TWI387751B - 用於ＲｈＤ血型檢驗之套組及使用該套組以檢驗ＲｈＤ血型之方法 - Google Patents

Description

用於RhD血型檢驗之套組及使用該套組以檢驗RhD血型之方法

本發明關於一種血型檢驗之套組和方法，尤指一種Rh血型檢驗之套組和方法。

為了避免受血者對於輸入之血液產生激烈的免疫反應，輸血前的常規檢測是非常重要的。Rh血型在臨床輸血醫學是複雜且具多型性的血型系統。Rh血型系統的主要抗原有RhD抗原和RhCcEe抗原，其中RhD抗原的相容性係造成輸血之免疫反應的主要原因，而RhCcEe抗原存在的重要性，則是影響RhD的蛋白質結構，造成RhD抗原的弱化，並不會顯著地引發輸血不相容的免疫反應。

因此，目前Rh血型的檢驗主要是針對RhD抗原來判定Rh陽性或陰性。然而，目前的研究指出，RhD血型依據其抗原的弱化程度(即，紅血球表面抗原的多寡)可分為多種次型態(subtype)，如：RhD陽性、Partial D型、Weak D(或稱D^u )型、Rh(Del)血型以及RhD陰性。

Partial D型的形成主要是因為紅血球表面缺乏某些D抗原的決定位置(epitopes)，導致其在Rh血型的判讀上容易造成偽陰性的誤判。近年來由於單株抗體(monoclone antibody)技術的發展，已可明確地將Partial D型檢測出來。

Weak D型的定義為，該血型的紅血球無法與免疫球蛋白M(IgM)之抗D抗體產生凝集反應，但卻可以藉由免疫球蛋白G(IgG)之抗D抗體於強化血清白蛋白測試(albumin enhanced test)、低離子濃度溶液試驗(Low-ionic strength saline test)或非直接抗免疫球蛋白測試(Indirect antiglobulin test)中檢測出凝集反應。進一步的研究指出，每個正常RhD陽性的紅血球細胞大概有10,000到30,000個RhD抗原，而每個Weak D型的紅血球細胞則大概有300到9,000個RhD抗原。

Rh(Del)血型係在1984年被研究發現，該研究指出，有10%經檢驗為RhD陰性的個體，進一步經吸附沖出法(adsorption and elution method)試驗，可沖出抗D抗體，這意味著這些個體的紅血球存在著少量的RhD抗原，而這些個體因此被稱為具有Rh(D elution)血型(簡稱(Rh(Del))。這種Rh(Del)血型的個體在亞洲區域如日本、香港和台灣出現的頻率相當的高。

目前於血庫常規檢驗中的新技術有凝膠技術(gel-column technology)、固態技術(solid phase technology)和親合柱技術(affinity-column technology)，這些技術較傳統手工試管測試優異之處是具有標準化、穩定測試結果、減少所需之試驗樣本、提高敏感度和特異性等優點。然而，除了吸附沖出法仍缺乏有效的方法可以檢驗出Rh(Del)血型，而吸附沖出法卻過於耗費時間和人力，並不適用於血庫常規檢驗。而Rh(Del)血型在亞洲區域發明的高頻率，使得Rh(Del)血型成為輸血程序上的一大隱憂。有鑑於此，開發出一種得以迅速檢驗出Rh血型之次型態(尤其是Rh(Del)血型)的檢驗方法和套組，確有其急迫性。

爰是，本發明之主要目的為提供一種得以迅速檢驗出所有Rh血型之次型態的檢驗方法和套組，以避免輸血程序造成免疫不相容的風險。

為達到上述目的，本發明提供一種用於檢驗RhD血型的套組，其係包含第一試劑及第二試劑；前述第一試劑包含：抗RhD抗原之免疫球蛋白G抗體；抗RhD抗原之免疫球蛋白M抗體；抗免疫球蛋白G之抗體；生物素；及溶劑；前述第二試劑包含：抗生物素之分子，其係包含卵白素(avidin)、抗生物素卵白(streptavidin)或其組合；及溶劑。

較佳地，前述第一試劑包含：0.000001~20.0wt%的抗RhD抗原之免疫球蛋白G單株抗體；0.000001~20.0wt%的抗RhD抗原之免疫球蛋白M單株抗體；0.000001~20.0wt%的抗免疫球蛋白G之抗體；0.000001~40wt%的生物素；及40~99.999996wt%的溶劑。

較佳地，前述第二試劑包含：0.000001~20.0wt%的抗生物素之分子；及80~99.999999wt%的溶劑。

較佳地，前述第一試劑及/或前述第二試劑進一步包含：酵素、血清白蛋白、凝聚胺(polybrene)、魚精蛋白(protamine)、補體C3與抗C3抗體、補體C4與抗C4抗體、運鐵蛋白(transferring)與抗運鐵蛋白抗體或其組合。

較佳地，前述第一試劑中的前述抗RhD抗原之免疫球蛋白G抗體接枝(conjugated)有前述生物素，及/或前述血清白蛋白接枝有前述生物素。

較佳地，前述第一試劑中的前述抗RhD抗原之免疫球蛋白M抗體接枝(conjugated)有前述生物素，及/或前述血清白蛋白接枝有前述生物素。

較佳地，前述第一試劑中的前述抗免疫球蛋白G之抗體接枝(conjugated)有前述生物素，及/或前述血清白蛋白接枝有前述生物素。

較佳地，前述酵素為木瓜酵素。

較佳地，前述溶劑為阿氏液(Alsever’s solution)、磷酸緩衝溶液(PBS)或其組合。

本發明再提供一種RhD血型的檢驗方法，其係包含下述步驟：(a)提供一血液樣本；(b)將前述血液樣本製成0.5~5.0%(v/v)的紅血球溶液；(c)將前述紅血球溶液與前述之第一試劑置入空白的第一凝膠管柱中；(d)將前述紅血球溶液與前述之第一試劑及第二試劑置入空白的第二凝膠管柱中；(e)離心前述第一凝膠管柱和前述第二凝膠管柱後；及(f)判讀血型。

較佳地，前述步驟c中，前述紅血球溶液與前述第一試劑的體積比值為0.5~2.0。

較佳地，前述步驟d中，前述紅血球溶液與前述第一試劑的體積比值為0.5~2.0；且前述紅血球溶液與前述第二試劑的體積比值為0.01~100。

較佳地，前述離心包含：第一離心步驟，其係於300~4000 r.p.m.下離心1~5分鐘；及第二離心步驟，其係於300~4000 r.p.m.下離心1~5分鐘。較佳地，前述第一離心步驟的轉速係低於前述第二離心步驟的轉速。

較佳地，前述第一凝膠管柱之凝集現象判讀為4+時，屬於RhD陽性血型；前述第一凝膠管柱之凝集現象判讀為3+、2+或1+時，屬於Partial D血型；前述第一凝膠管柱之凝集現象判讀為0+，且前述第二凝膠管柱之凝集現象判讀為為3+或2+時，屬於Rh(Del)血型；前述第一凝膠管柱之凝集現象判讀為0+，且前述第二凝膠管柱之凝集現象判讀為為1+或0+時，屬於RhD陰性血型；前述第一凝膠管柱之凝集現象判讀為0+，且前述第二凝膠管柱之凝集現象判讀為為4+時，須重新檢驗。

綜上所述，本發明之用於檢驗RhD血型的套組及使用該試驗組以檢驗RhD血型的方法，係使用本發明配方之雙試劑，搭配使用習知的凝膠技術，藉判讀抗體抗原交互作用產生的凝集現象，達到迅速並精確地檢測RhD血型之所有次型態的目的。

本發明之檢驗RhD血型的方法係搭配運用本發明套組之雙試劑配方。於第一試劑中，藉著一抗-二抗之原理，放大抗RhD抗體與RhD抗原的交互作用所產生的凝集現象，而得以分辨出RhD陽性與Partial D血型。而於合併使用第二試劑時，藉卵白素及/或抗生物素卵白與生物素的交互作用，更進一步地放大抗RhD抗體與RhD抗原的交互作用所產生的凝集現象[Teramura et al.,Biomaterials,2009]。據此，習所難以於血庫常規檢測中辨識的Rh(Del)血型，也得以藉本發明快速地辨識出來，減少輸血的風險。

本發明所述之「抗RhD抗原之免疫球蛋白G抗體」係指一種可以與人類紅血球表面的RhD抗原形成專一性鍵結(binding)的蛋白質(抗體)；其可從人、大鼠、鼠、兔、牛、山羊、羊、雞或其它哺乳類物種經免疫反應產生；其可為單株抗體、多株抗體、嵌合抗體或擬人化抗體；較佳地，其係為抗RhD抗原之小鼠免疫球蛋白G單株抗體(monoclone mouse anti-D IgG antibody)。

本發明所述之「抗RhD抗原之免疫球蛋白M抗體」係指一種可以與人類紅血球表面的RhD抗原形成專一性鍵結(binding)的蛋白質(抗體)；其可從人、大鼠、鼠、兔、牛、山羊、羊、雞或其它哺乳類物種經免疫反應產生；其可為單株抗體、多株抗體、嵌合抗體或擬人化抗體；較佳地，其係為抗RhD抗原之小鼠免疫球蛋白M單株抗體(monoclone mouse anti-D IgM antibody)。

前述抗RhD抗原之免疫球蛋白G抗體與前述抗RhD抗原之免疫球蛋白M抗體的不同在於，免疫球蛋白M抗體的結構係由五個免疫球蛋白G抗體藉由雙硫鍵連結在一起所成為的五角環狀結構。

研究指出，紅血球之間的凝集現象(agglutination)與抗體和紅血球表面抗原之間的下錨距離(anchoring distance)習習相關。由於紅血球細胞膜帶負電的特性，使得紅血球在血漿或生理食鹽水中會被帶正電的陽離子雲包圍，造成單一紅血球之間因為帶正電陽離子雲的排斥而至少保持約25奈米的距離。而免疫球蛋白G抗體接在兩個紅血球抗原之間的距離約為14奈米；免疫球蛋白M抗體接在兩個紅血球抗原之間的距離則約為30奈米，因此單獨使用免疫球蛋白G抗體使紅血球產生凝集現象的效果並不顯著，而必須同時使用免疫球蛋白M抗體及/或藉由其他方式的輔助，如經酵素處理、添加二級抗體(secondary antibody)、血清白蛋白(albumin)、凝聚胺(polybrene)、魚精蛋白(protamine)、補體C3與抗C3抗體、補體C4與抗C4抗體、運鐵蛋白(transferring)與抗運鐵蛋白抗體或其組合；該酵素可為木瓜酵素(papain)。

本發明所述之「抗免疫球蛋白G之抗體」係指對前述抗RhD抗原之免疫球蛋白G抗體具有專一性的抗體，更明確地，前述抗免疫球蛋白G之抗體會與前述抗RhD抗原之免疫球蛋白G抗體之結晶端(Fc site)專一性鍵結，因此又稱為二級抗體(secondary antibody)。前述抗免疫球蛋白G之抗體與前述抗RhD抗原之免疫球蛋白G抗體較佳地係來自於不同的來源；較佳地，前述抗免疫球蛋白G之抗體係為兔抗小鼠免疫球蛋白G之抗體(rabbit anti-mouse IgG antibody)。前述二級抗體可為單株抗體、多株抗體、嵌合抗體或擬人化抗體；較佳地，係為單株抗體。

本發明配方之血清白蛋白的來源包括，但不限於：人、大鼠、鼠、兔、牛、山羊、羊、雞。本發明配方之血清白蛋白係用以強化紅血球細胞表面抗原與抗體的鍵結能力。

生物素，即維生素B7(又稱維生素H)，在醣類、蛋白質、脂肪等營養素代謝過程中扮演重要輔酶(coenzyme)的角色。藉著運用生物素與抗生物素之分子之間的專一性結合，生物素廣泛運用於細胞檢測的技術中。較佳地，前述抗免疫球蛋白G之抗體接枝(conjugated)有前述生物素，及/或前述血清白蛋白接枝有前述生物素。

前述抗生物素之分子係指能與前述生物素形成專一性鍵結之分子。本發明所述之抗生物素之分子包括，但不限於：卵蛋白(avidin)、抗生物素卵白(streptavidin)或其組合，其可與生物素產生強大的專一性鍵結能力，每一分子的抗生物素卵白或卵白素均可吸附一個生物素，並且四個卵白素或抗生物素卵白彼此會形成緊密且穩定的結合，即便在酸性溶液、鹼性溶液或有機溶劑下，其結合能力也不受影響。卵白素與抗生物素卵白的最大差異在於卵白素的對生物素的專一性遠比抗生物素卵白來的高，也就是說，抗生物素卵白可能會在檢測中產生非專一性鍵結(non-specific binding)。

本發明所述之溶劑可在不影響本發明配方之功效的前提下選用所屬領域習知之溶劑，該溶劑包括，但不限於：阿氏液(Alsever’s solution)、磷酸緩衝溶液(PBS)或其組合。前述阿氏液(Alsever’s solution)每10毫升包含葡萄糖410毫克、檸檬酸鈉160毫克、檸檬酸11毫克、氯化鈉84毫克、疊氮化鈉10毫克；前述磷酸緩衝溶液(PBS)包含氯化鈉(8 mg/mL)、氯化鉀(0.2 mg/mL)、磷酸鈉(1.15 mg/mL)、磷酸二氫鉀(0.2 mg/mL)。前述阿氏液(Alsever’s solution)和磷酸緩衝溶液(PBS)的成分比例僅列舉以供參考，並非用以限制本發明所述之溶劑的成分比例關係，熟習該項技術者可依實際實驗需求，調整為其他適當比例。

本發明之試驗組可由傳統上商業可取得之檢驗試劑為基礎，再依據本發明之配方加以調整其成分及成分比例來配製，以符合本案發明之精神。

舉例來說，本發明套組之第一試劑可由下列所述之A、B和C溶液於適當比例下混合而得：

A溶液係一般捐血中心和血庫習用之Rh血型檢驗用常規試劑，其係包含溶於阿氏液(Alsever’s solution)的下列成分：0.01~5.0mg/dL的抗RhD抗原之免疫球蛋白G單株抗體；0.01~5.0mg/dL的抗RhD抗原之免疫球蛋白M單株抗體；及0.01~10.0wt%的血清白蛋白。

B溶液係商業可取得之二級抗體接枝生物素試劑(biotin conjugated secondary antibody)，其係包含溶於磷酸緩衝溶液的下列成分：0.01~11.2mg/mL的接枝有生物素的抗免疫球蛋白G之抗體；其中，每一個前述接枝有生物素的抗免疫球蛋白G之抗體接枝有1~32個生物素。

C溶液係商業可取得之血清白蛋白接枝生物素試劑，其係包含溶於氯化鈉溶液的下列成分：0.01~9.6mg/mL的接枝有生物素的血清白蛋白；其中每一個前述接枝有生物素的血清白蛋白接枝有6~8個生物素。C試劑並進一步以氯化鈉稀釋5×10^-8 倍以供後續配製本發明第一試劑之用。

將前述A試劑、前述B試劑以及前述稀釋過後的C試劑以10：1.22：0.52的比例混合均勻，即可得本案發明套組之第一試劑。

此外，本發明套組之第二試劑可由以下方式製備：將商業可取得之溶於磷酸緩衝溶液的抗生物素卵白(avidin)以阿氏液(Alsever’s solution)調整前述抗生物素卵白(avidin)之最後濃度(final concentration)為0.01~20mg/ml，即可得本案發明套組之第二試劑。

前述配製方法係為了簡化本發明之套組的配製過程，並非用以限制本案發明套組的配製方法，而所屬技術領域之具有通常知識者，當可在不違背本發明之精神的前提下，以不同方式調配符合本發明之成分配方的套組。

以下實施例係用於進一步了解本發明之優點，並非用於限制本發明之申請專利範圍。

實施例一：配置本發明配方之第一試劑

於本實施例中，本發明之第一試劑係由下列A、B、C三種溶液，以適當比例混合而成。前述A、B、C溶液分別包含下列成分：

[A溶液]

A溶液係一般捐血中心和血庫習用之Rh血型檢驗用常規試劑，其係包含溶於阿氏液(Alsever’s solution)的下列成分：1.83 mg/dL的抗RhD抗原之小鼠免疫球蛋白G單株抗體(mouse anti-D IgG antibody)；0.89 mg/dL的抗RhD抗原之小鼠免疫球蛋白M單株抗體(mouse anti-D IgM antibody)；及7 wt%的血清白蛋白。

[B溶液]

B溶液係商業可取得之二級抗體接枝生物素試劑(biotin conjugated secondary antibody，JonsonJonson)，其係包含溶於磷酸緩衝溶液的下列成分：1.5 mg/mL的接枝有生物素的兔抗小鼠免疫球蛋白G之抗體(rabbit anti-mouse IgG antibody,biotin conjugates)；其中，每一個前述接枝有生物素的兔抗小鼠免疫球蛋白G之抗體接枝有10~12個生物素。

[C溶液]

C溶液係商業可取得之牛血清白蛋白接枝生物素試劑(bovine albumin,biotin conjugates，Sigma)，其係包含溶於0.9 wt%之氯化鈉溶液的下列成分：5 mg/mL的接枝有生物素的血清白蛋白；其中每一個前述接枝有生物素的血清白蛋白接枝有6~8個生物素。C溶液並進一步以0.9 wt%之氯化鈉稀釋到5×10^-8 倍以供後續配製本發明第一試劑之用。

[混合]

將10毫升的前述A溶液、1.22毫升的前述B溶液以及0.52毫升的前述稀釋過後的C溶液混合均勻，即可得本實施例之第一試劑。

實施例二：配置本發明配方之第二試劑

本實施例之第二試劑係將商業可取得之溶於磷酸緩衝溶液的抗生物素卵白(avidin，具有10~15 unit/per protein，Sigma)，以阿氏液(Alsever’s solution)調整前述抗生物素卵白(avidin)之最後濃度(final concentration)為5 mg/ml，即可得本案發明套組之第二試劑。須注意的是，於此實施例中，本發明之第二試劑未添加卵白素，但在其他實施例中，本發明之第二試劑可進一步添加卵白素(10~15 unit/per protein，Sigma)。

實施例三：使用本發明之套組以檢驗RhD血型

[製備紅血球溶液]

本實施例係使用經常規處理而儲存於血庫之冷凍紅血球儲存液進行RhD血型的檢驗，共計使用五個來自不同個體之前述冷凍紅血球儲存液進行檢驗，分別標記為樣本A、樣本B、樣本C、樣本D及樣本E；其中，樣本A、B、C係分別來自Rh(Del)血型之不同捐贈者；樣本D和E係分別來自Rh陰性血型之不同捐贈者。

首先將冷凍紅血球儲存液移至試管中，並放置於37℃下解凍至紅血球可自然流動之液體狀態。

接著，取6滴的紅血球儲存液加入2滴12%的氯化鈉溶液，使其混合均勻後靜置5分鐘。

接著加入10滴1.6%的氯化鈉溶液，每滴加入時都需使其與紅血球儲存液混合均勻，然後於轉速1,000×g離心30秒。重複此步驟2次以進行緩衝液的置換。視情況再重複此步驟直到上清液無溶血現象為止。

然後小心地將試管中的上清液抽除，再加入0.9%的氯化鈉溶液，並於轉速1,000×g離心1分鐘以清洗試管中的紅血球。重複此步驟2次。

接著小心地將試管中的上清液抽除，加入阿氏液以配製3%(v/v)的紅血球溶液。此配製好的紅血球溶液可於4℃保存3到4個禮拜。

前述五個來自不同個體之冷凍紅血球儲存液皆以上述方法配置成3%(v/v)的紅血球溶液。

[進行凝集現象檢驗]

本實施例係使用商業可取得之凝膠管柱(Ortho BioVue System,Ortho-Clinical Diagonostics,Inc.)，並搭配使用前述凝膠管柱之套件離心機(Ortho)。

請參下表一(樣本F為空白對照組，即未添加任何紅血球溶液)，將10μl的前述紅血球溶液(樣本A~E)和20μl的實施例一所述之第一試劑分別加入一空白(blank)之前述凝膠管柱(即為各樣本之第一凝膠管柱)中；將10μl的前述紅血球溶液(樣本A~E)、20μl的實施例一所述之第一試劑以及3.66μl的實施例二所述之第二試劑分別加入另一空白(blank)之前述凝膠管柱(即為各樣本之第二凝膠管柱)中。

接著將前述第一凝膠管柱和前述第二凝膠管柱置入前述離心機(Ortho)中，此離心機係設計以供凝膠技術之血庫檢驗之用，其設有兩階段的離心，第一離心為低速離心，目的是為了讓試劑與樣本能夠在凝膠管柱的上端空腔內均勻混合，其轉速為835 rpm，離心時間為3分鐘；第二離心為高速離心，目的是為了讓紅血球通過前述凝膠管柱之內所設置之膠體，依據凝集之紅血球在前述膠體中的垂直分佈所反應出的凝集程度差異以判別血型，其轉速為1525 rpm，離心時間為2分鐘。

本實施例僅列舉前述Ortho凝膠管柱之套件離心機作為本發明方法離心步驟之範例，然，可以達到前述離心效果之任何離心設備皆適用於本發明，無需加以限制。

[判別血型]

依據習知凝膠技術的判斷準則，可觀察凝集之紅血球在前述凝膠管柱中垂直分佈的態樣給予4+、3+、2+、1+、0+的分數，該分數越大，代表凝集的程度越大。而根據本發明之方法，結合第一凝膠管柱和第二凝膠管柱即可判讀Rh血型的次型態，請參下表二：

更明確地，若第一凝膠管柱判讀為4+、3+、2+或1+，則無需再判讀第二凝膠管柱；反之，若第一凝膠管柱判讀為0+，則需再判讀第二凝膠管柱以分辨Rh(Del)血型和Rh陰型。此外，若前述第一凝膠管柱判別為0+，而前述第二凝膠管柱判別為4+，代表試劑與紅血球溶液放置於凝膠管柱中的時間過久，則須重新檢驗。

經判讀，前述樣本A~F的第一凝膠管柱皆為0+，因此進一步判讀第二凝膠管柱的凝集情況(圖中箭頭所指示處)。請參第一圖，樣本A的第二凝膠管柱1、樣本B的第二凝膠管柱2、樣本C的第二凝膠管柱3皆有紅血球凝集現象(箭頭標示處)而判讀為3+，即為Rh(Del)血型；樣本D的第二凝膠管柱4、樣本E的第二凝膠管柱5則沒有紅血球凝集現象，因此判讀為0+，即為Rh陰型。另外，樣本F的第二凝膠管柱6也判讀為0+。本實施例之樣本A~E的判讀結果統整如下表三：

判讀結果顯示皆符合原先預期，即，樣本A~C來自Rh(Del)血型的捐贈者，以及樣本D和E來自Rh陰型血型的捐贈者。據此，本發明套組準確地檢驗出難以檢驗的Rh(Del)血型，而且較習用於檢驗Rh(Del)血型的方法來得快速。

所屬領域之技術人員當可了解，在不違背本發明精神下，依據本案實施態樣所能進行的各種變化。因此，顯見所列之實施態樣並非用以限制本發明，而是企圖在所附申請專利範圍的定義下，涵蓋於本發明的精神與範疇中所做的修改。

1．．．樣本A之第二凝膠管柱

2．．．樣本B之第二凝膠管柱

3．．．樣本C之第二凝膠管柱

4．．．樣本D之第二凝膠管柱

5．．．樣本E之第二凝膠管柱

6．．．樣本F之第二凝膠管柱

第一圖係顯示樣本A~F的第二凝膠管柱中紅血球的凝集現象。

1．．．樣本A之第二凝膠管柱

2．．．樣本B之第二凝膠管柱

3．．．樣本C之第二凝膠管柱

4．．．樣本D之第二凝膠管柱

5．．．樣本E之第二凝膠管柱

6．．．樣本F之第二凝膠管柱

Claims (16)

1. 一種用於檢驗RhD血型的套組，其係包含第一試劑及第二試劑；前述第一試劑包含：抗RhD抗原之免疫球蛋白G抗體；抗RhD抗原之免疫球蛋白M抗體；接枝生物素之抗免疫球蛋白G之抗體；及溶劑；前述第二試劑包含：抗生物素之分子，其係包含卵白素(avidin)、抗生物素卵白(streptavidin)或其組合；及溶劑。
2. 如申請專利範圍第1項所述之套組，其中前述第一試劑包含：0.000001~20.0wt%的抗RhD抗原之免疫球蛋白G抗體；0.000001~20.0wt%的抗RhD抗原之免疫球蛋白M抗體；0.000001~20.0wt%的接枝生物素之抗免疫球蛋白G之抗體；及40~99.999996wt%的溶劑。
3. 如申請專利範圍第1項所述之套組，其中前述第二試劑包含：0.000001~20.0wt%的抗生物素之分子；及80~99.999999wt%的溶劑。
4. 如申請專利範圍第1項所述之套組，其中前述第一試劑及/或前述第二試劑進一步包含：酵素、血清白蛋白、凝聚胺(polybrene)、魚精蛋白(protamine)、補體C3與抗C3抗體、補體C4與抗C4抗體、運鐵蛋白(transferring)與抗運鐵蛋白抗體或其組合。
5. 如申請專利範圍第4項所述之套組，其中前述抗RhD抗原之免疫球蛋白G抗體接枝(conjugated)有生物素，及/或前述血清白蛋白接枝有生物素。
6. 如申請專利範圍第4項所述之套組，其中前述抗RhD抗原之免疫球蛋白M抗體接枝(conjugated)有生物素，及/或前述血清白蛋白接枝有生物素。
7. 如申請專利範圍第4項所述之套組，其中前述酵素為木瓜酵素。
8. 如申請專利範圍第1項所述之套組，其中前述溶劑為阿氏液(Alsever’s solution)、磷酸緩衝溶液(PBS)或其組合。
9. 一種RhD血型的檢驗方法，其係包含下述步驟：a)提供一血液樣本；b)將前述血液樣本製成0.5~5.0%(v/v)的紅血球溶液；c)將前述紅血球溶液與如申請專利範圍第1~8項中任一項所述之第一試劑置入空白的第一凝膠管柱中；d)將前述紅血球溶液與如申請專利範圍第1~8項中任一項所述之第一試劑及第二試劑置入空白的第二凝膠管柱中；e)離心前述第一凝膠管柱和前述第二凝膠管柱；及f)依據前述第一凝膠管柱和前述第二凝膠管柱的凝集現象判讀血型。
10. 如申請專利範圍第9項所述之方法，其中前述步驟c中，前述紅血球溶液與前述第一試劑的體積比值為0.5~2.0。
11. 如申請專利範圍第9項所述之方法，其中前述步驟d中，前述紅血球溶液與前述第一試劑的體積比值為0.5~2.0；且前述紅血球溶液與前述第二試劑的體積比值為0.01~100。
12. 如申請專利範圍第9項所述之方法，其中前述離心包 含：第一離心步驟，其係於300~4000 r.p.m.下離心1~5分鐘；及第二離心步驟，其係於300~4000 r.p.m.下離心1~5分鐘。
13. 如申請專利範圍第9項所述之方法，其中前述第一凝膠管柱之凝集現象判讀為4+時，屬於RhD陽性血型。
14. 如申請專利範圍第9項所述之方法，其中前述第一凝膠管柱之凝集現象判讀為3+、2+或1+時，屬於Partial D血型。
15. 如申請專利範圍第9項所述之方法，其中前述第一凝膠管柱之凝集現象判讀為0+，且前述第二凝膠管柱之凝集現象判讀為為3+或2+時，屬於Rh(Del)血型。
16. 如申請專利範圍第9項所述之方法，其中前述第一凝膠管柱之凝集現象判讀為0+，且前述第二凝膠管柱之凝集現象判讀為為1+或0+時，屬於RhD陰性血型。