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TWI381848B - 抗纖維母細胞生長因子受體-3 (fgfr-3) 抗體及包含其之醫藥組合物 - Google Patents

抗纖維母細胞生長因子受體-3 (fgfr-3) 抗體及包含其之醫藥組合物 Download PDF

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TWI381848B
TWI381848B TW098133737A TW98133737A TWI381848B TW I381848 B TWI381848 B TW I381848B TW 098133737 A TW098133737 A TW 098133737A TW 98133737 A TW98133737 A TW 98133737A TW I381848 B TWI381848 B TW I381848B
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Description

抗纖維母細胞生長因子受體-3(FGFR-3)抗體及包含其之醫藥組合物
本發明屬於免疫學及癌症治療領域。更具體而言，本發明係關於結合人類纖維母細胞生長因子受體3(FGFR-3)之人類抗體。FGFR亦被稱作CD333、ACH、CEK2、HSFGFR-3EX及JTK4。
已顯示，FGFR-3與包括多發性骨髓瘤、膀胱癌及膀胱上皮細胞癌在內之多種癌症的發生有關。FGF配體-受體結合誘導受體二聚化及自磷酸化，導致效應分子之下游激活。FGFR-3信號傳導能夠調控寬範圍之細胞活性，例如增殖、分化、遷移、存活/凋亡、細胞骨架及細胞因子調控、及胞吞作用/胞吐作用。已認識到，FGFR-3信號傳導之過度激活係提供腫瘤細胞生長或存活優勢且因此促進腫瘤惡性之重要事件。
全長FGFR-3具有兩種剪接形式，稱為FGFR-3(IIIb)及FGFR-3(IIIc)，其得自編碼FGFR-3之第三IgG樣結構域的交替外顯子。已有文獻記載FGFR-3亦具有由於DNA複製或轉譯錯誤而產生之突變體形式。假定FGFR-3信號傳導路徑在包括癌症在內之寬範圍疾病中的活性作用，當前需要調控該路徑之機制。
已揭示阻斷配體結合之抗FGFR-3抗體。(Rauchenberger,R.等人，J. Biol. Chem. 2003年10月3日；278(40):38194-205)已揭示結合野生型及突變體形式之FGFR-3之抗FGFR-3抗體。(Martinez-Torrecuadrada,J.等人，Clin. Cancer Res. 2005年9月1日；11(17):6280-90；Trudel S.等人，Blood 2006年5月15日；107(10):4039-46)已揭示抑制配體調介之FGFR-3信號傳導激活且抑制FGFR-3調介之腫瘤生長的抗FGFR-3抗體。(Trudel S.等人，Blood 2006年5月15日；107(10):4039-46)已揭示當以組合療法給與時可增強順鉑之抗腫瘤效果的抗FGFR-3抗體。(Deevi,D.等人，AACR 2007年10月21-24；Wang,W.等人，EORTC 2008年10月22-26)
然而，業內需要如下抗體拮抗劑：對FGFR-3之兩種剪接形式(FGFR-3(IIIb)及FGFR-3(IIIc))具有高度特異性；誘導FGFR-3(IIIb)及FGFR-3(IIIc)或其突變體形式降解；且當與化學細胞毒性劑組合使用時可增強治療功效且逆轉化學抵抗性。另外，此抗體必須對FGFR-3之突變體形式具有活性，阻斷FGF配體與FGFR-3之結合，使FGFR-3內化，抑制配體誘導之FGFR-3信號傳導路徑，抑制FGFR-3調介之細胞活性並在活體外及活體內抑制腫瘤生長。
本發明抗體可滿足該需要。該等抗體對FGFR-3之兩種剪接形式(FGFR-3(IIIb)及FGFR-3(IIIc))具有高度特異性，在細胞內結合FGFR-3受體或受體突變體後誘導受體降解，當與化學細胞毒性劑組合使用時可增強治療功效且逆轉化學抵抗性，而且對FGFR-3之突變體形式具有活性，阻斷FGF配體與FGFR-3之結合，使FGFR-3內化，抑制配體誘導之FGFR-3信號傳導路徑，抑制FGFR-3調介之細胞活性，並在活體外及活體內抑制腫瘤生長。
本發明係關於一種經分離抗體或其片段，該經分離抗體或其片段特異性結合人類纖維母細胞生長因子受體-3(FGFR-3)(IIIb)及FGFR-3(IIIc)且誘導其降解。本發明進一步係關於結合突變體形式之FGFR-3且誘導其降解之抗體。
本發明係關於特異性結合人類纖維母細胞生長因子受體-3(FGFR-3)之經分離抗體或其片段，其包含CDRH1，具有序列GYMFTSYGIS(SEQ ID NO 1)；CDRH2，具有序列WVSTYNGDTNYAQKFQG(SEQ ID NO 2)；CDRH3，具有序列VLGYYDSIDGYYYGMDV(SEQ ID NO 3)；CDRL1，具有序列GGNNIGDKSVH(SEQ ID NO 4)；CDRL2，具有序列LDTERPS(SEQ ID NO 5)；及CDRL3，具有序列QVWDSGSDHVV(SEQ ID NO 6)。
本發明亦係關於特異性結合FGFR-3(IIIb)及FGFR-3(IIIc)之經分離抗體或其片段，其包含CDRH1，具有序列GYMFTSYGIS(SEQ ID NO 1)；CDRH2，具有序列WVSTYNGDTNYAQKFQG(SEQ ID NO 2)；CDRH3，具有序列VLGYYDSIDGYYYGMDV(SEQ ID NO 3)；CDRL1，具有序列GGNNIGDKSVH(SEQ ID NO 4)；CDRL2，具有序列LDTERPS(SEQ ID NO 5)；及CDRL3，具有序列QVWDSGSDHVV(SEQ ID NO 6)。
在另一態樣中，該抗體可包含可變重鏈胺基酸序列EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYMFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWVSTYNGDTNYAQKFQGRVTVTTDTSTSTAYMELRSLRSEDTAVYYCARVLGYYDSIDGYYYGMDVWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO 7)或可變輕鏈胺基酸序列QSVLTQPPSLSVAPGKTATFTCGGNNIGDKSVHWYRQKPGQAPVLVMYLDTERPSGIPERMSGSNFGNTATLTITRVEAGDEADYYCQVWDSGSDHVVFGGGTKLTVLG(SEQ ID NO 8)。
在另一態樣中，該抗體或片段係具有約1×10-8 M或更小之KD 之人類抗體或片段。
在另一態樣中，該抗體或片段係完全人類抗體。在另一態樣中，抗體重鏈恆定區來自人類IgG1或其衍生物。
在另一態樣中，該抗體包含重鏈結構域SEQ ID NO: 9及輕鏈結構域SEQ ID NO: 10。在另一態樣中，該抗體包含重鏈結構域SEQ ID NO: 9或輕鏈結構域SEQ ID NO: 10。在另一態樣中，該抗體包含兩條SEQ ID NO: 9重鏈及兩條SEQ ID NO: 10輕鏈。
在另一態樣中，本發明係關於人類FGFR-3結合片段。
本發明亦係關於包含本發明抗體或片段與醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑之醫藥組合物。
本發明之又一態樣係關於編碼該抗體或片段之經分離聚核酸。另一態樣包括表現載體，其包含相連接之編碼該抗體或片段之聚核酸與控制元件，由此可表現所編碼抗體或片段。另一態樣包括可包含該載體之宿主細胞。
另一態樣係關於能夠產生抗體或片段之重組細胞、及藉由培養重組細胞由此產生抗體或片段及自培養物回收抗體或片段而產生之抗體或片段。
本發明亦關於含有抗體或其片段及其他抗癌劑或治療同時、分別或依序組合用於療法中的產品。
在本發明之另一態樣中，該抗體或片段係用作藥劑或用於治療癌症。在本發明之另一態樣中，該抗體或其片段係用作藥劑或用於治療膀胱癌，多發性骨髓瘤，或其他具有dys調控之FGFR-3信號傳導或細胞層面上顯著FGFR-3表現的癌症。
本發明亦關於一種治療患者癌症之方法，其包含向患者投與有效量之本發明抗體。癌症可為膀胱癌或多發性骨髓瘤。癌症可為膀胱癌，多發性骨髓瘤，或其他具有dys調控之FGFR-3信號傳導或細胞層面上顯著FGFR-3表現的癌症。在另一態樣中，本發明包括一種治療患者癌症之方法，其包含向患者投與有效量之本發明抗體及向患者投與有效量之另一抗癌劑。抗癌治療可為化學治療劑，(例如順鉑)。哺乳動物可為人類或非人類。
該等抗體亦可與其他化學及生物藥劑組合使用，包括(但不限於)抗腫瘤藥及/或調介細胞生長之其他受體或受體基質之抑制劑。
本發明進一步提供使用對FGFR-3具有特異性之抗體單獨或與其他藥劑組合用於預防或治療癌症之之方法。
因此，本發明抗體結合天然存在及突變體形式之FGFR-3且誘發FGFR-3降解，可由作用於腫瘤細胞以及間質組份而抑制腫瘤，在癌症治療中具有廣泛治療價值。
術語「抗體」包括免疫球蛋白分子，包含四條多肽鏈，兩條相同重鏈(H)及兩條相同輕鏈(L)，由二硫鍵互連。各鏈可摺疊成具有類似大小(110-125個胺基酸)及結構但不同功能之結構域。
「經分離抗體」係具有如下性質之抗體：(1)已自組份混合物部分、基本上或完全純化；(2)已得到鑒定並自其天然環境組份分離及/或回收；(3)單株；(4)不含來自相同物種之其他蛋白質；(5)由來自不同物種之細胞表現；或(6)非天然存在。其天然環境之污染組份係會干擾抗體診斷或治療用途之物質，且可包括酶、激素、及其他蛋白質或非蛋白質溶質。經分離抗體之實例包括經親和純化之抗體、藉由雜交瘤或其他活體外細胞系製得之抗體、及衍生自轉基因小鼠之人類抗體。
本文所用之術語「單株抗體」係指自一群實質上同源之抗體獲得的抗體，例如，構成該抗體群的單個抗體除了可存在可能天然存在之突變或較少轉譯後變異外實質上相同。單株抗體具有高度特異性，其針對單個抗原位點(亦稱為決定子(determinant)或抗原決定部位(epitope))。此外，與通常包括針對不同決定子之不同抗體之習用(多株)抗體製品相比，各單株抗體僅針對抗原上之單個決定子。修飾詞「單株」表明該抗體係自實質上同源之抗體群獲得之特徵，且不能理解為需要藉助任一特定方法來產生該抗體。
本文所用之術語「人類抗體」包括具有對應於人類種系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區的抗體，如Kabat等人、Chothia等人及Martin(見上文)所述。本發明之人類抗體在(例如)互補決定區(CDR)內可包括非由人類種系免疫球蛋白序列編碼之胺基酸殘基(例如，藉由活體外隨機誘變或位點特異性誘變或藉由活體內體細胞突變而引入之突變)。該人類抗體之至少一個位置由胺基酸殘基、例如非由人類種系免疫球蛋白序列編碼之活性增強胺基酸殘基所置換。然而，本文所用之術語「人類抗體」不欲包括其中衍生自另一哺乳動物物種(例如小鼠)種系之CDR序列接枝到人類框架序列上之抗體。
片語「重組人類抗體」包括藉由重組手段製備、表現、產生或分離之人類抗體，例如使用轉染至宿主細胞中之重組表現載體表現之抗體、分離自重組、組合人類抗體文庫之抗體、分離自人類免疫球蛋白基因轉基因動物之抗體、或藉由涉及將人類免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列之任何其他手段而製備、表現、產生或分離之抗體。此等重組人類抗體具有衍生自人類種系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區。
輕鏈可包含一個可變結構域(在本文中縮寫為VL)及/或一個恆定結構域(在本文中縮寫為CL)。抗體之輕鏈為卡帕(κ)輕鏈或蘭姆達(λ)輕鏈。本文所用之措詞VL意欲包括來自κ型輕鏈之可變區(Vκ)及來自λ型輕鏈之可變區(Vλ)二者。重鏈亦可包含一個可變結構域(在本文中縮寫為VH)及/或(端視抗體類型或同種型而定)三個或四個恆定結構域(CH1、CH2、CH3及CH4)。在人類中，同種型為IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，其中IgA及IgG進一步再分成數個亞類或亞型(IgA1-2 及IgG1-4 )。
本發明包括任何上述類型或亞類之抗體。人類IgG係本發明抗體之較佳同種型。在各VL及VH中可以看到三個稱為超變區或CDR之區域，其由稱為框架區(在本文中縮寫為FR)之較不變化區域所支撐。
根據Kabat條約(Kabat等人，Ann. NY Acad. Sci. 190:382-93(1971)；Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，美國健康及人類服務部(U.S. Department of Health and Human Services)，NIH公開案第91-3242號(1991))或Chothia條約(C. Chothia及A.M. Lesk，J. Mol. Biol. 196(4): 901-917(1987))或由Martin(Martin,A.C.R. Accessing the Kabat Antibody Sequence Database by Computer PROTEINS: Structure,Function and Genetics,25(1996),130-133.)將胺基酸分配至特定CDR區或結構域。
各VH及VL由3個CDR及4個FR構成，其自胺基末端至羧基末端之排列順序如下：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。由VL及VH結構域組成之抗體部分稱為Fv(可變片段)，且構成抗原結合位點。單鏈Fv(scFv)係在一條多肽鏈上含有VL結構域及VH結構域之抗體片段，其中一個結構域之N末端與另一結構域之C末端藉由撓性連接體連結在一起(參見例如美國專利第4,946,778號(Ladner等人)、WO 88/09344(Huston等人))。
片段具有與全抗體相同或相當之結合特徵。適宜抗體片段包括包含超變區(即互補決定區)適宜部分以特異性地且以足夠親和力結合從而抑制細胞生長之任一片段。該等片段可含有(例如)Fab片段或F(ab')2片段中的一種或兩種。較佳地，該等抗體片段含有全抗體之全部六個互補決定區，儘管含有少於所有該等區域(例如三個、四個或五個CDR)之功能片段亦包括在內。較佳片段係單鏈抗體或Fv片段。單鏈抗體係包含至少抗體重鏈之可變區及輕鏈之可變區而有或無互連之連接體的多肽。因此，Fv片段包含完整抗體結合位點。該等鏈可在細菌或真核細胞中產生。
Fab(抗原結合片段)係指由VL CL VH CH1結構域組成之抗體片段。彼等僅在木瓜蛋白酶消化後產生之抗體片段稱為不保留重鏈鉸鏈區之Fab。在胃蛋白酶消化後產生多種保留重鏈鉸鏈區之Fab。彼等具有完整鏈間二硫鍵之片段稱為F(ab')2，但在不保留二硫鍵時產生單個Fab'。F(ab')2片段較單價Fab片段對抗原具有較高結合力。
Fc(可結晶片段)係指包含成對重鏈恆定結構域之抗體部分或片段。例如，在IgG抗體中，Fc包含CH2及CH3結構域。IgA或IgM抗體之Fc進一步包含CH4結構域。Fc與Fc受體結合、補體調介之細胞毒性及抗體依賴性細胞毒性(ADCC)之激活有關。對於諸如IgA及IgM等抗體(其為多種IgG樣蛋白質之複合物)而言，複合物形成需要Fc恆定結構域。
鉸鏈區將抗體之Fab與Fc部分分開，提供Fabs相對於彼此及相對於Fc之活動性，而且包括用於共價連接兩條重鏈之多個二硫鍵。
因此，本發明抗體包括(但不限於)天然存在抗體、人類抗體、重組人類抗體、單株抗體、消化片段、二價片段(例如(Fab')2)、單價片段(例如Fab)、單鏈抗體、單鏈Fv(scFv)、單結構域抗體、多價單鏈抗體、雙鏈抗體(diabodies)、三鏈抗體(triabodies)及特異性結合抗原之類似物。
本發明抗體對FGFR-3具有特異性。抗體特異性係指抗體選擇性識別抗原之特定抗原決定部位。抗體可呈現種及分子選擇性二者，或可僅對分子具有選擇性而結合一種以上之FGFR-3。本發明抗體可結合人類、鼠科動物、大鼠、狗及/或兔FGFR-3。較佳地，該抗體結合人類FGFR-3。已研發出保留結合特異性但亦具有其他特徵之抗體形式。
本發明抗體可為例如單特異性抗體、雙特異性抗體或多特異性抗體。雙特異性抗體(BsAbs)係具有兩種不同抗原結合特異性或位點的抗體。多特異性抗體具有兩種以上不同抗原結合特異性或位點。若抗體具有一種以上特異性，所識別之抗原決定部位可能與單一抗原或與一種以上抗原有關。
FGFR-3抗體之特異性可基於親和力及/或結合力(avidity)測定。親和力係由抗原與抗體之解離平衡常數(KD )表示，測量抗原決定子與抗體結合位點間之結合強度。結合力係抗體與其抗原間結合強度之量度。結合力係關於抗原決定部位與抗體上抗原結合位點間的親和力及抗體價，抗體價係指特定抗原決定部位之抗原結合位點的數量。抗體通常以約10-5 至約10-11 mol/升之解離常數(KD )(例如KD <100nM)結合。任一小於約10-4 mol/升之KD 通常視為指示非特異性結合。KD 值越小，抗原決定子與抗體結合位點間之結合強度越強。
本發明抗體以較佳約1×10-8 M或更小、更佳約1×10-9 M或更小、更佳約1×10-10 M或更小且最佳約1×10-11 M或更小之KD 結合FGFR-3。參見下表1。
表1：抗體1與人類及鼠科動物FGFR-3剪接變體之結合親和力。
重鏈胺基酸序列描述於SEQ ID NO. 9中。輕鏈胺基酸序列描述於SEQ ID NO. 10中。在另一態樣中，本發明抗體具有抗體1之任一CDR的一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個互補決定區。
本發明抗體亦包括彼等結合特徵已藉由定向突變、親和力成熟、噬菌體展示或鏈改組方法改良者。親和力及特異性可藉由使CDR及/或框架區殘基突變並篩選具有期望特徵之抗原結合位點來改變或改良(參見，例如，Yang等人，J. Mol. Biol. 254:392-403(1995))。一種方式係使各殘基或殘基組合隨機化以使在其他方面相同之抗原結合位點群體中兩種至二十種胺基酸之子集可見於特定位置。或者，可藉由差錯利用PCR方法在多個殘基內誘導突變(參見，例如，Hawkins等人，J. Mol. Biol.,(1992)226:889-96)。在另一實例中，含有重鏈及輕鏈可變區基因之噬菌體展示載體可在大腸桿菌(E. coli )增變菌株中實施繁殖(參見，例如，Low等人，J. Mol. Biol. 250:359-68(1996))。
本發明抗體可藉由熟習此項技術者所習知之方法來產生。該等方法包括Kohler及Milstein，Nature 256:495-497(1975)及Campbell,「Monoclonal Antibody Technology,The Production and Characterization of Rodent and human Hybridomas」,Burdon等人編輯，Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology，第13卷，Elsevier Science Publishers,Amsterdam(1985)所述之免疫學方法；以及Huse等人，Science 246:1275-1281(1989)所述之重組DNA方法。
人類抗體亦可使用熟習此項技術者所習知之多種技術來產生，包括噬菌體展示文庫(Hoogenboom及Winter,J. Mol. Biol,227:381(1991)；Marks等人，J. Mol. Biol. 222:581(1991))。Cole等人及Boemer等人之技術亦可用於製備人類單株抗體(Cole等人，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R. Liss，第77頁(1985)及Boemer等人，J. Immunol. 147(1):86-95(1991))。亞純系所分泌之本發明單株抗體可藉由習用免疫球蛋白純化程序自培養基或腹水液進行分離或純化，例如蛋白質A-瓊脂糖、羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析或親和層析。
編碼本發明抗體之聚核酸係藉由標準分子生物學技術獲得。
本發明亦包括用於轉化載體及表現抗體之宿主細胞。較佳宿主細胞包括哺乳動物細胞，例如NSO(非分泌型(o)小鼠骨髓瘤細胞)、293及CHO細胞、及其他淋巴樣來源細胞系，例如淋巴瘤、骨髓瘤或雜交瘤細胞。可使用諸如酵母等其他真核宿主。
吾人已知用於在細菌(尤其大腸桿菌)中表現蛋白質之載體。該等載體包括PATH載體，闡述於Dieckmann及Tzagoloff,J. Biol. Chem. 260:1513-1520(1985)中。該等載體在羧基末端含有編碼鄰胺基苯甲酸合成酶(TrpE)之DNA序列再加上多位點連接體。其他表現載體系統係基於β-半乳糖苷酶(pEX)；λPL；麥芽糖結合蛋白(pMAL)；及麩胱甘肽S-轉移酶(pGST)。參見Gene 67:31(1988)及Peptide Research 3:167(1990)。
可利用可用於酵母中之載體。適宜實例係λZAP質粒。亦已知適於在哺乳動物細胞中表現之載體。該等載體包括SV-40之熟知衍生物、腺病毒、逆轉錄病毒衍生DNA序列及衍生自功能哺乳動物載體組合之穿梭載體(例如彼等上文所述者)、及功能質粒及噬菌體DNA。
可用於本發明之載體含有至少一種與擬表現DNA序列或片段連接之控制元件。將控制元件插入載體中以控制及調控所選殖DNA序列之表現。
在保持於適宜培養基中之宿主細胞中表現後，可自培養基回收擬表現之多肽，並藉由熟習此項技術者所習知之方法予以純化。若多肽或肽未分泌至培養基中，則溶解宿主細胞，隨後分離及純化。
本發明進一步提供包含本發明抗體、聚核酸、載體或宿主細胞與醫藥上可接受之載劑的醫藥組合物。該醫藥組合物可包含其他治療劑。其他藥劑可為化學治療劑(例如，順鉑)。
本文所用之載劑包括在所用劑量及濃度下對曝露於其之細胞或哺乳動物無毒性之醫藥上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑。通常，生理學上可接受之載劑係pH緩衝水溶液。在本發明之另一態樣中，尤其當抗體經內化時，抗FGFR-3抗體或抗體片段可以化學方式或生物合成方式連接至抗腫瘤藥或可檢測之信號產生劑。FGFR-3抗體可抑制數種癌細胞(例如膀胱癌細胞)中之受體(經磷酸化之FGFR-3)激活以及下游信號傳導分子(包括磷酸-MAPK及磷酸-AKT)激活，導致細胞增殖能力受抑制。
本發明抗體可結合天然存在之FGFR-3或其剪接形式或其突變體。FGFR-3之「剪接形式」意指編碼FGFR-3之第三IgG樣結構域之外顯子形式，稱為FGFR-3(IIIb)及FGFR-3(IIIc)。突變體FGFR-3包括彼等藉由DNA複製或轉譯錯誤而改變之受體形式。
本發明抗體誘導FGFR-3降解。在本說明書中，降解意指分解受體以使其不再能夠實施其信號傳導功能。
本發明抗體可中和FGFR-3之激活。在本說明書中，中和受體意指滅活受體轉導信號之內在激酶活性。例如，中和可藉由利用抗體阻斷某些抗原決定部位至配體之通路或藉由以一定方式改變FGFR-3之構象以使配體(尤其FGF)即使能夠結合受體亦不能激活受體來發生。當表現FGFR-3之細胞降低其表面上FGFR-3受體之數量(例如，藉由誘導受體內化或降解、或抑制FGFR-3之表現)時，可能發生下調。因此，中和具有多種效應，包括抑制、降低、滅活及/或破壞生長(增殖及分化)、血管發生(血管募集、侵入及轉移)、及細胞運動及轉移(細胞黏附及侵入性)。
FGFR-3中和之一個量度係受體酪胺酸激酶活性之抑制。酪胺酸激酶抑制可使用熟知方法來測定；例如，藉由量測重組激酶受體之自磷酸化程度及/或天然或合成受質之磷酸化。因此，在本發明之上下文中磷酸化分析可用以測定中和抗體。磷酸化可例如在ELISA分析或西方墨點法中使用對磷酸酪胺酸具有特異性之抗體來檢測。一些酪胺酸激酶活性分析闡述於Panek等人，J. Pharmacol. Exp. Ther. 283:1433-44(1997)及Batley等人，Life Sci. 62:143-50(1998)中。
另外，本發明抗體可藉由腫瘤細胞本身來抑制信號傳導，此乃因許多腫瘤細胞在其細胞表面上具有FGFR-3。本發明抗體可用於治療有需要之哺乳動物。「治療」疾病包括抑制疾病、阻滯或阻止其發展；減輕疾病、或使疾病症狀消退。
本發明抗體及組合物可用於治療癌症。癌症可為難治性癌症或一線癌症(first line cancer)。癌症包括(但不限於)腦癌、肺癌、鱗狀上皮細胞癌、膀胱癌、胃癌(gastric cancer)、胰腺癌、乳癌、頭部癌症、頸癌、腎癌(renal cancer或kidney cancer)、卵巢癌、前列腺癌、結腸癌、結腸直腸癌、食管癌、婦科癌症(卵巢癌、子宮內膜癌)、前列腺癌、胃癌(stomach cancer)或甲狀腺癌、白血病及淋巴瘤。另外，可藉由本發明抗體及組合物治療之癌症包括多發性骨髓瘤、結腸直腸癌、尤因氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、絨膜癌。
投與係藉由任一適宜投與途徑來達成，包括注射、輸注、經口、非經腸、皮下、肌內或靜脈內。
本文所述治療方法可利用一起投與該抗體與另一治療(例如抗腫瘤藥)來實施。抗腫瘤治療可包括小有機分子。該等小有機分子之實例包括細胞毒性及/或化學治療劑，例如紅豆杉醇(taxol)、多柔比星(doxorubicin)、放線菌素-D(actinomycin-D)、順鉑、胺甲蝶呤(methotrexate)、伊立替康(irinotecan)(CPT-11)、吉西他濱(gemcitabine)、奧沙利鉑(oxyplatin)、氟尿嘧啶(fluorouracil)(5-FU)、甲醯四氫葉酸(leucovorin)(LU)、順鉑、紫杉醇(paclitaxel)、多西他賽(docetaxel)、長春鹼(vinblastine)、埃博黴素(epothilone)、順鉑/卡鉑及聚乙二醇化亞德裏亞黴素(Pegylated adriamycin)。較佳之本發明治療係投與該抗體與順鉑。
抗腫瘤藥亦可為放射，放射來源相對於所治療之患者可為外部的(外部射線束放射療法-EBRT)或內部的(近距離放射療法-BT)。所投與抗腫瘤藥之劑量端視許多因素而定，包括例如藥劑類型、所治療腫瘤之類型及嚴重程度及藥劑之投與途徑。本發明並不限於任一特定劑量。
FGFR-3抗體與其他抗體及/或治療之投與可同時或分別經由相同或不同途徑實施相同或不同次數。此外，該抗體可與一或多種其他藥劑偶聯來投與。
本文所述治療方法可用於治療任一適宜哺乳動物，包括靈長類動物(例如猴及人類)、馬、母牛、貓、狗、兔及齧齒類動物(例如大鼠及小鼠)。較佳地，擬治療之哺乳動物係人類。
 實例
僅出於闡釋目的提供以下實例，而非欲以任何方式限定本發明之範圍。該等實例不包括習用方法之詳細描述，例如彼等用於構建載體及質粒、將編碼多肽之基因插入至該等載體及質粒中、或將質粒引入至宿主細胞中的方法。該等方法已為彼等熟習此項技術者所熟知，且闡述於多個出版物中，包括Sambrook,J.,Fritsch,E. F.及Maniatis,T. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press。
實例1 FGFR3特異性抗體拮抗劑之產生
重組人類FGFR-Fc、重組人類FGF、定製合成引物、限制性酶及DNA聚合酶可自銷售商獲得或藉由習知方法製備。
按照公開之淘選方案使用塗敷有10μg FGFR-3(IIIc)細胞外結構域(ECD)-Fc重組蛋白質之管針對人類FGFR-3細胞外結構域對原始人類Fab噬菌體文庫進行淘選。溶析淘選過程中保留之噬菌體，並用保留之噬菌體感染細菌宿主細胞。收集由宿主細胞產生之噬菌體。再次重複上文程序。將單一受感染宿主細胞菌落轉移至含有100μl/孔2xYTAG之96孔板中，並在10μl M13KO7輔助噬菌體(5×1010 pfu/ml)存在下生長噬菌體。將板在37℃下於不振盪下培育30min，隨後於振盪(100rpm)下培育30min。藉由在2,500rpm下離心10min製備細胞沉澱物，將其再懸浮於200μl 2xYTAK中，並在振盪(100rpm)下於30℃下培育過夜。將板在2,500rpm下離心10min。將上清液轉移至新鮮板中，並與6x阻斷緩衝液(18%乳/PBS)混合1hr。利用如下所述ELISA結合及阻斷分析來篩選噬菌體純系。隨後自該庫中選擇結合FGFR-3(IIIb)或FGFR-3(IIIc)之噬菌體純系，選擇阻斷受體與FGF-1配體之結合之噬菌體純系。按照標準測序技術測定結合並阻斷受體之純系的DNA序列。保存各獨特DNA序列，且對應噬菌體純系稱為候選FGFR-3阻斷劑噬菌體。自該等候選噬菌體製備可溶性Fab。利用純化Fab重複ELISA結合及阻斷分析以證實阻斷活性。藉由按照公開技術將CDR(SEQ ID No. 1-6)選殖至人類IgG1框架中將經證實之Fab阻斷劑構造成全大小抗體。利用ELISA結合分析來測定抗體1與FGFR-1(IIIb)、FGFR-1(IIIc)、FGFR-2(IIIb)、FGFR-2(IIIc)及FGFR-4 ECD重組可溶性蛋白質之結合。選擇對b及c兩種剪接形式FGFR-3顯示高親和力結合但對其他FGFR受體顯示低親和力結合之抗體。
實例2 抗體1
抗體1可在適宜哺乳動物表現系統中利用熟知方法來生物合成，而且其可藉由熟知方法予以純化。抗體1之胺基酸序列在下文中給出。
分析 ELISA結合分析
將重組FGFR以存於PBS中之1μg/ml濃度在96孔板上於室溫下塗敷2小時。將板用0.2% Tween20/PBS洗滌3次，並在使用前用5%乳/PBS阻斷2hr。向板上添加噬菌體、Fab或抗體，並在0.2% Tween20/PBS中連續稀釋。將板在室溫下再培育2hr。使用合適市售二級抗體來檢測捕獲之分子，並按照供應商說明書實施檢測。
ELISA阻斷分析
將重組FGF以0.5-2μg/ml濃度在Immulon2B微量滴定板(ThermoLab Systems,Franklin,MA)上於室溫下塗敷2hr。用0.2% Tween20/PBS洗滌板，並在使用前用5%乳/PBS阻斷2hr。用5μg/ml肝素、5%乳、PBS對噬菌體、Fab或抗體進行連續稀釋。添加FGFR-3(IIIb)或(IIIc) ECD(細胞外結構域)Fc標記可溶性重組蛋白質，最終濃度為1μg/ml。將混合物在室溫下培育1hr，然後轉移至塗覆有FGF-1之板中，並在室溫下再培育2hr。將板用0.2% Tween20/PBS洗滌3次。使用按照供應商說明書製備之偶聯HRP溶液之抗人類Fc單株抗體來檢測結合之受體。阻斷活性導致信號降低。
抗體1與人類及小鼠FGFR-3(IIIb)及FGFR-3(IIIc)之結合親和力
使用BiaCore3000生物感測器(BiaCore公司，Piscataway,NJ)在室溫下按照製造商建議之標準方案來測定抗體與FGFR-3(IIIb)及(IIIc)之結合動力學。展示於表1中之結果概述表明，該抗體結合b及c兩種剪接形式之人類FGFR-3且與小鼠FGFR-3(IIIc)受體完全交叉反應，親和力小於10-9 M。
抗體1對膜結合FGFR-3之特異性
將鼠科動物FGFR-3(IIIc)之cDNA選殖至含有嘌呤黴素(puromycin)選擇基因之pBABE表現載體中。在L6細胞中實施所得質粒之逆轉錄病毒表現。選擇細胞，並在含有10%FBS及2μg/ml嘌呤黴素之DMEM培養基中進行培養。將表現FGFR-3之L6細胞懸浮於1% BSA/PBS中。
添加抗體1至最終濃度1-30μg/ml。在冰上培育1小時後，用1% BSA/PBS洗滌細胞，並與合適二級檢測抗體或Fab片段在相同緩衝液中在冰上培育1小時。僅用此二級抗體將對照樣品染色。使用FACSvantage SE流式細胞儀(BD Biosciences)對所有樣品進行分析。僅在使用經FGFR-3轉染之細胞(R3-L6)時產生陽性染色信號，而在使用FGFR-3陰性L6親代細胞時不產生陽性染色信號，此顯示抗體1對FGFR-3具有特異性。
FGFR-3抗體拮抗劑阻斷FGFR-3(IIIb)及FGFR-3(IIIc)調介之FGF結合及細胞信號傳導
來自上述ELISA阻斷分析之結果顯示，抗體1以介於1-10nM範圍內之IC50值阻斷FGF-1/FGFR-3結合。使用上文所述表現FGFR-3之L6細胞來測試該抗體對活細胞中FGFR-3信號傳導之活性。將表現FGFR-3之L6細胞在含有非常低濃度血清(0.1%)之培養基中沉寂過夜。第二天，將細胞分成同等大小之五份樣品。分別用同種型匹配之非特異性對照抗體(200nM)及抗體1(200nM)將樣品1及樣品2處理1h。將樣品3曝露於0.6nM FGF-9達15min。首先分別用同種型匹配之非特異性對照抗體(200nM)及抗體1(200nM)將樣品4及樣品5處理1h，隨後曝露於0.6nM FGF-9達15min。在該等處理及曝露後，溶解細胞，並對其實施SDS-PAGE及西方墨點法。使用抗磷酸-酪胺酸抗體探測FGFR-3之激活。單獨抗體1既不增加亦不降低經激活FGFR-3及MAPK之信號，且FGF-9配體曝露使經激活FGFR-3及MAPK之信號增加到相同程度。因此，該等結果表明，抗體1係拮抗劑，其阻斷活細胞中之FGFR-3受體之配體誘導的激活。
在與抗體1結合後細胞表面FGFR-3內化.
抗體1引起FGFR-3內化，此構成下行調節受體信號傳導之機制。為對此進行測試，用市售Alexa Fluor染料標記抗體以示蹤抗體1/FGFR-3複合物之位置。使抗體1及同種型匹配之非特異性對照抗體與螢光染料偶聯。將表現FGFR-3之L6細胞在含有非常低濃度血清(0.1%)之培養基中沉寂過夜。
將細胞分成同等大小之8份樣品，並接種至6孔組織培養板之各孔中。對該等樣品實施三種截然不同的程序：1)結合，其中將細胞與1mL 200nM偶聯抗體在4℃下培育1h。此溫度對於胞吞作用過低，但有助於抗體-抗原相互作用；2)內化，其中將細胞與1mL 200nM偶聯抗體在37℃下培育1h。此溫度容許胞吞作用；3)剝離，其中將細胞用1mL 0.2M甘胺酸-0.15M NaCl,pH 3在4℃下處理30min。在該條件下，未經內化之抗體不再能夠結合表面受體，並釋放至培養基中。按照以下描述來處理經FGFR-3轉染之8份L6細胞樣品：將樣品1與偶聯對照抗體(200nM,1mL)在4℃下培育1h；將樣品2與偶聯對照抗體(200nM,1mL)在4℃下培育1h，隨後剝離；將樣品3用偶聯對照抗體(200nM,1mL)在37℃下處理1h；將樣品4用偶聯對照抗體(200nM,1mL)在37℃下處理1h，隨後剝離；將樣品5用偶聯IMC-抗體1(200nM,1mL)在4℃下處理1h。將樣品6用偶聯IMC-抗體1(200nM,1mL)在4℃下處理1h，隨後剝離；將樣品7用偶聯IMC-抗體1(200nM,1mL)在37℃下處理1h。將樣品8用偶聯IMC-抗體1(200nM,1mL)在37℃下處理1h，隨後剝離。在該等處理後，將所有細胞用1mL冰冷PBS洗滌三次，並置於Odyssey紅外成像系統中以檢測相對螢光強度。樣品1-8之讀數如下：1.5、0.6、1.1、1、3.3、1.5、5及5.8。樣品1及5之處理條件容許抗體-細胞表面結合，但不容許內化。樣品2及6之處理條件既不容許細胞表面結合又不容許內化。樣品3及7之處理條件容許細胞表面結合及內化。樣品4及8之處理條件容許內化，但不容許細胞表面結合。樣品1-4以及樣品6所產生之信號由於非特異性而視為背景。在37℃下1h後，偶聯抗體1可結合細胞表面FGFR-3以及內化。
在培育後對一些樣品實施「酸洗滌」步驟以剝離表面結合之抗體而不影響已經運輸至細胞內部之抗體。此能夠定量內化之抗體。不管培育溫度或洗滌步驟如何，經類似標記之對照抗體(非特異性hIgG)未保留。儘管抗體1在洗滌之前在兩個溫度下均保留，但僅在37℃下培育者後來仍保留；表明抗體被細胞內化。
抗體1誘導細胞中之FGFR-3受體降解
OPM-2係最初分離自多發性骨髓瘤癌細胞之細胞系。已知OPM-2細胞表現隱匿功能獲得性K650E點突變之FGFR-3受體。將OPM-2細胞在低血清培養基(0.1% FBS)中沉寂過夜。第二天，將該等細胞分成5個群組。將群組1立即溶解，且溶解產物保存於-20℃下，直至實施西方墨點法分析之時。因此，該群組稱為時間0hr樣品。群組2-5各具有同等大小之3份樣品，稱為群組2、3、4及5之樣品A、B及C。群組2-5之樣品A未實施任何進一步處理，只是在37℃下進行培育。群組2-5之樣品B在37℃下用30ng/ml FGF-1進行處理。群組2-5之樣品C在37℃下用30μg/ml抗體1進行處理。將群組2之所有樣品在處理1hr後溶解，且溶解產物保存於-20℃下，直至實施西方墨點法分析之時。該群組稱為時間1hr樣品。將群組3之所有樣品在處理4hr後溶解，且溶解產物保存於-20℃下，直至實施西方墨點法分析之時。該群組稱為時間4hr樣品。將群組4之所有樣品在處理8hr後溶解，且溶解產物保存於-20℃下，直至實施西方墨點法分析之時。該群組稱為時間8hr樣品。將群組5之所有樣品在處理24hr後溶解，且溶解產物保存於-20℃下，直至實施西方墨點法分析之時。該群組稱為時間24hr樣品。當所有溶解產物準備就緒時，對其實施SDS-PAGE，繼之西方墨點法實驗。群組1與所有群組2樣品之FGFR-3信號類似。在群組3中，樣品A及C之FGFR-3信號與群組1類似；然而樣品B之信號顯著較低。在群組4中，樣品A之FGFR-3信號與群組1類似，然而樣品B及C之信號顯著較低。在群組5中，樣品A之FGFR-3信號低於群組1之信號；然而樣品B及C之信號還要大大降低。因此，與已知誘導FGFR降解之FGF-1類似，抗體1能夠以時間依賴性方式誘導FGFR-3降解；吾人認為迄今為止尚未有抗體顯示此特徵。
FGFR-3抗體拮抗劑在活體外抑制表現FGFR-3之腫瘤細胞中之FGF-信號傳導
利用流式細胞術來識別表現野生型或突變體FGFR-3(IIIb及/或IIIc)之腫瘤細胞系，其中抗體1係一級抗體。三種膀胱腫瘤細胞系RT112、RT4及BFTC905顯示顯著FGFR-3表現。已知OPM-2細胞表現隱匿功能獲得性K650E點突變之FGFR-3受體，其在該研究中亦展示高程度表現。已發現兩種其他細胞系GEO及FADU表現中等但仍然顯著程度之受體。該等腫瘤細胞中之FGFR-3信號傳導路徑係利用西方墨點法予以表徵。
OPM-2係衍生自人類多發性骨髓瘤腫瘤之細胞系。將細胞在低血清培養基(0.1% FBS)中沉寂過夜。第二天，將該等細胞分成同等大小之四份樣品。將樣品1在37℃下放置並保存1h作為對照樣品。將樣品2與200nM抗體1在37℃下培育1h。將樣品3在37℃下放置1h，隨後將該樣品在37℃下曝露於0.2nM FGF-9配體達15min。將樣品4與200nM抗體1在37℃下培育1h，隨後將該樣品在37℃下曝露於0.2nM FGF-9達15min。然後，溶解所有四份樣品，並對其實施SDS-PAGE，繼之西方墨點法。使用抗磷酸-酪胺酸抗體探測FGFR-3之激活。使用抗磷酸-MAPK抗體探測下游效應分子MAPK之激活。使用抗磷酸-Akt抗體探測下游效應分子Akt之激活。抗體拮抗FGF-9誘導之FGFR-3及MAPK之磷酸化。
GEO係衍生自人類結腸直腸腫瘤之細胞系。將細胞在低血清培養基(0.1% FBS)中沉寂過夜。第二天，將該等細胞分成同等大小之六份樣品。將樣品1在37℃下放置並保存1h作為對照樣品。將樣品2與200nM同種型匹配之非特異性對照抗體在37℃下培育1h。將樣品3與200nM抗體1在37℃下培育1h。將樣品4在37℃下放置1h，隨後將該樣品在37℃下曝露於0.67nM FGF-1配體達15min。將樣品5與200nM對照抗體在37℃下培育1h，隨後將該樣品在37℃下曝露於0.67nM FGF-1達15min。將樣品6與200nM抗體1在37℃下培育1h，隨後將該樣品在37℃下曝露於0.67nM FGF-1達15min。溶解所有六份樣品，並對其實施SDS-PAGE，繼之西方墨點法。使用抗磷酸-酪胺酸抗體探測FGFR-3之激活。樣品1、2及4具有類似的較低磷酸-FGFR3含量，而唯有樣品3具有對應於所有三種分子之顯著較高之信號。因此，1) FGF-9曝露使FGFR3之磷酸化增加；2)抗體1拮抗該等增加；且3)單獨抗體1不具有任何激動活性。
RT-112係衍生自人類膀胱腫瘤之細胞系。將細胞在低血清培養基(0.1% FBS)中沉寂過夜。第二天，將該等細胞分成同等大小之四份樣品。將樣品1在37℃下放置並保存1h作為對照樣品。將樣品2與200nM抗體1在37℃下培育1h。將樣品3在37℃下放置1h，隨後將該樣品在37℃下曝露於1.3nM FGF-1配體達15min。將樣品4與200nM抗體1在37℃下培育1h，隨後將該樣品在37℃下曝露於1.3nM FGF-1達15min。然後，溶解所有四份樣品，並對各經溶解樣品的10%實施SDS-PAGE，繼之西方墨點法。使用抗磷酸-MAPK抗體探測下游效應分子MAPK之激活。使用抗磷酸-Akt抗體探測下游效應分子Akt之激活。對各溶解產物的另外90%實施免疫沉澱實驗。將樣品與市售抗FGFR-3抗體在4℃下混合4-16hr以容許抗體收集溶解產物中之FGFR-3受體，且隨後藉由將20μg蛋白質A-蛋白質G珠粒混合物(50:50,V:V)與樣品在4℃下混合過夜而獲得結合抗FGFR-3抗體之FGFR-3。使用PBS將該等珠粒洗滌3次，隨後對其實施SDS-PAGE及西方墨點法。使用抗磷酸-酪胺酸抗體探測FGFR-3之激活。樣品1、2及4具有類似的較低磷酸-FGFR3及磷酸-MAPK含量，而唯有樣品3具有對應於所有三種分子之顯著較高之信號。因此，1) FGF-1曝露使FGFR3及MAPK之磷酸化增加；2)抗體1拮抗該等增加；且3)單獨抗體1不具有任何激動活性。唯有樣品4較其他樣品具有較低磷酸-Akt信號，表明抗體1亦可拮抗Akt信號傳導。
使用GEO細胞來製備上文所述之六份樣品，隨後溶解，並如上文對其實施SDS-PAGE、繼之西方墨點法。然而，使用抗磷酸-MAPK抗體探測下游效應分子MAPK之激活。使用抗磷酸-Akt抗體探測下游效應分子Akt之激活。樣品1、2、3及6具有類似的較低磷酸-MAPK含量，而樣品4及5具有對應於所有三種分子之顯著較高之信號。因此，1) FGF-1曝露使MAPK之磷酸化增加；2)抗體1拮抗該增加；且3)單獨抗體1不具有任何激動活性。
抗體1在活體外抑制腫瘤細胞生長及存活
利用細胞增殖分析來展示抗體1對腫瘤細胞生長之抑制效果。將單層RT112細胞在低血清培養基(0.1%胎牛血清，5μg/mL肝素)中沉寂24-72hr。將細胞分成四份樣品。向樣品1中添加FBS(胎牛血清)至最終濃度10%(V:V)。將樣品2置於饑餓培養基中。向樣品3中添加FGF-1至最終濃度1nM。向樣品4中添加抗體1至最終濃度200nM，在37℃下培育1hr。然後，添加FGF-1至最終濃度1nM。如上所述製備樣品1-4後，將樣品在設置為37℃且含有5% CO2 (v:v)之組織培養培育箱中培育48小時。利用標準3 H-胸苷納入MTS或MTT分析來檢測細胞生長。當用1nM外源性FGF-1刺激活體內RT112細胞時，腫瘤細胞生長加倍。該實驗亦顯示抗體1有效降低此外源性刺激之生長。
軟瓊脂分析亦稱為菌落形成分析或菌落產生分析(colonigenic assay)，其用以顯示抗體1對腫瘤細胞存活之抑制效果。在含有200nM抗體1(存於10% FBS培養基中)之軟瓊脂中生長之RT112細胞比在僅含有10% FBS培養基或含有200nM同種型匹配之非特異性對照抗體(存於10% FBS培養基中)之軟瓊脂中生長之RT112細胞所形成的菌落少約50%。此顯示抗體1對腫瘤細胞具有抗存活效果。
抗體1顯示對具有FGFR3之實體腫瘤具有抗腫瘤效果
藉由常規方法建立RT112及GEO異種移植物腫瘤模型，其中將與0-100%基質膠混合之100-2000萬個腫瘤細胞經皮下注射至各雌性無胸腺裸小鼠中。在平均皮下腫瘤體積為約400mm2 時，開始抗體治療。與對照群中之相同類型腫瘤相比，兩種腫瘤細胞系RT112及GEO對應異種移植物腫瘤均藉由每週三次腹腔內注射40mg/kg抗體1治療而有效抑制。為證實該等效果係由具有FGFR-3信號傳導路徑而引起，使用原位PC-3腫瘤模型來實施功效研究，其中腫瘤細胞無FGFR-3信號傳導，如藉由來自FGFR-3受體磷酸化之西方墨點法分析的陰性結果所表明。原位PC-3模型係藉由通過手術將經螢光素酶轉染之PC-3細胞(PC-3LP)直接注射至Nu/nu小鼠(雄性，7-8週，1×106 個細胞/小鼠)之背葉前列腺中而產生。細胞移植後兩週，在腹側位置上(動物背部朝下躺著)捕獲動物之生物發光圖像，並利用IVIS系統按照製造商說明書(Caliper Life Sciences,Hopkinton,MA)定量。將成功獲得移植物之小鼠隨機分組，以規定時間方案經腹腔內接受各種測試藥劑。藉由IVIS捕獲之信號用作腫瘤負荷之替代，且每週記錄一次。利用重複ANOVA實施統計學分析。抗體1顯示對PC-3腫瘤生長無顯著影響。因此，抗體1抑制具有功能FGFR-3信號傳導路徑之實體腫瘤的生長。
抗體1顯示對具有突變體FGFR-3受體之骨髓樣腫瘤具有抗腫瘤效果
OPM-2及KMS-11係表現FGFR-3之多發性骨髓瘤細胞系。另外，兩種細胞系中之受體均為隱匿單點突變之突變體，單點突變分別為：OPM-2中之K650E及KMS-11中之Y373C。兩種突變均為功能獲得性突變，且通過諸如基本激活、延長半衰期及提高配體靈敏性等機制而提高突變體受體之活性。藉由常規方法建立OPM-2異種移植物模型，其中將與0-100%基質膠混合之100-2000萬個腫瘤細胞經皮下注射至各雌性無胸腺裸小鼠中。在平均皮下腫瘤體積為約400mm2 時，開始注射治療。KMS-11骨移植物植入模型係按照Xin X等人，Clin Cancer Res. 2006年8月15日；12(16):4908-15來建立。在腫瘤細胞注射後1週開始抗體治療。在兩種模型中，與對照群相比，每週三次腹腔內注射40mg/kg抗體1治療顯著抑制腫瘤生長。抗體1似乎第一個展示對具有K650E之腫瘤細胞以及具有Y373C突變體形式FGFR-3之腫瘤細胞之活體內抗腫瘤活性。
抗體1增強細胞毒性劑之治療功效
順鉑係癌症療法中廣泛使用之細胞毒性劑。其導致DNA交聯且誘導細胞凋亡。在三種膀胱異種移植物模型中探究將順鉑與FGFR-3抗體組合之治療益處。藉由常規方法建立RT112、RT4及BFTC905異種移植物腫瘤模型，其中將與0-100%基質膠混合之100-2000萬個腫瘤細胞經皮下注射至各雌性無胸腺裸小鼠中。在平均皮下腫瘤體積為約400mm2 時，開始抗體治療。每週三次注射40mg/kg抗體1及使用最大耐受劑量(MTD)之順鉑。在該三種腫瘤模型中，與任一單一療法形式相比，順鉑-抗體1組合始終最大程度地降低腫瘤大小。對數據進行進一步分析，顯示組合引起之效果與來自任一單一療法之效果間的差異為統計學顯著差異。該等研究之整個過程期間沒有一隻動物死於治療，表明向MTD之順鉑中添加抗體1可增強後者之功效而不顯著惡化兩種藥物之不良作用。

Claims (7)

  1. 一種抗體或其人類結合片段，其特異性結合人類FGFR-3，該抗體包含CDRH1，具有序列GYMFTSYGIS(SEQ ID NO 1)；CDRH2，具有序列WVSTYNGDTNYAQKFQG(SEQ ID NO 2)；CDRH3，具有序列VLGYYDSIDGYYYGMDV(SEQ ID NO 3)；CDRL1，具有序列GGNNIGDKSVH(SEQ ID NO 4)；CDRL2，具有序列LDTERPS(SEQ ID NO 5)；及CDRL3，具有序列QVWDSGSDHVV(SEQ ID NO 6)。
  2. 如請求項1之抗體或其人類結合片段，其中該抗體包含可變重鏈胺基酸序列：EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYMFTSYG IS WVRQAPGQGLEWMGWVSTYNGDTNYAQKFQGRVTVTTDTSTSTAYMELRSLRSEDTAVYYCARVLGYYDSIDGYYYGMDVWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO 7)及可變輕鏈胺基酸序列：QSVLTQPPSLSVAPGKTATFTCGGNNIGDKSVHWYRQKPGQAPVLVMYLDTERPSGIPERMSGSNFGNTATLTITRVEAGDEADYYCQVWDSGSDHVVFGGGTKLTVLG(SEQ ID NO 8)。
  3. 如請求項1或2之抗體或其人類結合片段，其包含SEQ ID NO：9之重鏈及SEQ ID NO：10之輕鏈。
  4. 如請求項1或2之抗體或其人類結合片段，其包含兩條SEQ ID NO：9之重鏈及兩條SEQ ID NO：10之輕鏈。
  5. 如請求項1或2之抗體或其人類結合片段，其特異性結合突變FGFR-3。
  6. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至5中任一項之抗體或其人類結合片段與醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
  7. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至5中任一項之抗體或其人類結合片段與醫藥上可接受之載劑。
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