TWI342312B - Hydrochloride salts of a glycopeptide phosphonate derivative - Google Patents

Description

1342312 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於糖肽抗生素之膦酸酯衍生物之氫氣酸鹽， 此類鹽適用於調配含有抗生素製劑之醫藥組合物。本發明 亦關於用於製備該等鹽之方法。 【先前技術】 糖肽（例如達巴七肽（dalbaheptide))係一類衆所熟知的由 各後微!k 物 t 之抗 ^_素（參 iGly copeptide Antibiotics， R· Nagarajan編，Marcel Dekker，Inc.紐約（1994))。此等複 合的多環肽化合物對大部分革蘭氏陽性細菌而言係非常有 效之抗菌劑。 以全文用之方式倂人本文中的共同讓渡之美國專利第 6,635:6 1 8號揭不了 _類新穎之糖肽鱗酸醋衍生物，其對报 多革蘭氏陽性細菌且右此合士 有非*有效之抗菌活性。 具體言之，本申嗜娈姐一 1 月本揭不了 一種式1之化合物： 96746.doc

1342312 此化合物在此項技術中作爲特拉文欣而爲人所知。 爲了在製備醫藥組合物及調配物時有效地使用特拉文 欣’非常需要在周圍溫度下儲存時具有改良穩定性之鹽形 式*先前未揭示過該等鹽形式。 【發明内容】 本發明提供具有約2.4重量％至約4.8重量％之氣離子含量 的特拉文欣之氫氣酸鹽。令人驚訝地，已發現該等氫氣酸鹽 在周圍溫度下儲存時較其他氫氣酸鹽具有改良之穩定性。 因此，在一實施例中，本發明係關於具有約24重量％至 約4.8重量％之氣離子含量的特拉文欣之氫氣酸鹽。 在另一態樣中’本發明係關於一種用於製備具有約2,4重 量％至約4·8重量％之氣離子含量的特拉文欣之氫氣酸鹽之 96746.doc 1342312 方法；該方法包含如下步驟： ⑷提供一種組合物’其包含具有高於約4.8重量％之氣離 子含量的特拉文欣之氫氣酸鹽及水性溶劑系統，其令該組 合物具有小於或等於約2.〇之pH值； ⑻將該組合物之pH值自約2 5調節至約5 〇以形成具有約 2.4重量％至約4.8重量％之氣離子含量的特拉文欣之氫氣酸 鹽；及 ⑷分離步驟（b)t所産生之特拉文欣之氫氣酸鹽。 在另實施例中，|發明係關⑤一種包含特拉文欣之氫 氯酸鹽及水性溶劑系統的組合物，其中該組合物之pH值介 於約2.5至約5.0之範圍内。 【實施方式】 · 本發明係關於某些在周圍溫度下儲存時具有改良穩定性， 的特拉文欣之氫氯酸鹽。該等鹽適用於製備醫藥組合物及 調配物。 在描述本發明時，除非另外指出，否則下列術語具有下籲 列含義。 如本文所用，術語"氫氯酸鹽，，或"氫氣化物"係指由氫氣酸 與所關注之化合物（即特拉文欣）反應所製備之鹽。除非明確 指出’否則此術語之使用不蘊涵任何特定化學計量。 術語"氣離子含量，，係指存在於其氫氣酸鹽形式的所關注 之化合物樣本中的氣離子之重量百分比（重量％)。此術語不 包括任何存在於所關注之化合物中的共價鍵結之氣取代基 (即，特拉文欣之芳香環（環 <：及£)上之氣取代基）之重量。因 96746.doc :晉術："氣離子含量"係指樣本的非共價鍵結之氣離子之 I。當心描述本發明之化合物時，諸子含量係基於 ’本之基本無水重量來計算，即，將樣本之水 之總重量中扣除。 樣本 如本文所用，術語”惰性溶劑"及"惰性稀釋劑”係指以下溶 劑或稀釋劑，其作爲溶劑或稀_使用時在反應條件下美 本上係惰性的。 土 術語"水性溶劑系統"係指包含水及至少一種惰性有機溶 劑或惰性有機稀釋劑之溶液。 命 當提供值之範圍時，應瞭解各中間值、除非另外明確指 出含量否則直至下限之單位之十分之一、該範圍之上限與 下限之間、及任何於所陳述之範圍中陳述之值或中間值均 涵蓋於本發明中。此等較小範圍之上限及下限可獨立地包 括於該等較小範圍中，且亦涵蓋於本發明中，其屬於所陳 述範圍中特定排除的任何極限。當所陳述之範圍包括該等 極限之一個或兩者時’排除彼等所包括之極限之一個或兩 者的範圍亦包括於本發明中。 在一態樣中，本發明係關於具有約2.4重量％至約4.8重量 %之氣離子含量的特拉文欣之氫氣酸鹽。 在另一態樣中，本發明係關於具有約2.4重量％至約4 7重 量％之氣離子含量的特拉文欣之氫氣酸鹽；包括約2,4重量 %至約4.6重量％。 在另一態樣中，本發明係關於具有約3.7重量％至約4.6重 量％之氣離子含量的特拉文欣之氫氣酸鹽；包括約3.7重量 96746.doc 1342312 約3.9重量％至約4.4重 %至約4,4重量。/。；舉例而言，例如， 量％或內3·7重量。/。至約3 9重量％。 存在於樣本中的氣離子之重量百分比係可測定的，例 如’以在 w States Pharmac〇peia ⑽ρ)23，22ι 節，⑽ 頁（聰）中所述之方法，或者藉由熟f此項技術者所已知之 許多其他技術。例如，一通用技術爲硝酸銀電位滴定法。 另-技術係基於重量測定添加㈣銀時自樣本中沈殿的氣 化銀之量。或者，可使用任何其他適用於敎存在於樣本 中的氣離子之重量百分比之方法。 因爲存在於特拉文欣之氫氣酸鹽樣本中的水之量可顯著 复化，所以在计算樣本之氣離子含量之前將任何存在於樣 本中的水之重量扣除。 另外，樣本重量（自其計算氣離子含量）包括任何存在於 特拉文欣之氫氣酸鹽中的雜質。存在於特拉文欣之氫氣酸 鹽樣本中的雜質之量通常小於約15%，例如小於丨2%。 因此’如下測定樣本之氣離子含量： 梓木幸畢v (100〜樣本中水之重量。/〇) ... 徠尽罜里X-而-特拉文欣之氫氣化物之重量 樣本重量X述勢子之重量％)=氣離子之重量 樣本重量X-(氣離子之重里°/>) =100 特拉文欣之氩氣化物之重量 通常可使用P/zarwacopei.a (USP) 25，921 節，2085-2088頁（2002)中所描述之卡爾.費歇爾電位測定法 來測定水含量，但亦可使用熟習此項技術者所已知之其他 96746.doc 1342312 技術來測定。 作爲參考，特拉文欣之單氫氣酸鹽（分子量1792.〇6)(〇% hO)具有1.98重量％之氣離子含量。相應地，特拉文欣之二 氫氣酸鹽（分子量1 828.52)及特拉文欣之三氫氣酸鹽（分子 量1864.98)分別具有3.88重量％及5·7〇重量％之氣離子含 量。 因此，具有約2.4重量％至約4‘8重量％之氣離子含量的本 發明之氫氣酸鹽對應每莫耳當量之特拉文欣中大於約1且 小於約3莫耳當量之氫氣酸鹽。在―態樣中，本發明係關於 每莫耳當量之特拉文欣中具有約1.5至約25莫耳當量之氫 氣化物的特拉文欣之氫氣酸鹽。較佳的本發明之氫氣酸鹽 之化學計量爲每莫耳當量之特拉文欣中約2莫耳當量之氫 氣化物。 " 諸如糖肽之醫藥化合物之降解産物正受到關注，因爲該 等降解產物較母體分子在其生物活性或治療效應上可有所 不同。例如參見，J. Dlana等人，《/贈〇/c心崎邮哪紗籲 996:1 15-13 1(2003)，其討論了萬古黴素雜質。 已發現某些特拉文欣之氫氣酸鹽在周圍溫度下儲存時產 生少量的不須之降解産物及雜f。兩種主要降解產物爲⑴ 特拉文欣之假糖皆配基雜質；及⑺特拉文欣之糖普配基雜 質（其結構如下所示）。假糖皆配基雜質係由特拉文欣之脂化 萬古胺（職。Samine)部分水解產生而料配基雜f係由特 拉文欣之葡萄糖部分水解産生。 96746.doc 1342312

HN Η203Ρ 先前所揭示的用於製備特拉文欣之方法已將特拉文欣之 氫氯酸鹽自pH值小於約2之溶液中分離出來，藉此導致具有 大於約5重量％之氣離子含量的特拉文欣之氫氣酸鹽，即， 提供一種近似爲特拉文欣之三氫氣酸鹽的特拉文欣之氫氣 酸鹽。該等鹽之樣本組在20-30°C下乾燥兩天後含有約8%的 假糖苷配基及糖苷配基降解副産物之經組合總數。具有大 96746.doc •12· ιΙ342312 於約5重量％之氣離子含量的特拉文欣之氫氣酸鹽在25 下於受控條件下儲存兩週後，觀測到假糖苷配基增加了超 過0.6%且糖苷配基增加了 0.4%。 相反，在類似條件下，具有約2 · 4重量％至約4.8重量％之 氣離子含量的特拉文欣之氫氣酸鹽顯示假糖苷配基雜質之 增加量小於0_2%且糖苷配基雜質之增加量小於〇.〇7% ^因 此’本發明之鹽在周圍溫度下儲存時所産生的假糖苷配基 及糖苷配基雜質之量顯著小於由先前所揭示之氫氣酸鹽所 0 産生的雜質之量。 在第二實施例中，本發明係關於一種用於製備具有約2.4 重量％至約4.8重量％之氣離子含量的特拉文欣之氫氣酸鹽 之方法。該方法包括：在第一步驟（a)中提供一種組合物， 其包含具有大於約4.8重量％之氣離子含量的特拉文欣之氫 ' 亂酸鹽，及在第二步驟（b)中調節該組合物之pH值。 本發明之方法可使用自本文所述的特拉文欣之氫氣酸鹽 之一般合成流程直接獲得的溶液，或者該組合物可藉由將 φ 所分離的特拉文欣之氩氯酸鹽再溶解來形成。因此，在本 發明之一態樣中，步驟（a)之組合物可直接自特拉文欣之氫 氣酸鹽之合成方法獲得。在本發明之另一態樣中，將經分 離的具有大於4.8重量％之氣離子含量的特拉文欣之氫氣酸 鹽再溶解以構成步驟（a)之紐合物。例如，可將凍幹的具有 大於4.8重量％之氣離子含量的特拉文欣之氫氣酸鹽再溶解 以構成步驟（a)之組合物。 在以上方法之步驟（a)中，該組合物包含特拉文欣之氩氣 96746.doc 13 1342312 J^及水丨生/合劑系統，其中該組合物具有小於或等於約2 〇 之pH值。在步驟⑷t所使用之水性溶劑系統通常包含水及 至少-種有機稀釋劑。適用於與水倂用之有機稀釋劑爲以 下稀釋劑：⑴可與水混溶；及（2)對特拉文欣之氫氯酸鹽在 化予上係U1·生的》適用之有機稀釋劑包括乙腈、甲醇、乙 醇、丙醇、異丙醇、第三丁醇、二噁烷及其類似物。例如， 該有機稀㈣可選自H f醇及乙醇組成之群。在一 特定實例令’步驟⑷之組合物包含乙腈及水。尤其受關注 的係步驟⑷之水性溶劑系統爲乙腈與水之比例爲約40%至 約60%(v/v)之溶液。 步驟⑷之組合物中特拉文欣之氮氣酸鹽之較佳濃度爲約 5 mg/mL至約30 mg/mL。例如，步驟⑷之初始組合物令特 拉文欣之氫氣酸鹽濃度可爲約2〇叫就至約心㈣。 在本發明之步驟⑼中，將組合物之pH值調節至約U至約 5.0之耗圍。在一態樣中，在該方法之步驟⑻中將組合物 之PH值調節至約3.〇至約5.〇之範圍。舉例而言，在 中，可將組合物之阳值調節至約3〇至約45之範圍，例如 約3.0至約4.0。在步驟⑻中，可將組合物之阳值調節至約 3.5至約4·5之範圍。例如，可將組合物之PH值調節至約35 至約4·0之範圍。在一態樣中，將組合物之PH值調節至約4 〇 至約4.5之範圍β ·υ 金=驟⑻中，通常藉由向步驟⑷之組合物中逐滴添加, 金屬心乳化物來調節組合物之仲值。可使用任 驗金肩類氫氧化物，包括（以實例說明之）：氫氧化鋇、氣氧 96746.doc 化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰及其類似物。尤其受關注的係 用氣氧化鈉_節組合物之pH值。 取後，在第三步驟（c)中，以此項技術中已知之諸多方法 中之任何方法將特拉文欣之氫氣酸鹽自步驟（b)之組合物中 刀離。例如’可將特拉文欣之氫氯酸鹽沈澱且離心或過減。 在本發明之一態樣中，在步驟（c)中，藉由沈澱且過濾將 特拉文欣之氫氣酸鹽自組合物中分離。例如，可使用過量 之有機稀釋劑將特拉文欣之氫氣酸鹽自組合物中沈殺出 來。適用於在步驟（c)中將特拉文欣之氫氣酸鹽自步驟（|^之 組合物中沈澱的有機稀釋劑爲以下稀釋劑：（1)與水混溶； (2)對特拉文欣之氩氣酸鹽在化學上係惰性的；及當添加 至步驟（b)之组合物時會導致特拉文欣之氫氣酸鹽之沈澱。 適用之有機稀釋劑包括（以說明之方式）：乙腈、甲醇、乙醇、 丙酮及其類似物。在本發明之一態樣中，在步驟（c)中，將 己腈添加至步驟（b)之組合物中以沈澱特拉文欣之氫氣酸 鹽。在本發明之另一態樣中’將丙酮添加至步驟（b)之組合 物中以沈澱特拉文欣之氫氣酸鹽。 必要時，可視情況以合適之有機稀釋劑洗滌步驟（c)中分 離的沈澱。例如，當將乙腈添加至步驟（b)之組合物以沈澱 特拉文欣之氫氣酸鹽時，可視情況以乙腈洗滌所得沈澱接 著以甲基第三丁基謎（MTBE)洗蘇》或者，當用丙來沈殿 特拉文欣之氫氣酸鹽時’可視情況以丙酮洗滌所得沈澱接 著以MTBE洗滌。 本文中所描述的本發明之方法中的步驟（a)、（b)及（c)一般 96746.doc -15- 1342312 係在約15t：至約3(TC之内部溫度下進行，通常在約2〇t至 約25°C之範阗内。 通常，當進行本發明之方法時’所有過濾、洗滌、乾燥 及篩分步驟均在諸如氮、氬及其類似物之惰性氣氛下完成。 在另-實施例中，本發明係關於一種包含特拉文欣之氫 氣酸鹽及水性溶劑系統之組合物，其中該組合物之pH值介 於約2.5至約5_0之範圍内。在本發明之另一態樣中，本發明 係關於該組合物，其中該組合物具有任一本文所述之特定 pH值。 本發明'亦包含以任-種本文所述的用於製備具有約2 4 重量％至約4.8重量％之⑽子含量或任何本文中所述之特 定氣離子含量範圍的特拉文欣之氫氣酸鹽之方法製備之産 物。 一般合成程式 可使用下列-般方法及程式自易獲得之起始材料製備特 拉文欣或其鹽，解當給定了典型或較佳之方法條件 (即，反應溫度、時間、反應物之莫耳比、溶劑、壓力等) τ除非另外5兒a月，否則亦可使用其他方法條件。最佳反 應條件可隨利之特定反應物或溶劑而改變，但熟習此項 技術者可以常用之優化程式來判定該等條件。另外，熟習 此項技術者將瞭解可能需要習知之保護基團以預防某些'官 能基經受不須之反應。 用於I備特拉文欣或其鹽之詳細程式描述於2咖年8月 23日申4之美國臨時專利_請案第丨g/226，刚號、2_年8 96746.doc 月23日申错夕M m 年8 、，臨時專利申請案第10/226,676號及2002 該箄申Λ請之美國臨時專利申請案第1〇/226,428號中； 申明木之揭示内容以全文引田认+二 何玆笼八心 用的方式倂入本文中。任 κ “。中所揭不之程式可用於製備特拉文欣或其 〇 以說明之方式，首先使用Ν_保護·癸基胺基乙酿在萬古胺 之胺基末端對萬古黴素或其鹽進行還原烷基化。例如，在 =性稀釋财將—料#量之萬錢素❹鹽與—莫耳當 量^更多的Ν-保護-癸基胺基乙酸⑼如N-F_-癸基胺基 乙越）及過量的合適驗組合以形成組合物。在該方法之此步 驟中較佳使用約1至約2莫耳當量之乙醛。在此組合物中， 認爲乙«萬古黴素之驗性氮原子（即，萬古胺氮原子及& 末端（白胺酸殘基）氮原子）之間形成了亞胺及/或半縮醛胺 之混合物。 通常，在過量的合適鹼存在下於惰性稀釋劑中將萬古黴 素或其鹽與乙醛組合來形成混合物。舉例而言，合適之惰 性稀釋劑或溶劑之組合包括N，N-二甲基甲醯胺、N，N_二甲 基乙醯胺、N-甲基吡咯烷酮、乙腈/水及其類似物或其混合 物。 任何可在此步驟十用於中和萬古黴素鹽及促進形成亞胺 及/或半縮醛胺的合適鹼包括〔諸如胺、鹼金屬羧醆鹽（即， 乙酸鈉及其類似物）之有機鹼及諸如鹼金屬碳酸鹽（即，碳酸 裡、碳酸鉀及其類似物）之無機鹼。通常，此步驟_所用之 鹼爲三級胺’例如（以說明之方式）三乙胺、二異丙基乙胺、 96746.doc -17· 1342312 N-甲基嗎啉及其類似物。 本方法之第一個步驟通常在介於約0°C至約75°C之範圍 内的溫度下（較佳在周圍溫度（即，約20-25°C)下）進行約1至 約24小時（較佳約6至12小時）或直至亞胺及/或半縮醛胺之 形成大體上完成。 當亞胺及/或半縮醛胺混合物之形成大體上完成時，以過 量酸來酸化混合物。任何可用於該方法之此步驟中之合適 酸包括（以說明之方式）：羧酸（例如乙酸 '三氣乙酸、檸檬 g 酸、甲酸、三氟乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸及其類似物）、無 機酸（例如氫氣酸、硫酸或磷酸）及其類似物。此步驟中所用 之酸通常爲三氟乙酸或乙酸。相對於萬古黴素（及鹼），酸通 常多加1莫耳。 此酸化步驟通常在介於約〇°c至約30〇c之範圍内的溫度 ' 下（較佳在約256C下）進行約0_25至約2.0小時（較佳約0.25至 約1.5小時）。 在此步驟中通常添加極性質子性溶劑，例如（以說明之方.泰 式）：曱醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、乙二醇及其類似 物。或者’可使用混合的極性質子性/非質子性溶劑，例如 甲醇/四氫呋喃、甲醇/1,2-二甲氧乙烷及其類似物。 在酸化步驟之後’接著將混合物與還原劑接觸以還原亞 胺及/或半縮路胺。任何與存在於糖肽中之官能度相容的還 原劑均可用於該方法之此步驟中。例如，合適之還原劑包 括胺/侧燒錯合物（例如硼氫化鈉、氰基硼氫化鈉、硼氫化 辞、二乙酿氧基硼氫化鈉）、吡啶/硼烷、第三丁胺/硼烷、 96746.doc -18- 1342312 N-甲基嗎啉/硼烷、氨/硼烷、二甲胺/硼烷、三乙胺/硼烷、 三甲胺/硼烷及其類似物。 還原作用（即’以還原劑處理）通常在諸如醇（例如甲醇、 乙醇、丙醇、異丙醇或丁醇）、水或其類似物之質子性溶劑 存在下進行。此還原步驟中通常存在極性質子性溶劑。可 在上述之酸化步驟中添加該極性質子性溶劑。 該方法之此還原步驟通常在介於約〇°c至約3〇〇c之範圍 内的溫度下（較佳在約25°C下）進行約0.5至約24小時（較佳 約1至約6小時）或直至還原作用大體上完成。 必要時’可在接下來的合成步驟前將存在於還原烷基化 作用産物之正癸基胺基乙基側面上的保護基園移除。例 如，若使用9·第基甲氧羰基（Fmoc)保護基團，則此基團通 常藉由以諸如第三丁胺之胺處理來移除。此反應通常在與 還原烷基化作用所用容器相同之反應容器中内進行以提供 N3"-[2-(癸基胺基）乙基]萬古黴素。 接著在鹼性條件下將得自還原烷基化作用之糖肽衍生物 在間笨二酚部分上與胺甲基膦酸及甲醛偶合以得到特拉文 欣或其鹽。通常藉由在鹼存在下與過量胺基甲基膦酸（例如 對應約1莫耳當量（例如約〇9至約丨丨莫耳當量）之曱醛爲約 2至約1〇莫耳）及約1莫耳當量的得自還原烷基化作用之糖 狀衍生物或其鹽接觸來進行此步驟。 通常以水溶液形式添加用於該方法之此步驟中的甲醛， 例如，視情;兄含有約5至約15%重量％甲醇（即福馬林）的甲 醛於水中之37重量％溶液。 96746.doc 19 1342312 任何可用於此反應中之合適驗包括（例如）：諸如=級p 之有機鹼及諸如鹼金屬氫氧化物（即，氫氧化鈉）之無機鹼。 該鹼通常爲三級胺，例如（以說明之方式）三乙胺、二異丙基 乙胺及其類似物。鹼與含膦酸基之胺之莫耳比爲約3 1至約 5:1。混合物之ΡΗ值通常爲約1〇至約11。此反應在諸如水、 乙腈/水及其類似物之惰性稀釋劑中進行。例如，該方法之 此步驟可在Wv比率介於約3:2至完全爲水之範圍内的乙腈/ 水或水中進行。 本方法之此步驟通常在介於約_2〇。(：至約3(rc之範圍内 的溫度（例如約-1(TC至約-5t )下進行約6至約48小時或直 至反應大體上完成。 所得化合物或鹽可藉由包括沈澱、過濾及其類似程式之 習知程式來分離。在一典型分離程式令，藉由添加諸如氫 氣酸水溶液之合適酸將混合物之pH值調節至約2與約3之 間。在酸化作用期間通常將混合物之溫度保持在約5 以 下。接著添加諸如乙腈之有機稀釋劑以促進反應産物沈 澱，且藉由過濾收集所得沈澱並視情況以額外之稀釋劑洗 滌。或者，此溶液可直接用於形成本發明之氫氣酸鹽。 必要時’可使用逆相HPLC或諸如樹脂層析之其他層析方 法進一步純化以上形成之沈澱。用於樹脂層析中的多種合 適之聚笨乙稀-一乙稀基苯樹脂均有市售，舉例而言’例如 購自 TosoHaas (Montgomery, PA) ^ Rohm & Haas (Philadelphia，PA)、Mitsubishi Chemical Industries LTD.(東 京’曰本）及Dow Chemical Co. (Midland，MI)。 96746.doc -20- 1342312 藉由於過量水中潤濕且以酸化水及/或酸化極性有機溶 劑之水溶液诜滌來製備樹脂。將待純化之特拉文欣樣本溶 解於視情況含有極性有機溶劑之酸化水中。 合適之極性有機溶劑包括曱醇、乙醇、異丙醇、乙腈及 其類似物。適用於酸化第一種及第二種水溶液之酸包括乙 西文、二氟乙酸、氫氣酸、硫酸、碟酸及類似酸。樣本溶液 之p Η值車乂佳在約2與約5之間。移除一小部分樣本溶液且用 作分析標準。 將樣本溶液裝至管柱上且以第二種酸化極性有機溶劑溶 液/谷離自管柱收集溶離份。第二種酸化水溶液之酸濃度 通常爲約10 mM且其極性有機溶劑與水之比率按比例爲約 1:3至約1:丨5。 例如’藉由薄層層析或HPLC來監測各溶離份中樣本之存 在It況、濃度及純度。富集含有高於組臨限值之樣本純度 (例如（以說明之方式）約85%純特拉文欣（或其鹽））的溶離 伤。待富集之溶離份令化合物1之濃度通常爲約0.5-5.〇 mg/mL。 爲增加特拉文欣之濃度，將以上收集之富集溶離份裝至 第二個聚笨乙烯樹脂管柱上。此程式亦充當鹽交換制程以 將任何甽鹽（藉由在以上純化步驟期間酸與特拉文欣相互 :用而形成）轉化爲i氣酸鹽。通常將特拉文欣作爲氫氣酸 來t備。然而，在上述之純化步驟期間可形成極少 不同鹽。 沁稀釋在早先之純化步驟令收集的富集溶離份，例 96746.doc -21 - 1342312 如’可將該等溶離份稀釋約兩次，接著將其裝至第二個樹 脂層析管柱上。使用體積比爲（例如）1G:9㈣5的乙赌：水： 虱氣醆之溶液來洗滌管柱。使用體積比爲約4〇•額-4〇的 乙腈-水溶液自該管柱溶離所關注之化合物，同時監測溶離 富集含有高於所要臨限值之樣本違度（例如⑽㈣）的 離伤；i it纟純化或濃縮’此樹脂層析純化步驟可重 複夕人或者，可藉由沈澱且過濾或以其他熟習此項技術 者所已知之方法自溶離液中分離純化産物。

通常，所得之富集溶離份爲pH值小於或等於約2 〇之乙猜馨 火/合液中的特拉文欣之二氫氣酸鹽，其具有大於重量％ 之氣離子含量D 就本文中所描述的本發明之方法而言，步驟（3)之組合物 可爲在上述濃縮步驟及鹽交換步驟中所收集之富集溶離 -份’或者該等溶離份可經諸如乾燥或凍幹之進一步處理， 接著再溶解於水性溶劑系統中以構成步驟（a)之組合物。 以上反應中所用之方法於此項技術中已爲人所熟知。合 參 適之試劑有市售或.者可使用市售之起始材料及習知試劑以 習知程式製備。例如參見，ΜναπΜ 以％

Jerry March，第 4版，1992, John Wiley 及 Sons，紐約，959 頁；及 Frank R· Hartley (ed·) TTie C7zewhr>； 〇/

Organophosphorous Compounds > # l -4 » John Wileys Sons * 紐約（1996)及其中所引用之參考文獻。 其他用於製備本發明之化合物之細節及方法描述於以下 實例中。 96746.doc •22· 1342312 以任何方式限制本發明 提供下列實例以說明本發明且不 之範疇。 實例 在以下實例中’下列縮寫具有下列含義。任何未定義之 縮寫具有其通常所被接受之含義。除非另外說明，否則所 有溫度均以攝氏度（c)爲單位。 ACN =乙腈 B V/h =柱床體積/小時 DMF=N，N-二曱基曱醯胺 eq.二莫耳當量 Fmoc= 9-第基甲氧羰基 MTBE=甲基第三丁基趟 TLC =薄層層析 TFA =三氟乙酸 在下述實例令’使用具有由Agilent所提供之Zorbax RP-Bonus 4.6 mm X 250 mm 管柱的 Agilent(Palo Alto, CA)ll〇〇系列設備來進行HPLC樣本分析，其中該等管柱具 有5微米之孔尺寸且封裝於C 14二氧化矽上。藉由254 nm處 之紫外吸收來進行情測。流動相A爲2%-98%-0.1〇/〇 ACN-H2〇-TFA ；且流動相 B 爲 90%-10%-0.1〇/〇 ACN-H2〇-TFA。流動相A之流動速率爲1.0 mL/分鐘，其含 有如下之流動相B梯度：30分鐘之10至43% B ; 5分鐘之43% B ; 5分鐘之43%至100% B ; 1分鐘之1〇〇至1〇% b ;及14分 鐘之10% B。 96746.doc •23· 1342312 在下列實例中，萬古黴素氫氣酸鹽之半水合物係購自 Alpharma’ Ihc· F〇rt Lee，NJ 〇7〇24㈧*随a as，奥斯陸， 挪威）其他试劑及反應物係購自Aldrich chemical Co (Μΐ17^’ WI)°又’除非另外指出，否則試劑、起始材 料U係講自商業供應商（例如施Ah ' Fiuka、Sigma及 類似公司）且不經進一步純化而使用。 使用，、有703型系/稅拌器之Brinkmann Metrohm Karl Fischer· 831型t量計來測定測試樣本之水含量。使用〇 i n 靖酸銀及736 GP Titrin〇電位滴定儀，Metr〇hm Ltd. (Hensau ’瑞士）藉由電位滴定來測定測試樣本中氣離子之 重量百分比。以已知樣本定期校準該設備以核實準確度。 實例1 合成具有大於約4.8之氣離子含量的特拉文欣之氫氣酸鹽 a·製備Nvan-2-(正癸基胺基）乙基萬古黴素之氫氯化物 向配備有機械攪拌器、溫度計及氮鼓泡器之5[三頸燒瓶 中添加DMF(760 g，800 mL)且溫至30-35。(：。在攪拌的同 時’依次添加24 mL二異丙基乙胺（181 g，〇 M m〇l，2 eq) 及萬古黴素氫氣化物（100 g，〇 〇67 mol，1 eq)(分成多份）。 以DMF(114 g，120 mL)沖洗添加漏斗。將混合物於30-35 °C下攪拌0.5小時，接著冷卻至20_25。(：。向混合物中添加 N-Fmoc-癸基胺基乙醛（29.7 g，0,07 mol，1.05 eq)，將其於 20-25°C下攪拌6-8小時。添加甲醇（220 g，280 mL)，隨後 添加三氟乙酸（31.2 g，21 mL，0.272 mol，4 eq)。將混合 物攪拌約15分鐘後，添加硼烷第三丁胺複合物（5.7 g，0.067 96746.doc •24- 1342312 mol ’ 1 eq)，且將混合物搜拌約2小時。添加第三丁胺（29.8 g ’ 0.4〇3 mi>l，6 eq)且將所得混合物溫至約55它並攪拌2·3 小時。將混合物冷卻至約2 0 - 2 5 °C且於約2 0 - 2 5 °C下添加0.5 N HC1(540 mL)以將溶液之pH值調節至7.25至7.35。經大約4 小時添加10%鹽水溶液（2400 g)同時將溫度保持在約2〇_25 °C ’其後將懸浮液冷卻至0-5°C且攪拌3至4小時。以Whatman #2濾紙（18.5 cm直徑，8微米）過濾所得漿體。依次以水（2χ 200 g)及甲基第三丁基醚（2x200 g)洗滌潮濕濾餅。以乙酸乙 酯（600 g)將潮濕濾餅再漿化8至12小時。過濾、此混合物，接 著以乙酸乙酯（2x100 g)洗滌。在40。(3下於室内真空（40至50 mm Hg)中乾燥該潮濕濾餅直至水含量達到小於約1〇%之偵 測極限（LOD)。獲得呈灰白色粉末之標題化合物（丨〇2 g ,約 85%純度）且不經純化而用於下一反應中。 b.製備粗特拉文欣之氫氣化物 向配備有機械攪拌器、溫度計及氮鼓泡器之12 L三頸燒 瓶中添加胺基甲基膦酸（47.7 g，0.43 mol，5eq)。添加乙腈 (786 g ’ 1 L)及水（1000 g，1 L)且在20-25°C下攪拌混合物直 至溶解。添加二異丙基乙胺（222 g，0.3 L，20 eq)且將混合 物於20-25°C下攪拌20分鐘。添加以上製備步驟（a)之産物 Nvan-2-(正癸基胺基）乙基萬古黴素之氫氣化物（200 g，〇.〇86 mol分析級（assayed) ’ 1 eq)且將混合物於20-25°C下攪拌1小 時。將混合物冷卻至-51，隨後添加水中之37重量％甲醛 (9.08 g，0.111 m〇l，1.3 eq)。在氮中將混合物攪拌12-24小 時。向反應混合物中逐滴添加3 N HC1(615 mL)以將混合物 -25- 96746.doc 1342312 之pH值自丨〇,8調節至2.8。將混合物溫至20-25 °C。經約2,5 小時將乙醇（95% ’ 8 L)添加於混合物中。將所得懸浮液於 5-10 C下搜拌16小時。藉由Whatman #2濾紙（24 cm直徑，8 微米）過濾該懸浮液。以乙酸乙酯（2x200 mL)洗滌潮濕遽餅 以得到灰白色細粉。將該濾餅於25〇C下乾燥以得到特拉文 欣之虱氣化物且藉由HPLC分析確認其爲標題化合物（1 g ’ 7 6.5 % 純度）。 c .純化步驟 將HP20SS聚本乙烤-二乙烯基苯樹脂（Agiient)裝至配備 有背壓調節器、蠕動泵、紫外偵測器及溶離份收集器之2"χ 25 cm管柱上。 藉由以約2-3 BV/小時之流動速率經由管柱泵入3柱床體 積（BV)之100%乙醇來對管柱進行預處理。在裝載樣本之 前，以流動速率爲2至3 BV/小時的用於3至5 bV的流動相 A{15% 乙醇（19(TC(proof)，經 5% 甲醇變性）、85%水、1〇/〇 乙 酸}使該管柱保持平衡。 將濃度爲20-25 mg/mL的以上製備步驟之産物之溶液 與80:10:10(ν/ν/ν)之水：乙醇：乙酸混合且攪拌丨_2小時。 將該溶液與矽藻土（5 g/L溶液）混合15分鐘，經由1微米之篩 檢程式過濾且以1.5 BV/小時裝至管柱上。使用2〇 mL/分鐘 之流動相A將管柱洗滌30分鐘（約i BV)。使用流動速率爲約 1BV/小日$(就Bi〇tage75M筒而言，爲i3.5mL/分鐘）的流動 相B(26%乙醇、72%水、1%乙酸乙酯、1%乙酸）歷經約5小 時來溶離分離各自體積爲約27 mL之溶離份。 96746.doc -26. 1342312 藉由薄層層析來分析各溶離份中特拉文欣之存在情況β 接著藉由HPLC分析含有特拉文欣之溶離份以測定溶離份中 特拉文欣之漢度及純度。富集彼等具有至少85%之純度的溶 離份。具有可接受純度的所富集溶離份之總體積爲約5 BV。 d *濃缩及鹽交換 以90%去離子水、1〇%乙醇及〇.1%乙酸（v/v/v)之混合物將 Ambedite XAD-1600聚笨己烯_二乙烯基苯樹脂（R〇hm &

Haas)洗蘇3天。將樹脂裝載入管柱中，接著藉由以約2 bv/鲁 小時之流動速率經由管柱泵入3柱床體積（B V)之1 〇〇%乙醇 來對管柱進行預處理。在裝載樣本之前，以流動速率爲約2 BV/小時的用於3_5 BV的流動相Α{15%乙醇（19〇〇c，經5% 甲醇變性）、85%水、0.6%乙酸}使該管柱保持平衡。 以水（2x富集溶離份體積）稀釋以上純化步驟（c)中所收集 之画集浴離份且藉由添加水將溶劑組合物自約25%乙醇水 溶液調節爲85%水、1 5%乙醇。接著以約i BV/h之流動速率 將該溶液泵至管柱上。由紫外偵測器監測到捕獲效率大於籲 98% » 製備體積比爲10:90:0.5的乙腈-水-濃氫氣酸水溶液之溶 液且以約1 BV/小時之流動速率將其泵至用於2 BV之管柱 上。 以濃HC1將體積比爲50:50的乙腈-水溶液之pH值調節至 2.0，接著以約1 BV/小時之流動速率將其泵至管柱上以自該 管柱上溶離特拉文欣之氫氣酸鹽。 收集各溶離份且測試特拉文欣之氫氣酸鹽之存在情況。 -27- 96746.doc 收集浴離份直至不再偵測到特拉文欣之氫氣酸鹽。富集含 有約20-30%特拉文欣之氫氣酸鹽的溶離份。2_3 Bv之釋放 溶液足以回收> 95%之捕獲樣本。富集溶離份直接用於以 下實例2中所述之方法中，或者將其凍幹且接著再溶解以用 於實例2中所述之方法中。 實例2 製備且分離具有4.1重量％之氣離子含量的特拉文欣之氩 氣酸鹽 將特拉文欣之氫氣酸鹽（1·14 L)(如實例1中所述來製備） 溶解於l:l(v/v)乙腈與水（PH 1.93，濃度約30mg/mL)f。在 22°C下以10 N NaOH水溶液（約3 mL)將該溶液之PH值調節 至3.78。在22°C下經3.5小時向此溶液中逐滴添加乙腈（3 42 L)以得到乳狀懸浮液沈殿。將此混合物授拌1.5小時且靜置 約14小時同時不攪拌。接著將沈澱混合物過濾且依次以乙 腈及MTBE(各200 mL)洗條所得之潮漁渡餅。將該潮濕渡餅 於氮中乾燥1小時，接著篩分（500微米）。在22。(：下將所得粉 末於45-50 mm Hg真空中乾燥96小時以得到32.5 g(約40%) 呈灰白色粉末之標題化合物。（HPLC純度91.3%，3.84重量 %氣化物，5,84重量％水）。調節水含量後此材料具有41重 量％之氣離子含量。 使用上述方法且藉由改變NaOH之添加量自pH值爲ι.8、 2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5及5.0的溶液中分別分離具有 5·74、5·60、4·69、4·59、4.41、3.94、3.68及 2.42重量 ％之 氣離子含量的特拉文欣之氫氣酸鹽。 96746.doc -28- 1342312 實例3 氯離子含量對穩定性之影饗 測定了在-20 °C、5 °C及25 °C下儲存時氣離子含量對特拉 文欣之氫氣酸鹽之穩定性的影響。

將如實例2中所述製備的八組特拉文欣之氫氣酸鹽置於 同樣之玻璃小瓶中且在其他條件相同之情況下於-2〇°C、5 °C及25°C下儲存兩週。使用假糖苷配基及糖苷配基雜質之 HPLC面積％之變化來評估相對穩定性。 在最高溫度25 °C下儲存的樣本之結果顯示於下表1中。儲 存於較低溫度下的樣本之假糖苷配基及糖苷配基雜質之增 加在數量上較小但顯示了相同傾向。 表1 在25°C下儲存兩週的特拉文欣之氫氣酸鹽之實驗資料 pH值 物1之氯離子 含量(°/。） 化合物1之假糖苷配基 佴卩以:面積％) 化合物1之糖苷配基 (1«^(：面積％> 初始 兩週後 兩週變化 初始 兩週後 兩週變化 1.8 5.74 0.89 1.94 +1.05 0.43 1.08 +0.65 2.0 5.60 0.48 1.11 +0.63 0.15 0.41 +0.26 2.5 4.69 0.45 0.62 +0.17 0.07 0.13 +0.06 3.0 4.59 0.52 0.72 +0.20 0.10 0.17 +0.07 3.5 4.41 0.42 0.53 +0.11 0.06 nd* nd* 4.0 3.94 0.43 0.56 +0.13 0.04 0.09 +0.05 4.5 3.68 0.43 0.51 +0.08 0.06 0.08 +0.02 5.0 2.42 0.32 0.40 +0.08 0.03 0.05 +0.02

*未測定出。 展示於表1中之氣離子含量係藉由扣除樣本之水含量來 計算。就各樣本而言1指出了用於自其中分離各樣本的混 96746.doc -29· 1342312 合物之pH值。所定名之行"兩週變化"係HPLC面積％之兩週 後之觀測值'與初始值之間的差異且以圖表說明於圖1及2 令〇 如圖1及2中所示，具有大於4.8重量％(5.74重量％及5.60 重量％)之氣離子含量的特拉文欣之氫氣酸鹽（即，彼等在低 pH值條件下（pH 1.8及2.0)沈殿的特拉文欣之氫氣酸鹽）在 2 5 °C下經兩週後具有增加的水解副產物含量。特定言之， 兩週後’在低pH值下沈澱的特拉文欣之氫氣酸鹽在假糖苷 配基雜質之積％上增加了 〇.6或更多；且在糖苷配基 雜質之HPLC面積％上增加了 0.3或更多。 令人驚奇地’具有約2.4重量％至約4.8重量％之氣離子含 量的特拉文欣之氫氣酸鹽在相同條件下顯著地更加穩定。 就該等鹽而言，假糖苷配基雜質之HPLC面積％之兩週變化 介於0.1與0·2之間。類似地，糖苷配基雜質之1{1>1^(：面積％ 之變化小於0.1。因此，本發明之氫氣酸鹽較先前所揭示之 鹽顯示出顯著改良之穩定性。 雖然已參考本發明之特定實施例描述了本發明，但熟習 此項技術者應瞭解在不脫離本發明之真實精神及範疇之情 況下可進行各種變化且可替換當[另外，可對本發明之 目的 '精神及料進行很多修正以適應特定情形、材料、 :關組合物、方法、一或多個方法步驟。所有該等修正均 意欲處於本文之附加專利中請範圍之㈣内。另外，所有 文中所引用之a 案、專利及專利文獻均以全文引用 方式併人本文中’如同將其以弓丨用的方式個別地併入一般、。 96746.doc -30· 1342312 【圖式簡單說明】 圖1係樣本於25。(：下儲存時，存在於8個特拉文欣之氫氣 酸鹽樣本中的假糖苷配基之hplc面積百分比對時間之圖 表。 圖2係樣本於25°C下儲存時，存在於8個特拉文欣之氫氣 酸鹽樣本中的糖苷配基之HPLC面積百分比對時間之圖表。 96746.doc

Claims (1)

1. |。〇年I月4a降(X)正本 # 093】3丨554號專利申請案 ____^文申請專利範圍替換本(100年1月） 十、申請專利範圍： 1. 一種特拉文欣（telavancin)之氫氣酸鹽，其具有3.7重量〇/〇 至3.9重量❶之氯離子含量。 2. 一種用於製備具有約2.4重量％至約4.8重量％之氣離子含 量的特拉文欣之氫氣酸鹽之方法；該方法包含以下步驟： (a) 長:供一組合物’其包含具有大於約48重量％之氯離 子έ昼的特拉文欣之氫氣酸鹽及水性溶劑系統，其中該 組合物具有小於或等於約2.〇之pH值； (b) 將遠組合物之pH值調節至自約2.5至約5.0，以形成 具有約2.4重量％至約4.8重量％之氣離子含量的特拉文欣 之氫氣酸鹽；及 分離步驟（b)中所產生之特拉文欣之氫氣酸鹽。 3. 4. 5. 6. 8. ^請求項2之方法，其中在步驟⑻中將該組合物之pH值調 節至約3.0至約5.0之範圍内。 =請求項2之方法’其中在步驟⑻中將該組合物之pH值調 節至約3.〇至約4.0之範圍。 :請求項2之方法’其中在步驟(b)中將該組合物之州值調 節至約3.5至約4.5之範圍。 & ^項2之m中在步驟（b)中將該組合物之沖值調 郎至約3.5至約4.0之範圍。 /长項2之H其中在步驟⑻中將該組合物之沖值調 即至約4.〇至約4.5之範圍。 腈及/ 2之方法’其中步驟（a)之該水性溶劑系統包含乙 1342312 9.如請求項2之方法，其中在步驟（b)中使用鹼金屬類氫氧化 物來調節pH值。 1 0.如請求項2之方法，其中在步驟（c)中藉由沈澱且過濾來分 離特拉文欣之氫氣酸鹽。

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