TWI375563B - Methods and compositions for treating tumors and metastatic disease - Google Patents

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1375563 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本申請案係關於一種使用一抗-α4整合素免疫球蛋白或 結合於一 α4整合素配體（例如，MadCAM-Ι及VCAM-1)之免 疫球蛋白來治療患有涉及α4整合素之表現之惡性腫瘤及/ 或轉移性疾病的患者之方法。本發明亦提供一藥物製劑於 抑制腫瘤生長及/或轉移性進展及/或轉移發展之用途。 【先前技術】 已知良性及惡性腫瘤二者皆以正常細胞所不具有之模式 表現蛋白質。腫瘤或惡性細胞所展示之蛋白質模式可反映 疾病之發展階段（即，早期階段或轉移性疾病）。當惡性腫瘤 進展時’細胞往往會越來越不同於他們所源自之組織。當 一癌症進展至變得更加分化不良時，不管使用哪種分期模 式來測定癌症之進展，細胞皆變得更可能轉移及/或更難使 用傳統療法對其加以治療。癌症療法可包含一或多種下列 療法.化療、外科手術治療、放射治療、高熱療法、免疫 療法、骨髓移植、激素療法及生物療法。 整合素係一族與細胞黏附、免疫細胞遷移及激活有關之 細胞表面糖蛋白。除嗜中性粒細胞外所有循環白細胞皆表 現α-4整合素，α_4整合素與心丨⑶丨）或0·7(β7)整合素亞單位 結合形成異二聚體受體。α_4心1(〇;4131)整合素及α_4β7(α4β7) 整合素皆在白細胞穿過血管内皮之遷移中扮演角色 (Springer等人，Ce//，1994, ％: 3〇114; Butcher等人^ 1996, 272: 60-6)且有助於實質内細胞激活及存活（1^爪16等 99388.doc 1375563 人，/wmwwo/.，1993; 151: 2368-79; Koopman等人，χ Immunol., 1994， 152: 3760-7; Leussink 等人， 2002, 103: 131-136)。α4β1整合素在淋巴細 胞、單核細胞、巨噬細胞、肥大細胞、嗜鹼細胞及嗜曙紅 細胞中以原構性方式表現。 α-4β-1 (亦稱作極遲抗原_4, VLA-4)與血管細胞黏附分子· l(VCAM-l)(Lobb等人，《/. C/z”. /«veW· 1994, 94: 1722-8)結

合’ 管内皮在許多慢性發炎位點皆表現 VCAM-l(Bevilacqua等人，1993，11: 767-804; Postigo等人，1993，Λβ·?· 144: 723-35)。 α4β1整合素具有其他配體，包括纖維連接蛋白及其他細胞 外基質（ECM)組份。 α-4β-7整合素與黏膜位址素細胞黏附分子（MAdCAM-1) 相互作用’且調介淋巴細胞至内臟之尋靶（Farstad等人， 1997, Am. J. Pathol., 150: 187-99; Issekutz, 1991, J.

147: 4178_84)。由此，需要發現可抑制癌瘤生長 及轉移之新穎試劑、組合物及使用該等試劑及組合物之方 法，其可單獨使用或與其他試劑結合使用來洽療癌症，尤 其是通常涉及轉移之晚期腫瘤。 【發明内容】 本發明提供新穎方法、組合物及組合療法來治療腫瘤及/ 或轉移性疾病及/或抑㈣瘤生長。該等方法、組合物及組 合療法係較佳針對α4表現癌症之治療，例如，淋巴瘤、白 ;两…、色素瘤、則列腺癌及任何α4表現原發腫瘤之轉移 99388.doc 性疾病。 因此，本發明之一態樣係提供一抑制腫瘤生長及/或轉移 或轉移性擴散之方法，其包括以足以抑制腫瘤生長、及/戋 轉移、及/或轉移性擴散之量向有其需要的患者投與抗 免疫球蛋白或結合於一《4整合素配體（例如，MadCAM]* VCAM-1)之免疫球蛋白。該抗_α4抗體較佳與“…整合素及/ 或α4β7整合素結合，且更佳該免疫球蛋白係一單克隆抗體 (例如，那他珠單抗）。 本發明之另一態樣係所治療腫瘤係一實體腫瘤或一實質 腫瘤。使用該寺方法、組合療法、及抗整合素免疫球蛋 白或抗α4整合素配體之免疫球蛋白治療之預期實體組織腫 瘤包括但不限於黑色素瘤（例如，皮膚黑色素瘤、轉移性黑 色素瘤、或眼内黑色素瘤）、前列腺癌及其他原發腫瘤之轉 移性病灶。 本發明之又一態樣涵蓋，所治療腫瘤係一實質腫瘤，例 如，骨腫瘤、白血病（例如，慢性骨髓性白血病、急性骨髓 性白jk病、成人急性淋巴母細胞性白血病、急性骨骑性白 企病、成熟B細胞急性淋巴母細胞性白灰病、慢性淋巴細胞 白血病、前淋巴細胞白血病或毛狀細胞白血病），或淋巴瘤 (例如’非隹奇金氏淋巴瘤（non.Hodgkin’s lymphoma)、皮膚 τ細胞淋巴瘤或霍奇金氏病（Hodgkin，s disease))。 本發明之另一實施例涵蓋，以約1毫克/公斤患者體重至 約100毫克/公斤患者體重（及該範圍内之任意整數值）之量 投與患者抗-α4整合素免疫球蛋白。更佳地，以約1毫克/公 99388.doc 1375563 斤患者體重至約10毫克/公斤患者體重之量投與患者抗-α4 整合素免疫球蛋白。較佳地，該免疫球蛋白係那他珠單抗。

在本發明之另一態樣中，該等免疫球蛋白可單獨投與或 以一多方案形式與其他癌症治療方案結合投與。舉例而 言，若該腫瘤係一黑色素瘤，患者可於手術去除黑色素瘤 後接受那他珠單抗治療。若該腫瘤係黑色素瘤，則上述方 法可進一步與諸如下列等癌症治療方案結合：隔離肢體灌 注、區域灌注化療、全身性化療、或使用一第二抗體（例如， 一抗-GM2神經節苷脂抗體、抗-GD2神經節苷脂抗體、抗-GD3神經節普脂抗體）或抗血清之免疫療法。該化療試劑可 係下列試劑中的任意一種或多種：達卡巴嗪（dacarbazine)、 亞石肖基脲氮齐（carmustine)、環己亞硝基脲（lomustine)、牛 績莫司幻 (tauromustine)、福莫司汀（fotemustine)、司莫司丁 (semustine)、川貝链（cisplatin)、卡在白（carboplatin)、長春新驗 (vincristine)、長春滅痕驗（vinblastine)、長春地辛 (vindesine)、 紅豆杉醇（taxol)、 二漠衛矛醇 (dibromodulcitol)、地托比星（detorubicin)、°比曲克辛 (piritrexim)及干擾素（interferon)(例如，干擾素-a2)。 本發明之又一態樣涵蓋一種治療轉移至腦、肺、肝臟或 骨骼之轉移之方法。 本發明之另一態樣涵蓋一種聯合使用結合至α4整合素或 其配體（例如，MadCAM-Ι及VCAM-1)之免疫球蛋白與其他 淋巴瘤治療方案來治療淋巴瘤之方法。 本發明之另一態樣涵蓋一組合治療方法，其中結合至α4 99388.doc 1375563 整合素或其配體（例如，MadCAM_1&VCAM_1)之免疫球蛋 白與此項技#中習知的其他腊瘤治療方案結合使用。 本發明之另一態樣係提供一種藥物製劑之用途，當將該 藥物製劑技予一有其需要之患者時可抑制腫瘤生長、及/或 抑制轉移、及/或抑制或減緩疾病進展，且該藥物製劑包含 抗α4整合素免疫球蛋白或一結合於整合素配體（例如， MadCAM-Ι及VCAM-1)之免疫球蛋白。 本發明之另一態樣涵蓋一種藥物製劑之用途，該藥物製 劑包含一抗·《4整合素免疫球蛋白，當將其投予一有其需要 之患者時可抑制腫瘤生長及/或轉移性進展及/或轉移之發 展。較佳地，進一步使用化療、免疫療法、外科手術、放 射療法、高熱療法或一藥物來治療該患者以改善癌症治療 之副作用。較佳地，該腫瘤係黑色素瘤、白血病、前列腺 癌或淋巴瘤。 【實施方式】 1. 定義及縮略詞 根據該實施方式，下列縮寫詞及定義適用。必須注音， 除非上下文令明確地另有說明，否則此處所用單數形式 「一」及「該」皆包含複數指示物。由此，舉例而言，备 提及「一抗體」時亦包括複數個該等抗體且當提及「哕气 量」時亦包括提及一或多個劑量及熟習此項技術者習知的 其等效物，等等。 本文所討論公開案僅因為其揭示内容先於本申請案之申 請日期而提供。絕不能由於此等公開案為先前發明而理解 99388.doc 1375563 為承認本發明無權先於此等公開案。此外，所提供的公開 日期可旎與實際公開曰期不同，實際公開曰期可能另需 獨證實。 u定義 此處所用術扣患者（subject〇rpatient)」意欲包括一哺 乳動物。該哺乳動物可係犬、猶'靈長類動物、+ '綿羊、 豬駱轮（camelid)、公山羊、齧齒動物或馬。該哺乳動物 較佳係人。 所用術語「那他珠單抗」或「丁⑽⑽」係指一抗VLA_4 之人源化抗體，如美國專利案第5,84〇,299號及第6,〇33,665 號所述，其全部内容以引用的方式倂入本文中。此處亦涵 盍其他VLA-4專-性抗體。該等抗心_4抗體及免疫球蛋白 包括但不限於彼等闡述於美國專利案第M〇2,5〇3號及第 6,551，593號及已公開的美國中請案第2咖細3號 (Rehon等人)之免疫球蛋白。該抗體可藉由揭示於該等專利 案及申請案t之方法，藉由哺乳動物細胞表現或經由轉基 因動物表現系統（例如，山羊）製備。 此處所用術語「功效，招一蛀—、人由 刀双」知特疋治療方案之效力。功效 可基於諸如下列(但不限於該等)等特徵量測：抑制腫瘤生 長、減小腫瘤體積、減少轉移性病灶（例如，藉由放射成像 評定）、腫瘤生長減缓、未檢測到與腫瘤相關之抗原及諸如 此類。評定Μ瘤進展的額外方、.泰& 由疋欣町領外方法响述於本文中並為治療及 診斷醫師所習知。 用語「醫藥上可接受載劑」及「醫藥上可接受賦形劑」 99388.doc -10. 指用於形成調配物的一部分之任一化合物 :為-載劑，即，其自身不欲具有生物活性 ： 接—!通常安全、無毒，及在生物學= 面皆無不期望作用。本文所用醫寧上可接…丨^他方 包含一 曾樂上了接又載剤或賦形劑 ° 3 或多種此載劑或賦形劑。 本文所用術語「―恭 . ^ 。 /口療」（treatmg」和「treatmentj )及 諸如此類通當指麻‘ “曰獲侍一期望樂理及生理效應。更具體而 '、文所述用於治療-患有—腫瘤及轉移性疾病之患者 L式劑通吊係以一治療有效量提供來達成下列效果中的任 Π 或夕種.抑制腫瘤生長、減小腫瘤體積、不出現轉 移性病火土、在〉台/療開始後抑制新轉移性病灶之發展或使腫 :廇減輕至檢測不到疾病(藉由，例如，放射成像、生物流體 :析、細胞遺傳學、螢光原位雜交、免疫細胞化學、群落 刀析去、多參數流式細胞術或聚合酶鏈式反應來評估）。本 文所用術語「治療（treatment)」涵蓋任何對一哺乳動物較佳 人類之疾病之治療。 〜療有效量」指當投予一哺乳動物時足以有效抵抗腫 瘤的本文所揭示藥劑、試劑、化合物、組合物或試劑組合 之量0 術。。腫瘤」意欲包括良性及惡性生長或癌二者。由此， 除非另有說明，否則術語「癌」可包含良性及惡性生長二 者。較佳地，腫瘤係惡性的。腫瘤可係—實體腫瘤，例如， 黑色素瘤或實質腫瘤，例如，淋巴瘤、白血病或骨癌。 術語「原發腫瘤」係指原始贅生物而非位於患者體内另 99388.doc 11 1375563 一組織或器官之轉移性病灶。術語「轉移性疾病」、「轉移」 及「轉移性病灶」係指一群相對於原發腫瘤已轉移至一較 遠位置之細胞。 1.2縮略詞 下列縮略詞通常用於相關術語且在此項技術中為人習 知。 α4β 1 «4Β7

Ab ABDIC

ALL AML BMT CAF CAMP CAVP

CBVD

CCNU α-4β-1 α-4β-7 抗體 多柔比星（doxorubicin)、博萊黴素 (bleomycin)、達卡巴口秦（dacarbazine)、環 己亞硝基脲（lomustine)及強的松 (prednisone) 急性淋巴細胞白血病 急性骨髓性白血病 骨髓移植 環填酿胺、阿黴素（adriamycin)及5-敗尿°密°定 環己亞硝基脲、米托蒽i昆（mitoxantrone)、 阿糖胞苷（cytarabine)及強的松 環己亞硝基脲、美法侖（melphalan)、表鬼 抬毒素（etoposide)及強的松 環己亞硝基脲、博萊黴素、長春鹼、地塞 米松（dexamethasone) 環己亞硝基脲 99388.doc -12- 1375563 CEFF(B) 環磷醯胺、表鬼桕毒素、丙卡巴井 (procarbazine)、強的松及博萊黴素 CEM 環己亞硝基脲、表鬼桕毒素及胺曱蝶呤 CEP (methotrexate) 環己亞硝基脲、表鬼桕毒素及潑尼莫司汀 CEVD (prednimustine) 環己亞硝基脲、表鬼桕毒素、長春地辛 (vindesine)及地塞米松 CHOP 環磷醯胺、多柔比星、長春新鹼 (vincristine)及強的松 CLL 慢性淋巴細胞白血病 CMF 環磷醯胺、胺甲蝶呤及5-氟尿嘧啶 CML 慢性骨髓性白血病 CNS 中樞神經系統 CTCL 皮膚T細胞淋巴瘤 DHAP 地塞米松、高劑量阿糖胞苷及順鉑 ECM 細胞外基質 EPOCH 表鬼枱毒素、長春新驗、多柔比星、環填 醯胺及強的松 ESHAP 表鬼枱毒素、甲潑尼龍（methylpredisolone)、 高劑量阿糖胞苷及順鉑 EVA 表鬼抬毒素、長春驗及多柔比星 EVAP 表鬼桕毒素、長春鹼、阿糖胞苷及順鉑 99388.doc -13· 1375563 GAP-BOP 環磷醯胺、多柔比星、丙卡巴井、博萊黴 素、長春新驗及強的松 HD 高劑量 . 3H-FUDR 3H-氟尿苷 . IFN 干擾素 * IFN-a2 干擾素-a2 IFNB-la 干擾素β-la IHC •. i.m. 免疫組織化學 肌内 IMVP-16 異環填醯胺（ifosfamide)、胺甲蝶吟及表鬼 才臼毒素 i.p. 腹膜腔内的 i. v. 血管内的 m-BACOD 胺甲蝶呤、博萊黴素、多柔比星、環磷醯 胺、長春新鹼、地塞米松及甲醯四氫葉酸 參 MAb (leucovorin) 單克隆抗體 MACOP-B 胺曱蝶呤、多柔比星、環磷醯胺、長春新 鹼、強的松、博萊黴素及曱醯四氫葉酸 MadCAM-1 黏膜位址素細胞黏附分子1(亦稱作 ψ CD106) MeCCNU 司莫司汀或曱基CCNU MF 蕈樣真菌病 99388.doc -14- 1375563 MIME 鹽酸丙脉腙（methyl-gag)、異環鱗醯胺、胺 曱蝶呤及表鬼桕毒素 MINE 米托嗤酮（mitoquazone)、異環填酿胺、長 春瑞濱（vinorelbine)及表鬼抬毒素 MOPLACE 環磷醯胺、表鬼桕毒素、強的松、胺甲蝶 呤、阿糖胞苷及長春新鹼 MOPP 氮芬、長春新鹼、丙卡巴井及強的松 MS 多發性硬化 MTX 胺甲蝶呤 MTX-CHOP 胺甲蝶呤及CHOP NAT 那他珠單抗（Tysabri®) PBMC 周邊血液單核細胞 PCVP 長春新鹼、丙卡巴井、環磷醯胺及強的松 p.o. 經口給藥（口服） ProMACE-MOPP強的松、胺甲蝶呤、多柔比星、環磷醯胺、 S.C. 表鬼桕毒素、甲醯四氫葉酸和標準MOPP 皮下的 SDS-PAGE 十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳 SCID 嚴重聯合免疫缺陷 TNM 腫瘤、結節及轉移，係美國癌症聯合委員 會（American Joint Commission on Cancer) 之分期類別 VABCD 長春驗、阿黴素、達卡巴°秦羅氮芥、環己 亞硝基脲及博萊黴素 99388.doc -15- 1375563 血管細胞黏附分子1(亦稱作CD106及 INCAM-110) VLA-4 極遲抗原-4(亦稱作α-4/3-1、α4β 1整合素、 VLA-4a及 CD49d) 2·疾病 在本發明之一態樣中，本文所揭示方法及組合物可用於 抑制或減緩惡性腫瘤之進展。該等惡性腫瘤可係實體或實

質腫瘤。實質腫瘤包括骨癌、淋巴瘤及白血病。本發明之 另一態樣係使用該等方法及組合物來抑制或阻止轉移或轉 移性進展。

VCAM-l 由此，本發明之一態樣係利用一免疫球蛋白來治療腫瘤 或轉移性疾病。該免疫球蛋白可以α4及較佳⑽…整合素及/ 或㈣7整合素為乾。或者’該免疫球蛋白可以W配體（例 如’ VCAM]㈣以心）為靶。該等免疫球蛋白可單獨使 用，互相結合使用或與其他癌症治療方案（例如但不限於化 療、外科手術、放射療法、高熱療法1疫療法、激素療 法、生物療法（例如，造成細胞破壞之免疫效應機理、細胞 活激素、免疫療法、干擾素、介白素_2、癌疫苗療法及過 繼療法））及改善此等癌症治療方案之副作用之藥物結合使 用。 口 〇 2.1癌症治療 腫瘤之集合，其 癌症」實際上由 點的細胞亞群組 術語「癌症」包括每種器官之所有惡性 由無數子集組成。通常’在癌症診斷時，「 多種具有不同遺傳、生化、免疫及生物特 99388.doc •16· 1375563 成。 待由本發明·组合物及方法治療的癌症類型係彼等展示α4 整合素（即α4β1及/*α4β7)或其配體（例如，vcam]及/或 ' MadCAM-Ι)之癌症。較佳癌症包括但不限於黑色素瘤（例 ‘如，皮膚黑色素瘤、轉移性黑色素瘤及眼内黑色素瘤）、前 列腺癌、淋巴瘤（例如，皮膚τ細胞淋巴瘤' 蕈樣真菌病、 霍奇金氏及非霍奇金氏淋巴瘤及原發中樞神經系統淋巴 φ 瘤）、白血病（例如，前Β細胞急性淋巴母細胞性白血病、慢 性及急性淋巴細胞白血病、慢性及急性骨髓性白血病、成 人急性淋巴母細胞性白血病、成熟Β細胞急性淋巴母細胞性 白血病、前淋巴細胞白血病、毛狀細胞白血病及τ細胞慢性 淋巴細胞白血病）及轉移性腫瘤，其在細胞表面展示該等蛋 白質。應注意，儘管蕈樣真菌病（MF)、S0zary症候群 '皮 膚網狀細胞肉瘤及幾種其他皮膚淋巴細胞體液不調曾被認 為係不同的疾病，現已認識到，它們係皮膚τ細胞淋巴瘤 _ (CTCL)之不同臨床表現，由此包含在該術語中。參見Lynn D.

Wilson 等人，「Cutaneous T-Cell Lymphomas，」in CANCER: PRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2220-2232 (Vincent T. DeVita，Jr.等人，編者，5th ed. 1997); Bank 等 人，1999, J. Cutan. Paiho!.，26(2).. 65-71。 2 · 2轉移性疾病 當在患者身上診斷出腫瘤時，首要問題係該腫瘤是否已 經發展且蔓延到局部淋巴結及遠端器官。最終，大多數癌 症死亡是由轉.移灶造成，因為其對傳統癌症治療有抗性。 99388.doc 17 1375563 轉移灶可定於不同的器宫及同—器官之不同區肖，使得外 科手術、放射、藥物及/或生物療法幾乎不可能完全將 除〇 '、 ‘ 本發明亦涵蓋以本文所揭示方法、組合療法及組合物之 * A療係治療轉移性癌症。通常’癌症僅在起始組織的一處 位置開始生長。當癌症進展時，癌症可遷移至患者身體上 的-遠端區域。舉例而言，一起始於前列腺的癌症可遷移 鲁 i肺臟。本文所涵蓋的轉移性疾病之其他常見位置包括至 腦、肺臟、肝臟及骨之轉移性癌症。已 亞單位W咖)在轉移灶中的表現較在正=2 組織及正常黑色素細胞中的表現增加。Hartstein等人，1997, Ophthal. Plast. Reconstr. Surg., 13(4)： 227-38 在所有的腫瘤中轉移的形成有幾個主要步驟.。該等步驟 包括下列： (1) 在贅瘤轉化後，贅瘤細胞漸進性增殖，其受到腫瘤 所位於的器官/組織環境的支持。 (2) 該腫瘤新血管形成或血管生成，進一步生長至直徑 .超過1至2毫米。 (3) 向下調節黏著分子之表現’其中該等細胞運動性或 能力增強’脫離該原發病灶。 (4) 單個腫瘤細胞或細胞集群脫離並阻塞，該等細胞中 的大部分會受到迅速破壞。 (5) —旦腫瘤細胞自脫離或阻塞步驟存活下來，他們必 須開始繼續在血管内腔内增殖。然後該等細胞藉由類似於 99388.doc -18· 1375563 彼等在入侵期間有效的機制開始繼續外滲至器官實質。 (6) 具有適當細胞表面受體的腫瘤細胞可應答旁分泌 生長因子且因此在器官實質中增殖。 (7) 腫瘤細胞逃避宿主之防禦（專一性及非專一性免疫 應答）。 (8) 對於增殖超過1至2毫米直徑之轉移，其必須發展一 血管網絡。

由此，若一原發腫瘤獲得足夠時間來經歷該等步驟，則 其會遠離該原發腫瘤的一處或多種位點形成轉移性病灶。 所揭示試劑、方法及組合療法在新陳代謝過程中抑制或阻 止該等步驟中的一或多個。關於腫瘤轉移的機制及病理學 的詳細資料參見 Isaiah J. Fidler， 「Molecular Biology of Cancer: Invasion and Metastasis,」 in CANCER: PRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 135-152 (Vincent T. DeVita等人，編者，5th ed.，1997)。

因此，本發明之一態樣係提供包括抗-α4整合素免疫球蛋 白或以〇:4整合素配體（例如，VCAM-1及MadCAM-Ι)為靶之 免疫球蛋白之組合物及使用該等免疫球蛋白之方法。一較 佳抗-α4整合素免疫球蛋白係一抗-VLA-4抗體（例如，那他 珠單抗）。該等免疫球蛋白可單獨使用或與其他可阻止轉移 或抑制轉移性病灶進展之試劑或癌症治療方案結合使用》 由此，該等組合物及方法可用於治療展示一 α4整合素或α4 整合素之配體之任何原發腫瘤之任何轉移。 3. 免疫球蛋白療法 99388.doc -19- 1375563 所涵蓋的用於治療上述癌症的免疫球蛋白包括抑制⑽β i 及/或α4β7與其同源配體（例如，vcam」或MAdCAM_i)結合 的抗_α4整合素抗體。本發明亦涵蓋使用抗該等配體的免疫 球蛋白。該等免疫球蛋白可係抗體（即，單株抗體、靈長源 化抗體、人源化抗體或人類抗體以及嵌合抗體及雙專一性 抗體）。該等免疫球蛋白亦可係抗體之免疫原性片斷（例如，

Fab ’ scFv，Fab’，F(aly)2，⑽，，他或一重組合成片斷） 或重組產生的免疫球蛋白。一較佳抗_蚪抗體係那他珠單 抗。然巾，本發明亦涵蓋其他抗·α4整合素免疫球蛋白，包 括可區分α4β1與α4β7之免疫球蛋白。若受試患者係人，則 較佳免疫球蛋㈣單株抗體，更佳免疫球蛋白係人源化或 靈長源化抗體。 該等抗體可單獨使用或與其他抗_ α4整合素免疫球蛋白 或結合於〇4整合素配體之免疫球蛋白組合使用。本發明之

另一態樣涵蓋抗抗體與其他常見癌症治療方案以組合 治療的形式組合使用。 ° 4 · 組合治療 癌症有許多治療方法。用於治療—癌症之特定癌症療法 或治療方案之組合很大程度上端視癌症類型、其階段、串 者（例如，體重、性別、年齡、健康狀況、先前癌症及諸^ 此類）及治療t患者所處時期（例如，首次治療、在急性轉化 期、不服從初始治療、癌症復發或—可能藉由數月或數年 前首次癌症治療誘發的第二癌症）而定。所以，通常醫師需 結合多種最適合患者抗擊疾病需要之治療方案與患者自我 99388.doc 1375563 決定之生活品質加以考慮。治療方案包括但不限於外科手 術、放射治療、化療、生物療法（例如，細胞活素、免疫療 法及干擾素）、激素療法及高熱療法^ 習知的化療可進一步劃分成激素療法（例如，抗雌激素、 芳香化酶抑制劑、促性腺激素釋放激素類似物及抗雄激 素）、抗腫瘤烷化劑（例如，芥末、亞硝基脲、四嗪及氮丙啶）、 順鉑及其類似物、抗代謝物（例如，胺甲蝶吟、抗葉酸、5_ 氟喷咬、阿糖胞苷、阿紮胞苷、二氟去氧胞苷、6-硫嗓吟 (6-thipudnes)及羥基脲）、拓樸異構酶活性試劑、抗微管劑 (例如，長春花生物鹼、太平洋紫杉醇及雌莫司汀 (estramustine))、分化試劑（例如，類視色素、維他命、 極性-非極性化合物、丁酸鹽及苯基乙酸鹽、細胞毒性藥 物、細胞活素及其組合）及其他化學治療試劑，例如，氟達 拉濱（fludarabine)、2-氣去氧腺苷、2，_脫氧柯福黴素 (2'-deoxycof〇rmycin)、高三尖杉酯鹼（HHT)、蘇拉明 ^ (suramin)、博萊黴素及左旋天冬醯胺酶。 4 · 1治療淋巴瘤之組合療法 本發明之一態樣涵蓋使用抗_α4整合素免疫球蛋白或結 合於α4整合素配體（例如，MadCAM_1&VCAM_1)之免疫球 蛋白來治療淋巴瘤。本發明涵蓋使用本文所揭示組合療法 治療任何表現一 α4整合素或一結合μ整合素之配體之淋巴 瘤細胞。 本發明所涵蓋藉由該等組合療法治療的淋巴瘤包括τ細 胞淋巴瘤’例如但不限於皮膚Τ細胞淋巴瘤（Ctcl)、Τ細胞 99388.doc -21 · 1375563 非霍奇金氏淋巴瘤、周邊τ細胞淋巴瘤、退行發育性大細胞 淋巴瘤、抗·免疫母細胞淋巴瘤及前體τ細胞淋巴瘤 (Τ-LBL)。淋巴瘤之治療亦端視所治療患者、疾病類型及其 階段而定。現有治療白血病及淋巴瘤的治療方案係概括地

闡述於CANCER: PRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY (Vincent T. DeVita等人編輯，第5版，1997)。本發明亦涵 蓋治療B細胞淋巴瘤（例如，濾泡型淋巴瘤、彌漫性大型B 細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、B-CLL/SLL、免疫細胞瘤/瓦 爾登斯特倫氏（Waldenstrom's)及MALT-型/單核血球樣B細 胞淋巴瘤）。本發明亦涵蓋治療兒童淋巴瘤（例如，勃凱氏 (Burkitt's)淋巴瘤、彌漫性大型B細胞淋巴瘤、濾泡型淋巴 瘤、前體B-LBL、前體Τ-LBL、退行發育性大細胞淋巴瘤及 周邊T細胞淋巴瘤）。

用於治療淋巴瘤之常見藥物組合包括但不限於 CHOP(即，環碌醯胺、多柔比星、長春新驗及強的松）、 GAP-BOP(即，環破醯胺、多柔比星、丙卡巴井、博萊徽素、 長春新鹼及強的松）、m-BACOD (即，胺甲蝶呤、博萊徽素、 多柔比星、環磷醯胺、長春新鹼、地塞米松及曱醯四氣葉 酸）、ProMACE-MOPP(即，強的松、胺曱蝶呤、多柔比星、 環填醯胺、表鬼抬毒素、曱醯四氫葉酸和標準MOpp)、 ProMACE-CytaBOM (5金的松、多柔比星、環碟酿胺、表鬼 桕毒素、阿糖胞苷、博萊黴素、長春新鹼、胺曱蝶吟及甲 醯四氫葉酸）及MACOP-B (胺甲蝶呤、多柔比星、環碟酿 胺、長春新鹼、強的松、博萊徽素及曱醯四氫葉酸）。對於 99388.doc -22- 1375563

復發入侵性非霍奇金氏淋巴瘤而言，下列化學治療藥物組 合可與此處闞述抗體及藥物組合使用：IMVP-16(即，異環 磷醯胺、胺甲蝶呤及表鬼桕毒素）、MIME (即、鹽酸丙脒腙、 異環磷醯胺、胺甲蝶呤及表鬼桕毒素）、DHAP (即，地塞米 松、高劑量阿糖胞苷及順鉑）、ESHAP (即，表鬼桕毒素、 甲基強的松、高劑量阿糖胞苷及順鉑）、CEFF(B)(即，環磷 醯胺、阿糖胞苷、丙卡巴井、強的松及博萊黴素）、及CAMP (即，環己亞硝基脲、米托蒽醌、阿糖胞苷及強的松）。參見 Margaret A. Shipp,等人，「Non-Hodgkin's Lymphomas,」 in CANCER: PRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2165-2220 (Vincent T. DeVita等人，編者，5th ed.，1997)。

用於某些淋巴瘤（例如，復發性難治性霍奇金氏疾病）之 搶救性化療之治療包括但不限於VABCD (即，長春鹼、多 柔比星、達卡巴嗪、洛莫司汀及博萊黴素）、ABDIC (即， 多柔比星、博萊黴素、達卡巴嗪、洛莫司汀及強的松）、CBVD (即，洛莫司汀、博萊黴素、長春鹼、地塞米松）、PCVP (即， 長春鹼、丙卡巴井、環磷醯胺及強的松）、CEP (即，洛莫 司汀、表鬼桕毒素及潑尼莫司汀）、EVA (即，表鬼桕毒素、 長春鹼及多柔比星）、MOPLACE (即，環磷醯胺、表鬼桕毒 素、強的松、胺甲蝶呤、阿糖胞苷及長春新鹼）、MIME (即， 鹽酸丙脒腙、異環磷醯胺、胺曱蝶呤及表鬼桕毒素）、MINE (即，丙雙脒腙、異環磷醯胺、長春瑞濱及表鬼桕毒素）、 MTX-CHOP (即，胺曱蝶呤及CHOP)、CEM (即，環己亞硝 基脲、表鬼桕毒素及胺甲蝶呤）、CEVD (即，環己亞硝基脲、 99388.doc -23- 1375563

表鬼桕毒素、長春新鹼及地塞米松），CAVP (即，環己亞硝 基脲、美法侖、表鬼桕毒素及強的松）、EVAP (即，表鬼桕 毒素、長春鹼、阿糖胞苷及順鉑）及EPOCH (即，表鬼桕毒 素、長春新臉、多柔比星、環鱗酿胺及強的松）。參見，例 如，Vincent T. DeVita 等人，「Hodgkin’s Disease，」in CANCER: PRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2242- 2283 (Vincent T. DeVita等人，編者，5th ed·, 1997) ° 對於CTCL而言，傳統的治療方法係端視患者之評價而 定。由此，基於TNM分期，一患者通常以局部化療、補骨 脂素紫外線療法、局部外部光束放射療法、體外光化療、 干擾素（IFN)、使用核苷衍生物的全身性化學療法或光子照 射結合本文所揭示方法及組合物治療。另外的治療方案在 此項技術中為人習知。概括地參見CANCER: PRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY (Vincent T. DeVita等人，編 者，5th ed.，1997)。

由此，本發明之一態樣涵蓋使用抗-α4免疫球蛋白或抗 d:4、α4β 1及α4β7之配體之免疫球蛋白來抑制患者之淋巴瘤 進展及/或淋巴瘤之轉移《該等試劑或可單獨使用，或與本 文所論述其他淋巴瘤治療組合使用。 4 · 2黑色素瘤之組合治療 本發明之另一態樣涵蓋抑制黑色素瘤生長及/或抑制黑 色素瘤轉移灶之生長或擴散。該等抗-〇;4整合素（即，ο:4β 1 及α4β7)免疫球蛋白或識別一 α4整合素配體之免疫球蛋白 可單獨使用或與其他治療黑色素瘤的癌症治療方案組合使 99388.doc -24- 1375563 用。本發明涵蓋，該等方法及組合物用於但不限於治療皮 膚黑色素瘤、轉移性黑色素瘤及眼内黑色素瘤。治療該等 黑色素瘤之常用療法在此項技術中為人習知。參見，例如， Anthony P. Albino等人，「Molecular Biology of Cutaneous

Malignant Melanoma，」 in CANCER: PRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 1935-1947 (Vincent T. DeVita 等人，編者，5th ed.，1997); Charles M· Balch等人，

「Cutaneous Melanoma，」in CANCER: PRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY, 1947-1994;及 Jose A. Sahel 等人，「Intraocular Melanoma，」IN CANCER: PRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY, 1995-2012。

舉例而言，對治療轉移性黑色素瘤而言’外科手術、隔 離肢體灌注、區域灌注化療（使用例如，達卡巴嗪或順鉑）、 放射療法、免疫療法（例如，以抗GD2及GD3神經節苷脂之 抗體治療）、病灶内免疫療法、全身化療 '高熱療法、全身 免疫療法、腫瘤疫苗或其組合之使用可進一步與抗-α4免疫 球蛋白或抗α4、α4β 1及α4β7之配體之免疫球蛋白組合。 4.3治療白血病之組合療法 本發明之另一態樣係為某種白血病提供使用該等抗-α4 免疫球蛋白或抗α4配體（例如，VCAM-1及MadCAM-1)之免 疫球蛋白與治療白血病之傳統治療方案之組合之治療。 急性骨髓性白血病（AML)之傳統治療包括但不限於基於 蒽環類抗生素/阿糖胞苷之誘導療法、缓解後加強療法，例 如，骨髓移植（BMT)或高劑量（HD)阿糖胞苷。 99388.doc •25- 1375563 急性前骨髓細胞白血病之傳統治療包括但不限於基於蒽 環類抗生素/阿糖胞苷之治療。亦可投予患者一冷凍沈澱物 或新鮮冷凍血漿來保持纖維蛋白質水平大於100毫克/分 升。必要時亦可實施血小板灌注在人體内保持一大於 50,000/pL之曰常血小板量°

急性淋巴細胞白血病（ALL)之傳統治療方案包括除長春 新鹼及強的松外又使用環磷醯胺、天門冬醯胺酶或一組合 之四或五種藥物誘導方案。或者，醫師可選擇使用一基於 與蒽環類抗生素、替尼泊苷（epidophillotoxin)結合之阿糖胞 苷或與本文所闡述免疫球蛋白組合物結合之抗代謝物的加 強鞏固療法。然而，另一態樣可係使用利用與巯嘌呤及標 題免疫球蛋白組合之口服胺甲蝶呤之長期維持療法。另一 選擇涵蓋，與標題免疫球蛋白組合使用預防性鞘内化療（使 用或不使用頭顱放射療法）預防CNS。關於可與本發明結合 使用之治療白血病之治療方案的附加說明，參見Issa Khouri 等人，「Molecular Biology of Leukemias,」 in CANCER: PRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2285-2293 (Vincent T. DeVita等人，編者，5th ed·, 1997); David A. Scheinberg 等人，「Acute Leukemias，」in CANCER: PRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2293-2321;及 Albert B. Deisseroth 等人，「Chronic Leukemias,」in CANCER: PRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2321-2343 ° 4.4治療轉移性疾病之組合療法 99388.doc -26- 1375563 端視轉移部位及該轉移所源自之原發腫瘤而定，可單獨 使用本文所揭示組合物、組合療法及方法或與其他癌症治 療方案組合結合來治療轉移。腫瘤轉移之最常見部位係 腦、肺臟、肝臟、骨、惡性胸膜及心包膜積水及惡性腹水P 4-4.1 腦轉移 當源自中樞神經系統（CNS)外部組織之腫瘤細胞繼發擴 政至直接涉及腦時’出現腦轉移。顧内轉移可涉及腦實質、 ^ 顧神經、血管（包括硬腦膜竇）、硬腦膜、軟腦膜及額骨内板。 最常見的顱内轉移係實質内轉移。原發腫瘤之腦轉移之頻 率係肺臟（48%)、乳房（15%)、黑色素瘤（9%)、結腸（5%)、 其他已知原發腫瘤（13%)及其他未知原發腫瘤（11 %)。參

見，Jay S. Loeffler，等人，「Metastatic Brain Cancer,」 in CANCER: PRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2523-2536 (Vincent T_ DeVita等人，編者，5th ed·，1997)。 腦轉移之相關症狀包含精神狀態改變、輕偏癱、半身不遂、 ^ 視神經乳頭水腫及步態失調。由此，剛診斷為腦轉移的患 者經常進行長期痙攣預防及腎上腺皮質類固醇治療。該等 藥物包括苯妥英鈉及苯巴比妥（phen〇barbital)。 若腦轉移容易到達，則可用外科手術切除轉移灶來治 療》隨著成像及定位技術之進步，與外科手術去除腦轉移 灶相關之發病率已經降低。然而，風險仍然存在。因此， 放射療法係治療患有腦轉移患者之主要治療方.法。放射療 法可與外科手術結合’作為外科手術之輔佐治療。或者， 可使用放射外科手術。放射外科手術係一外部放射技術， 99388.doc -27· 1375563 其使用多重會聚束來給一小塊體積遞遞一高能量的單劑量 輻射。放射療法可與其他化療試劑（例如，曱基-CCNU或 ACNU)或一放射療法、曱基-CCNU、ACNU及替加氟 (tegafur)(—口服5'氟尿嘧啶）之組合同時投與。 化療亦可用於腦轉移。端視原發腫瘤，可向患者投與下 列試劑之任意一種或組合：環磷醯胺、5-氟尿嘧啶、長春 新鹼、胺甲蝶呤、多柔比星、強的松及阿黴素（例如，在CAF 或CMF之組合中）。

本文所揭示抗體組合物及使用該等抗體之方法可與本文 所述或此項技術中習知之（參見，例如，Jay S. Loeffler,等 人，1997)任意傳統治療腦轉移之形式組合。 4.4.2 肺臟轉移

肺臟係轉移性疾病之第二最常見部位。在解剖學上，肺 臟係企管豐富部位且係當循環腫瘤細胞自原發腫瘤之靜脈 排出系統離開時遇到的首個毛細血管床。由此，該等肺臟 起起始過渡位置作用，在此散佈的腫瘤細胞以機械方式受 到捕捉。然而，該等在此處被捕捉且繼續增殖而形成轉移 性病灶之細胞在很大程度上取決於其源.自的最初原發腫 瘤。肺轉移之該種血源性方式係最常見方式，但肺轉移亦 可經由淋巴系統發生。參見Harvey I. Pass等人，「Metastatic Cancer to the Lung,」 in CANCER: PRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2536-2551 (Vincent T. DeVita 等人，編者，5 th ed.，1997)。 該等繼續生長形成肺轉移之最常見原發腫瘤包含實質肉 99388.doc -28- 1375563 瘤、結直腸癌、生殖細胞腫瘤、骨肉瘤、某些小兒科腫瘤（例 如，橫紋肌肉瘤、Ewing氏肉瘤、Wilm氏腫瘤、脂肪肉瘤、 平滑肌肉瘤、蜂窩狀肉瘤、滑膜肉瘤、纖維肉瘤、神經性 肉瘤及上皮肉瘤）、黑色素瘤、腎臟細胞癌及乳房癌。大多 數源自該等原發腫瘤之轉移係以外科手術治療。然而，有 人建議將外科手術與化學治療相結合。例如，轉移至肺之 生殖細胞腫瘤外科切除後，使用基於藥品順鉑之組合化療

治療。 肺轉移治療經常涉及轉移灶切除術（即，手術去除肺轉移 性病灶）。由此，本發明之一態樣涵蓋結合使用所揭示抗體 與本文所論述或在此項技術中習知之傳統療法來治療肺轉 移。其他治療方案參見，例如，Harvey j Pass等人，1997。 由此，本發明之一態樣涵蓋，將抗·α4整合素免疫球蛋白 或識別及結合至⑽配體（例如，vcammmmcam」）之免

疫球蛋白及使用方法與任意現有治療方案結合來治療肺轉 移。 4.4.3 肝臟轉移 在肝臟中的轉移性疾病可源自許多原發腫瘤位點。因為 解剖上的靜脈排除，胃腸腫瘤優先擴散至肝臟，以致於許 多患者起始診斷為患有肝癌。對於大多數轉移至肝臟之胃 腸腫瘤而言’診斷結果極為可怕，生存期相對較短。但是， 轉移至肝臟之結直腸轉移灶可以於切除治㈣可進行治 療。 的治療方案。對全身 全身化療代表肝轉移治療中最常用 99388.doc •29- 1375563

化學治療之反應端視原發腫瘤而變化。另一治療選擇係肝 動脈化療。旰轉移幾乎完全藉由肝動脈灌注，而正常肝細 胞自門靜脈及肝動脈二者獲得血液。由此，肝動脈化學治 療（其中將3H-氟尿苷（3H-FUDR)(或其他化學治療試劑）注 入肝動脈）會使轉移灶中之藥物濃度（15倍）較在正常肝組織 中明顯升高。可經肝動脈投與之額外藥物包括_但不限於氟 尿嘴咬、5-氟尿嘴咬-2 -脫氧尿苦、雙氣乙亞硝基脲 (bischlorethylnitrosourea)、絲裂黴素 C(mitomycin C)、順韵 及多柔比星。

對一肝轉移而言，治療方案可包括全身化療（使用例如， 3H-氟尿苷）、肝内療法、肝動脈結紮或栓塞、化療栓塞、 放射治療、酒精注射及冷凍手術。對於化療栓塞而言，可 使用下列藥物方案（1) DSM及絲裂黴素C ; (2)膠原質、順 鉑、多柔比星及絲裂黴素C ; (3)氟尿嘧啶、絲裂黴素C、 乙蛾油及明膠；（4)血管抑素（angiostatin)(或其他抑制新血 管形成或血管生成的藥物）、順鉑、多柔比星及絲裂黴素C ; (5)碘化油及多柔比星；（6)凝膠泡沫、多柔比星、絲裂黴 素C及順鉑；（7)多柔比星、絲裂黴素C及碘化油及（8)聚 乙烯、酒精、氟尿°密σ定及干擾素。對於另外的治療及細節， 參見 John Μ. Daly 等人，「Metastatic Cancer to the Liver,」in CANCER: PRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY, 2551- 2569 (Vincent T. DeVita等人，編者，5th ed.，1997)。 對於肝轉移，可將現有治療方案中的任一種與包含本發 明免疫球蛋白之方法和組合物結合使用。 99388.doc -30- 1375563

4.4.4 骨轉移 治療骨轉移之最佳途徑係利用多治療方案方法。與骨相 關的問題之一係骨折及骨癒合之發生率。骨腫瘤之腫瘤塊 可經外科手術切除且可包括截肢。除外科手術治療外，可 使用放射來治療骨轉移。可考慮使用局部外部放射療法、 半身放射療法或全身放射性核素療法治療廣泛散佈骨疾 病。人們主張使用89Sr等骨親和性同位素，因其耐受性較 32P-正磷酸鹽（其係一高能量同位素）好。治療骨轉移之另外 治療方案及細節，參見，例如，John H. Healy, 「Metastatic Cancer to the Bone,」 in CANCER: PRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2570-2586 (Vincent T. DeVita 等人，編者，5th ed.，1997)。 對於轉移至骨之轉移，可將任一種現有治療方案與使用 抗-α4整合素免疫球蛋白或抗結合於一 〇:4整合素之配體（例 如，VCAM-1及MadCAM-Ι)之抗體的方法及組合物結合使 用。 4.5改善與癌治療相關之狀況之組合治療 通常，使用放射或化療之初始癌症治療方案之原理係毒 害增殖速度快於正常細胞之癌細胞，使他們更易受化療及 放射的影響。然而，用放射及化療或甚至用某些較新穎癌 症治療方案治療一患者確實對所治療患者具有副作用。由 此，本發明之一態樣涵蓋，使用可減輕藉由用於治療患者 之治療方案組合所產生之副作用的化合物及組合物。舉例 而言，可將藥物與抗癌療法相組合施用至患者，治療例如 99388.doc -31 - 1375563 但不限於噁心、嘔吐、黏膜炎及其他口服併發症、膀胱炎、 肺部毒性、心臟毒性、脫髮及性腺功能障礙等副作用。儘 g某二該4弍劑可能以純粹化妝品（例如，抑制脫髮）的形式 出現，但研究表明，保持對癌症治療之積極態度及防止情 ，·者沮喪可有助於所治療患者之整個治療反應。因此，本文 所述忒劑及缒合治療可進一步與可減輕該等副作用之藥物 治療結合，以及與任何傳統癌症治療方案結合。關於減輕 癌症治療副作用之方法之細節，通常參見，cancer: PRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY (Vincent T. DeVita等人，編者，5th ed.，1997)。 5 · 免疫球蛋白調配物及投與方法 本發明之一態樣涵蓋使用抗_α4免疫球蛋白或與一 “配 體（例如，VCAM-1及MadCAM-Ι)結合之免疫球蛋白。該等 免疫球蛋白可係完全抗體、抗體片斷或識別並結合至該等 多肽之由重組產生的免疫球蛋白。 上述相關抗體或免疫球蛋白較佳係在一生理上可接受載 劑中投予患者。該等抗體可用多種方式投與，包括但不限 於非經腸投藥，包括皮下（s_c·)、硬膜下、靜脈内（i v )、肌 内d.m·)、鞘内、腹膜腔内（i.p·)、腦内、動脈内或病灶内投 藥途徑、局部（例如，手術施用或外科手術栓劑）及肺部（例 如，氣溶膠、吸入劑或粉末），如下文進一步闡述。較佳地， 該等抗-α4免疫球蛋白或α4配體之免疫球蛋白靜脈内或皮 下給藥。 該等免疫球蛋白可端視用藥方式以多種方式調配。在調 99388.doc -32- 1375563 物（p對接艾其治療的患者有療效之調配物）中，治療活 性免疫球蛋白之漠度可在自敎GI亳克/毫升至1克/毫升之 間變化。較佳地，當投予至有其需要之患者時，該免疫球 蛋白組合物在投藥请者血液中之濃度達到約1〇微克/毫升 或更高。 較么也It免疫球蛋白係在諸如消毒的生理鹽水溶液等 適且生载劍中調配成適合非經腸投藥。舉例而言，免疫 球蛋白在载劑錢中的濃度通常在約1-150毫克/毫升之 7。投與劑量將視投藥途徑而定。較佳投藥途徑包括非經 腸、皮下或靜脈内投藥。 對非經腸投藥而言’本發明免疫球蛋白可以該物質於一 生理^可接受稀釋液及醫藥載劑十之溶液或懸浮液的可注 射劑里形式技與’稀釋液及載劑可係一消毒液體，例如， 添加或不添加-表面活性劑之水及油。其他可接受稀釋液 包括動物油、植物油或合成油，例如，花生油、大豆油及 礦物油。-般而言’諸如丙二醇或聚己二醇（pEG)等二醇係 較佳的液體載劑’尤其對於注射溶液而言。本發明之抗體 及免疫球蛋白可以儲積注射或植入製劑之形式投與，其可 以允許該或該等活性成份以一持續不變的速率釋放之^式 調配。-較佳組合物包含一2〇毫克/毫升之單株抗體，苴在 一水性緩衝液中調配，該緩衝液由50 mM L_組氨酸、、15〇 mM氣化納組成，用鹽酸調節pH至6.0。 根據本發明之-癌樣，一識別且結合至糾、糾二聚體戋 一結合於α4(或- β*此、 一 、又/、一 ♦物）之配體的免疫球蛋白可單獨投 99388.doc •33- 1375563 與，或與上述其他試劑一起投與，來治療及/或改善一腫 瘤。該等試劑亦可用於製備用來治療一患者之藥物。其他 癌症治療試劑之投與可先於免疫球蛋白之投與，與其同時 或在其之後。向患者投與該等免疫球蛋白可在外科手術治 療、放射治療、激素治療、免疫治療、高熱治療或其他癌

症治療方案之前、期間或之後進行。向患者投與該等免疫 球蛋白可根據需要每天、每週或每月進行。較佳地，該等 免疫球蛋白可在一或多周内每週投與。 免疫球蛋白之治療調配物係藉由混合具有期望純度之免 疫球蛋白與可選生理上可接受載劑、賦形劑、防腐劑或穩 定劑（REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 16th d A· 〇sol，Ed.，觸及更新版本）製備儲存，其製備成床 乾塊或水溶液的形式。可接受免疫球蛋白載劑、賦形劑或 穩定劑在所用劑量及濃度下對接受者無毒、無治療作用及/ 或無致免疫作用，i包含緩衝劑，例如，磷酸鹽、檸檬酸

鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸’低分子量（少 於約1〇個殘基)多肽；蛋白質，例如，血清白蛋白、凝膠或 錢球蛋，例如，聚乙㈣钱酮；胺基 例甘胺酸，穀胺酿胺4門冬酸胺，精胺酸或賴 胺酸，單糖、-撼，好 — 及”他碳水化合物，包括葡萄糖、甘 路糖或糊精；螯合試劑 醢加丄 例如，乙二胺四乙酸（EDTA);糖 醇，例如，甘露醇或山梨糖、^ · « ,., ' ，風开）成反荷離子，例如， 鈉，及/或非離子型表面 氧乙稀+聚氧丙稀，—種如，⑧、P1⑽嶋（聚 义面活性劑）或聚乙二醇（PEG)。載 99388.doc -34- 1375563 劑分子娃 ^ . •疋實例包括但不限於葡糖胺聚糖（例如，硫酸肝 素）透明質酸、硫酸角質素、4_硫酸軟骨素、6硫酸軟骨 素、硫酸乙酿肝素、硫酸皮膚素、基底膜蛋白聚糖及連五 -硫酸鹽。 。若而要，包含免疫球蛋白之藥物組合物亦可包括醫藥上 °殳的…、母'載劑或稀釋液，其係通常用於調配適合動物 〆·員服用之醫藥組合物之媒劑。選擇該稀釋液以便不影 鲁響該且合之生物活性。實例包括但不限於蒸餾水、硫酸鹽 緩衝生理鹽水、Ringer氏溶液、葡萄糖溶液及Hank氏溶液。 本發月4*纟彳可藉由將其溶解、懸浮或乳化於—水性或非 ^性f劑（例如，植物油或其他類似油、合成脂肪酸甘油 曰门炭月曰肪Ig曰或丙二醇酯）調配成注射用製劑。該等調 配物亦可s有常見添加劑，例如，增溶劑、等壓劑、懸浮 劑、乳化劑、穩定劑及防腐劑。 忒等免疫球蛋白亦可用於氣溶膠調配物中經由吸入或肺 % 部遞送投與。本發明之試劑亦可調配入加壓可接受推進 劑，例如，二氯二氟甲烷、丙烷、氮及諸如此類。 該免疫球蛋白亦可加入藉由（例如）凝聚技術或藉由介面 間聚合製備之微膠囊中（例如’經甲基纖維素或明膠微膠囊 及聚f基丙烯酸甲醋微膠囊）中，加人膝f藥物輸送系統（例 如’脂質體、白蛋白微球體、微型乳劑、奈米顆粒及毫微 膠囊）中，或加入大型乳劑中。該等技# _示於 REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES，見上文。 該等用於體内投藥的免疫球蛋白必須無菌。此可在康乾 99388.doc -35- 1375563 法及重S之前或之後藉由通㈣菌過遽膜過遽容易地完 成。通常該免疫球蛋白可以凍乾或溶液形式存儲。 治療性免疫球蛋白組合物通常置於一具一無菌存取口之 容器中，例如，一具一藉由可皮下注射器針頭或類似鋒利 裝置刺穿之塞子之靜脈内溶液袋或小瓶。

緩釋製劑之適宜實例包括含有該蛋白之固態疏水聚合物 之半透明基質，該等基質係呈成形物件形式，例如，膜或 微膠囊。緩釋基質之實例包括聚酯、如Langer等人，7 扪⑽Μ. Μα⑽·細.15: 167_277 (1981)及 Langer，c/2隱 12: 98-105 (1982)闡述之水凝膠（例如，聚（曱基丙烯酸 2-羥乙基酯））或聚（乙烯醇）、聚交酯（美國專利案第 3,773,919號）、L-穀胺酸與r乙基_L_穀胺酸酯之共聚物 (Sidman等人，少用奶 22: 547-556，1983)、不可降解

的乙烯-醋酸乙稀酯（Langer等人，見上文）、可降解乳酸_乙 醇酸共聚物，例如，該LUPRON DEPOT™(即，由乳酸乙 醇酸共聚物及醋酸亮丙瑞林（leUpr〇lide acetate)組成之可注 射微球體）及聚-D-(-)-3-羥丁酸（歐洲專利第133,988號）。 儘管諸如乙烯-醋酸乙烯酯及乳酸-乙二醇酸等聚合物可 使分子持續釋放1 00多天，但某些水凝膠釋放蛋白質時間較 短。當裝入膠囊之抗體長時間停留在體内時，在37〇c下暴 露於潮濕環境中會使其變性或聚集，造成生物活性損失及 免疫原性可能改變《依據所涉及機制可設計合理的策略保 持免疫球蛋白穩定性。舉例而言，若發現聚集機制係經由 硫-二硫化物互換形成分子間S-S鍵，則可藉由修飾酼基殘 99388.doc -36- 1375563 基、自酸溶液凍乾、控制水分含量、使用適宜添加劑、形 成特定聚合物基質組合物及諸如此類達成穩定性。 緩釋免疫球蛋白組合物亦包括脂質體俘獲免疫球蛋白。 含有免疫球蛋白之脂質體藉由本身為人習知的方法製備。 參見’例如 ’ Epstein等人，Proc Natl Acad Sci USA 82: 3688 92 (1985); Hwang等人，proc· Natl. Acad. Sci. USA 77: 4030-4 (1980);美國專利案第 4,485 〇45; 4,544 545;

6，139,869號及第6,〇27,726號。通常，脂質體係小型（約2〇〇 至約800埃）單片類型’其中脂質係大於約30莫耳％(m〇l. %) 膽固醇；調整所選部分以適合最佳免疫球蛋白治療。 本發明之免疫球蛋白可以一緩釋形式投與，例如，一儲 積注射劑、植入製劑或滲透泵，其可調配為允許活性成份 以相同速率釋放之形式。緩釋調配物之植入體在此項技 術中為人所熟知。植入體係用生物可降解或生物不可降解

之聚合物調配為微球體、扁錠等。舉例而言，乳酸及/或乙 醇酸之聚合物形成一宿主耐受良好之易蝕聚合物。例如， 該植入體係靠近-實體腫瘤放置，以使在該位點處活性試 劑之局部濃度較體内其他位點增加。 細視本文所提及因+而卞 Λ U京而疋免疫球蛋白之典型每曰劑量 可自約1微克/公斤至約⑽毫克/公斤患者體重或更高，更佳 自約0.01毫克/公斤至約150毫克/公斤患者體重，更佳自約 0’1笔克/a 至約1〇〇毫克/公斤患者體重，最佳自約i毫克， 公斤至約75毫克/公斤患者體重（及在該等數值之間之每個 整數值）。通常，該臨床醫師會投與免疫球蛋白直至達到一 99388.doc •37- 1375563 可達成期望效果之劑量。該治療之進展可容易地藉由常規 分析監控。 一「穩定的」免疫球蛋白、抗體或抗體片斷調配物係_ 在存儲時蛋白質在其中基本保留其物理穩定性及/或化學 穩定性及/或生物穩定性之調配物。此項技術中現有各種量 測蛋白質穩定性之分析技術，且可參見，例如，尸以w Protein Drug Delivery, 247-301 (Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. 1991)^A. Jones, Adv. 价叹乃e/zVery hv. 10: 29-90 (1993)。穩定性可在一選擇溫 度下在一選擇時間段内量測。較佳地，該調配物在室溫（約 30 C )或在40。(：下可在至少1個月内保持穩定及/或在約 C下至^、在2年内保持穩定《而且’該調配物在調配物 冷凍（至，例如，_70。〇及融化後仍具穩定性。 右一免疫球蛋白在一給定時間内之生物活性係在藥物調 配物製備時所展示生物活性的約1〇%(在分析誤差之内）之 内（例如’如在一抗原結合分析中所測定），則該免疫球蛋白 在該藥物調配物中「保留其生物活性」。 雖然已參照以下實例對本發明予以詳細闡述，但應理解 可在不月離本發明精神之情況下實施各種修改，且熟習此 項技術者可容易地瞭解該等修改。 實例 實例1 那他珠單抗在體外對腫瘤細胞增殖的效應 為4疋那他珠單抗誘導或抑制可能導致腫瘤形成的轉化 99388.doc •38- 1375563 細胞之增殖及選殖擴充之潛能，實施實驗來測定那他珠單 抗體外刺激表現受體之惡性細胞之生長的能力，研究在動 物腫瘤模型中實施。 利用3H-胸苷結合分析來評價對腫瘤細胞株之增殖之正 面或負面效應。人類腫瘤細胞生長及/或轉移之抑制或增強 作用之評價係利用一腫瘤異種移植物裸/SCID鼠模型測 定。篩選出32種腫瘤細胞株。在32種腫瘤細胞株中，12種 ^ 係結直腸癌、結直腸腺癌、結腸腺癌或結腸癌細胞株；7 種係黑色素瘤或無黑色素性黑色素瘤；6種係膀胱過渡細胞 癌或膀胱癌；3種係白血病；兩種係淋巴瘤；及2個係前列 腺癌。 實施免疫組織化學（IHC)及螢光活化細胞分選（FACS)來 檢測α4表現。經IHC評價’ 26種細胞株中有5種係陽性。藉 由免疫組織化學（IHC)評價係陰性或不明確的21種細胞株 中有4種藉由FACS分析後係強陽性（>85%)。藉由IHC認為陰 % 性或不明確的2種細胞株經FACS分析係弱至中度陽性（22 5 及77.6%)。6種細胞株未經IHC評價。只有}種細胞株經FAes 分析後係中度陽性（68.4%)。 亦實施VCAM-1結合黏附化驗^ 11種細胞株中有7種經評 價係陽性。在一初步細胞增殖分析中，9種細^包株中的所有 、— 9種皆評價為無細胞毒性或增殖效應。‘ Tysabri⑧^ (那他珠 單抗）處理AS283、HT-29、M0LT-4及UM-UC-3細胞株。測 定經氚標記之胸苷之吸收。在8種不同濃度（〇 〇〇11〇〇毫克/ 毫升）中暴露1、2、3、4及5天，未發現細胞毒性或增殖效 99388.doc • 39- 1375563 應的跡象。 實例2 那他珠單抗對SCID鼠中皮下植入的人類MOLT-4異種移植物 之生長的效應 本研究之目的係測定用那他珠單抗治療對雌性SCID鼠 中皮下植入的人類M0LT-4急性淋巴母細胞白血病異種移 植物之生長的效應。

材料及方法 活體實驗工作在第〇天開始，在第80天結束.。5_6周齡雌

性SCID 鼠自 Taconic Farms，Inc. (Germantown, NY)購得，且 在實驗前1周在實驗室裏適應環境。該等動物放置在微_隔 離籠中之無病菌屏障設施中，每5隻動物一籠’處於12·小 時明/暗循環下。該等動物隨意飲用經過渡的則1>111丨1^]13111城 市用水並食用無菌齧齒動物食品。飼餵小鼠以消毒的齧齒 動物食品（Harlan-TekladTD8656)。籠子每週更換2次。每天 觀察動物並記錄臨床體徵。 利用一 12-號套管針頭將30-40毫克MOLT-4人白血病片斷 靠近右側腋寫區域植入小鼠内且允許其生長。腫瘤片斷植 入的當天係實驗的第〇天。在開始治療前使腫瘤重量達到 75-144毫克（大小為75-144毫米3)。對足夠數量的小鼠實施 植入以便在治療開始之日（腫瘤植入後第14天）挑選腫瘤重 量範圍盡可能窄的腫瘤進行實驗。彼等具大小範圍適當的 腫瘤的所選動物隨機分配至各治療組。治療第丨天平均腫瘤 重量ir、介於84或96毫克之間；在第14天時，中值腫瘤重量 99388.doc -40- 1375563 係75或88毫克。 在腫瘤碎片植入當天採集一供體腫瘤，並切成兩半。一 半腫瘤冷凍在O.C.T.化合物中，另一半腫瘤在10%嶷衝福爾 馬林中固定。兩半冷凍及福爾馬林固定腫瘤皆運送到 Biogen Idee Inc.進行分析。將用於植入小鼠之每個供體腫 瘤之一部分置於盛有硫基羥乙酸鹽培養基的試管中，在 + 37°C下培育24小時。

那他珠單抗（20-毫克/毫升溶液，Gensia Sicor Pharmaceuticals Inc.，Lot Nos. F23014 及 G23004)及一稀釋 液（Tysabri®之安慰劑，Gensia Sicor Pharmaceuticals Inc.， Lot No. F85002)係購自 Biogen Idee Inc.且收到後在+2-8°C 存儲。裝有0.97-毫克/毫升人體免疫球蛋白（IgG4)溶液之小 瓶係由 Sigma-Aldrich (St. Louis，MO，Lot No. 122K9159) 供應且收到後在-84°C存儲。一臨床調配物Taxol® (紅豆杉 醇）（6.0毫克/毫升在50%乙烯化氧脂肪醇-EL/50。/◦乙醇中，

Bristol-Myers Squibb Company, Princeton, NJ; Lot No. 2L57296)係購得且在收到後冷凍。鹽水（鹽溶液0.9%，僅用 於動物）係購自 Phoenix Pharmaceutical，Inc. (St. Joseph, MO, Lot Nos. 262053F，206205F，208281F)並在室溫下存 儲。每天調配時都使用一瓶新的鹽水。 在第14天時，將20-毫克/毫升那他珠單抗溶液用Tysabri® 之安慰劑稀釋至1. 〇毫克/毫升。在隨後的注射時期，用 Tysabri®之安慰劑稀釋一 20-毫克/毫升儲備溶液，調配成一 0.5-毫克/毫升那他珠單抗溶液。小心不要搖動盛有.那他珠 99388.doc 41 1375563 單抗的小瓶，上下顛倒小瓶實施混合。每天調配時都使用 一瓶新的那他珠單抗及Tysabri@之安慰劑。在第Μ天時， 解凍一所供給的0.97-毫克/毫升IgG4儲備溶液並注射入小 紙體内。在隨後的注射時期，藉由用〇 9%的鹽溶液稀釋一 〇.97-耄克/毫升儲備溶液製備一〇.5_毫克/毫升464溶液。每 天調配時都使用一瓶新的IgG4。每天注射時，用〇9%的生 理鹽水稀釋一等份溶於5〇%乙烯化氧脂肪醇_EL/5〇%乙醇

中的市售經調配6-毫克/毫升Taxo丨⑧溶液，來製備一溶於 12.5%乙烯化氧脂肪醇_EL/12 5%乙醇/75%鹽水中之1,5_毫 克/毫升溶液》所有劑量的溶液皆在調配後2·3小時内注射。 在第14、17、24、31、38及4S天時，在調配完成後立即 自劑量瓶取出第一組（鹽水）及第二組（那他珠單抗）之兩份 1-毫升等分劑量溶液。那他珠單抗及鹽水之每一丨_毫升等分 »式樣刀配至軚注有學名、組號、化合物名稱、劑量、投 與途徑、注射體積、研究日期及文字「Prep. Lab.」之小瓶

並立即將小瓶冷凍起來。在每組注射開始前將另外兩份鹽 水及那他珠單抗相同劑量溶液之丨·毫升等分試.樣吸入注射 益中（每組兩個’ 1毫升/注射器），且允許該等注射器在該組 中所有20只動物用藥期間在室溫下放置。在治療完後，每 個注射器之内容物皆係分配人_標注有學名、組號、化合 物名稱 '劑量 '投與途徑、注射體積、研究日期及文字 「Ammal Lab.」之小瓶並立即將小瓶冷康起來。在實驗完 成後，該料分試樣運送至C〇vanee Lab㈣tGdes，Inc進行 分析。 99388.doc -42· Ϊ375563 藥物治療 動物隨機分成小組，其中6組中每組有20只動物，1組中 有30只動物。2組（第丨及第5組）用〇_9%的鹽溶液（鹽水）治 •療。第2、6及7組的動物用那他珠單抗治療。第3組的動物 用IgG4(同種型對照）治療。第4組的動物用Tax〇i⑧（陽性對照） 治療。用鹽水、那他珠單抗及邮4之治療（第i、2、3、5及

6 组）在第 14、17、21、24、28、31、35、38、42及 45 天 IP 鲁給藥（Q3D X 2，5周，週五_週一給藥時間按排）。第7組⑼ 只小鼠組）中使用那他珠單抗之治療係在第14、17、2卜Μ、 28、31、35及38天時給藥（Q3Dx2，四周）。在第14天時， 以10毫克/公斤的劑量投與那他珠單抗，然後以5毫克/公斤/ 劑的劑量進-步治療。在第14天時，以9 7毫克/公斤的劑量 投與IgG4，然後以5毫克/公斤/$的劑量進一步治療。自第 14天時開始每天一次連續5天（Q^x5)al5毫克/公斤/劑的 量靜脈内（IV)投與Taxol®。所有測試化合物在治療每一天 • 冑係根據精禮的個體動物體重以〇1毫升/1〇克體重的媒劑 量投與。 自第14天開始在實施治療時的曰期上稱量該等動物之體 重並並量測皮下（SC)腫瘤，例外情況為兩次量測在注射前 一天（在第24及4丨天）實施。在治療結束後，每週收集2次= 瘤及體重數據。腫瘤體積藉由測徑法且使用一橢圓半球公 式：LxW2/2 = mm3測定（職），其中Law指每次量測時^ 集的較大及較小垂直尺寸。該公式亦用於計算腫瘤重量、 推定單位密度（1毫米3=1毫克）。 99388.doc -43- 1375563 在整個治療過程中收集第7組動物之血液。在第14天注射 結束後8小時對1-5號動物取血。5只動物在第21天（6-10號動 物）、第28天（11-15號動物）、第35天（16-20號動物）及第38 • 天（21-25號動物）於注射前取血。26-30號動物在第38天於注 射後8小時取血。在C02/02麻醉下藉由眼窩後刺穿採集血 液。使用一未經塗佈毛細管取動物之最大血液量（終末出血） 且允許血液自每一時間點下最後一隻動物取血開始在室溫 ^ 下/邊結分鐘。然後將血液樣品在]_〇,〇〇〇 rpm、+4eC下離心 ίο分鐘’分離血清且在乾冰中冷凍。所有血清樣品在_84<>c 下存儲直至運送至Biogen Idee分析。 在第28天’即第5組中的中值腫瘤重量達到466毫克一天 后，將第5及6組動物之原發腫瘤手術切離。麻醉品之施用 及手術/手術後恢復程序係根據經核准的標準實驗方法實 施。簡言之’將每只動物麻醉且該切除位點用一消毒溶液 消毒。沿腫瘤一侧之外圍做一切口（至多比腫瘤直徑長3_4 ^ 毫米）’將皮膚反過來並將腫瘤自切口處外翻。_自皮膚及肌 肉上切除腫瘤。將切口用一 4 〇毫米的創傷夾縫合。將每個 離體腫瘤切成兩半，一半腫瘤用〇CT.化合物冷凍起來，另 一半腫瘤用10%的缓衝福爾馬林保存起來，每週兩次監測 切除位點之腫瘤再生長情況當形成一個新的實體腫瘤時， 記錄其尺寸。 在腫瘤植入後第47天（2003年5月16日）對第1-4組中的 1-10號動物實施安樂死；在腫瘤植入後的第48天（2〇〇3年5 月Η日）對第1-4組中的11_2〇號動物實施安樂死。在腫瘤植 99388.doc 1375563

入後的第80天（2003年5月19日）對第5及6組中的所有存活動 物（第5組中的12號及第6組中的8號除外，解釋見下文）實施 安樂死。第5組中的12號動物因為腫瘤重量過大（>4,000毫克） 而在第73天殺死。第6組中的8號動物因為腫瘤潰瘍在第73 天殺死。對第7組中的5只動物在第14、21、28、35天時實 施安樂死，對10只動物在第38天時實施安樂死。所有在第 47、48及80天時仍存活的動物之屠體提交到南方研究機構 安全評估部門（Safety Assessment Department of Southern Research Institute)進行屍體解剖後進行完整的組織病理學 評價。第7組的動物不進行屍體解剖及完整的組織病理學評 價。對於1-6組動物而言，在第0天植入腫瘤（皮下）。在第14 天時開始治療，在第45天時結束治療。第5及6組中於植入 後28天實施原發腫瘤切除。該等動物在第80天殺死。非切 除組動物在第47-48天殺死。 表1 組 細胞株 治療 N 劑量 (毫克/公斤） 劑量趙積 (毫升/公斤） 1 MOLT-4 鹽水 20 0 10 2 MOLT-4 Taxol 20 15 10 3 M0LT-4 hIgG4 20 10/5 10 4 MOLT-4 那他珠單抗 20 10/5 10 5 MOLT-4 鹽水 20 10 10 6 M0LT-4 那他珠單抗 20 10/5 10

對第7-10組之動物，在第0天植入腫瘤（皮下）。治療在第7 天開始，治療在第45天時結束。該等動物在第46-47天時殺 死。 9938S.doc -45 - 1375563 表2 组 細胞株 治療 N 劑量 (毫克/公斤） 劑量體積 (毫升/公斤） 7 M0LT-4 鹽水 20 0 10 8 MOLT-4 Taxol 20 15 10 9 M0LT-4 hIgG4 20 10/5 10 10 M0LT-4 那他珠單抗 20 10/5 10 對於第11組之動物，在第0天植入腫瘤（皮下）。治療在第 14天開始，治療在第45天時結束。每組有5只動物在第卜7、 14、21、24、24天時殺死。該組用於鑒定那他珠單抗之血

清水平。 表3 組 細胞株 治療 N 劑量 (毫克/公斤） 劑量體積 (毫升/公斤） 11 MOLT-4 那他珠單抗 30 10/5 10 在一規定研究日以一 10毫克/公斤之用藥劑量開始投與 那他珠單抗。隨後每週給藥兩次（即，每3-4天一次）。劑量 水平之選擇係基於一單次劑量後的藥物動力學模擬以及在 一證實性重複劑量藥物動力學研究中之波谷血清濃度。選 擇劑量水平以於重複劑量投與後提供一 20毫升/毫升之最 低血清濃度。 確定MOLT-4腫瘤後用那他珠單抗治療會減緩在切除組 中之腫瘤生長，切除組中的一些動物在治療後不存在腫 瘤。在MOLT-4腫瘤植入之前開始那他珠單抗治療可顯著降 低腫瘤生長速度。整個治療期間動物體重增加，由此證實 那他珠單抗治療不會對動物健康產生有害影響。 測定非特定死亡之數量、部分及全部腫瘤衰退之數量、 99388.doc •46- 無腫瘤#存活h數量及個體㈣達到評價尺寸之時間 (達到四次腫瘤塊加倍之時間）。個體動物達到四次腫瘤塊加 倍之時間係用於計算中值腫瘤（T_C)生長中的總時延。在所 有汁中第1組（鹽水治療動物）係作為—對照組（c)。計算每 且在母數據收集日之中值腫瘤重量、平均腫瘤重量及 標準偏差，以及治療組（T)中的中值及平均腫瘤重量與對照 組（C)中的中值及平均腫瘤重量之比較值（分別地，中值 T/C中值τ/中值c X 100%，平均t/c=平均τ/平均c x 1〇〇〇/0) (數值列在表8-2至8-8中）。計算每組在每一數據收集曰的平 均體重及標準偏差（數值列在表8-9至8-15中）。 第1、2、3及4組之1-10號動物之腫瘤在第47天時收穫。 第1、2 ' 3及4組之11-20號動物之腫瘤在第48天時收穫。第 5及6組的1-20號動物之原發腫瘤在第28天手術切離。第5及 6組的所有存活動物之繼發腫瘤（其在原發腫瘤之位點再次 生長）在第80天時收穫。在第8〇天屍體解剖時第6組的1及15 號動物無繼發腫瘤。（第5組的4號動物及第6組的3號動物在 第28天時術後恢復期間死亡，及，由此，無繼發腫瘤。第5 組的19號動物，在第47天時死亡，其係死後剖檢。第5組的 12號動物在第73天時因腫瘤重量過大（4224毫克）而自實驗 中去除。第6組的8號動物在第73天時因為腫瘤潰瘍而自實 驗中去除。第5組的1〇、Π及20號動物在第73天時發現死 亡’因為嚴重自體分解而未經屍檢。）

每個重量超過100毫克之腫瘤切成兩半，且每個腫瘤之一 半用乾冰/乙醇漿液在O.C.T.化合物中冷凍起來，且在-84°C 99388.doc • 47- 1375563

存儲。腫瘤重量小於100毫克（第4組中的1、3、7、9、11、 12、14-18及20號動物之腫瘤）全部在O.C.T·化合物中冷凍起 來。第4組中的2、4、5、6、8、13及19號動物之腫瘤重量 小於100毫克，其全部用10%的缓衝福爾馬林全部保存起 來。實驗結束後，所有冷凍於O.C.T.化合物中之腫瘤樣品（共 145 個腫瘤樣品）運送至 Sierra Biomedical，Division of Charles River Laboratories進行免疫組織病理學檢查’來驗 證MOLT-4在體内表現VLA-4，由此在該項研究中係一有效 腫瘤模型。 免疫組織化學用市售抗-CD49d抗體及來自每個治療組之 動物子集的MOLT-4腫瘤冷凍部分實施。每個腫瘤之另一半 (若存在）固定在10%的緩衝福爾馬林中且提交至南方研究 所安全評估機構（Safety Assessment Department of Southern Research Institute)進行組織病理學評價。 數據分析

收集個體腫瘤量測尺寸及重量並利用南方研究所 (Southern Research Institute)開發的 ADAS軟件（數據自動採 集系統）處理。然後將數據輸進MS Excel以編製報告。使用

SigmaPlot™將現有的原始數據繪圖。為以統計方式對比各 組間之生長數據，將終止前最後一天（第1 -4組在第47天，第 5及6組在第80天）量測的個體動物腫瘤重量用作終點。使用 件實施Student氏t-檢驗。當數據集未通尚 態性或方差齊性檢驗時使用Mann-Whitney秩和檢驗代_ 檢驗。將一份該統計分析結果之拷貝附到該報告中。 9938S.doc -48- 1375563 劑量溶液分析 兩種劑量溶液（MP-21520及ΜΡ·21522)分別以+16%及 + 19〇/〇之差別略微超出目標濃度土15%。之所以出現該等偏差 是因為在鹽水劑量溶液及稀釋液中存在0.01-0.04單位之 280奈米吸光率。該吸光率歸因於樣品容器塞中之鹽水浸出 液。 SC MOLT-4白血病異種移植物之生長 在所有含琉基羥乙酸鹽培養基的試管（其中腫瘤碎片在 腫瘤碎月植入當天放置且在+371下培育24小時）中未觀察 到生長現象。對照組中腫瘤異種移植物獲得率為95%，鹽 水治療組（第1組）中20只中有！只的異種移植物未生長（未獲 得）。第1組中的20號動物未獲得腫瘤，因而排除在所有計 算外。耐受腫瘤生長及鹽水投與，體重未下降。在第47天 時中值腫瘤重量達到1764毫克且在30.2天内達成四次腫瘤 塊加倍。 第5組的所有20只鹽水治療動物之腫瘤在植入後進行性 生長。在第28天叫·手術切除腫瘤。一隻動物在術後恢復階 段死亡（4號動物）。動物在術後體重立即減輕（最大平均體重 損失為2克[10%])，但之後體重回升且繼續增長。觀察到的 體重損失可能歸因於投與麻醉藥及切除腫瘤之淨重量損 失。四隻動物在實驗過程中死亡：在第47天時發現19號動 物死亡；在第73天時發現1〇、η及2〇號動物死亡。所有動 物之腫瘤在切除後皆在原發腫瘤位點再次生長。在第8〇天 時中值腫瘤重量達到2363毫克，在60.9天内中值腫瘤達到 99388.doc •49· 1375563 四次腫瘤塊加倍。 那他珠單抗纥兔氣 那他珠單抗用藥（第2組）耐受性很好，未出現死亡’伴隨 ' 在冶療第1週期間平均體重波動1克（5°/。）。在整個實驗過程 .中’所有20只動物之腫瘤皆生長。在第47天時中值腫瘤 重$達到1240毫克，及在33 5天内中值腫瘤達到四次腫瘤 塊加倍。在第47天時比較對照組、鹽水治療組(第“且)及那 他珠單抗治療組（第2组）中個體腫瘤之重量，結果揭示，當 與鹽水治療k之重量比較時，那他珠單抗治療組之腫瘤重 里無統6十上的差別（p=〇 1〇32, Mann Whitney秩和檢驗），表 明在兩組中腫瘤以一相似速率生長。 第6組中所有20只那他珠單抗治療動物之腫瘤在植入後 皆進行性生長。在第28天時手術切除腫瘤。一隻動物在術 後恢復階段死亡（3號動物）。動物在腫瘤切除手術後立即經 歷最小的體重損失（最大平均體重損失為丨克^%])，但隨後 ^ 體重持續增長。19只動物中有17只之腫瘤於切除後在原發 腫瘤位點再次生長，有2只動物在研究終止時即第8〇天仍未 出現腫瘤。在第80天時中值腫瘤重量達到1006毫克，中值 腫瘤未達到四次腫瘤塊加倍（>66.0天）。比較鹽水治療組（第 5組）及那他珠單抗治療組（第6組）中個體動物之重量，結果 揭示那他珠單抗治療組中之腫瘤生長在統計上不同於鹽水 治療組中腫瘤之生長（P = 〇_〇189, t-檢驗），表明用那他珠單 抗治療的腫瘤之再生速度慢於鹽水治療組中腫瘤之再生速 率。第7組中所有3 0只那他珠單抗治療動物之腫瘤皆生長。 99388.doc •50· 1375563 S將動物定期自終末血液採集研究中去除時不評價生長之 腫瘤。

IgG 4之效應

IgG4用藥（第3組）耐受性良好，未出現死亡或體重損失。

在實驗終止時，所有20只動物皆有腫瘤。在第.47天時中值 腫瘤重量逹到1731毫克，中值腫瘤在31 7天内未達到四次 腫瘤塊加倍。在第47天時比較在對照組、鹽水治療組及 IgG4治療組中之個體腫瘤重量，揭示，當與鹽水治療組中 之腫瘤重量比較時，IgG4治療組中之腫瘤重量在統計上無 差別（p=0.80〇4, Mann-Whitney秩和檢驗），表明兩組中的腫 瘤以一相似的速率生長。

Taxol®之效應 Τ咖1⑧用藥（第4組）耐受性良好，未出現死亡或持續的體 重損失。在治療、结束時（在17天及21天日夺）觀察.到-為 克）之平均最大體重損失，據推測此係因Taxol®這種細胞毒 性試劑係以—約最大耐受劑量投與。動物在治療後階段期 間體重回升。該Taxc)1@治療在抑制m〇lt_4腫瘤異種移植物 ^方面非常有效。2〇只動物中有12只在實驗結束時沒有 可^測的腫瘤，且在8例可量測腫瘤中僅有3例在整個實驗 過私中其塊加倍-次。該TaxQl(g)•治療腫瘤之生長與媒劑治 療、對照組中腫瘤之生長在統計學上有差異(ρ<〇 〇〇〇ι，

Mann_Whltney秩和檢驗)，表明以-⑧治療抑制腫瘤生長。 組織病理學評價結果概要 概。之纟不同治療組中隨機觀察到涉及子宮、印巢、 99388.doc 1375563

淋巴結、肺臟、肝臟之肉眼病損及脾臟變大，但該等發現 中沒有一項係認為與治療相關。在不同治療組小鼠中隨機 發生之微觀病損包括在脾臟及肝臟中之髓質外血生成、肝 臟中之局部壞死與發炎、腸繫膜發炎及心臟心外膜之礦 化所有忒等變化係視為偶然或自發的，與所有檢測物件 之投與無關。在任一治療組中異種移植物生長之增強皆不 明顯。第5及ό組中各有四隻小在鼠腹部（腹股溝）皮膚中觀察 到異種移植物生長之擴展。在第5組小鼠之局部淋巴結（腋 窩、腹股溝、腸骨、顎及縱膈）及第6組小鼠之腹股溝淋巴 結觀察到異種移植物之轉移或擴展。第5及6組中各有一隻 小鼠觀察到胸腺轉移。沒有證據表明那他珠單抗治療會導 致繼發人類急性淋巴細胞白血病之生長或轉移之加劇。 腫瘤之免疫纟R織學分析概要

藉由免疫組織化學檢測腫瘤切面來驗證M0LT-4體内表 現VLA-4且由此係該研究的一有效腫瘤模型。使用市售抗_ CD49d抗體及來自每個治療組動物之子集之M0LT-4腫瘤冷 凍切片實施免疫組織化學。M0LT-4細胞之CD49d-專一免疫 正性之特徵在於強烈的粒狀束狀擴散的細胞質及細胞表面 染色。擴散細胞質染色表明，細胞質内及細胞表面CD49d 係結合抗-CD49d抗體。鹽水對照組及lgG4對照組動物之腫 瘤切面具強烈的染色，給予其3至4分的免疫組織化學染色 分值（分別「簇狀細胞，間隔緊密」至「密集細胞」）。在屍 體剖檢前具一延長的無治療階段之那他珠單抗治療組（第6 組）動物之腫瘤切面亦具強烈染色，給予其3至4分的免疫組 99388.doc -52- 1375563 織化學染色分值。在用那他珠單抗治療並在實驗終止時殺 死之動物中，對於CD49d之免疫組織化學染色大大降低至 不存在’腫瘤切面給予免疫組織化學染色分值〇至2(分別 「無標記細胞」至「離散個體細胞，間隔緊密」）^用腫瘤 溶解試劑Taxol治療的小鼠經常在治療後不具足夠的殘餘 腫瘤塊來實施免疫組織化學染色。該等數據確定，在該項 研究之實驗條件下M0LT-4人類白金病細胞株在體内不表 現 CD49d。 結論

施用那他珠單抗不抑制皮下植入之M0LT-4人類急性淋 巴細胞白血病異種移植物之生長。然而，施用那他珠單抗 抑制在原發腫瘤之切除位點處實體腫瘤之再生長。施用 IgG4對異種移植物之生長無作用。用Taxol®治療抑制原發 腫瘤生長，造成20只動物中有12只在實驗結束時不具可量 測腫瘤。動物之免疫組織病理學評價揭示，沒有跡象表明 人類急性淋巴細胞白血病異種移植物之生長或轉移之加劇 係那他珠單抗或IgG4治療之結果。所有治療組之隨機分佈 模式中皆出現多種肉眼及微觀病損。然而，所有發現的病 損皆係視為自然產生或偶然產生，與鹽水、那·他珠單抗、 IgG4或Taxol®治療無關。 所有上述參考文獻之全部内容實際上皆倂入本文中。本 申請案係與2004年2月6曰提出申請之美國臨時申請案第 60/541，946號相關，該申請案之全部内容實際上併入本文 中。 99388.doc -53- 印 5563 【圖式簡單說明】 圖1之曲線圖顯示在腫瘤建立後投與一對照劑、紅豆杉 醇、IgG4或那他珠單抗時M0LT_4異種移植物之原發腫瘤生 長情況。用鹽水（N=20) '那他珠單抗（n=2〇)、IgG4(N=20) 或紅豆杉醇（N=20)治療SCID小鼠。鹽水、那他珠單抗及IgG4 係在第-7、-4、0、3、7、10、14、17、21、24、28、31、 35 ' 38、42及45天上投與。第〇天皮下植入M〇LT_4白血病 異種移植物。在第1-5天靜脈投與紅豆杉醇。每週兩次量測 腫瘤。

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Claims (1)

1375563 1. 第094103833號專禾_知 中文申請專利範圍Φ ^(101 • !年二二？…j· 101. j 6. ϋ; 抑制黑色素瘤生長及/或轉移性進展及/或轉移之發 展之醫藥絚合物，其包括其量足以抑制黑色素瘤生長及/ 或轉移的那他珠單抗（natalizumab)。 、申請專利範圍 2. 如味求項1之醫藥組合物，其中該黑色素瘤係皮膚黑色素 瘤、轉移性黑色素瘤或眼内黑色素瘤。 3. 如請求項1之醫藥組合物，其中該那他珠單抗的量係為約 1毫克/公斤患者體重至約100毫克/公斤患者體重。

4_如請求項3之醫藥組合物，其中該那他珠單抗的量係為約 1毫克/公斤患者體重至約10毫克/公斤患者體重。 5.如請求項3之醫藥組合物，其中該那他珠單抗的量係為約 Ϊ毫克/公斤患者體重至約20毫克/公斤患者體重。 6.如請求項1之醫藥組合物，其中該腫瘤係黑色素瘤，且該 那他珠單抗係在手術切除黑色素瘤之後投藥。 如請求項1之醫藥組合物，其中該腫瘤係黑色素瘤，且該 患者進一步接受外科手術、隔離肢體灌注、局部化療輸 注、全身化療或使用一第二抗體或抗血清之免疫療法來 治療黑色素瘤。 8 _如請求項7之醫藥組合物，其中該第二抗體係抗—GM2神經 節苷脂（ganglioside)抗體、抗-GD2神經節苷脂抗體或抗_ GD3神經節苷脂抗體。 9.如請求項7之醫藥組合物，其中該局部化療輸注或該全身 化療包括至少一種選自由下列組成之群之化學治療劑： 達卡巴嗪（dacarbazine)、亞硝基脲氮芥（carniustine)、環己 99388-1010605.doc S 1375563 亞硝基腺（lomustine)、牛確莫司汀（tauromustine)、福莫司 >丁（fotemustine)、司·莫司 /j (semustine)、順翻（cisplatin)、 卡鉑（carboplatin)、長春新鹼（vincristine)、長春花鹼 (vinblastine)、長春地辛（vindesine)、紅豆杉醇（taxol)、二 溴衛矛醇（dibromodulcitol)、地托比星（detombicin)、吡曲 克辛（piritrexim)及干擾素。 10·如請求項9之醫藥組合物’其中該干擾素係干擾素_α2。 11. 如請求項1之醫藥組合物’其中該轉移係至腦、肺臟、肝 臟或骨之轉移。 12. 如請求項11之醫藥組合物，其中該轉移係轉移至肺臟。 13 ·如请求項1之醫藥組合物，其係與化療、免疫療法及/或放 射療法併用。 14.如請求項13之醫藥組合物，其中該那他珠單抗係經靜脈 内 '鞘内或皮下投予有需要的患者。 15·如請求項13之醫藥組合物，其中該那他珠單抗係以約1毫 克/公斤患者體重至約100毫克/公斤患者體重的量投藥。 16.如凊求項15之醫藥組合物，其中該那他珠單抗係以約⑺ 毫克/公斤患者體重至約30毫克/公斤患者體重的量投藥。 如π求項13之醫藥組合物，其中該那他珠單抗係每天、 每週或每月投藥。 18_ 求項17之醫藥組合物，其中該那他珠單抗係每週投 藥。 19.:種包含那他珠單抗之藥物製劑之用途，其係用於製備 又予有需要之患者時可抑制腫瘤生長及/或轉移性進展及 99388-10l0605.doc 丄575563 /或轉移之發展之藥劑，其中該腫瘤為黑色素瘤。 2〇·如請求項19之用途，其中兮鑪為丨〆> 外科手術、放射療法 用之藥物治療併用。 之副作 外科手街、“l 、心劑係與化療、免疫療法、 ° &療·法或減輕癌症治療

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