[go: up one dir, main page]

TW202535924A - 抗ｄｌｌ３嵌合抗原受體及其用途 - Google Patents

抗ｄｌｌ３嵌合抗原受體及其用途

Info

Publication number
TW202535924A
TW202535924A TW114114222A TW114114222A TW202535924A TW 202535924 A TW202535924 A TW 202535924A TW 114114222 A TW114114222 A TW 114114222A TW 114114222 A TW114114222 A TW 114114222A TW 202535924 A TW202535924 A TW 202535924A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
seq
amino acid
acid sequence
cdr3
cdr2
Prior art date
Application number
TW114114222A
Other languages
English (en)
Inventor
趙濤
彭園園
唐安
王素娟
楊帥
張望
武術
郝瑞棟
Original Assignee
大陸商南京傳奇生物科技有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 大陸商南京傳奇生物科技有限公司 filed Critical 大陸商南京傳奇生物科技有限公司
Publication of TW202535924A publication Critical patent/TW202535924A/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K40/11—T-cells, e.g. tumour infiltrating lymphocytes [TIL] or regulatory T [Treg] cells; Lymphokine-activated killer [LAK] cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/30—Cellular immunotherapy characterised by the recombinant expression of specific molecules in the cells of the immune system
    • A61K40/31—Chimeric antigen receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A61K40/4202—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A61K40/4225—Growth factors
    • A61K40/4229—Transforming growth factor [TGF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70517—CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70521—CD28, CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C12N5/0638—Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/22—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from camelids, e.g. camel, llama or dromedary
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本文提供抗DLL3嵌合抗原受體(CAR)、DLL3結合蛋白及此類CAR或DLL3結合蛋白在治療諸如小細胞肺癌之DLL3相關病症中的用途。

Description

抗DLL3嵌合抗原受體及其用途
本發明係關於靶向DLL3之嵌合抗原受體(CAR)及對DLL3具有特異性之結合蛋白。本發明亦關於編碼該等CAR或該等結合蛋白之核酸序列、表現該等CAR之經修飾之免疫細胞以及其用於治療DLL3相關病症之用途。
細胞免疫療法之發展已提供一種有前景之治療多種腫瘤之方法。一種此類治療涉及免疫細胞、特別是T細胞之基因工程，以在細胞表面上表現嵌合抗原受體(CAR)。嵌合抗原受體係在通常格式下將單株抗體(mAb)之特異性與T細胞之效應功能相結合的蛋白質。一旦CAR在T細胞中表現，經CAR修飾之T細胞(CAR-T或CAR-T細胞)即可獲得一些特性，諸如抗原特異性識別、抗腫瘤反應性及增殖，因此可充當「活藥物」來根除所靶向之腫瘤細胞。原則上，此等CAR-T細胞可靶向任何抗原(例如細胞表面分子)。CAR-T細胞療法可克服對自體抗原之耐受性，且提供一種不依賴於患者MHC狀態之治療。近來之試驗使用經工程改造以表現靶向CD19之嵌合抗原受體的T細胞，已證明在白血病及淋巴瘤患者中之顯著臨床反應。
CAR表現為跨膜蛋白，包括抗原特異性結合位點、跨膜區及信號傳導胞質域(例如CD3ζ鏈)。抗原特異性結合位點通常為源自單株抗體之單鏈可變片段(scFv)，由經可撓性連接子接合之重鏈及輕鏈組成。近來CAR構築體已合併來自如CD28或4-1 BB之共刺激分子的另外的胞質域以增強活體內T細胞存活率。亦對CAR進行其他遺傳修飾，例如添加細胞介素基因或避免腫瘤部位免疫抑制機制之基因。
已發現DLL3 (δ樣配位體3)蛋白在臨床上與多種增生性病症相關，該等增生性病症包括展現神經內分泌特徵之腫瘤，諸如小細胞肺癌(SCLC)。起源於神經內分泌祖細胞之SCLC大約占所有肺癌之15%，且具有最低5年存活率之一，6% (Alvarado-Luna等人, 2016,Transl Lung Cancer Res5:26-38；Siegel等人, 2017,CA Cancer J Clin67:7-30)。此係因為其具有高度侵襲性，約三分之二的患者在診斷時患有轉移性疾病，且為習知治療(例如基於鉑之化學療法)極難醫治的。
需要改良之治療SCLC及其他表現DLL3之癌症的治療方法。
在一個態樣中，本揭示案提供一種嵌合抗原受體(CAR)，該嵌合抗原受體靶向DLL3 (抗DLL3 CAR)。抗DLL3 CAR包含DLL3結合域，其中該DLL3結合域包含或源自單域抗體(sdAb)或單鏈可變片段(scFv)。
在一些實施例中，sdAb包含多肽，該多肽包含：包含SEQ ID NO: 1-81中之任一者之胺基酸序列的CDR1或其在該CDR1中包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 82-162中之任一者之胺基酸序列的CDR2或其在該CDR2中包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 163-243中之任一者之胺基酸序列的CDR3或其在該CDR3中包含至多約3個胺基酸取代之變異體。
在一些實施例中，sdAb包含多肽，該多肽包含：包含SEQ ID NO: 1-81中之任一者之胺基酸序列的CDR1；包含SEQ ID NO: 82-162中之任一者之胺基酸序列的CDR2；以及包含SEQ ID NO: 163-243中之任一者之胺基酸序列的CDR3，或多肽在CDR1、CDR2及CDR3中包含至多約3個胺基酸取代之變異體。
在一些實施例中，sdAb包含多肽，該多肽包含以下中之任一種：(1) 包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(2) 包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(3) 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 186之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(4) 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 189之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(5) 包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 196之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(6) 包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 120之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(7) 包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(8) 包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；或(9) 包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體。
在一些實施例中，sdAb包含多肽，該多肽包含以下中之任一種：(1) 包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列之CDR3；(2) 包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR3；(3) 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 186之胺基酸序列之CDR3；(4) 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 189之胺基酸序列之CDR3；(5) 包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之CDR 2；以及包含SEQ ID NO: 196之胺基酸序列之CDR 3；(6) 包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 120之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列之CDR 3；(7) 包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR 3；(8) 包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR 3；或(9) 包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之CDR 2；以及包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR 3。
在一些實施例中，sdAb為針對人類或恆河猴DLL3產生之駱駝sdAb。
在一些實施例中，sdAb包含與SEQ ID NO: 274-354中之任一者之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb藉由CDR移植進行人類化。
在一些實施例中，人類化sdAb包含與SEQ ID NO: 355-367中之任一者之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，scFv包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該scFv之VH結構域包含SEQ ID NO: 498或504中所示之CDR1或其在該CDR1中包含至多約3個胺基酸取代之變異體、SEQ ID NO: 499或505中所示之CDR2或其在該CDR2中包含至多約3個胺基酸取代之變異體以及SEQ ID NO: 500或506中所示之CDR3或其在該CDR3中包含至多約3個胺基酸取代之變異體，且該scFv之VL結構域包含SEQ ID NO: 495或501中所示之CDR1或其在該CDR1中包含至多約3個胺基酸取代之變異體、SEQ ID NO: 496或502中所示之CDR2或其在該CDR2中包含至多約3個胺基酸取代之變異體以及SEQ ID NO: 497或503中所示之CDR3或其在該CDR3中包含至多約3個胺基酸取代之變異體。
在一些實施例中，該scFv之VH結構域包含SEQ ID NO: 498中所示之CDR1、SEQ ID NO: 499中所示之CDR2及SEQ ID NO: 500中所示之CDR3，且該scFv之VL結構域包含SEQ ID NO: 495中所示之CDR1、SEQ ID NO: 496中所示之CDR2及SEQ ID NO: 497中所示之CDR3；或該scFv之VH結構域包含SEQ ID NO: 504中所示之CDR1、SEQ ID NO: 505中所示之CDR2及SEQ ID NO: 506中所示之CDR3，且該scFv之VL結構域包含SEQ ID NO: 501中所示之CDR1、SEQ ID NO: 502中所示之CDR2及SEQ ID NO: 503中所示之CDR3。
在一些實施例中，該scFv之VH結構域包含與SEQ ID NO: 508中所示之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列，且該scFv之VL結構域包含與SEQ ID NO: 507中所示之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列；或該scFv之VH結構域包含與SEQ ID NO: 510中所示之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列，且該scFv之VL結構域包含與SEQ ID NO: 509中所示之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，scFv係自合成人類Fab噬菌體文庫獲得。
在一些實施例中，DLL3為人類或恆河猴DLL3。
在一些實施例中，抗DLL3 CAR自N末端至C末端包含信號肽、該DLL3結合域、鉸鏈域、跨膜域及細胞內信號傳導域。
在一些實施例中，細胞內信號傳導域源自CD3ζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b或CD66d。
在一些實施例中，細胞內信號傳導域進一步包含細胞內共刺激序列。
在一些實施例中，細胞內共刺激序列源自選自由以下組成之群的共刺激分子：CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD40、PD-1、LFA-1、ICOS、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、TNFRSF9、TNFRSF4、TNFRSF8、CD40LG、ITGB2、KLRC2、TNFRSF18、TNFRSF14、HAVCR1、LGALS9、DAP10、DAP12、CD83、CD83配位體及其組合。
在一些實施例中，CAR包含與選自由SEQ ID NO: 476-484、SEQ ID NO: 485-494或SEQ ID NO: 515-516組成之群之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，DLL3結合域包含彼此連接之兩個sdAb。
在一些實施例中，sdAb中之每一者獨立地包含與SEQ ID NO:356或SEQ ID NO:366具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，CAR包含與選自由SEQ ID NO: 518-520組成之群之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，CAR包含SEQ ID NO: 520之胺基酸序列。
在另一方面，本揭示案提供DLL3結合蛋白，該DLL3結合蛋白包含特異性地結合於DLL3之單域抗體(sdAb)部分，其中該sdAb部分包含多肽，該多肽包含：包含SEQ ID NO: 1-81中之任一者之胺基酸序列的CDR1或其在該CDR1中包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 82-162中之任一者之胺基酸序列的CDR2或其在該CDR2中包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 163-243中之任一者之胺基酸序列的CDR3或其在該CDR3中包含至多約3個胺基酸取代之變異體。
在一些實施例中，sdAb部分包含多肽，該多肽包含：包含SEQ ID NO: 1-81中之任一者之胺基酸序列的CDR1；包含SEQ ID NO: 82-162中之任一者之胺基酸序列的CDR2；以及包含SEQ ID NO: 163-243中之任一者之胺基酸序列的CDR3，或多肽在CDR1、CDR2及CDR3中包含至多約3個胺基酸取代之變異體。
在一些實施例中，sdAb部分包含多肽，該多肽包含以下中之任一種：(1) 包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之CDR 2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列之CDR 3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(2) 包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(3) 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 186之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(4) 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 189之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(5) 包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 196之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(6) 包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 120之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列之CDR 3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(7) 包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR 3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(8) 包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之CDR 2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；或(9) 包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR 3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體。
在一些實施例中，sdAb部分包含多肽，該多肽包含以下中之任一種：(1) 包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列之CDR 3；(2) 包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之CDR 2；以及包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR 3；(3) 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 186之胺基酸序列之CDR 3；(4) 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之CDR 2；以及包含SEQ ID NO: 189之胺基酸序列之CDR3；(5) 包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 196之胺基酸序列之CDR3；(6) 包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 120之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列之CDR3；(7) 包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR3；(8) 包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR3；或(9) 包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR3。
在一些實施例中，sdAb部分為針對人類或恆河猴DLL3產生之駱駝sdAb。
在一些實施例中，sdAb部分包含與SEQ ID NO: 274-354中之任一者之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb部分藉由CDR移植進行人類化。
在一些實施例中，人類化sdAb包含與SEQ ID NO: 355-367中之任一者之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，DLL3為人類或恆河猴DLL3。
在另一方面，本揭示案提供一種DLL3結合蛋白，該DLL3結合蛋白包含特異性地結合於DLL3之單鏈可變片段(scFv)部分，其中該scFv部分包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該scFv部分之VH結構域包含SEQ ID NO: 498或504中所示之CDR1或其在該CDR1中包含至多約3個胺基酸取代之變異體、SEQ ID NO: 499或505中所示之CDR2或其在該CDR2中包含至多約3個胺基酸取代之變異體以及SEQ ID NO: 500或506中所示之CDR3或其在該CDR3中包含至多約3個胺基酸取代之變異體，且該scFv部分之VL結構域包含SEQ ID NO: 495或501中所示之CDR1或其在該CDR1中包含至多約3個胺基酸取代之變異體、SEQ ID NO: 496或502中所示之CDR2或其在該CDR2中包含至多約3個胺基酸取代之變異體以及SEQ ID NO: 497或503中所示之CDR3或其在該CDR3中包含至多約3個胺基酸取代之變異體。
在一些實施例中，scFv部分包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該scFv部分之VH結構域包含SEQ ID NO: 498中所示之CDR1、SEQ ID NO: 499中所示之CDR2及SEQ ID NO: 500中所示之CDR3，且該scFv部分之VL結構域包含SEQ ID NO: 495中所示之CDR1、SEQ ID NO: 496中所示之CDR2及SEQ ID NO: 497中所示之CDR3；或該scFv部分之VH結構域包含SEQ ID NO: 504中所示之CDR1、SEQ ID NO: 505中所示之CDR2及SEQ ID NO: 506中所示之CDR3，且該scFv部分之VL結構域包含SEQ ID NO: 501中所示之CDR1、SEQ ID NO: 502中所示之CDR2及SEQ ID NO: 503中所示之CDR3。
在一些實施例中，該scFv部分之VH結構域包含與SEQ ID NO: 508中所示之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列，且該scFv部分之VL結構域包含與SEQ ID NO: 507中所示之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列；或該scFv部分之VH結構域包含與SEQ ID NO: 510中所示之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列，且該scFv部分之VL結構域包含與SEQ ID NO: 509中所示之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列。
在一些實施例中，scFv部分係自合成人類Fab噬菌體文庫獲得。
在一些實施例中，LL3為人類或恆河猴DLL3。
在另一方面，本揭示案提供一種經分離之核酸分子，該經分離之核酸分子編碼如上所述之抗DLL3 CAR或DLL3結合蛋白。
在一些實施例中，該經分離之核酸分子包含選自由SEQ ID NO: 368-448組成之群的多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼駱駝單域抗體(sdAb)。
在一些實施例中，該經分離之核酸分子包含選自由SEQ ID NO: 449-461組成之群的多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼人類化駱駝sdAb。
在一些實施例中，該核酸分子包含選自由SEQ ID NO: 511-514組成之群的多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼人類scFv之VL或VH結構域。
在一些實施例中，該核酸分子進一步包含編碼嵌合轉換受體(CSR)或顯性負性受體(DNR)之多核苷酸序列。
在一些實施例中，該核酸分子進一步包含編碼PD-1顯性負性受體(PD-1 DNR)、PD-1嵌合轉換受體(PD-1 CSR)或TGF-β顯性負性受體(TGF-β DNR)的多核苷酸序列。
在一些實施例中，PD-1 DNR包含與SEQ ID NO: 523具有至少約95%序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，PD-1 CSR包含與SEQ ID NO: 524具有至少約95%序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，TGF-β DNR包含與SEQ ID NO: 529具有至少約95%序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，編碼PD-1 DNR、PD-1 CSR或TGF-β DNR之多核苷酸序列藉由編碼2A自裂解肽之多核苷酸序列連接至編碼CAR之多核苷酸序列。
在一些實施例中，2A自裂解肽為T2A或P2A肽。
在一些實施例中，核酸分子在5'至3'方向上包含編碼CAR之多核苷酸序列、編碼2A自裂解肽之多核苷酸序列以及編碼PD-1 DNR、PD-1 CSR或TGF-β DNR之多核苷酸序列。
在一些實施例中，該核酸分子編碼與SEQ ID NO: 521或522具有至少約95%序列一致性之肽，或該核酸分子編碼與選自由SEQ ID NO: 525-528組成之群之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的肽。
在另一方面，本揭示案提供一種表現載體，該表現載體包含如上所述之經分離之核酸分子。
在另一方面，本揭示案提供一種經工程改造之免疫細胞，該經工程改造之免疫細胞包含如上所述之經分離之核酸分子。
在一些實施例中，該經工程改造之免疫細胞係選自由以下組成之群：細胞毒性T細胞、輔助T細胞、自然殺手T細胞、γδ T細胞、NKT細胞及自然殺手細胞。
在另一方面，本揭示案提供一種經工程改造之免疫細胞，該經工程改造之免疫細胞表現如上所述之抗DLL3 CAR。
在一些實施例中，該經工程改造之免疫細胞亦表現CSR或DNR。
在一些實施例中，該CSR為PD-1 CSR，該DNR為PD-1 DNR或TGF-β DNR。
在一些實施例中，PD-1 DNR包含與SEQ ID NO: 523具有至少約95%序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，PD-1 CSR包含與SEQ ID NO: 524具有至少約95%序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，TGF-β DNR包含與SEQ ID NO: 529具有至少約95%序列一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，該CAR及該CSR、或該CAR及該DNR藉由2A自裂解肽共表現。
在一些實施例中，2A自裂解肽為T2A或P2A肽。
在一些實施例中，該經工程改造之免疫細胞表現CAR及PD-1 DNR，且經表現DLL3及PD-L1之細胞刺激。
在一些實施例中，該經工程改造之免疫細胞表現CAR及PD-1 CSR，且經表現DLL3及PD-L1之細胞刺激。
在一些實施例中，該經工程改造之免疫細胞表現CAR及TGF-β DNR，且在TGF-β存在下經表現DLL3之細胞刺激。
在一些實施例中，該經工程改造之免疫細胞係選自由以下組成之群：細胞毒性T細胞、輔助T細胞、自然殺手T細胞、γδ T細胞、NKT細胞及自然殺手細胞。
在另一方面，本揭示案提供一種醫藥組合物，該醫藥組合物包含如上所述之抗DLL3 CAR、經分離之DLL3結合蛋白、表現載體或經工程改造之免疫細胞以及生理學上可接受之賦形劑。
在另一方面，本揭示案提供一種用於治療個體之DLL3相關病症的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量的如上所述之經工程改造之免疫細胞或治療有效量的如上所述之醫藥組合物。
在另一方面，本揭示案提供如上所述之抗DLL3 CAR、經分離之DLL3結合蛋白、表現載體或經工程改造之免疫細胞用於製備用以治療DLL3相關病症之藥物的用途。
在另一方面，本揭示案提供一種用於治療DLL3相關病症之藥物，該藥物包含如上所述之抗DLL3 CAR、DLL3結合蛋白、表現載體或經工程改造之免疫細胞。
在一些實施例中，DLL3相關病症為選自由以下組成之群的癌症：肺癌、黑素瘤、乳腺癌、前列腺癌、結腸癌、腎細胞癌、卵巢癌、神經母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、白血病及淋巴瘤。
在一些實施例中，癌症表現DLL3及PD-L1。
在一些實施例中，癌症與對應正常組織相比具有較高TGF-β表現水準。
在一些實施例中，DLL3相關病症為小細胞肺癌。
除非另外定義，否則本文中使用之技術及科學術語具有與所屬領域之普通技術人員通常所瞭解之含義相同的含義。與本文所述之方法、裝置及材料類似或等效的任何方法、裝置及材料可用於實施本發明。提供以下定義以幫助瞭解本文中常用之某些術語，且不意欲限制本揭示案之範疇。
冠詞「一(a及an)」在本文中用以指一種或超過一種(即至少一種)該冠詞之語法賓語。例如，「一要素」意謂一種要素或超過一種要素。
如本文所用，術語「結合蛋白」係指結合靶分子(例如DLL3)之分子或分子之一部分。在一些實施例中，結合蛋白包含抗體。在一些實施例中，結合蛋白包含抗體之抗原結合片段。在一些實施例中，結合蛋白可進一步包含小分子量組分，諸如小分子藥物或毒素。結合蛋白亦可為抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，結合蛋白包含受體之配位體結合域。在一些實施例中，結合蛋白包含跨膜受體之胞外域。結合蛋白亦可為受體之配位體結合域，或跨膜受體之胞外域。在一些實施例中，結合蛋白包含單域抗體(sdAb)或單鏈可變片段(scFv)。在一些實施例中，結合蛋白可為sdAb或scFv。DLL3結合蛋白可為DLL3結合域。在一些實施例中，DLL3結合蛋白包含結合DLL3之抗體或抗體之抗原結合片段。在一些實施例中，DLL3結合蛋白可為抗體或抗體之抗原結合片段。在一些實施例中，DLL3結合蛋白包含結合DLL3之單域抗體(sdAb)或單鏈可變片段(scFv)。在一些實施例中，DLL3結合蛋白可為sdAb或scFv。
術語「抗體」泛指由四條多肽鏈-兩條重(H)鏈及兩條輕(L)鏈構成之任何免疫球蛋白(Ig)分子或其保持Ig分子之基本抗原表位結合特徵的任何功能片段。在全長抗體中，每條重鏈由重鏈可變區(本文中縮寫為HCVR或VH)及重鏈恆定區構成。重鏈恆定區由三個結構域CH1、CH2及CH3構成。每條輕鏈由輕鏈可變區(本文中縮寫為LCVR或VL)及輕鏈恆定區構成。輕鏈恆定區由一個結構域CL構成。VH及VL區可進一步再分成高變區，稱為互補決定區(CDR)，中間散佈更保守之區域，稱為構架區(FR)。每個VH及VL由三個CDR及四個FR構成，從胺基端至羧基端按以下次序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。免疫球蛋白分子可具有任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)、類別(例如IgG 1、lgG2、IgG 3、lgG4、IgA1及lgA2)或子類。在廣泛意義上，術語「抗體」進一步指不源自具有四條多肽鏈之免疫球蛋白分子的scFv或sdAb。
抗體片段為抗體之一部分，例如F(ab')2、Fab、Fv、scFv、sdAb及其類似物。全長抗體之功能片段保持全長抗體之靶特異性。因此諸如scFv (單鏈可變鏈片段)之重組功能抗體片段已用於研發作為基於mAb之治療劑之替代物的治療劑。scFv片段(約25 kDa)由兩個可變域VH及VL組成。天然地，VH及VL結構域經由疏水性相互作用非共價締合，且往往解離。然而，穩定片段可藉由用親水性可撓性連接子將該等結構域連接，建立scFv來工程改造。
如本文所用，術語「單域抗體」(sdAb)具有其在所屬領域中之通用含義，且係指在駱駝科哺乳動物中可發現之類型之抗體的單個重鏈可變域，且天然缺乏輕鏈。這種單域抗體亦稱為VHH或「奈米單抗」。可認為單域抗體之胺基酸序列及結構由四個構架區(FR1、FR2、FR3及FR4)及三個互補決定區(CDR1、CDR2及CDR3)構成。因此，單域抗體可定義為具有以下通用結構之胺基酸序列：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4，其類似於可變域VH或VL。sdAb用作單抗原結合蛋白或用作較大蛋白質或多肽中之抗原結合域提供許多顯著優於使用習知抗體或抗體片段(例如scFv)。sdAb之優點包括：僅僅要求單個結構域以高親和力及高選擇性結合抗原；面對變性劑或包括熱、pH值及蛋白酶在內之條件，sdAb高度穩定；且sdAb可接近習知抗體無法接近之標靶及抗原表位。雖然典型地在諸如美洲駝之駱駝科中產生sdAb，但亦可使用所屬領域中熟知之技術以合成方式產生。
如本文所用，術語「人類化sdAb」意謂在天然存在之VHH序列之胺基酸序列中的一或多個胺基酸殘基經在來自人類之習知4鏈抗體之VH結構域中的對應位置處存在之一或多個胺基酸殘基置換的sdAb。此可藉由所屬領域中熟知之方法進行。舉例而言，sdAb之FR可經人類可變FR置換。因此人類化sdAb在投與人體時具有較小抗原性。
如本文所用，術語「僅重鏈抗體」或「HCAb」係指包含重鏈，但缺乏通常在4鏈抗體中發現之輕鏈的功能抗體。已知駱駝科動物(諸如駱駝、美洲駝或羊駝)產生HCAb。
「DLL3」又名「δ樣配位體3」，為與Notch信號傳導路徑相關之跨膜蛋白。Notch信號傳導路徑首次係在秀麗隱桿線蟲(C. elegans)及果蠅(Drosophila)中鑑別，隨後證明自無脊椎動物至脊椎動物間進化保守，參與一系列基本生物過程，包括正常胚胎發育、成人組織活體內平衡及幹細胞維持。在果蠅中，Notch信號傳導主要由一種Notch受體基因及被稱為Serrate及Delta的兩種配位體基因介導(Wharton等人, 1985；Rebay等人, 1991)。人類中，存在四種已知之Notch受體及五種DSL (Delta-Serrate LAG2)配位體，即Serrate之兩種同源物，稱為Jagged1及Jagged 2，以及Delta之三種同源物，稱為δ樣配位體或DLL1、DLL3及DLL4。人類中，DLL3基因位於染色體19q13上，且由跨越9.5 kb之8個外顯子組成。在最後一個外顯子內之選擇性剪接產生兩種蛋白質同功型。兩者在其胞外域及其跨膜域上共享整體100%一致性，不同之處在於較長同功型含有延長之細胞質尾。
如本文所用，術語「特異性地結合」或「特異性結合」或其任何同義詞係指如藉由標準活體外分析所分析，諸如單域抗體(sdAb)之多肽能夠特異性地識別及可偵測地結合於DLL3分子。舉例而言，如本文所用，結合係使用充分描述之抗原-抗體結合分析、流式細胞術及所屬領域之技術人員已知的其他分析藉由本發明之抗DLL3多肽識別細胞表面上之DLL3分子的能力來量測。
如本文所用，術語「表現載體」為重組或合成產生之核酸構築體或序列，具有允許另一核酸在宿主細胞中轉錄及/或表現之特定核酸元件。表現載體可為質體、病毒或核酸片段之一部分。在一個實例中，表現載體為包含至少一個啟動子序列及至少一個終止序列(例如多腺苷酸化序列)以及視情況複製起點(ori)序列及視情況選擇或可選擇標記物序列的DNA載體，例如質體。視情況，表現載體可進一步包含至少一個所關注之核苷酸編碼序列，該核苷酸編碼序列編碼至少一種多肽，其中至少一個啟動子序列與該至少一個編碼序列可操作地連接。術語「表現」包括多肽產生中所涉及之任何步驟，包括(但不限於)轉錄、轉錄後修飾、轉譯、轉譯後修飾及/或分泌。
術語「分離」係指物質實質上或基本上不含在其天然狀態下通常伴隨其之組分。物質可為細胞或大分子，例如蛋白質或核酸。舉例而言，如本文所用，「經分離之核酸」係指已自在天然存在狀態下位於側面之序列純化的多核苷酸，例如已自通常相鄰之序列移除的DNA片段。可替代地，如本文所用，「經分離之抗體」或「經分離之多肽」及其類似物係指抗體或多肽分子自其天然細胞環境及與細胞之其他組分的締合中進行活體外分離及/或純化。
非人類(例如駱駝科)抗體之「人類化」形式為含有來源於非人類免疫球蛋白之最小序列的嵌合抗體。在一些實施例中，人類化抗體為來自接受者高變區(HVR)之殘基經來自諸如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物之非人類物種(供體抗體) HVR之殘基置換的人類免疫球蛋白(接受者抗體)，具有期望之特異性、親和力及/或能力。在一些情況下，人類免疫球蛋白之構架區(「FR」)殘基經對應之非人類殘基置換。此外，人類化抗體可包含未在接受者抗體中或供體抗體中發現之殘基。可進行此等修飾以進一步改進抗體效能，例如結合親和力。一般而言，人類化抗體將包含至少一個及典型地兩種可變域之基本上全部，其中高變環之全部或基本上全部與非人類免疫球蛋白序列之高變環對應，且FR區之全部或基本上全部為人類免疫球蛋白序列之FR區，不過FR區可包括一或多個提高例如結合親和力、異構化、免疫原性等抗體效能的單獨FR殘基取代。FR中此等胺基酸取代之數目典型地在H鏈中至多6個，且在L鏈中至多3個。人類化抗體視情況亦將包含免疫球蛋白恆定區(Fc)，典型地人類免疫球蛋白之恆定區的至少一部分。關於進一步細節，參見例如Jones等人, Nature 321:522-525 (1986)；Riechmann等人, Nature 332:323-329 (1988)；以及Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)。亦參見例如Vaswani及Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998)；Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995)；Hurle及Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994)；以及美國專利第6,982,321號及第7,087,409號。
關於肽、多肽或抗體序列之「序列一致性」及「同源性」定義為在比對序列及必要時引入間隙以實現最大序列一致性百分比後且不考慮任何保守取代作為序列一致性之一部分下，候選序列中與特定肽或多肽序列中之胺基酸殘基相同之胺基酸殘基的百分比。可根據所屬領域技能內之多種方式，使用公眾可獲得之計算機軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGN™ (DNASTAR)軟體，實現比對，以確定胺基酸序列一致性百分比。所屬領域技術人員可確定用於量測比對之適當參數，包括實現所比較之全長序列上之最大比對所需的任何演算法。
解離常數(KD或Kd)用作展示抗體對抗原之親和力的指標。舉例而言，藉由Scatchard方法使用用多種標記試劑標記之抗體，以及藉由使用非處方量測套組BiacoreX (Amersham Biosciences製造)或類似套組，根據與套組連接之使用者手冊及實驗操作方法容易分析。可使用此等方法獲得之KD值以單位M (Mol)表示。
如本文所用，「嵌合轉換受體(CSR)」係指一種受體，建立所述受體以逆轉其原始信號傳導路徑之結果，以賦予免疫細胞(例如CAR T細胞)所期望之活性，諸如能夠克服免疫抑制腫瘤微環境及允許其具有更大活體內持久性。在一些實施例中，CSR可利用由癌細胞表現之抑制分子來進一步刺激CAR T細胞。在一非限制性實例中，CAR T細胞可經工程改造以表現由人類抑制受體程式化細胞死亡蛋白1 (PD-1)之胞外配位體結合域與CD28之跨膜及胞質共刺激信號傳導域融合所構成的CSR。當CAR T細胞投與患有表現DLL3及程式化細胞死亡配位體1 (PD-L1)之癌症的個體時，所表現之CAR可結合於DLL3且所表現之轉換受體可結合於PD-L1。PD-1/CD28嵌合轉換受體融合蛋白之性質阻止正常PD1/PD-L1介導之T細胞抑制，代之以促進經由CD28域之信號傳導，此引起對CAR T細胞之刺激。因此，PD-1之跨膜及胞內域用CD28之跨膜及胞內域替換將PD-L1轉化成CAR T細胞之共刺激配位體。此將誘發增強的針對表現PD-L1之癌細胞的毒性。在其他實施例中，CSR亦可用於抑制CAR T細胞對非預期靶細胞之作用。
如本文所用，「顯性負性受體(DNR)」係指能夠結合配位體但不會誘發細胞內之信號傳導級聯的受體。DNR通常具有完整配位體結合區，但缺少胞內酶催化區。其可為全長受體之突變形式或受體之截短形式。在CAR T細胞免疫療法後，一些癌症、尤其是實體癌可能使結合於CAR T細胞上之抑制受體的抑制配位體上調。此適應性抗性使嵌合CAR T細胞療法之功效打折。已知一些癌症、特別是實體癌分泌轉型生長因子β (TGF-β)，建立免疫抑制環境。已知TGF-β誘發或促進轉移且有效抑制免疫系統。因此，在一些實施例中，使用TGF-β受體TGFΒRII之截短型式作為TGF-β DNR以提高本文揭示案之CAR T細胞的抗腫瘤效能。在一些實施例中，藉由使用2A自裂解肽使CAR及TGF-β DNR在T細胞表面上共表現。在一些實施例中，藉由使用兩種表現載體使CAR及TGF-β DNR在T細胞表面上分開表現。發現TGF-β DNR在引入本文揭示案之抗DLL3 CAR T細胞中時，能夠增強CAR T細胞針對一些DLL3陽性癌細胞、例如SCLC細胞之細胞毒性。類似地，在一些實施例中，使用PD-1受體之截短型式作為PD-1 DNR以提高本文揭示案之CAR T細胞的抗腫瘤效能。
如本文所用，「治療(treatment或treating)」包括對疾病或病理性疾患之症狀或病理的任何有益或合乎需要的作用，且可包括甚至例如癌症、自體免疫性疾病、免疫病症等所治療之疾病或疾患之一或多個可量測標記物最低程度的減少。治療可視情況涉及延遲疾病或疾患之進展。「治療」不一定指示完全根除或醫治疾病或疾患或其相關症狀。
本發明之一些態樣係指一種DLL3結合蛋白，該DLL3結合蛋白對人類或恆河猴DLL3蛋白具有結合特異性。
在一些實施例中，DLL3結合蛋白包含特異性地結合於DLL3之單域抗體(「sdAb」)部分，其中該sdAb部分包含多肽，該多肽包含：包含SEQ ID NO: 1-81中之任一者之胺基酸序列的CDR1或其在該CDR1中包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 82-162中之任一者之胺基酸序列的CDR2或其在該CDR2中包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 163-243中之任一者之胺基酸序列的CDR3或其在該CDR3中包含至多約3個胺基酸取代之變異體。
在一些實施例中，sdAb包含多肽，該多肽包含：包含SEQ ID NO: 1-81中之任一者之胺基酸序列的CDR1；包含SEQ ID NO: 82-162中之任一者之胺基酸序列的CDR2；以及包含SEQ ID NO: 163-243中之任一者之胺基酸序列的CDR3，或該多肽的在CDR區中包含至多約3個胺基酸取代之變異體。在一些實施例中，抗DLL3抗體為或包含單域抗體(sdAb)，該抗體係在用人類或恆河猴DLL3蛋白免疫接種後自駱駝產生。在一些實施例中，sdAb包含如表1之每行中所列出的CDR組(即CDR1、CDR2及CDR3之組合)。
在一些實施例中，sdAb包含多肽，該多肽包含以下中之任一種：(1) 包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之CDR 2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列之CDR 3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(2) 包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(3) 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 186之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(4) 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 189之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(5) 包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 196之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(6) 包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 120之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列之CDR 3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(7) 包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR 3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(8) 包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之CDR 2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；或(9) 包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR 3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體。
在一些實施例中，sdAb包含多肽，該多肽包含以下中之任一種：(1) 包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列之CDR 3；(2) 包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之CDR 2；以及包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR 3；(3) 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 186之胺基酸序列之CDR 3；(4) 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之CDR 2；以及包含SEQ ID NO: 189之胺基酸序列之CDR3；(5) 包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 196之胺基酸序列之CDR3；(6) 包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 120之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列之CDR3；(7) 包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR3；(8) 包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR3；或(9) 包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR3。
在一些實施例中，sdAb包含與SEQ ID NO: 274-354中之任一者之胺基酸序列具有至少約95% (例如約96%、97%、98%、99%或100%)序列一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 274-354中之任一者之胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb進行人類化，且包含與SEQ ID NO: 355-367中之任一者之胺基酸序列具有至少約95% (例如約96%、97%、98%、99%或100%)序列一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 355-367中之任一者之胺基酸序列。可使用所屬領域中已知之多種技術產生，該等技術包括但不限於CDR移植(參見例如美國專利第5,225,539號、第5,530,101號及第5,585,089號)、飾面(veneering)或者表面重構(resurfacing) (參見例如歐洲專利第EP 592,106號及第P 519,596號)及鏈改組(參見例如美國專利第5,565,332號)。一般地，在人類化期間，受體抗體(例如人類抗體)之CDR殘基替換為供體抗體(例如囓齒動物抗體)之CDR殘基，以保持抗原結合特異性，同時將活體內免疫原性減至最少。經常，構架區中之構架殘基亦用來自供體抗體之對應殘基取代，以改變，例如提高抗原結合。藉由所屬領域熟知之方法，例如藉由模擬CDR與構架殘基之相互作用鑑別對於抗原結合而言重要之構架殘基且進行序列比較以鑑別具有位置處之不尋常構架殘基，來鑑別此等構架取代，例如保守取代。(參見例如Queen等人,美國專利第5,585,089號；及Riechmann等人, 1988, Nature, 332:323)。
在一些情況下，sdAb可與人類IgG鉸鏈片段及Fc片段融合，形成重鏈抗體(HCAb)。在一些情況下，sdAb可與對除DLL3以外之抗原具有特異性的另一sdAb或scFv融合，形成雙特異性抗體。在一些情況下，sdAb可與對除DLL3以外之抗原具有特異性的兩種或更多種sdAb或scFv融合，形成多特異性抗體。在其他情況下，sdAb可進行化學修飾以攜帶藥物分子。因此，抗DLL3 sdAb可在活體內用於將藥物分子引導至表現DLL3之細胞。
在一些實施例中，DLL3結合蛋白為或包含特異性地結合DLL3之單鏈可變片段(scFv)。在一些情況下，藉由重複數輪之噬菌體淘選自合成的人類Fab或scFv噬菌體文庫分離scFv，其中每輪淘選涉及結合、移除非特異性噬菌體以及溶離及擴增所結合之噬菌體以進行下一輪過程。在一些實施例中，DLL3結合蛋白包含特異性地結合於DLL3之scFv部分，其中該scFv包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該scFv之VH結構域包含SEQ ID NO: 498或504中所示之CDR1、SEQ ID NO: 499或505中所示之CDR2以及SEQ ID NO: 500或506中所示之CDR3，且該scFv之VL結構域包含SEQ ID NO: 495或501中所示之CDR1、SEQ ID NO: 496或502中所示之CDR2以及SEQ ID NO: 497或503中所示之CDR3。在一些實施例中，DLL3結合蛋白包含特異性地結合於DLL3之scFv部分，其中該scFv包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該scFv之VH結構域包含SEQ ID NO: 498中所示之CDR1、SEQ ID NO: 499中所示之CDR2以及SEQ ID NO: 500中所示之CDR3，且該scFv之VL結構域包含SEQ ID NO: 495中所示之CDR1、SEQ ID NO: 496中所示之CDR2以及SEQ ID NO: 497中所示之CDR3；或該scFv之VH結構域包含SEQ ID NO: 504中所示之CDR1、SEQ ID NO: 505中所示之CDR2以及SEQ ID NO: 506中所示之CDR3，且該scFv之VL結構域包含SEQ ID NO: 501中所示之CDR1、SEQ ID NO: 502中所示之CDR2以及SEQ ID NO: 503中所示之CDR3。
在一些情況下，scFv可與對除DLL3以外之抗原具有特異性的另一sdAb或scFv融合，形成雙特異性抗體。在一些情況下，scFv可與對除DLL3以外之抗原具有特異性的兩種或更多種sdAb或scFv融合，形成多特異性抗體。在其他情況下，scFv可進行化學修飾以攜帶藥物分子。因此，抗DLL3 scFv可在活體內用於將藥物分子引導至表現DLL3之細胞。
本發明之一些態樣係關於包含DLL3結合域之CAR或CAR-T細胞(抗DLL3 CAR或抗DLL3 CAR-T細胞)。
本發明之CAR包含胞外域、跨膜域及胞內域。在一些實施例中，CAR亦包括在N末端之信號肽及介於胞外域與跨膜域之間的鉸鏈區。胞外域包括靶特異性結合元件(亦稱為抗原識別域或抗原結合域)。胞內域或胞質域經常包括一或多個共刺激信號傳導域及CD3 ζ鏈部分。共刺激信號傳導域係指包括共刺激分子之胞內域在內的CAR的一部分。
藉由CAR分子識別抗原或靶向抗原最常涉及抗體或抗體片段之使用。根據本發明，抗原結合域為特異性地結合於DLL3之抗體或抗體片段。較佳地，本發明之CAR的抗原結合域為如上所提及之抗DLL3 scFv或sdAb。
跨膜域可源自天然或合成來源。在來源為天然的情況下，結構域可源自任何膜結合或跨膜蛋白。本發明中具體使用之跨膜區可源自(即至少包含跨膜區)例如T細胞受體之α、β或ξ鏈、CD8α鏈。
本發明之CAR的細胞內信號傳導域引起免疫細胞之至少一種正常效應功能的活化。術語「效應功能」係指細胞之專門功能。T細胞之效應功能例如可為細胞溶解活性，或輔助活性，包括分泌細胞介素。因此，術語「胞內域」係指轉導效應功能信號且指導細胞進行專門功能之蛋白質部分。雖然通常可採用整個胞質域，但多數情況下不需要使用整條鏈。在使用胞質域之截短部分的程度上，此類截短部分可代替完整鏈使用，只要其轉導效應功能信號即可。因此術語胞內域意欲包括足夠轉導效應功能信號之胞質域之任何截短部分。用於本發明CAR中之胞質域的較佳實例包括協調一致以在抗原受體接合後開始信號轉導之T細胞受體(TCR)及共受體的胞質序列，以及此等序列之任何衍生物或變異體及具有相同功能能力之任何合成序列。在一些實施例中，細胞內信號傳導域源自CD3ζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b或CD66d。
常常，單單藉由TCR產生之信號不足以完全活化T細胞。因此，使用第二或共刺激信號。因此，據說T細胞活化由兩類不同胞質信號傳導序列介導：藉由TCR開始抗原依賴性初級活化之信號傳導序列(初級胞質信號傳導序列)及以非抗原相關性方式作用以提供第二或共刺激信號之信號傳導序列(第二胞質信號傳導序列)。共刺激信號傳導序列係指包括共刺激分子之胞內域在內的CAR之一部分。共刺激分子為淋巴細胞對抗原之高效反應所需的除抗原受體或其配位體以外的細胞表面分子。此類分子之實例包括CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD40、PD-1、LFA-1、ICOS、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、TNFRSF9、TNFRSF4、TNFRSF8、CD40LG、ITGB2、KLRC2、TNFRSF18、TNFRSF14、HAVCR1、LGALS9、DAP10、DAP12、CD83、CD83配位體及其組合。
介於CAR之胞外域與跨膜域之間的鉸鏈區一般意謂多肽鏈中用於將跨膜域連接至胞外域之任何寡肽或多肽。鉸鏈區可為至多300個胺基酸，較佳2至100個胺基酸且最佳2至10個胺基酸。
除抗原結合域、跨膜域、胞質域及鉸鏈區外，本發明之CAR亦可包括連接至CAR之N末端的信號肽序列。信號肽序列存在於許多分泌蛋白及膜蛋白之N末端，且典型地具有15至30個胺基酸之長度。因為許多以上提及之蛋白質分子具有信號肽序列，所以此等信號肽可以用作本發明CAR之信號肽。
在一些實施例中，CAR包含DLL3結合域，其中該DLL3結合域包含或源自單域抗體(sdAb)或單鏈可變片段(scFv)。
在一些實施例中，CAR包含DLL3結合域，其中該DLL3結合域包含或源自單域抗體(sdAb)，其中該sdAb包括包含SEQ ID NO: 1-81中之任一者之胺基酸序列的CDR1或其在該CDR1中包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 82-162中之任一者之胺基酸序列的CDR2或其在該CDR2中包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 163-243中之任一者之胺基酸序列的CDR3或其在該CDR3中包含至多約3個胺基酸取代之變異體。在一些實施例中，CAR包含DLL3結合域，其中該DLL3結合域包含或源自單域抗體(sdAb)，其中該sdAb包括包含SEQ ID NO: 1-81中之任一者之胺基酸序列的CDR1；包含SEQ ID NO: 82-162中之任一者之胺基酸序列的CDR2；以及包含SEQ ID NO: 163-243中之任一者之胺基酸序列的CDR3。
在一些實施例中，CAR包含DLL3結合域，其中該DLL3結合域包括包含以下中之任一種的sdAb：(1) 包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(2) 包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(3) 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 186之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(4) 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 189之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(5) 包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 196之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(6) 包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 120之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(7) 包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；(8) 包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；或(9) 包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之CDR1，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之CDR2，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體；以及包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR3，或其包含至多約3個胺基酸取代之變異體。
在一些實施例中，CAR包含DLL3結合域，其中該DLL3結合域包括包含以下中之任一種的sdAb：(1) 包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列之CDR3；(2) 包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR3；(3) 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 186之胺基酸序列之CDR3；(4) 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 189之胺基酸序列之CDR3；(5) 包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之CDR 2；以及包含SEQ ID NO: 196之胺基酸序列之CDR 3；(6) 包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 120之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列之CDR 3；(7) 包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR 3；(8) 包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR 3；或(9) 包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之CDR 2；以及包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR 3。
在一些實施例中，CAR包含DLL3結合域，其中該DLL3結合域包含駱駝sdAb，其中該sdAb包含與SEQ ID NO: 274-354中之任一者之胺基酸序列具有至少約95% (例如96%、97%、98%、99%或100%)序列一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，CAR包含DLL3結合域，其中該DLL3結合域包括包含SEQ ID NO: 274-354中的任一個的胺基酸的駱駝sdAb。在一些實施例中，CAR包含DLL3結合域，其中該DLL3結合域包含人類化sdAb，其中該sdAb包含與SEQ ID NO: 355-367中之任一者之胺基酸序列具有至少約95% (例如96%、97%、98%、99%或100%)序列一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，CAR包含DLL3結合域，其中該DLL3結合域包含人類化sdAb，該人類化sdAb包含SEQ ID NO: 355-367中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，CAR包含DLL3結合域，其中該DLL3結合域包含或源自單鏈可變片段(scFv)，其中該scFv之VH結構域包含SEQ ID NO: 498中所示之CDR1、SEQ ID NO: 499中所示之CDR2以及SEQ ID NO: 500中所示之CDR3，且該scFv之VL結構域包含SEQ ID NO: 495中所示之CDR1、SEQ ID NO: 496中所示之CDR2以及SEQ ID NO: 497中所示之CDR3；或該scFv之VH結構域包含SEQ ID NO: 504中所示之CDR1、SEQ ID NO: 505中所示之CDR2以及SEQ ID NO: 506中所示之CDR3，且該scFv之VL結構域包含SEQ ID NO: 501中所示之CDR1、SEQ ID NO: 502中所示之CDR2以及SEQ ID NO: 503中所示之CDR3。在一些實施例中，該scFv之VH結構域包含SEQ ID NO: 508中所示之胺基酸序列，且該scFv之VL結構域包含SEQ ID NO: 507中所示之胺基酸序列；或該scFv之VH結構域包含SEQ ID NO: 510中所示之胺基酸序列，且該scFv之VL結構域包含SEQ ID NO: 509中所示之胺基酸序列。
在一些實施例中，本發明之CAR包含本文中提供為DLL3結合域的駱駝sdAb且包含與SEQ ID NO: 476-484中之任一者之胺基酸序列具有至少約95% (例如96%、97%、98%、99%或100%)序列一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之CAR包含本文中提供為DLL3結合域的駱駝sdAb且具有選自由SEQ ID NO: 476-484組成之群之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之CAR包含本文中提供為DLL3結合域的人類化sdAb且包含與SEQ ID NO: 485-494中之任一者之胺基酸序列具有至少約95% (例如96%、97%、98%、99%或100%)序列一致性的胺基酸序列。在其他實施例中，本發明之CAR包含本文中提供為DLL3結合域的人類化sdAb且具有選自由SEQ ID NO: 485-494組成之群之胺基酸序列。
在一些實施例中，本發明之CAR包含本文中提供為DLL3結合域的人類scFv且包含與SEQ ID NO: 515-516中之任一者之胺基酸序列具有至少約95% (例如96%、97%、98%、99%或100%)序列一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之CAR包含本文中提供為DLL3結合域的人類scFv且具有選自由SEQ ID NO: 515-516組成之群之胺基酸序列。
在一些實施例中，本發明之CAR自N末端至C末端包含信號肽、DLL3結合域、鉸鏈區、跨膜域以及細胞質信號傳導域。在具體實施例中，本發明之CAR自N末端至C末端包含如SEQ ID NO: 465中所示之CD8α信號肽、DLL3結合域、如SEQ ID NO: 466中所示之CD8α鉸鏈域、如SEQ ID NO: 467中所示之CD8α跨膜域、如SEQ ID NO: 468中所示之CD137胞質域、如SEQ ID NO: 469中所示之CD28胞質域及如SEQ ID NO: 470中所示之CD3ζ胞質域。
本發明之一些態樣係關於一種經分離之核酸分子，該經分離之核酸分子編碼本發明之sdAb、scFv或CAR。在一些實施例中，核酸分子編碼駱駝sdAb且包含選自由SEQ ID NO: 368-448組成之群的多核苷酸序列。在一些實施例中，核酸分子編碼人類化sdAb且包含選自由SEQ ID NO: 449-461組成之群的多核苷酸序列。在一些實施例中，核酸分子編碼scFv之VH及VL結構域，其中VH結構域編碼包含SEQ ID NO: 512或514之多核苷酸序列的序列，VL結構域編碼包含SEQ ID NO: 511或513之多核苷酸序列的序列。
本發明之一些態樣係關於一種經工程改造之免疫細胞，該經工程改造之免疫細胞包含以上提供之任一種CAR、上述任一種經分離之核酸或上述任一種載體。在一些實施例中，經工程改造之免疫細胞為細胞毒性T細胞、輔助T細胞、自然殺手T細胞、γδ T細胞、NKT細胞及自然殺手細胞。在一些實施例中，細胞包含攜帶本發明之經分離之核酸分子的表現載體。用表現載體對細胞進行基因修飾以表現由核酸分子之一部分編碼的多肽為所屬領域中熟知之一項遺傳技術。
本發明之一些態樣係關於本發明之DLL3結合蛋白、抗DLL3 CAR、核酸分子或CAR-T細胞。在一些實施例中，本發明之CAR-T細胞用生理學上可接受之賦形劑調配成醫藥組合物。如本文所用，「生理學上可接受之賦形劑」包括不限於對於在人類或家畜中使用可接受之任何助劑、載體、稀釋劑、防腐劑、分散劑、懸浮劑、穩定劑、等張劑、溶劑、界面活性劑或乳化劑。在一些實施例中，本發明之CAR-T細胞或包含該CAR-T細胞之醫藥組合物用於治療個體之DLL3相關病症。因此，提供一種用於治療DLL3相關病症之方法，該方法包括向罹患DLL3相關病症之個體投與治療有效量的本發明之CAR-T細胞或醫藥組合物。抗體、CAR-T細胞或醫藥組合物之「治療有效量」可根據例如個體之疾病狀況、年齡、性別及重量(例如患者)的因素變化。術語「治療有效量」可包括有效「治療」個體之量。當指示治療劑量時，在具體實施例中涵蓋的待投與之精確量可由醫師考慮個體之狀況確定。在一些實施例中，DLL3相關病症為表現DLL3作為細胞表面蛋白之癌症，例如黑素瘤、乳腺癌、前列腺癌、結腸癌、腎細胞癌、卵巢癌、神經母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、白血病及淋巴瘤。較佳地，DLL3相關病症為肺癌，尤其是小細胞肺癌(SCLC)。實例
本文所述之實例不意欲表示以下實驗均進行或只進行該等實驗。努力確保關於所用數字(例如量、溫度等)之準確性，但應考慮一些實驗誤差及偏差。除非另外指示，否則份為重量份，分子量為重量平均分子量，溫度為攝氏度，且壓力為大氣壓或接近大氣壓。實例 1. 動物免疫及抗體文庫構築
本實例證明，免疫駱駝顯示對人類或恆河猴DLL3蛋白很好之免疫反應且所獲得之免疫文庫顯示優良品質。動物免疫
將包含具有N末端FLAG標籤之人類DLL3蛋白(AdipoGen，AG-40B-0151)的胞外域(aa27-466)或/及表現DLL3之質體或表現DLL3之細胞(CHO-K1/DLL3或/及CHO-K1/EGF4)的免疫原與助劑或PBS混合且注入駱駝中。典型地，駱駝進行免疫2-4次，時間間隔為1週至2週。在多輪免疫後，通過用酶聯免疫吸附劑分析(ELISA)及流式細胞術分析進行血清滴定來評定針對靶抗原DLL3之免疫反應。噬菌體展示文庫構築
使用TRIZOL®試劑，根據製造商之方案，自免疫駱駝之淋巴細胞提取全部RNA。cDNA係基於RNA模板，利用寡(dT)20引子，使用PRIMESCRIPT™第一鏈cDNA合成套組，根據製造商之方案來合成。自駱駝cDNA擴增VHH，以產生VHH噬菌體文庫。實例 2. 抗 DLL3 抗體之產生
本文提供之抗DLL3抗體包括自免疫駱駝或自合成人類Fab文庫分離之人類Fab產生的單域抗體(sdAb)。噬菌體展示
噬菌體展示文庫係用藉由免疫接種(包含具有N末端FLAG標籤之人類DLL3蛋白(AdipoGen，AG-40B-0151)的胞外域(aa27-466)或/及表現DLL3之質體或表現DLL3之細胞(CHO-K1/DLL3或/及CHO-K1/EGF4)的免疫原)獲得的sdAb構築。合成另一人類Fab噬菌體展示文庫。拯救兩個噬菌體文庫且在過濾殺菌後儲存在4℃下以供進一步使用。使用基於蛋白質之淘選以及基於細胞之淘選，利用以上提及之兩種噬菌體文庫分離結合之噬菌體。使用兩個文庫，針對基於蛋白質及基於細胞之淘選方法進行至少一輪淘選，直至DLL3特異性噬菌體純系之百分比達到30%。評定每輪輸出噬菌體之總輸出純系的數目，藉由ELISA評定DLL3陽性純系之百分比，及DLL3特異性純系之序列多樣性。基於此等結果，選擇最佳之淘選輸出，以供高通量篩選。高通量篩選
使用所選擇之輸出噬菌體感染呈指數生長之大腸桿菌細胞。提取輸出噬菌體之雙鏈DNA。自噬菌粒載體上切割sdAb/Fab插入物，且插入抗體片段表現載體中以供高通量篩選。所得質體用於轉化呈指數生長之大腸桿菌細胞，隨後塗鋪細胞且在37℃下生長隔夜。逐一挑選數千個菌落且在含有1 mL 2×YT培養基之96深孔盤中生長。藉由加入1 mM IPTG誘導抗體片段之表現。
藉由ELISA，分析上清液中之sdAb/Fab蛋白結合DLL3 ECD蛋白的能力，以及藉由FACS，分析結合表現DLL3之SHP-77細胞株(美國典型菌種保藏(ATCC)® CRL-2195™)及CHO-K1/人類DLL3 (內部產生)的能力。所有結合劑均定序。移除冗餘序列。總共獲得結合人類及恆河猴DLL3蛋白及細胞株的81個駱駝sdAb及2個人類Fab結合劑。所有此等結合劑具有獨特之胺基酸序列。
藉由BIAcore T200儀器(GE Healthcare)上之表面電漿子共振(SPR)對此等獨特結合劑中之一些結合劑進行進一步表徵。實驗如下進行：藉由親和力標籤將粗sdAb/Fab蛋白質捕捉至感測器晶片上。高濃度(100 nM)人類DLL3流過感測器晶片表面，且使其結合抗體片段300秒，接著注射操作緩衝液，以使所形成之複合物解離。基於一個締合及解離曲線大致計算締合速率(ka)及解離速率(kd)，且用於估計平衡解離常數(KD)。表7中示出此等獨特結合劑中之一些結合劑的結合親和力。
表1中列出抗DLL3駱駝sdAb之CDR序列且表2中列出抗DLL3人類scFv之CDR序列。表1. 抗DLL3駱駝sdAb CDR序列
sdAb ID CDR1序列 ID CDR2序列 ID CDR3序列
AS63930 1 GYTYSGNYMA 82 VVYNIDGGGRFTTYADSVKG 163 EVADPTWGSRDQRRYKY
AS63932 2 GYTYGSTFMG 83 VIYTGGGSTWYASSVKG 164 RYGSGNVNY
AS63951 3 RDIYGNNCMA 84 SIYPAGGRPYYADSVKG 165 RSFSIAVCATRSGITRSNFAY
AS63984 4 GYTYSSNFMG 85 TIVSGGGTTYYADSVRG 166 GGPVTNAPRWYPLRPPGYNY
AS63987 5 GYRNCMA 86 VIYTPSGITDYASSVKG 167 DRPFVCNIANMRRSSN
AS63997 6 FSGYGVSTMA 87 AITVGSGNTYYADSVKG 168 GYLSGGSWDVPGRYNY
AS64047 7 QYVYRWDLMG 88 AVYTGDGITYYADSVKG 169 GFVSGGRWNQSYRYKY
AS64052 8 GYTYRSNFMG 89 TIHSGVATTYYADSVKG 170 GGPPANADRWYPLRPPGYNY
AS64062 9 RSPYSSSRCMG 90 ALYTGGGSTSYADSVKG 171 VVPRGGSCRLDERGYYH
AS64072 10 GYSYYINLMA 91 AHGPVSGTAYYTDSVKG 172 ETTMGWAHERGYRY
AS64097 11 GYTYSRNCMG 92 AINTGGGSTYYADSLEG 173 GPDLGGSWCRPVERAFTY
AS64114 12 GNTYSTNYMG 93 VIYTRGGHTYYVDSVRG 174 ASRHRLRLNNPRDYDY
AS64123 13 GYTYTSNWLG 94 IIYTGSGSTHYRSSVKG 175 RFSEYNY
AS64130 14 GYTYRSNFMG 95 TIDSRGTITYYADSVKG 176 GGPRTNDDRWYPLRPPGYNY
AS64137 15 GSTYSTNFMG 96 TLVTWVERTAYADSVKG 177 AAASTDVRLLDPGDFAY
AS64142 16 GFTFDRNAMR 97 CIDWTGANIAYADSVKG 178 DTTSGYCSGFWSTSRYS
AS64154 17 GYTYRYLYMG 98 CIYTGSGSTGYADSVKG 179 SSPRWGGTCRRWSQYNY
AS64160 18 VYTSSSYCMG 99 AMCFGGLVTHYADSVKG 180 DFGRDKNYLRPLLPHAYNY
AS64228 19 GVSYNRCSMG 100 RIQPGGNTYYADSVKG 181 LCWRENVNY
AS64300 20 GDIYNLMSMA 101 YINTIIGNTYYTDSVKG 182 FNYGGAWYEERSYKY
AS64380 21 GNTYSSNYMG 102 VIYTRGGHTYYVDSVRG 183 SSRHRLGLNNPRDYDY
AS64395 22 GSTYSTNFMG 103 TLVTWAERTAYADSVKG 184 AASTAVRLLDPGDFAY
AS64443 23 GYTDSSVYIG 104 IIYTGGESTHYRSSVKG 185 RFPAVTY
AS64511 24 RATYSTNYIS 105 TITTGDGETAYADSVKG 186 NLRIGGDWFDGRDFRA
AS64536 25 RYTDNFVYMG 106 LIYPGGGSTYYASSVKG 187 KWGLGGGGLKSDTYMY
AS64597 26 GYTYRVNFMG 107 TIDSGVGTTYYADSVKG 188 GGPPTDGDRWYPLRPPGYNY
AS64617 27 GYTDRCSMA 108 RISTSGFTNYAASVKG 189 IVGRTCSLNY
AS64634 28 GYSFRGDFMCMG 109 VFYPGGGSTNYADSAKG 190 RRWVSGTCYWDSDFHY
AS69498 29 GNTYSSNYMA 110 VIYTRGGHTYYIDSVRG 191 SSRHRLRLSDPRDYDY
AS69500 30 RYTYSSACMG 111 SIFTGTGGSTYYADSVKG 192 RAFQVGYCYLRTDVYNY
AS69527 31 RYTFSSTCMA 112 AIYTDDGSTWYADSVKG 193 RRWACPRVGSWHEFAY
AS68280 32 GSTYSSNYLG 113 AISTGDGATAYADSVKG 194 ARGRFIDWTKATQYDY
AS68355 33 GYTYSGVCMG 114 AIDSDGSTSYADSVKG 195 AIVGGFNAYCSGGYVLDFGA
AS69443 34 GFTFDDSDMA 115 TISSDGSTYYADSVKG 196 DFLTGFYYSDSPHPAPCSASDFGY
AS75376 35 GYTYSSHSMG 116 VIYTGDGSTYYADSVKG 197 DPNPDYMLPFRPSRRSW
AS75387 36 GYPYSSPCMA 117 VAYTGGDIQYLTDSVKG 198 DLRLPRAGGCAYSY
AS75695 37 GYTVSAYCMG 118 FIDAGGATIYADPVKG 199 DRRGRVRRCEYNA
AS76169 38 GYIYSSFCMG 119 YIRDNIMTSYTDSVKG 200 DRGGYANSCAVAARYDY
AS63931 39 FSGYGVSTMA 120 AITVGSGNTYYADSVTG 201 GWLSGGSWHVPGRYNY
AS63937 40 GSTISSRPMA 121 CIHTGLGRTYYADSVKG 202 DSRRPCMVAAGYTY
AS63948 41 GYTYRYLYMG 122 CIYTGSGSTGYADSVKG 203 ASPRWGGTCRRWSEYNY
AS63956 42 GFTYSNCCMR 123 LINSSGGTYYADSVRG 204 YQAKYCSGPCAPPTD
AS63965 43 GYSSGSCRMG 124 KVISDGTTVYADSVKG 205 WCREYPGGILNNG
AS63993 44 GFTFDDLVMA 125 LVATAGNSVYADSVKG 206 RTDSEHAFKF
AS63999 45 GYTYSSNWMG 126 IIYTGGISTHYRSSVKG 207 RYTDYNY
AS64006 46 GYTGDTTYIG 127 LIYTSGTSEYYADSVKG 208 RSRTMMY
AS64057 47 GFTFDRNAMR 128 CISWTGANIAYADSVKG 209 DTTSGSCSGFWSTSRYY
AS64060 48 GSTYCTYRMS 129 VIDSGGSTSYADSVKG 210 DPTIGCPQTYRYNY
AS64071 49 GNTYRLNSMG 130 FIVMIRGTTYYGASVKG 211 STKDQFYVFNPIGYDS
AS64093 50 RYIYGNNCMA 131 SIYPAGGRTYYADSVKG 212 RSFSIGVCATQSGITWSNFAY
AS64118 51 GYTYSACRMA 132 FINSAGSTYYADSVKG 213 TWDSSCRFQY
AS64120 52 RYIYGNNCMA 133 SIYPAGGRPYYADSVKG 214 RSFSIADCATQSGITRSNFAY
AS64124 53 TYTPSNNYMG 134 AIATIGGTTRYADSVKG 215 GRPYSLPLPLPLESGAYRY
AS64135 54 TSTYCRYYMR 135 AMQPDGTTSYSDSVKG 216 DPMGGSRTPCTSA
AS64163 55 GYRYRWNCMA 136 AISTGSGSTYYAGSVKG 217 DPSVCPGGMWYSKEYRY
AS64182 56 GQTSRYLYMG 137 CIYTGSGSTGYADSVKG 218 SSPHWGGTCRRWSEYKY
AS64183 57 GHTYSANCMA 138 SVYTDDDSTMYTDSVKG 219 DLSGGPAGCGYTH
AS64207 58 GYTYSSNFMG 139 TIVSGGGTTYYADSVRG 220 GGPPTNGAKWYPLRPPGYNY
AS64276 59 GYTGSSRCMA 140 QIFTGRGTTGYADSVKG 221 SLGPGRGACGYNY
AS64336 60 GRTYSSCSMG 141 HIFSDGSRYYADSVKG 222 RTGWAPRCAVPGY
AS64346 61 GYTYFMG 142 TIGTGDIFNGAAYYVDSVKG 223 VQSKSSNYVLRDASTYNY
AS64420 62 GDTSRSVWMG 143 TISTAGGSTWYTDSVKG 224 RSRYATY
AS64473 63 GYTYRYLYMA 144 CIYTGSGTTGYADSVKG 225 SSPQWGGTCRRWSEYNY
AS64475 64 GYTWSRNWMG 145 TITISGGSTWYADSVKG 226 RDTARTY
AS64513 65 DYPYIDNCMG 146 AACTGGGSTYYADSVKG 227 GYYSGSGPGYLLPWRYNY
AS64562 66 GYTARRDFMA 147 VIHTGGDTTYYADSVKG 228 GFRPRGGGYTGDVLAQAAAYNY
AS64583 67 GFTIAVYTMG 148 CTSWAGGRTYTADSVKG 229 KAHPDCSGDWSPSGYEY
AS64594 68 GYTYNSNYMG 149 LIYTGGGSTYYADSVKG 230 RTQTRNY
AS64605 69 RYPYSSICMG 150 RIYTGTGSTWYTDSVKG 231 RSNSYSYSSCDYGPLTRGGYNF
AS64606 70 GYTSRSNYMG 151 AFYLIYTRGGSTYYASSVKG 232 RLDEKMY
AS68121 71 GYTYSRNCMG 152 TDYIRFGRTYYADSVKG 233 DPGSRTDDSCGTSYNKGNFGY
AS68170 72 GYTYRSNCMG 153 TIYTGGGRNLYYADSVKG 234 ASDVAVGVNSCGGRTAGFDA
AS63964 73 GYTYSYNNMG 154 AISGGRFTAYADSVKG 235 EVVDPTWGSRDQRRYKY
AS64116 74 GYIYSCVG 155 GISTGGGGTVYADSVKG 236 DRWNSFANCGAWGRYTY
AS68270 75 GYPSSTYYMLSMA 156 AITSGTGSTSYADSVKD 237 ASGWIVPSRSLTANLYRY
AS68320 76 GYTYNTNYMG 157 AIYRHSGNTAYADSVKG 238 GRAGPWALMRPTEFGY
AS68351 77 GDTFRAYYMN 158 GISASGGRTSYADSVKG 239 GAVRLSTSSVRDSS
AS75378 78 GNTRSTTYMG 159 IVYTGGRDTYYAASVKG 240 RSYEYTY
AS75383 79 GYTFSSYCLG 160 TFNNRGVANYHDSVKG 241 DRRYGRQWYQPCEWNT
AS75751 80 GYFYNTYYFMG 161 AIDTDGRTSYADSVKG 242 GFGYMNVIQALNGMRQNPDY
AS76422 81 GYTFAGNCLG 162 TYNNFGVANYADSVKG 243 DRRDGRRWSQPCEWNT
表2. 抗DLL3人類scFv CDR序列
Ab ID CDR1序列 ID CDR2序列 ID CDR3序列
AS56704 495 498 VL：RASQSVSSAVA VH：GFNISSSYMH 496 499 VL：SASSLYS VH：YIYPSYGYTSYADSVKG 497 500 VL：QQASWSPIT VH：GGYYYHGMDY
AS56788 501 504 VL：RASQSVSSAVA VH：GFNISSYSMH 502 505 VL：SASSLYS VH：YISSYYGYTYYADSVKG 503 506 VL：QQHYAPSLIT VH：YSYYYGMDY
表3中列出抗DLL3 sdAb胺基酸序列。sdAb之CDR加下劃線。編碼抗DLL3 sdAb之核酸序列示於SEQ ID NO: 368-448中。表3. 抗DLL3 駱駝sdAb胺基酸序列
SEQ ID 駱駝 sdAb 胺基酸序列
274 AS63930 EVQLAESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTYSGNYMAWFRQAPGNEREGVAVVYNIDGGGRFTTYADSVKGRFTISRGNDKNTVYLQMNSLKPEDSGMYYCAAEVADPTWGSRDQRRYKYWGQGTQVTVSS
275 AS63932 QVQLEESGGGSVQAGGSLRLSCVASGYTYGSTFMGWFRQNPGKEREGVAVIYTGGGSTWYASSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAARYGSGNVNYWGQGTQVTVSS
276 AS63951 QVHLMESGGGSVQAGGSLRLACETSRDIYGNNCMAWFRQAPGKEREGVASIYPAGGRPYYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMDSLKPEDTAMYYCAARSFSIAVCATRSGITRSNFAYWGQGTQVTVSS
277 AS63984 QVKLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTYSSNFMGWFRQAPGKEREGVATIVSGGGTTYYADSVRGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAAGGPVTNAPRWYPLRPPGYNYWGQGTQVTVSS
278 AS63987 QVRLVESGGGSVQAGGSLRLSCEATGYRNCMAWFRQAPGKEREGVAVIYTPSGITDYASSVKGRFTISQNNARNTQYLQMNSLKPEDTAMYYCAADRPFVCNIANMRRSSNWGRGTQVTVSS
279 AS63997 QVRLVESGGGSVQAGGSLRLSCAGSFSGYGVSTMAWFRQAPGKEREGVAAITVGSGNTYYADSVKGRFTISRDNAKRTVFLQMNSLKPEDTAMYYCAVGYLSGGSWDVPGRYNYWGQGTQVTVSS
280 AS64047 QVHLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASQYVYRWDLMGWFRQAPGKEREAVAAVYTGDGITYYADSVKGRFSISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTGMYFCAAGFVSGGRWNQSYRYKYWGQGTQVTVSS
281 AS64052 QVHLMESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTYRSNFMGWFRQAPGKEREGIATIHSGVATTYYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAAGGPPANADRWYPLRPPGYNYWGQGTQVTVSS
282 AS64062 QVRLVESGGGSVQVGGSLRLSCAASRSPYSSSRCMGWFRQAPGKEREGVAALYTGGGSTSYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAAVVPRGGSCRLDERGYYHWGQGTQVTVSS
283 AS64072 QVQLVESGGGSVQAGGFLRLSCALSGYSYYINLMAWFRQAPGKEREAVAAHGPVSGTAYYTDSVKGRFTISRDPGKNTMYLQMFSLQPEDTALYYCAAETTMGWAHERGYRYWGQGTQVTVSS
284 AS64097 QVHLMESGGGSVQAGGSLRLSCEASGYTYSRNCMGWFRQAPGKEREGVAAINTGGGSTYYADSLEGRFTISQDNAKNTMYLQMNSLKPEDTAMYYCAAGPDLGGSWCRPVERAFTYWGQGTQVTVSS
285 AS64114 QVQLQESGGGSVQAGGSLTLSCEASGNTYSTNYMGWFRQAPGKEREEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAAASRHRLRLNNPRDYDYWGQGTQVTVSS
286 AS64123 QVQLAESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTYTSNWLGWFRQAPGKEREEVAIIYTGSGSTHYRSSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAARFSEYNYWGQGTQVTVSS
287 AS64130 EVQLAESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTYRSNFMGWFRQAPAKEREGVATIDSRGTITYYADSVKGRFTISQDNEKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAAGGPRTNDDRWYPLRPPGYNYWGQGTQVTVSS
288 AS64137 QVRLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGSTYSTNFMGWFRQAPGKEREGVATLVTWVERTAYADSVKGRFTISQDRAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAAAAASTDVRLLDPGDFAYWGQGTQVTVSS
289 AS64142 QVHLMESGGGLVQTGGSLRLSCTASGFTFDRNAMRWYRQAPGKEREGVSCIDWTGANIAYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTGMYYCAADTTSGYCSGFWSTSRYSWGQGTQVTVSS
290 AS64154 QVQLKESGGGSVQAGGSLRLSCTASGYTYRYLYMGWFRQTPGKEREGVACIYTGSGSTGYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMNNLKPEDTAMYYCAASSPRWGGTCRRWSQYNYWGQGTQVTVSS
291 AS64160 EVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASVYTSSSYCMGWFRQAPGKEREGVAAMCFGGLVTHYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAADFGRDKNYLRPLLPHAYNYWGQGTQVTVSS
292 AS64228 QVQLKESGGGSIQAGGSLRLSCAASGVSYNRCSMGWYRQAPGKGRELVSRIQPGGNTYYADSVKGRFTVSQDNAKNTVSLQMNSLKPEDTAMYYCNALCWRENVNYWGQGTQVTVSS
293 AS64300 QVHLVESGGGSVQTGGSLRLSCAVSGDIYNLMSMAWFRRAPGKEREGVAYINTIIGNTYYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNNLKPEDTAMYYCAAFNYGGAWYEERSYKYWGQGTQVTVSS
294 AS64380 EVQLVESGGGSVQAGGSLTLSCEASGNTYSSNYMGWFRQAPGKEREEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTQVTVSS
295 AS64395 QVRLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGSTYSTNFMGWFRQAPGKEREGVATLVTWAERTAYADSVKGRFTISQDRAKNTVYLQMNGLKPEDTAMYYCAAAASTAVRLLDPGDFAYWGQGTQVTVSS
296 AS64443 QVHLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTDSSVYIGWFRQAPGKEREEVAIIYTGGESTHYRSSVKGRFTVSQDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAMYYCAARFPAVTYWGQGTQVTVSS
297 AS64511 QVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASRATYSTNYISWFRQAPGKEREAVATITTGDGETAYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAANLRIGGDWFDGRDFRAWGQGTQVTVSS
298 AS64536 QVKLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASRYTDNFVYMGWFRQAPGKEREGVALIYPGGGSTYYASSVKGRFTISQDNAKGTVHLQMNNLKPEDTAMYYCAAKWGLGGGGLKSDTYMYWGQGTQVTVSS
299 AS64597 QVHLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTYRVNFMGWFRQTPGKEREGVATIDSGVGTTYYADSVKGRFTISHNNAKNTIYLQMNSLKPEDTAMYYCAAGGPPTDGDRWYPLRPPGYNYWGQGTQVTVSS
300 AS64617 QVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTDRCSMAWYRQAPGKERELVSRISTSGFTNYAASVKGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLNPGDTGMYYCAIIVGRTCSLNYWGNGILVTVSS
301 AS64634 QVRLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYSFRGDFMCMGWFRQTPGKGREGVAVFYPGGGSTNYADSAKGRFTISQDNAKNTMYLQMNTLKPEDTAMYYCAARRWVSGTCYWDSDFHYWGQGTQVTVSS
302 AS69498 QVQLQESGGGSVQAGGSLRLSCEASGNTYSSNYMAWFRQAPGKEREEVAVIYTRGGHTYYIDSVRGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAASSRHRLRLSDPRDYDYWGQGTQVTVSS
303 AS69500 QVRLVESGGGSVQAGGSLRLSCAADRYTYSSACMGWFRQAPGKEREGVASIFTGTGGSTYYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAIYYCAARAFQVGYCYLRTDVYNYWGQGTQVTVSS
304 AS69527 EVQLAESGGGSVQAGGSLRLSCVASRYTFSSTCMAWFRQAPGKEREEVAAIYTDDGSTWYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAARRWACPRVGSWHEFAYWGQGTQVTVSS
305 AS68280 QVQLVESGGGSVHPGGSLRLSCAASGSTYSSNYLGWFRQAPGKGRDWVAAISTGDGATAYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKLEDSAMYYCAAARGRFIDWTKATQYDYWGQGTQVTVSS
306 AS68355 QMQLVESGGDSVQAGGSLRLSCAASGYTYSGVCMGWFRQAPGKEREGVAAIDSDGSTSYADSVKGRFTISKDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAMYYCAAAIVGGFNAYCSGGYVLDFGAWGQGTQVTVSS
307 AS69443 EVQLAESGGGSVQAGGSLRLSCSASGFTFDDSDMAWYRQAPGDGCDLVSTISSDGSTYYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMHSLKPEDTAVYYCAADFLTGFYYSDSPHPAPCSASDFGYWGQGTQVTVSS
308 AS75376 QVQLKESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTYSSHSMGWFRQAPGKEREGVAVIYTGDGSTYYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAADPNPDYMLPFRPSRRSWWGQGTQVTVSS
309 AS75387 QVHLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYPYSSPCMAWFRQAPGKEREGVLVAYTGGDIQYLTDSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAADLRLPRAGGCAYSYWGQGTQVTVSS
310 AS75695 QVRLVESGGGSVQAGGSLRLSCVASGYTVSAYCMGWFRQVLGKGRERIAFIDAGGATIYADPVKGRFTISKDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAMYYCVADRRGRVRRCEYNAWGQGTQVTVSS
311 AS76169 QVHLMESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYIYSSFCMGWFRQAPGKEREVVAYIRDNIMTSYTDSVKGRFTISKDNAKRTLYLQMNGLKPEDTGMYYCAVDRGGYANSCAVAARYDYWGRGTQVTVSS
312 AS63931 EVQLAESGGGSVQAGGSLRLSCAGSFSGYGVSTMAWFRQAPGKEREGVAAITVGSGNTYYADSVTGRFTISRDNAKRTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAAGWLSGGSWHVPGRYNYWGQGTQVTVSS
313 AS63937 QVKLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGSTISSRPMAWFRQAPGKEREGVACIHTGLGRTYYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQVNSLKPEDTAMYYCAADSRRPCMVAAGYTYWGQGTQVTVSS
314 AS63948 QVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCTASGYTYRYLYMGWFRQTPGKEREGVACIYTGSGSTGYADSVKGRFTISQDNAENTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAAASPRWGGTCRRWSEYNYWGQGTQVTVSS
315 AS63956 QVHLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGFTYSNCCMRWYRQAPGKARELVSLINSSGGTYYADSVRGRFTISKDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAMYYCAAYQAKYCSGPCAPPTDWGQGTQVTVSS
316 AS63965 QVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCVASGYSSGSCRMGWYRQAPGKERELVSKVISDGTTVYADSVKGRFTLSQGNAKNTVYLQMSSLLPEDTAMYYCNAWCREYPGGILNNGWGQGTQVTVSS
317 AS63993 QVKLVESGGGLVQAGGSLRLSCTVSGFTFDDLVMAWFRQAPGKERQLVSLVATAGNSVYADSVKGRFTLSRDNAHSTAYLQMNGLKPEDTAMYYCAARTDSEHAFKFWGQGTQVTVSS
318 AS63999 EVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTYSSNWMGWFRQAPGKEREEVAIIYTGGISTHYRSSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAARYTDYNYWGQGTQVTVSS
319 AS64006 QVHLVESGGGSVQAGGSLRLSCEVSGYTGDTTYIGWFRQAPGKEREGVALIYTSGTSEYYADSVKGRFIISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCGARSRTMMYWGQGTQVTVSS
320 AS64057 QVQLEESGGGLVQTGGSLRLSCTASGFTFDRNAMRWYRQAPGKEREGVSCISWTGANIAYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTGMYYCAADTTSGSCSGFWSTSRYYWGQGTQVTVSS
321 AS64060 QVKLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGSTYCTYRMSWFRQAPGKEREFVAVIDSGGSTSYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCKTDPTIGCPQTYRYNYWGQGTQVTVSS
322 AS64071 QVHLMESGGGSVQAGGSLRLSCVASGNTYRLNSMGWFRQAPGKEREGVAFIVMIRGTTYYGASVKGRFTISQDNAQTTVYLQMSSLKPEDTAMYYCAASTKDQFYVFNPIGYDSWGQGTQVTVSS
323 AS64093 QVHLVESGGGSVQAGGSLRLSCATSRYIYGNNCMAWFRQAPGKEREGVASIYPAGGRTYYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQIDSLKPEDTAMYYCAARSFSIGVCATQSGITWSNFAYWGQGTQVTVSS
324 AS64118 QVQLAESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTYSACRMAWYRQAPGKERELVSFINSAGSTYYADSVKGRFAISRDNAKTTVYLQMNALKAEDTAIYYCNTWDSSCRFQYWGQGTQVTVSS
325 AS64120 QVRLVESGGGSVQAGGSLRLSCETSRYIYGNNCMAWFRQAPGKEREGVASIYPAGGRPYYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMDSLKPEDTAMYYCAARSFSIADCATQSGITRSNFAYWGQGTQVTVSS
326 AS64124 QVKLVESGGGSVQTGGSLRLSCAVSTYTPSNNYMGWFRQAPGKEREGVAAIATIGGTTRYADSVKGRFTISQDGAKNTIYLQMNGLKPEDTAMYYCAAGRPYSLPLPLPLESGAYRYWGQGTQVTVSS
327 AS64135 QVKLVESGGGSVQAGGSLRLSCVASTSTYCRYYMRWYRQAPGKEREFVSAMQPDGTTSYSDSVKGRFTMSQDRANNMLYLQMNSLRPEDTAMYYCKRDPMGGSRTPCTSAWGQGTQVTVSS
328 AS64163 QVRLVESGGGSVQAGGSLRLSCAVSGYRYRWNCMAWFRQAPGKEREGVAAISTGSGSTYYAGSVKGRFTISQDNAKNMYLQMNSLKPEDTAMYYCAADPSVCPGGMWYSKEYRYWGQGTQVTVSS
329 AS64182 QVHLMESGGGSVQAGGSLRLSCTASGQTSRYLYMGWFRQTPGKEREGVACIYTGSGSTGYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQTNSLKPEDTAMYYCAASSPHWGGTCRRWSEYKYWGQGTQVTVSS
330 AS64183 QVHLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGHTYSANCMAWFRRAPGKEREWVASVYTDDDSTMYTDSVKGRFTIFQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTGMYICAADLSGGPAGCGYTHWGQGTQVTVSS
331 AS64207 EVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTYSSNFMGWFRQAPGKEREGVATIVSGGGTTYYADSVRGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAAGGPPTNGAKWYPLRPPGYNYWGQGTQVTVSS
332 AS64276 QVHLMESGGGSVQAGGSLSLSCVVSGYTGSSRCMAWFRQAPGKEREAVAQIFTGRGTTGYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLRMNSLRPEDTAIYYCAASLGPGRGACGYNYWGQGTQVTVSS
333 AS64336 QVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCTTSGRTYSSCSMGWYRQAPGKERELVSHIFSDGSRYYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCNRRTGWAPRCAVPGYWGQGTQVTVSS
334 AS64346 QVHLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTYFMGWFRQAPQKEREWVATIGTGDIFNGAAYYVDSVKGRFAISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYVCAAVQSKSSNYVLRDASTYNYWGQGTQVTVSS
335 AS64420 EVQLVESGGGSVQAEGSLRLSCAASGDTSRSVWMGWARQVPGKEREVVATISTAGGSTWYTDSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAIYYCAARSRYATYWGQGTQVTVSS
336 AS64473 QVRLVESGGGSVQAGGSLRLSCTASGYTYRYLYMAWFRQTPGKEREGVACIYTGSGTTGYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLNAEDTAMYYCAASSPQWGGTCRRWSEYNYWGQGTQVTVSS
337 AS64475 QVQLQESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTWSRNWMGWFRQAPGKEREGFATITISGGSTWYADSVKGRFTISLDNAGNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAARDTARTYWGQGTQVTVSS
338 AS64513 EVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCVASDYPYIDNCMGWFRQGPGKEREGVAAACTGGGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTDVYYCATGYYSGSGPGYLLPWRYNYWGQGTQVTVSS
339 AS64562 EVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTARRDFMAWFRQVPGKEREGVAVIHTGGDTTYYADSVKGRFTISRDNAQNIMNLQMNSLKPEDTAMYYCAAGFRPRGGGYTGDVLAQAAAYNYWGQGTQVTVSS
340 AS64583 EVQLAESGGGLVQAGGSLRLSCTASGFTIAVYTMGWFRQAPGKEREGISCTSWAGGRTYTADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAMYYCAAKAHPDCSGDWSPSGYEYWGQGTQVTVSS
341 AS64594 QVHLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTYNSNYMGWFRQAPGKEREGVALIYTGGGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCSVRTQTRNYWGQGTQVTVSS
342 AS64605 QVKLVESGGGSVQAGGSLRLSCAVSRYPYSSICMGWFRQAPGKESEGVARIYTGTGSTWYTDSVKGRFTIARDNAQNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAARSNSYSYSSCDYGPLTRGGYNFWGQGTQVTVSS
343 AS64606 EVQLAESGGGSVQAGGSLRLSCAVSGYTSRSNYMGWFRQAPGKEREGVALIYTRGGSTYYASSVKGRFTISQDSAKKTYLQMNSVKPEDTAMYYCALRLDEKMYWGQGTQVTVSS
344 AS68121 EVQLAESGGGSVQAGGSLRLSCDASGYTYSRNCMGWFRQAPGKEREGVAAFYTDYIRFGRTYYADSVKGRFTIFQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAADPGSRTDDSCGTSYNKGNFGYWGQGTQVTVSS
345 AS68170 QVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCTASGYTYRSNCMGWFRQAPGKEREGVATIYTGGGRNLYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDSARYYCAAASDVAVGVNSCGGRTAGFDAWGQGTQVTVSS
346 AS63964 QVRLVESGGGSVQAGGSLRLSCSASGYTYSYNNMGWFRQAPGNEREGVAAISGGRFTAYADSVKGRFTISRDNAENTLYLQMNNLKPEDTGMYYCAAEVVDPTWGSRDQRRYKYWGQGTQVTVSS
347 AS64116 QVKLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYIYSCVGWFRQAPGKEREGVAGISTGGGGTVYADSVKGQFTISRDNAKNTVYLQMDSLKPEDTAMYYCAADRWNSFANCGAWGRYTYWGQGTQVTVSS
348 AS68270 QVQLAESGGGSVQAGGSLRLSCVASGYPSSTYYMLSMAWFRQAPGKEREGVAAITSGTGSTSYADSVKDRFTISKDYANNTLYLHINNLKPEDTAMYYCAAASGWIVPSRSLTANLYRYWGQGTQVTVSS
349 AS68320 QVHLVESGGDSVQAGGSLRLSCAASGYTYNTNYMGWFRQAPGKEREGVAAIYRHSGNTAYADSVKGRFTISQDYAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAAGRAGPWALMRPTEFGYWGQGTQVTVSS
350 AS68351 QVQLEESGGGLVQPGGSLRLSCAASGDTFRAYYMNWVRQAPGKGFEWVSGISASGGRTSYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQLNSLSTEDTGMYYCVKGAVRLSTSSVRDSSWGQGTQVTVSS
351 AS75378 QVQLEESGGGSVQAGGSLRLSCVVSGNTRSTTYMGWFRQAPGKEREGVAIVYTGGRDTYYAASVKGRFTISQDNAKTTIYLQMNSLEPEDTAMYYCAARSYEYTYWGRGTQVTVSS
352 AS75383 EVQLAESGGGSVQAGGSLRLSCVASGYTFSSYCLGWFRQAPGKQRQGVATFNNRGVANYHDSVKGRFTASVDNAKNTLLLQMNSLEPDDTAMYYCAADRRYGRQWYQPCEWNTWGQGTQVTVSS
353 AS75751 QVRLVESGGGSVQAGGSLRLSCVASGYFYNTYYFMGWFRQAPGKEREGVAAIDTDGRTSYADSVKGRFTISKDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAMYYCAAGFGYMNVIQALNGMRQNPDYWGQGTQVTVSS
354 AS76422 QVKLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTFAGNCLGWFRQAPGKGREGVVTYNNFGVANYADSVKGRFTVSQDNAKNTLLLQMNSLEPEDTAMYYCAADRRDGRRWSQPCEWNTWGQGTQVTVSS
表4中列出抗DLL3人類scFv之VH及VL結構域的胺基酸序列。編碼抗DLL3人類scFv之VH或VL結構域的核酸序列示於SEQ ID NO: 511-514中。表4. 抗DLL3人類scFv胺基酸序列
scFv SEQ ID 胺基酸序列
AS56704 507 508 VL：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASWSPITFGQGTKVEIK VH：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNISSSYMHWVRQAPGKGLEWVAYIYPSYGYTSYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGYYYHGMDYWGQGTLVTVSS
AS56788 509 510 VL：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYAPSLITFGQGTKVEIK VH：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNISSYSMHWVRQAPGKGLEWVAYISSYYGYTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYSYYYGMDYWGQGTLVTVSS
實例 3. 單特異性駱駝 CAR 之產生
以上表3中提供抗DLL3駱駝sdAb片段之胺基酸序列，且在SEQ ID NO: 368-448中提供抗DLL3駱駝sdAb片段之核酸序列。表3之sdAb片段及另外的序列用於產生CAR構築體(SEQ ID NO: 476-484)。CAR3 scFv (SEQ ID NO: 473)為一種人類抗DLL3 scFv，亦用於產生作為參考之CAR構築體(CAR3)。全長CAR自N末端至C末端含有：CD8α信號肽(SEQ ID NO: 465)、表3中提供之DLL3結合域sdAb、CD8α鉸鏈域(SEQ ID NO: 466)、CD8α跨膜域(SEQ ID NO: 467)、CD137胞內域(SEQ ID NO: 468)或CD28胞內域(SEQ ID NO: 469)及CD3ζ胞內域(SEQ ID NO: 470)。圖1中示出CAR構築體之示意圖。接著將編碼CAR片段之核酸選殖至慢病毒載體中以在單個編碼框中建立全長CAR構築體，使用人EF1α啟動子進行表現。所得CAR主鏈載體命名為「PLLV-hEF1α-DLL3」。實例 4. 駱駝抗 DLL3 CAR-T 細胞之產生 慢病毒之製備
將包括pCMV-△R-8.47及pMD2.G之慢病毒包裝質體混合物(Addgene，目錄號12259)與PLLV-hEF1α-DLL3載體以預先優化比率(1:1:1:2)在聚乙烯亞胺存在下預先混合，接著添加至HEK293細胞中。在培育隔夜後收集上清液。含病毒之上清液經0.45 μm PES過濾器過濾，且進行超離心以濃縮慢病毒。將病毒糰粒用預先冷卻之DPBS沖洗。將病毒適當等分，然後立即儲存在-80℃下。藉由用流式細胞術測定量測轉導至supT1細胞株之效率來確定病毒效價。T 淋巴細胞之收集及轉導
藉由單採血液成分術自健康供體收集白細胞。使用Ficoll-Paque™ PLUS培養基，根據製造商方案，分離外周血單核細胞(PBMC)。使用Pan T細胞分離套組(Miltenyi，目錄號130-096-535)，根據製造商方案，自PBMC純化人類T細胞。經純化之T細胞隨後用人T細胞活化/擴增套組(Miltenyi，目錄號130-091-441)，根據製造商方案預先活化48小時，其中抗CD3/CD28 MACSiBead顆粒以1:2之珠粒與細胞比率添加。在7 μg/mL聚凝胺存在下將預先活化之T細胞用慢病毒原液轉導。接著轉導細胞轉移至細胞培育箱中，以在合適條件下表現轉殖基因。實例 5. 駱駝抗 DLL3 CAR-T 細胞之活體外活性的評估 活體外細胞毒性分析
在轉導後第6天，收穫轉導T細胞，且與表現DLL3之腫瘤細胞株SHP-77以2:1及5:1之效應細胞(CAR-T)與靶細胞比率共同培育20小時。在所有分析中CAR3 CAR-T細胞用作參考以比較分析變化，及/或充當對照。未轉導T細胞(UnT)用作陰性對照。
藉由乳酸去氫酶(LDH)分析來測定轉導T細胞之細胞毒性。結果表明CAR3 CAR-T及一些抗DLL3 CAR-T在活體外展現強烈的針對SHP-77細胞之抗腫瘤活性，而UnT無靶細胞殺死作用(圖2)。IFN-γ 及 TNF-α 釋放之偵測
另外，自活體外細胞毒性分析收集上清液，以評定CAR誘發之細胞介素釋放，例如干擾素γ (IFN-γ)及TNF-α釋放。如圖3A及圖3B所示，CAR3 CAR-T及一些抗DLL3 CAR-T經SHP-77刺激，產生IFN-γ及TNF-α，而UnT幾乎不產生IFN-γ及TNF-α。偵測IFN-γ及TNF-α釋放之方案可涉及CISBIO之人類TNF-α套組及IFN-γ套組。藉由長期刺激分析確定 CAR-T 擴增
在第0天，將1×105個SHP-77細胞塗鋪在24孔盤中以建立單層。在第1天，計數轉導T細胞且在新鮮培養基中在缺乏細胞介素下將2×105個活CAR+T細胞塗鋪在SHP-77細胞上面。在第3天，將新的1×105個SHP-77細胞單層塗鋪在CAR-T細胞上面。在第4天，計數每個孔之活CAR-T細胞。在同一天，將來自擴增孔之2×105個CAR+T細胞(具有至少這個量的細胞)再塗鋪以建立新的單層，如第1天。重複該過程以提供3-4輪刺激。每次刺激後之擴增倍數計算為[第4天之活CAR+T細胞]/2×105，每次刺激第1天塗鋪之CAR T細胞的量。為針對每次新刺激下丟棄之細胞歸一化，藉由[(擴增倍數)×(擴增倍數+1)…]確定累積擴增倍數。
在3輪刺激後，計算不同CAR-T構築體之擴增倍數。如圖4所示，在SHP-77腫瘤細胞之3輪刺激下，大部分CAR-T構築體擴增超過CAR3 CAR-T。實例 6. 藉由 CAR-T 細胞介導之腫瘤生長抑制對駱駝 CAR 進行活體內功效評估
在SHP-77腫瘤模型中評估駱駝CAR之抗腫瘤活性。將SHP-77細胞皮下植入NOD/SCID小鼠中且隨機化成7組(每組4隻小鼠，第0天)。第1組：媒劑(僅僅PBS)；第2組：UnT (陰性對照)；第3組：CAR3；第4組：CAS64380；第5組：CAS64511；第6組：CAS63931；第7組：CAS63997。當腫瘤可觸知(100 mm3)時開始用CAR-T細胞、UnT細胞或媒劑(僅僅PBS)治療，且當腫瘤體積達約3000 mm3時對小鼠施以安樂死。每週量測腫瘤體積2次。靜脈內投與CAR-T細胞，各小鼠1×106個CAR陽性T細胞。在腫瘤細胞植入後監測小鼠及腫瘤約21天。
如圖5所示，所有選擇之駱駝CAR證明在此動物腫瘤模型中之抗腫瘤活性。實例 7. 駱駝 sdAb 之人類化
使用CDR移植技術(參見例如美國專利第5,225,539號)將所選擇之駱駝sdAbs (SEQ ID NO: 279、294、297、312)人類化。簡言之，將駱駝sdAb序列與在結構生物信息學合作研究組織(Research Collaboratory for Structural Bioinformatics，RCSB)蛋白質資料庫中可得之序列相比。每種駱駝sdAb之同源性模型係基於最接近之VH結構產生。自模型結構鑑別在CDR附近或埋在分子內(即側鏈溶劑可及表面積小於15%)之殘基。
隨後，針對NCBI人類生殖系V基因資料庫，將各駱駝sdAb序列BLAST化，以鑑別與sdAb具有最高一致性之人類VH生殖系序列(亦即人接受體)(參見例如Foote及Winter,J. Mol. Biol.224:487-499 (1992)；Morea V.等人,Methods20:267-279 (2000)；Chothia C.等人,J. Mol. Biol.186:651-663 (1985))。在CDR移植方法中，人類接受體之CDR經駱駝sdAb之CDR置換，產生直移植序列。直移植抗體通常喪失結合活性，需要藉由用非人類殘基置換對於抗體活性來說關鍵之構架殘基來恢復。在CDR附近或埋在分子內之胺基酸殘基通常對於抗體之活性及結構而言係重要的，因此應該為潛在回復突變位點。使用此方法，設計出一系列人類化變異體。表5中示出該等人類化變異體之CDR胺基酸序列。表6中示出人類化變異體之全長胺基酸序列。CDR加下劃線。表5. 抗DLL3人類化sdAb CDR序列
Ab ID CDR1序列 ID CDR2序列 ID CDR3序列
AS64380VH4 244 GNTYSSNYMG 254 VIYTRGGHTYYVDSVRG 264 SSRHRLGLNNPRDYDY
AS64380VH5 245 GNTYSSNYMG 255 VIYTRGGHTYYVDSVRG 265 SSRHRLGLNNPRDYDY
AS64380VH6 246 GNTYSSNYMG 256 VIYTRGGHTYYVDSVRG 266 SSRHRLGLNNPRDYDY
AS64380VH7 247 GNTYSSNYMG 257 VIYTRGGHTYYVDSVRG 267 SSRHRLGLNNPRDYDY
AS64511VH4 248 RATYSTNYIS 258 TITTGDGETAYADSVKG 268 NLRIGGDWFDGRDFRA
AS64511VH5 249 RATYSTNYIS 259 TITTGDGETAYADSVKG 269 NLRIGGDWFDGRDFRA
AS64511VH6 250 RATYSTNYIS 260 TITTGDGETAYADSVKG 270 NLRIGGDWFDGRDFRA
AS63997VH4 251 FSGYGVSTMA 261 AITVGSGNTYYADSVKG 271 GYLSGGSWDVPGRYNY
AS63997VH5 252 FSGYGVSTMA 262 AITVGSGNTYYADSVKG 272 GYLSGGSWDVPGRYNY
AS63997VH6 253 FSGYGVSTMA 263 AITVGSGNTYYADSVKG 273 GYLSGGSWDVPGRYNY
表6. 抗DLL3人類化sdAb胺基酸序列
SEQ ID 人類化sdAb  胺基酸序列
355 AS64380VH4 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGNTYSSNYMGWFRQAPGKGLEEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTLVTVSS
356 AS64380VH5 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGNTYSSNYMGWFRQAPGKGLEEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTLVTVSS
357 AS64380VH6 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGNTYSSNYMGWFRQAPGKGLEEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAMYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTLVTVSS
358 AS64380VH7 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGNTYSSNYMGWFRQAPGKGREEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAMYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTLVTVSS
359 AS64511VH4 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASRATYSTNYISWFRQAPGKGLEAVATITTGDGETAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAANLRIGGDWFDGRDFRAWGQGTLVTVSS
360 AS64511VH5 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASRATYSTNYISWFRQAPGKGLEAVATITTGDGETAYADSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAMYYCAANLRIGGDWFDGRDFRAWGQGTLVTVSS
361 AS64511VH6 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASRATYSTNYISWFRQAPGKGREAVATITTGDGETAYADSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAMYYCAANLRIGGDWFDGRDFRAWGQGTLVTVSS
362 AS63931VH4 QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAGSFSGYGVSTMAWFRQAPGKGLEGVAAITVGSGNTYYADSVTGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAGWLSGGSWHVPGRYNYWGQGTLVTVSS
363 AS63931VH5 QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAGSFSGYGVSTMAWFRQAPGKGLEGVAAITVGSGNTYYADSVTGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAMYYCAAGWLSGGSWHVPGRYNYWGQGTLVTVSS
364 AS63931VH6 QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAGSFSGYGVSTMAWFRQAPGKGREGVAAITVGSGNTYYADSVTGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAMYYCAAGWLSGGSWHVPGRYNYWGQGTLVTVSS
365 AS63997VH4 QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASFSGYGVSTMAWFRQAPGKGLEGVAAITVGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVGYLSGGSWDVPGRYNYWGQGTLVTVSS
366 AS63997VH5 QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASFSGYGVSTMAWFRQAPGKGLEGVAAITVGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAMYYCAVGYLSGGSWDVPGRYNYWGQGTLVTVSS
367 AS63997VH6 QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASFSGYGVSTMAWFRQAPGKGREGVAAITVGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAMYYCAVGYLSGGSWDVPGRYNYWGQGTLVTVSS
將駱駝及人類化sdAb序列與人類IgG1鉸鏈及Fc融合，產生嵌合及人類化HCAb序列。合成編碼此等HCAb之DNA且插入pTT5載體中。使用HCAb表現質體轉染HEK293細胞。分泌至培養基中之粗HCAb蛋白如下進行SPR親和力量測：簡言之，使用EDC活化之胺偶合化學，將捕捉抗體抗人類Fc pAb (GE healthcare)固定在Biacore™ CM5晶片上，至大約6,000 RU。所關注HCAb經300秒捕捉至感測器晶片表面上。人類DLL3 (AdipoGen，AG-40B-0151)以一系列遞增濃度流過感測器晶片表面。監測締合及解離階段。使用10 mM甘胺酸-HCl之pH 2.0緩衝液在各循環之間移除所捕捉之抗體及抗原，以確保抗原之結合表面新鮮。使用1:1結合模型，總體上擬合所得感測圖，以計算締合及解離速率(分別ka及kd)以及親和力(KD)。
量測一些人類化sdAb之結合親和力且比較原始駱駝sdAb之結合親和力(表7)。大部分人類化抗體保持駱駝sdAb之結合親和力。本實例證明使用標準方案之sdAb人類化係成功的。大部分sdAb在人類化後保持其結合親和力。
當用與上述相同之程序分析時scFv具有可比KD值(表7中之AS56788及AS56704)。表7. 駱駝及人類化抗體以及scFv之單價結合親和力
配位體 ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M)
AS64380 6.7E+05 5.6E-03 8.4E-09
AS64380VH4 3.1E+05 4.4E-03 1.4E-08
AS64380VH5 5.9E+04 1.5E-03 2.6E-08
AS64380VH6 8.8E+04 1.5E-03 1.7E-08
AS64380VH7 3.2E+04 1.5E-03 4.5E-08
AS64511 1.3E+05 4.0E-04 3.0E-09
AS64511VH4 1.6E+05 9.4E-04 6.0E-09
AS64511VH5 1.6E+05 4.7E-04 2.9E-09
AS64511VH6 1.4E+05 4.8E-04 3.4E-09
AS63997 3.9E+05 6.4E-03 1.6E-08
AS63997VH4 8.4E+05 1.8E-02 2.1E-08
AS63997VH5 5.8E+05 2.1E-02 3.7E-08
AS63997VH6 1.8E+06 6.0E-02 3.3E-08
AS64617 1.9E+05 3.8E-03 2.0E-08
AS69443 9.4E+04 9.0E-05 9.6E-10
AS63931 3.6E+06 1.7E-01 4.7E-08
AS64047 1.4E+05 9.6E-04 6.7E-09
AS64052 1.0E+05 4.1E-04 4.0E-09
AS64062 1.0E+05 7.1E-04 6.9E-09
AS56788 1.3E+05 3.0E-03 2.3E-08
AS56704 6.60E+04 5.59E-04 5.59E-09
實例 8. 單特異性人類化 CAR 之產生
以上表6中列出抗DLL3人類化sdAb之胺基酸序列，且在SEQ ID NO: 449-461中列出抗DLL3人類化sdAb之核酸序列。表6中之人類化sdAb及另外的序列用於產生完全CAR構築體(SEQ ID NO: 485-494)。全長CAR自N末端至C末端含有：CD8α信號肽(SEQ ID NO: 465)、表6中提供之DLL3結合域(人類化sdAb)、CD8α鉸鏈域(SEQ ID NO: 466)、CD8α跨膜域(SEQ ID NO: 467)、CD137胞內域(SEQ ID NO: 468)或CD28胞內域(SEQ ID NO: 469)及CD3ζ胞內域(SEQ ID NO: 470)。圖1中示出CAR構築體之示意圖。接著將編碼CAR片段之核酸選殖至慢病毒載體中以在單個編碼框中建立全長CAR構築體，使用人EF1α啟動子進行表現。所得CAR主鏈載體命名為「PLLV-hEF1α-DLL3」。實例 9. 人類化抗 DLL3 CAR-T 細胞之活體外活性的評估
類似於實例4中所述之程序，提供CAR-T細胞介導之腫瘤細胞殺死、細胞介素釋放及長期刺激分析評估人類化CAR的效力。 活體外細胞毒性分析
結果示於圖6A-6D中。人類化CAR-T展示在活體外優良之抗腫瘤功效。IFN-γ 釋放分析
另外，自活體外細胞毒性分析收集上清液，以評定CAR誘發之細胞介素釋放，例如干擾素γ (IFN-γ)及腫瘤壞死因子α (TNF-α)釋放。如圖7A及圖7B所示，CAR3 CAR-T及一些抗DLL3 CAR-T經SHP-77刺激，產生IFN-γ及TNF-α，而UnT幾乎不產生IFN-γ或TNF-α。通過長期刺激分析確定 CART 擴增
在第0天，將1×105個SHP-77細胞塗鋪在24孔盤中以建立單層。在第1天，計數CAR-T細胞且在新鮮培養基中在缺乏細胞介素下將2×105個活CAR+T細胞塗鋪在SHP-77細胞上面。在第3天，將新的1×105個NCI-H82細胞單層塗鋪在CAR-T細胞上面。在第4天，計數每個孔之活CAR-T細胞。在同一天，將來自擴增孔之2×105個CAR+T細胞(具有至少這個量的細胞)再塗鋪以建立新的單層，如第1天。重複所述過程以提供3-4輪刺激。每次刺激後之擴增倍數計算為[第4天的活CAR+T細胞]/2×105，每次刺激第1天塗鋪之CAR T細胞的量。為針對每次新刺激下丟棄之細胞歸一化，藉由[(擴增倍數)×(擴增倍數+1)…]確定累積擴增倍數。
在3輪刺激後，計算不同CAR-T構築體之擴增倍數。如圖8所示，在SHP-77腫瘤細胞之3輪刺激下，大部分CAR-T構築體擴增超過CAR3 CAR-T。實例 10. 藉由 CAR-T 細胞介導之腫瘤生長抑制對人類化 CAR 進行活體內功效評估
在SHP-77腫瘤模型中評估人類化CAR之抗腫瘤活性。SHP-77細胞皮下植入物NOD/SCID小鼠中且隨機化成9組(每組4隻小鼠，第0天)：媒劑(僅僅PBS)、UnT (陰性對照)、CAR3、CAS64380、CAS64380VH5、CAS64511、CAS64511VH5、CAS63997及CAS63997VH5。當腫瘤可觸知(100 mm3)時開始用CAR-T細胞、UnT細胞或媒劑(僅僅PBS)治療，且當腫瘤體積達約3000 mm3時對小鼠施以安樂死。每週量測腫瘤體積2次。靜脈內投與CAR-T細胞，各小鼠0.2×106個CAR陽性T細胞。在腫瘤細胞植入後監測小鼠及腫瘤約21天。
如圖9A-9J所示，在這個動物模型中，與基準CAR3相比，CAS64380VH5及CAS63997VH5展示優良抗腫瘤活性。
未觀察到此等人類化CAR之抗腫瘤活性與其在活體外之細胞殺死效力相關。
以下列出本文中提到之一些胺基酸序列及核酸序列。駱駝 sdAb 核酸序列SEQ ID NO: 368 (駱駝sdAb AS63930核酸序列)GAGGTGCAACTGGCGGAGTCTGGGGGAGGATCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACCTACAGTGGCAACTATATGGCCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAACGAGCGCGAGGGGGTCGCAGTTGTTTATAATATTGACGGTGGCGGTCGTTTCACTACCTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCGAGGCAACGACAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGATAGTGGCATGTACTACTGTGCGGCAGAGGTAGCTGATCCGACCTGGGGGTCGCGTGACCAAAGACGATATAAGTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 369 (駱駝sdAb AS63932核酸序列)CAGGTGCAATTGGAGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTGGATACACCTACGGTAGCACCTTCATGGGCTGGTTCCGCCAGAATCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAGTTATTTATACTGGTGGTGGTAGTACATGGTATGCCAGCTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAGGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCGCGTTACGGGTCGGGAAACGTTAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 370 (駱駝sdAb AS63951核酸序列)CAGGTGCACCTGATGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCGCCTGTGAAACCTCTAGAGACATCTACGGTAACAACTGCATGGCCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGAGTCGCGTCTATTTATCCTGCTGGTGGTCGCCCGTACTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGGACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGCCATGTACTACTGCGCGGCACGCTCTTTTTCGATAGCAGTTTGCGCGACGCGCTCTGGTATTACCAGGTCTAATTTTGCTTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 371 (駱駝sdAb AS63984核酸序列)CAGGTGAAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACCTACAGTAGCAACTTCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAACTATTGTTTCTGGTGGTGGTACCACATACTATGCCGACTCCGTGAGGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGGGGGCCCCGTTACGAACGCACCTAGATGGTACCCCCTCCGACCTCCTGGTTATAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 372 (駱駝sdAb AS63987核酸序列)CAGGTGAGGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGAAGCCACTGGATATAGAAACTGCATGGCCTGGTTCCGCCAAGCTCCAGGGAAGGAACGCGAGGGGGTCGCAGTTATTTATACTCCTAGTGGTATCACGGACTATGCAAGCTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAAACAACGCCAGGAACACGCAGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGATCGACCCTTTGTTTGTAATATAGCGAATATGAGAAGGTCCTCCAACTGGGGCCGGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 373 (駱駝sdAb AS63997核酸序列)CAGGTGAGGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGGCTCTTTCTCTGGATACGGCGTCAGTACCATGGCCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAGCTATTACAGTTGGTAGTGGAAACACATACTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCGAGACAACGCCAAGAGGACGGTGTTTTTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGTCGGATACTTGTCGGGTGGTAGTTGGGACGTTCCCGGAAGGTATAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 374 (駱駝sdAb AS64047核酸序列)CAGGTGCACCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTCAGTACGTTTACAGGTGGGACCTCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGCGGTCGCTGCTGTTTATACTGGTGATGGTATTACATACTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCAGCATTTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGGCATGTACTTCTGTGCGGCAGGCTTCGTCTCTGGTGGTAGATGGAACCAGTCATATCGTTATAAATACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 375 (駱駝sdAb AS64052核酸序列)CAGGTGCACCTGATGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACCTACCGCAGCAACTTCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGATCGCAACTATTCATTCTGGTGTGGCTACCACATACTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGGGGGCCCCCCTGCGAACGCTGATAGATGGTACCCCCTCCGACCTCCTGGTTATAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 376 (駱駝sdAb AS64062核酸序列)CAGGTGAGGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGTTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTAGATCTCCCTACAGTAGCAGTAGGTGCATGGGGTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAGCTCTTTATACTGGTGGTGGTAGCACATCCTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAATACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGTTGTCCCTAGGGGTGGTAGCTGCCGTCTTGATGAAAGAGGGTATTACCACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 377 (駱駝sdAb AS64072核酸序列)CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCCGGAGGGTTTCTGAGACTCTCCTGTGCACTCTCTGGATACAGCTACTATATTAACTTGATGGCGTGGTTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGCAGTCGCAGCTCATGGTCCTGTGAGTGGGACAGCATACTATACCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCGAGACCCCGGCAAGAACACGATGTATCTTCAAATGTTTAGCCTGCAACCGGAGGACACTGCCCTCTACTACTGTGCGGCGGAAACGACTATGGGTTGGGCCCACGAACGCGGGTATAGGTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 378 (駱駝sdAb AS64097核酸序列)CAGGTGCACCTGATGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGAAGCCTCTGGATACACCTACAGTCGCAACTGCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAGCTATTAACACTGGTGGTGGTAGCACATATTATGCCGACTCCCTTGAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAATACTATGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGGTCCCGATCTCGGTGGTAGCTGGTGTCGGCCCGTTGAGCGGGCTTTTACGTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 379 (駱駝sdAb AS64114核酸序列)CAGGTGCAACTGCAGGAGTCTGGGGGGGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGACACTCTCCTGTGAAGCCTCTGGAAACACCTACAGTACTAATTACATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAAGAGGTCGCGGTTATTTACACTCGTGGTGGTCACACATACTATGTCGACTCCGTGAGGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGCTTCACGACATAGACTCCGTTTAAATAACCCACGGGACTATGACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 380 (駱駝sdAb AS64123核酸序列)CAGGTGCAACTGGCGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACTTATACGAGCAACTGGCTGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGAGGTCGCAATTATTTATACTGGTAGTGGTAGTACACACTATCGCAGCTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCGCGTTTCTCAGAGTATAATTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 381 (駱駝sdAb AS64130核酸序列)GAGGTGCAACTGGCGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACCTACCGTAGCAACTTCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCGGCGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAACTATTGATTCTCGTGGTACTATCACATACTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGAGAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGGGGGCCCCCGCACGAACGATGATAGATGGTACCCCCTCCGACCTCCTGGTTATAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 382 (駱駝sdAb AS64137核酸序列)CAGGTGAGGTTAGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCTGCCTCTGGATCCACCTACAGTACAAACTTCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAACGCTGGTTACTTGGGTTGAACGCACAGCCTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACCGCGCCAAGAACACGGTGTATCTACAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGCCGCCGCTTCCACTGATGTACGTCTCCTCGACCCGGGGGACTTTGCTTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 383 (駱駝sdAb AS64142核酸序列)CAGGTGCACCTGATGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTGCAGACAGGGGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTACAGCCTCTGGATTCACTTTTGATCGTAATGCCATGCGCTGGTACCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCTCATGTATTGATTGGACGGGTGCAAATATTGCCTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGGCATGTATTACTGTGCGGCAGATACGACGTCGGGGTATTGTTCAGGCTTTTGGTCTACGAGCCGGTACTCATGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 384 (駱駝sdAb AS64154核酸序列)CAGGTGCAATTGAAGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTACAGCCTCTGGATACACCTACAGATACCTCTACATGGGCTGGTTCCGCCAGACTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCATGTATTTATACTGGTAGTGGTAGCACAGGGTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAACCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAAGTTCGCCCCGGTGGGGCGGTACCTGTCGACGCTGGTCTCAGTATAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 385 (駱駝sdAb AS64160核酸序列)GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCGGCCTCTGTATACACCAGCAGTAGCTACTGCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAGCTATGTGTTTTGGTGGTCTTGTCACACACTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAATGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGATTTCGGCAGGGATAAAAACTATTTACGACCGTTACTGCCCCATGCATATAACTACTGGGGCCAAGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 386 (駱駝sdAb AS64228核酸序列)CAGGTGCAATTGAAGGAGTCTGGGGGAGGTTCGATCCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGAGTCTCCTACAATAGGTGCAGTATGGGCTGGTACCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCGCGAGTTGGTCTCACGTATTCAGCCGGGTGGTAATACATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCGTCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACAGTATCTCTACAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGCCATGTATTACTGTAACGCACTGTGCTGGCGGGAGAATGTTAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 387 (駱駝sdAb AS64300核酸序列)CAGGTGCACCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGACTGGAGGATCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAGACATCTATAACCTCATGTCGATGGCCTGGTTCCGCCGGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCATATATTAATACTATTATTGGTAACACATACTATACTGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCGCGATAACTCCAAGAACACTTTGTATCTGCAAATGAACAACCTGAAACCTGAGGACACAGCCATGTACTACTGTGCGGCGTTCAATTACGGAGGTGCCTGGTACGAGGAACGCAGCTATAAATACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 388 (駱駝sdAb AS64380核酸序列)GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGGGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGACACTCTCCTGTGAAGCCTCTGGAAACACCTACAGTAGTAATTACATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGAGGTCGCGGTTATTTACACTCGTGGTGGTCACACATACTATGTCGACTCCGTGAGGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCGTCTTCACGACATAGACTCGGTTTAAATAACCCACGGGACTATGACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 389 (駱駝sdAb AS64395核酸序列)CAGGTGAGGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCTGCCTCTGGATCCACCTACAGTACAAACTTCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAACGCTTGTTACTTGGGCTGAACGCACAGCCTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACCGCGCCAAGAACACGGTGTATCTACAAATGAACGGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGCCGCTTCCACTGCTGTACGTCTCCTCGACCCGGGGGACTTTGCTTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 390 (駱駝sdAb AS64443核酸序列)CAGGTGCACCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATATACCGACAGTAGCGTCTACATAGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGAGGTCGCGATTATTTATACTGGTGGTGAAAGCACACACTATCGCAGCTCCGTGAAGGGCCGATTCACCGTCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGCCATGTATTACTGTGCAGCACGATTCCCAGCTGTTACCTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 391 (駱駝sdAb AS64511核酸序列)CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTAGAGCCACCTACAGTACCAACTACATAAGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGCGGTCGCAACAATTACTACTGGTGATGGTGAGACAGCGTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCGAGACAACGCCAAGAACACGGTCTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCGAACTTGCGAATCGGTGGCGACTGGTTCGACGGACGCGATTTTCGTGCCTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 392 (駱駝sdAb AS64536核酸序列)CAGGTGAAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTAGATACACCGACAATTTCGTGTACATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCACTGATTTATCCTGGTGGTGGTAGCACCTACTATGCCTCCTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGGGCACGGTGCATCTGCAAATGAACAACCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAAAATGGGGGCTGGGCGGGGGGGGCCTGAAATCAGATACGTATATGTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 393 (駱駝sdAb AS64597核酸序列)CAGGTGCACCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACCTACCGTGTCAACTTCATGGGCTGGTTCCGCCAGACTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAACTATTGATTCTGGTGTGGGTACCACATACTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCATAACAACGCCAAGAACACGATTTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGGGGGCCCCCCTACGGACGGTGATAGATGGTACCCCCTCCGACCTCCTGGTTATAACTATTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 394 (駱駝sdAb AS64617核酸序列)CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACTGATAGATGCAGCATGGCCTGGTACCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGTTGGTCTCGCGTATTAGCACGAGCGGTTTCACAAACTACGCAGCCTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAACCCCGGGGACACGGGCATGTATTACTGTGCCATAATCGTAGGACGTACTTGTAGTTTGAACTACTGGGGCAACGGCATCCTGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 395 (駱駝sdAb AS64634核酸序列)CAGGTGAGGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCCGGATACAGTTTTAGAGGCGACTTTATGTGTATGGGCTGGTTCCGCCAGACTCCAGGGAAGGGGCGCGAGGGGGTCGCAGTTTTTTATCCTGGTGGCGGCAGCACAAACTATGCCGACTCCGCGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGATGTATCTGCAAATGAACACCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCTCGACGGTGGGTCAGTGGTACCTGCTACTGGGATAGTGACTTTCATTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 396 (駱駝sdAb AS69498核酸序列)CAGATGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGAAACACCTACAGTACCAATTACATGGCGTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGAGGTCGCGGTTATTTACACTCGTGGTGGTCACACCTACTATATCGACTCCGTGAGGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATAAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCGTCTTCACGAATTAGACTCCATTGAATCGACCCACGGGACTATCACGACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 397 (駱駝sdAb AS69500核酸序列)CAGGTGAGGTTAGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCGACAGATACACCTACAGTAGCGCCTGCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCCTCTATTTTTACTGGTACTGGTGGTAGCACATACTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATATACTACTGTGCGGCAAGGGCCTTCCAGGTCGGTTACTGCTACCTGCGAACCGATGTGTATAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 398 (駱駝sdAb AS69527核酸序列)GAGGTGCAGCTGGCGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTCCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTAGATACACCTTCAGTAGCACCTGCATGGCCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGAGGTCGCAGCTATTTATACTGATGATGGTAGCACATGGTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCTATGTACTACTGTGCGGCACGTAGGTGGGCGTGCCCCAGGGTTGGTAGCTGGCATGAGTTCGCCTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 399 (駱駝sdAb AS68280核酸序列)CAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCACCCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATCCACCTACAGTTCCAACTACCTCGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGGCGCGACTGGGTTGCGGCTATTAGCACTGGTGACGGTGCCACAGCCTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCTTGAAACTTGAGGACAGTGCCATGTACTACTGTGCGGCGGCTCGCGGCAGATTTATCGATTGGACAAAGGCAACCCAGTATGACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 400 (駱駝sdAb AS68355核酸序列)CAGATGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACCTACAGCGGCGTCTGCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAGCTATTGATAGTGATGGTAGCACAAGCTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAAAGACAACGCCAAGAACACTCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGCCATTGTCGGGGGTTTTAATGCATATTGTAGTGGTGGTTATGTTCTGGACTTTGGTGCCTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 401 (駱駝sdAb AS69443核酸序列)GAGGTGCAGCTGGCGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTTCAGCCTCTGGTTTCACTTTTGATGATTCTGACATGGCCTGGTACCGCCAGGCTCCAGGGGATGGGTGCGACTTGGTCTCAACTATTAGTAGTGATGGTAGCACATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGCACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGGCAGATTTCCTCACCGGCTTTTACTATAGCGACTCCCCCCATCCGGCCCCTTGTTCTGCATCCGACTTTGGTTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 402 (駱駝sdAb AS75376核酸序列)CAGGTGCAATTGAAGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACCTACAGTAGCCACTCCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAGTTATTTATACTGGTGATGGTAGCACATACTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGATCCGAACCCCGATTATATGCTTCCGTTTCGGCCGTCCCGTAGGTCGTGGTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 403 (駱駝sdAb AS75387核酸序列)CAGGTGCACCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACCCCTACAGTAGCCCCTGCATGGCCTGGTTTCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTTTTAGTTGCTTATACTGGTGGGGACATTCAATACCTTACCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCGAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCGGATCTGCGATTACCTCGTGCCGGCGGTTGTGCGTATAGCTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 404 (駱駝sdAb AS75695核酸序列)CAGGTGAGGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTGGATACACCGTCAGTGCCTACTGTATGGGCTGGTTCCGCCAGGTTCTAGGGAAGGGGCGCGAGAGGATCGCATTTATCGATGCCGGGGGTGCTACGATTTACGCAGACCCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAAAGACAACGCCAAGAACACTCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGTTGCAGATCGCCGGGGGCGGGTACGTCGGTGCGAGTATAACGCCTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 405 (駱駝sdAb AS76169核酸序列)CAGGTGCACCTGATGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACATTTACAGTAGCTTCTGCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGTGGTCGCGTATATTCGCGATAATATTATGACAAGTTACACAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAAAGACAACGCCAAGAGAACTCTGTATCTACAAATGAACGGCCTGAAACCTGAAGATACTGGCATGTACTACTGTGCGGTAGACCGGGGGGGATACGCTAATAGTTGCGCGGTAGCGGCCCGGTATGATTACTGGGGCCGGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 406 (駱駝sdAb AS63931核酸序列)GAGGTGCAGCTGGCGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGGGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGGCTCTTTCTCTGGATACGGCGTCAGTACCATGGCCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAGCTATTACTGTTGGTAGTGGAAACACATACTATGCCGACTCCGTGACGGGCCGATTCACCATCTCCCGAGACAACGCCAAGAGGACGGTGTATTTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCCGGATGGTTGTCGGGTGGTAGTTGGCACGTTCCCGGCAGGTATAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 407 (駱駝sdAb AS63937核酸序列)CAGGTGAAGTTAGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATCCACCATCAGTAGTCGCCCGATGGCCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCGTGTATACATACTGGTCTTGGTAGAACATACTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAGTGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGACTCGCGGCGGCCGTGTATGGTAGCCGCAGGGTATACCTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 408 (駱駝sdAb AS63948核酸序列)CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTACAGCCTCTGGATACACCTATAGATACCTCTACATGGGCTGGTTCCGCCAGACTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCATGTATTTATACTGGTAGTGGTAGCACAGGGTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCGAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGCTTCGCCCCGGTGGGGTGGTACCTGTCGACGGTGGTCCGAGTATAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 409 (駱駝sdAb AS63956核酸序列)CAGGTGCACCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCCGGATTCACCTACAGTAACTGCTGCATGAGGTGGTACCGCCAGGCTCCAGGGAAGGCGCGCGAGTTGGTCTCATTAATTAATAGTAGTGGTGGCACATACTATGCAGACTCTGTGAGGGGCCGATTCACCATCTCCAAAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGCCATGTATTACTGTGCGGCTTACCAAGCCAAGTACTGTTCAGGCCCTTGCGCCCCCCCAACTGACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 410 (駱駝sdAb AS63965核酸序列)CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTGGATACAGCAGCGGTAGTTGTCGCATGGGCTGGTACCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGTTGGTTTCAAAGGTTATTAGTGATGGTACTACAGTCTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCCTCTCCCAAGGAAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAGTAGCCTGTTACCTGAGGACACGGCCATGTATTACTGTAATGCATGGTGTAGGGAGTATCCCGGGGGGATCCTGAATAACGGCTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 411 (駱駝sdAb AS63993核酸序列)CAGGTGAAGTTGGTGGAGTCTGGGGGGGGCTTGGTGCAGGCAGGGGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTACAGTTTCTGGATTCACTTTCGATGACCTCGTCATGGCCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCCAACTTGTCTCGTTGGTTGCGACTGCTGGTAATAGCGTCTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACACTCTCCAGAGACAACGCCCACAGCACGGCGTATCTGCAAATGAACGGCCTGAAACCTGAGGACACGGCCATGTATTACTGTGCGGCACGTACCGATTCTGAGCATGCGTTTAAGTTCTGGGGTCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 412 (駱駝sdAb AS63999核酸序列)GAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACTTACAGTAGCAACTGGATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGAGGTCGCAATTATTTATACTGGTGGTATTAGTACACACTATCGCAGCTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCGCGTTATACAGACTATAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 413 (駱駝sdAb AS64006核酸序列)CAGGTGCACCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGAAGTCTCTGGATACACCGGCGATACGACTTACATAGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCACTTATTTATACTAGTGGTACTAGCGAGTACTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCATCATCTCCCGAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATTTACAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGGCGCACGGAGCCGCACGATGATGTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 414 (駱駝sdAb AS64057核酸序列)CAGGTGCAATTGGAGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTGCAGACAGGGGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTACAGCCTCTGGATTCACTTTTGATCGTAATGCCATGCGCTGGTACCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCTCATGTATTAGTTGGACGGGTGCAAATATTGCCTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGGCATGTATTACTGTGCGGCAGATACGACGTCGGGGTCTTGTTCAGGCTTTTGGTCTACGAGCCGGTACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 415 (駱駝sdAb AS64060核酸序列)CAGGTGAAGTTAGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATCCACCTACTGTACCTACCGTATGAGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGTTCGTCGCAGTTATTGATAGTGGCGGTAGCACAAGCTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCGAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGCCATGTATTACTGTAAAACAGATCCAACCATCGGCTGCCCCCAGACATATAGGTATAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 416 (駱駝sdAb AS64071核酸序列)CAGGTGCACCTGATGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTGGAAACACTTACAGGCTCAACTCTATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCATTTATTGTTATGATTAGAGGTACCACATACTATGGCGCCTCCGTAAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCCAGACCACGGTGTATCTGCAAATGAGCAGCCTGAAACCGGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCATCCACTAAGGACCAGTTTTATGTATTTAATCCTATTGGGTATGACTCTTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 417 (駱駝sdAb AS64093核酸序列)CAGGTGCACCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAACCTCTAGATACATCTACGGTAACAACTGCATGGCCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGAGTCGCGTCTATTTATCCTGCTGGTGGTCGCACGTACTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATTGACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGCCATGTACTACTGCGCGGCACGCTCTTTTTCGATAGGAGTTTGCGCGACGCAGTCTGGTATTACCTGGTCTAATTTTGCTTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 418 (駱駝sdAb AS64118核酸序列)CAGGTGCAACTGGCGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACCTACAGTGCCTGTAGAATGGCCTGGTACCGCCAGGCTCCCGGGAAGGAGCGCGAGTTGGTTTCATTTATTAATAGTGCTGGTAGCACATACTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCGCCATCTCCCGAGACAACGCCAAGACAACGGTGTATCTACAAATGAACGCCCTGAAAGCTGAGGACACGGCCATATATTACTGTAACACATGGGATAGTAGCTGCCGCTTTCAGTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 419 (駱駝sdAb AS64120核酸序列)CAGGTGAGGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGAAACCTCTAGATACATCTACGGTAACAACTGCATGGCCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGAGTCGCGTCTATTTATCCTGCTGGTGGTCGCCCGTACTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAAATGGACAGCCCTGAAAACCTGAGGACACGGCCCATGTACTACTGCGCGGGCACGCTTCTTTTTTCGATAGCAAATTGCGCCAACGCAATCCTGGTATTAACCAGGGCCAAATTTTGGCTTACGGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCCTTCTCCTCASEQ ID NO: 420 (駱駝sdAb AS64124核酸序列)CAGGTGAAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGACTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTACGTACACCCCCAGTAACAACTACATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGCGTCGCGGCTATCGCTACTATTGGTGGTACCACACGTTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACGGCGCCAAGAACACGATATATCTGCAAATGAACGGCCTGAAACCGGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCCGGGCGGCCATACTCATTACCCTTACCCTTACCCTTGGAAAGCGGTGCGTATCGCTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 421 (駱駝sdAb AS64135核酸序列)CAGGTGAAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTACATCAACCTACTGTAGGTACTACATGCGCTGGTACCGGCAGGCTCCAGGGAAAGAGCGCGAGTTCGTCTCAGCGATGCAACCCGATGGTACGACAAGCTACTCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATGTCCCAAGACAGAGCCAACAATATGTTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGGCCTGAGGACACGGCCATGTATTACTGTAAAAGAGATCCAATGGGGGGTTCAAGGACCCCGTGCACCTCCGCCTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 422 (駱駝sdAb AS64163核酸序列)CAGGTGAGGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGATACAGATATAGATGGAACTGCATGGCCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAGCTATTTCTACTGGAAGCGGAAGCACATACTATGCCGGCTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACATGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGATCCTTCGGTTTGCCCCGGTGGTATGTGGTACTCCAAAGAGTATAGGTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 423 (駱駝sdAb AS64182核酸序列)CAGGTGCACCTGATGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGCACAGCCTCTGGACAGACCTCCAGATACCTCTACATGGGCTGGTTTCGCCAGACTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCATGTATTTATACTGGTAGTGGTAGCACAGGGTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAACGAATAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAAGTTCGCCCCATTGGGGCGGTACCTGTCGACGCTGGTCCGAGTATAAGTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 424 (駱駝sdAb AS64183核酸序列)CAGGTGCACCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGACACACCTACAGTGCCAACTGCATGGCCTGGTTCCGCCGGGCCCCAGGGAAGGAGCGCGAGTGGGTCGCGTCGGTTTATACTGATGATGATAGCACAATGTATACCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTTCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGGCATGTACATCTGTGCGGCAGATTTAAGCGGAGGACCGGCCGGTTGTGGGTATACCCACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 425 (駱駝sdAb AS64207核酸序列)GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACCTACAGTAGCAACTTCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAACTATTGTTTCTGGTGGTGGTACCACATACTATGCCGACTCCGTGAGGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGGGGGCCCCCCTACGAACGGTGCTAAGTGGTACCCCCTCCGACCTCCTGGTTATAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 426 (駱駝sdAb AS64276核酸序列)CAGGTGCACCTGATGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGCCTCTCCTGTGTAGTCTCTGGATACACCGGCAGTAGCCGCTGTATGGCCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGCGGTCGCACAAATTTTTACTGGTCGTGGTACCACAGGCTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACTATTTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCGAATGAACAGTCTGAGACCTGAGGACACTGCCATTTACTACTGTGCGGCGAGTCTCGGCCCGGGACGCGGAGCCTGTGGGTATAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 427 (駱駝sdAb AS64336核酸序列)CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTAAGACTCTCCTGTACAACCTCTGGACGCACCTACAGTAGCTGCAGCATGGGCTGGTACCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGTTGGTCTCACATATTTTTAGTGATGGTAGCAGATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGCCATGTATTACTGTAACCGCCGTACGGGTTGGGCACCAAGGTGCGCTGTTCCCGGTTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 428 (駱駝sdAb AS64346核酸序列)CAGGTGCACCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACCTATTTCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCACAGAAGGAGCGCGAATGGGTCGCGACTATTGGTACTGGTGATATTTTCAATGGCGCTGCTTACTATGTCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCGCCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAAGACACTGCCGTGTACGTCTGTGCGGCAGTTCAATCGAAATCCTCAAACTACGTGTTGAGAGACGCATCTACCTACAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 429 (駱駝sdAb AS64420核酸序列)GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGAAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGAGACACCAGTAGAAGCGTCTGGATGGGCTGGGCCCGCCAGGTTCCAGGGAAAGAGCGCGAGGTGGTCGCAACCATTAGTACTGCCGGTGGTAGTACATGGTATACCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTACCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATATACTATTGTGCGGCCAGAAGCAGATATGCTACCTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 430 (駱駝sdAb AS64473核酸序列)CAGGTGAGGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTACAGCCTCTGGATACACCTACAGATACCTCTACATGGCCTGGTTCCGCCAGACTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCATGTATTTATACTGGTAGTGGTACCACAGGGTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAATACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAACGCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAAGTTCGCCCCAGTGGGGCGGTACCTGTCGACGCTGGTCCGAGTATAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 431 (駱駝sdAb AS64475核酸序列)CAGGTGCAACTGCAGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACCTGGAGTCGCAACTGGATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGTTCGCAACTATTACAATTAGTGGTGGTAGCACATGGTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCTAGACAACGCCGGGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCGCGGGATACCGCGCGGACCTACTGGGGCCAGGGTACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 432 (駱駝sdAb AS64513核酸序列)GAGGTGCAGCTGGTGGAATCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTGACTACCCCTACATAGACAACTGCATGGGCTGGTTCCGCCAGGGTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAGCTGCGTGTACTGGTGGTGGTAGCACATATTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCGAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGACGTGTACTACTGTGCGACAGGCTACTATAGCGGCTCTGGTCCGGGGTATTTACTCCCATGGAGGTATAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 433 (駱駝sdAb AS64562核酸序列)GAGGTGCAACTGGTGGAATCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACCGCTAGGCGCGACTTCATGGCCTGGTTCCGCCAGGTTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAGTCATTCATACTGGTGGTGACACCACATACTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCGCGACAACGCCCAGAACATAATGAATCTGCAAATGAACAGCCTTAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGGTTTCCGTCCGCGTGGTGGAGGATACACGGGTGACGTCTTGGCCCAGGCTGCGGCATACAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 434 (駱駝sdAb AS64583核酸序列)GAGGTGCAGCTGGCGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTGCAGGCAGGGGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTACAGCCTCTGGATTCACTATTGCTGTTTATACCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGAATCTCATGTACTAGCTGGGCTGGTGGTCGCACATACACTGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGCCATGTATTACTGTGCGGCAAAGGCACATCCCGACTGTTCAGGGGATTGGTCCCCATCTGGGTATGAATACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 435 (駱駝sdAb AS64594核酸序列)CAGGTGCACCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACCTACAATAGCAACTACATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCACTTATTTATACTGGTGGTGGTAGCACATATTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCGAGACAACGCCAAAAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTTCGGTAAGAACGCAGACGCGTAACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 436 (駱駝sdAb AS64605核酸序列)CAGGTGAAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGTTTCTAGATATCCCTACAGCAGCATCTGCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGAGCGAGGGTGTCGCACGTATTTATACTGGTACTGGTAGTACATGGTATACCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCGCCCGAGACAACGCCCAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCGCGTAGCAATTCATATTCATATTCAAGTTGTGATTACGGCCCCCTCACGAGGGGGGGGTATAACTTCTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 437 (駱駝sdAb AS64606核酸序列)GAGGTGCAGCTGGCGGAGTCTGGGGGAGGATCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGATACACCAGCCGTAGCAATTACATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCGCTAATTTATACTCGTGGTGGTAGCACATACTATGCCTCCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCAAGACAGTGCCAAGAAAACGTATCTGCAAATGAACAGTGTGAAACCGGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCTTTGCGCCTTGATGAGAAGATGTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 438 (駱駝sdAb AS68121核酸序列)GAGGTGCAGCTGGCGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGATGCCTCTGGATACACCTACAGCCGCAACTGCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAGCGTTCTATACTGATTATATTCGTTTTGGGCGCACATATTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTTCCAAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGATCCTGGGAGTCGTACAGACGATAGTTGTGGTACCTCATACAACAAAGGGAATTTTGGTTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 439 (駱駝sdAb AS68170核酸序列)CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCGCTGAGACTCTCCTGTACAGCCTCTGGATACACCTACAGAAGCAACTGTATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAACAATCTATACTGGTGGTGGTCGTAATCTATACTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCGAGACAACGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAAATGAACAGCCTGAAGCCTGAGGACTCTGCCAGGTACTACTGTGCGGCCGCGAGTGACGTGGCAGTTGGTGTTAATTCCTGCGGGGGAAGGACTGCGGGGTTTGACGCCTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 440 (駱駝sdAb AS63964核酸序列)CAGGTGAGGTTAGTGGAGTCTGGGGGAGGATCGGTACAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGCTCAGCCTCTGGATACACCTACAGTTACAACAATATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAACGAGCGCGAGGGGGTCGCAGCTATTAGTGGTGGTCGTTTCACCGCCTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCGAGACAACGCCGAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAACCTGAAACCTGAGGACACTGGGATGTACTACTGTGCGGCAGAGGTAGTTGATCCGACCTGGGGGTCGCGTGACCAAAGACGATATAAGTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 441 (駱駝sdAb AS64116核酸序列)CAGGTGAAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCGTGTGCAGCCTCTGGATACATCTACAGTTGCGTGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAGGTATTAGTACTGGTGGTGGTGGCACAGTCTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCAATTCACCATCTCCCGAGACAACGCCAAGAACACGGTGTACCTGCAAATGGACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGATCGATGGAATTCATTCGCTAATTGCGGTGCCTGGGGAAGGTATACCTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 442 (駱駝sdAb AS68270核酸序列)CAGGTGCAACTGGCGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTGGATACCCCTCTTCCACCTACTACATGCTCAGCATGGCGTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCCGCTATTACTAGCGGTACTGGGAGCACAAGCTACGCAGACTCCGTGAAGGACCGATTCACCATCTCCAAAGACTACGCCAACAACACTCTGTATCTGCACATAAACAACCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGCCTCAGGTTGGATCGTTCCTAGTAGGTCCCTGACCGCCAACCTATATAGGTATTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 443 (駱駝sdAb AS68320核酸序列)CAGGTGCACCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACCTACAATACCAACTACATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAGCTATTTATAGACATAGTGGTAACACAGCCTATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACTACGCCAAGAACACCGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGGGCGCGCTGGTCCCTGGGCCCTGATGCGCCCGACTGAGTTTGGTTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 444 (駱駝sdAb AS68351核酸序列)CAGGTGCAATTGGAGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTGCAGCCTGGGGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCGGCCTCTGGAGACACATTTCGTGCCTATTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGATTCGAGTGGGTCTCAGGTATTAGCGCCAGTGGCGGCCGTACGTCATACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAAAACACGCTGTATCTGCAATTGAACAGCCTGAGCACTGAGGACACGGGCATGTATTATTGTGTAAAGGGAGCTGTCCGTCTCTCGACATCGTCAGTACGGGATTCGTCCTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 445 (駱駝sdAb AS75378核酸序列)CAGGTGCAATTGGAGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGTAGTCTCTGGAAACACCCGCAGTACCACGTACATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAATAGTTTATACTGGTGGTCGTGACACATACTATGCCGCCTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGACAACGATCTATCTGCAAATGAACAGTCTGGAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCACGCTCATATGAGTATACCTACTGGGGTCGGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 446 (駱駝sdAb AS75383核酸序列)GAGGTGCAACTGGCGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTGGATACACCTTCAGTAGCTACTGCTTGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGCAGCGCCAGGGGGTCGCAACGTTTAATAATAGAGGTGTCGCAAACTACCACGATTCCGTGAAGGGCCGATTCACCGCCTCCGTAGACAACGCCAAGAACACTCTGCTTCTGCAAATGAACAGCCTGGAACCTGACGACACGGCCATGTACTACTGTGCGGCGGATCGCCGGTACGGTCGTCAGTGGTATCAGCCTTGCGAGTGGAACACCTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 447 (駱駝sdAb AS75751核酸序列)CAGGTGAGGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTGGATACTTCTACAATACCTACTACTTTATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCAGCTATTGATACTGATGGTAGAACAAGTTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAAAGACAACGCCAAGAACACTCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGGTTTTGGCTATATGAATGTTATTCAGGCTCTTAATGGCATGAGACAGAATCCCGACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 448 (駱駝sdAb AS76422核酸序列)CAGGTGAAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTCGGTGCAGGCTGGAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACACCTTCGCTGGCAACTGCTTGGGCTGGTTTCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCGCGAGGGGGTCGTAACGTACAATAACTTCGGTGTCGCCAACTACGCCGATTCCGTGAAGGGCCGATTCACCGTCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACTCTGCTTCTGCAAATGAACAGCCTGGAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCGGACCGCCGGGACGGTCGTCGCTGGTCTCAGCCTTGCGAGTGGAATACCTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCA人類化駱駝 sdAb 核酸序列SEQ ID NO: 449 (人類化sdAb AS64380VH4核酸序列)GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGAGGAGGACTGGTGCAGCCAGGAGGCAGCCTGAGGCTGTCCTGCGCAGCATCTGGAAACACCTACAGCTCCAATTATATGGGATGGTTCAGGCAGGCACCTGGCAAGGGACTGGAGGAGGTGGCCGTGATCTACACCAGGGGAGGACACACATACTATGTGGACTCCGTGCGGGGACGGTTCACCATCAGCAGGGATAACGCCAAGAACAGCCTGTATCTGCAGATGAACTCTCTGAGAGCCGAGGACACAGCCGTGTACTATTGTGCAGCATCTAGCAGGCACAGGCTGGGCCTGAACAATCCAAGGGACTACGATTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCCTCTSEQ ID NO: 450 (人類化sdAb AS64380VH5核酸序列)GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGAGGAGGACTGGTGCAGCCAGGAGGCAGCCTGAGGCTGTCCTGCGCAGCATCTGGAAACACCTACAGCTCCAATTATATGGGATGGTTCAGGCAGGCACCTGGCAAGGGCCTGGAGGAGGTGGCCGTGATCTACACCAGAGGCGGCCACACATACTATGTGGACTCCGTGCGGGGACGGTTCACCATCAGCCAGGATAACGCCAAGAACAGCCTGTATCTGCAGATGAACTCTCTGAGGGCCGAGGACACAGCCGTGTACTATTGTGCAGCATCTAGCAGGCACAGGCTGGGCCTGAACAATCCAAGGGACTACGATTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCCTCTSEQ ID NO: 451 (人類化sdAb AS64380VH6核酸序列)GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGAGGAGGACTGGTGCAGCCAGGAGGCAGCCTGAGGCTGTCCTGCGCAGCATCTGGAAACACCTACAGCTCCAATTATATGGGATGGTTCAGGCAGGCACCTGGCAAGGGCCTGGAGGAGGTGGCCGTGATCTACACCAGAGGCGGCCACACATACTATGTGGACTCCGTGCGGGGACGGTTCACCATCAGCCAGGATAACGCCAAGAACAGCGTGTATCTGCAGATGAACTCTCTGAGGGCCGAGGACACAGCCATGTACTATTGTGCAGCATCTAGCAGGCACAGGCTGGGCCTGAACAATCCAAGGGACTACGATTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCCTCTSEQ ID NO: 452 (人類化sdAb AS64380VH7核酸序列)GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGAGGAGGACTGGTGCAGCCAGGAGGCAGCCTGAGGCTGTCCTGCGCAGCATCTGGAAACACCTACAGCTCCAATTATATGGGATGGTTCAGGCAGGCACCTGGCAAGGGAAGAGAGGAGGTGGCCGTGATCTACACCAGGGGAGGACACACATACTATGTGGACTCCGTGCGGGGACGGTTCACCATCAGCCAGGATAACGCCAAGAACAGCGTGTATCTGCAGATGAACTCTCTGAGGGCCGAGGACACAGCCATGTACTATTGTGCAGCATCTAGCAGGCACAGGCTGGGCCTGAACAATCCAAGGGACTACGATTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCCTCTSEQ ID NO: 453 (人類化sdAb AS64511VH4核酸序列)GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGACTGGTGCAGCCAGGAGGCTCTCTGAGGCTGAGCTGCGCAGCATCCAGAGCAACCTACTCTACAAACTATATCAGCTGGTTCAGGCAGGCACCTGGCAAGGGACTGGAGGCAGTGGCAACCATCACCACAGGCGATGGCGAGACAGCCTACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGGTTTACCATCTCCCGCGATAACGCCAAGAACAGCCTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACAGCCGTGTACTATTGTGCAGCAAATCTGAGGATCGGAGGCGACTGGTTCGATGGAAGGGACTTTAGAGCATGGGGACAGGGAACCCTGGTGACAGTGAGCTCCSEQ ID NO: 454 (人類化sdAb AS64511VH5核酸序列)GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGACTGGTGCAGCCAGGAGGCTCTCTGAGGCTGAGCTGCGCAGCATCCAGAGCAACCTACTCTACAAACTATATCAGCTGGTTCAGGCAGGCACCTGGCAAGGGACTGGAGGCAGTGGCAACCATCACCACAGGCGATGGCGAGACAGCCTACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGGTTTACCATCTCCCGCGATAACGCCAAGAACAGCGTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACAGCCATGTACTATTGTGCAGCAAATCTGAGGATCGGAGGCGACTGGTTCGATGGAAGGGACTTTAGAGCATGGGGACAGGGAACCCTGGTGACAGTGAGCTCCSEQ ID NO: 455 (人類化sdAb AS64511VH6核酸序列)GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGACTGGTGCAGCCAGGAGGCTCTCTGAGGCTGAGCTGCGCAGCATCCAGAGCAACCTACTCTACAAACTATATCAGCTGGTTCAGGCAGGCACCTGGCAAGGGAAGGGAGGCAGTGGCCACCATCACCACAGGCGATGGCGAGACAGCCTACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGGTTTACCATCTCCCGCGATAACGCCAAGAACAGCGTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACAGCCATGTACTATTGTGCAGCAAATCTGAGGATCGGAGGCGACTGGTTCGATGGAAGGGACTTTAGAGCATGGGGACAGGGAACCCTGGTGACAGTGAGCTCCSEQ ID NO: 456 (人類化sdAb AS63931VH4核酸序列)CAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGAGGAGGAGTGGTGCAGCCAGGAGGCAGCCTGAGGCTGTCCTGCGCAGGCTCTTTCAGCGGATACGGCGTGTCCACCATGGCATGGTTTAGGCAGGCACCTGGCAAGGGACTGGAGGGAGTGGCAGCAATCACCGTGGGATCCGGAAACACATACTATGCCGACTCTGTGACCGGCCGGTTCACAATCTCTAGAGATAACAGCAAGAATACCCTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACAGCCGTGTACTATTGTGCAGCAGGATGGCTGTCCGGAGGATCTTGGCACGTGCCCGGCAGGTACAACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCTCCSEQ ID NO: 457 (人類化sdAb AS63931VH5核酸序列)CAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGAGGAGGAGTGGTGCAGCCAGGAGGCAGCCTGAGGCTGTCCTGCGCAGGCTCTTTCAGCGGATACGGCGTGTCCACCATGGCATGGTTTAGGCAGGCACCTGGCAAGGGACTGGAGGGAGTGGCAGCAATCACCGTGGGATCCGGAAACACATACTATGCCGACTCTGTGACCGGCCGGTTCACAATCTCTAGAGATAACAGCAAGAATACCGTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACAGCCATGTACTATTGTGCAGCAGGATGGCTGTCCGGAGGATCTTGGCACGTGCCCGGCAGGTACAACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCTCCSEQ ID NO: 458 (人類化sdAb AS63931VH6核酸序列)CAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGAGGAGGAGTGGTGCAGCCAGGAGGCAGCCTGAGGCTGTCCTGCGCAGGCTCTTTCAGCGGATACGGCGTGTCCACCATGGCCTGGTTTAGGCAGGCACCTGGCAAGGGAAGGGAGGGAGTGGCAGCAATCACCGTGGGATCCGGAAACACATACTATGCCGACTCTGTGACCGGCCGGTTCACAATCTCTAGAGATAACAGCAAGAATACCGTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACAGCCATGTACTATTGTGCAGCAGGATGGCTGTCCGGAGGATCTTGGCACGTGCCCGGCAGGTACAACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCTCCSEQ ID NO: 459 (人類化sdAb AS63997VH4核酸序列)CAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGAGGAGGAGTGGTGCAGCCAGGAGGCAGCCTGAGGCTGTCCTGCGCAGCCTCTTTCAGCGGATACGGCGTGTCCACCATGGCATGGTTTAGGCAGGCACCTGGCAAGGGACTGGAGGGAGTGGCAGCAATCACCGTGGGATCCGGAAACACATACTATGCCGACTCTGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCTAGAGATAACAGCAAGAATACACTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACAGCCGTGTACTATTGTGCCGTGGGCTATCTGTCCGGAGGATCTTGGGATGTGCCAGGAAGGTACAACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCTCCSEQ ID NO: 460 (人類化sdAb AS63997VH5核酸序列)CAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGAGGAGGAGTGGTGCAGCCAGGAGGCAGCCTGAGGCTGTCCTGCGCAGCCTCTTTCAGCGGATACGGCGTGTCCACCATGGCATGGTTTAGGCAGGCACCTGGCAAGGGACTGGAGGGAGTGGCAGCAATCACCGTGGGATCCGGAAACACATACTATGCCGACTCTGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCTAGAGATAACAGCAAGAATACAGTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACAGCCATGTACTATTGTGCCGTGGGCTATCTGTCCGGAGGATCTTGGGATGTGCCAGGAAGGTACAACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCTCCSEQ ID NO: 461 (人類化sdAb AS63997VH6核酸序列)CAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGAGGAGGAGTGGTGCAGCCAGGAGGCAGCCTGAGGCTGTCCTGCGCAGCCTCTTTCAGCGGATACGGCGTGTCCACCATGGCCTGGTTTAGGCAGGCACCTGGCAAGGGAAGGGAGGGAGTGGCAGCAATCACCGTGGGATCCGGAAACACATACTATGCCGACTCTGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCTAGAGATAACAGCAAGAATACAGTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACAGCCATGTACTATTGTGCCGTGGGCTATCTGTCCGGAGGATCTTGGGATGTGCCAGGAAGGTACAACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCTCCSEQ ID NO: 462 (連接子胺基酸序列)GGGGSGGGGSGGGGSSEQ ID NO: 463 (連接子胺基酸序列)GGGGSGGGGSSEQ ID NO: 464 (連接子胺基酸序列)GGGGSSEQ ID NO: 465 (CD8α信號肽胺基酸序列)MALPVTALLLPLALLLHAARPSEQ ID NO: 466 (CD8α鉸鏈胺基酸序列)TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCSEQ ID NO: 467 (CD8α跨膜域胺基酸序列)IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCSEQ ID NO: 468 (4-1BB胞內域胺基酸序列)KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELSEQ ID NO: 469 (CD28胞內域胺基酸序列)RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSSEQ ID NO: 470 (CD3ζ胞內域胺基酸序列)RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 471 (F2A元件胺基酸序列)GSGVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGPSEQ ID NO: 472 (P2A元件胺基酸序列)GSGATNFSLLKQAGDVEENPGPSEQ ID NO: 473 (CAR3抗DLL3 scFv胺基酸序列)MALPVTALLLPLALLLHAARPAIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYYNLAWYQQKPGKAPKLLIYTANSLEDVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCKQAYDVPPTFGGGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTRYWIHWIRQAPGQGLEWMGYINPTVYTEFNQNFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGSNFFDYWQGTTVTVSSSEQ ID NO: 474 (CD28跨膜域胺基酸序列)FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVSEQ ID NO: 475 (CD28鉸鏈)IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP駱駝抗 DLL3 CAR 序列SEQ ID NO: 476 (CAS63997)MALPVTALLLPLALLLHAARPQVRLVESGGGSVQAGGSLRLSCAGSFSGYGVSTMAWFRQAPGKEREGVAAITVGSGNTYYADSVKGRFTISRDNAKRTVFLQMNSLKPEDTAMYYCAVGYLSGGSWDVPGRYNYWGQGTQVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 477 (CAS64380)MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGSVQAGGSLTLSCEASGNTYSSNYMGWFRQAPGKEREEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTQVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 478 (CAS64511)MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASRATYSTNYISWFRQAPGKEREAVATITTGDGETAYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAANLRIGGDWFDGRDFRAWGQGTQVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 479 (CAS64617)MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTDRCSMAWYRQAPGKERELVSRISTSGFTNYAASVKGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLNPGDTGMYYCAIIVGRTCSLNYWGNGILVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 480 (CAS69443)MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLAESGGGSVQAGGSLRLSCSASGFTFDDSDMAWYRQAPGDGCDLVSTISSDGSTYYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMHSLKPEDTAVYYCAADFLTGFYYSDSPHPAPCSASDFGYWGQGTQVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 481 (CAS63931)MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLAESGGGSVQAGGSLRLSCAGSFSGYGVSTMAWFRQAPGKEREGVAAITVGSGNTYYADSVTGRFTISRDNAKRTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAAGWLSGGSWHVPGRYNYWGQGTQVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 482 (CAS64047)MALPVTALLLPLALLLHAARPQVHLVESGGGSVQAGGSLRLSCAASQYVYRWDLMGWFRQAPGKEREAVAAVYTGDGITYYADSVKGRFSISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTGMYFCAAGFVSGGRWNQSYRYKYWGQGTQVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 483 (CAS64052)MALPVTALLLPLALLLHAARPQVHLMESGGGSVQAGGSLRLSCAASGYTYRSNFMGWFRQAPGKEREGIATIHSGVATTYYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAAGGPPANADRWYPLRPPGYNYWGQGTQVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 484 (CAS64062)MALPVTALLLPLALLLHAARPQVRLVESGGGSVQVGGSLRLSCAASRSPYSSSRCMGWFRQAPGKEREGVAALYTGGGSTSYADSVKGRFTISQDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAMYYCAAVVPRGGSCRLDERGYYHWGQGTQVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR人類化抗 DLL3 CAR 序列SEQ ID NO: 485 (CAS64380VH4)MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGNTYSSNYMGWFRQAPGKGLEEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 486 (CAS64380VH5)MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGNTYSSNYMGWFRQAPGKGLEEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 487 (CAS64380VH6)MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGNTYSSNYMGWFRQAPGKGLEEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAMYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 488 (CAS64380VH7)MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGNTYSSNYMGWFRQAPGKGREEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAMYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 489(CAS64511VH4)MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASRATYSTNYISWFRQAPGKGLEAVATITTGDGETAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAANLRIGGDWFDGRDFRAWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 490 (CAS64511VH5)MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASRATYSTNYISWFRQAPGKGLEAVATITTGDGETAYADSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAMYYCAANLRIGGDWFDGRDFRAWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 491 (CAS64511VH6)MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASRATYSTNYISWFRQAPGKGREAVATITTGDGETAYADSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAMYYCAANLRIGGDWFDGRDFRAWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 492 (CAS63997VH4)MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASFSGYGVSTMAWFRQAPGKGLEGVAAITVGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVGYLSGGSWDVPGRYNYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 493 (CAS63997VH5)MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASFSGYGVSTMAWFRQAPGKGLEGVAAITVGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAMYYCAVGYLSGGSWDVPGRYNYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 494 (CAS63997VH6)MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASFSGYGVSTMAWFRQAPGKGREGVAAITVGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAMYYCAVGYLSGGSWDVPGRYNYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR抗 DLL3 人類 scFv VL 及 VH 結構域核酸序列SEQ ID NO: 511 (抗DLL3人類scFv AS56704之VL結構域的核酸序列)GACATCCAGATGACCCAGAGCCCGAGCAGCCTGAGCGCGAGCGTTGGTGACCGTGTTACCATTACCTGCCGTGCGAGCCAGAGCGTTAGCAGCGCGGTGGCGTGGTACCAGCAAAAGCCGGGTAAAGCGCCGAAGCTGCTGATCTATAGCGCGAGCAGCCTGTATAGCGGCGTTCCGAGCCGTTTCAGCGGTAGCCGTAGCGGCACCGACTTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGCCGGAAGATTTCGCAACTTATTACTGTCAGCAAGCTTCTTGGTCTCCGATCACGTTCGGACAGGGCACCAAAGTTGAGATTAAASEQ ID NO: 512 (抗DLL3人類scFv AS56704之VH結構域的核酸序列)GAGGTTCAACTGGTGGAGAGCGGTGGTGGTCTGGTTCAGCCGGGTGGTAGCCTGCGTCTGAGCTGCGCAGCTTCTGGCTTCAACATCTCTTCTTCTTATATGCACTGGGTGCGTCAGGCGCCGGGTAAAGGCCTGGAATGGGTTGCATATATTTATCCTTCTTATGGCTATACTTCTTATGCCGATAGCGTCAAGGGCCGTTTCACCATCAGCGCGGATACCAGCAAAAACACCGCATACCTGCAAATGAACAGCCTGCGTGCGGAAGATACCGCCGTCTATTATTGTGCTCGCGGTGGTTACTACTACCATGGTATGGACTACTGGGGTCAAGGCACCCTGGTTACCGTGAGCAGCSEQ ID NO: 513 (抗DLL3人類scFv AS56788之VL結構域的核酸序列)GACATCCAGATGACCCAGAGCCCGAGCAGCCTGAGCGCGAGCGTTGGTGACCGTGTTACCATTACCTGCCGTGCGAGCCAGAGCGTTAGCAGCGCGGTGGCGTGGTACCAGCAAAAGCCGGGTAAAGCGCCGAAGCTGCTGATCTATAGCGCGAGCAGCCTGTATAGCGGCGTTCCGAGCCGTTTCAGCGGTAGCCGTAGCGGCACCGACTTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGCCGGAAGATTTCGCAACTTATTACTGTCAGCAACATTACGCTCCGTCTCTGATCACGTTCGGACAGGGCACCAAAGTTGAGATTAAASEQ ID NO: 514 (抗DLL3人類scFv AS56788之VH結構域的核酸序列)GAGGTTCAACTGGTGGAGAGCGGTGGTGGTCTGGTTCAGCCGGGTGGTAGCCTGCGTCTGAGCTGCGCAGCTTCTGGCTTCAACATCTCTTCTTATTCTATGCACTGGGTGCGTCAGGCGCCGGGTAAAGGCCTGGAATGGGTTGCATATATTTCTTCTTATTATGGCTATACTTATTATGCCGATAGCGTCAAGGGCCGTTTCACCATCAGCGCGGATACCAGCAAAAACACCGCATACCTGCAAATGAACAGCCTGCGTGCGGAAGATACCGCCGTCTATTATTGTGCTCGCTACTCTTACTACTACGGTATGGACTACTGGGGTCAAGGCACCCTGGTTACCGTGAGCAGC人類抗 DLL3 scFv CAR 序列SEQ ID NO: 515 (CAS56704)MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASWSPITFGQGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNISSSYMHWVRQAPGKGLEWVAYIYPSYGYTSYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGYYYHGMDYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 516 (CAS56788)MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYAPSLITFGQGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNISSYSMHWVRQAPGKGLEWVAYISSYYGYTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYSYYYGMDYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR抗DLL3基準CARSEQ ID NO: 517 (1H2.1胺基酸序列)MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGDSISSYYWTWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGTTNYNPSLKSRVTISVDTSKSQFSLKLSSVTAADTAVYYCASIAVRGFFFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGTSPLTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR實例 11. 人類化抗 DLL3 串聯 CAR-T 細胞之活體外活性的評估
為提高CAR-T之抗腫瘤功效，構築三個串聯CAR (T1、T2及T3)。串聯CAR之胺基酸序列提供於SEQ ID: 518-520中。抗DLL3人類化sdAb片段之胺基酸序列提供於SEQ ID NO:356 (AS64380VH5)及SEQ ID NO: 366 (AS63997VH5)中。1H2.1 (SEQ ID NO: 517，例如參見WO2019200007)為一種抗DLL3 CAR，亦用於產生作為參考之CAR構築體。全長CAR自N末端至C末端含有：CD8α信號肽(SEQ ID NO: 465)、SEQ ID NO: 356 (AS64380VH5)及SEQ ID NO: 366 (AS63997VH5)中提供之DLL3結合域sdAb、CD8α鉸鏈域(SEQ ID NO: 466)、CD8α跨膜域(SEQ ID NO: 467)、CD137胞內域(SEQ ID NO: 468)或CD28胞內域(SEQ ID NO: 469)及CD3ζ胞內域(SEQ ID NO: 470)。圖10A中示出CAR構築體之示意圖。對於T1，sdAb 1及sdAb 2均為AS64380VH5。對於T2，sdAb 1及sdAb 2均為AS63997VH5。對於T3，sdAb 1及sdAb 2分別為AS63997VH5及AS64380VH5。接著將編碼CAR片段之核酸選殖至慢病毒載體中以在單個編碼框中建立全長CAR構築體，使用人EF1α啟動子進行表現。SEQ ID NO: 518 (T1胺基酸序列)MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGNTYSSNYMGWFRQAPGKGLEEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGNTYSSNYMGWFRQAPGKGLEEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 519 (T2胺基酸序列)MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASFSGYGVSTMAWFRQAPGKGLEGVAAITVGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAMYYCAVGYLSGGSWDVPGRYNYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASFSGYGVSTMAWFRQAPGKGLEGVAAITVGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAMYYCAVGYLSGGSWDVPGRYNYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 520 (T3胺基酸序列)MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASFSGYGVSTMAWFRQAPGKGLEGVAAITVGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAMYYCAVGYLSGGSWDVPGRYNYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGNTYSSNYMGWFRQAPGKGLEEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR 活體外細胞毒性分析
在轉導後第9天，收穫轉導T細胞，且與表現DLL3之腫瘤細胞株(具有DLL3高表現之SHP-77、具有DLL3中等表現之NCI-H82及具有DLL3低表現之NCI-H2171)及DLL3陰性表現之細胞株(NCI-H460及HEK293)以0.5:1及2:1之效應細胞(CAR-T)與靶細胞比率共同培育22小時。在所有分析中CAR3 CAR-T細胞用作參考以比較分析變化，及/或充當對照。未轉導之T細胞(UnT)用作陰性對照。
通過乳酸去氫酶(LDH)分析來測定轉導T細胞之細胞毒性。結果表明，CAR3 CAR-T及一些抗DLL3串聯CAR-T在活體外展現強烈的針對SHP-77細胞之抗腫瘤活性，而UnT無靶細胞殺死作用(圖11A-C)且DLL3陰性表現細胞(NCI-H460及HEK293)不誘發細胞毒性(圖11D-E)。除CAR3之外，亦比較T3及1H2.1對SHP-77細胞之活體外細胞毒性。結果顯示在短期刺激中T3具有可比或不太有效之細胞殺死活性(圖11V)。IFN-γ 及 TNF-α 釋放之偵測
另外，自活體外細胞毒性分析收集上清液，以評定CAR誘發之細胞介素釋放，例如干擾素γ (IFN-γ)及TNF-α釋放。如圖11F-K所示，CAR3 CAR-T及一些抗DLL3串聯CAR-T經表現DLL3之細胞株刺激，產生IFN-γ及TNF-α，而UnT幾乎不產生IFN-γ及TNF-α。DLL3陰性表現之細胞株不減少IFN-γ及TNF-α之特異性釋放(數據未示)。偵測IFN-γ及TNF-α釋放之方案可涉及CISBIO之人類TNF-α套組及IFN-γ套組。
與1H2.1相比，T3釋放更多IFN-γ及TNF-α (在共同培育22小時後)(圖 11W-X)。藉由長期刺激分析確定串聯 CAR-T 細胞毒性及擴增
藉由反復抗原刺激分析評估DLL3 CAR-T細胞。在經SCLC細胞株及對照細胞株反復刺激後，串聯CAR-T細胞T3顯示對SCLC細胞、尤其對SHP-77及NCI-H82細胞更有效之細胞毒性(圖11L-P)。除細胞毒活性外，串聯CAR-T細胞T3亦顯示比其他CART高之增殖能力，尤其在經SHP-77及NCI-H82細胞刺激時(圖11Q-U)。
除CAR3之外，亦比較T3及1H2.1對SHP-77細胞之活體外細胞毒性。結果表明，在長期刺激中T3具有優良細胞毒性及擴增(圖11Y-Z)。
如下進行反復刺激。第1輪：將CAR-T細胞及3×105個靶細胞(例如SHP-77)以1:5之效應細胞與靶細胞比率添加至24孔盤中，且在二氧化碳培育箱中在37℃、5% CO2中共同培育3天。移取200 μL細胞培養上清液偵測細胞介素，且收穫共同培育之細胞以藉由流式細胞術評定% CD3及CAR陽性率；第2輪：基於第1輪中收穫之細胞之CAR-T陽性率，將收穫之細胞繼續與相同體積之新靶細胞(SHP-77)在1:2之效應細胞與靶細胞比率下又共同培育3天。移取200 μL細胞培養上清液偵測細胞介素，且收穫共同培育之細胞以藉由流式細胞術評定% CD3及CAR陽性率；基於先前每輪CAR-T陽性率，按與第2輪類似之方式進行第3輪及下一輪。實例 12. 人類化抗 DLL3 PD-1 DNR 或 CSR 武裝之 CAR-T 細胞的活體內活性的評估
為提高CAR-T之持久性，構築PD-1顯性負性受體(PD-1DNR)或PD-1嵌合轉換受體(PD-1CSR)武裝之DLL3 CAR。兩種CAR之胺基酸序列提供於SEQ ID: 521-522中。PD-1DNR及PD-1CSR序列經由P2A連接至T3 C末端。PD-1DNR及PD-1CRS之胺基酸序列提供於SEQ ID: 523-524中。圖10B中示出CAR構築體的示意圖。SEQ ID NO: 521 (T3-PD-1DNR胺基酸序列)MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASFSGYGVSTMAWFRQAPGKGLEGVAAITVGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAMYYCAVGYLSGGSWDVPGRYNYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGNTYSSNYMGWFRQAPGKGLEEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRRIQSEQ ID NO: 522 (T3-PD-1CSR胺基酸序列)MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASFSGYGVSTMAWFRQAPGKGLEGVAAITVGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAMYYCAVGYLSGGSWDVPGRYNYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGNTYSSNYMGWFRQAPGKGLEEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSSEQ ID NO: 523 (PD-1DNR胺基酸序列)MQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRRIQSEQ ID NO: 524 (PD-1CSR胺基酸序列)MQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
藉由反復抗原刺激分析來評估PD-1DNR或PD-1CSR武裝之DLL3 CAR-T細胞。在經SHP-77細胞反復刺激後，與習知CART相比，武裝之CAR-T細胞未增加細胞毒性效力，且未提高擴增能力(圖12A-B)。在經SHP-77/PD-L1細胞(SHP-77細胞中過度表現人PD-L1)反復刺激後，PD-1 CSR武裝之CAR-T細胞顯示優良細胞毒性效力及擴增能力(圖12C-D)。實例 13. TGF-β-DNR 增強 DLL3 CAR-T 細胞之抗腫瘤功效 TGF-β-DNR 武裝之 DLL3 CAR-T 細胞的構築
為提高DLL3 CAR-T細胞在腫瘤微環境中之抗腫瘤效能，將TGF-β-DNR序列合併至DLL3 CAR中，如圖13A所示。TGF-β-DNR為TGFBRII之截短型式，其由TGFBRII之胞外域及跨膜域組成。構築體T3-P2A-TGF-β-DNR、T3-T2A-TGF-β-DNR包含N末端之T3-BBZ序列、如所指示之P2A或T2A肽、C末端之TGF-β-DNR；構築體TGF-β-DNR-P2A-T3及TGF-β-DNR-T2A-T3包含N末端之TGF-β-DNR序列、如所指示之P2A或T2A肽及C末端之T3-BBZ序列。TGF-β-DNR及武裝之DLL3 CAR的詳細序列提供於SEQ ID: 525-529中。SEQ ID NO: 525 (T3-P2A-TGF-β-DNR胺基酸序列)MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASFSGYGVSTMAWFRQAPGKGLEGVAAITVGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAMYYCAVGYLSGGSWDVPGRYNYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGNTYSSNYMGWFRQAPGKGLEEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMGRGLLRGLWPLHIVLWTRIASTIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDLLLVIFQVTGISLLPPLGVAISVIIIFYCYRVNRQQKLSSSEQ ID NO: 526 (TGF-β-DNR-P2A-T3胺基酸序列)MGRGLLRGLWPLHIVLWTRIASTIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDLLLVIFQVTGISLLPPLGVAISVIIIFYCYRVNRQQKLSSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASFSGYGVSTMAWFRQAPGKGLEGVAAITVGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAMYYCAVGYLSGGSWDVPGRYNYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGNTYSSNYMGWFRQAPGKGLEEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 527 (T3-T2A-TGF-β-DNR胺基酸序列)MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASFSGYGVSTMAWFRQAPGKGLEGVAAITVGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAMYYCAVGYLSGGSWDVPGRYNYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGNTYSSNYMGWFRQAPGKGLEEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGEGRGSLLTCGDVEENPGPMGRGLLRGLWPLHIVLWTRIASTIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDLLLVIFQVTGISLLPPLGVAISVIIIFYCYRVNRQQKLSSSEQ ID NO: 528 (TGF-β-DNR-T2A-T3胺基酸序列)MGRGLLRGLWPLHIVLWTRIASTIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDLLLVIFQVTGISLLPPLGVAISVIIIFYCYRVNRQQKLSSGSGEGRGSLLTCGDVEENPGPMALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASFSGYGVSTMAWFRQAPGKGLEGVAAITVGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAMYYCAVGYLSGGSWDVPGRYNYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGNTYSSNYMGWFRQAPGKGLEEVAVIYTRGGHTYYVDSVRGRFTISQDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAASSRHRLGLNNPRDYDYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSEQ ID NO: 529 (TGF-β-DNR胺基酸序列)MGRGLLRGLWPLHIVLWTRIASTIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDLLLVIFQVTGISLLPPLGVAISVIIIFYCYRVNRQQKLSS
所有構築體包裝至基於第二代慢病毒系統之慢病毒中。然後將自健康供體之PBMC分離的初級T細胞用慢病毒轉導。轉導4天後，藉由FACS偵測sdAb及TGF-β-DNR之陽性率(圖13B)。結果顯示，T3-P2A-TGF-β-DNR、T3-T2A-TGF-β-DNR、TGF-β-DNR -P2A-T3及TGF-β-DNR-T2A-T3 CAR-T細胞之sdAb陽性率相當。然而，構築體T3-P2A-TGF-β-DNR及T3-T2A-TGF-β-DNR中TGF-β-DNR之陽性率高於TGF-β-DNR-P2A-T3及TGF-β-DNR-T2A-T3中。此等結果表明TGF-β-DNR在結合於CAR之C末端時表現較高。 活體外細胞毒性分析
接著藉由LDH或IFN-γ釋放分析評估此等CAR-T細胞之細胞毒性。轉導5天後，將CAR-T細胞調至未轉導T細胞(UnT)之相同sdAb陽性率。接著將CAR-T細胞或UnT細胞與SHP77在5 ng/mL TGF-β存在下共同培育48小時，且量測LDH及IFN-γ釋放(圖13C-D)。結果顯示，TGF-β-DNR武裝之CAR-T細胞誘發比未武裝之CAR-T細胞更多的靶細胞特異性溶解。因此，TGF-β-DNR武裝之CAR-T細胞展示在抗原活化後較高的IFN-γ釋放能力。與不同CAR-T細胞之TGF-β-DNR表現水平一致，T3-P2A-TGF-β-DNR、T3-T2A-TGF-β-DNR顯示IFN-γ分泌水平高於TGF-β-DNR-P2A-T3及TGF-β-DNR-T2A-T3 CAR-T細胞。總言之，此等結果證明TGF-β-DNR能夠增強DLL3 CAR-T細胞針對DLL3陽性SCLC細胞之細胞毒性。長期刺激分析
為確定TGF-β-DNR是否能抵抗TGF-β對CAR-T細胞之抑制作用，進行長期刺激分析。簡言之，在5 ng/mL TGF-β存在或缺乏下將T3-P2A-TGF-β-DNR及T3 CAR-T細胞用SHP77細胞每3天反復激發。在每輪刺激結束時，藉由FACS分析全部活細胞之T細胞百分比，且計算CAR-T細胞之擴增。如圖13E及圖13F所示，TGF-β抑制T3 CAR-T細胞之持久性及擴增。相比之下，甚至在TGF-β存在下，T3-P2A-TGF-β-DNR之持久性及擴增亦維持得很好。在用SHP77細胞進行2輪刺激之後藉由FACS分析T細胞耗盡標記物。如圖13G所示，用TGF-β處理上調T3細胞中耗盡標記物之表現，但在T3-P2A-TGF-β-DNR CAR-T細胞中未上調。總之，此等結果證明TGF-β-DNR保護DLL3 CAR-T細胞避免被TGF-β抑制。因為在實體腫瘤之微環境中TGF-β之表現水平通常升高，所以結果表明TGF-β-DNR之添加提高DLL3 CAR-T細胞在實體腫瘤中之抗腫瘤功效。 活體內抗腫瘤功效研究
為進一步研究TGF-β-DNR是否可增強DLL3 CAR-T細胞在活體內之抗腫瘤功效，在異種移植模型中評估T3-T2A-TGF-β-DNR CAR-T細胞或親本CAR-T細胞。簡言之，將1×107個SHP77細胞皮下植入NCG小鼠中。在7-10天後，當腫瘤體積達到100-200 mm3時，將2.5×105個CAR-T細胞靜脈內注入小鼠中。接著每週量測腫瘤體積兩次，且每週量測外周血中CAR-T之百分比一次。如圖13H所示，在次最佳劑量下，T3-T2A-TGF-β-DNR CAR-T細胞可有效抑制腫瘤生長，而親本T3 CAR-T不能。如圖13I所示，外周血白細胞中T3-T2A-TGF-β-DNR CAR-T之百分比高於T3。總之，此等結果證明TGF -β-DNR可增強DLL3 CAR-T細胞在活體內之抗腫瘤功效。
圖1示出基於VHH之CAR構築體的示意圖。可用於構築體中之序列在SEQ ID NO: 462-472、474及475中列出。圖2示出表現包含多種駱駝抗DLL3 sdAb之示例性單特異性CAR之T細胞針對小細胞肺癌細胞株SHP-77的活體外細胞毒性分析的結果，E:T為2:1或5:1。該CAR之結果以右側所示之圖例中的次序描繪。圖3示出在與表現DLL3之腫瘤細胞株SHP-77共同培育之後表現包含多種駱駝抗DLL3 sdAb之示例性單特異性CAR之T細胞的細胞介素釋放水準的結果。IFN-γ釋放水準及TNF-α釋放水準(E:T為2:1或5:1)分別示於圖3A及圖3B中。各圖中，該CAR之結果以右側所示之圖例中的次序描繪。圖4示出在用小細胞肺癌細胞株SHP-77長期刺激之後，表現包含多種駱駝抗DLL3 sdAb之示例性單特異性CAR之T細胞的擴增倍數。圖5示出在SHP-77腫瘤模型中表現具有駱駝抗DLL3 sdAb之CAR之CAR-T細胞的活體內抗腫瘤功效的結果。此模型中，各小鼠輸注100萬CAR-T細胞之劑量。圖6示出表現包含多種人類化駱駝抗DLL3 sdAb之示例性單特異性CAR之T細胞針對小細胞肺癌細胞株SHP-77 (圖6A、6B)及NCI-H82 (圖6C、6D)的活體外細胞毒性分析的結果。圖7示出在經SHP-77刺激之後表現包含多種人類化駱駝抗DLL3 sdAb之示例性單特異性CAR之T細胞的細胞介素釋放水準的結果。IFN-γ釋放水準及TNF-α釋放水準(E:T為3:1或10:1)分別示於圖7A及圖7B中。各圖中，該CAR之結果以右側所示之圖例中的次序描繪。圖8示出在用小細胞肺癌細胞株SHP-77長期刺激之後，表現包含多種人類化駱駝抗DLL3 sdAb之示例性單特異性CAR之T細胞的擴增倍數。圖9示出在SHP-77腫瘤模型中表現具有人類化駱駝抗DLL3 sdAb之CAR之CAR-T細胞的活體內抗腫瘤功效的結果。此模型中，各小鼠輸注20萬CAR-T細胞之劑量。圖9A中比較9組之結果。各組中各小鼠之結果分別示於圖9B-9J中。圖10示出串聯CAR (圖10A)及經武裝之CAR構築體的示意圖(圖10B、C)。圖11示出通過量測短期細胞毒性(圖11A-E、V)及細胞介素釋放(圖11F-K、W-X)以及通過長期刺激分析(圖11L-U、Y-Z)對串聯CAR-T細胞及單特異性CAR-T細胞活體外功能活性比較的結果。圖12分別示出靶向PD-1 DNR或PD-1 CSR武裝之CAR-T細胞及T3的SHP-77細胞(圖12A、B)及SHP-77/PD-L1 (圖12C、D)的活體外功能比較結果。圖13示出TGF-β-DNR增強DLL3 CAR-T細胞之活體外及活體內抗腫瘤功效。圖13A示出TGF-β-DNR武裝之CAR的示意圖。圖13B示出相應CAR-T細胞上CAR及TGF-β-DNR之陽性比率。在短期(圖13C、D)及長期刺激分析(圖13E-G)中評估活體外抗腫瘤功效。圖13H示出活體內抗腫瘤功效。圖13I示出在治療之後SHP77異種移植模型之外周血中CAR-T細胞的藥物動力學。

Claims (41)

  1. 一種嵌合抗原受體(CAR)，該嵌合抗原受體包含DLL3結合域，其中該DLL3結合域包含或源自單域抗體(sdAb)或單鏈可變片段(scFv)，(i) 其中該sdAb部分包含：(1) 具有如SEQ ID NO: 279中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3;(2) 具有如SEQ ID NO: 294中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3;(3) 具有如SEQ ID NO: 297中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3;(4) 具有如SEQ ID NO: 300中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3;(5) 具有如SEQ ID NO: 307中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3;(6) 具有如SEQ ID NO: 312中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3;(7) 具有如SEQ ID NO: 280中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3;(8) 具有如SEQ ID NO: 281中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3; 或(9) 具有如SEQ ID NO: 282中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3;(ii) 其中該scFv部分包含：(1) 輕鏈可變區(VL)，其包含具有如SEQ ID NO: 507所示輕鏈可變區序列的CDR1、CDR2和CDR3，和重鏈可變區(VH)，其包含具有如SEQ ID NO: 508所示重鏈可變區序列的CDR1、CDR2和CDR3；或(2) 輕鏈可變區(VL)，其包含具有如SEQ ID NO: 509所示輕鏈可變區序列的CDR1、CDR2和CDR3，和重鏈可變區(VH)，其包含具有如SEQ ID NO: 510所示重鏈可變區序列的CDR1、CDR2和CDR3。
  2. 一種嵌合抗原受體(CAR)，該嵌合抗原受體包含DLL3結合域，其中該DLL3結合域包含或源自單域抗體(sdAb)，其中該sdAb包含多肽，該多肽包含以下中之任一種：(1) 包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列之CDR3；(2) 包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR3；(3) 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 186之胺基酸序列之CDR3；(4) 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 189之胺基酸序列之CDR3；(5) 包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 196之胺基酸序列之CDR3；(6) 包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 120之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列之CDR3；(7) 包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR3；(8) 包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR3；或(9) 包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR3。
  3. 如請求項1至2中任一項之CAR，其中該sdAb包含與SEQ ID NO: 274-354、SEQ ID NO: 355-367中之任一者之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列。
  4. 一種嵌合抗原受體(CAR)，該嵌合抗原受體包含DLL3結合域，其中該DLL3結合域包含或源自單鏈可變片段(scFv)，該scFv包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該scFv之該VH包含SEQ ID NO: 498中所示之CDR1、SEQ ID NO: 499中所示之CDR2及SEQ ID NO: 500中所示之CDR3，且該scFv之該VL包含SEQ ID NO: 495中所示之CDR1、SEQ ID NO: 496中所示之CDR2及SEQ ID NO: 497中所示之CDR3；或該scFv之該VH包含SEQ ID NO: 504中所示之CDR1、SEQ ID NO: 505中所示之CDR2及SEQ ID NO: 506中所示之CDR3，且該scFv之該VL包含SEQ ID NO: 501中所示之CDR1、SEQ ID NO: 502中所示之CDR2及SEQ ID NO: 503中所示之CDR3。
  5. 如請求項1或請求項4之CAR，該scFv之該VH包含與SEQ ID NO: 508中所示之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列，且該scFv之該VL包含與SEQ ID NO: 507中所示之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列；或該scFv之該VH包含與SEQ ID NO: 510中所示之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列，且該scFv之該VL包含與SEQ ID NO: 509中所示之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列。
  6. 如請求項1至5中任一項之CAR，其中該CAR自N末端至C末端包含信號肽、該DLL3結合域、鉸鏈域、跨膜域及細胞內信號傳導域。
  7. 如請求項6之CAR，其中該細胞內信號傳導域源自CD3ζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b或CD66d。
  8. 如請求項6至7中任一項之CAR，其中該細胞內信號傳導域進一步包含細胞內共刺激序列。
  9. 如請求項8之CAR，其中該細胞內共刺激序列源自選自由以下組成之群的共刺激分子：CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD40、PD-1、LFA-1、ICOS、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、TNFRSF9、TNFRSF4、TNFRSF8、CD40LG、ITGB2、KLRC2、TNFRSF18、TNFRSF14、HAVCR1、LGALS9、DAP10、DAP12、CD83、CD83配位體及其組合。
  10. 如請求項1至9中任一項之CAR，其中該CAR包含與選自由SEQ ID NO: 476-484、SEQ ID NO: 485-494或SEQ ID NO:515-516組成之群之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列。
  11. 如請求項1至10中任一項之CAR，其中該DLL3結合域包含彼此連接之兩個sdAb。
  12. 如請求項11之CAR，其中該等sdAb中之每一者獨立地包含與SEQ ID NO:356或SEQ ID NO:366具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列。
  13. 如請求項11之CAR，其包含第一單域抗體和第二單域抗體，其中：該第一單域抗體包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之CDR1，SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之CDR2，以及SEQ ID NO: 168之胺基酸序列之CDR3；該第二單域抗體包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的CDR1，SEQ ID NO: 102之胺基酸序列的CDR2，以及SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR3。
  14. 如請求項13之CAR，其中：該第一單域抗體包含SEQ ID NO: 366之胺基酸序列，該第二單域抗體包含SEQ ID NO: 356之胺基酸序列。
  15. 如請求項11至14中任一項之CAR，其中該CAR包含與選自由SEQ ID NO: 518-520組成之群之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列。
  16. 如請求項11至15中任一項之CAR，其中該CAR包含SEQ ID NO: 520之胺基酸序列。
  17. 一種DLL3結合蛋白，該DLL3結合蛋白包含特異性地結合於DLL3之單域抗體(sdAb)部分，其中該sdAb部分包含多肽，該多肽包含：(1)  具有如SEQ ID NO: 279中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3;(2) 具有如SEQ ID NO: 294中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3;(3) 具有如SEQ ID NO: 297中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3;(4) 具有如SEQ ID NO: 300中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3;(5) 具有如SEQ ID NO: 307中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3;(6) 具有如SEQ ID NO: 312中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3;(7) 具有如SEQ ID NO: 280中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3;(8) 具有如SEQ ID NO: 281中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3; 或(9) 具有如SEQ ID NO: 282中所示的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列相同的CDR1、CDR2和CDR3。
  18. 一種DLL3結合蛋白，該DLL3結合蛋白包含特異性地結合於DLL3之單域抗體(sdAb)部分，其中該sdAb部分包含多肽，該多肽包含以下中之任一種：(1) 包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列之CDR3；(2) 包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之CDR 2；以及包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之CDR3；(3) 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 186之胺基酸序列之CDR3；(4) 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之CDR 2；以及包含SEQ ID NO: 189之胺基酸序列之CDR3；(5) 包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 196之胺基酸序列之CDR3；(6) 包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 120之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列之CDR3；(7) 包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 169之胺基酸序列之CDR3；(8) 包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 170之胺基酸序列之CDR3；或(9) 包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之CDR1；包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之CDR2；以及包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列之CDR3。
  19. 如請求項17至18中任一項之DLL3結合蛋白，其中該sdAb部分包含與SEQ ID NO: 274-354、SEQ ID NO: 355-367中之任一者之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列。
  20. 一種DLL3結合蛋白，該DLL3結合蛋白包含特異性地結合於DLL3之單鏈可變片段(scFv)部分，其中該scFv部分包含：(1) 輕鏈可變區(VL)，其包含具有如SEQ ID NO: 507所示輕鏈可變區序列的CDR1、CDR2和CDR3，和重鏈可變區(VH)，其包含具有如SEQ ID NO: 508所示重鏈可變區序列的CDR1、CDR2和CDR3；或(2) 輕鏈可變區(VL)，其包含具有如SEQ ID NO: 509所示輕鏈可變區序列的CDR1、CDR2和CDR3，和重鏈可變區(VH)，其包含具有如SEQ ID NO: 510所示重鏈可變區序列的CDR1、CDR2和CDR3。
  21. 一種DLL3結合蛋白，該DLL3結合蛋白包含特異性地結合於DLL3之單鏈可變片段(scFv)部分，該scFv包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該scFv部分之該VH包含SEQ ID NO: 498中所示之CDR1、SEQ ID NO: 499中所示之CDR2及SEQ ID NO: 500中所示之CDR3，且該scFv部分之該VL包含SEQ ID NO: 495中所示之CDR1、SEQ ID NO: 496中所示之CDR2及SEQ ID NO: 497中所示之CDR3；或該scFv部分之該VH包含SEQ ID NO: 504中所示之CDR1、SEQ ID NO: 505中所示之CDR2及SEQ ID NO: 506中所示之CDR3，且該scFv部分之該VL包含SEQ ID NO: 501中所示之CDR1、SEQ ID NO: 502中所示之CDR2及SEQ ID NO: 503中所示之CDR3。
  22. 如請求項20或21之DLL3結合蛋白，其中該scFv部分之該VH包含與SEQ ID NO: 508中所示之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列，且該scFv部分之該VL包含與SEQ ID NO: 507中所示之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列；或該scFv部分之該VH包含與SEQ ID NO: 510中所示之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列，且該scFv部分之該VL包含與SEQ ID NO: 509中所示之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的胺基酸序列。
  23. 一種經分離之核酸分子，該經分離之核酸分子編碼如請求項1至16中任一項之CAR或如請求項17至22中任一項之DLL3結合蛋白。
  24. 如請求項23之經分離之核酸分子，其中該經分離之核酸分子包含選自由SEQ ID NO: 368-448、SEQ ID NO: 449-461、SEQ ID NO: 511-514組成之群的多核苷酸序列。
  25. 如請求項23至24中任一項之經分離之核酸分子，其中該核酸分子進一步包含編碼嵌合轉換受體(CSR)或顯性負性受體(DNR)之多核苷酸序列。
  26. 如請求項23至24中任一項之經分離之核酸分子，其中該核酸分子進一步包含編碼PD-1顯性負性受體(PD-1 DNR)、PD-1嵌合轉換受體(PD-1 CSR)或TGF-β顯性負性受體(TGF-β DNR)之多核苷酸序列。
  27. 如請求項26之經分離之核酸分子，其中該PD-1 DNR包含與SEQ ID NO: 523具有至少約95%序列一致性之胺基酸序列；該PD-1 CSR包含與SEQ ID NO: 524具有至少約95%序列一致性之胺基酸序列；該TGF-β DNR包含與SEQ ID NO: 529具有至少約95%序列一致性之胺基酸序列。
  28. 如請求項26至27中任一項之經分離之核酸分子，其中編碼該PD-1 DNR、該PD-1 CSR或該TGF-β DNR之該多核苷酸序列藉由編碼2A自裂解肽之多核苷酸序列連接至編碼該CAR之該多核苷酸序列。
  29. 如請求項28之經分離之核酸分子，其中該2A自裂解肽為T2A或P2A肽。
  30. 如請求項26至29中任一項之經分離之核酸分子，其中該核酸分子在5'至3'方向上包含編碼該CAR之多核苷酸序列、編碼該2A自裂解肽之多核苷酸序列以及編碼該PD-1 DNR、該PD-1 CSR或該TGF-β DNR之多核苷酸序列。
  31. 如請求項25至30中任一項之經分離之核酸分子，其中該核酸分子編碼與SEQ ID NO: 521或522具有至少約95%序列一致性之肽，或該核酸分子編碼與選自由SEQ ID NO: 525-528組成之群之胺基酸序列具有至少約95%序列一致性的肽。
  32. 一種表現載體，該表現載體包含如請求項23至31中任一項之經分離之核酸分子。
  33. 一種經工程改造之免疫細胞，該經工程改造之免疫細胞包含如請求項23至31中任一項之經分離之核酸分子或如請求項32之表現載體。
  34. 一種經工程改造之免疫細胞，該經工程改造之免疫細胞表現如請求項1至16中任一項之CAR。
  35. 如請求項34之經工程改造之免疫細胞，其中該經工程改造之免疫細胞亦表現CSR或DNR。
  36. 如請求項35之經工程改造之免疫細胞，其中該CSR為PD-1 CSR，該DNR為PD-1 DNR或TGF-β DNR。
  37. 如請求項33至36中任一項之經工程改造之免疫細胞，其中該經工程改造之免疫細胞係選自由以下組成之群：細胞毒性T細胞、輔助T細胞、自然殺手T細胞、γδ T細胞、NKT細胞及自然殺手細胞。
  38. 一種醫藥組合物，該醫藥組合物包含如請求項1至16中任一項之CAR、如請求項17至22中任一項之DLL3結合蛋白、如請求項32之表現載體或如請求項33至37中任一項之經工程改造之免疫細胞及生理學上可接受之賦形劑。
  39. 一種如請求項33至37中任一項之經工程改造之免疫細胞或治療有效量的如請求項38之醫藥組合物在製備用於治療患有DLL3相關病症之個體之藥物的用途。
  40. 如請求項39之用途，其中該DLL3相關病症為選自由以下組成之群的癌症：肺癌、黑素瘤、乳腺癌、前列腺癌、結腸癌、腎細胞癌、卵巢癌、神經母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、白血病及淋巴瘤。
  41. 如請求項39之用途，其中該DLL3相關病症為小細胞肺癌。
TW114114222A 2019-07-17 2020-07-17 抗ｄｌｌ３嵌合抗原受體及其用途 TW202535924A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2019096360 2019-07-17
CNPCT/CN2019/096360 2019-07-17
CNPCT/CN2020/090587 2020-05-15
CN2020090587 2020-05-15

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202535924A true TW202535924A (zh) 2025-09-16

Family

ID=74210175

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW109124309A TWI883026B (zh) 2019-07-17 2020-07-17 抗ｄｌｌ３嵌合抗原受體及其用途
TW114114222A TW202535924A (zh) 2019-07-17 2020-07-17 抗ｄｌｌ３嵌合抗原受體及其用途

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW109124309A TWI883026B (zh) 2019-07-17 2020-07-17 抗ｄｌｌ３嵌合抗原受體及其用途

Country Status (9)

Country Link
US (1) US12421292B2 (zh)
EP (2) EP3999550A4 (zh)
JP (3) JP7748933B2 (zh)
KR (1) KR20220035367A (zh)
CN (4) CN118420777A (zh)
AU (1) AU2020314509A1 (zh)
CA (1) CA3146019A1 (zh)
TW (2) TWI883026B (zh)
WO (1) WO2021008610A1 (zh)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117083067A (zh) * 2021-04-02 2023-11-17 南京传奇生物科技有限公司 工程化的免疫细胞及其用途
AU2022339815A1 (en) * 2021-09-02 2024-03-14 Memorial Hospital For Cancer And Allied Diseases Antigen recognizing receptors targeting dll3 and uses thereof
JP2025525421A (ja) * 2022-06-28 2025-08-05 カリスマ セラピューティクス インコーポレイテッド スイッチ受容体及び修飾免疫細胞
CN119907809A (zh) * 2022-07-08 2025-04-29 伊麦吉纳博公司 Dll3抗原结合构建体
AU2023329484A1 (en) * 2022-08-26 2025-02-20 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for delta-like ligand 3 (dll3)
CN115820698B (zh) * 2022-11-22 2025-01-21 浙江康佰裕生物科技有限公司 含有嵌合抗原受体和嵌合转换开关受体编码基因的融合基因及其应用
CN116004547B (zh) * 2023-03-06 2025-04-25 浙江康佰裕生物科技有限公司 一种辐照car-t细胞及其制备方法与应用
CN121152872A (zh) * 2023-05-10 2025-12-16 南京传奇生物科技有限公司 嵌合抗原受体及其使用方法
WO2025067338A1 (en) * 2023-09-26 2025-04-03 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Dll3 binding moieties and uses thereof
WO2025201493A1 (zh) * 2024-03-29 2025-10-02 诺纳生物（苏州）有限公司 Dll3结合分子及其用途
WO2025212519A1 (en) * 2024-04-01 2025-10-09 Moonlight Bio, Inc. Dll3 binding proteins and uses thereof
WO2025240849A1 (en) * 2024-05-16 2025-11-20 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Trem2 chimeric antigen receptors and uses thereof
CN119708238B (zh) * 2025-02-27 2025-07-04 昕传生物科技(北京)有限公司 靶向dll3的抗体、嵌合抗原受体及其应用

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
WO1999029888A1 (en) 1997-12-05 1999-06-17 The Scripps Research Institute Humanization of murine antibody
MA41613A (fr) 2015-02-23 2018-01-02 Abbvie Stemcentrx Llc Récepteurs antigéniques chimériques anti-dll3 et procédés d'utilisation desdits récepteurs
CN105153315B (zh) 2015-10-09 2019-04-02 重庆精准生物技术有限公司 免疫抑制受体联合肿瘤抗原嵌合受体及其应用
WO2018044866A1 (en) 2016-08-30 2018-03-08 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Immune cell compositions and methods of use for treating viral and other infections
CN108276493B (zh) * 2016-12-30 2023-11-14 南京传奇生物科技有限公司 一种嵌合抗原受体及其应用
US20210095029A1 (en) * 2017-04-19 2021-04-01 University Of Southern California Compositions and methods for treating cancer
BR112020005938A2 (pt) * 2017-09-27 2020-11-17 University Of Southern California célula imune ou população de células imunes da mesma, célula efetora imune ou célula-tronco, célula que apresenta antígeno, polinucleotídeo recombinante, vetor, composição que compreende uma célula imune efetora ou uma célula-tronco, métodos para produzir uma célula efetora imune que expressa receptor imune de ocorrência não natural, para gerar uma população de células manipuladas por rna, para fornecer imunidade antidoença em um indivíduo, para tratar ou prevenir uma doença associada à expressão de um antígeno, e, uso
EP3774921A4 (en) * 2018-04-03 2022-01-05 Dragonfly Therapeutics, Inc. ANTIBODY VARIABLE DOMAINS AGAINST DLL3 AND USE OF IT
EP3773912A1 (en) 2018-04-10 2021-02-17 Amgen Inc. Chimeric receptors to dll3 and methods of use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
EP3999550A4 (en) 2023-09-06
JP2025069305A (ja) 2025-04-30
CN114072427B (zh) 2024-04-26
EP3999550A1 (en) 2022-05-25
TWI883026B (zh) 2025-05-11
CN114072427A (zh) 2022-02-18
JP7748933B2 (ja) 2025-10-03
TW202116812A (zh) 2021-05-01
CN118420777A (zh) 2024-08-02
EP4527466A2 (en) 2025-03-26
KR20220035367A (ko) 2022-03-22
US20220249563A1 (en) 2022-08-11
CN118496374A (zh) 2024-08-16
AU2020314509A1 (en) 2022-01-06
JP2022542543A (ja) 2022-10-05
WO2021008610A1 (en) 2021-01-21
US12421292B2 (en) 2025-09-23
EP4527466A3 (en) 2025-06-18
CN117106099A (zh) 2023-11-24
CA3146019A1 (en) 2021-01-21
JP2026001061A (ja) 2026-01-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12421292B2 (en) Anti-DLL3 chimeric antigen receptors and uses thereof
JP2022105558A (ja) 新規のポリペプチド
CN111094350B (zh) 调节由细胞表达的生物活性的抗体
CN112639102A (zh) 抗间皮素嵌合抗原受体(car)构建体及其用途
WO2020147451A1 (zh) 抗cld18a2纳米抗体及其应用
KR20210110339A (ko) 클라우딘18.2 결합 모이어티 및 그 용도
TW202023580A (zh) 使用靶特異性融合蛋白進行ｔｃｒ再程式化之組合物及方法
CN113195542A (zh) Cd30-结合部分、嵌合抗原受体及其用途
CN119894930A (zh) 一种双特异性抗体及其应用
US20230265185A1 (en) Anti-cd22 single domain antibodies and therapeutic constructs
HK40110781A (zh) 一种抗dll3嵌合抗原受体及其用途
HK40110214A (zh) 一种抗dll3嵌合抗原受体及其用途
HK40098926A (zh) 一种抗dll3嵌合抗原受体及其用途
HK40065826B (zh) 抗dll3嵌合抗原受体及其用途
HK40065826A (zh) 抗dll3嵌合抗原受体及其用途
WO2024230793A1 (en) Chimeric antigen receptors and methods of use thereof
KR20260016889A (ko) B7-h3을 표적하는 항체, 및 이를 포함하는 키메라 항원 수용체
WO2026022767A1 (ko) B7-h3을 표적하는 항체, 및 이를 포함하는 키메라 항원 수용체
EP4141028A1 (en) Personalized vnar-based chimeric antigen receptors (vnar-car) for the treatment of clonal b-and t cell malignancies, and methods for producing vnar-cars
WO2025133609A1 (en) Polypeptide binding glypican-3
CN120137042A (zh) 一种抗st2单克隆抗体与应用
WO2024230776A1 (zh) Bcmap329g抗体及car-t细胞在治疗多发性骨髓瘤中的应用
WO2023199927A1 (ja) がん治療におけるｐｄ－１シグナル阻害剤との組み合わせによる抗ｔｓｐａｎ８－抗ｃｄ３二重特異性抗体の使用
WO2022262749A1 (zh) 靶向pd1和/或ox40的特异性结合蛋白
HK40101561A (zh) 人ccr8结合剂