TWI227241B

TWI227241B - IgE-CH3 domain antigen peptide, peptide conjugate containing the same, and pharmaceutical composition for treating allergies containing the peptide conjugate

Info

Publication number: TWI227241B
Application number: TW088106133A
Authority: TW
Inventors: Chang Yi Wang; Alan M Walfield
Original assignee: United Biomedical Inc
Priority date: 1998-06-20
Filing date: 1999-04-16
Publication date: 2005-02-01
Also published as: CA2329754A1; EP1090039B1; JP4031201B2; JP2002518038A; HK1036804A1; BRPI9911389B8; EP1090039A4; CA2329754C; US6811782B1; BRPI9911389B1; WO1999067293A1; DK1090039T3; AU4580299A; CN1259340C; EP1090039A1; AU757919B2; BR9911389A; DE69940775D1; CN1305498A; US7648701B2

Description

1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（1 ) 發明領域本發明係關於作為免疫原之胜肽結合物組合物之用途，其中所含每個胜肽結合物包括在其免疫球蛋白 E(IgE)s(epsilon)重鏈的第三個固定部位上之目標抗原邵位’而目標抗原部位會鍵結到（1) 一個載體蛋白質（經由化學聯結）（2) —個輔助τ細胞抗原表位和其他免疫刺激序列（經由化學聯結或經由直接合成），以治療過敏性疾病。本發明特別之處係關於使用這些胜肽結合物組合物作為免疫原來引導在哺乳動物（包含人類）體内，對抗位於免疫球蛋白伊普西隆（epsilon) ’ ε重鍵第三個固定部位（ch3) 區域之目標作用子部位的高效價多株抗體之產生，以此等當做醫藥之組合物之用途，以提供免疫球蛋白E-中介之過敏疾病之免疫治療。發明背景在人類和其他哺乳類動物的免疫系統，免疫球蛋白Ε中介類I過敏反應。此等係對食物、藥物以及環境過敏原之過敏反應，其藉過敏性鼻炎、氣喘、過敏性皮膚炎以及蓴麻療等的病徵顯示。現有治療過敏疾病的策略在使用上有限制，包含嘗試對鑑定出對抗原脫敏特應性個體，或以治療性化合物來改善進行中之過敏反應。基於過敏原之脫敏作用免疫療法之限制包含難以確認牵涉之過敏原以及因使用鑑定出之過敏原所經常引起的負面反應（世界衛生組織和國際聯合免疫協會，Lancet，1989 ; 1:259-261)。其他用於舒緩過敏患者之治療藥物以阻斷負責過敏反應之急性發炎 -4- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） ^--K-------------- (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) tT---------Φ. 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（2) 級聯。此等化合物包括抗組織胺，解除充血劑，β2拮抗劑以及皮質類固醇。抗組織胺，解除充血劑以及62拮抗劑作用於在過敏級聯中免疫球蛋的下游反應，使緩和性治療過敏徵兆而不是在靠近免疫球蛋白£_中介之過敏反應之起始點給予預防性治療。此類緩和性治療提供短暫和部分舒緩，但經常伴隨不利負作用。很多患有嚴重過敏的病患可以皮^類固醇有效地治療。類固醇療法可降低發炎反應但郤造成廣泛性免疫抑制。為避免已知治療藥物的缺點，藉對標的免疫球蛋白E之選擇性干涉來阻礙過敏反應是較令人滿意的。和其他的免疫球蛋白相同，免疫球蛋白E具有二個重鏈和二個輕鏈。ε 重鏈有五個區域，一個可變區域VH和固定區域cΗ 1到 C Η4。固定區域從免疫球蛋白ε分子的二個ε鏈結合以包括免疫球蛋白Ε之固定或Fc區域。免疫球蛋白ε循環並變成附著於作用子細胞如嗜驗性細胞及巨大細胞是經由免疫球蛋白E Fc部位的一位置，在細胞表面轉變成一高親和力 FcsRI受体。在過敏反應中，過敏原（如花粉，塵蟎蛋白質’跳蚤抗原）結合到位於巨大細胞或嗜鹼性細胞免疫球蛋白E之可變區域的抗原結合位置。此作用交聯免疫球蛋白E分子及其下之FcsRI受体。免疫球蛋白E-過敏原錯合物精由傳成巨大細胞或嗜驗性細胞之去顆粒作用而伴隨釋出組織胺和其他發炎中介物。此等中介物造成過敏症狀，過度調控免疫球蛋白E的製造，及導致對過敏原之高度敏感（Davis 等人，Springer SeminImmonpathd，1993 ； 15: 51-73) 〇本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） —---------------“--訂---------. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（3) 已建議藉由干擾作用治療過敏疾病，其抑制免疫球蛋白 E與巨大細胞及嗜驗性細胞之結合。例如，對應於免疫球蛋白E F c之各種部位合成胜肽係經研究，以作為免疫球蛋白E結合到FcsRI受体之競爭性抑制劑。研究者的假設為此作為免疫球蛋白E上部位之拮抗劑之此類胜肽參與免疫球蛋白E與F cεRI受体之結合並作為結合部位之圖譜部份。競爭性抑制免疫球蛋白Ε胜肽及下述所有的免疫球蛋白 Ε胜肽之胺基酸殘基，包括非人類之免疫球蛋白ε胜肽同源物，係根據Dorrington和Bennich提供之人類免疫球蛋白ε之編號而載於索引（Immunol Rev，1978;41:3-25,也可由網站 http:/www.pdb.bnl.gov/pdb.bin/pdbids獲得）。人類序列在此如SEQ ID : 1所列及其係經編號如表1所示。免疫球蛋白E之同源的狗，大鼠及小鼠序列（patei等人，Immunogenetics,1995;41:282-286;Steen等人，J Mol Biol，1984 ; 177 : 19-32 ;及，Ishida 等人，EMBO， 1982 ; 1 : 1117_1123)亦示於表 1 並分別列為 SEQ ID NOS: 2,3,4。動物序列和人類免疫球蛋白E顯示於登記。除非另有說明，在人類免疫球蛋白E及其他種類之同源物之個別胺基酸位置係根據示於表1之胺基酸序列號碼系統辨識。

Helm 等人（Nature，1988;331:180-183)已顯示一 76 個胺基酸長的重組多胜肽，跨越人類免疫球蛋白E之C -端 CH2和N-端CH3區域，自胺基酸3 0 1 -3 76，可藉競爭性抑制減少免疫球蛋白E與巨大細胞之結合。其他研究報告本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）丨 τΊν—τ;------------- - 訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（4) p有CH3區域牵涉結合至FcsRI。例如，對應至人類序列 4 0 1到4 1 5胺基酸（表1)之老鼠序列胜肽抑制老鼠的免疫〆球蛋白E結合到老鼠的巨大細胞（B u r t及S t a n w 〇 r t h，E u r J Immunol，1987;17:437-440)。自人類免疫球蛋白 E 殘基419至46 3之胜肽避免老鼠巨大細胞之致敏作用（Ni ο 等人，FEBS Lett.，1992 ; 3 14:229-23 1 ” Jardieu和 Presta(Wo 93/04 1 73)報告同源於胜肽CH3和CH4區域之胜肽，其可能包含胺基酸373-390，420-428，446-453及相鄰區域，其差別性地結合至FcsRI受体。然而，所有此類胜肽之高濃度係完成有效免疫球蛋白E結合之抑制所必需者。此等高濃度會因有造成劑量過高而導致明顯的生理反應，不具治療之實用性。抗免疫球蛋白E之抗体也已被應用在用於免疫球蛋白e 上作圖譜位置之方法，該位置參與FcsRI受体結合。由老鼠單株抗体直接對抗免疫球蛋白E F c之各種區域的研究中，顯示對C Η 3區域具專一性之抗免疫球蛋白E之單株抗体抑制免疫球蛋白Ε與其高親和力受体結合(Baniyash等人，

Molec Immuno，1988 ; 25 : 705_711 ;及 Stadler等人，Immunol Cell Biol，1996 ; 74 : 195-200)。此等單株抗体的研究係與早期使用多株抗胜肽抗体至明顯牵涉受体結合之圖譜部位之研究一致。例如，對免疫球蛋白E胺基酸位置401-415(Burt等人，Molec Immunol，1987 ; 24 : 379-389)和 3 5 5 - 3 6 8 (Robertson 及 Liu，Molec Immunol，1 9 8 8 ； 25 : 1 03 -1 1 3)具專一性之兔子抗体顯示對未結合之免疫球蛋 -7- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） — T,---Γ ^------------.--訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（5 ) 白E具專一性但對受体結合之免疫球蛋白E反應較差。包含得自狗免疫球蛋白E胺基酸359-479之至少連續五個胺基酸之犬科的免疫球蛋白E胜肽片段，可用於製備診斷狗過敏症（JP 9 1 79795，1 997)之抗體。彼等結果顯示在狗的ε鏈之C Η 3區域具表面暴露作用子部位，但是此作用子邵位未被教示，亦未揭示，用於抗免疫球蛋白Ε抗體之治療上應用。此等抗原表位圖譜研究一致的說明ε重鏈之C Η 3區域可用於干擾抑制免疫球蛋白Ε結合到嗜驗性細胞和巨大細胞。然而，多種研究對最有用之CH3上部位的精確位置相當不一致。此外，由免疫球蛋白Ε與部位專一性抗體（如 Burt等人，1 987)之交叉抑制作用的研究之結果，通常過度解釋為在ε鏈上FcsRI受体結合之精確作用位置。此等交叉抑制研究的解釋是有限制的，因為它不能假定抗原辨認邵位相等於配體結合部位。抗体可能藉直接結合到所欲目標位置而抑制，但他們也可佔據不連續的作用子部位及藉由立体障礙或結構改變之謗導以抑制配體結合。因此’抗原表位圖譜研究提供實驗上觀察但未解答CH3 區域中用於高親和力受体之結合位置。在缺乏一確實定義之結合位置的情況下，沒有方法可用於可靠的預期具有對作用子位置（其直接或不直接參與結合至FcsRI)具免疫上交叉反應之潛在治療性合成免疫原。況且’在缺乏免疫球蛋白E之X -放射線晶體圖之下，用於免疫球蛋白E之可利用結構模型是不足以用來可靠的預 ! J—丨 ^------------：丨丨訂---------^φ— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

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五、發明說明（6) 測週合抗免疫球蛋白E干擾作用之免疫球蛋白E上的部位。以免疫球蛋白G之經暴露三級結構為主之分歧結構已作為免疫球蛋白E及免疫球蛋白e之與免疫球蛋白£及其高親合力學體間交互作用結合之CH2/CH3區域之模型。此等模型提出各種與部位構型相關結構，牵涉與免疫球蛋白 E分子之線性不鄰接殘基接觸者。有些部位模型建議在相同ε鏈上不相鄰部位間之交互作用係藉分子内雙硫鍵鍵結環而中介（Helm 等人，Eur J Immun〇i，1991 ; 21 : 1 543- 1 548)或以靜電作用維持分子内環（1>1^以&等人，1 Biol Chem，1 994 ; 269 : 26368_263 73)。其他模型提出免疫球蛋白E分子之二聚ε鏈之片段間之分子間交互作用 (McDonnell 等人，Biochem Soc Trans，1 997;25:3 87-392)。事實上，實驗觀察顯示潛在接觸點包括ε鏈之ch3 區域中之數個分散且不連續的部位，且明白指出F cεRI結合部位的三級結構不能用模型而易於解答（Helm等人， 1 988 ; Baniyash 等人，1 988 ;及 Presta 等人，1 994)。因此，有用的合成胜肽拮抗劑及在免疫球蛋白E上模擬作用子部位之免疫原尚未經理論模型揭示。在缺乏藉χ_放射線晶體圖解析免疫球蛋白Ε之結構，此有用的胜肽部位只能靠實驗獲得。以抗免疫球蛋白Ε抗体治療過敏疾病之概念，植基於抑制免疫球蛋白Ε結合到嗜鹼性細胞和巨大細胞上之高親和力受体之專一性係為已知（Stadler等人，1 996 ; Davis等人，1 993)。此等抗免疫球蛋白E抗体為致過敏性的（交叉 -9 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) ------^—訂---- Φ. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ___B7_ 五、發明說明（7 ) 聯結）就是非致過敏性的（非交互聯結）。大部份此類抗免疫球蛋白E抗体為致過敏性的。他們將聯結及交叉連接免疫球蛋白E到嗜鹼性細胞和巨大細胞表面並且推動過敏反應之醫藥中介物之釋出。交互聯結可導致過敏反應及死亡。因此，以抗免疫球蛋白E抗体治療過敏性疾病是具決定性的。特定非致過敏性抗体保留對ε鏈之CH3區域之專一性及不會交叉連接細胞結合免疫球蛋白Ε，因而顯示對免疫球蛋白Ε中介之組織胺釋出之抑制活性（Davis等人， 1 993 ; Stadler 等人，1 996)。Rup 和 Kahn(U.S. 4,940,782)指出此種非致過敏性單株抗体可與游離的老鼠免疫球蛋白E及已結合至B細胞之老鼠免疫球蛋白E反應，但不與結合至老鼠巨大細胞之FcsRI受体之免疫球蛋白E反應。更顯著的是，其抑制老氣巨大細胞之致敏作用。此對人類免疫球蛋白E具同源專一性之非致過敏性抗体亦抑制相同作用模式之致敏作用。此等抗人類免疫球蛋白E抗体結合游離血清免疫球蛋白E，結合至B細胞結合免疫球蛋白E，不能結合至連接於嗜鹼性細胞和巨大細胞之尚親和力受体的免疫球蛋白E，及避免人類細胞之致敏作用。此等抗体係推測藉與FcsRI系體結合是以特異性的之位於免疫球蛋白E之部位之專一性而作用。（RUp及

Kahn，U.S· 4,940,782 ; Davis 等人，1993 ; Chang，Uj 5,420,251 ; Presta 等人，J Immunol，19 9 3 ； 1 5 1:2623-2632)。此外，已發現具不同專一性之非致過敏性抗人類 -10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） ϋ ϋ ϋ mmmmf ·1 ϋ 0 —Hi ϋ ea— i amat ϋ ϋ-丨、t ·1 ϋ ϋ 11 ft··— i·— 11 I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1227241 免疫球蛋白E之單株抗体，亦可中和游離免疫球蛋白 E(RUd〇lf 等人 ’ J ，1996 ; m:5646_ 5652)。此抗免疫球蛋白£不直接與受體結合部位级人，因其亦辨識FCeRI結合免疫球蛋白£。明顯地，其;二於降低嗜鹼性細胞之致敏作用係藉改變受體結合對游庐球蛋白E之熱動力學平衡。又因此，直接結合至FcsRI結合部位之抗免疫球蛋白£抗体及在其他作用子部位以合而干擾之抗_免疫球蛋白E抗體，二者均可用於藉游離免疫球蛋白£以阻止巨大細胞和嗜鹼性細胞之致敏作用。此等具潛力之免疫治療抗体辨識CH3為免疫球蛋白e中和高親和力免疫球蛋白e Fc受体作用之區域，與先前的圖譜研究結論一致。然而，如述於Rudolf等人之仍難辨認之有利之作用子部位之較精確辨識亦已使用嗤菌体表現基因庫以辨識可結合到抗免疫球蛋白E早株抗体的模擬抗原表位（m ί η 〇 t 〇 p e )胜肽；然而，此胜肽模擬抗原表位和人類免疫球蛋白E之主要胺基酸序列不具有同源性（Rudolf等人，j. Immun〇1 ， 1998;160:3315-3321)。對F c sRI受体部位具明顯專一性之人類單株抗免疫球蛋白E抗体在人類臨床研究上可藉被動免疫治療而用來治療過敏（MacGlashan 等人，1997 ; J Immunol，1997 ; 158: 1438-1445)。頃發現注入抗體rhuMAb-E25可降低病人血清中免疫球蛋白E的濃度，向下調節作用細胞上之免疫球蛋白E受体表現，降低過敏原所引起之過敏敏感性、並 -11 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

~ - Ί ^ β---- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 華經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227241 Α7 — ___ Β7 五、發明說明（9) 改善氣喘和過敏性鼻炎之症狀。此抗体顯示良好的安全性。臨床試驗結果建立以抗免疫球蛋白E方法用於治療過敏疾病之可行性。但此治療方式是有疑問的：以抗免疫球蛋白E發明之免疫治療是藉被動免疫達成，即藉抗体之注入。此抗体必須以夠高之劑量及足夠的注射次數，經由不便利之靜脈或皮下注射途徑，來達成抗体之連續醫藥上有效之濃度。有效之劑量依據病人体重、游離免疫球蛋白E 在循環系統中的基本濃度、及投藥途徑來決定。在最近的臨床試驗中，有效治療所須之穩定狀態濃度係藉每週注射一次，二週後以母二週注射一次來維持劑量。對典型過敏病人之一治療全程將耗費合計為2000-3000亳克之人類抗體且需要7-10次不便利的靜脈投藥（MacGlashan等人， 1 997; Boulet 等人，Am J Respir Crit Care Med， 1 9 9 7 ; 1 5 5 : 1 8 3 5 - 1 8 4 0)。用於治療所需之抗体量及花費之成本及在醫療裝置中之多次注射之不便性，此治療對所有病患（除少部份病患外）而言過於昂費。單株抗體rhuM Ab - E2 5之臨床有效性建立藉被動投藥抗免疫球蛋白E之免疫冶療之可行性。若這些免疫原可被設計’它也提供以主動免疫之替代性抗免疫球蛋白E方法之基本原理。藉含免疫球蛋白E免疫原之主動免疫影響抗免疫球蛋白 E治療，即藉接種免疫對抗内生性免疫球蛋白E，係在價格和便利性較為優良。對抗免疫球蛋白Ε的免疫接種提供超過被動免疫之優點：少量便宜之免疫原、較少注射次數 IT,-----------------訂--------- S. (請先閱讀背面之注音3事項再填寫本頁) -12-

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經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（w) 及經肌肉注射之便利性投藥、且不需訂做相容於該物種之鼠抗體，即用於人類之人類化抗體，因為製造者使用病患本身之免疫系統製造抗體。然而，上述之不敏感化單株抗体可能為具建設性之所欲免疫球蛋白E免疫原，它們並未揭示安全及有效免疫原之辨識。此類免疫原必須模擬相關之具足以引起交互抑制性抗體，並同時保有足以避免誘導過敏性抗體之部位專一性之免疫球蛋白E作用子部位。再者’有效之免疫球蛋白E免疫原必須具高度的免疫刺激性。因此，目前仍需要此類相關及部位專一性，及足夠免疫效力之免疫原。用於過敏之免疫冶療的免疫球蛋白E免疫原必須具免疫刺激性以使能引起足以減少免疫球蛋白E中介之致敏作用之抗免疫球蛋白E之濃度。此類免疫原必須被設計成可克服對自體分子呈現之強耐受性。H a b a和N i s ο η 〇 f f ( P r 〇 c Natl Acad Sci USA，1 990 ; 87:3363_3 367)指出在老鼠生長的最初期，由出生到第1 〇天之間，就可引發一個有效的抗免疫球蛋白E反應。較此時期更晚進行疫苗接種，就無法引發所欲之自體免疫反應，除非使用於免疫老鼠之免疫球蛋白E已共價偶合至外來攜帶蛋白質鎖孔具血藍蛋白（KLH)。相似地，去敏感化的抗免疫球蛋白e反應係藉包括CH2-CH3s鍵區域融合至日本血吸虫（Schistosoma japonnicum)之麩胱甘肽-S-轉移酶蛋白質之重組蛋白質在老氣身上引發（Heilman，Eur J. Immunol，1994; 24: 415·420)。 -13- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）丨7··---Γ；--------------訂--------- # (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（η) 其他的研究者已關注於藉尋求具高部位專一性之胜肽免疫球蛋白E免疫原，以使引發致過敏性抗免疫球蛋白E抗體之風險降至最低，而此免疫球蛋白E抗體交又連接至已和巨大細胞和嗜鹼性細胞表面相聯結之免疫球蛋白E。例如，對應於免疫球蛋白E之CH4區域部位之胜肽（SEQ ID N0:1之殘基497-506)係偶合至KLH且用於謗導可有效壓抑老鼠巨大細胞免疫球蛋白E中介之訊息傳導的多株抗體。然而，此胜肽· KLΗ結合物呈現不良的免疫刺激能力，其必須以含高峰期免疫之兔子抗血清之老鼠之被動免疫苗來說明功效（Stanworth等人，Lancet，1 990 ; 336:1279- 128 1 )。Stanworth等人之CH4免疫原係藉本發明人之工作而較晚製得者，此免疫原為一系列經合成之合成性的免疫原，其共價連接至濫交人類T輔助細胞抗原表位者。此等胜肽之免疫原性係經改良而優於原本的 K L Η -胜肢結合物，但是沒有提供證據顯示所得抗免疫球蛋白Ε抗體之功效（Wang，WO 95/26365)。而且，如此中貫例1所示（表2 ’弟3 4項），對先前揭示之c Η 4作用子部位具有專一性之抗胜肽抗體（S t a n w 〇 r t h等人，1 9 9 0)對人類免疫球蛋白E不具交互反應性。Burt和 Stanworth( 1 9 87)針對 IgE-CH3 40 1 -4 1 5 胜肽之早期抗胜肽研究亦引發去敏感化交叉反應性之證據，但這也需要篩選高峰期的兔子血清及使用定義不完全的胜肽攜、帶蛋白貝結合物以藉在老鼠模式中之被動疫苗接種觀察效果。沒有合成性胜肽曾被証明可有效在經免疫寄主中謗發可抑制 •T------------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -14-

1227241 五、發明說明（i2 ) 組織胺釋出之多株抗血清之產生。如上討論之前等免疫原之改良是必需的’以得到合成胜肽免疫原之具功效及安全性免疫原性及專一性。本發明乃經由併入用於辨識及設計胜肽免疫原之額外方法以^成此等改良。此等方法包括：用於⑴有效標的抗原表位之辨識之有效程序（2)增加B細胞標的抗原表位之免疫原性之方 =，藉結合其與包括廣泛反應性&交了助手細胞之胜肤（3) 藉結合性胜肽化學及藉其進一步適應生育外族群之可變免疫反應性以擴大T細胞抗原表位之功能；及（4)藉環狀限制之導入以安定結合性特徵使得對天然分子之交又反應性最大化。合成性胜肽已被用於抗原表位圖譜以辨識蛋白質表面上之免疫顯性決定子或抗原表位，用以發展新疫苗及診斷。抗原表位圖譜是使用一系列對應於有興趣蛋白質區域之重疊胜肽以辨識參與抗體一免疫原性決定子之交互作用的部位。同樣地，抗原表位圖譜是利用長度較相當短的胜肽以精確地檢測線性決定子。已知之註冊商標為"pEpscAN,，之抗原表位圖譜之快速方法，係基於同時合成上百個長度 8到14個胺基酸之重疊胜肽，並偶合至固態支持物。此經偶合胜肽係經測試其結合抗體之能力。pepscan方法在定位線性決定子是有效的，但無法用於模擬不連續作用子邰位如FcsRI結合部位所需之抗原表位之辨識（Mel〇en等人，Ann Biol Clin，1991;49:23 1 -242)。另一替代方法根據長度範圍自1 5到6 0個殘基之—組按順序套疊及重 15- 本紙張尺度適用中國國家鮮（CNS)A4規格（210 X 297公釐)-------- 丨 7,-----------------訂------ 丨！# (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（13) 疊胜肽。此等較長胜肽可藉是由費力的一系列獨立的固相胜肽合成而確實製得，而不是藉快速及同時之PEPSCAN 合成法。所得長而按順序套疊及重疊之胜肽組可接著用於系統中如實驗免疫接種及自然感染之抗體結合分析以辨識最佳免疫顯性決定子之長胜肽，其中包含簡單不連續性的抗原表位。此方法藉Wang之HTLV I/II(US 5,476,765) 及HCV (US 5，1 06,726)之免疫顯性部位之圖譜研究例示，且它可用於篩選ΗIV中和性抗原表位之最適表現之在 gpl20序列上之精確位置（Wang等人，Science，1991 ; 254:285-288)。胜肽免疫原一般較蛋白質具有彈性且傾向不能維持任何較佳結構。因此，藉環式限制之導入以穩定胜肽免疫原是有用的。正確環狀胜肽免疫原可模擬且維持目標抗原表位的構型，因而引發抗體對真實分子部位的交叉瓦應性 (Moore，Synthetic Peptides 之第 2 章：A User，s Guide, Grant，WH Freeman 及 Company 出版：New York， 1 992，pp 63·67)。影響用於過敏藥物之免疫球蛋白E衍生胜肽之免疫原性之另一重要因子為藉與寄主細胞受體及類n MHC分子反應之Τ辅助細胞抗原表位而對免疫系統之表現。 (Babbitt 等人，Nature，1 985;3 1 7:3 5 9-36 1 )。此等通常由攜帶蛋白質提供，伴隨由於製造很好的胜肽-攜帶者蛋白質結合物之困難、大部份抗體對攜帶者反應之錯誤反應、以及攜帶者-誘導之抗原表位抑制作用等缺 IT·---τι------4^^--------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -16 -

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227241 A7 __— _B7五、發明說明（14 ) 點(Cease，Intern Rev Immunol.，1990;7:85-107; Schutze 等人，j immun〇1 ， i985 ; i 3 5:23 1 9_ 2 322)。或者，T輔助細胞抗原表位（Th)亦可藉包含Th 部位的合成胜肽提供。因此，稱為濫交Th抗原表位引發有效的T細胞幫助及可與本身無法產生有效胜肽免疫原的合成性B細胞抗原表位結合（u § 5，7 5 9，5 5 1)。設计優良之濫父Th/B細胞抗原表位嵌合胜肽可在表現多種MHC單元型之遺傳歧異性族群中的大多數成員内引發Th反應及所得抗體反應。濫交可藉衍生自有效外來抗原’如麻療病毒F蛋白質，B型肝炎病毒表面抗原、及砂眼披衣菌主要外膜蛋白質（MOMP)而提供許多已知的 >監X Th，得自病毒和細菌性病原，已顯示可有效地增強對應於十胜肱荷爾蒙LHRH之弱免疫原性胜肽 (US 5,759,5 5 1 ) 〇仿生自外來病原之 >監父T h抗原表位包括，但不限於b型肝炎病毒表面及核心抗原之輔助T細胞抗原表位（HB s Th and HBc Th)，百日咳毒素之輔助τ細胞抗原表位（ρτ Th)，破傷風毒素之辅助τ細胞抗原表位（ττ Th)，麻疹病毒F蛋白質之輔助T細胞抗原表位（MVf Th)，砂眼披衣菌主要外膜蛋白質之輔助T細胞抗原表位（CT Th)，白喉毒素之輔助T細胞抗原表位（DT Th)，鐮狀癔原蟲環孢子體之輔助T細胞抗原表位（PF Th)，曼森血吸虫三磷酸同型羑之輔助T細胞抗原表位（SM Th)、及大腸桿菌TraT之輔助T細胞抗原表位（TraT Th)。此等病原衍生之Th係列 -17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ----- 訂---- # 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（15) 於 SEQ ID NOS:2-9 及 42-52 (US 5,759,552);披衣菌助手部位Pll(Stagg等人，imniunology，1993;79:1_ 9 );以及 HBc 胜肽 50_69 (Ferrari 等人，J Clin Invest，1991;88:2 14-222) 〇 >監交Th抗原表位的大小範圍係長度自約丨5至5 〇個胺基酸殘基（US 5,7 5 9,5 5 1 )及常有共同的結構特徵及含有特定目標序列。例如，一共同特徵是兩性螺旋型，其為阿法 -螺旋型結構’螺旋之一面具疏水性胺基酸，及周圍面具電％及極性殘基（Cease等人，pr〇c Natl Acad Sci USA，1 987; 84:4249·425 3)。Th抗原表位通常包含額外的一級胺基酸型式如Gly或帶電荷殘基，接著為2 _3個疏水性胺基酸，其後依次為帶電荷或極性殘基。這種型式被稱為羅士拔（Rothbard)序列。而且，抗原表位通常遵守1，4，5，8規則，亦即正價極性殘基後之第4，5，8 位置為疏水性殘基，與具位置1，4，5及8位於相同面之兩性螺旋一致。因為所有此等結構係由一般疏水性、帶電荷及極性胺基酸組成，每個結構可同時存在於單獨的Th 抗原表位當中（Partidos 等人，j Gen Virol，91;72: 1293-1299)。大多數，並非全部，的濫交τ細胞抗原表位至少符合上述之規律之一。此等特徵可併入以設計理想之人工Th部位。有用的Th部位也包括組合性Th，併入選擇之簡併部位於理想化T h部位之设計中。在a n g等人的專利中（w 〇 9 5 / 1 1 9 9 8 )，一特別類之組合性抗原表位乃設計成，，結構 -18- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） IT,-----------------訂--------- # (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明說明（16) 合成抗原庫’’(Structural Synthetic Antigen Library) 或SSAL構築如SSAL抗原表位之Th係由圍繞在固定的殘基之結構架構經位置取代而組成。S SAL的序列可藉並列比對濫交Th的一級胺基酸序列，保留用於Th抗原表位之獨特結構之位置之相對不變殘基及提供關聯於各種MHC 限制因子之辨識位置之簡併性來決定。可變及較佳胺基酸之列表係可用於MHC-結合基序（Meister等人， Vaccine，1 9 9 5 ; 1 3 : 5 8 1 - 5 9 1 ) ° 所有的SSAL成員都是在單一固相胜肤合成中和目標B 細胞抗原表位及其他序列同時製造。Th庫序列保有濫交 Th之結合基序及對廣範圍之單型提供反應性。例如：述於WO 95/1 1 998，命名為SSAL TH1之簡併Th抗原表位係以取自麻疹病毒F蛋白質中的濫交抗原表位為模型 (Partidos等人，1991)。SSALITH1係設計為用於 LHRH目標胜肽。如同麻疹抗原表位，SSALITH1符合羅士拔（Rothbard)序列及1，4，5，8規則： 1 5 10 15

Asp-Leu-Ser-Asp-Leu-Lys-Gly-Leu-Leu-Leu-His-Lys-Leu-Asp-Gly-Leu

Glu lie Glu lie Arg lie lie lie Arg lie Glu lie Val Val Val Val Val Val Val Phe Phe Phe Phe Phe Phe Phe 帶電荷殘基Glu或Asp被加在位置1以增加圍繞Th疏水面之電荷。兩性螺旋的疏水面係藉在2、5、8、9、1 0、 1 3和1 6的疏水性殘基維持，此2、5、8、9、1 0、3和1 6 位置具可變性以提供可和廣泛之MH C限制因子結合之能 -19- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱）丨 Τ-—'丨 --------------訂--------- (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 1227241 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（17) 力。SSAL特徵之淨作用是擴大對人工Th2免疫反應性範圍（W0 95/1 1 998) 〇以胜肽技術和上述之胜肽設計方法而設計成的胜肽免疫原’即，精確抗原表位圖譜、環狀限制、及濫交Th抗原表位或經理想化濫交Th之併入、以及理想化SSal Th抗原表位，為本發明之有效合成胜肽免疫球蛋白E免疫原的基礎。此類胜肽較佳為用於適當本案及由於以最適位置及環化作用之免疫球蛋白E之有效展現之安全性，及用於由於廣泛反應性T h感應性之免疫效力。發明概述本發明提供用於藉主動免疫治療免疫球蛋白E中介之過敏疾病之新頑合成性胜肤結合物組合物。免疫作用謗導在經免疫寄主中對免疫球蛋白E之作用子部位具專一性之高效價非過敏原性多株抗體之產生。如此可避免巨大細胞/ 嗜鹼性細胞之激發及活化且下游_調節免疫球蛋白E合成。治療係藉寄主以胜肽組合物之免疫接種而達成，其中之每個胜肽包括修飾自人類免疫球蛋白E艾普西隆（ε)重键之 CH3區域片段（如SEQ ID Ν0:1之胺基酸413-435或 SEQ ID NO: 5)或得自其他物種之同源序列（如SEQ ID Ν Ο S : 6 - 8及8 4)之目標抗原胜肽序列（在此是指” I gE -CH3區域抗原”或”IgE- CH3區域抗原胜肽”）。一般而言，IgE- CH3區域抗原為介於長度約25及約29 個胺基酸間之胜肽序列，為實質上同源於哺乳動物免疫球蛋白E抗体之艾普西隆（ε)重鏈的CH3區域的片段，且含有 -20- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-- ϋ ·1 ϋ I 訂---- # 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241

五、發明說明（I8 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製二個相隔約23個胺基酸的半胱胺酸殘基。在本文中，實質 ^同源=除了二個半胱胺酸之外，其可藉插人或取代而最同、、、勺四個其他胺基酸取代物（較佳為{呆留性取代亦可進行。較佳地，目標部位係修飾自如下之天然產生的免疫球蛋白E序列； (1) 在4 13位置或其同源位置的N端插入一半胱胺酸殘基，除非半胱胺酸已存在於天然序列之4丨3或4丨4位置。 (2) 在天然目標序列415到434位置中，對任何天然半胱胺酸進行保留性取代（較佳是用絲胺酸）。〜 (3 )在4 3 5位置或同源位置的c端插入一半胱胺酸，除非半胱胺酸已存在於天然序列之43 5或43 6位置。 (4)在保有的半胱胺酸間形成一雙硫鍵使產生環狀結構。此等結構亦可包含取自免疫球蛋白E 413-435片段端點之1 - 5個額外胺基酸，排除維持單一雙硫键環型結構。

本發明提供對人類免疫球蛋白E為最佳的免疫球蛋白E-CH3區域抗原胜肤，具有序列Cys-Gly-Glu-Thr-Tyr_ Gln-Ser-Arg-Val-Thr-His-Pro-His-Leu-Pro-Arg-Ala-Leu-Met-Arg-Ser-Thr-Thr-Lys-Cys(SEQ ID N Ο : 5)。人類免疫球蛋白E目標部位係經由非天然端點半胱胺酸及絲胺酸殘基取代天然序列之半胱胺酸殘基而環化。藉包括IgE- CH3區域抗原之胜肽免疫原所引發的抗體係與人類免疫球蛋白E有交叉反應性並抑制由人類免疫 -21 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） IT,---r ·ι--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（19) 球蛋白E所引導之人類嗜鹼性細胞的致敏性。同樣地，其他物種的免疫球蛋白E之對應目標部位可衍生自相關物種之同源ε鏈片段。例如，此等目標序列可取自示於表1(SEQ ID NOS: 2,3 and 4)的狗、大鼠及小鼠的 ε 序列，或由 Navarro 等人，Molec· Immun〇1 ， 1 995，32: 1-8提供之馬免疫球蛋白_CH3序列。另外的免疫球蛋白E-CH3區域抗原胜肽（SEQ ID NOS: a n d 8 4)序列，可衍生自此等序列。較佳地，本發明的IgE_ CH3區域抗原係經由化學偶合共價連接到載體蛋白質而提供較多的免疫原性，或較佳經共價連接到合成性免疫刺激成份，如經由直接合成之(監交 T h抗原表位。載體蛋白質和免疫刺激成份之特定實例係經提供，例如鎖孔貝血藍蛋白（KLH)載體、人工的Th (SEQ ID NO:9)、人工的 SSAL Th (SEQ ID NOS:10 及11)、病原菌衍生的Th (SEQ ID NO :12)、以及取自耶爾森氏菌（SEQ ID NO :1 3)免疫刺激性侵染素胜肽 (Inv) 〇

本發明之完整合成性胜肽結合物可以下式表示： (A)n-(IgE-CH3 區域抗原）-(B)0-(Th)m-X 或 (A)n-(Th)m-(B)0_(IgE-CH3 區域抗原）-χ 或

(IgE-CH3 區域抗原）-(B)0-(Th)m-(A)n-X 或 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） —-I·-----------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（20) (Th)m-(B)0-(IgE_CH3 區域抗原）-(Α)0-Χ 其中每個A各自為胺基酸或一般免疫刺激序列；每個B係選自下列所組成之群，胺基酸 -NHCH(X)CH2SCH2CO-，-NHCH(X)CH2SCH2CO( ε -N)

Lys- 5 _NHCH(X)CH2S-琥珀醯亞胺基（ε -N)Lys_，and -NHCH(X)CH2S-(琥珀醯亞胺基）-; 每個T h各自為胺基酸序列，其組成輔助T c e 11抗原表位或免疫增強類似物或其片段；

IgE-CH3區域抗原是長度介於約25至約29個胺基酸的胜肽，係實質上同源於哺乳動物免疫球蛋白E抗体之艾普西隆（ε)重鍵之CH3區域之以SEQ ID NOS:5-8及84代表的片段之一，且包含二個相隔約23個胺基酸殘基之半胱胺酸殘基； X是胺基酸α-COOH或a-C0NH2 ; η是由0至約1 0 ; m是由1至約4 ;及〇是由0至約10 更特別的，IgE-CΗ3區域抗原係選自相似序列包含 SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID Ν Ο : 8哺乳動物I gE _ C Η 3抗体之艾普西隆（ε)重鍵之同源序列及其交叉反應及中選免疫原性功能類似物所組成之群。 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21G X 297公f ~""" — 71---1}--------------訂--------- # (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（21) 本發明之胜肽組合物包含自約2 5至約1 0 0個胺基酸殘基之胜肽免疫原，較佳為自約2 5至約8 0個胺基酸殘基及更佳為自約4 5至約6 5個胺基酸殘基。亦提供例行併入疫苗調配物之佐劑及/或遞送媒劑及其他成份，及劑量指示使得產生對抗目標免疫球蛋白E作用子部位之免疫治療性抗體。如此一來可抑制嗜鹼性細胞和巨大細胞藉由循環系統中的I gE-之改敏作用。此抑制機制，藉抗體中介及藉本發明胜肽組合物謗導，將明確減少或消除免疫球蛋白E中介之病狀，然而留下不影響之免疫系統之防禀成份，如I g G。發明詳細說明本發明係關於新穎胜肽及胜肽結合物，用於產生對免疫球蛋白E之F c部份之第三區域上的目標作用子部位即ε趟之CH3區域具專一性之高效價多株抗體。簡言之，用於此中之用語胜肽聚合物是指包含共價連結到IgE-CH3區域抗原胜肽的Th抗原表位之分子，經由_ 般胜肽鍵以形成單一較大胜肽，或經由其他型式之共價連接。本發明之高部位專一性之組合物使抗^ E抗體之產生降到最小，此抗-IgE抗體可與嗜鹼性細胞/巨大細胞表面的 FcsRI結合之雙價免疫球蛋白ε交叉聯結，並藉此引發非過敏性抗-IgE抗體之產生。因此，本發明係進一步關於用於治療哺乳動物，包含人類，之免疫球蛋白E中介之過敏疾病之安全方法。 I --"ΓΪ--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -24- 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（22 ) 目標抗原序列係藉有用於免疫反應之人類免疫球蛋白E 的C Η 2和C Η 3區域之候補部位之完全篩選而決定。根據 Helm等人（ 1 9 8 8)和Presta等人（ 1 994)之揭示，起始於免疫球蛋白E之C Η 2區域的C端區域及經由包含潛在作用子部位之CH3區域進行之長區域，CH2和CH3部位係經選擇用於合成為胜肽免疫原。在免疫球蛋白Ε構型上之可能環狀結構係推竹自根據H e 1 m等人（E u r J I m m u η ο 1， 1991:21: 1543-1548)所發表的人類免疫球蛋白ε三級結構之理論模式（可由 Brookhaven National Laboretory 之資料庫 http://www.pdb.bnl.gov/pdb.bin/pdbids 得到此三級結構）。雙硫鍵結環係併入選擇出的胜肽免疫原之設計中用以模擬預期環型之位置，使得經設計的目標抗原胜肽及天然的免疫球蛋白E分子間之交叉反應可能性達到最大。有潛力的目標抗原部位係藉化學偶合至KLH接著固相胜肽合成，或藉共價連接至濫交Th抗原表位及藉連價合成其它免疫刺激序列（表2)而合成及製得免疫原性。數種部位併入特定雙硫鍵而合成為環狀胜肽，用以穩定可動胜肽成合理預期的免疫球蛋白E環狀結構之構形。有潛力之有用作用子目標部位係接著藉超免疫血清製備物及抗血清之對人類免疫球蛋白E的交叉反應之測試而辨識。係自血清之對人類免疫球蛋白E具高交叉反應性的抗体係經純化及評估抑制免疫球蛋白E中介之人類嗜鹼性細胞之致敏作用的能力。藉SEQ ID NOS : 1 4和1 5之胜肽引發的抗胜肽抗體顯示對免疫球蛋白E之強交叉反應性（表2 )，且在 -25- irl--T 一--------------^--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227241 A7 五、發明說明（23 ) 組織胺釋放分析中較能持續地表現高抑制活性（表3)。此目標抗原表位為SEQ ID NOS: 14和15對應於表1所示之免疫球蛋白E CH3區域的片段。表丨顯示人類免疫球蛋白 Ε ε重键之CH2，CH3和CH4區域之胺基酸序列，與取自狗、貓及老鼠之同源序列並列比對。係經劃線於表丨且在人類ε鏈序列上的目標部位經測定用於作為本發明之I _ CH3區域抗原之代表包含人類ε鏈殘基413_435。在狗、大鼠及小鼠蛋白質之同源目標序列也列於表丨。為之同源序列為Navarro 爭人，Molec Immunol.，1995 ; 32:1·» 8之胺基酸序列之殘基2 9 6 - 3 1 8。劃線之目標免疫球蛋白E CH3作用子部位，及本發明之衍生IgE- CH3區域抗原胜肽，為短胜肽序列，當本身被合成時，通常具微弱或不具免疫原性，較多為自我抗原。此等短胜肽可藉化學偶合至載體蛋白質而具有免疫潛力，例如，鎖孔貝血藍蛋白（KLH)。此等，，IgE_CH3區域抗原 -載蛋白質聚合物，’為基本的免疫原之缺點為此抗原相較大載體蛋白質具較弱免疫抗原性，其為關於胜肽-載體蛋白質結合物之固有的問題。藉此種結合物產生的多數抗體乃對載體蛋白質為功能的抗體。本發明之較佳免疫原為使不相關抗體之產生最小之整體合成性胜肽，並因此引發較集中於目標IgE-CH3區域抗原，例如SEQ ID NDS :5-8 及84，之免疫反應。然而’因為本發明之短1§£-〇113區域抗原胜肽（例如 SEQ ID NOS:5-8及84)是不具免疫原性的τ細胞相關抗 — Tt Γ； - I I I---I ^--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 26-

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發明說明（24 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1表位匕們依賴外來的Th抗原表位之免疫原性。此為 k供本明之較佳胜肽作為共價聯結之濫交η抗原表 ^本&月之免疫原引發部位專一性之免疫反應性以提供 2用子邵位灸精確標的並因此製造非交互聯結之抗_IgE抗體。所得部位專—性抗體抑制致敏作用及過敏反應，但不會謗導自發性的去顆粒作用。、提供t本發明之特定實例為本發明之免疫原胜肽結合物之具實施例。此等實例係提供用以連接合成性免疫刺激成份至IgE-CH3區域抗原胜肽（例如SEQ ID n〇S:5-8及 84)，使得有致交叉反應性抗體係廣泛產生於遺傳歧異性之寄主族群’對抗I gE cΗ3區域上之目標部位。這些抗 I gE抗體為非過敏原性及對免疫球蛋白Ε (實例2和實例3 ) 具專一性。此等抗體，依次，導致組織胺釋放之抑制且減少免疫球蛋白Ε中介之反應，因而能有效率地治療及/或預防免疫球蛋白Ε中介之過敏性疾病。對主動免疫接種而言，用語，，免疫原”在此中是指關於可謗導對免疫球蛋白Ε ε重鍵第三個區域上的作用子部位（例如SEQ ID NOS:5-8及84)之抗體之胜肽結合物組合物，導致抑制或壓抑免疫球蛋白E中介之嗜鹼性細胞和巨大細胞的去顆粒作用。本發明之胜肽組合物包括I gE _ C Η 3區域抗原胜肽，較佳為I g Ε — C Η 3區域抗原胜肽經由化學偶合連接至載體蛋白質，更佳為IgE_CH3區域抗原胜肽經化學偶合連接至濫交輔助T細胞抗原表位，及最佳為含有IgE-CH3區域抗原序列及濫交輔助T細胞抗原表位序列之完整 -27- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -I Ί一 --------訂---------^9. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 ΚΙ

五、發明說明（25) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製合成性胜肽。載體蛋白質係經由化學偶合共價連接至〗gE_ CH3區域抗原胜肽，較佳以間隔區(;例如1^3-1^3_1^0。

Th胜肽（例如SEq ID N〇s:9_12)經由化學偶合或較佳經直接合成’較佳以一間隔區（例如〇丨y _ G丨y )而共價連接至IgE-CH3區域抗原胜肽（例如seQ ID NOS:5-8及 84)，使得鄰接於IgE_cH3區域抗原序列的N或C端，而引發有效抗體反應。免疫原視需要也可包含一般免疫刺激胺基酸序列’例如：一對應於得自細菌耶爾森氏菌菌種 (Brett 等人，Eur J Immunol，1 993;23:1 608- 1 6 14 )之侵染素蛋白質之區域。一般的免疫刺激序列可包含聯結到 Th胜肽之間隔區。

此次發明之完整合成性胜肽可以下列公式表示： (A)n-(IgE-CH3 區域抗原）-(B)0-(Th)m-X 或

(A)n-(Th)m-(B)0-(IgE-CH3 區域抗原）-X 或

(IgE-CH3 區域抗原）-(B)0-(Th)m-(A)n-X 或 (Th)m-(B)0-(IgE-CH3 區域抗原）-(Α)0-Χ 其中每個A各自為胺基酸或一般性免疫刺激序列；每個B係選自下列所組成之群：胺基酸， -NHCH(X)CH2SCH2CO- ^ -NHCH(X)CH2SCH2CO( ε - -28 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱）丨 Τ, --------------訂--------- (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 五、發明說明（26) N)Lys_， (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -NHCH(X)CH2S-琥珀醯亞胺基（e-N)Lys-，及 -NHCH(X)CH2S-(琥珀醯亞胺基）·；每個Th是各自為胺基酸序列，其組成辅助τ細胞抗原表位或免疫增強類似物或其片段；

IgE-CH3區域抗原代表如定義於此中之igE-CH3區域抗原胜肽之序列（或其具交叉反應性及免疫原性的功能類似物）。 η是自0至約1 0 ; m是自1到約4 ;及〇是自〇到約1 〇本發明的胜肽免疫原包含自約2 5至1 0 0個胺基酸殘基，較佳的是自約2 5到約8 0個胺基酸殘基，更佳為自約 45到65個胺基酸殘基。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製當A為胺基酸，它可為任何非天然產生或任何天然產生的胺基酸。非天然產生的胺基酸包含，但不限於，D - α -胺基酸，Θ -丙胺酸，鳥胺酸，正白胺酸，正纈胺酸，經基脯胺酸，thyrixine，7 胺基丁酸，高絲胺酸，瓜胺酸及其類似物。天然產生的胺基酸包含丙胺酸，精胺酸，天門冬醯胺，天門冬胺酸，半胱胺酸，麩胺酸，麩胺醯胺，甘胺酸，組胺酸，異白胺酸，白胺酸，離胺酸，甲硫胺酸，苯丙胺酸，脯胺酸，絲胺酸，蘇胺酸，色胺酸，酪胺酸及纈胺酸。而且，當η是大於1，二或更多的A為胺基酸時，每一胺基酸各為相同或不同的。 -29- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（27) 當A是侵染素區域時，它為得白耶爾森氏菌種的侵染素蛋白質之免疫刺激抗原表位。免疫刺激性質導致侵染素區域與存於T細胞，特別是經活化免疫或記憶τ細胞，上的 β 1整聯蛋白分子交互作用之能力。Brett等人（Eur J Immunol，1 993 )已描述侵染素區域與ρι整聯蛋白交互作用之特定序列。用於連接至濫交Th抗原表位之侵染素區域（Inv)之較佳具體實施例已先前描述於us 5,759,551，其併入此中參考。此ιην區域具有序列： Thr-Ala-Lys-Ser-Lys-Lys-Phe-Pro-Ser-Tyr-Thr-Ala_Thr-Gln-Phe (SEQ ID NO:13 )或其得自另一耶爾森氏菌侵染素蛋白質之對應區域之免疫刺激同源物。此等同源物因此可包括胺基酸殘基的取代、缺失或插入，以適應細菌菌株間的變異性，但排除保留免疫刺激性質之同源物。免疫刺激同源物亦可視需要包括間隔區，經由其連接至T h抗原表位。在一具體實施例中，η是3且（A)3為侵染素區域 (Inv)、甘胺酸、及甘胺酸，以此順序聯結。 (B)〇為視需要之間隔區及包括如上所述之天然產生或非天然產生的胺基酸。每個B各為相同或不同。載體蛋白質以間隔區（例如L y s - L y s _ L y s )經由化學偶合共價連接至胜肽。B的胺基酸也提供間隔區例如Gly_Gly，其介於濫交Th抗原表位（例如SEQ ID NO : 9)及IgE-CH3胜肽 (例如·· SEQ ID NO : 5)及其交叉反應性及功能性免疫類似物之間。除了物理上自B細胞抗原表位分離Th抗原表位 -30- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ir，— τ;--------------訂--------- # (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 五、發明說明（28) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 外，即IgE-CH3胜肽（例如：SEQ ID NO : 5)及其免疫類似物，間隔區可破壞由Th抗原表位和IgE-CH3胜肽（例如：SEQ ID NO : 5)及其交又反應及功能性免疫類似物之聯結產生之任何人造二級結構，並藉此消除Th及/或B 細胞反應間之干擾。B的胺基酸也可形成間隔區，其可作為彈性絞缝以增強Th及I gE區域的分隔。編碼彈性絞鏈之序列之實例係發現於免疫球蛋白重鏈絞鏈區域。彈性絞鏈序列通常富含脯胺酸。一特別有用之彈性絞鏈係如序列：Pro-Pro-Xaa-Pro_Xaa-Pro ( SEQ ID NO:16 )，其中Xaa為任何胺基酸，且較佳為天門冬胺酸。由b的胺基酸造成的構型分隔允許表現的胜肽免疫原及適當的Th 細胞及B細胞間具較有效之交互作用，並因此增強對Th 抗原表位及抗体引發的抗原表位及其交叉反應及功能免疫類似物之免疫反應。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Th為包含Th抗原表位的胺基酸序列（天然或非天然胺基酸）。T h抗原表位可由連續性或不連續性之抗原表位組成。因此並非每個T h的胺基酸為抗原表位的必需部份。因此，Th抗原表位，包括Th抗原表位之類似物及片段，可增強或刺激對IgE-CH3(亦即SEQ ID NO : 5-8及84，及其免疫抗原性類似物）抗原胜肽的免疫反應。具有免疫顯性及濫交的這類Th抗原表位對動物及人類族群與歧異的 MHC 種類（Partidos 等人，1991; US 5,75 9,5 5 1 )具有高度且廣泛之反應性。本胜肽的Th區域有自約1 〇至約5 0 個胺基酸且較佳為自約1 0至約3 0個胺基酸。當存在多T h -31 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（29 抗原表位（i.e. m22)時，每個Th抗原表位各為相同或不同。Th片段是Th抗原表位之鄰接部份，其足以增強或刺激對IgE-CH3胜肽（如SEQ ID NO:5)及其免疫類似物之免疫反應。本發明的T h抗原表位包括如實例，但不限於，致病原付生之B型肝炎病毒表面及核心抗原辅助τ細胞的抗原表位（HBs Th和HBcTh) ’百日咳毒素辅助τ細胞抗原表位 (P T T h ) ’破傷風毒素輔助T細胞抗原表位（τ τ τ h )，麻疹病毒F蛋白質輔助T細胞抗原表位（MVF Th)，砂眼披衣菌主要外膜蛋白質輔助T細胞抗原表位（CT Th)，白喉毒素輔助T細胞抗原表位（D T T h )，肺氏黴漿菌環孢子體輔助T細胞抗原表位（PF Th)，曼森血吸虫三磷酸同型羑輔助T細胞抗原表位（SM Th)，及大腸桿菌Tra T輔助T細胞抗原表位（T r a T T h)。致病原衍生之T h序列係列示如 SEQ ID NOS:2-9 和 SEQ ID NOS:42-52 (US 5,75 9,5 5 1 );如披衣菌輔助部位Pll(Stagg等人， Immunology，1993;79:l-9)(也列於此如 SEQ ID NO:12);及如 HBc 胜肽 50-69(Ferrari 等人，J Clin Invest，1991 ; 88:2 14-222);及併於此中作為參考。本發明之典型的Th部位亦包含人造的Th部位，命名為，，Syn Th (1，2,4)，，（ SEQ ID NO : 9)、π 人造的 SSAL Th 部位 ’，、n(l，4,9 PALINDROMIC) Th”、，’IS(1，4,9 PALINDROMIC) LF Th，，、和 ’’IS (1，4,9 PALINDROMIC) LF 簡化的 Th”（ SEQ ID NOS:1〇，11 -32- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） IT·— τ；------—I------------ (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) A227241 A7

五、發明說明（30 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 and 60 )，及其免疫上功能類似物。功能性Th類似物包含免疫增強性類似物，交叉反應性類似物及任何此等Th 抗原表位上之片段。功能性Th類似物進一步在Th抗原表位之自1至約1 0個胺基酸殘基之保留性取代，增加，刪除及插入，其基本上未修飾Th抗原表位之Th刺激功能。本發明的合成性胜肽一般為約5 〇至約9 0個胺基酸，且包含： (a) 免疫刺激性之侵染素區域， (b) 輔助T細胞（Th)抗原表位，及 (c) IgE-CH3區域抗原胜肽較特定地，本發明的合成性胜肽係以下式所述： (A)n-(Th)m_(B)0-(IgE-CH3 區域抗原）-X (A)n-(IgE-CH3 區域抗原）-(B)0-(Th)m _X， (IgE-CH3 區域抗原）-(B)0-(Th)m -(A)n-X，和 (Th)m -(B)0- (IgE-CH3 區域抗原）-(A)n-X Th抗原表位係視需經由間隔區而連接至IgE-CH3胜肽之N端或C端及其交叉反應及功能免疫上類似物。本發明之較佳的胜肽免疫原是包含IgE-CH3區域抗原胜肽（例如SEQ ID NO:5)(或其免疫上類似物）和Th胜肽，及視需要為Inv ( SEQ ID NO:13)。在較佳之具體實施例，Th 抗原表位為 HBs Th，HBc Th，MVF Th，PT Th，TT Th，CT Th (如 SEQ ID NO:12)或人造的 Th ( SEQ ID NOS: 9·1 1及60 )，或其功能免疫原性類似物，及視需要的，A為Inv ( SEQ ID NO:13 )，經由（B)〇間隔區 -33- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）丨 ΓΊ.· J------衣--------訂--------- (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（31 ) 如Gly-Gly連接。

IgE-CH3區域抗原的結構包含取自人類免疫球蛋白E 之CH3區域之胜肽序列（SEQ ID N0:1之胺基酸413-435)，或由其他物種而來的同源序列（如SEQ ID N0:6-8及8 4 )及經由下列修飾者： (1) 目標部位係修飾自天然產生的免疫球蛋白E序列，藉插入半胱胺酸殘基位置413之N端或同源序列，除非半胱胺酸已存於天然序列之4 1 3或4 1 4。 (2) 藉絲胺酸取代位置4 1 8之天然半胱胺酸或同源非人類序列之對應位置或天然目標序列之其它半胱胺酸（除非該半胱胺酸係存於位置4 1 3或4 1 4及4 3 5或4 3 6) (3 )位置4 3 5或同源位置之C端插入一半胱胺酸，除非在天然序列的4 3 5或4 3 6位置上已存有半胱胺酸。 (4)在保留的半胱胺酸間形成雙硫鍵以產生環狀結構。該環狀結構亦包括取自免疫球蛋白E之4 1 3 -4 1 5片段之一端點之1 - 5個胺基酸，排除經保留之單一雙硫環狀結構。本發明提供對序列Cys-Gly-Glu-Thr-Tyr-Gln_ Ser-Arg-Val-Thr-His-Pro-His- Leu-Pro-Arg-Ala-

Leu - M et-Ar g-S er-Thr-Thr-Ly s - C y s (SEQ ID N0:5) 之人類I gE之最佳目標抗原。人類免疫球蛋白e目標抗原是經由非天然端點半胱胺酸及第1個絲胺酸殘基取代天然序列的半胱胺酸殘基而環化。藉包括I gE _ C Η 3區域之胜肽免疫原所引發之抗體與人類IgE產生交叉反應並抑制人類免疫球蛋白E對人類嗜驗性細胞之致敏作用。 -34- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐)— i^i _ϋ 1 —Bi ·ϋ .1·— ϋ · ϋ ·ϋ 1···· 1 ϋ ϋ-, 0 ϋ ϋ· · ^1 i^i ·ϋ ϋ I I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 五、發明說明（32) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 同理，對其他物種之IgE之對應IgE-CH3區域抗原序列可竹生自相關物種之同源6鍵片段。例如，此等目標序列可取自狗、大鼠及小鼠6鏈序列（示於表1之S E Q ID NOS : 2，3，4，及Navarro等人所發表的特定序列及

IgE-CH3區域抗原序列如：SEQ ID NOS : 6，7，8及 84也可推得。根據本發明之I g E - C Η 3區域抗原胜肽交叉反應性及之免疫上功能類似物（例如：S E Q ID Ν 0 S : 6，7，8及8 4 ) 可進一步包括自1至約4個胺基酸殘基之保留性取代，增加’刪除或插入，排除所得之胜肽類似物可*IgE_CH3胜月太（例如：SEQ ID NOS : 6，7，8及84)引發免疫反應交叉反應者。保留性取代，增加及插入可藉由如此中定義之天然或非天然胺基酸來達成。含有本胜肽免疫原與二或多個T h抗原表位之混合物之胜肽組合物可在廣泛族群中增強免疫功效並因此提供對 I gE - C Η 3區域抗原之改良性免疫反應（例如：$ E Q ID NOS : 5-8 及84) 〇經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明的胜肽免疫原可藉一般技藝人士熟知之化學合成方法來製備。見，例如，F i e 1 d s等人，s y n t h e t i c Peptides: A User’s Guild，之第三章，Grant， W.H.Freeman & Co. ^ 編著，New York， NY， 1 992，第77頁）。當胜肽免疫原包含SSAL之Th時，在所給可變位置之替代性胺基酸之併入係藉提供特定為該位置之胺基酸混合物而完成。因此，使用固相合成之自動化美 -35- 本紙張尺度刺中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公髮） 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（33 ) 利弗德（Merrifield)技術合成胜肽，即以t_B〇c4Fmoc 化學使用側鏈保護胺基酸保護α -NH2基，例如，應用生物系統胜肽合成儀430Α或431型（Applied Biosystems Peptide Synthesizer Model 430A or 431) ° 所欲胜肽免疫原完成組分後，則依據標準程序處理樹脂以自樹脂切斷胜肽，並去除胺基酸側鏈上的功能基。游離胜肽係經純化，例如藉HPLC，並經生化上特徵化，例如’藉胺基酸分析，質譜分析及/或藉定序。胜肽之純化乃特徵化方法為一般該項技術者所熟知的。製造本發明之包含IgE及Th部位之合成性胜肽之其它化學方法包括經由”硫醚”鍵結形成之_乙醯化及半胱醯基化胜肽之接合。例如，可添加半胱胺酸至包含Th胜肽的c 端，及半胱胺酸之硫醇基可用於形成共價鍵結至親電子基’如離胺酸殘基上的N氯乙醯基·修飾的或順丁晞二醯亞胺-衍生的α -或ε -胺基，連接至igE-CH3胜肽（例如： SEQ ID NO:5)或其交叉反應性及功能免疫上之類似物的 N端。以此方式，可得到具Th-( IgE-CH3區域抗原），或其反向物（IgE-CH3區域抗原）-Th之構築體。本發明之免疫原也可經聚合化。聚合作用可經由免疫原和父互聯結劑之反應而完成。例如，使用例行的方法學，藉戊二醛與離胺酸之-NH2基之間的反應。以另一方法，合成性免疫原，例如” A_Thm_間隔區_(IgE_CH3區域抗原）’’，可利用添加一額外的半胱胺酸至合成性免疫原之N端而與另一免疫原聚合化或共聚合化。半胱胺酸n端 -36- 本紙張尺度適时@國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱）丨 ΓΓ 丨 1:--------------訂--------- (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227241 A7 --------— B7______ 五、發明說明（34 ) 的硫醇基可用於與離胺酸殘基（其使連接至分支的聚一離胺酿基核心分子之N·端（例如K2K，K4K2K或K8K4K2K) 的鹵乙醯基修飾的或順丁缔二醯亞胺衍生的α _胺基或ε 胺基形成’’硯醚’’鍵，此免疫原可經由所欲胜肽構築體直接在分支的聚離胺醯基核心樹脂上合成而製備成分支狀聚合物。（Wang等人，Science，1991;254:285-288)。或者’較長的合成性胜肽免疫原可藉熟知的重組Dn A 技術來合成。分子選殖技術中之很多標準手冊提供詳細的流程藉重組DNA及RNA之表現以製造本發明之胜肽。建構編碼本發明胜肽之基因（例如’包括S e Q I d N 0 S : 5 - 8 and 8 4之免疫原性胜肽及其他物種專一性同源物），胺基酉艾序列係反轉譯成核酸序列，較佳使用用於個體之最適密碼子並可針對表達基因之個體生其中基因將被表現。另外，編碼胜肽之基因係經製得，典型地藉合成重疊之寡核芬酸，其編碼胜肽及必要的調節要素。合成性的基因係經組合並插入所欲之表現載體。涵蓋於本發明之合成性的核酸序列包括彼等編碼本發明胜肽、免疫上功能同源物及特徵在於改變非編碼序列但不改變藉此編碼胜肽之免疫原性質之核酸構築體。包括編碼本發明胜肽之序列之核酸亦經提供。插入合適轉殖載體及重組體之合成基因可被得到及特徵化。胜肽接著在適合於所選表現系統及寄主之環境下表現。胜肽藉標準方法純化及特徵化。本發明之核酸本身可用作稱為” D N A疫苗，，之成份。在本發明之具體實施例中，本發明之免疫原胜肽之表現係謗 -37- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱）丨”—r;--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 、發明說明（35) 導於病患本身之細胞中，藉導入編碼胜肽之核酸於彼等細胞。製造及使用DNA疫苗之方法係揭示於美國專利 5,5 80,85 9 ，5,5 89,466 和 5,703,0 5 5 ;亦見於 W0 97102840 及 W. McDonnell 及 F· AsKari，New Engl. L Med· ’ 1996，3 34:2-45，其所有皆併入此中作為參考。本發明之胜肽組合物之功效可藉活體外分析而建立，其中寄主動物係經本發明之胜肽組合物免疫接種及所得抗體藉I gE顯示，抑制啥鹼性細胞的致敏作用，如實例2所示，唯活體内功效之建立可藉物種適合的胜肽組合物注射於寄主動物（例如，以包含SEQ ID NOS:24及/或25之免疫原調配物來免疫接種老鼠），接著藉監測對IgE-CH3胜肽及其交叉反應及功能免疫上同源物之免疫反應，詳見實例5。本發明之另一觀點提供包含免疫上有效量之一或多個本發明之胜肽免疫原之組合物於醫藥上可接受之遞送系統。因此，該胜肽可利用佐劑、醫藥上可接受的載劑、或例行性用於疫苗組合物之成份而調配成醫藥組合物。可用於本發明中之成份為佐劑或包含鋁之乳化劑、不完全弗羅依特氏（Freund，S)佐劑、力波席（Hp〇syn)、皇角甞、角盥烯、L121、依馬斯根（emulsigen)、單磷醯基脂質

A(MPL) 、 QS21 、 ISA51 、 ISA35 、 ISA 206及ISA 720以及和其他已知有效用之佐劑及乳化劑。調配物包括用於立即釋出及/或持續性釋出劑型、以及用於謗導全身 -38- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

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1227241 五、發明說明（36 ) 性免疫及/或局部黏膜性免疫之調配物，其可藉，以微粒子包埋免疫原與免疫原共同投藥。此類調配物可由熟習該項技術者易於測定，及此類調配物之製備，保存及殺菌方法為技藝人士所熟知者。相關一般技術人員即可定出此劑型及其製備、保存以及無菌消毒等方法。本藥物可經任何便利的途徑投藥，包括皮下、口服、肌内或其他非經腸或經腸的途徑。相似地，藥物可以單一劑量或多次劑量來施用。免疫接種的程序為一般技藝人士易於決定者。本發明之醫藥組合物包含有效量之一或多個本發明之的胜肽免疫原及醫藥上可接受之載劑。此種組合物在適當劑量單位型式為一般每公斤體重含有〇 · 5微克到1亳克的免疫原。當分成多次劑量遞送時，其可方便地分成每單位劑型合適當量。例如，初次劑量，如〇 · 2 · 2 · 5毫克時；較佳為1亳克之本發明胜肽組合物代表之免疫原，可藉注射投藥，較佳為肌内，接著為重覆（加強）劑量。劑量係依年齡、體重病患之一般健康而定，為疫苗及治療技術所習知者。合成性IgE-CH3胜肽免疫原之免疫反應可藉經由包埋於或在生物可降解之微粒子之遞送而改良（述於〇，Hagan 等人（Vaccine，1991;9:768_771))。此免疫原可含或不含佐劑而包膠於生物可降解之微粒子，以加強免疫反應，包含局部性黏膜免疫反應，其可特別應用於黏膜部位之過敏反應，及提供用於持續或週期性反應，口服投藥及 -39- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）丨”----------------訂--------- # (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227241 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（37) 局部投藥之時間控制之釋出（0，Hagan等人，1991. Eldridge 等人，M〇iec Immun〇1，1991; Μ? 294) 。 . * 本發明之醫藥組合物之使用方式係類似於疫苗，用於預防異位性過敏反應包含過敏性鼻炎，食物性過敏、氣喘、咽喉炎、跳蚤過敏皮膚炎及其他由IgE所中介之過: 反應。所有前述的專利及，文獻參考資料係併入此中作為參考。特定胜肽及胜肽結合物免疫原係提供於下列實例以說明本發明，此等實例只用以說明，並不以任何方式構成^ 發明範圍之限制。實例1 人類免疫球蛋白E分子上之可能作用子部位之確認胜肽設計人類免疫球蛋白E之ε重鍵CH2和CH3區域内之部位係經篩選作為胜肽模擬，依據Helm等人（1 988)和presU 等人（1994)所揭示之ε鏈的長片段，其重疊此等參與免疫球蛋白Ε結合到Fee RI受体之區域。這類部位的序列係合成為目標部位胜肽’並藉下列方法使之成為抗原（丨）經由化學偶合至較大的載體蛋白質如KLH而聯結它們或（2)以溢交Th和Inv(SEQ ID NOS..13)聯結至目標部位之1^端以建構胜肽。此等區域中之專一性部位係經選擇作為胜肽，用於根據用於人類IgE之表面暴露環Br0〇khaven 3 -40- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ir、 r; --------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 五、發明說明（38) (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) 維模型而預測之環化作用。提供之立體模型 (http://www.pdb.bnl.gov/pdb.bin/pdbids)，特定的環狀壓迫係裝設於彼等胜肽之設計中使得抗原及天然I g E 分子間之交叉反應最大化。因此，數種合成性構築體是藉 Brookhaven模型預測之環狀結構模擬，以導入未發現於天然序列之半胱胺酸以提供特定位置之雙硫鍵環。在有些例子中，以絲胺酸取代天然存在之半胱胺酸，以避免不利此模型之結構的形成。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製列於表2的構築體。以*標記在表2之敘述欄之胜肽係以半胱胺酸雙硫鍵環狀。在表2中以括號來表示之胺基酸序列為已插入天然序列用於環化作用之半胱胺酸殘基，表 2中以底線來標記之胺基酸序列為已插入、取代天然殘基或參與雙硫键之其它殘基。其他胜肽為線性。第三列中標記為a的胜肽代表IgE-CH2/3或-CH3抗原胜肽，藉傳統戊二醛或MBS (m-順丁婦二醯亞胺苄基-N-羥基琥珀醯亞胺酯，Pierce Chemical公司，目錄No· 22510)偶合反應化學聯結到KLH載體蛋白質。第三列中標記為b的胜肽是和T h部位並列合成為免疫球蛋白E抗原胜肽。所用之τ h 邵位包含取自B型肝炎病毒之HBs19_32Th、取自麻療病毒之MUf Th、和取自百曰咳毒素之PT149_146Th(參考 US5,759,5 5 1 )、稱為 P11 之 CT Th(Stagg 等人，1 993)、及稱為，，1，4,9 PALINDROMIC Th，，（SEQ IC Ν Ο : 1 0)之新穎人造τ h部位、” I S (1，4，9 PALINDROMIC) LF Th”（SEQ ID NO: 1 1)、” -41 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（39) (1，4,9 PALINDROMIC )LF 簡化之 Th” （SEQ ID NO:60)、以及”Syn Th(l，2,4)，，（SEQ ID NO:9)。標呑己為c之胜肤為b構築體之變種，以i n v區域免疫刺激性胜肽（SEQ ID NO:13)並列合成。 b及c構築體是利用Gly-Gly間隔區合成，用以自Th 部位分隔IgE-CH2/3或-CH3目標抗原部位，及自Inv免疫刺激序列分隔T h。在表2中的b，c構築體具有聯結到免疫球蛋白E目標部位之胺端之Th及/或Inv區域。表2的胜肽免疫原是篩選作為用於治療過敏之候選目標抗原胜肽，藉動物之過度免疫，接著藉測試對人類免疫球蛋白E的交叉反應性之過度免疫血清。里於篩選候選目標抗原胜肽的特別步驟： 1. I g E - C Η 3區域抗原胜肤及結合物之合成列於表2的胜肤是根据美利弗德（μ e r r i f i e 1 d )固相合成技術用Applied Biosystems自動胜肽合成儀，使用Fmoc化學方法而合成。包含SSAL Th的胜肽免疫原’在所提供之可變位置之替代胺基酸之一之偶合係藉提供等莫耳比例之胺基酸混合物而達成。所欲胜肱完全組合後’可根据標準方法，即利用三氟酯酸將胜肽根據標準程序使用三氟醋酸處理以自樹脂切下胜肽並去除胺基酸側鏈之保護基。為形成環狀胜肽，切下的胜肽係溶於15%的DM SO於水中48個小時，以促進半胱胺酸間分子由雙硫键之形成。 2·實驗性免疫接種 -42- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐）丨 Γ：--1T--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（40) 老鼠或天竺鼠以實驗胜肽免疫原進行肌肉免疫接種。劑量為1 0 0毫克胜肽懸浮於〇 _ 5毫升之體積。第一劑以％全性弗羅恩特氏（F r e u n d s)佐劑投藥，接下來的劑量是以不完全性弗羅恩特氏佐劑投藥。動物在第〇， 3，6及10或〇，2，4及8週接受注射。受測血液在每二週間隔收取並利用免疫球蛋白E胜肽ELIS A測定反應性及人類免疫球蛋白E之E LI S A測定交叉反應性。 3. ELISA 分析用於測定抗IgE胜肽反應性之胜肽ELIS A係進行於塗覆胜肽之9 6孔微滴定盤，塗覆係是以不含載體之 0.5微克/毫升之適當”a”目標抗原部位胜肽，每孔使用100微升於10毫莫耳濃度之NaHC03緩衝溶液，PH 9 · 5在3 7 °C培養1小時。為測定抗一人類I g E之交叉反應性，人類IgE ELISA係進行於經人類IgE塗覆之96 孔微滴定盤，以同樣模式用5微克/毫升之人類IgE骨髓母細胞蛋白質塗覆（American Biosystems，Inc. cat. N ο · A 1 1 3 )經胜肽或人類I g E塗覆之孔係以2 5 0微升3 %以重量計之明膠於PBS培養於37 °C下1小時，以抑制非專一性蛋白質結合部位，再以含有〇 . 〇 5 %以體積計之TWEEN 20之PBS沖洗三次並接著乾燥。受測樣品係以含有2 0 %以體積計之正常山羊血清，1 %以重量計之明膠和0_0 5%以體積計之TWEEN 20的PBS進行連續稀釋。添加100微升之經稀釋樣品至每個微孔並允許在3 7 °C下反應1小時。孔接著以〇 _ 〇 5 %以體積計之 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -43-

1227241 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（41) TWEEN 20之PBS沖洗6次以去除未結合之標記抗體添加100微升之以抗鼠IgG山羊抗體或抗天竺鼠IgG山羊抗體標記之抗體（標記係使用預測定之最適稀釋於i 9 〇以骨豆和计之正常山羊血清，0 · 0 5 %以體積計之τ W E E N 2 0於PB S)至每一孔中並於3 7它下培養3 〇分鐘。孔以 0-05%以體積計之TWEEN 2〇於pbs沖洗6次以去除未結合之標記抗體結合物，並以i 〇〇微升之含有〇〇 4 % 以重量計之鄰伸苯基二胺（OPD)及〇 ·丨2 %以體積計過氧化氫於檸檬酸鈉緩衝液（pH5.0)反應1 5分鐘。反應藉添加1 0 0微升之1 · 〇莫耳濃度H2 S 〇4終止並測定在 A 4 9 2之吸光值。E LIS A效價（t i t e r s)，以稀釋度例數之 logio值表示，根據吸光值之線性迴歸分析計算，臨界值（cutoff)A49 2訂為〇·5。此臨界值係精確的為稀釋的正常天竺鼠控制樣本之值以每一分析小於〇 ·丨5進行。結果候選之目標抗原部位列於表2。彼等顯示如” a，，胜肽連接至KLH載體或如” b π胜肽連接至合成的Th部位或如” c，，胜肽連接至合成性Th及Inv。老鼠或天竺鼠如上述（特殊程序Specific Procedures)進行免疫接種及以述於Specific Procedures之抗胜肽ELISA及抗人類免疫球蛋白E ELISA分析收集於第8週之過度免疫抗血清。許多CH2/3和CH3胜肽免疫原都具免疫抗原性，它們可引發抗胜肽抗體效價在l〇g1〇 2-5之範圍。包含自301_ -44- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ΙΊ# Ί; --------^---- (請先閱讀背面之注音3事項再填寫本頁) # 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（42) 3 76(表1之編號）之人類ε鍵之長片段之CH2/3抗原目標部位為與人類免疫球蛋白Ε有強烈之交叉反應性，如在抗人類免疫球蛋白E ELISA的log1G效價大於3所顯示。起始於位置及更遠（如起頁21及22)342之一些CH3胜肽失去交叉反應性。然而，包含3 5 4 - 3 7 2之相對短區域之C Η 3胜肽，除了第3 1專項（3 5 4 - 3 6 8)外，交叉反應性大多復原。另一交叉反應性之短區域係見於第20項（環狀胜肽涵蓋位置374-385)。如第14，17，23，24，25和26項之缺乏交叉反應性所示，自3 65至413延伸之序列展開缺乏交叉反應性，儘管與交叉反應性的354-372區域及以第20項（374-385)代表之交叉反應區域重疊。有趣的是，以第27，28， 29(3 54-372)及20(374-3 85)項例示之短交叉反應性係失去長環化的胜肽（第17項（3 6 5-3 96))之構形。儘管他們與彼等交叉反應區域重疊。重疊非交叉反應性部位之交叉反應部位再次發現遠超於起始約位置3 9 9之區域並延伸至位置445，如第15及30項之交叉反應項及第19項（432-445) 及23項（404-4 13)之弱交叉反應所示。值得一提的是，在包含位置 418、1 5(4 1 3-4 3 5)、及 1 8(404-434)之二個相似地環狀胜肽，只有第15項（SEQ ID NO: 15)，其中在位置4 18之半胱胺酸已經絲胺酸取代，與人類IgE具交叉反應。Stanworth (Stanworth 等人，Lancet，1990; 336: 1 279- 1 2 8 1 )所述之對應於IgE作用子部位之CH4部位並未顯示交叉反應性（第3 4項）。 -45- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）丨7\--Γ；--------------訂---------^9. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（43 此等結果說明免疫球蛋白E胜肽的交叉反應性為被構形特徵影響之複雜現象，且不能以重疊線性胜肽之直向分析來預測。候選的I g E - C Η 3區域抗原是由與人類免疫球蛋白Ε顯示交互反應性之結合物之間（列於表2)篩選出來，且用於進一步分析。實例i 定出人類免疫球蛋白E分子上的作用部位 I g E - C Η 3區域抗原胜肽’是由表2之彼等胜肽結合物 (對人類免疫球蛋白Ε展現高親和力交叉反應性者）中筛選出來以用於進一步分析，如它們個別抗血清抗免疫球蛋白 Ε效價超過log 1G = 3所示。天竺鼠之過度免疫血清可係如上所述製造。天竺鼠免疫球蛋白G抗體是藉蛋白質A親和力層析法自過度免疫血清中純化，且藉功能性分析用於測定是抗-IgE藉免疫原一專一性IgE抑制人類嗜鹼性細胞之致敏作用的能力。分析終點以免疫球蛋白E中介之組織胺釋出的抑制百分比表示。天竺鼠免疫球蛋白G抗體是藉蛋白質a親和力層析法 (ImmunoPure Immobilized Recomb Protein A ^ Pierce )，自血清中純化，且沖堤出的抗體係製備成8毫克/毫升於25毫莫耳濃度PIPES緩衝液，〇15莫耳濃度 Nacl ’ ΡΗ7·2之標準濃度。控制組抗體製備物係製備自用不相干的胜肽免疫原疫苗接種天竺鼠之混合血清。此等抗體用於分析測定人類嗜鹼性細胞之免疫球蛋白Ε中介之致敏作用之減少。人類嗜鹼性細胞是由自願參與實驗者之靜 I M LI Ί _------衣--------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -46- 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（44) 脈血經由Percoll密度梯度離心而製備（MacGlashan. J Allergy Clin Immunol, 1993; 91:605-615)。白血球係經收集、清洗並再懸浮於〇. 1毫升PAGCM如述於 MacGlashan，1 9 93)，除了用於懸浮細胞的PAGCM缓衝液以包含44% D20的水製造。用於分析的免疫球蛋白E 為過敏原專一性，人類Β Ρ Ο有專一性之免疫球蛋白E或對 HIV醣蛋白gp 1 20有專一性之嵌合性人類免疫球蛋白E。用於致敏作用的0.25微毫克/毫升之過敏原專一性免疫球蛋白E係以等體積之8毫克/毫升（總體積〇.1毫升）之經純化天竺鼠，抗體在添加至嗜鹼性細胞前在3 7 t下預培養i 5 分鐘添加抗體混合物至細胞中並培養2 〇分鐘使得可藉未錯合I gE引起細胞之致敏作用。敏感化細胞接著以加過敏原’ BP021-HAS或gpl20多胜肽，刺激（如述於 MacGlashan, 1 993) ° 經過適當的培養期間（通常是45分鐘）後，將細胞由上清液中分離且利用自動螢光測定技術（Siraganian，Anal Biochem，1 974; 5 7:3 83 -3 94)分析上清液中之組織胺含量。所有反應係進行二重覆。組織胺釋出的百分比是由樣本對總量組織胺的比率計算且兩者都先減去自發性釋出量。結果以組織胺釋出之抑制百分比來表示，是由實驗抗體對組織胺釋出與無關專一性之控制組抗體之組織胺釋出的比例來測定。人類嗜鹼性細胞之組織胺釋出分析係依 Donald W· MacGlashan博士（約翰霍普金斯大學醫學院，約翰霍普金斯氣喘及過敏中心，巴爾的摩）之規則條 I Ί Ί ^--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

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1227241 五、發明說明（45 ) 件來進行。結果抗組織胺釋出分析之抑制結果示於表3，對人類免疫球蛋白E顯示交叉反應性是lGgiQ > 3。由純化自^血^ 中之抗體進行測定，除了自收集於第12週之血清之已特徵化之對抗第15b及15c項胜肽之抗體。抗15b，及抗i5c抗體，係分別以取自第8及12週之血液，顯示之抑制結果^ 61%及71%，這些結果是由8週及血液中純化的抗體來進行。隔離動物已用15b及15c免疫接種，此實驗中雖用15b 及15c免疫分別接種不同組之動物，而示於表3之8星期及 1 2星期的結果是將取自乙組動物之抗體混合在一起所測得。（此為天竺鼠之群組在第10週接受額外的胜肽結合物劑量，使在12星期中血液保持高濃度抗體）。相較於以其他列於表3之胜肽所引發的與免疫球蛋白e之反應性，抗_ 1 5抗體之顯著抑制反應性係為未預期到的。彼等其他 I gE - C Η 3區域抗原胜肽不具抑制力，或對於組織胺釋出所呈現的抑制濃度為可忽略的且不具有再現性。藉與胜肽 15b (SEQ ID Ν0:14)及胜肽 15c (SEQ ID NO:15)抗原位置重疊wIgE-CH3區域抗原胜肽，引發之抗體之組織胺釋出之抑制結果及免疫球蛋白E交叉反應性可被比較。由胜肽第19、23、24及3 3項代表之免疫球蛋白E抗原包括與第1 5項序列（SEQ ID NO·· 5)有短交集者’他們相對於第1 5項對免疫球蛋白E的交互反應性較差，且缺乏抑制活性。第1 8項的免疫球蛋白E抗原序列 -48- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） ΙΊ,--Ί 一--------------^---------^9. (請先閱讀背面之注咅3事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227241 ίΤ：發明說明（46 ) Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (SEQ ID NO :44)包含第1 5項之完整的抗原序列，排除 (1) C端離胺酸已缺失（2)仍保有在4 18位置之天然存在的半胱胺酸及（3)具9個額外用的N端胺基酸。它與免疫球蛋白E為非交叉反應性，且不能抑制組織胺釋出；相反地，第15項之免疫原具（抗原SEQ ID NO : 5)，提供未預期之反應性。第1 5項的I gE- CΗ3區域抗原序列，具有藉導入端點半胱胺酸之特別環狀結構及不具來自位置4 8之半胱胺酸之貢獻，提供與IgE具交叉反應及引發抑制IgE致敏作用之抗體之抗原。藉 15b (SEQ ID NO]4)和 15c (SEQ ID NO:15)所引發之抗體係製備自1 3週之血液及各自經過測試。在第 13星期，如藉IgE ELISA測定之IgE交叉反應性及組織胺釋出之抑制百分比皆較第12週之值減少。雖然如此，頃發現得自兩製備物之抗體各有效於減少組織胱胺釋出：抗 1 5 b抗體抑制2 8 %及抗1 5 c抗體抑制2 0 %。組織胺釋出的程度是由劑量相關之此等抗體所抑制，如抗體稀釋效應所證者。取自第1 3週之抗1 5 b製備物係在原濃度（8 mg/ml)，接著在1 : 3和1 : 9稀釋度分析，組織胺釋出之抑制百分比分別為28%，2 1%及14%。天竺鼠抗1 5 b之製備物是在缺乏過敏原之下藉免疫球蛋白E-敏感化嗜鹼性細胞之直接排成來測試，作為其交叉聯結受體結合IgE及謗導去顆粒作用之能力之評估。藉抗 1 5 b之組織胺釋出相當於供體細胞自發性組織胺釋出之程度。此顯示對SEQ ID NO : 5免疫球蛋白E抗原之專一 i r丨 r、--------------訂--------- # (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) -49-

1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（47) 性抗體為非過敏原性者。因此，以包含1§匕〇113區域抗原 SEQ ID NO · 5 (SEQ ID NOS : 14 and 15 )之胜肽結合物免疫原進行之主動免疫接種可引發非過敏原性抗IgE 抗體，其抑制免疫球蛋白E中介之致敏作用，不引起組織胺釋出。引發多株抗體之此等活性顯示對I g E作用子部位之專一性，其並未描述於先前研究，包括打算用於被動免疫治療過敏疾病之治療性且非致過敏反應性之抗I gE單株抗體（U_S· 4,940,782; U.S. 5,420,25 1 及 Presta 等人， 1993) ° 實例3 同種型專一性及免疫壓抑性之可能性藉對SEQ ID NOS:14及15主動免疫反應之所引發之多株抗體係用於檢測對免疫球蛋白E相較於對免疫球蛋白 G之專一性。述於實例2之製備自第12週血液之抗-15b天竺鼠抗體係用以比較對免疫球蛋白E及免疫球蛋白G的交叉反應性，藉述於實例1之IgE ELISA和與其相似之lgG ELISA來測定。對於IgE ELISA，微孔盤係以5微克/毫升之人類骨髓瘤IgE塗覆。對於IgG ELISA，微孔盤係以 5微克/毫升之人類純化的免疫球蛋白（Sigma試藥級人類 IgE )塗覆。純化的天竺鼠抗-15b係用0.5及0· 1微克/毫升之濃度，以ELIS A來試驗其反應性。此結果係與由對照組天竺鼠血清中純化之抗體及”沒有抗體”之對照相比較。抗-15b抗體之免疫球蛋白E的A49G值在〇·5微克/晕升時為 1.126及在0.1微克/毫升時為0.344。抗-15b抗體免疫球 -50- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） I__^1 I--I I I I ___I I I I I ^ ·11111111 (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 五、發明說明（48) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 蛋白G的Aw。值則等於對照組抗體及背景值。天竺鼠抗_ 1 5 b對人類免疫球蛋白g不具交叉反應性。本發明的胜肽組合物不能引發辨識免疫球蛋白G抗體之抗體，及因此為對I gE之同種型專一性。他們會壓抑免疫球蛋白e中介之過敏反應且不導致對免疫球蛋白G之保護性抗體反應之不希望的免疫壓抑性。實例4 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明之代表性胜肽結合物示於表4之本發明免疫原性胜肽聚合物為分成性胜肽，係藉概述於實例1之固相法合成。表中的每個胜肽都可用式（八）11_(丁1〇111_(8)()-(1§£-(：113區域抗原）-又代表，但前文敘述之其他式之胜肽也包含於本發明之胜肽。I gE -CH3區域抗原序列是表4所列之胜肽SEQ ID NO : 5，6 或8，但已知來自其他哺乳類的同區域抗原序列係包含於本發明的胜肽中。免疫原性胜肽包括衍生自外來病原菌之Th部位（如SEQ ID NO : 20)及人工性Th(亦即S E Q ID Ν Ο S : 1 4，1 8及2 1)。除了示於表4的實例外，其他病原菌相關之Th可選自例示於表5之濫交Th部位，及人工性Th可選自例示於表6之Th部位。實例中的每個胜肽在免疫抗原要素間具有G1 y - G1 y間隔區，但本發明胜肽可具有其他間隔區（亦即S E Q ID Ν Ο : 1 6 )或沒有間隔區。此等實例中的胜肽亦視需要包含Inv免疫刺激部位（如 SEQ ID NOS : 15〜19和22 )。然而需瞭解是本發明之額 -51 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 B7 五、發明說明（49) (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) 外之免疫刺激分子不只限於Inv。如KLH結合物所示，本發明之胜肽結合物亦包括偶合至攜帶蛋白質的IgE_CH3區域抗原。實例5 免疫接種老鼠、小鼠之免疫接種及在體内功效之評估 SEQ ID NOS : 24和25(3 76和3 86)之胜肽的功效是以5組1 6隻小鼠藉概述於下之免疫接種及致敏作用進行評估：雌性8 _ 1 0週大之1 6隻小氣（B a 1 b / c)之群組以本發明之胜肽組合物進行皮下免疫接種。在第〇，3，6及1 1週給予老鼠2 0微克/0 · 2毫升劑量。第一次劑量以完全弗羅依特氏佐劑製備，隨後的劑量以不完全弗羅依特氏佐劑製備。小鼠在第7和第1 〇週，以半抗物合物，二苯基化之 KLH(DNP-KLH)來致敏化。致敏作用藉腹腔内投藥5微克/0.2亳升/劑量之DNP-KLH於0.4%之明蓉來達成。在控制組是以投藥含磷酸鹽-緩衝-食鹽水之佐劑達成免疫接種及致敏作用。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製第一組：以胜肽37b及0.4%明礬來免疫/模擬致敏化。第二組：以胜肽37b及DNP-KLH來免疫/致敏化。第三組：以弗羅依特氏佐劑及D N P - K L Η來模擬/致敏化。第四組：以胜肽3 8b及0.4%明礬來免疫/致敏化。第五組：以胜肽38b及DNP-KLH來免疫致敏化。在第0，5，7，9，11，13，16及20週收集血清。脾臟細胞則由第1 0及1 1週，每組二隻老鼠中採得。 -52- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 B7 五、發明說明（ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、子胜肽k原及對DNP之免疫球蛋白G反應係藉傳統的 ELISA刀析【視），使用抗.鼠㈣辣根過氧化酶結合物，及微滴定盤之孔以未結合之胜肽37⑻，⑽區域抗原胜肽，SEQ ID N0:8)塗覆用於胜肽ELISA，及#DNp_ BSA結合物塗覆微滴定盤用於⑽卩elisa。以鼠㈣之抗_3713抗體之交叉反應性係以在塗覆以鼠單株抗體igE _ SPE 7 (Sigma)之盤中進行傳統1§(} ELISA監測。對胜肽免疫原之IgG反應係與經20週之群組間之鼠IgE交叉反應性比較，以測足1·)一級及二級反應，2 )IgG&應性之不希望的免疫壓抑之存在，3.)週期間在抗_1§£反應性之不希望之減少之發生，作為對本發明胜肽組合物之抗體反應之可造性及安全性的註明。在第7 ’ 9，10，13及16週，IgE反應乃利用完整的經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

IgE ELISA及DNP_專一性ELISA來監測。利用DNP_專性ELISPOT计异在弟1〇及1 1週之分泌對d N P具專一性之IgE之脾臟B細胞。而且，因為血清中IgE濃度無法完全預測過敏性，即IgE測定可能失去在活体致敏性之顯著效果’鼠之致敏作用係藉在大鼠中利用小鼠血清之被動表皮致過敏性分析（異源PCA)來測定。小鼠之異源PCA係優於自体PCA分析，因為大鼠皮膚幹細胞係藉小鼠igE而非小鼠IgG而專一性地交叉致敏化。因此，異源小鼠/大鼠 PCA反應為IgE專一性且不會有IgG中介之過敏性的混淆情形，其可發生於自體鼠PLA分析（Maekawa及 Ovary，J Immunol Methods，1 9 84 ; 7 1 : 229-2 3 9) 〇 -53- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（51) ELISA，ELIAPOT及PCA的結果，用於比較各組對 IgE反應之免疫壓抑及對於免疫壓抑之同種型專一性。實驗方法係如下所述：

完整IgE ELISA

利用E LI S A測足血清中小氣的總免疫球蛋白e時，微滴定盤係以1微克/毫升之單株大鼠抗-小鼠I g E ( R 3 5 -72(Pharmingen))塗覆。此滴定盤如所述塗覆、清洗以及封住。添加連續稀釋之小鼠血清至盤中並經培養。以生物素化的單株大鼠抗小鼠IgE，R35-118(Pharmingen) 來檢測被捕捉之IgE(Captured IgE)，隨後添加鏈黴抗生物素蛋白·辣根過氧化酶（Pierce)及OPD測定A492之值。 DNP-專一性 IgE ELISA

利用ELISA來測定小鼠被DNP-KLH致敏化後，血清中之半抗原專一性之小鼠I gE，微滴定盤之孔係以5微克/ ^:#DNP-BSA 結合物（Molercular Probes，Inc·)塗覆。對D N P半抗原具專一^生的被捕捉的係如上所述檢測。 DNP-專一性 ELISPOT 利用ELI SPOT分析來測定可分泌對DNP半抗原專一性之小鼠IgE之B細胞，5微克/毫升之DNP-BSA結合物被用於塗覆附著微滴定盤之孔，其内墊有0.45微米之硝酸纖維素濾紙，例如MULTISCREEN HA盤（Millipore Inc” cat· No。MAHAS45 10)。添加製備自致敏化組及控制組小鼠中之連續稀釋脾臟細胞，至孔中且罝於3 7 Ό，5 % C〇2下培養過夜。將細胞自盤中洗出及對DNP半抗原具專 -54· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）丨 ΓΓΓ J--------------訂--------- (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁)

1227241 五、發明說明（52) 一性之IgE—分泌細胞係以含5_溴_4_氯_3-吲哚基磷酸鹽 (Sigma)作為顏色基質之鹼性磷酸酶結合的-大鼠單株抗體R3 5 -1 1 8染色濾紙上的定點來計數。

異源PC A 自免疫/致敏化及控制小鼠而得到的連續稀釋血清係經皮内注射到成熟之雄性（SpragUe_Dawley大鼠）的已刮毛之背部。麻醉後的大鼠接受1 〇到丨2次稀釋血清之注射，>王射方式為三列平行注射到背部皮膚（5 〇微升/部位）。每種注射係重複於二重覆動物。經過24小時潛伏期後，為皮膚巨大細胞之有效致敏作用，大鼠以1毫克DNp _ B S A於1 %伊凡氏（Evans)藍染劑於PB s之靜脈注射進行挑戰。在3 0分鐘到1小時，大鼠被悶死並去皮使得莊色反應可觀祭於背部皮膚之内面。P C A效價係自可造成易於定義之點之最大血清稀釋而測定。 ίΊ^ΙΊ《--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

J 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 χ 297公釐） 1227241 A7

7 B 3 5 明説明發五 A? {Seq ID : No :i ) Ϊ {crjftq ID:NO:2) (seq ID : No: 3 )二/^ε (seq ID:No :4} ΑίΜε {Seq ID: No:i )^ε {Seq ID:No:2}^^ε {Seq ID :20 : 3 ) {Seq ID:NO:*l) 1^1^_Xm ε {Seq ID :2:0 : 1)^ε (seq ID:NO:2)^-^ε (seq ID:NO:3) {Seq ID:N〇：4 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

T'oov-TYoGHTFSDSTKKCADSi'JP?oGVSAYrs?orOSPFDrFIPOi<SPT » TCoGFTFKDroApoK- · - - ^CSESD^ 匁 GVTSKrsppsprDryvHaAPK TOKV-HSoGEZY^AHTRpoOSDDEPpoGVITyrl^ps^rDryra^G T P K Tc?3v-TSoGCDyrAHT^?OnpDHEP%>G A 1闩7广19*〇5?广0!,'/020 A PK 320 330

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Lnu-'o 5^0 7 B------- 卜錄ε {Seq ID:No:1) ^ε (seq ID:No :2)^声 ε (seq ID:No:3) ε {Seq ID:N〇：i 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A 刃 H S T To- P K TXG S - - G F 勺 V F S K r E V R A E'S-OE K D rafl C%1A V Η E DOK-TTTGPHKVSGSPOPAFFIFS 尤rEVS^VDSEo-KNKFTCoVVHE· so二 S T T T - P L· K T M G S20PC-F 勺 Ϊ F S ^ r π V T K ΛrSToT Ko- F T C 力 < I Η K SOH S T T T - PrK S 2 G - ZOG F 勺 I F S RrE V A K -ΓΓΣτορακο- F T cov I Η H： sc

Lnoo S L0 520 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 58 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐 1227241 A7 B7五、發明説明（56 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 C7\ V·/、二 NJ 一 ^iUfiL 舞）fi +綠 cr? m ，^ im 者 i - NJ n Q l s ro cc UJ Cs to n G ^ f〇〇乙 n 9 2 5 丄… 1 ^-) -J ON ^ n '― — ^ ro !乙 V* η Q to oo s 〇工 H -rj m ..a 00 H 〇 > a m 2： o < - CO > "0 on 〇「 "Π ^ ^ . S H — H a 2： < P < o > a 00 2： -a 〇 < 00 > $ in rj -n a 5 7： 00 ] 3 < < Ό r：〇 5 z p ΙΞ 〇 6 2 r— ·—· — -Cl in ^ 2 ^ H ll g 二 ^ H PS Z 5 2： PC ^ 9 m < 〇 - c < z G G < o < < 25 > o 3 2 ^ H C =1 —m < Ό Z 〇〇 m 〇 pc > a m 〇 < m > < d ·—·· m L-ΓΠ 二 «^s —· 一 7： C z 3 o d S '^2 > Ο 3 2 P 3 < a z 2 c--5 H穴 ^ n > a s rj 〇 < 00 > -< ΙΞ 6 00 3 ~· 。 Ο =3 — Η c：丨a γ < ^ 2 Η O < > ^ a r cn H 2 5： ^ in X) p〇〇 < ω > -< in 勺 TI Ό tr 勺 Μ XJ ρς ω χ) 闩 y-i 〜 r 〇爸 = r ^ > Ο ω r〇 π S ο 漭 ^iV ω - t： - 〇· ζ： 2J 海E3 -鋒許 7s r* X 7： 7： 7： —；Ο Ξ z? 7^ —* 一一· —j C 7： 7：「* UJ 〇 1 :l - 乂 Ο UJ IO •-J UJ Cn ON 海藏窆螂摩m Hh ^ E m ^ > -59- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） >2 迹芩脔麻蛉IgE黑IgE CH2/3薛^

1227241 A7 B7 五、發明説明（57 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製二 O 〇〇售释s 房耷. +絮 00 (Π ， ^ 四翁谇. 〇 UJ V—> o Γ3 UJ UJ vlj ^yi o ίο ，二 UJ ΙΟ DO UJ L/、 Os o Q ^ IO ^ - o Os iO S-^ ?s| 丄u; ii c UJ 〇\ ro 'w^ ο < 1 Γ1； G οο 六 r、 η > S < > < 6: 二 π ζ 二 C ，一 o 彐 rn 一 a m H 穴 n > a m 2： *T5 〇 < m > < r* LO r- Z? 5 一 ^ 3 乂 ·— 产w 2： 'w n > Ό Z C) < m > < 1 "S 2 ^—v 1 z w UJ ^ 〇二:< C’ H < o s m — 7：〇 > CO ^ < m in 〇 > 一 < C Γ- ~ LTj — P -3 L’j \^\ ~ < o Ό H -< • 〇 X ' H m D 00 H 穴 Ο > D in 2：汐 Ο < ⑺ > -< ?σ -ο 00 HD -η a 「 S' ^ || 3 2· O 乙广 J- 1 .冲V 1 - n cr - - Π： &> ^ HQ 7： r— < ό O -^ 一 C) ^ ΙΛ 孑 zr 5 ό o 7：了、 X -t* UJ IO s LO 5；二 o UJ \^J U-> txj 蜗摩m Φ >'匚 m織$ >2(籲轟) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 1227241 A7 B7 五、發明説明（58 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 5; IO 事項編號；敘述+ IgE衍生之目標抗原部位 CII2/3 (301-345) (C)CH3 ⑷3-435)(CT (C,I8->S) (C)CI13 (391-398) (C)# CH2/3 (301-376) _ CH2/3 (301-356) (C3I2—S) QKIIWLSDRTYTCQVTYQGIITFGDSTKKCADSNPRGVSAYI.SRPSP (S1：Q ID NO:42) (C)Gn'YQSRVTHPIlLPRALMRSTTK(C) i (Sl-Q ID NO:5) (C)KQRNGTLT(C) (S【:Q ll)NO:4l) QKmVLSDRTYTCQVTYQGim’mSTKKCADSNPRGVSAYLSRPSP FDLFIRKSPTITCLVVDI.APSKGrVNLi'WSR (Sl-Q II) NO:^0) QKHWLSDKTYTSQVTYQGHTraiSTKKCAaSNPRGVSAYLSRPSl》 I'DLilHKSPTI , (Si；Q 10 N():39) 胺基酸序列 σ* η cr n cr 二聯結到目標抗原部位之免疫刺激序列 ilBsl9.,Th-GG lnv-GG-Syn Th (1，2,仆 GG Syn Th (l,2,4)-GG lnv-GG-i!Bsl,.j>Th- GG llBsp^/rh-GG KUI KUI … 2.31 X- 4.24 0.77 2.79 聊摩m Hh ^ E m S > 和人類IgE之交互反應性 >2(_藏) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 1227241 A7 B7 五、發明説明（59 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ΙΟ ro to ΙΟ 'Z 事項編號；· 欽述+ IgE衍生之目標抗原部位 (C)CII3 (343-360)* CH3 (345-357)* (C)C!i.l (374-382-(〇-383-385)* CII3 (*432-445) * J (c)cm (404-‘i34)(C)* (C)Cll3 (365-396) (〇* (C)SRPSPFDLFIRKSPTITC | (C)PSm)LFlRKSPT(C) 1 (C)WSRASGKPV(C)NIIS SiTKTSGPRAAPEV (C)I)VGTRD\VlEGETYQCRVTin)nU)RALN1RSTT(C) (C)PSKGTVNLTWSRASGKPVNMSTRKnCKQRNGT(C) (Sl-Q ID NO:43) Amino Acid Sccjucnce (SEQ IDNO:47) (SI：Q II) NO:83) (ShQ ID N()>I6) (SI：Q II) NQ>I5) I (Sl：g ID N()>M)； J η cr n cr cr cr cr 聯結到目標抗原部位之免疫刺激序列 Inv-GG-iiBs|(；.12Th- G(; I!Bslv.32Th-GG liiv-GG-IIBs 丨·M2Th-GG HBs 丨,MJTh-GG ims 丨,MJTh-Gr, HBs 丨”2Th-GG IIBsP；.3,Th-GG IIBslv.32Th-GG Λ Λ 3.976 2.725 f、、 Λ b 蜗淖m n> ^ E m S > 4 瓣2(藏轟) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) _-62- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 1227241 A7 B7五、發明説明（6〇 ) 27 26 25 23 (c)cm (373-381)3* (C)WSRASGKPV(C) CH3 (387-3S) (com (387-_)(cr (n)(I)oH3 (403-413)(3(c)* (C)CH3 (49113) 33,

KEEKo【<MG (c)KrnEKQRNGTLTVTS(c) (C)(P)PVGTRDWIEGE(PXC) (c)VGTKnw 一 EGrn(p)n)

IgE^^~Im^^^!^ IM1J Mmi (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) >2(籤轟) (slcll) NP52) (SLOID NO:5l)

(slou) NC:5S (sroH) NQVI9) (SICH) NOVI8) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

Inv-GG-Im-riHT GG

i-c.tTrGG

InvIGG-i-sHT GG

二 BslHTGG

一 nv-GG-MI3-riTh-GG

二 Bs 一 Ξ/rh-GG

f-GG-MBS-s/i.h-GG

二 Bs 一 SJh-GG

Ill<-GG'5-r£TT GG

二 BS-i,Th.GG 2.¾

roglo ELISA 烊¾淖As ^^^i>E •^AsIgE ~ 63 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 1227241 A7 _B7五、發明說明（61 ) * =荈斧薛穿 + =^1,^1 , SEQ ID>io· 1 ~漭；&se^:s£^ Δ = :b=甘：0=^斧~詾^參妗冷x>gjiis:^^ ο)= ♦卜书霁漭释^渰^^+^鉍^^^迹 o->s)=桊漭颯黄^-^霁漭霽漭^- Dic=卡穿漭踝黄»3>漭龄海^。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 UJ U-) to UJ UJ IO ΪΟ oc 事項編號；敘述+ Ig£衍生之目標抗原部位 CH4 (497-506) (C)CI 13 (373424)* (C)C113 (370-390)(C)* 1 ί 1 CM3 (35^1-368)(C)* !(C)5,->S)(D362->C) CU3 (399-42^) cm (35冬369) cm (35心373)(C)+ KTKGSGFFVF «β 、 (CyrWSRASGKPVNMSTRKBEKQRNGTLTVTSTLPVGTRDWH-Gm' YQCRVTIIPII (S[QIDNO:58) ! (QVNLTWSRASGKPVNIISTRKlil^C) I)Tn、SLVL£LAPSKG(C) TSrLPVGTRDWIl£GmTQ£RVTHPI 1 PTliCLVLDLAPSKGr ΙΗΊ rCLVI.DLAPSKGTVNLT'(C) 胺基酸序列 (SliQlD NO:59) (SHQ ID NO:57) (S!£Q It) NO:56) (SfiQ IDNO:55) (SHQ li)N0:5^l) (Sl-Q ID NO;53) C- cr cr cr cr cr C- 聯結到目標抗原部位之免疫刺激序列 IIBsI9.32Th-GG i MV 丨、8.JU2TI卜 GG + 丨叮丨卯Jl丨-⑶ HBsiy〇2Th-GG IIBsl932Th-GG imsl93；rh-GG !IDsl9.3/rh-GG IIBsl9.32rh-GC] lins|y)2Th-GG Λ 2.33 3.45 Λ 4.01 to 2.59 申摩W 册卜匚 W » ^ Sf -64_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） I Ί ---!f--------------訂-------->^νΊ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 五、發明說明（62) 表3 用於抑制組織胺釋出之抗IgE抗體之免疫球蛋白E抗原事項編號 IgE抗原敘述 (SEQ ID NO) 聯j 洁到IgE抗原之免疫原性要素組織胺釋出之抑制 I CH2/3 (32S-376)(C”s—S) (SEQ ID NO：28) a KLH 0 2 CH2/3 (317-376) (C35g^S) a - KLH 14% 幫 (SEQ ID NO:29) b 1.4,9 PALINDROMIC Th-GG-( 17% and 0 5 CH2/3 (328-362) (C3,8^S) (SEQ IDNO:32) a KLH 0 6 CH2/3 (317-362) (C：<g^S) (SEQ tDNO:33) a KLH 0 7 ， CH2/3 (3 13-362) (C3<8—S) (SEQ IDNO:34) a KLH 6% 8 CH2/3 (301-362) (C3<8->S) (SEQ ID NO:35) a KLH 6% I 1 CH2/3 (313-356) (SEQ IDNO:38) a KLH 6% 15 (C)CH3 (413-435)(C)* (匕丨8~>5) ,, 〆/〆-- b Svn Th(L2,4)-GG 58%: and 71%*^ (SEQ IDN0:5) c Inv-Gt}.Svn Th(l,2,4>GG- 20 (C)CH3 (374-382-(C)-383-385)* (SEQ ID NO:46) b HBs,9.32Th-GG 0 30 CHS (399-424) (SEQ IDNO:55) b HBs jo.jiTh-GG- 9% and 0 32 (C)CH3 (370-390)(C)· ' (SEQ ID NO:57) b HBsl9.32Th-GG- 0 訂---- 命 * 環狀胜肽 (C) 導入半胱胺酸於天然序列中作爲環化作用經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (C—S)絲胺酸取代半胱胺酸 + 混合抗-15b和抗-15c IgG’s所顯示之結果 + 收集於第8週血清所純化的胜狀抗體對組織胺釋出之抑制力，以㊉表示除外㊉收集於第12週之胜肽抗體對組織胺釋出之抑制。 -65- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 B7 五、發明説明（63 ) SEOID M〇：5 SEOID 20:5 SEOID M〇：5 smcID M〇：5 SEQ ID §: 5 smo1C20:5 snoIDz〇：5

IgE-CH3 ^-¾SEQ ID § u、4、9 PAL二 Th-GG SEoID2〇：l〇 (CT Pll T11)-GG-IS {r4、9 PALta L^! simplified Th-GG SEOIDZ〇S:12, 60

Inv—IS (1、4、9 PALf)LF si3plil-hi.ed Hh-GG SEOID M〇s : 13、 60 is ti, 4、9 p>r I )rF simplified，rh-GG SEQ IDzo:60 CT Pll Th-GG-Syn Thu、2、4) 1-GG smoID MOS : 12、 9

Inv-GG-Syn Th u、2,4TGG-sraoIDZ〇S:13, 9

Syn Hh(l,2,4},GG— SEOID 2〇：9 ^^lstis^^J ~ SEQ ID NO (s) ISWIKGVIVHKIEGIGGCGE:TYos?oVTHPHL.PpaArM?oSTTKC MT ΙΤΓ TpdM L r < , (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (smQ ID NO:21 一 ^INKPKGYVGKmGGISISKIKGVIVHKIraGIrFGGCGcrJTKospaVTHPHrPKAI-MKSTTKC τ'ροτ ΊΈ H {SEQ ID §: 20r ΤΑΚ3κκ^ρ3γ,ΓΛΊ·ορααΙ8Ι3ΞκανΙνΗΚΙΕαΙΙ,ρααοαΗ:，ΓΥο5κντΗΡΗΙ,ρΑ3ΑΓΜΗ3ττκο β ίΤΓ HXIT {SEOIDZO: 19}

ISISplIKGVIVHKIraGIrFGGCGmTYoSFn/THPHr'PRAr'MxlSTTKC / 3 T/aH {SEQ ID N〇：18)

HlzKPKGYVGKEGGKKKIITIT?cIITI;rrTIDGGCGKTYospcVTHPHrp?aAl,M%!STTKn {srnoID M〇：17) TAKSKICFPSYTAHYoFGGKKKIITIT^IITIlTTIDGGCGWHYoSRVl'HPHrp^ArM/oSTTKC(sraoID zo: 15) {smoID N〇：14 j

KKKIrrIT/oIITIIHTIDGGnGETyoSRVTHPHrPRArMRSTTKC

漭^菸^^^痒穿-^SEQIDZO _- 66 -_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 1227241 A7 B7 五、發明説明（64 tp>L=涵^^湮經濟部中央標準局員工消費合作社印製

SEQ II SEQ IL SEQ IE SEQ IL SEQ IE SEQ ΙΓ SEQ Ii SEQ 11 SEQ I] 2：〇 ch 'Z. 〇 σ\ )NO : 6 Ο 0D )NO : 8 )NO: 8 3 NO: 5 Z 〇 LTl D NO : 5 IS( Til-( SEQ Syn SEQ klh ίη ιη W Ο㈡ IS ( sim SEQ | klh klh (CT PAL SEQ Inv Th- SEQ M 〇 -D i 厶 Η H a ^ 冷 1 μ Η α ^τ Π3 t—( h-* ' 〇 H· f-h 、冷 1 冷 I ρς Pll ί ) Tl] ID o · D M 2： K〇〇 2；卜* 〇' ·. to 1 2； Ρ 〇、 • · to 2： H· VD 〇CD •. 〇· nrl 1 » 2： · ^ O CTi H C 、 M > H* tT* VO - \Ω 、心 cn > C〇 Ο ΠΓ • · i ^ Co v«o ，•一♦· r 1 a I ο 〇 *~3 CT* rr -1 一 o r M \ NJ 一 PALt 13, \ Ώ 1 Ω ^ 1 M 厂 O 、 VO M 一 O M 穴 Γ~* M r—η r~» H CO X in ?r ?r > (Λ Ps Η-· 六 M 1_3 ΓΛ 'Z ra M M 1-9 * Μ Η •~~i uj Pj M 口" 玲 U-M# 'Ps ρς in *-r* o < M I ρς Μ Η ?0 H o < 1 ►τ' 1 ►χ· Cj < M H-l Μ M r^· < o (fi K： < ρς M H-： h Ο Ο frj Μ Η hH < HE pO ρς o CD n CD H > h-i w o 卜· H ►J Κ Κ Μ Η Η M K HO Q K； C L4J ►~3 K o ;G1S MT L < O M t- »T] D C. Η D h-i r in M m ra HH o o CD 〇 d o Η X UJ Ο η CJ o < a <c 十 XI Pn H c < ISE MT L o o ra o pj H 2 Ρ ο ο o o K； Xi a nn X M XI ^ H K： K；勺名 o K： n pa r z ^ U J < 1—( K in D Μ Hi Μ o in Μ > C7> n »_： Q ^ < < < < M < 2 < 2 M ^ — x: ?ς < Η — XI C/) a DU < (3j XI (f> ?3 C r z m *τ* 2 Μ > *V a Η C*^ r^, c· w H o < 2 M t-Lt r tr 〇 a rc^ Q ρς Q Ω u M D K-l < Μ < HD 穴 M O m O o o m HH > in M > ρσ ω Μ Η < m M H < K o in X! < n 〇 η n r- T； H T3 in (Λ CO > —2 r r> *n X r 一 ^ ra W η m \Jj ^ Π a Co DT3 > /° M 〇 M Ο t-i 〇 M 〇 i M ^ 〇 g m pd a z o D U z σ 〇 2： σ ⑺ Η 2 Η o CO 〇 NJ 〇 NJ o to 〇 KJ Ο 爻 .. Ο NJ -j O'! in UJ NJ _4(籙鐵) -67-

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7 B7 1227241

五、發明説明（65 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

表5 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 外來致病原序列衍生之Th抗原表位的胺基序列

Th的描述 SEQIDNO : 胺基酸序列 P288-302 Th 61 LSEIKGVIVHRLEGV ^258-277 Th 62 GILESRGIKARITHVDTESY TTS3〇-844 Th 63 KKQYIKANSmGITEL TT947.966 Th 64 KKFNNFTVSFWLRVPKVSASHL PTl49-l76 Th 65 KKLRRLLYMIYMSGLAVRVHVSKEEQYYD ΤΤ73·99 Th 66 YDPNYLRTDSDKDRJFLQTMVKLFNRIK p Wh 67 GAYARCPNGTRALTVAELRGNAEL HBS|9,32 Th 68 FFLLTRILTIPQSLD HBcl20-l40 Th 69 vsfgvwirtppayrppnapil ΗΒ〇2ΐ_；〇 Th 70 SDFFPSVRDLLDTASALYRE HBC5Q.59 Th 71 PHHTALRQAILCWGELMTLA 丁丁61>631 Th 72 WVRDIIDDFTNESSQKT HIV gp41 Th6 (N-) 73 RAGRAILHIPTRIRQGLER HIV gp41 Th6 (C-) 74 avaegtdrvievlqragrail CT A8l06.l30 Th 75 ALNIWORfDVFTLGATSGYLKGNS CTPll Th 12 TINKPKGYVOKE DTI Th 76 DSETADNLEKTVAALSILPGHG DT4Th 77 eeivaqsialsslmvaqaiplvg 訂 ____ -68· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨〇><297公釐） 1227241 A7 B7五、發明説明（66 ) 表6 代表性人造Th抗原表位及SSAL之胺基酸序列

Th的描述 SEQIDNO : 胺基酸序列 ’ (1，4,9 PALINDROMIC) Th ,、， i〇 ISEIKGVIVHKISGI MT RT TRM TM. L L V SynTh( 1.2,4) 9 KKKIITITRIITIITTID IS(1,4,9 PAL[NDROMIC)LF simplified Th . 60 ISISEIKGVLVHKIHGILF T RT TR T tS(L4.9 PALOnDROlMIOLF Th 11 ISISEIKGVIVHKIEGILF MT RT TRM TM L L V 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ____-69 ~_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1227241 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（67 序列表 (1) 一般資料： (i) 申請人：王長怡

Walfield, Alan Μ (ii) 發明名稱：以特殊胜肽組成物作為免疫原用來治療過敏性疾病 (iii) 序列號碼：84 (iv) 代表人住址： (A) 地址：Morgan & Finnegan (B) 街道：345 Park Avenue (C) 城市：紐約市 (D) 州：紐約州 (E) 國家：美國 (F) ZIP ： 10154-0053 (v) 電腦可讀之型式： (A) 媒體型式：軟式磁碟片 (B) 電腦：IBM可相容之個人電腦 (C) 操作系統：MS WINDOWS 95 或 98 (D) 軟體：Patentin Release #1.0，版本#1.25 (vi) 目前應用資料：

(A) 應用編號：US (B) 完成曰期： (C) 種類： (viii)代理人/代理商資料： -70- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） Γ Ί.---.--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 五、發明說明（68) (A) 姓名： (B) 登記號碼： (C) 參考/標籤號碼：1151-4153 (ix)電話聯絡資料： (A) 電話：212-758-4800 (B) 傳真：212-751-6849 (2) SEQ ID NO : 1 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：325個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D) 拓樸學：線狀 (ii) 分子種類：蛋白質 (ix)特性： (A)名稱：人類免疫球蛋白艾普西隆（ε)重鏈 (X)發表資料： (Α)作者：Dorrington，Keith J Bennich，Hans Η _--·1 —τ 7--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (B)標題：人類免疫蛋白E之結構功能相關性 (C)雜誌： Immunology Reviews (D)期刊： 41 (E)課題： (F)頁數： 3-25 (G)日期： 1978 (xi)序列敘述：SEQ ID NO :1: 71 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 B7 五、發明說明（69) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Val Cys Ser Arg Asp Phe Thr Pro Pro Thr Val Lys 1 5 10 lie Leu Gin Ser Ser Cys Asp Gly Gly Gly His Phe 15 20 Pro Pro Thr lie Gin Leu Leu Cys Leu Val Ser Gly 25 30 35 Tyr Thr Pro Gly Thr lie Asn lie Thr Trp Leu Glu 40 45 Asp Gly Gin Val Met Asp Val Asp Leu Ser Thr Ala 50 55 60 Ser Thr Thr Gin Glu Gly Glu Leu Ala Ser Thr Gin 65 70 Ser Glu Leu Thr Leu Ser Gin Lys His Trp Leu Ser 75 80 Asp Arg Thr Tyr Thr Cys Gin Val Thr Tyr Gin Gly 85 90 95 His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lys Cys Ala Asp 100 105 Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg 110 115 120 Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe lie Arg Lys Ser Pro 125 130 Thr lie Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Ala Pro Ser 135 140 Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg Ala Ser 145 150 155 Gly Lys Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu 160 165 Lys Gin Arg Asn Gly Thr Leu Thr Val Thr Ser Thr 170 175 180 Leu Pro Val Gly Thr Arg Asp Trp He Glu Gly Glu 185 190 Thr Tyr Gin Cys Arg Val Thr His Pro His Leu Pro -72- 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） n I ϋ-ϋ ϋ ϋ emmt ϋ «ϋ ϋ Bn I ·ϋ^-Γ\ I >^1 ^1 ϋ ϋ I ^1 ϋ I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 1227241 __B7 五、發明說明（70 ) 195 200 Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser Gly 205 210 215 Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val Tyr Ala Phe Ala Thr 220 225 Pro Glu Trp Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg Thr Leu 230 235 240 Ala Cys Leu lie Gin Asn Phe Met Pro Glu Asp lie 245 250 Ser Val Gin Trp Leu His Asn Glu Val Gin Leu Pro 255 260 Asp Ala Arg His Ser Thr Thr Gin Pro Arg Lys Thr 265 270 275 Lys Gly Ser Gly Phe Phe Val Phe Ser Arg Leu Glu 280 285 Val Thr Arg Ala Glu Trp Gin Glu Lys Asp Glu Phe 290 295 lie Cys Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro Ser 305 310 Gin Thr Val Gin Arg Ala Val Ser Val Asn Pro Gly 315 320 Lys 325 IΗ ^— ΊΙ--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (2) SEQ ID NO : 2 之資料： (i)序列特徵： (A) 長度：312個胺基酸 (B) 型式：胺基酸 -73· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 _ B7 五、發明說明（71 ) (D)拓樸學：線性 (ii)分子種類：蛋白質 (ix)特徵： (A)名稱：狗IgE之i鏈 (X)得自 Patel 等人，Immunogenetics ， 1995 ， 41:282-286 之序列 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 2 :

Ala Cys Ala Leu Asn Phe lie Pro Pro Thr Val Lys 1 5 10 Leu Phe His Ser Ser Cys Asn Pro Val Gly Asp Thr 15 20 His Thr Thr lie Gin Leu Leu Cys Leu lie Ser Gly 25 30 35 Tyr Val Pro Gly Asp Met Glu Val lie Trp Leu Val 40 45 Asp Gly Gin Lys Ala Thr Asn lie Phe Pro Tyr Thr 50 55 60 Ala Pro Gly Thr Lys Glu Gly Asn Val Thr Ser Thr 65 70 His Ser Glu Leu Asn lie Thr Gin Gly Glu Trp Val 75 80 Ser Gin Lys Thr Tyr Thr Cys Gin Gly Phe Thr Phe 85 90 95 Lys Asp Glu Ala Arg Lys Cys Ser Glu Ser Asp Pro 100 105 Arg Gly Val Thr Ser Tyr Leu Ser Pro Pro Ser Pro -74- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ΙΊ ·」Ι Ί【--------------訂---------^一^ (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（72) 110 115 120 Leu Asp Leu Tyr Val His Lys Ala Pro Lys lie Thr 125 130 Cys Leu Val Val Asp Leu Ala Thr Met Glu Gly Met 135 140 Asn Leu Thr Trp Tyr Arg Glu Ser Lys Glu Pro Val 145 150 155 Asn Pro Gly Pro Leu Asn Lys Lys Asp His Phe Asn 160 165 Gly Thr lie Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Asn 170 175 180 Thr Asn Asp Trp lie Glu Gly Glu Thr Tyr Tyr Cys 185 190 Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Lys Asp lie Val 195 200 Arg Ser lie Ala Lys Ala Pro Gly Lys Arg Ala Pro 205 210 215 Pro Asp Val Tyr Leu Phe Leu Pro Pro Glu Glu Glu 225 Gin Gly Thr Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Cys Leu 230 235 240 lie Gin Asn Phe Phe Pro Ala Asp lie Ser Val Gin 245 250 Trp Leu Arg Asn Asp Ser Pro lie Gin Thr Asp Gin 255 260 Tyr Thr Thr Thr Gly Pro His Lys Val Ser Gly Ser 265 270 275 Arg Pro Ala Phe Phe lie Phe Ser Arg Leu Gin Val 280 285 Ser Arg Val Asp Trp Glu Gin Lys Asn Lys Phe Thr 290 295 300 Cys Gin Val Val His Glu Ala Leu Ser Gly Ser Arg 305 310 -75- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Ala Arg Pro Val Asn lie Thr Lys Pro Thr Val Asp 1 5 10 Leu Leu His Ser Ser Cys Asp Pro Asn Ala Phe His 15 20 Ser Thr lie Gin Leu Tyr Cys Phe Val Tyr Gly His 25 30 35 lie Gin Asn Asp Val Ser lie His Trp Leu Met Asp 40 45 Asp Arg Lys lie Tyr Asp Thr His Ala Gin Asn Val 50 55 60 Leu lie Lys Glu Glu Gly Lys Leu Ala Ser Thr Tyr 65 70 Ser Arg Leu Asn lie Thr Gin Gin Gin Trp Met Ser 75 80 Glu Ser Thr Phe Thr Cys Lys Val Thr Ser Gin Gly 85 90 95 Glu Asn Tyr Trp Ala His Thr Arg Arg Cys Ser Asp 100 105 Asp Glu Pro Arg Gly Val lie Thr Tyr Leu lie Pro 110 115 120 五、發明說明（73) (2) SEQ ID NO : 3 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：313個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：蛋白質 (ix)特性： (A)名稱：大老鼠免疫球蛋白E之Ϊ鏈 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 3 : -76- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） !_--I---------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 1227241 __B7 五、發明說明（74 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Pro Ser Pro Leu Asp Leu Tyr Glu Asn Gly Thr Pro 125 130 Lys Leu Thr Cys Leu Val Leu Asp Leu Glu Ser Glu 135 140 Glu Asn lie Thr Val Thr Trp Val Arg Glu Arg Lys 145 150 155 Lys Ser lie Gly Ser Ala Ser Gin Arg Ser Thr Lys 160 165 His His Asn Ala Thr Thr Ser lie Thr Ser lie Leu 170 175 180 Pro Val Asp Ala Lys Asp Trp lie Glu Gly Glu Gly 185 190 Tyr Gin Cys Arg Val Asp His Pro His Phe Pro Lys 195 200 Pro lie Val Arg Ser lie Thr Lys Ala Leu Gly Leu 205 210 215 Arg Ser Ala Pro Glu Val Tyr Val Phe Leu Pro Pro 220 225 Glu Glu Glu Glu Lys Asn Lys Arg Thr Leu Thr Cys 230 235 240 Leu lie Gin Asn Phe Phe Pro Glu Asp lie Ser Val 245 250 Gin Trp Leu Gin Asp Ser Lys Leu lie Pro Lys Ser 255 260 Gin His Ser Thr Thr Thr Pro Leu Lys Thr Asn Gly 265 270 275 Ser Asn Gin Arg Phe Phe lie Phe Ser Arg Leu Glu 280 285 Val Thr Lys Ala Leu Trp Thr Gin Thr Lys Gin Phe 290 295 300 Thr Cys Arg Val lie His Glu Ala Leu Arg Glu Pro 305 310 Arg -77- I Ί Ί I Ί ^---------I----訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 B7 五、發明說明（75) (2) SEQ ID NO : 4 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：313個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：蛋白質 (ix)特性： (A)名稱：小老鼠免疫球蛋白E之Ϊ鏈 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 4 : (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Val Arg Pro Val Thr His Ser Leu Ser Pro Pro Trp 1 5 10 Ser Tyr Ser lie His Arg Cys Asp Pro Asn Ala Phe 15 20 His Ser Thr lie Gin Leu Tyr Cys Phe lie Tyr Gly 25 30 35 His lie Leu Asn Asp Val Ser Val Ser Trp Leu Met 40 45 Asp Asp Arg Glu lie Thr Asp Thr Leu Ala Gin Thr 50 55 60 Val Leu lie Lys Glu Glu Gly Lys Leu Ala Ser Thr 65 70 Cys Ser Lys Leu Asn lie Thr Glu Gin Gin Trp Met 75 80 Ser Glu Ser Thr Phe Thr Cys Arg Val Thr Ser Gin 85 90 95 Gly Cys Asp Tyr Leu Ala His Thr Arg Arg Cys Pro 100 105 Asp His Glu Pro Arg Gly Ala lie Thr Tyr Leu lie 110 115 120 -78- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 _B7五、發明說明（76 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Pro Pro Ser Pro Leu Asp Leu Tyr Gin Asn Gly Ala 125 130 Pro Lys Leu Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Glu Ser 135 140 Glu Lys Asn Val Asn Val 145 150 155 Lys Thr Ser Val Ser Ala Ser Gin Trp Tyr Thr Lys 160 165 His His Asn Asn Ala Thr Thr Ser lie Thr Ser lie 170 175 180 Leu Pro Val Val Ala Lys Asp Trp lie Glu Gly Tyr 185 190 Gly Tyr Gin Cys lie Val Asp Arg Pro Asp Phe Pro 195 200 Lys Pro lie Val Arg Ser lie Thr Lys Thr Pro Gly 205 210 215 Gin Arg Ser Ala Pro Glu Val Tyr Val Phe Pro Pro 220 225 Pro Glu Glu Glu Ser Glu Asp Lys Arg Thr Leu Thr 230 235 240 Cys Leu lie Gin Asn Phe Phe Pro Glu Asp lie Ser 245 250 Val Gin Trp Leu Gly Asp Gly Lys Leu lie Ser Asn 255 260 Ser Gin His Ser Thr Thr Thr Pro Leu Lys Ser Asn 265 270 275 Gly Asn Gin Gly Phe Phe lie Phe Ser Arg Leu Glu 280 285 Val Ala Lys Thr Leu Trp Thr Gin Arg Lys Gin Phe 290 295 300 Thr Cys Gin Val lie His Glu Ala Leu Gin Lys Pro 305 310 Arg -79- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ΙΊΊ-ΙΊ.--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241

Cys 1 Gly Glu Thr Tyr Gin Ser Arg Val Thr 10 His Pro His Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys 15 20 A7 _B7_ 五、發明說明（77 ) (2) SEQ ID NO : 5 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：25個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：胜肽 (ii) 分子種類：蛋白質 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 5 :

Cys 25 (2) SEQ ID NO : 6 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：25個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 6 : -80- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）丨 --Ί ^--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Cys 1 Gly Glu Thr 5 Tyr Tyr Ser Arg Val Thr 10 His Pro His Leu Pro Lys Asp lie Val Arg Ser lie Ala Lys 15 20 Cys 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（78) 25 (2) SEQ ID NO : 7 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：25個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 7 : IΊ ,--Ί.--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Cys 1 Gly Glu Gly Tyr Gin Ser Arg Val Asp 10 His Pro His Phe Pro Lys Pro lie Val Arg Ser lie Thr Lys 15 20 Cys 25 ⑺ SEQ ID NO ： 8的資料： ⑴ 序列特性： (A)長度： 25個胺基酸 (B)種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ϋ) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述： SEQ ID NO ： 5 ?： Cys 1 Gly Tyr Gly Tyr Gin Ser lie Val Asp 10 Arg Pro Asp Phe Pro Lys Pro lie Val Arg Ser lie Thr Leu 15 20 -81 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 B7 五、發明說明（79)

Cys 25 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (2) SEQ ID NO : 9 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：18個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 9 :

Lys Lys Lys lie lie Thr lie Thr Arg lie lie Thr 1 5 10 lie lie Thr Thr lie Asp 15 (2) SEQ ID NO : 10 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：15個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (ii) 分子種類：胜肽 (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：1 (D)其他資料：/註= ’’Ile，Met or Leu” (ix)特性： -82- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227241 A7 r_Β7_ 五、發明說明（80 ) (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：2 (D)其他資料：/註= f’Ser or Thr1’ (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：5 (D)其他資料：/註= nLys or Arg·’ (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：6 (D)其他資料：/註= ’’Gly or Thr” (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：10 (D)其他資料：/註= nHis or Thrf’ (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：11 (D)其他資料：/註= ’’Lys or Arg’’ (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：12 (D)其他資料：/註= nIle，Met or Leun (ix)特性： -83- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） I Ί ,----------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 _B7_ 五、發明說明（81 ) (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：14 (D)其他資料：/註= f’Gly or Thr” (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：15 (D)其他資料：/註=，’Ile，Met or Val” (xi)序列敘述：SEQIDNO : 10 : Xaa Xaa Glu lie Xaa Xaa Val lie Val Xaa Xaa Xaa 1 5 10 Glu Xaa Xaa 15 (2) SEQ ID NO ： 11的資料： (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (i) 序列特性： (A) 長度：19個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (ix)特性：經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：3 (D)其他資料：/註= ’’Ile，Met or Leu'， (ix)特性： (A)名稱/關键：修飾部位 -84- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227241 A7 B7 五、發明說明（82) (B)位置：4 (D)其他資料：/註= ’’Ser or Thr” (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：7 (D)其他資料：/註= nLys or Arg·’ (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：8 (D)其他資料：/註= ’’Gly or Thrf’ (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：12 (D)其他資料：/註= or Thrn (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：13 (D)其他資料：/註= "Lys or Arg” (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：14 (D)其他資料·· /註= f’Ile，Met or Leu” (ix)特性： (A)名稱/關键：修飾部位 -85- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） I Ί ^---J--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 五、發明說明（83) (B)位置：16 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (D)其他資料：/註= f’Gly or Thr1’ (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：17 (D)其他資料：/註= f’Ile，Met or Val1’ (xi)序列敘述：SEQIDNO : 11 : lie Ser Xaa Xaa Glu lie Xaa Xaa Val lie Val Xaa 1 5 10

Xaa Xaa Glu Xaa Xaa Leu Phe 15 (2) SEQ ID NO : 12 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：12個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 12 : 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Thr lie Asn Lys Pro Lys Gly Tyr Val Gly Lys Glu 1 5 10 (2) SEQ ID NO : 13 的資料： (i)序列特性： (A)長度：16個胺基酸 -86- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 B7 五、發明說明（84 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (B)種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii)分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 13 :

Thr Ala Lys Ser Lys Lys Phe Pro Ser Tyr Thr Ala 1 5 10

Thr Tyr Gin Phe 15 (2) SEQ ID NO : 14 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：45個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 14 : 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Lys Lys Lys lie lie Thr lie Thr Arg lie lie 1 5 10 lie lie Thr Thr lie Asp Gly Gly Cys Gly Glu 15 20 Tyr Gin Ser Arg Val Thr His Pro His Leu Pro 25 30 35 Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Cys Thr 40 45 (2) SEQ ID NO : 15 的資料： (i)序列特性： -87- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 _B7_ 五、發明說明（85 ) (A) 長度：63個胺基酸 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii)分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 15 :

Thr Ala Lys Ser Lys Lys Phe Pro Ser Tyr Thr Ala Thr 1 5 10

Tyr Gin Phe Gly Gly Lys Lys Lys lie lie Thr lie Thr 15 20 25

Arg lie lie Thr lie lie Thr Thr lie Asp Gly Gly Cys 30 35

Gly Glu Thr Tyr Gin Ser Arg Val Thr His Pro His Leu 40 45 50

Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Cys 55 60 (2) SEQ ID NO : 16 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：6個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 16 :

Pro Pro Xaa Pro Xaa Pro 1 5 (2) SEQ ID NO : 17 的資料： -88 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 B7 五、發明說明（86

(i) 序列特性： (A) 長度：59個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO 17 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Thr lie Asn Lys Pro Lys Gly Tyr Val Gly Lys Glu 1 5 10 Gly Gly Lys Lys Lys lie lie Thr lie Thr Arg lie 15 20 lie Thr lie lie Thr Thr lie Asp Gly Gly Cys Gly 25 30 35 Glu Thr Tyr Gin Ser Arg Val Thr His Pro His Leu 40 45 Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Cys 50 55 (2) SEQ ID NO : 18 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：46個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾邵位 (B) 位置：4 -89- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227241 A7 _B7_ 五、發明說明（87 ) (D)其他資料：/註= nSer or Thrn (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：7 (D)其他資料：/註= nLys or Arg，’ (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：8 (D)其他資料：/註= nGly or Thrn (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾邵位 (B) 位置：12 (D)其他資料：/註= '’His or Thrf’ (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：13 (D)其他資料：/註= f’Lys or Arg” (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：16 (D)其他資料：/註= nGly or Thrf’ (xi)序列敘述：SEQIDNO : 18 : lie Ser lie Xaa Glu lie Xaa Xaa Val lie Val Xaa 1 5 10 -90- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） IΊ 一—1 ·------.—I----訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241

Xaa lie Glu Xaa lie Leu Phe Gly Gly Cys Gly Glu 15 20 Thr Tyr Gin Ser Arg Val Thr His Pro His Leu Pro 25 30 35 Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Cys 40 45 A7 _B7 五、發明說明（88 ) (2) SEQ ID NO : 19 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：63個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：21 (D)其他資料：/註= nSer or Thrn (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：24 (D)其他資料：/註= ’’Lys or Argn (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾邵位 (B) 位置：25 (D)其他資料：/註= ’’Gly or Thr” (ix)特性： -91 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） I Ί L —Ί.--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (B) 位置：33 (D)其他資料：/註= nGly or Thr” (xi)序列敘述：SEQIDNO : 19 : Thr Ala Lys Ser Lys Lys Phe Pro Ser Tyr Thr Ala Thr Gin Phe Gly 5 Gly lie Ser lie Xaa 10 Glu lie Xaa 15 20 Xaa Val lie Val Xaa Xaa lie Glu Xaa lie Leu Phe 25 30 35 Gly Gly Cys Gly Glu Thr Tyr Gin Ser Arg Val Thr 40 45 His Pro His Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr 50 55 60 Thr Lys Cys 1227241 A7 _B7_ 五、發明說明（89 ) (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：29 (D)其他資料：/註= nHis or Thrn (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：30 (D)其他資料：/註= nLys or Argff (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (2) SEQ ID NO : 20 的資料： (i)序列特性： (A)長度：60個胺基酸 -92- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 五、發明說明（90) (B)種類：胺基酸 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (D)表面結構：線狀 (ii)分子種類：胜肽 (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：18 (D)其他資料：/註= ’’Ser or Thr，’ (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：21 (D)其他資料：/註= ’’Lys or Arg” (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：22 (D)其他資料：/註= nGly or Thr'， (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：26 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (D)其他資料：/註= ’’His or Thrf’ (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：27 (D)其他資料：/註= f’Lys or Arg” (ix)特性： -93- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 _B7_五、發明說明（91 ) (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：30 (D)其他資料：/註= '’Gly or Thr (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 20 : 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Thr lie Asn Lys Pro Lys Gly Tyr Val Gly Lys Glu 1 5 10 Gly Gly lie Ser lie Xaa Glu lie Xaa Xaa Val lie 15 20 Val Xaa Xaa lie Glu Xaa lie Leu Phe Gly Gly Cys 25 30 35 Gly Glu Thr Tyr Gin Ser Arg Val Thr His Pro His 40 45 Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Cys 50 55 60 (2) SEQ ID NO : 21 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：42個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：1 (D)其他資料：/註= ’’Ile，Met or Leu” (ix)特性： -94- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） — .— LJJ--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 _B7 五、發明說明（92 ) (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (B) 位置：2 (D)其他資料：/註= '，Ser or Thrn (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：5 (D)其他資料：/註= ’’Lys or Argn (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：6 (D)其他資料：/註= nGly or Thr” (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：10 (D)其他資料：/註= ’’His or Thrn (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：11 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (D)其他資料：/註= nLys or Arg·’ (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：12 (D)其他資料：/註= f’Ile, Met or Leu，’ (ix)特性： -95- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Xaa Xaa Glu lie Xaa Xaa Val lie Val Xaa Xaa Xaa 1 5 10 Glu Xaa Xaa Gly Gly Cys Gly Glu Thr Tyr Gin Ser 15 20 Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Arg Ala Leu Met 25 30 35 Arg Ser Thr Thr Lys Cys 40 1227241 A7 _B7_ 五、發明說明（93 ) (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：14 (D)其他資料：/註= ’’Gly or Thrn (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾邵位 (B) 位置：15 (D)其他資料：/註= ’’Ile，Met or Val” (xi)序列敘述：SEQIDNO : 21 : (2) SEQ ID NO : 22 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：60個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：19 -96- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） —•I 一—Ί.--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（94) (D)其他資料：/註= nIle，Met or Leu” (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：20 (D)其他資料：/註= f’Ser or Thr1' (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：23 (D)其他資料：/註= '’Lys or Argn (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：24 (D)其他資料：/註= nGly or Thrn (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：28 (D)其他資料：/註= ’’His or Thr·’ (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：29 (D)其他資料：/註= ’’Lys or Argn (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：30 -97- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） i --------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 五經濟部智慧財產局員工消費合作社印製發明說明（95) (D)其他資料：/註= f’Ile，Met or Leu” (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：32 (D)其他資料：/註= f’Gly or Thr” (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：33 (D)其他資料：/註= nIle5 Met or Val·’ (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 22 : 丁hr Ala Lys Ser Lys Lys Phe Pro Ser 丁yr ΊΊιτ Ala 1 5 10

Thr Tyr Gin Phe Gly Gly Xaa Xaa Glu lie Xaa Xaa 15 20

Val lie Val Xaa Xaa Xaa Glu Xaa Xaa Gly Gly Cys 25 30 35

Gly Glu Thr Tyr Gin Ser Arg Val Thr His Pro His 40 45

Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Cys 50 55 60 (2) SEQ ID NO : 23 的資料： (i)序列特性： (A) 長度：56個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 98-本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227241 A7 _B7_ 五、發明說明（96 ) (ii)分子種類：胜肽 (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：15 (D)其他資料：/註= nIle，Met or Leun (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：16 (D)其他資料：/註= nSer or Thr'， (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：19 (D)其他資料：/註= nLys or Argn (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：20 (D)其他資料：/註= ’’Gly or Thr” (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：24 (D)其他資料：/註= ’’His or Thr” (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：25 -99 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ΙΊ JI.--------------訂---------^9. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 五、發明說明（97) (D)其他資料：/註= f’Lys or Argn (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：26 (D)其他資料：/註= nIle，Met or Leun (ix)特性： (A) 名稱/關鍵·修飾部位 (B) 位置：28 (D)其他資料：/註= nGly or Thrn (ix)特性： (A )名稱/關鍵·修飾部位 (B)位置：29 (D)其他資料：/註= ’’Ile，Met or Valn (xi)序列敘述：SEQIDNO : 23 : (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Thr lie Asn Lys Pro Lys Gly Tyr Val Gly Lys Glu 1 5 10 Gly Gly Xaa Xaa Glu lie Xaa Xaa Val lie Val Xaa 15 20 Xaa Xaa Glu Xaa Xaa Gly Gly Cys Gly Glu Thr Tyr 25 30 35 Gin Ser Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Arg Ala 40 45 Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Cys 50 55 (2) SEQ ID NO : 24 的資料： -100- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（98) (i) 序列特性： (A) 長度：46個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾邵位 (B) 位置：4 (D)其他資料：/註= nSer or Thrn (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：7 (D)其他資料：/S = nLys or Argn (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：8 (D)其他資料：/註= nGly or Thrn (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：12 (D)其他資料：/註= ’’His or Thrn (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：13 -101 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ••—I.ΙΊ-----；----------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 __B7_ 五、發明說明（99 ) (D)其他資料：/註= "Lys or Argn (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：16 (D)其他資料：/註= f’Gly or Thrn (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 24 : -102- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ΙΊ1ΙΊ---------------訂---------^9. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) lie Ser lie Xaa Glu lie Xaa Xaa Val lie Val Xaa 1 5 10 Xaa lie Glu Xaa lie Leu Phe Gly Gly Cys Gly Tyr 15 20 Gly Tyr Gin Ser lie Val Asp His Pro Asp Phe Pro 25 30 35 Lys Pro lie Val Arg Ser lie Thr Lys Cys 40 45 (2) SEQ 丨 ID NO : 25的資料： (i) 序列特性： (A)長度： 45個胺基酸 (B)種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ϋ) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述： SEQ ID NO ： 25 ·· Lys Lys Lys lie lie Thr lie Thr Arg lie lie Thr 1 5 10 lie lie Thr Thr lie Asp Gly Gly Cys Gly Tyr Gly 15 20 Tyr Gin Ser lie Val Asp His Pro Asp Phe Pro Lys 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 _B7 五、發明說明（) 25 Pro lie Val Arg Ser 30 lie Thr Lys Cys 35 40 45 (2) SEQ ID NO : 26 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：45個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 26 :

Lys lie Lys lie Lys Thr lie Thr lie lie Thr Asp lie Gly Thr Gly Arg Cys lie 10 Gly lie Glu Thr Thr 15 20 Tyr Tyr Ser Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Lys 25 30 35 Asp lie Val Arg Ser lie Ala Lys Cys 40 45 (2) SEQ ID NO : 27 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：46個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 27 : -103- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） |_丨「/丨，--------------訂---------^9. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 五、發明說明（101) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 lie Ser lie Ser Glu lie Lys Gly Val lie Val His 1 5 10 Lys lie Glu Gly lie Leu Phe Gly Gly Cys Gly Glu 15 20 Thr Tyr Tyr Ser Arg Val Thr His Pro His Leu Pro 25 30 35 Lys Asp lie Val Arg Sr lie Ala Lys Cys 40 45 (2) SEQ ID NO ： 28的資料： (i) 序列特性： (A)長度： 49個胺基酸 (B)種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ϋ) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述： SEQ ID NO ： 28 : Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr 1 5 10 Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe lie Arg 15 20 Lys Ser Pro Thr lie Thr Ser Leu Val Val Asp Leu 25 30 35 Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser 40 45 Arg (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (2) SEQ ID NO : 29 的資料： (i)序列特性： (A)長度：60個胺基酸 -104- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Gin Gly His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lys Cys 1 5 10 Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu 15 20 Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe lie Arg Lys 25 30 35 Ser Pro Thr lie Thr Ser Leu Val Val Asp Leu Ala 40 45 Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg 50 55 60 (2) SEQ ID NO ： 30的資料： (i) 序列特性： (A)長度： 64個胺基酸 (B)種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ϋ) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述： SEQ ID NO ： 30 : Gin Val Thr Tyr Gin Gly His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lys Cys 5 Ala Asp Ser Asn Pro 10 Arg Gly Val 15 20 Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu 25 30 35 A7 _B7_ 五、發明說明（102 ) (B)種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (i i)分子種類：胜月太 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 29 : -105- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ·ϋ -^1 IJ ϋ 1 l^i ϋ mamee ϋ I I ϋ 1 ·ϋ ""、 a··· w· w· am· μ·· ^ J » (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（103)

Phe lie Arg Lys Ser Pro Thr lie Thr Ser Leu Val 40 45 Val Asp Leu Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu 50 55 60 Thr Trp Ser Arg (2) SEQ ID NO : 31 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：76個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 31 :

Gin Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr Ser 1 5 10 Gin Val Thr Tyr Gin Gly His Thr Phe Glu Asp Ser 15 20 Thr Lys Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val 25 30 35 Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu 40 45 Phe lie Arg Lys Ser Pro Thr lie Thr Ser Leu Val 50 55 60 Val Asp Leu Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu 65 70

Thr Trp Ser Arg 75 (2) SEQ ID NO : 32 的資料： -106- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -—.—.u --------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 _B7_ 五、發明說明（104) (i) 序列特性： (A) 長度：35個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 32 : Γ g TyAr aφ AlIleAS35 erohe/al SIPV aleual vLev GlyASPMLeu 8 e r ^rher APS rororhro p p T 3 n r Lsere A 5 sII errorhr s p T asAr15pr uaerer Ass rsu s cylLeLY25 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (2) SEQ ID NO : 33 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：46個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO ·· 33 : 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Gin Gly His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lys Cys 1 5 10 Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu 15 20 Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe lie Arg Lys 25 30 35 Ser Pro Thr lie Thr Ser Leu Val Val Asp -107- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241

Gin Val Thr Tyr Gin Gly His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lsy Cys 5 Ala Asp Ser Asn Pro 10 Arg Gly Val 15 20 Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Por Ser Pro Phe Asp Leu 25 30 35 Phe lie Arg Lys Ser Pro Thr lie Thr Ser Leu Val 40 45 A7 B7 五、發明說明（105) 40 45 (2) SEQ ID NO : 34 的資料·· (i) 序列特性： (A) 長度：50個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 34 :

Val Asp 50 (2) SEQ ID NO : 35 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：62個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 35 : -108- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） IΊ J J----------------------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227241 A7 B7 五、發明說明（106)

Gin Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr Ser 1 5 10 Gin Val Thr Tyr Gin Gly His Thr Phe Glu Asp Ser 15 20 Thr Lys Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val 25 30 35 Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu 40 45 Phe lie Arg Lys Ser Pro Thr lie Thr Ser Leu Val 50 55 60 Val Asp (2) SEQ ID NO : 36 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：29個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 36 :

Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr 1 5 10 Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe lie Arg 15 20 Lys Ser Pro Thr lie (2) SEQ ID NO : 37 的資料： (i)序列特性= (A)長度：40個胺基酸 -109- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） I Ί .L J J.--------------訂--------- (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) 1227241

Gin Gly His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lys Cys 1 5 10 Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu 15 20 Ser Arg Pro Sre Pro Phe Asp Leu Phe lie Arg Lys 25 30 35 Ser Pro Thr lie 40 A7 B7 五、發明說明（107) (B)種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii)分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 37 : (2) SEQ ID NO : 38 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：44個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 38 : —I J--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Gin Val Thr Tyr Gin Gly His Thr Phe Glu Asp Ser 1 5 10 Thr Lys Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val 15 20 Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu 25 30 35 Phe lie Arg Lys Ser Pro Thr lie 40 -HO- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 B7 五、發明說明（108) (2) SEQ ID NO : 39 的資料： (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (i) 序列特性： (A) 長度：56個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 39 :

Gin Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr Ser 1 5 10 Gin Val Thr Tyr Gin Gly His Thr Phe Glu Asp Ser 15 20 Thr Lys Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val 25 30 35 Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu 40 45 Phe lie Arg Lys Ser Pro Thr lie 50 55 (2) SEQ ID NO : 40 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：76個胺基酸經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 40 :

Gin Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr Cys -Ill - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 B7 五、發明說明（109) 1 Gin Val Thr Tyr 5 Gin Gly His Thr Phe 10 Glu Asp Ser Thr Lys 15 Lys Cys Ala Asp Ser 20 Asn Pro Arg Gly Val 25 Ser Ala Tyr Leu Ser 30 Arg Pro Ser Pro Phe 35 Asp Leu Phe lie Arg 40 Lys Ser Pro Thr lie 45 Thr Cys Leu Val Val 50 Asp Leu Ala Pro Ser 55 Lys Gly Thr Val Asn 60 Leu Thr Trp Ser 75 Arg 65 70 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (2) SEQ ID NO : 41 的資料：(i) 序列特性： (A) 長度：10個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 41 : Cys Lys Gin Arg Asn Gly Thr Leu Thr Cys 1 5 10 (2) SEQ ID NO : 42 的資料：(i)序列特性： (A) 長度：45個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 -112- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） I Ί J J---------I----訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（11G) (D)表面結構：線狀 (ii)分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 42 :

Gin Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr Cys 1 5 10 Gin Val Thr Tyr Gin Gly His Thr Phe Glu Asp Ser 15 20 Thr Lys Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val 25 30 35 Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro 40 45 (2) SEQ ID NO ： 43的資料： (i) 序列特性： (A)長度： 34個胺基酸 (B)種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ϋ) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述： SEQ ID NO ： 43 : Cys Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser 1 5 10 Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Asn His Ser Thr Arg 15 20 Lys Glu Glu Lys Gin Arg Asn Gly Thr Cys 25 30 (2) SEQ ID NO : 44 的資料： (i)序列特性： -113 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） I Ί J J--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（111 (A) 長度：33個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii)分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 44 :

Cys Pro Val Gly Thr Arg Asp Trp lie Glu Gly Glu 1 5 10

Thr Tyr Gin Cys Arg Val Thr His Pro His Leu Pro 15 20

Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Cys 25 30 (2) SEQ ID NO : 45 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：14個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 45 :

Ser Thr Thr Lys Thr Ser Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val 1 5 10 (2) SEQ ID NO : 46 的資料： (i)序列特性： (A) 長度：14個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 114- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） I Ί .u i I---------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（112) (D)表面結構：線狀 (ii)分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 46 :

Cys Trp Ser Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Cys Asn His Ser 1 5 10 (2) SEQ ID NO : 47 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：19個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 47 ··

Cys Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe lie Arg 1 5 10 Lys Ser Pro Thr lie Thr Cys 15 (2) SEQ ID NO : 48 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：13個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 48 : -115- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ΙΊ l· J 1^---------I----訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（113)

Cys Val Gly Thr Arg Asp Trp lie Glu Gly Glu Pro Cys 1 5 10 (2) SEQ ID NO : 49 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：15個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 49 : Pro Val

Cys Pro 1 Glu Pro

Cys 15

Thr Arg Asp Trp lie Glu Gly 10 (2) SEQ ID NO : 50 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：16個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 50 :

Cys Lys Glu Glu Lys 5 Gin Arg Asn Gly Thr Leu Thr 10 Val Thr Ser Cys 15 -116- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ^1 1_1 1^^ ·ϋ n ·ϋ ϋ ϋ 0 Βϋ _1 n ammmf mmmme _1 J 、 I ϋ ϋ— I n I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 1227241 _B7_ 五、發明說明（114) (2) SEQ ID NO : 51 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：8個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 51 :

Lys Glu Glu Lys Gin Arg Asn Gly 1 5 (2) SEQ ID NO : 52 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：1 1個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 52 :

Cys Trp Ser Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Cys 1 5 10 (2) SEQ ID NO : 53 的資料： (i)序列特性： (A) 長度：21個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 -117- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ϋ —L^ ίΛ -ϋ n emtm I ϋ · I— I i_i 1 an an J I ϋ ϋ ·ϋ ϋ ϋ ϋ I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1227241 A7 B7 五、發明說明（115) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (ϋ) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述： SEQ ID NO ： 53 : Pro Thr lie Thr Cys Leu Val Leu Asp Leu Ala Pro 1 5 10 Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Cys 15 20 (2) SEQ ID NO : 54的資料： (i) 序列特性： (A)長度= 16個胺基酸 (B)種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ϋ) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述： SEQ ID NO ： 54 : Pro Thr lie Thr Cys Leu Val Leu Asp Leu Ala Pro 1 5 10 Ser Lys Gly Thr 15 (2) SEQ ID NO ： 55的資料： (i) 序列特性： (A)長度： 25個胺基酸 (B)種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ϋ) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述： SEQ ID NO ： 55 : -118- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） n ril el· IJ ϋ ϋ ^ ϋ ϋ I ϋ · ϋ ^1 ϋ ϋ ϋ I ·ϋ 一-0、 ϋ ϋ I I ϋ ϋ ϋ I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（116)

Thr 1 Ser Thr Leu Pro 5 Val Gly Thr Arg Asp 10 Trp lie Glu His 25 Gly Glu 15 Thr Tyr Gin Cys Arg 20 Val Thr His Pro (2) SEQ ID NO : 56 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：16個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 56 :

Pro Thr lie Thr Ser Leu Val Leu Cys Leu Ala Pro 1 5 10

Ser Lys Gly Cys 15 (2) SEQ ID NO : 57 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：23個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 57 :

Cys Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg Ala Ser Gly Lys -119- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ^1 ϋ el· I ϋ ϋ ϋ ϋ ϋ 1 1 I ϋ J」I —ϋ ϋ ϋ ϋ an ϋ ϋ I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（117) 1 5 Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys 10 Glu Glu Cys 15 20 (2) SEQ ID NO : 58 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：53個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 58 :

Cys Thr Trp Ser Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Asn 1 5 10 His Ser Thr Arg Lys Glu Glu Lys Gin Arg Asn Gly 15 20 Thr Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly Thr 25 30 35 Arg Asp Trp lie Glu Gly Glu Thr Tyr Gin Cys Arg 40 45 Val Thr His Pro His 50 (2) SEQ ID NO : 59 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：10個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 -120- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ϋ n L. —J ·1 I ϋ ϋ · ϋ ϋ I I 1 _1 I J < I ϋ ϋ ϋ ϋ ϋ I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7_ 五、發明說明（118) (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 59 :

Lys Thr Lys Gly Ser Gly Phe Phe Val Phe 1 5 10 (2) SEQ ID NO : 60 的資料： (i)序列特性： (A) 長度：19個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (Π)分子種類：胜肽 (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：4 (D)其他資料：/註= f’Ser or Thrn (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：7 (D)其他資料：/註= nLys or Argn (ix)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：8 (D)其他資料：/註= ’’Gly or Thr” (ix)特性： (A)名稱/關键：修飾邵位 -121 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） I—^l· J- ---------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（119) (B)位置：12 (D)其他資料：/註= ’’His or Thrn (ix)特性： (A )名稱/關鍵·修飾部位 (B)位置：13 (D)其他資料：/註= f’Lys or Arg” (ix)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：16 (D)其他資料：/註= ’’Gly or Thr” (xi)序列敘述：SEQIDNO : 60 : lie Ser lie Xaa Glu lie Xaa Xaa Val lie Val Xaa 1 5 10

Xaa lie Glu Xaa lie Leu Phe 15 (2) SEQ ID NO : 61 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：15個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 61 :

Leu Ser Glu lie Lys Gly Val lie Val His Arg Leu 1 5 10 -122- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ^^1 "1·— i·^ ϋ ϋ··. -ϋ 1§ ϋ · mmm— mmmmmm mam§ mmmmm eammm mmmma mMMmm 一一口、 ϋ ϋ -^1· i^i ϋ·· 1_1 I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 _B7_ 五、發明說明（120)

Glu Gly Val 15 (2) SEQ ID NO : 62 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：20個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 62 : 1 ϋ HJ- ϋ ^^1 I 1. emmmm n ^1· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Gly lie Leu Glu Ser Arg Gly lie Lys Ala Arg lie Thr His Val Asp 5 Thr Glu Ser Tyr 10 15 20 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (2) SEQ ID NO : 63 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：17個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 63 : Lys Lys Gin Tyr lie Lys Ala Asn Ser Lys Phe lie 1 5 10 Gly lie Thr Glu Leu 15 訂--------- -123- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐） 1227241

Lys 1 Lys Phe Asn Asn 5 Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu 10 Arg Val Pro 15 Lys Val Ser Ala Ser 20 His Leu A7 _B7_ 五、發明說明（121 ) (2) SEQ ID NO : 64 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：22個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 64 : (2) SEQ ID NO : 65 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：30個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 65 : (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Lys Lys Leu Arg Arg Leu Leu Tyr Met lie Tyr Met 1 5 10 Ser Gly Leu Ala Val Arg Val His Val Ser Lys Glu 15 20 Glu Gin Tyr Tyr Asp Tyr 25 30 -124- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 B7 五、發明說明（122) (2) SEQ ID NO : 66 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：27個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 66 : Asn Tyr Leu Arg Thr Asp Ser Asp Lys 5 10 Leu Gin Thr Met Val Lys Leu Phe Asn 20

Asp Pro Asp Arg Phe 15 Arg lie Lys 25 (2) SEQ ID N( 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 :67的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：24個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 67 :

Gly 1 Ala Tyr Ala Arg 5 Cys Pro Asn Gly Thr 10 Arg Ala Leu Thr Val 15 Ala Glu Leu Arg Gly 20 Asn Ala Glu Leu -125- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） II ,-ϋ 1-^ ·ϋ ϋ ϋ am— 1— ϋ ϋ I mmmmme J Mr > I ϋ ϋ ·ϋ ϋ I (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) 1227241 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（123) (2) SEQ ID NO : 68 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：15個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 68 :

Phe Phe Leu Leu Thr Arg lie Leu Thr lie Pro Gin 1 5 10

Ser Leu Asp 15 (2) SEQ ID NO : 69 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：21個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 69 :

Val 1 Ser Phe Gly Val 5 Trp lie Arg Thr Pro Pro Ala 10 Tyr Arg Pro 15 Pro Asn Ala Pro lie 20 Leu (2) SEQ ID NO : 70 的資料： (i)序列特性： -126- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） —1 J 1^.---------I----^--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 Α7 Β7 Γ 五、發明說明（124) (A) 長度：20個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii)分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 70

Ser 1 Asp Phe Phe Pro 5 Ser Val Arg Thr Ala Ser 15 Ala Leu Tyr Arg Glu 20 10 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (2) SEQ ID NO : 71 的資料： (i)序列特性： (A) 長度：20個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (i i)分子種類：胜月太 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 71 : Pro His His Thr Ala Leu Arg Gin Ala lie 1 5 10 Trp Gly Glu Leu Met Thr Leu Ala 15 20 (2) SEQ ID NO : 72 的資料： (i)序列特性： (A) 長度：17個胺基酸 (B) 種類：胺基酸

Leu Cys ϋ^ϋ βΗ ϋ ϋ ϋ ϋ n · ·ϋ ·ϋ n ·1 ϋ ^1 ^1 JrJI .1- ϋ ϋ ϋ ϋ ϋ ^1 I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -127- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 B7 五、發明說明（125) (D)表面結構：線狀 (ii)分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 72 ··

Trp

Val Arg Asp lie lie 5 Ser Ser Gin Lys Thr 15

Asp Asp Phe Thr Asn Glu 10 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (2) SEQ ID NO : 73 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：19個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 73 : Arg Ala Gly Arg Ala lie Leu His lie 1 5 lie Arg Gin Gly Leu Glu Arg 15 (2) SEQ ID NO : 74 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：21個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽

Pro Thr Arg 10 —J— * T--------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -128- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1227241 A7 B7 五、發明說明（126) (xi)序列敘述：SEQIDNO : 74 : Ala Val Ala Glu Gly Thr Asp Arg Val lie 1 5 10 Leu Gin Arg Ala Gly Arg Ala lie Leu 15 20

Glu Val 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (2) SEQ ID NO : 75 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：25個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 75 : Ala Leu Asn lie Trp Asp Arg Phe Asp Val Phe Ser 1 5 10 Thr Leu Gly Ala Thr Ser Gly Tyr Leu Lys Gly Asn 15 20 Ser 25 (2) SEQ ID NO : 76 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：22個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 -129- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ▼裝---- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) II--------- 1227241 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（127) (xi)序列敘述：SEQIDNO : 76 :

Asp 1 Ser Glu Thr Ala 5 Asp Asn Leu Glu Lys Thr Val 10 Ala Ala Leu 15 Sre lie Leu Pro Gly 20 His Gly (2) SEQ ID NO : 77 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：39個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述·· SEQIDNO : 77 :

Glu Glu lie Val Ala Gin Ser lie Ala Leu Ser Ser 1 Leu Met Val Ala 5 Gin Ala lie Pro Leu 10 Val Gly Glu Leu Val 15 Asp lie Gly Phe Ala 20 Ala Thr Asn Phe Val 25 Glu Ser Cys 30 35 (2) SEQ ID NO : 78 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：21個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 -130- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） il^l· I In----I----------^--I------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7 五、發明說明（128) (xi)序列敘述：SEQIDNO : 78 : Asp lie Glu Lys Lys lie Ala Lys Met Glu Lys Ala 1 5 10 Ser Ser Val Phe Asn Val Val Asn Ser 15 20

(2) SEQ ID NO : 79 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：17個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO 79 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Trp Phe Lys Thr Asn Ala Pro Asn Gly Val Asp 5 10 Glu Lys lie Arg lie 15 (2) SEQ ID NO : 80 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：14個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 80 : Gly Leu Gin Gly Lys lie Ala Asp Ala Val Lys Ala -131 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 0 ϋ>ϋ ϋ ·ϋ ϋ ϋ n I · ϋ ϋ I I ϋ ϋ ^1^^· ϋ ^1 ϋ -^ ί (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1227241 A7 B7

Gly Leu Ala Ala Gly 5 Leu Val Gly Met Ala Ala Asp 10 Ala Met Val Glu Asp Val Asn 15 五、發明說明（129) 1 5 10

Lys Gly (2) SEQ ID NO : 81 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：19個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述·· SEQIDNO ·· 81 ·· (2) SEQ ID NO : 82 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：20個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQ ID NO : 82 : -132- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） — I ^---------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Ser 1 Thr Glu Thr Gly Asn Gin His His Tyr Gin Thr 10 Arg Val Val Ser Asn Ala Asn Lys 15 20 A7 1227241 _B7_ 五、發明說明（130) (2) SEQ ID NO : 83 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：15個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 83 :

Cys Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe lie Arg Lys Ser 1 5 10

Pro Thr Cys 15 (2) SEQ ID NO : 84 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：25個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D)表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (xi)序列敘述：SEQIDNO : 84 : (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------訂---- # 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Cys Gly Glu Thr Tyr 5 Lys Ser Thr Val Ser 10 His Pro Asp Leu Pro Arg Glu Val Val Arg Ser lie Ala Lys 15 20 Cys 25 -133- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） L_ 1227241 . 申請曰期饮屮、、‘ 案號 088106133 類別以上各攔由本局填註）

中文說明書替換頁(93年6月） $ 1專利説明書中文、霧！名稱發明創# 人申請人英文姓名國籍住、居所姓名 (名稱）國籍住、居所 (事務所) 代表人姓名

IgE-CH3區域抗原胜肽，含彼之胜肽結合物，及含有該胜肽結合物用於治療過敏之醫藥組合物

IgE-CH3 DOMAIN ANTIGEN PEPTIDE, PEPTIDE CONJUGATE CONTAINING THE SAME, AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATING ALLERGIES CONTAINING THE PEPTIDE CONJUGATE L王長怡 2.亞倫M.菲爾均美國 1 ·美國紐約州寒春港市蛇崗路47號 2·美國紐約州杭庭頓站市希樂路45號美商聯合生物醫學公司美國美國紐約州侯波巨市大衛斯路25號王長怡本紙張尺度適用中國國豕檩準(CNS) A4規格(210 X 297公釐）

裝

Claims

I227¥ds8106133號專利申請案中文申請專利範圍替換本(93年9月）益 A8 B8 申請專利範圍

修i丨補充I 1. 一種介於25及29個胺基酸長度之IgE-CH3區域抗原胜肽，其含有以約2 3個胺基酸殘基區隔之兩個半胱胺酸殘基，其係選自：SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8 及 SEQ ID NO:84所組成之群，或其免疫功能類似物，其中seq ID N0:5中1至4個殘基係被保存地取代或刪除。 2·根據申請專利範圍第1項之IgE-CH3區域抗原胜肽，其中該IgE-CH3區域抗原胜肽係選自·· SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID Ν0··7、SEQ ID N0:8及SEQ ID NO:84所組成之群。 3. 一種50至90個胺基酸之合成性胜肽，其包括： ⑻輔助Τ細胞（Th)抗原表位， (b) I g E - C Η 3區域抗原胜肤，其係選自：$ e q I d NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID N〇:13 及 SEQ ID NO:84 所組成之群；及 (c) 免疫刺激性侵染素區域，其中该Th抗原表位係選自下列所組成之群：b型肝炎病毒表面及核心抗原之辅助τ細胞抗 -服叫' 百日咳毒素之辅助胞㈣表^ (PT Th)、破傷風毒素之輔助Τ細胞抗原表位（ττ Th)、麻療病毒F蛋白質之輔助τ細胞抗原表位（Mvf Th)、砂眼披衣菌主要外膜蛋白質之輔助τ細胞抗原表位（CT Th)、白喉毒素之輔助τ細胞抗原表位（DT 1227241 as Β8 C8 ______D8 六、申請專利範園 Th)、鐮狀瘧原蟲環孢子體之辅助τ細胞抗原表位（pF Th)、芰森血吸虫三磷酸同型羑之輔助τ細胞抗原表位 (SM Th)及大腸桿菌TraT之輔助T細胞抗原表位 (TraT Th) ’及其根據羅士拔（Rothbad)序列及卜 4、5、8規則所修飾之經修飾Th抗原表位。 4· 一種胜肽結合物，其包括輔助T細胞抗原表位序列 (Th)共價聯結到IgE-CH3區域抗原胜肽，其中該 IgE-CH3區域抗原胜肽係選自·· seQ ID N0:5、 SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID Ν0··8、 SEQ ID N0:13及SEQ ID NO :84所組成之群，且該 Th抗原表位係選自下列所組成之群·· B型肝炎病毒表面及核心抗原之輔助T細胞抗原表位（HBs Th and HBc Th)、百日咳毒素之輔助τ細胞抗原表位（ρτ Th)、破傷風毒素之輔助τ細胞抗原表位Th)、麻疹病毒F蛋白質之輔助τ細胞抗原表位（mvf Th)、砂眼披衣菌主要外膜蛋白質之輔助T細胞抗原表位（c τ Th)、白喉毒素之輔助τ細胞抗原表位（DT Th)、鐮狀癔原蟲環孢子體之辅助T細胞抗原表位（p f T h)、曼森血吸虫三磷酸同型麦之輔助T細胞抗原表位（s Μ Th)及大腸桿菌TraT之辅助τ細胞抗原表位（TraT Th) ’及其根據羅士拔（R〇thbard)序列及1、4、5、8 規則所修飾之經修飾Th抗原表位。 5. 一種如下式之胜肽結合物： (A)n-(IgE-CH3 區域抗原）-(B)〇-(Th)m-X -2- 本紙張尺度適财國國家標準(CNS) A4規格(謂χ撕公董) A BCD 1227241 六、申請專利範圍或 (A)n-(Th)m-(B)0-(IgE-CH3 區域抗原）-X 其中每個A各自為胺基酸或一免疫刺激性侵染素區域；每個B係選自下列胺基酸所組成之群： -NHCH(X)CH2SCH2CO-，-NHCH(X)CH2SCH2CO( ε -N)Lys-， -NHCH(X)CH2S-i虎 ί白醯亞胺基（e-N)Lys-，and -NHCH(X)CH2S-(琥J白醯亞胺基）·；每個Th係各自係選自：SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:13及SEQ ID NO:84所組成之群，且該Th抗原表位係選自下列所組成之群：B型肝炎病毒表面及核心抗原之輔助T細胞抗原表位（HBs Th and HBc Th)、百日咳毒素之輔助τ細胞抗原表位（ρτ Th)、破傷風毒素之輔助T細胞抗原表位（TT Th)、麻疹病毒F 蛋白質之輔助T細胞抗原表位（MV f Th)、砂眼披衣菌主要外膜蛋白質之辅助T細胞抗原表位（CT Th)、白喉毒素之辅助T細胞抗原表位（DT Th)、鐮狀瘧原蟲環孢子體之輔助T細胞抗原表位（pf Th)、曼森血吸虫二磷酸同型羑之輔助T細胞抗原表位（SM Th)及大腸桿菌TraT之辅助T細胞抗原表位（TraT Th)，及其根據羅士拔（Rothbard)序列及1、4、5、8規則所修飾之經修飾Th抗原表位； -3-

1227241 έ88 C8 D8 六、申請專利範圍 IgE-CH3區域抗原係選自：SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6 ' SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:13及SEQ ID NO:84所組成之群； X是α-COOH或a-CONH2胺基酸； η是由0到約1 0 ; m是由1到約4 ;及 0是由0到約1 0。 6. 一種如下式之胜肽結合物 (IgE-CH3 區域抗原）-(B)〇-(Th)m-(A)n-X 或 (Th)m-(B)〇-(IgE-CH3 區域抗原）-(A)n-X 其中每個A是各自為胺基酸或是一般免疫刺激序列；每個B係選自下列胺基酸所組成之群， -NHCH(X)CH2SCH2CO-，-NHCH(X)CH2SCH2CO〇-N)Lys-， -NHCH(X)CH2S-succinimidyl( ε -N)Lys- 5 and -NHCH(X)CH2S-(succinimidyl)-；每個Th係各自選自：SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID Ν0··13及SEQ ID NO:84所組成之群，且該Th抗原表位係選自下列所組成之群：B型肝炎病毒表面及核心抗原之輔助T細胞抗原表位（HBs Th and HBc Th)、百日咳毒素之輔助T細胞抗原表位（pT Th)、破 -4- 1227241 as B8 C8 D8 六、申請專利範圍一傷風毒素之辅助T細胞抗原表位（TT Th)、麻疹病毒F 蛋白質之輔助T細胞抗原表位（MVf Th)、砂眼披衣菌主要外膜蛋白質之輔助T細胞抗原表位（CT Th)、白喉毒素之輔助T細胞抗原表位（DT Th)、鐮狀瘧原蟲環孢子體之輔助T細胞抗原表位（PF Th)、曼森血吸虫三磷酸同型羑之輔助T細胞抗原表位（SM Th)及大腸桿菌TraT之輔助T細胞抗原表位（TraT Th)，及其根據羅士拔（R 〇 t h b a r d )序列及1、4、5、8規則所修飾之經修飾Th抗原表位； IgE-CH3區域抗原係選自：SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:13及SEQ ID NO:84所組成之群； X是α-COOH或a-CONH2胺基酸； η是由〇到約1 〇 ; m是由1到約4 ;及〇是由0到約1 0。 7· 根據申請專利範圍第4-6項中任一項之胜肽結合物，其中該Th為SSAL。 8· 根據申請專利範圍第4-6項中任一項之胜肽結合物，其中該IgE-CH3區域抗原胜肽具有選自下列所組成之群之胺基酸序列SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、 SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、及 SEQ ID NO:84。 9·根據申請專利範圍第7項之胜肽結合物，其中該I gE- -5- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) !227241 x A8 B8 C8 ------------ D8 心申請專； CH3區域抗原胜肽具有選自下列所組成之群之胺基酸序列：SEQ ID N0:5 SEQ ID N0:6、SEQ ID N〇: 7 ' SEQ ID N0:8、及 SEQ ID NO:84。 10·根據申請專利範圍第4-6項中任一項之胜肽結合物，其中該Th具有選自SEQ ID NOS:9-12及SEQ ID N〇S·· 61-82所組成之群之胺基酸序列。 U·根據申請專利範圍第7項之胜肽結合物，其中該Τ1ι具有選自 SEQ ID NOS:9-12 及 SEQ ID NOS:61-82 所組成之群之胺基酸序列。 12·根據申請專利範圍第8項之胜肽結合物，其中該Tll具有選自 SEQ ID NOS:9-12 及 SEQ ID NOS:61-82 所組成之群之胺基酸序列。 13·根據申請專利範圍第9項之胜肽結合物，其中該Tll具有選自 SEQ ID NOS:9-12 及 SEQ ID NOS:61-82 所組成之群之胺基酸序列。 14· 一種含有IgE-CH3區域抗原胜肽之胜肽，其包括選自 SEQ ID NOS:14-27所組成之群之胺基酸序列。 b·根據申請專利範圍第5或6項之胜肽結合物，其中至少一個A為侵染素區域。 16·根據申請專利範圍第5或6項之胜肽結合物，其中η為 3 ’且（Α)3為（侵染素區域）-Gly-Gly。 17·根據申請專利範圍第15項之胜肽結合物，其中該侵染素區域具有SEQ ID N0:13之胺基酸序列。 18.根據申請專利範圍第16項之胜肽結合物，其中該侵染 -6- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1227241 、申請專利範圍 A8 B8 C8 D8 素區域具有SEQ ID N0:13之胺基酸序列。 19· 一種胜肽結合物，其包含載體蛋白質共價聯結到一個或多個根據申請專利範圍第1項之IgE-CH3區域抗原胜肽。 20·根據申請專利範圍第19項之胜肽結合物，其中該載體蛋白質為鎖孔具血藍蛋白。 21·根據申請專利範圍第14項之胜肽，其包括選自SEQ D N0:14及SEQ ID NO:15所組成之群之胺基酸序列。 22· —個分支型多聚物，其包括離胺酸、三離胺酸、或七離胺酸之核心，分別共價聯結至申請專利範圍第4-6 或1 4項中之二個、四個、或八個胜肽結合物。 23· —種聚合物’其包含一或多個申請專利範圍第4 _ 6或 1 4項中任一項之聚合物，藉雙功能性交互聯結劑交互聯結。 24· —種用於治療過敏之醫藥組合物，其包含免疫有效量之申請專利範圍第4-6或1 4項中任一項之胜肽或胜肽結合物及藥學上可接受之載体。 25·根據申請專利範圍第24項之醫藥組合物，其中該免疫有效里之邊胜肤或胜肤結合物為每次劑量為每公斤体重約有0 · 5 // g到1 m g。 26. —種核酸’其係編碼根據申請專利範圍第6項任一項之胜肽。本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐)