TWI397585B - 細胞培養方法及其應用 - Google Patents
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Description
本發明係有關於一種細胞培養方法，尤其是有關於一種人類間葉幹細胞與標的動物細胞共同培養之方法。
第1型糖尿病(又稱為胰島素依賴型糖尿病)，主要是負責分泌胰島素的胰臟胰島細胞異常所引起的，雖然僅佔糖尿病患者的5至10%，但由於患者需要終身注射胰島素以控制病情，嚴重影響患者的生活，因此有許多關於治療第1型糖尿病的研究。
一般認為，胰臟胰島細胞團(islet-like cell clusters,ICCs)是一種產生胰島素的組織來源，而且胰臟胰島細胞團移植是對於第1型糖尿病目前最好、能永久治癒的方法。但由於胰島細胞團移植因供給不足、分離純化過程中胰島細胞團的流失，不易取得足夠大量純化的胰島細胞團，常為胰島細胞團移植失敗的原因之一。此外，胰島細胞團在體外很難培養，一般的培養方法不能超過3至5天；即便是國際上著名的Edmonton方法(亦即將去世的人所捐贈的胰臟胰島細胞移植到糖尿病患者的手術)，也必須在2小時內將胰島細胞移植到糖尿病患者。因為在體外，以目前一般的培養方法，胰島細胞會變性、死亡，無法利用。
職是之故，本發明鑑於胰島細胞團培養之困難，提出一
種細胞培養方法及其應用。以下為本發明之簡要說明。
本發明係提供一種細胞培養方法，尤其是有關於一種人類間葉幹細胞與標的動物細胞共同培養之方法，以解決動物細胞單獨培養時不易存活之問題，並仍可維持該標的細胞之活性與功能。本發明亦提供一種以幹細胞條件培養液，培養動物細胞之方法。最後，本發明亦提供一種誘導人類幹細胞轉化為似人類胰島細胞團的方法及其應用。
本發明之一目的在於提供一種細胞培養的方法，包括製備含有人類幹細胞之懸浮培養液，加入欲培養之標的動物細胞，以及以適於該標的細胞之條件進行共同培養。
依據本發明之一實施例，該人類幹細胞係為人類臍帶間葉幹細胞。
於本發明之一較佳實施例，該標的動物細胞係為哺乳動物細胞。
較佳地，該哺乳動物細胞係為人類細胞。
更佳地，該人類細胞係為胰島細胞團。
依據本發明之一實施例，該人類幹細胞與該標的動物細胞係依序接種於培養盤。
依據本發明之另一實施例，該人類幹細胞與該標的動物細胞於接種一定時間後，以培養液洗去未貼附於培養盤之細胞。
本發明之另一目的在於提供一種細胞培養的方法，包括：
製備幹細胞條件培養液，加入欲培養之標的動物細胞，以及以適於該標的細胞之條件進行培養；其中該幹細胞條件培養液係由基礎培養液以及活性成分所組成。
依據本發明之一實施例，該活性成分係選自下列群組之一或多種：介白素-6(interleukin-6,IL-6)、金屬蛋白酶組織抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、金屬蛋白酶組織抑制因子-2(tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2)、單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、生長相關致癌基因(growth related oncogene,GRO)、肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)、類胰島素生長因子結合蛋白-4(insulin-like growth factor binding protein 4,IGFBP-4)以及介白素-8(interleukin-8,IL-8)。
依據本發明之另一實施例，該標的動物細胞係為哺乳動物細胞。
較佳地，該哺乳動物細胞係為人類細胞。
更佳地，該人類細胞係為人類胰島細胞團。
本發明之另一目的在於提供一種誘導人類幹細胞轉化為似人類胰島細胞團的方法，包括：分離人類幹細胞，培養該人類幹細胞於神經條件培養液，以及依序培養該人類幹細胞於第一條件培養液與第二條件培養液。
依據本發明之一實施例，該神經條件培養液係為培養哺乳動物腦細胞之細胞培養液。
依據本發明之另一實施例，該第一條件培養液係包括DMEM/F12培養液、葡萄糖、胰島素、菸鹼胺、以及B27。
較佳地，該葡萄糖濃度係為20至30毫莫耳濃度(mM)。
更佳地，該葡萄糖濃度係為25毫莫耳濃度。
於本發明之一較佳實施例，該第一條件培養液更包括2%的胎牛血清。
於本發明之另一較佳實施例，該第二條件培養液係於該第一條件培養液中添加幹細胞條件培養液。
依據本發明之另一實施例，該人類幹細胞係為人類臍帶間葉幹細胞。
本發明之另一目的在於提供一種使用依據本發明之方法所製備的似人類胰島細胞團培養物抑制第1型糖尿病的方法，包括將該似人類胰島細胞團培養物移植至有需要之個體的肝臟。
在初級培養(primary culture)或準備移植前，許多種類的細胞沒有辦法在體外存活很久。本發明之細胞培養方法係用人類臍帶間葉幹細胞共同培養或幹細胞條件培養液，可以克服上述困難，使標的細胞存活更久，並維持細胞的功能。依據本發明之細胞培養方法培養細胞後，並不會發生細胞異常生長或產生癌細胞。
胚胎幹細胞需要特別的培養環境，才可以在體外生長，例如需要白血病抑制因子(leukemia inhibitor factor,LIF)，以促進幹細胞增殖、抑制幹細胞分化，培養較為困難。因為人類臍帶間葉幹細胞(umbilical cord mensenchymal stem cell,HUMSCs)，不需要特別的環境就可以在體外培養生長，相較於胚胎幹細胞顯得容易培養。因此，本發明係以相對較易於體
外培養之人類臍帶間葉幹細胞做為細胞培養之基礎，將之與其他種類之標的細胞共同培養，以維持共同培養之標的細胞的生存與功能。以人類臍帶間葉幹細胞進行共同培養時，可以保護標的細胞團免於毀壞，因此可以用為新穎的細胞培養方法，在使用標的細胞團進行移植或實驗之前，用以增加標的細胞的數目，並維持標的細胞之生存與功能。
人類臍帶間葉幹細胞係由人類臍帶所分離出來，較胚胎或骨髓幹細胞更易於取得和處理，無須使用特殊的生長激素就可以培養。人類臍帶間葉幹細胞具有極佳的自我更新、修復及增生的能力。人類臍帶間葉幹細胞培養，其分泌的細胞激素種類及濃度易於控制與驗證，容易進行科學實驗的評估。此外，安全性高，只要母子健康所取出的人類臍帶間葉幹細胞就沒有感染的問題，可以用於大量生產，不用再檢查是否有病毒感染。
利用本發明之細胞培養方法，使用人類臍帶間葉幹細胞共同培養，可以維持標的細胞之生存與功能。以培養大鼠的胰臟胰島團細胞為例，若使大鼠的胰臟胰島團細胞與人類臍帶間葉幹細胞共同培養，可以持續3個月增加大鼠胰臟胰島團細胞的數量及其胰島素的分泌量；而未與人類臍帶間葉幹細胞共同培養的大鼠胰臟胰島團細胞，則會逐漸毀壞，並於12天內全部死亡。
可用於本發明之細胞培養方法，與人類臍帶間葉幹細胞共同培養之標的細胞，包括但不限於，胰島細胞團或腎細胞。
此外，依據本發明之細胞培養方法，以幹細胞條件培養液培養標的細胞時，可獲得相當於使用人類臍帶間葉幹細胞共同
培養之效果，在幹細胞條件培養液(Stem cell condition medium，SCM)中的活性成份和共同培養液(co-culture medium)中的活性成份相似，包括：介白素-6、金屬蛋白酶組織抑制因子-1、金屬蛋白酶組織抑制因子-2、單核細胞趨化蛋白-1、生長相關致癌基因、肝細胞生長因子、類胰島素生長因子結合蛋白-4以及介白素-8。例如使幹細胞轉化為似胰島細胞團時，使用幹細胞條件培養液，可以維持似胰島細胞團之生存與功能超過2個星期，仍保有產生胰島素的能力。可說利用幹細胞條件培養液來培養與利用人類臍帶間葉幹細胞共同培養具有異曲同工之效果。而所轉化的似胰島細胞團培養物，因為仍保有產生胰島素的能力，故可移植至有需要之個體的肝臟，進一步應用於第1型糖尿病之抑制。
綜上所述，利用本發明之細胞培養方法，使用人類臍帶間葉幹細胞共同培養或幹細胞條件培養液，可以培養、促進或維持標的細胞之生存或功能，並可促進或維持標的細胞之更新、修復以及增生的能力。
本發明所提供之細胞培養方法及其應用，將可由以下的實施例說明而得到充分瞭解，並使得具有本技術領域之通常知識者可以據以完成之，然本發明之實施型態並不限制於下列實施例中。
在胎兒初生後，取得新鮮的人類臍帶，並在4℃保存於HBSS緩衝液(購自Gibco公司)。人類臍帶間葉幹細胞係參考Fu等人之方法所製備(Conversion of human umbilical cord mesenchymal stem cells in wharton's jelly to dopaminergic neurons in vitro：Potential therapeutic application for parkinsonism.Stem Cells 24：115-124；2006)：臍帶Wharton氏膠的間葉組織被切成邊長約0.5立方公分的小塊，以250 xg離心5分鐘。間葉組織隨後以第1型膠原蛋白酶(collagenase type I,購自Sigma公司)於37℃處理18小時，清洗並以2.5%胰蛋白酶於37℃分解30分鐘。被分解的混合物接著以孔徑100微米(μm)的濾膜過濾，以獲得細胞懸浮液，隨後將該細胞懸浮液以250 xg離心5分鐘。將分離的細胞培養於以下成分組成之培養液中：具有25毫莫耳濃度(mM)葡萄糖的DMEM/F12培養液(Dulbecco’s modified Eagle’s medium/F12，購自Invitrogen公司)、2%胎牛血清(fetal bovine serum，購自Invitrogen公司)、1毫莫耳濃度的麩醯胺(glutamine)、以及10毫莫耳濃度的菸鹼胺(nicotinamide)。
7天大的Sprague-Dawley大鼠被用於製備胰臟細胞與產生胰島細胞團(ICCs)。本實驗係經由國立台灣大學醫學院動物研究委員會(The Animal Research Committee of The College of
Medicine,National Taiwan University)核准。將大鼠犧牲後，其胰臟被摘除並切為小塊，置於含有3毫克膠原蛋白酶的2毫升培養液中，以37℃培養20分鐘。將細胞重新懸浮於不含膠原蛋白酶的培養液，並以1500 rpm離心3分鐘。最終的沈澱物被懸浮於12毫升DMEM/F12(含2%胎牛血清、1莫耳濃度的麩醯胺、10毫莫耳濃度的菸鹼胺)。為了製備共同培養系統，人類臍帶間葉幹細胞以80%的密度(confluence)，在37℃下被培養於6孔盤。用膜封住每個培養孔，以確定沒有額外的空氣。將2毫升的胰臟細胞懸浮液朝膜內加入培養孔(膜的孔徑為3.0或0.2微米，購自Nunc公司)。
在胰臟細胞培養過程中，約30%以下的細胞能貼附於培養盤表面。接種3天後，沒有貼附的細胞會隨著培養液的更換而被移除。所使用的培養液具有高葡萄糖、低血清，所培養的胰臟細胞會逐漸形成細胞團。細胞團的數目從第3天至第9天，從每個培養孔約7至8個細胞團增加為25至30個細胞團，而第6天的細胞團尺寸為272±44微米、第9天則為418±72微米。
單獨培養的胰臟細胞雖逐漸於第6天形成胰島細胞團，但在第12天卻整個毀壞、死亡；如第1圖(a)與(b)所示。而共同培養的確可促進細胞團的存活，如第1圖(e)顯示，與人類臍帶間葉幹細胞共同培養的胰島細胞，在形成細胞團後，可以穩定的成長與存活，雖然相較於單獨培養的胰臟細胞，胰島細胞團/人類臍帶間葉幹細胞共同培養(ICCs/HUMSCs)所形成的細胞團數目並無明顯的增加，但仍持續至實驗結
束的第90天依然正常存活。同時，作為對照組而單獨培養的人類臍帶間葉幹細胞並不會形成細胞團。
為了檢視實施例2所製備之共同培養系統所產生的胰島細胞團是否仍具有胰島細胞的功能特性，將進一步檢視其細胞分泌胰島素之活性是否正常。每3天收取胰島細胞團培養液與胰島細胞團/人類臍帶間葉幹細胞共同培養之培養液，並使用對大鼠胰島素專一的酵素免疫螢光法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)作為定量試驗方法(購自瑞典商Mercodia公司)，檢測分泌於細胞培養液之中的胰島素濃度。在每次收取培養液後，以PBS緩衝液潤洗培養盤5次，並繼續每3天更換培養液。
第6天時，胰島細胞團之細胞培養液以及胰島細胞團/人類臍帶間葉幹細胞共同培養之細胞培養液中的胰島素濃度分別為89.43±3.32微克/公升(μg/L)與89.97±2.12微克/公升(請參照第2圖)。然而，在胰島細胞團之細胞培養液中的胰島素含量在第9天與第12天卻急速地衰減(分別降為4.23±0.64微克/公升與2.87±0.09微克/公升)。在同時，胰島細胞團/人類臍帶間葉幹細胞共同培養之細胞培養液中的胰島素濃度在第9天(92.35±2.18微克/公升)、第12天(145.40±26.85
微克/公升)仍逐漸地增加，甚至持續至第90天(160.30±31.92微克/公升)。另外，使用對人類胰島素專一的ELISA套組檢驗胰島細胞團/人類臍帶間葉幹細胞共同培養之細胞培養液，確定並無有人類胰島素(資料未列出)。
為了檢驗依據實施例2所製備之共同培養系統所產生的胰島細胞團的其他細胞活性，利用蛋白質陣列方式分別檢測胰島細胞團之細胞培養液以及胰島細胞團/人類臍帶間葉幹細胞共同培養之細胞培養液中的多種蛋白質的濃度變化。人類細胞激素蛋白質陣列係購自RayBiotech公司(Norcross,GA)，並依據廠商的使用說明進行實驗，透過螢光掃瞄，可以判斷蛋白質的濃度。
相較於對照組的培養液(未培養細胞)，如第3圖所示的細胞激素的表現量超過2倍以上，包括介白素-6(IL-6)、金屬蛋白酶組織抑制因子-1(TIMP-1)、金屬蛋白酶組織抑制因子-2(TIMP-2)、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)、生長相關致癌基因(GRO)、肝細胞生長因子(HGF)、類胰島素生長因子結合蛋白-4(IGFBP-4)以及介白素-8(IL-8)，表示人類臍帶間葉幹細胞所分泌的這些細胞激素與維持胰島細胞團的生存與功能具有重要的關係。
如進一步以添加前述細胞激素之培養液(即幹細胞條件培
養液)培養細胞，仍可維持細胞的生長與活性，亦即，利用幹細胞條件培養液來培養與利用人類臍帶間葉幹細胞共同培養具有異曲同工之效果(參照實施例5)。
首先依據Fu等人的方法(Conversion of human umbilical cord mesenchymal stem cells in wharton's jelly to dopaminergic neurons in vitro：Potential therapeutic application for parkinsonism.Stem Cells 24：115-124；2006)，製備神經條件培養液(neuronal conditioned medium,NCM)。7天大的Sprague-Dawley大鼠被腹腔注射10%的氯酸(chloride hydrate)而麻醉後，大腦被摘除，置於不含鈣/鎂離子之緩衝液(購自Gibco公司)，並以900 rpm離心5分鐘。除去上清液後，於沈澱物(腦組織)加入含10%胎牛血清的DMEM培養液。腦組織懸浮液被研磨15分鐘，以分散為單獨的細胞。細胞被懸浮於含10%胎牛血清的DMEM培養液(FBS/DMEM)，並於37℃、5% CO2、95% O2條件下培養。第二天，2微莫耳濃度(μM)的賽德薩(Cytarabine，Ara C)(購自Sigma-Aldrich公司)被加入。培養第五天，培養液被收集，以作為進一步培養人類臍帶間葉幹細胞所用的神經條件培養液。
為了在體外使人類臍帶間葉幹細胞被培養、轉化為似胰島細胞團，以階段性方式進行培養(如第4圖所示)：首先，未
分化的人類臍帶間葉幹細胞於含有10%胎牛血清的DMEM培養液被培養3至6天(階段1)；其次，人類臍帶間葉幹細胞於神經條件培養液被培養7天，並且每天更換培養液，以誘使巢蛋白細胞(nestin-positive cells)的產生(階段2)；接著，細胞被置於含有2%胎牛血清的DMEM/F12培養液(葡萄糖濃度為25毫莫耳濃度)，並添加10毫莫耳濃度菸鹼胺與維生素B27(購自Gibco公司，Cat.No.17504-044)，培養7天(階段3)；最後，開始分化的似胰島團細胞被置於前階段所用之培養液中，並添加幹細胞條件培養液後，培養14天(階段4)。以幹細胞條件培養液培養細胞，仍可維持細胞的生長與活性，亦即，利用幹細胞條件培養液來培養與利用人類臍帶間葉幹細胞共同培養具有相似之效果。如此將產生許多似胰島細胞團，並經由免疫染色方法檢測，發現這些似胰島細胞團會表現高血糖素(glucagon)與胰島素(參照第5圖)。
此外，在階段4的培養液中，若調整葡萄糖的濃度，可以發現似胰島細胞團所分泌的胰島素的量產生變化，例如，以低濃度(5.5微莫耳濃度)葡萄糖培養液進行培養，似胰島細胞團會分泌較少的胰島素，而若將葡萄糖濃度提高(如25微莫耳濃度)，則似胰島細胞團會分泌較多的胰島素(結果如第6圖所示)；這與正常胰島細胞的生理活性相似，可證明利用本發明之方法所轉化成的似胰島細胞團仍能維持正常胰島細胞的功能與活性。
在移植前7天，將Sprague-Dawley大鼠以腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)以誘導糖尿病的發生，注射劑量為每天每公斤體重50毫克，連續注射2天。在注射鏈脲佐菌素之前、注射後每週、以及細胞團移植3天後，從被實驗的大鼠尾部靜脈抽取血液，經由SURE-STEP血糖機(SURE-STEP blood glucose meter,購自Lifescan公司)判讀血液中的葡萄糖濃度。當大鼠被注射鏈脲佐菌素一週後，血液中葡萄糖的濃度超過400毫克/公合(mg/dl)。將大鼠以腹腔注射10%的氯酸麻醉後，由實施例5所製備的似胰島細胞團(約2 x 106個細胞)，透過以22號針頭緩慢注射於肝組織(liver parenchyma)，而被移植至實驗的大鼠肝臟。對照組的大鼠，則分別是將未分化的人類臍帶間葉幹細胞移植至實驗大鼠的肝臟，以及僅注射生理食鹽水(假實驗組)。結果如第7圖所示，被鏈脲佐菌素誘導產生糖尿病的大鼠，在移植實施例5所製備的似胰島細胞團之後，其血液中的葡萄糖濃度降低，且也可檢測到人類胰島素的分泌，顯示依據本發明之方法所誘導轉化之似胰島細胞團具有抑制糖尿病之效果。
綜上所述，依據本發明之方法，使用人類臍帶間葉幹細胞共同培養，或是以幹細胞條件培養液培養細胞，可以促進、維持標的動物細胞之生存與功能，並可能促進或維持標的動物細胞之更新、修復與增生之能力。此外，依據本發明之方法，可誘導人類幹細胞轉化為似人類胰島細胞團，並具有與胰島細胞
相似的功能與活性。
以上所述僅為本發明之較佳實施例而已，並非用以限定本發明之申請專利範圍；凡其它未脫離本發明所揭示之精神下所完成之等效改變或修飾，均應包含在下述之申請專利範圍內。
第1圖係為依據本發明之方法建立之胰島細胞團與人類臍帶間葉幹細胞共同培養之存活細胞的顯微鏡圖。
第2圖係為本發明之共同培養系統之細胞所分泌胰島素濃度之統計圖。
第3圖係為本發明之共同培養系統之細胞激素濃度變化之統計圖。
第4圖係為依據本發明之方法誘導人類臍帶間葉幹細胞轉化為似胰島細胞團之流程圖。
第5圖係為依據本發明之實施例製備之似胰島細胞團分泌不同細胞蛋白之染色圖。
第6圖係為依據本發明之實施例以不同濃度葡萄糖培養細胞所誘導之胰島素濃度變化之統計圖。
第7圖係為依據本發明之方法所轉化之似胰島細胞團移植至糖尿病大鼠後之血糖與胰島素濃度變化之統計圖。
Claims (1)
- 一種誘導人類幹細胞轉化為似人類胰島細胞團的方法，包括：以一離心法分離人類臍帶間葉幹細胞；培養該人類臍帶間葉幹細胞於含有10%胎牛血清的DMEM培養液；置該人類臍帶間葉幹細胞於一培養過哺乳動物腦細胞之添加2微莫耳濃度的賽德薩，以及該10%胎牛血清的DMEM培養液進行培養；以及置換該人類臍帶間葉幹細胞依序於第一條件培養液與第二條件培養液進行培養，其中該第一條件培養液包含DMEM/F12培養液、2%胎牛血清、25毫莫耳濃度葡萄糖、胰島素、菸鹼胺、以及B27，該第二條件培養液係於該第一條件培養液添加一幹細胞條件培養液，其中該幹細胞條件培養液包含：一基礎培養液，包含：DMEM/F12培養液；1莫耳濃度的麩醯胺；10毫莫耳濃度的菸鹼胺；以及2%胎牛血清；以及一細胞激素活性成分，包含：係由介白素-6、金屬蛋白酶組織抑制因子-1、金屬蛋白酶組織抑制因子-2、單核細胞趨化蛋白-1、生長 相關致癌基因、肝細胞生長因子、類胰島素生長因子結合蛋白-4以及介白素-8群組中所選出，藉以誘導該人類臍帶間葉幹細胞轉化為似人類胰島細胞團。
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| US9567569B2 (en) | 2012-07-23 | 2017-02-14 | Gamida Cell Ltd. | Methods of culturing and expanding mesenchymal stem cells |
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| US10413543B2 (en) * | 2015-09-01 | 2019-09-17 | Sun Pharma Advanced Research Company Ltd. | Stable multiparticulate pharmaceutical composition of rosuvastatin |
| WO2017123312A2 (en) | 2015-09-02 | 2017-07-20 | Regeneration Worldwide Company, Inc. | Composition and methods of using umbilical cord lining stem cells |
| CN108486057B (zh) * | 2018-04-08 | 2021-06-29 | 天晴干细胞股份有限公司 | 利用多功能胎盘组织处理装置提取胎盘中造血干细胞的方法 |
| EP4036221A1 (en) * | 2021-01-29 | 2022-08-03 | Baer, Hans Ulrich | Method for stimulating cell growth and proliferation of cells of interest, and method for preparing a liver or pancreas implant |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060281174A1 (en) * | 2004-03-09 | 2006-12-14 | Gang Xu | Methods for generating insulin-producing cells |
-
2008
- 2008-07-16 TW TW97127044A patent/TWI397585B/zh active
-
2009
- 2009-01-15 US US12/320,026 patent/US9017657B2/en active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060281174A1 (en) * | 2004-03-09 | 2006-12-14 | Gang Xu | Methods for generating insulin-producing cells |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Chao KC et al., A novel human stem cell coculture system that maintains the survival and function of culture islet-like cell clusters. Cell Transplant. 2008;17(6):657-64. Publication date: 2008-05-01. * |
| Fu YS et al., Conversion of human umbilical cord mesenchymal stem cells in Wharton's jelly to dopaminergic neurons in vitro: potential therapeutic application for Parkinsonism. Stem Cells. 2006 Jan;24(1):115-24. Epub 2005 Aug 11. * |
| Gao F et al., In vitro cultivation of islet-like cell clusters from human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells. Transl Res. 2008 Jun; 151(6):293-302. Epub 2008 Apr 28. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US9017657B2 (en) | 2015-04-28 |
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