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TWI619731B - 具備抗微生物、抗癌及／或促進傷口癒合之活性的胜肽、含此胜肽的醫藥組成物，以及此胜肽的用途 - Google Patents

具備抗微生物、抗癌及／或促進傷口癒合之活性的胜肽、含此胜肽的醫藥組成物，以及此胜肽的用途 Download PDF

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TWI619731B
TWI619731B TW104136447A TW104136447A TWI619731B TW I619731 B TWI619731 B TW I619731B TW 104136447 A TW104136447 A TW 104136447A TW 104136447 A TW104136447 A TW 104136447A TW I619731 B TWI619731 B TW I619731B
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wound healing
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anticancer
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程家維
Jya Wei Cheng
游輝元
Hui Yuan Yu
祝宏倫
Hung Lun Chu
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國立清華大學
National Tsing Hua University
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Abstract

本發明提供一種具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，包括：一α-螺旋(α-helix)胜肽；以及一短胜肽，係由約4至10個帶正電荷之胺基酸所構成，連接於該α-螺旋胜肽之N端，以形成該具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中該具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽的總長為約10至20個胺基酸。

Description

具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的 胜肽、含此胜肽的醫藥組成物，以及此胜肽的用途
本發明係關於一種新穎之胜肽，且特別關於一種同時具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽、含此胜肽之醫藥組成物，以及此胜肽之用途。
陽離子抗微生物胜肽，對於植物、昆蟲與動物的先天性免疫性統的調控是重要的(Zasloff M(2002)Antimicrobial peptides of multicellular organisms.Nature 415：389-395.)，且原先被認為是抗細菌與抗真菌的候選物(Rothstein DM,Spacciapoli P,Tran LT,Xu T,Roberts FD,et al.(2001)Anticandida activity is retained in P-113,a 12-amino-acid fragment of histatin 5.Antimicrob Agents Chemother 45：1367-1373；Yu HY,Huang KC,Yip BS,Tu CH,Chen HL,et al.(2010)Rational design of tryptophan-rich antimicrobial peptides with enhanced antimicrobial activities and specificities.Chembiochem 11：2273-2282.)。陽離子抗微生物胜肽一般以它們的正電荷與兩性特性為特徵，這使它們 能夠與帶負電荷之細菌細胞膜結合，而導致細胞膜破裂，且因此導致細菌死亡(Hancock RE and Sahl HG(2006)Antimicrobial and host-defense peptides as new anti-infective therapeutic strategies.Nat Biotechnol 24：1551-1557.；La Rocca P,Shai Y and Sansom MS(1999)Peptide-bilayer interactions：simulations of dermaseptin B,an antimicrobial peptide.Biophys Chem 76：145-159.)。陽離子抗微生物胜肽的細胞膜裂解特性，使得它們成為克服抗生素抗性問題的潛力治療劑(Yu HY,Huang KC,Yip BS,Tu CH,Chen HL,et al.(2010)Rational design of tryptophan-rich antimicrobial peptides with enhanced antimicrobial activities and specificities.Chembiochem 11：2273-2282.)。
雖然已投入了極大的努力於新治療方式的發展，然而，癌症目前仍維持為主要死亡原因(Siegel R,Ma J,Zou Z and Jemal A(2014)Cancer statistics 2014.CA Cancer J Clin 64：9-29)。而，儘管化學療法對於正常細胞與組織具有副作用，且容易形成多重藥物抗性，但，它們仍然是用於治療在後段與轉移階段中之癌症的主要藥物(Siegel R,Ma J,Zou Z and Jemal A(2014)Cancer statistics 2014.CA Cancer J Clin 64：9-29)。
因此，對於正常細胞具有低毒性的新穎癌症藥物以及可避免多重藥物抗性之新穎機制的模式，可提供抗癌治療的一個新方向。
故，目前亟需一種對於正常細胞具有低毒性且可具有抗微生物與抗癌活性的新穎胜肽藥物。
本發明提供一種具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，包括：一α-螺旋(α-helix)胜肽；以及一短胜肽，係由約4至10個帶正電荷之胺基酸所構成，連接於該α-螺旋胜肽之N端，以形成該具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中該具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽的總長為約10至20個胺基酸。
本發明也提供一種醫藥組成物，包括：前述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽；以及一藥學上可接受之載體或鹽類，其中該醫藥組成物具有抗微生物活性、具有抗癌活性及/或具有促進傷口癒合之活性，且不影響正常細胞。
本發明還提供一種前述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽用於製備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之藥物的用途，其中該藥物具有抗微生物活性、具有抗癌活性及/或具有促進傷口癒合之活性，且不影響正常細胞。
為了讓本發明之上述和其他目的、特徵、和優點能更明顯易懂，下文特舉較佳實施例，並配合所附圖示，作詳細說明如下：
第1圖顯示在不同NaCl之濃度下，安比西林(ampicillin,AP)以及S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1與K6-Nal2-S1胜肽對於大腸桿菌(Escherichia coli)、金黃葡萄球菌(Staphylococcus aureus)與綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)之最小抑制濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)的色彩分級(以灰階顯示)。
第2A圖顯示，經S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1胜肽處理3小時後，PC9與PC9-G細胞的存活率(S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1抵抗PC9與PC9-G細胞株的活性)。
第2B圖顯示，經S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1胜肽處理3小時後，A549與OECM-1細胞的存活率(S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1抵抗A549與OECM-1細胞株的活性)。
第2C圖顯示，經S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1胜肽處理3小時後，SAS與C9細胞的存活率(S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1抵抗SAS與C9細胞株的活性)。
第3A圖顯示，經S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1胜肽處理12小時後，PC9與PC9-G細胞的存活率(S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1抵抗PC9與PC9-G細胞株的活性)。
第3B圖顯示，經S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1胜肽處理12小時後，A549與OECM-1細胞的存活率(S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1抵抗A549與OECM-1細胞株的活性)。
第3C圖顯示，經S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1胜肽處理12小時後，SAS與C9細胞的存活率(S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1抵抗SAS與C9細胞株的活性)。
第4A圖顯示，經S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1胜肽處理24小時後，PC9與PC9-G細胞的存活率(S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1抵抗PC9與PC9-G細胞株的活性)。
第4B圖顯示，經S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1 胜肽處理24小時後，A549與OECM-1細胞的存活率(S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1抵抗A549與OECM-1細胞株的活性)。
第4C圖顯示，經S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1胜肽處理24小時後，SAS與C9細胞的存活率(S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1或K6-Nal2-S1抵抗SAS與C9細胞株的活性)。
第5A圖顯示，S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1與K6-Nal2-S1胜肽對於人類紅血球細胞的溶血性。
第5B圖顯示，S1、Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1與K6-Nal2-S1胜肽對於人類纖維母細胞(HFW)的細胞毒性。
第6A圖顯示，將PC9與HFW細胞經由或未經由12μM FITC-K4R2-Nal2-S1處理5分鐘的代表性相位差影像。
第6B圖顯示，將FITC-結合-K4R2-Nal2-S1胜肽與PC9細胞及HFW細胞交互作用之免疫螢光分析的結果。為了細胞核之偵測，將細胞預先以DAPI染色，接著將細胞以FITC-K4R2-Nal2-S1胜肽(12μM)處理1小時。DAPI與FITC在UV與藍光光源下，分別呈現藍色與綠色訊號。所有比例尺=20μm。
第7圖顯示，對於經活化之caspase 3表現的西方墨點分析，以監測在所指出之時間點上之PC9細胞與HFW細胞中的細胞凋亡(apoptosis)。GAPDH作為一載入的控制組(loading control)。
第8A圖顯示，經皮下注射PC9人類肺癌細胞，並以靜脈注射K4R2Nal2-S1胜肽(右圖)或PBS控制組(左圖)之雄性裸鼠在癌症細胞移植後第46天的背側(5天讓腫瘤生長，然後經過40天處 理，於第46天照相)。
第8B與8C圖顯示，第8A圖中之裸鼠在所指出之監測期間的體重(第8B圖)與腫瘤體積(第8C圖)。
第8D圖顯示，經K4R2Nal2-S1胜肽(上部)或PBS(下部)處理之小鼠之暴露於外的腫瘤(小鼠在癌症細胞植入後第46天被犧牲)。於PBS處理組中發現12個暴露的腫瘤(6隻小鼠x 2側植入)，但在K4R2Nal2-S1胜肽處理組中僅發現7個暴露的腫瘤。
第8E圖顯示，第8D圖中之經K4R2Nal2-S1胜肽處理之小鼠之腫瘤總重與經PBS處理之小鼠之腫瘤總重。
第9圖顯示，將來切除自第5A與5B圖之小鼠的異種移植腫瘤進行蘇木素-伊紅染色(hematoxylin and eosin stain,H&E stain)與對於經裂解PARP之表現的免疫組織化學染色法(immunohistochemistry,IHC)，以監測細胞凋亡。比例尺分別=500μm、100μm與50μm(40X、200X與400X)。
第10A圖顯示，於細胞遷移分析中，於0、12與24小時所觀察之不同測試組別之影像。
第10B圖顯示，於細胞遷移分析中之不同測試組別的修復率。
在本發明一實施態樣中，本發明提供一種新穎之胜肽，其具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性。
上述本發明之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，可包括，但不限於，一α-螺旋(α-helix)胜肽與 一短胜肽，其中上述短胜肽可由約4至10個帶正電荷之胺基酸所構成，且連接於上述α-螺旋胜肽之N端以形成上述本發明之胜肽。
上述本發明之胜肽的總長可為約10至20個胺基酸，例如，10個、11個、12個、13個、14個、15個、16個、17個、18個或19個胺基酸，但不限於此。
構成上述α-螺旋胜肽的胺基酸並無特殊限制，可全部皆為自然胺基酸或全部皆為非自然胺基酸，或者，也可同時包含自然胺基酸與非自然胺基酸，只要這些胺基酸所構成之胜肽可以形成α-螺旋結構即可。換言之，上述α-螺旋胜肽的序列並無特殊限制，只要構成此序列中的胺基酸可以形成α-螺旋結構即可。
在一實施例中，上述α-螺旋胜肽可具有一個或一個以上之非自然胺基酸，但不限於此。上述一個或一個以上非自然胺基酸的各個可獨立地為，例如，萘基丙胺酸(β-naphthylalanine,Nal)、(3-苯并噻吩基)-丙胺酸((benzothien-3-yl)alanine,Bal)、二苯基丙胺酸(diphenylalanine,Dip)、4,4'-聯苯丙胺酸(4,4'-biphen-yl)alanine,Bip)、(9-蒽基)-丙氨酸(anthracen-9-yl)alanine,Ath)或(2,5,7-tri-tert-butyl-indol-3-yl)alanine(Tht)等，但不限於此。在一實施例中，上述一個或一個以上非自然胺基酸可為萘基丙胺酸。
又，在上述α-螺旋胜肽之一個以上之非自然胺基酸可為完全連續排列或部分連續排列。於此處所使用之用語「完全連續排列」意指，在上述α-螺旋胜肽中，任兩個非自然胺基酸之間並不具有任何自然胺基酸。而用語「部分連續排列」意指，在上述α-螺旋胜肽中，對於一部分非自然胺基酸而言，為任兩個非自 然胺基酸之間並不具有任何自然胺基酸，而對於另一部分之非自然胺基酸而言，與各非自然胺基酸直接連接的胺基酸為自然胺基酸。
或者，在上述α-螺旋胜肽之一個以上之非自然胺基酸可為非連續排列。而用語「非連續排列」意指，在上述α-螺旋胜肽中，與各非自然胺基酸直接連接的胺基酸必然為自然胺基酸。
在一實施例中，上述一個以上之非自然胺基酸為完全連續排列。於此實施例中，上述一個以上之非自然胺基酸可為位於此α-螺旋胜肽之N端且與短胜肽直接連接，或者也可位於此α-螺旋胜肽之C端，又，或者可位於此α-螺旋胜肽的中間區域。
在一特定實施例中，上述一個以上之非自然胺基酸為完全連續排列，且位於上述α-螺旋胜肽之N端而與短胜肽直接連接。於此特定實施例中，上述α-螺旋胜肽具有兩個非自然胺基酸，又，兩個非自然胺基酸可皆為萘基丙胺酸。
在另一特定實施例中，α-螺旋胜肽的序列可包括序列辨識號：1，例如，α-螺旋胜肽的序列可由序列辨識號：1之序列所構成，但不限於此。
再者，於本發明之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽中，構成上述短胜肽之帶正電荷之胺基酸並無特別限制，只要是帶有正電知胺基酸即可。短胜肽之各個帶正電荷之胺基酸可獨立地為，例如，離胺酸(lysine)、精胺酸(arginine)或組胺酸(histidine)等，但不限於此。
在一實施例中，於本發明具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽中之上述短胜肽的長度可為六個胺基 酸。於此實施例中，構成上述短胜肽之六個帶正電胺基酸可皆為離胺酸。或者，於此實施例中，構成上述短胜肽之六個帶正電胺基酸可為4個離胺酸與2個精胺酸之組合。又，於一特定實施例中，構成上述短胜肽之六個帶正電胺基酸為4個離胺酸與2個精胺酸之組合，且從上述短胜肽之N端至C端，這些帶正電荷之胺基酸依序為4個離胺酸與2個精胺酸。
此外，本發明之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽之N端胺基酸可被乙醯化。或者，本發明之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽之C端胺基酸可被醯胺化。又，或者，本發明之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽之N端胺基酸與C端胺基酸，可分別被乙醯化與醯胺化。
在一實施例中，本發明之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽的序列可包括，序列辨識號：2或序列辨識號：3之序列，但不限於此。在一特定實施例中，本發明之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽的序列係由序列辨識號：2之序列所構成。又，在另一特定實施例中，本發明之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽的序列係由序列辨識號：3之序列所構成。
在本發明之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽的序列係由序列辨識號：2之序列所構成的特定實施例中，序列辨識號：2之序列的N端胺基酸可進一步被乙醯化。或者，於此特定實施例中，序列辨識號：2之序列的C端胺基酸可進一步被醯胺化。又，或者，於此特定實施例中，序列辨識號：2 之序列的N端胺基酸與C端胺基酸，可進一步分別被乙醯化與醯胺化。
相似地，在本發明之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽的序列係由序列辨識號：3之序列所構成的特定實施例中，序列辨識號：3之序列的N端胺基酸可進一步被乙醯化，或者，序列辨識號：3之序列的C端胺基酸可進一步被醯胺化，又，或者，序列辨識號：3之序列的N端胺基酸與C端胺基酸，可進一步分別被乙醯化與醯胺化。
本發明之上述包括一α-螺旋胜肽與一短胜肽之新穎胜肽可具有下述功效，但不限於此。
本發明之上述新穎胜肽具有抗微生物活性。於本發明中所述之「抗微生物活性」係指胜肽可改變目標微生物的功能或代謝，例如，影響複製、生長、毒素的產生、生存等。在一實施例中，抗微生物活性係指抑制微生物的生長。又，在一特定實施例中，抗微生物活性係指本發明胜肽可毒殺至少一種微生物。
本發明中所述之微生物的例子可包括，細菌、真菌、病毒、原生動物等，特別是，具有脂質雙層膜之細胞或結構的微生物，但不限於此。
上述細菌可包括一革蘭氏陽性細菌及/或一革蘭氏陰性細菌，但不限於此。革蘭氏陽性細菌的例子包括金黃葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)、A型鏈球菌(Group A streptococcus)、化膿性鏈球菌(Streptococcus pyogenes)、B型革蘭氏陽性鏈球菌(Group B gram-positive streptococcus)、單 核細胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)等，但不限於此。而，上述革蘭氏陰性細菌的例子則可包括，但不限於大腸桿菌(Escherichia coli)、綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)、沙門氏菌(Salmonella)、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenza)、霍亂弧菌(Vibrio cholera)、副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori)等。
上述真菌包括，酵母菌，例如，白色念珠菌(Candida albicans)。而上述病毒可包括，但不限於麻疹病毒(Measles virus)、皰疹病毒(herpes simplex virus,HSV)(例如，皰疹病毒-1(HSV-1)、皰疹病毒-2(HSV-2))、人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)、C型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)、水皰性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)、绵羊髓鞘脫落病毒(visna virus)、巨細胞病毒(cytomegalovirus,CMV)。此外，上述原生動物可包括賈第鞭毛蟲(Giardia)，但不限於此。
又，本發明上述新穎胜肽具有抗癌活性，且不影響正常細胞。換言之，本發明上述新穎胜肽對於癌細胞具有高度選擇性。
於本發明中所述之「抗癌活性」係指胜肽可改變目標癌細胞的功能或代謝，例如，影響複製、生長、生存等，但不限於此。在一實施例中，抗癌活性係指抑制癌細胞的生長。又，在一特定實施例中，抗癌活性係指本發明胜肽可毒殺至少一種癌細胞。
而，上述癌細胞並無特別限制，例如，可為肺癌細胞、口腔癌細胞、前列腺癌、乳癌、肝癌、胰臟癌等，但不限 於此。上述肺癌細胞包括肺腺癌細胞，但不限於此。而上述口腔癌細胞的例子，則可包括，但不限於，口腔鱗狀細胞癌(oral squamous-cell carcinoma,OSCC)細胞。
此外，本發明上述新穎胜肽還進一步具有殺死對抗癌藥物具有抗性之癌細胞的能力。在一實施例中，本發明上述新穎胜肽具有殺死對艾瑞莎(gefitinib)具有抗性之肺腺癌細胞的能力。
於本發明中所述之「傷口癒合」可為連續、動態、複雜性生理過程，其可包括，但不限於，細胞增生、細胞遷移等，。於一實施例中，於本發明中所述之「促進傷口癒合」，也可意指「促進細胞增生」或「促進細胞遷移」，但不限於此。
本發明之新穎胜肽，視需要而定，可單純作為抗微生物胜肽使用，也可單純作為抗癌胜肽使用，也可單純作為促進傷口癒合之胜肽使用，或者，也可同時作為抗微生物、抗癌與促進傷口癒合之胜肽來使用，並無特別限制。
在本發明另一實施態樣中，本發明提供一種醫藥組成物，其可包括任何前述本發明之新穎胜肽與一藥學上可接受之載體或鹽類。
前述本發明之種醫藥組成物具有抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合而不影響正常細胞之能力。
可以本發明之醫藥組成物來抵抗的微生物的例子可包括，細菌、真菌、病毒、原生動物等，特別是，具有脂質雙層膜之細胞或結構的微生物，但不限於此。
而上述細菌可包括一革蘭氏陽性細菌及/或一革蘭氏 陰性細菌，但不限於此。革蘭氏陽性細菌可例如，金黃葡萄球菌、表皮葡萄球菌、無乳鏈球菌、A型鏈球菌、化膿性鏈球菌、B型革蘭氏陽性鏈球菌、單核細胞增生李斯特氏菌等，但不限於此。而，上述革蘭氏陰性細菌的例子則可包括，但不限於，大腸桿菌、綠膿桿菌、沙門氏菌、流感嗜血桿菌、霍亂弧菌、副溶血性弧菌、幽門螺旋桿菌等。
上述真菌包括，酵母菌，例如，白色念珠菌。而上述病毒可包括，但不限於麻疹病毒、皰疹病毒(例如，皰疹病毒-1、皰疹病毒-2))、人類免疫缺陷病毒、C型肝炎病毒、水皰性口炎病毒、绵羊髓鞘脫落病毒、巨細胞病毒。再者，上述原生動物可包括，但不限於，賈第鞭毛蟲等。
再者，上述癌細胞可包括，但不限於肺癌細胞、口腔癌細胞、前列腺癌、乳癌、肝癌、胰臟癌等。肺癌細胞包括肺腺癌細胞，但不限於此。口腔癌細胞的例子則可包括，口腔鱗狀細胞癌細胞，但不限於此。
又，本發明上述醫藥組成物還進一步具有殺死對抗癌藥物具有抗性之癌細胞的能力。在一實施例中，本發明上述醫藥組成物具有殺死對艾瑞莎具有抗性之肺腺癌細胞的能力。
於本發明之醫藥組成物之促進傷口癒合的功效，也可意指「促進細胞增生」、「促進細胞遷移」等功效，但不限於此。
於前述本發明之醫藥組成物中，上述藥學上可接受之載體可包括，但不限於溶劑、分散媒(dispersion medium)、套膜(coating)、抗菌與抗真菌試劑與一等滲透壓與吸收延遲(absorption delaying)試劑等與藥學投予相容者。對於不同的給藥 方式，可利用一般方法將醫藥組合物配製成劑型(dosage form)。
又，上述藥學上可接受之鹽類可包括，但不限於鹽類包括無機陽離子，例如，鹼金屬鹽類，如鈉、鉀或胺鹽，鹼土金族鹽類，如鎂、鈣鹽，含二價或四價陽離子之鹽類，如鋅、鋁或鋯鹽。此外，也可是為有機鹽類，如二環己胺鹽類、甲基-D-葡糖胺，胺基酸鹽類，如精胺酸、離胺酸、組織胺酸、麩胺酸醯胺。
本發明所製備出藥物給藥可以口服、非口服、經由吸入噴霧(inhalation spray)或藉由植入貯存器(implanted reservoir)的方式。非口服可包括皮下(subcutaneous)、皮內(intracutaneous)、靜脈內(intravenous)、肌肉內(intramuscular)、關節內(intraarticular)、動脈(intraarterial)、滑囊(腔)內(intrasynovial)、胸骨內(intrasternal)、蜘蛛膜下腔(intrathecal)、疾病部位內(intralesional)注射以及灌注技術。
口服成分的形式可包括，但不限定於，藥錠、膠囊、乳劑(emulsions)、水性懸浮液(aqueous suspensions)、分散液(dispersions)與溶液。
本發明之醫藥組合物可投予至植物或動物等。上述可包括魚類、禽類、哺乳動物等，但不限於此。哺乳動物的例子可包括，但不限於，貓、狗、牛、馬、豬、人類等。在一實施例中，醫藥組合物可投予至人類。
在本發明又另一實施態樣中，本發明提供一種任何前述本發明之新穎胜肽用於製備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之藥物的用途。
實施例
A. 材料與方法
1. 倫理聲明
人類靜脈血液收集自三位健康的自願者，具備其事先書面通知同意書，以及經國立台大醫院新竹分院之人體試驗委員會所同意。
所有動物實驗為根據國立清華大學實驗動物照護及使用委員會(National Tsing Hua University Institutional Animal Care)(許可號：10260)的動物使用方針來執行。所有裸鼠於CO2下被犧牲，而所有努力係為了使動物痛苦最小化。
2. 胜肽製備
合成所設計之胜肽。胜肽的身分(identity)為藉由電噴灑質譜儀(electrospray mass spectroscopy)來確認，而純度(>95%)則由HPLC來評估。胜肽濃度則藉由使用紫外光/可見光光譜儀(spectrophotometer)於280nm來確認。緩衝溶液則以二次玻璃蒸餾水來配製。
3. 細菌培養
大腸桿菌(Escherichia coli)菌株(ATCC 25922)、金黃葡萄菌(Staphylococcus aureus)subsp菌株(ATCC 25923,methicillin-resistant)與綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)Migula菌株(ATCC 27853，安比西林抗性)為用於測試胜肽的抗菌活性。將細菌培養於經滅菌之米勒亨頓(Mueller-Hinton,MH)培養液於200rpm且於37℃，8小時。
於培養8小時之後，藉由以紫外光/可見光光譜儀來測 量於600nm之光密度的吸收，以確認接種體(inoculums)的濃度(OD 600=1，約等於108個CFU/mL)。
4.抗微生物活性
藉由國家臨床檢驗室標準委員會(National Committee for Clinical Laboratory Standards)的標準培養基微量稀釋法(standard broth microdilution method)以LYM培養基(broth)來測定抗菌活性。LYM培養基包含5.4mM KCl、5.6mM Na2HPO4,0.5mM MgSO4與1.0mM檸檬酸鈉(sodium citrate)。此外，每公升之培養基添加0.4mg之ZnCl2、2.0mg之FeCl3．6H2O、0.1mg之CuSO4．5H2O、0.1mg之MnSO4．H2O、0.1mg之Na2B4O7．10H2O、700mg之無色胺酸(tryptophan)的胺基酸混合物(Clontech)與20mg之L-色胺酸。以終濃度2%來添加一維他命混合物(100X,Sigma)與葡萄糖。
製備1μl胜肽溶液(以連續稀釋(serial dilution)，範圍從5000μg/ml至78μg/ml)並於聚丙烯(polypropylene)96-孔盤中與99μl接種體(5 x 105CFU/ml)混合。藉由ELISA plate reader(Thermo Max,Molecular Devices,Sunnyvale,CA)於OD 600nm測量濁度(turbidity)。將沒有胜肽之培養基與接種體懸浮液，分別做為負控制組與正控制組。最低抑制濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)值為並無明顯生長(等於或小於90%)之胜肽的最低濃度。藉由使用TreeView Program(Arnusch CJ,Ulm H,Josten M,Shadkchan Y,Osherov N,et al.(2012)Ultrashort Peptide Bioconjugates Are Exclusively Antifungal Agents and Synergize with Cyclodextrin and Amphotericin B.Antimcrob Agents Chemother 56：1-9.；Eisen MB,Spellman PT,Brown PO and Botstein D(1998)Cluster analysis and display of genome-wide expression patterns.Proc Natl Acad Sci 95：14863-14868.)來將最低抑制濃度轉換為色彩分級(color scale)並顯示。將所有胜肽以三重複來進行測試。
5. 溶血活性(hemolytic activity)
藉由靜脈血液收集試管(venous blood collection tube)(BD Vacutainer,REF 367525)來收集人類靜脈血液。經由PBS緩衝溶液清洗以及於800g離心5分鐘來移除血清。重複上述程序至少三次以完全移除血清。
將50μl之胜肽(以連續稀釋，範圍從1.6mM至3.1μM)與50μl之10%人類紅血球(hRBC)混合，並培養於37℃，1小時。在以800g離心5分鐘之後收集上清液。藉由測量於405nm的吸收來確認釋放自人類紅血球之血紅素的量。以10%人類紅血球未以胜肽處理以及以1% Triton X-100處理，來分別代表負控制組以及正控制組。
6. 細胞培養
將人類肺癌細胞株PC9與A549，以及口腔鱗狀細胞癌細胞株OECM-1培養於添加10%胎牛血清(fetal bovine serum)與抗生素的RPMI培養基中。將人類舌癌細胞株SAS、口腔癌細胞株C9與人類二倍體纖維原細胞株(human diploid fibroblast)HFW培養於添加10%胎牛血清與抗生素的DMEM培養基中。將細胞培養於含5% CO2在37℃之一潮濕培養器中。
PC9與抗艾瑞莎(gefitinib)之PC9(PC9-G)細胞株為獲 自國立清華大學生物科技研究所，周裕珽教授。PC9-G為產生自將PC9細胞株以艾瑞莎(500nM)培養60天。
7. 細胞毒性
使用MTT分析來確認in vitro細胞毒性。將所有癌症細胞株以5000個細胞/100μl/孔之濃度接種於96-孔盤中，並培養24小時。將HFW細胞以8000個細胞/100μl/孔之濃度來接種。
在移除培養基之後，將包含胜肽(範圍從50μM至3.13μM，HFW細胞以75μM與100μM胜肽另外處理)之100μl之新鮮培養基添加至孔洞中。於3、12或24小時培養後，以含有MTT(0.5mg/ml)之新鮮培養基取代並培養3小時。在移除培養基/MTT之後，添加DMSO至100μl以溶解甲瓚(formazan)結晶。藉由使用多重標記為盤分析儀(Multi-labeled Microplate Reader)(VICTOR3)來測量於540nm之吸收以計算細胞存活率。對癌細胞而言，與H2O2(aq)混合之培養基為正控制組(細胞全死)，而僅有培養基為負控制組(細胞全活)；對正常細胞而言，僅有培養基為正控制組(細胞全活)，而與H2O2(aq)混合之培養基為負控制組(細胞全死)。
8. 細胞存活影像
將PC9與HFW細胞(~105個細胞)預先接種於6-cm聚苯乙烯(polystyrene)盤達24小時。以終濃度10μg/ml之4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)來標記細胞核。在10分鐘培養之後，以PBS來清洗細胞。以12μM之終濃度來將FITC-K4R2Nal2S1-NH2添加至培養盤。在於37℃培養5、10、20分鐘或1小時之後，將細胞以PBS清洗。使用倒立螢光顯微鏡 (Inverted Fluorescent Microscope Zeiss/Observer.Z1)來觀察FITC-K4R2Nal2S1-NH2在PC9細胞與HFW細胞中的影像。
9. 西方墨點法(Western blotting)
將PC9細胞接種於10-cm聚苯乙烯盤達48小時。將約70%滿的細胞以12μM K4R2Nal2S1處理10分鐘、1小時或24小時。以無經胜肽之RPMI培養基處理24小時者做為負控制組。
藉由200μl RIPA與蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)混合緩衝溶液來收集細胞。在超音波震盪與於4℃以13000rpm離心10分鐘後，收集上清液(細胞分解物)。以Bradford試劑來測定細胞萃取物之蛋白質濃度。將等量之經煮沸的細胞分解物(總量50μg)以10%丙烯醯胺膠體(acrylamide gel)來分離。於電轉漬系統(electro-blot system)，以300V、350A與80分鐘來將膠體轉移至PVDF膜。
於室溫將膜培養於阻礙緩衝溶液(blocking buffer)(5%脫脂乳，TBST緩衝溶液)中1小時，並於TBST緩衝溶液中清洗兩次。將經阻礙之膜以Caspase-3抗體(EPITOMICS,clone ID：E83-77)於4℃隔夜培養、清洗五次，且之後於室溫培養於二次抗體中(HRP,GeneTex catalogue number：GTX21311-01)，達1小時。藉由增強化學發光(enhanced chemiluminescence,ECL)以使訊號顯像，並藉由一偵測系統(ImageQuant LAS 4000 mini)來記錄。
10. 小鼠與病理研究
12隻雄性裸鼠(BALB/cAnN.Cg-Foxn1nu/CrlNarl)為購自國家實驗動物中心(台灣)。
將在Matrigel(Corning)中之100μl人類肺癌細胞PC9 (3 x 106個細胞)皮下注射至5週大之雄性裸鼠的背側。每隻小鼠被接種於其背部的兩側(Taguchi F,Koh Y,Koizumi F,Tamura T,Saijo N,et al.(2004)Anticancer effects of ZD6474,a VEGF receptor tyrosine kinase inhibitor,in gefitinib("Iressa")-sensitiveandresistant xenograft models.Cancer Sci 95：984-989.)。於植入(癌症大小>95mm3)5天後，將12隻小鼠隨機分派成兩組。一組為經由一週三次尾靜脈注射(tail vein injection)來接受K4R2Nal2S1胜肽(5mg/Kg，溶解於100μl PBS緩衝溶液中)，而另一組注入PBS為控制組。
體重與癌症大小為一週測量三次。經由寬度2×長度×0.52的公式來計算癌症體積。低於100%之處理前體積的癌症體積被定義為「癌症縮小」(Taguchi F,Koh Y,Koizumi F,Tamura T,Saijo N,et al.(2004)Anticancer effects of ZD6474,a VEGF receptor tyrosine kinase inhibitor,in gefitinib("Iressa")-sensitive and resistant xenograft models.Cancer Sci 95：984-989.)。又，藉由解剖小鼠，來確認「癌症縮小」。
在經處理40天後，將小鼠犧牲，並將腫瘤移出、照相並且秤重。所有動物實驗為根據國立清華大學實驗動物照護及使用委員會(National Tsing Hua University Institutional Animal Care)的動物使用方針來執行，並經動物照護委員會(Animal Care Committee)同意。
將固態癌症固定於4%甲醛緩衝溶液。將石蠟包埋組織(paraffin-embedded tissues)裁剪成2μm-後之切片，並於Ultraclear Buffer(J.T.Baker)與梯度乙醇(graded ethanol)中去石 蠟。藉由蘇木素-伊紅染色(hematoxylin and eosin stain,H&E stain)之切片來觀察癌症的形態學。此外，將切片以抗-經裂解-PARP(1：100)抗體(Cell Signaling,clone number：D65E10)來進行免疫染色(immunostain)。
使用光顯微鏡(Eclipse E400,Nikon)偕同數位顯微相機(AxioCam ICc 5,ZEISS)來捕捉影像於40X、200X與400X視野。
B. 結果
1. 胜肽設計
先前，發明人已發展藉由在短的抗微生物胜肽之末端添加萘基丙胺酸(β-naphthylalanine,Nal)來增加之其鹽類耐受性與血清穩定度的策略(Chu HL,Yu HY,Yip BS,Chih YH,Liang CW,et al.(2013)Boosting salt resistance of short antimicrobial peptides.Antimicrob Agents Chemother 57：4050-4052.)。此策略已被成功地應用至S1胜肽(序列辨識號：4)與超短胜肽KWWK(序列辨識號：5)。
然而，具有萘基丙胺酸末端標誌的胜肽，也被證實了具有較高的細胞分解活性(cell lytic activity)(細胞毒性)。(Chu HL,Yu HY,Yip BS,Chih YH,Liang CW,et al.(2013)Boosting salt resistance of short antimicrobial peptides.Antimicrob Agents Chemother 57：4050-4052.)。此問題可藉由將帶正電胺基酸添加至抗微生物胜肽之N端及/或C端來抵銷(Yin LM,Edwards MA,Li J,Yip CM and Deber CM(2012)Roles of Hydrophobicity and Charge Distribution of Cationic Antimicrobial Peptides in Peptide-Membrane Interactions.J Biol Chem 287：7738-7745.)。
於此設計並合成Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1與K6-Nal2-S1胜肽，並與它們的抗微生物活性與抗癌活性以及它們的細胞毒性，與其起源胜肽S1進行比較。將S1、Nal2S1、K4R2-Nal2-S1與K6-Nal2-S1胜肽之序列與分子量列於下方表1中。
2.抗微生物活性
於各種鹽類條件下來測試S1胜肽與其類似物抵抗革蘭氏陽性與革蘭氏陰性細菌的活性。
分析前述胜肽的最小抑制濃度，結果如第1圖所示。第1圖顯示，在LYM培養基條件下，Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1與K6-Nal2-S1三個胜肽皆對於抵抗細菌非常有效。
Nal2-S1與K4R2-Nal2-S1胜肽顯示在高鹽條件下具有可期望的活性。然而，K6-Nal2-S1胜肽的活性則由於100或200mM NaCl的添加而被減弱。
3. 細胞毒性
S1肚肽及其類似物，Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1與K6-Nal2-S1三個胜肽對於人類肺癌細胞(即，PC9、PC9-G與A549)、人類口腔癌細胞(即，OECM-1、SAS與C9)以及人類纖維母細胞(HFW)的3小時、12小時與24小時細胞毒性，經由MTT分析來進行評估。
上述胜肽對於各種癌細胞的3小時細胞毒性分別顯示於第2A-2C圖，上述胜肽對於各種癌細胞的12小時細胞毒性分別顯示於第3A-3C圖，而上述胜肽對於各種癌細胞的24小時細胞毒性分別顯示於第4A-4C圖。
結果顯示，於將各種癌細胞以胜肽處理24小時之後，包埋有萘基丙胺酸(Nal)之三個胜肽，Nal2-S1、K4R2-Nal2-S1與K6-Nal2-S1，皆具有強效之抵抗不同癌細胞的抗癌活性(參見第4A-4C圖)。
相似的結果也可於較早的時間點觀察到(即，3小時與12小時，分別參見第2A-2C圖以及第3A-3C圖)。
使用人類紅血球細胞(hRBCs)與人類纖維母細胞(HFW)來研究這些胜肽的選擇性。結果如第5A與5B圖所示。
所有胜肽對於人類紅血球細胞的分解活性。在37℃，1小時培養下測試，並由最低溶血濃度(minimal hemolytic concentration)來計算。
Nal2-S1胜肽於25μM之胜肽濃度顯示10%溶血活性。令人驚訝地，K4R2-Nal2-S1與K6-Nal2-S1胜肽甚至在濃度800μM也並未被發現溶血活性。而，這些胜肽對於人類纖維母細胞的細胞毒性，則被發現為S1胜肽<K4R2-Nal2-S1胜肽<K6-Nal2-S1胜肽<Nal2-S1胜肽。
由於K4R2-Nal2-S1胜肽顯現較佳之鹽類耐受性，以及相較於Nal2-S1與K6-Nal2-S1胜肽，對於人類紅血球細胞與人類纖維母細胞毒性較低，因此選擇K4R2-Nal2-S1胜肽來研究其在PC9癌症細胞株與異種移植動物模型(xenograft animal model)中的抗癌活性。
4. In vitro抗癌機制
為了研究K4R2Nal2-S1胜肽對於人類癌症細胞株(PC9)與人類纖維母細胞(HFW)的作用模式，將細胞以FITC-標記-K4R2-Nal2-S1進行處理。細胞核則被以DAPI來進行標記，且經由UV激發光來觀察藍色訊號。FITC-標記-K4R2-Nal2-S1胜肽在細胞膜上之螢光分佈則以倒立螢光顯微鏡來顯像。
相位差顯微鏡(phase-contrast microscopy)顯示K4R2-Nal2-S1胜肽處理，並未在人類纖維母細胞中，而是在PC9中誘導細胞膨大(參見第6A圖)。此外，免疫螢光分析顯示，FITC-標記-K4R2-Nal2-S1胜肽的處理，在PC9細胞中導致形成小色斑於細胞膜上，但並未在人類纖維母細胞中導致形成小色斑於細胞膜上(參見第6B圖)。由此可知，於癌細胞中，K4R2-Nal2-S1與細胞膜結合且誘導細胞死亡。
免疫墨點指出的結果，K4R2-Nal2-S1胜肽的處理， 是在PC9細胞中而並人類纖維母細胞中非活化了caspase 3，建議了K4R2-Nal2-S1胜肽所媒介的細胞死亡，涉及了細胞凋亡(apoptosis)(參見第7圖)。
上述結果指出，K4R2-Nal2-S1肚肽優先與癌細胞結合，且導致細胞凋亡。
5. 於異種移植動物模型中抑制肺癌細胞生長
為了評估in vivo K4R2-Nal2-S1胜肽之抗癌功效，將PC9細胞皮下植入裸鼠中(參見第8A圖)，且接著經由靜脈途徑，以5mg/kg之劑量，每週三次，將K4R2-Nal2-S1胜肽注入裸鼠(參見第8B與8C圖)。
在投予期間，並未在K4R2Nal2-S1胜肽處理組中發現到體重減少(參見第8B)；然而，在經K4R2-Nal2-S1胜肽處理隻小鼠中，觀察到腫瘤生長方面的顯著抑制(參見第8C圖)。在注射40天後，K4R2-Nal2-S1胜肽處理也減少了所得到之腫瘤的體積與重量(參見第8D與8E圖)。
上述結果清楚顯示K4R2-Nal2-S1胜肽處理減弱了異種移植腫瘤的生長。
為了檢驗細胞壞死(necrosis)與細胞凋亡在K4R2Nal2-S1胜肽媒介之抗癌作用中的關聯性，將在異種移植小鼠模型中產生的肺腫瘤切除，並且以蘇木素-伊紅(H&E)染色與對於為細胞凋亡標記之經裂解PARP的免疫組織化學染色法(immunohistochemistry,IHC)進行分析。
蘇木素-伊紅(H&E)染色顯示了大範圍的細胞壞死區域於經K4R2-Nal2-S1胜肽處理的癌症中，但並未顯示於以PBS處 理之癌症中(第9圖)。免疫組織化學染色則指出，在K4R2-Nal2-S1胜肽處理下，癌症中緊鄰細胞壞死區域之經裂解PARP的表現增加。這些結果支持了K4R2Nal2-S1胜肽處理，抑制腫瘤生長的見解。
6.細胞遷移(cell migration)分析(in vitro傷口癒合分析)
將懸浮於添加10%胎牛血清之DMEM培養基中的HaCaT細胞(40,000)接種於一培養插件(culture insert)(ibidi,Germany)的各側。將插件置於24孔盤中。在於37℃與5% CO2隔夜培養之後，移除插件，並加入添加有不同濃度之胜肽的1ml無血清DMEM。不含有胜肽之培養基與含有100ng/ml表皮生長因子(epidermal growth factor,EGF)之培養基，分別為負控制組與正控制組。藉由使用倒立螢光顯微鏡(Zeiss/Observer.Z1)(10X)，於0、12與24小時，觀察受損區域之影像(injury area)。又，傷口面積(wound area)藉由Adobe Photoshop來評估。然後，計算修復率(repairing rate)：修復率=(面積 t0 -面積 t12,24 )/面積 t0 ，其中t為時間。
第10A圖顯示，於細胞遷移分析中於0、12與24小時所觀察之不同測試組別之影像。而，第10B圖顯示，於細胞遷移分析中之不同測試組別之傷口修復率。
根據第10A圖與第10B圖可以清楚得知，不同濃度之K4R2-Nal2-S1胜肽，相較於負控制組，皆具有較佳之傷口修復能力。換言之，K4R2-Nal2-S1胜肽具備促進傷口癒合之活性。
雖然本發明已以較佳實施例揭露如上，然其並非用 以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作些許之更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
<110> 國立清華大學
<120> 具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽、含此胜肽的醫藥組成物，以及此胜肽的用途
<160> 5
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成胜肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(2)
<223> Xaa為萘基丙胺酸(β-naphthylalanine)
<400> 1
<210> 2
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成胜肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(8)
<223> Xaa為萘基丙胺酸(β-naphthylalanine)
<400> 2
<210> 3
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成肽肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(8)
<223> Xaa為萘基丙胺酸(β-naphthylalanine)
<400> 3
<210> 4
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成胜肽
<400> 4
<210> 5
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 化學合成胜肽
<400> 5

Claims (28)

  1. 一種具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，包括：一α-螺旋(α-helix)胜肽；以及一短胜肽，係由6個帶正電荷之胺基酸所構成，連接於該α-螺旋胜肽之N端，以形成該具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中從該短胜肽之N端至C端，該些帶正電荷之胺基酸依序為4個離胺酸與2個精胺酸，其中該具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽的總長為約10至20個胺基酸。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中該α-螺旋胜肽具有一個或一個以上之非自然胺基酸。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中該一個或一個以上非自然胺基酸的各個為獨立地擇自由下列所組成之群組：萘基丙胺酸(β-naphthylalanine,Nal)、(3-苯并噻吩基)-丙胺酸((benzothien-3-yl)alanine,Bal)、二苯基丙胺酸(diphenylalanine,Dip)、(4,4'-biphen-yl)alanine(Bip)、(anthracen-9-yl)alanine(Ath)與(2,5,7-tri-tert-butyl-indol-3-yl)alanine(Tht)。
  4. 如申請專利範圍第2項所述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中該一個或一個以上非自然胺基酸為萘基丙胺酸。
  5. 如申請專利範圍第2項所述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中該一個以上之非自然胺基酸為完全連續排列、部分連續排列或非連續排列。
  6. 如申請專利範圍第2項所述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中該一個以上之非自然胺基酸為完全連續排列。
  7. 如申請專利範圍第6項所述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中該一個以上之非自然胺基酸為位於該α-螺旋胜肽之N端且與該短胜肽直接連接或位於該α-螺旋胜肽之C端。
  8. 如申請專利範圍第6項所述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中該一個以上之非自然胺基酸為位於該α-螺旋胜肽之N端且與該短胜肽直接連接。
  9. 如申請專利範圍第8項所述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中該α-螺旋胜肽具有兩個非自然胺基酸。
  10. 如申請專利範圍第9項所述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中該兩個非自然胺基酸皆為萘基丙胺酸。
  11. 如申請專利範圍第2項所述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中該α-螺旋胜肽的序列包括序列辨識號：1。
  12. 如申請專利範圍第1項所述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中該抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽的序列包括序列辨識號：2。
  13. 如申請專利範圍第1項所述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中該抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽的N端胺基酸被乙醯化。
  14. 如申請專利範圍第1項所述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中該抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽的C端胺基酸被醯胺化。
  15. 如申請專利範圍第1項所述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中該抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性之胜肽的N端胺基酸與C端胺基酸，分別被乙醯化與醯胺化。
  16. 如申請專利範圍第15項所述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽，其中該抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽的序列係序列辨識號：2之序列。
  17. 一種醫藥組成物，包括：如申請專利範圍第1項所述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽；以及一藥學上可接受之載體或鹽類，其中該醫藥組成物具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性，且不影響正常細胞。
  18. 如申請專利範圍第17項所述之醫藥組成物，其中該α-螺旋胜肽的序列包括序列辨識號：1。
  19. 如申請專利範圍第17項所述之醫藥組成物，其中該具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽的序列係序列辨識號：2之序列。
  20. 如申請專利範圍第17項所述之醫藥組成物，其中該具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽的N端胺基酸與C端胺基酸，分別被乙醯化與醯胺化。
  21. 如申請專利範圍第17項所述之醫藥組成物，其中該細菌包括一革蘭氏陽性細菌及/或一革蘭氏陰性細菌。
  22. 如申請專利範圍第21項所述之醫藥組成物，其中該革蘭氏陽性細菌包括金黃葡萄球菌。
  23. 如申請專利範圍第21項所述之醫藥組成物，其中該革蘭氏陰性細菌包括大腸桿菌或綠膿桿菌。
  24. 如申請專利範圍第17項所述之醫藥組成物，其中該癌細胞包括肺癌細胞、口腔癌細胞、前列腺癌、乳癌、肝癌或胰臟癌。
  25. 一種如申請專利範圍第1項所述之具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽用於製備具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的藥物的用途，其中該藥物具有抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性，且不影響正常細胞。
  26. 如申請專利範圍第25項所述之用途，其中該α-螺旋胜肽的序列包括序列辨識號：1。
  27. 如申請專利範圍第25項所述之用途，其中該具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽的序列係序列辨識號：2之序列。
  28. 如申請專利範圍第25項所述之用途，其中該具備抗微生物、抗癌及/或促進傷口癒合之活性的胜肽的N端胺基酸與C端胺基酸，分別被乙醯化與醯胺化。
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