TWI397687B - 腎病變相關之生物標記的應用及其中所使用的套組 - Google Patents
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Description
本發明係關於一種腎病變(nephropathy)相關之生物標記。
腎病變(nephropathy)，一般已知為糖尿病、高血壓、藥物毒性，與發炎所引起之腎損傷(kidney damage)。
通常腎病變為藉由測定蛋白尿(proteinuria)(例如尿白蛋白(urine albumin)之程度)之程度或藉由檢查腎功能指標-腎絲球過濾率(glomerular filtration rate,GFR)，來進行診斷。但目前早期腎病變無法顯示症狀供此兩種方法偵測早期腎病變。雖然可根據腎組織切片來偵測腎病變，但此侵入式方法並非為理想的診斷方式。
研發偵測早期腎病變的方法非常重要。達成此目標之關鍵點在於鑑定出與初期腎病變相關的可靠生物標記。
本發明為根據發現白血球相關類免疫球蛋白受器-2(leukocyte-associated Ig-like receptor-2)、α-1酸性醣蛋白(alpha-1 acid glycoprotein)和此兩蛋白質之片段在尿液內之程度，腎病變(nephropathy)之病患顯著高於無腎病變之病患。這些蛋白質分子因而為早期腎病變之診斷的可靠生物標記。
因此，本發明特徵之一為腎病變診斷的方法。此方法至少包括下列步驟：(a)自一被懷疑具有腎病變之個體取得一尿液樣本，(b)測定於該尿液樣本中一生物標記的程度，與(c)根據該生物標記的程度評估是否該個體具有腎病變。於先前所敘述之方法中使用的生物標記為下列之一：(i)白血球相關類免疫球蛋白受器-2或一具有至少十個胺基酸之其片段，如DFLELLVKGTVPGTEASGFDAP(序列辨識號：1)，(ii)一具有至少十個胺基酸之α-1酸性醣蛋白的片段，如GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(序列辨識號：2)，(iii)(i)與(ii)的組合，或(iv)(i)與α-1酸性醣蛋白的組合。當四個生物標記之一的程度高於無腎病變個體，則可指出該個體具有腎病變。在一實施例中，生物標記程度係藉由一質譜分析(例如，基質輔助雷射脫附游離質譜(Matrix-assisted laser desorption/ionization-mass spectrometry,MALDI-MS)、液相層析質譜(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)，與液相層析串聯質譜(liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry,LC-MS/MS))來測定。在另一實施例中，為藉由一免疫分析(例如，酵素連結免疫吸附分析(enzyme-link immunosorbent assay,ELISA)、西方墨點法(Westernblot)、放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)、螢光免疫分析(fluorescence immunoassay,FIA)與冷光免疫分析(luminescence immunoassay,LIA))來測定。
上述腎病變診斷之方法可應用於人類與實驗動物兩者，例如沒有蛋白尿(proteinuria)的那些。此使用之措辭“一實驗動物”意指一般使用於動物測試之脊椎動物，例如，小鼠、大鼠、兔子、貓、狗、豬，與非人類靈長類動物。
本發明之另一特徵為一種方法可於一個體中監測腎病變的發展。此方法包括(a)自一罹患腎病變之個體(例如，一人類或一實驗動物)取得一第一尿液樣本，(b)測定於該第一尿液樣本中上列四個生物標記之一的程度，(c)在取得該第一尿液樣本後2週至12個月自該個體取得一第二尿液樣本，(d)測定於該第二尿液樣本中該生物標記的程度，與(e)評估腎病變於該個體中之發展。當該第二尿液樣本較該第一尿液樣本中之該生物標記的程度的增加，可指出腎病變於該個體中惡化。當早期腎病變為人類個體，該第二尿液樣本在該第一尿液樣本後6至12個月取得。對於一晚期腎病變之人類個體，該第二尿液樣本在該第一尿液樣本後3至6個月取得。當此方法應用於一實驗動物時，該第二尿液樣本在該第一尿液樣本後2至24週取得。
於又另一特徵中，本發明提供一種方法監測腎病變病患對於腎病變治療之功效，包括(a)測定於該腎病變病患在治療前一尿液樣本中該上列生物標記之一的程度，(b)測定該病患在治療後之一尿液樣本中之該生物標記的程度，與(c)根據在治療後該生物標記的程度的變化評估該治療的功效。與治療前之生物標記程度相較，當生物標記於治療後之程度維持相同或下降時，判定該治療為有效。
本發明也提供方法評估一試劑之腎毒性，包括(a)自以一試劑治療之一個體於治療中在不同時間點取得多數個尿液樣本，(b)測定各尿液樣本中上述生物標記之一的程度，與(c)根據該生物標記在治療中的程度變化評估該試劑之腎毒性。在該治療過程中該生物標記程度的增加指出該試劑為具腎毒性。試劑可為一化合物(例如，一藥物或一藥物候選物)、一草藥產品，與一食物產品。
本發明更進一步提供對於任何上述之方法為有用之一套組。該套組包含一第一抗體可專一結合白血球相關類免疫球蛋白受器-2與一第二抗體可專一結合α-1酸性醣蛋白。兩個抗體皆可為完整之免疫球蛋白分子。在此處所揭露之方法之一實施例中，該套組之抗體僅專一於欲被偵測之抗原(如：腎病變之生物標記)。即，其實質上由此類抗體所組成。
在本發明範圍中也有一種經分離之抗體，其專一結合至DFLELLVKGTVPGTEASGFDAP(序列辨識號：1)，或GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(序列辨識號：2)。此處使用之措辭“經分離之抗體”意指一抗體大體上無天然結合之分子。可更具體地說，當製備物中天然結合之分子於構成不多於20%乾重時，含此抗體之製備物被視為“一經分離之抗體”。純度測量可藉由任何適合的方法，例如管柱層析、聚丙烯醯胺膠體電泳(polyacrylamide gel electrophoresis)，與高效液相層析(high-performance liquid chromatography,HPLC)。
上述之任何抗體可用於製造一套組可有用的實施本發明之任何方法。
本發明之一或多個實施例於下面敘述中。本發明之其他特徵或優點顯示於下列數個實施例之詳細敘述，與所附之申請專利範圍。
本發明關於一種根據一尿液生物標記之程度診斷腎病變(nephropathy)的方法，尿液生物標記可為白血球相關類免疫球蛋白受器-2(leukocyte-associated Ig-like receptor-2)(GenBank accession number CAQ08962;10-Jan-2010)、α-1酸性醣蛋白(alpha-1 acid glycoprotein)(GenBank accession number EAW87416;10-Jan-2010)、一兩蛋白質任一的片段，或一其組合。兩蛋白質任一的片段具有十個胺基酸的最小長度且較佳為120至200個胺基酸的最大長度。例如，白血球相關類免疫球蛋白受器-2與α-1酸性醣蛋白的片段可分別包含上至125與191個胺基酸。在一實施例中，白血球相關類免疫球蛋白受器-2的片段為DFLELLVKGTVPGTEASGFDAP(序列辨識號：1)而α-1酸性醣蛋白的片段為GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(序列辨識號：2)。
上述之各尿液生物標記可被用來診斷任何類型之腎病變，包括關於糖尿病(即，糖尿病腎病變(diabetic nephropathy))、起因於IgA在腎臟組織中之沈澱的腎絲球腎炎(glomerulonephritis)(即，IgA腎病變)、發炎(inflammation)(例如，膜狀腎絲球腎炎(membranous glomerulonephritis))、中草藥誘發之腎纖維化(renal fibrosis)(即，中草藥腎病變(Chinese herbal nephropathy))、導致腎衰竭(renal failure)之慢性腎小管間質性損傷(chronic tubulointerstitial damage)(即，慢性間質性腎炎(chronic interstitial nephritis))，與局部性腎絲球硬化症(focal segmental glomerulosclerosis)的那些。
為了實施本發明之診斷方法，自一被懷疑具有腎病變之個體取得一尿液樣本且上述任何生物標記之程度可藉由一般方法來測定，例如酵素連結免疫吸附分析(enzyme-link immunosorbent assay,ELISA)與西方墨點法(Westernblot)。當生物標記為一胜肽或一胜肽之組合時，其程度可藉由一質譜分析(mass spectrometry)來測定。尿液生物標記之程度可與一無腎衰竭個體中相同之尿液生物標記的程度作為參考點(reference point)進行比較。參考點可經由例行操作來比較一腎病變病患之群組與無腎病變個體之群組其尿液生物標記的代表性程度來測定。例如，其可為介於此兩群組之平均程度間的中間點。當於個體中尿液生物標記之程度大於參考點時，其指出個體具有腎病變。
當需要時，具有微小變化性腎病變(minimal change nephropathy,MCN)或微小變化症(minimal change disease,MCD)之病患可被做為控制組以測定上述參考點。一般而言，微小變化性腎病變或微小變化症病患展現顯著之蛋白尿但正常之腎功能。
本發明使用一白血球相關類免疫球蛋白受器-2的片段或一α-1酸性醣蛋白的片段之診斷方法，可被應用在偵測初期腎病變其尿液無法偵測蛋白質(例如，白蛋白(albumin))之存在時，即無蛋白尿時。
另一方面，本發明敘述一方法可根據任何上述尿液生物標記監測一個體中腎病變之發展。為實施此方法，可在適合之時間間隔(例如2週至12個月)中取得來自一個體之兩個尿液樣本以檢查以測定上述尿液生物標記之一的程度。若於較晚取得之尿液樣本中之尿液生物標記程度高於較早取得之尿液樣本中之尿液生物標記程度，其指出此個體中有腎病變之發展。
此監測方法可被應用於罹患或具有腎病變之風險的人類個體。當人類個體具有腎病變風險或於早期腎病變時，可每6至12個月測定尿液生物標記之程度一次以監測腎病變之發展。當人類個體已在腎病變之後期時，為每3至6個月測定尿液生物標記程度一次較佳。早期腎病變之病患儘管帶有腎損傷一般無症狀且表現正常之腎功能。這些病患是具有腎病變發展之風險。後期腎病變之特徵為腎絲球過濾率(glomerular filtration rate,GFR)的逐步下降(例如，<15 mL/分鐘/1.73m2
)。
上述監測方法亦可根據例行步驟，應用至一實驗動物以研究腎病變。實驗動物為每2至24週測定一次上述尿液生物標記之一的程度較佳。生物標記程度隨著時間增加可指出動物內的疾病發展。
在另一方面，本發明提供一種評估腎病變治療的功效於需要之個體(即，人類腎病變病患或帶有腎損傷之實驗動物)。在此方法中，上述尿液生物標記之一的程度於治療前、中及/或後期被測定。若尿液生物標記程度隨著治療過程維持相同或下降，則可指出治療為有效。
任何尿液生物標記可用於監測一目標試劑之腎毒性，即，一試劑是否會誘發腎損傷。目標試劑可為任何用於人類投藥之化合物或組合物。例子包括，但不限於化學化合物，其可為藥物(例如，非類固醇抗發炎藥物)或藥物候選物、食物產品或補充品，與中草藥補充品。目標試劑之腎毒性係藉由一尿液生物標記之程度隨著時間增加的能力來判斷。
本發明也揭露一套組有助於實施任何上述之方法。此套組包含至少兩抗體，一為專一於類免疫球蛋白受器-2，例如可結合至其片段DFLELLVKGTVPGTEASGFDAP(序列辨識號：1)或任何包含於其中之抗原決定位，與另一為專一於α-1酸性醣蛋白，例如可結合至其片段GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(序列辨識號：2)或任何包含於其中之抗原決定位。在一實施例中，套組包含與相同生物標記結合之兩種不同的抗體(即，一塗覆抗體(coating antibody)與一偵測抗體(detecting antibody))。通常，偵測抗體連結一分子其可藉由本身或是經由與其他試劑結合而發出一可偵測訊號。此處使用之措辭“抗體”意指一完整之免疫球蛋白或其片段，例如維持抗原結合活性之Fab或F(ab’)2
。其可為自然發生或經基因工程(例如單鏈抗體(single-chain antibody)、嵌合抗體(chimeric antibody)，或人源化抗體(humanized antibody))。
本發明套組中包含之抗體可獲得自商業製造供應商。或可藉由一般方法來製備。參見，例如，Harlow and Lane,(1988) Antibodies: A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York。為產生如上列之辨識一特定生物標記抗體，標誌視需要而可與一攜帶蛋白質(carrier protein)(例如，KLH)結合並與一佐劑混合後注入一宿主動物。產生於動物中之抗體可藉由親和層析(affinity chromatography)進一步純化。一般使用之宿主動物包括兔子、小鼠、天竺鼠，與大鼠。可使用來增加免疫反應之各種佐劑視宿主種類而定，包括佛朗氏佐劑(Freund's adjuvant)(完全與不完全)、礦物凝膠(mineral gel)，例如氫氧化鋁，CpG、表面活性物質(surface-active substance)，例如溶血卵磷脂(lysolecithin)、多聚醇(pluronic polyol)、聚陰離子(polyanion)、胜肽(peptides)、油乳劑(oil emulsion)、裂螺科血藍蛋白(keyhole limpet hemocyanin)，與二硝基酚(dinitrophenol)。有用的人類佐劑包括BCG(卡介苗(bacille Calmette-Guerin))與短小棒狀桿菌(Corynebacterium parvum)。多株抗體，即抗體分子之異種族群(heterogeneous population)，表現於經免疫之動物的血清中。
製備單株抗體，即抗體分子之同種群組(homogeneous populations)可使用標準融合瘤技術(參見，例如Kohler et al.(1975) Nature 256,495;Kohler et al.(1976) Eur. J. Immunol. 6,511;Kohler et al.(1976) Eur J Immunol 6,292;and Hammerling et al.(1981) Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas,Elsevier,N.Y.)。特別是，單株抗體可藉由任何可生產抗體之技術獲得，如敘述於Kohler et al.(1975)Nature 256,495 and U.S. Patent No. 4,376,110之持續性細胞株(continuous cell line)；人類B細胞融合瘤(B-cell hybridoma)技術(Kosbor et al.(1983) Immunol Today 4,72;Cole et al.(1983) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80,2026)，與EBV-融合瘤(EBV-hybridoma)技術(Cole et al.(1983) Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R. Liss,Inc.,pp. 77-96)。此種抗體可為任何種類之免疫球蛋白，包括IgG、IgM、IgE、IgA、IgD與其之任何次種類。可在體內(in vivo)或在體外(in vitro)培養本發明用來生產單株抗體之融合瘤。In vivo產生高效價之單株抗體的能力使其為一特別有效之製造方法。
此外，可藉由已知技術產生抗體片段。例如，此種片段包括，但不限於F(ab’)2
片段，其可藉由胃蛋白脢(pepsin)分解抗體分子之產生，與Fab片段，其可藉由減少F(ab’)2
片段之雙硫鍵(disulfide bridge)產生。
無更進一步詳細闡述，可以相信的是，熟悉此技術人士可根據上述，利用本發明至其最大範圍。因此，下述特定實施例僅被建構來說明，且不論於任何形式中並非為所揭露的限制。所有此處提及之出版物被引用作為本說明書的揭示內容。
【實施例】
實施例1：使用尿液白血球相關類免疫球蛋白受器-2或α-1酸性醣蛋白為生物標記來診斷腎病變
材
料與方法
(i) 個體
下列人類個體之群組參與於本研究中：
(a) 健康提供者：無糖尿病(diabetic mellitus)具正常腎功能，
(b) DM病患：具有第2型糖尿病，但無腎病變，
(c) DN病患：具有糖尿病腎病變，
(d) DN尿毒症(uremia)病患：具有糖尿病腎病變伴有尿毒症，
(e) IgAN病患：具有IgA腎病變
(f) MGN病患：具有膜狀腎絲球腎炎(membranous glomerulonephritis)
(g) CHN病患：具有由中草藥誘發之腎病變，與
(h) CIN病患：具有慢性間質性腎炎(chronic interstitial nephritis)。
健康提供者與病患之臨床特徵總整於下方表1中：
(ii) 基質輔助雷射脫附游離質譜(matrix-assisted laser desorption/ionization-mass spectrometry,MALDI-MS)分析
自上列人類個體之群組於早晨收集中段尿液樣本。以基質輔助雷射脫附游離飛行時間質譜(matrix-assisted laser desorption/ionization-time of fly-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析這些與蛋白酶抑制劑混合之健康提供者與病患之尿液樣本。胜肽候選物之鑑別是根據比較於各病患群組與健康提供者群組間之多胜肽形態(polypeptide pattern)的差異，並考慮到臨床參數(demographic)與樣本參數之統計評估(statistical evaluation)。將這些胜肽純化，經由例行技術測定其胺基酸序列。
(iii) 西方墨點法(Westernblot)
根據例行技術，西方墨點法分析使用專一於白血球相關類免疫球蛋白受器-2片段DFLELLVKGTVPGTEASGFDAP(序列辨識號：1)與α-1酸性醣蛋白片段GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(序列辨識號：2)的抗體來執行。再對照在相同樣本中之肌酸酐(creatinine)或蛋白質的程度將結果進行標準化。
(iv) 酵素連結免疫吸附分析(enzyme-link immunosorbent assay,ELISA)
將尿液樣本與蛋白酶抑制劑混合且並與稀釋緩衝溶液進行1：100倍稀釋而血清樣本為1：10被稀釋。將稀釋後之樣本三重複置於酵素連結免疫吸附分析盤中。白血球相關類免疫球蛋白受器-2與α-1酸性醣蛋白的濃度係經由標準三明治酵素連結免疫吸附分析方法測定並與對照在相同樣本中之肌酸酐或蛋白質的程度來進行標準化。
結果
經由上述之基質輔助雷射脫附游離質譜分析，偵測到DFLELLVKGTVPGTEASGFDAP(序列辨識號：1)與GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(序列辨識號：2)在來自腎病變病患之尿液樣本中的程度高於來自健康控制組之尿液樣本。序列辨識號：1與2分別為白血球相關類免疫球蛋白受器-2與α-1酸性醣蛋白的片段。此兩胜肽於健康提供者群組與不同病患群組中的陽性偵測率(positive rate)表示於下方表2中：
結果也顯示，腎病變病患尿液中此兩胜肽的程度與蛋白尿不相關，此指出它們可在尿液中之蛋白質，特別是白蛋白出現前，用以偵測腎臟損害(kidney lesions)。
此外，於腎病變病患中發現尿液內此兩胜肽的程度與腎絲球過濾率(glomerular filtration rate,GFR)逆相關，此指出它們可作為監測腎功能改變與腎病變發展之標誌。
經由上述酵素連結免疫吸附分析與西方墨點法分析，發現在來自腎病變病患(例如具有中草藥誘發腎病變之病患)與來自健康控制組之尿液樣本中，白血球相關類免疫球蛋白受器-2與α-1酸性醣蛋白有差異表現。參見下方表3。更明確地，在健康控制組之尿液樣本中幾乎沒有偵測兩者任一蛋白質的存在；儘管於來自腎病變病患之尿液樣本中發現較高之蛋白質程度。此結果指出兩蛋白質任一可被使用為診斷腎病變的標誌。
實施例2：使用尿液白血球相關類免疫球蛋白受器-2與α-1酸性醣蛋白的組合為生物標記來診斷腎病變
如於上方實施例1中所述來測定來自健康控制組與腎病變病患(包括具有糖尿病腎病變、尿毒症、IgA腎病變、中草藥誘發腎病變，與膜狀腎絲球腎炎(membranous glomerulonephritis)腎病變之病患)之尿液白血球相關類免疫球蛋白受器-2與α-1酸性醣蛋白的程度。
如於第1圖中所示，結合上述兩蛋白質標誌的程度，在所有類型之腎病變病患中比其在健康控制組中遠高得多(AUROC=0.93)。此指出結合白血球相關類免疫球蛋白受器-2與α-1酸性醣蛋白，可被做為高靈敏度與專一度診斷腎病變之可靠生物標記。
在尿液白血球相關類免疫球蛋白受器-2與α-1酸性醣蛋白的組合中發現，其特別可靠於偵測由中草藥所誘發之腎病變。參見第2圖。本研究所得之AUROC達到1.0，可指出當使用此生物標記診斷具有中草藥誘發腎病變之病患時，診斷準確度為100%。
其他實施例
本說明書揭露之所有特徵可結合成任何組合。本說明書所揭露各特徵可藉由具有相同、等同或相似目的之特徵可取代。除非以別的方式特別敘述，所揭露之各特徵僅為一系列相等或相似特徵之實施例。
從以上敘述，熟知此技術之人士可輕易地確定本發明之必要特徵，且在不違反本發明精神與範圍下，可為本發明做各種改變與修飾以適應各種用法與情況。因此，其他實施例也包含於申請專利範圍中。
<110> 財團法人工業技術研究院
<120> 腎病變相關之生物標記的應用及其中所使用的套組
<130> 70006-009001
<150> 61/147,785
<151> 2009-01-28
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 白血球相關類免疫球蛋白受器-2之片段
<400> 1
<210> 2
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> α-1酸性醣蛋白之片段
<400> 2
第1圖為一顯示於健康控制組與具有不同類型之腎病變的病患中，一白血球相關類免疫球蛋白受器-2之片段與一α-1酸性醣蛋白之片段之程度經結合的盒鬚圖(boxplots)。DN、IgAN、CHN與MGN指糖尿病腎病變、IgA腎病變、中草藥腎病變，與膜狀腎絲球腎炎(membranous glomerulonephritis)腎病變。圖中的盒型(boxes)的上限、下限及該盒型中的橫線分別標示為第25百分位數值、第75百分位數值及中位數值。上方虛線標示上圍籬值(upper adjacent)為最大值或小於第75百分位數值加1.5四分位距(interquartile range;upper fence)的最大值，下方虛線(lower adjacent)標示下圍籬值為最小值或為大於第25百分位數值減1.5四分位距(lower fence)的最小值。
第2圖為一顯示於健康控制組與具有中草藥腎病變(CHN)的病患中，一白血球相關類免疫球蛋白受器-2之片段與一α-1酸性醣蛋白之片段之程度經結合的盒形圖。盒形圖案之上限、下限及該盒型中的橫線分別標示為第25百分位數值、第75百分位數值及中位數值。上方虛線標示上圍籬值(upper adjacent)為最大值或小於第75百分位數值加1.5四分位距(interquartile range;upper fence)的最大值，下方虛線(lower adjacent)標示下圍籬值為最小值或為大於第25百分位數值減1.5四分位距(lower fence)的最小值。
Claims (25)
- 一種評估一個體具有腎病變風險的方法，包括：自一被懷疑具有腎病變之個體取得一尿液樣本；測定於該尿液樣本中一生物標記的程度，該生物標記係擇自由下列所組成之群組：(i)白血球相關類免疫球蛋白受器-2或其片段，以及(ii)白血球相關類免疫球蛋白受器-2或其片段與α-1酸性醣蛋白或其片段的組合，其中白血球相關類免疫球蛋白受器-2之該片段為DFLELLVKGTVPGTEASGFDAP(序列辨識號：1)，而α-1酸性醣蛋白之該片段為GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(序列辨識號：2)；以及根據該生物標記的程度評估該個體是否具有腎病變風險，當與一無腎病變個體中相同之生物標記的程度作為一參考點(reference point)相較時，該生物標記程度的增加可指出該個體具有腎病變風險，其中該參考點為介於一腎病變病患之群組之該生物標記的平均程度與一無腎病變個體之群組之該生物標記的平均程度間的中間點。
- 如申請專利範圍第1項所述之評估一個體具有腎病變風險的方法，其中該生物標記的程度係藉由一質譜分析或一免疫分析來測定。
- 如申請專利範圍第2項所述之評估一個體具有腎病變風險的方法，其中該質譜分析係擇自由基質輔助雷射脫附游離質譜(Matrix-assisted laser desorption/ionization-mass spectrometry,MALDI-MS)、液相 層析質譜(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)，與液相層析串聯質譜(liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry,LC-MS/MS)所組成之群組。
- 如申請專利範圍第2項所述之評估一個體具有腎病變風險的方法，其中該免疫分析係擇自由酵素連結免疫吸附分析(enzyme-link immunosorbent assay,ELISA)、西方墨點法(Westernblot)、放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)、螢光免疫分析(fluorescence immunoassay,FIA)與冷光免疫分析(luminescence immunoassay,LIA)所組成之群組。
- 如申請專利範圍第1項所述之評估一個體具有腎病變風險的方法，其中該個體為一人類。
- 如申請專利範圍第1項所述之評估一個體具有腎病變風險的方法，其中該個體為一實驗動物。
- 如申請專利範圍第1項所述之評估一個體具有腎病變風險的方法，其中該生物標記為白血球相關類免疫球蛋白受器-2。
- 如申請專利範圍第1項所述之評估一個體具有腎病變風險的方法，其中該生物標記為白血球相關類免疫球蛋白受器-2之該片段。
- 如申請專利範圍第7或8項所述之評估一個體具有腎病變風險的方法，其中該個體為無蛋白尿。
- 如申請專利範圍第1項所述之評估一個體具有腎病變風險的方法，其中該生物標記為白血球相關類免疫球 蛋白受器-2與α-1酸性醣蛋白的組合。
- 如申請專利範圍第12項所述之評估一個體具有腎病變風險的方法，其中該生物標記為白血球相關類免疫球蛋白受器-2與α-1酸性醣蛋白之該片段的組合。
- 如申請專利範圍第1項所述之評估一個體具有腎病變風險的方法，其中該生物標記為白血球相關類免疫球蛋白受器-2之該片段與α-1酸性醣蛋白的組合。
- 如申請專利範圍第1項所述之評估一個體具有腎病變風險的方法，其中該生物標記為白血球相關類免疫球蛋白受器-2之該片段與α-1酸性醣蛋白之該片段的組合。
- 如申請專利範圍第10、11、12或13項所述之評估一個體具有腎病變風險的方法，其中該個體為無蛋白尿。
- 一種於一個體中監測腎病變發展的方法，包括：自一遭受腎病變之個體取得一第一尿液樣本；測定於該第一尿液樣本中一生物標記的程度，該生物標記係擇自由下列所組成之群組：(i)白血球相關類免疫球蛋白受器-2或其片段，以及(ii)白血球相關類免疫球蛋白受器-2或其片段與α-1酸性醣蛋白或其片段的組合，其中白血球相關類免疫球蛋白受器-2之該片段為DFLELLVKGTVPGTEASGFDAP(序列辨識號：1)，而α-1酸性醣蛋白之該片段為GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(序列辨識號：2)；在取得該第一尿液樣本後2週至12個月自該個體取得一第二尿液樣本； 測定於該第二尿液樣本中該生物標記的程度；以及評估於該個體中之腎病變發展，其中當與於該第一尿液樣本中之該生物標記的程度相較，於該第二尿液樣本中之該生物標記的程度的增加指出腎病變於該個體中惡化。
- 如申請專利範圍第15項所述之於一個體中監測腎病變發展的方法，其中該個體為一於早期腎病變之人類，該第二尿液樣本為在取得該第一尿液樣本後6至12個月取得。
- 如申請專利範圍第15項所述之於一個體中監測腎病變發展的方法，其中該個體為一於後期腎病變之人類，該第二尿液樣本為在取得該第一尿液樣本後3至6個月取得。
- 如申請專利範圍第15項所述之於一個體中監測腎病變發展的方法，其中該個體為一實驗動物，該第二尿液樣本為在取得該第一尿液樣本後2至24週取得。
- 一種於一遭受腎病變之個體中監測腎病變治療之功效的方法，包括：測定於該個體在治療前之一尿液樣本中之一生物標記的程度，該生物標記係擇自由下列所組成之群組：(i)白血球相關類免疫球蛋白受器-2或其片段，以及(ii)白血球相關類免疫球蛋白受器-2或其片段與α-1酸性醣蛋白或其片段的組合，其中白血球相關類免疫球蛋白受器-2之該片段為DFLELLVKGTVPGTEASGFDAP(序列辨識號：1)，而α-1酸性醣蛋白之該片段為 GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(序列辨識號：2)；測定於該個體在治療後之一尿液樣本中之一生物標記的程度；以及根據在治療後於該生物標記的程度中的變化評估該治療的功效，其中當與治療前之該生物標記的程度相較，若該生物標記程度維持不變或下降則治療為有效。
- 一種評估一試劑之腎毒性的方法，包括：自以一試劑治療之一個體於治療中在不同時間點取得多數個尿液樣本；測定於各尿液樣本中一生物標記的程度，該生物標記係擇自由下列所組成之群組：(i)白血球相關類免疫球蛋白受器-2或其片段，以及(ii)白血球相關類免疫球蛋白受器-2或其片段與α-1酸性醣蛋白或其片段的組合，其中白血球相關類免疫球蛋白受器-2之該片段為DFLELLVKGTVPGTEASGFDAP(序列辨識號：1)，而α-1酸性醣蛋白之該片段為GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(序列辨識號：2)；以及根據在治療中該生物標記的程度變化評估該試劑的腎毒性，其中在該治療之過程中該生物標記程度的增加指出該試劑為具腎毒性。
- 如申請專利範圍第20項所述之評估一試劑之腎 毒性的方法，其中該試劑係擇自由一化合物、一草藥產品，與一食物產品所組成之群組。
- 一種經分離之抗體，專一結合至DFLELLVKGTVPGTEASGFDAP，或GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS。
- 一種診斷腎病變的套組，包括一第一抗體專一結合至白血球相關類免疫球蛋白受器-2與一第二抗體專一結合至α-1酸性醣蛋白。
- 如申請專利範圍第23項所述之診斷腎病變的套組，其中該第一與第二抗體為完整之免疫球蛋白分子。
- 一種診斷腎病變的套組，實質上由一第一抗體專一結合至白血球相關類免疫球蛋白受器-2與一第二抗體專一結合至α-1酸性醣蛋白所組成。
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