TWI461205B

TWI461205B - 治療癌症之植物大麻素

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Publication number: TWI461205B
Application number: TW100107897A
Authority: TW
Inventors: 丹尼拉帕羅拉洛; 帕歐拉瑪西; 安吉羅Ａ伊羅; 法蘭西斯卡寶瑞里; 葛布里拉艾米羅; 文森羅迪馬諾; 路西安諾迪皮卓西里斯; 安妮羅Ｓ摩瑞伊羅; 艾莉西亞黎格瑞斯提; 路斯Ａ羅斯; 雷斯理Ａ福特; 雪隆安納米古弗; 曼紐古茲曼; 古樂摩瓦拉斯寇; 馬爾羅倫堤; 索菲亞托瑞斯; 菊地哲朗; 傑佛瑞蓋伊; 寇林史托特; 史蒂芬懷特
Original assignee: Ｇｗ伐瑪有限公司; 大塚製藥股份有限公司
Priority date: 2010-03-12
Filing date: 2011-03-09
Publication date: 2014-11-21
Also published as: US9675654B2; US20150086653A1; NZ602953A; PH12012501782A1; BR112012023017A8; UA109271C2; CA2792722A1; HUE029817T2; AU2016266059A1; ES2569669T3; IL221871A; GB2478595B; KR20130067248A; PL2544682T3; US20130059018A1; WO2011110866A1; CO6630103A2; EP2544682B1; CY1117451T1; AU2018217273A1

Description

治療癌症之植物大麻素

本發明係相關於一種植物大麻素之用途，不論是單離形式或植物原料藥(BDS)形式，用以預防或治療癌症。一般而言，該待治療之癌症為：前列腺癌、乳癌、皮膚癌、神經膠質瘤、大腸癌、肺癌，或骨或淋巴轉移。該植物大麻素可與其他癌症療法組合使用。

發明背景

癌症是一種由於細胞變得不朽化(immortalised)而產生之疾病；它們無法察覺一般停止生長的訊號，其為身體重建之正常功能，需要細胞能依時程死亡。缺乏細胞凋亡現象，或計畫性細胞死亡現象，當此現象發生時，便會產生細胞惡性轉型。該不朽化細胞之生長超越了正常細胞限制，且會侵犯鄰近組織。該惡性細胞亦會轉移並擴散至體內其他位置，經由血液或淋巴系統。癌細胞通常會形成腫瘤。

目前約有20種不同形式之癌症；癌症可起始於體內任何組織，雖然許多癌症會轉移至其他體內組織。有許多不同的致癌原因，包括：致癌物、年齡、基因突變、免疫系統問題、飲食、體重、生活方式、環境因子如污染物、某些病毒，如人類乳突狀病毒(HPV)會導致子宮頸癌，以及某些細菌感染亦知會造成癌症。

目前關於癌症有數種不同的治療方式，治療考量通常是依據癌症種類與階段決定。治療選擇包括：化療藥物療法、荷爾蒙藥物療法、放射線療法、手術、補充療法與其組合。

前列腺癌為男性最常見之癌症，在所有英國男性癌症中佔24%。在2006年，單單在英國，就有超過35,000例新增之前列腺癌被診斷出。

前列腺為男性生殖系統之一腺體，前列腺癌之症狀包括疼痛、排尿困難、性交問題以及勃起障礙。前列腺癌會轉移至骨頭或淋巴結。前列腺癌之治療選擇包括手術、放射線療法、化療與荷爾蒙療法。

荷爾蒙療法通常涉及以抗雄性激素劑治療，如醋酸環丙孕酮(cyproterone acetate)、氟他醯胺(flutamide)、必可魯醯胺(bicalutamide)，不論是單獨使用或是與化療試劑組合。這些治療旨在停止睪酮素(雄性激素)之製造，可減緩腫瘤生長，或甚至縮小腫瘤體積。當前列腺癌細胞對於抗雄性激素劑有反應時，稱之為“荷爾蒙敏感型”前列腺癌。不幸的是，以抗雄性激素劑治療數年後，前列腺癌會停止對荷爾蒙治療之反應，此稱之為“荷爾蒙不敏感型”前列腺癌。在此階段，癌細胞之生長便無法以荷爾蒙療法控制。

為了測試不同化合物對於治療荷爾蒙敏感型或荷爾蒙不敏感型前列腺癌之效用，可使用兩種不同的細胞株。細胞株LNCaP為荷爾蒙敏感型前列腺癌細胞，衍生自1977年50歲男性之鎖骨上淋巴結轉移。細胞株DU-145為荷爾蒙不敏感型前列腺癌細胞，衍生自大腦轉移。

目前已知兩種大麻素受器CB1與CB2二者，在CA-人類乳突狀病毒-10(病毒轉型細胞，衍生自人類前列腺組織之腺癌)，以及其他人類前列腺細胞LNCaP、DU-I45、PC3與CWR22RN1中，明顯較高，與人類前列腺上皮細胞及PZ-HPV-7(病毒轉型細胞，衍生自正常人類前列腺組織)細胞(Sarfaraz,2005)相較。

此外，已知以WIN-55,212-2(CB1/CB2增效劑混合物)處理荷爾蒙敏感型LNCaP細胞，會產生劑量-(1-10 Mmol/L)與時間依賴性(24-48小時)之細胞生長抑制。以拮抗劑SR141716(CB1)與SR144528(CB2)阻斷CB1與CB2受器，可明顯阻止此效應。

這些結果顯示WIN-55,212-2或其他大麻素受器增效劑可開發作為新穎之前列腺癌治療試劑。

已知大麻同時為致癌物與抗癌試劑。尤其是大麻菸，已知為致癌物，由於大麻菸中含有至少50種不同之已知致癌化合物，其中許多成分與煙草中物質相同。這些致癌物之一，苯並芘，已知會致癌，藉由改變腫瘤抑制基因p53。大麻含有四氫大麻酚(THC)物質，其已知會導致苯並芘促進p53基因改變。

然而，研究人員已發現某些大麻素，包括THC與大麻雙酚(CBD)，可促使細胞凋亡現象再次出現，因此某些腫瘤會接收到訊號，停止分裂並死亡。細胞凋亡的過程係以觀察到數種現象而判定：細胞體積縮小、核染色體濃縮、細胞膜磷脂質上的磷脂質分佈改變，以及染色體切割成俗稱為DNA梯之DNA片段。

另一個觀察腫瘤生長的方法為確認腫瘤有被滋養(nourished)：它們會送出訊號促進血管新生，亦即使新的血管長出。大麻素會關閉這些訊號。

大麻素已顯示出對於多種不同癌細胞株具有抗增生效用。大麻素THC、THCA、CBD、CBDA、CBG與CBC，以及大麻素BDSTHC與CBD，係於八種不同之細胞株上試驗，包括DU-145(荷爾蒙敏感型前列腺癌)、MDA-MB-231(乳癌)、CaCo-2(大腸直腸癌)與C6(神經膠質瘤細胞)。每一種大麻素對每一種細胞之數據皆不相同，但一般而言，在CBD或CBD BDS可觀察到最佳結果。所有大麻素對於DU-145之IC50值都相當高，代表所檢測之大麻素中，無一者對於荷爾蒙不敏感型前列腺癌之抑制有特別效用(Ligresti,2006)。

已知數個瞬間電壓受器(TRP)通道與前列腺癌及其他癌症之存活、生長與擴散有關。TRPM8表現於感覺神經上，對於冷與冷卻試劑有反應，尤其是薄荷醇，但其在前列腺之表現量亦相當豐富。TRPM8尤其在荷爾蒙敏感型前列腺癌細胞上會過度表現，然而，一旦癌細胞轉變為荷爾蒙不敏感型，且病患接受抗雄性激素劑治療後，TRPM8會幾乎完全消失。在荷爾蒙敏感型前列腺癌細胞株(LNCaP)中，TRPM8之表現會受到雄性激素之刺激。此證據顯示TRPM8之表現為前列腺癌細胞存活所必須。

此TRPM8作用之機制似乎與其可調節細胞內鈣離子之能力有關，甚至與細胞內鈣離子分佈有關。後者觀點很重要，因為與TRPM8在前列腺癌細胞中的定位有關。當於細胞膜上發現時，亦可於內質網上發現，因此任一可以TRPM8受器為標的之治療試劑，皆應容易進入細胞內空間。

內生性大麻素，極樂醯胺(anandamide)，已發現可拮抗TRPM8(De Petrocellis,2007)。作者亦發現刺激CB1受器會暫時拮抗同一細胞上表現之TRPM8受器。

申請案WO 2008/129258係描述使用含大麻素植物萃取物，預防或治療由於阻斷一或多種TRP通道而減輕之疾病或病症。並描述該含大麻素植物萃取物對於TRPA1與TRPM8通道之結合電位不同。該待預防或治療之疾病與病症包括：神經痛、發炎、血管收縮或癌症。

TRPM8受器亦見於乳癌、大腸癌與皮膚癌。

目前已發現CBD可降低調節DNA結合蛋白抑制劑，Id-1，在人類乳癌細胞中之表現(McAllister,2007)。可有效抑制Id-1表現之CBD濃度，係與用於抑制乳癌細胞增生與入侵表型者有關。CBD可抑制Id-1之mRNA與蛋白質表現量，具濃度依賴性趨勢。

CBD亦已知可抑制人類癌細胞之增生與入侵，經由差別調節ERK與ROS路徑，持續活化ERK路徑會導致降低調節Id-1之表現。亦發現CBD會加強調節前分化(pro-differentiation)試劑，Id-2。使用小鼠4T1細胞株與轉移性乳癌模式，CBD會明顯降低轉移性擴散。因此CBD對於患有繼發性腫瘤之乳癌患者應具有良好療效(McAllister,2009)。

最近的證據顯示CBD為一種GPR55拮抗劑；因而增加了在乳癌與其他腫瘤細胞上之此受器可能會受到CBD作用之可能性。GPR55耦合至G12/13上，並會於下游活化RhoA、rac1與cdc42小GTP水解酶；此路徑對於細胞骨架之重組與細胞遷移相當重要。已於人類早期乳癌細胞切片中發現G12/13的表現量增加，且抑制G13會降低體內乳癌細胞之轉移量(Kelly et al,2007)。

CBD之抗細胞增生作用，已於U87與U373人類神經膠質瘤細胞株上評估(Massi,2004)。CBD之抗細胞增生作用與誘發細胞凋亡有關，經細胞螢光分析與單股DNA染色實驗測定，此現象無法以大麻素拮抗劑回復。除了CBD之外，經皮下(s.c.)投藥至裸鼠中，劑量為0.5 mg/小鼠，會明顯抑制經皮下植入之U87人類神經膠質瘤細胞之生長。結論為，CBD可產生明顯之抗腫瘤活性，在體內或體外皆然，因此說明了可應用CBD作為化療試劑。

申請案WO/2006/037981描述使用大麻素CBD預防腫瘤細胞自無法控制生長之區域，移動或轉移至遠離原腫瘤位置之區域。CBD對於U87神經膠質瘤細胞之轉移可產生濃度依賴型抑制作用，經Boyden皿(Boyden chamber)定量。由於這些細胞會於細胞膜上表現大麻素CB1與CB2受器二者，此團隊亦評估CBD之抗轉移作用。

已發現大麻素在控制細胞存活/細胞死亡中扮演關鍵角色。目前已報導大麻素會誘發數種細胞之細胞增生、生長停止或細胞凋亡，包括神經細胞、淋巴細胞，以及各種轉型之神經與非神經細胞，且大麻素會誘發培養中之神經膠質瘤細胞產生細胞凋亡，並於體內使惡性神經膠質瘤退化(Guzman,2001)。

目前已導入一項關於THC對於復發性多形性膠質母細胞瘤病患之作用之前期臨床試驗(pilot clinical study)。此第I期試驗係由九位患有復發性多形性膠質母細胞瘤之病患組成，其以腫瘤內投藥方式投以THC。先前之標準療法(手術與放射性療法)對於這些病患無效，並有清楚的證據顯示腫瘤已惡化。此試驗之主要終點係以頭蓋骨內投以THC之安全性而判定。他們亦評估了THC對於存活期間與各種腫瘤細胞參數之作用。群體之存活中間數，自開始投以大麻素起算，為24週(95%信賴區間：15-33)。

申請案WO 2008/144475係描述以大麻二酚衍生物，不論是單獨或與THC或其衍生物組合，治療細胞增生疾病，包括癌症。

申請案WO 03/063847描述了使用CBDA或CBDVA作為活性藥物物質。此申請案之重點為提供一種治療噁心、急性嘔吐與運動疾病之治療。

申請案WO 2009/147439係描述使用大麻素之組合物，尤其是四氫大麻酚(THC)與大麻雙酚(CBD)，以製造用於治療癌症之藥物。尤其是待治療之癌症為腦癌，特別是神經膠質瘤；更特別的是多形性膠質母細胞瘤(GBM)。

申請案WO 2009/147438係描述使用一或多種大麻素，尤其是THC及/或CBD，與非-大麻素化療試劑組合，以製造用於治療癌症之藥物。尤其是待治療之癌症為腦癌，特別是神經膠質瘤；更特別的是多形性膠質母細胞瘤(GBM)。該非-大麻素化療試劑可為選擇性雌激素受器調節劑或烷化試劑。

這些文獻與相對應之專利申請案皆顯示出，可使用大麻素於癌症研究與治療領域中。

本發明之一目的在於發現一種增進及/或另一種癌症療法。為了此目的，使用經單離之植物大麻素與植物大麻素植物原料藥(BDS)，於不同方式之癌症治療中，且結果可推論辨識出數組植物大麻素，不論是經單離或為BDS形式，皆顯示出良好療效，與其他特定療法相較。

定義與縮寫

用於描述本發明某些術語之定義係詳列於下：

本發明中所描述之植物大麻素與其標準縮寫列於下表。

上表並不排除他項，僅用於列出本申請案辨識出之大麻素，以供參考。目前有超過60種不同之大麻素被辨識出，這些大麻素可分為不同族群如下：植物大麻素；內大麻素與合成大麻素。

“植物大麻素”為天然來源之大麻素，可發現於大麻植物中。植物大麻素可為經單離之大麻素或作為植物原料藥。

“經單離之大麻素”係定義為萃取自大麻植物，並經純化至所有其他成分，如次要與小量之大麻素與非大麻素分液皆被移除，之植物大麻素。

“植物原料藥”或“BDS”係依據美國衛生與人類服務部，食品與藥品監督管理中心之產業植物性藥物產物草稿指南，200年8月，中有關藥品評估與研究之定義：“一種衍生自一或多種植物、藻類或微真菌類之藥物。以一或多種下列流程：研碎、水煎、表現、水萃取、乙醇萃取或其他類似方法，自植物原始材料中製備”。植物原料藥並不包括衍生自天然來源，經高度純化或經化學性修飾之物質。因此，在大麻案例中，衍生自大麻植物之BDS並不包括高度純化之藥典級大麻素。

“內大麻素”為人類或動物體內之內生性製造之大麻素。內大麻素系統之加強或降低調節，可用於治療某些疾病或病症。

“合成大麻素”為使用化學方式製造之具有大麻素-類似結構之物質。取決於製造方法，該合成大麻素可包含大麻素之外消旋混合物，相對於經單離之大麻素，其為單一鏡像異構物。

目前發現植物大麻素有中性(去羧酸形式)或羧酸形式，取決於萃取大麻素所使用之方法。例如，已知將羧酸形式加熱會導致大部分之羧酸形式去羧酸化，形成中性形式。

植物大麻素亦可產生戊基(5個碳原子)或丙基(3個碳原子)變異物。起初認為丙基變異物與戊基變異物具類似性質，但最近的研究發現並非如此。例如，植物大麻素THC已知為CB1受器增效劑，而丙基變異THCV則被發現為CB1受器拮抗劑，表示其具有幾乎完全相反之作用。

在本發明中，BDS被認為具有兩種成分：含植物大麻素成分，以及含非植物大麻素成分。較佳該含植物大麻素成分為較大成分，包含大於總BDS之50%(w/w)，且該含非植物大麻素成分為較小成分，包含小於總BDS之50%(w/w)。

BDS中含植物大麻素成分之量可大於總萃取物之55%，至60%、65%、70%、75%、80%至85%，或更多。實際量可能取決於所使用之起始物質與所使用之萃取方法。

BDS中之“主要植物大麻素”為其存在量高於其他植物大麻素之植物大麻素。較佳該主要植物大麻素之存在量大於總萃取物之40%(w/w)。更佳該主要植物大麻素之存在量大於總萃取物之50%(w/w)。尤佳該主要植物大麻素之存在量大於總萃取物之60%(w/w)。

BDS中該主要植物大麻素之量較佳大於該含植物大麻素分液之75%，更佳大於該含植物大麻素分液之85%，尤佳大於該含植物大麻素分液之95%。

在某些案例中，此主要大麻素為CBDV或THCVA，在BDS中該主要植物大麻素之量較低。於此，該植物大麻素之量較佳大於含植物大麻素分液之55%。

BDS中之“次要植物大麻素”為具有明顯比例之植物大麻素。較佳該次要植物大麻素之存在量大於總萃取物之5%(w/w)，更佳大於總萃取物之10%(w/w)，尤佳大於總萃取物之15%(w/w)。某些BDS會具有二或多種次要植物大麻素，其存在明顯量。然而，並非所有BDS都會有次要植物大麻素。例如，CBG BDS並不具有次要植物大麻素在其萃取物中。

BDS中之“小量植物大麻素”可用於描述所有植物大麻素之剩餘成分，一旦定出主要與次要植物大麻素之後。較佳該小量植物大麻素之總存在量小於總萃取物之10%(w/w)，更佳小於總萃取物之5%(w/w)，尤佳該小量植物大麻素之存在量小於總萃取物之2%(w/w)。

一般BDS中之含非植物大麻素之成分包含萜類、固醇類、三酸甘油酯、烷類、鯊烯(squalenes)、生育醇類與類胡蘿蔔素。

這些化合物可能在BDS之藥物學上扮演重要角色，不論是單獨使用或是與植物大麻素組合。

“萜類分液”相當重要，可分為多種萜類：單萜或倍半萜。這些萜類成分可進一步以類似大麻素之方式定義。

BDS中含非植物大麻素之成分量可小於總萃取物之45%，至40%、35%、30%、25%、20%至15%或更低。實際量可能取決於所使用之起始物質與所使用之萃取方法。

BDS中之“主要單萜”為其存在量高於其他單萜之單萜。較佳該單萜之存在量大於萜類總含量之20%(w/w)。更佳該主要單萜之存在量大於萜類總含量之30%(w/w)，更佳大於萜類總含量之40%(w/w)，尤佳大於萜類總含量之50%(w/w)。該主要單萜較佳為月桂油烯(myrcene)或蒎烯(pinene)。在某些案例中，可為兩種主要單萜。而此案例中該主要單萜較佳為蒎烯(pinene)，及/或月桂油烯(myrcene)。

BDS中之“主要倍半萜”為其存在量高於其他倍半萜之倍半萜。較佳該主要倍半萜之存在量大於萜類總含量之20%(w/w)，更佳大於萜類總含量之30%(w/w)。該主要倍半萜較佳為石竹烯(caryophyllene)及/或蛇麻烯(humulene)。

該倍半萜成分可具有“次要倍半萜”。該次要單萜較佳為蒎烯(pinene)，其存在量較佳大於萜類總含量之5%(w/w)，更佳該次要萜類之存在量大於萜類總含量之10%(w/w)。

該次要倍半萜較佳為蛇麻烯(humulene)，其較佳之存在量大於萜類總含量之5%(w/w)，更佳該次要萜類之存在量大於萜類總含量之10%(w/w)。

另一植物性萃取物可藉由引入單離之植物大麻素至非大麻素植物分液中而製備，因此可由無大麻素植物或不含CBG之BDS中獲得。

發明概要

依據本發明第一個觀點，係提供一或多種用於治療前列腺癌之植物大麻素，選自於由：THCV、CBDV、THCVA、THCA、CBDA、CBD、CBG與CBC組成之族群，其中，當存在時，THCVA係以單離之植物大麻素形式存在，而THCA、CBDA、CBD、CBG或CBC係以BDS形式存在，且THCV或CBDV可以單離形式或BDS形式存在。

依據本發明第二個觀點，係提供一種使用一或多種植物大麻素，以製造治療前列腺癌之藥物之用途，該植物大麻素係選自於由：THCV、CBDV、THCVA、THCA、CBDA、CBD、CBG與CBC組成之族群，其中，當存在時，THCVA係以單離之植物大麻素形式存在，而THCA、CBDA、CBD、CBG或CBC係以BDS形式存在，且THCV或CBDV可以單離形式或BDS形式存在。

依據本發明第三個觀點，係提供一種治療前列腺癌病患之方法，包含投以該病患有效劑量之一或多種植物大麻素，其選自於由：THCV、CBDV、THCVA、THCA、CBDA、CBD、CBG與CBC組成之族群，其中，當存在時，THCVA係以單離之植物大麻素形式存在，而THCA、CBDA、CBD、CBG或CBC係以BDS形式存在，且THCV或CBDV可以單離形式或BDS形式存在。

在一實施例中，該一或多種植物大麻素為丙基變異植物大麻素。

在第二實施例中，該一或多種植物大麻素為酸形式。

在又一實施例中，該一或多種植物大麻素為中性或去羧基化形式。

在一較佳實施例中，該植物大麻素為CBG，且為BDS形式。

較佳該前列腺癌為荷爾蒙敏感型前列腺癌。

在另一實施例中，該植物大麻素為單離形式之THCVA。

在又一實施例中，該前列腺癌為荷爾蒙不敏感型前列腺癌，且該植物大麻素為CBD，且為BDS形式，或該植物大麻素為CBDV，且為BDS形式。

較佳該一或多種植物大麻素係組合使用，或作為化療試劑及/或抗雄性激素劑之輔助療法。

較佳該化療試劑為細胞分裂抑制劑。該細胞分裂抑制劑較佳來自紫杉烷(taxane)藥物類。更佳該來自紫杉烷(taxane)藥物類之細胞分裂抑制劑，係選自於：多西他賽(docetaxel)；拉若他賽(larotaxel)；奧塔他賽(ortataxel)；太平洋紫杉醇(paclitaxel)；以及泰西他賽(tesetaxel)。

當該一或多種植物大麻素與化療試劑及/或抗雄性激素劑組合使用時，該植物大麻素較佳為CBG或CBD，其可為BDS形式。

在又一實施例中，該一或多種植物大麻素係用於減緩前列腺癌腫瘤之生長，或減少其體積。

依據本發明之第四觀點，係提供一或多種丙基植物大麻素或酸類植物大麻素之用途，以於病患體內降低調節ERK之訊息傳遞，並影響：抗細胞增生、抗細胞轉移或抗血管新生之一或多者。

依據本發明之第五觀點，係提供一或多種丙基植物大麻素或酸類植物大麻素之用途，以製造用以於病患體內降低調節ERK之訊息傳遞，並影響：抗細胞增生、抗細胞轉移或抗血管新生之一或多者之藥物。

依據本發明之第六觀點，係提供一種治療癌症病患之方法，包含投以該病患有效劑量之一或多種丙基或酸類植物大麻素，以於病患體內降低調節ERK訊息傳遞，並影響：抗細胞增生、抗細胞轉移或抗血管新生之一或多者。

較佳該一或多種植物大麻素選自於由：THCV、CBGV、CBDV、CBGA與CBDA組成之族群。

較佳該一或多種植物大麻素為單離形式。

較佳該一或多種丙基或酸類植物大麻素用於治療肺癌、前列腺癌或乳癌。

較佳該一或多種丙基或酸類植物大麻素用於治療骨或淋巴轉移。

依據本發明之第七觀點，係提供一或多種植物大麻素酸之用途，CBDA或CBDVA除外，用於藥物中

依據本發明之第八觀點，係提供一或多種植物大麻素酸之用途，用於治療癌症。

依據本發明之第九觀點，係提供一或多種植物大麻素酸之用途，用於製造治療癌症之藥物。

依據本發明之第十觀點，係提供一種治療癌症病患之方法，包含投以該病患治療劑量之一或多種植物大麻素酸。

較佳該一或多種植物大麻素酸為BDS形式。

較佳該待治療之癌症為前列腺癌、乳癌、大腸癌、肺癌、神經膠質瘤或皮膚癌。

較佳該植物大麻素酸係選自於由：THCA、CBGA與CBDA組成之族群。

更佳係提供一種植物大麻素THCA與CBDA及/或CBGA之組合。

依據本發明之第十一個觀點，係提供一種大麻植物萃取物，包含一含植物大麻素成分，以及一含非植物大麻素成分，使用作為藥物，其中該含植物大麻素成分包含大麻植物萃取物之至少50%(w/w)，且該含非植物大麻素成分包含單萜分液與倍半萜分液，其中該主要單萜次分液係選自於月桂油烯(myrcene)或蒎烯(pinene)，以及該主要倍半萜次分液係選自於石竹烯(caryophyllene)或蛇麻烯(humulene)。

依據本發明第十二個觀點，係提供一種使用大麻植物萃取物，包含一含植物大麻素成分，以及一含非植物大麻素成分，以製造藥物之用途，其中該含植物大麻素成分包含大麻植物萃取物之至少50%(w/w)，且該含非植物大麻素成分包含單萜分液與倍半萜分液，其中該主要單萜次分液係選自於月桂油烯(myrcene)或蒎烯(pinene)，以及該主要倍半萜次分液係選自於石竹烯(caryophyllene)或蛇麻烯(humulene)。

依據本發明第十三個觀點，係提供一種治療病患之方法，包含投以該病患治療有效劑量之大麻植物萃取物，該萃取物包含一含植物大麻素成分，以及一含非植物大麻素成分，其中該含植物大麻素成分包含大麻植物萃取物之至少50%(w/w)，且該含非植物大麻素成分包含單萜分液與倍半萜分液，其中該主要單萜次分液係選自於月桂油烯(myrcene)或蒎烯(pinene)，以及該主要倍半萜次分液係選自於石竹烯(caryophyllene)或蛇麻烯(humulene)。

較佳該主要單萜次分液包含月桂油烯(myrcene)，以及該次要單萜次分液包含蒎烯(pinene)。在另一實施例中，該主要單萜次分液包含月桂油烯(myrcene)與蒎烯(pinene)二者。

較佳該主要倍半萜次分液包含石竹烯(caryophyllene)，以及次要倍半萜次分液包含蛇麻烯(humulene)。

較佳該主要單萜選自於由：THCV、CBDV、CBGV、THCVA、THCA、CBDA、CBG、THC、CBD與CBC組成之族群。

較佳該含非植物大麻素成分更包含選自於由：二萜；三萜；固醇；三酸甘油酯；烷類；鯊烯；生育酚與類胡蘿蔔素組成族群之一或多者。

在一實施例中，該大麻植物萃取物包含主要植物大麻素CBG，且該含植物大麻素之成分包含大麻植物萃取物之61-75%(w/w)。較佳該萃取物更包含大於總大麻植物分液之88%(w/w)之CBG。

在另一實施例中，該大麻植物萃取物包含主要植物大麻素THC，且該含植物大麻素之成分包含大麻植物萃取物之77-94%(w/w)。較佳該萃取物更包含總大麻植物萃取物分液之78-95%(w/w)之THC。

在另一實施例中，該大麻植物萃取物包含主要植物大麻素CBD，且該含植物大麻素之成分包含大麻植物萃取物之76-96%(w/w)。較佳該萃取物包含總大麻植物萃取物分液之72-88%(w/w)之CBD。

在又一實施例中，該大麻植物萃取物包含主要植物大麻素CBC，且該含植物大麻素之成分包含大麻植物萃取物之49-60%(w/w)。較佳該萃取物更包含總大麻植物萃取物分液之71-87%(w/w)之CBC。更佳該萃取物更包含次要植物大麻素CBD與CBL。尤佳該CBD包含總植物大麻素分液之6.5-8%(w/w)，以及該CBL包含總植物大麻素分液之5.8-7.1%(w/w)。

在又一實施例中，該大麻植物萃取物包含主要植物大麻素THCV，且該含植物大麻素之成分包含大麻植物萃取物之74-90%(w/w)。較佳該萃取物包含植物總大麻素分液之71-87%(w/w)之THCV。更佳該萃取物更包含次要植物大麻素THC。尤佳該THC包含總植物大麻素分液之14.8-18%(w/w)。

在又一實施例中，該大麻植物萃取物包含主要植物大麻素CBDV，且該含植物大麻素之成分包含大麻植物萃取物之64-78%(w/w)。較佳該萃取物更包含總植物大麻素分液之52-64%(w/w)之CBDV。尤佳該萃取物更包含次要植物大麻素CBD與CBCV。特佳該CBD包含總植物大麻素分液之22.4-27.4%(w/w)，以及該CBCV包含總植物大麻素分液之5.5-6.7%(w/w)。

在又一實施例中，該大麻植物萃取物包含主要植物大麻素CBGV，且該含植物大麻素之成分包含大麻植物萃取物之54-66%(w/w)。較佳該萃取物包含總植物大麻素分液之68-84%(w/w)之CBGV。更佳該萃取物更包含次要植物大麻素CBG。尤佳該CBG包含總植物大麻素分液之19-23%(w/w)。

在又一實施例中，該大麻植物萃取物包含主要植物大麻素THCA，且該含植物大麻素之成分包含大麻植物萃取物之54-66%(w/w)。較佳該萃取物更包含總植物大麻素分液之71-86%(w/w)之THCA。更佳該萃取物更包含次要植物大麻素THC。尤佳該THC包含總植物大麻素分液之13.4-16.4%(w/w)。

在又一實施例中，該大麻植物萃取物包含主要植物大麻素CBDA，且該含植物大麻素之成分包含大麻植物萃取物之71-86%(w/w)。較佳該萃取物更包含總植物大麻素分液之78-86%(w/w)之CBDA。更佳該萃取物更包含次要植物大麻素CBD。尤佳該CBD包含總植物大麻素分液之6.1-7.5%(w/w)。

在又一實施例中，該大麻植物萃取物包含主要植物大麻素THCVA，且該含植物大麻素之成分包含大麻植物萃取物之62-75%(w/w)。較佳該萃取物更包含總植物大麻素分液之53-65%(w/w)之THCVA。更佳該萃取物更包含次要植物大麻素THCV。尤佳該THCV包含總植物大麻素分液之17.3-21.2%(w/w)。

依據本發明第十四個觀點，係提供一種經單離之CBD、CBG、CBDV、CBD BDS、CBG BDS，及/或CBDV BDS，用於治療大腸癌之癌前症狀。

依據本發明第十五個觀點，係提供一種使用經單離之CBD、CBG、CBDV、CBD BDS、CBG BDS，及/或CBDV BDS，以製造治療大腸癌之癌前症狀之藥物之用途。

依據本發明第十六個觀點，係提供一種治療患有大腸癌癌前症狀之病患之方法，包含投以該病患治療有效劑量之經單離之CBD、CBG、CBDV、CBD BDS、CBG BDS，及/或CBDV BDS。

在一實施例中，該經單離之CBD、CBG、CBDV、CBD BDS、CBG BDS，及/或CBDV BDS，係用於治療大腸之異常腺窩。

在又一實施例中，該經單離之CBD、CBG、CBDV、CBD BDS、CBG BDS，及/或CBDV BDS，係用於治療大腸息肉。

依據本發明第十七個觀點，係提供一種植物大麻素與非大麻素之化療試劑之組合物，用於治療神經膠質瘤。

依據本發明第十八個觀點，係提供一種使用植物大麻素與非大麻素之化療試劑之組合物，以製造治療神經膠質瘤之藥物之用途。

依據本發明第十九個觀點，係提供一種治療神經膠質瘤病患之方法，包含投以該病患治療有效劑量之植物大麻素與非大麻素之化療試劑之組合物。

較佳該植物大麻素與非大麻素之化療試劑之組合物，係經包裝，用以單獨、同時或依序投藥。

較佳該植物大麻素為THC與CBD。

較佳該植物大麻素若單獨用於治療神經膠質瘤時，其劑量為次有效(sub-effective)。

較佳該化療試劑為替馬唑醯胺(temazolamide)。

較佳該替馬唑醯胺(temazolamide)若單獨用於治療神經膠質瘤時，其劑量為次有效(sub-effective)。

圖式簡單說明

本發明之各實施例將以後附之圖示進行說明，其中：第1圖顯示植物原料藥(BDS)之製備流程；第2圖顯示大麻素對於荷爾蒙不敏感型前列腺癌細胞株(DU-145)，以及荷爾蒙敏感型前列腺癌細胞株(LNCaP)之細胞凋亡之影響；第3圖顯示真實與重組之大麻素BDS對於TRPM8拮抗作用之影響；第4(a-f)圖顯示大麻素單獨使用或與化療試劑組合，於皮下異種移植模式中，對於荷爾蒙不敏感型前列腺癌細胞株(DU-145)以及荷爾蒙敏感型前列腺癌細胞株(LNCaP)之影響；第5(a-c)圖顯示大麻素經單離之CBD與CBD BDS對於小鼠之大腸癌致癌機制之影響；第6(a-c)圖顯示大麻素經單離之CBG、經單離之CBDV、CBG BDS與CBDV BDS，對於小鼠之大腸癌致癌機制之影響。

較佳實施例之詳細說明

植物大麻素之使用，不論是單離形式或與其所有共萃取成分一起，係描述於下列範例中。

範例1 大麻素BDS之植物性生產與製備

植物性粗產物(BRM)係由大麻(Cannabis sativa L.)之化學型變異物(chemotypes)中獲得，其已發育成可特異性地製造高含量之特定植物大麻素作為主要植物大麻素。大麻素CBG為THC、CBD與CBC生合成路徑之前驅分子。其他大麻素會由這些大麻素形成。由該植物製造之主要大麻素係以羧酸形式存在於該植物材料中，其他次要或小量大麻素亦是如此。大麻素之羧酸形式通常在處理BRM成為植物原料藥(BDS)之過程中，會脫去羧酸成為中性形式。

這些用於製備大麻素BDS之植物可為野生型，或特定培育為可製造某一大麻素作為主要大麻素之植物。這些植物稱之為‘化學型(chemotypes)’。例如，文獻(De Meijer & Hammond,2005)已描述可選擇性培育高CBG含量之植物。可產生大量CBG之野生型植物，已於歐洲大麻纖維族群中發現。

植物原料藥(BDS)係製備自BRM，為適用於進一步製劑及/或研究目的之萃取物。這些萃取物稱之為植物原料藥。該方法之簡要總覽係提供於第1圖。萃取流程之條件係經最佳化，以取得大麻素含量與非大麻素分液間之平衡，並具有令人滿意之產率。例如，CBG BDS之大麻素含量實際上為100% CBG，僅含有非常少量之其他大麻素存在。

不含大麻素之BDS可製備自CBG BDS或無大麻素之植物，如USO-31。由於CBG為大麻CBG BDS中存在之主要大麻素，因此要移出存在之CBG便相對容易，使用已知標準技術如管柱層析法即可。不含CBG之萃取物可用於評估與不含大麻素之分液相關之藥理學。可將BDS完全分開，使得各化合物可移出進行純化，而剩餘的成分結合，在移除溶劑後產生不含選定化合物之BDS。因此可製得不含CBG之萃取物，以評估大麻素與非-大麻素分液間之任何協同性。

亦可製備經單離之植物大麻素。如上所述，可使用管柱層析法將CBG自CBG BDS中分離出，以產生大於99%之純度。該BDS與經單離之植物大麻素，可用於比較BDS中主要植物大麻素與其他植物大麻素，以及非大麻素組成間之效用與任一協同性。

範例2 BDS中之植物大麻素與非大麻素成分

下列範例說明組成每一BDS之不同植物大麻素成分。在每一表格中，該主要植物大麻素以粗字標示。

BDS係使用液態CO₂ 萃取，之後經高效液態層析法(HPLC)，分析每一大麻素BDS中各不同之大麻素成分。

在下表中，描述每一代表性BDS中主要、次要與小量植物大麻素之平均含量。熟習此技術者應瞭解到由於BDS係由大麻植物中萃取出，因此它們的組成會有某些程度之變異。一般每一植物大麻素成分之含量會不同，範圍在±10%(w/w)內。然而，取決於起始植物原料以及所使用之萃取方法，這些含量會在小至±5%，大至±50%(w/w)間變化。

CBG BDS中之含植物大麻素分液總量包含總BDS之約61-75%(w/w)。

CBG BDS中之主要植物大麻素分液含量，為含植物大麻素分液之約88-100%(w/w)。

THC BDS中含植物大麻素分液之總量包含總BDS之約77-94%(w/w)。

THC BDS中之主要植物大麻素，為含植物大麻素分液之約78-95%(w/w)。

CBD BDS中之含植物大麻素分液總量包含總BDS之約79-96%(w/w)。

CBD BDS中之主要植物大麻素含量，為含植物大麻素分液之約72-88%(w/w)。

CBC BDS中之含植物大麻素分液總量包含總BDS之約49-60%(w/w)。

CBC BDS中之主要植物大麻素為含植物大麻素分液之約71-87%(w/w)。該CBC BDS亦具有兩種次要大麻素：CBD，其量為含植物大麻素分液之約6.5-8%(w/w)，以及CBL，其量為含植物大麻素分液之約5.8-7.1%(w/w)。

THCV BDS中之含植物大麻素分液總量包含總BDS之約74-90%(w/w)。

THCV BDS中之主要植物大麻素含量為含植物大麻素分液之約71-87%(w/w)。該THCV BDS亦具有次要大麻素THC，其量為含植物大麻素分液之約14.8-18%(w/w)。

CBDV BDS中之含植物大麻素分液總量包含總BDS之約64-78%(w/w)。

CBDV BDS中之主要植物大麻素含量為含植物大麻素分液之約52-64%(w/w)。該CBDV BDS亦具有兩種次要大麻素：CBD，其存在量為含植物大麻素分液之約22.4-27.4%(w/w)，以及CBCV，其存在量為含植物大麻素分液之約5.5-6.7%(w/w)。

CBGV BDS之含植物大麻素分液總量包含總BDS之約54-66%(w/w)。

CBGV BDS中之主要植物大麻素含量為含植物大麻素分液之約68-84%(w/w)。該CBGV BDS亦具有次要大麻素CBG，其存在量為含植物大麻素分液之約19-23%(w/w)。

THCA BDS之含植物大麻素分液之總量包含總BDS之約54-66%(w/w)。

THCA BDS中之主要植物大麻素含量為含植物大麻素分液之約71-86%(w/w)。THCA BDS亦具有次要大麻素THC，其存在量為含植物大麻素分液之約13.4-16.4%(w/w)。

CBDA BDS之含植物大麻素分液總量包含總BDS之約71-86%(w/w)。

CBDA BDS中之主要植物大麻素含量為含植物大麻素分液之約78-96%(w/w)。該CBDA BDS亦具有次要大麻素CBD，其存在量為含植物大麻素分液之約6.1-7.5%(w/w)。

THCVA BDS之含植物大麻素分液之總量包含總BDS之約37-45%(w/w)。

THCVA BDS中主要植物大麻素之含量為含植物大麻素分液之約53-65%(w/w)。THCVA BDS亦具有次要大麻素THCV，其存在量為含植物大麻素分液之約17.3-21.2%(w/w)。

在下表中詳細列出每一大麻素BDS中之大麻素分液與非大麻素分液之含量，以及每一BDS中大麻素含量佔總大麻素之百分比。如前所述，熟習此技術者應瞭解到，由於起始植物原料之天然性質，這些值會變化。

希望能使含植物大麻素分液中主要植物大麻素之含量最大化，然而，在某些情況下，主要與次要大麻素間有協同作用，會增強藥效。

亦希望含植物大麻素分液、含非植物大麻素分液，以及主要植物大麻素之百分比範圍各不相同。在某些案例中，此變化範圍可小至±5%，大至±10%，大至±25%，較佳不大於±50%。

植物大麻素BDS之非大麻素成分在BDS藥理學上扮演重要角色。因此，將萜類分類如下。下表說明CBD化學變型，其為植物大麻素高含量植物之代表，中之萜類分佈。五株植物皆新鮮收穫，並使用蒸氣蒸餾法萃取。主要單萜與倍半萜以粗字標示。

該含單萜分液包含總萜類分液之約52-64%(w/w)。

單萜分液中之主要單萜月桂油烯(myrcene)含量為單萜分液之約61-75%(w/w)。該單萜分液亦具有次要單萜蒎烯(pinene)，其存在量為單萜分液之約16.3-20%(w/w)。

該含倍半萜分液包含總萜類分液之約27-32%(w/w)。

專利申請案號PCT/GB2008/001837描述製造‘無大麻素’植物。這些植物係由選擇性培育而生產，以產生大麻(Cannabis sativa L.)植物，其含有類似於會製造大麻素之大麻(Cannabis sativa L.)植物之萜類分佈，但不產生任何大麻素。這些植物可用於製造不含大麻素之植物萃取物，使用作為實驗與臨床試驗中之控制組植物。該植物中所產生之萜類分析列於下表。主要單萜與倍半萜以粗字標示。

該含單萜分液包含總萜類分液之約65-79%(w/w)。

該無大麻素植物發現包含有兩種主要單萜：蒎烯(pinene)與月桂油烯(myrcene)。該單萜中之主要單萜月桂油烯(myrcene)含量為單萜分液之約37-45%(w/w)。該單萜中之主要單萜蒎烯(pinene)含量為單萜分液之約37-45%(w/w)。

該含倍半萜分液包含總萜類分液之約25-31%。

倍半萜分液中之主要倍半萜石竹烯(caryophyllenes)為倍半萜分液之約35-43%(w/w)。該倍半萜分液亦具有次要倍半萜蛇麻烯(humulene)，其存在量為倍半萜分液之約16-20%(w/w)。

範例3 植物大麻素對於荷爾蒙不敏感型前列腺癌細胞株(DU-145) 與荷爾蒙敏感型前列腺癌細胞株(LNCaP)之細胞凋亡之影響

係測試CBDV BDS、CBD BDS、THCVA BDS、THCV BDS、經單離之THCV與經單離之THCVA，對於兩種前列腺癌細胞株之細胞凋亡之影響，使用化學冷光試驗，觀察caspase 3/7之釋放。係測試兩種不同濃度之大麻素：低劑量(10 μM)與高劑量(25 μM)。每一植物大麻素之化學冷光值係列於第2圖中。

在荷爾蒙不敏感型前列腺癌細胞株(DU-145)中，化學冷光最高值，以及最高之前細胞凋亡作用，係於低劑量之CBDV BDS，以及高劑量之單離THCVA，濃度為25 μM之經純化大麻素，中觀測到。高劑量之THCV BDS、CBD BDS與單離之THCV亦顯示出細胞凋亡情況高於控制組。

荷爾蒙敏感型前列腺癌細胞株(LNCaP)中，化學冷光最高值，以及最高之前細胞凋亡作用，係於高劑量之單離THCVA中觀測到。低與高劑量之CBDV BDS亦顯示對於癌細胞具有細胞凋亡作用。

這些數據顯示植物大麻素BDS與單離之植物大麻素可用於治療癌症，由於其對於癌細胞可發揮細胞凋亡作用。

範例4 植物大麻素對於G-蛋白耦合受器GPR55之作用

進行ERK Alphascreen試驗，使用GPR55-HEK細胞。所測試之不同大麻素，展現出對於GPR55不同之藥理特性，如下表4.1所列。

觀察到ERK訊息傳遞上之明顯降低，顯示會導致誘發細胞凋亡(Changet al .,2003)。

這些資料顯示癌細胞上表現之GPR55可被所測試之所有植物大麻素拮抗，使其成為癌症治療之良好標的藥物。

範例5 植物大麻素對於單醯基甘油酯酶(MAGL)與二醯基甘油酯酶(DAGL)之抑制作用

係測試植物大麻素BDS THCA、CBN、CBGA、CBDA與CBCV之作用，以測定其是否可抑制MAGL與DAGL酵素，此二酵素可水解內生性大麻素2-AG為花生四烯酸與甘油。這些實驗之結果列於下表5.1。

如上所示，該植物大麻素THCA在抑制DAGL方面最有效，而所有的植物大麻素酸(THCA、CBDA與CBGA)皆可有效抑制MAGL。這些數據顯示這些植物大麻素可用於治療癌症，由於它們可預防內生性大麻素2-AG之水解，因而預防癌細胞之形成。

遂進行額外的實驗，測定植物大麻素BDS是否可更有效抑制MAGL，與其代表性經純化之成分相較。為了此實驗，CBG BDS係使用作為此BDS，因為它是最容易純化與重組的。係使用四種不同測試物質：CBG BDS、經單離之CBG、不含CBG之CBG BDS與CBG經重組之BDS，其中該不含CBG之BDS(如範例1所製備)係加入經單離之CBG，該CBG之濃度與CBG BDS中的相同。下表5.2詳列出數據。

如上表5.2所示，CBG BDS具有類似於重組BDS之藥效。這些數據顯示主要植物大麻素與BDS中其餘之大麻素及非大麻素成分間具有協同作用。

這些數據顯示使用含非大麻素成分之植物大麻素BDS，可更有效地治療癌症，與經單離之植物大麻素相較。

範例6 植物大麻素BDS與重組植物大麻素BDS對於TRPM8拮抗作用之影響

範例5中所描述之CBG BDS與重組CBG BDS係用於決定其對於TRPM8拮抗作用之效用。為了完整性，亦測試不含CBG之BDS與經純化之CBG。亦觀察對於0.25 μM依西林(icilin)之反應百分比，結果列於第3圖。

由此可見，CBG BDS與重組性CBG BDS二者皆可提供相當高之反應，與單離之CBG或不含CBG之BDS相較。這些數據再次說明BDS中主要植物大麻素與其他成分之協同作用。

由這些數據可推測，使用植物大麻素BDS可為一更有效之癌症治療選擇。

範例7 植物大麻素對於荷爾蒙不敏感型前列腺癌細胞株(DU-145)，以及荷爾蒙敏感型前列腺癌細胞株(LNCaP)之細胞存活率之影響(MTT試驗)

細胞係於FBS存在下種入6孔多孔盤中，密度為8x10⁴ 細胞/孔(DU-145)或1x10⁵ 細胞/孔(LNCaP)。7小時後，細胞不加入二氫睪固酮(DHT)15小時，並以濃度遞增之化合物處理24或48小時(處理過程中維持血清不存在)。細胞之存活率係以MTT染色法評估。

植物大麻素BDS與其各自之單離植物大麻素，係於荷爾蒙不敏感型前列腺癌細胞株(DU-145)，以及荷爾蒙敏感型前列腺癌細胞株(LNCaP)二者上測試。此實驗選用三種不同之植物大麻素：CBG BDS與其單離之化合物、CBC BDS與其單離之化合物，以及CBD BDS與其單離之化合物。

表7.1詳細列出在不加入DHT細胞中觀察到的數據。由此可知，在每一案例中，BDS對於前列腺癌細胞之存活率都具有較高的效用，與其各自之單離植物大麻素相較。

此實驗係於加入DHT處理之荷爾蒙不敏感型(DU-145)前列腺癌細胞株，以及荷爾蒙敏感型(LNCaP)前列腺癌細胞株二者上重複進行。於此僅將CBG BDS與單離之CBG之結果列於下表7.2。

如表7.2所示，在加入DHT之細胞中，DHT之存在會強烈影響植物大麻素BDS與單離之植物大麻素之效用。

這些數據再次說明植物大麻素BDS之效用更好，因此為用於治療癌症之較佳化合物。

範例8 在皮下異種移植(xenograft)模式中，植物大麻素單獨使用或與化療試劑或抗雄性激素劑組合，對於荷爾蒙不敏感型前列腺癌細胞株(DU-145)，以及荷爾蒙敏感型前列腺癌細胞株(LNCaP)之影響

本實驗使用植物大麻素CBG BDS與CBD BDS，說明植物大麻素BDS之體內效用。

癌細胞係於體外保存於適當之培養液中，並收穫，以培養液清洗，並重新懸浮於matrigel中，以準備進行體內投予。200μl之1-2x10⁷ 個細胞係於皮下注射至小鼠左脅。小鼠經麻醉，並皮下植入0.5mg之5-α-二氫睪固酮微粒(21日釋放型)至每一小鼠之頸背，以刺激腫瘤生長，之後將傷口縫合。

一旦植入之腫瘤細胞達100-200 mm之間(2-3週)，小鼠便會被分派到處理組中。於第17天開始處理。植物大麻素BDS以i.p.投藥，於接下來的25天每日投藥一次，劑量為1、10 & 100mg/kg大麻素BDS。

在另一實驗中，化療試劑剋癌易(taxotere)(5mg/kg)係i.v.投藥，每週一次，單獨使用或與100mg/kg植物大麻素BDS組合。

化療試劑剋癌易(taxotere)係作為紫杉烷(taxane)藥物類之範例，其為細胞分裂抑制劑。

在另一實驗中，CBD BDS，劑量為100 mg/kg之CBD，係評估其與25或50mg/kg之抗雄性激素劑必可魯醯胺(bicalutamide)組合之作用。

該抗雄性激素劑必可魯醯胺(bicalutamide)為用於治療前列腺癌之荷爾蒙療法之一範例。荷爾蒙療法會干擾體內某些荷爾蒙之製造。前列腺癌(當其位於荷爾蒙敏感期)需要雄性荷爾蒙睪固酮(雄性激素)維持生長。該前列腺癌細胞在其表面具有受器，當荷爾蒙與其結合時，會使癌細胞生長。

抗雄性激素劑必可魯醯胺(bicalutamide)在結構上類似於睪固酮，並可阻止睪固酮結合至癌細胞上。沒有睪固酮，癌細胞生長便會減緩，甚至完全停止生長，因此腫瘤會縮小。

有經驗的技術人員會每日評估小鼠的情況，進行4-5週。腫瘤大小於第7天紀錄(以測徑器測量長度與寬度，並計算腫瘤橫截面之面積與體積)，每週紀錄三次，每週測量體重。

人體等效劑量(HED)可使用下式評估：

小鼠之K_m 為3，人類之K_m 為37。

第4(a-f)圖詳細列出這些實驗中所紀錄之腫瘤體積與重量。

第4 a)圖顯示腫瘤之生長速率被CBG BDS抑制，為劑量依賴性。與載劑組相較時，劑量10與100 mg/kg BDS之作用相當明顯。此外，剋癌易(taxotere)會明顯抑制生長速率與最終腫瘤體積，而在CBG BDS與剋癌易(taxotere)共同處理組中，觀測到些許協同作用。

第4 b)圖顯示腫瘤之生長速率被CBD BDS抑制，為劑量依賴性。與載劑組相較時，劑量10與100 mg/kg BDS之作用相當明顯。類似於CBG BDS之實驗，剋癌易(taxotere)會明顯抑制生長速率與最終腫瘤體積，而在CBD BDS與剋癌易(taxotere)共同處理組中，觀測到些許協同作用。

第c)與d)圖說明在荷爾蒙不敏感型前列腺癌細胞株(DU-145)中，僅有少許腫瘤體積抑制作用。

第4 e)與f)圖中之數據顯示，以CBD BDS與抗雄性激素劑必可魯醯胺(bicalutamide)組合處理後之腫瘤體積與重量。這些數據顯示組合此二者，尤其是低劑量之必可魯醯胺(bicalutamide)，可使腫瘤體積與重量減少，與單獨使用必可魯醯胺(bicalutamide)或CBD BDS相較。

這些數據皆顯示植物大麻素BDS，為非常有效之癌症治療藥物，尤其是與另一化合物，如抗雄性激素劑或化療試劑組合時。

範例9 植物大麻素對於乳癌細胞之細胞存活率之影響(Alamar藍試驗)

細胞係於FBS存在下種入6孔多孔盤中，並以濃度遞增之化合物處理72小時。細胞存活率係以Alamar藍染色法評估。

經單離之植物大麻素係於MDA-MB-231乳癌細胞株上測試，以測定植物大麻素是否對於前列腺癌以外之癌細胞亦有效。本實驗選用之經單離植物大麻素為：CBGA、CBDA、CBDV、CBD、THCV與THC。

下表9.1列出可殺死乳癌細胞之大麻素效用

植物大麻素酸CBGA與CBDA二者為殺死乳癌細胞最有效者，因此為良好標的，可使用這些化合物治療癌症。令人驚訝地，這些數據顯示植物大麻素酸比游離型植物大麻素效用更好50%。

範例10 小鼠中植物大麻素對於大腸癌致癌機制之影響

係評估單離之CBD、CBG與CBDV，以及CBD、CBG與CBDV對應之BDS等植物大麻素，其預防與治療小鼠大腸癌之作用。以致癌物氧化偶氮甲烷(azoxymethane)，於小鼠體內誘發異常腺窩病灶(ACF)、息肉與腫瘤。投以植物大麻素至小鼠體內，每週三次，歷時三個月。COX-2抑制劑塞來昔布(celecoxib)係使用作為陽性控制組。

第5(a-c)圖詳細列出由單離CBD與CBD BDS實驗所獲得之結果。在第5 a)圖中，可見CBD BDS可降低每隻小鼠之ACF數目，具統計學上之顯著性，與控制組相較。

第5 b)圖顯示CBD BDS可更有效地降低每隻小鼠之息肉數目，具統計學上之顯著性，與控制組相較。

第5 c)圖顯示CBD經純化之化合物會明顯降低每隻動物之腫瘤數目。

第6(a-c)圖說明由單離之CBG與CBDV獲得之數據，除了由CBG BDS與CBDV BDS獲得之數據外。

所有的植物大麻素皆發揮保護作用，對抗實驗性誘發之大腸癌致癌機制，如第6 a)圖所示，使用單離之CBG可提供統計學上最顯著之結果。

第6 b)圖顯示對於具有4或更多個腺窩之ACF形成具有更顯著之保護作用。這些種類之腺窩可預測最終大腸癌發生之機率，以及腫瘤之形成。如上所示，單離之CBG可提供統計學上最顯著之數據，提供此保護作用，在投以單離CBG後，動物體內無大於4個腺窩之ACF產生。

第6 c)圖詳細說明每一隻動物發生之腫瘤數目。同樣地，投以單離CBG之動物所產生之結果為，這些動物並未產生腫瘤。

總結這些數據，顯示植物大麻素對於預防大腸癌之保護作用。其重要性為植物大麻素CBG，當其為單離形式時，會發揮強烈的保護作用對抗大腸癌。

範例11 植物大麻素對於人類神經膠質瘤細胞之細胞存活率之影響(MTT試驗)

細胞係於FBS存在下種入6孔多孔盤中，密度為8x10⁴ 細胞/孔。神經膠質瘤細胞以濃度遞增之化合物處理，細胞之存活率係以MTT染色法評估。

測試CBD BDS與單離之CBD、CBG與CBDV。

表11.1詳細列出所觀察到的數據。如表所示，最低濃度之CBD BDS可提供最佳的結果，與其對應之單離植物大麻素相較，可提供稍佳的效用。

如上所示，這些數據說明CBD BDS與單離CBD二者皆可用於治療腦瘤，包括神經膠質瘤。

範例12 大麻素THC與CBD單獨使用，以及互相組合，及/或與化療試劑替馬唑醯胺(temazolamide)組合使用，對於人類神經膠質瘤細胞株存活率之影響(MTT試驗)

等量植物大麻素THC與CBD組合投藥之協同作用，係於人類神經膠質瘤細胞株中測試。在MTT試驗中，該二植物大麻素之組合投藥會導致協同性降低人類神經膠質瘤細胞之存活率。

下表12.1顯示次有效劑量之THC與CBD(0.7 μM)，當該二大麻素組合時，會導致細胞存活率降低，具統計學上之顯著性。細胞存活率會明顯降低，當THC與CBD劑量增加時。

係使用化療試劑替馬唑醯胺(temazolamide)(TMZ)進行其他實驗，這些數據列於下表12.2。

THC、CBD與TMZ之次最大劑量之組合投藥，會導致U87神經膠質瘤細胞存活率協同性降低。

範例13 大麻素THC與CBD單獨使用，以及互相組合，及/或與化療試劑替馬唑醯胺(temazolamide)組合使用，對於人類神經膠質瘤異種移植之影響

下表13.1詳細列出當植物大麻素THC與CBD單獨測試，或組合測試時，對於人類神經膠質瘤異種移植腫瘤之影響。

植物大麻素亦與TMZ組合測試，如下表13.2所列。

第1圖顯示植物原料藥(BDS)之製備流程；

第2圖顯示大麻素對於荷爾蒙不敏感型前列腺癌細胞株(DU-145)，以及荷爾蒙敏感型前列腺癌細胞株(LNCaP)之細胞凋亡之影響；

第3圖顯示真實與重組之大麻素BDS對於TRPM8拮抗作用之影響；

第4(a-f)圖顯示大麻素單獨使用或與化療試劑組合，於皮下異種移植模式中，對於荷爾蒙不敏感型前列腺癌細胞株(DU-145)以及荷爾蒙敏感型前列腺癌細胞株(LNCaP)之影響；

第5(a-c)圖顯示大麻素經單離之CBD與CBD BDS對於小鼠之大腸癌致癌機制之影響；

第6(a-c)圖顯示大麻素經單離之CBG、經單離之CBDV、CBG BDS與CBDV BDS，對於小鼠之大腸癌致癌機制之影響。

Claims

一種植物大麻素四氫大麻酚(THC)與大麻雙酚(CBD)之組合物，該組合物協同馬唑醯胺(temazolamide)用於治療神經膠質瘤；其中該植物大麻素及/或馬唑醯胺之劑量是其等單獨用時不足以有效地(sub-effective)用來治療神經膠質瘤。
如申請專利範圍第1項之組合物，其中該植物大麻素之組合物與馬唑醯胺係被包裝成供單獨、同時或依序投藥。
一種植物大麻素四氫大麻酚(THC)與大麻雙酚(CBD)之組合物協同馬唑醯胺(temazolamide)於製造一藥物之用途，該藥物係用於治療神經膠質瘤；其中該植物大麻素及/或馬唑醯胺之劑量是在其等單獨用時不足以有效地(sub-effective)用來治療神經膠質瘤。
如申請專利範圍第3項之植物大麻素組合物之用途，其中該植物大麻素之組合物與馬唑醯胺係被包裝成供單獨、同時或依序投藥。