TWI230069B - Process to make a sustained release formulation - Google Patents

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1230069 案號 891158fi7 A_η 修正 五、發明說明（1) 包 本發明是有關於一種持續釋放複合物之製造方法 括具有下式之化合物··

H〇(H2C)2——N 广\ Μ -(C hy 一 C 0 D- P he- c [G y &-T yr- D-T rp- Lys-Ab u- C ysf Th r- N H2 以及一包括聚-（1)—乳酸—甘醇酸—酒石酸（p(1)LGT)之共 聚物，其中該化合物的胺基是離子性地結合至p (〗）LGT的 羧基。 許多的藥物傳遞系統已被發展、測試以及利用，以作 為藥學組成物之活體内的控制釋放。例如，聚酯類，例如 聚（DL-乳酸）、聚（甘醇酸）、聚（ε -己内酯）以及其他的各 種共聚物，已用於釋放生物性的活性分子（例如，黃體鲷 );這些活性分子已以微膠囊、薄膜或棒狀物的形式存 —(Μ. Chasin及R. Langer編輯，生物可分解的聚合物 樂物傳遞系統’ Dekker，New York，1 990 )。當藉由，馮 t敗ί下或肌肉内植入聚合物/治療作用劑組合物時，此例 :口，作用劑是在―特^的㈣内被釋 匕 相容性之生物可分解的聚合物系 生物 ::療可從聚合物基質中擴散。在;的 後者降解的原因仍不清楚，但 難然 :可藉由酿類連結對於聚合物成份降 水解而調控。 非酵素的自身催化 數篇歐洲專利公開文件 s 質的設計及其在調控速率上=專利，已公開聚合物基

手上的角色，以及活體内治療作J 1230069

劑的釋放範圍。 曰 例如’ D e 1u c a (歐洲專利公開文件〇 4 6 7 3 8 9 A 2 )說 明一種在厭水性生物可分解的聚合物及一蛋白質或多胜肽 的物理性父互作用。所形成的組成物是治療作用劑及 厭水性聚合物的混合物，在引導進入患者之後，其從基質 中持續擴散的釋放。 /11忧1^1^〇11(美國專利第4,767,628號）藉由在聚合 勿=置中的固定分散，而控制治療作用劑的釋放。它揭示 了這個配方藉由兩個相的重疊，而提供控制的連續性釋 ，：f先，藥物從配方的表面之擴散依賴性的過濾；其 人猎由t合物的分解而誘導的水溶液通道之釋放。

PcT公開文件w0 9 3 / 24 1 5 0揭示一種持續性的釋放配 方，包括一種具有一鹼性基團及一羧基端聚酯的胜肽。 美國專利弟5，6 1 2，0 5 2號揭示陽離子交換的微顆粒， 典型地是由帶有羧基的聚酯鏈所製造，其上固定有鹼性的 生物活性作用劑，以在可吸收之形成凝膠的液體聚酯内， 提供一控制釋放系統。 下式化合物 HO(H2C)2 N N-(Chy-CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys}-Thr-NH2 疋在美國專利第5，5 5 2，5 2 0號中所揭示及主張的申請專利 範圍。 申請人的PCT公開文件W0 97 /40 085揭示生物可分解的 聚酯，包括乳酸單元、甘醇酸單元以及經基聚叛酸單元，

6060-3374-PF2(N).ptc 第 5 頁 1230069 Γ_-年月 a _ 五、發明說明（3) 例如’酒石酸或棕櫚酸（pam〇ic acid )，以及製造該聚 醋的方法。更特別地，它揭示聚—内交酯（lactide) —乙交 醋（glyc^lide)-酒石酸聚合物，其比例分別為6 5/3 3/2。 申請人的PCT公開文件W0 94 / 1 5 587揭示具有游離C00H 基的聚醋’以及具有至少一有效的可電離基團的胺之生物 活性的胜狀所形成之離子性共軛體。更特別地，它揭示聚 合物是藉由將共聚物與蘋果酸或檸檬酸反應之聚羧酸所製 得。美國專利第5, 6 72, 6 59號是W0 94/15587之美國之延續 申請案。美國專利第5, 8 63, 985號是美國專利第5, 6 72, 65 9 號之延續案。審查中的美國申請案〇9/237,4〇5是美國專利 第5，8 6 3，9 8 5號的部份延續案，其額外地揭示必須包括有 檸檬酸、ε-己内酯及乙交酯之聚酯；包括前面的聚酯及 一多胜肽之組成物；必須包括有酒石酸作為其成員之一的 聚酯；包括前面的聚酯及一多胜肽之組成物；以及以棒狀 形式出現之前面的組成物，其可視需要地以一生物可分解 的聚合物包覆。 申請人的PCT公開文件W0 97/39 738揭示一種製造如W0 9 4/155 87所說明的持續釋放離子共軛體的微顆粒之方法。 上述專利、專利申請案以及公開文件之内容，都完整 地納入此處作為參考資料。 本發明是有關於一種用於製造聚合物及下式化合物 H0(H2C)2 N N —*—-(CH^-CO--D-Phe-c[Cy&-T yr-D-T rp-Lys-Abu- Cys}-Thr- NH2 之持續釋放離子共軛體的較佳具體實施例之較佳方法，其

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1230069 五、發明說明（4) 特徵為上述化合物從共輕體中令人驚訝及非顯而易見的零 級（z e r 〇 - 〇 r d e r )釋放性貝。本發明的方法之進一步的優 點，是所使用的溶劑可避免側反應，並且相較於先前所揭 示的方法，是較不昂貴的。 本發明是有關於一穆製造持續釋放複合物的方法，其 中該持續釋放複合物包栝具有下式之化合物： H0(H2C)2 N-(CH2) 一⑶-D-Phe-c[Cy s-T yr-D-T rp-Lys-Abu- Cys]-Thr- NH2 以及一聚合物，其中此聚合物包括内交酯單元、乙交酯單 元以及酒石酸單元，在此聚合物中，内交酯單元的比例是 從71 %到73 % (包括此比例）；乙交酯單元的比例是從26 %到2 8 % (包括此比例）；以及酒石酸單元的比例是從1 %到3 % (包括此比例）；其中，上述化合物的胺基是離 子性地結合至此聚合物酸單元的羧基； 該方法包括在乙腈及水的混合物中（其中乙腈對水的重量 比，分別是大約3比1 )，以大約〇 °C到5 °C的溫度，將上述 $合物的水溶液與該聚合物或其鹽類反應的步驟，直到持 續釋放複合物的形成實質上完成為止。 上述方法之較佳的方法是當反應混合物的溫度在大約 2 · 5 C日守’並且此方法包括分離複合物之額外的步驟。 +在另一形態中，本發明包括一種用於製造如上所述之 持，釋放複合物的微顆粒之方法，該方法包括下列步驟： 使複合物之乙酸乙酯溶液喷霧至異丙基醇，以得到複合物 的被顆粒之分散液；

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‘發明說明（5) 其中，在乙酸乙酯 %到12%(你^);從嗔9T。液中之複合物的濃度，是大約8 醇的速率，是大約4 9 Γ :中將複合物的溶液噴至異丙基 霧器的頻率設定是毛升/分鐘到大約5· 1毫升/分鐘；喷 液噴出…基醇器不會將複合物之乙酸乙醋溶 的體積；以及異丙基大f20到30倍過量於乙酸乙醋 使異丙基醇回溫至大約〇 c， 中將該微顆粒分離出來。 、力22 c，以及從異丙基醇 铲方法之車乂佳的方法是喷霧的速率在大約5毫升/分 =，以及異丙基醇的體積是大約20倍過量於乙酸乙輯的 積0 抑一上述方法之杈佳的方法是聚合物包括大約7 2 %内交酯 單兀、大約2 7 %乙交酯單元以及大約i %酒石酸單元。 上述方法之較佳的方法是微顆粒具有大約丨〇微米到大 約1 0 0微米的平均大小。 上述方法之較佳的方法是微顆粒具有大約4 〇微米到大 約7 0微米的平均大小。 此處所使用有關於參數或量的名詞，，大約”，是指參數 或量是在所指的參數或量之± 5 %的範圍内。 此處所使用的名詞V微顆粒"，是指包括具有下式之化 合物

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共軛體的微米大小顆粒’較佳地基本上是球狀的形式。 快速的應用代表此技藝所熟知的使用標準3個字母縮 寫的胺基酸，例如，Phe=苯丙胺酸；Abu= 胺基丁酸。 一般方法： 共聚物形成：含有L-内交酯、乙交酯以及L_( + )_酒石 酸的共聚物，可根據在此技藝者所熟知且在此處可使用的 方法而製造。因此，一反應器裝載有乙交酯、L—内交酯以 及L-酒石酸的單體，以及在曱苯溶液中的含錫的己酸 -2- ^基酯。較佳地，L-内交酯、乙交酯以及L—( + )—酒石 酸的莫耳百分比分別是大約7 2 / 2 7 / 1。 L-酒石酸較佳地是先在Abderhalden乾燥裝置 中’在二氧化石夕膠上乾燥1 〇小時。然後將反應器放在真空 下授掉以移除甲苯。在不含氧氣的氮氣氣氛下，接著將反 應器加熱’較佳地是浸在油浴中，溫度大約在丨8 〇到1 9 〇 °c ’並將擾拌增加至大約125轉/分鐘（rpin)。在浸入之 前，將一加熱帶（例如，Therm〇lyne型號455〇〇，輸入控 制設定=4 )置於反應器的蓋子上。注意反應器内容物完全 融化所需的時間，對於大約3 〇 〇克的裝載，在大約i 8 〇它， 典型地需要1 5分鐘。在合成期間，每小時取樣一次，並藉 由GPC分析，以測定殘留單體的百分比，並得到數量平均 刀子里（Μη)及重量平均分子量（Mw)的分布。典型地反 應時間是大約9到1 5小時的等級。最終的聚合物也藉由滴 定而分析，以測定酸值（單位meq/克），並藉由GC以測定 殘留未反應的單體含量。進一步的分析包括IR (偵測特有

1230069 月 曰 修正 惠蕊—891158R7 五、發明說明（7) · : 、） ，NMR (偵測聚合物中的内交酯及乙交酯含量 ’以及殘留錫（偵測由於使用含錫的己酸-2 -乙基g旨作 為催化劑之殘留的錫）。 〇这/、來物之純化/納鹽形成：將殘留的單體（典型 j(w/w))移除，並將共聚物以一步驟轉變成其鈉鹽 以促進離子鹽的形成）。將聚—乳酸-共-甘醇酸-共 :1酒石酸共聚物（PLGTA )藉由在超音波浴中超音 ^口4而溶解在丙酮中，以得到具有濃度範圍在19-21% PLGTA (重量百分比）的溶液。 俨: f無機鹼溶液加到此溶液中，例如，氫氧化鈉或 至m/父佳地是使用〇·2㈣酸納，以所得的^農度是1 ^ 的莫耳過量於共聚物的羧基而加入，較佳地是，丨· 2 S ί過置於共聚物的羧基。將溶液在室溫攪拌大約15 循产、’較佳是3g分鐘，以協助納鹽的形成。然後使用 以大約50到300毫升/分鐘的速率，較佳是100毫 Γ離7Λ Λ到含有冷卻至大約1到代，較佳是2.r的 酮的體：之r : LI V ;水量大約是20到30倍過量於丙 至擾拌馬達的授拌棒，將水以一足以產^品使曰用嘴=古接玄 攪拌，以避免在沈澱期間聚合物結塊。义此# ‘、^ 協助；完成，將分散液進一步授拌30 _分鐘，以 f助早體的移除，然後置於離心瓶中並離心。 液，並將凝塊再懸浮於另外的去雜 ^ 燥，較佳是藉由冷束乾燥去離子水中’再次離心並乾 具有下式之化合物的聚人骗M工& η + 嶋~離子性共軛體的製備·· 第10頁 6060-3374-PF2(N).ptc 1230069

H0(H2C)2

D-Phe-c[Cy^Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys}-Thr-NH2 $ :成必須將上述化合物結合至在基質中的共聚物鈉鹽， ^中兩者都是可溶性的，較佳是3 ·· 1 (w/w)的乙腈： 然後將所得的離子性共軛體在去離子水中沈澱，並回 收所形成的水溶性共軛體沈澱物。 在去離子水中之上述化合物的乙酸鹽溶液，加到含有 乙臆中（範圍從24 - 26 %(w/w)溶液），1 2,0 0 0 MW / 2 8 / 1到7 3 / 2 6 / 1 PLGT A之清洗的納鹽之溶液，此溶液已 加入一弱鹼，較佳是〇 · 5 M碳酸鈉，以致於產生大約1. 〇 5 莫耳過量於上述化合物乙酸鹽的乙酸含量之鈉，並攪拌大 約5分鐘，以提供一鹼性環境，較佳是邱8，以中和上述 化合物的乙酸基團。乙腈：水的大約重量比是3 : 1。根據 2需之標的裝載（通常大約8 %至大約丨2 % )，而測定所 而之上述化合物的數量。從這裡，測定所需之水溶性碳酸 納用以中和上述化合物的乙酸鹽之體積，最後，根據所需 的最終乙腈：水（包括所加的碳酸鈉）之大約3 :丨的體積 比’計算上述化合物溶解的水體積。 、 將上述化合物-共聚物溶液在大約〇到5 °C，較佳是2 5 C ’攪拌大約1 〇到1 5分鐘，以促進離子性的結合，並防止 在兩種成份之間的共價結合（使用低溫）。然後在一連接 至循環浴的套管反應器中，以大約5 0到3 0 0毫升/分鐘的速 率，進料去離子水，其體積是大約20-30倍到1倍過量於先 前3 : 1的乙腈-水溶液中的乙腈體積，以一足以產生表面

鎌 891·7 修正 年 月 Γ230069 曰 五、發明說明（9) 攪動的速率授拌以避免結塊，並將其冷卻至大約1到4它， 較佳是1. 7 °C。 當沈澱完成時，將分散液進一步攪拌3 0到6 0分鐘，以 協助水溶性上述化合物—寡聚化合物（寡聚物是PLGTA之較 低分子量的成份，其是不需要的，因為它們是水溶性的） 的移除’然後置於離心瓶中，並在離心機中以大約5，〇 〇 〇 轉/分鐘的速度離心大約1 5分鐘。將所得的離心凝塊再懸 浮於去離子水中並再次離心。然後藉由冷凍乾燥而冷康並 乾燥2天，然後回收持續釋放複合物（離子性結合至p l g τ A 的上述化合物）。藉由上清液之HPLC分析，對於未結合的 上述化合物及氮分析，以測定裝載量（上述化合物氮含量 疋已知的’並且聚合物不含有任何的氮）。從持續釋放複 合物中萃取上述化合物，然後藉由HPLC的分析，也可測定 裝載量。 持續釋放複合物之喷霧：為了提供非常適合注射至患 者的配方，藉由溶解於乙酸乙酯並使用超音波霧化（a. k. a·喷霧化），而將持續釋放複合物賦形成微球體，以將溶 液喷至低溫（大約-6 〇 到-7 8 °C )的乙醇、異丙醇，或己 烷和異丙醇的混合物，較佳是異丙醇，當持續釋放複合物 溶液與冰冷的異丙醇接觸時，其導致持續釋放複合物的微 球體之形成。持續釋放複合物/乙酸乙酯溶液可藉由通過 0 · 2微米的濾、紙而過濾減菌。 將持續釋放複合物溶解於乙酸乙酯，較佳是藉由超音 波/攪拌的方法，以得到大約8 %到大約12 %(w/w)的溶° 液，較佳是12% ’取決於聚合物的分子量及上述化合物的 H·

6060-3374-PF2(N).ptc 1230069 案號 89115867 五、發明說明（10) ί載量者可改變溶液的黏度。其以大約4.9〇毫 升/为鐘狀“宅升/分鐘㈠交佳是^⑽毫升/分鐘^ 率：進料至-工業的霧化器或噴霧器（功率—大約7 〇 %，、 振幅-大約80%，頻率—大約34到35 kHz，較佳是％ ^ kHz ; —般而言，喷霧器應有效力足以產生_頻·直 以固定地將持續釋放複合物/乙酸乙酯溶液噴霧 (但非喷出（spit))，濃度從大約8%到大約i2%(w/w)， 這樣的濃度導致固體微球體的形成，並且頻率必須是 可獲得40至70微米之間的平均粒徑，這可使得經由2"虎或 19號針的注射變得容易），並噴霧至異丙醇（ιρΑ) ，2〇 到3 0倍（較佳是20倍）過量於乙酸乙酯的體積，冷卻至大 約-60 °C到-78 °C，冷卻可藉由一套管反應器，加入乾冰或 插入冷卻線圈而達成，並以至少2〇〇轉/分鐘的速度攪拌 (避免微球體結塊），將溫度大約6 °C的去離子水，較佳 地以1.5公升/分鐘的速度進料至套管喷霧器，以消除任何 局部的熱效應，其可導致由於乙酸乙酯蒸發而造成的喷霧 器頂端堵塞。此溶液被均勻地噴霧，並可觀察到灰白色的 微粒分散液在異丙醇中形成。使其解凍至大約Ot：到22 °C 大約30分鐘到2小時，然後通過125微米孔篩（以移除任何 大的=了 ’主射的/夜滴/顆粒）’並放置在What man 1號渡 紙上真空過濾。過濾的凝塊以另外的異丙醇潤洗，然後直 空乾燥。 八 本發明將藉由以下的實施例舉例說明，但並不限於其 細節。 實施例1

Γ230069 案號 89115867 曰 修正 五、發明說明（11) P(1 )LGTA ( 7 2/2 7/ 1 )及上述化合物之離子性共軛體 步驟A ··合成3 0 0克的P ( 1 ) LG /酒石酸共聚物（1 -内交 酯··乙交酯··酒石酸=7 2 ·· 2 7 ·· 1 ) 一反應器裝載有乙交酯（Purac Biochem. Netherlands， 68· 71克）、内交酯（Purac Biochem. Netherlands，22 7 .53 克）以及L-( + )-酒石酸（Riedel-de Haen，Seelze， Germany，產品編號 3 3 0 8 1，3·75 克）的單 體，以及在甲苯（Riedel - deHaen，Seelze，Germany) 溶液（0.0982 Μ， 4.47毫升）中的含錫的己酸-2-乙基酉旨 (Sigma， St· Louis， Missouri, USA,產品編號S-3252 )。L-内交酯、乙交酯及l(+ )-酒石酸的莫耳百分比分別 相當於71· 81 %、26· 82 % 及1. 36 %。 乙-（+ )-酒石酸先在人匕(16 1'1^1(1611乾燥裝置中，在二氧 化石夕膠（Riedel-de Haen，Seelze，Germany)上乾燥 1〇 小時。然後將反應器（藉由液態氮彎管而連接至一幫浦） 放在真空下（〇.〇4毫巴）攪拌大約5分鐘以移除曱苯。在 =含，氣的氮氣（B0C氣體，Dublin， IreUnd，8vpm的溼 氣含i )氣氛下’接著將反應器浸在油浴中（溫度大約在 1 8 0 °C )，並將攪拌增加至大約丨2 5轉/分鐘。在浸入之 刖’將一加熱帶（Thermolyne型號4 55 〇〇，输入控制設定 -4 )置於反應器的蓋子上。注意反應器内容物完全融化所 需的時間，對於大約3 0 0克的裝載量，在大約18〇。〇，典型 地需要15分鐘。在合成期間，每小時取樣一次，並藉由 GPC胃分析，以測定殘留單體的百分比，並得到數量平均分 f里( Μη ) &重量平均分子量（Mw )的分布。典型地反應

第14頁 1230069 曰 修正 _案號89115867_年月 五、發明說明（12) 時間是大約1 5小時的等級。最終的聚合物也藉由滴定而分 析，以測定酸值（單位m e q /克），並藉由G C以測定殘留未 反應的單體含量。進一步的分析包括I R (偵測特有的C = 〇 波峰）；NMR (债測聚合物中的内交醋及乙交酿含量）； 以及殘留錫（偵測由於使用含錫的己酸-2 -乙基酯作為催 化劑之殘留的錫）。 步驟B :上述共聚物之純化/鈉鹽形成 將殘留的單體（典型地< 5 % (w / w ))移除，並將共聚 物以一步驟轉變成其鈉鹽形式（以促進離子鹽的形成）。 將81· 05克之1 2, 0 0 0克/莫耳72/2 7/ 1之聚-乳酸—共—甘醇酸 -共_L-( + )-酒石酸共聚物（由滴定得到酸值=〇.231 me(i/ 克）措由在超音波洛（Branson，Danbury, Connecticut, USA)中超音波，而溶解在324.24克丙酮中（Riedel-de

Haen， Seelze， Germany )，以得到濃度2〇 %PLGTA (重量 百分比）的溶液。 將 56.17 毫升之 〇·2 Μ 碳酸鈉（Aldrich，Gillingham,

Dorset，UK)加到此溶液中，以提供12倍莫耳過量於共 聚物羧基的鈉濃度。將溶液在室溫攪拌大約3〇分鐘，以協 助鋼J^的形成。然後使用循環浴，以大約1 〇 〇毫升/分鐘的 速率進料到含有2公升去離子水（大約2〇 : 1過量於丙 酮的體積，冷卻至大約2· 5它）之套管反應器中。使用一 ，，至攪拌馬達的授掉棒，將水以一 &以產纟纟面混濁的 速率攪拌，以避免在沈澱期間聚合物結塊。 旦沈殿完成’將分散液進一步禮揲s n公 在

第15頁 1230069 案號891⑽6丄

年____A 曰 修正 五、發明說明（13) C Dupont Sorva 1 Products, Wilmington，Delaware， USA )，以5，000轉/分鐘離心大約15分鐘。丟棄上清液， 並將凝塊再懸浮於另外的去離子水中，再次離心並在冷來 箱（-1 3 °C )中冷凍隔夜，然後隔天在小型的冷凍乾燥器 中（Edwards， Crawley， West Sussex， UK)乾燥。此冷 凍乾燥器不含冷卻系統。5天的冷凍乾燥後，回收6 5 · 3 7克 之清洗的共聚物，產率8 0. 6 5 %。 步驟C :持續釋放複合物之製備 在5·87克去離子水中之1·27克上述化合物的乙酸鹽溶 液（批號97Κ-8501，購自Kinerton Ltd.，Dublin， Ireland，效價=85· 8 %(效價是指在胜肽乙酸鹽的游離基 底胜肽百分比）；乙酸鹽：=1 〇· 87 % )，加到含有在24. 84 克乙腈中（Riedel de-Haen) ( 24.38 %(w/w)) ，8.〇1 克 1 2,0 0 0 MW 72/27/ 1 PLGTA之清洗的鈉鹽之溶液，此溶液 已加入2.41毫升，0.5^{碳酸鈉（相當於1〇5莫耳過量於 上述化合物-乙酸鹽的乙酸鹽含量之鈉），並攪拌大約5分 鐘，以提供-鹼性環境（PH 8 )，以中和上述化合物： K團而2 :水的大約重量比是3 :1。根據所需之標的 衣 疋所需之上述化合物的數量。從這裡，測定所 ίΐ水ΐί碳酸鈉用以中和上述化合物的乙酸鹽之體積， 3人的：積戶:需！1 Ϊ終乙腈：水（包括所加的碳酸鈉)、之 1 ，计异上述化合物溶解的水體積。 價结合。铁# Ϊ 合，並防止在兩種成份之間的共 t口·^一連接至循環浴的6公升套管反赢裝^，、

6060-3374-PF2(N).ptc 第16頁 1230069 ---- 案號 SQ1158fi7 五、發明說明（14) 以大約100亳升/分鐘的速率，進料6 3 0毫升去離子水（大 = 20:1過量於乙腈的體積）’以35〇轉/分鐘的速度（以 挺供表面攪動並避免上述化合物-共聚物結塊）而攪拌， 並冷卻至大約1. 7 °C。 、當沈澱完成時，將分散液進一步攪拌3〇分鐘，以協助 水溶性上述化合物-寡聚化合物的移除，然後置於離心瓶 中，並在Sorvall 離心機中（Dup〇nt s〇rval pr〇ducts，

Hlmington，Delaware，USA)，以 5，ϋ〇〇 轉 / 分鐘的速度 離心大約1 5分鐘。將所得的離心凝塊再懸浮於去離子水中 並再次離心。然後藉由冷凍乾燥而冷凍並乾燥2天。回收

8.30克的標題化合物，產率91.38%。藉由上清液之up LC 分析，對於未結合的上述化合物及氮分析，以測定裝載量 (上述化合物氮含量是已知的，並且聚合物不含有任何的 氮）。從持續釋放複合物中萃取上述化合物，然後藉由 HPLC的分析，也可測定裝載量，此實施例是11, 25 %。 步驟D ··持續釋放複合物之喷霧 將步驟C所得之8· 27克的上述化合物藉由使用超音波/ 攪拌（室溫）而溶解於乙酸乙酯，得到1 2 · 〇 〇 % ( w/ w)的溶 液。其以大約5毫升/分鐘的速率，進料至一工業的霧化 或噴霧器（Martin Walter Powersonic Model MW400GSIP，購自Sodeva of France )，設定功率=7〇 %，振幅=80 %，頻率=34 · 50 kHz，並喷霧至1· 35公升 的異丙醇（I PA )( 2 0倍過量於乙酸乙酯的體積），冷卻 至大約-74 ± 4 °C (冷卻可藉由反應器套管而達成），並在 套管反應器中以2 00轉/分鐘的速度攪拌（以避免微球體結

6060-3374-PF2(N).ptc 第17頁 1230069 _案號 89115867 五、發明說明（15)

塊）。將溫度大約6 °C的去離子水，以]c \ ^ 致由於乙酸乙，蒸發而造成的噴霧器頂端堵塞。此溶液被 均勾地喷霧，i可觀察到灰白色的微粒分散液在異丙醇中 形成。使其解凍至大約〇 4 °c大約30分鐘到2小時，然後 通過1 2 5微米孔篩（以移除任何大的、不可注射的液滴/顆 粒），並放置在Whatman 1號濾紙上真空過濾。過濾的凝 塊以另外的異丙醇潤洗，然後真空乾燥。得到6· 88克的可 /主射物貝，產率8 3 · 1 9 %。持續釋放複合物的微顆粒具有 大約5 4微米的平均粒徑。 上述化合物從持續釋放複合物的微顆粒之活體内釋 放，可根據以下的說明而測試。活體内的研究，是設計成 :肌：内給藥持續釋放複合物的微顆粒至公的小獵犬之 ^ 平估上述化合物的活體内釋放記錄；此評估是藉由給 樂後，亡述化合物的藥物動力學而達成。 #衣Ϊ、只釋放複合物的微顆粒之藥學配方，是以肌肉内給 樂至後腿的肌肉。盆你 入从叫挪t /、後’早一肌肉内給藥含有持續釋放複 合物试顆粒之昭蔚& & „ #认R a +…、射次非照射的藥學形式（注射的微顆粒量 相當於5耄克的上祝几人 .,A, u , 逑化合物，根據測定，在持續釋放複合 鏟石β隹> 物裝载1是11· 23 % )，每個藥學形式給 樂至6隻狗族群中的么 七旦” η —砰Τ的母—隻。在血清樣品中上述化合物的 疋里樂物動力學分析，{以如下的方法而進行。 八# 射前從狗中收集血液（時間〇)，以及5、15及30 为鐘，1。2、4、8»1〇 曰—Q \ / 8及1 2小時；1、2、3及4天；然後第1個 月母週2次（例如，H u -— 玍期一及星期四）；以及最後從第2個

6060-3374-PF2(N).ptc 第18頁 1230069 修正 曰 M% 8911RRR7 五、發明說明（16) 碎X i、rv、直到完成實驗為止（當上述化合物的血清濃 ί用协I ί、測到時）。然而，記錄真實的血液收集時間， 樂为動力學的分析中。在時間〇(肌肉内給藥前） =及古在肌肉内給藥後的7、21、35、56及84天之血液樣品 7次頭靜脈，在預定的時間取樣。 5真π〇 ΐ於兩個部份：一為在固定時間取樣之大約2· (ίο ·5毛升，I於分別含有5〇及8〇微升的抗蛋白酞酶 古斗=的1'1'“7101㊅50 0 0 0 0 KJU冷凍乾燥及再稀釋於2 水中）溶液的試管中；另一為大约h 在忒官中，使其靜置。 離心2^'ϋ球ϊίί後’將試管在4°c，以3G，GGG轉/分鐘 儲存；：個部份中，直到樣品對上述化合物做分析為止。 分析法而1樣品中的上述化合物濃度，試藉由放射性免疫 化合物w庐、# _ 衣備二白的狗血漿之標準曲線及上述 :二：標準溶液。在這個方法中，㈣： 之定量限度’是大約。〇5。奈克(ng) 供的劑量(、^荜至每隹動血清濃度（Cmax ) ’是藉由所提 而# m介隻動物的劑量，以微克/公斤表示） 而‘丰化。也計算吸收率指 丁）

l X1' ^ v ^max 7 JA u ^ J 上述貫驗的結果顯示於第丨圖。

6060-3374-PF2(N).ptc 第19頁 物戋^合物或其藥學上可接受的鹽類、持續釋放複人 :或土：化合物的微顆粒’可藉由，服、非腸胃道（：。 —、腹膜内、靜脈内或皮下注射或植入）、經 Ϊ230069 案號 89115867 五、發明說明（17) 鼻、陰道、直腸、舌 學上可接受的載體而 劑量形式。 用於口服給藥的 丸、粉末及顆粒。在 是與至少一種惰性之 蔗糖、乳糖或澱粉。 可包括另外不同於這 劑（例如，硬脂酸鎂 劑量形式也可包括緩 而製備。 用於口服給藥的 乳液、溶液、懸浮液 常用的惰性稀釋劑（ 組合物也可包括佐劑 及甘味劑、調味劑及 非腸胃道給藥的 浮液或乳液。非水溶 乙二醇、植物油（例 注射的有機酯類（例 可包含佐劑，例如， 它們可藉由，例如， 毒劑納入至組成物中 而滅卤。它們也可以 n用前，溶解在無 修正一 下或 職形 固體 這樣 藥學 以其 樣的 )0 衝劑 液體 、糖 例如 ，例 香料 製劑 性的 如， 如， 防腐 通過 、藉 無菌 菌的 局部的途徑而給藥，並可使用 ’以提供適合於每個給藥途徑 劑量形式，包括膠囊、錠劑、 的固體劑量形式中，活性化合 上可接受的載體而混合，例如 正常的施用，這樣的劑量形式 惰性稀釋劑之物質，例如，潤 在膠囊、錠劑及藥丸的例子中 。錠劑及藥丸可額外地以腸衣 劑量形 漿、萬 水）。 如，渔 Ο 包括無 溶劑或 撖欖油 油酸乙 劑、溼 固定細 由照射 固體組 水中或 式，包括藥學上可接受 能藥，其含有在此技藝 除了這樣的惰性稀釋劑 潤劑、乳化及懸浮劑， 菌水 賦形 及玉酯） 潤劑 菌的 組成 成物 其他 溶液或非 劑的例子 米油）、 。這樣的 、乳化劑 慮紙過過 物或藉由 的形式而 無菌可注 水溶液、 是丙二醇 明膠以及 劑量形式 及分散劑 、藉由將 加熱組成 製造，其 射的基質 藥 的 藥 物 5 也 滑 膜 的 中 5 以 懸 可 也 Ο 消 物 可

6060-3374-PF2(N). 1230069 五、發明說明 案號 89115867 (18) 曰 修正

中 0 用於直腸或陰道給藥的組成物，較佳地是栓劑，除 活性物質之外，其玎包含賦形劑，例如可可油或栓劑^ y 用於經鼻或舌下給藥的組成物，也可使用在此技藝中 所熟知的標準賦形劑而製傷。 較佳地，持續釋放複合物的微顆粒是經由非腸胃道或 口服給藥的途徑而給藥。 給藥至患者之持續釋放複合物的微顆粒之有效劑量， 可由主治醫師或獸醫師決定’並且將根據包括上述化合物 的適當劑量以及在持續釋放複合物的微顆粒中之上述化合 物的裝載量而定。這樣的劑量將是熟知的，並且可由熟悉 於此技藝者所決定。較佳地’劑量應可導致在患者中，至 少2 0 0微微克（pg)/毫升的上述化合物之濃度。。

1230069 _案號89Π5867_年月日_«：_ 圖式簡單說明 第1圖顯示在狗血清中，式列化合物從持續釋放複合 物的樣品中，活體内的釋放記錄，結果為平均值±標準 差，其中持續釋放複合物的樣品含有大約11. 2 5 %的式列 化合物，聚酯是1 -内交酯：乙交酯：酒石酸（7 2 : 2 7 : 1 )，以及持續釋放複合物是以微顆粒的形式而肌肉内給藥 5毫克。照射的樣品是指持續釋放複合物的樣品以鈷來源 的X光照射。

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Claims (1)

1. 修正本 素號 8911586_7_ 六 、申請專利範圍 其中該 1 , 一種用於製造一持續釋放複合物的方法 持續釋放複合物包括具有下式之化合物： H0(H2C)2-"N N-(Chy —C 0-D-Phe-c[Cy&Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 以及一聚合物’其中此聚合物包括内交醋（1 a C t丨d e ) 單元、乙交S旨（glyc〇lide)單元以及酒石酸單元’在此聚 合物中，内交酯單元的比例是從71 %到7 3 % (包括此比例 );乙交酯單元的比例是從2 6 %到2 8 % (包括此比例）； 以及酒石酸單元的比例是從1 %到3 % (包括此比例）丨其 中，該化合物的胺基是離子性地結合至此聚合物酸單元的 羧基； 該方法包括在乙腈及水的混合物中（其中乙腈對水的 重量比’分別是大約3比1 ) ’以大約0 C到5 C的溫度’將 該化合物的水溶液與該聚合物或其鹽類反應的步驟’直到 化合物（I)的形成實質上完成為止。 2. 如申請專利範圍第1項所述之方法’其中溫度是大 約2. 5 °C ;並且該方法包括分離該複合物之額外的步驟。 3. 一種用於製造一持續釋放複合物的微顆粒之方 法，其中該持續釋放複合物包括具有下式之化合物： H 0(¾ C)2 —-|\] 厂\ N--(CH2) 一C 〇-D-Phe-c[Cy &Tyr-D-Trp-Lys-Abu- Cys]>Thr- NH2 以及一聚合物，其中此聚合物包括内交酯單元、乙交

   6060-3374-PF2(N).ptc 第23頁 1230069 _案號89115867_年月日__ 六、申請專利範圍 酯單元以及酒石酸單元，在此聚合物中，内交酯單元的比 例是從71 %到73 % (包括此比例），·乙交酯單元的比例是 從26 %到28 % (包括此比例）；以及酒石酸單元的比例是 從1 %到3 % (包括此比例）；其中，該化合物的胺基是離 子性地結合至此聚合物酸單元的羧基； 該方法包括下列步驟： 使該持續釋放複合物之乙酸乙酯溶液喷霧至異丙基 醇，以得到該持續釋放複合物的微顆粒之分散液； 其中，在乙酸乙酯溶液中之該持續釋放複合物的濃 度，是大約8 %到1 2 %(w/w);從噴霧器中將該持續釋放複 合物的溶液喷至異丙基醇的速率，是大約4. 9毫升/分鐘到 大約5. 1毫升/分鐘；喷霧器的頻率設定是使得喷霧器不會 將該持續釋放複合物之乙酸乙酯溶液喷出；異丙基醇的體 積是大約2 0到3 0倍過量於乙酸乙酯的體積；以及異丙基醇 的溫度是大約-6 0°C到大約-78°C ; 使異丙基醇回溫至大約0 °C到大約2 2 °C ;以及從異丙 基醇中將該微顆粒分離出來。 4. 如申請專利範圍第3項所述之方法，其中喷霧速率 在大约5毫升/分鐘，以及異丙基醇的體積是大約2 0倍過量 於乙酸乙酯的體積。 5. 如申請專利範圍第4項所述之方法，其中聚合物包 括大約7 2 %内交酯單元、大約2 7 %乙交酯單元以及大約1 %酒石酸單元。 6. 如申請專利範圍第5項所述之方法，其中微顆粒具

   6060-3374-PF2(N).ptc 第24頁 1230069 _案號89115867_年月曰 修正_ 六、申請專利範圍 有大約1 0微米到大約1 0 0微米的平均大小。 7. 如申請專利範圍第6項所述之方法，其中微顆粒具 有大約4 0微米到大約7 0微米的平均大小。

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