TWI769382B

TWI769382B - 利博西林用於製備治療罹患磷酸二酯酶４介導疾病的患者的醫藥組合物及用途

Info

Publication number: TWI769382B
Application number: TW108121743A
Authority: TW
Inventors: 黃聰龍; 陳柏任
Original assignee: 長庚大學
Priority date: 2019-06-21
Filing date: 2019-06-21
Publication date: 2022-07-01
Also published as: US20200397789A1; TW202100158A; CN112107582A; US11351172B2; CN112107582B

Abstract

本發明揭露一種用於治療罹患磷酸二酯酶4介導疾病的患者以及用於抑制磷酸二酯酶4的活性的醫藥組合物，其包括有效劑量的利博西林(Ribociclib)以及醫藥上可接受的載體。本發明另揭露一種利博西林用於製備治療罹患磷酸二酯酶4介導疾病的患者的醫藥組合物之用途。利用本發明之用途及醫藥組合物，可有效的抑制磷酸二酯酶4的活性，並可治療磷酸二酯酶4介導疾病。

Description

利博西林用於製備治療罹患磷酸二酯酶4介導疾病的患者的醫藥組合物及用途

本發明是關於一種治療罹患磷酸二酯酶4介導疾病的患者及抑制磷酸二酯酶4的活性的醫藥組合物以及製備該醫藥組合物的用途。

磷酸二酯酶(phosphodiesterase，PDE)家族能夠將環腺苷單磷酸(Cyclic adenosine monophosphate，cAMP)和環鳥苷單磷酸(cyclic guanosine monophosphate，cGMP)水解為AMP和GMP而使其失活。在該家族中，cAMP專一性酵素為磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4，PDE4)，其在炎症和免疫細胞中普遍存在。

cAMP是細胞中的關鍵第二信使。已知cAMP的濃度增加可抑制各種類型的炎症和免疫細胞中的促發炎反應，包括淋巴細胞、單核球細胞、巨噬細胞、嗜中性白血球、嗜酸性白血球、嗜鹼性白血球和肺部上皮細胞等。

然而，磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4，PDE4)會使cAMP的濃度下降，而使得其抑制各種類型的炎症和免疫細胞中的促發炎反應的效果降低，導致發炎性及過敏性疾病容易發生。目前已知磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4，PDE4)活性的提高與某些發炎性及過敏性疾病有關，例如哮喘、慢性支氣管炎、肺氣腫、異位性皮膚炎、蕁麻疹、過敏性鼻炎、過敏性結膜炎、乾癬、類風濕性關節炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、急性呼吸窘迫症候群和多發性硬化症等。

因此，現仍亟需一種用來抑制磷酸二酯酶4活性的醫藥組合物及其製備用途，來降低患者體內的磷酸二酯酶4的活性，避免其影響免疫系統的功能，進而達到治療與磷酸二酯酶4活性相關疾病的功效。

有鑑於上述課題，本發明的目的為提供一種用來抑制磷酸二酯酶4活性的醫藥組合物及其製備用途，使用該醫藥組合物能夠降低個體體內的磷酸二酯酶4的活性，避免其影響免疫系統的功能，進而達到治療磷酸二酯酶4介導疾病的功效。

為達上述目的，本發明提供一種用於治療罹患一磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4，PDE4)介導疾病的患者之醫藥組合物，包括一有效劑量的利博西林(Ribociclib)以及一醫藥上可接受的載體。

為達上述目的，本發明另提供一種利博西林用於製備治療罹患一磷酸二酯酶4介導疾病的患者的醫藥組合物之用途，其中醫藥組合物包括一有效劑量的利博西林以及一醫藥上可接受的載體。

為達上述目的，本發明又提供一種用於抑制一磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4，PDE4)的活性之醫藥組合物，包括一有效劑量的利博西林(Ribociclib)以及一醫藥上可接受的載體。

在一實施例中，磷酸二酯酶4介導疾病係為急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群、乾癬、慢性阻塞性肺病、肺纖維化、肝損傷、脂肪性肝炎、肝纖維化、心肌梗塞、休克、中風、血管炎、敗血症、炎症性腸病、類風濕性關節炎、全身性紅斑性狼瘡或異位性皮膚炎。

在一實施例中，利博西林係抑制嗜中性白血球之活性來治療磷酸二酯酶4介導疾病。

在一實施例中，利博西林係透過抑制一磷酸二酯酶4路徑來治療磷酸二酯酶4介導疾病。

在一實施例中，利博西林係透過抑制磷酸二酯酶4路徑的磷酸二酯酶4A(phosphodiesterase 4A，PDE4A)、磷酸二酯酶4B(phosphodiesterase 4B，PDE4B)、磷酸二酯酶4C(phosphodiesterase 4C，PDE4C)或磷酸二酯酶4D(phosphodiesterase 4D，PDE4D)的活性來治療該PDE4介導疾病。

在一實施例中，利博西林的有效劑量介於每日每公斤體重1微克至100毫克之間。

承上所述，本發明的功效在於：藉由提供一種用來抑制磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4，PDE4)活性的醫藥組合物及其製備用途，來降低患者體內的磷酸二酯酶4的活性，避免其影響免疫系統的功能，進而達到治療磷酸二酯酶4介導疾病的功效。

圖1A至圖1F為利博西林專一性抑制磷酸二酯酶4活性的研究結果。圖1A為不同劑量的利博西林抑制磷酸二酯酶4A(PDE4A)的結果圖。圖1B為不同劑量的利博西林抑制磷酸二酯酶4B(PDE4B)的結果圖。圖1C為不同劑量的利博西林抑制磷酸二酯酶4C(PDE4C)的結果圖。圖1D為不同劑量的利博西林抑制磷酸二酯酶4D(PDE4D)的結果圖。圖1E為不同劑量的利博西林皆不抑制磷酸二酯酶3B(PDE3B)的結果圖。圖1F為不同劑量的利博西林皆不抑制磷酸二酯酶7A(PDE7A)的結果圖。

圖2為利博西林抑制以fMLF(formyl-Met-Leu-Phe)刺激的嗜中性白血球中過氧化陰離子的產生的結果圖。

圖3為利博西林可減少咪喹莫特(imiquimod，IMQ)處理小鼠產生的類乾癬症狀的研究結果，其為不同處理的小鼠皮膚於處理後第0天至第5天的局部放大照片。

圖4為利博西林可減少LPS處理小鼠產生的急性肺損傷的研究結果，其為不同處理的小鼠肺部組織切片進行H&E染色的照片。

以下將參照相關圖式，說明依據本發明用來抑制磷酸二酯酶4活性的醫藥組合物及其製備用途的較佳實施例及實驗例，其中相同的元件將以相同的參照符號加以說明。

本發明的醫藥組合物及其製備用途，能夠降低患者體內的磷酸二酯酶4的活性，避免影響免疫系統的功能，進而達到治療磷酸二酯酶4介導疾病的功效。

除非另外定義，否則本文使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬技術領域的通常知識者理解的相同的含義。儘管在本發明的測試實驗中可以使用與本文描述的那些相似或等同的任何方法和材料，但是本文描述了優選的材料和方法。在描述和要求保護本發明時，將使用以下術語。應該理解的是，這裡使用的術語的目的僅用於描述特定實施例，而非對本發明的限制。

在本說明書中所使用之「磷酸二酯酶(phosphodiesterase，PDE)」能夠水解磷酸二酯鍵，其使能夠將環腺苷單磷酸(Cyclic adenosine monophosphate，cAMP)和環鳥苷單磷酸(cyclic guanosine monophosphate，cGMP)水解為AMP和GMP而使其失活。磷酸二酯酶可依胺基酸序列、基質專一性、調結性質、藥理性質及細胞組織分布等特性分為11型，分別是PDE1至PDE11。在磷酸二酯酶家族中，cAMP專一性酵素為磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4，PDE4)，其在炎症和免疫細胞中普遍存在。目前已知磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4，PDE4)活性的提高與某些發炎性及過敏性疾病有關，例如哮喘、慢性支氣管炎、肺氣腫、異位性皮膚炎、蕁麻疹、過敏性鼻炎、過敏性結膜炎、乾癬、類風濕性關節炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、急性呼吸窘迫症候群和多發性硬化症等。

術語「磷酸二酯酶4介導疾病」是指前述與磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4，PDE4)活性的提高有關的發炎性及過敏性疾病，例如但不限於哮喘、慢性支氣管炎、肺氣腫、異位性皮膚炎、蕁麻疹、過敏性鼻炎、過敏性結膜炎、乾癬、類風濕性關節炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、急性呼吸窘迫症候群或多發性硬化症、急性肺損傷、肺纖維化、肝損傷、脂肪性肝炎、肝纖維化、心肌梗塞、休克、中風、血管炎、敗血症、炎症性腸病或全身性紅斑性狼瘡。

術語「利博西林(Ribociclib)」又稱為「LEE011」、「LEE011」、「Kisqali」，其為CDK4及CDK6之有效的及選擇性抑制劑，其IUPAC命名為7-環戊基-N,N-二甲基-2-{[5-(1-哌嗪基)-2-吡啶基]胺基}-7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺(7-Cyclopentyl-N,N-dimethyl-2-{[5-(1-piperazinyl)-2-pyridinyl]amino}-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidine-6-carboxamide)。利博西林在美國經核准用於治療激素受體(Hormone receptor，HR)-陽性、人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)-陰性晚期或轉移性乳癌，其與來曲唑(letrozole) 組合作為初始內分泌療法或在以內分泌療法的疾病進展之後與法洛德(fulvestrant)組合使用。該藥物係由諾華(Novartis)以商品名Kisqali^®銷售，其呈膜衣錠劑型，內含200毫克的利博西林。利博西林可以具有以下結構、或其鹽類、溶劑合物、水合物、前驅藥、鏡像異構物、非鏡像異構物或幾何異構物。

如本說明書所使用的，個體健康狀態中的「疾病(disease)」是指個體不能維持體內恆定(homeostasis)，並且如果疾病沒有改善，則個體的健康持續惡化。

如本說明書所使用的，術語「治/處理」、「治療」及「治療方法」是指透過向個體施用藥劑或醫藥組合物，來降低個體所經歷疾病或病症症狀的頻率或嚴重程度。

如本說明書所使用的，術語「醫藥上可接受的」是指一種材料，例如載體或稀釋劑，該材料為可用於本發明的利博西林、或其鹽類、溶劑合物、水合物、前驅藥、鏡像異構物、非鏡像異構物或幾何異構物，該利博西林可保有其生物活性或性質且相對無毒。即該材料可以施用於個體，但不會引起不希望的生物效應或與組合物所含的任何成分以有害的方式相互作用。

在本說明書中所使用之「醫藥上可接受的載體」包括鹽類、材料、組合物或載體，例如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或包封材料，其可將本發明的利博西林攜帶或運輸到受試者體內使利博西林發揮其預期的功能。通常，這些利博西林從一個器官或身體的一部分，被攜帶或運輸到另一個器官或身體的一部分。每種鹽類或載體必須是與製劑的其他成分(包括可用於本發明的利博西林)相容且對受試者無害。可用作載體的材料的實例包括：糖，例如乳糖、葡萄糖及蔗糖；澱粉，例如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；纖維素及其衍生物，例如鈉羧甲基纖維素、乙基纖維素及醋酸纖維素；粉狀黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，例如可可脂及栓劑蠟；油，例如花生油、棉籽油、紅花子油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；二醇類，例如丙二醇；多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇及聚乙二醇；酯類，例如油酸乙酯及月桂酸乙酯；瓊脂；緩衝劑，例如氫氧化鎂及氫氧化鋁；海藻酸；無熱原水；等滲鹽水；林格氏溶液(Ringer’s solution)；乙醇；磷酸鹽緩衝溶液；稀釋劑；製粒劑；潤滑劑；黏合劑；崩散劑；潤濕劑；乳化劑；著色劑；釋放劑；塗佈劑；甜味劑；調味劑；芳香劑；防腐劑；抗氧化劑；塑化劑；膠凝劑；增稠劑；硬化劑；定型劑；懸浮劑；界面活性劑；保濕劑；載體；穩定劑；和製劑中使用的其他無毒相容物質，或其任何組合。

用於本發明方法的醫藥組合物可能適合下列施用途徑：鼻腔、吸入、口服、直腸、陰道、胸膜、腹膜、非腸胃道、局部、經皮、肺部、鼻內、口腔、眼部、硬膜外、鞘內、靜脈內或其他施用途徑。其他本發明的製劑包括投射的奈米粒子(projected nanoparticles)、微球體(microspheres)、脂質體製劑(liposomal preparations)、披覆粒子(coated particles)，聚合物的綴合物(polymer conjugates)，含有活性成分的再密封紅血球(resealed erythrocytes)及基於免疫學的製劑。

適合的醫藥組合物及劑型包括例如片劑、膠囊、膠囊型錠劑、丸劑、凝膠帽、錠劑、乳劑、分散劑、懸浮劑、溶液劑、糖漿劑、顆粒劑、珠劑、經皮貼劑、凝膠劑、粉劑、粒劑、糜劑(magmas)、霜劑、膏劑(pastes)、硬膏劑(plasters)、洗劑、盤劑(discs)、栓劑、用於鼻或口服施用的液體噴霧劑、用於吸入的乾粉或霧化製劑、用於膀胱內施用的組合物及製劑等。應該理解的是，可用於本發明的製劑及醫藥組合物不限於本文所述的特定製劑及醫藥組合物。

本發明的醫藥組合物可以任何口服可接受之劑量形式，經口服而投予患者，其例如但不限於膠囊、藥錠、水性懸浮液或溶液。在以口服使用之藥錠情況中，常使用的載體包括乳糖及玉米澱粉。另外，亦可加入潤滑劑，如硬脂酸鎂。關於膠囊形式之口服投藥，有用的稀釋液包括乳糖及乾燥的玉米澱粉。在以水性懸浮液供口服使用時，則將活性成份之利博西林與乳化及懸浮劑結合。在其他實施例中，也可以加入特定的甜味劑、香味劑或著色劑，以使患者容易地服用。

適合非腸胃道施用的醫藥組合物的製劑包含與醫藥上可接受的載體(例如無菌水或無菌等滲鹽水)組合的活性成分。該製劑可以以適合用於快速推注或連續施用的形式來製備、包裝或銷售。可注射製劑可以以單位劑量的形式來製備、包裝或銷售，例如安瓿或含有防腐劑的多劑量容器中。可注射製劑還可以例如病患自控式止痛(patient-controlled analgesia，PCA)裝置的形式來製備、包裝或銷售。用於非腸胃道施用的製劑，包括但不限於懸浮液、溶液、油性或水性載體中的乳劑、膏劑及可植入的緩釋或生物可降解製劑。在非腸胃道施用製劑的一個實施例中，活性成分以乾燥(即粉末或顆粒)形式提供，並在非腸胃道施用之前用適合的載體(例如無菌無熱原水)回溶組合物。

適合於局部施用的製劑包括但不限於液體或半液體製劑，如擦劑、洗劑，水包油或油包水乳劑，如霜劑、軟膏劑或膏劑，以及溶液或懸浮液。儘管活性成分的濃度可以與活性成分在溶劑中的溶解度的極限一樣高，但局部施用的製劑可以例如包含約1%至約10%(w/w)的活性成分。用於局部施用的製劑可以進一步包含一或多種本文所述的額外的成分。可供局部投藥使用之軟膏中的載體可例如但不限於礦物油、液態凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蠟或水。

本發明的醫藥組合物可以以適合用於口腔施用的製劑來製備、包裝或銷售。該製劑可以是例如使用常規方法製成的片劑或錠劑的形式，並且可以含有例如0.1%至20%(w/w)的活性成分，所餘部分包含可口服溶解或降解的組合物，以及，可選擇地，包含一或多種本文所述的額外成分。或者，適合用於口腔施用的製劑可以包含具有活性成分的粉末或霧化(aerosolized或atomized)溶液或懸浮液。該粉末、霧化或霧化製劑在分散時可具有約0.1至約200奈米的平均顆粒或液滴尺寸，並可進一步包含一或多種本文所述的額外成分。本文描述的製劑實例不是全面的，並且應該理解的是，本發明包括本文中未描述但是為本領域技術人員所知的這些及其他製劑的額外改良。

本發明的醫藥組合物可以以適用於直腸施用的製劑來製備、包裝或銷售。該醫藥組合物可以是例如栓劑、保留灌腸製劑及用於直腸或結腸灌洗的溶液的形式。本發明的醫藥組合物可以更包括適合且無刺激性之賦形劑混合，以製備成栓劑。上述之賦形劑在室溫下是固體，但是在直腸溫度作用下會成為液體，從而在直腸中溶解，釋出活性成份之利博西林。具體來說，賦形劑包括椰子奶油、蜂蠟及聚乙二醇。

本說明書所述的醫藥組合物的製劑，可以透過藥理學及藥劑學領域所知的或今後所開發的任何方法來製備。一般來說，這樣的製備方法包括以下步驟：使活性成分與載體或一種或多種的其他輔助成分結合，接著一如果需要或可行的話一將產品形成或包裝成預計的單劑量或多劑量的單元。

在本說明書中所使用之「患者」、「個體」、「受試者」可以互換使用，其是指人類或非人類哺乳動物。非人類哺乳動物包括例如家畜和寵物，例如綿羊、牛、豬、犬科動物、貓科動物和鼠類哺乳動物。優選地，患者是人類。

在本說明書中所使用之「嗜中性白血球」可以與「嗜中性球」、「嗜中性細胞」互換使用，其是指在哺乳動物血液中最主要的一種白血球，佔白血球的60~70%。嗜中性白血球在非專一性免疫系統中扮演非常重要的角色。嗜中性白血球的形態不規則，外周常有突起。未成熟的嗜中性白血球的細胞核呈杆狀或馬蹄形，成熟的則呈分葉狀，以三葉較常見。骨髓細胞分化成嗜中性白血球的過程中，由骨髓母細胞(myeloblast)分化為骨髓前細胞(promeylocyte)時開始製造一級顆粒(azurophil，又稱為primary granules)，再分化為骨髓細胞及骨髓中細胞時可製造二級顆粒(secondary granules，又稱為specific granules)，骨髓中細胞進一步分化為桿狀核粒細胞(band cell)後離開骨髓進入血液循環，並開始製造第三級顆粒(tertiary granules，又稱為gelatinase granules)，而最終分化為嗜中性白血球(neutrophil，又稱為多核型顆粒球)時，可製造出分泌顆粒(secretory granule)。成熟的嗜中性白血球可製造的顆粒中，一級顆粒最大，約為0.3微米(μm)，內含許多物質，包括髓過氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)、絲胺酸蛋白酶(serine protease，例如：蛋白酶3(proteinase 3)、組織蛋白酶G(cathepsin G)、嗜中性白血球彈性蛋白酶(neutrophil elastase))及溶酶體(lysozyme)等。顆粒中的絲胺酸蛋白酶主要功能為分解吞噬體(phagosome)及溶酶體((lysosome)內的病原菌，其也會被分泌至細胞外以消滅外來物。嗜中性白血球具有很強的趨化作用和吞噬作用。隨著吞噬作用的開始，導致細胞膜紊亂而引起呼吸爆發，細胞耗氧量增加，產生大量的過氧化物及超氧化物等細胞毒性效應分子，對病菌具有殺傷活性。除了利用吞噬作用和分泌蛋白質來清除病原以外，當病原入侵時，嗜中性白血球能夠釋放出其自身的DNA，這樣網狀的DNA和一些原本附著在細胞核後來移動並吸附在DNA上的酵素，例如髓過氧化物酶及嗜中性白血球彈性蛋白酶(neutrophil elastase)，來包住病原菌，同時藉由DNA的負電黏附住病原，最後使用酵素殺死病原，前述機制被稱為嗜中性白血球胞外陷阱(Neutrophil Extracellular Traps，NETs)。因此，嗜中性白血球所產生的過氧化物以及彈性蛋白酶與其活性有關。當嗜中性白血球過度活化時，會產生過多的氧化壓力、顆粒內物質過量釋放、形成過量的NETs等現象，這些都會對細胞或組織造成傷害。因此，嗜中性白血球過度活化與許多疾病的形成具有關聯性，包括：急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群、乾癬、慢性阻塞性肺病、肺纖維化、肝損傷、脂肪性肝炎、肝纖維化、心肌梗塞、休克、中風、血管炎、敗血症、炎症性腸病、類風濕性關節炎、全身性紅斑性狼瘡或異位性皮膚炎。

在本說明書中所使用之「有效劑量」意指利博西林可以抑制磷酸二酯酶4的活性之劑量。在本發明中，利博西林的劑量較佳的係介於每日每公斤體重1微克至100毫克之間。

範圍：貫穿本發明，本發明的各個實施例可以以範圍的形式呈現。應該理解的是，範圍形式的描述僅僅是為了方便及簡潔，不應該被解釋為對本發明權利範圍的限制。因此，範圍的描述應被視為是具體公開了所有可能的子範圍以及該範圍內的單一數值。例如，從1到6的範圍的描述應該被視為具有特定公開的子範圍，例如從1到3、1到4、1到5、2到4、2到6、3到6等，以及在該範圍內的單一及部分數字，例如1、2、2.7、3、4、5、5.3及6。前述規則無論範圍的跨度如何皆有適用。

依據本發明之一種用於治療罹患磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4，PDE4)介導疾病的患者之醫藥組合物，包括一有效劑量的利博西林(Ribociclib)以及一醫藥上可接受的載體。在本實施例中，可以抽取或秤取一有效劑量的利博西林，並加入醫藥上可接受的載體來製備成一個醫藥組合物，再施用於患者來達成抑制磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4，PDE4)的活性的功效，並進而用來治療磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4，PDE4)介導疾病。特別地，利博西林可以具有以下結構、或是其鹽類、溶劑合物、水合物、前驅藥、鏡像異構物、非鏡像異構物或幾何異構物，本發明不作限制。

另外，本發明的醫藥組合物可以包括但不限於片劑、膠囊、膠囊型錠劑、丸劑、凝膠帽、錠劑、乳劑、分散劑、懸浮劑、溶液劑、糖漿劑、顆粒劑、珠劑、經皮貼劑、凝膠劑、粉劑、粒劑、糜劑(magmas)、霜劑、膏劑(pastes)、硬膏劑(plasters)、洗劑、盤劑(discs)、栓劑、用於鼻或口服施用的液體噴霧劑、用於吸入的乾粉或霧化製劑、用於膀胱內施用的組合物及製劑等。

在本實施例中，醫藥上可接受的載體的種類已詳細描述於前，於此不再重複贅述。

在本實施例中，磷酸二酯酶4介導疾病例如但不限於急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群、乾癬、慢性阻塞性肺病、肺纖維化、肝損傷、脂肪性肝炎、肝纖維化、心肌梗塞、休克、中風、血管炎、敗血症、炎症性腸病、類風濕性關節炎、全身性紅斑性狼瘡或異位性皮膚炎等本領域技術人員習知與 PDE4相關、免疫相關、或嗜中性白血球相關的疾病。

在本實施例中，利博西林可以透過抑制嗜中性白血球之活性來治療磷酸二酯酶4介導疾病。

在本實施例中，利博西林可以透過抑制磷酸二酯酶4路徑的磷酸二酯酶4A(phosphodiesterase 4A，PDE4A)、磷酸二酯酶4B(phosphodiesterase 4B，PDE4B)、磷酸二酯酶4C(phosphodiesterase 4C，PDE4C)或磷酸二酯酶4D(phosphodiesterase 4D，PDE4D)的活性來治療磷酸二酯酶4介導疾病。

在本實施例中，利博西林的有效劑量介於每日每公斤體重1微克至100毫克之間。較佳的，利博西林的有效劑量可以是每日每公斤1微克、5微克、10微克、15微克、20微克、25微克、30微克、35微克、40微克、45微克、50微克、55微克、60微克、65微克、70微克、75微克、80微克、85微克、90微克、95微克、100微克、105微克、110微克、115微克、120微克、125微克、130微克、135微克、140微克、145微克、150微克、155微克、160微克、165微克、170微克、175微克、180微克、185微克、190微克、195微克、200微克、205微克、210微克、215微克、220微克、225微克、230微克、235微克、240微克、245微克、250微克、255微克、260微克、265微克、270微克、275微克、280微克、285微克、290微克、295微克、300微克、305微克、310微克、315微克、320微克、325微克、330微克、335微克、340微克、345微克、350微克、355微克、360微克、365微克、370微克、375微克、380微克、385微克、390微克、395微克、400微克、405微克、410微克、415微克、420微克、425微克、430微克、435微克、440微克、445微克、450微克、455微克、460微克、465微克、470微克、475微克、480微克、485微克、490微克、495微克、500微克、505微克、510微克、515微克、520微克、525微克、530微克、535微克、540微克、545微克、550微克、555微克、560微克、565微克、570微克、575微克、580微克、585微克、590微克、595微克、600微克、605微克、610微克、615微克、620微克、625微克、630微克、635微克、640微克、645微克、650微克、655微克、660微克、665微克、670微克、675微克、680微克、685微克、690微克、695微克、700微克、705微克、710微克、715微克、720微克、725微克、730微克、735微克、740微克、745微克、750微克、755微克、760微克、765微克、770微克、775微克、780微克、785微克、790微克、795微克、800微克、805微克、810微克、815微克、820微克、825微克、830微克、835微克、840微克、845微克、850微克、855微克、860微克、865微克、870微克、875微克、880微克、885微克、890微克、895微克、900微克、905微克、910微克、915微克、920微克、925微克、930微克、935微克、940微克、945微克、950微克、955微克、960微克、965微克、970微克、975微克、980微克、985微克、990微克、995微克、1毫克、1.5毫克、2毫克、2.5毫克、3毫克、3.5毫克、4毫克、4.5毫克、5毫克、5.5毫克、6毫克、6.5毫克、7毫克、7.5毫克、8毫克、8.5毫克、9毫克、9.5毫克、10毫克、10.5毫克、11毫克、11.5毫克、12毫克、12.5毫克、13毫克、13.5毫克、14毫克、14.5毫克、15毫克、15.5毫克、16毫克、16.5毫克、17毫克、17.5毫克、18毫克、18.5毫克、19毫克、19.5毫克、20毫克、20.5毫克、21毫克、21.5毫克、22毫克、22.5毫克、23毫克、23.5毫克、24毫克、24.5毫克、25毫克、25.5毫克、26毫克、26.5毫克、27毫克、27.5毫克、28毫克、28.5毫克、29毫克、29.5毫克、30毫克、30.5毫克、31毫克、31.5毫克、32毫克、32.5毫克、33毫克、33.5毫克、34毫克、34.5毫克、35毫克、35.5毫克、36毫克、36.5毫克、37毫克、37.5毫克、38毫克、38.5毫克、39毫克、39.5毫克、40毫克、40.5毫克、41毫克、41.5毫克、42毫克、42.5毫克、43毫克、43.5毫克、44毫克、44.5毫克、45毫克、45.5毫克、46毫克、46.5毫克、47毫克、47.5毫克、48毫克、48.5毫克、49毫克、49.5毫克、50毫克、50.5毫克、51毫克、51.5毫克、52毫克、52.5毫克、53毫克、53.5毫克、54毫克、54.5毫克、55毫克、55.5毫克、56毫克、56.5毫克、57毫克、57.5毫克、58毫克、58.5毫克、59毫克、59.5毫克、60毫克、60.5毫克、61毫克、61.5毫克、62毫克、62.5毫克、63毫克、63.5毫克、64毫克、64.5毫克、65毫克、65.5毫克、66毫克、66.5毫克、67毫克、67.5毫克、68毫克、68.5毫克、69毫克、69.5毫克、70毫克、70.5毫克、71毫克、71.5毫克、72毫克、72.5毫克、73毫克、73.5毫克、74毫克、74.5毫克、75毫克、75.5毫克、76毫克、76.5毫克、77毫克、77.5毫克、78毫克、78.5毫克、79毫克、79.5毫克、80毫克、80.5毫克、81毫克、81.5毫克、82毫克、82.5毫克、83毫克、83.5毫克、84毫克、84.5毫克、85毫克、85.5毫克、86毫克、86.5毫克、87毫克、87.5 毫克、88毫克、88.5毫克、89毫克、89.5毫克、90毫克、90.5毫克、91毫克、91.5毫克、92毫克、92.5毫克、93毫克、93.5毫克、94毫克、94.5毫克、95毫克、95.5毫克、96毫克、96.5毫克、97毫克、97.5毫克、98毫克、98.5毫克、99毫克、99.5毫克、100毫克或前述任兩個數值之間所涵蓋的任意數值及範圍。當然，利博西林的有效劑量可能會隨配合的處理上之載體、投予路徑或有需要之個體及其生理狀況的不同而有所變化。

本發明另提供一種利博西林(Ribociclib)用於製備治療罹患一磷酸二酯酶4介導疾病的患者的醫藥組合物之用途。本發明又提供一種用於抑制一磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4，PDE4)的活性之醫藥組合物。本發明再提供一種利博西林(Ribociclib)用於製備抑制一磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4，PDE4)的活性的醫藥組合物之用途。另外，本發明提供一種用於治療罹患一磷酸二酯酶4介導疾病的患者之方法，包括提供一醫藥組合物，該醫藥組合物包括一有效劑量的利博西林(Ribociclib)以及一醫藥上可接受的載體，該利博西林(Ribociclib)係透過抑制磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4，PDE4)的活性以治療磷酸二酯酶4介導疾病，該磷酸二酯酶4介導疾病係為急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群、乾癬、慢性阻塞性肺病、肺纖維化、肝損傷、脂肪性肝炎、肝纖維化、心肌梗塞、休克、中風、血管炎、敗血症、炎症性腸病、類風濕性關節炎、全身性紅斑性狼瘡或異位性皮膚炎。然而，該醫藥組合物的劑量、載體的種類、及其他性質與前述說明之醫藥組合物大致相同，可參考前述，於此不再贅述。

承上所述，依據本發明的醫藥組合物及其製備用途，能夠抑制患者體內的磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4，PDE4)的活性，避免磷酸二酯酶4影響免疫系統的功能，進而達到治療磷酸二酯酶4介導疾病的功效。

實驗例一：利博西林專一性抑制磷酸二酯酶4活性的研究結果。

依據HTRF^® package insert cAMP dynamic tests(購自Cisbio bioassays，目錄編號為62AM₄PEB)的使用者說明書進行檢測來分析PDE酵素的活性，將利博西林溶於DMSO(作為溶劑)中，並以0.1~30微莫耳(μM)的濃度，加入含有PDE4A、PDE4B、PDE4C、PDE3B或PDE7A(皆購自BPS hioscience) 的PDE分析緩衝液(PDE assay buffer)中，在37℃下反應10分鐘。未加入利博西林的反應物改加入DMSO(溶劑，於圖1A至圖1F中標示為「-」)作為控制組。接著加入60奈莫耳(nM)cAMP，在37。℃下再培養45分鐘。再加入cAMP-d₂及anti-cAMP cryptate於室溫下避光反應1小時。然後以冷光檢測儀(TECAN infinite 200 Pro)定量，用以檢測PDE酵素的活性。實驗結果如圖1A至圖1F所示。

請參照圖1A至圖1F，圖1A為不同劑量的利博西林抑制磷酸二酯酶4A(PDE4A)的結果圖。圖1B為不同劑量的利博西林抑制磷酸二酯酶4B(PDE4B)的結果圖。圖1C為不同劑量的利博西林抑制磷酸二酯酶4C(PDE4C)的結果圖。圖1D為不同劑量的利博西林抑制磷酸二酯酶4D(PDE4D)的結果圖。圖1E為不同劑量的利博西林皆不抑制磷酸二酯酶3B(PDE3B)的結果圖。圖1F為不同劑量的利博西林皆不抑制磷酸二酯酶7A(PDE7A)的結果圖。如圖所示，除了控制組(標示為「-」)以外，利博西林專一性的抑制PDE4的活性。詳細而言，如圖1A所示，利博西林在0.1微莫耳(μM)、0.3微莫耳(μM)、1微莫耳(μM)、3微莫耳(μM)以及10微莫耳(μM)都顯著抑制PDE4A的活性，且隨著利博西林的濃度增加，PDE4A的活性顯著降低。如圖1B所示，利博西林在3微莫耳(μM)、10微莫耳(μM)以及30微莫耳(μM)都顯著抑制PDE4B的活性，且隨著利博西林的濃度增加，PDE4B的活性顯著降低。如圖1C所示，利博西林在3微莫耳(μM)、10微莫耳(μM)以及30微莫耳(μM)都顯著抑制PDE4C的活性，且隨著利博西林的濃度增加，PDE4C的活性顯著降低。如圖1D所示，利博西林在10微莫耳(μM)以及30微莫耳(μM)都顯著抑制PDE4D的活性，且隨著利博西林的濃度增加，PDE4D的活性顯著降低。如圖1E及圖1F所示，利博西林不會抑制PDE3B及PDE7A的活性，顯示利博西林能專一性的抑制磷酸二酯酶4的活性。在圖1A至圖1F中，「-」表示控制組；**表示與控制組相比，P<0.01；***表示與控制組相比，P<0.001；每個實驗都進行了六組獨立試驗，誤差槓表示平均值標準誤差(standard error of the mean，SEM)。

實驗例二：利博西林抑制以fMLF(formyl-Met-Leu-Phe)刺激的嗜中性白血球中過氧化陰離子的產生的研究結果。

捐獻者

捐獻者為年齡介於20至35歲的健康個體(無任何已知疾病或危險因子、作息正常且禁服藥物一週以上)，捐獻者皆已簽署研究作業倫理規範審議小組(Institutional Review Board，IRB)批准的書面知情同意書。捐獻者係以無菌真空採血管於其手肘靜脈進行採血，每位捐獻者採集50毫升，用於分離本實驗例使用的嗜中性白血球。

將人類嗜中性白血球(自捐獻者全血中所分離出)與DMSO(溶劑，圖2中，於X軸利博西林標示為「-」的組別)或0.3~10微莫耳(μM)的利博西林(溶於DMSO中)共同培養5分鐘，接著，加入/不加入fMLF 0.1微莫耳(μM)/細胞鬆弛素1微克/毫升(cytochalasin B，CB 1μg/ml)處理10分鐘，以活化嗜中性白血球。然後以分光光度計測量反應混合物於OD 550nm處的吸光值(OD₅₅₀)。OD₅₅₀的測量結果是用以檢測鐵細胞色素c(ferricytochrome c)的還原狀態，其表示過氧化陰離子產生的量。前述細胞鬆弛素(cytochalasin B)係購自Sigma-Aldrich，目錄編號為#C2506；fMLF係購自Sigma-Aldrich，目錄編號為#454454；分光光度計型號為HITACHI U-3010。

請參照圖2，圖2為利博西林抑制以fMLF(formyl-Met-Leu-Phe)刺激的嗜中性白血球中過氧化陰離子的產生的結果圖。如圖2所示，以有加入fMLF但未加入利博西林(改成加入DMSO)的組別作為控制組，有加入fMLF及利博西林的組別與控制組相比，可降低過氧化陰離子的產生，且加入1微莫耳(μM)、3微莫耳(μM)及10微莫耳(μM)的組別皆具有顯著差異，隨著利博西林的濃度增加，過氧化陰離子的產生顯著降低，顯示利博西林可以降低嗜中性白血球的活性。在圖2中，「-」表示未加入利博西林(改成加入DMSO)；「+」表示有加入；***表示與控制組相比，P<0.001；每個實驗都進行了六組獨立試驗，誤差槓表示平均值標準誤差(standard error of the mean，SEM)。

實驗例三：製備醫藥組合物。

將250微克或500微克的利博西林(Ribociclib)溶於50微升的0.5%(w/v)甲基纖維素400(methylcellulose 400)溶液中，以製成利博西林濃度為250微克/50微升或500微克/50微升的醫藥組合物，用於後續實驗例四、實驗例五的動物實驗。

實驗例四：利博西林可減少咪喹莫特(imiquimod，IMQ)處理小鼠產生的類乾癬症狀的研究結果。

將7~9週齡、體重約25克的雄性BALB/C小鼠進行分組，每組各6隻。將所有的小鼠背部除毛後，先各以50微升的溶劑(0.5%甲基纖維素400溶液)或50微升實驗例三所製備的醫藥組合物(利博西林劑量為10毫克/公斤(mg/kg)或20毫克/公斤(mg/kg))塗抹於小鼠背部，再各用/不用咪喹莫特(imiquimod，IMQ，購自3M Health Care Limited)局部塗抹於小鼠背部，用以產生類乾癬症狀，各種處理組別都連續處理5天，每天處理1次。於此，塗抹溶劑後塗抹IMQ的組別作為控制組，僅塗抹溶劑但不塗抹IMQ的組別作為空白組。

請參照圖3，圖3為利博西林可減少咪喹莫特(imiquimod，IMQ)處理小鼠產生的類乾癬症狀的研究結果，其為不同處理的小鼠皮膚於處理後第0天至第5天的局部放大照片，圖3是以手持式數位顯微鏡拍攝的照片。如圖3所示，僅塗抹溶劑但不塗抹IMQ的組別在處理後第0天至第5天都沒有產生類乾癬症狀。塗抹溶劑後塗抹IMQ的控制組在處理後第3天開始產生類乾癬症狀，塗抹利博西林後塗抹IMQ的組別相較於控制組，其在處理後第5天都沒有觀察到明顯的類乾癬症狀，且利博西林劑量為10毫克/公斤(mg/kg)或20毫克/公斤(mg/kg)都具有改善或治療類乾癬症狀的效果。本實驗例結果顯示利博西林可以用來改善或治療類乾癬症狀。

實驗例五：利博西林可減少LPS處理小鼠產生的急性肺損傷的研究結果。

將7~8週齡的BALB/C小鼠透過氣管內噴霧2毫克/公斤(mg/kg)的LPS以誘發急性肺損傷(ALI)。將小鼠禁食後，以尾靜脈注射的方式注射50微升(μl)實驗例三所製備的醫藥組合物(利博西林劑量為10或20毫克/公斤(mg/kg))或等體積的0.5%甲基纖維素400(50微升(μl))。在1小時後，麻醉小鼠。並以氣管內噴霧的方式用2毫克/公斤(mg/kg)的LPS(溶於40μl 0.9%生理食鹽水)或0.9%生理食鹽水處理小鼠。5小時後，犧牲小鼠並取得肺組織，將肺組織固定於10%福馬林中，用於組織切片並進行H&E染色。結果如圖4所示。

請參照圖4，圖4為利博西林可減少LPS處理小鼠產生的急性肺損傷的研究結果，其為不同處理的小鼠肺部組織切片進行H&E染色的照片。僅以溶劑處理的小鼠肺部組織沒有產生急性肺損傷。以溶劑處理後再以LPS處理的控制組，其肺部組織中觀察到型態的改變及嗜中性白血球的浸潤，故有產生急性肺損傷。而以利博西林處理後再以LPS處理的組別相較於控制組，其沒有觀察到明顯的型態改變及嗜中性白血球的浸潤，因此沒有產生急性肺損傷。本實驗例結果顯示利博西林可以用來改善或治療急性肺損傷。

依據實驗例一的結果顯示，本發明實施例的醫藥組合物，可以顯著且專一性的抑制磷酸二酯酶4(包括PDE4A、PDE4B、PDE4C及PDE4D)的活性。依據實驗例二的結果顯示，本發明實施例的醫藥組合物，可以顯著抑制嗜中性白血球的活性。依據實驗例四的結果顯示，本發明實施例的醫藥組合物，可以用來改善或治療類乾癬症狀。依據實驗例五的結果顯示，本發明實施例的醫藥組合物，可以用來改善或治療急性肺損傷。特別地，上述實驗例僅用以說明，而非對本發明的限制。

綜上所述，本發明的醫藥組合物及其製備用途，能夠降低患者體內的磷酸二酯酶4的活性、抑制嗜中性白血球的活性，避免磷酸二酯酶4或嗜中性白血球影響免疫系統的功能，進而達到治療磷酸二酯酶4介導疾病的功效。

以上所述僅為舉例性，而非為限制性者。任何未脫離本發明之精神與範疇，而對其進行之等效修改或變更，均應包含於後附之申請專利範圍中。

Claims

一種利博西林用於製備治療由磷酸二酯酶4介導之急性肺損傷的醫藥組合物之用途，其中該醫藥組合物包括有效劑量的利博西林(Ribociclib)以及醫藥上可接受的載體，且該醫藥組合物的劑型為可注射製劑。
如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該利博西林係抑制嗜中性白血球之活性來治療該磷酸二酯酶4介導之急性肺損傷。
如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該利博西林係透過抑制磷酸二酯酶4路徑來治療該磷酸二酯酶4介導之急性肺損傷。
如申請專利範圍第3項所述的用途，其中該利博西林係透過抑制該磷酸二酯酶4路徑的磷酸二酯酶4A、磷酸二酯酶4B、磷酸二酯酶4C或磷酸二酯酶4D的活性來治療該急性肺損傷。
如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該利博西林的該有效劑量介於每日每公斤體重1微克至100毫克之間。