TWI351958B - Degradation products as reference standard for ana - Google Patents

Description

1351958 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於羅素他汀（rosuvastatin)降解產物及其作為 羅素他汀分析用之參考標準的用途。 【先前技術】 膽固醇合成抑制素（statin)為當前可獲得之降低有心血管 病危險病人的血流中低密度脂蛋白（LDL)粒子濃度之最有 效的治療藥物。因此，膽固醇合成抑制素用於治療高膽固 醇血症（hypercholesterolemia)、高脂蛋白血症及動脈硬化 症。血流中高含量之LDL已與冠脈病變之形成相聯繫，其 阻隔血液的流動且可破裂並促進血栓形成。Goodman及 Gilman，The Pharmacological Basis of Therapeutics，第 897 頁（1996年第9版）。 膽固醇合成抑制素藉由競爭性抑制3-羥基-3-曱基-戊二 醯基-輔酶A(nHMG-CoA")還原酶酵素來抑制人體中膽固醇 之生物合成。HMG-CoA還原酶催化HMG轉化為曱羥基戊酸 鹽，其為膽固醇生物合成中決定速率之步驟。膽固醇產量 之降低引起LDL受體數目增加及血流中LDL粒子濃度相應 降低。血流中LDL含量的降低減少了冠狀動脈疾病之危 險。J.A.M.A. 1984 ， 251 ， 351-74 。 當前可獲得之膽固醇合成抑制素包括洛伐他汀 (lovastatin)、斯伐他汀（simvastatin)、普伐他汀 (pravastatin)、氣伐他汀（fluvastatin)、西立伐他汀 (cerivastatin)及阿托伐他汀（atorvastatin)。洛伐他汀（揭示於 98053.doc 1351958. 美國專利案第4,23 1，938號中）及斯伐他汀（揭示於美國專利 案第4,444,784號中）以内酯形式投藥。吸收後，内酯環藉由 化學或酵素水解而在肝贜中開環，並生成活性羥基酸。普 伐他汀（揭示於美國專利案第4,346’227號中）以鈉鹽的形式 投藥。氟伐他汀（揭示於美國專利案第4,739,〇73號中）及西 立伐他汀（揭示於美國專利案第5,006,53〇號及5，177〇8〇號 中）亦以鈉鹽投藥，完全為合成化合物，其結構上部分區別 於含有六氫萘環的此類化合物之真菌衍生物。阿托伐他汀 及兩種新穎"超膽固醇合成抑制素（superstatin)"之羅素他汀 (rosuvastatin)及匹伐他汀（pitavastatin)，係以鈣鹽形式投 藥。 羅素他汀鈣（雙（+)7-[4-(4-氟苯基）_6·異丙基_2_(Ν·曱基 -Ν-曱磺醯基胺基嘧啶）_5_基]_(311，58)·二羥基_(Ε)_6_庚烯酸 單鈣）為HMG-CoA還原酶抑制劑，由Shi〇n〇gi開發，每曰一 次口服用於治療高脂也症（Ann Rep， Shionogi，1996 ; Direct communications，Shionogi，1999 年 2 月 8號 & 2000 年2月25號）。羅素他汀鈣為超膽固醇合成抑制素，其可比 第一代藥物更有效降低LDL-膽固醇及甘油三酸酯。羅素他 ^丁弼具有如下化學式： 98053.doc

1351958. 羅素他汀鈣以名稱CRESTOR銷售，其用於治療喃乳動物 諸如人類。根據CRESTOR之製造商’其以日劑量自約5mg 至約40 mg來投藥》對於需要較小凝集性LDL-C降低之病人 或具有肌病誘病因素的人’推薦使用5 mg劑量，而對於普 通病人推薦使用1 〇 mg劑量’對於顯著的高膽固醇血症及凝 集性脂類目標（>190 mg/dL)的病人為20 mg劑量，且將40 mg 劑量用於已對更少劑量無反應之病人。 美國專利案第5，260，440號揭示及主張羅素他汀、其約鹽 (2:1)及其内酯形式。第，440號專利之方法藉由4_(4氟苯 基）-6-異丙基-2-(N-f 基-N-甲磺酿基胺基嘧啶甲醛與 (3R)-3-(第三丁基二曱基甲矽烷氧基）_5•酮基_6_三苯基正 膦亞基己酸f酯在乙腈中回流反應來製備羅素他汀。該甲 梦烧基然後用氟化氩裂解，接著用NaBH4及二乙基甲氧美 侧烷在THF中還原以獲得羅素他汀之甲酯。 然後該酯在乙醇中於室溫下用氫氧化鈉水解，接著移除 乙醇並添加乙醚以獲得羅素他汀之鈉鹽。然後將鈉鹽轉化 為鈣鹽。將該鈉鹽溶於水中且維持在氮氣氛下。隨後添加 98053.doc 1351958 氣化約至溶液中’導致羅素他汀鈣（2:丨）沉澱。揭示於第，44〇 號專利中之製備十間物之方法以引用的方式倂入本文供參 考。 美國專利案第6,3 16,460號中揭示羅素他汀之醫藥組合 物。該等醫藥組合物含有羅素他汀或其鹽及多價三鹼式磷 酸鹽》 一反應之產品混合物很少為足夠純淨之單一化合物以符 合醫藥標準。在大多數情況下，將存在有該反應的次要產 物及曰彳產物及用於此反應之附屬試劑。在特定階段下，含 於產品混合物中之羅素他汀加工為活性醫藥成份（"Αρι")期 間，通常須藉由HPLC或GC分析來分析該羅素他汀之純度， 以確定其是否適合於繼續加工或最終用於醫藥產品。該羅 素他汀不需要絕對純淨《絕對純淨係不可獲得的理論上的 理想情況》然而’由於雜質的存在，有純度標準意欲確保 API在床上不會更不安全。在$國，食品藥物管理局⑽e Food and Drug Administration)指導方針推薦申請人限制其 雜質低於0.1%。 通常，利用光譜彳法及#由其它的物s方法識別次要產 物、副產物及附屬試劑（統稱"雜質”）並接著將該等雜質與層 析譜中峰的位置相聯繫（或TLC板上之點）。（Str〇bei p. 953) (Strobel, H.A.; Heineman, W.R., Chemical Instrumentation： A Systematic Approach, 3- dd. (Wiley & Sons: New Y〇rk 1989))。其後，雜質可藉由層析譜中的位置來識別，其習知 在將樣品注射至管柱上及通過偵測器溶離該特殊組份之間 98053.doc 1351958 。此段時間基於儀器

的幾分鐘（被稱為"滯留時間量測組份。 條件及許多其它因素而每天變化。為減 識別雜質之影響，專業人員使用"相對 。理論上，羅素他汀本身可用作 其在混合物中以壓倒性的比例存 參考標記，但實際情況， 在，其趨於飽和該管柱，導致不能再現的滞留時間，意即 對應於羅素他汀之最大峰趨於偏移（Str〇bel Fig 24 8(b) P 879，當管柱過載時含有可觀測之該種不對稱峰的說明）。 因此，有時需要選擇替代化合物，其以顯著足以偵測及充 分低但不致使該管柱飽和的量添加至，或存在於混合物中 且使用該化合物作為參考標記。 藥物製造業中研究者及開發者認為相對純淨狀態之化合 物可被用作"參考標準參考標記"類似於參考標準但其用 於定性分析）以量化未知混和物中該化合物之量。當該化合 物用作"外部標準"時，藉由與未知混合物相同技術分析該 化合物已知濃度之溶液。（Strobel p. 924， Snyder p. 549) (Snyder ’ L.R.，Kirkland，J.J. Introduction to Modern Liquid

Chromatography，第 2期（John Wiley & Sons: New York 1979))。混合物中該化合物的量藉由比較偵測器反應的量值 而確定。亦參見USP 6,333，198,其以引用的方式倂入本文。 ♦"反應因子”（其校正兩種化合物之偵測器的靈敏度差別） 已預先測定’則該參考標準化合物亦可用作混合物中另一 化合物的定量。（Strobel ρ· 894)。為此目的，該參考標準化 98053.doc 1351958 【實施方式】 本文所使用之術語"參考標車"r 〒栎早係指可用於活性醫藥成份 之疋直及疋性兩種分析的化人#。 仍幻化。物。舉例而言，HpLC：中化合 物之滯留時間需設定一相對滯 7厣留時間，因此使得定性分析 成為可能。注入HPLC管柱前之溶液中該化合物之濃度可供 比較肌C層㈣中之峰下面積，因此使得U分析成為可 月£

Jal%· ”參考標記"基於其位置例如在層析譜中或薄層層析（Μ) 板上用於定性分析以識別混合物組份（WOW沖Μ!， 922’ 953)。為此目的，若該化合物存在於混合物中則沒必 要添加至混合物。"參考標記，’僅用於^性分析，而參考標 準可用於定量或定性分析或可用於二者。因此，參考標記 為參考標準之子集且包含於參考標準之定義中。 雖然此項技術中某些相關參考標準之知識以一般術語已 描述直至此點’但熟習此項技術者亦瞭解偵測器反應(例 如’所得層析譜之峰高度或積分蜂面積）可藉由（例如_或 折射率須測得自HPLC系統之溶離物或例如火焰離子摘測 或熱導偵測得自氣體層析儀之溶離物，或例如偵測螢光 TLC板上點之其他偵測反應如1；¥吸收獲得。該參考標準的 位置亦可用於計算羅素他汀及其它雜質之相對滯留時丁間。 當羅素他汀鈣暴露於可見光照射時，可獲得羅素他汀降 解產物，其可用作參考標準。該等兩種降解產物為如下之 在位置6產生額外不對稱中心之非對映異構之環狀產物（^) 及（III): 98053.doc • J4-

1/2 Ca2+

除羅素他汀狀外，亦可照射羅素他汀之其它形式（包括内 龍、游離酸及諸如鈉鹽的鹽）。 …、射可在♦液中或以固態執行。當照射溶液時，此照射 較佳可自約室溫至高至約回流溫度下執行。用於溶解之有 2溶劑可為極性質子（C】至c 4醇諸如f醇或乙醇）或非質子 谷劑（乙E9氫咬喃）與水之混合物。約下，約从 之可見光照射羅素他汀鈣之乙腈水溶液約7小時生成化合 物(II及III)比例為i: i之混合物。當照射固態時，溫度較佳 自約20 EC至約1GGEC。熟習此項技術者仍可在該等光譜戍

多種光譜混合中選擇一窄光譜。基於本文提供之多種降解 產物的結構指導，熟習此項技術者可製備一合成途徑以獲 得該降解產物。 在另-實施例中，相應的内酿可藉由照射羅素他；丁内 形式或藉由自化合物„謂製備此内㈣獲得相應的化 物(其可用作參考標準）來獲得。化合物^具有如下 ΝΜ_0 MHz，CDa3)s(ppm):1 以，2 % t “，2 dm 2.64, 3.15, 3.35, 3.46, 3.56, 3.60, 4.28, 4.45, 6.99, 7.1 98053.doc • !5· 1351958 8.31 ； 13C NMR(75 MHz, CDCl3)6(ppm): 20.87, 21.26, 23.29, 31.41，33.26，34.03, 38.23, 42.07，43.00, 62.23, 74.53, 115.61， 116.08(J=26 Hz), 116.25(J=22 Hz), 129.08, 128.91(J=9 Hz), 139.28(J=8 Hz), 157.64, 157.86, 163.96

(J=253 Hz), 169.47，174.48; FAB + m/z(MH+):464。化合物 V 具有如下1HNMR(300 MHz，CDCl3)δ(ppm):l·24，1.29，l_52, 1.70, 2.58, 3.02, 3.21, 3.27, 3.41, 3.55, 3.60, 4.26, 4.78, 7.05，7.12，8.34; FAB+m/z(MH+):464。 自化合物II及III製備相應的内酯化合物IV&V，包括將化 合物II及III溶於合適的溶劑中且例如與含水鹽酸形成内酯 環。可使用其它酸形成内酯。用於自化合或ΙΠ製備内 酯之合適的溶劑為二氣甲烷、氣仿、乙腈或四氫呋喃。較 佳合適的溶劑為乙腈。為回收該產物，可藉由任何習知方 法如蒸發移除溶劑。所得之化合物1¥及V可藉由諸如管柱層 析法及結晶之方法分離。 自羅素他>丁内酯製備相應的内酯化合物1¥及V亦可在相— 同溶劑中藉由可見光照射執行。該照射特徵如上所述。該 Τ内酯化合物IV及V可在溶劑存在下用一當量的含水鹼如 氫氧化鈉或氫氧化舞來水解以獲得相應的鹽。較佳該溶劑 為乙猜。在—實施例中，該等㈣在乙腈中用氫氧化納水 /合液請帛著移除乙腈並添加諸如氣化妈之約源。 ，内Sg形式IV及V可以驗分別水解獲得鹽及其後轉化為酸 形式VI及VII，其可用你A如 、 乍參考標準。該等内酯轉化為鹽可藉 由使用驗性水溶液勃并 订。在一實施例中，將内酯溶於乙腈 98053.doc -16- 1351958 儀器 對於層析法，可填充氧化鋁或較好填充矽膠。至於溶離 液’可使用不同的有機溶劑或其混合物，較佳為乙酸乙酯。 以相應的酸（VI及VII)、内酯（IV及V)單離之化合物II及III 可用丨H NMR、丨3c NMR、COSY NMR及質譜分析研究以決 定其結構。 實例 實例1·藉由照射羅素他汀（Ca鹽）製備羅素他汀降解產物 1. 羅素他汀（Ca-鹽）（4_0 g)溶於乙腈·水（380 ml-140 ml)混 合物中及用可見光（750 w，35。〇照射7小時。在真空下蒸發 乙腈及水。 2. 將所得固體溶於4〇 ml乙腈中及添加40 ml 1 N鹽酸。將 該混合物在室溫下攪拌隔夜。在蒸發乙腈及水且真空乾燥 後’所得產物藉由矽膠管柱層析法分離（溶離液為己烷_乙酸 乙酯1:2)，生成内酯lV(〇.8 g)及内酯ν(〇·6 g)。在矽膠上進 行TLC中，溶離液為己烷·乙酸乙酯（1:2)，對於化合物^， Rf=0.30，對於化合物 v，Rf=〇 25。

化合物IV 原子編號 ΉΝΜΙΙ (CDC1,). ljC NMR (CDC13) "—~ Δ △ J(Hz) 1 169.47 2 2.53, 2.64 38.23 3 4.28 62.23 4 1.68 34.03 5 4.45 74.53 6 3.15 43.00 7 2.47, 3.46 23.29 98053.doc -18- 1351958 1 2 157.64 4' 157.86 5' 115.61 6' 174.48 7, 3.35 31.41 8' 1.24, 1.34 21.36,20.87 9' 3.60 33.26 10， 3.56 42.07 1" 129.08 2" 139.28 8 3" 6.99 116.25 22 4" 163.96 253 5" 7.14 116.08 26 6" 8.31 128.91 9 化合物v 原子編號 *H NMR(CDC13) Δ 2 2.58 3 4.26 4 1.52,1.70 5 4.78 6 3.41 7 3.02, 3.21 7， 3.27 8' 1.24, 1.29 9' 3.60 10’ 3.55 3" 7.05 4" 5" 7.12 6" 8.34 3.將内酯IV(0.8 g)溶於乙腈中，並添加in氫氧化鈉水溶 液（4 ml)。將該混合物室溫下攪拌隔夜。在蒸發乙腈及水並 真空乾燥後，所得產物藉由矽膠管柱層析法（溶離液為二氣 甲烷-甲醇65 ml: 10 ml)純化’獲得純淨化合物vi(0.4 g)。 98053.doc -19· 化合物VI(化合物IV之相應酸） 原子編號 'HNMR, (CDC13, CD3OD5:l) 13cnmr (CDCI3+CD3OD 5:1) Δ Δ J(Hz) 1 2 2.22 42.97 3 3.95 68.99 4 1.39/1.58 40.15 5 3.58 71.45 6 2.89 44.62 7 2.80/3.52 23.32 2' 157.71 4' 158.57 5' 117.77 6' 174.30 7' 3.36 31.56 8' 1.25/1.33 21.14/21.31 9. 3.61 33.47 10' 3.58 42.16 1" 129.20 2" 142.34 δ 3" 7.01 116.32 22 4" 164.26 251 5" 7.09 115.17 21 6" 8.26 128.87 9 1351958 4.類似地，化合物VII(0.3 g)自内酯V獲得。 化合物VII(化合物V之相應酸） 98053.doc 20- 1351958 原子編號 JHNMR (CDC13+CD30D 5:1) IJCNMR (CDCI3+CD3OD 5:1) Δ Δ J(Hz) 1 178 2 2.25 42.08 3 4.03 68.82 4 1.43 38.83 5 3.85 73.86 6 3.05 43.45 7 2.95/3.19 22.98 2' 157.58 4' 158.45 5' 117.41 6' 173.19 7' 3.30 31.22 8， 1.24/1.31 21.15/21.23 9' 3.60 33.36 10， 3.56 42,08 1" 128.91 2" 142.02 8 3" 7.02 116.31 21 4- 164.28 252 5" 7.08 114.95 21 6" 8.31 128.56 δ 實例2·藉由照射羅素他汀内酯製備羅素他汀降解產物 1. 將羅素他汀内酯（2.0 g)溶於200 ml乙腈中並用可見光 (750 w ’ 35°C )照射7小時。在蒸發乙腈並真空乾燥後，所得 產物藉由矽膠管柱層析法分離（溶離液己烷-乙酸乙酿 1:2) ’獲得内酯IV(0.1 g)及内酯ν(0·6 g)。

2. 將内酯IV(1.0 g)溶於5 ml乙腈中且添加2 ml IN NaOH 水溶液。將該混合物在室溫下攪拌4小時。蒸發乙腈後，添 加1 ml之2N CaCh水溶液，且該混合物在室溫下攪拌卜卜 時。過濾此沉澱物並在真空下乾燥獲得化合物π。 3. 類似地，自内酯V獲得化合物hi。 98053.doc 21 1351958 實例3.測定羅素他汀鈣之HPLC雜質分佈®。 化合物IV、V、VI及VII之純度藉由HPLC分析測定》 HPLC 管柱：C18 溶離液： 甲酸鹽緩衝液及乙腈梯度溶離 流速： 1 ml/分鐘 Ί貞測器： 245 nm 樣品容積：1 〇 μΐ 稀釋液： 乙腈：水=50 :50 可改變流動相組份及流速以達成所需系統適合性。 樣品製備 在2 0 m 1玻ίό色谷直燒瓶中稱重約1 〇 m g羅素他丁約樣 品。該樣品用10 ml乙腈溶解並用水稀釋至一容積。 標準製備 在20 ml琥珀色容量燒瓶中稱重約1〇 mg各化合物〗乂、v、 VI及VII，溶於1〇 ml乙腈並用水稀釋至一容積。丨mi之所製 備溶液以稀釋液稀釋至1〇〇 ml。 方法 將新鮮製備之樣品溶液注入層析儀，且持續樣品之層析 一直至梯度結束。各溶液中各峰之面積使用合適的積分儀 來測定。 本發明已參照特定較佳之實施例加以描述且用實例說明 本發明，此項技術中的人員可瞭解在不背離如說明書中揭 示之本發明的精神及範疇的描述及說明内可對本發明進行 修正。陳述該等實例以有助於理解本發明但並非意欲且不 98053.doc •22· 1351958 應解釋為以任何方式限制其範圍。該等實例不包括習知方 法之詳細描述。本文所提及之所有參考文獻全文倂入本文 供參考。 【圖式簡單說明】 圖1為化合物VI之HPLC層析譜。 圖2為化合物VII之HPLC層析譜。

圖3為羅素他汀、化合物VI及化合物VII之混合物之HPLC 層析譜。 98053.doc -23 -

Claims (1)

1. 1351958 . 第093137210號專利申請案 中文申請專利範圍替換本(100年6月） 十、申請專利範圍： 1. 一種用於參考標準之羅素他汀（ROSUVASTATIN)降解產 物，其係於有機溶劑及水之混合物中以可見光照射而 得，並經分離或純化，且具有下式之結構：

   2. 一種用於參考標準之羅素他汀降解產物，其係於有機溶 劑及水之混合物中以可見光照射而得，並經分離或純 化，且具有下式之結構：

   3. 一種用於參考標準之羅素他汀降解產物，其係於有機溶 劑及水之混合物中以可見光照射而得，並經分離或純 化，且具有下式之結構： 98053-1000613.doc 1351958.

   其中Μ為驗金屬或驗土金屬。

   4. 一種用於參考標準之羅素他丁降解產物，其係於有機.六 劑及水之混合物中以可見光照射而得，並經分離气純 化，且具有下式之結構：

   其中Μ為驗金屬或檢土金屬。 5·如請求項3或4之羅素他汀降解產物，其中Μ為鈣。 6_如請求項1、2、3或4之羅素他汀降解產物，其中該降解 產物係約95 /〇 HPLC面積％不含其位於位置6之相應立體 異構體。 7· 一種轉化如請求項5夕思各从、 $ >之羅素他>丁降解產物之鈣鹽為内酯 形式之方法，其勺A 一匕3組合乙腈、鹽酸及鈣鹽以獲得該内 98053-1000613.doc 1351958 δ _____ ΑΑ #, .长 如請求項5之羅素他汀降解產物之鈣鹽為游離 β之方法，其包含將該鈣鹽溶於乙腈及水之混合物中獲 付'合液，並使該溶液與矽膠管柱接觸。 9 ·如請求項8 $古 之方法’其進一步包括自矽膠管柱轉化游離 酸。 10. 一種用於夂去、.在 >号彳示準之内酯形式的羅素他汀降解產物，其 3 K鹼性條件下水解、與鈣源反應及經可見光照射 而^並备分離或純化，且具有下式之結構：

   11. 一種用於參者择.、佳 ， , 可知準之内酯形式的羅素他汀降解產物，其 係於3水驗性條件下水解、與㉟源反應及經可見光照射 而得並經分離或純化，且具有下式之結構： 98053-1000613.doc 1351958

   OH w 12. 如請求項10或11之内酯形式的羅素他汀降解產物，其中該 降解產物係約9 5 % Η P L C面積％不含其位於位置6之相應 立體異構體》 13. —種轉化如請求項^或^之内醋形式的羅素他汀降解產 物為鈣鹽之方法，其包含在含水鹼性條件下水解該内 ’且將該經水解内g旨與飼源反應。 14. 如清求項13之方法，其中將驗性水溶液與含内酯之乙猜 溶液組合，隨後移除乙腈並添加鈣源，且回收該鈣鹽。 15. 如請求項14之方法，其中該方法包含將該㈣溶於^猜 及氫氧化納水溶液之混合物中’蒸發該乙腈，及添加氯 化鈣至該殘餘水中以沉澱該鈣鹽。 16. -種轉化如請求項㈣^之㈣形式的羅素他江降解產 物為游離酸形式之方法’其包含在含水驗性條件下水解 该内醋以獲得鹽並使該鹽與石夕膠管桎接觸以獲得該游離 酸。 17· 一種分析羅素他;丁樣品之方法，其包含如下步驟： a)在該樣品上執行層析法以獲得資料；及 …將該資料與如請求項卜2、^。或u之降解產物 98053-1000613.doc 之層析法資料比較β 18_如請求項17 <万去，其中該方法包含如 (a) 製備含有兮降紐# ι 下步驟· 令这降解產物之羅素他汀溶液； (b) 使該溶以行高黯相層析法 層 (c) 將該層析詳中僅π々丨欠也 足侍層析4，及 較。 S又侍之峰與由該降解產物產生的峰比 如明求項17之方法’其中該方法包含如下步驟： ⑷製備含有該降解產物之羅素料溶液； (b)使該溶液進行薄層層析法以獲得滑析譜；及 ()將u層析4中獲得之帶或點與由該降解產物產生的 峰或帶比較。 種製備如。月求項1、2、3、41()或11之降解產物之方 法其包3以可見光照射羅素他汀酸 '羅素他汀鹼金屬 或驗土金屬鹽或羅素他、;丁内g旨的步驟，其中該照射係在 溶液中或以固態執行。 21. —種製備如下化合物之方法，

   或 98053-1000613.doc 1351958

   其中Μ為每’該方法包含以可見光照射含於有機

   溶劑與水 自約室溫 混〇物中之羅素他灯飼溶液，其中該照射係在 至約回流溫度下執行。 22.如凊求項21之方法，其中該有機溶劑為乙腈。 23‘如請求項21之方法，其中該可見光照射在約35<t下為約 750 w。 24. —種製備如下内酯形式之化合物之方法，

   98053-1000613.doc

   °亥方法包含以可昭 該溶劑係選自由二μ/劑中之羅素他㈣醋，其今 成之群。 、疋、氧仿、乙腈及四氫呋喃所激 其中該可見光照射係在約20。(：至約 25.如請求項24之方法 l〇〇°C 間。 其包含以如下化

   如。月求項24之方法，其中該溶劑為乙猜 27· -種測定羅素他汀之滯留時間之方法， 合物作為標準進行層析法， F

   其中Rl&R2獨立地為氫或可水解保護基；r3為氫、（^至 C：4烷基，或鹼金屬或鹼土金屬；或其中€1及亇形成内酯。 28.如請求項27之方法，其中該參考標準為—參考標記。 98053-1000613.doc 1351958 29·如請求項27之方法’其中該標準為如請求項、 10或11之降解產物。 3、4、 .種製備如請求項!或2之羅素他汀降解 包括以下步驟·· 扨之方法’其 ⑷以可見光照射在有機溶劑與水之混合物中之羅素他 ’弓而獲得具以下結構的羅素他汀降解產物：

   或

   其中Μ為鈣； (b)回收步驟⑷中獲得的產物； 解步驟（b)中獲得的化合物於合適溶劑中，及混合 98053-1000613.doc 1351958 該溶液與含水鹽酸； (d)回收步驟（c)的產物； (e) 在含水鹼性條件下水解步驟（d)中回收的產物，並將 該經水解產物與鈣源反應而沈澱固體； (f) 回收步驟（e)中沈澱的固體；及 (g) 溶解步驟（f)中回收的產物於乙腈及水的混合物中， 且使該溶液與矽膠管柱接觸而獲得游離酸。 31.

   一種製備如請求項1或2之羅素他汀降解產物之方法，其 包括以下步驟： 、 (a)以可見光照射在有機溶劑與水之混合 、 |心維素他 汀内酯而獲得具以下結構的羅素他汀降解產物：、

   Ο) E7收步驟（a)中獲得的產物； 98053-1000613.doc -9- 1351958. (C)在含水鹼性條件下水解步驟（b)中回收的產物，並將 該經水解產物與鈣源反應而沈殿固體； (d) 回收步驟（幻中沈澱的固體；及 (e) 溶解步驟（d)中回收的產物於乙腈及水的混合物 中’且使該溶液與矽膠管柱接觸而獲得游離酸。 3 2 · —種混合物’其包含羅素他汀降解產物I

   及羅素他汀降解產物Π

   其中，相關於該混合物中夕姦τ to . M T之產物1，羅素他汀降解產物II 係少於5 HPLC%。 98053-1000613.doc •10·