TWI432203B - 以羊毛固醇及茯苓萃取物治療惡病質的用途 - Google Patents

Description

以羊毛固醇及茯苓萃取物治療惡病質的用途

本發明係關於一種用於預防及治療消耗性疾病(諸如惡病質及厭食)，尤其是癌症引起的惡病質，之醫藥組合物。本發明之醫藥組合物包含羊毛固醇化合物作為有效成分。此羊毛固醇化合物的一合適來源為茯苓萃取物。此外，冬蟲夏草、樟芝及靈芝亦為可能之羊毛固醇化合物的來源。

惡病質(Cachexia)表示處於一種不好的虛弱的狀態，常源自於疾病造成厭食和內分泌及免疫系統改變，而出現疲勞，肌肉及內臟蛋白減少，最終造成體重減輕。

惡病質在慢性病患或重症病患是常見的症狀，在癌症病患尤其常見於胃癌和胰臟癌病患之中，約有百分之七十的病患會出現這樣的症狀。在癌症末期，不論是何種癌症，約有百分之八十的病患會出現惡病質的症狀，其特徵為就算病患增加進食的量或提高營養的攝取，也無法預防或阻止患者體重的持續下降。在治療上常使用荷爾蒙食慾促進劑(如Megestrol,medroxyprogesterone acetate)，但實際上有些人認為是暫停性體重增加(只是水分及脂肪增加)，身體肌肉量並沒有增加，活動能力、體能也未見改善。相反的，一些藥物副作用如血栓、水腫、出血、高血糖、高血壓會出現。

分解代謝性(catabolic)消耗或惡病質是一種特徵為不自主進行性消耗脂肪及骨骼肌、頑固性體重減輕以增加營養輸入、靜態能量消耗(REE)增加、蛋白質合成降低、碳水化合物代謝改變(柯氏循環(Cori cycle)活性增加)、肌肉透過蛋白質溶解之ATP-泛素(ubiquitin)-依賴型蛋白酶體路徑過度分解代謝、及脂肪組織透過脂肪溶解過度分解代謝之症候群(Body JJ,Curr Opin Oncol 11：255-60,1999,Muscaritoli M,et al：Eur J Cancer 42：31-41,2006)。通常，在病患已減輕至少5%或5磅的罹病前體重後才被診斷為惡病質。大約一半的所有癌症病患經歷某種程度的分解代謝性消耗，較高發生率見於肺、胰及胃腸道惡性疾病之病例(Dewys WD,et al：Am J Med 69：491-7,1980)。該症候群亦可見於免疫不全疾病諸如AIDS之病患以及罹患細菌性及寄生蟲性疾病、類風濕性關節炎及腸、肝、腎、肺和心之慢性疾病的病患中。惡病質亦與厭食有關，其可為老化所表現之狀況或因為身體傷害及燒傷造成。惡病質症候群降低病患之功能性能力及生活品質，使潛在狀況惡化並降低對藥物之耐受性。惡病質之程度與病患存活時間呈反比，其通常代表預後不良。近年來，老化相關疾病與失能已經成為主要的健康關注及重要性。

厭食(表示食慾喪失之醫學名詞)係許多惡性疾病之惡化表現，可見於癌症、感染性疾病、慢性器官衰竭及創傷病患。厭食是一種嚴重的症候群，因為它導致卡洛里攝取降低及營養不良。厭食之表現包括對食物之味覺及嗅覺降低、早飽、饑餓感降低及甚至完全厭惡食物，也可能出現噁心及嘔吐之症狀。對厭食的原因了解不多；而有效的治療選擇有限。有些研究指出荷爾蒙、社會及心理因素之組合可能是該症候群發生及進展之重要因素。

雖然事實上惡病質經常與癌症有關，但尚未證實惡病質之發生與腫瘤大小、疾病階段及惡性疾病之種類或時期之間具有一致關係。然而，癌症惡病質經常與卡洛里攝取減少、靜態能量消耗增加、及蛋白質、脂肪及碳水化合物代謝改變有關。舉例來說，一些在碳水化合物代謝上之顯著異常包括：總葡萄糖轉換率增加、肝臟糖質新生上升、葡萄糖不耐及血糖上升。也經常發現脂肪溶解增加、游離脂肪酸及甘油轉換增加、高脂血症、及脂蛋白脂酶活性下降。重要的是，與癌症惡病質有關之體重減輕不僅是因為身體脂肪儲存減少所致，也與身體總蛋白質質量減少及廣泛骨骼肌消耗有關。蛋白質轉換增加及胺基酸氧化調節不良亦可能是該症候群惡化之重要因素。此外，因應癌症所產生之特定宿主源性因素，例如，發炎前細胞激素(腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、介白素-1、介白素-6、及γ-干擾素)、急性期蛋白質(諸如C反應蛋白)、及特定前列腺素似乎亦與癌症惡病質有關。

在傳統中國醫學中建議給老年人天天食用茯苓中藥，則老年人除了不容易生病外，且有助於延緩老化而長壽。

本案申請人於EP 1535619 A1揭示了一種用以提昇人體免疫力之醫藥組合物，此組合物含羊毛固醇(lanostane)化合物作為有效成分，能提昇免疫力，用於病毒感染預防及治療。另一方面，茯苓萃取物及其純化物(lanostanes)能抑制免疫力，用於IgE引起過敏(氣喘)之預防及治療，此抑制作用揭示於我國第97123189號及PCT/CN2008/001218專利申請案。從這兩篇專利申請案顯示茯苓萃取物及其羊毛固醇成分(lanostanes)可調節免疫力。本案申請人另於我國第97111791號及PCT/CN2008/000749專利申請號揭示人之腸細胞可受茯苓萃取物及其純化物羊毛固醇(lanostanes)作用而增強吸收營養素；葡萄糖、胺基酸、維他命(葉酸)之吸收。

因此我們認為茯苓萃取物成分，特別是羊毛固醇化合物(lanostanes)有可能有助於與營養及免疫有關之惡病質的改善或治療。於本發明中以人肺癌細胞移植於小鼠進行實驗來證明茯苓萃取物成分及羊毛固醇化合物是否能對惡病質有治療效果，觀察人肺癌細胞移植小鼠是否與正常小鼠一樣有正常食慾而且體重也正常並無日漸減輕現象。

本發明之主要目的即在提供一種用於治療預防及治療消耗性疾病(諸如惡病質及厭食)，尤其是癌症引起的惡病質，之醫藥組合物。

本發明之另一目的即在提供一種從茯苓製備的茯苓萃取物用於治療預防及治療消耗性疾病(諸如惡病質及厭食)，尤其是癌症引起的惡病質，之用途。

本發明之另一目的即在提供一種羊毛固醇(lanostane)用於治療預防及治療消耗性疾病(諸如惡病質及厭食)，尤其是癌症引起的惡病質，的新用途。

本發明揭示一種預防及治療哺乳類動物(例如人類)之消耗性疾病(諸如惡病質及厭食)的醫藥組合物，包含一預防及治療消耗性疾病有效量作為有效成分的具下列化學式(I)的羊毛固醇或其醫藥容許鹽：

其中R₁ 為H或CH₃ ；R₂ 為OCOCH₃ ,=O或OH；R₃ 為H或OH；R₄ 為-C(=CH₂ )-C(CH₃ )₂ R_a ，其中R_a 為H或OH，或-CH=C(CH₃ )-R_b ，其中R_b 為CH₃ 或CH₂ OH；R₅ 為H或OH；及R₆ 為CH₃ 或CH₂ OH。

較佳的，該羊毛固醇(I)具有具下列化學式：

較佳的，本發明的組合物其含有0.1-60重量%的羊毛固醇(I)或其醫藥容許鹽。

較佳的，本發明的組合物為口服的。

本發明的又一目的係使用一茯苓萃取物作為該羊毛固醇(I)的來源，該茯苓萃取物包含1-60重量%的具前述式(I)的羊毛固醇且實質上不含開環羊毛固醇。

較佳的，該茯苓萃取物係由包含下列步驟的方法所製備：

a)以一水，甲醇，乙醇或它們的混合溶劑萃取茯苓菌的代謝物，茯苓菌的醱酵產物或茯苓菌菌絲；

b)濃縮步驟a)萃取所獲得的液體；

c)將步驟a)所獲得的濃縮物導入一矽膠管柱；

d)以一低極性沖提劑(eluent)沖提該矽膠管柱，及收集所產生的溶離液(eluate)；及

e)濃縮步驟d)的溶離液。

較佳的，從步驟e)所獲得的溶離液的濃縮物以矽膠薄層層析法分析具有一層析值，其中以紫外光燈及碘作檢側，展開液為二氯甲烷：甲醇=96:4。

較佳的，步驟a)的萃取所使用的溶劑為95%酒精。

較佳的，步驟a)包含以沸水萃取茯苓菌的代謝物，茯苓菌的醱酵產物或茯苓菌菌絲；加入一鹼至該萃取水溶液至其pH值9-11；分離出該鹼性水溶液；加入一酸至該鹼性水溶液至其pH值4-7，以產生沈澱物；分離出該沈澱物；再以酒精萃取該沈澱物，並分離出萃取液體。

較佳的，步驟b)的濃縮物被進一步以一體積比為1:1的95% v/v甲醇水溶液及正己烷的兩相溶劑萃取；分離出甲醇層；及濃縮該甲醇層，所獲得的濃縮物被用作為步驟c)的矽膠管柱的進料。

較佳的，步驟d)的低極性沖提劑為體積比為96.5:3.5的二氯甲烷及甲醇的混合溶劑。

較佳的，該茯苓萃取物包含5-35重量%的羊毛固醇(I)。

較佳的，本發明的組合物進一步包含一營養素，例如葡萄糖、胺基酸、維生素或其組合。

較佳的，本發明的消耗性疾病係指惡病質；更佳的，該惡病質係因癌症而引起，例如肺癌、胃癌、胰臟癌、直腸癌、乳癌、口腔癌或鼻咽癌。

較佳的，本發明的消耗性疾病係指因癌症、厭食、老化、因為身體傷害或燒傷而引起。

較佳的，本發明醫藥組合物對人的投予劑量為該羊毛固醇(I)每日的投予劑量不低於8.4mg。

較佳的，本發明的醫藥組合物進一步包含一醫藥容許載體或稀釋劑。

本發明以具式(I)的羊毛固醇或其醫藥容許鹽，或前述茯苓萃取物作為癌症患者食慾不振、體重嚴重下降的治療。與惡病質有關之疾病除癌症外，尚有愛滋病、老化、類風濕性關節炎、肺結核、纖維囊腫、克隆氏症、感染疾病等所引起之惡病質。手術或癌症病人(接受化療或放射療法)造成身體虛弱，急需要補充營養素(胺基酸、葡萄糖、維他命)來改善。本發明的有效成分可以被添加在奶粉、飲料、食品作為營養補充目的，也可作成醫藥品，如錠劑、膠囊、顆粒劑、液劑、注射劑等形式出現，用於醫療目的。

惡病質(Caclexia)表示人體處於一種衰弱狀態，造成惡病質之原因，有多種不同說法，但無一個確切之機轉。目前所能知道的是以癌症而言，癌細胞釋放因子或人體對癌細胞之免疫反應釋放各種因子直接或間接造成厭食，體內之內分泌及免疫系統發生改變。因而使得人體之脂肪及肌肉中之蛋白質逐漸減少而導致患者不喜歡飲食，身體日漸虛弱及體重日漸減輕的現象。

與惡病質有關之疾病有癌症、感染疾病(如肺結核、愛滋病)，自體免疫病(類風濕性關節炎)，老年人，纖維囊腫、克隆氏病。在癌症病患，尤其常見於胃癌和胰臟癌病患之中，約有百分之七十的病患會出現這樣症狀。另外，在癌症末期，不論是何種癌症，約有百分之八十病患會出現惡病質症狀。在治療上如增加進食或其他經由灌食或靜脈注射營養素，也無法預防或阻止患者體重的持續下降。在治療上常使用荷爾蒙食慾促進劑(如Megestrol,medoxy progesterone)，但實際上有些人認為是暫停性體重增加(只是水分及脂肪增加)，身體肌肉量並沒有增加，活動能力也未見改善。相反的，一些藥物副作用如血栓、水腫、出血、高血糖、高血壓會出現。

本發明所揭示之從茯苓製備具有治療惡病質的有效成分的一合適方法例如為前述EP 1535619 A1所揭示的方法，包括利用傳統萃取法萃取茯苓得到一粗萃取物，再經由層析法，分成極性小之羊毛固醇(lanostane)類部位(以二氯甲烷：甲醇(96:4)為沖提液)和極性大之開環羊毛固醇(secolanostane)類部位(以二氯甲烷：甲醇(90:10或0:100)為沖提液)，其中，利用矽膠薄層層析法，顯示出羊毛固醇(lanostane)類部位之所在位置，即展開溶媒為二氯甲烷一甲醇(96:4)時，層析值(Rf)為；至於開環羊毛固醇(secolanostane)類成分，則層析值小於0.1。用矽膠管柱層析法可進一步分離該羊毛固醇類部位，其中沖提液使用二氯甲烷：甲醇(97:3至95:5)，分離出數種羊毛固醇(lanostane)類化合物。

下面結合實施例對本發明做進一步詳細的描述，但不以此限制本發明。

實施例一

雲南產茯苓26公斤，以260升含75%酒精，加熱萃取三次，合併酒精萃取液，經減壓濃縮後可得225.2克萃取物。萃取物經定量分析知道每一克萃取物可得76.27毫克之羊毛固醇(lanostanes)，其中K1(Pachymic acid)33.4亳克，K1-1(dehydropachymic acid)9.59亳克，K2-1(Tumulosic acid)19.01亳克，K2-2(dehydrotumulosic acid)6.75亳克，K3(Poylporenic acid C)5.06mg，K4(3-epidehydrotumulosic acid)2.46亳克。

實施例二

實施例一酒精萃取物125克以1.3升二氯甲烷萃取6次，合併二氯甲烷萃取液，經濃縮後可得22.26克之萃取物。以95%熱酒精溶解二氯甲烷萃取物，放冷後過濾不溶物，濾液以水少量加入直到酒精含量為45%為止，此時會有沉澱產生，用離心方式取沉澱物，可得17.4克沉澱物。經定量分析可得知每克沉澱物含有264.78毫克羊毛固醇(lanostanes)，其中K1-1(pachymic acid)159.7毫克，K1-2(dehydropachymic acid)56.96毫克，K2-1(Tumulosic acid)24.43毫克，K2-2(dehydrotumulosic acid)8.8毫克，K3(polyporenic acid)9.84毫克，K4(3-epidehydrotumulosic acid)5.05毫克。該沉澱物經矽膠薄層層析法檢測證明其不含有開環羊毛固醇。

實施例三

茯苓藥材100公斤以800公斤水煮沸3小時後，靜置冷卻至50℃，以5N NaOH調節溶液至pH 11，再攪拌溶液3小時。接著以離心機分離液體和固體，固體再以800公斤水加入，同上述方法，以NaOH調至pH 11、攪拌和離心機分離，去掉固體。合併兩次液體，在50℃將液體真空濃縮至100公斤溶液，再加入3N HCl至pH 6.5，產生沈澱物。分離出該沈澱物，再以40L H₂ O清洗，接著以離心機分離出沈澱物，加入8L水噴霧乾燥(spray dry)，得到約380g粉末。再以4L之酒精萃取該粉末三次，合併萃取液並濃縮可得238.9克酒精萃取物。該萃取物經矽膠薄層層析法(TLC)檢測證明其不含有開環羊毛固醇。該萃取物再經過HPLC分離，每克該萃取物可得主成分為K2 214mg，K3 23mg，K4 24mg及少量成分K1 4.52mg，即萃取物每克約含265mg羊毛固醇(lanostanes)。

或以4L之50%酒精水溶液萃取該粉末，去除50%酒精水溶液部份收取不溶之粉末，重覆三次可得245.7克之50%酒精水溶液不溶物，經TLC法檢測顯示該不溶物不含開環羊毛固醇，再經過HPLC純化分離該不溶物，每克可得主成分為K2 214mg，K3 23mg，K4 24mg及少量成分K1 4.52mg，即萃取物每克約含261mg羊毛固醇(lanostanes)。

實施例四

以雲南產茯苓30公斤，磨成粉後，利用120L酒精(濃度95%)萃取24小時，及過濾分離。再重復前述萃取及固液分離三次。合併濾液，並將之濃縮後得乾燥萃取物265.2克。再利用一兩相萃取劑(己烷：95%甲醇=1:1)對該乾燥萃取物進行分配萃取。取出甲醇層並加予濃縮後得到乾燥固體246.9克。利用矽膠管柱層析對該乾燥固體進行分離，該矽膠管柱填充有該乾燥固體重量10-40倍的矽膠，係購自Merck公司，Silica gel 60,70-230mesh。以二氯甲烷/甲醇混合液作為沖提劑(eluent)，依序以96:4、90:10、0:100比例的混合液進行沖提，溶離液(eluate)以矽膠薄層層析法(Thin Layer Chromatography)(紫外光燈及碘作檢測，展開液為二氯甲烷：甲醇=96:4)檢測成分，將相同成分合併。

以二氯甲烷-甲醇(96:4)混合液進行矽膠管柱層析，可得到屬本發明的茯苓萃取物之PCM部份78克。PCM部份依上述矽膠薄層層析法可明顯看到6個跡點。以二氯甲烷：甲醇(90:10)及(0:100)沖提液層析合併可得到PCW部份168克。

PCM部份進一步以二氯甲烷：甲醇(96.5:3.5)作為沖提劑進行矽膠管柱層析(同上述矽膠管柱)，進一步分離可得純化之羊毛固醇(lanostane)類成分K1(K1-1及K1-2),K2(K2-1及K2-2),K3,K4,K4a,K4b,K5,K6a及K6b。詳細分離步驟及鑑定分析數據請參見EP 1535619 A1。

上述之K1至K6b化合物，其結構如下：

從PCM部份分離出來羊毛固醇化合物K1至K6b的產量如下表所示。PCM部份含有約15重量%的羊毛固醇化合物K1至K6b。

實施例五：膠囊製備

依下列組成製備含有實施例四所製得的茯苓萃取物PCM成份的膠囊：

將茯苓萃取物PCM與矽鋁酸鈉分別以#80目(mesh)篩網過篩，馬鈴薯澱粉以#60目篩網過篩，硬脂酸鎂以#40目篩網過篩後，置入混合機攪拌均勻，接著填充入壹號空膠囊，每顆膠囊含有約1.68mg(0.42wt%)的有效成份K1-K6。

實施例六

以本發明之實施例二及實施例三所製備的茯苓萃取物分別調配如表一的藥劑做為試驗物質，來評估動物因癌症引起之體重、攝食情況與血清中蛋白質量之改變，以及癌症引起之惡病質病人服用茯苓萃取物萃取物之整體營養狀況。

實施例七

本實施例為以表一的藥劑來治療癌症引起之惡病質的動物試驗。以人肺癌細胞移植於小鼠進行實驗來證明茯苓萃取物是否能對惡病質有治療效果，觀察人肺癌細胞移植小鼠與正常小鼠的體重、攝食量及血清白蛋白濃度變化，來評估其治療癌症惡病質的藥效。

實驗動物

試驗用老鼠分別自台大動物中心購進六至八週齡。CB-17 SCID小鼠，分別飼養於不鏽鋼籠中。室溫控制於25±2℃，濕度範圍40-70%，12小時光照/黑暗交替，飲水不限制。購入後於動物房先給予適應期，逢機秤重後，以亂數方式將相近體重者編為同一組後，以統計分析確認各組間之體重無顯著性差異。

人體肺癌細胞株H460培養

自液態氮筒取出保存之H460細胞株，在37℃水浴槽內解凍，並在操作檯內加入8ml之10%FBS DMEM媒介液，並以1200rpm離心10分鐘後，取出上清液後將細胞加入8ml培養液，培養於37℃、5%CO₂ 的培養箱中，直到所需的細胞量。

小鼠原位(orthotopic)植入肺癌細胞株H460

將小鼠以戊巴比妥(pentobarbital)深度麻醉後，用29號(gauge)0.5ml胰島素(insulin)針，於小鼠胸肋腔內植入H460細胞株0.1ml(1x10⁶ /ml)，植入細胞後，將小鼠置回原小鼠籠，讓其自行恢復。

藥物處理

實施例二製備的茯苓萃取物精稱67.7mg以加入無菌水定量至10ml，使用超音波處理使該萃取物成懸浮狀態存在於溶液中即成PC-A藥劑，定量5ml PC-A藥劑以無菌水定量至10ml，即成PC-B藥劑，定量5ml PC-B藥劑以無菌水定量至10ml，即成PC-C藥劑。小鼠依各別體重進行餵食，每小鼠體重25gm管餵0.25CC之藥劑，完成表一 的劑量。分兩次進行試驗；正常小鼠組(blank)以蒸餾水餵食正常小鼠(用培養液PBS替代H460注入胸腔之小鼠)。對照組(control)，則以蒸餾水餵食肺癌小鼠。餵食方式是以注射針筒(1cc)接上18號(長5公分)鋼管，管餵時以左手握開鼠雙口腔，再輕將管餵鋼管小心置入胃部，再管餵藥劑或蒸餾水，每次體積以不超過0.3cc為限。

第一次試驗分正常組(blank)，對照組(control)及三組給藥組(給予不同羊毛固醇劑量)，共計五組，每組9隻小鼠。給藥組三組分別為餵食實施例二製備的茯苓萃取物的藥劑PC-A、PC-B及PC-C給予肺癌小鼠，小鼠每公斤體重被分別施予羊毛固醇17.6mg，8.8mg及4.4mg，如表一所示。

第二次試驗分正常組(blank)，對照組(control)及給藥組一組，共計三組，每組3隻小鼠。給藥組為餵食實施例三製備的茯苓萃取物的藥劑PC-D給予肺癌小鼠，小鼠每公斤體重被施予羊毛固醇8.8mg，如表一所示。

血清白蛋白血樣品收集

於第22天從小鼠眼角採集全血，血樣於室溫靜置1小時。以3,000rpm速度離心2次，收集血清，儲存於-20℃，待日後測定血清白蛋白之含量分析。

血清白蛋白濃度測定

使用鼠血蛋白ELISA(Mouse albumin ELISA)試劑套組(Bethyl Laboratories Inc.,Texas,US)進行分析試劑套組分析。抗鼠血蛋白(Anti-mouse albumin)以TBS稀釋100倍， 被覆100μl/well井於微滴盤中，在室溫下作用1小時。以TBST清洗3次後，以1% BSA 200μl/well井做阻擋(blocking)，在室溫下作用1小時，再以TBST清洗3次。加入樣品及標準液，在室溫下作用1小時，以TBST清洗5次，再加入100μl/well井的羊抗血蛋白-HRP共軛(Goat anti-mouse albumin-HRP conjugate)稀釋液(以含1% BSA及0.05% Tween 20之TBS稀釋10,000倍)於室溫下作用1小時。以TBST清洗5次，加入100μl的基質液TMB(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine)，在室溫下避光反應15分鐘，加入100μl/well井的2N HCl終止反應，測定A_450nm 之吸光值。

統計方法

數據結果以平均值±標準差來表示。統計原則首先以單向變異分析(one-way ANOVA)來檢定組間變異，若P<0.05，再以Dunnett’s multiple range t-test來進行各組間之差異比，此種方式則是各組與控制組分別進行比較為原則。

體重及攝食量變化

觀察第一次及第二次試驗的每一組小鼠之攝食量的變化及體重變化情形。

結果

小鼠之體重變化

第一次試驗，肺癌小鼠在進行管餵茯苓萃取物過程中，體重變化情形如圖一所示。對照組(control)小鼠在植入H460肺癌細胞之後，體重明顯下降，相較於植入肺癌細胞小鼠，再給予茯苓萃取物低劑量PC-C(4.4mg/kg)及PC-B(8.8mg/kg)，二者並無區別，即無改善惡病質症狀。但如加大劑量至17.6mg/kg(PC-A)則可看到小鼠對體重之下降有明顯趨緩之現象，因此茯苓成分能改善植入H460肺癌細所引起體重下降之現象。使用不同茯苓萃取物進行第二次試驗，萃取物PC-D(8.8mg/kg)，對肺癌小鼠體重變化如圖二所示。如同圖一，對照組(control)小鼠在植入H460細胞後，體重明顯下降，而正常老鼠(Blank)(不植入H460細胞)則體重略加而已，而給予茯苓萃取物的PC-D組則發現能夠持續維持在試驗起始時之體重，因此茯苓能治療惡病質症，應該可以由此得到證明。

罹癌小鼠之攝食量變化

肺癌小鼠在進行管餵茯苓萃取物後，食物攝取量變化情形如圖三所示。對照組(control)小鼠在植入H460肺癌細胞之後，食物攝取量逐漸下降。相較於植入肺癌細胞小鼠再給予茯苓萃取物(PC-D)的給藥組小鼠，攝取食物不會呈現逐漸下降情形，反而與正常組(black)小鼠一樣(未植入H460肺癌細胞)，二組小鼠的攝取食物量並無區別。因此茯苓萃取物能改善或治療惡病質引起攝食不佳之病症。

肺癌小鼠血清中白蛋白含量變化

第一次及第二次試驗的每一組小鼠之血清中白蛋白含量變化情形如圖四及圖五所示。對照組(control)之植入肺癌細胞H460)的小鼠相對於正常組(Blank)小鼠(不接種H460)具有血清中白蛋白有下降的趨勢。在餵食茯苓萃取物的給藥組(PC-A、B、C)可觀察到隨著羊毛醇劑量增加會增加小鼠的血中之白蛋白含量，在給予PC-A 17.6mg/kg之劑量可觀察到有顯著之增加。在給予茯苓萃取物的給藥組PC-D(8.8mg/kg劑量)，也得到相同顯著效果。

由於動物體對肺癌細胞會產生發炎反應，此反應會改變肝細胞蛋白質製造情形，有些蛋白質會減少製造，有些蛋白(或誘導出蛋白質)的製造會增加。因此，惡病質除觀察老鼠體重及攝食量變化外，另外一個方式可測量血中白蛋白，血中白蛋白如下降，顯示動物受肺癌細胞影響使肝細胞所製造的白蛋白減少，故釋放到血中白蛋白減少。如圖四及圖五所示，惡病質小鼠其血中白蛋白含量減少，但施予茯苓萃取物的惡病質小鼠其血中白蛋白含量並不會減少，茯苓萃取物顯然具有治療惡病質之作用。

實施例八：

茯苓萃取物治療癌症引起之惡病質的人體臨床研究：

(一)觀察病人整體營養狀況改善。

(二)觀察病人體重改善。

(A)癌症病人分組及給藥：

15個癌症病人體重持續性減輕，分屬於胃癌(3人)、胰臟癌(3人)、直腸癌(3人)、乳癌(4人)、口腔癌(1人)及鼻咽癌(1)，隨機分成3組，每組各5人，第一組給予低劑量茯苓萃取物(萃取物源自實施例三，16.8mg/每顆)，每日一顆膠囊。第二組給予較高劑量茯苓萃取物，每日二顆膠囊。第三組不給予茯苓萃取物僅服用化療藥物作對照目的。

(B)治療過程：15個病人化療6週，第一/二組病人服用茯苓且服用4週(5/6週僅化療)，每週記錄‧體重/營養狀況評估表。

(C)治療結果(一)：癌症患者體重改善，治療結束後(第六週或42天後)將病人體重與治療第1天體重作比較結果如下：

從治療結果可以看出給予化療藥物與茯苓萃取物組(一/二組)其對於體重維持不變或改善體重優於對照之第三組(僅給予化療而不給予茯苓)，此組體重可以觀察到體重會減輕，仍低於治療第1天之體重。

(D)治療結果(二)病人整體營養狀況改善

癌症患者整體營養狀況之評估是依據臨床醫生使用之PG-SGA評量表(Patient-Generated Subjective Global Assessment)，評估三組病人在(1)體重改善(2)飲食改善(3)症狀困擾改善及(4)體能改善所得綜合分數，如下列圖六、圖七及圖八所示，圖六為第一組患者(化療+茯苓萃取物膠囊1顆)，圖七為第二組患者(化療+茯苓萃取物膠囊2顆)，圖八為對照組患者(化療)。PG-SGA分數愈低病人改善程序愈佳，整體趨向於健康。

從治療結果來看，給予茯苓萃取物併用化療藥物治療對於惡病質患者之健康/生活品質改善遠遠超越僅給予化療惡病質患者，而且在統計學上呈現顯著意義

從本實施例的結果可以發現茯苓萃取物與化療藥物併用能阻止癌症病人體重減輕，同時病人整體營養狀況改善，很顯著優於只給予化療的癌症病人。

圖一顯示實施例七的第一次試驗的每一組小鼠之體重變化，其中+代表正常組(blank)；黑圓點代表控制組(control)；菱形、方形及三角形分別代表給藥組PC-A、PC-B及PC-C，小鼠每公斤體重被分別施予羊毛固醇17.6mg，8.8mg及4.4mg。

圖二顯示實施例七的第二次試驗的每一組小鼠之體重變化，其中菱形代表正常組(blank)；方形代表控制組(control)；及三角形代表給藥組PC-D，小鼠每公斤體重被施予羊毛固醇8.8mg。

圖三顯示實施例七的第二次試驗的每一組小鼠之攝食量變化，其中菱形代表正常組(blank)；三角形代表控制組(control)；及圓形代表給藥組PC-D，小鼠每公斤體重被施予羊毛固醇8.8mg。

圖四顯示實施例七的第一次試驗的每一組小鼠之小鼠於第22天之血中白蛋白濃度。

圖五顯示實施例七的第二次試驗的每一組小鼠之小鼠於第22天之血中白蛋白濃度。

圖六為實施例八的第一組癌症患者(化療+茯苓萃取物膠囊1顆)之整體營養狀況之評估，其是依據臨床醫生使用之PG-SGA評量表(Patient-Generated Subjective Global Assessment)進行評估。

圖七為實施例八的第二組癌症患者(化療+茯苓萃取物膠囊2顆)之整體營養狀況之評估，其是依據臨床醫生使用之PG-SGA評量表進行評估。

圖八為實施例八的對照組癌症患者(化療)之整體營養狀況之評估，其是依據臨床醫生使用之PG-SGA評量表。

Claims (11)

1. 一種使用具下列化學式(I)的羊毛固醇或其醫藥容許鹽於製備一種治療哺乳類動物之癌症引起的惡病質的藥物的用途， 於式中R₁ 為H或CH₃ ；R₂ 為OCOCH₃ ,=O或OH；R₃ 為H或OH；R₄ 為-C(=CH₂ )-C(CH₃ )₂ R_a ，其中R_a 為H或OH，或-CH=C(CH₃ )-R_b ，其中R_b 為CH₃ 或CH₂ OH；R₅ 為H或OH；及R₆ 為CH₃ 或CH₂ OH。
2. 如申請專利範圍第1項的用途，其中該羊毛固醇(I)具有具下列化學式：
3. 如申請專利範圍第1項的用途，其中該藥物含有0.1-60重量%的羊毛固醇。
4. 如申請專利範圍第1項的用途，其中該藥物為口服的。
5. 如申請專利範圍第1項的用途，其中該哺乳類動物為人類。
6. 如申請專利範圍第1項的用途，其中該藥物包含一茯苓萃取物，該茯苓萃取物包含1-60重量%的式(I)的羊毛固醇且實質上不含開環羊毛固醇。
7. 如申請專利範圍第6項的用途，其中該茯苓萃取物包含5-35重量%的羊毛固醇(I)。
8. 如申請專利範圍第6項的用途，其中該羊毛固醇(I)具有具下列化學式：
9. 如申請專利範圍第1項的用途，其中該癌症為肺癌、胃癌、胰臟癌、直腸癌、乳癌、口腔癌或鼻咽癌。
10. 如申請專利範圍第5項的用途，其中該藥物的每日投予劑量為羊毛固醇(I)每日的投予劑量不低於8.4mg。
11. 如申請專利範圍第1項的用途，其中該藥物進一步包含一醫藥容許載體或稀釋劑。