自異種來源腎臟組織，例如豬腎實質組織，分離異種腎臟細胞組合物，其中包含異種腎臟幹細胞、異種腎臟前驅細胞、異種腎臟前體和異種腎上皮細胞，並將所分離的異種腎臟細胞組合物進行擴增，再將擴增後的異種腎臟細胞組合物病灶內注射至腎癌病變位置，利用免疫系統對異種腎臟細胞組合物的排斥免疫應答來引發抗腫瘤免疫達到治療腎癌的效果。

如第1C圖所示，當以本發明之異種組織細胞組合物治療肝癌時，可自異種來源肝臟組織，例如豬肝小葉組織，分離異種肝臟細胞組合物，其中包含異種肝臟幹細胞、異種肝臟前驅細胞、異種肝臟前體和異種肝臟細胞，並將所分離的異種肝臟細胞組合物進行擴增，再將擴增後的異種肝臟細胞組合物病灶內注射至肝癌病變位置，利用免疫系統對異種肝臟細胞組合物的排斥免疫應答來引發抗腫瘤免疫達到治療肝癌的效果。

根據本發明內容，病灶內途徑可包含腫瘤內施用和腫瘤周圍施用。而施用本發明之異種組織細胞組合物可借助於成像系統(例如超音波儀器、內視鏡、電腦斷層掃描系統、X光機、核磁共振儀、螢光透視平台或正子電腦斷層造影儀)的協助，引導注射的針頭可靶向腫瘤病變的位置，而將異種組織細胞組合物注射到腫瘤區域中。

根據本發明內容，異種組織細胞組合物可分離自哺乳類動物，而所述哺乳類動物可為人、豬、狗、貓、牛、馬、驢、鹿、山羊、綿羊、兔、小鼠、大鼠、豚鼠、猴和/或用作家畜或用作寵物的任何其他哺乳類動物。

根據本發明內容，異種組織細胞組合物包含異種組織特異性幹細胞、異種組織前驅細胞、異種組織前體和異種組織成熟細胞。進一步地，異種組織細胞組合物可在含有細胞質外基質分子和多醣的溶液中，使異種組織細胞組合物中的細胞群與有效量的生長因子、細胞外基質和信號傳導途徑調節劑接觸，以維持異種組織特異性幹細胞群和異種組織前驅細胞群，並擴增異種組織前體和異種組織成熟細胞以增加總細胞數。

根據本發明內容，異種組織前體係選自異種組織特異性幹細胞、異種組織前驅細胞、異種組織前體細胞及其組合，而異種組織細胞組合物包含至少50%和90%的異種組織特異性幹細胞/異種組織前驅細胞，所分離的異種組織特異性幹細胞/異種組織前驅細胞或其群體表達其相應的標記基因。

根據本發明內容，擴增的異種組織細胞組合物的細胞表型可以藉由評估標誌物來確定，可以藉由發明所屬技術領域已知的多種方法評估標記物的表達。可以在DNA、RNA或多肽表現量確定標記物的存在，例如可以包含檢測標誌物基因多肽的表達，而多肽的表達包含標記基因多肽序列的存在或不存在。前述可藉由發明所屬技術領域已知的各種技術來檢測，包含藉由定序和/或與特定配體(例如抗體)結合。舉例來說，可以藉由包含但不限於免疫染色、流式細胞術分析或西方墨點法評估多肽的表達。而若為檢測異種組織細胞組合物中的標誌物基因(例如p63、CD33、CD44、CD133、ALDH或其組合)RNA的表達，而RNA的表達包含RNA序列的存在、RNA剪接或加工的存在或一定量RNA的存在。前述可藉由發明所屬技術領域已知的各種技術來檢測，包含藉由對全部或部分標記基因RNA進行定序，或藉由選擇性雜交或選擇性擴增全部或部分RNA進行。而前述方法為發明所屬技術領域習知，在此不再贅述。

該方法可以包括例如在組織特異性細胞中檢測標誌物基因（例如，p63、CD33、CD44、CD133、ALDH或其組合)RNA表達的存在。RNA表達包括RNA序列的存在，RNA剪接或加工的存在或一定數量的RNA的存在。這些可以藉由本領域已知的各種技術來檢測，包括藉由對全部或部分標記基因RNA進行測序，或通過對全部或部分RNA進行選擇性雜交或選擇性擴增來進行。

本說明書所述之「治療」是指將本發明之異種組織細胞組合物施用予有需要的受試者，例如癌症患者。

本說明書所述之「有效量」是指有效「治療」受試者的疾病或病症的異種組織細胞組合物的量。有效量與所施用的組織、系統、動物或人的生物或醫學反應有一定程度上的相關性，例如當施用時其足以在一定程度上防止一種或多種疾病或病症的發展或減輕一種或多種所治療的病症或病症的症狀。治療有效量將取決於疾病及其嚴重程度以及待治療的哺乳動物的年齡和體重等而變化。

本說明書所述之「改善」意指減小、抑制、削弱、減少、停止或穩定疾病或其症狀的發展或進展。

本說明書所述之「癌症」是指或描述哺乳動物中以細胞生長失調為典型特徵的生理狀況。「腫瘤」包括一種或多種癌細胞。癌症的實例包含但不限於癌、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴惡性腫瘤。此類癌症的更具體的實例包含鱗狀細胞癌(例如上皮鱗狀細胞癌)、包含小細胞肺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、肺腺瘤和肺鱗癌在內的肺癌、腹膜癌、肝細胞癌、包含胃腸癌在內的胃癌、胰腺癌、成膠質細胞瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞瘤、乳腺癌、結腸癌、直腸癌、結直腸癌、子宮內膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肛門癌、陰莖癌和頭頸癌。

本發明實際上可以治療任何類型的癌症，所述癌症包含急性髓細胞白血病、腎上腺皮質癌、與AIDS相關的癌症、與AIDS相關的淋巴瘤、肛門癌、闌尾癌、星形細胞瘤、基底細胞癌、肝外膽管癌、膀胱癌、骨癌、骨肉瘤/惡性纖維組織細胞瘤、腦幹神經膠質瘤、腦腫瘤、小腦星形細胞瘤、大腦星形細胞瘤/惡性神經膠質瘤、室管膜瘤、成神經管細胞瘤、幕上原始神經外胚層腫瘤、視覺途徑和下丘腦神經膠質瘤、乳腺癌、支氣管腺瘤/類癌、兒童期類癌瘤、胃腸道類癌、未知的原發癌、原發性中樞神經系統淋巴瘤、兒童期小腦星形細胞瘤、兒童期大腦星形細胞瘤/惡性神經膠質瘤、宮頸癌、兒童期癌症、慢性骨髓增生性疾病癌、結腸癌、皮膚T細胞淋巴瘤、促結締組織增生性小圓細胞腫瘤、子宮內膜癌、食道癌、尤文氏肉瘤、兒童期顱外生殖細胞腫瘤、眼癌、視網膜母細胞瘤、膽囊癌、胃癌、胃腸道間質瘤(GIST)、生殖細胞瘤(顱外、性腺外或卵巢)、妊娠滋養細胞腫瘤、兒童期大腦星形細胞瘤神經膠質瘤、兒童期視覺通路和下丘腦神經膠質瘤、胃類癌、毛細胞白血病、頭頸癌、肝細胞(肝)癌、下咽癌、胰島細胞癌(內分泌胰腺)、卡波西肉瘤、腎臟癌、喉癌、白血病、急性淋巴細胞性白血病、急性髓性白血病(或稱為急性骨髓性白血病)、慢性淋巴細胞性白血病、慢性髓性白血病(或稱為慢性骨髓性白血病)、唇癌、口腔癌、脂肪肉瘤、肝癌(原發性)、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(除霍奇金氏以外的所有淋巴瘤的舊分類)、巨球蛋白血症、華氏巨球蛋白血症、骨惡性纖維性組織細胞瘤/骨肉瘤、兒童期成神經管細胞瘤、黑色素瘤、眼內(眼)黑素瘤、梅克爾細胞癌、成人惡性間皮瘤、兒童期間皮瘤、潛伏的原發性轉移鱗狀頸部癌、兒童期多發性內分泌腫瘤、多發性骨髓瘤/漿細胞瘤、蕈樣肉芽腫、骨髓增生不良症候群、骨髓增生異常/骨髓增生性疾病、慢性粒細胞性白血病、成人急性骨髓性白血病、兒童急性骨髓性白血病、多發性骨髓瘤(骨髓癌)、鼻腔和鼻竇癌、鼻咽癌、成神經細胞瘤、骨肉瘤/骨惡性纖維性組織細胞瘤、卵巢癌、卵巢上皮癌(表面上皮間質腫瘤)、卵巢生殖細胞瘤、卵巢低惡性潛在腫瘤、胰腺癌、甲狀旁腺癌、陰莖癌、咽喉癌、嗜鉻細胞瘤、松果體星形細胞瘤、松果生殖細胞瘤、兒童期松果體細胞瘤和幕上原始神經外胚層腫瘤、垂體腺瘤、漿細胞瘤變/多發性骨髓瘤、胸膜肺母細胞瘤、前列腺癌、直腸癌、腎細胞癌、腎盂和輸尿管移行細胞癌、兒童期橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、尤文氏家族腫瘤、卡波西氏肉瘤、軟組織肉瘤、子宮肉瘤、塞扎里綜合症、皮膚癌(非黑色素瘤)、皮膚癌(黑色素瘤)、小腸癌、鱗狀細胞癌、潛伏原發性轉移鱗狀頸部癌、兒童期幕上原始神經外胚層腫瘤、睾丸癌、胸腺瘤、兒童期胸腺瘤、胸腺癌、甲狀腺癌、兒童期甲狀腺癌、成人的未知原發部位癌、兒童期的未知原發部位癌、尿道癌、子宮內膜子宮癌、陰道癌、外陰癌以及兒童期威爾姆氏腫瘤。

本發明之異種組織細胞組合物可與至少一種其它治療劑聯合施用，例如可與化療藥物、靶向治療藥物、抗體藥物、免疫調節劑或其組合聯合施用。

所述化療藥物係選自由烷基化劑、亞硝基脲劑、抗代謝物、抗腫瘤抗生素、植物來源的生物鹼、拓撲異構酶抑製劑、激素治療藥、激素拮抗劑、芳香酶抑製劑、P-糖蛋白抑製劑和鉑絡合物衍生物所組成之群組。化療藥物的實例包含但不限於酸阿比特龍、阿法替尼、阿地白介素、阿來組單抗、阿利維A酸、六甲蜜胺、氨磷丁(Amifostine)、氨魯米特、阿那格雷、阿那曲唑、三氧化二砷、天冬醯胺酶、氮雜胞苷、硫唑嘌呤、賓達氮芥、貝伐單抗、蓓薩羅丁(Bexarotine)、比卡魯胺、博來黴素、硼替佐米、白消安、卡培他濱、卡鉑、卡莫司汀、西妥昔單抗、苯丁酸氮芥、順鉑、克拉屈濱、克唑替尼、環磷醯胺、阿糖胞苷、達卡巴嗪、放線菌素D、達沙替尼、柔紅黴素、地尼白介素、地西他濱、多西他賽、地塞米松、去氧氟尿苷、阿黴素、表柔比星、重組人類紅細胞生成素α(Epoetin Alpha)、埃博黴素(Epothilone)、厄洛替尼、雌莫司汀、恩替諾特、依託泊苷、依維莫司、依西美坦、非格司亭、氟尿苷、氟達拉濱、氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他胺、葉酸連接的生物鹼(folated linked alkaloid)、吉非替尼、吉西他濱、吉妥珠單抗(Gemtuzumab ozogamicin)、GM-CT-01、戈舍瑞林、羥基脲、替伊莫單抗、伊達比星、異環磷醯胺、伊馬替尼、干擾素α、干擾素β、伊立替康、伊沙匹隆、拉帕替尼、甲醯四氫葉酸、利普安、來那度胺、來曲唑、洛莫司汀、氮芥、甲地孕酮、美法侖、巰基嘌呤、甲氨蝶呤、絲裂黴素、米托蒽醌、奈拉濱、尼祿替尼、尼魯米特、奧曲肽、奧法木單抗、奧普瑞白介素、奧沙利鉑、紫杉醇、帕尼單抗、培美曲塞、噴司他丁、多糖半乳凝集素抑制劑、甲基苄肼、雷洛昔芬、視黃酸、利妥昔單抗、羅米司亭、沙格司亭、索拉非尼、鏈脲黴素、舒尼替尼、他莫西芬、坦羅莫司、替莫唑胺、替尼泊苷、沙立度胺、硫鳥嘌呤、噻替派、硫鳥嘌呤、拓撲替康、托瑞米芬、托西莫單抗、曲美替尼、曲妥珠單抗、維甲酸、戊柔比星、VEGF抑制劑和捕獲劑、長春鹼、長春新鹼、長春地辛、長春瑞賓、Vintafolide (EC145)、伏立諾他、其鹽或前述任意組合。

所述靶向治療藥物可為小分子、小分子偶聯物或單株抗體。其可選自由酪氨酸激酶抑制劑、裂原活化蛋白激酶抑制劑、JAK激酶抑制劑、間變性淋巴瘤激酶抑制劑、B細胞淋巴瘤-2抑制劑、聚ADP核糖聚合酶抑制劑、選擇性雌性激素受體調節劑、磷脂醯肌醇三激酶抑制劑、Braf抑制劑、周期蛋白依賴性激酶抑制劑和熱休克蛋白90抑制劑所組成之群組。靶向治療藥物的實例包含但不限於甲磺酸伊馬替尼、吉非替尼、厄洛替尼、硼替佐米、三苯氧胺、托法替尼、克唑替尼、ABT-263、棉酚、奧拉帕、哌立福辛、阿帕替尼、AN-152、(AEZS-108)阿黴素結合[D-Lys(6)]-LHRH、維羅非尼、達拉菲尼、LGX818、曲美替尼、MEK162、PD-0332991、LEE011、沙利黴素、Vintafolide、利妥昔單抗、曲妥單抗、西妥昔單抗、貝伐單抗或前述任意組合。

所述抗體藥物係選自抗體和抗體藥物複合體。抗體藥物的實例包含但不限於阿侖珠單株抗體(Campath)、貝伐珠單株抗體(AVASTIN^® , Genentech) 、西妥昔單株抗體(ERBITUX^® , Imclone)、帕木單株抗體(VECTIBIX^® , Amgen)、利妥昔單株抗體(RITUXAN^® , Genentech/Biogen Idee)、帕妥珠單株抗體(OMNITARG^™ , 2C4, Genentech)、曲司珠單株抗體(HERCEPTIN^® , Genentech)、托西莫單株抗體(Bexxar, Corixia)，以及抗體藥物偶聯物，吉妥珠單株抗體奧加米星(MYLOTARG^® , Wyeth)或其任意組合。

所述免疫調節劑係選自細胞因子和免疫檢查點抑制劑。免疫調節劑的實例包含但不限於TLR促效劑(TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、TLR11促效劑)、1型干擾素(視情況為α干擾素或β干擾素)、CD40促效劑、IL-6拮抗劑、TNF拮抗劑、細胞毒素T淋巴細胞相關聯之抗原4 (CTLA-4)抑制劑[例如伊派利單抗(ipilimumab) (Yervoy^® )]、細胞程序死亡-1 (PD-1)抑制劑[例如派立珠單抗(pembrolizumab) (Keytruda^® )或納武單抗(nivolumab) (Opdivo^® )]及細胞程式死亡-配體1 (PD-L1)抑制劑[例如阿特唑單抗(atezolizumab) (Tecentriq^® )]。

茲以下列具體試驗例進一步示範說明本發明，用以有利於本發明所屬技術領域通常知識者，可在不需過度解讀的情形下完整利用並實踐本發明，而不應將這些試驗例視為對本發明範圍的限制，但用於說明如何實施本發明的材料及方法。

一、異種組織細胞組合物治療乳癌之效果

為了證明異種組織細胞組合物藉由病灶內途徑給予具有抗乳癌作用，試驗上使用分離自豬乳腺組織並進行擴增的異種乳腺細胞組合物，以及具有免疫功能的原位4T1乳腺腫瘤小鼠模型來探討其功效。

試驗上先進行異種乳腺細胞組合物的分離和擴增，並分析所分離的異種乳腺細胞組合物的細胞特性。請參照第2A圖和第2B圖，為分離自豬乳腺組織的異種乳腺細胞組合物的細胞特性分析結果圖，其中第2A圖為不同代數的豬乳腺上皮細胞的顯微照片圖，第2B圖為豬乳腺上皮細胞的相關基因表現分析結果圖。

第2A圖的結果顯示，所分離的異種乳腺細胞組合物具有豬乳腺上皮細胞的形態。而第2B圖的結果顯示，與豬腎臟細胞、豬尿路上皮細胞和骨骼肌組織相比，僅有豬乳腺上皮細胞大量表現CSN2 基因、CK5 基因和CK14 基因等乳腺上皮細胞相關基因，而其他細胞不表現或少量表現前述乳腺上皮細胞相關基因。其中第2B圖係以單因子變異數分析進行統計分析，數據表示為平均值±標準差，而***表示p ＜0.001。

為了進一步評估異種乳腺細胞組合物在體內的抗乳癌作用，需要使用類似乳腺腫瘤且免疫系統完整的同系動物模型，因此試驗上先建立原位4T1乳腺腫瘤小鼠模型。將衍生自BALB/c小鼠的4T1乳腺癌細胞株(1×10⁶ )注射到具有免疫功能的BALB/c小鼠的乳腺脂肪墊中，植入的4T1乳腺癌細胞株會發展成腫瘤，待腫瘤大小為50-100 mm³ 時即建立好模型，後續進行治療。試驗上分為4個組別，分別為未處理的控制組、處理異種乳腺細胞組合物的試驗組1、處理化療藥物的試驗組2以及同時處理異種乳腺細胞組合物和化療藥物的試驗組3，其中本試驗例中所使用的化療藥物為吉西他濱(Gemcitabine)，而試驗組1和試驗組3中，所處理的異種乳腺細胞組合物為在試驗第1天於腫瘤內注射1×10⁶ 個異種乳腺細胞組合物，試驗組2和試驗組3所處理的化療藥物為在試驗第2、7和14天以腹腔注射60 mg/kg的吉西他濱。治療時間為3週，並於每週以卡尺量測腫瘤體積2次以評估腫瘤的生長狀況，並使用以下公式計算腫瘤體積：π/6×長度×寬度² 。當小鼠死亡或達到試驗終點時，收取腫瘤組織並稱重，並將腫瘤組織包埋和切片，以進一步進行組織學評估和免疫染色。

請參照第3A圖至第3C圖，為異種乳腺細胞組合物治療乳癌效果的分析結果圖，其中第3A圖為不同組別小鼠於試驗期間的腫瘤體積統計結果圖，第3B圖為不同組別小鼠的腫瘤照片圖，第3C圖為不同組別小鼠的腫瘤重量統計圖。第3A圖和第3C圖中*表示p ＜0.05；**表示p ＜0.01；***表示p ＜0.001。

第3A圖至第3C圖的結果顯示，和控制組相比，單獨處理異種乳腺細胞組合物的試驗組1即可大幅抑制腫瘤的生長，其可達到與試驗組2(單獨處理化療藥物)相近的效果。而同時處理異種乳腺細胞組合物和化療藥物的試驗組3，其抑制腫瘤生長的效果更為顯著。

二、異種組織細胞組合物治療腎癌之效果

為了證明異種組織細胞組合物藉由病灶內途徑給予具有抗腎癌作用，試驗上使用分離自豬腎乳突組織並進行擴增的異種腎臟細胞組合物，以及具有免疫功能的原位RAG-luc腎腫瘤小鼠模型來探討其功效。

試驗上先進行異種腎臟細胞組合物的分離和擴增，並分析所分離的異種腎臟細胞組合物的細胞特性。請參照第4A圖和第4B圖，為分離自豬腎臟組織的異種腎臟細胞組合物的細胞特性分析結果圖，其中第4A圖為不同代數的豬腎臟細胞的顯微照片圖，第4B圖為豬腎臟細胞的相關基因表現分析結果圖。

第4A圖的結果顯示，所分離的異種腎臟細胞組合物具有豬腎上皮細胞的形態。而第4B圖的結果顯示，與豬肝臟細胞、豬尿路上皮細胞和骨骼肌組織相比，僅有豬腎臟細胞大量表現PAX2 基因、PAX6 基因和ZO-1 基因等腎臟細胞相關基因，而其他細胞不表現或少量表現前述腎臟細胞相關基因。其中第4B圖係以單因子變異數分析進行統計分析，數據表示為平均值±標準差，而**表示p ＜0.01；***表示p ＜0.001。

為了進一步評估異種腎臟細胞組合物在體內的抗腎癌作用，需要使用類似腎腫瘤且免疫系統完整的同系動物模型，因此試驗上先建立原位RAG-luc腎腫瘤小鼠模型。將衍生自BALB/c小鼠且轉染螢光素酶報導基因的RAG-luc腎癌細胞株(1×10⁶ )注射到具有免疫功能的BALB/c小鼠的腎實質組織中，植入的RAG-luc腎癌細胞株會發展成腫瘤，待腫瘤螢光訊號達到10⁵ plex時即建立好模型，後續進行治療。試驗上分為4個組別，分別為未處理的控制組、處理異種腎臟細胞組合物的試驗組1、處理化療藥物的試驗組2以及同時處理異種腎臟細胞組合物和化療藥物的試驗組3，其中本試驗例中所使用的化療藥物為舒尼替尼(Sunitinib)，其為酪氨酸激酶抑制劑。而試驗組1和試驗組3中，所處理的異種腎臟細胞組合物為在試驗第1天於腫瘤內注射1×10⁶ 個異種腎臟細胞組合物，試驗組2和試驗組3所處理的化療藥物為每天口服40 mg/kg的吉西他濱。治療時間為4週，試驗期間以IVIS成像系統監測腫瘤大小，當小鼠死亡或達到試驗終點時，收取被腫瘤侵害的腎臟組織並稱重。

請參照第5A圖至第5C圖，為異種腎臟細胞組合物治療腎癌效果的分析結果圖，其中第5A圖為不同組別小鼠治療前和進行治療至第14天的IVIS圖像，第5B圖為不同組別小鼠的腎臟照片圖，第5C圖為不同組別小鼠的腎臟重量統計圖。第5C圖中*表示p ＜0.05；**表示p ＜0.01；***表示p ＜0.001。

第5A圖至第5C圖的結果顯示，和控制組相比，單獨處理異種腎臟細胞組合物的試驗組1即可大幅抑制腫瘤的生長，其可達到與試驗組2(單獨處理化療藥物)相近的效果。而同時處理異種腎臟細胞組合物和化療藥物的試驗組3，其抑制腫瘤生長的效果更為顯著。顯示異種腎臟細胞組合物可抑制腎臟腫瘤的進展，並可進一步搭配化療藥物進行合併治療達到更優異的治療效果。

三、異種組織細胞組合物治療肝癌之效果

為了證明異種組織細胞組合物藉由病灶內途徑給予具有抗肝癌作用，試驗上使用分離自豬肝臟組織並進行擴增的異種肝臟細胞組合物，以及具有免疫功能的原位Hepa 1-6-luc HCC肝腫瘤小鼠模型來探討其功效。

試驗上先進行異種肝臟細胞組合物的分離和擴增，並分析所分離的異種肝臟細胞組合物的細胞特性。請參照第6A圖和第6B圖，為分離自豬肝臟組織的異種肝臟細胞組合物的細胞特性分析結果圖，其中第6A圖為豬肝臟細胞的顯微照片圖，第6B圖為豬肝細胞的相關基因表現分析結果圖。

第6A圖的結果顯示，所分離的異種肝臟細胞組合物具有豬初代肝臟細胞的形態。而第6B圖的結果顯示，與豬乳腺上皮細胞、豬腎臟細胞、豬尿路上皮細胞和骨骼肌組織相比，僅有豬肝臟細胞大量表現ALB 基因、TF 基因和CK18 基因等肝臟細胞相關基因，而其他細胞不表現前述肝臟細胞相關基因。其中第6B圖係以單因子變異數分析進行統計分析，數據表示為平均值±標準差，而***表示p ＜0.001。

為了進一步評估異種肝臟細胞組合物在體內的抗肝癌作用，需要使用類似肝腫瘤且免疫系統完整的同系動物模型，因此試驗上先建立原位Hepa 1-6-luc肝腫瘤小鼠模型。將衍生自C57BL6小鼠且轉染螢光素酶報導基因的Hepa 1-6-luc肝癌細胞株(1×10⁶ )注射到具有免疫功能的C57BL6小鼠的肝左葉中，植入的Hepa 1-6-luc肝癌細胞株會發展成腫瘤，待腫瘤螢光訊號達到10⁵ plex時即建立好模型，後續進行治療。試驗上分為4個組別，分別為未處理的控制組、處理異種肝臟細胞組合物的試驗組1、處理化療藥物的試驗組2以及同時處理異種肝臟細胞組合物和化療藥物的試驗組3，其中本試驗例中所使用的化療藥物為索拉非尼(Sorafenib)，而試驗組1和試驗組3中，所處理的異種肝臟細胞組合物為在試驗第1天於腫瘤內注射1×10⁶ 個異種肝臟細胞組合物，試驗組2和試驗組3所處理的化療藥物為每週口服5次30 mg/kg的索拉非尼。治療時間為2週或4週，試驗期間以IVIS成像系統監測腫瘤大小，當小鼠死亡或達到試驗終點時，收取被腫瘤侵害的肝臟組織並稱重。

請參照第7圖，為異種肝臟細胞組合物治療肝癌效果的分析結果圖，其為不同組別小鼠於進行治療至第4、8和12天的IVIS圖像。第7圖的結果顯示，和控制組相比，單獨處理異種肝臟細胞組合物的試驗組1可大幅抑制腫瘤的生長，其可達到比試驗組2(單獨處理化療藥物)更優異的效果。而同時處理異種肝臟細胞組合物和化療藥物的試驗組3，其抑制腫瘤生長的效果更為顯著。顯示異種肝臟細胞組合物可抑制肝臟腫瘤的進展，並可進一步搭配化療藥物進行合併治療達到更優異的治療效果。

四、異種組織細胞組合物治療膀胱癌之效果

為了證明異種組織細胞組合物藉由病灶內途徑給予具有抗膀胱癌作用，試驗上使用分離自豬尿路上皮組織並進行擴增的異種尿路上皮細胞組合物，以及具有免疫功能的原位MBT-2膀胱腫瘤小鼠模型來探討其功效。

試驗上先進行異種尿路上皮細胞組合物的分離和擴增，並分析所分離的異種組織細胞組合物的細胞特性。請參照第8A圖和第8B圖，為豬源的異種尿路上皮細胞組合物的細胞特性分析結果圖，其中第8A圖為不同代數的豬尿路上皮細胞的顯微照片圖，第8B圖為豬尿路上皮細胞的相關基因表現分析結果圖。

第8A圖的結果顯示，所分離的異種尿路上皮細胞組合物具有豬尿路上皮細胞的形態。而第8B圖的結果顯示，與豬肝臟細胞、豬腎臟細胞和骨骼肌組織相比，僅有豬尿路上皮細胞大量表現CD44 基因、CK5 基因、CK14 基因和UPK3A 基因等尿路上皮細胞相關基因，而其他細胞不表現或少量表現前述尿路上皮細胞相關基因。其中第8B圖係以單因子變異數分析進行統計分析，數據表示為平均值±標準差，而*表示p ＜0.05；***表示p ＜0.001。

為了進一步評估異種尿路上皮細胞組合物在體內的抗膀胱癌作用，需要使用類似膀胱腫瘤且免疫系統完整的同系動物模型，因此試驗上先建立原位MBT-2膀胱腫瘤小鼠模型。將衍生自C3H/He小鼠的MBT-2膀胱癌細胞株(1×10⁶ )注射到具有免疫功能的C3H/He小鼠的皮下組織中，植入的MBT-2膀胱癌細胞株會發展成腫瘤，待腫瘤大小為50-100 mm³ 時即建立好模型，後續進行治療。試驗上分為4個組別，分別為未處理的控制組、處理異種尿路上皮細胞組合物的試驗組1、處理化療藥物的試驗組2以及同時處理異種尿路上皮細胞組合物和化療藥物的試驗組3，其中本試驗例中所使用的化療藥物為吉西他濱(Gemcitabine)和順鉑(Cisplatin)，而試驗組1和試驗組3中，所處理的異種尿路上皮細胞組合物為在試驗第3天且每週1次於腫瘤內注射1×10⁶ 個異種尿路上皮細胞組合物，共治療2週；試驗組2和試驗組3所處理的化療藥物為在試驗第1天以腹腔注射6 mg/小鼠的吉西他濱，以及第2天以腹腔注射0.12 mg/小鼠的順鉑，每週1次，治療時間為連續3週，並於每週以卡尺量測腫瘤體積2次以評估腫瘤的生長狀況，並使用以下公式計算腫瘤體積：π/6×長度×寬度² 。當小鼠死亡或達到試驗終點時，收取腫瘤組織並稱重。

請參照第9A圖至第9C圖，為異種尿路上皮細胞組合物治療膀胱癌效果的分析結果圖，其中第9A圖為不同組別小鼠於試驗期間的腫瘤體積統計結果圖，第9B圖為不同組別小鼠的腫瘤照片圖，第9C圖為不同組別小鼠的腫瘤重量統計圖。第9C圖中*表示p ＜0.05；**表示p ＜0.01；***表示p ＜0.001。

第9A圖至第9C圖的結果顯示，和控制組相比，單獨處理異種尿路上皮細胞組合物的試驗組1即可大幅抑制腫瘤的生長，而同時處理異種尿路上皮細胞組合物和化療藥物的試驗組3，其抑制腫瘤生長的效果更為顯著。

五、異種組織細胞組合物治療胰臟癌之效果

為了證明異種組織細胞組合物藉由病灶內途徑給予具有抗胰臟癌作用，試驗上使用分離自豬胰臟組織並進行擴增的異種胰臟細胞組合物，以及具有免疫功能的異位Pan 18胰腺腫瘤小鼠模型來探討其功效。

試驗上先進行異種胰臟細胞組合物的分離和擴增，並分析所分離的異種胰臟細胞組合物的細胞特性。請參照第10A圖和第10B圖，為分離自豬胰臟組織的異種胰臟細胞組合物的細胞特性分析結果圖，其中第10A圖為不同代數的豬胰腺上皮細胞的顯微照片圖，第10B圖為豬胰腺上皮細胞的相關基因表現分析結果圖。

第10A圖的結果顯示，所分離的異種胰臟細胞組合物具有豬胰腺上皮細胞的形態。而第10B圖的結果顯示，與骨骼肌組織相比，僅有豬胰腺上皮細胞大量表現CK19 基因、CFTR 基因和SOX2 基因等胰腺上皮細胞相關基因，而骨骼肌組織則少量表現前述胰腺上皮細胞相關基因。其中第10B圖係以單因子變異數分析進行統計分析，數據表示為平均值±標準差，而***表示p ＜0.001。

為了進一步評估異種胰臟細胞組合物在體內的抗胰臟癌作用，需要使用類似胰腺腫瘤且免疫系統完整的同系動物模型，因此試驗上先建立異位Pan 18胰腺腫瘤小鼠模型。將衍生自C57BL6小鼠的Pan 18胰腺癌細胞株(1×10⁶ )注射到具有免疫功能的C57BL6小鼠的背側，植入的Pan 18胰腺癌細胞株會發展成腫瘤，待腫瘤大小為50-100 mm³ 時即建立好模型，後續進行治療。試驗上分為4個組別，分別為未處理的控制組、處理異種胰臟細胞組合物的試驗組1、處理化療藥物的試驗組2以及同時處理異種胰臟細胞組合物和化療藥物的試驗組3，其中本試驗例中所使用的化療藥物為吉西他濱(Gemcitabine)，而試驗組1和試驗組3中，所處理的異種胰臟細胞組合物為在試驗第1天於腫瘤內注射1×10⁶ 個異種胰臟細胞組合物，試驗組2和試驗組3所處理的化療藥物為每週以腹腔注射60 mg/kg的吉西他濱1次，治療時間為3週，並於每週以卡尺量測腫瘤體積2次以評估腫瘤的生長狀況，並使用以下公式計算腫瘤體積：π/6×長度×寬度² 。當小鼠死亡或達到試驗終點時，收取腫瘤組織並稱重。

請參照第11圖，為異種胰臟細胞組合物治療胰臟癌效果的分析結果圖，為不同組別小鼠於試驗期間的腫瘤體積統計結果圖，其中*表示p ＜0.05；**表示p ＜0.01。第11圖的結果顯示，和控制組相比，單獨處理異種胰臟細胞組合物的試驗組1即可大幅抑制腫瘤的生長，其可達到與試驗組2(單獨處理化療藥物)相近的效果。而同時處理異種胰臟細胞組合物和化療藥物的試驗組3，其抑制腫瘤生長的效果更為顯著。

綜上所述，本發明之異種組織細胞組合物藉由病灶內途徑給予到相似或相同組織學分級的腫瘤部位來修復受損的組織，並恢復免疫系統以治療癌症。並經由實驗數據證實，本發明之異種組織細胞組合物在乳癌、腎癌、肝癌、膀胱癌和胰臟癌等動物模型上具有優異抑制腫瘤進展的效果，其更可與另一抗癌治療劑合併使用，例如化療藥物，以達到協同作用之功效，具有運用於生醫保健市場之潛能。

然本發明已以實施方式揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明的精神和範圍內，當可作各種的更動與潤飾，因此本發明的保護範圍當視後附的申請專利範圍所界定者為準。

無

為讓本發明之上述和其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之說明如下： 第1A圖、第1B圖和第1C圖係繪示以本發明之異種組織細胞組合物治療相似或相同組織學分級的癌症的示意圖； 第2A圖和第2B圖為分離自豬乳腺組織的異種乳腺細胞組合物的細胞特性分析結果圖； 第3A圖、第3B圖和第3C圖為異種乳腺細胞組合物治療乳癌效果的分析結果圖； 第4A圖和第4B圖為分離自豬腎臟組織的異種腎臟細胞組合物的細胞特性分析結果圖； 第5A圖、第5B圖和第5C圖為異種腎臟細胞組合物治療腎癌效果的分析結果圖； 第6A圖和第6B圖為分離自豬肝臟組織的異種肝臟細胞組合物的細胞特性分析結果圖； 第7圖為異種肝臟細胞組合物治療肝癌效果的分析結果圖； 第8A圖和第8B圖為豬源的異種尿路上皮細胞組合物的細胞特性分析結果圖； 第9A圖、第9B圖和第9C圖為異種尿路上皮細胞組合物治療膀胱癌效果的分析結果圖； 第10A圖和第10B圖為分離自豬胰臟組織的異種胰臟細胞組合物的細胞特性分析結果圖；以及 第11圖為異種胰臟細胞組合物治療胰臟癌效果的分析結果圖。

Claims (12)

1. 一種異種組織細胞組合物之用途，其係用於製備治療相似或相同組織學分級的癌症的醫藥品，其中該異種組織細胞組合物不包含一腫瘤細胞和一血管內皮細胞，該異種組織細胞組合物未經由一佐劑處理，且該醫藥品是藉由一病灶內途徑給予。
2. 如請求項1所述之異種組織細胞組合物之用途，其中該病灶內途徑包含腫瘤內施用和腫瘤周圍施用。
3. 如請求項1所述之異種組織細胞組合物之用途，其中該異種組織細胞組合物包含異種組織特異性幹細胞、異種組織前驅細胞、異種組織前體和異種組織成熟細胞。
4. 如請求項1所述之異種組織細胞組合物之用途，其中該異種組織細胞組合物更包含一細胞質外基質分子和一多醣。
5. 如請求項1所述之異種組織細胞組合物之用途，其中該異種組織細胞組合物分離自一哺乳類動物之一組織。
6. 如請求項5所述之異種組織細胞組合物之用 途，其中該哺乳類動物為人、豬、狗、貓、牛、馬、驢、鹿、山羊、綿羊、兔、小鼠、大鼠、豚鼠或猴。
7. 如請求項1所述之異種組織細胞組合物之用途，其中該異種組織細胞組合物更包含至少一化療藥物。
8. 如請求項7所述之異種組織細胞組合物之用途，其中該至少一化療藥物係選自由烷基化劑、亞硝基脲劑、抗代謝物、抗腫瘤抗生素、植物來源的生物鹼、拓撲異構酶抑製劑、激素治療藥、激素拮抗劑、芳香酶抑製劑、P-糖蛋白抑製劑和鉑絡合物衍生物所組成之群組。
9. 如請求項1所述之異種組織細胞組合物之用途，其中該異種組織細胞組合物更包含一靶向治療藥物、一抗體藥物、一免疫調節劑及其組合。
10. 如請求項9所述之異種組織細胞組合物之用途，其中該靶向治療藥物係選自由酪氨酸激酶抑制劑、裂原活化蛋白激酶抑制劑、間變性淋巴瘤激酶抑制劑、B細胞淋巴瘤-2抑制劑、聚ADP核糖聚合酶抑制劑、選擇性雌性激素受體調節劑、磷脂醯肌醇三激酶抑制劑、Braf抑制劑、周期蛋白依賴性激酶抑制劑和熱休克蛋白90抑制劑所組成之群組。
11. 如請求項9所述之異種組織細胞組合物之用途，其中該抗體藥物係選自一抗體和一抗體藥物複合體。
12. 如請求項9所述之異種組織細胞組合物之用途，其中該免疫調節劑係選自一細胞因子和一免疫檢查點抑制劑。

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