TWI754659B

TWI754659B - 用於製備含有弱酸性劑之微脂體組合物的傳輸載體、方法及套組

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Publication number: TWI754659B
Application number: TW106126551A
Authority: TW
Inventors: 黃可名; 陳和儒; 基隆洪
Original assignee: 台灣微脂體股份有限公司; 美商Ｔｌｃ生物醫藥公司
Priority date: 2016-08-08
Filing date: 2017-08-07
Publication date: 2022-02-11
Also published as: US20190160009A1; JP7062639B2; EP3496704B1; EP4552632A1; US20250387332A1; EP3496704A1; CN109562068A; CA3032687A1; CA3032687C; AU2017308827B2; CN109562068B; US12419837B2; WO2018031568A1; TW201806585A; AU2017308827A1; US20210393525A1; JP2019527692A

Abstract

提供一種製備微脂體組合物的方法。該方法包含使一微脂體溶液與一弱酸性劑在有限的時間內接觸的步驟。該微脂體溶液包含一弱酸式鹽，該弱酸式鹽被包覆在一水性內部空間內。該水性內部空間係由含有一種或多種脂質及一親水性聚合物共軛脂質的脂質混合物所組成之膜與水性介質分隔，基於該脂質混合物的總量，該親水性聚合物共軛脂質的莫耳百分比小於3%。即使在不將溫度升高到高於周圍環境的條件下，將該藥劑包覆到所需量的與脂質預定比例的時間也會顯著減少。

Description

用於製備含有弱酸性劑之微脂體組合物的傳輸載體、方法及套組

本發明涉及一種傳輸載體、套組或方法，其係應用於製備包覆治療劑(特別是一弱酸性藥物)的微脂體。

現今已有許多方法可用於改善與弱酸性藥物的穩定性或其他與治療功能相關的性質。弱酸性藥物，如前列腺素(prostaglandins，PGs)，在醫藥應用上有其缺點。例如，edex^®是一種在α-環糊精包合複合物(α-cyclodextrin inclusion complex)內的無菌無熱原粉末，其亦被視為前列腺素E₁(PGE₁-CD)的α-環糊精形式。這種藥品易溶於水，且幾乎不溶於乙醇、醋酸乙酯，及乙醚。於回溶(reconstitution)後，其活性成分，前列地爾(alprostadil)，會立即從α-環糊精包合複合物中解離。然而，由於PGE₁的人體半衰期短(約30秒)，且其用量過度時會產生嚴重的副作用，因此限制劑量之高頻率給藥對於PGE₁-CD療法而言是必要的。其他醫藥製劑則為懸浮液的形式，其中PGE₁溶解於脂質微球體中，而為水包油型乳劑。然而，這種製劑的儲放穩定性或在血漿內的穩定性都是不夠的(US 4,684,633)。

一方面，為了改善一般弱酸性藥物製劑在治療上之不便，微脂體製劑被應用於傳輸弱酸性藥物，例如PG。美國專利申請公開號US20020182248揭露了透過使用特定的脂質、神經脂質(sphingolipid)的微脂體分散液。然而，這種習用的微脂體分散液係透過被動載入(passive loading)而製備，而有PG包覆效率不定的情況。未經包覆的PG可能在施用於受試者時造成過量的問題。

於另一方面，為了防止微脂體在血液中的聚集並避免被網狀內皮系統(reticuloendothelial system，RES)捕獲，微脂體的表面係經聚(乙二醇)(poly(ethylene glycol)，PEG)包覆。因為經長效型微脂體處理可使得腫瘤組織之藥物濃度增加，包覆多柔比星之PEG衍生的微脂體(PEG衍生的微脂體已知為隱身微脂體(stealth liposome))在臨床前研究中展現出增強的治療功效(美國專利號5,013,556，美國專利號5,676,971)。然而，領域中似也未有證實PEG衍生的微脂體可適用於在環境溫度下以迅速的製程裝載或包覆弱酸性藥物供臨床使用。此外，領域中仍然需要能以高效率將弱酸性藥物，特別是PG，裝載至PEG衍生的微脂體中的微脂體分散液，以避免因游離藥物引起的過量藥物問題或藥物在水性分散體中降解的問題。

於另一態樣，為了以更高的效率將化學成分穩定地包覆在微脂體中，美國專利號US 5,939,096利用質子穿梭機制(proton shuttle mechanism)，其使用化學成分之鹽類，從而產生內部較高/外部較低的pH梯度，以達成陽離子促進的沉澱作用或跨越低通透性(permeability)的微脂體跨膜屏障。

然而，基於先前將弱酸性藥物裝載到微脂體或隱身微脂體中的技術，結合本案申請人進行之實驗數據(第1圖)，顯示隱身微脂體在環境溫度(25℃)下的包覆效率很差，而需要加熱步驟來增加前列腺素的穿透性。裝載製程需要將溫度升高至高於微脂體的相轉移溫度(transitional temperature)，通常高於60℃，其一般係高於環境溫度。當暴露於水性環境時，升高的溫度加速了不穩定之藥物(例如前列腺素)的降解，從而阻礙組合物在長期儲存時的穩定性。

為了克服這些缺點，本發明提供了一種用於製備微脂體組合物的方法與套組。該微脂體組合物含有聚乙二醇衍生之微脂體，並適於取得在環境溫度下較高的包覆效率及得以發揮持續釋放弱酸性藥物的有利藥物動力學特性。此外，包覆較佳地，在貨架存儲時有提高的穩定性，以減輕或消除上述提及的問題。

本發明基於以下發現：在用於形成具有弱酸式鹽梯度之微脂體的脂質混合物中，減少親水性聚合物共軛脂質的含量，有助於在微脂體中裝載及保留酸性化合物。據此，本發明提供用於傳輸對於診斷、預後、治療或預防一受試者之不適、疾病、病症或症狀有用之各種酸性化合物的方法、套組，或組合物。

於本發明之一態樣，提供了一種傳輸載體，該傳輸載體包含在一水性介質中的一微脂體，其中該微脂體具有一內部空間，且該內部空間：(1).為水性，(2).係由一脂質混合物組成之膜與該水性介質分隔，其中該脂質混合物含有一種或多種脂質以及基於該脂質混合物總量的小於3%的莫耳百分比之一親水性聚合物共軛脂質；以及(3).含有一弱酸式鹽。

於本發明之另一態樣，提供了一種製備一微脂體組合物之方法，其包含：在一水性介質中，使含一弱酸式鹽之一微脂體與一弱酸性劑接觸一足夠之時間，從而使該弱酸性劑轉而包覆在該微脂體內；該弱酸式鹽包覆在一水性內部空間內，且該水性內部空間係由一脂質混合物組成之膜與該水性介質分隔；其中該弱酸式鹽與該弱酸性劑具有一陽離子配對，且該脂質混合物含有一種或多種脂質以及基於該脂質混合物總量的小於3%的莫耳百分比之一親水性聚合物共軛脂質。

在一組具體實施例中，該親水性聚合物共軛脂質為基於該脂質混合物總量的0.1%至3%的莫耳百分比之聚乙二醇衍生的脂質；較佳為0.5%至3%；更佳為0.5%至1%。

在一組具體實施例中，該微脂體進一步包含一多質子酸。該多質子酸係包覆於該微脂體的水性內部空間中，從而，該多質子酸於該微脂體中提供了使經包載(entrapped)的前列腺素保留於該微脂體中的的優異效果。通常，該多質子酸為天然酸或合成的生物相容性酸。較佳地，該多質子酸為有機三元酸。於一具體實施例中，該多質子酸係選自由檸檬酸、琥珀酸、酒石酸，或其組合所組成之群組。

在一組具體實施例中，在一水性介質中，使微脂體與弱酸性劑的接觸係在一環境溫度下進行一段足以使該弱酸性劑弱酸性劑轉而包覆在該微脂體內的時間。

於本發明之另一方面，提供一種套組，其係用於製備含有一弱酸性劑的微脂體組合物，該套組包含：容納一凍乾餅(lyophilized cake)之一容器，其中該凍乾餅含有一弱酸性劑；以及容納一微脂體溶液之另一容器，其中該微脂體溶液含有在一水性介質中的一微脂體，其中該微脂體包括一包覆在一水性內部空間之弱酸式鹽，該水性內部空間由一脂質混合物組成之膜與該水性介質分隔，其中該脂質混合物含有一種或多種脂質以及基於該脂質混合物總量的小於3%的莫耳百分比之一親水性聚合物共軛脂質。

於一個一般的具體實施例中，該弱酸性劑係衍生自脂肪酸之生理活性脂質。特別是，該弱酸性劑為花生四烯酸代謝物，例如包括前列環素或凝血脂素之前列腺素(PG)，其係為參與許多身體功能的一種類激素物質，例如平滑肌的收縮與鬆弛、血管擴張與收縮、控制血壓、抑制血小板聚集，以及調節發炎。前列腺素已被開發為用於治療高血壓、血栓形成、哮喘，以及胃及腸潰瘍的藥物或治療化合物，用於懷孕的哺乳動物之分娩及流產的指示，以及用於預防動脈硬化。

於一個一般的具體實施例中，該弱酸性劑為前列腺素A₁(PGA₁)、前列腺素A₂(PGA₂)、前列腺素E₁(PGE₁)、前列腺素E₂(PGE₂)、前列腺素F₁α(PGF₁α)，或前列腺素F₂α(PGF₂α)。

於一較佳具體實施例中，根據本發明之弱酸性劑為前列腺素E₁(PGE₁)(也稱為前列地爾)或其衍生物，例如，但不限於，6-酮前列腺素E₁、15- 酮前列腺素E₁、13,14-二氫-15-酮前列腺素E₁，或16,16-二甲基-6-酮前列腺素E₁，其係適用於間歇性跛行患者的治療。對於間歇性跛行患者，前列地爾可增加其末梢血流量及血管通透性，並抑制血小板聚集。PGE₁可以緩解患者因末梢循環血流不足所引起之疼痛。然而，使用PGE₁-CD(α-環糊精形式)的常規治療對於BID療程(每天兩次)進行數週的患者而言並不方便。於另一態樣，因為PGE₁的半衰期在人體內很短(約30秒至10分鐘)，且當過量(其降低血壓)時，其副作用可能很嚴重，因此限制劑量之高頻率給藥對於PGE₁-CD療法而言是必要的。

為了改善常規前列腺素療法的該些不便，本發明提供一種用於製備一含有前列腺素之微脂體組合物的傳輸載體、套組或方法，特別是一微脂體PGE₁製劑，其中PGE₁被包覆在微脂體內。微脂體製劑的益處之一是允許PGE₁在該微脂體組合物中自微脂體逐漸釋放出來，從而對於目標疾病或症狀進行較長間隔時間的治療。此外，由於只有PGE₁的游離形式會引起副作用，而微脂體形式則不會引起，因此可以增加微脂體PGE₁的劑量，而不會產生嚴重的副作用問題。本發明之傳輸載體、套組及方法提供了更加友善且具控制力的產品以供患者使用。

本發明的目的之一是建立一種即用型之兩瓶套組形式的微脂體組合物，其含有如PGE₁的弱酸性劑。為了達到更好的臨床應用，在環境溫度下的短期間且遠程裝載(remote loading)後的高包覆效率是必要的。較高的包覆效率降低了可能於過量時引起不欲副作用之游離形式的藥劑。另一方面，在體外釋放後有更多被保留的藥劑也是必須的，其代表持續釋放的性質。此外，為了本發明這樣的目的，該套組在4℃下保存至少一年仍應是穩定且得於動物模型中表現出藥效。根據這些需求，對該所述運輸載體、套組及方法的參數進行調整，以滿足該些需求。

從以下結合附圖之詳細描述，本發明的其它目的、優點及新穎特徵將變得更加明顯。

第1圖係比較在環境溫度及升高的溫度條件下，將前列腺素包覆至具有習知可使用量之聚乙二醇衍生脂質(6%)的微脂體的圖；以及第2圖顯示根據實施例7所獲得的包覆效率與微脂體組合物中聚乙二醇衍生脂質之效價的關係圖。

I.定義

如上述及本揭露內容全文所用，除非另有說明，以下術語應理解為具有以下含義。

如本文所用，單數形式「一」、「一個」，與「該」包括複數含義，除非上下文另有明確指出。

本文中的所有數字可被理解為被以「約」修飾。

微脂體

如本文所用之術語「微脂體」通常的特徵在於具有透過形成囊泡的一或多個雙層膜從外部介質隔離的水性內部空間。微脂體的雙層膜通常由脂質形成，亦即包含空間分離的疏水及親水結構域之合成或天然來源的兩親分子。較佳地，在本發明的實踐中，微脂體包括小單層微脂體(SUV)、大單層微脂體(LUV)，亦即直徑大於50nm的單層微脂體，以及具有多於一個雙層脂質的多層微脂體(MLVs)。

通常，微脂體由包括一種或多種脂質的脂質混合物所組成。脂質的實例包括，但不限於，(i)中性脂質，例如，膽固醇、神經醯胺、二醯基甘油、醯基(聚醚)，或烷基聚(醚)；(ii)中性磷脂，例如，二醯基磷脂醯膽鹼、鞘磷脂，以及二醯基磷脂醯乙醇胺，(iii)陰離子脂質，例如，二醯基磷脂醯絲胺酸、二醯基磷脂醯甘胺酸、二醯基磷脂醯膽鹼、心磷脂、二醯基甘胺醯基肌醇、二醯基甘油硫代琥珀酸酯、二醯基甘油硫酸膽酸酯、以及其類似物；以及(v)陽離子脂質，例如，二甲基二十八烷基銨溴化物(DDAB)、1,2-二醯基-3-三甲基銨丙烷(DOTAP)，以及1,2-二醯基-sn-甘油-3-乙基磷酸膽鹼。

就親水性聚合物衍生之微脂體的典型案例而論，微脂體係由至少一種磷脂與中性脂質的混合物，以及一親水性聚合物共軛脂質所組成。用於本發明之磷脂的實例包括，但不限於，磷脂醯膽鹼(PC)、磷脂醯甘油(PG)、磷脂醯乙醇胺(PE)、磷脂醯絲胺酸(PS)、磷脂酸(PA)、磷脂醯肌醇(PI)、卵磷脂醯膽鹼(EPC)、卵磷脂醯甘油(EPG)、卵磷脂醯乙醇胺(EPE)、卵磷脂醯絲胺酸(EPS)、卵磷脂酸(EPA)、卵磷脂醯肌醇(EPI)、大豆磷脂醯膽鹼(SPC)、大豆磷脂醯甘油(SPG)、大豆磷脂醯乙醇胺(SPE)、大豆磷脂醯絲胺酸(SPS)、大豆磷脂酸(SPA)、大豆磷脂醯肌醇(SPI)、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)、1,2-二油醯-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼(DOPC)、二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼(DMPC)、二棕櫚醯磷脂醯甘油(DPPG)、二油醯磷脂醯甘油(DOPG)、二肉豆蔻醯磷脂醯甘油(DMPG)、十六烷基磷酸膽鹼(HEPC)、氫化大豆磷脂醯膽鹼(HSPC)、二硬脂醯磷脂醯膽鹼(DSPC)、二硬脂醯磷脂醯甘油(DSPG)、二油醯磷脂醯乙醇胺(DOPE)、棕櫚醯硬脂醯磷脂醯膽鹼(PSPC)、棕櫚醯硬脂醯磷脂醯甘油(PSPG)、單油醯磷脂醯乙醇胺(MOPE)、1-棕櫚醯-2-油醯-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼(POPC)、二硬脂醯磷脂醯乙醇胺(DSPE)、二棕櫚醯磷脂醯絲胺酸(DPPS)、1,2-二油醯-sn-甘油-3-磷脂醯絲胺酸(DOPS)、二肉荳蔻醯磷脂醯絲胺酸(DMPS)、二硬脂醯磷脂醯絲胺酸(DSPS)、二棕櫚醯磷脂酸(DPPA)、1,2-二油醯-sn-甘油-3-磷脂酸(DOPA)、二肉荳蔻醯磷脂酸(DMPA)、二硬脂醯磷脂酸(DSPA)、二棕櫚醯磷脂醯肌醇(DPPI)、1,2-二油醯-sn-甘油-3-磷脂醯肌醇(DOPI)、二肉荳蔻醯磷脂醯肌醇(DMPI)、二硬脂醯磷脂醯肌醇(DSPI)，及其混合物。

親水性聚合物共軛脂質

術語「親水性聚合物共軛脂質」係指親水性聚合物，其具有連接到脂質分子上的一長鏈之高度水合且撓性的中性聚合物。親水性聚合物的實例包括，但不限於，分子量約2,000至約5,000道爾頓的聚乙二醇(PEG)、甲氧基PEG(mPEG)、神經節苷脂GM₁、聚唾液酸、聚乙醇酸、聚乳酸聚乙醇酸(apolyacticpolyglycolic acid)、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚甲基噁唑啉、聚乙基噁唑啉、聚羥基乙基噁唑啉、聚羥基丙基噁唑啉、聚天冬醯胺、聚羥丙基甲基丙烯醯胺、聚甲基丙烯醯胺、聚二甲基丙烯醯胺、聚乙烯基甲基醚、聚羥基乙基丙烯酸酯、衍生化纖維素如羥甲基纖維素或羥乙基纖維素以及合成聚合物。脂質分子的實例包括，但不限於(i)中性脂質，例如，膽固醇、神經醯胺、二醯基甘油、醯基(聚醚)，或烷基聚(醚)；(ii)中性磷脂，例如，二醯基磷脂醯膽鹼、鞘磷脂，以及二醯基磷脂醯乙醇胺，(iii)陰離子脂質，例如，二醯基磷脂醯絲胺酸、二醯基磷脂醯甘油、二醯基磷脂酸、心磷脂、二醯基磷脂醯肌醇、二醯基甘油硫代琥珀酸酯、二醯基甘油硫酸膽酸酯、及其類似物；以及(v)陽離子脂質，例如，二甲基二十八烷基銨溴化物(DDAB)、1,2-二醯基-3-三甲基銨丙烷(DOTAP)，以及1,2-二醯基-sn-甘油-3-乙基磷酸膽鹼。

於一組具體實施例中，親水性聚合物共軛脂質為聚乙二醇衍生的脂質，其包括，但不限於：DSPE-PEG，其中PEG的分子量為約2,000道爾頓(以下稱為DSPE-PEG₂₀₀₀)。

包覆

術語「經包覆的(encapsulated)」或「經包載的(entrapped)」化合物、物質或治療劑係指化合物、物質或治療劑與微脂體相結合或至少部分地被隔離在微脂體的內部隔室中。術語「包覆效率」係指微脂體形式的藥物含量相對於游離形式藥物與微脂體形式的藥物總和的比例。於一組具體實施例中，基於包覆在微脂體中的實體含量除以未包覆在微脂體中的實體含量與包覆在微脂體中的實體之總和，以計算包覆效率，其係使用各種本領域已知的方法來確定。

弱酸式鹽

術語「弱酸式鹽」係指該弱酸的共軛鹼。如本文所用，弱酸式鹽係指該弱酸的共軛鹼與任何伴隨的相對離子(accompanying counterion)。較佳地，本發明中使用的弱酸式鹽在高濃度下為水溶性的。該相對離子或陽離子實際上應該為脂膜不滲透的(具有滲透係數P小於10^-12至10^-11cm/s)。該相對離子可以是單價或多價的。用於本發明之示例性的弱酸包括：羧酸，如甲酸、醋酸、丙酸、丁酸、戊酸，及其取代的衍生物。用於本發明之示例性陽離子包括：鈉、鉀、銨及鈣。較佳地，使用鈣作為陽離子，而根據本發明選擇前列腺素作為弱酸性劑。

多質子酸

術語「多質子酸」係指弱有機多元酸。用於本發明之示例性的多質子酸包括：檸檬酸、酒石酸、琥珀酸、己二酸，以及烏頭酸，通常濃度為1至20mM。

較佳地，用於本發明之多磷酸為濃度小於3mM的檸檬酸；更佳小於2.5mM；最佳小於2.3mM。於一特定具體實施例中，檸檬酸的濃度為1.5至2.5mM。

弱酸性劑

本文所用之術語「弱酸性劑」係指用於加載到微脂體中並還含有至少一個羧基且為兩親性之化合物。該試劑的pKa值通常小於約5。於一特定具體實施例中，該試劑的pKa為約4.85。除了羧基官能團之外，該試劑還可以含有一個或多個官能團，儘管這種官能團的存在不應該顯著地改變該試劑與其非官能化對應物的酸度。該試劑係指其質子化形式的化合物與其任何鹽類形式。該試劑的鹽類可以伴隨任何醫藥上可接受之抗衡離子。

術語「兩親性」在本文中用於表示具有極性與非極性結構域的化合物，因此具有在合適條件下滲透通常無法滲透之膜的能力。

術語「兩親性」在本文中用於表示具有疏水(非極性)與親水性(極性)基團之分子，且其特徵在於以下任何一種：pKa：其具有pKa值高於3.0，較佳高於3.5，更佳在約3.5及約6.5之間的範圍內；分配係數：在pH為7.0的正辛醇/緩衝液(水相)系統中，其具有logD在約-3及約2.5之間的範圍內。

凍乾餅

術語「凍乾餅」係指含有弱酸性劑之冷凍乾燥產品，其包括所需的特性，包括在回溶時維持原始劑型的特徵，包括溶液性質；以及懸浮液的粒度分佈；以及回溶時的等滲性。

II.用於裝載之微脂體溶液的製備

本發明提供了具有微脂體的微脂體溶液，其具有弱酸式鹽的梯度，用於在整個梯度上裝載一弱酸性劑。製備該微脂體溶液的一般方法係描述如下。

A.微脂體形成

帶有經包載於其水性內部空間之弱酸式鹽且適用於形成本發明之微脂體溶液的微脂體，可透過技術製得。。適用於製備本發明微脂體之方法的實例包括溶劑注射、反相蒸發、超音波處理、微流化、洗滌劑透析、醚注射，以及脫水/再水化。在典型的方法中，將脂質混合物溶解在乙醇中並注入含有弱酸式鹽(如醋酸鈉或醋酸鈣)的水合緩衝液中。

通常，微脂體的膜係由脂質混合物所組成，其中該脂質混合物包括磷脂或至少一種磷脂及中性脂質的混合物，以及親水性聚合物共軛脂質。於一較佳具體實施例中，該脂質混合物係由一或多種磷脂及膽固醇與親水性聚合物共軛脂質所組成，其中親水性聚合物共軛脂質為DSPE-mPEG，其基於該脂質混合物總量的莫耳百分比小於3%。於一組具體實施例中，膽固醇的基於該脂質混合物總量的莫耳百分比為10%至40%。於一組具體實施例中，該磷脂係選自DSPC、DMPC、DPPC，以及DOPC。於另一組具體實施例中，磷脂、膽固醇，以及DSPE-mPEG的含量之莫耳比為3：2：0.045。

適用於本發明之水合緩衝液含有醋酸鈉、醋酸鉀或醋酸鈣。於一組具體實施例中，該水合緩衝液含有醋酸鈉，較佳濃度至少為100mM；通常在100mM至800mM之間；較佳在200mM至800mM之間；最佳在400mM至800mM之間。於另一組具體實施例中，該水合緩衝液含有濃度較佳在200mM至400mM之間的醋酸鈣；更佳為250mM至350mM。通過在4.0至9.0之間，較佳為7.5至8.5之間，最佳為8.2的pH值下加入酸或鹼以調整該水合緩衝液。於一替代的具體實施例中，當該水合緩衝液進一步含有多質子酸(如檸檬酸)時，較佳的pH值調整至6.5，且與未含多質子酸者相比，在體外釋放測定後可相對保持更多其保留的PGE₁。

對於弱酸性劑以及允許在內部及外部隔室之間分佈之弱酸，作為一內部到外部的質子穿梭器，弱酸性劑的保留可能在微脂體的內部空間中的各種組分之間改變。為了調節弱酸性劑的保留，該水合緩衝液係經調整以含有多質子酸。然而，將多質子酸添加到該水合緩衝液中降低了微脂體的水性內部空間的pH值導致包覆效率被不期望地降低。於一較佳具體實施例中，該水合緩衝液含有濃度小於50mM、較佳小於10mM、更佳為0.01mM至5mM，更佳為0.1mM至3mM，最佳為在1.5mM至2.5mM之間的多質子酸。

微脂體的大小可以透過控制用於低壓擠出之膜的孔徑，或在微流化中使用之通道的壓力及數量，或任何其它合適之方法來控制。本發明之微脂體具有約30nm至約200nm的平均直徑，更佳為約50nm至約150nm。

B.建立弱酸式鹽之梯度

於調整微脂體的尺寸(sizing)後，微脂體的外部水合緩衝液係經處理以形成內部具較高濃度梯度的弱酸式鹽(如醋酸鈉)。這可以透過各種技術來完成，例如透過(a)水性介質的稀釋，(b)對水性介質的透析，(c)分子篩色層分析，或(d)高速離心及在一水性介質中重新懸浮離心的微脂體，其中該水性介質適合於生理條件及醫藥施用。

於一般情況下，該水性介質，或者作為外部緩衝液，含有用於保持所需滲透壓的緩衝液及溶質，並將pH值調整在4至7之間，較佳為4至5之間，最佳為5.5。示例性的緩衝液為濃度在5至50mM，較佳為20mM的pH值4至7的組胺酸、MES等。示例性的溶質為強酸的鹽類，以形成鹽水，或單醣或二糖，如蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇、乳糖或麥芽糖。

III.凍乾餅的製備

用於本發明之凍乾餅可透過各種技術來製備。通常，凍乾過程由三個階段組成：冷凍、一次乾燥，以及二次乾燥。凍乾製劑的設計取決於活性醫藥成分(active pharmaceutical ingredient，API)，在本文中係指弱酸性劑，以及預期給藥途徑的要求。於另一具體實施例中，含有弱酸性劑的儲備溶液適用於本發明，由以下組成：一有機溶劑，如叔丁醇(TBA)；一冷凍保護劑；以及該弱酸性劑。對儲備溶液進行凍乾處理以獲得該凍乾餅。示例性的凍乾餅含有1.2%至1.5%範圍內的水含量，且該弱酸性劑與冷凍保護劑的重量比為0.0001：1.0至0.01：1.5，較佳為0.005：1.25，更佳為0.0526：125。於一特定的具體實施例中，該冷凍保護劑為麥芽糖。

IV.製備含有一弱酸性劑的微脂體組合物之方法

透過根據本發明之方法製備包覆該弱酸性劑之親水性聚合物衍生的微脂體。

於一典型的方法中，在一弱酸性劑可轉而被包覆在本發明微脂體內的條件下，將該微脂體溶液與含有該弱酸性劑之凍乾餅接觸，以製備微脂體組合物；其中該條件包括在環境溫度(通常為18℃至30℃)且時間短於20分鐘的狀況下進行。由此獲得含有該弱酸性劑之微脂體，該弱酸性劑係被包覆於該水性內部空間內，而該水性內部空間係透過膜而與該水性介質分隔，且該微脂體係準備用於醫藥或其他應用。

通常，該微脂體組合物係透過將該藥物對脂質以一預定比例而使該微脂體溶液與該凍乾餅接觸而獲得。該藥物對脂質的比例係指凍乾餅中弱酸性劑含量與微脂體溶液中脂質含量的比例。藥物對脂質的示例性莫耳比為0.001：1至0.05：1。通常，PGE₁：脂質的比例範圍為20μg：5μmol至10μg：20μmol。

於一組具體實施例中，該條件包括，但不限於，在環境溫度下足以將弱酸性劑轉而包覆在微脂體內的時間，該時間至少為5分鐘，例如，10分鐘、60分鐘或24小時；較佳至少10分鐘。更佳地，該條件包括在環境溫度，通常為18℃至30℃，下使該弱酸性劑轉而被包覆在該微脂體內。

所得之微脂體組合物的包覆效率至少為85%；且任選的至少為90%、95%，或97%；且較佳為95~99%。

現在將參考以下具體的非限制性實施例更詳細地描述本發明。

實施例1 製備凍乾餅之方法

將冷凍保護劑溶於熱水(50~60℃)中，然後冷卻至40℃以下以形成冷凍保護劑溶液。將前列腺素E₁溶解在叔丁醇(TBA)中(其在40℃下預熱以使該溶劑液化)，然後轉移至冷凍保護劑溶液中並與其混合以形成前列腺素溶液。將該前列腺素溶液進行無菌過濾並裝入6R小瓶中，然後冷凍乾燥以形成含有PGE₁的凍乾餅(此處亦表示為前列地爾(alprostadil)餅)。在具有如下表I中列出的參數之程序下使用擱板式冷凍乾燥機進行凍乾。

實施例2 以各種成分製備前列地爾餅

為了找到合適的製劑以形成本發明之前列地爾餅，提出了使用每小瓶52.6μg的PGE₁於前列地爾餅，以及使用125mg冷凍保護劑於本實施例之製劑。

由於PGE₁在製劑中作為API，因此需要合適的溶劑來溶解不溶於水的PGE₁。PGE₁可溶於叔丁醇(TBA)。選擇TBA溶解PGE₁以形成前列腺素溶液。

PGE₁經脫水形成前列腺素A₁。為了提高PGE₁的儲存壽命，使用凍乾法將水分含量降至非常低的含量以使降解減到最小。候選製劑的篩選係基於40℃加速穩定性試驗的結果。

由於如上所述，冷凍保護劑與PGE₁的含量係固定的，如表II所述進一步調節其他凍乾參數，如含水量、TBA添加量等，並按下列實施例所述進行研究。

實施例2A 前列腺素溶液中含水量之影響

首先，按照TBA的固定百分比，透過使用表III中列出之配方形成前列地爾餅，以研究冷凍乾燥前水所佔百分比之影響。

如表IV所示，所有製劑均滿足在40℃下6週後剩餘90% PGE₁的標準，該剩餘含量隨著前列腺素溶液中水的百分比而降低。顯示透過增加空間間隔(透過增加水的百分比)，減少API與水接觸的機會，可以提高前列地爾餅的穩定性。此外，製劑Pc029與Pc030之間沒有顯著差異，證明隨著空間增加到一定值，API與水之間將以足夠大的空間分隔。為了使凍乾時間最小化，具有最低含水量的配方是適合的候選物。選擇製劑Pc030而非製劑Pc029。

實施例2B 前列腺素溶液中溶劑含量之影響

第二，透過使用表V中列出的配方來形成前列地爾餅，以研究TBA在PGE₁溶液中含量的影響。

如表VI所示，TBA含量的增加降低了PGE₁的降解。此暗示係由冷凍步驟中的結晶變化所引起；與TBA含量較低之組別的類晶體相比，在高TBA含量之組別中觀察到餅的外觀鬆散，這表示在具有不同TBA含量的組別中結晶作用不同。結晶條件的變化影響PGE₁的穩定性，並導致觀察到的結果。

實施例2C 冷凍保護劑含量在前列腺素溶液中之影響

最後，亦透過使用表VII中列出之配方形成該前列地爾餅，以研究如表VII中記載的不同冷凍保護劑之效果。

如表VIII所示，以麥芽糖作為冷凍保護劑的前列地爾餅顯示出最慢的降解速率(Pc036)。另一方面，以蔗糖作為冷凍保護劑的前列地爾餅(Pc035)是所有配方中最差的。這表示冷凍保護劑的種類可以調節前列地爾餅中PGE₁的穩定性，這是由於所有製劑於凍乾過程中晶體結構的變化。

結果

基於上述結果，選擇較高的含水量，較高的TBA含量與麥芽糖作為前列腺素溶液中的冷凍保護劑，以提高凍乾餅的穩定性。

基於40℃加速穩定性試驗的結果進一步評估Pc030的穩定性，在實驗進行6週後僅觀察到4%的降解。配方Pc030被選用是因為其使用乳糖單水合物而PGE₁具有降解速率最低的PGE₁。在以下實施例中選擇乳糖單水合物作為冷凍保護劑。據此，選擇Pc030作為前列地爾餅的合適配方。

實施例3 製備微脂體溶液之一般方法

微脂體與HSPC、膽固醇，以及可選擇的1,2-二硬脂醯-磷脂醯乙醇胺-甲基-聚乙二醇綴合物(DSPE-mPEG)混合。為了形成微脂體顆粒，首先將脂質混合並溶解於乙醇中；然後注入一水合緩衝液，其中水合緩衝液含有pH值高於7的弱酸式鹽，例如，醋酸鈉。由於脂質分子的兩親性質，微脂體粒子自發形成並懸浮於該水合緩衝液中。

在微脂體粒子形成後，透過擠出來操作粒徑。所謂擠出，係使微脂體粒子受力通過聚碳酸酯膜，得到平均直徑在80nm至180nm範圍內的微脂體。多次通過後，微脂體粒徑降至亞微米級；且該微脂體粒子比初始粒子更為穩定。

透過正交流過濾(tangent flow filtration，TFF)的滲濾作用將微脂體懸浮於其中的外部水合緩衝液取代為一外部緩衝液，以形成懸浮該微脂體的水性介質；並且，在此過程中，微脂體內的一些醋酸分子也可穿透微脂體的雙層結構而被移除。這可以在微脂體膜上產生醋酸鹽類/pH梯度；且這種梯度對於PGE₁主動裝載(亦即遠程裝載)是必需的。

據此，製備PGE₁遠程裝載的微脂體溶液。設計以下實驗來研究合適的配方參數、方法參數，以及PGE₁遠程裝載參數，以實現PGE₁的高包覆效率與持續釋放。

透過包含以下步驟的一般方法來確定包覆效率。藉由自填充樹脂管柱分離微脂體及游離形式的PGE₁：首先，製備在Bio-Rad管柱中填充Toyopearl HW-55F樹脂的管柱。將樣品施加到該經調整(conditioned)之管柱中，以一般生理鹽水沖提，並收集微脂體形式之PGE₁的各分段(fraction)，然後以水沖提管柱，收集游離形式之PGE₁的分段。透過HPLC分析微脂體與游離形式PGE1的含量。以微脂體形式之PGE₁與游離形式之PGE₁的總和含量除以微脂體形式PGE₁的含量以計算包覆效率。

透過包含以下步驟的一般方法進行體外釋放測定。將裝載PGE₁的微脂體與醋酸鈉緩衝液或人類血漿(實施例6A)混合，以引發並促進PGE₁從該微脂體中釋放。根據上述記載測定於釋放試驗後的包覆效率，即為所述經保留的PGE₁。

實施例4 微脂體溶液的製備

微脂體溶液係根據實施例3所述之方法製備，包括脂質、水合緩衝液、水性介質，以及PGE₁裝載過程中的其它參數的描述，例如使該微脂體溶液與如先前所述之凍乾餅接觸(例如，前列地爾餅)，或溶液形式的前列地爾(例如PGE₁溶液)；並形成微脂體組合物。包括裝載持續時間、藥物-脂質比以及最終獲得的包覆效率的其它參數顯示於表X中。

實施例5 在不同條件下製備微脂體溶液以改善包覆效率

更高的包覆效率表示游離形式PGE₁的最小化。在PGE₁裝載於最終獲得之微脂體組合物後促進PGE₁的包覆效率是優先要務。透過改變水合緩衝液與水性介質來調整微脂體膜兩側的外部相及內部相，從而形成增強之驅動力以供本實施例的PGE₁裝載。

實施例5A 水合緩衝液的pH值調整

水合緩衝液的pH值決定微脂體的內部pH值。儘管在內部醋酸鹽類穿透出之滲濾處理後，內部pH值可能升高，但水合緩衝液的pH值仍然主要地影響供PGE₁裝載之微脂體跨膜的梯度。

針對內部pH值(受含醋酸的水合緩衝液影響)對包埋效率的影響進行評估並摘要於表XI中。

在相同裝載條件下，即藥物與脂質之間的比例為20μg：10μmol，60℃反應5分鐘，測定包覆效率。

結果顯示，較高的緩衝液pH值具有較好的包覆效率。該結果與遠程裝載理論相關：更大的pH梯度具有較佳的包覆效率。該水合緩衝液的pH值經決定為8.2。

實施例5B 水性介質的pH調整

水性介質的pH值決定微脂體的外部pH值且透過影響微脂體膜跨膜的pH梯度來促進PGE₁裝載。透過將pH調整至所列標準，含濃度20mM之組胺酸的水性介質的pH值的影響係記錄於表XII中。

在以下裝載條件下測定包覆效率：藥物與脂質之比為10μg：5μmol，20℃反應30分鐘。

由於該水性介質的pH值決定了該微脂體膜的跨膜pH值梯度，高於6.0的外部pH值導致包覆效率顯著降低。該水性介質的pH值經決定為5.5。

實施例5C 水合緩衝液的濃度調整

該水合緩衝液中弱酸式鹽的濃度是可能影響包覆效率的另一個因素。

對表XIII中所示的弱酸式鹽的濃度對包覆效率(E.E.)的影響進行評估並摘要於表XIII中。

在以下裝載條件下測定包覆效率：藥物與脂質之比為10μg：5μmol，於25℃下反應30分鐘。

當醋酸鈉的濃度超過400mM時，E.E.達到高原期。較高的醋酸鹽類濃度沒有改變包覆效率。然而，由於低醋酸鹽類濃度顯示出較低的E.E，所以較高的醋酸鹽類濃度對於形成供PGE₁裝載的醋酸鹽類梯度仍然是必需的。

弱酸式鹽的濃度經決定為400mM醋酸鈉，因其產生足夠的PGE₁裝載梯度。

結果

根據實施例5A至5C，使用包覆方法測定水合緩衝液與水性介質的性質。含有pH 8.2的400mM醋酸鈉的水合緩衝液與pH 5.5的含有20mM組胺酸的水性介質展現所欲包覆效率。

實施例6 在不同條件下製備微脂體溶液以改善持續釋放特性

根據本發明之目標微脂體組合物需要持續釋放特性以控制人體內的藥物釋放。因此，透過不僅包覆效率而且透過體外釋放測定以評估以下調整，以選擇所需之配方。

透過前述實施例中所述之方法測定經保留的PGE百分比。

實施例6A 水合緩衝液中陽離子的調整

PGE₁裝載後，在水合緩衝液中弱酸式鹽的陽離子與作為陰離子的PGE₁相互作用。這種相互作用可能會減緩PGE₁的釋放。在水合緩衝液中使用不同的醋酸鹽類作為弱酸式鹽，並透過包覆效率測定及以人類血漿進行體外釋放測定以進行評估。

在以下裝載條件下測定包覆效率：藥物與脂質的比例為20μg：10μmol，60℃下反應5分鐘。透過將分析物與人類血漿以1：1的比例混合進行體外釋放，然後在37℃下作用2小時。

僅有醋酸鈉與醋酸鉀之微脂體在血漿釋放後表現出高的包覆效率與經保留的PGE₁。進一步的研究集中在如表XV中所示的這二種選擇的配方。

在以下裝載條件下測定包覆效率：藥物與脂質的比例為20μg：10μmol，在60℃下反應5分鐘。透過將分析物與人類血漿以1：1的比例混合進行體外釋放，然後在37℃下作用1小時。

雖然醋酸鉀在血漿釋放測定中顯示出所需的釋放曲線，但其初始包覆效率遠小於以醋酸鈉作為弱酸式鹽的組別。因此，在該水合緩衝液中選擇醋酸鈉作為該弱酸式鹽。

實施例6B 在水合緩衝液中加入檸檬酸

根據實施例5，該水合緩衝液經決定為pH 8.2的400mM醋酸鈉。然而，高pH值可能導致脂質不穩定。為了避免脂質不穩定且為了建立較大的醋酸鹽類梯度以供進行裝載，評估如表XVI所示之不同濃度的額外添加之檸檬酸的影響。

在以下裝載條件下測定包覆效率：藥物與脂質的比例為10μg：5μmol，在20℃下反應30分鐘。

結果顯示額外添加的檸檬酸降低了包覆效率。然而，E.E.的降低可能是由於pH值大幅度降低所引起的(其阻礙了PGE₁裝載)。

因此，透過包覆效率(E.E.)測定與體外釋放(IVR)測定進一步評估如表XVII中所示之添加檸檬酸以維持pH值為6.5的效果。

於以下裝載條件下測定包覆效率：藥物與脂質的比例為10μg：5μmol，在20℃下反應30分鐘。IVR以1：1的比例進行，與15mM NaAc及8.1% pH 5.5的蔗糖緩衝液混合，然後於25℃下作用30分鐘。

結果顯示，在該水合緩衝液中額外添加的檸檬酸不僅提高了包覆效率，且在IVR後也保留了更多的PGE₁在微脂體內。據此，該水性介質因此決定為pH 6.5的400mM醋酸鈉，並具有濃度為1.5mM至2mM的檸檬酸。

實施例6C 透過調整藥物與脂質的比例以製備微脂體組合物

分別根據表X製備的微脂體溶液與含有PGE₁的凍乾餅或PGE₁溶液以如下表XVIII(a)所示之藥物對脂質的比例接觸，以形成相應的微脂體組合物。透過將PGE₁粉末溶解在適量的乙醇中製備PGE₁溶液，得到濃度為5mg/mL的PGE₁儲備溶液。為了製備根據本發明之一微脂體組合物，將該微脂體溶液與PGE₁儲備溶液在9%蔗糖溶液中稀釋至一目標濃度；然後在指定條件下作用使PGE₁裝載入微脂體中。

在初始配方中，藥物與脂質之比例預先確定為10μg：5μmol。為了進一步提高微脂體的包覆效率與持續釋放之特性，調整了裝載PGE₁的藥物與脂質的比例，且PL130、PL156以及PL 157的E.E結果如表XVIII(b)所示。

在以下裝載條件下測定包覆效率：於25℃下反應30分鐘。

降低藥物與脂質的比例提高了包覆效率。之後，進一步測試了在25℃反應10分鐘的條件下，藥物與脂質的比例為10μg：10μmol以及10μg：20μmol的微脂體。

在以下裝載條件下測定包覆效率：於25℃下反應10分鐘。IVR以1：1的比例進行，與15mM NaAc及8.1% pH 5.5的蔗糖緩衝液混合，然後在25℃下作用15分鐘。

降低藥物與脂質的比例在IVR後略有增加包覆效率。然而，10μg：20μmol的藥物與脂質比例太低了。因此，決定藥物與脂質的比例為10μg：10μmol。

實施例7 mPEG含量的調製

磷酸膽鹼與膽固醇的含量以3：2的莫耳比固定，因為這種類型的組合物具有最大的脂質凝聚排列。對於產生表面負電荷以避免人體微脂體排出或微脂體聚集的DSPE-mPEG，如表XX所示，改變了PGE₁裝載與IVR。

在以下裝載條件下測定包覆效率：藥物與脂質的比例為10μg：10μmol，在25℃下反應10分鐘。對於IVR測定，在裝載PGE₁(平衡裝載)1小時後，所獲得的微脂體溶液以9：1(v/v)的比例與75mM醋酸鈉釋放緩衝液混合，並在37℃下作用15分鐘。

如表XX及第2圖所示，DSPE-mPEG莫耳比為0.9%至3%之間(亦即，HSPC：膽固醇：DSPE-mPEG=3：2：0.45至3：2：0.15)，作用10分鐘時顯示出最高的包覆效率。此外，在IVR測定後，經保留的PGE₁的含量在這些配方中排名高。確定最終脂質組合物含有HSPC：膽固醇：DSPE-mPEG=3：2：0.45之比例的脂質。

結果

根據實施例6A至6C以及7，微脂體溶液的配方被調整為HSPC：膽固醇：DSPE-mPEG=3：2：0.045的脂質組合物；含有400mM醋酸鈉與2mM檸檬酸之pH6.5的水合緩衝液；藥物與脂質的比例為10μg：10μmol，如表XXI所示。

在環境溫度下，這種配方在短時間(10分鐘)裝載後展現高PGE₁包覆效率(約90%)；且在IVR測定中保留了比其他配方更多的PGE₁。

實施例8 使用血流分析對PGE1配方的功效進行體內評估

將微脂體組合物PL157與PL194的功效透過如下所述之血流研究與經游離藥物(PEG₁-CD)處理的動物進行比較。

血流研究

將Wistar大鼠以異氟烷麻醉並在加熱墊(36.5℃)上保持體溫。當動物被深度麻醉時，在透過靜脈施予3μg/kg PGE₁-CD或微脂體組合物之前5分鐘，透過激光多普勒流量計(MoorVMS LDF1，Moor儀器有限公司)記錄右尾爪數字上的圓弧數字的皮膚微血管血流量，然後連續記錄20分鐘，以監測給予劑量後的反應。透過moorVNS-PCV2.0軟體記錄通量值的原始數據，並導出到Excel文件(Microsoft軟體)進行數據處理。

對血流數據進行標準化，繪製曲線，計算參數BF₀、BF_max，以及AUC%，其中BF₀表示基線的平均血流量；BF_max表示給予劑量後最大血流量；AUC%表示與基線AUC相比，血流量0至20分鐘曲線下面積的百分比。

結果

如表XXII和表XXIII所示，與PGE₁-CD相比，PL194及PL157都引起較高的BF_max/BF₀以及較大的AUC比。

與PL157相比，PL194引起的BF_max/BF₀比值略低，AUC比較小。

前列地爾餅與微脂體溶液的配方如上述進行了研究。反映於穩定性試驗與動物研究，該配方展現了所需性能。對於前列地爾餅，配方Pc030或Pc036顯示出優異的穩定性。對於微脂體溶液，配方PL194在環境溫度條件下的短裝載時間內顯示出高度的包覆效率；還有，經保留的PGE₁比IVR研究中的其他配方多。

如血流結果所示，與常規的前列腺素組合物相較，根據本發明之微脂體組合物確實獲得了改善的功效。

儘管在前面的描述中已經闡述了本發明的許多特徵及優點，以及本發明的結構與特徵之細節，但是本揭露內容僅為說明性的。細節事項可經改變，特別是在本揭露內容的原則至所附之申請專利範圍內所表述之術語的廣泛一般含義所指示的全部範圍內，部分內容之形狀、尺寸及佈置的事項。

Claims

一種傳輸載體，該傳輸載體包含在一水性介質中的一微脂體，其中該微脂體具有一內部空間，且該內部空間：1)為水性，2)係由一脂質混合物組成之膜與該水性介質分隔，其中該脂質混合物含有一種或多種脂質以及基於該脂質混合物總量的0.5%至3%的莫耳百分比之一親水性聚合物共軛脂質；以及3)含有一弱酸式鹽。
如申請專利範圍第1項之傳輸載體，其中該親水性聚合物共軛脂質為聚乙二醇衍生的脂質。
如申請專利範圍第1項之傳輸載體，其中該親水性聚合物共軛脂質為基於該脂質混合物總量的0.5%至1%。
如申請專利範圍第1至3項中任一項之傳輸載體，其中該弱酸式鹽為醋酸鈉、醋酸鉀或醋酸鈣。
如申請專利範圍第4項之傳輸載體，其中該弱酸式鹽的濃度為至少100mM。
如申請專利範圍第4項之傳輸載體，其中該弱酸式鹽的濃度為100mM至800mM之間。
如申請專利範圍第4項之傳輸載體，其中該弱酸式鹽的濃度為200mM至800mM之間。
如申請專利範圍第4項之傳輸載體，其中該弱酸式鹽的濃度為400mM至800mM之間。
如申請專利範圍第1至3項中任一項之傳輸載體，其中該微脂體進一步包含在該水性內部空間中包覆在該微脂體內之多質子酸。
如申請專利範圍第9項之傳輸載體，其中該多質子酸為有機三元酸。
如申請專利範圍第9項之傳輸載體，其中該多質子酸係選自由檸檬酸、琥珀酸、酒石酸，或其組合所組成之群組。
如申請專利範圍第11項之傳輸載體，其中該多質子酸的濃度為小於50mM。
如申請專利範圍第11項之傳輸載體，其中該多質子酸的濃度為小於10mM。
如申請專利範圍第11項之傳輸載體，其中該多質子酸的濃度為0.01mM至5mM之間。
如申請專利範圍第11項之傳輸載體，其中該多質子酸的濃度為0.1mM至3mM之間。
如申請專利範圍第11項之傳輸載體，其中該多質子酸的濃度為1.5mM至2.5mM之間。
一種製備一微脂體組合物之方法，其包含：在一水性介質中，使包含一弱酸式鹽之一微脂體與一弱酸性劑接觸一足以使該弱酸性劑包覆在該微脂體內的時間，該弱酸式鹽包覆在一水性內部空間內，且該水性內部空間係由一脂質混合物組成之膜與該水性介質分隔該弱酸式鹽包覆在一水性內部空間內，且該水性內部空間係由一脂質混合物組成之膜與該水性介質分隔；其中該弱酸式鹽與該弱酸性劑具有一陽離子配對，且該脂質混合物含有一種或多種脂質以及基於該脂質混合物總量的0.5%至3%的莫耳百分比之一親水性聚合物共軛脂質。
如申請專利範圍第17項之方法，其中該親水性聚合物共軛脂質為聚乙二醇衍生的脂質。
如申請專利範圍第17項之方法，其中該親水性聚合物共軛脂質為基於該脂質混合物總量的0.5%至1%。
如申請專利範圍第17至19項中任一項之方法，其中該弱酸式鹽為醋酸鈉、醋酸鉀，或醋酸鈣。
如申請專利範圍第17至19項中任一項之方法，其中該弱酸式鹽的濃度為至少100mM。
如申請專利範圍第17至19項中任一項之方法，其中該弱酸式鹽的濃度為100mM至800mM之間。
如申請專利範圍第17至19項中任一項之方法，其中該弱酸式鹽的濃度為；200mM至800mM之間。
如申請專利範圍第17至19項中任一項之方法，其中該弱酸式鹽的濃度為400mM至800mM之間。
如申請專利範圍第17至19項中任一項之方法，其中該弱酸性劑與該微脂體組合物的脂質含量的莫耳比為至少0.001：1。
如申請專利範圍第17至19項中任一項之方法，其中該弱酸性劑為花生四烯酸代謝物。
如申請專利範圍第26項之方法，其中該弱酸性劑為前列腺素。
如申請專利範圍第17至19項中任一項之方法，其中該微脂體進一步包含在該水性內部空間中包覆在該微脂體內之多質子酸。
如申請專利範圍第28項之方法，其中該多質子酸為有機三元酸。
如申請專利範圍第28項之方法，其中該多質子酸係選自由檸檬酸、琥珀酸、酒石酸或其組合所組成之群組。
如申請專利範圍第30項之方法，其中該多質子酸的濃度為小於50mM。
如申請專利範圍第30項之方法，其中該多質子酸的濃度為小於10mM。
如申請專利範圍第30項之方法，其中該多質子酸的濃度為0.01mM至5mM之間。
如申請專利範圍第30項之方法，其中該多質子酸的濃度為0.1mM至3mM之間。
如申請專利範圍第30項之方法，其中該多質子酸的濃度為1.5mM至2.5mM之間。
如申請專利範圍第17至19項中任一項之方法，其中該在一水性介質中使微脂體與弱酸性劑的接觸係在為18℃至30℃的環境溫度進行。
一種用於製備一微脂體組合物之套組，其包含：一容器，容納含有一弱酸性劑之一凍乾餅；以及另一容器，容納含有在一水性介質中的一微脂體之一微脂體溶液，其中該微脂體包括一包覆在一水性內部空間之弱酸式鹽，該水性內部空間係由一脂質混合物組成之膜與該水性介質分隔，其中該脂質混合物含有一種或多種脂質以及基於該脂質混合物總量的0.5%至3%的莫耳百分比之一親水性聚合物共軛脂質。
如申請專利範圍第37項之套組，其中該親水性聚合物共軛脂質為聚乙二醇衍生的脂質。
如申請專利範圍第37項之套組，其中該親水性聚合物共軛脂質為基於該脂質混合物總量的0.5%至1%。
如申請專利範圍第37至39項中任一項之套組，其中該弱酸式鹽為醋酸鈉、醋酸鉀、或醋酸鈣。
如申請專利範圍第37至39項中任一項之套組，其中該弱酸式鹽的濃度為至少100mM。
如申請專利範圍第37至39項中任一項之套組，其中該弱酸式鹽的濃度為100mM至800mM之間。
如申請專利範圍第37至39項中任一項之套組，其中該弱酸式鹽的濃度為200mM至800mM之間。
如申請專利範圍第37至39項中任一項之套組，其中該弱酸式鹽的濃度為400mM至800mM之間。
如申請專利範圍第37至39項中任一項之套組，其中該弱酸性劑為花生四烯酸代謝物。
如申請專利範圍第45項之套組，其中該弱酸性劑為前列腺素。
如申請專利範圍第37至39項中任一項之套組，其中該微脂體進一步包含在該水性內部空間中包覆在該微脂體內之多質子酸。
如申請專利範圍第47項之套組，其中該多質子酸為有機三元酸。
如申請專利範圍第47項之套組，其中該多質子酸係選自由檸檬酸、琥珀酸、酒石酸或其組合所組成之群組。
如申請專利範圍第49項之套組，其中該多質子酸的濃度為小於50mM。
如申請專利範圍第49項之套組，其中該多質子酸的濃度為小於10mM。
如申請專利範圍第49項之套組，其中該多質子酸的濃度為0.01mM至5mM之間。
如申請專利範圍第49項之套組，其中該多質子酸的濃度為0.1mM至3mM之間。
如申請專利範圍第49項之套組，其中該多質子酸的濃度為 1.5mM至2.5mM之間。
一種微脂體組合物，包含在一水性介質中的一微脂體，其中該微脂體具有一內部空間，以及該內部空間：1)為水性，2)係由一脂質混合物組成之膜與該水性介質分隔，其中該脂質混合物含有一種或多種脂質以及基於該脂質混合物總量的0.5%至3%的莫耳百分比之一親水性聚合物共軛脂質；以及3)含有一弱酸式鹽；以及一弱酸性劑。
如申請專利範圍第55項之微脂體組合物，其中該親水性聚合物共軛脂質為聚乙二醇衍生的脂質。
如申請專利範圍第55項之微脂體組合物，其中該親水性聚合物共軛脂質為基於該脂質混合物總量的0.5%至1%。
如申請專利範圍第55項之微脂體組合物，其中該弱酸式鹽為醋酸鈉、醋酸鉀或醋酸鈣。
如申請專利範圍第55至58項中任一項之微脂體組合物，其中該弱酸式鹽的濃度為至少100mM。
如申請專利範圍第55至58項中任一項之微脂體組合物，其中該弱酸式鹽的濃度為100mM至800mM之間。
如申請專利範圍第55至58項中任一項之微脂體組合物，其中該弱酸式鹽的濃度為200mM至800mM之間。
如申請專利範圍第55至58項中任一項之微脂體組合物，其中該弱酸式鹽的濃度為400mM至800mM之間。
如申請專利範圍第55項之微脂體組合物，其中該微脂體進一步包含在該水性內部空間中包覆在該微脂體內之多質子酸。
如申請專利範圍第63項之微脂體組合物，其中該多質子酸為有機三元酸。
如申請專利範圍第63項之微脂體組合物，其中該多質子酸係選自由檸檬酸、琥珀酸、酒石酸或其組合所組成之群組。
如申請專利範圍第63至65項中任一項之微脂體組合物，其中該多質子酸的濃度為小於50mM。
如申請專利範圍第63至65項中任一項之微脂體組合物，其中該多質子酸的濃度為小於10mM。
如申請專利範圍第63至65項中任一項之微脂體組合物，其中該多質子酸的濃度為0.01mM至5mM之間。
如申請專利範圍第63至65項中任一項之微脂體組合物，其中該多質子酸的濃度為0.1mM至3mM之間。
如申請專利範圍第63至65項中任一項之微脂體組合物，其中該多質子酸的濃度為1.5mM至2.5mM之間。
如申請專利範圍第55至58項中任一項之微脂體組合物，其中該弱酸性劑與該微脂體組合物的脂質含量的莫耳比為至少0.001：1。