TWI230071B

TWI230071B - Topical skin care composition

Info

Publication number: TWI230071B
Application number: TW089117493A
Authority: TW
Inventors: Karen Elizabeth Barrett; Martin Richard Green; Preyesh Parmar; Jonathan Richard Powell; Heng-Long Hu
Original assignee: Unilever Nv
Priority date: 1999-07-30
Filing date: 2000-08-29
Publication date: 2005-04-01
Also published as: DE60022758D1; AU776606B2; ZA200200552B; ATE304841T1; WO2001008652A1; US6551602B1; DE60022758T2; CN1195492C; KR100729315B1; MXPA02001028A; ES2248109T3; CN1376050A; GB9918028D0; KR20020013978A; AU6985500A; EP1198222B1; EP1198222A1; JP2003505492A; CA2391343C; CA2391343A1

Description

1230071_ 五、發明說明（1) 發明範圍本發明係關於塗抹於人類皮膚之局部用組合物及關於其改良皮膚狀況與外觀之用途。發明背景: 皮膚會經由皮膚學上失調、環境濫用（風、空調及中央暖氣）或經由皮膚曝露於日光下可能加速的正常老化過程 (時間老化）受到傷害。最近已廣大提升對改良皮膚外觀及狀況之化粧組合物及化粧法之需求。消費者正擴大尋找抗老化化粧產品，以其治療或延緩時間老化及光照老化皮膚之視學記號，如皺紋、條紋、鬆弛、過度色素沉；殿及老斑。消費者也時常自化粧產品尋找除了抗老化之外的其它好處。敏感性皮膚之概念也已提升消費者的對改良敏感性、乾性及/或脫皮性皮膚之外觀及狀況之化粧用產品之需求。消費者也希望化粧用產品具有控油/皮脂效果。許多人關心其皮膚的色素沉澱程度。例如，有老斑或雀斑的人希望這些色素沉澱的斑點不明顯。其它人可能希望減少因曝露於曰光下造成的皮膚暗沉或淡化皮膚原色。為了迎合這些要求，已進行許多發展產品之計劃，以減少在黑細胞中的色素產生。但是，因此廣泛證實之物質傾向於不希望的副效果，例如，皮膚刺激性。結果這些物質不適合於化粧品用途，或只可以使用使其皮膚的淡化效果未如預期之濃度。可考慮使用不同的皮膚淡化物質之組合物，以減低相反的副效果，但是，使用這

第5頁 1230071_ 五、發明說明（3) 目前吾等已發現有效治療及預防正常（但化粧學上不希望）的皮膚狀況，因為可經由在皮膚上塗抹包含共軛亞油酸及/或其衍生物與酚系化合物（其條件是酚系化合物不是防曬劑）組合之化粧用組合物。吾等也已發現這些化粧組合物之用途有利於提供除了抗老化之外進一步的皮膚好處，如減緩敏感性及/或受刺激皮膚、控油/皮脂分泌及淡化皮膚。本發明概述根據本發明的第一個目的，其係提供一種局部用組合物，其包含： (a)共軛亞油酸及/或其衍生物； (b )驗系化合物或其混合物；及 (c)皮膚學上可接受之媒劑。其條件是驗系化合物不是防曬劑。根據本發明的第二個目的，其係提供一種改良至少一種選自以下的皮膚護理好處之化粧法：治療/預防皺紋、鬆弛、乾性、老化及/或受光害皮膚；有助於在皮膚中膠原質沉積作用；有助於在皮膚中的去可因（decorin)產生作用；增強組織修護；減緩受刺激、紅腫及/或敏感性皮膚；改良皮膚紋理、平滑性及/或緊實性；淡化皮膚；控油/皮脂分泌，該方法包含將根據以上說明之局部用組合物塗抹於皮膚上。本發明也包含以本發明組合物之用途，以提供至少一種選自以下的皮膚護理好處：治療/預防皺紋、鬆弛、乾性、

第7頁 1230071 五、發明說明（5) ^膚ΐΚ以Π或減低皮膚之刺激⑯、起皺及增加柔動 =據本二明的έI性、柔軟性及彈性改良其外觀及紋理。 m;:物、方法及用途也有用於治療已在起 fu iσ、受刺激狀況下之皮膚或治療年輕的皮廣以預防或減低那此 a 的不預期變化。二上述口為正吊老化/光照老化過程本發明的詳細說共軛亞油醢 _ λ亞/由^酸（以下稱為CLA)是二未飽和長鏈（C18)脂肪 -夂。 0 3亞油酸之位置及幾何異構物群，其中各種在位置(6 ’ 8)、（7 ’ 9)、（ 8，1 0)、（ 9，11)、（ 1 〇，1 2)或 Π ’ ί 3)上之順式及反式雙鍵組態是有可能的。因此，有 24種不同的CLA異構物存在。本發明也包含自由酸衍生物，其因此包含共軛亞油酸部份。衍生物以包括那些衍生自酸的羧基取代作用者，如酯 (例如一酸甘/由S旨、單酸甘油g旨、二酸甘油酷）、鹽（例如’驗金屬及鹼土金屬鹽、銨鹽）及/或那些衍生自C18碳鏈取代作用者，如α —羥基及/或万—羥基衍生物。在三酸甘油酯衍生物實例中，包含在甘油主鏈上的C L A 取代物的所有位置異構物。例如，在甘油主鏈上的三個可酉旨化位置中，可以CLA及在位置3的另一個類脂酯化位置1 及2，或可替換以在位置1及3 iCLA及在位置2之類脂酯化甘油主鏈。供本發明使用最佳的C L A異構物是順式9反式1 1 ( c 9 111)

第9頁 1230071_ 五、發明說明（6) 或反式1 0順式1 2 (11 0 c 1 2 )異構物。在組合物中有至少1重量％之總CLA(及/或CLA部份）是c9，tll及/或tlO，cl2異構物形狀較佳。在組合物中有至少20重量％之總CLA及/或CLA 部份是c9，： til異構物及/或tlO，C12異構物形狀更佳，並以至少4 0 %最佳。在特別佳的具體實施例中，共軛亞油酸富集在c 9 11 1或11 0 c 1 2異構物中。以”富集”代表在組合物中有至少50重量％之總CLA(及/或CLA)部份是順式9，反式1 1或反式1 0，順式1 2異構物形狀在組合物中有至少7 〇重量％之總CLA及/或CLA部份是c9，tll異構物或tlO，cl2異構物形狀較佳，以至少8 0 %更佳及以至少9 〇 %最佳。根據本發明的CLA及/或其含CLA部份之衍生物成為商業上有效的油’其是在共輛亞油酸三酸甘油酯中含量豐富的油’如成為脫水篦麻油之桐油（U n i c h e m a )。一種混合異構物厓σ口係取’ $且cg til富集之cla係取自Matreya 公司。可選擇根據在wo 97/丨832 0中揭示的方法製備根據本發明較佳的具體實施例之CLA，將其内容併入本文以供參考。在以下的實施例1及2中揭示較佳的製備方法。缺在本申請書中無論何處使用的共軛亞麻油或C L A術語當然也包括其含CLA部份之衍生物。CLA部份係指CLA衍生物之CLA脂肪醯基部份（等）。根據本發明使用的CLA以有效量存在於局部用組合物中Θ活性總量正常係以介於〇 · 〇〇〇 1 %至5 〇重量％之間之組合物量存在。以從〇· 01%至10%的量更佳及以從〇· 1%至5%的量最佳’以最低的成本達到最大的好處。

發明說明（8) 薩姆茶本發明特別排除熟知當成防曬劑使用的那些酚系化合物’如對胺基苯曱酸及二苯曱酮。在本發明Μ合物中使用從約〇 · 〇 1 %至約1 〇%之酚系化合物或其混合物量，以從約丨〇 %至約1 %的最較佳，以從約〇 .丄％至約5%的量最佳。 · ° 皮膚曼上可接受之嫫劑 6根據本發明使用的組合物也包含皮膚學上/化粧用可接叉之媒劑，其具有當成活性物之稀釋劑、作用、。媒劑可以包含常在皮錢理產品巾使㈣水、液體或固體軟化劑、矽酮油、乳化劑、溶劑、濕潤劑、增稠劑、粉末、噴射劑及類似物。 ·”' / 媒劑將經常構成從5%至99· 9重量％之組合物（以從至。軏佳）並1以在沒有其它化粧品佐劑的存在下構成袓合物的其餘部份。、、、墓要之皮膚受益材料及化粧品佐齊丨除了活性物之外，也可以包括其它特殊的皮膚受益活性物，如防曬劑、皮膚淡化劑及皮膚助曬劑。媒劑也可以進 :步包括如抗氧化劑、香料、遮光劑、防腐劑、著色及緩衝液之類的佐劑。產^製備作用、形狀、用途及包！為了製備在本發明的方法中使用的局部組合物，可以使用製備皮膚護理產品的一般方式。通常以熟知的方性組份併入皮膚學上/化粧用可接受之载體中。可適合先

第12頁 1230071 五、發明說明（9) 將活性組份溶解或分散在欲併入組合溶劑或液體中。較佳的組合物是水包包油包水型乳液。組合物可：以是熟知的皮膚護理產品粧水、膠囊或類似物。組合物也可以品，例如，泡澡或淋浴凝膠，其可能統，以促進活性物在沖洗期間黏附於置型產品最佳，將欲塗抹於皮膚之產後，沒有刻意沖洗的步驟。可以任何適合的方式包裝產品，如類似方式。也假設可將本發明的組合同時或連續塗抹於皮膚之單獨的組合油酸及另一個包括紛系化合物。也可將根據本發明的的組合物調配形狀，如藥錠、膠囊或類似形狀。可以每日一或數次在需要治療的皮法。在3至6個月之後，經常變成可看其根據皮膚的狀況、在本發明方法中度、塗抹時使用的組合物量及頻率而合物（例如，例0 · 1至5毫升）自適當的皮膚上，並利用手或指頭或適當的設擦至皮膚中。接著是可視需要之沖洗將組合物調配成留置型或沖洗型產品為了可以更輕易瞭解本發明，故提物中的部份水或其它油型或油包水型或水之形狀，如乳膏或化是又稱為沖洗型產包括活性物之輸送系皮膚上。產品是以留品在塗抹於皮膚之罐、瓶、管、圓球或物包裝成一組兩個欲物，一個包括共輛亞成適合於口服消化的膚上進行本發明的方出皮膚外觀的改良，使用的活性组份濃定。通常將少量的組容器或塗抹器塗抹在計將其擴散及/或磨步驟，其係根據是否而定。供以下只做為例證方

HII

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五、發明說明（10) 式之實例。實施例實施例1 本實施例例證含有c9 til異構物及tl0 cl2異構物之丘輊亞油酸合成作用。 /' 混合的CL A異構物之生轰作用

將11^1^試劑”（^)氫氧化鈉（0.6公斤）以混合溶解在6 公斤製藥學級丙二醇中，並加熱至8 0-85 °C。將樣品冷卻，並加入2公斤紅花油。利用標準的指示刻度設備，將混合物在1 70 °C下以快速授拌回流3小時。將反應混合物:冷卻至約9 5 °C，將攪拌減至中速，並利用溶解在軟化水（8公升）中的1· 28 0公升之35· 5%氫氣酸中和混合物，維持溫度在約9 0 °C。允許反應混合物沉降及洩掉水相。將油相以 2 X1公升之5 % A R鹽溶液及以2 X1公升軟化水在g q ^下清洗油相，丢棄任何泡狀物質。在將富集油之CLA在約5 0 °C下排出之前，先將其在100 °C的真空下乾燥，並經由含 Whatman濾、紙及C鹽-hyflo-渡器輔助之薄膜層之Buchner系統過濾。將混合的異構物C L A油貯存在〜2 5 °C之氮氣下，直到需要時。將以該方法生產之油組合物陳列在以下的表1 中：

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I合的CLA脂肪酸之組合物僅量

ϋ脂肪酸脂類之相對百分比 34.1(47%之總 CLA) c9，ell & clO，cl2 t9，tllt& tlO，12t '34.1，(47%之總(：1^) 2.3

其它CLA

總CLA 16:0 16:1 18:0 18:1 18:2 憮-CLA) 其它的脂肪酸 0.7 1.4 72.6 7.0 0.8 2.5 13.3 3,3 0.5 2. cl til異構物富隹之ru (I)月桂酯之製備作用：將2X莫耳當量月桂醇（i-十二烷醇；98%取自Aidrich Chemicals)與5. 96公斤軟化水一起加入以紅花油（2. 〇公斤）製備之C L A中。將溫度调整至2 5。(2，加入與少量水預合之1% (重量/重量）白地霉（取自日本Amano Pharmaceuticals)，並劇烈混合。將反應停止4 4小時。將容器加熱至8 0 - 9 0 °C，將水相排出及以軟化水清洗油，並在1 0 0 °C的真空下乾燥3 0分鐘。將油冷卻至5 0 °C，並經由含Whatman渡紙及C鹽-hyflo -遽器輔助之薄膜層之Buchner

第15頁 1230071 五、發明說明（12) 系統過濾 (I1)富集之c9，tl 1 CLA酯之分離作用· :货13。。(：下以每分鐘25_35毫升之分子蒸館作用取出殘醇。以在158 °C下以每分鐘35毫升流速之基發 ϋ Ϊ殘餘物粗略地分離成月桂醇（富集之c9，tn CLA) — 酸（田集之tlO ’cl2 CLA)。進一步以在i7i°c下以 J分，30-40毫升流速之蒸餾作用減低在月桂酯殘餘物中任f殘餘的自由酸。在90。〇下利用33()毫升之翗ar氫氧化 2中和2790公斤月桂酯殘餘物，接著以在軟化熱水中的油 /月洗3 -人、進一步以〇. 1M鹼清洗及以熱水清洗兩次的方式將油與水相分離。根據以上的方式乾燥富集之月桂酯油樣品。 (I I I )富集之c9，11 1 CL Α月桂酯之皂化作用：利用AR氫氧化鈉/96%食品級乙醇將c9, tl 1富集之CLA之月桂醋皂化及利用A R濃縮之氫氣酸將其再酸化。將含富集之CLA自由脂肪酸之反應混合物在丨〇〇。〇下乾燥及在約5 〇。〇之前過濾。在132 °C下以每分鐘2 5-3 0毫升將月桂酯蒸發。為了取出任何殘餘的月桂醇，可利用SP392 Mucor miehei 月曰酉母（5% ’ lux 0110批組，取自Novo Nordisk)將自由醇醋化成在反應混合物中存在的脂肪酸。以在1 5 5 °C的真空下 0 以每分鐘1 5 - 2 0毫升之分子焉餾作用將含脂肪酸之富集之 c9 11 1 CLA與月桂酯分離。將由以上方法生產之富集之 c9 11 1 CLA組合物陳列在以下的表2中：

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典型製備之富集之c9，til CLA脂肪酸之組合物(重量％) 總脂肪酸脂類之相對百分比 c9 ， til 66.1(93%之總(：1>八） tlO ， cl2 : 4.1 c9，ell & clO，cl2 0.3 t9，tllt&tlO，12t 0.4 其它CLA 0.2 總CLA 71.1 16:0 1.6 16:1 - 18:0 0.4 18:1 22.3 18:2(無-CLA) 4.5 其它的脂肪酸 0.1

(ii)富集之tiO，cl2 CLA之分離作用：以在130 c下以每分鐘25-35毫升之分子蒸餾作用取出殘餘之月桂醇。以在1 5 8 °C下以每分鐘2 5 - 3 5毫升流速之蒸發作用將殘餘物粗略地分離成月桂醇（富集之c9，tll CLA) 及自由酸（富集之tl〇，cl2 CLA)。 1__集，cl2 CLA之隔離作用再在160-165 °C及以每分鐘20-30毫升下蒸餾來自步驟 j (II)之CLA自由酸，以減低酯含量。進一步在1以。c及每分鐘2 5 - 3 0毫升流速下之蒸餾作用減低殘餘的月桂醇。為了取出任何殘餘的月桂醇，可利用SP3 9 2 Mucor miehei脂酶 (5%，11^0110批組，取自^1〇\^〇^〇『(1131〇將自由醇酯化成

第17頁 1230071 五、發明說明（14) 在反應混合物中存在的脂肪酸。以在1 5 5 °C的真空下以每分鐘1 5 - 2 0毫升之分子蒸餾作用將含脂肪酸之富集之11 0， cl 2 CLA與月桂酯分離。將以該方法產生之富集之11〇， c 1 2 CL A組合物陳列在以下的表3中：表3 典型製備之富集之tio，C12CLA脂肪酸之組合物(重量％) 總脂肪酸脂類之相對百分[：卜， c9 ， til 8.3 tlO ， cl2 53.9(80.5%之總 CLA) c9，ell &clO，cl2 2.9 t9，tllt&t 10，12t 1.1 其它CLA 0.7 總CLA 66.9 16:0 13.6 16:1 - 18:0 4.6 18:1 10.3 18:2(無-CLA) 3.1 其它的脂肪酸 1.5 實施例2 - 11 0，c 1 2 CL A三酸甘油酯之製——備j乍-用將根據實施例1製備之富集之t10，c12 CLAd 0公克）與 1· 01 公克（10. 1〇/〇)甘油（取自 Ellis & Everards ipricerine 9 0 8 3甘油CP)混合及加入〇. 5公克（約5%) SP 3 92 Mu cor miehei 非特殊脂酶（Mucor Meihei 取自 Novo Nordisk 批組 Lux 0 1 1 〇 )。在6 0 °C真空下的旋轉蒸發器中以少量氮氣流

1230071 ~—_____________ 五、發明說明（19) -— 低真皮成纖維細胞之發炎反應。、以發炎刺激物ρ Μ A (大二萜醛肉豆蔻酸酯醋酸酯）誘發人類皮膚:成纖維細胞產生之細胞内黏著分子（丨cAM)及 EG2。PMA代表誘發在細胞中的氧化應力及發炎反應之外應力源。利用該模式設計在活體内的發炎。將路徑2 (P 2 )上的一級人類包皮成纖維細胞以丨〇〇〇〇個細胞/平方公分接種成96-井狀平盤，並在5%二氧化碳之大氣中以補充10%胎牛血清之Dulbeccos Modified Eagles介質 (DMEM )中維持24小時。將以下表7中陳列的試驗物質加入在二倍於最終濃度（< 1 % )之二曱基亞楓及乙醇中新鮮的細胞介質中（DMEM，補充1 〇%脂牛血清），並進一步培育24小 ^。將10毫微克分子量大g二萜醛肉豆蔻酸酯醋酸酯 (PMA) (Sigma)加入介質中，並將細胞再培育24小時。只包括媒劑之控制物不包括任何試驗化合物或任何pMA。或立即根據以下的說明分析該成纖維細胞/介質，或急速冷卻在液態氮中及貯存在-7 0。(：下，供未來分析。然後計算細胞及接著將來自斑點分析之數據標準化成細胞數。前列腺素E2CPGE。）分析：在溫和地搖動過培養盤之後，以體積5 〇微升之培養介質0 進行PGA分析。以Biotrak PGE2免疫分析組（英國的 Amersham)測定在介質中的PGE2值。分析以在樣品中未標識的PGE2與有限量的固定PGE2特殊抗體之定量辣根過氧物酶標識之PGE2之間的競爭為主。根據在同時獲得的標準曲

1230071 五、發明說明（20) 線測定未標識樣品PGE2之濃度。 ICAM-1 分析：將介質丟棄，並以D u 1 b e c c ο P B S清洗細胞。將1 5 0微升 0.1% Triton X-lOO(Sigma)以3分鐘加入清洗細胞中，以萃取細胞膜之ICAM。將萃取物轉移至Eppendoff離心管及在1 0 0公克下離心2分鐘，以除去細胞碎屑。利用體積1 0 0 微升之上層清液進行ICAM分析。以商業上可取得的免疫酵素分析組（R&D系統）評定可溶性I CAM-1。根據平行進行的標準曲線測定在樣品中的ICAM-1濃度。將自PGE2與ICAM分析獲得的結果總結在以下的表6中。表6 處理成纖維細胞pge2 値之抑制％成纖維細胞ICAM 生成物之抑制％控制物 100 100 以PMA處理 0 0 PMA+0.1微克分子量CLA 16.9 PMA+5微克分子量EGCG 35.6 PMA+0.1微克分子量CLA+5微克分子量EGCG 59.4 PMA+1微克分子量CLA 27.7 PMA+5微克分子量EGCG 4.5 PMA+1微克分子量CLA+5微克分子量EGCG 93.1 PMA+5微克分子量CLA 14.5 PMA+5微克分子量染料木因 52 PMA+5微克分子量CLA+5微克分子量染料木因 85.7 根據以前列腺素E 2 (PGE2)生成物之測量，以上的結果展 IHi! 第24頁 1230071 五、發明說明（21) 、示具有發炎刺激物，如Ρ Μ A (大$二蔽搭肉豆蔻酸酯醋酸酯）之挑戰細胞會造成增加發炎反應。根據以前列腺素 E2(PGE2)生成物之測量，共軛亞油酸與酚系化合物之特殊組合會以增效降低發炎反應。結果因此證明在本發明範圍内之活性物的特殊組合會驚詞1地展現出增效的抗發炎活性。以上的結果也證明具有Ρ Μ A之挑戰細胞會造成增加I C A Μ 生成物。以共軛亞油酸與酚系化合物之組合處理細胞或以增效方式降低細胞内黏著分子（I CAM )之生成，其是另一個發炎記號。這些結果因此進一步證明在本發明範圍内之活 B 性物的特殊組合會驚訝地展現出增效的抗發炎活性。實施例7 以下的配方說明適合於本發明方法及用途之水包油型乳膏。表示的百分比是以組合物重量計。

第25頁 1230071 五、發明說明（22) 重量％重量％重量％礦物油 4 4 4 共軛亞油酸(三酸甘油酯)取自 Loder Croklaan 1.15 2 3 綠茶多酚 0 2 0 EFCG 0 0 1 櫟精 0.5 0 0 Brij 56* 4 4 4 Alfol 16RD* 4 4 4 三乙醇胺 0.75 0.75 0.75 丁烷-1，3-二醇 3 3 3 漢生膠 0.3 0.3 0.3 香科 qs qs qs 丁基化羥基甲苯 0.01 0.01 0.01 水加至100 加至100 加至1〇〇 *Brij56 是鯨蠟醇 POE(IO) *Alfol 16RD是鯨蠟醇實施例8 以下的配方說明根據本發明的乳液膏。第26頁 1230071 五、發明說明（24) 治療，在將其塗抹於已經由老化或光照老化所惡化之正常皮膚時，或在將其塗抹在有助於預防或延緩這些惡化改變之年輕的皮膚時，以改良有皺紋、老化、受光害及/或刺激性皮膚之:外觀。組合物也有效於減緩刺激性皮膚、調理乾燥皮膚、淡化皮膚色彩及減低油及皮脂分泌。可以熟知的方式處理組合物。 1

第28頁年月 $ "3修正曰修·充— 230071 申請曰期：1 案號：89117493 類別：講丨1丨“ aV 4： (以上各欄由本局填註）厶口今" 發明專利說明書

中文局部用皮膚調理組合物發明名稱英文 TOPICAL SKIN CARE COMPOSITION 姓名 (中文） 1. 卡雷伊利莎白巴雷特 2. 馬丁理察葛雷恩 3. 普雷夏波瑪 4. 強納生理察包爾發明人姓名 (英文） 1. KAREN ELIZABETH BARRETT 2. MARTIN RICHARD GREEN 3. PREYESH PARMAR 4. JONATHAN RICHARD POWELL 國籍 1.英國2.英國3.英國4.英國住、居所 1. 英國貝夫德區夏恩布魯克市卡瓦斯屋卡瓦斯聯合利華研究中心 2. 英國貝夫德區夏恩布魯克市卡瓦斯屋卡瓦斯聯合利華研究中心 3. 英國貝夫德區夏恩布魯克市卡瓦斯屋卡瓦斯聯合利華研究中心 4. 英國貝夫德區夏恩布魯克市卡瓦斯屋卡瓦斯聯合利華研究中心姓名 (名稱） (中文） 1.荷蘭商聯合利華公司姓名 (名稱） (英文） 1. UNILEVER N. V. 國籍 1.荷蘭申請人住、居所 (事務所) 1.荷蘭鹿特丹市威納455號代表人姓名 (中文） 1.健.保拉斯.凡.吉特代表人姓名 (英文） 1.JAN PAULUS VAN GENT

O:\65\65421-930903.ptc 第1頁 1230071 案號 89117493 修正修正五、發明說明（2) 一種皮膚組合物有實質上的風險。因此，特別有改良化粧品皮膚淡化產品有效性之要求，使得其不會刺激皮膚。曰本專利申請案第0 7 2 7 7 9 3 9號說明改良皮膚老化及皮膚發炎之皮膚護理組合物，其包括（A)Flor de Manita及（B) 至少一個選自除氧劑、抗氧化劑、細胞活化劑、抗發炎劑、酪氨酸酶抑制劑及保濕劑之活性物。其中許多就組份 B說明的成份選擇物是懈皮素、櫟醇素、兒茶素、沒食子酸、T -亞麻油及二十碳烯二酸。日本專利申請案第〇 5 2 7 1 0 4 6號說明包括具有1 8至2 2個碳原子及二或數個不飽和鍵之不飽和脂肪酸之皮膚淡化組合物，如亞油酸及花生四稀酸與多盼。 W〇9 9 / 2 6 5 8 8說明含有共軛亞油酸及可視需要包括熟知的防曬劑（如二苯曱酮）之抗老化皮膚護理配方。以上討論的技藝未揭示共軛亞油酸與酚系化合物（其不是防曬劑）特殊的增效組合，也未揭示以這種特殊的組合治療鼓紋、敏感性皮膚、乾性皮膚、控油/皮脂分泌或淡化皮膚。本發明的範圍特別排除當成防曬劑作用之酚系化合物。本文將防曬劑定義成一種提供防曬指數（SPF )至少2之成份，其係利用在不需醫師處方之人類用途之食品與藥物管理專題論文防曬藥物產品中說明的標準化型式在人類皮膚上之化粧用產品配方測得的指數；最終的專題論文發表在 1999 年5 月 21 日之 Federal Register 第 64 冊第 98 號第 27666 至2 7 6 9 1頁。

O:\65\65421-930903.ptc 第6頁 1230071 修正修正案號 89117493 五、發明說明（4) 老化及/或受光害皮膚；有助於在皮膚中膠原蛋白質沉積作用；有助於在皮膚中的去可因產生作用；增強組織修護；減緩受刺激、紅腫及/或敏感性皮膚；改良皮膚紋理、平滑性及/或緊實性；淡化皮膚及控油/皮脂分泌。根據本發明還有的進一步目的，其係提供在化粧品局部用組合物中使用共軛亞油酸及/或其衍生物與酚系化合物或其混合物（其條件是酚系化合物不是防曬劑）之組合，以提供至少一種選自以下的皮膚護理好處：治療/預防皺紋、鬆弛、老化及/或受光害皮膚；有助於在皮膚中膠原蛋白質沉積作用；有助於在皮膚中的去可因產生作用；增強組織修護；減緩刺激性、紅腫及/或敏感性皮膚；改良皮膚紋理、平滑性及/或緊實性；淡化皮膚及控油/皮脂分泌。本發明的組合物、方法及用途因此提供起因於改良彈性及減低或延緩皺紋與老化皮膚的外觀及改良皮膚色彩促進平滑及柔軟的皮膚之抗老化好處。本發明會達到一般性的外觀、紋理及狀況的改良，特別是關於皮膚的光彩、透明度及全面性年輕的外觀。本發明的組合物、方法及用途也具有減缓及鎮定敏感性及/或受刺激皮膚、淡化皮膚及控油/皮脂分泌的好處。因此，本發明有利於提供寬廣的皮膚護理好處。根據本文使用的治療術語包括在其範圍内減低、延缓及 /或預防以上正常（但非化粧上所希望）的皮膚狀況（如起皺、老化、及/或受光害及/或受刺激皮膚）、全面性增強

O:\65\65421-930903.ptc 第8頁 1230071 案號 89117493 丨充修正五、發明說明（7) 盼系化合物將酚系化合物根據其基本的化結結構劃分成至少1 0種不同的分類。化合物包括簡單酴（c6)、苯醌（C6)、酴酸（C6-C i)、乙醯苯（c6-c2)、苯基醋酸（c6-c2)、羥基肉桂酸（c6-c3 )、苯基丙烯酸（c6-c3)、香豆素，異香豆素（c6-c3)、色酮 (c6-c3)、萘醌（C6-C4) 、芪（c6-c2-c6)、黃酮類化合物（c6-c3-c6)、木聚糖、新木聚糖（c6-c3)2及木質 (C 6 - C 3 ) n。以黃酮類化合物術語代表由兩個以三個碳單位（C6-C3C6) 接合之芳族環組成非常大的基。黃酮類族群包括異黃酮類、單體黃酮醇、二氫黃酮類、兒茶素、表兒茶素（例如，月桂S同）、花白素、花黃素、花色素、黃酮、二氫黃酮、查耳酮、二氫查耳酮、異黃酮、新黃酮、橙酮、黃3 醇及恩索賽寧（anthrocyanins)。異黃酮類也包括異黃酮、紫檀素、異二氫黃酮、魚藤酮類、異黃烷及異黃醇。供本發明組合物使用較佳的酚系化合物是黃酮類，包括如掛桔素之類的二氫黃酮，如槲皮素、兒茶素（例如， epigallocatechingallate， EGCG)之類的黃酮醇、如大豆黃素、染料木因、賴西錠（1 y c e t i η )之類的異黃酮類及也包括如沒食子酸之類的酚酸及綠茶多酚。懈皮素、柑桔素、大豆黃素、染料木因、EGCG及綠茶多驗可取自S i g m a。含有盼系化合物之植物萃取液也適用於本發明。例如，蘆丁、月見草、含大豆黃素及染料木因之大豆及各種綠茶，如含EGCG與綠茶多酚之山茶sinensis及阿

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修正 1230071 ~~_ 案號 89117493 五、發明說明（15) 攪拌混合物質。在9 6小時之後，以過濾反應混合物的方式終止反應，將 ^應混合物經由在Buchner濾器上的c鹽超-cel過濾輔助薄膜層過濾，以收集C L A二酸甘油酯油相，將其組合物陳列在以下的表4中：

過1 I在人類真皮成纖維ψ ψ 成之步，驟 """""签膠原蛋白_ I與去可因金真皮成纖維細胞調理介質之穿』將路徑2 ( P 2 )上的一級人類勺肴作用胞/平方公分接種成1 2 -井狀伞匕皮成纖維細胞以1 0 0 0 0個細十盤，並在5%二氧化碳及4%氧

O:\65\6542.1-930903.ptc 第19胃

1230071 _ 案號 89117493 五、發明說明（16) 的大氣中以補充10%胎牛血清之^^丨匕以⑶^ Modified E a g 1 e s介質（D Μ EM )中維持2 4小時。在該時間之後，將細胞以無DMEM之血清清洗及接著在#DMEM的新鮮血清中再培育 60小時。接著再以無DMEM之血清清洗成纖維細胞單層。將式a式劑及媒劑控制物以3倍加入〇 · 4毫升/井之無J) μ e μ之新鮮血清之最終體積中，並再培育24小時。或立即分析該成纖維細胞調理介質，或急速冷卻在液態氮中及貯存在 - 7 0 °C下’供未來分析。然後計算細胞及接著將來自斑點分析之數據標準化成細胞數。實施例4 1真皮成纖維細胞調理介t中的溶膠原蛋白—丨及去可因蛋白質之斑點分析以2 0毫克分子量二硫蘇糖醇（2 〇〇毫克分子量原料溶液以 1 : 1 0稀釋）及0 · 1 %十二烷基硫酸鈉（丨〇 %原料溶液以丨：丨〇〇稀釋）補充以媒劑（當成控制物）或試驗試劑處理之真皮成纖維細胞之調理介質樣品，充分混合及接著在75〇c下培育2 分鐘。在1 7 5平方公分的燒瓶中以來自丨〇〇〇〇個細胞/平方公分下接種成纖維細胞之純成纖維細胞調理介質的一系列稀釋’以產生供分析用標準品，並如上述維持在無⑽£ μ之 jk清中。接著利用取自Bio-Rad之96 -井Bio- Dot裝置，根據製造者指南的說明將分析樣品以3倍塗抹在欲濕的iramobi ι〇η — ρ 轉移膜薄片上。每一個井塗抹約2 〇〇微升介質。允許介質經由膜在重力下過濾（3 〇分鐘），然後以p B S ( 2 0 〇微升）清洗

Μ

O:\65\65421-930903.ptc 第20頁气气修正一^·…月補充 1230071 案號 89117493 修正五、發明說明（17) 膜兩次。允許這些P B S洗液經由膜在重力下（2 X 1 5分鐘）過渡。接著將B 1 〇 - D 〇 t裝置附著在真空岐管上，並在抽氣下進行第三次及最後的P B S清洗。將裝置拆解，取出膜，並在放入4 °C下經隔夜的封阻緩衝液之前，先將其根據需要迅速切割。將供去可因分析所製備之膜以在PB S中的3 % (重量/體積） BSA/0.1%(體積/體積）Tween20封阻，將那些供溶膠原蛋白 -I分析所製備之膜以在PBS中的5% (重量/體積）無脂肪之乾燥奶粉/0. 05%(體積/體積）Twee n20封阻。隔天將膜在室溫下插入以一級抗體對或人類溶膠原蛋白—I ( M A B 1 9 1 2 ;老鼠單株；加州Temecula之Chemic on Int.公司），或人類去可因（兔子多株；Biogens is)之1 : 1 0 0 0 0稀釋液中2小時。接著將膜以TBS/0· 05% Tween20(3x5分鐘）清洗，並接著在室溫下根據需要以1251_共軛抗鼠或抗兔子F(ab’）2片段 (A m e r s h a m )之1 : 1 0 0 0稀釋液培育1小時。然後在允許 I m m 〇 b i 1 ο η細條在室溫的空氣中乾燥之前，再將其以 TBS/Tween20(3x5分鐘）清洗。將乾燥膜包裹在玻璃紙中及曝露在分子動態（Molecular Dynamics)貯存黃填篩中 1 6 - 1 8小時。在該時間結束時，利用1 m a g e Q u a n tTM軟體之黃石粦顯影器（Molecular Dynamics Phosphorimager SF)掃描曝露_。利用I m a g e Q u a n tTM之定量工具，以電腦輔助影像分析評定點強度，將其標準化成細胞數，並以相對於以 1 0 0個任意單位之經媒劑處理之控制物值測定各種試驗試劑對去可因及溶膠原蛋白-I合成作用之效應。

O:\65\65421-930903.ptc 第21頁 1230071 _案號89117493__年月補龜| 修正_ 五、發明說明（18) 實施例5 試驗以下的表5指出共輛亞油酸與酴系化合物表沒食子兒茶素酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG)之組合對人類真皮成纖維細胞中的溶膠原蛋白-I及/或去可因合成及塗抹之活性物量之增效效應。為了使結果標準化，以相對於以1 0 0個任意單位之經媒劑處理之控制物值測定試驗物質之效應。在試驗中使用的試劑濃度對細胞生存能力沒有任何影響。表5 處理溶膠原蛋白-I Decorin 控制物(媒劑） 100 100 0.1微克分子量CLA 68.29% 0.5微克/毫升EGCG 99.6% 0.1微克分子量CLA，0.5微克/毫升EGCG 157.11% 與控制物比較，在表5中的結果顯示以共輥亞油酸與紛系化合物之組合會以增效向上調節在人類真皮成纖維細胞中的溶膠原蛋白-I及/或去可因之合成作用。在皮膚中的去可因值與皮膚的改良狀態及外觀有關連。增加在皮膚中的去可因值具有控制及校正在皮膚中的膠原蛋白沉積作用的重要性，其與許多皮膚受益有關連，如皺紋消除及受光害皮膚之真皮修護。實施例6 本實施例例證共軛亞油酸與酚系化合物之特殊組合在減

O:\65\65421-930903.ptc 第22頁 1230071 案號 89117493 9¾ 9, 03修正年月修正五、發明說明（23) 化學全名或CTFA名稱根據實施例1 Croklaan製備之CLA三酸甘油酯，以CLA總部份之重量計93%之c9，til異構物商標重量％ 2.0 重量％ 3 重量％ 1.5 掊酸 1 0 0 染料木因 0 2 大豆黃素 0 0 1.5 二鈉 EDTA Sequesterene Na2 0.05 0.05 0.05 鎂鋁矽酸鹽 Veegum Ultra 0.6 0.6 0,6 對羥基苯曱酸曱酯 Methyl Paraben 0.15 0.15 0.15 二甲基矽油 DC Antifoam Emulsion 0.01 0.01 0.01 丁二醇1，3 Butylene Glycol 1，3 3.0 3.0 3.0 羥乙基纖維素 Natrosol 250 HHR 0.5 0.5 0.5 甘油，USP Glycerine USP 2.0 2.0 2.0 漢生膠 Keltrol 1000 0.2 0.2 0.2 三乙醇胺 Triethanolamine(99%) 1.2 1.2 1.2 硬脂酸 Pristerene 4911 3.0 3.0 3.0 苯甲酸丙酯NF Propylparaben NF 0.1 0.1 0.1 甘油基氫硬脂酸酯 Naturechem GMHS 1.5 1.5 1.5 硬脂醇 Lanette 18 DEO 1.5 1.5 1.5 異硬脂基棕櫚酸酯 Protachem ISP 6.0 6.0 6.0 C12-C15醇辛酸酯 Hetester FAO 3.0 3.0 3.0 二曱基聚矽氧烷 Silicone Fluid 200 (50cts) 1.0 1.0 1.0 膽固醇NF Cholesterol NF 0.5 0.5 0.5 花椒聚糖硬脂酸酯 Sorbitan Stearate 1.0 1.0 1.0 丁基化羥基甲苯 Embanox BHT 0.05 0.05 0.05 生育基醋酸酯 Vitamin E Acetate 0.1 0.1 0.1 PEG-100硬脂酸酯 Myrj 59 2.0 2.0 2.0 硬脂醯基乳醯酸鈉 Pationic SSL 0.5 0.5 0.5 羥基辛酸 Hydroxycaprylic Acid 0.1 0.1 0.1 沒藥醇 Alpha-bisabolol 0.2 0.2 0.2 去離子水加至100 加至100 加至100 以上實施例7及8的兩個局部用組合物提供有效的化粧用

1 O:\65\65421-930903.ptc 第27頁 1230071 案號 89117493 年丨> 月G曰 )細。

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Claims

1230071 案號 89Π7493 年修正月補充修正六、申請專利範圍 1 . 一種局部用皮膚調理組合物，其實質上由下列組成： (a )共耗亞油酸（C L V )化合物，其中至少5 0重量％的 C L V化合物是以順式9反式1 1異構物、反式1 0順式1 2異構物或其組合存在； (b) 酚系化合物，其係選自由表沒食子兒茶素沒食子酸酯、染料木因、綠茶萃取物及大豆萃取物所組成之群；及 (c) 皮膚學上可接受之媒劑。 2 . —種局部用皮膚調理組合物，其實質上由下列組成： (a) 該組合物的約0 · 0 0 0 1至約5 0重量％之共輛亞油酸化合物；其中該共軛亞油酸化合物係經富集，其中至少9 0 重量％的共軛亞油酸化合物是以順式9反式1 1異構物、反式1 0順式1 2異構物或其組合存在； (b) 該組合物的約0 · 0 1至約1 0重量％之酚系化合物，其係選自由表沒食子兒茶素沒食子酸酯及染料木因所組成之群；及 (c) 皮膚學上可接受之媒劑。 3 .根據申請專利範圍第1項之局部用皮膚調理組合物，其中共輛亞油酸化合物是以該組合物的0 . 0 0 0 1至5 0重量％之等級存在。

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