TWI392511B - 肝受體造影用注射劑、其調劑方法及其醫藥組合物 - Google Patents

Description

肝受體造影用注射劑、其調劑方法及其醫藥組合物

本發明係關於一種用於肝受體造影用注射劑之醫藥組合物、用途及其調劑方法，特別是能改善預先製成已標誌藥物經高壓滅菌程序後標誌產率減少及不穩定的缺點，所發展出來能單一步驟調劑肝受體造影注射劑之凍晶小瓶及製備方法。

去唾液酸醣蛋白受體(以下簡稱ASGPR)是一種只會出現在哺乳動物肝細胞表面內吞噬性接受體，其能特異性地識別帶有末端半乳糖基或N-乙醯半乳醣胺基的醣鏈。肝ASGPR的SPECT顯像明顯優於其他顯像手段，對肝有較高的親和性，且肝吸收迅速，肝病變時ASGPR的數量會改變，依此特性可以開發肝細具半乳醣基或N-乙醯半乳醣胺基端之醣胜肽或醣蛋白作為肝受體造影劑。肝受體造影劑在產業上有如下之實用性：

1.　換肝病患常有短暫性缺氧現象，換肝後做肝受體造影，可立即知道換肝手術是否有成功。

2.　肝受體造影是實際肝功能的證據。帶半乳醣基或N-乙醯半乳醣胺基端的醣胜肽或醣蛋白和ASGPR結合後，係經由receptor-mediated endocytosis途徑進入肝細胞，肝病變時，肝受體減少，造影值會減低；因此理論上是可以造影值評估實際肝功能的多寡。

此類肝受體造影劑具定量肝儲存功能之潛力，由肝臟對此肝受體造影劑的造影吸收，可以評估肝臟病程的嚴重度。

銦-111為醫院常用在核子醫學應用上的優勢包括：(1)有適中的物理半衰期(67小時)，能夠有足夠的時間觀察核醫藥物在人體內的代謝變化；(2)與很短的生物半生期(3)醫院常用核種，方便獲得。大部分銦-111核醫藥物可以隨時加入銦-111溶液來進行標幟調劑，對醫療單位及使用者十分方便，大幅提昇醫院核子醫學部門使用銦-111核醫藥物的彈性及供應可靠度；(4)銦-111所釋出的加馬射線(171 keV)能量適中，可以使用於所有加馬造影設備；(5)國內核能研究所自行生產銦-111行之有年，品質優良穩定，可以提供國內各醫療單位及研究單位使用，且價格較國外進口品低廉許多，使銦-111核醫藥物在核醫造影劑市場中具有特定的競爭優勢。

傳統的鎝-99m-DTPA-半乳醣-白蛋白(Tc-99m-DTPA-Galactosyl-Albumin；簡稱Tc-99m DTPA-GSA)已知是一種肝受體造影劑，以白蛋白為骨架，連接數個不可預知數量的半乳胺醣和DTPA，由於無法控制製程使每批次DTPA接上去的數量都相同，因此每批次鎝-99m標誌後的放射化學比活度會有很大差異。為了控制每次放射化學比活度是一定的，也為維持一定品質再現性高之造影品質，有必要開發可以連接固定個數半乳胺醣和DTPA的新骨架。

YEE(酪氨酸-麩氨酸-麩氨酸)，YDD(酪氨酸-天門冬氨酸-天門冬氨酸)，YEEE(酪氨酸-麩氨酸-麩氨酸-麩氨 酸)都是靠著胜肽做骨架來製備聚合醣鏈，例如麩氨酸-麩氨酸(glutamyl-glutamic acid，簡寫為EE)、天門冬氨酸-天門冬氨酸(aspartyl-aspartic acid簡寫為DD)。YEE和YDD可連接固定個數半乳胺醣和二亞乙基三胺五乙酸(diethylene triamine pentaacetic acid，以下簡稱DTPA)，適合碘標誌，但它們的合成步驟繁瑣與低溶解度，使得他們在製藥界的發展受到限制，且進行碘標誌時，必須加入氯胺T(chloramine T)、碘珠(iodobead)、或Iodogen等氧化劑，若要作為體內造影使用，有必要於反應終了進行純化步驟來去除氧化劑，因為這些氧化劑對人體體內使用是有毒性的。

使用人體的造影注射劑，必須符合標誌產物無菌無熱原之規範，目前最終產物消毒滅菌的方法，最常使用的是高壓滅菌法，通常應用於預先製成已標誌藥物供應醫院使用的注射液，但如果已標誌藥物經高壓滅菌後產品品質不若高壓滅菌前，就無法以高壓滅菌法使用於實際例行之所需。

另一個滅菌方法為通過0.22μm濾菌膜法，為將已標誌產物通過0.22μm微孔膜(Millipore membrane)，比如臨床目前所用的正子腫瘤造影劑¹⁸ F-FDG，這種方法可有效過濾細菌，且可有效保持藥物活性，但因為是使用於放射標誌產物，所需的製藥廠規格必需全負壓式之class 100等級，等級與成本較高，非一般藥廠所能負擔。

有鑑於此，為解決上述問題，本發明之一目的在於提 供一種醫藥組合物，包含一種具醣質肝受體專一性之雙官能基化合物，可進一步藉由DTPA的橋接，形成不含氯胺T(chloramine T)、碘珠(iodobead)、或Iodogen等氧化劑之標誌前驅物，且本身毒性極低，故製得之醫藥組合物具有定量肝儲存功能之潛力，可以評估肝臟病程嚴重度。

本發明之又一目的在於提供一種肝受體造影用注射劑，係將上述醫藥組合物在低溫無菌條件下，利用冷凍真空乾燥法，製備成凍晶劑型，其中該醫藥組合物內含之鹽類能有效控制標誌所需之pH，故未標誌的凍晶劑型之醫藥組合物可在室溫下儲存2年以上，且經放射性核種標誌能有效用於肝功能診斷。

本發明之再一目的在於提供一種調製肝受體造影注射劑之調劑方法，以單一步驟調製，其調劑方法簡單迅速且標誌完成之放射化學純度，經數天仍可維持95%以上。藉此調劑方法改善標誌產物經高壓滅菌程序後標誌產率減少且不穩定的缺點。

為達成上述目的，本發明係提供一種包括有一放射性核種標誌前驅物之醫藥組合物，該醫藥組合物包括：一放射性核種標誌前驅物，包含如化學式1所示之一雙官能基化合物，A-(B)n (1)

其中，A為具α -氨基之胺基酸或其衍生物，B選自於由乳醣、半乳醣及其衍生物所組成之群且n為1至3之任一正整數； 附加條件為B係乳醣或其衍生物時，該雙官能基化合物進一步為如化學式2所示之結構：D-{A-(B)n}_K (2)

其中D為側鏈帶有羧酸基之胺基酸或其衍生物，且K為1或2；一檸檬酸鹽，其組份為10-100毫克；以及一檸檬酸，其組份為10-100毫克。

上述之醫藥組合物，其中D為天門冬胺酸(Asparatic acid)、麩胺酸(Glutamic acid)或前述之衍生物，較佳地，D為天門冬胺酸或麩胺酸，更佳地，D為天門冬胺酸。該衍生物較佳地可為N^α -(三氟醋酸胺己醯胺基)-左旋天門冬胺酸(N^α -(trifluoroacetaminohexanoyl)-L-aspartic acid)，但不僅限於此。

上述之醫藥組合物，其中A係為離胺酸或其衍生物。較佳地，該離胺酸可為左旋離胺酸，但不僅限於此。較佳地，該衍生物可為ε-苯甲氧羰基-N,N-二酸甲基-左旋離胺酸(-benzyloxycarbonyl-N,N-bis(carboxymethyl)-L-lysine)，但不僅限於此。舉例來說，以單一離胺酸(lysine)衍生物做為骨架來製備聚合半乳醣鏈或乳醣鏈，離胺酸上的α -氨基與甘醇酸(glycolic acid)進行烷基化還原反應(reductive alkylation)，如此N上帶2個CH₂ COOH，加上離胺酸本身的一個COOH和一個NH₂ ，足以聚合3個醣鏈又有游離氨基可進一步藉由DTPA的橋接，形成適於放射性核種(如：¹¹¹ In)標誌之肝受體造影劑的前驅物。

上述之醫藥組合物，其中該檸檬酸鹽為檸檬酸三鈉(trisodium citric)。較佳地，該檸檬酸與檸檬酸鹽於水中之pH維持為4。上述之醫藥組合物，其係為凍晶劑型。該凍晶劑型係在低溫無菌條件下，利用冷凍真空乾燥法製備而成，且製成凍晶劑型之醫藥組合物可在室溫下儲存2年以上。該醫藥組合物中所含之檸檬酸與檸檬酸鹽能有效控制標誌所需pH。

本發明更提供一種調製肝受體造影注射劑之調劑方法，其係將上述之醫藥組合物及放射性核種分別儲存於一第一容器及一第二容器中，欲標誌時將第二容器中之放射性核種加入該第一容器中反應10-30分鐘即得該肝受體造影用注射劑。

上述之調劑方法，其中該醫藥組合物進一步包含一適量甘露醇，並製成凍晶劑型。於某些實施例中，該調劑方法較佳地係於室溫下進行，而更佳地在室溫反應15分鐘即完成肝受體造影注射劑。上述之放射性核種可為銦-111，但不僅限於此，任何能用於該放射性核種標誌前驅物者均可使用。該第一容器可為一凍晶小瓶，內含製成凍晶劑型之醫藥組合物，惟其餘熟習該項技術領域者所熟知的可儲存凍晶劑之容器均可使用。而第二容器可以為任何已為熟習該項技術領域者所熟知的可儲放射性核種之容器。以該調劑方法標誌完成之肝受體造影注射劑的放射化學純度，在標誌反應完成後5天仍可維持95%以上。

本發明亦提供一種肝受體造影用注射劑，係使用上述之調劑方法製得。該肝受體造影用注射劑，可用於殘餘肝功能之篩檢。

本發明中一或多個實施例之細節將於下詳細描述。而本發明之其他特徵及優點將由下述之詳細描述及申請專利範圍中顯現。

上述之一般性描述及後述之詳細描述可藉由例子而理解，且可提供如本發明所主張之進一步解釋。

其後，本發明之實施例依下列例子詳細描述，但不限於此。

實施例一、新穎肝標靶藥物之設計

請參考第一圖的本實施例一之主成分藥物的結構圖，本實施例一以ε-苄氧羰基-α─二羧甲基-L-離胺酸(ε-benzyloxycarbonyl-α-dicarboxylmethyl-L-lysine，簡稱Z-DCM-Lys)為基本結構來串接胺基己烷基乳糖(aminohexyl Lac，簡稱ah-Lac)，如此將形成三鏈乳醣或三鏈半乳胺醣(簡稱triGalNAc)，由於乳醣比半乳醣便宜十分多，具有降低成本之優勢，更有市場競爭力。但是因為乳醣鏈與ASGPR的結合強度不若半乳胺醣鏈來得強，因此若串接的是乳醣鏈，會再以天門冬胺酸(aspartic acid)或麩胺酸(glutamic acid)將2分子的三鏈乳醣鏈串接在一起；亦即將2分子的ε-Z-α-DCM-Lys(ah-Lac)₃ 再以胺基己酸天門冬胺酸(aminohexanoic aspartic acid，簡稱AHA-Asp)串接在一塊形成AHA-Asp[DCM-Lys(ah-Lac)₃ ]₂ (以下簡稱hexa-Lactoside)。此hexa-Lactoside的游離胺基端可與DTPA酸酐(DTPA anhydride)在碳酸鈉溶液中反應，形成AHA-Asp[DCM-Lys(ah-Lac)₃ ]₂ 的DTPA衍生物(以下簡稱為DTPA-hexa-lactoside)。

實施例二、高壓滅菌前後放射化學純度

為了測試高壓滅菌對DTPA-hexa-lactoside的¹¹¹ In放射標誌的影響，本實施例二將DTPA-hexa-lactoside放入凍晶玻璃小瓶，再放入高壓滅菌鍋進行滅菌，待滅菌完成後，進行¹¹¹ In放射標誌，結果顯示在高壓滅菌後，¹¹¹ In放射化學純度有明顯降低(<90%)，表示高壓滅菌方式對DTPA-hexa-lactoside並不可行。第二圖為本實施例二中高壓滅菌前後之放射純度之比較。

實施例三、醣質肝受體造影劑凍晶製劑之製備

本項製備程序必需在無菌環境下以無菌操作完成，以確保製成品的無菌品質。以精密電子式分析天平精稱0.08 mg DTPA-hexa lactoside、55 mg檸檬酸(citric acid)、62 mg檸檬酸三鈉(trisodium citrate)及100 mg甘露醇(mannitol)小心倒入10 mL可密封式反應瓶。加入15 mL注射用水加以振盪溶解並持續通入氮氣。將溶液以0.22μm過濾膜過濾分裝至10個無菌無熱原之10-mL玻璃小瓶中，每瓶體積為1.5 mL。已分裝之玻璃小瓶分別蓋上已經高壓蒸氣滅菌之長腳橡皮塞，壓入一半深度，使保留通氣孔。儘速將玻璃小瓶移入冷凍乾燥機。乾燥18小時後，繼續導入氮氣，控制油壓按鈕將橡皮塞壓入瓶口定位後關閉氮氣進氣閥。將玻璃小瓶從冷凍乾燥機取出，逐瓶以紅色膠頂鋁蓋封瓶，室溫保存。

實施例四、醣質肝受體造影劑之放射標誌

取肝受體造影劑玻璃小瓶，剝除鋁蓋，置於適當大小之鉛罐內。以針筒抽取0.5 mL氯化銦[¹¹¹ In]溶液(放射活性約5 mCi)，加入造影劑玻璃小瓶內，混合1~2分鐘使其完全溶解，靜置15分鐘後，即可進行取樣分析。

實施例五、銦-111標誌醣質肝受體造影劑放射即時薄層液相層析分析(radio-ITLC)

首先製備10 mM檸檬酸鈉(sodium citrate)緩衝液(pH 5)作為radio-ITLC的展開液如下，精秤0.13 g之一水合檸檬酸(citric acid monohydrate)及0.11 g之二水合檸檬酸三鈉(trisodium citrate dihydrate)，溶於100 mL注射用水中，取10 mL加入展開槽作為展開液。

取一片ITLC-SG薄片，以鉛筆標示距底部2 cm處為原點(origin)，9 cm處為終點。以微量分注器抽取少量樣品，滴於原點處，將ITLC-SG薄片放入已含10 mM檸檬酸鈉緩衝液(pH 5)之展開槽中展開。當液面到達展開終點時，取出薄片，置於煙櫃內烘乾。以放射薄層掃描分析儀掃描，圖譜收集1分鐘，繪出積分圖譜。

結果計算方式：放射化學純度(Radiochemical purity(%))=A/B×100%

A：¹¹¹ In-DTPA-hexa-lactoside之計算面積峰值(Rf=0.0-0.1)

B：所有峰值之計算面積

第三圖為實施例五中100%銦-111薄層層析圖譜；第四圖為實施例五中100%¹¹¹ In-hexa-lactoside薄層層析圖譜。

實施例六、銦-111標誌醣質肝受體造影劑經時安定性試驗

取三個肝受體造影劑玻璃小瓶，依照上述標誌方法進行銦-111標誌。將反應瓶置於室溫，分別於標誌後15分鐘、24小時、48小時及120小時取樣進行radio-ITLC放射化學純度分析。結果顯示標誌後120小時，放射化學純度仍然可達>95%，表示¹¹¹ In DTPA-hexa-lactoside具有高穩定度之特性。第五圖為實施例六放射化學純度經時安定性試驗結果。

實施例七、有無加甘露醇對標誌穩定度的影響

本實施例分別製備含甘露醇及不含甘露醇之兩種凍晶劑型，含甘露醇之凍晶劑型成份有：檸檬酸、檸檬酸鈉、DTPA-hexa-lactoside、甘露醇；不含甘露醇之凍晶劑型成份則只有：檸檬酸、檸檬酸鈉、DTPA-hexa-lactoside。凍晶劑型製備完成後，進行¹¹¹ In放射標誌，反應15分鐘後，以radio-ITLC進行放射化學純度分析，結果顯示含甘露醇及不含甘露醇之兩種凍晶劑型之放射標誌效率皆>95%，表示甘露醇對肝受體造影劑之¹¹¹ In放射標誌效率沒有影響。第六圖為實施例七中有無加甘露醇對標誌穩定度之影響。

實施例八、pH對標誌穩定度的影響

本實施例利用不同pH的檸檬酸鈉緩衝液，進行DTPA-hexa-lactoside的¹¹¹ In放射標誌，結果顯示在pH 2-4的情況下，放射標誌效率皆>95%，但pH 6時¹¹¹ In放射標 誌效率有明顯降低，表示pH 2-4是DTPA-hexa-lactoside的¹¹¹ In放射標誌的最佳條件。第七圖為實施例八中pH值對標誌產率的影響。

實施例九、動物造影

先以1、2、3、4、5μCi¹¹¹ InCl₃ 各100μL的圓柱體進行microSPECT動態掃描15分鐘，1分鐘收集1次吸收讀值，建立活度-吸收曲線圖。隨後將¹¹¹ In DTPA-hexa-Lactoside(200nCi/g)自尾靜脈注入硫乙醯胺(thioacetamide)誘發肝纖維化小鼠體內，進行microSPECT影像掃描，圈選肝的位置以內插法對照前述標準活度-吸收曲線圖，來定量求得其影像強度。第八圖實施例九中是硫乙醯胺誘發肝纖維化組與正常組經microSPECT造影後肝放射活度之度量，其結果顯示硫乙醯胺誘發肝纖維化組肝臟對¹¹¹ In DTPA-hexa-Lactoside的吸收明顯遠低於正常組。

綜合上述，動物及核醫應用試驗顯示本發明之肝受體造影劑能有效用於殘餘肝功能的篩檢。

其他實施例

所有說明書中之特徵均可以任何方式結合，每一此說明書中揭示之特徵均可以使用相同、相等或類似目的之替代特徵而置換。因此，除非另有說明，每一揭示之特徵僅為相同或相似特徵之廣泛系列中的例子。從上述描述，熟習該項技術領域者可輕易確知本發明之必要特徵，在不偏離本發明之精神與範圍之下，將可達成具有通常知識者將意識到可以多樣化之改變及修飾而適用於各種的用法或情況。對各種本實施例中揭示之反應劑、胺基酸衍生物、放射性核種等藥劑、凍晶劑型、動物造影等的材料器材等修改、替換，在不偏離本發明之創新精神與範圍之下，均可由所屬技術領域中具有通常知識者實行。故本發明應不侷限於如後申請專利範圍所請及其均等之發明。因此，其他實施例亦在後述請求項之範圍內。

所有說明書中提及之專利及刊物表示本發明所屬領域通常知識者程度。本文中提及之專利及刊物均以其各自全文引用，且視為每個專利或刊物均明確獨立地全文引用。

上述實施例僅係為了方便說明而舉例而已，本發明所主張之權利範圍自應以申請專利範圍所述為準，而非僅限於上述實施例。

第一圖係本發明實施例一之肝標靶藥物的結構圖。

第二圖係本發明實施例二之高壓滅菌前後對肝受體造影劑放射化學純度之比較。

第三圖係本發明實施例四之100%銦-111薄層層析圖譜。

第四圖係本發明實施例五之100%¹¹¹ In DTPA hexa-lactoside薄層層析圖譜。

第五圖係本發明實施例六之肝受體造影劑放射化學純度經時安定性試驗結果。

第六圖係本發明實施例七之有無加甘露醇對肝受體造影劑標誌穩定度的影響。

第七圖係本發明實施例八之pH值對肝受體造影劑標誌產率的影響。

第八圖係本發明實施例九之肝受體造影劑應用於正常鼠與肝纖維化鼠之造影比較。

Claims (9)

1. 一種肝受體造影注射劑之調劑方法，其係包含：a.提供將如下式(I)之一化合物； b.將該化合物與一凍晶配方混合經冷凍乾燥後形成一凍晶劑型之未標誌醣質肝受體造影劑，其中該凍晶配方係包含：甘露醇及一酸性鹽類緩衝液；c.將一放射性核種與該未標誌醣質肝受體造影劑混合反應10-30分鐘即得該肝受體造影用注射劑。
2. 如申請專利範圍第1項之調劑方法，其中該酸性鹽類緩衝液於水中之pH維持於約4。
3. 如申請專利範圍第1項之調劑方法，其中該酸性鹽類緩衝液係為一檸檬酸鹽緩衝液。
4. 如申請專利範圍第3項之調劑方法，其中該檸檬酸鹽緩衝液包含：10-100毫克之檸檬酸鹽以及10~100毫克之檸檬酸。
5. 如申請專利範圍第4項之調劑方法，其中該檸檬酸鹽係指檸檬酸三鈉(trisodium citric)。
6. 如申請專利範圍第1項所述之調劑方法，其係於室溫下進行。
7. 如申請專利範圍第1項所述之調劑方法，其中該放射性核種係指銦-111。
8. 一種肝受體造影用注射劑，係使用如申請專利範圍第1項所述之調劑方法製得。
9. 如申請專利範圍第8項所述之肝受體造影用注射劑，係用於殘餘肝功能之篩檢。