TWI287985B - Water-soluble isoflavone composition, manufacture method and usage thereof - Google Patents

Description

1287985 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】

及盆m系有關一種水溶性異黃，組成物及其製造方法 及^途’ ^之為水溶性優越、對吸收之即效 收後之藥理作用之捭續柯望版& 其製造方法及其㈣之水純異黃《組成物及 【先前技術】

辟及料生物（異黃_生物）已知有效於防止骨 二=2,具有不流失補充之約之效果、防止高㈣ 夕見之月貝疏鬆症、又緩和女性激素之㈣，補充益古 2素作用者而防止更年期障礙，防止膽固醇之氧化而防 幼脈硬化，防止高脂血症等之成人患者之^ 二=黃r其衍生物之攝取’提出萃取大豆異黃酮及 其何生物之各種方法。 上述骨質疏鬆症藥劑之治療法，可列舉如：投藥以往 之鈣劑、活性維生素〇3劑、女性激素劑等。X，為了預防 =質疏鬆症之發病，每天要改善包括飲食、運動之生活習 慣，可有效防止骨密度之降低。尤其對停經後之女性，= 於女性激素之雌激素之分泌量降低，受肋影響而有動脈 硬化、高脂血症、高血壓等更年期障礙，提高停經後骨質 疏鬆症之發病風險。因此作為該等疾病之預防對策亦可期 望積極攝取大豆異黃酮及其衍生物等。 / 又，假如可開發使體内迅速吸收、且較長時間以高濃 度停留在體内之異黃酮衍生物或及其組生物，其意義重大 315843 5 1287985 ., 收後較長時間；其二，及藥效成分吸收迅速、吸 醫藥品等 專發病、且含營養分及藥效成分之食品及 防止it ί要平日通過攝取食品或健康食品等可減低. 治療骨質疏鬆症，則1有用Ρ 、-鬆疒之毛病、或 全接古、八有用性咼。因此期望出現簡便且安 Ζ进度、預防骨質疏鬆症之新穎健康食品或醫藥品。 σ ’’期望出現緩和女性激素 :::者而防止更年期障礙、防止膽固醇之氧二: =妝:防高'血症等成人疾病之新賴健康食品、醫藥 又本兔明人專，深入研究以往描屮夕士 - s廿 生物之萃取方法、或接1处出之大且異黃嗣衍 得到之物質等。/ U溶性之方法、以及經該方法 —大五八汽輞衍生物之方法或提高其水溶性之方法 1::列舉：：在合成吸附樹脂上接觸大豆萃取液且在該 *曰口附異Θ㈣，以有機溶劑或有機溶劑 溶出異相之Μ(特開昭62_126186號公報：專利文^勿 將大丑胚芽經水溶性有機溶劑萃取濃縮後 f機溶劑去除親油性成分、再經濃縮、純化、乾燥製造異 η酮化合物之方法（特開平u_263786號公報··專利文獻2)、 將由大丑何生之異黃_衍生物萃取物用乙醇溶液在分 支型麥芽糖基^環糊精（malt〇syl α _cycl〇dextdn)共存下 315843 6 1287985 * * .

• I J0 進行加溫溶解，冷卻後去除不溶物之水溶性異黃酮衍生物 萃取物之製造方法（特開2002-155072號公報：專利文獻3)、 ，^ 由大豆原料中得到之粗萃取物，在水溶液中與環糊精 二· 混合後，去除不溶物之水易溶性大豆異黃酮之製造方法（特 開平10-298175號公報：專利文獻4)等。 " 又，將異黃酮衍生物用冷-或7 -環糊精包接，抑制苦 ， 味等，提高對水之溶解性，而為體内之吸收效率高之包接 物（特開平9-309902號公報：專利文獻5)。 但，由上述特開昭62-126186號公報、特開平 鲁 11-263786號公報之方法得到之萃取物，如特開 2002-155072號公報所記載，其水溶液之溶解性不佳。同 樣特開平9-309902號公報之包接物，對水溶液之溶解性、 水溶液中之安定性存在改良之餘地。 又，在上述特開2002-155072號公報之方法中，雖揭 示可有效回收異黃酮衍生物萃取物，但由於大豆粗萃取物 中之乙醇可溶性之不純物也流到濾液中而回收，因此存在 $ 進一步改良異黃酮或其衍生物之收率等之餘地，又得到之 異黃酮或其衍生物之包接物，接著在糖及糖轉移酶存在下 進行α ·葡萄糖基化而使用時，由於所含之乙醇阻礙酶活 性，在酶處理時有必要事先揮散·去除乙醇。又，特開平 10-298175號公報之方法，如上述特開2002-155072號公報 所記載，能回收不超過約10%左右，因此存在進一步改良 異黃酮或其衍生物之收率之餘地。 在特開2000-327691號公報（專利文獻6)中記載，從大 7 315843 4 1287985 ' 9 f 旦及/或大旦加工品中用pH8以上之鹼性溶液萃取異黃酮 衍生物、或用熱水或有機溶劑萃取異黃酮衍生物，其次將 ， α ·葡萄糖基糖化合物與糖轉移酶反應產生^ -葡萄糖基異 黃酮衍生物後，在ρΗ5·5以下之酸性冷卻，使不純物沉澱 而去除之由大豆衍生之異黃酮衍生物或其配糖基之製造方’ 法。 / 但’在該公報（特開2000-327691號公報）之方法中， 得到之由大豆衍生之α -葡萄糖基異黃酮衍生物、在異黃酮 及其衍生物以外之含大豆不純物之鹼側進行酶反應，因此_ 由不純物衍生之色價高、又容易引起分解反應，存在改良 之餘地。 專利文獻1 :特開昭62-126186號公報 專利文獻2 :特開平11-263786號公報 專利文獻3 :特開2002-155072號公報 專利文獻4 :特開平ι〇-298175號公報 專利文獻5 :特開平9_3〇99〇2號公報 馨 專利文獻6 :特開2000-327691號公報 【發明内容】 本發明係提供在體内迅速吸收，且能於較長時間内以 南濃度狀態停留在體内，能期待具有提高骨密度、骨質疏 氣、症之預防·治療等效果，可利用作為骨密度提高劑等醫 某πα，復可使用添加在一般飲食物、健康食品 '機能性食 Π 口或飼料中，而能均衡有效地改善骨代謝之酶處理異黃酮 類組成物（異黃酮衍生物組成物）為目的。 8 315843 1287985 等、及提供產生水溶性異黃酮組成物特性之化妝占 “水溶性異黃酮組成物之適宜用途。 物作f明係提供使用含^異黃_類之大豆異黃酮萃取 異黃明類之製造方法ίΓΓ 異黃賴之酶處理 定组it明人等進行深人研究，其結果驚奇發現，攝取特 之類黃酮類’與攝取以往之類黃酮類時相比，且 ==停留在體内、提高骨密度、骨質疏鬆症之預防、· 為〜 又，上述特定組成比之類黃酮類，可利用作 健：二：：劑等醫藥品，復可使用添加在-般飲食物、 機能性食品以及飼料中，而可均衡有效地改善 月代”射等，而完成本發明。 碉f:者里ί發明人等’對適宜用於水溶性異黃酮組成物 =中、頁酮衍生物本身之萃取效率提高深入研究，结 ^現從含大豆異黃酮類之粗大豆萃取物中萃取異黃嗣類 二如特，2〇〇2·155〇72號公報所示不使用乙醇而使用 ㈣精包接後，在酸存在下使不純物沉殿，分遽 從渡液中分取異黃綱類，再視需要容易地進行酶 =〜’合適使用作為水溶性異黃酮組成物或其調製用 寺，而完成本發明。 亦即’本發明係有關以下各項。 一本發明之水溶性異黃綱組成物為含有α_葡萄糖美里 :酮甘，、以及視需要之異黃酮配糖基之異黃酮組成 ，、中，α_葡萄糖基異黃酮中之配糖基量，在異黃酮和 315843 9 1287985 美里二： 配糖基量之比，-葡萄糖 基異育酮中之配糖基量/(異黃酮中之配糖基量+異黃酮配 糖基量）]為2.5/1以上，其中以5/1以上為佳。、 廿本發明之水溶性異黃酉同組成物為含有二葡萄糖基里 :酮、異相和異黃_配糖基之異黃酮組成物，該組成物 中之異頁酮配糖基量’佔該組成物中之全體 0.01 至 20%。 本發明中，上述α_葡萄糖基異 係在異黃酮中以 α-鍵附加平均2·0至20個葡萄糖為佳 立本發日二中，上述異黃酮組成物，係包括心葡萄糖基異 κ酮、異頁酮、和異黃酮配糖基為佳。 本毛明中’上述α_葡萄糖基異黃_，係在含異黃嗣及 異黃酮衍生物之㈣物中’與環糊精和糖轉_作用 到者為佳。 廿本毛月中i述α•葡萄糖基異黃_，係在含異黃嗣及 異黃酮衍生物之組成物中’與環糊精作用，其次在酸性條 件下冷卻分遽去除產生之沉澱物後’以糖轉移酶作用而得 到者為佳。 a本發明中，不論上述任何狀態，只要上述環糊精為万· 環糊精或分支yS-環糊精時可得到水溶性良好者而佳。 本發明之飲食物、化妝品、醫藥品或 任一種之水雜異黃難絲。 #'3^ 本發明中，上述飲食物為酸性飲料為佳。 本發明中’上述飲食物復含酶處理橘皮苷（⑻抑咖) 315843 10 1287985 · 及/或酶處理芸香苷（rutin)為佳。 ❿ 本發明中，將大豆異黃酮萃取物懸浮在水或水性介質 後，在得到之懸浮液中加入環糊精，以4〇至^⑼它進行加 熱溶解環糊精後，在得到之溶液中添加並混合鹼，且調至 PH8至13後，溶解異黃賴，同時將異黃酮類包接在環糊 精中，其次，在包接在環糊精中之異黃綱類之含有液中， 添加並混合酸，且調至ρΗ5·5至2 〇後降溫，過遽去除產 生之沉澱物，接著將得到之濾液調至ρΗ5〇至7力，並進 行έ在;慮液中之異黃酉同類之酶處理。 、 本發明係提供在體内迅速吸收而具即效性、且能於較 = = 濃度狀態停留在體内而具持續性、能 有“骨欲度、骨質疏鬆症之預防·治療 作為骨密度提高劑等醫藥品、復可使用添加在' “物、健康食品、機能性食品或㈣中，而能 ::)善骨代謝之水溶性異黃剩組成物(酶處理異黃嗣魅 用'令提供以有效使用水溶性異黃綱組成物特性為 用仫之飲&物、化妝品、醫藥品、飼料等。 ，，、、 本發明係提供酶處理異黃_ 用（粗）大豆異黃酮萃取物作為 造方法里、中，使 時，將粗大豆異黃綱萃取物無需用乙醇^處理異耳_ 異黃酮類，進行萃取等 ·〆合❼使用驗溶解 先去除乙醇，以較二:：異黃㈣之酶處理前無需事 且由於不使用乙醇，在;裂造酶處— 卒取液（洛解液）中不會流入乙醇可 315843 11 1287985 · * /合11之不純物，得以高收率製造高純度之酶處理異黃酮類。 【實施方式】 、 以下’具體說明本發明之水溶性異黃酮組成物其製造 方法及其用途。 (水溶性異黃酮組成物） 廿本發明之水溶性異黃酮組成物，係包括α _葡萄糖基異 黃酮、異黃酮、和視需要之異黃酮配糖基、其中，^萄 糖基異黃酮中之配糖基量，在異黃酮和異黃酮配糖基之合 计中所含之配糖基量之比（Cg)=[a_葡萄糖基異黃酮中之 配糖基量/(異黃酮中之配糖基量+異黃酮配糖基量）]為 1以上時，水;谷液中之穩定性、和經口攝取時對吸收之 即效性、和吸收後之藥效之持續性佳。 又，該配糖基量比，亦可為重量比或莫耳比中之任一， 但無，別提示時以重量比來表示。又’上述配糖基量比似） 之计异等時，^_葡萄糖基異黃酮中之配糖基量、異黃酮中 j配糖基量、異黃酮配糖基中之配糖基量等，均由染料木 苷（genistin)換算而求得。 、 又，該配糖基量比（Cg)之上限，通常為25/1或以下， 此時該組成物在體内迅速吸收而具即效性，且能於較 間内以高濃度狀態停留在體内而具持續性，能期待呈； 高骨密度、骨質疏鬆症之肋·治療料越之效果， 用作為骨密度提高劑等醫藥品’復可使用添加在—般 物、健康食品、機能性食品或飼料中，而能均衡有效地改 善骨代謝而佳。 315843 12 1287985 又’當該異黃酮組絲中之上述配糖基量比 適用^m2.5/1 _，降低該組成物之溶液穩枝，因此不宜 用於特別是飲料等液體中。 之本=月之上述㈣糖基異黃酮，在異黃嗣中以 C糖⑹數目為平均2.0至2〇個時，該組成物 4_和異黃酮配糖基在水溶液中保持敎性而佳。 _和2日月之上述異黃晒組成物中，含有^葡萄糖基異黃 〜只酮作為必需成分，該理想之狀態中，含 糖基異黃g同、里立 4 S廿 百匍萄 即^ 異相配糖基時具上述效果，亦 迅速吸收而具強之即效性’且能於較長時間内 间/辰度狀恕停留在體内而具效果優越之 ，提高骨密度’骨質疏鬆症之預防·治療等優= - 用作為f密度提高劑等醫藥品，復可使用添加在 又人艮物、健康食品、機能性食品或飼料中，而 有效地改善骨代謝而佳。 习銜 昱2發：ί上述異黃酮組成物中，除了上述心葡萄糖基 二頁酮、異頁酮、和視需要含有異黃酮配糖基以外，在不 迷反本發明目的之範圍下亦可含糊精（含環糊精仰 、 寡糠等糖類、蛋白質、胜月太、其他黃綱類等。 又’異黃_配糖基’係為在下述式[巧所示之異黃酮 中，該R為Η時之結構者。 315843 13 1287985 R3·

異黃酮配質（isofl avongn i n ) Y~ 異黃酮（isof lavon) 【I] (式中，R1、R2、R3表示同下表1 一樣。） [表1] 表1 化合物名 R1 R2 R3 大豆苔（daidzin) Η Η 葡萄糖（G) 黃豆苷（glycitin) Η och3 葡萄糖（G) 染料木^(genistin) OH Η 葡萄糖（G) 大豆素（daidzein) Η Η Η 黃豆素（glycitein) Η 〇ch3 Η 染料木素（genistein) OH Η Η 本發明中α -葡萄糖基異黃酮之附加糖數（附加葡萄糖 數）(η)，亦即上述式[I]之化合物中R3為，由以α鍵連接之 14 315843 1287985 · * 複數個葡萄糖而成時，該附加在α鍵之葡萄糖數為平均u ' 個，上’因此可提高本發明之異黃酮組成物之水溶性，保· 持该組成物中之異黃酮和異黃嗣配糖基之水溶液中之穩定 !·生而仏。又’ 5亥α _葡萄糖基異黃嗣之附加糖數⑷之上限 值無特別限定，通常為20個左右為止。 … 得到該配糖基量比（Cg)之異黃酮組成物，係將^葡萄· 糖基異黃綱:異黃綱、和視需要使用之異黃酮配糖基、以 (Cg)=U-葡萄糖基異黃酮中之配糖基量/(異冑酮中之配糖 基量+異黃酮配糖基量）](重量比）為2.5/1以上配合該等成· 刀，或亦可貫施異黃酮葡萄糖基化反應等。 重里比中，在葡萄糖基異黃酮之附加糖數越多，單 位葡萄糖基異黃_重量中之配糖基重量比減少，因此應 考慮該附加糖數’有必要增加。_葡萄糖基異黃酮重量。 本Ίχ月之上述葡萄糖基異黃酮，如後述在含異 黃酮及異黃酮衍生物之組成物中，以環糊精作用，其次在 酉欠性條件下冷卻並分濾去除產生之沉澱後，在含異黃酮及 異，啊衍生物之遽液中’於ΡΗ5.0至7.0以糖轉移酶作用· 得至i此時成乎不產生異黃_及異黃酮衍生物之分解， 可侍到收率佳之葡萄糖基異黃酮及其組成物而佳。 本發明之上述環糊精可列舉如·· α _型、万_型、7 _型。 ^中万-環糊精或分支環糊精，因有效包接異黃酮、穩 疋化’在該組成物之製造上為佳。 又，本發明之水溶性異黃酮組成物，係為含α _葡萄糖 基異頁酮和異黃酮和異黃酮配糖基之異黃酮組成物，該組 315843 15 1287985 . * ，中之異黃酮配糖基量，以伯該組成物中全體配 之0.01至20%為佳，以0.5至10 0〇/〇為更佳。 土 含該量異黃酮配糖基之水溶性異黃綱組成物中 子在對即效性和持續性優越之傾向。如二 :足_〇時，存在即效性欠佳之傾向，又超過=；^ 存在溶液中易產生沉澱之傾向。 、 (用途（飲食物、醫藥等）） 本發明之飲食物、化妝品、醫筚或翻 食物等」。），其係以含上述水溶 優越例二:水!溶性異黃網組成物水可溶性 苦味、= 谷解18量，呈味良好，幾乎沒有 古禾、澀味、收斂味等異味。 方 又㉗等飲食物巾含有水溶性異黃_且成物者可列兴 可樂水二ΓΤ、咖啡、烏龍茶、紅茶、麥茶、綠：、 加ΐ乳t 可可牛奶、可可飲料等清涼飲料、 ^酵礼、乳製品、乳酸菌飲料等水性飲料； 箸汁味二:：油慕靜餐油、麵醬油、烤肉佐料汁、高湯、 番加醬、美乃滋、調味汁等液體或半固體之調味料； 果;東、布丁等水性點心； 飲食=等溶解性優越者，其配合量無特別限定，可依據 人食物之種類等適宜設定。 琢 舉如該物Γ尤其對酸性飲料之溶解性優越者可列 飲料等妒…頻果汁、番祐汁、疲蘿汁、可樂、乳酸菌 …夂性飲料1L中，以0·001至10g量使用為佳。 315843 16 1287985 廿該等飲食物、或化妝品、醫藥或飼料，復可在水溶性 異:酮^成物中以任意比例含有酶處理橘皮普及/或酶處 理友香苷。含该酶處理橘皮苷和上述水溶性異黃酮組成 物、或酶處理橘皮脊和酶處理芸香脊和上述水溶性里黃嗣 、，成，之飲食物’具㈣f疏鬆症之預防及改善效果、改 。猶環器官疾病而佳。 本毛明之水洛性異黃酮組成物，經口攝取時，在體内 具即效性，且能於較長時間内以高濃度狀態停 =體内而具持續性’能期待具有提高骨密度、骨質疏鬆 =預防·治療等優越之效果，可利用作

骨質疏鬆症預防•治療劑、f主也护又捉门月J 细胎螌結女座丨十，麋d更年期^礙預防·治療劑、癌 、、、田胞繁殖抑制劑等醫藥品。 /、上述用途之醫藥品或健康食品等，使用水溶性昱i 酮組成物時，相者# π使用水/合性異Η 攝取為佳 田於叫體重以_2至以日之量經口 將该水溶性異黃酮組成物，以任音 般飲食物、犍庵人口 ik ^里復使用添加在一 部外口等中”…、、能性食品、嗜好品、飼料、醫藥 P 中，可均衡有效改善骨代謝。 -般飲食物具體可列舉如··點心、西式點心、水果、 / (syrup)、果實加工品、鋅口 火腿、香腸、總飞、，4力1衣加工口口、醃潰物、魚肉、 夭德 帛、瓶罐品、酒類等；嗜好品可列舉如· 曰糖4，飼料可列舉如·· — 等飼料、魚_等；化妝品可列舉如：口么禽真…、龍物 乳液、面霜等I y 、、、工、4 τ、化妝水、 相等吳谷液及整髮料等；醫㈣外品可列舉如： 315843 17 4 1287985 • » 生沉澱。酸亦可為有機酸或無機酸，可列舉如··乙酸、鹽 酸、硫酸、磷酸、硝酸、檸檬酸等。 ：β 之後過濾去除產生之沉澱，再如同下述進行酶處理調 、 製水溶性異黃酮組成物。 亦即，將本發明之如上述過濾去除沉澱物而得到之濾 ^ 液在酶活性之良好條件下，使溶液調至ρΗ5·0至9.0，最 一 好調至ρΗ5·5至7.0，以常法進行酶處理。 如此進行包接在環糊精之異黃酮類之酶處理時’在異 黃酮類中轉移由環糊精衍生之糖。該糖通常雖利用包接異 · 黃酮類之環糊精之一部分（或全部），但在酶處理時，亦可 添加新澱粉或其部份分解物、糖等，將該等利用在糖轉移 中〇 酶只要在異黃酮類中可以糖轉移之酶皆可，並無特別

限定，本發明中使用脂肪嗜熱芽孢桿菌（Bacillus stearothermophilus)及軟化芽孢桿菌（Bacillus macerans)等 桿菌（bacillus)屬之由微生物衍生之環糊精葡聚糖轉移酶 (cyclodextrin glucanotransferase ; CGTase)等為佳，其中由 脂肪嗜熱芽孢桿菌衍生之CGTase之糖轉移效率高而佳 另外還可以使用巨桿菌（Bacillus megarius)、環狀芽抱才曰# (Bacillus cirmlaus)等屬於同桿菌屬之由微生物衍生之 CGTase。本發明中亦可併用2種以上酶。酶使用量、酶产 理條件（溫度、水量、pH、時間）等，可依據常法。 处 該經酶處理之水溶性異黃酮組成物，具有同酶處理今 之異黃酮類一樣之生理活性，在水溶性方面與未處理物相 315843 19 1287985 · « « Λ 比，非常優越。 該經酶處理之水溶性異黃酮組成物，視需要首先以10 / 至99^%(重量％)乙醇等之含水有機溶劑、有機溶劑等活性 一· 化之無極性多孔性吸附樹脂上，通液上述酶處理異黃酮類 之水溶液，水洗淨後，用10至99.5%(重量％)乙醇等之含 · · 水有機溶劑、有機溶劑進行通液，溶出吸附之異黃酮類， 回收溶出液，蒸镏去除溶劑後亦可進行柬結乾燥。如此用 多孔性吸附樹脂進行處理時，酶處理異黃酮類之「總異黃 酮含量」（定義後述。）通常可達到20至80°/。左右。可使用馨 多孔性吸附樹脂如特開2000-327691號公報第4頁[0009] 欄所揭示者，可列舉如：「DiaionHP」、「Dual-LightS」、 「AmberliteXAD」等。又，除了使用該多孔性吸附樹脂提 高總異黃酮含量外，亦可經色譜（chromato)分離提高總異 黃酮含量。 該水溶性異黃酮組成物（乾燥固體物）中之總異黃酮含 量通常為5至90%，其中以20至40%為佳，使上述比（Cg) 鲁 最好維持在該範圍内。 本發明之水溶性異黃酮組成物之製造中，由於在酶反 應中提供之異黃酮類不使用乙醇來溶解，因此其後之酶處 理前不需要阻礙酶活性之乙醇之去除步驟。其結果可以較 少之步驟數、有效製造水溶性異黃酮組成物。 又，本發明之使用大豆異黃酮萃取物（萃取液）之水溶 性異黃酮組成物之製造步驟中也不使用乙醇，因此萃取液 中不會流入乙醇可溶性之不純物，可以高收率製造α -葡萄 20 315843 1287985 糖基異黃酮，並提供水溶性異黃嗣組成物之製造方法。. 从本發明之水溶性異黃酮組成物中，含在該組成物中之· 葡萄糖基異黃酮之平均附加糖數⑷係2 〇個以上為佳。· 由上述得到之水溶性異黃酮組成物，係當上述里普酮 組成物中之上述配糖基量比（Cg)達到2 5/1以上時直接使 用’或適宜配合〇^葡萄糖基異黃酮和異黃_糖基和異‘ 酮為佳。該配糖基量比（Cg)之上限值無特別限定通常為、 一本發明之水溶性異黃酮組成物之理想狀態為，含α^ 匍萄糖基異黃酮、異黃酮和異黃酮配糖基之異黃酮組成 物，該組成物中之異黃酮配糖基量如前述佔該組成物中全 配糖基里之0.01至20%為佳，如此調整異黃酮配糖基量， 如在酶處理異黃酮中所含之α_葡萄糖基異黃酮和在異黃 酮中之配糖基量，以達到規定量為止添加習知之異黃嗣^配 糖基，溶解鹼後，調至規定之pH為佳。 以下，依據實施例更具體說明本發明，但本發明並不 限定於該等實施例。 在以下之實施例、比較例等中之「％」，如無特別提示 表示「重量％」。 (總異黃酮含量之測定） 總異黃酮含量（表示異黃酮含量（單位：重量％)之總 和。）’係在酶處理異黃酮時，將由糖轉移酶（CGTase)之作 用而附加在異黃酮上之糖，用加水分解酶（葡萄糖澱粉酶 (glucoanylase))去除後進行測定。 315843 21 1287985 具體為，將lg作為試料之酶處理異黃酮溶解於0.1L 之25°c水中，添加o.oig葡萄糖殿粉酶後，在ρΗ5·0、溫 度50°C之條件下反應3小時，將酶處理異黃酮中之以α -1，4鍵結合之糖（G)加水分解後，根據習知之方法（根據（財） 曰本健康·營養食品協會發行、健康補助食品規格標準集# 之大豆異黃酮之試驗方法），在下述條件下經HPLC(高效液· 相色譜法）測定異黃酮量。 HPLC條件 使用機器：Waters996(Waters公司製） < 使用柱：資生堂膠囊包（capsule pack)ODS-C18 UG120(250mmx4.6mm I.D.) 柱溫度· 40 C 流速：1 .Oml/min 洗提掖：水/曱醇/乙酸=65/30/5(v/v/v) 檢測：UV 254nm 注入量：10 // 1 | (附加糖數之測定） 將5g酶處理異黃酮溶解於50ml之25°c離子交換水 中，在50ml吸附樹脂上通液·水洗去除α -葡萄糖基異黃 酮以外之物質。吸附劃分用150ml之60%乙醇解吸 (desorption)，去除醇後，添加O.Olg葡萄糖殿粉酶，在 ρΗ5·0、溫度50°C下反應5小時。 葡萄糖澱粉酶處理後之溶液，以使用水進行同樣處理 之液體為空白液，經市售之葡萄糖測定工具（變旋酶 22 315843 1287985 * · (mutarotase) · GOD法）求得葡萄糖量，並算出莫耳數（D)。 另外，用上述總異黃酮含量測定方法求得之酶處理異 黃酮中之總異黃酮量由染料木苷換算，並求該莫耳數（E)。 平均附加糖數（個），係由（D)除（E)，經下式求得。 附加糖數（個）=D/E ((Cg)之測定） 將0.05g試料A溶解於100ml之25°C離子交換水中， 與測定總異黃酮含量之項目中所述之HPLC條件相同之條 件下，進行測定。根據（財）日本健康·營養食品協會發行 之健康補助食品規格標準集之「大豆異黃酮之試驗方法」， 將試料中之異黃酮（F)及異黃酮配糖基（G)，使用大豆苷標 準品為標準，以染料木素求得配糖基量。亦即，配糖基量 為由染料木素換算求得之量。 又，根據上述之總異黃酮含量之測定方法，將試料中 之總異黃酮以染料木素測定，由此將減去上述（F)及（G)之 值作為α -葡萄糖基異黃酮之配糖基量。 (實施例1) 〈由環糊精之包接工程〉 將3g含40%(重量％)量異黃酮之大豆異黃酮萃取物懸 浮在600ml之離子交換水中。其次，在得到之懸浮液中加 入27g/3-環糊精，以70°C加溫，溶解/5-環糊精。在該溶 液中添加混合濃度為15%之氫氧化鈉水溶液9ml使溶液調 至pHll.3完全溶解異黃酮，在/3 -環糊精上包接異黃酮。 接著，在包接在Θ -環糊精之異黃酮之含有液中，於 23 315843 1287985 60°C下添加混合濃度為20%之硫酸5.5ml調至ρΗ4·0後降 溫，冷卻至液溫達到12°C為止。 最後過濾去除產生之沉澱物，分取濾液。（該稱為「試 料C。」 〈酶處理反應工程（酶處理）〉 將得到之濾液用lml之15%氫氧化鈉水溶液調至 pH5.5。其次在610ml之該濾液中添加由脂肪嗜熱芽孢桿 菌衍生之環麥芽糊精葡聚糖轉移酶（cyclomaltodextrin glucanotransferase)[(股份）林原生物化學研究所製、0.3ml] 在60°C下加溫整晚，在異黃酮上轉移反應糖。 在異黃酮上轉移糖由HPLC確認。 在異黃酮上進行糖之轉移反應後，將反應液以90°C以 上之溫度加溫1小時使酶失活。之後進行過濾。分取之濾 液濃縮後進行凍結乾燥，得到27.6g乾燥物。 該乾燥物中之「總異黃酮含量」為4.02%。 〈由多孔性吸附樹月旨之純化步驟〉 首先，在通液50%乙醇後活性化之無極性多孔性吸附 樹脂（Organo(股份）製、型號·· XAD-7)上，通液500ml上述 乾燥物之水溶液（濃度：5.5重量％)使異黃酮類吸附在該樹 脂上後’流入10 0 0 in 1水洗淨該樹脂，溶出·去除壞糊精（C D) 及CD分解物。之後，通液50%乙醇溶出吸附之異黃酮類。 回收含異黃酮之溶出液，蒸餾去除溶出液中之醇後，凍結 乾燥得到3.5g固體物。本品（水溶性異黃酮組成物）之總異 黃酮含量為35.8%(該稱為「試料A」）。分析本品，係α- 24 315843 1287985 葡萄糖基異黃酮（異黃酮）為29·2%(配糖基為18.3%)、異黃 酮為6.6%(配糖基為4.1%)、異黃酮配糖基為0%，平均附 加糖數為3.6。 (比較例1) 〈由環糊精之包接工程〉 在1.2g總異黃酮含量為40%之大豆異黃酮萃取物中， 添加混合濃度約為30%之乙醇水溶液38m卜其次添加該大 豆異黃酮萃取物之9倍量之/3-環糊精10.8g後，於60°C下 加熱攪拌，以該溫度保持30分鐘，在石-環糊精上包接異 黃酮類。 之後，冷卻至常溫（25°C)後過濾。分取之濾液經去除 乙醇、濃縮乾燥後得到2.67g固體物（依據特開2002-155072 號公報。）(作為試料B)。 得到之固體物進行HPLC(高效液相色譜法）分析，總異 黃酮含量為3·85%。 〈酶處理反應工程〉 接著使用上述試料Β，以環麥芽糊精葡聚糖轉移酶 (cyclomaltodextrin glucanotransferase)作用進行酶處理反 應時，由於溶劑為30%之乙醇導致酶作用降低，幾乎不進 行酶處理，因此在酶處理前有必要去除乙醇。 又本發明之實施例1中，在pH8以上溶解1.2g大豆異 黃酮萃取物，包接在lOJg^-環糊精回到酸性區域後進行 過濾，將實施例1之酶處理之前者（試料C)，用HPLC(高 效液相色譜法）分析，結果試料C之總異黃酮含量為4.12%。 25 315843 1287985 比較檢討試料B和試料c之總異黃酮量。 - 〈考察〉 - ⑴總異黃嗣含量’係由HPLC分析之結果，與以3〇%乙·· 醇作為溶劑包接之試料B之總異黃酮含量3·85%相比，本 發明之試料C之總異黃酮含量412%為高。其理由為，試… 料Β回收在濾液中流出之大豆異黃酮萃取物之乙醇可溶性 不純物，而試料C在調整時沒有使用乙醇，可抑制往濾液 中之不純物之混入，因此認為總異黃酮含量高。 (2)在比較例1中以環麥芽糊精葡聚糖轉移酶作用進行酶# 處理反應時，由於溶劑為30%之乙醇導致酶作用降低，幾 乎不進行酶處理，因此在酶處理前有必要去除乙醇。 相對於此，本發明之實施例丨，在ρΗ8以上溶解異黃 嗣，用環糊精包接後調至ρΗ中性區域，無需蒸顧去除乙 醇，可直接進行酶反應，可簡單化酶處理反應之步驟而佳。 (企中動態試驗） (I) 從日本CharlesRiver股份有限公司購入5周歲之

Sprague-DaWley(SD)系之雄大鼠（體重範圍：1〇8至134g)， · 進行7天之檢疫，檢疫結束後使用。 (II) 大鼠，係在設定為室溫22± 3°C、相對濕度50± 2〇%、 換氣次數10次以上/小時（全新空氣方式）、照明12小時/ 曰（在午前6時至午後6時照明、15〇至3〇〇勒克斯）之飼育 室中，在不銹鋼製之大鼠用支架籠中，每1籠收容丨只月 進行飼育。 ^ (iii)飼料’係將精製飼料（AiN_76A配合固體飼料、東方酵 315843 26 1287985 « ， 母股份有限公司製）通過籠附屬給餌器給於，從進入後進行 自由攝取。又，飲料水將家用自來水通過聚碳酸醋製之給 水瓶給於，進行自由攝取。 (iv) 分群，係從評價健康狀態之健康之動物中通過體重之 層別無作為化法每群9只分配3群，各群之平均體重最好 相同。投藥開始日起大鼠之年齡為6周歲，體重範圍為137 至 179g 。 (v) 群結構，係為酶處理異黃酮投藥群、異黃酮之配糖基投 藥群、α -葡萄糖基異黃酮/(異黃酮+異黃酮之配糖基）之配 糖基重量比為3.6/1之混合試料投樂群之3群結構。 作為試驗物質，異黃酮之配糖基使用「SoyAct W」（含 33.3%之異黃酮配糖基，龜曱萬股份有限公司製），酶處理 異黃酮使用實施例1中製造之「試料A」。 混合試料，係將試料A和SoyAct W以鹼溶解，pH調 整至5.5後使用。 [表2] 〈表2〉 單位：重量％ 括號内：配糖基重量％ 項目 異黃酮衍生物（異黃酮換算） 總異黃酮 含量(％) 配糖基量 比(Cg) 試驗物質^^ α_葡萄糖 基異黃酮 異黃酮 異黃酮配 糖基 酶處理異黃酮 (配糖基量°/〇) 29.2 (18.3%) 6.6 (4.1%) 0 (〇%) 35.8 (22.4%) 4.5/1 異黃酮之配糖基 (配糖基量％) 0 (〇%) 0 (〇%) 53.3 (33.3%) 53.3 (33.3%) 0/33.3 混合試料 (配糖基量％) 28.4 (17.8%) 6.4 (4.0%) 1.4 (0.88%) 36.2 (22.6%) 3.6/1 27 315843 1287985 (vi) 試驗物質，係將各自在0.5%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na) 水溶液中懸浮，或溶解。使用大鼠用口服探頭，將禁食18 小時之大鼠以每體重50 // mol強制口服投藥。到投藥24 小時後之採血、及採尿為止，不給食物只給水。 (vii) 試驗物質投藥前（以下為〇時間）、及投藥0.5、1、2、 4、8、12、16、24小時後經頸靜脈採血2ml，各自放入塑 膠管中，經由大容量冷卻離心機（high capacity Refrigerated Centrifuge)(久保田製作所股份有限公司製）離心分離 (350〇xg、4°C、1〇分鐘），分離血漿。又採取24小時尿測 定尿量，與血液一樣進行離心分離。得到之血漿、及24 小時尿直到分析為止經三洋超低溫冷凍機（三洋電機股份 有限公司製）在-80°C下冷凍保存。 (viii) 取0.5ml得到之血漿和、0.5ml之1M乙酸納緩衝液 (ρΗ4·5)放入到1.5ml容量之微量（eppendorf)管中，充分擾 拌後以37°C預培養2分鐘。其次添加/3 -葡萄糖昔酸酶/硫 酸酯酶（Sigma 公司製、Type-H-2 ; 10500units/ml， 4300units/ml)，至 5.5><102units/ml、2><102units/ml 為止， 以37°C培養20分鐘。之後立即冷卻，加入0.5ml之o.oiμ 乙二酸後攪拌，以8000rpm、4°C離心分離5分鐘。將得到 之上清液注入到預先由曱醇活性化之「Sep-PackCl8 Cartridge」（Waters公司製）中，依次用lml之〇·〇1Μ乙二 酸、10ml離子交換水洗淨。吸附物用5ml之25%甲醇、10mi 之100%甲醇溶出，分取在試驗管中。 使用旋轉蒸發器（EYELAN-2、東京理化器械股份有限 315843 28 1287985 公司製）減壓乾燥該等。該等直到分析之前經三洋超低溫冷 凍機（三洋電機股份有限公司製）在 " ⑽肌C㈣，仙在得収減㈣留物中 加入100/zl之100%甲醇溶解，以15〇〇〇rpm、吖離心分 離（SKiMA KUBQTA3615:久保田製作所股份有限公司製）2 为知後作為HPLC試料’在以下所示之Ηριχ條件下分析、 定量。

在本分析中，作為標準物質使用大豆素（關東化學 製）、染料木素（關東化學製）作成各自之校正曲線後定量， 合併大豆素和大豆素結合體作為大豆素量，同樣合併染料 木素和染料木素結合體作為染料木素量算出。混合該等作 為血中之總異黃酮含量。（上述大豆素結合體、染料木素結 &體表示大豆素及染料木素之葡糖醒_酸acid) 結合體及硫酸結合體。） 其結果顯示在第1圖及表3中。 [表3]

〈表3〉 血中總異黃酮 濃度(nmol/ml) 之時間(h) 酶處理品A 混合試料 異黃酮之配糖基 0 0 0 0 0.5 0.23 1.54 0.1 1 1.25 0.85 0.3 2 2.47 2.18 0.6 4 1.34 1.45 0.5 8 0.72 0.84 0.2 12 0.53 0.63 0.1 16 0.48 0.54 0.08 0.35 0.51 0.02 29 315843 1287985 <HPLC條件> 同上述一樣。亦即 使用機器：Waters996(Waters公司製） 使用柱：資生堂膠囊包0DS-C18 UG120(250mmx4.6mm I.D.) 柱溫度· 40 C 流速：1 .Oml/min 洗提掖··水/甲醇/乙酸=65/30/5(ν/ν/ν) 檢測：UV 254nm 注入量：10 // 1 (考察） 如第1圖及表3所示，本發明之「水溶性異黃酮組成 物」、及「水溶性異黃酮組成物和異黃酮配糖基之混合物」， 與異黃酮配糖基相比，血中之初期總異黃酮濃度高、且可 長時間維持（持續）高之總異黃酮濃度。 (溶解穩定性試驗1) α -葡萄糖基異黃酮中之配糖基量，係在異黃酮和異黃 酮配糖基之合計中所含之配糖基量之比（Cg)=[ α -葡萄糖 基異黃酮中之配糖基量/(異黃酮中之配糖基量+異黃酮配 糖基量）]，從溶解穩定性方面檢查。 作為試驗物質，異黃酮配糖基使用「SoyActW」（含 33.3%之異黃酮配糖基，龜曱萬股份有限公司製），酶處理 異黃酮使用實施例1中製造之「試料A」。 以該等為全配糖基量在適宜量之水中分散至 30 315843 1287985 1 · 250ppm，用15%氫氧化鈉調至pm2 〇溶解後，用20%硫 酸中和成為組成比（Cg)為2.0/1、2.5/1、3.0/1之試驗液（樣 品 SA、SB、SC)。 結果顯示在表4中。 [表4] 表4

No. 樣品名 開始時 2周後 1個月後 k成比（Cg) 1 樣品SA —— 士 土 2.0/1 2 樣品SB — — 2.5/1 3 樣品SC ~- — — 3.0/1 表4中之「組成比（cg)」表示[α_葡萄糖基異黃酮中 之配糖基量/(異黃酮中之配糖基量+異黃酮配糖基量）]。 表4中之記號表示如下。 —」·無析出。「土」··析出一點。「+」：析出。 (溶解穩定性試驗2) 具有即效性和持續性之組成物，從即效性方面異黃酮 配糖基之添加為重要因素。但該量過於多會產生析出，導 致給商品壽命帶來大影響之結果。 因此，檢查組成物中之異黃酮配糖基量和全配糖基量 之關於長期保存下析出帶來之影響。 &里 作為試驗物質，異黃酮之配糖基使用r s〇yAct w」（人 33.3%之異黃酮配糖基，龜甲萬股份有限公司製），酶處理 異黃酮使用實施例1中製造之「試料A」。 以該等為全配糖基量在適宜量之水中分散至 315843 31 1287985 250ppm，用15%氫氧化鈉調至ρΗ12·0溶解後，用20%硫 酸中和，重量比「異黃酮配糖基/全配糖基」如表5所示， 各自調製成 3.0/100、10.0/100、20.0/100、30.0/100 之試驗 液（樣品SD至SG)。該試驗液在常溫下保存1個月，檢查 伴隨保存而析出的有無。 結果顯示在表5中。 [表5] 表5

No. 樣品名 開始時 2周後 1個月後 異黃酮配糖基/全配糖基 1 樣品SD 一 一 — 3.0/100 2 樣品SE — 一 — 10.0/100 3 樣品SF — 一 — 20.0/100 4 樣品SG — 土 + 30.0/100 表5中之記號表示如下。 「一」：無析出。「土」：析出一點。「+」：析出。 (飲食物之調製例1) 〈清涼飲料〉 調製具有表6所示之配合組成，併含水溶性異黃酮組 成物（Cg=4.0/；l、異黃酮配糖基=2.2%)和其他具有骨密度改 善效果之物質之清涼飲料。 32 315843 1287985 [表6] 表6 材料 ^4.81 g 6.0 g 6.0 g 〇.〇4 g 1.2 g 〇·1 g i.o g 0.1 g 〇.〇1 g 0.7 g 0.04 g 150 IU ^ g _1〇0 2〇〇 g ^~' 砂糖 果糖葡萄糖液糖 酶處理甜菊（stevia) 檸檬濃縮果汁 檸檬調味劑 酸味料 酶處理橘皮苷（hersperidin) 水溶性異黃酮組成物 乳酸1丐

維生素C 維生素D3

維生素K 合計 如上述，併用水溶性異黃_組成 度改善效果之成分’可得到具骨密度之維持 清涼飲料。 U復效果乂 (飲食物之調製例2) 〈橙汁〉 調製具有表7所示之配合組成，含水溶性異黃闕組成 物（Cg=4.0/1、異黃酮配糖基=2.2%)之橙汁。 315843 33 1287985[表7] 表7 含量 水 - 撥濃縮果汁（以1 / 6容量濃縮） 果糖葡萄糖液糖 麥芽糖醇 酶處理甜菊 酸味料 維生素C 酶處理橘皮替 水溶性異黃酮組成物 香料—$ 183.36 10.0 1.8 4.0 0.04 0.6 0.04 0.1 0-01 2〇〇^一 g g g g g g g g g g g 本製品（橙汁）’作為不產生異黃_沉澱之果汁飲料， 適宜利用於注意骨質疏鬆症之人。 (飲食物之調製例3) 〈乳酸飲料〉 調製具有表8所示之配合組成，含水溶性異黃_組成 物（Cg=4.0/1、異黃酮配糖基=2.2%)之乳酸飲料。 34 315843 1287985 * » [表8] 材料 水 乳酸菌原料 檸檬果汁 異性化液糖 麥牙糖醇 酶處理甜菊 酶處理芸香苷（rutin) 酶處理橘皮苷 水溶性異黃酮組成物 檸檬香料合計 表8

4 0 0 0 02 • 08 1 01 g g g g g g g g g g 200 g 該乳酸飲料，可利用作為無關於低之pH(酸性），不產 生析出且含異黃酮之乳酸飲料。 (飲食物之調製例4) 〈果凍〉 調製具有表9所示之配合組成，含水溶性異黃酮組成 物（Cg=4.3/1、異黃酮配糖基= 1.2%)之果凍。 315843 35 1287985[表9] 表9 含量 155.026 g 20.0 g 17.0 g 3.0 g 0.04 g 0.4 g 0.08 g 0.1 g 0.01 g 3.0 g 0.2 g 0.4 g 0.7 g 0.004 g 0.04 g 75 IU 5〇 U g 200 σ 材料 砂糖 擰檬濃縮果汁 凝膠化劑 酶處理甜菊 酸味料 酶處理芸香：g： 酶處理橘皮苷 水溶性異黃酮組成物 凝膠化劑 檸檬調味劑 乳鹼性蛋白質 乳酸鈣 振子色素製劑 維生素C 維生素d3 維生素K __ 合計 本製品（果凍），可利用作為無關於（半）固體物、不渾 濁、不影響味質、澄清且含異黃酮之果;東。 (化妝料組成物之調製例1) 〈含水化妝料〉 調製具有表10所示之配合組成，含水溶性異黃酮組成 物（Cg=4.3/1、異黃嗣配糖基= 1.2%)之弱酸性之柔軟化化妝 水0 36 315843 1287985 [表 ίο] 製油二醇十氧醇料料腐處處溶 精甘丙油單聚乙香染防酶酶水

醇 表 量 含 酐 醇 糖 梨 山 烯 乙 氧醚聚二 酸十 烷烯二乙 匕曰 8.5.4.0.10.0.0. 5 物 成 組 苷苷酮| 香皮黃 芸橘異計 劑理理性合 量量 適適 (化妝料組成物之調製例2) 〈乳霜化妝料〉 調製具有表11所示之配合組成，含水溶性異黃鲖組成 物（Cg=4.3/1、異黃酮配糖基= 1·2%)之乳霜化妝料。 37 315843 1287985 [表 11] 表11 量 含 3 3 0 1 5 6 8 0 1 7 11 量量 0.10.10.1適適 _ 材料 -— 流動石虫鼠 甘油 酶處理芸香Ig： 酶處理橘皮苷 水溶性異黃酮組成物 香料 色素 精製水 合計 該乳霜化妝料，具有異黃 之作用，為穩定之乳霜。 酮所具有之「防止肌膚老化 ’將乳霜之配合組成改變為化妝水用，可得到作為 化妝水且其水溶性穩定之商品。 … 【圖式簡單說明】 第1圖係為，將水溶性異黃酮組成物（♦)、「水溶性異 η酮組成物和異黃酮配糖基之混合物」之混合試料（)、異 黃酮配糖基（▲)，經過25小時後投藥給試驗動物，從投藥 開始至經過時間（h)(橫軸）和、血中總異黃酮濃度 、 (nmol/ml)(縱軸）之關係圖表。 【主要元件符號說明】 ▲......異黃_配糖基投藥群 ......混合試料投藥群 ♦……水溶性異黃酮組成物投藥群 38 315843

Claims (1)

1. 第93114211號專利申請案 (96年7月31曰^ 00： 、申請專利ϋΓ 一種水溶性異黃酮組成物，係含α _葡萄糖基異黃酮 異只酮、環糊精以及視需要含異黃酮配糖基之異黃酮組 成物，其中，[α_葡萄糖基異黃酮中之配糖基量/(異普 酮中之配糖基量+異黃酮配糖基量）]為2·5/1以上。 2· —種水溶性異黃酮組成物，係含α _葡萄糖基異黃酮、 異黃酮、異黃酮配糖基以及環糊精之異黃酮組成物，其 中，該組成物中之異黃酮配糖基量佔該組成物中之全體 配糖基量之0.01至20〇/〇。 如申請專利範圍第1項之水溶性異黃酮組成物，其中 該α-葡萄糖基異黃酮係為在異黃酮上以α_鍵附加平均 2·〇至20個葡萄糖者。 4·如申請專利範圍第丨項之水溶性異黃酮組成物，其中 該異黃㈣成物巾之異相與異相崎錢包接於 環糊精。 .如申請專利範圍第1項之水溶性異黃酮組成物，其中， 該α·葡萄糖基異黃酮係在含異黃酮及異黃_衍生物之 組成物中，在環糊精共存下以糖轉移酶作用而得到者。 .如申請專利範圍第5項之水溶性異黃酮組成物，其中， 該α-葡萄糖基異黃_在含異黃嗣及異黃嗣衍生物之 2物中，以環糊精作用，其次在酸性條件下冷卻分滤 去除產生之沉殿物後，以糖轉移酶作用而得到者。 =申請專利範圍第5項之水雜異黃_組成物，盆中， 該環糊精為石-環糊精或分支万-環糊精。 、 315843修正本 39 1287985 第93114211號專利申請案 (96年7月31曰) •一種飲食物，係含申請專利範圍第1項至第7項中任一 項之水溶性異黃酮組成物。 9·如申請專利範圍第8項之飲食物，其中，復含有酶處理 橘皮苷（hersperdin)及/或酶處理芸香苷（rutin)。 10·—種酸性飲料，係含申請專利範圍第i項至第7項中任 一項之水溶性異黃酮組成物。 1 1 ·如申明專利範圍第1 〇項之酸性飲料，其中，復含有酶 處理橘皮苷及/或酶處理芸香苷。 12·一種化妝品，係含申請專利範圍第！項至第7項中任一籲 項之水溶性異黃酮組成物。 13.如申請專利範圍第12項之化妝品，其中，復含有酶處 理橘皮苷及/或酶處理芸香苦。 Μ·種改善骨代謝、提高骨密度以及骨質疏鬆症之預防· /σ療用醫藥品，係含申請專利範圍第1項至第7項中任 一項之水溶性異黃酮組成物。 15·如申請專利範圍第14項之醫藥品，其中，復含有酶處 理橘皮苷及/或酶處理芸香苷。 鲁 16·一種飼料，係含申請專利範圍第1項至第7項中任一項 之水溶性異黃酮組成物。 17·如申請專利範圍第16項之飼料，其中，復含有酶處理 橘皮苷及/或酶處理芸香苷。 18二種水溶性異黃酮組成物之製造方法，係將大豆異黃酮 萃取物懸浮在水或水性介質後，在得到之懸浮液中加入 %糊精，以4〇至1〇〇它進行加熱溶解環糊精後，在得到 40 315843修正本 1287985 第93114211號專利申請案 (96年7月31曰） 之溶液中添加並混合鹼，且調至pH8至13後，溶解異 黃酮類，同時將異黃酮類包接在環糊精中，其次， 在包接在環糊精中之異黃酮類之含有液中，添加並 混合酸，且調至ρΗ5·5至2.0後降溫，過濾去除產生之 沉澱物，其次將得到之濾液調至ρΗ5·0至7·0，並進行 含在濾液中之異黃酮類之酶處理。

   41 315843修正本