TWI480045B - 使用包含有４株乳酸菌菌株的混合物來預防和／或緩解酒精性肝病變 - Google Patents
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本發明是有關於使用一包含有嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus
)LASW、糞腸球菌(Enterococcus faecium
)TM39、發酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum
)LF33以及胚芽乳桿菌(Lactobacillus plantarum
)BCRC 10069的混合物來預防和/或緩解酒精性肝病變(alcoholic liver disease,ALD)，其中該嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39以及發酵乳桿菌LF33分別以寄存編號BCRC 910276、910248以及910554被寄存於食品工業發展研究所的生物資源保存及研究中心(BCRC of FIRDI)。
酒精性肝病變是一種由酒精的過度消耗(alcohol overconsumption)所造成的肝損傷(liver injury)，其可依據病理生理學(pathophysiology)而被區分為下列3個階段：(1)脂肪肝(fatty liver)[亦被知曉為肝脂肪變性(hepatic steatosis)]：由於過多的脂肪酸經由肝細胞合成或從血液中被運送至肝臟，而使得肝細胞無法有效代謝三酸甘油酯(triglyceride,TG)，進而造成大量的脂肪[包括三酸甘油酯、脂肪酸(fatty acid)以及膽固醇酯(cholesterol ester)]累積在肝臟中而引起肝臟病變；(2)酒精性肝炎(alcoholic hepatitis,AH)：慢性的酒精消耗會改變腸通透性(gut permeability)，並增加對於由存在於腸中的細菌所釋放之內毒素(endotoxins)的吸收，而使得肝
臟巨噬細胞[亦即庫弗式細胞(Kupffer cell)]釋出大量的前發炎性細胞激素(proinflammatory cytokines)[諸如腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]以及自由基(free radicals)，藉此形成氧化性壓力(oxidative stress)，進而導致肝臟細胞發炎(inflammation)以及細胞凋亡(apoptosis)；以及(3)慢性肝炎伴隨肝纖維化(hepatic fibrosis)或硬化(cirrhosis)：當肝細胞持續產生發炎反應(inflammatory response)時，肝臟星狀細胞(hepatic stellate cells,HSCs)會受到活化而開始增生(proliferation)並轉變成為類肌纖維母細胞(myofibroblasts)，同時分泌並累積大量的細胞外基質(extracellular matrix)[包括第1與3型膠原蛋白(type I and III collagen)以及纖維連接蛋白(fibronectin)]，進而導致肝纖維化，而過度的肝纖維化會致使肝臟結瘢(scarring)以及壞死(necrosis)，最後形成肝硬化。
目前臨床上大多是藉由中斷酒精消耗(cessation of alcohol consumption)[亦即戒酒(abstinence)]並搭配營養療法(nutrition therapy)[包括攝取補充有維生素(vitamins)以及膳食礦物質(dietary minerals)的飲食]來緩解肝臟受損或者避免肝損傷惡化。此外，常用於治療酒精性肝病變的藥物可被歸納為下面3大類：(1)皮質類固醇(corticosteroids)：它可供用於治療嚴重的酒精性肝病變；(2)秋水仙素(colchicine)：它具有抗發炎(anti-inflammatory)與抗纖維化(anti-fibrotic)的效用，因而可供用於抑制肝纖維化；以及(3)抗細胞激素藥物(anti-cytokine drug)：例如，因福利美(infliximab)以及
己酮可可鹼(pentoxifylline)，它們可用來抑制TNF-α生成，進而降低TNF-α所造成的肝發炎現象。
然而，上面所提及的治療方式或藥物在臨床應用上仍存在有療效不佳以及容易產生副作用(side effect)的問題。因此，本領域的相關研究人員皆致力於開發可以有效地治療酒精性肝病變並且不會產生非所欲的副作用的藥物。
乳酸菌(lactic acid bacteria,LAB)是一群能夠發酵醣類並以乳酸為主要代謝產物的革蘭氏陽性菌，它們普遍存在於乳製品、醃漬品以及人類或動物的腸道黏膜中。乳酸菌已廣為被接受的形態與生理特徵包括：(1)外形為球狀(cocci)或桿狀(rod)；(2)缺乏細胞色素及過氧化氫酶(catalase)；(3)不形成內生性孢子；以及(4)不具運動性。
乳酸菌是屬於一般被公認為安全的(generally recognized as safe,GRAS)並且是為人所熟悉與廣泛使用的益生菌(probiotics)。乳酸菌已被發現到具有抑制腸胃道病原菌生長、緩和乳糖不耐症(lactose intolerance)、免疫調節(immunoregulation)、抗癌(anti-cancer)以及降血壓等功效。可作為益生菌使用的乳酸菌有許多種類，例如乳桿菌屬(Lactobacillus
)、乳球菌屬(Lactococcus
)、小球菌屬(Pediococcus
)、鏈球菌屬(Streptococcus
)以及腸球菌屬(Enterococcus
)等。
已有研究顯示，某些乳酸菌菌株具有緩解酒精性肝病變的功效。例如，在A.K.Irinaet al
.(2008),Alcohol
,42：675-682中，A.K.Irina等人發現與健康對照組相較之下，
帶有酒精-誘發的肝損傷(alcohol-induced liver injury)的病患具有經改變的腸菌相(bowel flora)，而短期口服補充以雙叉型雙叉桿菌(Bifidobacterium bifidum
)以及胚芽乳桿菌(Lactobacillus plantarum
)8PA3
可復原腸菌相，並且在酒精-誘發的肝損傷的改善上要比標準治療(亦即戒酒以及補充維生素B1
與B6
)更為顯著。
在S.Segawaet al
.(2008),International Journal of Food Microbiology
,128：371-377中，S.Segawa等人發現加熱致死(heat-killed)的短毛乳桿菌(Lactobacillus brevis
)SBC8803可藉由抑制在肝臟中的TNF-α以及固醇調節要素-結合蛋白(sterol regulatory element-binding proteins,SREBPs)的過度表現來改善酒精-誘發的肝損傷以及脂肪堆積(fat accumulation)[亦即脂肪肝(fatty liver)]，因而被預期可供用於緩解酒精性肝病變。
在C.B.Forsythet al
.(2009),Alcohol
,43：163-172中，C.B.Forsyth等人發現在酒精性肝病變的大鼠模型中，鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus
)GG的胃管灌食(gavage)可顯著地降低酒精性脂肪肝炎(alcoholic steatohepatitis,ASH)的嚴重性、酒精-誘發的腸高滲透性(gut hyperpermeability)以及酒精-誘發的組織(包括腸和肝臟)與全身性氧化性壓力(systemic oxidative stress)。因此，鼠李糖乳桿菌GG被預期可供用於改善和/或預防酒精性肝病變。
另外，在弘光科技大學生物產業研究所的梁馨文所著碩士論文[名稱：“多重乳酸菌組合之免疫調節功能及其在生
菌劑之應用(The immunomodulation activity and probiotic application for the multispecises combination of lactic acid bacteria)”]中，梁馨文從不同來源的乳酸菌菌株[包括購自於台灣的食品工業發展研究所(Food Industry Research and Development Institute,FIRDI)的生物資源保存及研究中心(Biosource Collection and Research Center,BCRC)以及實驗室自行分離的菌株]中篩選出能夠刺激巨噬細胞產生大量的干擾素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、TNF-α以及一氧化氮(nitric oxide,NO)並且具有良好的抑菌效果以及腸道吸附能力的潛力菌株。接著，對這些潛力菌株進行不同的組合以配製含有不同乳酸菌菌株的混合物，然後將之餵食給小鼠歷時10週，繼而以鼠傷寒沙門桿菌(Salmonella typhimurium
)來感染該等小鼠，藉此探討該等混合物在提升該等小鼠之免疫力上的效用。而實驗結果顯示：一包含有嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus
)LASW、糞腸球菌(Enterococcus faecium
)TM39、發酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum
)LF33以及胚芽乳桿菌(Lactobacillus plantarum
)BCRC 10069的混合物具有提高腹膜巨噬細胞的吞噬能力，以及抑制鼠傷寒沙門桿菌侵入小鼠的脾臟與肝臟的效用。
經研究，申請人意外地發現該包含有嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39、發酵乳桿菌LF33以及胚芽乳桿菌BCRC 10069的混合物除了具有免疫調節的效用之外，還能對帶有酒精性肝病變的小鼠產生有利的預防和/或緩解效用。因此，該包含有4株乳酸菌菌株的混合物被預期可供用於預防和/
或緩解酒精性肝病變。
於是，在第一個方面，本發明提供一種用於預防和/或緩解酒精性肝病變的藥學組成物，其包含有嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39、發酵乳桿菌LF33以及胚芽乳桿菌BCRC 10069，其中該嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39以及發酵乳桿菌LF33分別以寄存編號BCRC 910276、910248以及910554被寄存於食品工業發展研究所的生物資源保存及研究中心。
在第二個方面，本發明提供一種用於預防和/或緩解酒精性肝病變的食品產品，其包含有嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39、發酵乳桿菌LF33以及胚芽乳桿菌BCRC 10069。
在第三個方面，本發明提供一種用於緩解一具有或被懷疑具有酒精性肝病變的個體的方法，其包括對該個體投藥以一包含有嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39、發酵乳桿菌LF33以及胚芽乳桿菌BCRC 10069的混合物。
本發明的上述以及其它目的、特徵與優點，在參照以下的詳細說明與較佳實施例和隨文檢附的圖式後，將變得明顯。
要被瞭解的是：若有任何一件前案刊物在此被引述，該前案刊物不構成一個下述承認：在台灣或任何其他國家中，該前案刊物形成本技藝中的常見一般知識之一部分。
為了本說明書之目的，將被清楚地瞭解的是：術語“包含有(comprising)”意指“包含但不限於”，以及術語“包括(comprises)”具有一對應的意義。
除非另外有所定義，在本文中所使用的所有技術性與科學術語具有熟悉本發明所屬技藝的人士所共同瞭解的意義。一熟悉本技藝者會認知到許多與那些被描述於本文中者相似或等效的方法和材料，它們可被用於實施本發明。當然，本發明決不受到所描述的方法和材料之限制。
在開發可用於預防和/或緩解酒精性肝病變的藥物上，申請人發現：一包含有4株乳酸菌菌株(包括嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39、發酵乳桿菌LF33以及胚芽乳桿菌BCRC 10069)的混合物具有這方面的產業應用潛力。於是，本發明揭示一包含有嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39、發酵乳桿菌LF33以及胚芽乳桿菌BCRC 10069的混合物供用於製備一用來預防和/或緩解酒精性肝病變之醫藥品的用途。
嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39以及發酵乳桿菌LF33已分別於西元2004年9月14日、西元2004年4月14日以及西元2012年6月26日以寄存編號BCRC 910276、BCRC 910248以及BCRC 910554被寄存於台灣的食品工業發展研究所(Food Industry Research and Development Institute,FIRDI)的生物資源保存及研究中心(Biosource Collection and Research Center,BCRC)(300新竹市食品路331號，台灣)。
特別地，申請人經由活體內動物試驗(in vivo
animal test)而證實：當將依據本發明的包含有上述4株乳酸菌菌株的混合物投藥給帶有酒精性肝病變的小鼠時，牠們的許多病理症狀(包括肝細胞損傷、肝功能障礙以及肝臟中的脂肪堆積等)都獲得明顯改善。因此，本發明提供一種用於預防和/或緩解酒精性肝病變的藥學組成物，其包含有嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39、發酵乳桿菌LF33以及胚芽乳桿菌BCRC 10069。
如本文中所使用的，“緩解(alleviating)”或“緩解(alleviation)”意指治療(treating)、減少(reducing)、改善(ameliorating)、減輕(relieving)或控制(controlling)一疾病(disease)或障礙(disorder)的一或多個臨床徵兆(clinical sign)，以及降低(lowering)、停止(stopping)或逆轉(reversing)一正在被治療中的病況(condition)或症狀(symptom)之嚴重性(severity)的進展(progression)。
依據本發明，該酒精性肝病變包含一選自於由下列所構成之群組中的病況：脂肪肝、酒精性肝炎、肝纖維化以及肝硬化。
依據本發明，該藥學組成物具有一範圍落在107
至109
CFU/mL內的細菌濃度。在本發明的一個較佳具體例中，該藥學組成物具有一範圍落在108
至109
CFU/mL內的細菌濃度。
依據本發明，在該藥學組成物中，該嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39、發酵乳桿菌LF33以及胚芽乳桿菌BCRC
10069的相對比例(relative ratio)是1：1：1：1(v/v/v/v)。
依據本發明，該藥學組成物可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於口服投藥(oral administration)的劑型(dosage form)，這包括，但不限於：溶液(solution)、懸浮液(suspension)、乳劑(emulsion)、粉末(powder)、錠劑(tablet)、丸劑(pill)、糖漿(syrup)、口含錠(lozenge)、片劑(troche)、酏劑(elixir)、口嚼膠(chewing gum)、膠囊(capsule)、濃漿(slurry)以及類似之物。
依據本發明的藥學組成物可進一步包含有一被廣泛地使用於藥物製造技術之藥學上可接受的載劑。例如，該藥學上可接受的載劑可包含一或多種選自於由下列所構成之群組中的試劑：溶劑(solvent)、緩衝液(buffer)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、崩解劑(disintegrating agent)、分散劑(dispersing agent)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、防腐劑(preservative)、潤濕劑(wetting agent)、潤滑劑(lubricant)、稀釋劑(diluent)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)、甜味劑(sweetening agent)、調味劑(flavoring agent)、染色試劑(coloring agent)以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
本發明亦提供一種用於緩解一具有或被懷疑具有酒精性肝病變的個體的方法，其包括對該個體投藥以一包含有
嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39、發酵乳桿菌LF33以及胚芽乳桿菌BCRC 10069的混合物。
依據本發明，投藥劑量與投藥次數會視下列因素而變化：要被改善的疾病之嚴重性，投藥途徑，以及要被改善的個體之體重、年齡、身體狀況與反應。而有關投藥劑量與投藥次數的選擇是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
此外，本發明亦預期該包含有上述4株乳酸菌菌株的混合物可被拿來製備用於預防和/或緩解酒精性肝病變的保健食品或非處方醫藥品。
因此，本發明提供一種用於預防和/或緩解酒精性肝病變的食品產品(food product)，其包含有嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39、發酵乳桿菌LF33以及胚芽乳桿菌BCRC 10069。
依據本發明，該4株乳酸菌菌株可被當作食品添加成分(food additive)，藉由習知方法於原料製備時被添加，或是於食品的製作過程中被添加，而與任一種可食性材料一起被配製成供人類與非人類動物攝食的食品產品。
依據本發明，該食品產品的種類包括，但不限於：流體乳品(fluid milk products)，例如牛奶(milk)、濃縮牛奶(concentrated milk)；發酵乳品(fermented milk)，例如優酪乳(yogurt)、酸乳(sour milk)、冷凍優格(frozen yogurt)、乳酸菌發酵飲料(lactic acid bacteria-fermented beverages)；奶粉(milk powder)；冰淇淋(ice cream)；乳酪(cream cheeses)；
乾酪(dry cheeses)；豆奶(soybean milk)；發酵豆奶(fermented soybean milk)；蔬果汁(vegetable-fruit juices)；果汁(fruit juices)；運動飲料(sports drinks)；甜點(confectionery)；果凍(jellys)；糖果(candies)；健康食品(health foods)；動物飼料(animal feeds)；以及膳食補充品(dietary supplements)。
此外，依據本發明的食品產品可被製造成呈一即溶沖泡食品(instant food)的形式，該即溶沖泡食品包含有可直接食用之經冷凍乾燥(lyophilized)或噴霧乾燥(spray-dried)的菌體粉末。有關食品產品的製備，可以參見，例如US 6,872,565 B2、US 7,244,424 B2、US 7,270,994 B2、US 7,172,777 B2以及US 6,872,411 B1。
本發明將就下面的實施例來做進一步說明，但應瞭解的是，該等實施例僅是供例示說明用，而不應被解釋為本發明的實施上的限制。
在下面實驗中所使用的嗜酸乳桿菌(Lactobacillus
acidophilus)LASW、糞腸球菌(Enterococcus faecium
)TM39以及發酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum
)LF33已分別於西
元2004年9月14日、西元2004年4月14日以及西元2012年6月26日以寄存編號BCRC 910276、BCRC 910248以及BCRC 910554被寄存於台灣的食品工業發展研究所(Food Industry Research and Development Institute,FIRDI)的生物資源保存及研究中心(Biosource Collection and Research Center,BCRC)(300新竹市食品路331號，台灣)，而胚芽乳桿菌(Lactobacillus plantarum
)BCRC 10069是購自於台灣的食品工業發展研究所的生物資源保存及研究中心。
首先，將嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39、發酵乳桿菌LF33以及胚芽乳桿菌BCRC 10069分別接種至MRS肉湯培養基(MRS Broth)(Difco,USA)中，然後在一恆溫培養箱(37℃)中進行培養歷時24小時。之後，各個乳酸菌培養物分別在4℃下以10,000 g進行離心歷時10分鐘，接著倒除上澄液，而沉澱物(pellets)以磷酸鹽緩衝的生理鹽水(phosphate buffered saline,PBS)予以洗滌共計2次，繼而以適量的PBS予以懸浮並調整至一為109
CFU/mL(以平板計數培養基來進行菌數計數)的濃度。接著，將所得到的各個嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39、發酵乳桿菌LF33以及胚芽乳桿菌BCRC 10069的菌液以一為1：1：1：1(v/v/v/v)的比例予以混合均勻，而得到一具有一細菌濃度為109
CFU/mL的混合物來供隨後的實驗之用。
有關正常飼料(normal diet)以及含有酒精的飼料(ethanol-containing diet)的製備是分別參考C.S.Lieber and
L.M.Decarli(1982),Alcoholism-Clinical and Experimental Research
.,6：523-531以及C.S.Lieber and L.M.Decarli(1989),Alcohol and Alcoholism
.,24：197-211當中所述的方法來進行，並作部分修改。而有關正常飼料以及含有酒精的飼料的配方被顯示於下面的表1中。
在下面實施例中所使用的雄性C57BL/6N小鼠
(C57BL/6N mice)(7週大，體重約18-20 g)是購自於樂斯科生物科技股份有限公司(BioLasco Taiwan Co.,Ltd)。所有的實驗動物被飼養於一個光照與黑暗各為12小時、室溫維持在22±2℃以及相對濕度維持在55±5%的獨立空調的動物房內，而且水分與上面第2項當中所製備出的正常飼料被充分地供給。有關實驗動物的處理以及一切實驗程序均符合台灣動物保護法(Animal Protection Act of Taiwan)的規定並且依據台灣農委會實驗動物管理委員會準則(guidelines of Animal Care Committee of the Council of Agriculture,Taiwan)來進行。
在下面的實施例中，實驗數據是以“平均值(mean)±平均值的標準誤差(standard error of the mean,SEM)”來表示。所有的數據是藉由變異數分析(analysis of variance,ANOVA)，繼之以鄧肯氏多變域檢定(Duncan’s multiple range test)來作分析，俾以評估各組之間的差異性。若所得到的統計分析結果是p
<0.05，代表具有統計學顯著性(statistical significance)。
在本實驗中，申請人使用含有酒精的飼料來誘發小鼠產生酒精性肝病變，並且藉由量測該等小鼠血清中的天門
冬胺酸轉胺酶(aspartate aminotransferase,AST)以及丙胺酸轉胺酶(alanine aminotransferase,ALT)的活性來檢視小鼠的肝功能，同時分析小鼠肝臟中所含有的三酸甘油酯(triglyceride,TG)，並且對肝臟進行組織病理學檢驗(histopathological examination)，俾以評估本發明之含有4株乳酸菌菌株的混合物對於酒精性肝病變的緩解效用。
將雄性C57BL/6N小鼠隨機地分成1個正常對照組(normal control group)、1個病理對照組(pathological control group)、1個乳酸菌對照組以及1個實驗組(每組n=8)。在實驗開始進行的前3天起，用來餵食病理對照組以及實驗組小鼠的正常飼料逐日地被更換成一依據上面“實驗材料”的第2項「飼料的製備」所製得之含有不同濃度(分別為16.75 mL/L、33.5 mL/L以及50.25 mL/L)的酒精的飼料，俾以使該等小鼠可以逐漸地適應含有酒精的飼料。至於正常對照組以及乳酸菌對照組的小鼠則持續餵食正常飼料。
在實驗開始進行的第1天起，病理對照組以及實驗組的小鼠每天被餵食以依據上面“實驗材料”的第2項「飼料的製備」所製得之含有酒精的飼料(酒精濃度為67 mL/L)，俾以誘發該等小鼠產生酒精性肝病變。至於正常對照組以及乳酸菌對照組的小鼠則被餵食以正常飼料。
除了餵食飼料之外，各組小鼠進一步以一胃管灌食針(0.9 x L 50 mm gavage needle,Popper & Sons)來進行口服投
藥，每天1次並且持續地進行直到實驗開始之後的第28天結束為止，其中正常對照組以及病理對照組的小鼠被口服投藥以200 μL的d.d.H2
O，而乳酸菌對照組以及實驗組的小鼠則被口服投藥以200 μL的依據上面“實驗材料”的第1項「製備一種含有4株乳酸菌菌株的混合物」所製得之含有4株乳酸菌菌株的混合物。
在實驗開始進行之後的第14天以及第28天，於各組小鼠在口服投藥之後的第2個小時，使用一毛細管來對小鼠的眼窩位置進行採血，繼而將所得到的血液靜置於室溫下歷時2小時以使其凝結，接著在4℃下以2,000 rpm進行離心歷時10分鐘，由此所得到的血清樣品被拿來進行下面第B項的分析。
另外，在實驗開始進行之後的第28天，於完成眼窩採血之後藉由異氟烷(isoflurane)來犧牲各組的小鼠，接著取出肝臟來進行下面第C項以及第D項的分析。
有關各組小鼠血清中的天門冬胺酸轉胺酶以及丙胺酸轉胺酶的活性分析是委由大華醫事檢驗所(Da.Hua medical laboratory center)來代為進行。所得到的實驗數據是依照上面“一般實驗方法”的「A.統計學分析」當中所述方法來進行分析。
有關三酸甘油酯的濃度分析是使用Randox三酸甘油酯
分析套組(Randox Triglycerides Assay Kit)(TR 210，Randox laboratories Ltd.,U.K)並依據製造商的操作指南來進行測定。簡言之，對在上面第A項當中所得到的各組小鼠的肝臟各取0.05 g並以一為1：9(w/v)的比例浸泡於0.25%蔗糖溶液(含有1 mM EDTA)中，接而在4℃下以一均質機予以研磨歷時5分鐘，所形成的肝臟均質液是使用一含有氯仿與甲醇的有機溶劑[氯仿：甲醇=2：1(v/v)]來進行萃取，繼而進行蒸發處理(evaporation)以去除該有機溶劑，藉此而得到一乾燥產物。然後，將所得到的乾燥產物溶解於含有5%無脂肪酸的牛血清白蛋白(fatty acid-free bovine serum albumin)的蒸餾水中，接著在4℃下以10,000 g離心歷時30分鐘。之後，對所形成的上澄液各取10 μL，繼而分別添加1 mL的RI反應試劑(Reagent RI)並予以混合均勻，接著將所得到的混合物置於37℃下反應歷時5分鐘。最後，將該混合物以一分光光度計(spectrophotometer)(Ultrospec 2100 pro,GE healthcare)在波長500 nm下來量測吸光值(OD500
)。
各組所測得的吸光值(OD500
)接而分別根據預先以一具有已知濃度的三酸甘油酯標準品相對於其自身的OD500
數值而被換算成三酸甘油酯濃度(mg/dl)，然後將正常對照組的三酸甘油酯濃度當作100%，而其餘各組相對於正常對照組的三酸甘油酯濃度百分比分別被計算出。所計算出的實驗數據是依照上面“一般實驗方法”的「A.統計學分析」當中所述方法來進行分析。
對上面第A項當中所得到的各組小鼠的肝臟各取具有一體積為1 cm3
的組織樣品，並在室溫下以10%福馬林(formaline)來進行固定處理(fixation)歷時一天，繼而將經固定的肝臟組織樣品依序地以不同濃度(包括30%、50%、70%、95%以及99.5%)的乙醇來進行脫水處理(dehydration)。之後，將經脫水的肝臟組織樣品以二甲苯(xylene)予以洗淨(clearing)，繼而以石蠟(paraffin)予以包埋(embedding)，然後進行切片處理，藉此而得到具有一厚度為5 μm的組織切片(tissue sections)。
之後，所得到的組織切片藉由使用蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin)並且依據熟習此項技藝者所詳知且慣用的技術來進行染色，經染色的組織切片是藉由使用一倒立式螢光顯微照相系統(TE2000-S)(Nikon，Japan)並在一為200 X的放大倍率下來進行觀察以及拍照。
圖1以及圖2分別顯示在實驗開始進行之後的第14天以及第28天之時，於各組小鼠的血清中所測得的天門冬胺酸轉胺酶以及丙胺酸轉胺酶的活性。
從圖1以及圖2可見，與正常對照組的小鼠相較之下，乳酸菌對照組小鼠的血清中的天門冬胺酸轉胺酶以及丙胺酸轉胺酶的活性均沒有顯著差異，而病理對照組小鼠的血清中的天門冬胺酸轉胺酶以及丙胺酸轉胺酶的活性均顯著
地被增高，這表示含有酒精的飼料會誘發小鼠產生酒精性肝病變並造成肝細胞損傷以及肝功能障礙。而與病理對照組的小鼠相較之下，實驗組小鼠的血清中的天門冬胺酸轉胺酶以及丙胺酸轉胺酶的活性則顯著地被降低並且展現統計顯著性(p
<0.05)。這個實驗結果顯示：依據本發明之含有4株乳酸菌菌株的混合物可以有效地改善酒精性肝病變所導致的肝細胞損傷以及肝功能障礙。
圖3顯示在實驗開始進行之後的第28天之時，於各組小鼠的肝臟中所測得的三酸甘油酯濃度百分比。從圖3可見，與正常對照組的小鼠相較之下，乳酸菌對照組小鼠的肝臟中的三酸甘油酯濃度沒有顯著差異，而病理對照組小鼠的肝臟中的三酸甘油酯濃度則顯著地被增高，這表示含有酒精的飼料會造成大量的三酸甘油酯累積在小鼠的肝臟中而引起酒精性肝病變。而與病理對照組的小鼠相較之下，實驗組小鼠的肝臟中的三酸甘油酯濃度則顯著地被降低並且展現統計顯著性(p
<0.05)。這個實驗結果顯示：依據本發明之含有4株乳酸菌菌株的混合物可以有效地降低三酸甘油酯累積於小鼠的肝臟中，藉此達到改善酒精性肝病變的效用。
圖4顯示在實驗開始進行之後的第28天之時，從各組小鼠的肝臟中所取得的組織藉由蘇木精-伊紅染色而被觀察到的結果。從圖4可見，與正常對照組相較之下，乳酸菌
對照組小鼠的肝臟組織切片並沒有顯著差異，而病理對照組小鼠的肝臟組織切片會出現大量的脂肪堆積的現象，這表示含有酒精的飼料會造成大量的脂肪累積在小鼠的肝臟中而引起酒精性肝病變。而與病理對照組相較之下，實驗組小鼠的肝臟組織切片當中所出現的脂肪累積的現象則顯著地被減少。這個實驗結果顯示：依據本發明之含有4株乳酸菌菌株的混合物具有改善酒精性肝病變所造成的肝臟脂肪堆積的現象。因此，該含有4株乳酸菌菌株的混合物被預期可供用於預防和/或緩解酒精性肝病變。
於本說明書中被引述之所有專利和文獻以其整體被併入本案作為參考資料。若有所衝突時，本案詳細說明(包含界定在內)將佔上風。
雖然本發明已參考上述特定的具體例被描述，明顯地在不背離本發明之範圍和精神之下可作出很多的修改和變化。因此意欲的是，本發明僅受如隨文檢附之申請專利範圍所示者之限制。
圖1顯示在實驗開始進行之後的第14天以及第28天之時，於各組小鼠的血清中所測得的天門冬胺酸轉胺酶的活性，其中“＊”表示：當與正常對照組相比較，p
<0.05；以及“#”表示：當與病理對照組相比較，p
<0.05；圖2顯示在實驗開始進行之後的第14天以及第28天之時，於各組小鼠的血清中所測得的丙胺酸轉胺酶的活性，其中“＊”表示：當與正常對照組相比較，p
<0.05；以及“#”
表示：當與病理對照組相比較，p
<0.05；圖3顯示在實驗開始進行之後的第28天之時，於各組小鼠的肝臟中所測得的三酸甘油酯濃度百分比，其中“＊”表示：當與正常對照組相比較，p
<0.05；以及“#”表示：當與病理對照組相比較，p
<0.05；以及圖4是一組織切片染色圖，其顯示在實驗開始進行之後的第28天之時，從各組小鼠的肝臟中所取得的組織藉由蘇木精-伊紅染色而被觀察到的結果。
Claims (12)
- 一種用於預防和/或緩解酒精性肝病變的藥學組成物，其包含有嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39、發酵乳桿菌LF33以及胚芽乳桿菌BCRC 10069，其中該嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39以及發酵乳桿菌LF33分別以寄存編號BCRC 910276、910248以及910554被寄存於食品工業發展研究所的生物資源保存及研究中心。
- 如申請專利範圍第1項的藥學組成物，其中該酒精性肝病變包含一選自於由下列所構成之群組中的病況：脂肪肝、酒精性肝炎、肝纖維化以及肝硬化。
- 如申請專利範圍第1項的藥學組成物，其進一步包含有一藥學上可接受的載劑。
- 如申請專利範圍第3項的藥學組成物，其中該藥學上可接受的載劑包含一或多種選自於由下列所構成之群組中的試劑：溶劑、緩衝液、乳化劑、懸浮劑、分解劑、崩解劑、分散劑、黏結劑、賦形劑、安定劑、螯合劑、防腐劑、潤濕劑、潤滑劑、稀釋劑、吸收延遲劑、脂質體、甜味劑、調味劑以及染色試劑。
- 如申請專利範圍第1項的藥學組成物，它是呈一供口服投藥的劑型。
- 如申請專利範圍第5項的藥學組成物，其中該劑型是選自於下列所構成的群組：溶液、懸浮液、乳劑、粉末、錠劑、丸劑、糖漿、口含錠、片劑、酏劑、口嚼膠、濃漿以及膠囊。
- 一種包含有嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39、發酵乳桿菌LF33以及胚芽乳桿菌BCRC 10069的混合物供用於製備一用來預防和/或緩解酒精性肝病變之醫藥品的用途，其中該嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39以及發酵乳桿菌LF33分別以寄存編號BCRC 910276、910248以及910554被寄存於食品工業發展研究所的生物資源保存及研究中心。
- 如申請專利範圍第7項的用途，其中該酒精性肝病變包含一選自於由下列所構成之群組中的病況：脂肪肝、酒精性肝炎、肝纖維化以及肝硬化。
- 如申請專利範圍第7項的用途，其中該醫藥品是呈一供口服投藥的劑型。
- 如申請專利範圍第9項的用途，其中該劑型是選自於下列所構成的群組：溶液、懸浮液、乳劑、粉末、錠劑、丸劑、糖漿、口含錠、片劑、酏劑、口嚼膠、濃漿以及膠囊。
- 一種用於預防和/或緩解酒精性肝病變的食品產品，其包含有嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39、發酵乳桿菌LF33以及胚芽乳桿菌BCRC 10069，其中該嗜酸乳桿菌LASW、糞腸球菌TM39以及發酵乳桿菌LF33分別以寄存編號BCRC 910276、910248以及910554被寄存於食品工業發展研究所的生物資源保存及研究中心。
- 如申請專利範圍第11項的食品產品，其中該酒精性肝病變包含一選自於由下列所構成之群組中的病況：脂肪肝、 酒精性肝炎、肝纖維化以及肝硬化。
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Citations (2)
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|---|---|---|---|---|
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Non-Patent Citations (2)
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| Kirpich, I.A., et al.," Probiotics Restore Bowel Flora and Improve Liver Enzymes in Human Alcohol-Induced Liver Injury: A Pilot Study", Alcohol, 2008, Vol.42, P.675-682. (Also published on NIH Public Access, available in PMC 2009 December 1. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles//) * |
| Xiao, Li-Xia et al,Journal Of Yangzhou University(AGRICULTURAL AND LIFE SCIENCE EDITION) vol. 29, no. 4, 2008/12,p.37 – 41. * |
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