[go: up one dir, main page]

TW202502306A - Gpx4抑制劑與抗衰老化合物及其用途 - Google Patents

Gpx4抑制劑與抗衰老化合物及其用途 Download PDF

Info

Publication number
TW202502306A
TW202502306A TW113120356A TW113120356A TW202502306A TW 202502306 A TW202502306 A TW 202502306A TW 113120356 A TW113120356 A TW 113120356A TW 113120356 A TW113120356 A TW 113120356A TW 202502306 A TW202502306 A TW 202502306A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
substituted
aryl
alkyl
cycloheteroalkyl
cycloalkyl
Prior art date
Application number
TW113120356A
Other languages
English (en)
Inventor
艾伯托 克雷蒙特 維塔利
麥寇 哈德
朱里安 丹尼爾 迪埃瑪 克連
保羅 凱茲
永仙 莊
奧弗 莫雷諾
瑪科 夸塔
Original Assignee
美商魯貝多生命科學公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商魯貝多生命科學公司 filed Critical 美商魯貝多生命科學公司
Publication of TW202502306A publication Critical patent/TW202502306A/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/18—Acyclic radicals, substituted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane
    • C07J1/0051—Estrane derivatives
    • C07J1/0081—Substituted in position 17 alfa and 17 beta
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane
    • C07J1/0051—Estrane derivatives
    • C07J1/0081—Substituted in position 17 alfa and 17 beta
    • C07J1/0088—Substituted in position 17 alfa and 17 beta the substituent in position 17 alfa being an unsaturated hydrocarbon group
    • C07J1/0096—Alkynyl derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J31/00—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J31/006—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J31/003
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0005—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring the nitrogen atom being directly linked to the cyclopenta(a)hydro phenanthrene skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0005—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring the nitrogen atom being directly linked to the cyclopenta(a)hydro phenanthrene skeleton
    • C07J41/0016—Oximes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J43/00—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J43/003—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not condensed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J51/00—Normal steroids with unmodified cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not provided for in groups C07J1/00 - C07J43/00

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本發明係關於殺死衰老細胞之化合物(亦即抗衰老化合物)及抑制GPX4之化合物。本發明亦提供用於治療衰老相關疾病或病症之化合物及方法，及用於治療受GPX4影響之疾病或病症的化合物及方法。

Description

GPX4抑制劑與抗衰老化合物及其用途
本發明係關於殺死衰老細胞之化合物(亦即抗衰老化合物)及抑制GPX4之化合物。本發明亦提供用於治療衰老相關疾病或病症之化合物及方法，及用於治療受GPX4影響之疾病或病症的化合物及方法。
衰老係一種細胞程序，它會對受損或老化細胞施加穩定阻滯，以阻止該等細胞複製。除生長阻滯外，衰老細胞亦經歷深遠表型變化，包括染色體重組、β-半乳糖苷酶活性增加(稱為衰老相關β-半乳糖苷酶或SA-β-Gal)及多個主要促炎性之因子的分泌，其統稱為衰老相關分泌表型(SASP)。
複製性衰老在細胞於培養物中連續傳代時(或當細胞在生物體中變得老化時)被活化。衰老亦由例如致癌基因活化、輻射及暴露於化學治療藥物誘導。另外，存在誘導衰老之數種藥物，原型實例係CDK4/CDK6抑制劑，諸如帕博希布(Palbociclib)。
衰老之穩定生長阻滯特徵藉由p16/Rb及p53/p21路徑之活化實施。週期蛋白依賴性激酶抑制劑p16 INK4a及p21Cip1抑制CDK活性，引起Rb低磷酸化及G1生長阻滯(Kuilman等人, Genes Dev 2010 24, 2453-2479)。此外，p16 INK4a在衰老期間經特異性誘導且單獨地或與其他標記物諸如SA-β-Gal活性、衰老相關異染色質病灶(SAHF)形成及其他者組合用於鑑別衰老細胞。
衰老細胞隨年齡而積累且與許多疾病相關，包括癌症、纖維化及許多年齡相關病理。最近證據表明，衰老細胞在多種病理中係有害的，且消除衰老細胞帶來許多優點，可改善多種病理且延長壽命。
衰老細胞存在於許多腫瘤前病變、纖維化組織(例如肝臟、腎臟、心臟、胰腺中)及老齡組織中。衰老細胞亦與一長串其他病理相關，包括神經病理(例如腦動脈瘤、阿茲海默氏症及帕金森氏症)、肺病理(例如特發性肺纖維化、慢性阻塞性肺病及囊腫纖維化)、眼科病理(例如白內障、青光眼、黃斑變性)、肌肉骨骼病理(例如肌肉減少症、椎間盤退行性病變、骨關節炎)、心血管病理(例如動脈粥樣硬化、心臟纖維化、主動脈動脈瘤)、腎病理(例如腎臟疾病、移植併發症)，及其他病理諸如糖尿病、黏膜炎、高血壓及骨髓纖維瘤(OMF)。雖然衰老細胞對癌症具有保護作用且限制大多數類型之纖維化，但認為衰老細胞隨年齡且隨許多其他疾病而積累係有害的。
一系列來自van Deursen實驗室之研究為衰老細胞之許多有害影響(及其選擇性消除所帶來之益處)提供了證據(Baker等人, Nature 2016 530, 184-189；Baker等人, Nature 2011 479, 232-236；Childs等人, Science 2016 354, 472-477)。此等研究使用特異性表現衰老細胞上之誘導性融合蛋白的轉殖基因小鼠(INK4-ATTAC小鼠) (利用p16 Ink4a之啟動子)。此融合蛋白之活化藉由添加觸發其二聚之藥物而引起衰老細胞之選擇性死亡。
藉由使用以上小鼠模型，衰老細胞之清除藉由減弱多種年齡相關病理而增加壽命(Baker等人, Nature 2016 530, 184-189；Baker等人, Nature 2011 479, 232-236；Childs等人, 2016 Science 354, 472-477)。衰老細胞之清除延緩了腫瘤發生，及減弱白內障形成、動脈粥樣硬化及其他器官中之腎臟、脂肪及心臟之年齡相關惡化。用INK4-ATTAC小鼠獲得之結果已部分複製於不同小鼠模型中，其中以衰老細胞(3MR小鼠)表現tk轉殖基因，從而允許該等細胞在更昔洛韋治療之後選擇性消除(Demaria等人, Dev Cell 2014 31, 722-733)。此外，在化學療法中消除衰老細胞減少了癌症復發及與化學療法相關之副作用。重要的是，若衰老細胞在癒合過程期間被消除，則衰老細胞之消除無除延緩傷口癒合以外之副作用(Baker等人, Nature 2016 530, 184-189；Demaria等人, Dev Cell 2014 31, 722-733)。然而，統一普遍假設為衰老細胞分泌之(促炎性)因子妨礙組織穩態。此表明由衰老細胞介導之常見機制可能係許多年齡相關病理影響的原因。
概念驗證研究已鑑別出可選擇性地消除衰老細胞之化合物(所謂「抗衰老劑(senolytics)」)。迄今為止已鑑別出數種抗衰老化合物，包括達沙替尼(dasatinib)及槲皮素、蓽茇醯胺及Bcl2家族抑制劑諸如ABT-263及ABT-737。當前，Bcl2家族抑制劑為最具前景之抗衰老劑，已展示能在活體內殺死一系列衰老細胞，且在轉殖基因小鼠中具有可再現之效應。Bcl2抑制劑最初經開發為用於淋巴瘤治療。ABT-737為BCL-2、BCL-XL及BCL-w之小分子抑制劑，但具有低溶解度及口服生物可用性。ABT-263抑制相同分子且較適合於活體內使用，但作為副作用引起顯著血小板減少。
鐵積累係已在多種衰老細胞條件下觀測到之另一跡象。舉例而言，活體外產生之複製及應激誘導之衰老細胞模型展示細胞內鐵含量增加高達三十倍(Killea等人, Ann. N.Y. Acad. Sci. 2004, 1019: 365-267；及Masaldan等人, Redox Biol. 2018 100-115)。衰老細胞展示上調運鐵蛋白受體及鐵蛋白亞基之表現，此可有助於觀測到溶酶體中之高含量鐵蛋白結合鐵之積累(Masaldan等人, Redox Biol. 2018, 100-115)。
對細胞組分之氧化損傷的主要來源為藉由呼吸鏈作為副產物產生之反應性含氧物種(ROS)及自由基及經由芬頓反應(Fenton reaction)反應以產生氧化中間物(Fe 2 ++ H 2O 2→Fe 3 ++ •OH + OH-)之二價鐵。此一致，據報導衰老細胞積累高度氧化及共價交聯之聚集體，諸如脂褐質及神經原纖維纏結(Flor等人, Cell Death Disc. 2017 3:17075；Bae等人, Exp Mol Med. 2022, 54(6): 788-800；及Dekhrodi等人, Nat. Aging 2021 (1)12: 11107-1116)。此外，二價鐵與還原當量之來源可與多不飽和脂質上之雙烯丙基氫反應，在脂質鏈上產生以碳為中心之自由基，此可引起一系列傳播及鏈分支化反應。細胞膜處脂質過氧化物之積累最終會引起膜滲透及細胞死亡，且已被描述為稱為「鐵死亡(ferroptosis)」之特定形式之氧化非凋亡細胞死亡(Stockwell, Cell 2022 185(14): 2401-2421)。
基於本發明證據，脂質過氧化之生物化學事件表示受控之生物過程，其涉及氧、膜磷脂、二價鐵、麩胱甘肽(GSH)、GSH依賴性脂質氫過氧化麩胱甘肽過氧化酶4 (GPX4)、α-生育酚及輔酶Q10 (CoQ10) (Bersuker等人, Nature 2019 575:688-692；Seibt等人, Free Radic Biol Med. 2019 133: 133-144；及Polotrack等人, FEBS J. 2022 289*2):374-385)。特定言之，麩胱甘肽過氧化酶4 (GPX4)已確立為鐵依賴性脂質過氧化及鐵死亡之關鍵酶調節劑(Malorino等人, Antioxid Redox Signal. 2018 29(1): 61-74)。GPX4含有硒半胱胺酸-麩醯胺酸-色胺酸催化三聯體，其將氫過氧化物還原為無毒醇。與其他麩胱甘肽過氧化酶家族成員不同，GPX4與膜結合，其在該膜中將磷脂氫過氧化物還原為磷脂羥基，藉此保護細胞膜免受氧化損傷且負向調節鐵死亡(Cozza等人, Free Radic Biol Med. 2017 112: 1-11；及Lebrecque等人, Biochemistry 2021 60 (37): 2761-2772)。
鐵死亡充當天然腫瘤遏制及免疫監視機制且可藉由結合於GPX4之試劑誘導。藉由選擇性地抑制GPX4誘導鐵死亡可選擇性地靶向癌細胞，包括具有間質特徵及多重治療耐藥性之癌症(Viswananthan等人, Nature, 2017, 547: 453-457；Hangauer等人, Nature, 2017, 561: 247-250；及Lui等人, Biochemistry 2018, 57, 14, 2059-2060)。
因此，需要鑑別更多化合物及具有抗衰老特性之多類化合物及/或抑制GPX-4之化合物。
在一個態樣中，提供一種滿足此等及其他需要之式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中R 1為-OR 36、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；R 2為-H、-CN、-CO 2R 7、-CONR 8R 9、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；各R 3及R 4獨立地為H、-F或烷基；n為1或2；R 5為-H、-CO 2R 10、-C(O)R 11、-CONR 12R 13、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；R 6為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基，或當X為=O或=NR 14時不存在；R 27為氫、鹵基、烷基、經取代之烷基、雜烷基、經取代之雜烷基、-NR 28R 29、-NCONR 30R 31、-CONR 32R 33、-CO 2R 34、-NCO 2R 35；X為=O、=NR 14或-OR 15；R 14為-OR 16、-NR 17R 18或-N +R 40R 41R 42；R 7-R 10、R 12、R 13、R 15及R 28-R 36獨立地為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基，或視情況R 8及R 9、R 12及R 13、R 28及R 29、R 30及R 31、R 32及R 33與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環；R 11為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；R 16為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基、經取代之雜芳基炔基，或為碳水化合物衍生物；R 17及R 18獨立地為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基、經取代之雜芳基炔基、碳水化合物衍生物、R 19CO-、R 20R 21NCO-、R 22OCO-或R 23SO 2-，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代且R 17及R 18兩者均不為R 19CO-、R 21R 20NCO-、R 22OCO-或R 23SO 2-或其任何組合；R 19為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基、經取代之雜芳基炔基或碳水化合物衍生物，或視情況R 19及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代；R 20及R 21獨立地為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基或碳水化合物衍生物，或視情況R 20及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基或經取代之環雜烷基環，其視情況經=O取代，或視情況R 20及R 21與其所連接之原子一起形成環雜烷基或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代；R 22為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基、經取代之雜芳基炔基或碳水化合物衍生物，或視情況R 22及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代；且R 23為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代，或視情況R 23及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代；且R 40、R 41及R 42為烷基。
在另一態樣中，提供一種滿足此等及其他需要之式(II)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、N-氧化物、水合物或溶劑合物，其中R 100為-H、-CO 2R 107、-C(O)R 108、-CONR 109R 110、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；R 101為-OR 130、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；R 102為-H、-CN、-CO 2R 111、-CONR 112R 113、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；各R 103及R 104獨立地為H、-F或烷基，其限制條件為R 103及R 104中之至少一者為-F；q為1或2；R 105為-H、-CO 2R 114、-C(O)R 115、-CONR 116R 117、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；各R 106獨立地為-H、-CO 2R 118、-C(O)R 119、-CONR 120R 121、OR 122、-NR 123R 124、-NHR 125R 126C(O)R 127、-SO 2NR 128R 129、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、鹵基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；s為0、1或2；R 109-R 113、R 116-R 118、R 120-R 126、R 128-R 130獨立地為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；R 107、R 108、R 114、R 115、R 116及R 127獨立地為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基。
亦提供本文中所描述之化合物之衍生物，包括鹽、酯、烯醇醚、烯醇酯、溶劑合物、水合物、代謝物及前藥。進一步提供醫藥組合物，其包括本文中所提供之化合物及醫藥學上可接受之媒劑。
在又另一個態樣中，提供治療、預防或改善諸如衰老相關之疾病或病症及受GPX4影響之疾病或病症的醫學病症之症狀的方法。
相關申請案之交叉參考
本申請案根據35 U.S.C. § 119 (e)主張分別於2023年5月31日、2024年3月20日及2024年4月1日遞交之美國臨時申請案第63/505,128號、第63/567,749號及第63/572,605號之優先權，該等美國臨時申請案以全文引用之方式併入本文中用於所有目的。 定義
除非另外定義，否則本文中所使用之所有技術及科學術語均具有與一般熟習本發明所屬技術者通常所理解相同之含義。若本文中存在關於一個術語之複數個定義，則除非另外陳述，否則以此章節中之定義為準。
本文中所使用且除非另外說明，否則術語「約」及「大致」在與具有數值或值範圍之性質結合使用時指示值或值範圍可在一般熟習此項技術者認為合理的程度上偏離而仍描述特定性質。特定言之，當在此情形中使用時，術語「約」及「大致」指示數值或值範圍可與所述值或值範圍相差5%、4%、3%、2%、1%、0.9%、0.8%、0.7%、0.6%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%或0.1%。此外，除非上下文另外明確規定，否則單數形式「一(a)」及「該(the)」包括複數個參考物。因此，例如提及「該化合物」包括複數種此類化合物且提及「該分析」包括提及一或多個分析及熟習此項技術者已知之其等效物。
不在兩個字母或符號之間的短劃線(「-」)係用於指示取代基之連接點。舉例而言，-C(O)NH 2經由碳原子連接。在化學基團之前端或末端處之短劃線係出於方便之目的；可在具有或不具有一或多個短劃線之情況下描繪化學基團而不會丟失其普通含義。穿過結構中之線繪製的波浪線指示基團之連接點。除非在化學上或結構上需要，否則化學基團所書寫或命名之次序不指示或暗示方向性。
字首「C u-v」指示隨後的基團具有u至v個碳原子。應理解，u至v個碳包括u+1至v、u+2至v、u+3至v等個碳，u+1至u+3至v、u+1至u+4至v、u+2至u+4至v等且涵蓋u及v之所有可能排列。
本文所使用之「老化之特徵」包括但不限於免疫系統之全身性下降、肌肉萎縮及肌肉肌力降低、皮膚彈性降低、傷口癒合延遲、視網膜萎縮、晶狀體透明度降低、聽力下降、骨質疏鬆、肌肉減少症、頭髮變白、皮膚起皺、視力不佳、虛弱及認知障礙。
本文所使用之「年齡相關疾病或病況」包括但不限於退化疾病或降低功能之病症，諸如阿茲海默氏症、帕金森氏症、白內障、黃斑變性、青光眼、虛弱、肌無力、認知障礙、動脈粥樣硬化、急性冠狀動脈症候群、心肌梗塞、中風、高血壓、特發性肺纖維化(IPF)、慢性阻塞性肺病(COPD)、骨關節炎、2型糖尿病、肥胖症、脂肪功能障礙、冠狀動脈疾病、腦血管疾病、牙周病、 癌症治療相關失能，諸如各種組織萎縮及纖維化、腦及心臟損傷及治療相關骨髓發育不良症候群，及與加速老化及/或DNA損傷修復中之缺陷相關的疾病，及端粒維持，諸如早衰症候群(亦即，哈欽森-吉爾福德氏早衰症候群(Hutchinson-Gilford progeria syndrome)、維爾納症候群(Werner syndrome)、布魯姆症候群(Bloom syndrome)、羅姆蒙-托馬森症候群(Rothmund-Thomson Syndrome)、柯凱因氏症候群(Cockayne syndrome)、著色性乾皮病(xeroderma pigmentosum)、毛髮低硫失養症(trichothiodystrophy)、混合性著色性乾皮病-柯凱因氏症候群、限制性皮膚病)、共濟失調毛細血管擴張、範可尼貧血(Fanconi anemia)、弗里德賴希共濟失調(Friedreich's ataxia)、先天性角化不良、再生不良性貧血及其他。
「烷基」本身或作為另一取代基之一部分係指藉由自母烷烴之單一碳原子移除一個氫原子而衍生之飽和、分支鏈或直鏈單價烴基。典型烷基包括但不限於甲基；乙基；丙基，諸如丙-1-基及丙-2-基等；丁基，諸如丁-1-基、丁-2-基、2-甲基-丙-1-基、2-甲基-丙-2-基等；及類似基團。在一些態樣中，烷基包含1至20個碳原子(C 1-C 20烷基)。在其他態樣中，烷基包含1至10個碳原子(C 1-C 10烷基)。在又其他態樣中，烷基包含1至6個碳原子(C 1-C 6烷基)。
「烯基」本身或作為另一取代基之一部分係指藉由自母烯烴之單一碳原子移除一個氫原子而衍生之具有至少一個碳-碳雙鍵的不飽和分支鏈、直鏈。基團可在雙鍵周圍呈順式或反式構形。典型烯基包括但不限於乙烯基；丙烯基，諸如丙-1-烯-1-基、丙-1-烯-2-基、丙-2-烯-1-基(烯丙基)、丙-2-烯-2-基；丁烯基，諸如丁-1-烯-1-基、丁-1-烯-2-基、2-甲基-丙-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-2-基、丁-1,3-二烯-1-基、丁-1,3-二烯-2-基；及其類似基團。在一些態樣中，烯基包含2至20個碳原子(C 2-C 20烯基)。在其他態樣中，烯基包含2至10個碳原子(C 2-C 10烯基)。在又其他態樣中，烯基包含2至6個碳原子(C 2-C 6烯基)。
「炔基」本身或作為另一取代基之一部分係指藉由自母炔烴之單一碳原子移除一個氫原子而衍生之具有至少一個碳-碳參鍵的不飽和分支鏈、直鏈。典型炔基包括但不限於乙炔基；丙炔基，諸如丙-1-炔-1-基、丙-2-炔-1-基等；丁炔基，諸如丁-1-炔-1-基、丁-1-炔-3-基、丁-3-炔-1-基等；及其類似基團。在一些態樣中，炔基包含2至20個碳原子(C 2-C 20炔基)。在其他態樣中，炔基包含2至10個碳原子(C 2-C 10炔基)。在又其他態樣中，炔基包含2至6個碳原子(C 2-C 6炔基)。
「芳基」本身或作為另一取代基之一部分係指藉由自本文中所定義之母芳環系統之單一碳原子移除一個氫原子而衍生之單價芳族烴基。典型芳基包括但不限於來源於以下之基團：乙烯合蒽、乙烯合萘、乙烯合菲、蒽、薁、苯、䓛、六苯并苯、丙二烯合茀、茀、稠六苯(hexacene)、六苯(hexaphene)、己二烯(hexalene)、as-二環戊二烯并苯、s-二環戊二烯并苯、茚烷、茚、萘、稠八苯(octacene)、八苯(octaphene)、辛搭烯(octalene)、卵苯、稠五苯(pentacene)、戊搭烯(pentalene)、五苯(pentaphene)、苝、萉(phenalene)、菲、苉、七曜烯、芘、吡蒽、茹(rubicene)、聯伸三苯、三萘及其類似基團。在一些態樣中，芳基包含6至30個碳原子(C 6-C 30芳基)。在其他態樣中，芳基包含6至20個碳原子(C 6-C 20芳基)。在又其他態樣中，芳基包含6至15個碳原子(C 6-C 15芳基)。在又其他態樣中，芳基包含6至10個碳原子(C 6-C 10芳基)。
「芳基烷基」本身或作為另一取代基之一部分係指其中一個鍵結至碳原子(通常末端或 sp 3 碳原子)之氫原子由本文中所定義之芳基置換之非環狀烷基。典型芳基烷基包括但不限於苯甲基、2-苯基乙-1-基、1-苯基伸乙-1-基、萘基甲基、2-萘基乙-1-基、1-萘基伸乙-1-基、萘并苯甲基、2-萘并苯基乙-1-基及其類似基團。在一些態樣中，芳基烷基為(C 7-C 40)芳基烷基，例如芳基烷基之烷基部分為(C 1-C 10)烷基且芳基部分為(C 6-C 30)芳基。在其他態樣中，芳基烷基為(C 7-C 30)芳基烷基，例如芳基烷基之烷基部分為(C 1-C 10)烷基且芳基部分為(C 6-C 20)芳基。在其他態樣中，芳基烷基為(C 7-C 20)芳基烷基，例如芳基烷基之烷基部分為(C 1-C 8)烷基且芳基部分為(C 6-C 12)芳基。在又其他態樣中，芳基烷基為(C 7-C 15)芳基烷基，例如芳基烷基之烷基部分為(C 1-C 5)烷基且芳基部分為(C 6-C 10)芳基。
「芳基烯基」本身或作為另一取代基之一部分係指其中一個鍵結至碳原子之氫原子由本文中所定義之芳基置換之非環狀烯基。在一些態樣中，芳基烯基為(C 8-C 40)芳基烯基，例如芳基烯基之烯基部分為(C 2-C 10)烯基且芳基部分為(C 6-C 30)芳基。在其他態樣中，芳基烯基為(C 8-C 30)芳基烯基，例如芳基烯基中之烯基部分為(C 2-C 10)烯基且芳基部分為(C 8-C 20)芳基。在一些態樣中，芳基烯基為(C 8-C 20)芳基烯基，例如芳基烯基中之烯基部分為(C 2-C 8)烯基且芳基部分為(C 6-C 12)芳基。在又其他態樣中，芳基烯基為(C 8-C 15)芳基烯基，例如芳基烯基中之烯基部分為(C 2-C 5)烯基且芳基部分為(C 6-C 10)芳基。
「芳基炔基」本身或作為另一取代基之一部分係指其中一個鍵結至碳原子之氫原子由本文中所定義之芳基置換之非環狀炔基。在一些態樣中，芳基炔基為(C 8-C 40)芳基炔基，例如芳基炔基之炔基部分為(C 2-C 10)炔基且芳基部分為(C 6-C 30)芳基。在其他態樣中，芳基炔基為(C 8-C 30)芳基炔基，例如芳基炔基之炔基部分為(C 2-C 10)炔基且芳基部分為(C 6-C 20)芳基。在其他態樣中，芳基炔基為(C 8-C 20)芳基炔基，例如芳基炔基之炔基部分為(C 2-C 8)炔基且芳基部分為(C 6-C 12)芳基。在又其他態樣中，芳基炔基為(C 8-C 15)芳基炔基，例如芳基炔基之炔基部分為(C 2-C 5)炔基且芳基部分為(C 6-C 10)芳基。
「碳水化合物衍生物」係指連接至化合物之基團之通式C nH 2nO n的碳水化合物。在一些實施例中，碳水化合物衍生物通常含有五個或六個碳原子。在其他實施例中，碳水化合物衍生物為單醣(例如葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖)。在又其他實施例中，碳水化合物衍生物包括雙醣(例如乳糖、蔗糖、麥芽糖、纖維二糖、殼二糖、龍膽二糖等)。在又其他實施例中，碳水化合物衍生物包括寡醣(例如果寡糖、寡半乳糖、棉子糖、硬糖(plantose)、維糖(veracose)等)。在其他實施例中，碳水化合物衍生物包括多醣(例如纖維素、直鏈澱粉、澱粉、幾丁質、果膠、半乳糖原(galactogen)等)。在又其他實施例中，碳水化合物衍生物包括受保護碳水化合物，諸如酯(例如乙酸酯或苯甲酸酯等)、矽烷基衍生物或受任何其他已知的其他醇保護基團保護之碳水化合物。
「化合物」係指由本文中所揭示之結構式涵蓋之化合物且包括屬於具有本文中所揭示之結構之此等化學式之範圍內之任何特定化合物。化合物可藉由其化學結構及/或化學名稱來鑑別。化學結構決定化合物之身分。本文中所描述之化合物可含有一或多個對掌性中心及/或雙鍵，且因此可以立體異構體之形式存在，諸如雙鍵異構體(亦即，幾何異構體)、鏡像異構體或非鏡像異構體。因此，本文中所描繪之化學結構涵蓋結構中所描繪之立體異構純形式(例如，幾何學上純、鏡像異構純或非鏡像異構純)。本文中所描繪之化學結構亦涵蓋所描繪之化合物之鏡像異構及立體異構衍生物。鏡像異構及立體異構混合物可使用熟習此項技術者熟知之分離技術或對掌性合成技術解析為其組分鏡像異構體或立體異構體。化合物亦可以若干互變異構形式存在，該等形式包括烯醇形式、酮形式及其混合物。因此，本文中所描繪之化學結構涵蓋所說明之化合物之所有可能的互變異構形式。所描述之化合物亦包括經同位素標記之化合物，其中一或多個原子具有與習知地在自然界中發現之原子質量不同的原子質量。可併入本文中所揭示之化合物的同位素之實例包括但不限於 2H、 3H、 11C、 13C、 14C、 15N、 18O、 17O等。化合物可以非溶合形式及溶合形式(包括水合形式)存在。通常，化合物可為水合或溶合的。某些化合物可以多結晶或非晶形式存在。通常，所有物理形式皆等效地用於本文中所涵蓋之用途且意欲屬於本揭示內容之範疇內。此外，應理解，當說明化合物之部分結構時，括號指示部分結構與分子之其餘部分之連接點。
「環烷基」本身或作為另一取代基之一部分係指藉由自母環烷之單一碳原子移除一個氫原子而衍生之飽和環狀單價烴基。典型環烷基包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基等；及其類似基團。在一些態樣中，環烷基包含3至20個碳原子(C 3-C 15環烷基)。在其他態樣中，環烷基包含3至10個碳原子(C 3-C 10環烷基)。在又其他態樣中，環烷基包含3至8個碳原子(C 3-C 8環烷基)。術語「環狀單價烴基」亦包括多環狀烴環系統，其具有單一自由基及5至12個碳原子。例示性多環狀環烷基環包括例如降𦯉)、松油基及金剛烷基。
「環烯基」本身或作為另一取代基之一部分係指藉由自母環烯之單一碳原子移除一個氫原子而衍生之不飽和環狀單價烴基。典型環烯基包括但不限於環丙烯基、環丁烯基、環戊烯基等；及其類似基團。在一些態樣中，環烯基包含3至20個碳原子(C 3-C 20環烯基)。在其他態樣中，環烯基包含3至10個碳原子(C 3-C 10環烯基)。在又其他態樣中，環烯基包含3至8個碳原子(C 3-C 8環烯基)。
「環雜烷基」本身或作為另一取代基之一部分係指其中一或多個碳原子(及視情況任何相關氫原子)各自彼此獨立地由相同或不同雜原子或雜原子基團(下文中所定義之「雜烷基」)置換之本文中所定義之環烷基。在一些態樣中，環雜烷基包含3至20個碳原子及雜原子( 3-20環雜烷基)。在其他態樣中，環雜烷基包含3至10個碳原子及雜原子( 3-10環雜烷基)。在又其他態樣中，環雜烷基包含3至8個碳原子及雜原子( 3-8環雜烷基)。術語「環狀單價雜烷基」亦包括具有單一基團及3至12個碳與至少一個雜原子之多環雜烷基環系統。例示性環雜烷基包括例如氮雜環丁烷、吡咯啶、哌𠯤、哌啶、𠰌啉及四氫呋喃。
「環雜烯基」本身或作為另一取代基之一部分係指其中一或多個碳原子(及視情況任何相關氫原子)各自彼此獨立地由相同或不同雜原子或雜原子基團(下文中所定義之「雜烯基」)置換之本文中所定義之環烯基。在一些態樣中，環雜烯基包含3至20個碳原子及雜原子( 3-20環雜烯基)。在其他態樣中，環雜烯基包含3至10個碳原子及雜原子( 3-10環雜烯基)。在又其他態樣中，環雜烯基包含3至8個碳原子及雜原子( 3-8環雜烯基)。術語「環狀單價雜烯基」亦包括具有單一基團及2至12個碳與至少一個雜原子之多環雜烯基環系統。
本文所使用之「DNA損傷療法」包括但不限於伽瑪輻射；烷基化劑，諸如氮芥(例如苯丁酸氮芥、環磷醯胺、異環磷醯胺、美法侖)、亞硝基脲(鏈脲佐菌素、卡莫司汀、洛莫司汀)、烷基磺酸酯(例如白消安)、三𠯤(達卡巴𠯤、替莫唑胺)及伸乙亞胺(例如噻替派、六甲蜜胺(altretamine))；鉑藥物，諸如順鉑、卡鉑、奧沙利鉑(oxalaplatin)；抗代謝物，諸如5-氟尿嘧啶、6-巰基嘌呤、卡培他濱、克拉屈濱、氯達拉賓、阿糖胞苷、氟尿苷、氟達拉賓、吉西他濱、羥基脲、甲胺喋呤、培美曲塞、噴司他丁、硫鳥嘌呤；蒽環黴素，諸如道諾黴素、阿黴素、表柔比星、艾達黴素、抗腫瘤抗生素(諸如放射菌素-D)、博萊黴素、絲裂黴素-C、米托蒽醌；拓樸異構酶抑制劑，諸如拓樸異構酶I抑制劑(例如拓樸替康、伊立替康)及拓樸異構酶II抑制劑(例如依託泊苷、替尼泊甙、米托蒽醌)；有絲分裂抑制劑，諸如紫杉烷(例如太平洋紫杉醇、多西他賽)、埃坡黴素(例如伊沙匹隆)、長春花生物鹼(例如長春鹼、長春新鹼、長春瑞濱)及雌氮芥。
「鹵基」本身或作為另一取代基之一部分係指自由基-F、-Cl、-Br或-I。
「雜烷基」係指其中一或多個碳原子(及視情況任何相關氫原子)各自彼此獨立地由相同或不同雜原子或雜原子基團置換之烷基。可置換碳原子之典型雜原子或雜原子基團包括但不限於-O-、-S-、-N-、-Si-、-NH-、-S(O)-、-S(O) 2-、-S(O)NH-、-S(O) 2NH-及其類似物及其組合。雜原子或雜原子基團可位於烷基、烯基或炔基之任何內部位置。可包括於此等基團中之典型雜原子基團包括但不限於-O-、-S-、-O-O-、-S-S-、-O-S-、-NR 501R 502、=N-N=、-N=N-、-N=N-NR 503R 404、-PR 505-、-P(O) 2-、-POR 506-、-O-P(O) 2-、-SO-、-SO 2-、-SnR 507R 508及類似基團，其中R 501、R 502、R 503、R 504、R 505、R 506、R 507及R 508獨立地為氫、烷基、芳基、經取代之芳基、雜烷基、雜芳基或經取代之雜芳基。在一些態樣中，雜烷基包含1至20個碳原子及雜原子( 1-20雜烷基)。在其他態樣中，雜烷基包含1至10個碳原子及雜原子( 1-10雜烷基)。在又其他態樣中，雜烷基包含1至6個碳原子及雜原子( 1-6雜烷基)。
「雜烯基」係指其中一或多個碳原子(及視情況任何相關氫原子)各自彼此獨立地由相同或不同雜原子或雜原子基團置換之烯基。可置換碳原子之典型雜原子或雜原子基團包括但不限於-O-、-S-、-N-、-Si-、-NH-、-S(O)-、-S(O) 2-、-S(O)NH-、-S(O) 2NH-及其類似物及其組合。雜原子或雜原子基團可位於烷基、烯基或炔基之任何內部位置。可包括於此等基團中之典型雜原子基團包括但不限於-O-、-S-、-O-O-、-S-S-、-O-S-、-NR 501R 502、=N-N=、-N=N-、-N=N-NR 503R 404、-PR 505-、-P(O) 2-、-POR 506-、-O-P(O) 2-、-SO-、-SO 2-、-SnR 507R 508及類似基團，其中R 501、R 502、R 503、R 504、R 505、R 506、R 507及R 508獨立地為氫、烷基、芳基、經取代之芳基、雜烷基、雜芳基或經取代之雜芳基。在一些態樣中，雜烯基包含1至20個碳原子及雜原子( 1-20雜烯基)。在其他態樣中，雜烯基包含1至10個碳原子及雜原子( 1-10雜烯基)。在又其他態樣中，雜烯基包含1至6個碳原子及雜原子( 1-6雜烯基)。
「雜芳基」本身或作為另一取代基之一部分係指藉由自本文中所定義之母雜芳環系統之單一原子移除一個氫原子而獲得之單價雜芳族基團。典型雜芳基包括但不限於來源於以下之基團：吖啶、β-咔啉、𠳭烷、苯并哌喃、㖕啉、呋喃、咪唑、吲唑、吲哚、吲哚啉、吲哚𠯤、異苯并呋喃、異𠳭烯、異吲哚、異吲哚啉、異喹啉、異噻唑、異㗁唑、㖠啶、㗁二唑、㗁唑、呸啶、啡啶、啡啉、吩𠯤、呔𠯤、喋啶、嘌呤、哌喃、吡𠯤、吡唑、嗒𠯤、吡啶、嘧啶、吡咯、吡 、喹唑啉、喹啉、喹喏啉、四唑、噻二唑、噻唑、噻吩、三唑、二苯并哌喃及其類似物。在一些態樣中，雜芳基包含5至20個環原子(5至20員雜芳基)。在其他態樣中，雜芳基包含5至10個環原子(5至10員雜芳基)。例示性雜芳基包括來源於以下之基團：呋喃、噻吩、吡咯、苯并噻吩、苯并呋喃、苯并咪唑、吲哚、吡啶、吡唑、喹啉、咪唑、㗁唑、異㗁唑及吡𠯤。
「雜芳基烷基」本身或作為另一取代基之一部分係指其中一個鍵結至碳原子(通常為末端或 sp 3 碳原子)之氫原子由雜芳基置換之非環狀烷基。在一些態樣中，雜芳基烷基為6至21員雜芳基烷基，例如雜芳基烷基之烷基部分為(C 1-C 6)烷基且雜芳基部分為5至15員雜芳基。在其他態樣中，雜芳基烷基為6至13員雜芳基烷基，例如烷基部分為(C 1-C 3)烷基且雜芳基部分為5至10員雜芳基。
「雜芳基烯基」本身或作為另一取代基之一部分係指其中一個鍵結至碳原子之氫原子由雜芳基置換之非環狀烯基。在一些態樣中，雜芳基烯基係7至21員雜芳基烯基，例如雜芳基烯基之烯基部分為(C 2-C 6)烯基，且雜芳基部分為5至15員雜芳基。在其他態樣中，雜芳基烯基為7至13員雜芳基烯基，例如烯基部分為(C 2-C 3)烯基且雜芳基部分為5至10員雜芳基。
「雜芳基炔基」本身或作為另一取代基之一部分係指其中一個鍵結至碳原子之氫原子由雜芳基置換之非環狀烯基。在一些態樣中，雜芳基炔基為7至21員雜芳基炔基，例如雜芳基炔基之炔基部分為(C 2-C 6)炔基且雜芳基部分為5至15員雜芳基。在其他態樣中，雜芳基炔基為7至13員雜芳基炔基，例如炔基部分為(C 2-C 3)炔基且雜芳基部分為5至10員雜芳基。
「水合物」係指水以化學計量比例併入本文中所描述之化合物之晶格，引起形成加合物。製備水合物之方法包括但不限於在含有水蒸氣之氛圍中儲存、包括水之劑型或常規醫藥學處理步驟，諸如結晶(亦即，自水或混合水性溶劑)、凍乾、濕式造粒、水性薄膜衣或噴霧乾燥。在某些情形下，亦可由結晶溶劑合物在暴露於水蒸氣時或在無水物質懸浮於水中時形成水合物。水合物亦可以超過一種形式結晶，產生水合物多形現象。參見例如(Guillory, K., 第5章, 第202-205頁, Polymorphism in Pharmaceutical Solids, (Brittain, H.編), Marcel Dekker, Inc., 紐約, NY, 1999)。上述用於製備水合物之方法良好地屬於熟習此項技術者之技術範圍內、為完全習知的且無需除此項技術中之典型實驗以外的任何實驗。可藉由熟習此項技術者熟知的方法表徵及/或分析水合物，諸如單晶X射線繞射、X射線粉末繞射、偏光光學顯微法、熱顯微法、熱解重量分析、差熱分析、差示掃描熱量測定、IR光譜學、拉曼光譜學(Raman spectroscopy)及NMR光譜學(Brittain, H., Chapter 6, pp. 205-208 in Polymorphism in Pharmaceutical Solids, (Brittain, H. ed.), Marcel Dekker, Inc. New York, 1999).  此外，許多商業公司日常提供服務，其包括水合物之製備及/或表徵，諸如HOLODIAG, Pharmaparc II, Voie de l'Innovation, 27 100 Val de Reuil, France (http://www.holodiag.com)。
「N-氧化物」係指含有N-O鍵與連接至N之三個額外氫或側鏈，因此氮上存在正電荷之化合物。本揭示之N-氧化物可藉由熟習此項技術者熟知之氧化程序合成。
「母芳環系統」係指具有共軛p電子系統之不飽和環狀或多環狀環系統。「母芳環系統」之定義尤其包括其中一或多個環為芳族且一或多個環為飽和或不飽和之稠環系統，諸如茀、茚烷、茚、萉等。典型母芳環系統包括但不限於乙烯合蒽、乙烯合萘、乙烯合菲、蒽、薁、苯、䓛、六苯并苯、丙二烯合茀、茀、稠六苯、六苯、己二烯、as-二環戊二烯并苯、s-二環戊二烯并苯、茚烷、茚、萘、稠八苯、八苯、辛搭烯、卵苯、戊-2,4-二烯、稠五苯、戊搭烯、五苯、苝、萉、菲、苉、七曜烯、芘、吡蒽、茹、聯伸三苯、三萘及其類似基團。
「母雜芳環系統」係指其中一或多個碳原子(及視情況任何相關氫原子)各自獨立地由相同或不同雜原子置換之母芳環系統。用於置換碳原子之典型雜原子包括(但不限於)N、P、O、S、Si等。「母雜芳環系統」之定義尤其包括其中一或多個環為芳族且一或多個環為飽和或不飽和之稠環系統，諸如苯并二㗁烷、苯并呋喃、𠳭烷、苯并哌喃、吲哚、吲哚啉、二苯并哌喃等。典型母雜芳環系統包括但不限於砷哚、咔唑、b-咔啉、𠳭烷、苯并哌喃、㖕啉、呋喃、咪唑、吲唑、吲哚、吲哚啉、吲哚𠯤、異苯并呋喃、異𠳭烯、異吲哚、異吲哚啉、異喹啉、異噻唑、異㗁唑、㖠啶、㗁二唑、㗁唑、呸啶、啡啶、啡啉、吩𠯤、呔𠯤、喋啶、嘌呤、哌喃、吡𠯤、吡唑、嗒𠯤、吡啶、嘧啶、吡咯、吡 、喹唑啉、喹啉、喹𠯤、喹喏啉、四唑、噻二唑、噻唑、噻吩、三唑、二苯并哌喃及其類似物。
「醫藥學上可接受之鹽」係指具有母化合物之所需藥理學活性的化合物之鹽。此等鹽包括：(1)與無機酸形成之酸加成鹽，該等無機酸諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及其類似物；或與有機酸形成之酸加成鹽，該等有機酸諸如乙酸、丙酸、己酸、環戊丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、丁二酸、蘋果酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、3-(4-羥基苯甲醯基)苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙烷-二磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、4-甲基雙環[2.2.2]-辛-2-烯-1-甲酸、葡糖庚酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、三級丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、麩胺酸、羥基萘甲酸、水楊酸、硬脂酸、黏康酸及其類似物；或(2)當存在於母體化合物中之酸性質子經金屬離子(例如鹼金屬離子、鹼土金屬離子或鋁離子)置換時；或與有機鹼(諸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺及其類似物)配位時形成之鹽。
「預防(Preventing/prevention)」係指降低罹患疾病或病症之風險(亦即，引起疾病之至少一種臨床症狀不在可能暴露於或易患疾病，但尚未經歷或顯示疾病之症狀之患者中發展)。用於預防疾病或病症之治療手段之應用稱為「防治」。在一些態樣中，本文中所提供之化合物由於在長時間段內的較低長期副作用而提供優良防治。
本文所使用之「前藥」係指需要體內轉化以釋放活性藥物之藥物分子之衍生物。前藥在轉化為母藥之前，通常(但不一定)是藥理學上無活性的。
本文所使用之「前部分(promoiety)」係指在用於遮蔽藥物分子內之官能基時將藥物轉化成前藥的保護基形式。通常，前部分將經由藉由酶或非酶方式活體內裂解之鍵連接至藥物。
「保護基」係指在連接至分子遮罩中之反應性官能基時降低或阻止官能基在化學合成期間之反應性之原子之群。保護基之實例可見於Green等人, 「Protective Groups in Organic Chemistry」, (Wiley, 第2版, 1991)及Harrison等人, 「Compendium of Synthetic Organic Methods」, 第1至8卷(John Wiley and Sons, 1971-1996)。代表性胺基保護基包括但不限於甲醯基、乙醯基、三氟乙醯基、苯甲基、苯甲氧基羰基(「CBZ」)、三級丁氧基羰基(「Boc」)、三甲基矽烷基(「TMS」)、2-三甲基矽烷基-乙磺醯基(「SES」)、三苯甲基以及經取代之三苯甲基、烯丙氧基羰基、9-茀基甲氧基羰基(「FMOC」)、硝基-藜蘆基氧基羰基(「NVOC」)及其類似物。代表性羥基保護基包括但不限於其中羥基經醯基化或烷基化之保護基，諸如苯甲基，及三苯甲基醚以及烷基醚、四氫哌喃基醚、三烷基矽烷基醚及烯丙基醚。
本文所使用之「衰老」或「衰老細胞」係指細胞回應於一些細胞應力而獲得一或多個衰老標記物之狀態。此等標記物通常可包括自細胞週期永久抽取、表現發炎性因子之生物活性分泌蛋白質體、改變之甲基化、視情況相關之衰老相關異染色質病灶(SAHF)、表現關於氧化應激之標記物、表現關於DNA損傷之標記物、蛋白質及脂質修飾、衰老之形態特徵、改變之溶酶體/液泡及表現衰老相關b半乳糖苷酶(Galluzzi等人(編), Cell Senescence: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, 第965卷, DOI 10.1007/978-1-62703-239-1_4, © Springer Science+Business Media, LLC 2013)。
本文所使用之「抗衰老試劑」係指「選擇性地」(優先或在更大程度上)破壞、殺死、移除或促進衰老細胞之選擇性破壞的試劑。換言之，與其破壞或殺死非衰老細胞之能力相比，抗衰老試劑以在生物學上、臨床上及/或統計上顯著之方式破壞或殺死衰老細胞。抗衰老試劑以足以選擇性地殺死已建立之衰老細胞但不足以以臨床上顯著或生物學上顯著之方式殺死非衰老細胞之一量及時間使用。在某些實施例中，本文中所描述之抗衰老試劑以誘導(亦即，引發、刺激、觸發、活化、促進)衰老細胞且導致衰老細胞死亡之方式改變至少一個信號傳導路徑。
「溶劑合物」係指溶劑以化學計量比例併入本文中所描述之化合物之晶格，引起形成加合物。製備溶劑合物之方法包括(但不限於)在含有溶劑之氛圍中儲存、包括溶劑之劑型或常規醫藥學處理步驟，諸如結晶(亦即，自溶劑或混合溶劑)蒸氣擴散等。在某些情形下，亦可自其他結晶溶劑合物或水合物在暴露於溶劑時或在物質懸浮於溶劑中時形成溶劑合物。溶劑合物可以超過一種形式結晶，產生溶劑合物多形現象。參見例如(Guillory, K., 第5章, 第202-205頁, Polymorphism in Pharmaceutical Solids, (Brittain, H.編), Marcel Dekker, Inc., 紐約, NY, 1999)。以上用於製備溶劑合物之方法良好地屬於熟習此項技術者之技術範圍內、為完全習知的且無需除此項技術中之典型實驗以外的任何實驗。可藉由熟習此項技術者熟知的方法表徵及/或分析溶劑合物，諸如單晶X射線繞射、X射線粉末繞射、偏光光學顯微法、熱顯微法、熱解重量分析、差熱分析、差示掃描熱量測定、IR光譜學、拉曼光譜學及NMR光譜學(Brittain, H., 第6章, 第205-208頁, Polymorphism in Pharmaceutical Solids, (Brittain, H.編), Marcel Dekker, Inc. 紐約, 1999)。此外，許多商業公司日常提供服務，其包括溶劑合物之製備及/或表徵，諸如HOLODIAG, Pharmaparc II, Voie de l'Innovation, 27 100 Val de Reuil, France (http://www.holodiag.com)。
當用於修飾指定基團或自由基時，「經取代」意謂指定基團或自由基之一或多個氫原子各自彼此獨立地由相同或不同取代基置換。適用於取代指定基團或自由基中之飽和碳原子之取代基包括R a、鹵基、-O -、=O、-OR b、-SR b、-S -、=S、-NR cR c、=NR b、=N-OR b、三鹵甲基、-CF 3、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO 2、-N-OR b、-N-NR cR c、-NR bS(O) 2R b、=N 2、-N 3、-S(O) 2R b、-S(O) 2NR bR b、-S(O) 2O -、-S(O) 2OR b、-OS(O) 2R b、-OS(O) 2O -、-OS(O) 2OR b、-OS(O) 2NR cNR c、-P(O)(O -) 2、-P(O)(OR b)(O -)、-P(O)(OR b)(OR b)、-C(O)R b、-C(O)NR b-OR b-C(S)R b、-C(NR b)R b、-C(O)O -、-C(O)OR b、-C(S)OR b、-C(O)NR cR c、-C(NR b)NR cR c、-OC(O)R b、-OC(S)R b、-OC(O)O -、-OC(O)OR b、-OC(O)NR cR c、-OC(NCN)NR cR c-OC(S)OR b、-NR bC(O)R b、-NR bC(S)R b、-NR bC(O)O -、-NR bC(O)OR b、-NR bC(NCN)OR b、-NR bS(O) 2NR cR c、-NR bC(S)OR b、-NR bC(O)NR cR c、-NR bC(S)NR cR c、-NR bC(S)NR bC(O)R a、-NR bS(O) 2OR b、-NR bS(O) 2R b、-NR bC(NCN)NR cR c、-NR bC(NR b)R b及-NR bC(NR b)NR cR c，其中各R a獨立地為經取代之烷基、經取代之烯基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基或經取代之雜芳基；各R b獨立地為氫、經取代之烷基、經取代之烯基、經取代之炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；且各R c獨立地為R b，或可替代地，兩個R c與其所鍵結之氮原子一起形成4員、5員、6員或7員環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基環或與芳基稠合之環雜烷基或環雜烯基，該芳基可視情況包括1至4個選自由O、N及S組成的群組的相同或不同額外雜原子。作為特定實例，-NR cR c意謂包括-NH 2、-NH-烷基、N-吡咯啶基及N-𠰌啉基。在其他態樣中，適用於取代指定基團或自由基中之飽和碳原子之取代基包括R a、鹵基、-OR b、-NR cR c、三鹵甲基、-CN、-NR bS(O) 2R b、-C(O)R b、-C(O)NR b-OR b、-C(O)OR b、-C(O)NR cR c、-OC(O)R b、-OC(O)OR b、-OS(O) 2NR cNR c、-OC(O)NR cR c及-NR bC(O)OR b，其中R a、R b及R c如先前所定義。在又其他態樣中，適用於取代指定基團或自由基中之飽和碳原子之取代基包括R a、鹵基、-OR b、-NR cR c、三鹵甲基、-CN、-C(O)R b、-C(O)OR b、-C(O)NR cR c、-OC(O)R b、-OC(O)NR cR c及-NR bC(O)OR b，其中R a、R b及R c如先前所定義。
適用於取代指定基團或自由基中之不飽和碳原子之取代基包括-R a、鹵基、-O -、-OR b、-SR b、-S -、-NR cR c、三鹵甲基、-CF 3、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO 2、-N 3、-S(O) 2O -、-S(O) 2OR b、-OS(O) 2R b、-OS(O) 2OR b、-OS(O) 2O -、-P(O)(O -) 2、-P(O)(OR b)(O -)、-P(O)(OR b)(OR b)、-C(O)R b、-C(S)R b、-C(NR b)R b、-C(O)O -、-C(O)OR b、-C(S)OR b、-C(O)NR cR c、-C(NR b)NR cR c、-OC(O)R b、-OC(S)R b、-OC(O)O -、-OC(O)OR b、-OC(S)OR b、-OC(O)NR cR c、-OS(O) 2NR cNR c、-NR bC(O)R b、-NR bC(S)R b、-NR bC(O)O -、-NR bC(O)OR b、-NR bS(O) 2OR a、-NR bS(O) 2R a、-NR bC(S)OR b、-NR bC(O)NR cR c、-NR bC(NR b)R b、-NR bC(NR b)NR cR c及-C(NR b)NR bC(NR b)NR cR c，其中R a、R b及R c如先前所定義。在其他態樣中，適用於取代指定基團或自由基中之不飽和碳原子之取代基包括-R a、鹵基、-OR b、-SR b、-NR cR c、三鹵甲基、-CN、-S(O) 2OR b、-C(O)R b、-C(O)OR b、-C(O)NR cR c、-OC(O)R b、-OC(O)OR b、-OS(O) 2NR cNR c、-NR bC(O)R b及-NR bC(O)OR b，其中R a、R b及R c如先前所定義。在又其他態樣中，適用於取代指定基團或自由基中之不飽和碳原子之取代基包括-R a、鹵基、-OR b、-NR cR c、三鹵甲基、-S(O) 2OR b、-C(O)R b、-C(O)OR b、-C(O)NR cR c、-OC(O)R b、-NR bC(O)R b及-NR bC(O)OR b，其中R a、R b及R c如先前所定義。
適用於取代雜烷基及環雜烷基中之氮原子之取代基包括但不限於-R a、-O -、-OR b、-SR b、-S -、-NR cR c、三鹵甲基、-CF 3、-CN、-NO、-NO 2、-S(O) 2R b、-S(O) 2O -、-S(O) 2OR b、-OS(O) 2R b、-OS(O) 2O -、-OS(O) 2OR b、-P(O)(O -) 2、-P(O)(OR b)(O -)、-P(O)(OR b)(OR b)、-C(O)R b、-C(S)R b、-C(NR b)R b、-C(O)OR b、-C(S)OR b、-C(O)NR cR c、-C(NR b)NR cR c、-OC(O)R b、-OC(S)R b、-OC(O)OR b、-OC(S)OR b、-NR bC(O)R b、-NR bC(S)R b、-NR bC(O)OR b、-NR bC(S)OR b、-NR bC(O)NR cR c、-NR bC(NR b)R b、-NR bC(NR b)NR cR c及-C(NR b)NR bC(NR b)NR cR c，其中R a、R b及R c如先前所定義。在一些態樣中，適用於取代雜烷基及環雜烷基中之氮原子之取代基包括R a、鹵基、-OR b、-NR cR c、三鹵甲基、-CN、-S(O) 2OR b、-OS(O) 2R b、-C(O)R b、-C(NR b)R b、-C(O)OR b、-C(O)NR cR c、-OC(O)R b、-OC(O)OR b、-OS(O) 2NR cNR c、-NR bC(O)R b及-NR bC(O)OR b，其中R a、R b及R c如先前所定義。在又其他態樣中，適用於取代雜烷基及環雜烷基中之氮原子之取代基包括R a、鹵基、-OR b、-NR cR c、三鹵甲基、-CN、-S(O) 2OR b、-C(O)R b、-C(NR b)R b、-C(O)OR b、-C(O)NR cR c、-OC(O)R b、-NR bC(O)R b及-NR bC(O)OR b，其中R a、R b及R c如先前所定義。
熟習此項技術者將顯而易見適用於取代其他指定基團或原子之來自以上清單之取代基。
用於取代指定基團之取代基可經進一步取代，通常經一或多個選自以上指定之各種基團之相同或不同基團取代。
「個體(subject/individual)」或「患者」在本文中可互換地使用且係指脊椎動物，較佳哺乳動物。哺乳動物包括(但不限於)鼠類、嚙齒動物、猿猴、人類、農畜、運動型動物及寵物。在一些態樣中，個體或患者為物種智人之成員。在其他態樣中，個體或患者包括除智人之外的所有哺乳動物。
在一些態樣中，任何疾病或病症之「治療(treating/treatment)」係指改善疾病或病症(亦即，抑制或降低疾病或其至少一種臨床症狀之發展)。亦可認為治療包括用於改善、抑制或預防疾病或至少一種臨床症狀之發展之搶先式或預防性投與。在另一特性中，治療在多年內具有長期副作用之可能性較低。在其他態樣中，「治療」係指改善至少一種身體參數，其可能不能由患者辨別。在其他態樣中，「治療」係指在身體上(例如使可辨別之症狀穩定)、在生理上(例如使身體參數穩定)或在此兩方面抑制疾病或病症。在其他實施例中，「治療」係指延緩疾病或病症之發作。
「治療有效量」意謂在投與患者以用於治療疾病時足以治療疾病之化合物之量。「治療有效量」將視化合物、疾病及其嚴重程度以及所治療之患者之年齡、體重、吸收、分佈、代謝及分泌等而變化。
「媒劑」係指與化合物一起投與個體之稀釋劑、賦形劑或載劑。在一些態樣中，媒劑為醫藥學上可接受的。 化合物
在一個態樣中，提供一種滿足此等及其他需要之式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中R 1為-OR 36、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；R 2為-H、-CN、-CO 2R 7、-CONR 8R 9、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；各R 3及R 4獨立地為H、-F或烷基；n為1或2；R 5為-H、-CO 2R 10、-C(O)R 11、-CONR 12R 13、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；R 6為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基，或當X為=O或=NR 14時不存在；R 27為氫、鹵基、烷基、經取代之烷基、雜烷基、經取代之雜烷基、-NR 28R 29、-NCONR 30R 31、-CONR 32R 33、-CO 2R 34、-NCO 2R 35；X為=O、=NR 14或-OR 15；R 14為-OR 16、-NR 17R 18或-N +R 40R 41R 42；R 7-R 10、R 12、R 13、R 15及R 28-R 36獨立地為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基，或視情況R 8及R 9、R 12及R 13、R 28及R 29、R 30及R 31、R 32及R 33與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環；R 11為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；R 16為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基、經取代之雜芳基炔基，或為碳水化合物衍生物；R 17及R 18獨立地為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基、經取代之雜芳基炔基、碳水化合物衍生物、R 19CO-、R 20R 21NCO-、R 22OCO-或R 23SO 2-，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代且R 17及R 18兩者均不為R 19CO-、R 21R 20NCO-、R 22OCO-或R 23SO 2-或其任何組合；R 19為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基、經取代之雜芳基炔基或碳水化合物衍生物，或視情況R 19及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代；R 20及R 21獨立地為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基或碳水化合物衍生物，或視情況R 20及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基或經取代之環雜烷基環，其視情況經=O取代，或視情況R 20及R 21與其所連接之原子一起形成環雜烷基或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代；R 22為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基、經取代之雜芳基炔基或碳水化合物衍生物，或視情況R 22及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代；且R 23為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基、經取代之雜芳基炔基，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代，或視情況R 23及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代；且R 40、R 41及R 42為烷基。
在一些實施例中，其中X為=O，n為1，R 1不為苯基或經取代之苯基，但R 1可為在對位處經-OR 25取代之苯基，R 25為經環烷基、經取代之環烷基或-CF 3取代之烷基、環烷基、經取代之環烷基或R 43SO 2-，其中R 43為烷基或CF 3。
在其他實施例中，其中X為=O，n為1，R 3及R 4為-F，R 27為-H，R 1不為苯基或經取代之苯基，但R 1可為在對位處經-OR 25取代之苯基，R 25為經環烷基、經取代之環烷基或-CF 3取代之烷基、環烷基、經取代之環烷基或R 43SO 2-，其中R 43為烷基或CF 3。
在其他實施例中，其中X為=O，n為1，R 3及R 4為-H，R 27為-H，R 1不為苯基或經取代之苯基，但R 1可為在對位處經環烷基或經取代之環烷基取代之苯基。
在又其他實施例中，其中X為=O，n為1，R 1不為苯基、經取代之苯基、-OH、烷基、烯基或雜芳基。在又其他實施例中，其中X為=O，n為1，R 1不為苯基、經取代之苯基、烷基、烯基或雜芳基。在又其他實施例中，其中X為=O，n為1，R 1不為苯基、經取代之苯基、烷基或烯基。在又其他實施例中，其中X為=O，n為1，R 1不為苯基、經取代之苯基或雜芳基。在又其他實施例中，其中X為=O，n為1且R 1為在對位處經-OR 25取代之苯基，R 25不為-H、烷基、經取代之烷基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基或經取代之芳基烷基。
在一些實施例中，其中X為=O且n為1，且R 1為苯基，苯基基團之對位不經烷基、烯基、R 24CO-、環烷基、環雜烷基、-CN、R 25O-、-N(R 26) 2、-CON(R 26) 2、-S(O) xR 26或-(CH 2)p-CH 2-Y取代；Y為-H、-OR 26-SCH 3、-CF 3或-N(R 26) 2；x為0、1或2；p為1至18之整數；R 24為-(C 1-C 12)烷基；R 25為-H、烷基、經取代之烷基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基或經取代之芳基烷基；R 26為-H、烷基或環烷基；且R 1不為 。在其他實施例中，其中X為=O且n為1，R 3及R 4為-F，R 27為-H且R 1為苯基，苯基基團之對位不經烷基、烯基、R 24CO-、環烷基、環雜烷基、-CN、R 25O-、-N(R 26) 2、-CON(R 26) 2、-S(O) xR 26或-(CH 2)p-CH 2-Y取代；Y為-H、-OR 26-SCH 3、-CF 3或-N(R 26) 2；x為0、1或2；p為1至18之整數；R 24為-(C 1-C 12)烷基；R 25為-H、烷基、經取代之烷基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基或經取代之芳基烷基；R 26為-H、烷基或環烷基；且R 1不為 。
在一些實施例中，其中X為=O，n為1，R 1不為苯基或經取代之苯基。在其他實施例中，其中X為=O，n為1，R 3及R 4為-F，R 1不為苯基或經取代之苯基。在一些實施例中，其中X為=O，n為1，R 3及R 4為-F，R 1不為苯基或經取代之苯基，但經 取代之苯基除外。在一些實施例中，其中X為=O，n為1，R 3及R 4為-H，R 1不為苯基或經取代之苯基，但經 取代之苯基除外。在一些實施例中，其中X為=O，n為1，R 1不為苯基或經取代之苯基，但經 或 取代之苯基除外。
在又其他實施例中，其中X為=O，n為1，R 1不為苯基、經取代之苯基、-OH、烷基、烯基或雜芳基。在又其他實施例中，其中X為=O，n為1，R 1不為苯基、經取代之苯基、烷基、烯基或雜芳基。在又其他實施例中，其中X為=O，n為1，R 1不為苯基、經取代之苯基、烷基或烯基。在又其他實施例中，其中X為=O，n為1，R 1不為苯基、經取代之苯基或雜芳基。在又其他實施例中，其中X為=O，n為1且R 1為苯基，苯基基團之對位不經-OH取代。
在一些實施例中，其中X為=O且n為1，且R 1為苯基，苯基基團之對位不經烷基、烯基、R 24CO-、環烷基、環雜烷基、-CN、R 25O-、-N(R 26) 2、-CON(R 26) 2、-S(O) xR 26或-(CH 2)p-CH 2-Y取代；Y為-H、-OR 26-SCH 3、-CF 3或-N(R 26) 2；x為0、1或2；p為1至18之整數；R 24為-(C 1-C 12)烷基；R 25為-H、烷基、經取代之烷基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基或經取代之芳基烷基；R 26為-H、烷基或環烷基；且R 1不為 。
在一些實施例中，R 1為經取代之芳基、雜芳基或經取代之雜芳基。在其他實施例中，R 2為-H、-CN、-CO 2R 7、-CONR 8R 9、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基。在又其他實施例中，R 3及R 4獨立地為H或-F。在又其他實施例中，R 3及R 4獨立地為H或-F，其限制條件為R 3及R 4中之至少一者為-F。在又其他實施例中，R 5為-H、-CO 2R 10、-C(O)R 11、-CONR 12R 13、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基。在又其他實施例中，R 6為-H、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基。在又其他實施例中，R 27為氫、鹵基、-NR 28R 29、-CONR 32R 33或-CO 2R 34。在又其他實施例中，R 7-R 10、R 12、R 13、R 15、R 16及R 28-R 36獨立地為-H、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基。在又其他實施例中，R 11獨立地為烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基。在又其他實施例中，R 17及R 18獨立地為-H、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、碳水化合物衍生物、R 19CO-、R 20R 21NCO-、R 22OCO-或R 23SO 2-。在又其他實施例中，R 19為烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、經取代之雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基或碳水化合物衍生物，或視情況R 19及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代。在又其他實施例中，R 20及R 21獨立地為烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、經取代之雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基或碳水化合物衍生物，或視情況R 20及R 21與其所連接之原子一起形成環雜烷基或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代。在又其他實施例中，R 22為烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、經取代之雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基或碳水化合物衍生物，或視情況R 22及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代。在又其他實施例中，R 23為烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、經取代之雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基或碳水化合物衍生物，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代，或視情況R 23及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代。
在一些實施例中，R 1為經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基，R 2為-H、-CN、-CO 2R 7、-CONR 8R 9、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基；各R 3及R 4獨立地為H或-F，其限制條件為R 3及R 4中之至少一者為-F；R 5為-H、-CO 2R 10、-C(O)R 11、-CONR 12R 13、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基；R 6為-H、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基；R 27為氫、鹵基、-NR 28R 29、-CONR 32R 33或-CO 2R 34；R 7-R 10、R 12、R 13、R 15及R 28-R 36獨立地為-H、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基；R 11獨立地為烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基；R 16為-H、烷基、烯基、炔基、芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基，或為碳水化合物衍生物；R 17及R 18獨立地為-H、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、碳水化合物衍生物、R 19CO-、R 20R 21NCO-、R 22OCO-或R 23SO 2-； R 19為烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、經取代之雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基或碳水化合物衍生物，或視情況R 19及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代；R 20及R 21獨立地為烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、經取代之雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基或碳水化合物衍生物，或視情況R 20及R 21與其所連接之原子一起形成環雜烷基或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代。R 22為烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、經取代之雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基或碳水化合物衍生物，或視情況R 22及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代。R 23為烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、經取代之雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基或碳水化合物衍生物，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代，或視情況R 23及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代。
在一些實施例中，R 1為經取代之芳基或經取代之苯基。在其他實施例中，R 1為 ；R 36為烷基、經取代之烷基、-SO 2R 39、芳基烷基、經取代之芳基烷基；R 39為烷基或經取代之烷基；R 37為烷基；且R 38為烷基或經取代之烷基。在又其他實施例中，R 36為-CH 3、-CH 2CF 3、-SO 2CF 3、-CH 2(CH 3)-環丁基或-CH 2Ph，其中Ph在對位經-SO 2CF 3取代；R 37為-CH 3；且R 38為CF 3或環丙基。在又其他實施例中，R 1為 ；R 36為烷基、經取代之烷基、-SO 2R 39、芳基烷基、經取代之芳基烷基；R 39為烷基或經取代之烷基；且R 38為烷基或經取代之烷基。在又其他實施例中，R 36為-CH 3、-CH 2CF 3、-SO 2CF 3或-CH 2(CH 3)-環丁基；R 37為-CH 3；且R 38為CF 3或環丙基。
在一些實施例中，n為1且R 3及R 4為-F。在其他實施例中，R 2為-H。在又其他實施例中，R 5為-H。在以上又其他實施例中，X為=O。在又其他實施例中，X為-OR 15且R 6為-H或甲基。在又其他實施例中，R 15為-H或烷基。在又其他實施例中，X為=NR 14。在又其他實施例中，R 14為-OR 16。
在一些實施例中，R 16為-H。在其他實施例中，R 16為烷基。在又其他實施例中，R 16為(C 1-C 4)烷基。在又其他實施例中，R 16為-CH 2CH 3。
在一些實施例中，R 16為經取代之烷基。在其他實施例中，R 16為-CH 2CF 3、-CH 2CO 2H、-CH 2CH 2OCH 3、-CH 2(CH 3) 2OH、-CH 2C(O)N(CH 3) 2、-CH 2CN、-CH 2CH 2OSi(CH 3) 3、-CH 2CH 2OH、-CH 2CH 2OCH 2CH 2OH、-CH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 3、 、 、 、 、 、 或 。
在一些實施例中，R 16為雜芳基烷基。在其他實施例中，R 16為 。
在一些實施例中，R 16為環雜烷基。在其他實施例中，R 16為 、 或 。
在一些實施例中，R 16為碳水化合物衍生物。在其他實施例中，R 16為 。
在一些實施例中，R 14為-NR 17R 18。在其他實施例中，R 17為-H、甲基、烷基、環丙基, 環烷基或-C(O)CH 3。
在一些實施例中，R 18為-H或甲基。
在一些實施例中，R 18為經取代之芳基烷基。在其他實施例中，R 18為經碳水化合物衍生物取代之芳基烷基。在又其他實施例中，R 18為 。
在一些實施例中，R 17為-H、甲基、烷基、環丙基、環烷基或-C(O)CH 3，且R 18為碳水化合物衍生物。在其他實施例中，R 18為 。
在一些實施例中，R 17為-H、甲基、烷基、環丙基, 環烷基或-C(O)CH 3，且R 18為-H、經取代之芳基烷基或經碳水化合物衍生物取代之芳基烷基。在其他實施例中，R 18為-H、經取代之芳基烷基、經碳水化合物衍生物取代之芳基烷基或碳水化合物衍生物。在又其他實施例中，R 17為-H、甲基、烷基、經取代之烷基、環丙基、經取代之環丙基, 環烷基或經取代之環烷基，且R 18為R 19CO-。
在一些實施例中，R 18為R 19CO-。在其他實施例中，R 19為烷基。在又其他實施例中，R 19為-CH 3、-CH(CH 3) 2、-CH 2CH(CH 3) 2、-C(CH 3) 3-或-CH 2CH 2CH 3。
在一些實施例中，R 19為經取代之烷基。在其他實施例中，R 19為-CH 2NH 2、-CH 2NHBoc、-CH 2OCH 3、-CH 2OH、-CH 2N(CH 3) 2、-CH 2CN或 。
在一些實施例中，R 19為環烷基或經取代之環烷基。在其他實施例中，R 19為環丙基及經取代之環丙基。
在一些實施例中，R 19為雜芳基或經取代之雜芳基。在其他實施例中，R 19為 或 。
在一些實施例中，R 19為雜芳基烷基。在其他實施例中，R 19為 。
在一些實施例中，R 19為環烷基。在其他實施例中，R 19為 。
在一些實施例中，R 19為環雜烷基。在其他實施例中，R 19為 。
在一些實施例中，R 19及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環。在其他實施例中，R 19及R 17與其所連接之原子一起形成 。
在一些實施例中，R 17為-H、甲基、烷基、經取代之烷基、環丙基、經取代之環丙基、環烷基或經取代之環烷基，且R 18為R 20R 21NCO-。
在一些實施例中，R 18為R 20R 21NCO-。在其他實施例中，R 20為氫或烷基且R 21為環烷基或經取代之環烷基。在又其他實施例中，R 20為氫或烷基且R 21為環丙基或經取代之環丙基。
在一些實施例中，R 20為氫或烷基且R 21為氫或烷基。
在一些實施例中，R 20為氫或烷基且R 21為經取代之烷基。
在一些實施例中，R 20為氫或烷基且R 21為碳水化合物衍生物。在其他實施例中，R 21為 。
在一些實施例中，R 17為-H、甲基、烷基、環丙基、環烷基、-C(O)CH 3，R 18為-R 19CO-；且R 19為烷基、經取代之烷基、雜芳基、經取代之雜芳基、經取代之雜芳基烷基、環烷基、環雜烷基，或R 19及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環。
在一些實施例中，R 18為-R 19CO-，R 19為烷基、經取代之烷基、雜芳基、經取代之雜芳基、經取代之雜芳基烷基、環烷基、環雜烷基，或視情況R 19及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環。
在一些實施例中，R 18為R 22OCO-。在其他實施例中，R 22為經碳水化合物衍生物取代之芳基烷基。在又其他實施例中，R 22為 。
在一些實施例中，R 22為碳水化合物衍生物。在其他實施例中，R 22為 。
在一些實施例中，R 22為烷基。在其他實施例中，R 22為-CH 3、-C 2H 5或-C(CH 3) 3。
在一些實施例中，R 22為經取代之烷基。在其他實施例中，R 22為-CH 2CH 2OH、-CH 2CH 2OSi(CH 3) 3或-CH 2CF 3。
在一些實施例中，R 22及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環。在其他實施例中，R 22及R 17與其所連接之原子一起形成 或 。
在一些實施例中，R 17為-H、甲基、烷基、環丙基、環烷基、-C(O)CH 3，R 18為R 22OCO-，且R 22為經碳水化合物衍生物取代之芳基烷基、碳水化合物衍生物、烷基、經取代之烷基，或R 22及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環。
在一些實施例中，R 18為R 22OCO-且R 22為經碳水化合物衍生物取代之芳基烷基、碳水化合物衍生物、烷基、經取代之烷基，或R 22及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環。
在一些實施例中，R 18為R 20R 21NCO-。在其他實施例中，R 20及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其視情況經=O取代。在又其他實施例中，R 20及R 17與其所連接之原子一起形成 、 或 。
在一些實施例中，R 20及R 21與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環。在其他實施例中，R 20及R 21與其所連接之原子一起形成 、 或 。
在一些實施例中，R 20為芳基。在其他實施例中，R 20為 。
在一些實施例中，R 20為烷基。在其他實施例中，R 20為-CH(CH 3) 2。
在一些實施例中，R 20為經取代之烷基。在其他實施例中，R 20為 。
在一些實施例中，R 20為環烷基。在其他實施例中，R 20為 。
在一些實施例中，R 20為環雜烷基。在其他實施例中，R 20為 。
在一些實施例中，R 17為-H、甲基、烷基、環丙基、環烷基、-C(O)CH 3，R 18為R 20R 21NCO-；且R 20為烷基、經取代之烷基、芳基、環烷基、環雜烷基，R 20及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其視情況經=O取代，或R 20及R 21與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環。
在一些實施例中，R 18為R 20R 21NCO-，且R 20為烷基、經取代之烷基、芳基、環烷基、環雜烷基，R 20及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其視情況經=O取代，或R 20及R 21與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環。
在一些實施例中，R 18為R 23SO 2-。
在一些實施例中，R 23為烷基。在其他實施例中，R 23為-CH 2CH 2CH 3或-CH(CH 3) 2。
在一些實施例中，R 23為經取代之烷基。在其他實施例中，R 23為-CH 2CH 2OCH 3、-CH 2CN、-CH 2SO 3CH 3、 、 或-CH 2CF 3。
在一些實施例中，R 23為經取代之芳基。在其他實施例中，R 23為 或 。
在一些實施例中，R 23為雜芳基或經取代之雜芳基。在其他實施例中，R 23為 或 。
在一些實施例中，R 23為環烷基。在其他實施例中，R 23為 或 。
在一些實施例中，R 23為環雜烷基。在其他實施例中，R 23為 。
在一些實施例中，R 17為-H、甲基、烷基、環丙基、環烷基、-C(O)CH 3，R 18為R 23SO 2-，且R 23為烷基、經取代之烷基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基或環雜烷基。在其他實施例中，R 18為R 23SO 2-，且R 23為烷基、經取代之烷基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基或環雜烷基。
在一些實施例中，R 16為-H、烷基、經取代之烷基、雜芳基烷基或環雜烷基，R 17為-H、甲基、烷基、環丙基、環烷基、-C(O)CH 3，R 18為-H、經取代之芳基烷基、經碳水化合物衍生物取代之芳基烷基、碳水化合物衍生物、-R 19CO-、R 20R 21NCO-、R 22OCO-或R 23SO 2-。
在一些實施例中，R 19為烷基、經取代之烷基、雜芳基、經取代之雜芳基、經取代之雜芳基烷基、環烷基、環雜烷基，或視情況R 19及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環；R 20為烷基、經取代之烷基、芳基、環烷基、環雜烷基，或R 20及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其視情況經=O取代，或R 20及R 21與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環；R 22為經碳水化合物衍生物取代之芳基烷基、碳水化合物衍生物、烷基、經取代之烷基，或R 22及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環；且R 23為烷基、經取代之烷基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基或環雜烷基。
在另一態樣中，提供一種式(II)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中R 100為-H、-CO 2R 107、-C(O)R 108、-CONR 109R 110、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；R 101為-OR 130、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；R 102為-H、-CN、-CO 2R 111、-CONR 112R 113、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；各R 103及R 104獨立地為H、-F或烷基，其限制條件為R 103及R 104中之至少一者為-F；q為1或2；R 105為-H、-CO 2R 114、-C(O)R 115、-CONR 116R 117、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；各R 106獨立地為-H、-CO 2R 118、-C(O)R 119、-CONR 120R 121、OR 122、-NR 123R 124、-NHR 125R 126C(O)R 127、-SO 2NR 128R 130、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、鹵基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；s為0、1或2；R 109-R 113、R 116-R 118、R 120-R 126和R 128-R 130獨立地為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基；R 107、R 108、R 114、R 115及R 127獨立地為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基。
在一些實施例中，R 101為經取代之芳基、雜芳基或經取代之雜芳基。在其他實施例中，R 100為-H、-CO 2R 107、-C(O)R 108、-CONR 109R 110、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基；在又其他實施例中，R 102為-H、-CN、-CO 2R 111、-CONR 112R 113、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基。在又其他實施例中，各R 103及R 104獨立地為-H或-F。在又其他實施例中，各R 103及R 104獨立地為-H或-F，其限制條件為R 3及R 4中之至少一者為-F。在又其他實施例中，R 105為-H、-CO 2R 114、-C(O)R 115、-CONR 116R 117、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基。在又其他實施例中，各R 106獨立地為-H、-CO 2R 118、-C(O)R 119、-CONR 120R 121、-OR 122、-NR 123R 124、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、鹵基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基或經取代之雜芳基烷基。在又其他實施例中，R 111-R 113及R 116-R 124獨立地為-H、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基。在又其他實施例中，R 114及R 115獨立地為烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基。
在一些實施例中，R 100為-H、-CO 2R 107、-C(O)R 108、-CONR 109R 110、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基；R 101為-OR 130、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基，R 102為-H、-CN、-CO 2R 111、-CONR 112R 113、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基；各R 103及R 104獨立地為H或-F，其限制條件為R 103及R 104中之至少一者為-F；R 5為-H、-CO 2R 114、-C(O)R 115、-CONR 116R 117、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基；R 106獨立地為-H、-CO 2R 118、-C(O)R 119、-CONR 120R 121、-OR 122、-NR 123R 124、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、鹵基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基或經取代之雜芳基烷基；R 111-R 113、R 116-R 124及R 130獨立地為-H、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基；且R 114及R 115獨立地為烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基。
在一些實施例中，R 100為-H、-CO 2R 107、烷基、經取代之烷基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基。
在一些實施例中，R 101為經取代之芳基或經取代之苯基。在其他實施例中，R 101為 ；R 130為烷基、經取代之烷基、芳基烷基、經取代之芳基烷基；R 133為烷基或經取代之烷基；R 131為烷基；且R 132為烷基或經取代之烷基。
在一些實施例中，R 131為-CH 3, -CH 2CF 3、-SO 2CF 3、-CH 2Ph，其中Ph在對位經-SO 2CF 3取代；R 132為-CH 3；且R 133為CF 3。
在一些實施例中，n為1且R 3及R 4為-F。
在一些實施例中，R 2為-H。
在一些實施例中，R 5為-H。
在一些實施例中，R 100為經取代之烷基。在其他實施例中，R 100為-CH 2CF 3、-CH 2CO 2H、-CH 2CH 2OCH 3、-CH 2(CH 3) 2OH、-CH 2C(O)N(CH 3) 2、-CH 2CN、-CH 2CH 2OSi(CH 3) 3、-CH 2CH 2OH、-CH 2CH 2OCH 2CH 2OH、-CH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 3、 、 、 、 、 、 或 。
在一些實施例中，提供一種具有以下結構之化合物： 。
在一些實施例中，R 100為-H、-CO 2R 107、烷基、經取代之烷基、雜烷基、雜芳基或經取代之雜芳基。
在一些實施例中，R 100為-H、-CO 2R 107、烷基、經取代之烷基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基或經取代之雜烷基。
下表1中描繪了一些例示性化合物。 表1
上述化合物可藉由熟知程序製備，其中一些例示於實驗章節中。 用於表徵及鑑別抗衰老試劑之方法
表徵抗衰老試劑可使用本文或此項技術中所描述且熟習此項技術者將熟悉之一或多種基於細胞之分析及一或多種動物模型來測定。抗衰老試劑可選擇性地殺死一或多種類型之衰老細胞(例如衰老前脂肪細胞、衰老內皮細胞、衰老纖維母細胞、衰老神經元、衰老上皮細胞、衰老間質細胞、衰老平滑肌細胞、衰老巨噬細胞或衰老軟骨細胞)。在某些實施例中，抗衰老試劑能夠選擇性地殺死至少衰老纖維母細胞。
將試劑表徵為抗衰老試劑可使用本文或此項技術中所描述之一或多種基於細胞之分析及一或多種動物模型來實現。熟習此項技術者將容易瞭解，將試劑表徵為抗衰老試劑及測定試劑之殺死程度可藉由比較測試試劑與適當陰性對照(例如僅媒劑或稀釋劑及/或此項技術中已知不殺死衰老細胞之組合物或化合物)及適當陽性對照之活性來實現。用於表徵抗衰老試劑之基於細胞之活體外分析亦包括用於測定試劑對非衰老細胞(例如，靜止細胞或增殖性細胞)之效應的對照。與一或多個陰性對照相比，抗衰老試劑減少(亦即，降低)複數個衰老細胞之存活百分比(亦即，以某種方式減少動物或基於細胞之分析中之存活衰老細胞的量)。特定活體外分析之條件包括溫度、緩衝劑(包括鹽、陽離子、培養基)及其他組分，該等其他組分維持分析中使用之測試試劑及反應劑之完整性，為熟習此項技術者所熟悉及/或其可容易地透過常規實驗來測定。
用於分析之衰老細胞之來源可為初生細胞培養物，或培養物調適細胞株，包括但不限於基因工程改造細胞株，其可含有染色體整合或游離型重組核酸序列、永生化或可永生化細胞株、體細胞雜交細胞株、分化或可分化細胞株、轉化細胞株及其類似物。在一些實施例中，衰老細胞自獲自具有衰老細胞相關疾病或病症之宿主或個體的生物樣品分離。在其他實施例中，非衰老細胞可獲自個體或可為培養物調適株，且衰老係藉由本文中且在此項技術中所描述之方法誘導，諸如藉由暴露於輻射或化學治療劑(例如阿黴素)誘導。生物樣品可為例如血液樣品、切片樣本、體液(例如肺灌洗液、腹水、黏膜洗滌液、滑液等)、骨髓、淋巴結、組織外植體、器官培養物或獲自個體之任何其他組織或細胞製劑。生物樣品可為其中例如已藉由解剖、解離、溶解、分餾、均勻化、生物化學或化學萃取、粉碎、凍乾、音波處理或用於處理源自個體或生物來源之樣品的任何其他方式破壞形態完整性或物理狀態的組織或細胞製劑。個體可為人類或非人類動物。
本文中且在此項技術中所描述之轉殖基因動物模型可用於測定衰老細胞之殺死或去除(參見例如Baker等人, Nature, 479 (2011) 232-236；國際申請案第WO/2012/177927號；國際申請案第WO 2013/090645號)。例示性轉殖基因動物模型含有轉殖基因，其包括允許作為陽性對照之衰老細胞(例如p16INK4a陽性衰老細胞)之受控清除的核酸。轉殖基因動物中衰老細胞之存在及含量可藉由量測在動物衰老細胞中表現之一或多種可偵測標記的含量來測定。轉殖基因核苷酸序列包括可偵測標記，例如紅色螢光蛋白、綠色螢光蛋白及一或多種螢光素酶中之一或多者，以偵測衰老細胞之清除。
本文中且在此項技術中所描述之動物模型包括用於測定抗衰老試劑治療或預防(亦即，降低其發生之可能性)特定衰老相關疾病或病症(諸如動脈粥樣硬化模型、骨關節炎模型、COPD模型、IPF模型等)之有效性的公認模型。本文所描述諸如博萊黴素肺纖維化模型及慢性吸菸模型之肺病鼠類模型適用於諸如COPD之疾病且可以由熟習此項技術者常規地實施。用於測定抗衰老試劑治療及/或預防(亦即，降低其發生之可能性)化學療法及放射線療法副作用模型或治療或預防(亦即，降低其發生之可能性)癌細胞轉移之動物模型描述於國際申請案第WO 2013/090645號及第WO 2014/205244號中。用於測定試劑用於治療眼部疾病尤其年齡相關之黃斑變性之有效性的動物模型亦常規用於此項技術中(參見例如Pennesi等人; Mol. Aspects Med. 33 (2012) 487-509；Zeiss等人, Vet. Pathol. 47 (2010) 396-413；Chavala等人, J. Clin. Invest. 123 (2013) 4170-4181)。
藉助於非限制性實例且本文所描述，已研發出骨關節炎動物模型。可在動物中例如藉由手術切斷不完全或全部前交叉韌帶來誘導對關節(例如在膝蓋中)之損傷而誘導骨關節炎。骨關節炎動物模型可用於評估抗衰老試劑治療或預防(亦即，降低其發生之可能性)骨關節炎及引起蛋白聚糖侵蝕減少及誘導(亦即，刺激、增強)膠原蛋白(諸如2型膠原蛋白)產生及減輕進行ACL手術之動物中之疼痛的有效性。可進行免疫組織學以檢查組織及細胞在關節中之完整性及組成。亦可使用本文中所描述之方法及技術進行免疫化學及/或分子生物學技術，諸如用於測定發炎性分子(例如IL-6)含量之分析及用於測定上文所指出之衰老標記物含量之分析，該等方法及技術可由熟習此項技術者常規地實施。
藉助於非限制性實例且本文所描述，已研發出動脈粥樣硬化動物模型。可例如藉由餵養動物高脂肪飲食或藉由使用對顯現動脈粥樣硬化高度敏感之轉殖基因動物來在動物中誘導動脈粥樣硬化。動物模型可用於測定抗衰老試劑減少斑塊之量或抑制動脈粥樣硬化動脈中斑塊之形成、減少動脈粥樣硬化斑塊之脂質含量(亦即，減少、降低斑塊中脂質之量)且引起斑塊之纖維帽厚度增加或增強之有效性。可使用蘇丹染色(Sudan staining)偵測動脈粥樣硬化血管中之脂質含量。免疫組織學及免疫化學及分子生物學分析(例如用於測定發炎性分子(例如IL-6)含量及用於測定上文所指出之衰老標記物含量)均可根據本文所描述之方法進行，該等方法在此項技術中常規地實施。
在另一非限制性實例中且如本文中所描述，已描述用博萊黴素治療動物之小鼠模型(參見例如Peng等人, PLoS One 8(4) (2013) e59348. doi: 10.1371/journal.pone.0059348；Mouratis等人, Curr. Opin. Pulm. Med. 17 (2011) 355-361)以用於測定試劑用於治療IPF之有效性。在肺病動物模型(例如博萊黴素動物模型、煙霧暴露動物模型或其類似物)中，可獲取呼吸量測以測定彈性、順應性、靜態順應性及外周毛細管氧飽和度(SpO 2)。免疫組織學及免疫化學及分子生物學分析(例如用於測定發炎性分子(例如IL-6)含量及用於測定上文所指出之衰老標記物含量)均可根據本文所描述之方法進行，該等方法在此項技術中常規地實施。
測定本文中所描述之抗衰老試劑在動物模型中選擇性地殺死衰老細胞之有效性可使用熟習此項技術者熟悉之一或多種統計分析進行。舉例而言，可使用諸如雙向變異數分析(ANOVA)之統計分析來測定用試劑治療之動物群組與未用試劑治療之動物群組(亦即陰性對照組，其可包括僅媒劑及/或非抗衰老試劑)之間的差異之統計顯著性。諸如SPSS、MINITAB、SAS、Statistika、Graphpad、GLIM、Genstat及BMDP之統計套裝軟體係現成的，且由熟習動物模型領域之技術者常規地使用。
熟習此項技術者將容易瞭解，表徵抗衰老試劑及測定抗衰老試劑之殺死程度可藉由比較測試試劑與適當陰性對照(例如僅媒劑及/或此項技術中已知不殺死衰老細胞之組合物、試劑或化合物)及適當陽性對照之活性來實現。用於表徵試劑之基於細胞之活體外分析亦包括用於測定試劑對非衰老細胞(例如，靜止細胞或增殖性細胞)之效應的對照。與一或多個陰性對照相比，有用之抗衰老試劑減少(亦即，降低)衰老細胞之存活百分比(亦即，以某種方式減少動物或基於細胞之分析中之存活衰老細胞的量)。因此，與殺死非衰老細胞相比，抗衰老試劑選擇性地殺死衰老細胞(其在本文中可稱為選擇性地殺死衰老細胞超過非衰老細胞)。
在某些實施例(在活體外分析或活體內(在人類或非人類動物中)中，至少一種抗衰老試劑殺死至少20%衰老細胞且殺死不超過5%非衰老細胞。在其他實施例(在活體外分析或活體內(在人類或非人類動物中)中，至少一種抗衰老試劑殺死至少約25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%或65%衰老細胞且殺死不超過約5%或10%非衰老細胞。在再其他實施例(在活體外分析或活體內(在人類或非人類動物中)中，至少一種抗衰老試劑殺死至少約30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%或65%衰老細胞且殺死不超過約5%、10%或15%非衰老細胞。在再其他實施例(在活體外分析或活體內(在人類或非人類動物中)中，至少一種抗衰老試劑殺死至少約40%、45%、50%、55%、60%或65%衰老細胞且殺死不超過約5%、10%、15%、20%或25%非衰老細胞。在再其他實施例(在活體外分析或活體內(在人類或非人類動物中)中，至少一種抗衰老試劑殺死至少約50%、55%、60%或65%衰老細胞且殺死不超過約5%、10%、15%、20%、25%或30%非衰老細胞。換言之，抗衰老試劑對衰老細胞之選擇性殺死比對非衰老細胞之選擇性殺死大至少5至25、10至50、10至100或100至1000倍。
關於本文所描述之用於治療衰老相關疾病或病症之方法的特定實施例，所殺死之衰老細胞百分比可指在包含促成疾病或病症發作、進展及/或惡化之衰老細胞的組織或器官中殺死之衰老細胞百分比。作為非限制性實例，大腦組織、眼睛之組織及部分、肺組織、心臟組織、動脈、關節、皮膚及肌肉可包含衰老細胞，如上文所描述，該等衰老細胞可藉由本文所描述之抗衰老試劑減少百分比且藉此提供治療效應。此外，自受影響組織或器官選擇性地移除至少20%或至少25%衰老細胞可具有臨床上顯著之治療效應。
關於本文所描述之方法的特定實施例，諸如藉由投與抗衰老試劑(亦即，參考上述活體內方法)治療與動脈硬化(諸如動脈粥樣硬化)相關之心血管疾病或病症，殺死之衰老細胞百分比可指在含有斑塊之受影響動脈中殺死之衰老細胞對比在動脈斑塊中殺死之非衰老細胞的百分比。在某些實施例中，在本文所描述之治療心血管疾病(諸如動脈粥樣硬化)之方法中，至少一種抗衰老試劑殺死動脈中至少20%衰老細胞且殺死不超過5%非衰老細胞。在其他實施例中，抗衰老試劑選擇性地殺死動脈硬化動脈中至少25%衰老細胞。
在一些實施例中，關於本文所描述之藉由投與抗衰老試劑治療骨關節炎之方法，殺死之衰老細胞百分比可指在骨關節炎關節中殺死之衰老細胞對比在骨關節炎關節中殺死之非衰老細胞的百分比。在某些實施例中，在本文所描述之治療骨關節炎之方法中，至少一種抗衰老試劑殺死骨關節炎關節中至少20%衰老細胞且殺死不超過5%非衰老細胞。在其他實施例中，抗衰老試劑選擇性地殺死骨關節炎關節中至少25%衰老細胞。
在一些實施例中，關於本文所描述之藉由投與至少一種抗衰老試劑治療衰老相關肺病或病症(例如COPD、IPF)之方法，殺死之衰老細胞百分比可指在受影響肺組織中殺死之衰老細胞對比在肺部之受影響肺組織中殺死之非衰老細胞的百分比。在某些實施例中，在本文所描述之治療衰老相關肺病及病症之方法中，抗衰老試劑殺死受影響之肺組織中至少20%衰老細胞且殺死不超過5%非衰老細胞。在其他實施例中，抗衰老試劑選擇性地殺死受影響之肺組織中至少25%衰老細胞。
在某些實施例中，提供用於鑑別(亦即篩選)適用於治療或預防(亦即，降低其發生之可能性)衰老相關疾病或病症之抗衰老試劑的試劑之方法。在一些實施例中，一種用於鑑別用於治療此等疾病及病症之抗衰老試劑的方法包含誘導細胞衰老以提供已建立之衰老細胞。本文及此項技術中描述了誘導細胞衰老之方法，該等方法包括例如暴露於輻射(例如10 Gy通常足夠)或化學治療劑(例如阿黴素或其他蒽環黴素)。在暴露於試劑之後，將細胞在適當條件(例如適合於給定細胞類型或細胞株之培養基、溫度、CO 2/O 2含量)下培養適當時間以允許建立衰老。如本文所論述，細胞之衰老可藉由以下方式測定：測定任何數目之特徵，諸如形態變化(如藉由例如顯微法觀測)；產生例如衰老相關之半乳糖(SA-gal)、p16INK4a、p21或任一或多個SASP因素(例如IL-6、MMP3)。接著將衰老細胞之樣品與候選試劑接觸(亦即，與試劑混合、組合或以某種方式允許細胞與試劑相互作用)。熟習此項技術者應瞭解，分析將包括適當的陰性及陽性對照，無論係歷史對照還是同時進行的對照。舉例而言，將已與衰老細胞類似培養但不暴露於衰老誘導試劑之對照非衰老細胞之樣品與候選試劑接觸。測定衰老細胞之存活水平且與非衰老細胞之存活水平進行比較。當衰老細胞之存活水平低於非衰老細胞之存活水平時，鑑別出抗衰老試劑。
在一些實施例中，用於鑑別抗衰老試劑之上述方法可進一步包含用於鑑別抗衰老試劑是否適用於治療骨關節炎之步驟。該方法可進一步包含使經鑑別之抗衰老試劑與能夠產生膠原蛋白之細胞接觸；及測定由細胞產生之膠原蛋白之含量。在一些實施例中，細胞係軟骨細胞且膠原蛋白係2型膠原蛋白。該方法可進一步包含向關節中有關節炎病變之非人類動物投與候選抗衰老試劑，且測定以下中之一或多者：(a)關節中衰老細胞之含量；(b)動物之生理功能；(c)一或多種炎症標記物之含量；(d)關節之組織學；及(e)所產生之2型膠原蛋白之含量， 從而測定抗衰老試劑之治療功效，其中與未用抗衰老試劑治療之動物相比，在經治療之動物中觀測到以下中之一或多者：(i)經治療之動物的關節中衰老細胞之含量降低；(ii)經治療之動物之生理功能改善；(iii)經治療之動物的之一或多種炎症標記物之含量降低；(iv)經治療之動物的關節中之組織標準化程度提高；(v)經治療之動物中產生的2型膠原蛋白之含量增加。如本文及此項技術中所描述，動物之生理功能可藉由測定腿部對所誘導或天然骨關節炎病況之敏感性的技術來測定，例如藉由動物對受影響之肢體承受重量之耐受性或動物移動遠離令其不適之刺激(諸如熱量或寒冷)的能力。如本文所述，測定在動物模型中殺死衰老細胞之試劑的有效性可使用熟習此項技術者將熟悉之一或多種統計分析進行。如本文中所描述且此項技術中常規地實踐之統計分析可用於分析資料。
在其他實施例中，用於鑑別抗衰老試劑之上述方法可進一步包含用於鑑別該抗衰老試劑是否適用於治療由動脈硬化引起或與動脈硬化相關之心血管疾病的步驟。因此，該方法可進一步包含在非人類動物中或在動物模型中投與抗衰老候選試劑，用於測定試劑減少斑塊之量、抑制動脈粥樣硬化動脈中斑塊之形成、減少動脈粥樣硬化斑塊之脂質含量(亦即，減少、降低斑塊中脂質之量)及/或引起斑塊之纖維帽厚度增加或增強之有效性。可使用蘇丹染色偵測動脈粥樣硬化血管中之脂質含量。用於測定發炎性分子(例如IL-6)含量之免疫組織學分析及/或用於測定上文所指出之衰老標記物含量之分析均可根據本文所描述之方法進行，該等方法在此項技術中常規地實施。
在特定實施例中，本文所描述之用於鑑別抗衰老試劑之方法可進一步包含向有動脈粥樣硬化斑塊之非人類動物投與候選抗衰老試劑，且測定以下中之一或多者：(a)動脈中衰老細胞之含量；(b)動物之生理功能；(c)一或多種炎症標記物之含量；(d)受影響之血管(例如動脈)之組織學；從而測定抗衰老試劑之治療功效，其中與未用抗衰老試劑治療之動物相比，在經治療之動物中觀測到以下中之一或多者：(i)經治療之動物的動脈中衰老細胞之含量降低；(ii)經治療之動物之生理功能改善；(iii)經治療之動物的之一或多種炎症標記物之含量降低；(iv)經治療之動物的動脈中之組織標準化程度提高。如本文及此項技術中所描述，動物之生理功能可藉由量測身體活動來測定。如本文中所描述且此項技術中常規地實踐之統計分析可用於分析資料。
在一些實施例中，本文所描述之用於鑑別抗衰老試劑之方法可包含向非人類動物肺病模型(諸如博萊黴素模型或煙霧暴露動物模型)投與候選抗衰老試劑，且測定以下中之一或多者：(a)肺部中衰老細胞之含量；(b)動物之肺部功能；(c)一或多種炎症標記物之含量；(d)肺組織之組織學， 從而測定抗衰老試劑之治療功效，其中與未用抗衰老試劑治療之動物相比，在經治療之動物中觀測到以下中之一或多者：(i)經治療之動物的肺部及肺組織中衰老細胞之含量降低；(ii)經治療之動物之肺部功能改善；(iii)經治療之動物的之一或多種炎症標記物之含量降低；(iv)經治療之動物的肺組織中之組織標準化程度提高。可進行呼吸量測以測定彈性、順應性、靜態順應性及外周毛細管氧飽和度(SpO 2)。可藉由測定眾多量測結果中之任一者來評估肺部功能，該等量測結果諸如呼氣儲備量(ERV)、用力肺活量(FVC)、用力呼氣量(FEV) (例如，一秒中之FEV，FEV1)、FEV1/FEV比率、25%至75%之用力呼氣流量，及最大自發通氣量(MVV)、峰值呼氣流量(PEF)、緩慢肺活量(SVC)。總肺容量包括總肺活量(TLC)、肺活量(VC)、殘氣量(RV)及功能性殘氣量(FRC)。肺泡毛細管膜上之氣體交換可使用一氧化碳之擴散容量(DLCO)來量測。亦可量測外周毛細管氧飽和度(SpO.sub.2)。如本文中所描述且此項技術中常規地實踐之統計分析可用於分析資料。 治療及預防衰老相關疾病及病症之方法
本文提供用於治療有需要之個體之有關於細胞衰老、與細胞衰老相關或由細胞衰老引起之病況、疾病或病症，包括年齡相關疾病及病症的方法。衰老相關疾病或病症在本文中亦可稱為衰老細胞相關疾病或病症。衰老相關疾病及病症包括例如心血管疾病及病症、發炎性疾病及病症、自身免疫性疾病及病症、肺病及病症、眼病及病症、代謝疾病及病症、神經疾病及病症(例如神經退化性疾病及病症)；由衰老誘導之年齡相關疾病及病症；皮膚病況；年齡相關疾病；皮膚病及病症；及移植相關疾病及病症。老化之顯著特徵為在分子、細胞、組織及生物體含量上發生逐漸喪失功能或退化症。年齡相關之退化症會導致公認的病理，諸如肌肉減少症、動脈粥樣硬化及心臟衰竭、骨質疏鬆、肺功能不全、腎衰竭、神經退化(包括黃斑變性、阿茲海默氏症及帕金森氏症)，及許多其他病理。儘管不同哺乳動物物種對特定年齡相關之病理的敏感性不同，但總體而言，年齡相關之病理通常在物種特定壽命之中間點(例如對於人類為50至60歲)開始以大致指數動力學上升(參見例如Campisi, Annu. Rev. Physiol. 75 (2013) 685-705；Naylor等人, Clin. Pharmacol. Ther. 93 (2013) 105-116)。
可藉由根據本文所描述之方法投與本文所描述之抗衰老試劑中之任一者來治療的衰老相關病況、病症或疾病的實例包括認知疾病(例如輕度認知障礙(MCI)、阿茲海默氏症及其他癡呆；亨廷頓氏症)；心血管疾病(例如動脈粥樣硬化、心臟舒張功能障礙、主動脈動脈瘤、絞痛症、心律不整、心肌病、充血性心臟衰竭、冠狀動脈疾病、心肌梗塞、心內膜炎、高血壓、頸動脈疾病、外周血管疾病、心臟應激抵抗、心臟纖維化)；代謝疾病及病症(例如肥胖症、糖尿病、代謝症候群)；運動功能疾病及病症(例如帕金森氏症、運動神經元功能障礙(MND)；亨廷頓氏症)；腦血管疾病；肺氣腫；骨關節炎；良性前列腺肥大；肺病(例如特發性肺纖維化、慢性阻塞性肺病(COPD)、肺氣腫、阻塞性細支氣管炎、哮喘)；發炎性/自身免疫性疾病及病症(例如骨關節炎、濕疹、銀屑病、骨質疏鬆、黏膜炎、移植相關疾病及病症)；眼科疾病或病症(例如年齡相關之黃斑變性、白內障、青光眼、視力喪失、老花眼)；糖尿病性潰瘍；癌細胞轉移；化學治療療法副作用、放射線療法副作用；年齡相關疾病及病症(例如脊柱後彎、腎功能障礙、虛弱、脫髮、聽力喪失、肌肉疲勞、皮膚病況、肌肉減少症及推間盤突出)及由衰老誘導之其他年齡相關疾病(例如由輻射、化學療法、吸菸、進食高脂肪/高糖飲食及環境因素產生之疾病/病症)；傷口癒合；皮膚色素沉著；纖維化疾病及病症(例如囊腫纖維化、腎纖維化、肝纖維化、肺纖維化、口腔黏膜下纖維化、心臟纖維化及胰臟纖維化)。在某些實施例中，可排除上文或本文所描述之疾病或病症中之任一或多者。
在一些實施例中，提供藉由在患有衰老相關疾病或病症之個體中藉由投與抗衰老試劑殺死與該疾病或病症相關之衰老細胞(亦即，已建立之衰老細胞)來治療該疾病或病症的方法，其中該疾病或病症為骨關節炎、特發性肺纖維化、慢性阻塞性肺病(COPD)或動脈粥樣硬化。 心血管疾病及病症
在其他實施例中，藉由本文所描述之方法治療的衰老相關疾病或病症為心血管疾病。心血管疾病可為以下中之任一或多者：絞痛症、心律不整、動脈粥樣硬化、心肌病、充血性心臟衰竭、冠狀動脈疾病(CAD)、頸動脈疾病、心內膜炎、心臟病發作(冠狀動脈血栓、心肌梗塞[MI])、高血壓(high blood pressure/hypertension)、主動脈動脈瘤、腦動脈瘤、心臟纖維化、心臟舒張功能障礙、高膽固醇血症/高脂質血症、二尖瓣脫垂、外周血管疾病(例如外周動脈疾病(PAD))、心臟應激抵抗及中風。
在某些實施例中，提供用於治療與動脈硬化(亦即動脈之硬化)相關或由動脈硬化引起之衰老相關心血管疾病的方法。心血管疾病可為動脈粥樣硬化(例如冠狀動脈疾病(CAD)及頸動脈疾病)；絞痛症、充血性心臟衰竭及外周血管疾病(例如外周動脈疾病(PAD))中之任一或多者。用於治療與動脈硬化相關或由動脈硬化引起之心血管疾病的方法可降低高血壓、絞痛症、中風及心臟病發作(亦即冠狀動脈血栓、心肌梗塞(MI))發生之可能性。在某些實施例中，提供用於使個體之血管(例如，動脈)中之動脈粥樣硬化斑塊穩定，藉此降低血栓性事件(諸如中風或心肌梗塞)發生或延遲發生的可能性的方法。在某些實施例中，此等方法包含投與抗衰老試劑、減少(亦即，引起降低)個體之血管(例如，動脈)中動脈粥樣硬化斑塊之脂質含量及/或增加纖維帽厚度(亦即，引起纖維帽之增加、增強或促進其增厚)。
動脈粥樣硬化之特徵在於在中等大小動脈及較大動脈之內腔上夾帶之斑塊狀內膜斑塊(動脈粥樣硬化)；該等斑塊含有脂質、發炎性細胞、平滑肌細胞及結締組織。動脈粥樣硬化可能影響較大動脈及中等大小動脈，包括冠狀動脈、頸動脈及腦動脈、主動脈及其分支，及肢端之主要動脈。在一些實施例中，提供藉由投與抗衰老試劑抑制動脈粥樣硬化斑塊之形成(或減少、消減、引起降低動脈粥樣硬化斑塊之形成)的方法。在其他實施例中，提供用於減少(降低、消減)斑塊之量(亦即，含量)的方法。血管(例如，動脈)中斑塊之量減少可例如藉由斑塊之表面積減小或藉由血管(例如，動脈)之閉塞範圍或程度(例如，百分比)減小來測定，斑塊之表面積減小或血管之閉塞範圍或程度減小可藉由血管造影或心臟血管技術中所用之其他視覺化方法來測定。本文亦提供用於增加個體之一或多個血管(例如，一或多個動脈)中存在的動脈粥樣硬化斑塊之穩定性(或改良、促進、增強穩定性)的方法，該等方法包含向個體投與本文所描述之抗衰老試劑中之任一者。
可使用此項技術中已知針對心血管疾病之標準診斷方法鑑別患有心血管疾病之個體。一般而言，動脈粥樣硬化及其他心血管疾病之診斷係基於患者之症狀(例如胸部疼痛或壓力(絞痛症)、手臂或腿之麻木或無力、說話困難或言語不清、面部肌肉下垂、腿疼痛、高血壓、腎衰竭及/或勃起功能障礙)、病史及/或體檢。診斷可藉由血管造影、超音波檢查或其他成像測試來證實。有罹患心血管疾病風險之個體包括彼等有一或多種易感染因素諸如心血管疾病家族病史之個體，及彼等有其他風險因素(亦即，易感染因素)諸如高血壓、血脂異常、高膽固醇、糖尿病、肥胖症及吸菸、久坐生活方式及高血壓之個體。在某些實施例中，作為衰老細胞相關疾病/病症之心血管疾病為動脈粥樣硬化。
醫學及臨床領域技術者可很容易地測定一或多種抗衰老試劑用於治療或預防心血管疾病(例如動脈粥樣硬化) (亦即，減少或降低其罹患或發生之可能性)的有效性。診斷方法中之一者或任何組合，包括體檢、臨床症狀評估及監測及本文所描述且在此項技術中實踐之分析測試及方法之執行(例如，血管造影、心電圖、應激測試、非應激測試)，可用於監測個體之健康狀況。可使用此項技術中已知之技術，諸如將已接受治療之患有心血管疾病或有患心血管疾病風險之患者的症狀與沒有接受此等治療或接受安慰劑治療之患者的症狀進行比較，來分析抗衰老試劑或包含該抗衰老試劑之醫藥組合物之治療效應。 發炎性及自身免疫性疾病及病症
在某些實施例中，衰老相關疾病或病症係發炎性疾病或病症，諸如作為非限制性實例係骨關節炎，其可根據本文所描述之包含投與抗衰老試劑之方法治療或預防(亦即，降低發生之可能性)。可藉由投與本文所描述之諸如抑制劑及拮抗劑之抗衰老試劑治療之其他發炎性或自身免疫性疾病或病症包括骨質疏鬆、銀屑病、口腔黏膜炎、類風濕性關節炎、發炎性腸道疾病、濕疹、脊柱後彎、推間盤突出及肺病、COPD及特發性肺纖維化。
骨關節炎退化性關節疾病之特徵在於高力學應力部位處之軟骨纖維化、骨硬化及滑膜及關節囊增厚。纖維化係涉及軟骨表層之分裂的局部表面結構紊亂。早期分裂沿著主要膠原蛋白束之軸線與軟骨表面相切。軟骨內之膠原蛋白變得紊亂，且軟骨表面之蛋白聚糖損失。在關節中缺乏蛋白聚糖之保護性及潤滑效應的情況下，膠原蛋白纖維變得容易降解，隨之發生力學破壞。罹患骨關節炎之易感染風險因素包括年齡增長、肥胖症、既往關節損傷、關節過度使用、大腿肌肉無力及遺傳學。骨關節炎之症狀包括關節疼痛或僵硬，尤其係髖部、膝部及下背部在不活動或過度使用後；休息後僵硬，運動後消失；及活動後或接近一天結束時疼痛加劇。骨關節炎亦可能影響頸部、小手指關節、拇指根部、腳踝及大腳趾。慢性炎症被認為係導致骨關節炎的主要年齡相關因素。隨著年齡的增長，關節過度使用及肥胖症似乎促成骨關節炎。
藉由選擇性殺死衰老細胞，抗衰老試劑能預防(亦即，降低發生之可能性)、減少或抑制關節中蛋白聚糖層之損失或侵蝕，減少受影響關節中之炎症，且促進(亦即，刺激、增強、誘導)膠原蛋白(例如2型膠原蛋白)產生。移除衰老細胞使得關節中產生之發炎性細胞介素(諸如IL-6)之量(亦即，含量)減少且炎症減少。本文提供藉由向個體投與至少一種抗衰老試劑(其可與至少一種醫藥學上可接受之賦形劑組合以形成醫藥組合物)治療骨關節炎、選擇性殺死個體骨關節炎關節中之衰老細胞及/或誘導膠原蛋白(諸如2型膠原蛋白)產生之方法。抗衰老試劑亦可用於減少(抑制、降低)使關節中之膠原蛋白降解的金屬蛋白酶13 (MMP-13)之產生，且用於恢復蛋白聚醣層或抑制蛋白聚醣層之損失及/或降解。因此，用抗衰老試劑進行治療亦預防(亦即，降低其發生之可能性)、抑制或減少侵蝕或減緩(亦即，降低速率)骨骼侵蝕。如本文中詳細描述，在某些實施例中，將抗衰老試劑直接投與至骨關節炎關節(例如藉由關節內、局部、經皮、皮內或皮下遞送)。用抗衰老試劑進行治療亦可恢復、改良或抑制關節肌力之降低。另外，包含投與抗衰老試劑之該等方法可減少關節疼痛且因此適用於骨關節炎關節之疼痛管理。
醫學及臨床領域技術者可很容易地測定一或多種抗衰老試劑用於治療或預防個體之骨關節炎及監測接受一或多種抗衰老試劑之個體的有效性。診斷方法中之一者或任何組合，包括體檢(諸如測定受影響關節之壓痛、腫脹或發紅)、臨床症狀評估及監測(諸如疼痛、僵硬性、活動性)及本文所描述且在此項技術中實踐之分析測試及方法之執行(例如，測定發炎性細胞介素或趨化介素之含量；測定軟骨損失之X射線影像，如關節中之骨骼之間的空間變窄所示；磁共振成像(MRI)、提供骨骼及軟組織(包括軟骨)之詳細影像)，可用於監測個體之健康狀況。可藉由將已接受治療之患有發炎性疾病或病症(諸如骨關節炎)或有患發炎性疾病或病症風險之患者的症狀與沒有接受此等治療或接受安慰劑治療之患者的症狀進比較，來分析一或多種抗衰老試劑之治療效應。
在某些實施例中，抗衰老試劑可以用於治療及/或預防(亦即，降低或減少發生之可能性)類風濕性關節炎(RA)。先天性及適應性免疫反應失調表徵類風濕性關節炎(RA)，RA為自身免疫性疾病，其發生率隨年齡增長而增加。類風濕性關節炎係通常影響手及足中之小關節的慢性發炎性病症。骨關節炎至少部分由關節之磨損及撕裂產生，而類風濕性關節炎影響關節之內層，從而導致會引起骨骼侵蝕及關節變形之疼痛腫脹。RA有時亦可影響身體之其他器官，諸如皮膚、眼睛、肺部及血管。RA可能發生在任何年齡之個體中；然而，RA通常在40歲之後開始發展。該病症在女性中更為常見。在本文所描述之方法的某些實施例中，排除RA。
慢性炎症亦可造成其他年齡相關或衰老相關之疾病及病症，諸如脊柱後彎及骨質疏鬆。脊柱後彎係嚴重的脊柱彎曲，常見於正常及過早老化(參見例如Katzman等人, J. Orthop. Sports Phys. Ther. 40 (2010) 352-360)。通常在骨質疏鬆使脊椎骨減弱至其破裂及壓縮的程度之後發生年齡相關之脊柱後彎。幾種類型之脊柱後彎主要針對嬰兒或青少年。嚴重的脊柱後彎會影響肺部、神經及其他組織及器官，導致疼痛及其他問題。脊柱後彎與細胞衰老相關。可在此項技術中使用的臨床前動物模型中測定表徵抗衰老試劑用於治療脊柱後彎之能力。舉例而言，TTD小鼠罹患脊柱後彎(參見例如de Boer等人, Science 296 (2002) 1276-1279)；可使用之其他小鼠包括BubR1 H/H小鼠，其亦已知為罹患脊柱後彎(參見例如Baker等人, Nature 479 (2011) 232-236)。隨時間推移目視量測脊柱後彎形成。藉由偵測一或多種衰老細胞相關之標記物(諸如藉由SA-β-Gal染色)之存在，可測定藉由用抗衰老試劑進行治療而減少之衰老細胞之含量。
骨質疏鬆係進行性骨病，其特徵在於可能導致骨折風險增加之骨質量及骨密度降低，其可藉由投與本文所描述之抗衰老試劑來治療或預防。骨礦物質密度(BMD)降低，骨微架構劣化，且骨中蛋白質之量及種類改變。骨質疏鬆典型地藉由骨礦物質密度測試進行診斷及監測。絕經後女性或雌激素減少之女性風險最大。雖然75歲以上男性及女性均有風險，但女性罹患骨質疏鬆的可能性係男性的兩倍。藉由偵測一或多種衰老細胞相關之標記物(諸如藉由SA-β-Gal染色)之存在，可測定藉由用抗衰老試劑進行治療而減少之衰老細胞之含量。
在再其他實施例中，可用本文所描述之抗衰老試劑治療或預防(亦即，降低發生之可能性)之發炎性/自身免疫性病症包括大腸急躁症(IBS)及發炎性腸病，諸如潰瘍性結腸炎及克隆氏病。發炎性腸道疾病(IBD)涉及全部或部分消化道之慢性炎症。除了由IBD引起之危及生命的併發症之外，該疾病還可能疼痛且衰弱。潰瘍性結腸炎係在消化道部分中引起持久炎症之發炎性腸道疾病。症狀通常會隨著時間推移而發展，而非突然出現。潰瘍性結腸炎通常僅影響大腸(結腸)及直腸之最內內層。克隆氏病係發炎性腸道疾病，其引起沿消化道內層任何地方之炎症，且通常深入延伸至受影響組織中。此可能導致腹痛、嚴重腹瀉及營養不良。克隆氏病引起之炎症可能涉及消化道之不同區域。該疾病之診斷及監測係根據此項技術中常規實施之方法及診斷測試進行，包括血液測試、結腸鏡檢查、乙狀結腸鏡檢查、鋇灌腸、CT掃描、MRI、內窺鏡檢查及小腸成像。
可藉由使用抗衰老試劑治療或預防(亦即，降低發生之可能性)之其他發炎性或自身免疫性疾病包括濕疹、銀屑病、骨質疏鬆及肺病(例如慢性阻塞性肺病(COPD)、特發性肺纖維化(IPF)、哮喘)、發炎性腸道疾病及黏膜炎(包括口腔黏膜炎，其在一些情況下由輻射誘導)。可用本文所描述之抗衰老試劑治療諸如腎纖維化、肝纖維化、胰纖維化、心臟纖維化、皮膚傷口癒合及口腔黏膜下纖維化之器官之某些纖維化或纖維化病況。
在某些實施例中，衰老細胞相關病症係發炎性病症，諸如作為非限制性實例係銀屑病及濕疹，其可根據本文所描述之包含投與抗衰老試劑之方法治療或預防(亦即，降低發生之可能性)。銀屑病之特徵在於皮膚表皮層之異常過度及快速生長。銀屑病診斷通常係基於皮膚外觀。銀屑病典型之皮膚特徵為鱗片狀紅色斑塊、丘疹或可能疼痛及發癢之皮膚斑點。在銀屑病中，觀測到各種促炎性細胞介素之皮膚及全身性過度表現，諸如SASP之關鍵組分IL-6。濕疹係皮膚炎症，其特徵為發紅、皮膚腫脹、發癢及乾燥、結痂、掉皮、起泡、開裂、滲水或出血。醫學及臨床領域技術者可很容易地測定抗衰老試劑治療銀屑病及濕疹及監測接受此等抗衰老試劑之個體的有效性。診斷方法中之一者或任何組合，包括體檢(諸如皮膚外觀)、臨床症狀評估及監測(諸如發癢、腫脹及疼痛)及本文所描述且在此項技術中實踐之分析測試及方法之執行(亦即，測定促炎性細胞介素之含量)。
可用本文所描述之抗衰老試劑治療或預防(亦即，降低發生之可能性)之其他免疫病症或病況包括由對器官移植(例如腎臟、骨髓、肝臟、肺部或心臟移植)之宿主免疫反應產生之病況，諸如移植器官之排斥反應。本文所描述之抗衰老試劑亦可用於治療或降低移植物抗宿主疾病發生之可能性。 肺病及病症
在一些實施例中，提供藉由在患有衰老相關疾病或病症亦即肺病或病症之個體中藉由投與本文所描述之抗衰老試劑殺死與該疾病或病症相關之衰老細胞(亦即，已建立之衰老細胞)來治療或預防該疾病或病症(亦即，降低其發生之可能性)的方法。衰老相關肺病及病症包括例如特發性肺纖維化(IPF)、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、囊腫纖維化、支氣管擴張及肺氣腫。
COPD係一種肺部疾病，其特徵在於肺部組織破裂(肺氣腫)及小氣道功能障礙(阻塞性細支氣管炎)導致持續氣流不良。COPD之主要症狀包括呼吸短促、喘息、胸悶、慢性咳嗽及過量痰產生。香菸煙霧活化之嗜中性白血球及巨噬細胞中之彈性蛋白酶使肺泡結構之細胞外基質崩解，導致空氣空間擴大及呼吸能力喪失(參見例如Shapiro等人, Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 32 (2005) 367-372)。COPD最常由菸草煙霧(包括香菸煙霧、雪茄煙霧、二手菸煙霧、菸斗煙霧)、職業性暴露(例如，暴露於粉塵、煙霧或煙氣)引起，發生時間長達幾十年，因此衰老係罹患COPD之風險因素。
涉及引起肺損傷之過程包括例如由菸草煙霧中高濃度自由基產生之氧化應激；由於對氣道中之刺激物之發炎性反應而導致的細胞介素釋放；及菸草煙霧及自由基對抗蛋白酶之損傷，使蛋白酶損傷肺部。遺傳敏感性亦可促成該疾病。在約1%患有COPD的人中，該疾病由在肝臟中引起低含量α-1-抗胰蛋白酶產生之遺傳病症引起。酶通常分泌至血流中以幫助保護肺部。
肺纖維化係一種慢性及進行性肺病，其特徵為肺部之硬化及瘢痕形成，可能導致呼吸衰竭、肺癌及心臟衰竭。纖維化與上皮修復相關。活化纖維母細胞，增加細胞外基質蛋白質之產生，且向收縮性肌纖維母細胞的轉分化有助於傷口收縮。臨時基質堵塞受傷上皮細胞且提供上皮細胞遷移之支架，包括上皮-間質轉移(EMT)。與上皮細胞損傷相關之失血誘導血小板活化、生長因子產生及急性發炎性反應。正常情況下，上皮障壁癒合及發炎性反應消退。然而，在纖維化疾病中，纖維母細胞反應繼續，導致傷口癒合未得到解決。纖維母細胞病灶之形成係疾病之特徵，反映進行中之纖維形成的位置。顧名思義，IPF之病源學未知。IPF中細胞衰老之參與係由以下觀測結果表明的：疾病發病率隨著年齡增長而增加，且IPF患者之肺部組織富集SA-β-Gal陽性細胞且含有升高含量之衰老標記物p21 (參見例如Minagawa等人, Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 300 (2011) L391-L401；亦參見例如Naylor等人, 同上)。短端粒係IPF及細胞衰老兩者共有之風險因素(參見例如Alder等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105 (2008) 13051-13056)。不希望受理論束縛，以下報告表明了細胞衰老促成IPF：即衰老細胞之SASP組分，諸如IL-6、IL-8及IL-1示出，促進纖維母細胞向肌纖維母細胞之分化及上皮間質轉化，導致肺泡及間質空間之細胞外基質之廣泛重塑(參見例如Minagawa等人, 同上)。
有罹患肺纖維化風險之個體包括暴露於環境或職業污染物(諸如石棉沉著病及矽粉沉著病)之個體；吸菸之個體；有一些典型結締組織疾病，諸如類風濕性關節炎、SLE及硬皮病；有涉及結締組織之其他疾病，諸如類肉瘤病及韋格納氏肉芽腫病；有感染；服用某些藥物(例如胺碘酮、博萊黴素、白消安、甲胺喋呤及呋喃妥因)；經受胸部放射線療法之個體；及家族成員患有肺纖維化之個體。
COPD之症狀可包括以下中之任一者：呼吸短促，尤其在身體活動期間；喘息；胸悶；由於肺部之過量黏液，清晨第一件事即清理喉嚨；產生可為澄清的、白色的、黃色的或米黃色的痰之慢性咳嗽；嘴唇或指甲床發藍(蒼白)；頻繁呼吸道感染；缺乏能量；非預期體重減輕(在疾病後期觀測到)。患有COPD之個體亦可能經歷惡化，在此期間症狀惡化且持續數天或更長時間。肺纖維化之症狀為此項技術中已知的且包括呼吸短促，尤其在運動期間；乾咳、入侵性咳嗽；急促淺呼吸；逐漸非預期體重減輕；疲勞；關節及肌肉疼痛；及結塊(手指或腳趾之尖端變寬及變圓)。
患有COPD或肺纖維化之個體可以使用此項技術中常規實施的標準診斷方法鑑別。可使用通常用於診斷之方法進行監測向患有肺病或處於罹患肺病之風險的個體投與之一或多種抗衰老試劑之效應。一般而言，可進行以下檢查或測試中之一或多者：體檢、患者病史、患者家族病史、胸部X射線、肺部功能測試(諸如肺活量測量法)、血液測試(例如動脈血氣體分析)、支氣管肺泡灌洗、肺活檢、CT掃描及運動測試。
可藉由使用抗衰老試劑治療之其他肺病或病症包括例如肺氣腫、哮喘、支氣管擴張及囊腫纖維化(參見例如Fischer等人, Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 304(6) (2013) L394-400)。此等疾病亦可能因菸草煙霧(包括香菸煙霧、雪茄煙霧、二手菸煙霧、菸斗煙霧)、職業性暴露(例如，暴露於粉塵、煙霧或煙氣)、感染及/或誘導細胞衰老且進而導致炎症之污染物而加劇。肺氣腫有時被視為COPD之亞組。
支氣管擴張由對氣道之損失引起，其使氣道變寬、鬆弛及結疤。支氣管擴張通常係由損傷氣道壁或抑制氣道清除黏液之醫學病況引起。此等病況之實例包括囊腫纖維化及原發性睫狀運動困難(PCD)。當僅一部分肺部受影響時，該病症可能係由阻塞而非醫學病況引起。
本文所描述之用於治療或預防(亦即，降低其可能性或發生)衰老相關肺病或病症的方法亦可用於治療正衰老且有肺部功能損失(或退化) (亦即，與較年輕個體相比，肺部功能下降或減弱)及/或肺部組織退化之個體。隨著年齡增長，呼吸系統會經歷各種解剖、生理和免疫變化。結構變化包括胸壁及胸脊變形，其可能損害總呼吸系統順應性，從而導致呼吸努力增加。隨著年齡增長，呼吸系統會經歷各種結構、生理和免疫變化。與較年輕成人相比，老年人的支氣管肺泡灌洗(BAL)中可常見嗜中性白血球之比例增加且巨噬細胞之比例降低。下呼吸道中之持續低度發炎可能引起蛋白水解及氧化劑介導之肺基質損傷，導致肺泡單元損失且肺泡膜氣體交換受損，這與衰老有關。下呼吸道之持續炎症可能使老年人更容易受有毒環境暴露之影響，且加速肺部功能下降。(參加例如Sharma等人, Clinical Interventions in Aging 1 (2006) 253-260)。氧化應激加重老化期間的炎症(參加例如Brod, Inflamm. Res. 49 (2000) 561-570；Hendel等人, Cell Death and Differentiation 17 (2010) 596-606)。衰老期間改變氧化還原平衡且增加氧化應激會促成細胞介素、趨化介素及黏附分子及酶之表現(參加例如Chung等人, Ageing Res. Rev. 8 (2009) 18-30)。巨噬細胞、T細胞及肥大細胞之組成性活化及募集促進蛋白酶釋放，從而導致細胞外基質降解、細胞死亡、重塑及會在慢性炎症期間引起組織及器官損傷之其他事件(參加例如Demedts等人, Respir. Res. 7 (2006) 53-63)。藉由向老齡個體(其包括無症狀之中年成人)投與抗衰老試劑，肺部功能之減退可藉由殺死及自呼吸道移除衰老細胞而減速或抑制。
醫學及臨床領域技術者可很容易地測定抗衰老試劑之有效性。診斷方法中之一者或任何組合，包括體檢、臨床症狀評估及監測及本文所描述之分析測試及方法之執行，可用於監測個體之健康狀況。可使用此項技術中已知之技術，諸如將已接受治療之患有肺病或有患肺病風險之患者的症狀與沒有接受此等治療或接受安慰劑治療之患者的症狀進行比較，來分析抗衰老試劑或包含該抗衰老試劑之醫藥組合物之治療效應。另外，可進行評估肺部之力學功能的方法及技術，例如量測肺容量、彈性及氣道超敏反應之技術。為測定肺部功能及監測整個治療中之肺部功能，可獲得眾多量測結果中之任一者：呼氣儲備量(ERV)、用力肺活量(FVC)、用力呼氣量(FEV) (例如，一秒中之FEV，FEV1)、FEV1/FEV比率、25%至75%之用力呼氣流量，及最大自發通氣量(MVV)、峰值呼氣流量(PEF)、緩慢肺活量(SVC)。總肺容量包括總肺活量(TLC)、肺活量(VC)、殘氣量(RV)及功能性殘氣量(FRC)。肺泡毛細管膜上之氣體交換可使用一氧化碳之擴散容量(DLCO)來量測。亦可量測外周毛細管氧飽和度(SpO 2)；正常氧含量通常在95%與100%之間。低於90%之SpO 2含量表明個體有低血氧症。低於80%之值被認為係致命性的，且需要干預以維持大腦及心臟功能且避免心臟或呼吸停止。 神經疾病及病症
可藉由投與本文所描述之抗衰老試劑治療之衰老相關疾病或病症包括神經疾病或病症。此等衰老相關疾病及病症包括帕金森氏症、阿茲海默氏症(及其他癡呆)、運動神經元功能障礙(MND)、輕度認知障礙(MCI)、亨廷頓氏症及眼睛疾病及病症，諸如年齡相關之黃斑變性。與年齡增長相關之眼睛之其他疾病有青光眼、視力喪失、老花眼及白內障。
帕金森氏症(PD)係第二最常見神經退化性疾病。其為大腦殘疾病況，以動作緩慢(運動遲緩)、顫抖、僵硬表徵，且在後期失去平衡。許多此等症狀歸因於大腦中某些神經之損失，其導致多巴胺缺乏。此疾病之特徵在於神經退化，諸如黑質緻密部中之多巴胺激導性神經元之約50%至70%的損失、紋狀體中多巴胺之嚴重損失及/或主要由α-突觸核蛋白及泛素組成的胞質內夾雜物(路易體)之存在。帕金森氏症之特徵亦為運動缺陷，諸如震顫、僵硬、運動遲緩及/或姿勢不穩定。有罹患帕金森氏症風險之個體包括有帕金森氏症之家族病史之彼等個體及暴露於殺蟲劑(例如魚藤酮或百草枯)、除草劑(例如橙劑)或重金屬之彼等個體。產生多巴胺之神經元的衰老被認為係經由產生反應性含氧物種促成PD中觀測到之細胞死亡的原因(參見例如Cohen等人, J. Neural Transm. Suppl. 19 (1983) 89-103)；因此，本文所描述之方法及抗衰老試劑適用於治療及預防帕金森氏症。
用於偵測、監測或定量與帕金森氏症相關之神經退化性缺陷及/或運動缺陷的方法為此項技術中已知的，諸如組織學研究、生物化學研究及行為評估(參見例如美國申請公開案第2012/0005765號)。帕金森氏症之症狀為此項技術中已知的，且包括但不限於難以開始或完成自發運動、急抽、僵硬運動、肌肉萎縮、顫抖(震顫)及心跳速率變化，但為正常反射、運動遲緩及姿勢不穩定性。逐漸認識到，診斷患有帕金森氏症的人除其身體症狀外亦可能患有認知障礙，包括輕度認知障礙。
阿茲海默氏症(AD)係一種神經退化性疾病，其表現出緩慢進行性精神惡化，伴有記憶障礙、定向障礙和意識模糊，從而導致嚴重癡呆。年齡係罹患AD之單一最大易感染風險因素，其為老年人癡呆之主要原因(參見例如Hebert等人, Arch. Neural. 60 (2003) 1119-1122)。早期臨床症狀與輕度認知障礙有顯著相似性(參見下文)。隨著疾病進展，發生判斷減弱、意識模糊、行為變化、定向力障礙及行走及吞咽困難。
阿茲海默氏症之特徵在於組織學樣本中存在神經原纖維纏結及澱粉樣蛋白斑塊(老年斑)。該疾病主要涉及大腦之邊緣及皮質區。含有澱粉樣蛋白前驅蛋白(APP)之類澱粉樣Aβ片段的嗜銀斑塊分散於整個大腦皮質及海馬體中。神經原纖維纏結存在於錐體神經元中，主要位於Meynert之新皮層、海馬體及核底中。觀測到其他變化，諸如海馬體之錐體細胞中之粒泡變性，及皮質及海馬體中之神經元損失及神經膠質瘤。有罹患阿茲海默氏症風險之個體包括：高齡之個體；有阿茲海默氏症之家族病史之彼等個體；有遺傳風險基因(例如，ApoE4)或確定性基因突變(例如，APP、PS1或PS2)之彼等個體；及有頭部創傷或心臟/血管病況(例如，高血壓、心臟病、中風、糖尿病、高膽固醇等)病史之彼等個體。
此項技術中已知多種行為及組織病理學分析法用於評估阿茲海默氏症表型、用於表徵治療劑及評估治療。組織學分析通常在死後進行。Aβ含量之組織學分析可使用硫代黃素-S、剛果紅或抗Aβ染色(例如，4G8、10D5或6E10抗體)來進行，以觀測切片腦組織上之Aβ沉積(參見例如Holcomb等人, Nat. Med. 4 (1998) 97-100；Borchelt等人, Neuron 19 (1997) 939-945；Dickson等人, Am. J. Path. 132 (1998) 86-101)。亦描述在轉殖基因小鼠中觀察Aβ沉積之活體內方法。BSB ((反,反)-1-溴-2,5-雙-(3-羥基羰基-4-羥基)苯乙烯基苯)及PET示蹤劑 11C標記之匹茲堡化合物-B (PIB)結合於AP斑塊(參見例如Skovronsky等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97 (2000) 7609-7614；Klunk等人, Ann. Neurol. 55 (2004) 306-319)。含 19F之嗜澱粉性剛果紅型化合物FSB ((E,E)-1-氟-2,5-雙-(3-羥基羰基-4-羥基)苯乙烯基苯)允許藉由MRI觀測Aβ斑塊(參見例如Higuchi等人, Nature Neurosci. 8 (2005) 527-533)。經放射性標記之經腐胺修飾之類澱粉樣蛋白-β肽標記阿茲海默氏症之小鼠模型中活體內澱粉樣蛋白沉積物(參見例如Wengenack等人, Nat. Biotechnol. 18 (2000) 868-872)。
星形膠質細胞增加之膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)係星形膠質細胞活化及神經退化期間之神經膠質瘤的標記物。AP斑塊與GFAP陽性活化之星形膠質細胞相關，且可經由GFAP染色而觀測(參見例如Nagele等人, Neurobiol. Aging 25 (2004) 663-674；Mandybur等人, Neurology 40 (1990) 635-639；Liang等人, J. Biol. Chem. 285 (2010) 27737-27744)。神經原纖維纏結可使用硫代黃素-S螢光顯微法及Gallyas銀染藉由免疫組織化學來鑑別(參見例如Gotz等人, J. Biol. Chem. 276 (2001) 529-534；美國專利第6,664,443號)。使用電子顯微術及軸突傳輸研究之軸突染色可用於觀測神經元退化(參見例如Ishihara等人, Neuron 24 (1999) 751-762)。
可使用此項技術中已知針對阿茲海默氏症之標準診斷方法鑑別患有阿茲海默氏症之個體。一般而言，阿茲海默氏症之診斷係基於症狀(例如記憶功能之進行性減退、對正常活動的逐漸退縮和沮喪、冷漠、激躁或易怒、攻擊性、焦慮、睡眠紊亂、煩躁不安、異常運動行為、抑制解除、社會退縮、食慾減少、幻覺、失智症)、病史、神經心理測試、神經及/或患者之體檢。亦可評估腦脊髓液中與阿茲海默症病理相關之各種蛋白質，包括τ、澱粉樣蛋白β肽及AD7C-NTP。遺傳測試亦可用於早發性家族性阿茲海默氏病(eFAD)，一種自體顯性基因疾病。臨床基因測試可用於AD症狀患者或早發性疾病患者的高危家庭成員。在美國，PS2及APP之突變可在臨床或聯邦審批通過的實驗室中在臨床實驗室改進角度下評價。用於PS1突變之商業測試亦可用(Elan Pharmaceuticals)。
醫學及臨床領域技術者可很容易地測定本文所描述之一或多種抗衰老試劑及監測接受一或多種抗衰老試劑之個體的有效性。診斷方法中之一者或任何組合，包括體檢、臨床症狀評估及監測及本文所描述之分析測試及方法之執行，可用於監測個體之健康狀況。可使用此項技術中已知之技術，諸如將已接受治療之患有阿茲海默氏症或有患阿茲海默氏症風險之患者的症狀與沒有接受此等治療或接受安慰劑治療之患者的症狀進行比較，來分析一或多種抗衰老試劑之投與效應。
輕度認知障礙(MCI)係腦功能症候群，涉及認知障礙之發作及演變，超出基於個體年齡及教育所預期，但其並不顯著足以干擾個體之日常活動。MCI為認知衰老之態樣，其被視為正常衰老與可能轉變為癡呆症之間的過渡狀態(參見Pepeu, Dialogues in Clinical Neuroscience 6 (2004) 369-377)。主要影響記憶之MCI被稱為「健忘性MCI」。有健忘性MCI之個人可能開始忘記他或她以前很容易回憶起來的重要資訊，諸如近期事件。健忘性MCI通常被視為阿茲海默氏症之前驅階段。影響除記憶之外的思考技能的MCI稱為「非健忘性MCI」。此類型之MCI影響思考的技能，諸如做出明智決定、判斷完成複雜任務所需的時間或步驟順序或視覺感知的能力。認為患有非健忘性MCI之個體更可能轉變為其他類型之癡呆(例如，路易體之癡呆)。
醫學領域的技術人員越來越認識到，經診斷患有帕金森氏症的人除其身體症狀以外亦可能患有MCI。近期研究表明，20%至30%帕金森氏症患者患有MCI，且其MCI往往會為健忘性。患有MCI之帕金森氏症患者有時會發展為完全癡呆(帕金森氏症伴癡呆)。
用於偵測、監測、量化或評估與MCI相關之神經病理學缺陷的方法為此項技術中已知的，包括星形膠質細胞形態分析、乙醯膽鹼釋放、評估神經退化之銀染及偵測β澱粉樣蛋白沉積之PiB PET成像(參見例如美國申請公開案第2012/0071468號；Pepeu, (2004), 同上)。用於偵測、監測、量化或評估與MCI相關之行為缺陷的方法亦為此項技術中已知的，包括八臂放射狀迷宮範例、非樣品匹配任務、水迷宮中的分配中心位置測定任務、Morris迷宮測試、視覺空間任務、延遲回應空間記憶任務及嗅覺新穎性測試。
運動神經元功能障礙(MND)係一組破壞運動神經元之進行性神經病症，運動神經元係控制諸如說話、行走、呼吸及吞咽等基本自主肌肉活動之細胞。其根據退化是否影響上運動神經元、下運動神經元或兩者進行分類。MND之實例包括(但不限於)肌萎縮性側索硬化(ALS)，亦稱為葛雷克氏病、進行性延髓麻痺、假性延髓麻痺、原發性側索硬化、進行性肌肉萎縮、下運動神經元疾病及脊髓性肌萎縮(SMA) (例如SMA1亦稱為韋爾德尼-霍夫曼氏病(Werdnig-Hoffmann Disease)，SMA2、SMA3亦稱為庫格爾伯格-韋蘭德氏病(Kugelberg-Welander Disease)及甘迺迪氏症(Kennedy's disease))、脊髓灰質炎後症候群及遺傳性痙攣性截癱。在成人中，最常見MND係肌萎縮性側索硬化(ALS)，其影響上運動神經元及下運動神經元兩者。其可影響手臂、腿或面部肌肉。原發性側索硬化為上運動神經元之疾病，而進行性肌肉萎縮僅影響脊髓中之下運動神經元。在進行性延髓麻痺中，腦幹之最低運動神經元受最大影響，導致言語不清、及咀嚼及吞咽困難。手臂和腿部幾乎總是有輕微異常跡象。MND患者表現出帕金森氏症之表型(例如有震顫、僵硬、運動遲緩及/或姿勢不穩定性)。用於偵測、監測或定量運動及/或與帕金森氏症(諸如MND)相關之其他缺陷的方法為此項技術中已知的(參見例如美國申請公開案第2012/0005765號)。
用於偵測、監測、定量或評估與MND相關之運動缺陷及組織病理學缺陷的方法為此項技術中已知的，包括組織病理學、生物化學及電生理學研究及運動活性分析(參見例如Rich等人, J. Neurophysiol. 88 (2002) 3293-3304；Appel等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88 (1991) 647-651)。在組織病理學上，MND之特徵在於運動神經元死亡、含有SOD1及泛素的耐清潔聚集體之漸進積聚，以及退化運動神經元中之異常神經絲積聚。另外，在患病組織中經常偵測到反應性星形膠質細胞及微神經膠質細胞。患有MND之患者表現出一或多種運動缺陷，包括肌無力及消瘦、不可控制之抽搐、痙攣、緩慢而費力之運動及過度活躍之肌腱反射。 眼科疾病及病症
在某些實施例中，衰老相關疾病或病症係眼部疾病、病症或病況，例如老花眼、黃斑變性或白內障。在其他某些實施例中，衰老相關疾病或病症為青光眼。黃斑變性係引起視網膜中心部分(稱為黃斑)中之感光體細胞損失的神經退化性疾病。黃斑變性一般分為兩種類型：乾燥型及濕潤型。乾燥形式比濕潤形式更常見，其中約90%之年齡相關之黃斑變性(ARMD或AMD)患者經診斷患有乾燥形式。該疾病之濕潤形式通常引起更嚴重的視力喪失。雖然年齡相關之黃斑變性之確切病因仍未知，但衰老視網膜色素上皮(RPE)細胞之數目隨年齡增長而增加。年齡及某些遺傳因素及環境因素係罹患ARMD之風險因素(參見例如Lyengar等人, Am. J. Hum. Genet. 74 (2004) 20-39；Kenealy等人, Mol. Vis. 10 (2004) 57-61；Gorin等人, Mol. Vis. 5 (1999) 29)。環境易感染因素包括ω-3脂肪酸攝入(參見例如Christen等人, Arch. Ophthalmol. 129 (2011) 921-929)；雌激素暴露(參見例如Feshanich等人, Arch. Ophthalmol. 126(4) (2008) 519-524)；及維生素D之血清含量增加(參見例如Millen等人, Arch. Ophthalmol. 129(4) (2011) 481-89)。基因易感染風險因素包括患有乾燥型AMD之患者之眼睛中的Dicer1(涉及微RNA成熟之酶)含量降低，且微RNA降低導致衰老細胞。
乾燥型ARMD與RPE層之萎縮相關，該萎縮導致感光細胞損失。ARMD之乾燥形式可能係由於黃斑組織之衰老及薄化及由黃斑中色素沉積產生。衰老似乎抑制RPE複製及遷移兩者，導致乾燥型AMD患者之黃斑中的永久性RPE耗竭(參見例如Iriyama等人, J. Biol. Chem. 283 (2008) 11947-11953)。在濕潤型AMD之情況下，視網膜下方新血管生長且洩漏血液及流體。此異常滲漏脈絡膜新生血管引起視網膜細胞死亡，在中心視力中產生盲點。不同形式之黃斑變性亦可能出現於年輕患者中。非年齡相關病因可能與遺傳、糖尿病、營養缺乏、頭部損傷、感染或其他因素有關。
患者或眼科醫師在常規眼科檢查中發現的視力下降可能係黃斑變性之第一個指標。黃斑布魯赫膜下滲出物或「玻璃疣」之形成通常係黃斑變性可能發展之第一個體徵。症狀包括感知到的直線扭曲，在一些情況下，視覺中心似乎比場景之其他部分更失真；視覺中心出現黑暗、模糊的區域或「白斑」；及/或顏色感知改變或減弱。患有黃斑變性之個體之診斷及監測可由熟習眼科領域技術人員根據公知之週期性眼檢查程序及個體之症狀報導來實現。
老花眼為年齡相關之病況，其中隨著年齡的增長，正常眼睛的調節速度及幅度逐漸降低，眼睛對附近物體之聚焦能力逐漸減弱。結晶之彈性損失及睫狀肌之收縮性損失已假定為其病因(參見例如Heys等人, Mol. Vis. 10 (2004) 956-963；Petrash, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (2013) ORSF54-ORSF59)。前晶狀體囊和後晶狀體囊力學性質之年齡相關變化表明，後晶狀體囊之力學強度隨著年齡的增長而顯著減小(參見例如Krag等人, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44 (2003) 691-696；Krag等人, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 38 (1997) 357-363)。
囊之層壓結構亦發生變化且可至少部分地由組織組成之變化引起(參見例如Krag等人, 1997, 同上及其中所引用之參考文獻)。晶狀體囊之主要結構成分為組織成三維分子網路之基底膜IV型膠原蛋白(參見例如Cummings等人, Connect. Tissue Res. 55 (2014) 8-12；Veis等人, Coll. Relat. Res. 1 (1981) 269-286)。IV型膠原蛋白由締合成異三聚體膠原蛋白IV原聚體之六個同源α鏈(α 1至6)組成，各原聚體包含α 112、α 345或α 556之特定鏈組合(參見例如Khoshnoodi等人, Microsc. Res. Tech. 71 (2008) 357-370)。原聚體與Gly-X-Y之三重態肽序列共用三螺旋膠原結構域之結構相似性(Timpl等人, Eur. J. Biochem. 95 (1979) 255-263)，終止於稱為非膠原1 (NC1)結構域之球形C端區。N-末端由稱為7S結構域之螺旋結構域構成(參見例如Risteli等人, Eur. J. Biochem. 108 (1980) 239-250)，其亦涉及原聚體-原聚體相互作用。
研究表明，IV型膠原蛋白影響細胞功能，此可從上皮層下方基底膜之位置推斷出來，且資料支援IV型膠原蛋白在組織穩定中之作用(參見例如Cummings等人，同上)。後囊渾濁(PCO)在白內障手術之後的後續幾年中約20%至40%患者中發展為併發症(參見例如Awasthi等人, Arch. Ophthalmol. 127 (2009) 555-562)。PCO係由殘餘晶狀體上皮細胞沿後囊膜之增殖和活性引起，其反應類似於傷口癒合。生長因子，諸如纖維母細胞生長因子、轉型生長因子、表皮生長因子、肝細胞生長因子、類胰島素生長因子及白細胞間介素IL-1及IL-6亦可促進上皮細胞遷移(參見例如Awasthi等人，同上；Raj等人，同上)。如本文所論述，衰老細胞產生此等因素及細胞介素有助於SASP。相比之下，活體外研究表名，IV型膠原蛋白促進晶狀體上皮細胞之黏附(參見例如Olivero等人, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 34 (1993) 2825-2834)。IV型膠原蛋白、纖維結合蛋白及層黏連蛋白與人工晶狀體之黏著抑制細胞遷移且可降低PCO之風險(參見例如Raj等人, Int. J. Biomed. Sci. 3 (2007) 237-250)。
不希望受任何特定理論束縛，本文所描述之藉由抗衰老試劑選擇性殺死衰老細胞可減緩或阻礙(延遲、抑制、延緩) IV型膠原蛋白網路之結構紊亂。移除衰老細胞且藉此移除SASP之發炎性效應可減少或抑制上皮細胞遷移，且亦可延遲(抑制)老花眼發作或降低或減緩病狀之進行性嚴重程度(諸如減緩自輕度至中度或中度至重度之進展)。本文所描述之抗衰老試劑亦可適用於白內障手術後以降低PCO發生之可能性。
雖然尚未自人類研究獲得涉及細胞衰老與白內障發展之直接證據，但BubR1低態小鼠在生命早期雙側罹患後囊下白內障，表明衰老可能起作用(參見例如Baker等人, Nat. Cell Biol. 10 (2008) 825-836)。白內障係眼睛晶狀體之混濁，導致視力模糊，若不及時治療可能會導致失明。手術是有效且常規的白內障摘除手術。投與本文中所描述之抗衰老試劑中之一或多者可引起白內障發生之可能性降低或可減緩或抑制白內障發展。白內障之存在及嚴重程度可藉由眼科領域技術人員常規進行的眼科檢查來監測。
在某些實施例中，可將本文所描述之至少一種抗衰老試劑投與有罹患老花眼、白內障或黃斑變性風險之個體。當人類個體至少40歲時，可以開始使用抗衰老試劑進行治療，以延緩或抑制白內障、老花眼和黃斑變性的發作或發展。因為幾乎所有人都會罹患老花眼，所以在某些實施例中，在個體達到40歲之後，可以本文中所描述之方式向人類個體投與抗衰老試劑以延遲或抑制老花眼之發作或發展。
在某些實施例中，衰老相關疾病或病症為青光眼。青光眼係一廣義術語，用於描述一組通常在無任何其他常見症狀下導致視野喪失的疾病。症狀之缺乏通常導致青光眼之診斷延遲直至疾病之末期。即使罹患青光眼之個體未變得失明，其視力常常亦嚴重減弱。通常，清透流體流入眼前部部分及流出眼前部部分，稱為前房。在患有開放性/廣角青光眼之個體中，此液體之排出速度太慢，導致眼內壓力增加。若不及時治療，此高壓隨後損傷視神經且可導致完全失明。外周視覺之損失係由視網膜中之神經節細胞之死亡引起。神經節細胞係將眼睛連接至大腦之特定類型的投影神經元。當對液體流出所需之細胞網路進行SA-β-Gal染色時，在青光眼患者中觀察到衰老增加了四倍(參見例如Liton等人, Exp. Gerontol. 40 (2005) 745-748)。
為監測療法對抑制青光眼進展之效應，標準自動化周邊量測(視野測試)係使用最廣泛之技術。另外，已開發出用於進展偵測之若干演算法(參見例如Wesselink等人, Arch. Ophthalmol. 127(3) (2009) 270-274, 及其中參考文獻)。額外方法包括房角鏡檢查(檢查小樑網狀結構及自眼睛流出流體之角度)；成像技術，例如掃描雷射斷層攝影術(例如HRT3)、雷射旋光測定法(例如GDX)及眼相干斷層攝影術)；檢眼鏡；及測定中央角膜厚度之氣速量測。 代謝疾病或病症
可藉由投與抗衰老試劑治療之衰老相關疾病或病症包括代謝疾病或病症。此類衰老細胞相關疾病及病症包括糖尿病、代謝症候群、糖尿病潰瘍及肥胖症。
糖尿病之特徵在於因胰島素產生、胰島素作用或兩者之缺陷所引起的血糖含量升高。在所有確診之成人糖尿病病例中，絕大部分(90%至95%)為2型糖尿病，其特徵在於胰腺逐漸喪失胰島素分泌。糖尿病係美國成年人腎衰竭、非創傷性下肢截肢及失明新病例之主要原因。糖尿病為心臟病及中風之主要病因，且為美國第七大死亡原因(參見例如美國疾病控制與預防中心, National diabetes fact sheet: national estimates and general information on diabetes and pre-diabetes in the United States, 2011 (「糖尿病概況介紹」))。本文所描述之抗衰老試劑可用於治療2型糖尿病，尤其係與年齡、飲食及肥胖相關之2型糖尿病。
衰老細胞參與代謝性疾病(諸如肥胖和2型糖尿病)已被認為係對損傷或代謝功能障礙之回應(參見例如Tchkonia等人, Aging Cell 9 (2010) 667-684)。肥胖小鼠之脂肪組織顯示出衰老標誌物SA-β-Gal、p53和p21之誘導(參見例如Tchkonia等人, 同上；Minamino等人, Nat. Med. 15 (2009) 1082-1087)。在同一脂肪組織中觀測到促炎性細胞介素諸如腫瘤壞死因子及Ccl2/MCP1之伴隨上調(參見例如Minamino等人，同上)。肥胖症中衰老細胞之誘導潛在地具有臨床含義，此係因為促炎SASP成分亦被認為與2型糖尿病有關(參見例如Tchkonia等人，同上)。衰老標記物及SASP組分之類似上調模式與小鼠及人類之糖尿病有關(參見例如Minamino等人，同上)。因此，包含投與抗衰老試劑之本文所描述之方法可適用於治療或預防2型糖尿病以及肥胖症及代謝症候群。不希望受理論束縛，衰老前脂肪細胞與抗衰老試劑接觸從而殺死衰老前脂肪細胞，此可能會為患有糖尿病、肥胖症或代謝症候群中之任一者的個人提供臨床及健康益處。
可以使用所屬技術領域中已知之2型糖尿病標準診斷方法來鑑別患有2型糖尿病之個體。通常，2型糖尿病之診斷係基於患者之症狀(例如，口渴及頻尿增加、饑餓感增加、體重減輕、疲乏、視力模糊、潰瘍癒合緩慢或頻繁感染及/或變暗皮膚區域)、病史及/或體檢。罹患2型糖尿病風險之個體包括有2型糖尿病家族史的人及有其他風險因素的人，諸如超重、脂肪分佈、缺乏運動、種族、年齡、糖尿病前期及/或妊娠期糖尿病。
醫學及臨床領域技術者可很容易地測定抗衰老試劑之有效性。診斷方法中之一者或任何組合，包括體檢、臨床症狀評估及監測及諸如本文所描述之分析測試及方法之執行，可用於監測個體之健康狀況。可例如藉由分析葡萄糖及胰島素耐受性、能量消耗、身體組成、脂肪組織、骨骼肌肉及肝臟炎症及/或脂毒性(藉由活體內成像之肌肉及肝臟脂質及藉由組織學之肌肉、肝臟、骨髓及胰臟β-細胞脂質累積及炎症)來監測接受本文所描述之一或多種抗衰老試劑用於治療或預防糖尿病之個體。2型糖尿病之其他特徵或表型為已知的且可如本文所描述且藉由使用此項技術中已知且常規實施之其他方法及技術進行分析。
肥胖症及肥胖症相關病症用於指身體質量明顯大於其身高和體型理想值之個體之病況。身體質量指數(BMI)為用於測定過量體重之量測工具且根據個體之身高及體重計算得出 。當個人之BMI為25至29時，其被視為超重；當個人之BMI為30至39時，其被視為肥胖，且當個人之BMI為＞40時，其被視為嚴重肥胖。因此，術語肥胖症及肥胖症相關係指身體質量指數值大於30、大於35或大於40之人類個體。BMI未擷取之肥胖症類別在此項技術中稱為「腹部肥胖症」，其與個體腹部周圍發現之額外脂肪有關，係甚至與BMI無關之重要因素。腹部肥胖症之最簡單及最常用量度為腰圍。一般而言，女性之腹部肥胖症定義為35吋或更高之腰圍，且男性定義為40吋或更高之腰圍。用於判定肥胖症之更複雜方法需要特殊化設備，諸如磁共振成像或雙能量X射線吸光測定法。
與糖尿病及衰老相關之病況或病症為糖尿病性潰瘍(亦即糖尿病性創傷)。潰瘍為皮膚之破裂，其可能延伸至皮下組織或甚至肌肉或骨骼。此等病變尤其出現在下肢上。患有糖尿病性靜脈潰瘍之患者在慢性傷口部位表現出細胞衰老的增加(參見例如Stanley等人, J. Vas. Surg. 33 (2001) 1206-1211)。在慢性傷口部位亦觀測到慢性炎症，諸如糖尿病性潰瘍(參見例如Goren等人, Am. J. Pathol. 168 (2006) 65-77)，表明衰老細胞之促炎性細胞介素表型在病理學中起作用。
患有2型糖尿病或有罹患2型糖尿病風險之個體可能患有代謝症候群。人類之代謝症候群通常與肥胖症相關，且其特徵為心血管疾病、肝脂肪變性、高脂質血症、糖尿病及胰島素抗性中之一或多者。有代謝症候群之個體可能會出現一系列代謝紊亂或異常，其中可能包括例如高血壓、2型糖尿病、高脂質血症、血脂異常(例如高三酸甘油酯血症、高膽固醇血症)、胰島素抗性、肝脂肪變性(脂肪變性肝炎)、高血壓、動脈粥樣硬化及其他代謝病症中之一或多者。 腎功能障礙
腎臟病理，諸如腎小球疾病，出現於老年人中且可藉由投與本文所描述之抗衰老化合物來治療。腎小球腎炎之特徵在於腎臟炎症及兩種蛋白質IL1α及IL1β之表達(參見例如Niemir等人, Kidney Int. 52 (1997) 393-403)。IL1α及IL1β被視為SASP之主要調節因子(參見例如Coppe等人, PLoS. Biol. 6 (2008) 2853-2868)。腎小球疾病與衰老細胞之存在升高相關，尤其係在纖維化腎中(參見例如Sis等人, Kidney Int. 71 (2007) 218-226)。 皮膚病或病症
可藉由投與本文所描述之化合物治療之疾病或病症包括皮膚病或病症。此等疾病及病症包括銀屑病及濕疹，其亦為發炎性疾病且更詳細地論述於上文中。其他皮膚病及病症包括皺紋(因衰老引起之皺紋)；搔癢症(與糖尿病及衰老有關)；感覺遲鈍(與糖尿病及多發性硬化症有關之化學療法副作用)；銀屑病(如所指出)及其他丘疹鱗屑性病症，例如紅皮病、扁平苔癬及苔蘚皮膚病；異位性皮膚炎(濕疹之形式且與炎症有關)；濕疹性皮疹(常見於老年患者，與某些藥物之副作用有關)。與衰老相關之其他皮膚病及病症包括嗜酸性皮膚病(與某些類型之血液癌症有關)；反應性嗜中性白細胞皮膚病(與諸如發炎性腸症候群之潛在疾病有關)；天疱瘡(其中形狀針對橋粒醣蛋白之自體抗體的自身免疫性疾病)；類天疱瘡及其他免疫大皰性皮膚(皮膚之自身免疫性起泡)；與衰老相關之皮膚纖維組織細胞增生；及在老年人群中更常見之皮膚淋巴瘤。可根據本文所描述之方法治療的另一皮膚疾病包括皮膚狼瘡，其為紅斑狼瘡之症狀。遲發性狼瘡可能與T細胞、B細胞及細胞介素功能下降(即免疫衰老)有關。可使用本文所描述之化合物治療的其他皮膚病適應症包括(但不限於)斑塊型銀屑病、藉由癌症療法(化學療法或輻射)誘導之皮膚炎及禿頭症、白斑病、斑禿、化膿性汗腺炎、慢性自發性風疹、光化性角化症及皮脂性角化症。 癌細胞轉移
在一些實施例中，提供治療或預防(亦即，降低其發生或發展之可能性)衰老細胞相關疾病(或病症或病況) (其為癌細胞轉移)之方法。本文所描述之抗衰老試劑亦可根據本文所描述之方法用於治療或預防(亦即，降低其發生之可能性)自身體中之一個器官或組織至另一器官或組織之癌細胞轉移(亦即，癌細胞或腫瘤細胞之擴散及傳播)。
衰老細胞相關之疾病或病症包括癌細胞轉移，且患有癌症之個體可受益於投與本文所描述之適用於抑制癌細胞轉移之抗衰老試劑。當根據本文所描述之方法向患有癌症之個體投與時，此類抗衰老試劑可抑制腫瘤增殖。當癌細胞(亦即腫瘤細胞)擴散超出解剖起源位點且初始拓殖至個體全身其他區域時，發生癌症之癌細胞轉移。腫瘤增殖可藉由腫瘤尺寸測定，其可以熟習此項技術者熟悉之各種方式量測，諸如藉由例如PET掃描、MRI、CAT掃描、活檢。治療劑對腫瘤增殖之影響亦可藉由檢查腫瘤細胞之分化來評估。
如本文及此項技術中所用，術語癌症或腫瘤為臨床描述術語，其包括通常以表現出異常細胞增殖之細胞為特徵的疾病。術語癌症一般用於描述惡性腫瘤或由腫瘤引起之疾病病況。替代地，異常生長在此項技術中可稱為腫瘤。諸如關於組織之術語腫瘤一般係指至少部分以過度及異常細胞增殖為特徵之任何異常組織生長。腫瘤可為轉移性的且能夠擴散超過其解剖起源位點且初始拓殖至個體全身其他區域。癌症可包含實體腫瘤或可包含「液體」腫瘤(例如白血病及其他血癌)。
癌症療法(諸如輻射及某些化療藥物)誘導細胞衰老。衰老細胞之存在增加發炎性分子之分泌，促進腫瘤進展，其可包括促進腫瘤生長及增加腫瘤尺寸，促進癌細胞轉移及改變分化。當衰老細胞被破壞時，腫瘤進展受到顯著抑制，導致腫瘤尺寸較小，很少或沒有觀察到轉移生長(參見例如國際公開案第WO 2013/090645號。)。
在一些實施例中，提供藉由投與本文所描述之抗衰老試劑預防(亦即，降低其發生之可能性)、抑制或延遲患有癌症之個體之癌細胞轉移的方法。在其他實施例中，在不超過7天或14天之治療窗(亦即，治療過程)內之一或多天投與抗衰老試劑。在其他實施例中，治療過程不超過2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或不超過21天。在其他實施例中，治療過程為單日。在再其他實施例中，在不超過7天或14天之治療窗內之兩天或更多天投與抗衰老試劑。
因為細胞可藉由癌症療法，諸如輻射及某些化學療法藥物(例如阿黴素；太平洋紫杉醇；吉西他濱；泊利度胺；來那度胺)誘導衰老，所以本文所描述之抗衰老試劑可在化學療法或放射線療法之後投與以殺死(或促進殺死)此等衰老細胞。如本文所論述且此項技術中所理解，衰老之建立，諸如衰老相關分泌表型(SASP)之存在所示，發生在幾天內；因此，當衰老已建立時，投與抗衰老試劑以殺死衰老細胞且藉此降低發生之可能性或降低癌細胞轉移之程度。如本文所討論，在本文所描述之用於治療或預防(亦即，降低發生之可能性或降低嚴重程度)化學療法或放射線療法副作用的方法中可使用以下用於投與抗衰老試劑之治療過程。
在某些實施例中，當在至少一天治療中(亦即化學療法或放射線療法)之治療週期中投與化學療法或放射線療法，隨後至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14天(或約2週)、15、16、17、18、19、20、21天(或約3週)或約4週(約一個月)停止治療(亦即停止放射性療法)時， 在停止治療時間間隔(時間段)內的一天或多天投與抗衰老試劑，從停止治療時間間隔的第二天或之後開始，結束於停止治療時間間隔的最後一天或之前。藉助於說明性實例，若n為停止治療之天數，則在停止治療時間間隔的至少一天且不超過n-1天投與抗衰老試劑。在一些實施例中，當在至少一天治療中(亦即化學療法或放射線療法)之治療週期中投與化學療法或放射線療法，隨後進行至少一週停止治療時，在停止治療時間間隔內的一天或多天投與抗衰老試劑，從停止治療時間間隔的第二天或之後開始，結束於停止治療時間間隔的最後一天或之前。
化學療法可稱為化學療法、化學治療劑或化學治療藥物。許多化學治療劑係稱為小型有機分子之化合物。化學療法為亦用於描述所投與以治療特定癌症之化學治療藥物之組合的術語。如熟習此項技術者所瞭解，化學療法亦可指協同投與且可稱為組合化學療法的兩種或多於兩種化學治療劑分子之組合。腫瘤學技術中使用多種化學治療藥物，且包括(但不限於)烷基化劑；抗代謝物；蒽環黴素、植物生物鹼；及拓樸異構酶抑制劑。
可轉移之癌症可為實體腫瘤或可為液體腫瘤(例如，血癌，例如白血病)。作為液體腫瘤之癌症在此項技術中歸類為血液、骨髓及淋巴結中發生之癌症且包括一般白血病(骨髓及淋巴球性)、淋巴瘤(例如霍奇金氏淋巴瘤)及黑素瘤(包括多發性骨髓瘤)。白血病包括例如急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)及毛細胞白血病。作為實體腫瘤且以較高頻率存在於人類中之癌症包括例如前列腺癌、睪丸癌、乳癌、腦癌、胰臟癌、大腸癌、甲狀腺癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、卡波西氏肉瘤、皮膚癌(包括鱗狀細胞皮膚癌)、腎癌、頭頸癌、咽喉癌、在鼻、口、咽喉等潮濕黏膜內層上形成之鱗狀癌瘤、膀胱癌、骨肉瘤(骨癌)、宮頸癌、子宮內膜癌、食道癌、肝癌及腎癌。在某些特定實施例中，藉由本文所描述之方法治療或預防(亦即，降低發生或發展之可能性)之衰老細胞相關疾病或病症為以下之癌細胞轉移：黑色素瘤細胞、前列腺癌細胞、睪丸癌細胞、乳癌細胞、腦癌細胞、胰臟癌細胞、大腸癌細胞、甲狀腺癌細胞、胃癌細胞、 肺癌細胞、卵巢癌細胞、卡波西氏肉瘤細胞、皮膚癌細胞、腎癌細胞、頭頸癌細胞、咽喉癌細胞、鱗狀癌瘤細胞、膀胱癌細胞、骨肉瘤細胞、宮頸癌細胞、子宮內膜癌細胞、食道癌細胞、肝癌細胞或腎癌細胞。
本文所描述之方法亦適用於抑制、延遲或減緩醫學領域中描述之腫瘤類型中之任一者的轉移性癌症之進展。癌症(腫瘤)之類型包括以下：腎上腺皮質癌、兒童腎上腺皮質癌、愛滋病相關癌症、肛門癌、闌尾癌、基底細胞癌、兒童基底細胞癌、膀胱癌、兒童膀胱癌、骨癌、腦瘤、兒童星形細胞瘤、兒童腦幹神經膠質瘤、兒童中樞神經系統非典型畸胎樣/橫紋肌瘤、兒童中樞神經系統胚胎瘤、兒童中樞神經系統生殖細胞腫瘤、兒童顱咽管瘤腦瘤、兒童室管膜瘤腦瘤、 乳癌、兒童支氣管腫瘤、類癌腫瘤、兒童類癌腫瘤、胃腸道類癌腫瘤、未知原發性癌症、兒童未知原發性癌症、兒童心肌症(心臟)腫瘤、宮頸癌、兒童宮頸癌、兒童脊索瘤、慢性骨髓增生病症、大腸癌、大腸直腸癌、兒童大腸直腸癌、肝外膽管癌、乳腺管原位癌(DCIS)、子宮內膜瘤、食道癌、兒童食道癌、兒童敏感性神經胚細胞瘤、眼癌、骨惡性纖維組織細胞瘤、膽囊癌、胃(腹)癌、兒童胃(腹)癌、胃腸道基質腫瘤(GIST)、兒童胃腸道基質腫瘤(GIST)、兒童顱外生殖細胞腫瘤、性腺外生殖細胞腫瘤、妊娠期營養母細胞瘤、神經膠質瘤、頭頸癌、兒童頭頸癌、肝細胞(肝臟)癌、下咽癌、腎癌、腎臟細胞腎癌、威爾姆斯腫瘤、兒童腎腫瘤、蘭格漢氏細胞組織細胞增多症、喉癌、兒童喉癌、白血病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、 毛細胞白血病、唇癌、肝癌(原發性)、兒童肝癌(原發性)、小葉原位癌(LCIS)、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、淋巴瘤、愛滋病相關淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤(CNS)、黑色素瘤、兒童黑色素瘤、眼內(眼)黑色素瘤、梅克爾細胞癌惡性間皮瘤兒童惡性間皮瘤、隱性原發性之轉移性鱗狀頸癌、涉及NUT基因之中線道癌瘤、口腔癌、兒童多發性內分泌瘤症候群、蕈樣黴菌病、骨髓發育不良症候群、骨髓發育不良贅瘤、骨髓增生性贅瘤、多發性骨髓瘤、鼻腔癌、鼻咽癌、兒童鼻咽癌、神經母細胞瘤、口腔癌、兒童口腔癌、口咽癌、卵巢癌、兒童卵巢癌、上皮卵巢癌、低度惡性潛能腫瘤卵巢癌、胰臟癌、兒童胰臟癌、胰臟神經內分泌腫瘤(胰島細胞腫瘤)、兒童乳頭狀瘤症、副神經節瘤、鼻竇癌、甲狀旁腺癌、陰莖癌、咽癌、嗜鉻細胞瘤、垂體腫瘤、漿細胞腫瘤、兒童胸膜肺母細胞瘤、前列腺癌、直腸癌、腎盂移行細胞癌、視網膜母細胞瘤、 唾液腺癌、兒童唾液腺癌、尤文氏肉瘤腫瘤家族、卡波西氏肉瘤、骨肉瘤、橫紋肌肉瘤、兒童橫紋肌肉瘤、軟組織肉瘤、子宮肉瘤、皮氏症候群、兒童皮膚癌、非黑素瘤皮膚癌、小腸癌、鱗狀細胞癌、兒童鱗狀細胞癌、睪丸癌、兒童睪丸癌、咽喉癌、胸腺瘤及胸腺癌、兒童胸腺瘤及胸腺、甲狀腺癌、兒童甲狀腺癌、輸尿管移行細胞癌、尿道癌、子宮內膜子宮癌、陰道癌、外陰癌及瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症。 化學療法及放射性療法副作用
在其他實施例中，衰老細胞相關病症或病狀係化學療法副作用或放射線療法副作用。誘導非癌細胞衰老之化學治療劑之實例包括蒽環黴素(諸如阿黴素、道諾黴素)；紫杉醇(例如太平洋紫杉醇)；吉西他濱；泊利度胺；及來那度胺。本文所描述之投與的抗衰老試劑中之一或多者可用於治療及/或預防(亦即降低其發生之可能性)化學療法副作用或放射線療法副作用。衰老細胞之移除或破壞可改善化學療法或放射線療法之急性毒性，包括包含能量不平衡之急性毒性。急性毒性副作用包括(但不限於)胃腸道毒性(例如噁心、嘔吐、便秘、食慾不振、腹瀉)、外周神經病變、疲乏、不適、身體活動不足、血液毒性(例如貧血)、肝毒性、禿頭症(脫髮)、疼痛、感染、黏彈性炎、流體滯留、皮膚毒性(例如皮疹、皮炎、色素沉著過度、風疹、光敏性、指甲變化)、口腔(例如口腔黏膜炎)、牙床或喉嚨問題，或由化學療法或放射線療法引起的任何毒副作用。舉例而言，由放射線療法或化學療法引起之毒性副作用可藉由本文所述之方法改善。因此，在某些實施例中，本文提供用於在接受療法之個體中改善(降低、抑制或預防發生(亦即，降低發生之可能性))化學療法或放射線療法或兩者之毒性副作用(亦即，有害副作用)之急性毒性或降低其嚴重程度的方法，其中該方法包含向該個體投與選擇性殺死、移除或毀壞或促進衰老細胞之選擇性破壞的試劑。投與本文所描述之用於治療或降低化學療法或放射線療法副作用發生之可能性或降低其嚴重程度的抗衰老試劑可以藉由上文針對治療/預防癌細胞轉移所描述之相同治療方案實現。如針對治療或預防(亦即，降低發生之可能性)癌細胞轉移所描述，在停止化學療法或停止放射線療法時間間隔期間或在已完成化學療法或放射線療法治療方案之後投與抗衰老試劑。
在更特定實施例中，急性毒性為包含能量不平衡之急性毒性，且可包含體重減輕、內分泌變化(例如激素不平衡、激素信號傳導變化)及身體組成變化中之一或多者。在某些實施例中，包含能量不平衡之急性毒性與個體身體活動能力之降低或減少有關，如藉由與未接受醫學療法之個體中所觀測的相比，能量消耗減少或減弱所指示。作為非限制性實例，包含能量不平衡之此急性毒性效應包括身體活動不足。在其他實施例中，能量不平衡包含疲乏或不適。
在一些實施例中，藉由本文所描述之抗衰老試劑治療或預防(亦即，降低發生之可能性)之化學療法副作用為心臟毒性。患有用蒽環黴素(諸如阿黴素、道諾黴素)治療之癌症的個體可用本文所描述之降低、改善或減少蒽環黴素之心臟毒性的一或多種抗衰老試劑治療。如醫學領域中所充分理解，由於與蒽環黴素相關之心臟毒性，即使癌症對藥物有反應，個體可接受之最大終生劑量亦係有限的。投與抗衰老試劑中的一或多者可降低心臟毒性，使得可向個體投與額外量之蒽環黴素，產生與癌症疾病相關之改良預後。在一些實施例中，心臟毒性是由投與蒽環黴素諸如阿黴素引起的。阿黴素為蒽環黴素拓樸異構酶抑制劑，其經批准用於治療患有卵巢癌之患者(在鉑基療法失敗之後)；患有卡波西氏肉瘤之患者(在原發性全身性化學療法失敗或對療法不耐受之後)；或與硼替佐米聯合使用喲娜與治療患有多發性骨髓瘤之患者(該患者先前尚未接受硼替佐米或已接受至少一種先前療法)。若患者之總壽命劑量超過550 mg/m 2，則阿黴素可造成可能導致充血性心臟衰竭之心肌損傷。若患者亦接受縱隔照射或另一心臟毒性藥物，則可能在甚至更低劑量下發生心臟毒性。
在其他實施例中，本文所描述之抗衰老試劑可用於本文所提供之用於改善慢性或長期副作用之方法中。慢性毒性副作用通常由多次暴露於化學療法或放射線療法或歷經較長時間段投與化學療法或放射線療法產生。某些毒性作用在治療後很長時間內出現(亦稱為晚期毒性作用)且係由療法對器官或系統之損傷引起。在兒童時期接受癌症治療的患者中已觀測到器官功能障礙(例如神經、肺、心血管及內分泌功能障礙) (參見例如Hudson等人, JAMA 309 92013) 2371-2381)。不希望受任何特定理論束縛，藉由破壞衰老細胞，即已藉由化學療法或放射線療法誘導衰老之特定正常細胞，可降低慢性副作用發生之可能性，或可降低或減弱慢性副作用之嚴重程度，或可延遲慢性副作用之發作時間。接受化學療法或放射線療法之個體中發生的慢性及/或晚期毒性副作用包括(作為非限制性實例)心肌症、充血性心臟病、炎症、早期閉經、骨質疏鬆、不孕症、認知功能受損、外周神經病變、繼發性癌症、白內障及其他視力問題、聽力喪失、慢性疲勞、肺活量減少及肺病。
另外，藉由投與抗衰老試劑來殺死或移除患有癌症之個體中之衰老細胞，與未投與抗衰老試劑相比，對化學療法或放射線療法之敏感性可在臨床或統計學上顯著提高。換言之，當向用各別化學療法或放射線療法治療之個體投與抗衰老試劑時，可抑制化學療法或放射線療法抗性之發展。 年齡相關疾病及病症
本文所描述之抗衰老試劑選擇性地殺死衰老細胞。以此方式，在衰老過程期間靶向衰老細胞可為預防性策略。因此，向個體投與本文所描述之抗衰老試劑可預防老年人個體中之共發病及延遲死亡。此外，選擇性殺死衰老細胞可增強免疫系統，延長健康壽命，且改良個體之生活品質。
抗衰老試劑亦可適用於治療或預防(亦即降低發生之可能性)年齡相關之疾病或病症，該疾病或病症係自然衰老過程的一部分，或係在個體暴露於衰老誘導試劑或因素(例如輻射、化學療法、吸菸、高脂肪/高糖飲食、其他環境因素)時發生。年齡相關病症或疾病或年齡敏感特徵可能與衰老誘導刺激相關。本文所描述之治療方法的功效可藉由減少與衰老誘導刺激相關的年齡相關疾病或年齡敏感特徵之症狀數量、降低一或多種症狀之嚴重程度或延緩與衰老誘導刺激相關的年齡相關疾病或年齡敏感特徵的進展來體現。在其他實施例中，預防與衰老誘導刺激相關的年齡相關病症或年齡敏感特徵係指預防(亦即，降低發生之可能性)或延遲與衰老誘導刺激相關的年齡相關病症或年齡敏感特徵的發作，或與衰老誘導刺激相關的一或多個年齡相關病症或年齡敏感特徵的復發。年齡相關疾病或病況包括例如腎功能障礙、脊柱後彎、推間盤突出、虛弱、脫髮、聽力喪失、視力喪失(失明或視力受損)、肌肉疲勞、皮膚病況、皮膚色素沉著、糖尿病、代謝症候群及肌肉減少症。視力喪失係指當個體先前具有視力時不存在視力。已開發出各種量表來描述基於視敏度的視力及視力喪失的程度。年齡相關疾病及病況亦包括皮膚病況，例如但不限於治療以下病況中之一或多者：皺紋，包括淺表精細皺紋；色素沉著過度；疤痕；瘢痕樣；皮膚炎；銀屑病；濕疹(包括皮脂溢濕疹)；紅斑痤瘡；白斑病；尋常型魚鱗癬；皮肌炎；及光化性角化症。虛弱被定義為一種臨床可鑑別之脆弱性增加狀態，其係由於與衰老相關的多個生理系統的儲備及功能下降，損害了個體應對日常或急性壓力的能力。虛弱可表徵為能量特性受損，諸如握力低、能量低、行走速度慢、身體活動不足及/或無意體重減輕。研究表明，當觀測到五種前述特徵中之三者時，患者可能會被診斷為虛弱(參見例如Fried等人, J. Gerontol. A Biol. Sci. Med, Sci. 56(3) (2001) M146-M156；Xue, Clin. Geriatr. Med. 27(1) (2001) 1-15)。在某些實施例中，可藉由投與抗衰老試劑治療或預防衰老及與衰老相關之疾病及病症(亦即，降低發生之可能性)。抗衰老試劑可抑制成體幹細胞之衰老或抑制累積、殺死或促進移除已變得衰老之成體幹細胞。預防幹細胞中衰老以維持組織再生能力之重要性論述於例如Park等人, Clin. Invest. 113 (2004) 175-179；及Sousa-Victor, Nature 506 (2014) 316-321。
本領域中已知量測衰老之方法。舉例而言，可藉由偶發性非椎骨斷裂、偶發性髖斷裂、偶發性全骨折、偶發性椎骨斷裂、偶發性重複斷裂、骨折之後的功能恢復、腰椎和髖部骨密度降低、膝關節屈曲率、NSAID使用、疼痛關節數目及骨關節炎來量測骨骼衰老。可藉由功能減退、跌倒率、反應時間及握力、上肢及下肢肌肉質量減少以及雙任務10米步態速度來量測肌肉衰老。此外，可藉由收縮壓和舒張壓變化、偶發性高血壓、諸如心肌梗死、中風、充血性心臟病及心血管死亡等主要心血管事件來量測心血管系統衰老。另外，可藉由認知減退、偶發性抑鬱症及偶發性呆症來量測大腦衰老。此外，可藉由感染率、上呼吸道感染率、流感樣疾病率、導致入院之偶發性嚴重感染、偶發性癌症、植入物感染率及胃腸道感染率來量測免疫系統衰老。其他衰老跡象可能包括但不限於口腔健康狀況下降、牙齒脫落、胃腸道症狀發生率、空腹血糖及/或胰島素含量變化、身體組成、腎功能下降、生活品質、日常生活活動方面之意外殘疾及意外入住療養院。量測皮膚老化之方法為此項技術中已知的，且可包括表皮水損失(TEWL)、皮膚水合、皮膚彈性、魚尾紋面積比分析、敏感性、光澤度、粗糙度、斑點、鬆弛度、膚色均勻性、柔軟度和浮雕(深度變化)。
與未接受治療之個體的預期生存期相比，投與本文所描述之抗衰老試劑可以延長生存期。需要治療之個體包括已患有疾病或病症之個體以及容易患有疾病或病症或容易有患上疾病或病症之風險的個體，還有彼等需要預防性治療疾病、病況或病症之個體。個體可能有患上疾病或病症之遺傳傾向性，該疾病或病症將得益於衰老細胞之清除或可能具有一定年齡，其中接受抗衰老試劑將提供臨床益處以延遲疾病(包括年齡相關疾病或病症)之發展或降低其嚴重程度。
在其他實施例中，提供一種治療衰老相關疾病或病症的方法，其進一步包含鑑別將受益於用本文所描述之抗衰老試劑治療的個體(亦即表型分型；個別化治療)。此方法包含首先偵測個體中之衰老細胞之含量，諸如在個體之特定器官或組織中。生物樣品可獲自個體，例如血液樣品、血清或血漿樣品、活檢標本、體液(例如肺灌洗、腹水、黏膜洗滌液、滑液、玻璃體流體、脊髓液)、骨髓、淋巴結、組織外植體、器官培養物或任何其他來自個體之組織或細胞製劑。衰老細胞之含量可根據本文所述之任何活體外分析或技術來測定。舉例而言，衰老細胞可藉由形態偵測(如藉由顯微法觀測)；產生衰老相關之標記物，諸如衰老相關之β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)、p16INK4a、p21、PAI-1或任何一或多個SASP因子(例如IL-6, MMP3)。生物樣品之衰老細胞及非衰老細胞亦可用於活體外細胞分析，其中細胞暴露於本文所描述之抗衰老試劑中的任一者，以測定抗衰老試劑殺死個體之衰老細胞而對非衰老細胞無不合需要之毒性的能力。另外，此等方法可用於在用抗衰老試劑治療之前、期間及之後監測個體中之衰老細胞之含量。在某些實施例中，可偵測衰老細胞之存在(例如，藉由測定衰老細胞標記物之mRNA表現量)，且可相應地調整治療過程及/或非治療間隔。 治療及預防 GPX4 疾病及病症之方法
提供治療、預防或改善個體體內之麩胱甘肽過氧化酶4 (GPX4)相關疾病之症狀的方法，其包含投與有效量之一或多種本文所揭示之化合物或本文所揭示之組合物。在一些實施例中，GPX4相關疾病為癌症、神經性病症、神經退行性疾病、脊髓幹骺端發育不良、混合性腦癱、腦橋小腦發育不全或男性不孕症。
在一些實施例中，GPX4相關疾病為癌症。癌症之非限制性實例包括肝細胞癌、肉瘤、神經膠質瘤、腎細胞癌、卵巢癌、前列腺癌、乳癌、胰臟癌、黑色素瘤、大腸癌、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、白血病、肺癌、透明細胞癌或非小細胞肺癌。在一些實施例中，癌症為肝細胞癌。在其他實施例中，癌症為轉移性的。在再其他實施例中，癌症對脫鐵性貧血高度敏感。在再其他實施例中，癌症難以用標準癌症療法治療。在再其他實施例中，癌症具有間充質特徵。在再其他實施例中，癌症為多重療法耐藥性癌症。
本文亦提供一種調節個體之GPX4活性之方法，其包含投與有效量之一或多種本文所揭示之化合物或本文所揭示之組合物。在一些實施例中，調節包含抑制GPX4活性。
本文亦提供一種提高個體之過氧化物含量的方法，其包含投與有效量之一或多種本文所揭示之化合物或本文所揭示之組合物。過氧化物之非限制性實例包括過氧化氫、有機氫過氧化物、脂質過氧化物及其組合。
本文亦提供一種誘導細胞中之鐵死亡的方法，其包含使該細胞與有效量之一或多種本文所揭示之化合物或本文所揭示之組合物接觸。細胞可具有異常脂質積累。在一些實施例中，細胞為癌細胞，其包括但不限於肝細胞癌、肉瘤、神經膠質瘤、腎細胞癌、卵巢癌、前列腺癌、乳癌、胰臟癌、黑色素瘤、大腸癌、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、白血病、肺癌、透明細胞癌或非小細胞肺癌細胞。在其他實施例中，癌細胞為肝細胞癌細胞。
在一些實施例中，癌細胞為轉移性的。在其他實施例中，癌症細胞對脫鐵性貧血高度敏感。在再其他實施例中，癌症具有間充質特徵。在再其他實施例中，癌症為多重療法耐藥性癌症。
對鐵代謝異常之高度敏感反應可藉由NADPH豐度、GCH1表現、NF2-YAP活性、EMT標記及GPX4表現鑑別。在一些實施例中，癌細胞係選自由以下組成之群：肝細胞癌、肉瘤、神經膠質瘤、腎細胞癌、卵巢癌、前列腺癌、乳癌、胰臟癌、黑色素瘤、大腸癌、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、白血病、肺癌、透明細胞癌或非小細胞肺癌細胞。在一些實施例中，癌症為肝細胞癌細胞。 醫藥組合物及投與方法
本文亦提供醫藥組合物，其包含如本文所描述之抗衰老試劑及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑，其亦可稱為醫藥學上適合之賦形劑或載劑(亦即，不干擾活性成分之活性的無毒物質)。醫藥組合物可為無菌水溶液或非水溶液、懸浮液或乳液(例如微乳液)。本文所描述之賦形劑為實例且不為限制之方式。有效量或治療有效量係指以單次劑量或作為一系列劑量之一部分向個體投與的一或多種抗衰老試劑的量，其可有效地產生所需治療效應。
當向個體投與兩種或更多種抗衰老試劑用於治療本文所述之疾病或病症時，可將抗衰老試劑中之各者調配成獨立醫藥組合物。可製備包含各別醫藥組合物中之各者的醫藥製劑(為方便起見，其可例如稱作分別包含第一及第二抗衰老試劑中之各者的第一醫藥組合物及第二醫藥組合物)。製劑中醫藥組合物中之各者可同時(亦即，並行)及經由相同投與途徑投與，或可藉由相同或不同投與途徑在不同時間投與。替代地，兩種或超過兩種抗衰老試劑可以一起調配在單一醫藥組合物中。
在其他實施例中，可向有需要之個體投與至少一種抗衰老試劑與mTOR、NF-κB或PI3K路徑之至少一種抑制劑之組合。當至少一種抗衰老試劑與mTOR、NF-κB或PI3K路徑中的一或多者之抑制劑均共同用於本文所描述之方法中以選擇性殺死衰老細胞時，該等試劑中之各者可調配成相同醫藥組合物或調配成獨立醫藥組合物。可製備包含獨立醫藥組合物中之各者的醫藥製劑，其可方便起見例如分別提及為第一醫藥組合物及包含抗衰老試劑與mTOR、NF-κB或PI3K路徑中之一或多者之抑制劑中之各者的第二醫藥組合物。製劑中醫藥組合物中之各者可同時及經由相同投與途徑投與，或可藉由相同或不同投與途徑在不同時間投與。
可藉由測定生物流體中(例如血液中、血液分離物(例如血清)中及/或尿液中)及/或來自個體之其他生物樣品或生物組織中之抗衰老試劑之含量來監測向個體投與之抗衰老試劑(或一或多種其代謝物)的藥代動力學。此項技術中實施及本文所描述偵測試劑之任何方法可用於在治療過程期間量測抗衰老試劑含量。
本文所描述之用於治療衰老細胞相關疾病或病症之抗衰老試劑的劑量可視個體病況而定，亦即疾病之階段、由疾病引起之症狀之嚴重程度、一般健康狀況以及年齡、性別及體重及對於熟習醫療領域之技術人員顯而易見之其他因素。醫藥組合物可以如熟習醫療技術者所測定的適合於待治療之疾病的方式投與。除了本文及上文關於使用抗衰老試劑治療衰老相關之疾病或病症之因素以外，亦可藉由諸如以下之因素來測定或調節抗衰老試劑之適合的投與持續時間及頻率：患者之病況、患者疾病之類型及嚴重程度、活性成分之特定形式及投與方法。一般使用實驗模型及/或臨床試驗來測定藥劑之最佳劑量。最佳劑量可視個體之身體質量、體重或血量而定。通常較佳使用足以提供有效療法之最小劑量。本文所描述之抗衰老試劑(包括當投與以用於預防益處時)之臨床前及臨床研究之設計及執行完全在熟習相關技術者之技能範圍內。當投與兩種或超過兩種抗衰老試劑來治療衰老相關疾病或病症時，相比於當單獨投與任一試劑作為單一試劑療法時，各抗衰老試劑之最佳劑量可不同，諸如更小。在某些實施例中，兩種抗衰老試劑組合可協同或相加起作用，且任一試劑可以少於若獨自投與時的量使用。每天可投與之抗衰老試劑的量可例如在以體重計約0.01 mg/kg與100 mg/kg之間(例如，在約0.1至1 mg/kg之間，在約1至10 mg/kg之間，在約10至50 mg/kg之間，在約50至100 mg/kg之間)。在其他實施例中，每天可投與之抗衰老試劑的量在以體重計約0.01 mg/kg與1000 mg/kg之間，在約100 mg/kg與500 mg/kg之間，或在約500 mg/kg與1000 mg/kg之間。(每天或每個治療過程之)最佳劑量對於待治療之衰老相關疾病或病症可為不同的，且亦可隨投與途徑及治療方案變化。
包含抗衰老試劑之醫藥組合物可以適合於遞送方法之方式藉由使用此項技術中通常實施之技術來調配。組合物可呈固體(例如錠劑、膠囊)、半固體(例如凝膠)、液體或氣體(氣溶膠)形式。在其他某些特定實施例中，抗衰老試劑(或包含其之醫藥組合物)以推注輸注形式投與。在某些實施例中，當藉由輸注遞送抗衰老試劑時，根據熟習醫療領域之技術者常規進行之技術，經由血管將抗衰老試劑遞送至包含待殺死之衰老細胞的器官或組織中。
醫藥學上可接受之賦形劑為醫藥技術中所熟知的且描述於例如Rowe等人，Handbook of Pharmaceutical Excipients: A Comprehensive Guide to Uses, Properties, and Safety, 第5版, 2006及Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Gennaro，第21版，Mack Pub. Co., Easton, Pa (2005))中。例示性醫藥學上可接受之賦形劑包括無菌鹽水及生理pH下之磷酸鹽緩衝鹽水。防腐劑、穩定劑、染料、緩衝劑及其類似者可提供於醫藥組合物中。另外，亦可使用抗氧化劑及懸浮劑。通常基於投與模式以及活性成分之化學組合物來選擇賦形劑之類型。替代地，本文所描述之組合物可調配為凍乾物。本文所描述之組合物可凍乾或另外使用一或多種合適的賦形劑溶液調配為凍乾產物，以在投與時溶解及/或稀釋組合物之藥劑。在其他實施例中，可使用此項技術中已知且實施之技術將試劑囊封於脂質體內。醫藥組合物可調配用於本文所描述及此項技術中之任何合適的投與方式。
醫藥組合物可藉由熟習此項技術者已知之若干途徑中之任一者遞送至有需要之個體。藉助於非限制性實例，組合物可經口、經靜脈內、腹膜內、藉由輸注(例如推注輸注)、皮下、經腸、經直腸、鼻內、藉由吸入、口腔、舌下、肌內、經皮、皮內、局部、眼內、經陰道、經直腸或藉由顱內注射或其任何組合遞送。在某些實施例中，如上文所描述之劑量係經由靜脈內、腹膜內、直接投與至目標組織或器官中或經皮下途徑進行。在某些實施例中，遞送方法包括藥物為抗衰老試劑之包覆藥物或滲透支架。本文更詳細地描述了適合於此類遞送方法之調配物。
在某些實施例中，將抗衰老試劑(其可與至少一種醫藥學上可接受之賦形劑組合以形成醫藥組合物)直接投與至目標組織或器官，該目標組織或器官包含促成疾病或病症之顯現特徵之衰老細胞。在特定實施例中，當治療骨關節炎時，將至少一種抗衰老試劑直接投與至有需要之個體之骨關節炎關節(亦即關節內)。在其他特定實施例中，可經由局部、經皮、皮內或皮下途徑向關節投與抗衰老試劑。在其他某些實施例中，本文提供藉由向動脈中直接投與治療與動脈硬化(諸如動脈粥樣硬化)相關之心血管疾病或病症的方法。在其他實施例中，用於治療衰老相關肺病或病症的抗衰老試劑(其可與至少一種醫藥學上可接受之賦形劑組合以形成醫藥組合物)可藉由吸入、鼻內、插管或鞘內投與，例如以更直接地向受影響之肺組織提供抗衰老試劑。藉助於另一非限制性實例，抗衰老試劑(或包含抗衰老試劑之醫藥組合物)可藉由注射(例如眼內或玻璃體內)或藉由乳膏、軟膏、凝膠或滴眼劑之眼瞼下的結膜施用直接遞送至眼睛。在更特定實施例中，可將抗衰老試劑或包含抗衰老試劑之醫藥組合物調配為定時釋放型(亦稱為持續釋放型、控制釋放型)組合物或可以推注輸注形式投與。
醫藥組合物(例如用於經口投與或用於注射、輸注、皮下遞送、肌內遞送、腹膜內遞送或其他方法)可呈液體形式。液體醫藥組合物可包括例如以下各者中之一或多者：無菌稀釋劑，諸如水、生理鹽水溶液，較佳生理鹽水，林格氏溶液(Ringer's solution)、等張氯化鈉、可充當溶劑或懸浮介質之不揮發性油、聚乙二醇、丙三醇、丙二醇或其他溶劑；抗菌劑；抗氧化劑；螯合劑；緩衝液及用於調節張力之試劑，諸如氯化鈉或右旋糖。可將非經腸組合物封裝於由玻璃或塑膠製成之安瓿、拋棄式注射器或多劑量小瓶中。較佳使用生理鹽水，且可注射醫藥組合物較佳為無菌的。在其他實施例中，為了治療眼部病狀或疾病，可將液體醫藥組合物呈滴眼劑形式施用至眼睛。液體醫藥組合物可經口遞送。
對於口服調配物，本文所描述之抗衰老試劑中之至少一者可單獨使用或與合適的添加劑組合使用以製得錠劑、粉劑、顆粒或膠囊，且若需要，與稀釋劑、緩衝劑、濕潤劑、防腐劑、著色劑及調味劑組合使用。化合物可與緩衝劑一起調配，以使得化合物可抵禦胃環境之低pH，及/或與腸溶包衣一起調配。醫藥組合物中所包括之抗衰老試劑可調配用於與調味劑一起經口遞送，例如呈液體、固體或半固體調配物及/或具有腸溶包衣。
包含本文所描述之抗衰老試劑中的任一者的醫藥組合物可調配用於持續或緩慢釋放(亦稱為定時釋放型或控制釋放型)。此類組合物可一般使用熟知之技術製備且藉由例如經口、經直腸、皮內或皮下植入或藉由在所需目標部位植入投與。持續釋放型調配物可含有分散於載劑基質中及/或包含於速率控制膜所包圍之儲集層內的化合物。在此類調配物內使用之賦形劑為生物相容性的，且亦可為可生物降解的；調配物較佳提供相對恆定含量之活性組分釋放。持續釋放型調配物內含有之活性劑的量視植入部位、釋放速率及預期持續時間、及待治療或預防之病況、疾病或病症的性質而定。
在某些實施例中，包含抗衰老試劑之醫藥組合物經調配用於經皮、皮內或局部投與。組合物可使用注射器、繃帶、經皮貼片、插入物或注射器樣施料器以粉末/滑石或其他固體、液體、噴霧、氣霧、軟膏、泡沫、乳膏、凝膠、糊劑形式投與。此係較佳以控制釋放型調配物或持續釋放型調配物形式局部投與或直接注射至靠近所治療之區域或所治療之區域內的皮膚中(皮內或皮下)。活性組合物亦可經由離子電滲法遞送。可使用防腐劑以預防真菌及其他微生物之生長。適合的防腐劑包括但不限於苯甲酸、對羥基苯甲酸丁酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、苯甲酸鈉、丙酸鈉、苯紮氯銨、苄索氯銨、苄醇、氯化十六烷基吡錠、氯丁醇、酚、苯乙醇、硫柳汞及其組合。
包含抗衰老試劑之醫藥組合物可調配為用於局部施用之乳劑。乳劑含有一種分佈於第二液體主體中之液體。乳劑可為油包水乳劑或水包油乳劑。油相及水相任一者或兩者可含有一或多種界面活性劑、乳化劑、乳劑穩定劑、緩衝劑及其他賦形劑。油相可含有其他油性的醫藥學上審批通過的賦形劑。適合之界面活性劑包括但不限於陰離子性界面活性劑、非離子性界面活性劑、陽離子性界面活性劑及兩性界面活性劑。用於局部施用之組合物亦可包括至少一種適合的懸浮劑、抗氧化劑、螯合劑、軟化劑或保濕劑。
軟膏及乳膏可例如用添加適合之增稠劑及/或膠凝劑之水性或油性基質調配。洗劑可用水性或油性基質調配且一般應亦含有一或多種乳化劑、穩定劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑或著色劑。液體噴霧劑可自加壓包裝，例如經由專門成形之封閉件遞送。水包油乳劑亦可用於組合物、貼片、繃帶及製品中。此等系統為半固體乳劑、微乳劑或泡沫乳劑系統。
經皮或局部之控制或持續釋放型調配物可藉由添加定時釋放之添加劑(諸如此項技術中可獲得之高分子結構、基質)來達成。舉例而言，組合物可藉由使用熱熔擠出物品來投與，諸如生物黏附熱熔擠出膜。調配物可包含經交聯之聚羧酸聚合物調配物。交聯劑可以提供充分黏著力的量存在，以允許系統保持附著至目標上皮或內皮細胞表面持續充足時間，以允許化合物之所需釋放。
插入物、經皮貼片、繃帶或製品可包含聚合物之混合物或塗層，其在長期時段內以恆定速率提供活性劑之釋放。在一些實施例中，製品、經皮貼片或插入物包含水可溶性造孔劑，諸如聚乙二醇(PEG)，其可與不可溶於水之聚合物混合以增加插入物之耐久性且延長活性成分之釋放。
亦可採用聚合物調配物以提供控制或持續釋放。可使用此項技術中描述之生物黏附聚合物。藉助於實例，持續釋放凝膠及化合物可併入聚合基質中，諸如疏水性聚合物基質。聚合基質之實例包括微粒。微粒可為微球粒，且核心可具有與聚合殼不同的物質。替代地，聚合物可澆築為薄板或膜，產生於研磨或其他標準技術之粉末，或諸如水凝膠之凝膠。聚合物亦可呈塗層形式或為繃帶、血管支架、導管、血管移植物或其他裝置之一部分以促進抗衰老試劑之遞送。基質可藉由溶劑蒸發、噴霧乾燥、溶劑萃取及熟習此項技術者已知之其他方法形成。
提供具有本文中所描述之一或多種試劑之單位劑量，通常呈口服或可注射劑量形式之套組。此類套組可包括含有單位劑量之容器、描述藥物在治療衰老細胞相關疾病中之用法及伴隨益處的資訊性藥品說明書，以及視情況選用之用於遞送組合物之器具或裝置。 組合療法
本文中所揭示之化合物及組合物亦可與一或多種其他活性成分組合使用。在某些態樣中，化合物可與另一治療劑組合或依序投與。此類其他治療劑包括已知用於治療、預防或改善本文所揭示之一或多種症狀的彼等治療劑。許多此等治療劑為此項技術中已知的。
應理解，認為本文中所提供之化合物及組合物與一或多種以上治療劑及視情況一或多種其他藥理學活性物質之任何適合的組合屬於本揭示內容之範疇內。在一些態樣中，本文提供之化合物及組合物在一或多種額外活性成分之前或之後投與。
可與本文所揭示之化合物一起投與的化合物之實例包括但不限於達沙替尼(dasatinib)、槲皮素(quercetin)、黃櫨素(fisetin)、左旋托林(leeutolin)、薑黃素、薑黃素類似物EF24、Navioclax (ABT253)、A1331852、A1155463、格爾德黴素(Geldamycin)、坦螺旋黴素(Tanespimycin)、阿螺旋黴素(Alvespimycin)、哌嗪胍(piperlongumeine)、FOXO-4肽、Nutlin3a、強心苷(例如，烏本苷(Ouabain)、原螺旋素(Proscillaridin)A、地高辛(Digoxin)等)、HSP-90抑制劑、雷公藤內酯(triptolide)、EF-24、原花青素C1、阿奇黴素、羅紅黴素、25-羥基膽固醇、SSK1、BIRC5基因剔除、BCL-2抑制劑、Src抑制劑、PD-1、CTLA-4伊派利單抗(ipilimumab)、帕博利珠單抗(pembrolizumab)、納武單抗(nivolumab)、阿特利珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)、度伐魯單抗(durvalumab)、西米普利單抗(cemiplimab)、奧伐木單抗(ofatumumab)、博納吐單抗(blinatumomab)、達雷木單抗(daratumumab)、埃羅妥珠單抗(elotuzumab)、阿托珠單抗(obinutuzumab)、塔里穆尼拉赫韋克(talimogene laherparepvec)、耐昔妥珠單抗(necitumumab)、來那度胺(lenalidomide)、迪奴圖單抗(dinutuximab)及其組合。
最後，應注意，存在實施本發明之替代性方式。因此，本發明態樣應被視為係說明性而非限制性，且本發明並不限於本文中給定之細節，但可在隨附申請專利範圍之範圍及等效物內對本發明進行修改。
本文中所引用的所有公開案及專利案皆以全文引用之方式併入。
以下實例僅出於說明性目的而提供，且不意欲限制本發明之範疇。 實例
方案1說明製備化合物1、2及3。 實例 1 ： (8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O-(2- 甲氧基乙基 ) 肟 (1)
在環境溫度下，向(11S,13S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-1H-環戊[a]菲-3-酮(100) (35 mg，0.08 mmol，1.0當量)於甲醇(1 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加O-(2-甲氧基乙基)羥胺(101) (0.15 mmol，2.0當量)，隨後添加D-(+)-樟腦-10-磺酸(4 mg，0.015 mmol，0.2當量)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，直至藉由LCMS分析反應完成為止。藉由旋轉蒸發濃縮混合物，得到呈E及Z異構體混合物形式之化合物1。 實例 2 ： (8S,11R,13S,14S,17S,Z)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O-(2- 甲氧基乙基 ) 肟 (2) 及 (8S,11R,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O-(2- 甲氧基乙基 ) 肟 (3)
藉由逆相HPLC (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化化合物1，得到純幾何異構體2 (5 mg，12%產率)及3 (14.6 mg，36%產率)。
化合物2： 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 7.02 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 6.97 - 6.92 (m, 2H), 6.28 (s, 1H), 5.42 (s, 1H), 4.29 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 4.24 (t, J= 5.2, 5.2 Hz, 1H), 4.04 - 3.99 (m, 2H), 3.51 - 3.47 (m, 2H), 3.23 (s, 3H), 2.59 - 2.53 (m, 1H), 2.39 (d, J= 13.3 Hz, 2H), 2.26 - 2.04 (m, 4H), 1.96 - 1.89 (m, 1H), 1.82 (m, 2H), 1.76 - 1.57 (m, 3H), 1.34 (m, 1H), 1.23 (m, 1H), 0.92 - 0.83 (m, 2H), 0.62 - 0.56 (m, 2H), 0.45 (s, 3H)。計算質量：535.29，觀測質量(ESI+)：536.5 [M+H]。
化合物3： 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 7.02 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 6.94 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.77 (s, 1H), 4.28 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 4.26 - 4.21 (m, 1H), 4.07 - 4.01 (m, 2H), 3.51 - 3.45 (m, 2H), 3.43 (s, 2H), 3.20 (s, 3H), 2.65 (dd, J= 11.5, 5.5 Hz, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.18 - 2.03 (m, 3H), 1.96 - 1.89 (m, 1H), 1.82 (m, 2H), 1.76 - 1.56 (m, 4H), 1.35 - 1.20 (m, 2H), 0.92 - 0.85 (m, 2H), 0.62 - 0.55 (m, 2H), 0.43 (s, 3H)。計算質量：535.29，觀測質量(ESI+)：536.5 [M+H]。
方案2說明製備關鍵中間物108。 製備 1,2,3,4- 四 -O- 乙醯基 -L- 岩藻醣 (102)
將L-岩藻醣(101) (50 g，0.3 mol)溶解於乙酸酐(400 mL，4.23 mol)及吡啶(800 mL，9.9 mol)之溶液中。將反應混合物在室溫下攪拌隔夜，在減壓下濃縮，用EtOAc (2000 mL)稀釋，用水(1000 mL)、10%檸檬酸水溶液(3×700 mL)、水(1000 mL)、鹽水(1000 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮。使殘餘物與甲苯(200 mL)共沸且在高真空下乾燥，得到粗產物1,2,3,4-四-O-乙醯基-L-岩藻醣(102) (100 g，定量)，其不經任何進一步純化即用於下一步驟中。 製備乙酸 (2S,3R,4R,5S)-4,5- 雙 ( 乙醯氧基 )-6- 溴 -2- 甲基氧雜環己烷 -3- 基酯 (103)
將1,2,3,4-四-O-乙醯基-L-岩藻醣(102) (101 g，0.3 mol)溶解於無水二氯甲烷(500 mL)中且冷卻至0℃。接著，添加HBr (33%於AcOH中，135 mL)且在攪拌下使反應混合物升溫至室溫持續2小時，倒入冰/水混合物中且分離有機層。用CH 2Cl 2(200 mL)萃取水相。將有機層用飽和NaHCO 3(100 mL)、鹽水(150 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀物之乙酸(2S,3R,4R,5S)-4,5-雙(乙醯氧基)-6-溴-2-甲基氧雜環己烷-3-基酯(103) (115 g，定量)。粗物質不經進一步純化即用於下一步驟中。 製備乙酸 (2S,3R,4S)-4-( 乙醯氧基 )-2- 甲基 -3,4- 二氫 -2H- 哌喃 -3- 基酯 (104)
在回流下在40分鐘內向Zn (111 g，1.7 mol)及1-甲基-咪唑(25 mL，0.31 mol)於無水乙酸乙酯(1200 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加乙酸(2S,3R,4R,5S)-4,5-雙(乙醯氧基)-6-溴-2-甲基氧雜環己烷-3-基酯(103) (100 g，0.28 mol)於無水乙酸乙酯(200 mL)中之溶液。將反應混合物在回流下加熱3小時，直至TLC分析顯示反應完成。將反應混合物冷卻至室溫，再攪拌30分鐘且接著通過矽藻土墊過濾。在減壓下濃縮得到粗產物，藉由矽膠急驟層析(0%至10% EtOAc/己烷)將其純化，得到所需產物乙酸(2S,3R,4S)-4-(乙醯氧基)-2-甲基-3,4-二氫-2H-哌喃-3-基酯(104) (38 g，63%產率)。 製備乙酸 (2S,3R,4S)-4,6- 雙 ( 乙醯氧基 )-2- 甲基氧雜環己烷 -3- 基酯 (105)
向乙酸(2S,3R,4S)-4-(乙醯氧基)-2-甲基-3,4-二氫-2H-哌喃-3-基酯(104) (75 g，0.35 mol)於無水二氯甲烷(500 mL)中之冷溶液(冰/水浴)中添加乙酸(190 mL，3.3 mol)及乙酸酐(290 mL，3 mol)。將反應混合物攪拌15分鐘，添加含33% HBr之AcOH溶液(19 mL)且再繼續攪拌30分鐘直至溶液變為淡黃色為止。TLC分析顯示起始物質完全耗盡(下部斑點，25% EtOAc/己烷)。添加冰/水混合物以淬滅反應物。將有機層用水(2×1 L)隨後用冷NaHCO 3飽和水溶液(1 L)、水(1 L)及鹽水(1 L)徹底洗滌。將有機層經無水Na 2SO 4乾燥，並在真空中濃縮以得到粗產物，藉由矽膠急驟層析(0%至20% EtOAc/己烷)純化粗產物，得到呈白色固體狀之所需產物乙酸(2S,3R,4S)-4,6-雙(乙醯氧基)-2-甲基氧雜環己烷-3-基酯(105) (83 g，86.2%產率)。 製備 乙酸 (2S,3R,4S,6S)-4-( 乙醯氧基 )-6- 溴 -2- 甲基氧雜環己烷 -3- 基酯 (106)
在0℃下，向乙酸(2S,3R,4S)-4,6-雙(乙醯氧基)-2-甲基氧雜環己烷-3-基酯(105) (82 g, 0.3 mol)於無水二氯甲烷(700 mL)中之溶液中添加含33% HBr之AcOH溶液(80 mL)。將攪拌反應混合物15分鐘，且隨後添加冰冷水(300 mL)以淬滅反應物。將水相用二氯甲烷(3×700 mL)萃取且將經合併之有機層用鹽水(2×500 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥並在真空中濃縮，得到呈黏性油狀物之乙酸(2S,3R,4S,6S)-4-(乙醯氧基)-6-溴-2-甲基氧雜環己烷-3-基酯(106)。粗物質不經任何進一步純化即儘可能快地用於下一步驟中。 製備乙酸 (2S,3R,4S,6S)-4-( 乙醯氧基 )-6-[(1,3- 二氧雜 -2,3- 二氫 -1H- 異吲哚 -2- 基 ) 氧基 ]-2- 甲基氧雜環己烷 -3- 基酯 (107)
在0℃下，向粗乙酸(2S,3R,4S,6S)-4-(乙醯氧基)-6-溴-2-甲基氧雜環己烷-3-基酯(106)及N-羥基鄰苯二甲醯亞胺(54 g，0.33 mol)於無水二氯甲烷(600 mL)中之溶液中添加三乙胺(55 mL，0.33 mol)，接著添加BF 3·OEt 2(92 mL，0.75 mol)。使反應混合物達到室溫並攪拌1小時，直至形成綠灰色為止。添加冷NaHCO 3飽和水溶液(500 ml)且分離有機層。然後將水溶液用二氯甲烷(3×500 mL)萃取，且將經合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥，且在減壓下濃縮，獲得粗物質。矽膠急驟層析(10%至60% EtOAc/己烷)提供呈白色多泡固體狀之乙酸(2S,3R,4S,6S)-4-(乙醯氧基)-6-[(1,3-二氧雜-2,3-二氫-1H-異吲哚-2-基)氧基]-2-甲基氧雜環己烷-3-基酯(107) (75 g，經兩個步驟產率66%)。
LC/MS (方法B)：RT=4.32分鐘；m/z =377.1，實驗值= 378.2 [M +H] +。總時間= 12分鐘。 1H NMR (500 MHz，氯仿 d3) δ 7.85 (ddd, J = 5.5, 3.3, 0.6 Hz, 2H), 7.76 (ddd, J = 5.9, 2.9, 0.8 Hz, 2H), 5.62 - 5.52 (m, 1H), 5.43 (ddd, J = 12.5, 5.3, 3.0 Hz, 1H), 5.38 - 5.23 (m, 1H), 4.97 (td, J = 6.7, 6.7, 5.6 Hz, 1H), 2.35 - 2.18 (m, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.03 (d, J = 0.6 Hz, 3H), 1.14 (dd, J = 6.5, 0.6 Hz, 3H) 。製備乙酸(2S,3R,4S,6S)-4-(乙醯氧基)-6-(胺氧基)-2-甲基氧雜環己烷-3-基酯(108)
在冰/水浴下將乙酸(2S,3R,4S,6S)-4-(乙醯氧基)-6-[(1,3-二氧雜-2,3-二氫-1H-異吲哚-2-基)氧基]-2-甲基氧雜環己烷-3-基酯(107) (25 g，0.066 mol)於甲醇(500 mL)中之溶液冷卻至0℃。緩慢添加水合肼(5.5 mL，0.066 mol)且將所得反應混合物在0℃下再攪拌30分鐘。將沉澱物過濾，並將濾液用二氯甲烷(500 mL)稀釋，用冷NaHCO 3水溶液(2×350 mL)、水(350 mL)、鹽水(350 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，且在減壓下濃縮，得到呈灰白色多泡固體狀之粗物質乙酸(2S,3R,4S,6S)-4-(乙醯氧基)-6-(胺氧基)-2-甲基氧雜環己烷-3-基酯(108) (12 g，78%產率)。LC/MS：m/z =247.2，實驗值= 248.3 [M+H] +。總時間= 6分鐘。
方案3說明製備化合物4、5、6及22。 實例 3 ：二乙酸 (2S,3R,4S,6S)-6-((((11S,13S,17S,E:Z)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 胺基 ) 氧基 )-2- 甲基四氫 -2H- 哌喃 -3,4- 二基酯 (22)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (52 mg，0.11 mmol，1.0當量)於吡啶(1.1 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加二乙酸(2S,3R,4S,6S)-6-(胺氧基)-2-甲基四氫-2H-哌喃-3,4-二基酯(31.0 mg，0.12 mmol，1.1當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(11.0 mg，0.05 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時，此時藉由LCMS分析反應完成。將反應混合物濃縮且乾燥，得到二乙酸(2S,3R,4S,6S)-6-((((11S,13S,17S,E:Z)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)胺基)氧基)-2-甲基四氫-2H-哌喃-3,4-二基酯(22) (78 mg，100%產率)。 實例 4 ： (8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O-((2S,4S,5S,6S)-4,5- 二羥基 -6- 甲基四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 ) 肟 (4)
在環境溫度下，向二乙酸(2S,3R,4S,6S)-6-((((11S,13S,17S,E:Z)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)胺基)氧基)-2-甲基四氫-2H-哌喃-3,4-二基酯(22) (78 mg，0.11 mmol，1.0當量)於甲醇(1.6 mL)及水(0.4 mL)中之經攪拌溶液中添加三甲胺(73 uL，0.56 mmol，5.0當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，藉由LCMS分析反應完成，得到(8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮O-((2S,4S,5S,6S)-4,5-二羥基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)肟(4)。 實例 5 ： (8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O-((2S,4S,5S,6S)-4,5- 二羥基 -6- 甲基四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 ) 肟 (5) 及 (8S,11S,13S,14S,17S,Z)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O-((2S,4S,5S,6S)-4,5- 二羥基 -6- 甲基四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 ) 肟 (6) 藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化化合物4，得到純幾何異構體5 (22.7 mg，33%產率)及6 (5.9 mg，8.6%產率)。
化合物5： 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 7.03 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 5.81 (s, 1H), 5.41 (s, 1H), 5.30 - 5.26 (m, 1H), 4.55 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 4.31 - 4.26 (m, 2H), 4.23 (t, J = 5.3, 5.3 Hz, 1H), 3.72 - 3.63 (m, 2H), 2.67 (dt, J = 16.8, 5.7, 5.7 Hz, 1H), 2.42 (d, J = 13.3 Hz, 4H), 2.23 - 2.04 (m, 3H), 1.97 - 1.90 (m, 1H), 1.86 - 1.78 (m, 2H), 1.78 - 1.65 (m, 3H), 1.62 (dt, J = 11.6, 5.7, 5.7 Hz, 2H), 1.36 - 1.19 (m, 2H), 1.02 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.93 - 0.83 (m, 2H), 0.62 - 0.56 (m, 2H), 0.44 (s, 3H)。計算質量：607.3，觀測質量(ESI+)：608.5 [M+H]。
化合物6： 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 7.03 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.31 (s, 1H), 5.41 (s, 1H), 5.30 - 5.24 (m, 1H), 4.56 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 4.29 (t, J = 5.2, 5.2 Hz, 2H), 4.24 (t, J = 5.2, 5.2 Hz, 1H), 3.80 (dt, J = 12.0, 8.1, 8.1 Hz, 1H), 3.69 (q, J = 7.0, 6.5, 6.5 Hz, 1H), 2.39 (d, J = 12.6 Hz, 2H), 2.25 - 2.04 (m, 4H), 1.96 - 1.89 (m, 1H), 1.88 - 1.78 (m, 3H), 1.72 (dd, J = 25.7, 9.0 Hz, 2H), 1.62 (dd, J = 12.4, 4.9 Hz, 2H), 1.34 (q, J = 11.5, 11.5, 11.5 Hz, 1H), 1.28 - 1.18 (m, 1H), 1.03 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.91 - 0.86 (m, 2H), 0.62 - 0.56 (m, 2H), 0.45 (s, 3H)。計算質量：607.3，觀測質量(ESI+)：608.5 [M+H]。
方案4說明製備中間物114。 製備甲酸 4 -( 2 - 羥乙基 ) 哌 𠯤 - 1 - 三級丁酯 ( 111 )
在0℃下，向2-(哌𠯤-1-基)乙-1-醇(110) (1.0 g，7.68 mmol，1.0當量)於THF (76 mL)中之經攪拌溶液中添加二碳酸二-三級丁酯(1.84 g，8.44 mmol，1.1當量)。將反應混合物在0℃下攪拌10分鐘，隨後升溫至室溫持續6小時，此時藉由LCMS分析反應完成。將反應混合物用水(76 mL)淬滅且用乙酸乙酯(2×200 mL)萃取。將經合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮且乾燥，得到甲酸4-(2-羥乙基)哌𠯤-1-三級丁酯(111) (1.76 g，100%產率)。 製備甲酸 4-(2-((1,3- 二氧雜異吲哚啉 -2- 基 ) 氧基 ) 乙基 ) 哌 𠯤 -1- 三級丁酯 (113)
在室溫下，向甲酸4-(2-羥乙基)哌𠯤-1-三級丁酯(111) (1.7 g，7.39 mmol，1.0當量)於THF (74mL)中之經攪拌溶液中添加N-羥基醯胺(112) (1.2 g，7.39 mmol，1.0當量)、三苯膦(2.13 g，8.13 mmol，1.1當量)，接著添加偶氮二甲酸二異丙酯。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。將反應混合物用水(76 mL)淬滅且用乙酸乙酯(2×200 mL)萃取。將經合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮。用二乙醚(30 mL)及己烷(70 mL)稀釋粗物質且在室溫下攪拌1小時。將混合物通過經燒結漏斗過濾以去除大部分三苯基氧化膦。將濾液藉由正相矽膠(0%至60% EtOAc/己烷)純化，得到呈白色固體狀之甲酸4-(2-((1,3-二氧雜異吲哚啉-2-基)氧基)乙基)哌𠯤-1-三級丁酯(113) (2.16 g，78%)。 製備甲酸 4-(2-( 胺氧基 ) 乙基 ) 哌 𠯤 -1- 三級丁酯 (114)
在室溫下，向甲酸4-(2-((1,3-二氧雜異吲哚啉-2-基)氧基)乙基)哌𠯤-1-三級丁酯(113) (0.2 g，0.52 mmol，1.0當量)於THF (74 mL)中之經攪拌溶液中添加單水合肼(0.12 mL，1.6 mmol，3.0當量)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時，此時藉由LCMS分析反應完成。將反應混合物通過矽藻土墊過濾且濃縮濾液，得到甲酸4-(2-(胺氧基)乙基)哌𠯤-1-三級丁酯(114) (0.13 g，100%)。
方案5說明製備化合物7及23。 實例 6 ：甲酸 4-(2-((((8S,11R,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 胺基 ) 氧基 ) 乙基 ) 哌 𠯤 -1- 三級丁酯 (23)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (0.1 g，0.216 mmol，1.0當量)於甲醇(3 mL)中之經攪拌溶液中添加甲酸4-(2-(胺氧基)乙基)哌𠯤-1-三級丁酯(114) (0.16 g，0.43 mmol，2.0當量)，隨後添加D-(+)-樟腦-10-磺酸(10 mg，0.08 mmol，0.4當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由旋轉蒸發濃縮混合物。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化殘餘物，得到甲酸4-(2-((((8S,11R,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)胺基)氧基)乙基)哌𠯤-1-三級丁酯(23) (59 mg，50%產率)。 實例 7 ： (8S,11R,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O-(2-( 哌 𠯤 -1- 基 ) 乙基 ) 肟 (7)
在室溫下，向甲酸4-(2-((((8S,11R,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)胺基)氧基)乙基)哌𠯤-1-三級丁酯(23)(10 mg，0.014 mmol)中添加4M HCl (於二㗁烷中) (0.5 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，此時藉由LCMS分析反應完成。濃縮反應混合物，得到(8S,11R,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮O-(2-(哌𠯤-1-基)乙基)肟(7) (13 mg，100%)。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 7.03 (dd, J = 8.3, 3.9 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 6.36 (s, 1H), 4.31 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 4.24 (t, J = 5.6, 5.6 Hz, 1H), 3.73 - 3.63 (m, 2H), 3.50 - 3.44 (m, 3H), 2.45 (s, 2H), 2.43 - 2.37 (m, 2H), 2.29 - 2.21 (m, 1H), 2.18 (s, 1H), 2.15 (dd, J = 9.0, 5.7 Hz, 1H), 2.13 - 2.04 (m, 1H), 1.94 (dt, J = 12.6, 4.3, 4.3 Hz, 1H), 1.83 (ddd, J = 10.4, 8.4, 5.1 Hz, 2H), 1.76 - 1.57 (m, 3H), 1.39 - 1.17 (m, 3H), 0.93 - 0.86 (m, 2H), 0.59 (tq, J = 4.5, 4.5, 2.7, 2.1, 2.1 Hz, 2H), 0.45 (d, J = 5.0 Hz, 3H)。計算質量：589.35，觀測質量(ESI+)：590.5 [M+H]。
方案6說明中間物118之合成。 製備 2-(2-(4- 甲基哌 𠯤 -1- 基 ) 乙氧基 ) 異吲哚啉 -1,3- 二酮 (117)
在0℃下，向2-羥基異吲哚啉-1,3-二酮(112) (1.12 g，6.9 mmol，1當量)及三苯膦(2.0 g，7.6 mmol，1.1當量)於THF (25 ml)中之經攪拌溶液中逐滴添加2-(4-甲基哌𠯤-1-基)乙醇(116) (1.0 g，6.9 mmol，1.01當量)。接著在0℃下攪拌混合物30分鐘，隨後逐滴添加DIAD (1.5 mL，7.6 mmol，1.1當量)。在0℃下再攪拌反應物30分鐘，隨後升溫至室溫且攪拌16小時。在減壓下移除溶劑且使殘餘物再溶解於EtOAc (35 mL)中。將有機層用飽和NaHCO 3(2×25 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮至大約15 mL。將有機層冷卻至0℃，且添加冷1M HCl水溶液(15 mL)。完成添加後，使混合物升溫至室溫且攪拌20分鐘。分離各層且用Et 2O (2×15 mL)洗滌水層。冷卻至0℃後，藉由緩慢添加NaHCO 3飽和溶液鹼化水層，隨後用CHCl 3(3×25 mL)萃取。合併有機萃取物，經Na 2SO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到呈米色固體狀之2-(2-(4-甲基哌𠯤-1-基)乙氧基)異吲哚啉-1,3-二酮(117) (1.1 g，55%)。計算質量：289.14，觀測質量(ESI+)：290.1 [M+H]。 製備 O-(2-(4- 甲基哌 𠯤 -1- 基 ) 乙基 ) 羥胺 (118)
在0℃下，向2-(2-(4-甲基哌𠯤-1-基)乙氧基)異吲哚啉-1,3-二酮(117) (200 mg，0.69 mmol)於MeOH:DCM (2:1，3 mL)中之經攪拌溶液中添加單水合肼(0.1 mL，2.1 mmol，3當量)且在0℃下繼續攪拌1小時。反應完成後，在真空下移除溶劑，將殘餘物再溶解於乙酸乙酯中，用水(2×3 mL)洗滌兩次，經Na 2SO 4乾燥且濃縮，得到O-(2-(4-甲基哌𠯤-1-基)乙基)羥胺(118)，其不經進一步純化即用於下一步驟中(110 mg，粗產物)。計算質量：159.13，觀測質量(ESI+)：160.0 [M+H]。
方案7說明製備化合物8。 實例 8 ： (8S,11R,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O-(2-(4- 甲基哌 𠯤 -1- 基 ) 乙基 ) 肟 (8)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (35 mg，0.07 mmol，1.0當量)於甲醇(0.7 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加O-(2-(4-甲基哌𠯤-1-基)乙基)羥胺(118) (36 mg，0.22 mmol，3.0當量)，隨後添加D-(+)-樟腦-10-磺酸(3.5 mg，0.01 mmol，0.2當量)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由旋轉蒸發濃縮揮發物。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化殘餘物，得到(8S,11R,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮O-(2-(4-甲基哌𠯤-1-基)乙基)肟(8) (3.9 mg, 8.5%產率)。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 7.07 - 7.00 (m, 2H), 6.97 - 6.91 (m, 2H), 5.96 (s, 1H), 5.71 (s, 1H), 5.40 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.31 - 4.20 (m, 2H), 2.87 (s, 1H), 2.71 (s, 1H), 2.42 - 2.32 (m, 5H), 2.20 - 2.01 (m, 3H), 1.93 (ddt, J = 17.1, 11.8, 5.5, 5.5 Hz, 2H), 1.86 - 1.55 (m, 5H), 1.38 - 1.17 (m, 2H), 0.92 - 0.83 (m, 2H), 0.62 - 0.56 (m, 2H), 0.44 (d, J = 5.5 Hz, 3H)。計算質量：603.364，觀測質量(ESI+)：605.5 [M+H] +。
方案8說明製備化合物9。 實例 9 ： (8S,11R,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O-(2-(N- 𠰌 啉基 ) 乙基 ) 肟 (9)
在環境溫度下，向(11S,13S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-1H-環戊[a]菲-3(2H)-酮(100) (35 mg，0.08 mmol，1.0當量)於吡啶(0.7 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加O-(2-(N-𠰌啉基)乙基)羥胺(122) (42 mg，0.23 mmol，3.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(7.3 mg，0.04 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到(8S,11R,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮O-(2-(N-𠰌啉基)乙基)肟(9) (8.5 mg，19%產率)。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 7.02 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 6.94 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 5.77 (s, 1H), 5.41 (s, 1H), 4.28 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 4.23 (t, J= 5.2, 5.2 Hz, 1H), 4.05 (t, J= 5.9, 5.9 Hz, 2H), 3.50 (t, J= 4.7, 4.7 Hz, 4H), 2.67 - 2.59 (m, 2H), 2.43 - 2.31 (m, 9H), 2.19 - 2.03 (m, 3H), 2.02 - 1.88 (m, 1H), 1.82 (m, 1H), 1.77 - 1.56 (m, 4H), 1.36 - 1.19 (m, 2H), 0.92 - 0.85 (m, 2H), 0.62 -0.55 (m, 2H), 0.43 (s, 3H)。計算質量：590.33，觀測質量(ESI+)：591.7 [M+H]。
方案9說明製備化合物10、11及12。 實例 10 ： (8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O-(2-(2- 羥基乙氧基 ) 乙基 ) 肟 (10)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (35 mg，0.08 mmol，1.0當量)於吡啶(0.7 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加2-(2-(胺氧基)乙氧基)乙醇(123) (27 mg，0.23 mmol，3.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(7.3 mg，0.04 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成，得到化合物10。 實例 11 ： (8S,11R,13S,14S,17S,Z)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O-(2-(2- 羥基乙氧基 ) 乙基 ) 肟 (11) 及 (8S,11R,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O-(2-(2- 羥基乙氧基 ) 乙基 ) 肟 (12)
藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化化合物10，得到純幾何異構體11 (4 mg，10%產率)及12 (18 mg，42%產率)。
化合物11： 1H NMR (500 MHz，氯仿- d3)：δ 7.05 (d, J= 7.9 Hz, 2H), 7.02 - 6.92 (m, 2H), 6.45 (s, 1H), 4.32 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 4.23 - 4.18 (m, 2H), 3.80 - 3.75 (m, 2H), 3.73 (m, 2H), 3.65 -3.58 (m, 2H), 2.89 (t, J= 5.4, 5.4 Hz, 1H), 2.60 - 2.25 (m, 10H), 2.13 - 2.06 (m, 1H), 2.05 (s, 1H), 1.99 (m, 1H), 1.85 (m, 2H), 1.79 - 1.70 (m, 2H), 1.49 -1.33 (m, 2H), 0.93 (m, 2H), 0.69 - 0.62 (m, 2H), 0.59 (s, 3H)。計算質量：565.3，觀測質量(ESI+)：566.2 [M+H]。
化合物12： 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 7.03 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 6.96 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 5.79 (s, 1H), 5.42 (s, 1H), 4.53 (t, J= 5.5, 5.5 Hz, 1H), 4.30 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 4.24 (t, J= 5.4, 5.4 Hz, 1H), 4.05 (dd, J= 5.9, 4.0 Hz, 2H), 3.60 - 3.55 (m, 2H), 3.45 (m, 2H), 3.41 - 3.37 (m, 2H), 2.69 - 2.62 (m, 1H), 2.42 (d, J= 13.4 Hz, 3H), 2.19 - 2.06 (m, 6H), 1.97 - 1.90 (m, 1H), 1.83 (m, 1H), 1.76 - 1.57 (m, 4H), 1.37 - 1.19 (m, 2H), 0.94 - 0.84 (m, 2H), 0.66 - 0.54 (m, 2H), 0.45 (s, 3H)。計算質量：565.3，觀測質量(ESI+)：566.5 [M+H]。
方案10說明製備化合物13、14及15。 實例 12 ： (8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O-(2-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 ) 肟 (13)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (35 mg，0.07 mmol，1.0當量)於吡啶(0.7 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加O-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)羥胺(124) (20.0 mg，0.15 mmol，2.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(7.2 mg，0.03 mmol，0.5當量)。當藉由LCMS分析進行反應時，將反應混合物在室溫下攪拌16小時，得到化合物13。 實例 13 ： (8S,11R,13S,14S,17S,Z)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O-(2-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 ) 肟 (14) 及 (8S,11R,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O-(2-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 ) 肟 (15)
藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化化合物13，得到純幾何異構體14 (5.4 mg，13%產率)及15 (13.3 mg，33%產率)。
化合物14： 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 7.03 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.29 (s, 1H), 5.42 (s, 1H), 4.30 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.25 (t, J = 5.5, 5.5 Hz, 1H), 4.02 (dd, J = 5.7, 4.2 Hz, 2H), 3.58 (t, J = 5.0, 5.0 Hz, 2H), 3.53 - 3.49 (m, 2H), 3.44 - 3.40 (m, 2H), 3.23 (s, 3H), 2.58 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 2.40 (d, J = 13.3 Hz, 2H), 2.27 - 2.05 (m, 4H), 1.97 - 1.90 (m, 1H), 1.83 (tt, J = 8.4, 8.4, 5.1, 5.1 Hz, 2H), 1.77 - 1.58 (m, 3H), 1.35 (q, J = 11.5, 11.5, 11.5 Hz, 1H), 1.24 (qd, J = 12.4, 12.2, 12.2, 5.4 Hz, 1H), 0.93 - 0.84 (m, 2H), 0.63 - 0.57 (m, 2H), 0.46 (s, 3H)。計算質量：579.3，觀測質量(ESI+)：580.3 [M+H]。
化合物15： 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 7.03 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.79 (s, 1H), 5.42 (s, 1H), 4.30 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 4.24 (t, J = 5.4, 5.4 Hz, 1H), 4.05 (dd, J = 5.9, 4.0 Hz, 2H), 3.57 (t, J = 4.9, 4.9 Hz, 2H), 3.51 - 3.46 (m, 2H), 3.39 (dd, J = 5.7, 3.8 Hz, 2H), 3.20 (s, 3H), 2.70 - 2.62 (m, 1H), 2.58 - 2.53 (m, 1H), 2.42 (d, J = 13.7 Hz, 3H), 2.19 - 2.06 (m, 3H), 1.97 - 1.90 (m, 1H), 1.83 (tt, J = 8.3, 8.3, 5.1, 5.1 Hz, 1H), 1.78 - 1.58 (m, 4H), 1.37 - 1.19 (m, 2H), 0.93 - 0.86 (m, 2H), 0.62 - 0.57 (m, 2H), 0.45 (s, 3H)。計算質量：579.3，觀測質量(ESI+)：580.6 [M+H]。
方案11說明製備化合物16。 實例 14 ： (8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O- 乙基 肟 (16)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (35 mg，0.07 mmol，1.0當量)於吡啶(0.7 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加O-乙基羥胺鹽酸鹽(125) (22 mg，0.22 mmol，3.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(7.2 mg，0.04 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮O-乙基肟(16) (6.7 mg，17%產率)。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.02 (dd, J = 8.3, 2.4 Hz, 2H), 6.97 - 6.92 (m, 2H), 5.41 (s, 1H), 4.28 (s, 1H), 4.24 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 3.96 (dq, J = 12.1, 7.0, 7.0, 7.0 Hz, 2H), 2.68 - 2.59 (m, 1H), 2.44 - 2.35 (m, 3H), 2.25 - 2.04 (m, 3H), 1.92 (dt, J = 12.4, 4.3, 4.3 Hz, 1H), 1.82 (tt, J = 8.5, 8.5, 5.1, 5.1 Hz, 1H), 1.76 - 1.57 (m, 3H), 1.38 - 1.18 (m, 2H), 1.14 (td, J = 7.1, 7.0, 4.9 Hz, 3H), 0.92 - 0.85 (m, 2H), 0.59 (dddd, J = 6.3, 5.4, 4.1, 1.2 Hz, 2H), 0.44 (d, J = 6.7 Hz, 3H)。計算質量：505.2792，觀測質量(ESI+)：506.5 [M+H]。
方案12說明製備化合物17。 實例 15 ： 2-((((8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 胺基 ) 氧基 ) 乙酸 (17)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (35 mg，0.08 mmol，1.0當量)於吡啶(0.7 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加2-(胺氧基)乙酸(126) (22 mg，0.23 mmol，3.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(7.3 mg，0.04 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到2-((((8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)胺基)氧基)乙酸(17) (3.6 mg，9%產率)。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 7.03 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 6.95 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.75 (s, 1H), 5.41 (s, 1H), 4.38 (d, J= 6.8 Hz, 2H), 4.30 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 4.24 (t, J= 5.4, 5.4 Hz, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.56 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 2.45 - 2.35 (m, 4H), 2.23 - 2.03 (m, 3H), 1.97 - 1.89 (m, 1H), 1.82 (m, 1H), 1.78 - 1.54 (m, 4H), 1.37 - 1.27 (m, 1H), 1.27 - 1.18 (m, 1H), 0.92 - 0.83 (m, 2H), 0.63 - 0.56 (m, 2H), 0.45 (d, J= 6.0 Hz, 3H)。計算質量：535.25，觀測質量(ESI+)：536.2 [M+H]。
方案13說明製備化合物18。 實例 16 ： (8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O-(2- 羥乙基 ) 肟 (18)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (0.8 g，1.73 mmol，1.0當量)於甲醇(57 mL，0.03M)中之經攪拌溶液中添加2-(胺氧基)乙醇(127) (0.4 g，5.19 mmol，3.0當量)，隨後添加D-(+)-樟腦-10-磺酸(0.16 g，6.92 mmol，0.4當量)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由旋轉蒸發濃縮混合物，且藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化殘餘物，得到(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮O-(2-羥乙基)肟(18) (0.6 g，66%產率)。
1H NMR (500 MHz，氯仿- d3)：7.05 (t, J = 8.7, 8.7 Hz, 2H), 6.95 (dd, J = 8.4, 2.8 Hz, 2H), 5.84 (s, 1H), 4.32 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.16 (ddd, J = 4.4, 2.9, 1.1 Hz, 2H), 3.90 - 3.83 (m, 2H), 2.88 (t, J = 5.4, 5.4 Hz, 1H), 2.79 (ddd, J = 16.8, 6.2, 4.5 Hz, 1H), 2.61 - 2.43 (m, 5H), 2.41 - 2.23 (m, 4H), 2.13 - 1.80 (m, 6H), 1.74 (dd, J = 12.9, 9.2 Hz, 3H), 1.49 - 1.33 (m, 3H), 0.97 - 0.89 (m, 2H), 0.71 - 0.61 (m, 2H), 0.58 (d, J = 3.2 Hz, 3H)。計算質量：522.4，觀測質量(ESI+)：522.4 [M+H]。
方案14說明製備化合物19及20。 實例 17 ：三乙酸 (2S,3S,4R,5R,6S)-2-((((8S,11R,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 胺基 ) 氧基 )-6- 甲基四氫 -2H- 哌喃 -3,4,5- 三酯 (19)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (60 mg，0.13 mmol，1.0當量)於吡啶(1 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加三乙酸(2S,3S,4R,5S,6S)-2-(胺氧基)-6-甲基四氫-2H-哌喃-3,4,5-酯(128) (80 mg，0.27 mmol，2.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(13 mg，0.07 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。反應完成後，在真空下移除溶劑，得到三乙酸(2S,3S,4R,5R,6S)-2-((((8S,11R,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)胺基)氧基)-6-甲基四氫-2H-哌喃-3,4,5-三酯(19)。 實例 18 ： (8S,11R,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 O-((2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5- 三羥基 -6- 甲基四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 ) 肟 (20)
將(8S,11R,13S,14S,17S,E:Z)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十氫-1H-環戊[a]菲-3(2H)-酮-O-((2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-三乙醯氧基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)肟(19)溶解於MeOH/H 2O (4:1) (5 mL)中，添加TEA (0.09 mL)，且將混合物在室溫下攪拌隔夜，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化粗反應混合物，得到(8S,11R,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮O-((2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-三羥基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基)肟(20) (10.5 mg，14%產率)。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 7.04 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 6.96 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 6.41 - 6.37 (m, 1H), 5.42 (s, 1H), 5.12 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 4.65 (d, J= 5.9 Hz, 1H), 4.56 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 4.42 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 4.31 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 4.25 (t, J= 5.5, 5.5 Hz, 1H), 3.77 (m, 1H), 3.69 - 3.60 (m, 2H), 3.51 (t, J= 4.5, 4.5 Hz, 1H), 2.56 (s, 1H), 2.41 (d, J= 13.2 Hz, 2H), 2.28 - 2.05 (m, 4H), 1.98 - 1.91 (m, 1H), 1.84 (m, 2H), 1.78 - 1.58 (m, 3H), 1.40 - 1.19 (m, 2H), 1.03 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 0.93 - 0.86 (m, 2H), 0.63 - 0.58 (m, 2H), 0.46 (s, 3H)。計算質量：623.31，觀測質量(ESI+)：624.4 [M+H]。
方案15說明製備化合物21。 實例 19 ： N-(2-(2-(2-(2-((((8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 胺基 ) 氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 )-5-(2- 側氧基六氫 -1H- 噻吩并 [3,4-d] 咪唑 -4- 基 ) 戊醯胺 (21)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (35 mg，0.07 mmol，1.0當量)於吡啶(0.7 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加N-(2-(2-(2-(2-(胺氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-5-(2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊醯胺(129) (71.0 mg，0.15 mmol，2.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(7.2 mg，0.03 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化粗反應混合物，得到N-(2-(2-(2-(2-((((8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)胺基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-5-(2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊醯胺(21) (13.4 mg，22%產率)。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): 7.79 (t, J = 5.5, 5.5 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.39 (s, 1H), 6.33 (s, 1H), 5.78 (s, 1H), 5.42 (s, 1H), 4.29 (t, J = 6.3, 6.3 Hz, 2H), 4.24 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.11 (dd, J = 9.1, 3.2 Hz, 1H), 4.05 (t, J = 5.0, 5.0 Hz, 2H), 3.57 (t, J = 4.9, 4.9 Hz, 2H), 3.50 - 3.45 (m, 8H), 3.15 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 2.80 (dd, J = 12.4, 5.1 Hz, 1H), 2.67 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 2.57 (d, J = 12.2 Hz, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.19 - 2.07 (m, 3H), 2.04 (t, J = 7.5, 7.5 Hz, 2H), 1.97 - 1.90 (m, 1H), 1.83 (td, J = 8.4, 8.4, 4.3 Hz, 1H), 1.77 - 1.55 (m, 5H), 1.52 - 1.39 (m, 3H), 1.35 - 1.20 (m, 4H), 0.93 - 0.86 (m, 2H), 0.63 - 0.56 (m, 2H), 0.44 (s, 3H)。計算質量：878.4，觀測質量(ESI+)：879.7 [M+H]。
方案16說明製備中間物132。 製備中間物 132
在環境溫度下，向3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)丙酸(130) (500 mg，2.60 mmol，1.0當量)於二氯甲烷(20 mL)中之經攪拌溶液中添加肼甲酸三級丁酯(131) (380 mg，2.87 mmol，1.1當量) (131)，隨後添加N,N'-二環己基碳二亞胺(590 mg，2.87 mmol，1.1當量)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時，此時藉由LCMS分析反應完成。過濾白色沉澱物且藉由旋轉蒸發濃縮混合物。藉由Combi Flash層析純化殘餘物，得到4-側氧基-7,10,13-三氧雜-2,3-二氮雜十四烷-1-酸三級丁酯(690 mg，87%產率)。
在環境溫度下，向4-側氧基-7,10,13-三氧雜-2,3-二氮雜十四烷-1-酸三級丁酯(690 mg，2.8 mmol，1.0當量)於二氯甲烷(20 mL)中之經攪拌溶液中添加三氟乙酸(1.7 mL，11.27 mmol，5.0當量)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由旋轉蒸發濃縮反應混合物，得到3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)丙烷醯肼(132) (410 mg，88%產率)且不經進一步純化即用於下一步驟。
方案17說明製備化合物24及25。 實例 19 ： N'-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 )-3-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ) 丙烷醯肼 (24)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (0.615 g，1.32 mmol，1.0當量)於甲醇(49 mL，0.03M)中之經攪拌溶液中添加3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)丙烷醯肼(132) (0.410 g，2.0 mmol，1.5當量)，隨後添加D-(+)-樟腦-10-磺酸(124 mg，0.54 mmol，0.4當量)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，此時藉由LCMS分析反應完成。移除溶劑以提供N'-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)-3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)丙烷醯肼(24)。 實例 20 ： N'-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 )-3-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ) 丙烷醯肼 (24) 及 N'-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 )-3-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ) 丙烷醯肼 (25)
藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化化合物24，得到24 (235.1 mg，27%產率)及25 (130 mg，15%產率)。
化合物24： 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 7.03 (t, J = 6.5, 6.5 Hz, 2H), 6.95 (dd, J = 8.5, 3.3 Hz, 2H), 5.84 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 5.44 (s, 1H), 4.30 (dd, J = 32.6, 7.0 Hz, 2H), 3.61 (dt, J = 18.5, 6.5, 6.5 Hz, 2H), 3.49 - 3.43 (m, 6H), 3.41 - 3.34 (m, 3H), 3.19 (d, J = 16.0 Hz, 3H), 2.74 (t, J = 6.7, 6.7 Hz, 1H), 2.61 - 2.51 (m, 2H), 2.47 - 2.35 (m, 5H), 2.11 (ddd, J = 30.9, 13.1, 7.0 Hz, 3H), 1.93 (dd, J = 8.3, 4.1 Hz, 1H), 1.86 - 1.70 (m, 3H), 1.70 - 1.56 (m, 2H), 1.38 - 1.17 (m, 2H), 0.92 - 0.85 (m, 2H), 0.62 - 0.55 (m, 2H), 0.44 (s, 3H)。計算質量：650.3，觀測質量(ESI+)：651.4。
化合物25： 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 7.02 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 6.94 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 5.45 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 22.9, 5.7 Hz, 2H), 3.61 (td, J = 6.6, 6.3, 3.3 Hz, 2H), 3.50 - 3.42 (m, 7H), 3.41 - 3.35 (m, 3H), 3.20 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 2.75 - 2.69 (m, 1H), 2.56 (d, J = 14.8 Hz, 2H), 2.46 - 2.36 (m, 4H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 2.22 - 2.14 (m, 2H), 2.09 (dt, J = 15.7, 8.5, 8.5 Hz, 1H), 1.95 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 1.82 (tt, J = 8.7, 8.7, 4.9, 4.9 Hz, 2H), 1.77 - 1.58 (m, 3H), 1.33 (t, J = 9.8, 9.8 Hz, 1H), 1.28 - 1.19 (m, 1H), 0.92 - 0.85 (m, 2H), 0.59 (dt, J = 4.6, 2.3, 2.3 Hz, 2H), 0.45 (d, J = 3.5 Hz, 3H)。計算質量：650.3，觀測質量(ESI+)：651.4 [M+H]。
方案18說明製備關鍵中間物135。 製備 2-(( 三級丁基二甲基矽烷基 ) 氧基 ) 乙 -1- 胺 (134)
在0℃下，向2-胺基乙醇(133) (2.5 g，41 mmol，1.0當量)於二氯甲烷(50 mL)中之經攪拌溶液中添加咪唑(5.6 g，82 mmol，2.0當量)及三級丁基二甲基矽烷基氯(6.8 g，45 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時。反應完成後，將水(20 mL)添加至反應混合物中且用二氯甲烷(200 mL×3)萃取混合物。將經合併之有機萃取物經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮。對所得殘餘物進行矽膠急驟管柱層析(MeOH/DCM，1:9)，得到2-((三級丁基二甲基矽烷基)氧基)乙-1-胺(134) (5.26 g，73%，黃色油狀物)。計算質量：175.343，觀測質量(ESI+)：176.3 [M+H] 。 製備 N-(2-(( 三級丁基二甲基矽烷基 ) 氧基 ) 乙基 ) 肼甲醯胺 (135)
在0℃下，向2-((三級丁基二甲基矽烷基)氧基)乙胺(134) (5.26 g，30 mmol，1.0當量)於二氯甲烷(50 mL)中之經攪拌溶液中添加三乙胺(8.4 mL，60 mmol，2.0當量)及氯甲酸苯酯(4.9 mL，39 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時。反應完成後，將水(30 mL)添加至反應混合物中且用二氯甲烷(200 mL×3)萃取混合物。將經合併之有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到目標化合物N-(2-((三級丁基二甲基矽烷基)氧基)乙基)肼甲醯胺(135) (5.26 g，73%，黃色油狀物)。計算質量：295.16，觀測質量(ESI+)：296.4 [M+H]。
方案19說明製備化合物26。 實例 21 ： (E)-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 )-N-(2- 羥乙基 ) 肼 -1- 甲醯胺 (26)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (0.67 g，1.45 mmol，1.0當量)於甲醇(50 mL)中之經攪拌溶液中添加N-(2-((三級丁基二甲基矽烷基)氧基)乙基)肼甲醯胺(0.40 g，1.74 mmol，1.2當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(0.27 g，1.45 mmol，1當量)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到(E)-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)-N-(2-羥乙基)肼-1-甲醯胺(26) (0.42 g，51%產率)。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): d 9.47 (s, 1H), 7.03 (dd, J = 8.4, 2.3 Hz, 2H), 6.94 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.62 (dt, J = 27.7, 5.9, 5.9 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 5.41 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.67 (dt, J = 10.6, 5.2, 5.2 Hz, 1H), 4.29 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.23 (t, J = 5.5, 5.5 Hz, 1H), 3.39 (p, J = 5.9, 5.9, 5.7, 5.7 Hz, 2H), 3.15 (p, J = 6.1, 6.1, 6.0, 6.0 Hz, 2H), 2.59 - 2.50 (m, 2H), 2.45 - 2.36 (m, 3H), 2.27 (ddd, J = 14.5, 11.2, 5.2 Hz, 1H), 2.20 - 2.04 (m, 3H), 1.97 - 1.90 (m, 1H), 1.82 (tt, J = 8.4, 8.4, 5.1, 5.1 Hz, 2H), 1.77 - 1.56 (m, 3H), 1.36 - 1.20 (m, 2H), 0.92 - 0.83 (m, 2H), 0.62 - 0.55 (m, 2H), 0.45 (d, J = 2.2 Hz, 3H)。計算質量：563.296，觀測質量(ESI+)：564.7 [M+H]。
方案20說明製備化合物27、28及29。 實例 22 ： (8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-3- 亞肼基 -13- 甲基 -2,3,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -17- 醇 (27)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (76 mg，0.16 mmol，1.0當量)於甲醇(1.6 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加水合肼(50.0 mg，0.96 mmol，6.0當量)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，此時藉由LCMS分析反應完成。濃縮反應混合物且將殘餘物溶解於二氯甲烷(5 mL)中，濃縮且乾燥，得到(8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-3-亞肼基-13-甲基-2,3,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-1H-環戊[a]菲-17-醇(27) (78 mg，100%產率)。 實例 23 ： (2R,3S,4S,5R,6S)-2-( 乙醯氧基甲基 )-6-((2-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 肼 -1- 羰基 ) 氧基 ) 四氫 -2H- 哌喃 -3,4,5- 三乙酸三酯 (28)
在室溫下，向(8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-3-亞肼基-13-甲基-2,3,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-1H-環戊[a]菲-17-醇(27) (78 mg，1.0當量)於二氯甲烷(1.6 mL)中之經攪拌溶液中添加(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(乙醯氧基甲基)-6-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)四氫-2H-哌喃-3,4,5-三乙酸三酯(136) (27) (102.0 mg，0.198 mmol，1.2當量)。將混合物在室溫下攪拌1小時。隨後添加DMAP (24.2 mg，0.198 mmol，1.2當量)，並且將混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到(2R,3S,4S,5R,6S)-2-(乙醯氧基甲基)-6-((2-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)肼-1-羰基)氧基)四氫-2H-哌喃-3,4,5-三乙酸三酯(28) (72.6 mg，52%產率)。
1H NMR 500 MHz, DMSO- d6): 7.04 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.99 - 6.93 (m, 2H), 5.92 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.85 (s, 1H), 5.42 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 5.35 - 5.28 (m, 1H), 5.28 - 5.25 (m, 1H), 5.13 (dt, J = 10.4, 8.0, 8.0 Hz, 1H), 4.40 (t, J = 6.3, 6.3 Hz, 1H), 4.33 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.25 (t, J = 5.2, 5.2 Hz, 1H), 4.08 - 4.02 (m, 1H), 3.98 (dd, J = 11.4, 6.8 Hz, 1H), 2.41 (d, J = 13.1 Hz, 2H), 2.16 (d, J = 11.5 Hz, 2H), 2.14 - 2.05 (m, 4H), 1.91 (d, J = 4.6 Hz, 3H), 1.88 - 1.55 (m, 5H), 1.38 - 1.21 (m, 2H), 0.93 - 0.84 (m, 2H), 0.60 (dtd, J = 6.3, 4.3, 4.2, 1.7 Hz, 2H), 0.46 (d, J = 5.9 Hz, 3H)。計算質量：850.3，觀測質量(ESI+)：851.5 [M+H] 。 實例 24 ： (E)-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 肼 -1- 甲酸 (2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5- 三羥基 -6-( 羥甲基 ) 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基酯 (29)
在室溫下，向(2R,3S,4S,5R,6S)-2-(乙醯氧基甲基)-6-((2-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)肼-1-羰基)氧基)四氫-2H-哌喃-3,4,5-三乙酸三酯(28) (70 mg ,0.05 mmol，1.0當量)於甲醇(0.7 mL) H 2O (0.1 mL)中之經攪拌溶液中添加三甲胺(60 uL, 0.4 mmol，8.0當量)。將混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到(E)-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)肼-1-甲酸(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三羥基-6-(羥甲基)四氫-2H-哌喃-2-基酯(29) (3.9 mg，7%產率)。
1H NMR (500 MHz，氯仿- d3)：7.01 (s, 2H), 6.93 (s, 2H), 4.25 (s, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.11 (s, 1H), 2.37 (d, J = 61.6 Hz, 6H), 1.81 (s, 21H), 1.26 (s, 2H), 0.88 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 0.58 (d, J = 35.4 Hz, 5H)。計算質量：682.3，觀測質量(ESI+)：683.5 [M+H]。
方案21說明製備化合物30及31。 實例 25 ： (2S,3S,4R,5R,6S)-2-((2-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 肼 -1- 羰基 ) 氧基 )-6- 甲基四氫 -2H- 哌喃 -3,4,5- 三乙酸三酯 (30)
在室溫下，向(8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-3-亞肼基-13-甲基-2,3,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-1H-環戊[a]菲-17-醇(27) (47.6 mg，0.1 mmol，1.0當量)於二氯甲烷(1 mL)中之經攪拌溶液中添加化合物137 (55 mg，0.12 mmol，1.2當量)。將混合物在室溫下攪拌1小時。隨後添加DMAP (14.6 mg，0.12 mmol，1.2當量)，並且將混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到(2S,3S,4R,5R,6S)-2-((2-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)肼-1-羰基)氧基)-6-甲基四氫-2H-哌喃-3,4,5-三乙酸三酯(30) (45.3 mg，64%產率)。
1H NMR 500 MHz, DMSO- d6): δ 10.09 (s, 1H), 7.04 (t, J = 7.1, 7.1 Hz, 4H), 6.96 (dd, J = 8.5, 3.6 Hz, 4H), 6.09 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 5.32 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 5.25 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.08 (dt, J = 10.7, 4.0, 4.0 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 4.24 (s, 1H), 2.24 - 2.06 (m, 10H), 1.97 (dd, J = 17.4, 10.2 Hz, 9H), 1.83 (td, J = 8.4, 8.4, 4.1 Hz, 2H), 1.70 (dd, J = 30.6, 15.9 Hz, 2H), 1.63 (s, 1H), 1.37 - 1.29 (m, 1H), 1.24 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 1.05 (t, J = 6.7, 6.7 Hz, 4H), 0.92 - 0.88 (m, 3H), 0.62 - 0.58 (m, 3H), 0.46 (d, J = 8.2 Hz, 5H)。計算質量：792.3，觀測質量(ESI+)：793.6 [M+H]。 實例 26 ： (E)-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 肼 -1- 甲酸 (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5- 三羥基 -6- 甲基四氫 -2H- 哌喃 -2- 基酯 (31)
在室溫下，向(2S,3S,4R,5R,6S)-2-((2-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)肼-1-羰基)氧基)-6-甲基四氫-2H-哌喃-3,4,5-三乙酸三酯(30) (39.6 mg，0.05 mmol，1.0當量)於甲醇(0.7 mL) H 2O (0.1 mL)中之經攪拌溶液中添加三甲胺(60 uL, 0.4 mmol，8.0當量)。將混合物在室溫下攪拌8天，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到(E)-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)肼-1-甲酸(2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-三羥基-6-甲基四氫-2H-哌喃-2-基酯(31) (2.8 mg，8 %產率)。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 7.03 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.58 (dd, J = 30.9, 7.4 Hz, 1H), 5.95 (s, 1H), 5.43 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 5.31 - 5.21 (m, 1H), 5.16 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.59 (dd, J = 16.0, 11.7 Hz, 1H), 4.42 (dd, J = 15.9, 5.9 Hz, 1H), 4.34 (dd, J = 23.1, 6.8 Hz, 1H), 4.26 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.16 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 3.87 (t, J = 6.6, 6.6 Hz, 1H), 2.67 - 2.54 (m, 2H), 2.42 (d, J = 13.5 Hz, 3H), 2.32 - 2.04 (m, 3H), 1.97 (dd, J = 8.4, 4.3 Hz, 1H), 1.87 - 1.56 (m, 5H), 1.41 - 1.17 (m, 3H), 1.15 - 0.99 (m, 3H), 0.93 - 0.81 (m, 2H), 0.63 - 0.56 (m, 2H), 0.46 (d, J = 7.6 Hz, 3H)。計算質量：666.3，觀測質量(ESI+)：667.6 [M+H]。
方案22說明製備關鍵中間物141。 製備環丙基胺基甲酸苯酯 (140)
遵循Xi等人的國際公開案第WO 201744434號中之程序由138及139製備中間物140。 製備 N- 環丙基肼甲醯胺 (141)
向環丙基胺基甲酸苯酯(140) (3.7 g，21 mmol，1.0當量)於2-丙醇(20 mL)中之經攪拌溶液中添加單水合肼(8.2 mL，105 mmol，5.0當量)且在回流下攪拌混合物隔夜。反應完成後，將反應混合物冷卻至室溫，在真空下移除溶劑，將殘餘物再溶解於乙酸乙酯中，用0.1% NaOH洗滌兩次，將有機層經Na 2SO 4乾燥且濃縮，得到N-環丙基肼甲醯胺(141)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。計算質量：115.07，觀測質量(ESI+)：116.1 [M+H] +。
方案23說明製備化合物32。 實例 27 ： N- 環丙基 -2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 肼 -1- 甲醯胺 (32)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (0.7 g，1.51 mmol，1.0當量)於吡啶(14 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加N-環丙基肼甲醯胺(141) (32) (0.87 g，7.6 mmol，5.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(144 mg，0.76 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到N-環丙基-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)肼-1-甲醯胺(32) (350 mg，46%產率)。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 9.14 (s, 1H), 7.04 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.95 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.63 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 5.82 (s, 1H), 4.31 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 4.24 (t, J= 5.4, 5.4 Hz, 1H), 2.40 (d, J= 12.8Hz, 3H), 2.20 - 2.03 (m, 4H), 1.97 - 1.90 (m, 2H), 1.83 (m,  1H), 1.79 - 1.57 (m, 4H), 1.38 - 1.18 (m, 3H), 0.93 - 0.86 (m, 3H), 0.63 - 0.54 (m, 4H), 0.45 (d, J= 2.3 Hz, 5H)。計算質量：559.3，觀測質量(ESI+)：560.2 [M+H]。
方案24說明製備化合物33。 實例 28 ： N'-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 甲磺醯肼 (33)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (35 mg，0.08 mmol，1.0當量)於吡啶(0.7 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加N-甲基肼甲醯胺(142) (Helvetica Chimica Acta 1989, 72, 1383) (21 mg，0.23 mmol，3.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(7.3 mg，0.04 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到N'-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)甲磺醯肼(33) (15 mg，36%產率)。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 9.64 (s, 1H), 7.04 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 6.96 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.84 (s, 1H), 5.42 (s, 1H), 4.33 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 4.25 (t, J= 5.5, 5.5 Hz, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.57 (t, J= 5.1, 5.1 Hz, 1H), 2.42 (d, J= 13.4 Hz, 3H), 2.21 - 2.05 (m, 4H), 1.98 - 1.91 (m, 1H), 1.88 - 1.73 (m, 3H), 1.73 - 1.57 (m, 2H), 1.39 - 1.21 (m, 2H), 0.93 - 0.85 (m, 2H), 0.63 - 0.57 (m, 2H), 0.46 (s, 3H)。計算質量：554.2，觀測質量(ESI+)：555.1 [M+H]。
方案25說明製備化合物34及35。 實例 29 ： (2-(2-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 肼基 )-2- 側氧基乙基 ) 胺基甲酸三級丁酯 (34)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (55.5 mg，0.12 mmol，1.0當量)於吡啶(1.2 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加化合物143 (68.0 mg，0.36 mmol，3.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(11.4 mg，0.06 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。濃縮反應混合物，將殘餘物溶解於乙酸乙酯(30 mL)中，用飽和NaHCO 3(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌。將有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮，得到(2-(2-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)肼基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸三級丁酯(34) (76 mg，100%產率)。 實例 30 ： 2- 胺基 -N'-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 乙醯肼 (35)
在室溫下，向(2-(2-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)肼基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸三級丁酯(34) (76 mg，0.12 mmol)於二氯甲烷(0.9 mL)中之經攪拌溶液中添加三氟乙酸(0.3 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到2-胺基-N'-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)乙醯肼(35) (12.9 mg，20%產率)。
1H NMR (500 MHz，氯仿- d3)：7.06 (dt, J = 11.7, 5.9, 5.9 Hz, 2H), 6.96 (dt, J = 8.5, 2.3, 2.3 Hz, 2H), 4.32 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 3.81 - 3.73 (m, 1H), 3.54 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 2.90 (q, J = 5.2, 4.1, 4.1 Hz, 1H), 2.68 - 2.44 (m, 6H), 2.42 - 2.26 (m, 3H), 2.23 - 1.80 (m, 10H), 1.79 - 1.68 (m, 2H), 1.41 (qd, J = 17.2, 14.9, 14.9, 9.0 Hz, 2H), 1.00 - 0.86 (m, 2H), 0.65 (qd, J = 7.2, 7.2, 6.1, 3.5 Hz, 2H), 0.59 (d, J = 4.0 Hz, 3H)。計算質量：534.26，觀測質量(ESI+)：535.3 [M+H]。
方案26說明製備化合物36。 實例 31 ： N'-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 )-2- 甲氧基 乙醯肼 (36)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (35 mg，0.07 mmol，1.0當量)於吡啶(0.7 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加2-甲氧基乙醯肼(144) (24.0 mg，0.22 mmol，3.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(7.2 mg，0.03 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到N'-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)-2-甲氧基乙醯肼(36) (10.3 g，27%產率)。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): 9.76 (s, 1H), 7.03 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.82 (s, 1H), 5.41 (s, 1H), 4.32 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.24 (t, J = 5.5, 5.5 Hz, 1H), 2.64 - 2.51 (m, 2H), 2.46 (s, 2H), 2.41 (d, J = 13.7 Hz, 2H), 2.20 - 2.04 (m, 3H), 1.99 - 1.89 (m, 1H), 1.86 - 1.71 (m, 3H), 1.70 - 1.57 (m, 2H), 1.38 - 1.19 (m, 2H), 1.04 - 0.92 (m, 4H), 0.91 - 0.85 (m, 2H), 0.62 - 0.56 (m, 2H), 0.45 (s, 3H)。計算質量：548.2，觀測質量(ESI+)：549.4 [M+H]。
方案27說明製備化合物37。 實例 32 ： N'-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 )-2- 羥基乙醯肼 (37)   
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (37 mg，0.08 mmol，1.0當量)於吡啶(0.8 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加2-羥基乙醯肼(145) (22.0 mg，0.24 mmol，3.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(7.6 mg，0.04 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到N'-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)-2-羥基乙醯肼(37) (3.3 mg，8%產率)。
1H NMR (500 MHz，氯仿- d3)：7.03 (d, J = 4.5 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 5.43 (s, 1H), 4.32 (s, 1H), 4.23 (q, J = 10.0, 7.7, 7.7 Hz, 2H), 3.92 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 3.39 (s, 4H), 2.40 (d, J = 13.3 Hz, 2H), 2.26 - 2.03 (m, 2H), 1.94 (s, 1H), 1.88 - 1.56 (m, 4H), 1.29 (dd, J = 49.9, 11.8 Hz, 1H), 0.93 - 0.85 (m, 2H), 0.65 - 0.56 (m, 2H), 0.46 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。計算質量：534.26，觀測質量(ESI+)：535.3 [M+H]。
方案28說明製備化合物38。 實例 33 ： N'-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 環丙烷碳醯肼 (38)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (0.8 g，1.72 mmol，1.0當量)於甲醇(60 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加環丙烷碳醯肼(146) (0.52 g，5.2 mmol，3.0當量)，隨後添加D-(+)-樟腦-10-磺酸(160 mg，0.69 mmol，0.4當量)。將反應混合物在室溫下攪拌隔夜，此時藉由LCMS分析反應完成。將反應混合物濃縮，且藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化殘餘物，得到N'-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)環丙烷碳醯肼(38) (625 mg，66%產率)。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 7.03 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 6.98 - 6.92 (m, 2H), 5.85 (s, 1H), 5.45 (s, 1H), 4.33 (d, J= 17.3 Hz, 1H), 4.27 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 2.64 - 2.50 (m, 3H), 2.45 (s, 1H), 2.39 (d, J= 12.6 Hz, 2H), 2.35 - 2.23 (m, 1H), 2.16 (t, J= 9.4, 9.4 Hz, 2H), 2.09 (dt, J= 15.9, 8.6, 8.6 Hz, 1H), 2.00 - 1.90 (m, 1H), 1.90 - 1.56 (m, 6H), 1.33 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 1.25 (t, J= 13.4, 13.4 Hz, 1H), 0.92 - 0.85 (m, 2H), 0.76 (dd, J= 13.5, 7.7 Hz, 2H), 0.69 (d, J= 3.7 Hz, 2H), 0.59 (dt, J= 6.5, 3.2, 3.2 Hz, 2H), 0.45 (d, J= 7.3 Hz, 3H)。計算質量：544.2，觀測質量(ESI+)：545.5 [M+H]。
方案29說明製備化合物39。 實例 34 ： N'-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 乙醯肼 (39)   
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (35 mg，0.08 mmol，1.0當量)於吡啶(0.7 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加N-甲基肼甲醯胺(147) (21 mg，0.23 mmol，3.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(7.3 mg，0.04 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到N'-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)乙醯肼(39) (14 mg，35%產率)。
1H NMR (500 MHz，氯仿- d3)：δ 7.53 (s, 1H), 7.06 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 6.96 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.14 (q, J= 5.0, 4.9, 4.9 Hz, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.32 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 2.89 (d, J= 5.0 Hz, 4H), 2.62 (m, 1H), 2.53 - 2.45 (m, 4H), 2.42 - 2.30 (m, 3H), 2.26 - 2.13 (m, 2H), 2.03 (m, 2H), 1.93 - 1.80 (m, 2H), 1.79 - 1.70 (m, 2H), 1.48 - 1.32 (m, 2H), 0.98 -0.87 (m, 2H), 0.68 - 0.62 (m, 2H), 0.58 (s, 3H)。計算質量：533.2，觀測質量(ESI+)：534.2 [M+H]。
方案30說明製備化合物40。 實例 35 ： (E)-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 肼 -1- 甲酸 乙 酯 (40)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (20 mg，0.04 mmol，1.0當量)於吡啶(0.4 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加肼基甲酸乙酯(148) (13.5 mg，0.13 mmol，3.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(4.1 mg，0.02 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到(E)-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)肼-1-甲酸乙酯(40) (5.9 mg，27%產率)。
1H NMR (500 MHz，氯仿- d3)：7.05 (dd, J = 11.2, 8.2 Hz, 2H), 6.96 (dd, J = 8.4, 3.8 Hz, 2H), 4.34 - 4.21 (m, 3H), 3.49 (s, 1H), 2.89 (td, J = 5.3, 5.2, 1.4 Hz, 1H), 2.66 - 2.27 (m, 9H), 2.24 - 2.09 (m, 1H), 2.06 (s, 1H), 2.03 - 1.94 (m, 1H), 1.93 - 1.81 (m, 2H), 1.80 - 1.69 (m, 2H), 1.60 (s, 1H), 1.48 - 1.35 (m, 2H), 1.32 (s, 3H), 0.97 - 0.89 (m, 2H), 0.70 - 0.62 (m, 2H), 0.58 (d, J = 4.4 Hz, 3H)。計算質量：548.66，觀測質量(ESI+)：549.4 [M+H]。
方案31說明製備化合物41。 實例 36 ： (E)-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 肼 -1- 甲醯胺 (41)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (20 mg，0.04 mmol，1.0當量)於吡啶(0.4 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加半卡肼(149) (9.8 mg，0.13 mmol，3.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(4.1 mg，0.02 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。將反應混合物用0.2 mL甲醇稀釋，且藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化，得到(E)-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)肼-1-甲醯胺(41) (8.7 mg，42%產率)。
1H NMR (500 MHz，氯仿- d3)：7.57 (s, 1H), 7.06 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.88 (s, 1H), 4.32 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 2.89 (t, J = 5.3, 5.3 Hz, 1H), 2.63 (dt, J = 15.0, 5.1, 5.1 Hz, 1H), 2.53 - 2.47 (m, 3H), 2.46 (s, 1H), 2.43 - 2.29 (m, 3H), 2.24 - 2.14 (m, 1H), 2.09 (s, 1H), 2.07 - 1.97 (m, 2H), 1.90 - 1.80 (m, 2H), 1.78 - 1.68 (m, 2H), 1.48 - 1.35 (m, 2H), 0.93 (dt, J = 8.4, 1.7, 1.7 Hz, 2H), 0.70 - 0.60 (m, 2H), 0.58 (s, 3H)。計算質量：519.62，觀測質量(ESI+)：520.6 [M+H]。
方案32說明製備化合物42。
實例 37 ： (E)-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 )-N- 甲基肼 -1- 甲醯胺 (42)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (0.8 g，1.73 mmol，1.0當量)於甲醇(57 mL，0.03M)中之經攪拌溶液中添加醯肼(148) (4.86 mmol，3.0當量)，隨後添加D-(+)-樟腦-10-磺酸(0.16 g，6.92 mmol，0.4當量)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，此時藉由LCMS分析反應完成。將反應混合物濃縮，且藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化殘餘物，得到(E)-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)-N-甲基肼-1-甲醯胺(42) (633.6 mg，71%產率)。
1H NMR (500 MHz，氯仿- d3)：δ 7.08 - 7.02 (m, 2H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.94 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 4.32 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 2.89 (t, J = 5.4, 5.4 Hz, 1H), 2.68 - 2.55 (m, 1H), 2.55 - 2.43 (m, 4H), 2.43 - 2.30 (m, 3H), 2.26 (d, J = 13.2 Hz, 2H), 2.22 - 2.11 (m, 1H), 2.11 - 1.97 (m, 3H), 1.84 (ddd, J = 13.5, 8.5, 5.1 Hz, 2H), 1.80 - 1.68 (m, 2H), 1.47 - 1.33 (m, 2H), 0.97 - 0.88 (m, 2H), 0.65 (ddd, J = 7.0, 5.1, 1.6 Hz, 2H), 0.58 (d, J = 5.0 Hz, 3H)。計算質量：518.6。觀測質量(ESI+)：519.4 [M+H]。
方案33說明製備化合物43及44。 實例 38 ： (8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -7,8,9,11,12,13,14,15,16,17- 十氫 -6H- 環戊 [a] 菲 -3- 乙酸基酯 (43)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (400 mg，0.76 mmol，1.0當量)於DCM (40 mL)中之經攪拌溶液中添加乙酸酐(78 mg，0.76 mmol，1.0當量)及乙醯溴(233 mg，1.90 mmol，2.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。將反應混合物傾入碳酸氫鈉(661 mg，7.6 mmol，10當量)於水(300 mL)中之溶液中且用乙酸乙酯(80 mL×3)萃取。將經合併之有機層用水(2×150 mL)、鹽水(150 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且在真空下濃縮，得到呈淡黃色固體狀之產物(410 mg，95%產率)。將產物(60 mg)藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3)，移動相B：20 mm NaOH + 10% ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內自45% B至75% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：6.9，得到呈白色固體狀之(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-3-乙酸基酯(43) (13.5 mg，22%產率)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 7.60 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 7.31 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 6.97 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 6.67 (dd, J= 8.5, 2.6 Hz, 1H), 5.41 (s, 1H), 4.34-4.18 (m, 2H), 3.05 (t, J= 14.4 Hz, 1H), 2.96-2.70 (m, 3H), 2.48-2.37 (m, 2H), 2.30-2.07 (m, 5H), 2.06-1.84 (m, 2H), 1.78-1.62 (m, 2H), 1.45-1.29 (m, 2H), 1.12-0.91 (m, 4H), 0.35 (s, 3H)。計算質量：568.21，觀測質量(ESI-)：567.35 [M-H]。 實例 39 ： (8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-13- 甲基 -7,8,9,11,12,13,14,15,16,17- 十氫 -6H- 環戊 [a] 菲 -3,17- 二醇 (44)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-3-乙酸基酯(43) (350 mg，0.62 mmol，1.0當量) (43)於甲醇(10 mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸銫(604 mg，1.86 mmol，3.0當量)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，此時藉由LCMS分析反應完成。將反應混合物藉由Prep-TLC (乙酸乙酯/石油醚=2:1)純化，得到呈淡黃色固體狀之(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-3,17-二醇(44) (280 mg，86%產率)。計算質量：526.20，觀測質量(ESI-)：525.25 [M-H]。
方案34說明製備化合物45。 實例 40 ： (8S,11R,13S,14S,17S)-3- 丁氧基 -11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-13- 甲基 -7,8,9,11,12,13,14,15,16,17- 十氫 -6H- 環戊 [a] 菲 -17- 醇 (45)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-3,17-二醇(50 mg，0.095 mmol，1.0當量) (44)於DMF (2.5 mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸銫(93 mg，0.285 mmol，3.0當量)及1-碘丁烷(150) (26 mg，0.143 mmol，1.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。將反應混合物用水(15 mL)淬滅且用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取。將經合併之有機層用水(20 mL×2)及鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮。將殘餘物藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3)，移動相B：20 mm NaOH + 10% ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內自60% B至90% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：7.0，得到呈白色固體狀之(8S,11R,13S,14S,17S)-3-丁氧基-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-17-醇(45) (19.8 mg，35%產率)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 7.59 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.32 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 6.83 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 6.65 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 6.48 (dd, J= 8.6, 2.7 Hz, 1H), 5.41 (s, 1H), 4.29 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.19 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 3.85 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 3.08-2.94 (m, 1H), 2.89-2.71 (m, 3H), 2.48-2.34 (m, 2H), 2.23-2.05 (m, 2H), 2.04-1.84 (m, 2H), 1.75-1.56 (m, 4H), 1.45-1.26 (m, 4H), 1.09-0.94 (m, 4H), 0.90 (t, J= 7.4 Hz, 3H), 0.34 (s, 3H)。計算質量：582.26，觀測質量(ESI-)：581.45 [M-H]。
方案35說明製備化合物46。 實例41：(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-3-(2-(N-𠰌啉基)乙氧基)-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-17-醇(46)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-3,17-二醇(44) (50 mg，0.095 mmol，1.0當量)於DMF (2.5 mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸銫(93 mg，0.285 mmol，3.0當量)及4-(2-溴乙基)𠰌啉氫溴酸鹽(151) (39 mg，0.143 mmol，1.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。將反應混合物用水(15 mL)淬滅且用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取。將經合併之有機層用水(20 mL×2)、鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮。將殘餘物藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：XSelect CSH C18 Column管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(0.1% FA)，移動相B：20 mm NaOH + 10% ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內自42% B至72% B；波長：254 nm；RT(分鐘)：6.55，得到呈白色固體狀之(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-3-(2-(N-𠰌啉基)乙氧基)-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-17-醇(46) (25.1 mg，40%產率)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 7.60 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.32 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 6.84 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 6.69 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 6.50 (dd, J= 8.6, 2.7 Hz, 1H), 5.41 (s, 1H), 4.29 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 4.21 (t, J= 6.5 Hz, 1H), 3.98 (t, J= 5.8 Hz, 2H), 3.56 (t, J= 4.6 Hz, 4H), 3.02 (t, J= 14.4 Hz, 1H), 2.91-2.71 (m, 3H), 2.63 (t, J= 5.8 Hz, 2H), 2.49-2.35 (m, 6H), 2.24-2.07 (m, 2H), 2.05-1.86 (m, 2H), 1.77-1.62 (m, 2H), 1.44-1.27 (m, 2H), 1.10-0.94 (m, 4H), 0.35 (s, 3H)。計算質量：639.28，觀測質量(ESI+)：640.45 [M+H]。
方案36說明製備化合物47。 實例 42 ： 8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-3-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 )-13- 甲基 -7,8,9,11,12,13,14,15,16,17- 十氫 -6H- 環戊 [a] 菲 -17- 醇 (47)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-3,17-二醇(44) (50 mg，0.095 mmol，1.0當量)於DMF (2.5 mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸銫(93 mg，0.285 mmol，3.0當量)及1-碘-2-(2-甲氧基乙氧基)乙烷(152) (33 mg，0.143 mmol，1.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。將反應混合物用水(15 mL)淬滅且用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取。將經合併之有機層用水(20 mL×2)及鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮。將殘餘物藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3+ 0.05% NH 3H 2O)，移動相B：20 mm NaOH + 10% ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在8分鐘內自3% B至10% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：7.3，得到呈白色固體狀之8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-17-醇(47) (22.6 mg，37%產率)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 7.60 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 6.84 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 8.6, 2.7 Hz, 1H), 5.40 (s, 1H), 4.28 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.19 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 4.03-3.92 (m, 2H), 3.73-3.62 (m, 2H), 3.58-3.52 (m, 2H), 3.47-3.40 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 3.09-2.95 (m, 1H), 2.90-2.72 (m, 3H), 2.49-2.34 (m, 2H), 2.24-2.06 (m, 2H), 2.04-1.84 (m, 2H), 1.77-1.62 (m, 2H), 1.44-1.26 (m, 2H), 1.12-0.92 (m, 4H), 0.34 (s, 3H)。計算質量：628.27，觀測質量(ESI-)：627.40 [M-H]。
方案37說明製備化合物48及49。 實例 43 ： (8S,11R,13S,14S,17S)-3-(2-(( 三級丁基二甲基矽烷基 ) 氧基 ) 乙氧基 )-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-13- 甲基 -7,8,9,11,12,13,14,15,16,17- 十氫 -6H- 環戊 [a] 菲 -17- 醇 (48)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-3,17-二醇(44) (80 mg，0.152 mmol，1.0當量)於DMF (4 mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸銫(148 mg，0.456 mmol，3.0當量)及三級丁(2-碘代乙氧基)二甲基矽烷(153) (65 mg，0.228 mmol，1.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。將反應混合物用水(30 mL)淬滅且用乙酸乙酯(30 mL×3)萃取。將經合併之有機層用水(30 mL×2)及鹽水(30 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮。將殘餘物藉由Prep-TLC (乙酸乙酯/石油醚=- 1:1)純化，得到呈淡黃色固體狀之(8S,11R,13S,14S,17S)-3-(2-((三級丁基二甲基矽烷基)氧基)乙氧基)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-17-醇(48) (70 mg，67%產率)。計算質量：684.31，觀測質量(ESI-)：683.45 [M-H]。 實例 44 ： (8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-3-(2- 羥基乙氧基 )-13- 甲基 -7,8,9,11,12,13,14,15,16,17- 十氫 -6H- 環戊 [a] 菲 -17- 醇 (49)
向(8S,11R,13S,14S,17S)-3-(2-((三級丁基二甲基矽烷基)氧基)乙氧基)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-17-醇(48) (60 mg，0.088 mmol，1.0當量)於DCM (5 mL)之溶液中添加TFA (0.5 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時，此時藉由LCMS分析反應完成。將反應混合物濃縮且藉由Prep-HPLC在以下條件下純化殘餘物：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3)，移動相B：20 mm NaOH + 10% ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內自34% B至64% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：6.9，得到呈白色固體狀之(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-3-(2-羥基乙氧基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-17-醇(49) (24.7 mg，49%產率)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 7.60 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 7.32 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 6.84 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 6.67 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 6.49 (dd, J= 8.6, 2.7 Hz, 1H), 5.40 (s, 1H), 4.78 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 4.28 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.19 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 3.87 (t, J= 5.0 Hz, 2H), 3.65 (q, J= 5.2 Hz, 2H), 3.02 (t, J= 15.9 Hz, 1H), 2.90-2.72 (m, 3H), 2.48-2.34 (m, 2H), 2.24-2.06 (m, 2H), 2.05-1.84 (m, 2H), 1.76-1.62 (m, 2H), 1.44-1.26 (m, 2H), 1.11-0.91 (m, 4H), 0.34 (s, 3H)。計算質量：570.23，觀測質量(ESI-)：569.35 [M-H]。
方案38說明製備化合物50。 實例 45 ： (E)-N-( 環丙基甲基 )-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 肼 -1- 甲醯胺 (50)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (37 mg，0.08 mmol，1.0當量)於吡啶(0.8 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加N-(環丙基甲基)肼甲醯胺(154) (31.0 mg，0.24 mmol，3.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(7.6 mg，0.04 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到(E)-N-(環丙基甲基)-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)肼-1-甲醯胺(50) (18.5 mg，40%產率)。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 9.11 (s, 1H), 7.04 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.69 (t, J = 6.1, 6.1 Hz, 1H), 5.85 (s, 1H), 5.41 (s, 1H), 4.31 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.24 (t, J = 5.2, 5.2 Hz, 1H), 2.97 (t, J = 6.5, 6.5 Hz, 2H), 2.41 (d, J = 13.4 Hz, 2H), 2.13 (ddt, J = 27.1, 15.5, 8.2, 8.2 Hz, 3H), 1.98 - 1.91 (m, 1H), 1.83 (ddd, J = 13.4, 8.4, 5.0 Hz, 1H), 1.80 - 1.57 (m, 4H), 1.39 - 1.20 (m, 2H), 0.97 - 0.86 (m, 3H), 0.63 - 0.57 (m, 2H), 0.45 (s, 3H), 0.39 - 0.34 (m, 2H), 0.19 - 0.13 (m, 2H)。計算質量：573.3，觀測質量(ESI+)：574.6 [M+H]。
方案39說明製備化合物51。 實例 46 ： N'-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 環丙磺醯肼 (51)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (0.6 g，1.29 mmol，1.0當量)於吡啶(0.7 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加環丙磺醯肼(155) (0.53 g，3.89 mmol，3.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(0.111 g，0.65 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到N'-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)環丙磺醯肼(51) (0.202 g，27%產率)。
1H NMR (500 MHz，氯仿- d3)：9.91 (s, 1H), 7.03 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.23 (s, 1H), 5.42 (s, 1H), 4.31 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 4.24 (t, J = 5.4, 5.4 Hz, 1H), 2.64 - 2.54 (m, 3H), 2.42 (dd, J = 20.2, 12.8 Hz, 3H), 2.30 (ddd, J = 14.6, 11.2, 5.2 Hz, 1H), 2.23 - 2.14 (m, 2H), 2.14 - 2.05 (m, 1H), 1.95 (dq, J = 12.9, 4.5, 4.3, 4.3 Hz, 1H), 1.90 - 1.79 (m, 2H), 1.79 - 1.56 (m, 3H), 1.40 - 1.27 (m, 1H), 1.27 - 1.20 (m, 1H), 0.97 (dt, J = 5.2, 3.0, 3.0 Hz, 2H), 0.95 - 0.86 (m, 4H), 0.63 - 0.56 (m, 2H), 0.46 (s, 3H)。計算質量：580.2，觀測質量(ESI+)：581.5 [M+H]。
方案40說明製備化合物52。 實例 47 ： (8S,11S,13S,14S,17S)-4- 氯 -11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 (52)
向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (50 mg，0.10 mmol)於DMF (2 mL)中之經攪拌溶液中添加NCS (17 mg，0.13 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌18小時，用水(20 mL)淬滅且用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取。將經合併之有機萃取物用水(20 mL)、鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且在真空下濃縮。將殘餘物藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：XBridge Prep苯基管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3+ 0.05 % NH 3H 2O)，移動相B：ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在8分鐘內自50% B至80% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：7.96，得到呈白色固體狀之(8S,11S,13S,14S,17S)-4-氯-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(52) (13.4 mg，25%)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 7.06-6.96 (m, 4H), 5.48 (s, 1H), 4.45 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 4.27 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 3.06-3.00 (m, 1H), 2.77-2.71 (m, 1H), 2.63-2.54 (m, 2H), 2.47-2.40 (m, 2H), 2.34-2.23 (m, 2H), 2.17-1.99 (m, 3H), 1.88-1.63 (m, 4H), 1.43-1.24 (m, 2H), 0.95-0.84 (m, 2H), 0.63-0.59 (m, 2H), 0.50 (s, 3H)。(C30H31ClF2O2)之ESI-MS [M+H] +計算值：497.20、499.20，實驗值：497.30、499.30。
方案41說明製備化合物54及55。 實例 48 ： (8S,11S,13S,14S,17S,E)-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-3- 亞肼基 -13- 甲基 -11-(4-(2,2,2- 三氟乙氧基 ) 苯基 )-2,3,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -17- 醇 (54)
向(8S,11R,13S,14S,17S)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-11-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(53) (180 mg，0.35 mmol)於乙醇(5 mL)中之經攪拌溶液中添加水合肼(51 mg，1.04 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1天，在真空下濃縮，用石油醚(30 mL×5)洗滌且在減壓下乾燥，得到呈白色固體狀之(8S,11S,13S,14S,17S,E)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-3-亞肼基-13-甲基-11-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)-2,3,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-1H-環戊[a]菲-17-醇(200 mg，粗物質) (54)。(C 29H 31F 5N 2O 2)之ESI-MS [M+H] +計算值：535.23，實驗值：535.30。 實例 49 ： (E)-N- 環丙基 -2-((8S,11S,13S,14S,17S)-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -11-(4-(2,2,2- 三氟乙氧基 ) 苯基 )-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 肼 -1- 甲醯胺 (55)
在0℃下在氮氣下，向(8S,11S,13S,14S,17S,E)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-3-亞肼基-13-甲基-11-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)-2,3,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-1H-環戊[a]菲-17-醇(54) (55 mg，0.10 mmol)及三乙胺(31 mg，0.30 mmol)於DCM (3 mL)中之經攪拌溶液中添加異氰酸基環丙烷(155) (15 mg，0.18 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌4小時，用水(20 mL)淬滅且用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取。將經合併之有機層用水(30 mL)、鹽水(30 mL×2)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且在真空下濃縮。將殘餘物藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3)，移動相B：ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內自50% B至80% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：5.7、6.2，得到呈白色固體狀之(E)-N-環丙基-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-11-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)肼-1-甲醯胺(14.8 mg，23%)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 9.48-9.17 (m, 1H), 7.13 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 6.95 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 6.65-6.47 (m, 1H), 5.84 (s, 1H), 5.44 (s, 1H), 4.70 (q, J= 8.8 Hz, 2H), 4.35-4.25 (m, 2H), 2.59-2.53 (m, 3H), 2.43-2.39 (m, 4H), 2.27-2.06 (m, 3H), 2.01-1.93 (m, 1H), 1.85-1.62 (m, 4H), 1.46-1.26 (m, 2H), 0.60-0.44 (m, 7H)。(C 33H 36F 5N 3O 3)之ESI-MS [M+H] +計算值：618.27，實驗值：618.50。
方案42說明製備化合物57。 實例 50 ： (8S,11S,13S,14S,17S)-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -11-(4-((4-(( 三氟甲基 ) 磺醯基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 苯基 )-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 (57)
向(8S,11S,13S,14S,17S)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-11-(4-羥苯基)-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(50 mg，0.114 mmol) (56)於DMF (4 mL)之溶液中添加1-(溴甲基)-4-((三氟甲基)磺醯基)苯(157) (69 mg，0.228 mmol)及Cs 2CO 3(148 mg，0.456 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時，用水(30 mL)淬滅且用乙酸乙酯(3×30 mL)萃取。將經合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，且在真空下濃縮。將殘餘物藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3)，移動相B：ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內自31% B至61% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：6.2，得到呈白色固體狀之(8S,11S,13S,14S,17S)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-11-(4-((4-((三氟甲基)磺醯基)苯甲基)氧基)苯基)-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(57) (37.5 mg，50%)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 8.15 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.87 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.11 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.94 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.64 (s, 1H), 5.45 (s, 1H), 5.28 (s, 2H), 4.40 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 4.25 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 2.80-2.67 (m, 1H), 2.67-2.55 (m, 1H), 2.54-2.50 (m, 1H), 2.47-2.45 (m, 1H), 2.44-2.37 (m, 1H), 2.36-2.25 (m, 1H), 2.25-2.00 (m, 4H), 2.00-1.90 (m, 1H), 1.85-1.56 (m, 3H), 1.41-1.18 (m, 2H), 0.50 (s, 3H)。(C 35H 33F 5O 5S)之ESI-MS [M+H] +計算值：661.20，實驗值：661.45。
方案43說明製備化合物58及59。 實例 51 ： (8S,11S,13S,14S,17S)-4- 氯 -17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -11-(4- 羥苯基 )-13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 (58)
向(8S,11S,13S,14S,17S)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-11-(4-羥苯基)-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(56) (50 mg，0.11 mmol)於DMF (2 mL)中之經攪拌溶液中添加NCS (17 mg，0.13 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌18小時，用水(10 mL)淬滅且用乙酸乙酯(10 mL×3)萃取。將經合併之有機層用水(30 mL)及鹽水(20 mL×2)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且在真空下濃縮。將殘餘物藉由Prep-TLC (乙酸乙酯/石油醚=1:2)純化，得到呈白色固體狀之(8S,11S,13S,14S,17S)-4-氯-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-11-(4-羥苯基)-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(58) (50 mg，92%)。(C 27H 27ClF 2O 3)之ESI-MS [M+H] +計算值：473.16、475.16，實驗值473.20、475.20。 實例 52 ： (8S,11S,13S,14S,17S)-4- 氯 -17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -11-(4-(2,2,2- 三氟乙氧基 ) 苯基 )-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 (59)
向(8S,11S,13S,14S,17S)-4-氯-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-11-(4-羥苯基)-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(58) (50 mg，0.10 mmol)於DMF (2 mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸銫(69 mg，0.21 mmol)及2,2,2-三氟甲烷磺酸三氟乙酯(158) (37 mg，0.16 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌4小時，用水(10 mL)淬滅且用乙酸乙酯(10 mL×3)萃取。將經合併之有機層用水(20 mL)、鹽水(20 mL×2)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且在真空下濃縮。將殘餘物藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3+ 0.05% NH 3H 2O)，移動相B：ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在8分鐘內自35% B至65% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：6.98，得到呈白色固體狀之(8S,11S,13S,14S,17S)-4-氯-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-11-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(59) (1.7 mg，2.8%)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.14 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.96 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.50 (s, 1H), 4.71 (q, J= 8.8 Hz, 2H), 4.47 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 4.28 (t, J= 5.4 Hz, 1H) 3.05-3.00 (m, 1H), 2.78-2.72 (m, 1H), 2.65-2.54 (m, 2H), 2.47-2.38 (m, 2H), 2.33-2.24 (m, 2H), 2.18-2.09 (m, 2H), 2.04-2.00 (m, 1H), 1.81-1.64 (m, 3H), 1.44-1.24 (m, 2H), 0.51 (s, 3H)。(C 29H 28ClF 5O 3)之ESI-MS [M+H] +計算值：555.16、557.16，實驗值：555.40、557.40。
方案44說明製備化合物60。 實例 53 ： (8S,11S,13S,14S,17S)-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -11-(4-((1- 甲基環丁基 ) 甲氧基 ) 苯基 )-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 (60)
向(8S,11S,13S,14S,17S)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-11-(4-羥苯基)-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(56) (50 mg，0.12 mmol)於DMF (4 mL)中之經攪拌溶液中添加Cs 2CO 3(112 mg，0.34 mmol)及1-(溴甲基)-1-甲基環丁烷(159) (37 mg，0.23 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌一天，用水(20 mL)淬滅且用乙酸乙酯(3×30 mL)萃取。將經合併之有機層用水(50 mL)及鹽水(2×50 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥且在真空下濃縮，得到粗殘餘物，將該粗殘餘物藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3)，移動相B：ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內自31% B至61% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：6.9，得到呈白色固體狀之(8S,11S,13S,14S,17S)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-11-(4-((1-甲基環丁基)甲氧基)苯基)-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(60) (15.3 mg，25%)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 7.07 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.86 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 5.66 (s, 1H), 5.47 (s, 1H), 4.40 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 4.27 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 3.76 (s, 2H), 2.78-2.52 (m, 3H), 2.48-2.02 (m, 7H), 2.02-1.58 (m, 10H), 1.45-1.23 (m, 2H), 1.19 (s, 3H), 0.51 (s, 3H)。(C 33H 38F 2O 3)之ESI-MS [M+H]計算值：521.28，實驗值：521.20。
方案45說明製備化合物61及62。 實例 54 ： (8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-( 環丙基磺醯基 ) 苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-3- 亞肼基 -13- 甲基 -2,3,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -17- 醇 (61)
向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(158) (300 mg，0.57 mmol)於乙醇(8 mL)中之經攪拌溶液中添加水合肼(0.06 mL，1.14 mmol)及乙酸(6.53 uL，0.11 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時且在真空下濃縮，得到呈淡黃色固體狀之(8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-3-亞肼基-13-甲基-2,3,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-1H-環戊[a]菲-17-醇(61) (350 mg，粗物質)。(C 30H 34F 2N 2O 3S)之ESI-MS [M+H] +計算值：541.23，實驗值：541.30。 製備化合物 160
向1-環丙基甲胺(50 mg，0.70 mmol)於二氯甲烷(4 mL)中之經攪拌溶液中添加三光氣(104 mg，0.35 mmol)及碳酸氫鈉(177 mg，2.11 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，過濾且在真空下濃縮，得到粗物質160。 實例 55 ： (E)-N-( 環丙基甲基 )-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-( 環丙基磺醯基 ) 苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 肼 -1- 甲醯胺 (62)
將粗化合物160溶解於二氯甲烷(3 mL)中，且逐滴添加至(8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-3-亞肼基-13-甲基-2,3,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-1H-環戊[a]菲-17-醇(61) (50 mg，0.09 mmol)及三乙胺(15 mg，0.15 mmol)於二氯甲烷(4 mL)之溶液中。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，且在真空下濃縮，得到粗殘餘物，將該粗殘餘物藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3)，移動相B：ACN；流動速率：45毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內自34% B至66% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：6.4，得到呈白色固體狀之(E)-N-(環丙基甲基)-2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫3H-環戊[a]菲-3-亞基)肼-1-甲醯胺(62) (7.4 mg，12%)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 9.16 (s, 1H), 7.79 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.47 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.72 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 5.89 (s, 1H), 5.48 (s, 1H), 4.54 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 4.29 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 2.97 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 2.87-2.76 (m, 1H), 2.69-2.54 (m, 3H), 2.49-2.41 (m, 3H), 2.35-2.21 (m, 1H), 2.19-2.04 (m, 2H), 2.03-1.93 (m, 1H), 1.84-1.59 (m, 4H), 1.45-1.21 (m, 2H), 1.14-1.06 (m, 2H), 1.05-0.99 (m, 2H), 0.99-0.91 (m, 1H), 0.43 (s, 3H), 0.41-0.34 (m, 2H), 0.21-0.14 (m, 2H)。(C 35H 41F2N 3O 4S)之ESI-MS [M+H] +計算值：638.28，實驗值：638.50。
方案46說明製備化合物63。 實例 56 ： 4-((8S,11S,13S,14S,17S)-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -3- 側氧基 -2,3,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -11- 基 ) 三氟甲烷磺酸苯酯 (63)
向(8S,11S,13S,14S,17S)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-11-(4-羥苯基)-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(56) (50 mg，0.114 mmol)及1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺醯基)甲磺醯胺(161) (49 mg，0.137 mmol)於二氯甲烷(4 mL)中之混合物中添加三乙胺(23 mg，0.228 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1天，在真空下濃縮且藉由Prep-HPLC在以下條件下純化殘餘物：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3)，移動相B：ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內自50% B至80% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：6.1，得到呈白色固體狀之4-((8S,11S,13S,14S,17S)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-3-側氧基-2,3,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-1H-環戊[a]菲-11-基)三氟甲烷磺酸苯酯(63) (11.3 mg，17%)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.46-7.30 (m, 4H), 5.68 (s, 1H), 5.51 (s, 1H), 4.57 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 4.28 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 2.84-2.61 (m, 2H), 2.59-2.53 (m, 1H), 2.49-2.23 (m, 4H), 2.23-1.93 (m, 4H), 1.88-1.58 (m, 3H), 1.46-1.18 (m, 2H), 0.45 (s, 3H)。(C 28H 27F 5O 5S)之ESI-MS [M+H] +計算值：571.15，實驗值：571.35。
方案47說明製備化合物64。 實例 57 ： (8S,11S,13S,14S,17S)-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -11-(4-(2,2,2- 三氟乙氧基 ) 苯基 )-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 (64)
向(8S,11S,13S,14S,17S)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-11-(4-羥苯基)-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(56) (40 mg，0.09 mmol)於DMF (4 mL)中之經攪拌溶液中添加Cs 2CO 3(60 mg，0.18 mmol)及2,2,2-三氟甲烷磺酸三氟乙酯(155) (32 mg，0.14 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌4小時，用水(20 mL)淬滅且用乙酸乙酯(3×30 mL)萃取。將經合併之有機層用水(50 mL)、鹽水(2×50 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥且在真空下濃縮，得到殘餘物，將該殘餘物藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：YMC-Actus Triart C 18ExRS，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3)，移動相B：ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在8分鐘內自41% B至71% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：7.0，得到呈白色固體狀之(8S,11S,13S,14S,17S)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-11-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(64) (40.5 mg，85%)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 7.14 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 6.96 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.66 (s, 1H), 5.49 (s, 1H), 4.70 (q, J= 8.8 Hz, 2H), 4.43 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 4.27 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 2.79-2.69 (m, 1H), 2.68-2.57 (m, 1H), 2.56-2.52 (m, 1H), 2.50-2.46 (m, 1 H), 2.45-2.39 (m, 1H), 2.38-2.29 (m, 1H), 2.28-1.94 (m, 5H), 1.87-1.60 (m, 3H), 1.43-1.21 (m, 2H), 0.50 (s, 3H)。(C 29H 29F 5O 3)之ESI-MS [M+H] +計算值：521.20，實驗值：521.35。
方案48說明製備化合物65及66。 實例 58 ： (8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-3-(2,2- 二甲基亞肼基 )-13- 甲基 -2,3,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -17- 醇 (65)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (150 mg，0.32 mmol，1.0當量)於吡啶(3.2 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加1,1-二甲基肼：HCl (162) (94.0 mg，0.97 mmol，3.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(31.0 mg，0.16 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌18小時，直至藉由LCMS分析測定反應完成為止。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到(8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-3-(2,2-二甲基亞肼基)-13-甲基-2,3,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-1H-環戊[a]菲-17-醇(65) (125 mg，76%產率)。 實例 59 ： 2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 )-1,1,1- 三甲基肼 -1- 鎓 (66)
在室溫下，向二氯甲烷(0.2 mL)中之(8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-3-(2,2-二甲基亞肼基)-13-甲基-2,3,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-1H-環戊[a]菲-17-醇(65) (10 mg，0.02 mmol)添加碘化甲烷(0.2 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌18小時，直至藉由LCMS分析測定反應完成為止。將反應混合物濃縮，得到(2-((8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)-1,1,1-三甲基肼-1-鎓(66) (8.4 mg，82%)。
1H NMR (500 MHz，氯仿-d) δ 7.03 - 6.91 (m, 4H), 4.33 (dd, J = 23.4, 6.5 Hz, 1H), 3.75 (s, 2H), 3.72 - 3.66 (m, 1H), 3.64 (s, 1H), 3.19 (q, J = 7.6, 7.5, 7.5 Hz, 1H), 3.15 - 2.84 (m, 2H), 2.84 - 2.65 (m, 3H), 2.64 - 2.50 (m, 2H), 2.49 - 2.27 (m, 4H), 2.26 - 1.87 (m, 3H), 1.84 (t, J = 7.4, 7.4 Hz, 2H), 1.77 (h, J = 5.4, 5.4, 5.0, 5.0, 5.0 Hz, 2H), 1.54 - 1.36 (m, 2H), 0.98 - 0.89 (m, 2H), 0.70 - 0.56 (m, 5H)。計算質量：519.6，觀測質量(ESI+)：519.4 [M+H]。
方案49說明製備化合物67及68。 實例 60 ： (2-((((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 胺基 ) 氧基 ) 乙基 ) 胺基甲酸三級丁酯 (67)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(100) (150 mg，0.32 mmol，1.0當量)於吡啶(3.2 mL，0.1M)中之經攪拌溶液中添加(2-(胺氧基)乙基)胺基甲酸三級丁酯(163) (114.0 mg，0.65 mmol，2.0當量)，隨後添加對甲苯磺酸單水合物(31.0 mg，0.16 mmol，0.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時，此時藉由LCMS分析測定反應完成。藉由逆相HPLC (CLIPEUS C-18 10 um (Higgins Analytical Inc) 20×250 mm；ELSD及254 UV偵測；移動相A：10 mmol碳酸氫銨水溶液；移動相B：5%乙腈水溶液至90%乙腈水溶液，歷時40分鐘)純化反應混合物，得到(67) (156 mg，77%產率)。 實例 61 ： 2-((((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 胺基 ) 氧基 ) 乙 -1- 氯化銨 (68)
在室溫下，向(2-((((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)胺基)氧基)乙基)胺基甲酸三級丁酯(67) (25 mg，0.04 mmol)中添加4M HCl (於二㗁烷中) (0.4 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，此時藉由LCMS分析測定反應完成。將反應混合物濃縮，得到(2-((((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)胺基)氧基)乙-1-氯化銨(68) (19.1 mg，74%)。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.86 (d, J = 16.8 Hz, 3H), 7.02 (dd, J = 8.4, 4.6 Hz, 2H), 6.97 - 6.92 (m, 2H), 6.41 (s, 1H), 5.42 (s, 1H), 4.31 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.24 (t, J = 5.3, 5.3 Hz, 1H), 4.10 (dt, J = 12.6, 5.2, 5.2 Hz, 2H), 3.72 - 3.62 (m, 1H), 3.55 (s, 2H), 3.46 (dd, J = 15.0, 4.8 Hz, 1H), 3.03 (dq, J = 10.0, 5.5, 5.5, 5.5 Hz, 2H), 2.62 - 2.50 (m, 2H), 2.40 (dd, J = 12.9, 7.1 Hz, 2H), 2.29 - 2.03 (m, 4H), 1.97 - 1.90 (m, 1H), 1.83 (ddd, J = 13.5, 8.4, 5.1 Hz, 2H), 1.76 - 1.57 (m, 3H), 1.28 (dt, J = 44.9, 7.9, 7.9 Hz, 2H), 0.94 - 0.81 (m, 2H), 0.59 (qd, J = 5.1, 4.3, 4.3, 2.9 Hz, 2H), 0.45 (d, J = 3.8 Hz, 3H)。計算質量：520.2，觀測質量(ESI+)：521.5 [M+H]。
方案50說明製備化合物69及70。 實例 62 ： (E)-N- 環丙基 -2-((8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 肼 -1- 甲醯胺 (69) 及 (Z)-N- 環丙基 -2-((8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4- 環丙基苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 ) 肼 -1- 甲醯胺 (70)
藉由Prep-HPLC在以下條件下分離N'-((8S,11S,13S,14S,17S,E)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)甲磺醯肼(33) (75 mg)：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3)，移動相B：乙腈；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在8.0分鐘內自26% B至56% B；波長：254 nm/220 nm；RT1(分鐘)：7.15，得到呈白色固體狀之(Z)-N-環丙基-2-((8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)肼-1-甲醯胺(70) (20.6 mg，27%)；及RT2(分鐘)：7.3，得到呈白色固體狀之(E)-N-環丙基-2-((8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-環丙基苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)肼-1-甲醯胺(69) (26.4 mg，35%)。
化合物69： 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 9.17 (s, 1H), 7.04 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 6.96 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 6.64 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 5.83 (s, 1H), 5.42 (s, 1H), 4.31 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 4.25 (t, J= 5.2 Hz, 1H), 2.69-2.52 (m, 3H), 2.49-2.35 (m, 4H), 2.24-2.02 (m, 3H), 2.00-1.89 (m, 1H), 1.88-1.55 (m, 5H), 1.42-1.18 (m, 2H), 0.96-0.84 (m, 2H), 0.68-0.54 (m, 4H), 0.46 (s, 5H)。(C 34H 39F 2N 3O 2)之ESI-MS [M+H] +計算值：560.30，實驗值：560.45。
化合物70： 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 9.48 (s, 1H), 7.04 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 6.96 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 6.57 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 6.46 (s, 1H), 5.43 (s, 1H), 4.30 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 4.26 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 2.61-2.51 (m, 3H), 2.47-2.35 (m, 3H), 2.34-2.04 (m, 4H), 2.00-1.91 (m, 1H), 1.90-1.79 (m, 2H), 1.78-1.57 (m, 3H), 1.41-1.18 (m, 2H), 0.97-0.82 (m, 2H), 0.67-0.52 (m, 4H), 0.46(s, 5H)。(C 34H 39F 2N 3O 2)之ESI-MS [M+H] +計算值：560.30，實驗值：560.45。
方案51說明製備化合物71。 實例 63 ： 反式 -N'-((8S,11R,13S,14S,17S)-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -11-(4-(2,2,2- 三氟乙氧基 ) 苯基 )-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 亞基 )-3- 羥基環丁烷 -1- 碳醯肼 (71)
向(8S,11R,13S,14S,17S)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-3-亞肼基-13-甲基-11-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)-2,3,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-1H-環戊[a]菲-17-醇(54) (60 mg，0.11 mmol，1當量)及反式-3-羥基環丁烷甲酸(16 mg，0.13 mmol，1.2當量)於DMF (2.5 mL)中之混合物中HATU (64 mg，0.17 mmol，1.5當量)及DIEA (44 mg，0.34 mmol，3當量)。將反應物在室溫下攪拌2小時。用水(20 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取。將經合併之有機層用水(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且在真空下濃縮。將殘餘物藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3)，移動相B：ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內自32% B至62% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：6.9，得到呈白色固體狀之反式-N'-((8S,11R,13S,14S,17S)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-11-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-亞基)-3-羥基環丁烷-1-碳醯肼(71) (16.7 mg，23%)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.40-9.83 (m, 1H), 7.16-7.09 (m, 2H), 6.99-6.91 (m, 2H), 6.55-5.78 (m, 1H), 5.55-5.37 (m, 1H), 5.09-4.97 (m, 1H), 4.70 (q, J= 8.9 Hz, 2H), 4.43-4.10 (m, 3H), 3.61-3.49 (m, 0.5H), 3.11-2.95 (m, 0.5H), 2.69-2.53 (m, 3H), 2.44-2.36 (m, 2H), 2.36-2.23 (m, 3H), 2.21-2.06 (m, 3H), 2.05-1.89 (m, 3H), 1.86-1.55 (m, 4H), 1.42-1.20 (m, 2H), 0.47 (d, J= 5.4 Hz, 3H)。計算質量：632.27，觀測質量(ESI+)：633.55 [M+H]。
方案52說明製備化合物72。 實例 64 ： (8S,11R,13S,14S,17S)-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -11-(4-((3- 甲基氧雜環丁 -3- 基 ) 甲氧基 ) 苯基 )-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 (72)
向8S,11R,13S,14S,17S)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-11-(4-羥苯基)-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(54) (50 mg，0.12 mmol，1當量)於DMF (2 mL)之溶液中添加3-(溴甲基)-3-甲基氧雜環丁烷(57 mg，0.34 mmol，3當量)及K 2CO 3(95 mg，0.68 mmol，6當量)。將反應混合物在室溫下攪拌18小時。用水(15 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取。將經合併之有機層用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，且在真空下濃縮。將殘餘物藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3+ 0.05% NH 3H 2O)，移動相B：ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在8分鐘內自39% B至69% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：7.5，得到呈白色固體狀之(8S,11R,13S,14S,17S)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-11-(4-((3-甲基氧雜環丁-3-基)甲氧基)苯基)-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(72) (33.3 mg，55%)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.10 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.89 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.66 (s, 1H), 5.48 (s, 1H), 4.47 (d, J= 5.7 Hz, 2H), 4.41 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 4.34-4.23 (m, 3H), 4.00 (s, 2H), 2.80-2.69 (m, 1H), 2.68-2.57 (m, 1H), 2.57-2.51 (m, 1H), 2.45-2.39 (m, 1H), 2.38-2.05 (m, 6H), 2.04-1.93 (m, 1H), 1.86-1.58 (m, 3H), 1.45-1.22 (m, 5H), 0.51 (s, 3H)。計算質量：522.26，觀測質量(ESI+)：523.40 [M+H]。
方案53說明製備化合物73、74、75及76。 實例 65 ： (8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-( 環丙基磺醯基 ) 苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -7,8,9,11,12,13,14,15,16,17- 十氫 -6H- 環戊 [a] 菲 -3- 乙酸基酯 (73)
在環境溫度下，向(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(63) (400 mg，0.76 mmol，1.0當量)於DCM (40 mL)中之經攪拌溶液中添加乙酸酐(78 mg，0.76 mmol，1.0當量)及乙醯溴(233 mg，1.90 mmol，2.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析測定反應完成。將反應混合物傾入碳酸氫鈉(661 mg，7.6 mmol，10當量)於水(300 mL)中之溶液中且用乙酸乙酯(80 mL×3)萃取。將經合併之有機層用水(2×150 mL)及鹽水(150 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且在真空下濃縮，得到呈淡黃色固體狀之產物(410 mg，95%產率)。將產物(60 mg)藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3)，移動相B：20 mm NaOH + 10% ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內自45% B至75% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：6.9，得到呈白色固體狀之(8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-3-乙酸基酯(73) (13.5 mg，22%產率)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.60 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 7.31 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 6.97 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 6.67 (dd, J= 8.5, 2.6 Hz, 1H), 5.41 (s, 1H), 4.34-4.18 (m, 2H), 3.05 (t, J= 14.4 Hz, 1H), 2.96-2.70 (m, 3H), 2.48-2.37 (m, 2H), 2.30-2.07 (m, 5H), 2.06-1.84 (m, 2H), 1.78-1.62 (m, 2H), 1.45-1.29 (m, 2H), 1.12-0.91 (m, 4H), 0.35 (s, 3H)。計算質量：568.21，觀測質量(ESI-)：567.35 [M-H]。 實例 66 ： 8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-( 環丙基磺醯基 ) 苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-13- 甲基 -7,8,9,11,12,13,14,15,16,17- 十氫 -6H- 環戊 [a] 菲 -3,17- 二醇 (74)
在環境溫度下，向(8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-3-乙酸基酯(74) (350 mg，0.62 mmol，1.0當量)於甲醇(10 mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸銫(604 mg，1.86 mmol，3.0當量)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，此時藉由LCMS分析測定反應完成。將反應混合物藉由Prep-TLC (乙酸乙酯/石油醚=2:1)純化，得到呈淡黃色固體狀之(8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-3,17-二醇(74) (280 mg，86%產率)。計算質量：526.20，觀測質量(ESI-)：525.25 [M-H]。 實例 67 ： (8S,11S,13S,14S,17S)-3-(2-(( 三級丁基二甲基矽烷基 ) 氧基 ) 乙氧基 )-11-(4-( 環丙基磺醯基 ) 苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-13- 甲基 -7,8,9,11,12,13,14,15,16,17- 十氫 -6H- 環戊 [a] 菲 -17- 醇 (75)
在環境溫度下，向(8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-3,17-二醇(74) (80 mg，0.152 mmol，1.0當量)於DMF (4 mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸銫(148 mg，0.456 mmol，3.0當量)及三級丁(2-碘代乙氧基)二甲基矽烷(65 mg，0.228 mmol，1.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析測定反應完成。將反應混合物用水(30 mL)淬滅且用乙酸乙酯(30 mL×3)萃取。將經合併之有機層用水(30 mL×2)及鹽水(30 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮。將殘餘物藉由Prep-TLC (乙酸乙酯/石油醚=- 1:1)純化，得到呈淡黃色固體狀之(8S,11S,13S,14S,17S)-3-(2-((三級丁基二甲基矽烷基)氧基)乙氧基)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-17-醇(75) (70 mg，67%產率)。計算質量：684.31，觀測質量(ESI-)：683.45 [M-H]。
實例 68 ： (8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-( 環丙基磺醯基 ) 苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-3-(2- 羥基乙氧基 )-13- 甲基 -7,8,9,11,12,13,14,15,16,17- 十氫 -6H- 環戊 [a] 菲 -17- 醇 (76)
向(8S,11S,13S,14S,17S)-3-(2-((三級丁基二甲基矽烷基)氧基)乙氧基)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-17-醇(75) (60 mg，0.088 mmol，1.0當量)於DCM (5 mL)之溶液中添加TFA (0.5 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時，此時藉由LCMS分析測定反應完成。將反應混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3)，移動相B：20 mm NaOH + 10% ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內自34% B至64% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：6.9，得到呈白色固體狀之(8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-3-(2-羥基乙氧基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-17-醇(76) (24.7 mg，49%產率)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.60 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 7.32 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 6.84 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 6.67 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 6.49 (dd, J= 8.6, 2.7 Hz, 1H), 5.40 (s, 1H), 4.78 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 4.28 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.19 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 3.87 (t, J= 5.0 Hz, 2H), 3.65 (q, J= 5.2 Hz, 2H), 3.02 (t, J= 15.9 Hz, 1H), 2.90-2.72 (m, 3H), 2.48-2.34 (m, 2H), 2.24-2.06 (m, 2H), 2.05-1.84 (m, 2H), 1.76-1.62 (m, 2H), 1.44-1.26 (m, 2H), 1.11-0.91 (m, 4H), 0.34 (s, 3H)。計算質量：570.23，觀測質量(ESI-)：569.35 [M-H]。
方案54說明製備化合物77。 實例 69 ： (8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-( 環丙基磺醯基 ) 苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-13- 甲基 -3-(2-(N- 𠰌 啉基 ) 乙氧基 )-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17- 十氫 -6H- 環戊 [a] 菲 -17- 醇 (77)
在環境溫度下，向(8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-3,17-二醇(74) (50 mg，0.095 mmol，1.0當量)於DMF (2.5 mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸銫(93 mg，0.285 mmol，3.0當量)及4-(2-溴乙基)𠰌啉氫溴酸鹽(39 mg，0.143 mmol，1.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析測定反應完成。將反應混合物用水(15 mL)淬滅且用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取。將經合併之有機層用水(20 mL×2)及鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮。將殘餘物藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：XSelect CSH C18 Column管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(0.1% FA)，移動相B：20 mm NaOH + 10% ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內自42% B至72% B；波長：254 nm；RT(分鐘)：6.55，得到呈白色固體狀之(8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-3-(2-(N-𠰌啉基)乙氧基)-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-17-醇(77) (25.1 mg，40%產率)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.60 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.32 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 6.84 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 6.69 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 6.50 (dd, J= 8.6, 2.7 Hz, 1H), 5.41 (s, 1H), 4.29 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 4.21 (t, J= 6.5 Hz, 1H), 3.98 (t, J= 5.8 Hz, 2H), 3.56 (t, J= 4.6 Hz, 4H), 3.02 (t, J= 14.4 Hz, 1H), 2.91-2.71 (m, 3H), 2.63 (t, J= 5.8 Hz, 2H), 2.49-2.35 (m, 6H), 2.24-2.07 (m, 2H), 2.05-1.86 (m, 2H), 1.77-1.62 (m, 2H), 1.44-1.27 (m, 2H), 1.10-0.94 (m, 4H), 0.35 (s, 3H)。計算質量：639.28，觀測質量(ESI+)：640.45 [M+H]。
方案55說明製備化合物78。 實例 70 ： (8S,11S,13S,14S,17S)-3- 丁氧基 -11-(4-( 環丙基磺醯基 ) 苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-13- 甲基 -7,8,9,11,12,13,14,15,16,17- 十氫 -6H- 環戊 [a] 菲 -17- 醇 (78)
在環境溫度下，向(8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-3,17-二醇(50 mg，0.095 mmol，1.0當量)於DMF (2.5 mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸銫(93 mg，0.285 mmol，3.0當量)及1-碘丁烷(26 mg，0.143 mmol，1.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析測定反應完成。將反應混合物用水(15 mL)淬滅且用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取。將經合併之有機層用水(20 mL×2)及鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮。將殘餘物藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3)，移動相B：20 mm NaOH + 10% ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內自60% B至90% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：7.0，得到呈白色固體狀之(8S,11S,13S,14S,17S)-3-丁氧基-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-17-醇(78) (19.8 mg，35%產率)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.59 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.32 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 6.83 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 6.65 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 6.48 (dd, J= 8.6, 2.7 Hz, 1H), 5.41 (s, 1H), 4.29 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.19 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 3.85 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 3.08-2.94 (m, 1H), 2.89-2.71 (m, 3H), 2.48-2.34 (m, 2H), 2.23-2.05 (m, 2H), 2.04-1.84 (m, 2H), 1.75-1.56 (m, 4H), 1.45-1.26 (m, 4H), 1.09-0.94 (m, 4H), 0.90 (t, J= 7.4 Hz, 3H), 0.34 (s, 3H)。計算質量：582.26，觀測質量(ESI-)：581.45 [M-H]。
方案56說明製備化合物79。 實例 71 ： 8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-( 環丙基磺醯基 ) 苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-3-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 )-13- 甲基 -7,8,9,11,12,13,14,15,16,17- 十氫 -6H- 環戊 [a] 菲 -17- 醇 (79)
在環境溫度下，向(8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-3,17-二醇974) (50 mg，0.095 mmol，1.0當量)於DMF (2.5 mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸銫(93 mg，0.285 mmol，3.0當量)及1-碘-2-(2-甲氧基乙氧基)乙烷(33 mg，0.143 mmol，1.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，此時藉由LCMS分析測定反應完成。將反應混合物用水(15 mL)淬滅且用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取。將經合併之有機層用水(20 mL×2)及鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮。將殘餘物藉由Prep-HPLC在以下條件下純化：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm，5 μm；移動相A：水(10 mmol/L NH 4HCO 3+ 0.05% NH 3H 2O)，移動相B：20 mm NaOH + 10% ACN；流動速率：60毫升/分鐘；梯度：在8分鐘內自3% B至10% B；波長：254 nm/220 nm；RT(分鐘)：7.3，得到呈白色固體狀之(8S,11S,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-13-甲基-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-十氫-6H-環戊[a]菲-17-醇(79) (22.6 mg，37%產率)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.60 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.32 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 6.84 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 6.68 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 6.50 (dd, J= 8.6, 2.7 Hz, 1H), 5.40 (s, 1H), 4.28 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 4.19 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 4.03-3.92 (m, 2H), 3.73-3.62 (m, 2H), 3.58-3.52 (m, 2H), 3.47-3.40 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 3.09-2.95 (m, 1H), 2.90-2.72 (m, 3H), 2.49-2.34 (m, 2H), 2.24-2.06 (m, 2H), 2.04-1.84 (m, 2H), 1.77-1.62 (m, 2H), 1.44-1.26 (m, 2H), 1.12-0.92 (m, 4H), 0.34 (s, 3H)。計算質量：628.27，觀測質量(ESI-)：627.40 [M-H]。
方案57說明製備化合物80。 製備化合物 163
在氮氣下，向鎂屑(112 mg，4.65 mmol)及碘晶體於燒瓶中之混合物中添加THF(5 mL)。向經攪拌之混合物中逐滴添加1,2-二溴乙烷(0.16 mL)且用熱風槍使燒瓶平緩地升溫。當觀測到持續放熱時(在不存在加熱的情況下)，逐滴添加溴化物162 (887 mg，3當量)於8 mL THF之溶液。將所得混合物加熱至60℃持續30分鐘，其後Mg固體耗盡。將混合物冷卻至0℃且添加CuCl (134 mg，0.9當量)。將混合物攪拌30分鐘，接著逐滴添加起始物質161 (495 mg，1.5 mmol，1當量)於5 mL THF中之溶液。將混合物在室溫下攪拌1小時，其後TLC顯示化合物161完全轉化。將混合物冷卻至0℃且添加NH 4Cl飽和溶液(15 mL)以淬滅反應物。將所得混合物用EtOAc (3×50 mL)萃取且將經合併之萃取物用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。將EtOAc溶液經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，得到黃色油狀物(1 g粗物質)。粗物質不經進一步純化即載入下一步驟中。精確質量：430.25 製備化合物 163
將炔烴164 (164 mg，0.837 mmol)於THF (0.7 mL)中之溶液冷卻至-78℃且逐滴添加2.5 M n-BuLi於己烷中之溶液(0.33 mL)。將所得混合物在-78℃下攪拌10分鐘，接著升溫至室溫。將混合物在環境溫度下攪拌40分鐘，接著再冷卻至-78℃。逐滴添加163 (300 mg，0.7 mmol)於0.7 mL THF中之溶液且在-78℃下攪拌所得混合物1.5小時。移除冷卻浴且藉由添加飽和氯化銨(1.5 mL)淬滅反應混合物。藉由添加EtOAc (100 mL)稀釋混合物，用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。在經硫酸鈉乾燥有機相之後，過濾溶液且在真空中濃縮。藉由矽膠急驟層析(EtOAc/己烷梯度)純化殘餘物，得到化合物165 (54 mg，12%)且回收163 (170 mg，57%)。精確質量：626.42。 製備化合物 166
向165 (54 mg，0.087 mmol)於THF (0.9 mL)及MeOH (0.9 mL)之混合物中之溶液中添加4N HCl (65 µL，0.26 mmol，3當量)且在室溫下攪拌所得混合物7小時。此時TLC分析展示完全轉化為極性更強之產物。用EtOAc (100 mL)稀釋反應混合物且用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌所得混合物。將經合併之萃取物經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。獲得粗化合物166 (47.9 mg，95%)，其繼續用於下一步驟中。精確質量：582.30 實例 72 ：製備化合物 80
向化合物166 (47.9 mg)於0.9 mL THF中之溶液中添加於THF中之0.165 mL 1M TBAF且在室溫下攪拌混合物1小時。在氮氣流下蒸發所得混合物且再溶解於EtOAc (100 mL)中，用水(50 mL)、鹽水(50 mL)洗滌，且將經合併之萃取物經硫酸鈉乾燥。將溶液過濾並在真空中濃縮，得到黏稠棕色油狀物(44.6 mg)。將此物質溶解於DMF (約1 mL)且藉由製備型HPLC在C18逆相上純化溶液。將純溶離份合併且凍乾，得到呈灰白色固體狀之化合物80 (7.3 mg)。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d6) δ 7.04 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 6.98 - 6.92 (m, 2H), 5.64 (s, 1H), 4.35 (d, J= 6.8 Hz, 2H), 2.72 - 2.61 (m, 2H), 2.57 (d, J= 13.1 Hz, 1H), 2.42 (s, 1H), 2.33 - 2.24 (m, 3H), 2.19 - 2.02 (m, 2H), 2.00 - 1.90 (m, 2H), 1.83 (tp, J= 8.4, 8.4, 3.0, 3.0, 2.7, 2.7 Hz, 2H), 1.63, 1.46 (m, 2H), 1.35 - 1.20 (m, 1H), 0.97 (d, J= 6.3 Hz, 8H), 0.94 - 0.84 (m, 3H), 0.63 - 0.57 (m, 2H), 0.40 (s, 3H)。精確質量：426.26。
方案58說明製備化合物56。 製備 (1'R,5'S,9'S,10'S,13'R)-5'- 甲基 -18'- 氧雜螺 [1,3- 二氧雜環戊烷 -2,15'- 五環 [11.4.1.0^{1,13}.0^{2,10}.0^{5,9}] 十八烷 ]-2'- 烯 -6'- 酮 (168)
在0℃下，向Na 2HPO 4(361 g，2.54 mol, 2.00當量)於DCM (2 L)中之經攪拌溶液中添加六氟丙酮三水合物(352 mL，1.60 mol, 1.26當量)及H 2O 2(632 mL，2.00當量, 30%)。在0℃下攪拌混合物1小時。隨後在0℃下將於700 mL DCM中之(3aS,3bS,11aS)-11a-甲基-2,3,3a,3b,4,5,6,8,9,11-十氫螺[環戊[a]菲-7,2'-[1,3]二氧雜環戊烷]-1-酮(167) (400 g，1.27 mol，1當量)添加至混合物中。在0℃下攪拌所得溶液18小時。向混合物中添加10% Na 2SO 3溶液(1L)，攪拌15分鐘。用H 2O (3×1L)萃取有機溶離份，將有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。藉由與(二異丙基醚:乙酸乙酯(5:1))一起研磨來純化殘餘物，過濾固體且乾燥，得到呈白色固體狀之(1'R,5'S,9'S,10'S,13'R)-5'-甲基-18'-氧雜螺[1,3-二氧雜環戊烷-2,15'-五環[11.4.1.0^{1,13}.0^{2,10}.0^{5,9}]十八烷]-2'-烯-6'-酮(168) (280 g，66%)。計算質量：330.18，觀測質量(ESI+)：331.15 [M+H]。 製備 (3aS,3bS,5aR,10R,11aS)-10-{4-[( 三級丁基二甲基矽烷基 ) 氧基 ] 苯基 }-5a- 羥基 -11a- 甲基 -3,3a,3b,4,5,6,8,9,10,11- 十氫 -2H- 螺 [ 環戊 [a] 菲 -7,2'-[1,3] 二氧雜環戊烷 ]-1- 酮 (169)
在N 2下在-10℃下，向三級丁(4-碘苯氧基)二甲基矽烷(182 g，544 mmol，1.50當量)於THF (2.5 L)之溶液中逐滴添加氯化異丙基鎂(2 M，363 mL，726 mmol，2.00當量)。將所得溶液在-10℃下攪拌30分鐘。接著添加氯化銅(I) (21.5 g，217 mmol，0.60當量)且在0℃下攪拌溶液30分鐘。30分鐘後，在0℃下逐滴(1'R,5'S,9'S,10'S,13'R)-5'-甲基-18'-氧雜螺[1,3-二氧雜環戊烷-2,15'-五環[11.4.1.0^{1,13}.0^{2,10}.0^{5,9}]十八烷]-2'-烯-6'-酮(168) (120 g，363 mmol，1.00當量) (於500 mL THF中)且攪拌15分鐘。接著使所得溶液升溫至室溫且在室溫下攪拌16小時。將反應物冷卻且藉由添加飽和NH 4Cl (水溶液)(1.5 L)在0℃下淬滅，且用乙酸乙酯(3×2 L)萃取，將有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且在減壓下濃縮。將粗產物藉由矽膠管柱純化，用石油醚/乙酸乙酯(1:1)溶離，得到呈白色固體狀之(3aS,3bS,5aR,10R,11aS)-10-{4-[(三級丁基二甲基矽烷基)氧基]苯基}-5a-羥基-11a-甲基-3,3a,3b,4,5,6,8,9,10,11-十氫-2H-螺[環戊[a]菲-7,2'-[1,3]二氧雜環戊烷]-1-酮(169) (90 g，41%)。計算質量：538.31，觀測質量(ESI+)：539.10 [M+H]。 製備 (3aS,3bS,10R,11aS)-10-{4-[( 三級丁基二甲基矽烷基 ) 氧基 ] 苯基 }-11a- 甲基 -2,3,3a,3b,4,5,8,9,10,11- 十氫螺 [ 環戊 [a] 菲 -7,2'-[1,3] 二氧雜環戊烷 ]-1- 酮 (170)
在65℃下將(3aS,3bS,5aR,10R,11aS)-10-{4-[(三級丁基二甲基矽烷基)氧基]苯基}-5a-羥基-11a-甲基-3,3a,3b,4,5,6,8,9,10,11-十氫-2H-螺[環戊[a]菲-7,2'-[1,3]二氧雜環戊烷]-1-酮(169) (80.0 g，148 mmol，1.00當量)、乙酸乙醯酯(75.8 g，742 mmol，5.00當量)及N,N-二甲基吡啶-4-胺(1.81 g，14.8 mmol，0.10當量)於吡啶(1 L)中之混合物攪拌36小時。將所得溶液在減壓下部分濃縮。藉由逆相急驟管柱(管柱，C18矽膠，300 g，20至35固定相，具有0.1% FA及ACN之水(在50分鐘內10%至100%梯度)；偵測器UV 254/220 nm)純化殘餘物，得到呈黃色油狀物之(3aS,3bS,10R,11aS)-10-{4-[(三級丁基二甲基矽烷基)氧基]苯基}-11a-甲基-2,3,3a,3b,4,5,8,9,10,11-十氫螺[環戊[a]菲-7,2'-[1,3]二氧雜環戊烷]-1-酮(170) (55 g，64%)。重複反應2次，得到110 g產物。計算質量：520.30，觀測質量(ESI+)：521.25 [M+H]。 製備 (1S,3aS,3bS,10R,11aS)-10-{4-[( 三級丁基二甲基矽烷基 ) 氧基 ] 苯基 }-1-[1,1- 二氟 -3-( 三異丙基矽烷基 ) 丙 -2- 炔 -1- 基 ]-11a- 甲基 -2,3,3a,3b,4,5,8,9,10,11- 十氫螺 [ 環戊 [a] 菲 -7,2'-[1,3] 二氧雜環戊烷 ]-1- 醇 (171)
將(3aS,3bS,10R,11aS)-10-{4-[(三級丁基二甲基矽烷基)氧基]苯基}-11a-甲基-2,3,3a,3b,4,5,8,9,10,11-十氫螺[環戊[a]菲-7,2'-[1,3]二氧雜環戊烷]-1-酮(170) (20.0 g，38.4 mmol，1.00當量)及(3-溴-3,3-二氟丙-1-炔-1-基)三異丙基矽烷(35.8 g，115 mmol，3.00當量)溶解於THF (1.4 L)中且冷卻至-78℃。接著逐滴添加丁基鋰(46.1 mL，115 mmol，3.00當量，2.50 M)且在-78℃下攪拌所得溶液1小時。藉由添加NH 4Cl飽和溶液(1 L)淬滅反應物且用EA (3×1 L)萃取。將有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，且在減壓下濃縮，得到呈無色油狀物之(1S,3aS,3bS,10R,11aS)-10-{4-[(三級丁基二甲基矽烷基)氧基]苯基}-1-[1,1-二氟-3-(三異丙基矽烷基)丙-2-炔-1-基]-11a-甲基-2,3,3a,3b,4,5,8,9,10,11-十氫螺[環戊[a]菲-7,2'-[1,3]二氧雜環戊烷]-1-醇(21 g，58.08%)。重複反應6次以得到126 g (粗)產物。計算質量：752.45，觀測質量(ESI+)：753.20 [M+H]。 製備 (1S,3aS,3bS,10R,11aS)-10-{4-[( 三級丁基二甲基矽烷基 ) 氧基 ] 苯基 }-1-[1,1- 二氟 -3-( 三異丙基矽烷基 ) 丙 -2- 炔 -1- 基 ]-1- 羥基 -11a- 甲基 -2H,3H,3aH,3bH,4H,5H,8H,9H,10H,11H- 環戊 [a] 菲 -7- 酮 (172)
在0℃下，向(1S,3aS,3bS,10R,11aS)-10-{4-[(三級丁基二甲基矽烷基)氧基]苯基}-1-[1,1-二氟-3-(三異丙基矽烷基)丙-2-炔-1-基]-11a-甲基-2,3,3a,3b,4,5,8,9,10,11-十氫螺[環戊[a]菲-7,2'-[1,3]二氧雜環戊烷]-1-醇(171) (21.0 g，27.8 mmol，1.00當量)於THF (570 mL)及甲醇(570 mL)之溶液中逐滴添加4 N HCl溶液(20.9 mL，83.6 mmol，3.00當量)。在0℃下攪拌所得溶液1小時，在此期間TLC展示起始物質完全轉化為產物。將反應物淬滅且藉由添加NaHCO 3飽和溶液而酸化至pH 8。將混合物用乙酸乙酯(3×1 L)萃取，且將經合併之有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，用石油醚/乙酸乙酯(3:1)溶離，得到呈黃色油狀物之(1S,3aS,3bS,10R,11aS)-10-{4-[(三級丁基二甲基矽烷基)氧基]苯基}-1-[1,1-二氟-3-(三異丙基矽烷基)丙-2-炔-1-基]-1-羥基-11a-甲基-2H,3H,3aH,3bH,4H,5H,8H,9H,10H,11H-環戊[a]菲-7-酮(172) (11 g，50%)。重複反應6次以得到66 g產物。計算質量：708.42，觀測質量(ESI+)：709.40 [M+H]。 實例 73 ：製備 (1S,3aS,3bS,10R,11aS)-1-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-1- 羥基 -10-(4- 羥苯基 )-11a- 甲基 -2H,3H,3aH,3bH,4H,5H,8H,9H,10H,11H- 環戊 [a] 菲 -7- 酮 (56)
在0℃下，向(1S,3aS,3bS,10R,11aS)-10-{4-[(三級丁基二甲基矽烷基)氧基]苯基}-1-[1,1-二氟-3-(三異丙基矽烷基)丙-2-炔-1-基]-1-羥基-11a-甲基-2H,3H,3aH,3bH,4H,5H,8H,9H,10H,11H-環戊[a]菲-7-酮(50.0 g，70.5 mmol，1.00當量) (172)於THF (4 L)中之溶液中添加TBAF (1 M，140 mL)。將所得混合物在室溫下攪拌20分鐘。藉由添加水(5 L)來淬滅反應物。用EA (3×5 L)萃取所得混合物。將經合併之有機層用鹽水(1 L)洗滌且經無水硫酸鈉乾燥。過濾之後，在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，用正己烷/EA (1:1)溶離，得到呈黃色固體狀之(1S,3aS,3bS,10R,11aS)-1-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-1-羥基-10-(4-羥苯基)-11a-甲基-2H,3H,3aH,3bH,4H,5H,8H,9H,10H,11H-環戊[a]菲-7-酮(56) (23.5303 g，74%)。
1H NMR (300 MHz, DMSO- d 6) δ 9.17 (s, 1H), 6.96 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 6.67 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 5.65 (s, 1H), 5.48 (s, 1H), 4.35 (d, J= 6.7 Hz, 1H), 4.27 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 2.80-2.69 (m, 1H), 2.60 (dd, J= 26.5, 13.2 Hz, 2H), 2.47-2.26 (m, 3H), 2.24-2.05 (m, 4H), 1.98-1.95 (m, 1H), 1.86-1.56 (m, 3H), 1.38-1.27(m, 2H), 0.51 (s, 3H)。計算質量：438.20，觀測質量(ESI+)：439.20 [M+H]。
方案59說明製備中間物158。
(4-溴苯基) (環丙基)硫烷(180)
反應分兩批進行。在25℃下，將4-溴苯硫酚(179) (400 g，2115.6 mmol，1.0當量)、DMSO (2 L)置於兩個2 L燒瓶中。接著在0℃下逐份添加t-BuOK (308.6 g，2750.3 mmol，1.3當量)且在25℃下攪拌所得混合物15分鐘。接著添加溴環丙烷(766 g，6383.3 mmol，3.0當量)且將所得混合物在60℃下攪拌72小時，冷卻至25℃且傾入2 L冰/水中，用乙酸乙酯(2 L×2)萃取。將經合併之有機層用鹽水(3 L×3)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，用乙酸乙酯:石油醚(2:98)溶離，得到呈黃色液體狀之(4-溴苯基) (環丙基)硫烷(180) (334 g，63.4%)。
1H-NMR (CDCl 3, 400 MHz) δ (ppm): 7.41 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.25 (d, J= 8.8 Hz , 2H), 2.15-2.21 (m, 1H), 1.07-1.12 (m, 2H), 0.69-0.73 (m, 2H)。計算質量：227.96，觀測質量(ESI+)：229.26 [M+H]。 製備 (5'R,8'S,10'R,13'S,14'S)-13'- 甲基 -1',2',6',7',8',12',13',14',15',16'- 十氫 -4'H,17'H- 螺 [[1,3] 二氧雜環戊烷 -2,3'-[5,10] 環氧 環戊 [a] 菲 ]-17'- 酮 (174)
將Na 2HPO 4(99.3 g，699.7 mmol，1.1當量)、DCM (2 L)置於5 L之3頸燒瓶中。接著在0℃下添加六氟丙酮(180 mL)及H 2O 2(30%，320 mL)且攪拌1小時。接著，在0℃下添加(8S,13S,14S)-13-甲基-1,4,6,7,8,12,13,14,15,16-十氫螺[環戊[a]菲-3,2'-[1,3]二氧雜環戊烷]-17(2H)-酮(173) (200 g，636.1 mmol，1.0當量)且在-5至0℃下攪拌溶液18小時。藉由添加10% Na 2SO 3(水溶液，1 L)淬滅反應物。用DCM (1 L×2)萃取所得混合物。將經合併之有機層用10% Na 2SO 3(2 L×2)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，且在減壓下濃縮。將殘餘物溶解於1 L (乙酸乙酯:2-異丙氧基丙烷：=1:3，含有0.1%吡啶)中且在25℃下攪拌15小時。將所得混合物過濾，用(乙酸乙酯:2-異丙氧基丙烷：=1:3，含有0.1%吡啶) (400 mL×1)洗滌濾餅，從而得到呈白色固體狀之(5'R,8'S,10'R,13'S,14'S)-13'-甲基-1',2',6',7',8',12',13',14',15',16'-十氫-4'H,17'H-螺[[1,3]二氧戊環-2,3'-[5,10]環氧環戊[a]菲]-17'-酮(174) (120 g，51.4%)。
1H-NMR (CDCl 3, 400 MHz) δ (ppm): 6.03-6.06 (m, 1H), 3.85-3.96 (m, 4H), 2.47-2.50 (m, 2H), 2.01-2.18 (m, 6H), 1.84-1.98 (m, 3H), 1.65-1.80 (m, 2H), 1.46-1.58 (m, 4H), 1.17-1.30 (m, 1H), 0.87 (s, 3H)。計算質量：330.18，觀測質量(ESI+)：331.35 [M+H]。
(5R,8S,13S,14S)-11-(4-( 環丙基 硫基 ) 苯基 )-5- 羥基 -13- 甲基 -1,4,5,6,7,8,11,12,13,14,15,16- 十二氫螺 [ 環戊 [a] 菲 -3,2'-[1,3] 二氧雜環戊烷 ]-17(2H)- 酮
將Mg (6.6 g，272.4 mmol，6當量)、I 2(0.12 g，0.45 mmol，0.01當量)、THF (125 mL)置於1 L之3頸燒瓶中。接著在60至70℃下在N 2氛圍下逐滴添加於THF (125 mL)中之(4-溴苯基) (環丙基)硫烷(180) (31.2 g，136.2 mmol，3.0當量) (添加1/4之物質以起始反應，數分鐘之後添加其他3/4之物質且將浴液謹慎地保持在60至70℃之間)。在添加完成之後，經30分鐘將溫度冷卻至25℃以提供溶液A。將(5'R,8'S,10'R,13'S,14'S)-13'-甲基-1',2',6',7',8',12',13',14',15',16'-十氫-4'H,17'H-螺[[1,3]二氧雜環戊烷-2,3'-[5,10]環氧環戊[a]菲]-17'-酮(174) (15 g，45.4 mmol，1當量)、THF (190 mL)、CuI (17.3 g，90.8 mmol，2.0當量)置於另一個1 L之3頸燒瓶中，接著在N 2氛圍下在0℃下逐滴添加溶液A。在N 2氛圍下，在0℃下攪拌所得混合物1小時。將反應物用NH 4Cl (水溶液，400 mL)淬滅，用乙酸乙酯(500 mL×1)萃取。將有機層用NH 4Cl (水溶液，500 mL×2)、鹽水(500 mL×1)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，且在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，用乙酸乙酯:石油醚(1:1)溶離，得到呈灰白色固體狀之(5R,8S,13S,14S)-11-(4-(環丙基硫基)苯基)-5-羥基-13-甲基-1,4,5,6,7,8,11,12,13,14,15,16-十二氫螺[環戊[a]菲-3,2'-[1,3]二氧雜環戊烷]-17(2H)-酮(175) (23 g，93%)。
1H-NMR (CDCl 3, 400 MHz) δ (ppm): 7.26 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.15 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 4.39 (s, 1H), 4.29 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 3.91-4.06 (m, 4H), 2.29-2.50 (m, 5H), 2.00-2.20 (m, 5H), 1.75-1.91 (m, 3H), 1.50-1.70 (m, 5H), 1.23-1.34 (m, 1H), 1.02-1.09 (m, 2H), 0.66-0.73 (m, 2H), 0.51 (s, 3H)。計算質量：480.23，觀測質量(ESI+)：480.35 [M+H]。
製備 (8S,13S,14S)-11-(4-( 環丙基硫基 ) 苯基 )-13- 甲基 -1,6,7,8,11,12,13,14,15,16- 十氫螺 [ 環戊 [a] 菲 -3,2'-[1,3] 二氧雜環戊烷 ]-17(2H)- 酮 (176)
反應分兩批進行。將(5R,8S,13S,14S)-11-(4-(環丙基硫基)苯基)-5-羥基-13-甲基-1,4,5,6,7,8,11,12,13,14,15,16-十二氫螺[環戊[a]菲-3,2'-[1,3]二氧雜環戊烷]-17(2H)-酮(175) (140 g，291.3 mmol，1當量)、吡啶(1400 mL)、Ac 2O (148.7 g，1456.3 mmol，5.0當量)、DMAP (3.56 g，29.1 mmol，0.1當量)置於兩個2 L燒瓶中。將溶液在65℃下攪拌30小時。使混合物冷卻至25℃，且接著在減壓下濃縮。用H 2O (1 L)稀釋殘餘物。用乙酸乙酯(1 L×2)萃取所得混合物。將經合併之有機層用鹽水(2 L×2)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥。過濾之後，在減壓下濃縮濾液。此產生呈棕色固體狀之(8S,13S,14S)-11-(4-(環丙基硫基)苯基)-13-甲基-1,6,7,8,11,12,13,14,15,16-十氫螺[環戊[a]菲-3,2'-[1,3]二氧雜環戊烷]-17(2H)-酮(176) (134 g，89.5%)。
1H-NMR (CDCl 3, 400 MHz) δ (ppm): 7.26 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.15 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.41 (s, 1H), 4.26-4.33 (m, 1H), 3.85-4.05 (m, 4H), 2.40-2.58 (m, 5H), 2.01-2.19 (m, 6H), 1.71-1.91 (m, 3H), 1.44-1.60 (m, 3H), 1.03-1.08 (m, 2H), 0.65-0.72 (m, 2H), 0.54 (s, 3H)。計算質量：462.22，觀測質量(ESI+)：462.31 [M+H]。 製備 (8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-( 環丙基硫基 ) 苯基 )-17-(1,1- 二氟 -3-( 三異丙基矽烷基 ) 丙 -2- 炔 -1- 基 )-13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫螺 [ 環戊 [a] 菲 -3,2'-[1,3] 二氧雜環戊烷 ]-17- 醇 及 (8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-( 環丙基硫基 ) 苯基 )-17-(1,1- 二氟 -3-( 三異丙基矽烷基 ) 丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 (177)
將(8S,13S,14S)-11-(4-(環丙基硫基)苯基)-13-甲基-1,6,7,8,11,12,13,14,15,16-十氫螺[環戊[a]菲-3,2'-[1,3]二氧雜環戊烷]-17(2H)-酮(176) (40 g，86.5 mmol，1當量)、THF (1 L)及(3-溴-3,3-二氟丙-1-炔-1-基)三異丙基矽烷(107.6 g，345.8 mmol，4.0當量)置於2 L之3頸燒瓶中。接著在N 2氛圍下在-78℃下逐滴添加n-BuLi (173 mL，5.0當量)。在N 2氛圍下在-78℃下攪拌溶液2小時。將反應物在-78℃下用NH 4Cl (水溶液，700 mL)淬滅。用乙酸乙酯(700 mL×2)萃取所得混合物。將經合併之有機層用鹽水(1 L×2)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，用EA:PE (1:9)溶離，得到呈黃色固體狀之(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基硫基)苯基)-17-(1,1-二氟-3-(三異丙基矽烷基)丙-2-炔-1-基)-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫螺[環戊[a]菲-3,2'-[1,3]二氧雜環戊烷]-17-醇(177) (15 g，22.5%)。
1H-NMR (CDCl 3, 400 MHz) δ (ppm): 7.23 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.11 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.35 (s, 1H), 4.27-4.30 (m, 1H), 3.85-4.01 (m, 4H), 3.73 (s, 1H), 2.30-2.49 (m, 8H), 2.06-2.18 (m, 3H), 1.88-1.94 (m, 1H), 1.67-1.81 (m, 5H), 1.01-1.13 (m, 23H), 0.65-0.70 (m, 2H), 0.58 (s, 3H)。計算質量：694.37，觀測質量(ESI+)：694.33 [M+H]。 製備 (8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-( 環丙基磺醯基 ) 苯基 )-17-(1,1- 二氟 -3-( 三異丙基矽烷基 ) 丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 (178)
在0℃下逐滴添加將(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基硫基)苯基)-17-(1,1-二氟-3-(三異丙基矽烷基)丙-2-炔-1-基)-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫螺[環戊[a]菲-3,2'-[1,3]二氧雜環戊烷]-17-醇(177) (15 g，21.6 mmol，1當量)、THF (200 mL)、MeOH (200 mL)及於H 2O (130 mL)中之過硫酸氫鉀(22.4 g，64.7 mmol，3.0當量)置於1 L之3頸燒瓶中，且在0℃下將溶液攪拌0.5小時。LCMS顯示在254 nm處有70%產物。
在0℃下逐滴添加將(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基硫基)苯基)-17-(1,1-二氟-3-(三異丙基矽烷基)丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(11 g，16.9 mmol，1.0當量)、THF (125 mL)、MeOH (125 mL)及於H 2O (80 mL)中之過硫酸氫鉀(15.9 g，45.9 mmol，3.0當量)置於另一個1 L之3頸燒瓶中，且在0℃下將溶液攪拌0.5小時。LCMS顯示在254 nm處有71%產物。
將兩批合併且過濾。在減壓下濃縮濾液，且將所得混合物用500 mL H 2O稀釋且用乙酸乙酯(500 mL×2)萃取。將經合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥，且在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，用EA:PE (35:65)溶離，得到呈黃色固體狀之(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟-3-(三異丙基矽烷基)丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(178) (15 g，57%)。
1H-NMR (CDCl 3, 400 MHz) δ (ppm): 7.80 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.37 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.80 (s, 1H), 4.48 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 2.66-2.74 (m, 1H), 2.50-2.65 (m, 5H), 2.32-2.49 (m, 5H), 2.20-2.29 (m, 1H), 2.05-2.18 (m, 2H), 1.72-1.86 (m, 2H), 1.40-1.52 (m, 2H), 1.30-1.37 (m, 2H), 1.07-1.15 (m, 21H), 1.00-1.05 (m, 2H), 0.55 (s, 3H)。計算質量：682.33，觀測質量(ESI+)：683.21 [M+H]。 製備 (8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-( 環丙基磺醯基 ) 苯基 )-17-(1,1- 二氟丙 -2- 炔 -1- 基 )-17- 羥基 -13- 甲基 -1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17- 十二氫 -3H- 環戊 [a] 菲 -3- 酮 (158)
反應分五批(10 g×5批)進行。在0℃下逐滴添加將(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟-3-(三異丙基矽烷基)丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(178) (50 g，73.2 mmol，1當量)、THF (4 L)、TBAF (14.6 mL，14.6 mmol，0.2當量)置於五個2 L之3頸燒瓶中，且在0℃下將混合物攪拌5小時。TLC顯示反應完成。藉由在0℃下添加H 2O (4 L)淬滅反應物且用乙酸乙酯(4 L×1)萃取所得混合物。將有機層經無水Na 2SO 4乾燥。過濾之後，在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，用乙酸乙酯:石油醚(1:1)溶離，得到呈灰白色固體狀之(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-17-(1,1-二氟丙-2-炔-1-基)-17-羥基-13-甲基-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(158) (25.1 g，61.7%)。
1H-NMR (DMSO-d 6, 400 MHz) δ (ppm): 7.80 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.48 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 5.69 (s, 1H), 5.52 (s, 1H), 4.62 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 4.27-4.30 (m, 1H), 2.73-2.87 (m, 2H), 2.60-2.72 (m, 1H), 2.50-2.57 (m, 3H), 2.27-2.40 (m, 2H), 1.95-2.22 (m, 4H), 1.60-1.87 (m, 3H), 1.24-1.44 (m, 2H), 1.07-1.12 (m, 2H), 0.97-1.05 (m, 2H), 0.46 (s, 3H)。計算質量：526.20，觀測質量(ESI+)：527.18 [M+H]。 實例 74 ： 衰老分析程序及結果
在37℃下在具有5%二氧化碳之含濕氣培育箱中，將細胞維持在補充有10%胎牛血清之DMEM培養基(高葡萄糖、4 mM L-麩醯胺酸、無丙酮酸鈉)中。經由用亞致死濃度之化學療法(博萊黴素、吉西他濱、阿黴素、5-氟尿苷)治療，繼而係無化學療法之休息期來誘導衰老，類似於本領域其他人所報導的(例如，Aoshiba等人, 2003 Eur Respir J 22:436-443)。與增殖未經治療之細胞相比，藉由低EdU (5-乙炔基-2'-脫氧尿苷)併入及高SA-β-Gal (衰老相關β-半乳糖苷酶)染色來限定螢光。將衰老細胞以5至15,000個細胞/孔之密度接種於96孔盤中。次日，在大約四個Log10單位之十種不同濃度下，一式兩份添加化合物。將細胞與化合物一起培育24至72小時，此時使用CellTiter-Glo (Promega)或XTT (R&D Systems)定量存活率。相對於未治療之對照細胞測定經治療之細胞之存活率。將化合物濃度相對於標準化平均存活率之對數擬合至具有可變斜率之四參數希爾函數(Hill function)。底部被限制為大於零。內插Y=50之X平均值以測定絕對IC 50。表2中之結果表明，許多化合物在細胞中具有活性且可誘導衰老HEPG2及A549細胞之存活率呈劑量依賴性降低。
結果呈現於下表2中。 表2
絕對 IC50 平均值
化合物編號 HEPG2_SEN IC50 A549_SEN IC50
66 n.t. **
24 **** ***
26 **** ****
28 *** n.t.
31 *** n.t.
30 **** n.t.
50 **** n.t.
32 **** ****
33 **** ****
51 **** n.t.
35 **** n.t.
36 **** n.t.
37 **** n.t.
38 **** ****
39 **** ***
40 **** n.t.
41 **** n.t.
42 **** ***
27 *** n.t.
2 *** n.t.
6 **** n.t.
7 n.t. ***
8 *** **
68 n.t. ***
9 **** ***
3 *** n.t.
11 **** n.t.
14 **** n.t.
16 *** **
17 * n.t.
18 **** ***
5 *** n.t.
20 **** n.t.
12 **** n.t.
15 *** n.t.
21 **** n.t.
52 n.t. ***
59 n.t. ***
62 n.t. ***
55 n.t. ***
53 n.t. ***
63 n.t. ***
57 n.t. ***
60 n.t. ***
80 * *
72 n.t. ***
77 n.t. *
71 n.t. ***
* 1E-06 M或更高，** 1E-07至1E-06 M，*** 1E-08至1E-07 M，**** 1E-10至1E-08M，n.t.未測試。 實例 75 ： 抑制麩胱甘肽過氧化酶 4 (GPX4)
使用例如麩胱甘肽過氧化酶4抑制劑篩選分析(項目號701880，美國密歇根Cayman Chemical)分析(GPX4)之酶活性，該分析經設計以鑑別GPX4之抑制劑。GPX4活性可藉由使用氫過氧化物丙苯作為受質來評估(Lawrence and Bur, Biochem Biophys Res Commun 1976 71(4): 952)。GPX4酶採用還原麩胱甘肽(GSH)作為電子供體。藉由麩胱甘肽還原酶(EC號1.8.1.7)及NADPH將所形成之麩胱甘肽二硫化物(GSSH)再循環回至還原狀態。NADPH氧化成NADP+伴隨著藉由UV/vis光譜儀量測之340 nm處的吸光度降低，此允許GPX4活性之間接評估。簡言之，將化合物與重組人類GPX4酶一起在室溫或37℃下預培育1.5小時，接著添加麩胱甘肽還原酶、GSH、氫過氧化異丙苯及NADPH。量測吸光度之動力學變化。將不受抑制之活性設定為100%活性，且使用未添加GPX4酶之條件來估計GPX4活性之完全抑制。ML162，一種原型GPX4抑制劑(Moosmayer等人, Acta Crystallogr D Struct Biol 2021 77(Pt 2) :237-248；Shin等人, Free Rad Biol Med 2018 129:454-462)用作自25 μM之最高濃度滴定之參考化合物。所有化合物均以25 μm之最高濃度一式兩份進行測試，其中表3中所示為GPX4抑制劑篩選分析中所選化合物之抑制活性結果。 表3
化合物 25.00 µM 下之抑制 % 2.50 µM 下之抑制 % 0.25 µM 下之抑制 %
ML162 96 88 15
17 102 99 30
26 74 67 16
51 41 45 12
實例 76 ： 化合物 21 影響人類細胞及小鼠中細胞 GPX4 之電泳凝膠遷移率
細胞分析中GPX4之修飾可藉由基於共價結合之預期性質的電泳凝膠遷移率變化來偵測。為此目的，將A549癌細胞株(ATCC)暴露於2 µM之化合物21中5小時。在用指定化合物進行細胞治療之後，收集細胞且在蛋白酶抑制劑混合物(4693132001，Roche)存在下藉由IGEPAL CA-630及十二烷基硫酸鈉(SDS)裂解。分離可溶性蛋白質溶離份且在二硫蘇糖醇(DTT)存在下進行熱變性。使用具有12%聚丙烯醯胺濃度之Bis-Tris蛋白質凝膠電泳分離蛋白質。在蛋白質轉移至PVDF膜之後，用抗GPX4單株抗體(ab125066，Abcam)、隨後用抗兔IgG HRP結合抗體(31460，ThermoFisher)探測膜。藉由ChemiDoc XRS+ System (BioRad)偵測HRP受質添加之後的化學發光(34580，ThermoFisher)。用化合物21治療細胞使得GPX4之電泳遷移率降低估計為約1 kDa之分子量，其與化合物21之分子量相關且說明於圖1中。 實例 77 ：回應於用化合物 32 治療所培養之細胞的 GPX4 蛋白質的電泳凝膠遷移率變化
應用GPX4之電泳凝膠遷移率變化分析來測定作為組織中之直接生物標記物的化合物32之靶接合水平。舉例而言，在暴露於絲裂黴素C (細胞衰老之強效誘導劑)之小鼠皮膚中評定化合物32之標靶接合。經化合物32治療24小時後，收集經治療之BALB/c小鼠(Charles River Laboratories)之皮膚且在蛋白酶抑制劑混合物(4693132001，Roche)及核酸酶(E1014，Sigma-Aldrich)存在下藉由IGEPAL CA-630及十二烷基硫酸鈉(SDS)裂解。分離可溶性蛋白質溶離份且在二硫蘇糖醇(DTT)存在下進行熱變性。使用具有12%聚丙烯醯胺濃度之Bis-Tris蛋白質凝膠電泳分離蛋白質。在蛋白質轉移至PVDF膜之後，用抗GPX4單株抗體(ab125066，Abcam)及抗β-肌動蛋白(4970，Cell Signaling Technology)、隨後用抗兔IgG HRP結合抗體(31460，ThermoFisher)探測膜。藉由ChemiDoc XRS+ System (BioRad)偵測HRP受質添加之後的化學發光(34580，ThermoFisher)。在經化合物32治療之小鼠中觀測到GPX4之較慢遷移帶，其與針對化合物32與GPX4之共價結合所預期之帶移一致，如圖2所示。 實例 78 ： 化合物 32 及 69 在人類細胞中共價結合 GPX4 蛋白
化合物32及69與所培養之細胞中之靶蛋白GPX4的結合可藉由使用生物素標記之類似物，諸如保持其細胞活性之化合物21來評估。可分析同時或依次暴露於化合物32及69及生物素標記之類似物21之細胞或組織中之外源性生物素標記之蛋白質且藉此能夠鑑別化合物32及69之細胞標靶。將A549癌細胞株(ATCC)暴露於2 µM之化合物32及69中2小時，接著添加2 µM之化合物21 5小時。收集細胞且在蛋白酶抑制劑混合物(4693132001，Roche)存在下藉由IGEPAL CA-630及十二烷基硫酸鈉(SDS)裂解。分離可溶性蛋白質溶離份且在4℃下與鏈黴抗生物素蛋白Mag瓊脂糖(28-9857-38，Cytiva)一起培育16小時。收集未結合鏈黴抗生物素蛋白之溶離份，從而允許定量生物素標記之化合物21所耗之GPX4相對於未經鏈黴抗生物素蛋白Mag瓊脂糖治療之樣品的比例。此外，生物素標記之蛋白質藉由在過量生物素(5 mM)存在下頭變性而自鏈黴抗生物素蛋白Mag瓊脂糖溶離。在二硫蘇糖醇(DTT)存在下對未經鏈黴抗生物素蛋白Mag瓊脂糖治療之樣品(亦稱為「輸入物」)、鏈黴抗生物素蛋白未結合之溶離份(亦稱為「上清液」)及鏈黴抗生物素蛋白結合之溶離份(亦稱為「洗出液」)進行熱變性。使用具有12%聚丙烯醯胺濃度之Bis-Tris蛋白質凝膠電泳分離蛋白質。在蛋白質轉移至PVDF膜之後，用抗GPX4單株抗體(ab125066，Abcam)、抗β-肌動蛋白(4970，Cell Signaling Technology)、抗兔IgG HRP結合抗體(31460，ThermoFisher)及鏈黴抗生物素蛋白HRP (N504，ThermoFisher)探測膜。藉由ChemiDoc XRS+ System (Bio-Rad)偵測HRP受質添加之後的化學發光(34580，ThermoFisher)。圖3中描繪用2 µM之生物素標記之模擬化合物21治療A549細胞5小時，此導致未結合鏈黴抗生物素蛋白之溶離份中的GPX4蛋白質相對於其輸入樣品估計耗竭超過50%。用2 µM化合物32及69預治療細胞減少了未結合鏈黴抗生物素蛋白之溶離份中GPX4蛋白質的化合物21依賴性耗竭及結合鏈黴抗生物素蛋白之溶離份中之富集。該等分析結果支援化合物32及69與化合物21競爭GPX4之同一結合位點。 實例 79 ： 化合物 32 在人類細胞中誘導脂質過氧化
GPX4之細胞活性之抑制可藉由脂質過氧化水平之變化來估計，該等變化可藉由BODIPY 581/591 C11之氧化偵測到，其為與在膜過氧化期間產生之自由基反應之比率螢光指示劑(Drummen等人, Free Radic Biol Med 2002 33(4): 473-90；及Martinez等人, Methods Mol Biol 2020 2018: 125-130)。對於藉由流式細胞分析技術進行之脂質過氧化分析，將A549細胞以333,000個細胞/孔接種在12孔培養盤中。第二天，將培養基替換為含有DMSO或化合物32 (0.02、0.2及2 μm)之1 mL培養基，且將培養物在37℃下培育18.5小時。在培育期結束之前三十分鐘，將2 μm BODIPY 581/591 C11 (D3861，Invitrogen)添加至細胞中。在藉由胰蛋白酶消化進行細胞收集之後，對細胞進行流式細胞分析技術分析(BD FACSAria)，且針對活細胞群體進行閘控，分析其與BODIPY 581/591 C11之氧化狀態相關的螢光信號。結果繪示於圖4中。 實例 80 ： 藉由化合物 18 及 32 誘導之細胞死亡被自由基捕獲劑抑制
由鐵死亡誘導劑誘導之細胞死亡可藉由用自由基捕獲劑救援細胞反應表徵，該等自由基捕獲劑防止磷脂氫過氧化物積聚(Stockwell等人, Cell Chem Biol 2020 27(4): 365-375)。因而，費羅他汀-1鑑別為鐵死亡強力抑制劑，針對其已報導自由基捕獲機制(Skouta等人, J Am Chem Soc 2014 136(12): 4551-6；Zika等人, ACS Cent Sci. 2017 3(3): 232-243；及Miotto等人, Redox Biol. 2020; 101328)。為測定化合物18及32是否誘導衰老細胞中之鐵死亡，藉由用亞致死濃度之化學療法(博萊黴素硫酸鹽)治療，繼而係無化學療法之休息期來誘導正常人類皮膚纖維母細胞經歷衰老，類似於先前報導(Aoshiba等人, 2003 3: 436-43)。在37℃下在具有5%二氧化碳及5%氧氣之含濕氣培育箱中，將細胞維持在補充有10%熱滅活胎牛血清之DMEM培養基(高葡萄糖、4 mM L-麩醯胺酸、無丙酮酸鈉)中。與增殖未經治療之細胞相比，藉由減少之EdU (5-乙炔基-2'-脫氧尿苷)併入及增加之SA-β-Gal (衰老相關β-半乳糖苷酶)染色來限定細胞衰老。將衰老纖維母細胞以10,000個細胞/孔之密度接種於96孔盤中。次日，將費羅他汀-1在細胞培養基中稀釋至達到0.375及6 µM之最終濃度且添加至細胞中。在添加費羅他汀-1之後大約30分鐘，將1.11 µM之化合物18及32或10 µM之肽基轉移抑制劑嘌呤黴素添加至細胞中。將細胞與化合物一起培育24小時，此時使用CellTiter-Glo分析(Promega)定量存活率。相對於未治療之對照細胞測定經治療之細胞之存活率。如圖5中所描繪，所測試濃度之費羅他汀-1強力地抑制由化合物18及32誘導之細胞死亡，其支援鐵死亡參與作為細胞死亡機制。
圖1繪示回應於用化合物21治療所培養之細胞的GPX4蛋白質的電泳凝膠遷移率變化。
圖2繪示自用化合物32治療之小鼠皮膚分離之GPX4蛋白質的電泳凝膠遷移率變化。
圖3繪示使用化合物32及69及其經生物素標記之類似物允許鑑別與經培養之人類細胞中之GPX4蛋白質的競爭性結合。
圖4展示本文中所提供之化合物32誘導細胞脂質過氧化之標記物。
圖5展示本文中所提供之化合物18及32之細胞死亡誘導活性可由抗鐵死亡試劑抑制。

Claims (20)

  1. 一種式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中： R 1為-OR 36、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基； R 2為-H、-CN、-CO 2R 7、-CONR 8R 9、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基； 各R 3及R 4獨立地為H、-F或烷基； n為1或2； R 5為-H、-CO 2R 10、-C(O)R 11、-CONR 12R 13、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基； R 6為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基，或當X為=O或=NR 14時不存在； R 27為氫、鹵基、烷基、經取代之烷基、雜烷基、經取代之雜烷基、-NR 28R 29、-NCONR 30R 31、-CONR 32R 33、-CO 2R 34、-NCO 2R 35； X為=O、=NR 14或-OR 15； R 14為-OR 16、-NR 17R 18或-N +R 40R 41R 42； R 7-R 10、R 12、R 13、R 15及R 28-R 36獨立地為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基，或視情況R 8及R 9、R 12及R 13、R 28及R 29、R 30及R 31、R 32及R 33與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環； R 11為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基； R 16為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基、經取代之雜芳基炔基，或為碳水化合物衍生物； R 17及R 18獨立地為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基、經取代之雜芳基炔基、碳水化合物衍生物、R 19CO-、R 20R 21NCO-、R 22OCO-或R 23SO 2-，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代且R 17及R 18兩者均不為R 19CO-、R 21R 20NCO-、R 22OCO-或R 23SO 2-或其任何組合； R 19為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基、經取代之雜芳基炔基或碳水化合物衍生物，或視情況R 19及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代； R 20及R 21獨立地為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基或碳水化合物衍生物，或視情況R 20及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基或經取代之環雜烷基環，其視情況經=O取代，或視情況R 20及R 21與其所連接之原子一起形成環雜烷基或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代； R 22為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基、經取代之雜芳基炔基或碳水化合物衍生物，或視情況R 22及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代；且 R 23為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代，或視情況R 23及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代；且R 40、R 41及R 42為烷基；其限制條件為其中X為=O，n為1，R 3及R 4為-F，R 27為-H，R 1不為苯基或經取代之苯基，但R 1可為在對位處經-OR 25取代之苯基，R 25為經環烷基、經取代之環烷基或-CF 3取代之烷基、環烷基、經取代之環烷基或R 43SO 2-，其中R 43為烷基或CF 3。
  2. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中R 1為經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基，R 2為-H、-CN、-CO 2R 7、-CONR 8R 9、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基；各R 3及R 4獨立地為H或-F，其限制條件為R 3及R 4中之至少一者為-F；R 5為-H、-CO 2R 10、-C(O)R 11、-CONR 12R 13、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基；R 6為-H、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基；R 27為氫、鹵基、-NR 28R 29、-CONR 32R 33或-CO 2R 34；R 7-R 10、R 12、R 13、R 15及R 28-R 36獨立地為-H、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基；R 11獨立地為烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基或經取代之雜芳基；R 16為-H、烷基、烯基、炔基、芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基，或為碳水化合物衍生物；R 17及R 18獨立地為-H、烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、碳水化合物衍生物、R 19CO-、R 20R 21NCO-、R 22OCO-或R 23SO 2-；R 19為烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、經取代之雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基或碳水化合物衍生物，或視情況R 19及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代；R 20及R 21獨立地為烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、經取代之雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基或碳水化合物衍生物，或視情況R 20及R 21與其所連接之原子一起形成環雜烷基或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代；R 22為烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、經取代之雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基或碳水化合物衍生物，或視情況R 22及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代；且R 23為烷基、烯基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、環雜烷基、環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、經取代之雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基或碳水化合物衍生物，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代，或視情況R 23及R 17與其所連接之原子一起形成環雜烷基環或經取代之環雜烷基環，其限制條件為任何經取代之基團視情況經碳水化合物衍生物取代。
  3. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中R 1為經取代之芳基或經取代之苯基。
  4. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中n為1且R 3及R 4為-F。
  5. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中R 2為-H。
  6. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中R 5為-H。
  7. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中X為=O。
  8. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中X為-OR 15且R 6為-H或甲基。
  9. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中X為=NR 14。
  10. 如請求項9之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中R 14為-OR 16。
  11. 如請求項9之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中R 14為-NR 17R 18。
  12. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中R 18為R 20R 21NCO-。
  13. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中R 18為R 22OCO-。
  14. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中R 18為R 20R 21NCO-。
  15. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中R 18為R 23SO 2-。
  16. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1之化合物及醫藥學上可接受之媒劑。
  17. 一種如請求項1之化合物在製造用於治療衰老相關疾病或病症之藥劑中的用途。
  18. 一種式(III)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，其中： R 100為-H、-CO 2R 107、-C(O)R 108、-CONR 109R 110、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基； R 101為-OR 130、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基； R 102為-H、-CN、-CO 2R 111、-CONR 112R 113、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基； 各R 103及R 104獨立地為H、-F或烷基； q為1或2； R 105為-H、-CO 2R 114、-C(O)R 115、-CONR 116R 117、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基； 各R 106獨立地為-H、-CO 2R 118、-C(O)R 119、-CONR 120R 121、OR 122、-NR 123R 124、-NHR 125R 126C(O)R 127、-SO 2NR 128R 130、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、鹵基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基； s為0、1或2； R 109-R 113、R 116-R 118、R 120-R 126和R 128-R 130獨立地為-H、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基； R 107、R 108、R 114、R 115及R 127獨立地為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、芳基烯基、經取代之芳基烯基、芳基炔基、經取代之芳基炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、環雜烷基、經取代之環雜烷基、環雜烯基、經取代之環雜烯基、雜烷基、經取代之雜烷基、雜烯基、經取代之雜烯基、雜炔基、經取代之雜炔基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、雜芳基烯基、經取代之雜芳基烯基、雜芳基炔基或經取代之雜芳基炔基。
  19. 一種醫藥組合物，其包含如請求項18之化合物及醫藥學上可接受之媒劑。
  20. 一種如請求項18之化合物在製造用於治療衰老相關疾病或病症之藥劑中的用途。
TW113120356A 2023-05-31 2024-05-31 Gpx4抑制劑與抗衰老化合物及其用途 TW202502306A (zh)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202363505128P 2023-05-31 2023-05-31
US63/505,128 2023-05-31
US202463567749P 2024-03-20 2024-03-20
US63/567,749 2024-03-20
US202463572605P 2024-04-01 2024-04-01
US63/572,605 2024-04-01

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202502306A true TW202502306A (zh) 2025-01-16

Family

ID=93658767

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW113120356A TW202502306A (zh) 2023-05-31 2024-05-31 Gpx4抑制劑與抗衰老化合物及其用途

Country Status (6)

Country Link
US (3) US20240408124A1 (zh)
CN (1) CN121443281A (zh)
AU (1) AU2024280583A1 (zh)
IL (1) IL324776A (zh)
TW (1) TW202502306A (zh)
WO (1) WO2024249613A2 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2025199126A1 (en) * 2024-03-19 2025-09-25 Rubedo Life Sciences, Inc. Gpx4 inhibitors and senolytic compounds and uses thereof

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3242892C1 (de) * 1982-11-16 1984-07-12 Schering AG, 1000 Berlin und 4709 Bergkamen Verfahren zur Herstellung von 17alpha-(Br oder J)-ethinyl-17ss-hydroxysteroiden
EP0837874B1 (en) * 1995-06-06 2004-12-15 Euro-Celtique S.A. Neuroactive steroids of the androstane and pregnane series
US6664443B1 (en) 1998-05-01 2003-12-16 Mayo Foundation For Medical Education And Research Pathogenic Tau mutations in transgenic mice
US20130203718A1 (en) * 2010-05-07 2013-08-08 Marie-Edith Rafestin-Oblin Progesterone receptor antagonists and uses thereof
US20120005765A1 (en) 2010-07-01 2012-01-05 Saint Louis University Animal model for parkinson's disease
WO2012177927A1 (en) 2011-06-21 2012-12-27 Mayo Foundation For Medical Education And Research Transgenic animals capable of being induced to delete senescent cells
US20140335074A1 (en) 2011-12-13 2014-11-13 Buck Institute For Research On Aging Methods for improving medical therapies
TW201536324A (zh) 2013-06-19 2015-10-01 Buck Inst For Res On Aging 增加醫藥療法有效性之方法
WO2020056349A2 (en) * 2018-09-13 2020-03-19 Evestra, Inc. Lif/lifr antagonist oncology and nonmalignant diseases

Also Published As

Publication number Publication date
US20250319109A1 (en) 2025-10-16
WO2024249613A3 (en) 2025-01-09
US20260007689A1 (en) 2026-01-08
AU2024280583A1 (en) 2025-11-27
US20240408124A1 (en) 2024-12-12
IL324776A (en) 2026-01-01
US12485132B2 (en) 2025-12-02
WO2024249613A2 (en) 2024-12-05
CN121443281A (zh) 2026-01-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102843318B1 (ko) 세놀리틱 조성물 및 이의 사용
TWI765995B (zh) 雙環雜芳基衍生物及其製備與用途
US20260007689A1 (en) GPX4 Inhibitors and Senolytic Compounds and Uses Thereof
US20250222115A1 (en) Drug Conjugates of Sugar Derivatives and Uses Thereof as Senolytic Agents
JPWO2019140188A5 (zh)
WO2025199126A1 (en) Gpx4 inhibitors and senolytic compounds and uses thereof
WO2025117556A1 (en) Phosphorous containing bcl inhibitors and senolytic compounds and uses thereof
WO2025117722A1 (en) Carbon linked bcl inhibitors and senolytic compounds and uses thereof