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TW202509216A - 靶向血管收縮素原的寡核苷酸及其用途 - Google Patents

靶向血管收縮素原的寡核苷酸及其用途 Download PDF

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TW202509216A
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TW113126304A
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高傑
鄭文芝
王浩軍
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大陸商北京安龍生物醫藥有限公司
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Abstract

本發明涉及一種靶向血管收縮素原的寡核苷酸及其用途，所述寡核苷酸顯著抑制AGT基因表達水準，並且藥效持久。

Description

靶向血管收縮素原的寡核苷酸及其用途
本發明涉及一種寡核苷酸，特別是一種用於治療高血壓或相關疾病的靶向寡核苷酸。
1998年，美國兩位科學家Andrew Fire和Craig Mello發現的一種生物學機制，小干擾RNA分子（Small interfering RNA；siRNA）可以介導特定的mRNA的降解（Fire, Andrew, et al. Nature 391.6669 （1998）: 806-811），當RNA分子以雙鏈形式出現在細胞中時，這種機制就會被誘發啟動，即出現RNA干擾現象，這一發現預示著一個新研究領域的開始，這兩位科學家也因此獲得了2006年的諾貝爾生理學和醫學獎。當雙鏈RNA與蛋白質複合物Dicer結合後，Dicer將dsRNA切割成片段，而後另一種蛋白質複合物RISC結合這些片段，siRNA雙鏈中的一條鏈被去除，但另一條鏈仍與RISC複合物結合，RISC藉由單鏈RNA的引導識別並降解靶基因的mRNA，使特定蛋白的表達受到抑制，進而特異性導致基因沉默。
RNA干擾為基因技術的應用開闢了一個新領域。雙鏈RNA（dsRNA）分子已被人工設計用於沉默人類、動物或植物中的特定基因。這種人工設計合成的用於基因沉默的雙鏈小干擾RNA分子（siRNA）被導入細胞並啟動RNA干擾機制以降解對應的mRNA，目前，這種方法是生物學和生物醫學的重要研究工具。此外，目前人們已開發了眾多的siRNA藥物，用以治療病毒感染、心血管疾病、癌症、內分泌失調和其他多種疾病，多數處於研發階段或已獲批上市的siRNA療法，顯示出很好的治療效果。從2018年第一款siRNA藥物上市至今，已有至少6款siRNA在歐盟或美國獲批上市。因此，利用RNA干擾技術抑制特定靶基因表達已經成為一種有效的疾病治療途徑。
肝臟中去唾液酸醣蛋白受體（（asialoglycoprotein receptor, ASGPR）是肝細胞特異性表達的受體，是一種高效的內吞型受體。由於體內生理情況下各種醣蛋白在酶或酸水解唾液酸後，暴露出的次末端是半乳糖殘基，所以ASGPR特異性結合的糖為半乳糖基，故又稱半乳糖特異性受體。半乳糖、半乳糖胺、N-乙醯半乳糖胺（GalNAc）等單糖和多糖分子都對ASGPR有高親和性。ASGPR主要生理功能是介導血液中去唾液酸醣蛋白、脂蛋白等物質的清除，且與病毒性肝炎、肝硬化、肝癌等肝臟疾病的發生發展有著密切聯繫。ASGPR這一特性的發現，對肝源性疾病的診斷及治療起著重要作用（Ashwell G、Harford J, Carbohydrate specific Receptors of the Liver, Ann Rev Biochem 1982 51:531-554）。結構中含有半乳糖或半乳糖胺及其衍生物的肝源性疾病治療藥物可以特異性地與ASGPR親和，從而具有主動肝靶向性，不需要其它的載體系統來輸送。
血壓是指循環系統中血液對血管壁的壓力。血壓主要是由於動物心臟的跳動。在每次心跳期間，血壓在最大（收縮期）血壓（SBP）和最小（舒張期）血壓（DBP）之間變化。平均動脈壓（MAP） 是心跳週期期間的平均動脈壓。血壓可以藉由血壓計（即血壓測量計）測量。靜息時的正常血壓在100-140 mmHg收縮期和60-90Hg舒張期的範圍內，並且通常表示為收縮壓（最高讀數）/ 舒張壓（最低讀數）mmHg。
《中國高血壓臨床實踐指南》（2022版）中推薦將我國成人高血壓的診斷界值由 SBP≥ 140 mmHg 和/或 DBP≥90 mmHg 下調至 SBP≥ 130 mmHg 和/或 DBP≥80 mmHg（1B）
推薦我國成人高血壓患者按血壓水準分為：
1級 （SBP130~139 mmHg 和/或 DBP80~89 mmHg）
SBP130~139 mmHg 和/或 DBP80~89 mmHg 者，伴有臨床合併症、靶器官損害或≥3個心血管危險因素時，心血管病絕對風險才顯著升高。
2級（SBP≥140 mmHg 和/或 DBP≥90 mmHg）（1B）
研究證據顯示SBP≥ 140 mmHg和/或DBP≥90 mmHg者，10年心血管病 累積發病風險已達15%，且其中≥80%伴有2種以上心血管危險因素，絕大多數SBP≥140 mmHg 和/或DBP≥90 mmHg的患者屬於心血管高危人群。
根據病症起因，高血壓還可分為原發性高血壓以及繼發性高血壓。原發性高血壓是多種因素導致的高血壓，或者是由不明原因導致的高血壓，有遺傳、地域或者是鈉水瀦留、交感興奮、RAS啟動等各種各樣的原因，所以原發性高血壓只能夠控制，不能夠根治。繼發性高血壓是指由某種疾病所導致血壓增高，高血壓是原發疾病的臨床症狀之一，占95％。一般繼發性高血壓常見於腎性高血壓、腎動脈狹窄，原發性醛固酮增多症、嗜鉻細胞瘤、多發性大動脈炎等等。
腎素-血管縮素-醛固酮系統（英文縮寫為RAAS或者RAS（腎素-血管收縮素系統））是人體內對心血管功能有調節作用的系統，受交感神經系統領導，分泌產生的血管收縮素具有收縮血管的作用。RAS途徑的過度刺激或活動是高血壓形成的原因之一。血管收縮素原（angiotensinogen，AGT）是serpin家族的成員，也被稱為SERPINA8，由AGT基因編碼，是RAS所有血管收縮素肽的唯一前體。人AGT有485個氨基酸，其中包括一個33個氨基酸的訊號肽，主要在肝臟中產生，並且釋放到體循環中，期間腎素將其轉化為血管收縮素I。隨後藉由血管收縮素轉化酶（ACE）將血管收縮素I轉化成血管收縮素II。血管收縮素Ⅰ能刺激腎上腺髓質分泌腎上腺素，但直接收縮血管的作用不明顯；血管收縮素Ⅱ能使全身小動脈收縮而升高血壓，此外，還可促進腎上腺皮質分泌醛固酮，醛固酮作用於腎小管，起保鈉、保水、排鉀作用，從而引起血量增多，血壓升高。
無臨床合併症的高血壓患者初始降壓藥物，《中國高血壓臨床實踐指南》（2022版）推薦將ACEI、ARB、CCB和利尿劑作為無臨床合併症的高血壓患者的一線初始降壓藥物（1B），對血壓≥140/90 mmHg的高血壓患者，推薦初始聯合降壓藥物治療（1B）。對需要聯合降壓藥物治療的高血壓患者，建議優先選用SPC（single-pill combination，SPC，2C）。SPC的選擇，建議優先選用腎素-血管收縮素系統抑制劑（renin-angiotensin system inhibitor，RASI）+CCB或RASI+利尿劑組合（2C）。2023年3月11日，在2022中國高血壓年會暨第24次國際高血壓及相關疾病學術研討會上，《中國高血壓防治指南》委員會專家組對正在修訂中的《2023中國高血壓防治指南》展望及探討了更新要點，主要聚焦在新增藥物推薦、高血壓流調資料、危險因素細化等方面，作為展望要點之一，血管收縮素受體腦啡肽酶抑制劑（ARNI）首次作為高血壓常用藥進入指南推薦，作用機制如圖1所示。
當前臨床常用的這六類藥物都需要長期每天不間斷的用藥，有些患者的依從性差，其中的副作用是導致依從性差的主要原因，ACEI類和ARB類都可引起乾咳和水腫，嚴重可導致腎功能不全；鈣離子通道拮抗劑（CCB）和β受體阻斷劑類藥副作用可見為心跳加速、臉紅、頭疼、腳腫；β受體阻斷劑類還可導致乏力，對血糖、血脂代謝影響；利尿劑類藥可導致身體發軟、抽筋，嚴重可導致痛風。另外目前口服降壓藥所有作用靶點因為替代途徑的存在經常出現RAAS系統用藥逃逸現象。因此，本領域中存在不同於現有臨床藥物的新的作用機理的、副作用少的有更有效治療的需要。
siRNA的脫靶效應之一是miRNA樣效應。亦即在RNA干擾中的核心效應物的argonaute蛋白將人工引入以誘導RNA干擾的siRNA作為miRNA （微小RNA）處理（Lam等人 （2015） Molecular Therapy Nucleic Acids[分子療法-核酸]（2015）4, e252）。miRNA主要藉由種子區域（來自5 '末端的位置2-9）與用於基因遏制的靶mRNA之間的鹼基配對識別靶基因。由siRNA引起的脫靶源自iRNA的載入有RISC 的反義鏈的種子區域與具有一個或多個mRNA的鹼基互補性。在若干個研究中已經報導了siRNA中的miRNA樣脫靶效應，並且取決於種子區域的序列影響多種基因的表達，並且嚴重到足以引起基於 siRNA的表型篩選中高達30％的陽性命中。此外，在miRNA的情況下，當種子區域與靶之間的相互作用變弱時，它們也被報導藉由其3'末端區域內的補償配對（3'-補償配對）沉默靶基因，暗示miRNA樣脫靶效應可能是由這種機制調節的。已知在siRNA的反義鏈的不同位置加入化學修飾的siRNA設計可以不損害 siRNA基因療法的基因沉默功效，並且消除或降低siRNA的 miRNA樣脫靶效應。如在siRNA反義鏈不同位置處用二醇核酸（glycerol nucleic acid，GNA）修飾的鹼基代替，一般的二醇核酸包括Tgn、Cgn、Agn和Ggn，或者藉由2'磷酸酯與下一個核酸的5'磷酸酯連接的方式消除或降低siRNA的miRNA樣脫靶效應（Schlegel等人（2021年），CN 110582283 A）。
為了解決現有技術中存在的問題，本發明的目的在於提供療效好、安全性高、藥效持久的靶向AGT的抑制劑。
在一方面，本發明提供了用於降低AGT的表達的寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽，前述寡核苷酸包含有義鏈和反義鏈，前述有義鏈具有與SEQ ID NO: 2-219、789-804、868-871中任一所示的序列或其片段、或前述序列或其片段的修飾序列至少80％以上的序列同一性的序列，優選具有85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%以上的序列同一性的序列；前述反義鏈具有與SEQ ID NO: 221-424、805-821、872-875中任一所示的序列或其片段、或前述序列或其片段的修飾序列至少80％以上的序列同一性的序列，優選具有85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%以上的序列同一性的序列。
在另一方面，本發明提供了一種組合物，其包含前述寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽，以及任選地藥學上可接受的載體。
在另一方面，本發明提供了前述的寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽或組合物在製備用於治療或/和預防AGT-相關疾病的藥物中的用途。
實驗證明，本發明的候選化合物對人類肝癌細胞系Hep3B中AGT基因表達水準的抑制有顯著效果；其中一些候選化合物對Hep3B細胞株的AGT基因表達水準抑制效果均達到了90%以上，一些化合物對食蟹猴肝細胞AGT基因表達的抑制達到70%、80%、甚至90%以上，表現出良好的抑制效果。其中一些化合物給藥含hAGT轉基因小鼠約2月後（Day29）AGT蛋白降低還能維持在60%左右；一些化合物可以在小鼠體內連續四周（Day 28）使AGT蛋白降低80%以上，藥效持久。可用於治療原發性高血壓和繼發性高血壓及其相關疾病。
AGT基因表達的抑制可以由細胞系（此類細胞可以在例如來源於受試者的樣品中存在）表達的mRNA的量的減少表示，在細胞或細胞群中轉錄了AGT基因並且其是被處理的（例如，藉由使一個或多個細胞與本發明的iRNA接觸，或者藉由向其中存在或曾經存在細胞的受試者施用本發明的iRNA），以使得與同細胞系基本上相同但未被處理的細胞系（未使用iRNA處理或者未使用靶向目標基因的iRNA處理的對照細胞）相比AGT基因的表達抑制。在優選實施方式中，抑制藉由實施例1中提供的方法在物種匹配細胞系中使用0.5nM、0.05nM siRNA濃度評估抑制，使用下述公式，由所處理的細胞中的mRNA表達量相對於對照細胞中的mRNA水準的2^-△△CT表示，其中，用管家基因（例如hTBP或GAPDH）作為內參用於歸一化： △CT= CT AGT-CT 管家基因△△CT=△CT 處理細胞-△CT 對照細胞mRNA水準=2 -△△CT
在其他實施方式中，AGT基因表達的抑制可以根據與AGT基因表達功能相關的參數的降低來評估，例如，來自受試者的血液或血清中的AGT蛋白水準。AGT基因沉默可以在任何表達AGT的細胞中確定，無論是內源的還是來自表達構建體的異源的，並且藉由本領域公知的任何測定。
AGT蛋白表達的抑制可以藉由由細胞或細胞群或者在受試者樣品（例如，在來自受試者的血液樣品中的蛋白水準）中表達的AGT蛋白水準的降低來體現。如上所述，為評估mRNA抑制，在處理的細胞或細胞群中蛋白表達水準的抑制可以類似地表示為對照細胞或細胞群中蛋白水準的百分比，或者在受試者樣品（例如，來自其的血液或血清）中蛋白水準的變化，抑制藉由實施例3、實施例4、實施例5、實施例6或實施例7中提供的方法在評估抑制，使用下述公式，由所處理的樣本中（例如，來自其的血液或血清）的AGT表達量相對於對照中或相對於給藥前的AGT表達量的百分比表示。
mRNA的抑制百分比=（蛋白表達量 處理細胞-蛋白表達量 對照細胞）/蛋白表達量 對照細胞*100%
可用於評估AGT基因表達的抑制的對照細胞、細胞群或受試者樣品包括尚未與本發明的RNAi劑接觸的細胞、細胞群或受試者樣品。例如，在用RNAi劑處理受試者或者適當匹配的群對照之前，對照細胞、細胞系或者受試者樣品可以來自個體受試者（例如，人或動物受試者）。
在本發明方法的一些實施方式中，將iRNA施用於受試者，以使得將iRNA遞送至受試者內的特定位點。AGT表達的抑制可以藉由測量來自受試者特定部位（例如，肝或血液）的流體或組織的樣品中AGT mRNA或AGT蛋白的水準或變化來評估。
在本發明中，除非另有說明，否則本文中使用的科學和技術名詞具有本領域技術人員所通常理解的含義。並且，本文中所用的蛋白質和核酸化學、分子生物學、細胞和組織培養、微生物學、免疫學相關術語和實驗室操作步驟均為相應領域內廣泛使用的術語和常規步驟。同時，為了更好地理解本發明，下面提供相關術語的定義和解釋。
如本文所用，如應用於一種或多種目標值的術語“約”或“近似”是指與參考值類似的值。在某些實施方案中，除非另有說明或另外從上下文顯而易見，否則術語“近似”或“約”是指落入所述參考值在任一方向（大於或小於）的20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少內的值的範圍（除非這種數字將超過可能值的100%）。
如本文所用，術語“血管收縮素原”可以與術語“AGT”交換使用，指公知的基因及多肽，本領域中也稱為Serpin肽酶抑制劑，分支A，成員8；α-1抗蛋白酶；抗胰蛋白酶；SERPINA8；血管收縮素I；Serpin A8；血管收縮素II；α-1抗蛋白酶血管收縮素原；抗胰蛋白酶；前血管收縮素原2；ANHU；絲氨酸蛋白酶抑制劑；及半胱氨酸蛋白酶抑制劑。
如本文所用，術語“互補”是指核苷酸（例如，在相對的核酸上或在單一核酸鏈的相對區域上的兩個核苷酸上）之間允許核苷酸彼此形成鹼基對的結構關係。例如，一個核酸的與相對核酸的嘧啶核苷酸互補的嘌呤核苷酸可以藉由彼此形成氫鍵而鹼基配對在一起。在一些實施方案中，互補的核苷酸可以以沃森-克裡克（Watson-Crick）方式或以允許形成穩定雙鏈體的任何其他方式鹼基配對。在一些實施方案中，兩個核酸可以具有與彼此互補以便形成互補區域的核苷酸序列，如本文所述。
如本文所用，術語“鏈”是指藉由核苷酸間鍵（例如，磷酸二酯鍵、硫代磷酸酯鍵）連接在一起的核苷酸的單一連續序列。在一些實施方案中，鏈具有兩個游離末端，例如5'-末端和3'-末端。
如本文所用，術語“去氧核醣核苷酸”是指與核醣核苷酸相比在其戊糖的2'位置處具有氫的核苷酸。修飾的去氧核醣核苷酸是除了在2'位置以外具有一個或多個原子的修飾或取代（包括醣、磷酸酯基團或鹼基中的修飾或取代或醣、磷酸酯基團或鹼基的修飾或取代）的去氧核醣核苷酸。
如本文所用，術語“雙鏈RNA”或“dsRNA”是指核醣核酸分子的複合物，具有雙鏈體結構，所述雙鏈體結構包括兩條反平行且基本上互補的核酸鏈，相對於靶RNA（即，AGT基因）具有“有義”和“反義”取向。在本發明的一些實施例中，雙鏈RNA（dsRNA）藉由本文中稱為RNA干擾或RNAi的轉錄後基因沉默機制觸發靶RNA（例如，mRNA）的降解。一般而言，dsRNA分子的每條鏈的大多數核苷酸是核醣核苷酸，但如本文詳細描述的，每條鏈或兩條鏈也可以包含一種或多種非核醣核苷酸，例如去氧核醣核苷酸或經修飾的核苷酸。另外，如本文所用，“iRNA”可以包含具有化學修飾的核醣核苷酸；iRNA可以包含在多個核苷酸處的實質性修飾。
如本文所用，術語“經修飾的核苷酸”是指獨立地具有經修飾的糖部分、經修飾的核苷酸間鍵或經修飾的核鹼基或其任何組合的核苷酸。因此，術語“經修飾的核苷酸”涵蓋對核苷間鍵、糖部分或核鹼基的取代、添加或去除，例如官能團或原子。適用於本發明的藥劑的修飾包含本文所公開的或本領域已知的所有類型的修飾。
如本文所用，術語“寡核苷酸”是指短核酸，例如長度小於100個核苷酸的短核酸。寡核苷酸可以包含核醣核苷酸、去氧核醣核苷酸和/或修飾的核苷酸，包括例如修飾的核醣核苷酸。寡核苷酸可以是單鏈或雙鏈的。寡核苷酸可以具有或可以不具有雙鏈體區域。作為一組非限制性實例，寡核苷酸可以是，但不限於，小干擾RNA （siRNA）、微RNA（miRNA）、短髮夾RNA（shRNA）、Dicer底物干擾RNA（dsiRNA）、反義寡核苷酸、短siRNA或單鏈siRNA。在一些實施方案中，雙鏈寡核苷酸是RNAi寡核苷酸。如本文所用，“綴合”是指兩個或多個各自具有特定功能的化學部分之間以共價連接的方式彼此連接；相應地，“綴合物”是指該各個化學部分之間藉由共價連接而形成的化合物。進一步地，“siRNA綴合物”表示一個或多個具有特定功能的化學部分共價連接至siRNA上而形成的化合物。在下文中，有時也將本發明的siRNA綴合物簡稱為“綴合物”。siRNA綴合物應根據上下文，理解為siRNA綴合物的總稱，第一種siRNA綴合物或第二種siRNA綴合物，或siRNA有義鏈綴合物或siRNA反義鏈綴合物。
如本文所用，術語“雙鏈寡核苷酸”是指基本上呈雙鏈體形式的寡核苷酸。在一些實施方案中，在共價分離的核酸鏈的核苷酸的反向平行序列之間形成雙鏈寡核苷酸的一個或多個雙鏈體區域的互補鹼基配對。在一些實施方案中，在共價連接的核酸鏈的核苷酸的反向平行序列之間形成雙鏈寡核苷酸的一個或多個雙鏈體區域的互補鹼基配對。在一些實施方案中，從單一核酸鏈形成雙鏈寡核苷酸的一個或多個雙鏈體區域的互補鹼基配對，所述單一核酸鏈被折疊（例如，經由髮夾），以提供在一起鹼基配對的核苷酸的互補的反向平行序列。在一些實施方案中，雙鏈寡核苷酸包含彼此完全雙鏈體化的兩條共價分離的核酸鏈。然而，在一些實施方案中，雙鏈寡核苷酸包含部分雙鏈體化、例如在一個或兩個末端具有突出端的兩條共價分離的核酸鏈。在一些實施方案中，雙鏈寡核苷酸包含核苷酸的反向平行序列，其部分互補，且因此，可以具有一個或多個錯配，所述錯配可以包括內部錯配或末端錯配。
如本文所使用的，術語“核苷酸突出端”是指從雙鏈iRNA的雙鏈體結構突出的至少一個未配對的核苷酸。例如，當dsRNA的一條鏈的3'端延伸超過另一條鏈的5'端時，或者反之亦然，則存在核苷酸突出端。dsRNA可以包括至少一個核苷酸的突出端；可替代地，突出端可以包括至少兩個核苷酸、至少三個核苷酸、至少四個核苷酸、至少五個核苷酸或更多。核苷酸突出端可以包括以下或由以下組成：核苷酸/核苷類似物，包含去氧核苷酸/核苷。突出端可以在有義鏈、反義鏈或其任何組合上。此外，突出端的核苷酸可以存在於dsRNA的反義鏈或有義鏈的5'端、3'端或兩端上。
如本文所用，術語“裸序列”是指未經修飾的核苷酸序列。
如本文所用，術語“受試者”是內源性或異源性表達靶基因的動物，如哺乳動物，包含靈長類動物（如人、非人靈長類動物，例如猴子和黑猩猩）、非靈長類動物（如牛、豬、馬、山羊、兔子、綿羊、倉鼠、豚鼠、貓、狗、大鼠或小鼠）或鳥類。在一個實施例中，受試者是人。
如本文所用，術語“治療（treating）”或“治療（treatment）”是指有益或期望的結果，如減少受試者的AGT相關病症的至少一種體征或症狀。治療還包含減少與不期望的AGT表達相關的一種或多種體征或症狀；減輕不期望的AGT啟動或穩定的程度；改善或緩和不期望的AGT啟動或穩定。治療還包含減少與不期望的AGT表達相關的一種或多種體征或症狀。“治療”也可以意指與沒有治療的預期存活期相比，延長存活期。
如本文所用，術語“預防（prevention）”或“預防（preventing）”當用於提及疾病或病症時，將受益於AGT基因表達或agt蛋白產生的減少。
如本文所用，術語“治療有效量”旨在包含當向患有AGT相關病症的受試者施用時足以影響疾病的治療（例如，藉由減少、改善或維持現有疾病或一種或多種疾病症狀）的RNAi藥劑的量。“治療有效量”可能因RNAi藥劑、藥劑如何施用、疾病和其嚴重程度以及病史、年齡、體重、家族史、基因組成、先前或伴隨治療的類型（如果有的話）以及待治療受試者的其它個體特徵而異。
如本文所用，術語“預防有效量”旨在包含當向患有AGT相關病症的受試者施用時足以預防或改善病症或所述病症的一種或多種症狀的RNAi藥劑的量。改善疾病包含減緩疾病的進程或降低後期發展的疾病的嚴重程度。“預防有效量”可能因RNAi藥劑、藥劑如何施用、疾病風險的程度以及病史、年齡、體重、家族史、基因構成、先前治療或伴隨治療的類型（如果有的話）以及要治療的患者的其它個體特徵而變化。
如本文所用，術語“藥學上可接受的載體”是指藥學上可接受的材料、組合物或媒劑，如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、製造助劑（例如，潤滑劑、滑石鎂、硬脂酸鈣或硬脂酸鋅、或硬脂酸）、或溶劑封裝材料（涉及將主題化合物從身體的一個器官或部分攜帶或運送到身體的另一個器官或部分）。在與調配物的其它成分相容並且對被治療的受試者無害的意義上來講，每種載體必須是“可接受的”。此類載體在本領域中是已知的。藥學上可接受的載體包含用於藉由注射施用的載體。
在一方面，本發明提供了一種用於降低AGT的表達的寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽，前述寡核苷酸包含有義鏈和反義鏈，前述有義鏈具有與SEQ ID NO: 2-219、789-804、868-871中任一所示的序列或其片段、或前述序列或其片段的修飾序列至少80％以上的序列同一性的序列，優選具有85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%以上的序列同一性的序列；前述反義鏈具有與SEQ ID NO: 221-424、805-821、872-875中任一所示的序列或其片段、或前述序列或其片段的修飾序列至少80％以上的序列同一性的序列，優選具有85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%以上的序列同一性的序列。
在一些實施方案中，其中每個鏈在長度上獨立地為19至25個核苷酸。
在一些實施方案中，前述反義鏈長度為19至23個核苷酸。
在一些實施方案中，前述有義鏈長度為19至23個核苷酸。
在一些實施方案中，前述寡核苷酸包含長度為一個或多個核苷酸的5'和/或3'-突出端序列，其中前述5'和/或3'-突出端序列存在於反義鏈和/或有義鏈上。在一個實施例中，前述寡核苷酸的反義鏈在3'端或5'端處的突出端具有1個至10個核苷酸，例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個核苷酸。在一個實施例中，dsRNA的有義鏈在3'端或5'端處的突出端具有1個至10個核苷酸，例如，1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個核苷酸。在另一個實施例中，突出端中的一個或多個核苷酸被核苷硫代磷酸鹽替代。
在一些實施方案中，前述反義鏈帶有一個突出端。
在一些實施方案中，前述有義鏈帶有一個突出端。
在一些實施方案中，前述寡核苷酸包含長度為兩個核苷酸的3'-突出端序列。
在一些實施方案中，前述3'-突出端序列存在於前述有義鏈上；優選地，前述突出端序列選自：GG、GA、GC、UC、UG、UU、UA、CA、CC、CG、CU、AA、AG、AU、AC。
在一些實施方案中，前述3'-突出端序列存在於前述反義鏈上；優選地，前述突出端序列選自：UU、UC、UA、UG、GA、GG、GU、GC、TT、AG、AU、AA、AC、CA、CC、U；更優選地，前述突出端序列為UU。
在一些實施方案中，前述寡核苷酸包含長度各自在19至23個核苷酸的範圍內的反義鏈和有義鏈。
在一些實施方案中，前述有義鏈與前述反義鏈形成雙鏈體區域。
在一些實施方案中，前述有義鏈和前述反義鏈分別為19/21配對、21/21配對、21/23配對或23/23配對的雙鏈體結構。
在一些實施方案中，前述寡核苷酸包含長度為兩個核苷酸的3'-突出端序列，其中前述3'-突出端序列存在於前述反義鏈上，且其中前述有義鏈長度為19個核苷酸且前述反義鏈長度為21個核苷酸，使得前述有義鏈和反義鏈形成長度為19個核苷酸的雙鏈體。
在一些實施方案中，前述寡核苷酸包含長度為兩個核苷酸的3'-突出端序列，其中前述3'-突出端序列存在於前述反義鏈和有義鏈上，且其中前述有義鏈長度為21個核苷酸且前述反義鏈長度為21個核苷酸，使得前述有義鏈和反義鏈形成長度為19個核苷酸的雙鏈體。
在一些實施方案中，前述寡核苷酸包含長度為兩個核苷酸的3'-突出端序列，其中前述3'-突出端序列存在於前述反義鏈上，且其中前述有義鏈長度為21個核苷酸且前述反義鏈長度為23個核苷酸，使得前述有義鏈和反義鏈形成長度為21個核苷酸的雙鏈體。
在一些實施方案中，前述寡核苷酸包含長度為兩個核苷酸的3'-突出端序列，其中前述3'-突出端序列存在於前述反義鏈和有義鏈上，且其中前述有義鏈長度為23個核苷酸且前述反義鏈長度為23個核苷酸，使得前述有義鏈和反義鏈形成長度為21個核苷酸的雙鏈體。
在一些實施方案中，前述有義鏈的修飾序列包含選自SEQ ID NO: 426-598、822-838、876-886中任一前述的序列；
在一些實施方案中，前述反義鏈的修飾序列包含選自SEQ ID NO: 600--676、678-788、839-867、887-911中任一前述的序列。
在一些實施方案中，前述寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽優選以羧酸鹽、鈉鹽、三乙胺鹽或其它可藥用鹽的形式製備或合成。
在一些實施方案中，前述寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽更優選為其鈉鹽或三乙胺鹽。
在一些實施方案中，前述有義鏈包含選自74、101、107、108、111-113、129、133、135、137、148、166、178、184、789、794、798、799、800、801、802、803、804、870中任一所述的未經修飾寡核苷酸，或SEQ ID NO: 471、477、478、481-483、518、536、548、554、592-598、822、827、831、832、833、834、835、836、837、838中任一所述的經修飾寡核苷酸。
在一些實施方案中，前述反義鏈包含選自SEQ ID NO: 259、281、286、311、317、318、319、334、338、340、342、353、371、383、389、805、808、811、812、813、814、815、816、817、818、874中任一所述的未經修飾寡核苷酸，或SEQ ID NO: 643、644、645、647、648、681、678、679、680、764、610、773、774、775、776、777、778、779、780、782、783、785、839、854、857、858、859、860、861、862、863、864中任一所述的經修飾寡核苷酸。
在一些優選的實施方案中，前述寡核苷酸具有有義鏈和反義鏈，其中，前述寡核苷酸選自下述有義鏈和反義鏈組合中的任一：
（1）有義鏈包含SEQ ID NO: 101所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 311所示的序列；
（2）有義鏈包含SEQ ID NO: 107所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 281所示的序列；
（3）有義鏈包含SEQ ID NO: 108所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 286所示的序列；
（4）有義鏈包含SEQ ID NO: 111所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 317所示的序列；
（5）有義鏈包含SEQ ID NO: 112所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 318所示的序列；
（6）有義鏈包含SEQ ID NO: 113所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 319所示的序列；
（7）有義鏈包含SEQ ID NO: 129所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 334所示的序列；
（8）有義鏈包含SEQ ID NO: 133所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 338所示的序列；
（9）有義鏈包含SEQ ID NO: 135所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 340所示的序列；
（10）有義鏈包含SEQ ID NO: 137所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 342所示的序列；
（11）有義鏈包含SEQ ID NO: 148所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 353所示的序列；
（12）有義鏈包含SEQ ID NO: 166所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 371所示的序列；
（13）有義鏈包含SEQ ID NO: 178所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 383所示的序列；
（14）有義鏈包含SEQ ID NO: 184所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 389所示的序列；
（15）有義鏈包含SEQ ID NO: 113所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 808所示的序列；
（16）有義鏈包含SEQ ID NO: 113所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 811所示的序列；
（17）有義鏈包含SEQ ID NO: 113所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 818所示的序列；
（18）有義鏈包含SEQ ID NO: 789所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 805所示的序列；
（19）有義鏈包含SEQ ID NO: 794所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 805所示的序列；
（20）有義鏈包含SEQ ID NO: 798所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 805所示的序列；
（21）有義鏈包含SEQ ID NO: 799所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 812所示的序列；
（22）有義鏈包含SEQ ID NO: 800所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 813所示的序列；
（23）有義鏈包含SEQ ID NO: 801所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 814所示的序列；
（24）有義鏈包含SEQ ID NO: 802所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 815所示的序列；
（25）有義鏈包含SEQ ID NO: 803所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 816所示的序列；
（26）有義鏈包含SEQ ID NO: 804所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 817所示的序列；
（27）有義鏈包含SEQ ID NO: 868所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 872所示的序列；
（28）有義鏈包含SEQ ID NO: 869所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 873所示的序列；
（29）有義鏈包含SEQ ID NO: 870所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 874所示的序列；
（30）有義鏈包含SEQ ID NO: 871所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 875所示的序列；和
（31）有義鏈包含SEQ ID NO: 74所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 259所示的序列；
其中每個鏈在長度上獨立地為19至25個核苷酸。
在一些實施方案中，前述寡核苷酸包含至少一個經修飾的核苷酸。
在一些實施方案中，前述經修飾的核苷酸中的至少一種經修飾的核苷酸選自以下組成的組：去氧核苷酸、3'末端去氧胸苷（dT）核苷酸、2'-O-甲基修飾的核苷酸、2'-氟修飾的核苷酸、2'-去氧修飾的核苷酸、鎖核苷酸、2'-5'-連接核醣核苷酸（3'-RNA）、解鎖核苷酸、構象限制性核苷酸、約束乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、2'-氨基修飾的核苷酸、2'-O-烯丙基修飾的核苷酸、2'-O-烷基修飾的核苷酸、2'-羥基修飾的核苷酸、2'-甲氧基乙基修飾的核苷酸、2'-O-烷基修飾的核苷酸、嗎啉代核苷酸、氨基磷酸酯、包括非天然鹼基的核苷酸、四氫吡喃修飾的核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾的核苷酸、環己烯基修飾的核苷酸、包括硫代磷酸酯基的核苷酸、包括甲基膦酸酯基的核苷酸、包括5'-磷酸酯的核苷酸、包括5'-磷酸酯模擬物的核苷酸、乙烯基-膦酸酯核苷酸、熱不穩定核苷酸、二醇修飾的核苷酸（glycol modified nucleotide）、包括2'磷酸酯的核苷酸和2-O-（N-甲基乙醯胺）修飾的核苷酸；以及其組合。
在一些實施方案中，前述經修飾的核苷酸中的至少一種經修飾的核苷酸選自由以下組成的組：LNA、HNA、CeNA、2′-甲氧基乙基、2′-O-烷基、2′-O-烯丙基、2′-C-烯丙基、2′-氟、2′-去氧、2'-羥基和乙二醇；以及其組合。
在一些實施方案中，前述經修飾的核苷酸中的至少一種經修飾的核苷酸選自由以下組成的組：去氧核苷酸、2'-O-甲基修飾的核苷酸、2'-氟修飾的核苷酸、2'-去氧修飾的核苷酸、乙二醇修飾的核苷酸（GNA）、包括2'磷酸酯的核苷酸和包括硫代磷酸酯基的核苷酸；以及其組合。
在一些實施方案中，前述寡核苷酸包含至少一個2'-修飾的核苷酸。例如，這些核苷酸可以是選自2'-烷氧基修飾的核苷酸、2'-經取代的烷氧基修飾的核苷酸、2'-烷基修飾的核苷酸、2'-經取代的烷基修飾的核苷酸、2'-氟修飾的核苷酸、2'-醯基氨基修飾的核苷酸、2'-去氧修飾的核苷酸、2'-O-烯丙基修飾的核苷酸、2'-O-烷基修飾的核苷酸、2'-羥基修飾的核苷酸、2'-甲氧基乙基修飾的核苷酸、2'-氨基修飾的核苷酸、2'-經取代的氨基修飾的核苷酸、2'-去氧核苷酸、包括2'磷酸酯的核苷酸和2'-O-（N-甲基乙醯胺）修飾的核苷酸中的一種或多種。例如C1-C3烷氧基（例如甲氧基）；取代的烷氧基（例如C 1-C 3烷氧基取代的C 1-C 3烷氧基，例如甲氧基乙氧基）；烷基（例如C 1-C 3烷基，例如甲基）、取代的烷基（例如C 1-C 3烷氧基取代的C 1-C 3烷基，例如甲氧基甲基、甲氧基乙基）；氨基（-NH 2）、取代的氨基（例如C 1-C 3烷基單或雙取代的氨基，例如甲氨基、乙基氨基），但不限於此。
在一些實施方案中，前述2'-修飾的核苷酸選自2'-烷氧基修飾的核苷酸、2'-經取代的烷氧基修飾的核苷酸、2'-烷基修飾的核苷酸、2'-經取代的烷基修飾的核苷酸、2'-氨基修飾的核苷酸、2'-經取代的氨基修飾的核苷酸、2'-去氧核苷酸中的一種或多種。
在一些實施方案中，前述2'-修飾是選自以下的修飾：2'-甲氧基、2'-乙醯氨基、2'-氨基乙基、2'-氟、2'-O-甲氧基乙基和2'-氟-β-d-阿拉伯核醣核酸。
在一些實施方案中，前述修飾是選自以下的修飾：5'-磷酸酯類似物修飾、2'-甲氧基（CH 3O-，m）、2'-氟（f）、2’-乙醯氨基（CH 3CO-NH-）和硫代磷酸酯（s）。
在一些實施方案中，前述2'-修飾是2'-甲氧基修飾。
在一些實施方案中，前述2'-修飾是2'-乙醯氨基。
在一些實施方案中，前述寡核苷酸的所有核苷酸都是修飾的。
在一些實施方案中，前述寡核苷酸可包含二醇核酸（GNA）修飾。
在一些實施方案中，前述二醇核酸（GNA）修飾選自腺苷-二醇核酸、胞苷-二醇核酸、胸苷-二醇核酸和鳥苷-二醇核酸。
在一些實施方案中，前述二醇核酸（GNA）修飾選自式（I）所示的胸苷-二醇核酸S-異構體（Tgn）、式（II）所示的胞苷-二醇核酸S-異構體（Cgn）、式（III）所示的腺苷-二醇核酸S-異構體（Agn）和式（IV）所示的鳥苷-二醇核酸S-異構體（Ggn）； 、 、 、 ；
在一些實施方案中，前述寡核苷酸可包含2'-5'-磷酸二酯鍵。
在一些實施方案中，前述寡核苷酸包含選自式（V）所示的尿苷-2'-磷酸酯（U-2'5'）、式（VI）所示的鳥苷-2'-磷酸酯（G-2'5'）；式（VII）所示的胞苷-2'-磷酸酯（C-2'5'）；式（VIII）所示腺苷-2'-磷酸酯（A-2'5'）和式（IX））所示的胸苷-2'-磷酸酯（T-2'5'）； 、 、 、 、
在一些實施方案中，前述寡核苷酸還包含5'-磷酸酯類似物修飾的核苷酸。
在一些實施方案中，前述磷酸酯類似物是氧基甲基膦酸酯、乙烯基膦酸酯或丙二醯基膦酸酯。
在一些實施方案中，前述反義鏈的5'-核苷酸的糖的4'-碳包含磷酸酯類似物。
在一些實施方案中，前述5'-磷酸酯類似物修飾的核苷酸為式（X）所示的APU。在一些實施方案中，前述5'-磷酸酯類似物修飾的核苷酸為式（XI） 所示的VPUm； ； 。
在一些實施方案中，前述寡核苷酸包含至少一個經修飾的核苷酸間鍵。
在一些實施方案中，前述至少一個經修飾的核苷酸間鍵是硫代磷酸酯鍵。硫代磷酸酯核苷酸間鍵修飾可以發生在鏈的任何位置中的有義鏈、反義鏈或兩條鏈的任何核苷酸上。例如，核苷酸間鍵修飾可以發生在有義鏈或反義鏈上的每個核苷酸上；每個核苷酸間鍵修飾可以在有義鏈或反義鏈上以交替模式發生；或有義鏈或反義鏈可以以交替模式含有兩種核苷酸間鍵修飾。有義鏈上的核苷酸間鍵修飾的交替模式可以與反義鏈相同或不同，並且有義鏈上核苷酸間鍵修飾的交替模式可以相對於反義鏈上核苷酸間鍵的交替模式具有偏移。在一個實施例中，雙鏈RNAi藥劑包括6個至8個硫代磷酸酯核苷酸間鍵。在一些實施例中，反義鏈在5'端處包括兩個硫代磷酸酯核苷酸間鍵，並且在3'端處包括兩個硫代磷酸酯核苷酸間鍵，並且有義鏈在5'端或3'端處包括至少兩個硫代磷酸酯核苷酸間鍵。
在一些優選的實施方案中，前述寡核苷酸包含選自下述有義鏈和反義鏈組合中的任一：
（1）有義鏈包含SEQ ID NO: 477所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 643所示的序列；
（2）有義鏈包含SEQ ID NO:471所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 644所示的序列；
（3）有義鏈包含SEQ ID NO:478所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 645所示的序列；
（4）有義鏈包含SEQ ID NO:482所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 647所示的序列；
（5）有義鏈包含SEQ ID NO:483所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 648所示的序列；
（6）有義鏈包含SEQ ID NO:481所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 681所示的序列；
（7）有義鏈包含SEQ ID NO:471所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 678所示的序列；
（8）有義鏈包含SEQ ID NO:478所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 679所示的序列；
（9）有義鏈包含SEQ ID NO:483所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 680所示的序列；
（10）有義鏈包含SEQ ID NO:594所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 764所示的序列；
（11）有義鏈包含SEQ ID NO:593所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 610所示的序列；
（12）有義鏈包含SEQ ID NO:592所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 773所示的序列；
（13）有義鏈包含SEQ ID NO:592所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 774所示的序列；
（14）有義鏈包含SEQ ID NO:592所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 775所示的序列；
（15）有義鏈包含SEQ ID NO:595所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 776所示的序列；
（16）有義鏈包含SEQ ID NO:596所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 777所示的序列；
（17）有義鏈包含SEQ ID NO:597所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 778所示的序列；
（18）有義鏈包含SEQ ID NO:598所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 779所示的序列；
（19）有義鏈包含SEQ ID NO:518所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 780所示的序列；
（20）有義鏈包含SEQ ID NO:536所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 782所示的序列；
（21）有義鏈包含SEQ ID NO:548所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 783所示的序列；
（22）有義鏈包含SEQ ID NO:554所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 785所示的序列；
（23）有義鏈包含SEQ ID NO: 592所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 854所示的序列；
（24）有義鏈包含SEQ ID NO: 592所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 857所示的序列；
（25）有義鏈包含SEQ ID NO: 592所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 864所示的序列；
（26）有義鏈包含SEQ ID NO: 822所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 839所示的序列；
（27）有義鏈包含SEQ ID NO: 827所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 839所示的序列；
（28）有義鏈包含SEQ ID NO: 831所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 839所示的序列；
（29）有義鏈包含SEQ ID NO: 598所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 840所示的序列；
（30）有義鏈包含SEQ ID NO: 832所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 841所示的序列；
（31）有義鏈包含SEQ ID NO: 832所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 842所示的序列；
（32）有義鏈包含SEQ ID NO: 832所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 848所示的序列；
（33）有義鏈包含SEQ ID NO: 832所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 849所示的序列；
（34）有義鏈包含SEQ ID NO: 832所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 850所示的序列；
（35）有義鏈包含SEQ ID NO: 833所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 858所示的序列；
（36）有義鏈包含SEQ ID NO: 834所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 859所示的序列；
（37）有義鏈包含SEQ ID NO: 835所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 860所示的序列；
（38）有義鏈包含SEQ ID NO: 836所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 861所示的序列；
（39）有義鏈包含SEQ ID NO: 837所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 862所示的序列；
（40）有義鏈包含SEQ ID NO: 838所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 863所示的序列；
（41）有義鏈包含SEQ ID NO: 882所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 894所示的序列；
（42）有義鏈包含SEQ ID NO: 882所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 902所示的序列；
（43）有義鏈包含SEQ ID NO: 884所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 896所示的序列；
（44）有義鏈包含SEQ ID NO: 884所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 903所示的序列；
（45）有義鏈包含SEQ ID NO: 592所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 905所示的序列；
（46）有義鏈包含SEQ ID NO: 592所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 907所示的序列；
（47）有義鏈包含SEQ ID NO: 882所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 910所示的序列；和
（48）有義鏈包含SEQ ID NO: 882所示的序列，和反義鏈包含SEQ ID NO: 911所示的序列；
其中每個鏈在長度上獨立地為19至25個核苷酸。
在一些優選的實施方案中，前述寡核苷酸包含選自下述有義鏈和反義鏈組合中的任一：
（1）SEQ ID NO: 594所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 764所示的反義鏈；
（2）SEQ ID NO:593所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 610所示的反義鏈；
（3）SEQ ID NO:592所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 773所示的反義鏈；
（4）SEQ ID NO:592所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 774所示的反義鏈；
（5）SEQ ID NO:592所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 775所示的反義鏈；
（6）SEQ ID NO:595所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 776所示的反義鏈；
（7）SEQ ID NO:596所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 777所示的反義鏈；
（8）SEQ ID NO:597所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 778所示的反義鏈；
（9）SEQ ID NO:598所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 779所示的反義鏈；
（10）SEQ ID NO:518所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 780所示的反義鏈；
（11）SEQ ID NO:536所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 782所示的反義鏈；
（12）SEQ ID NO:548所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 783所示的反義鏈；
（13）SEQ ID NO:554所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 785所示的反義鏈；
（14）SEQ ID NO: 592所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 854所示的反義鏈；
（15）SEQ ID NO: 592所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 857所示的反義鏈；
（16）SEQ ID NO: 592所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 864所示的反義鏈；
（17）SEQ ID NO: 822所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 839所示的反義鏈；
（18）SEQ ID NO: 827所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 839所示的反義鏈；
（19）SEQ ID NO: 831所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 839所示的反義鏈；
（20）SEQ ID NO: 598所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 840所示的反義鏈；
（21）SEQ ID NO: 832所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 841所示的反義鏈；
（22）SEQ ID NO: 832所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 842所示的反義鏈；
（23）SEQ ID NO: 832所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 848所示的反義鏈；
（24）SEQ ID NO: 832所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 849所示的反義鏈；
（25）SEQ ID NO: 832所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 850所示的反義鏈；
（26）SEQ ID NO: 833所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 858所示的反義鏈；
（27）SEQ ID NO: 834所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 859所示的反義鏈；
（28）SEQ ID NO: 835所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 860所示的反義鏈；
（29）SEQ ID NO: 836所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 861所示的反義鏈；
（30）SEQ ID NO: 837所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 862所示的反義鏈；
（31）SEQ ID NO: 838所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 863所示的反義鏈；
（32）SEQ ID NO: 882所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 894所示的反義鏈；
（33）SEQ ID NO: 882所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 902所示的反義鏈；
（34）SEQ ID NO: 884所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 896所示的反義鏈；
（35）SEQ ID NO: 884所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 903所示的反義鏈；
（36）SEQ ID NO: 592所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 905所示的反義鏈；
（37）SEQ ID NO: 592所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 907所示的反義鏈；
（38）SEQ ID NO: 882所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 910所示的反義鏈；和
（39）SEQ ID NO: 882所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 911所示的反義鏈。
在一些優選的實施方案中，前述寡核苷酸包含選自下述有義鏈和反義鏈組合中的任一：
（1）SEQ ID NO: 594所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 764所示的反義鏈；
（2）SEQ ID NO:592所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 773所示的反義鏈；
（3）SEQ ID NO:592所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 774所示的反義鏈；
（4）SEQ ID NO:592所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 775所示的反義鏈；
（5）SEQ ID NO:595所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 776所示的反義鏈；
（6）SEQ ID NO:598所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 779所示的反義鏈；
（7）SEQ ID NO:518所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 780所示的反義鏈
（8）SEQ ID NO: 592所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 854所示的反義鏈；
（9）SEQ ID NO: 592所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 857所示的反義鏈；
（10）SEQ ID NO: 592所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 864所示的反義鏈；
（11）SEQ ID NO: 822所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 839所示的反義鏈；
（12）SEQ ID NO: 827所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 839所示的反義鏈；
（13）SEQ ID NO: 831所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 839所示的反義鏈；
（14）SEQ ID NO: 598所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 840所示的反義鏈；
（15）SEQ ID NO: 832所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 841所示的反義鏈；
（16）SEQ ID NO: 832所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 842所示的反義鏈；
（17）SEQ ID NO: 832所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 848所示的反義鏈；
（18）SEQ ID NO: 832所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 849所示的反義鏈；
（19）SEQ ID NO: 832所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 850所示的反義鏈；
（20）SEQ ID NO: 833所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 858所示的反義鏈；
（21）SEQ ID NO: 834所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 859所示的反義鏈；
（22）SEQ ID NO: 835所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 860所示的反義鏈；
（23）SEQ ID NO: 836所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 861所示的反義鏈；
（24）SEQ ID NO: 837所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 862所示的反義鏈；
（25）SEQ ID NO: 838所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 863所示的反義鏈；
（26）SEQ ID NO: 882所示的有義鏈，和SEQ ID NO: 894所示的反義鏈；
（27）SEQ ID NO: 882所示的有義鏈，和SEQ ID NO:902所示的反義鏈；
（28）SEQ ID NO: 884所示的有義鏈，和SEQ ID NO:896所示的反義鏈；
（29）SEQ ID NO: 884所示的有義鏈，和SEQ ID NO:903所示的反義鏈；
（30）SEQ ID NO: 592所示的有義鏈，和SEQ ID NO:905所示的反義鏈；
（31）SEQ ID NO: 592所示的有義鏈，和SEQ ID NO:907所示的反義鏈；
（32）SEQ ID NO: 882所示的有義鏈，和SEQ ID NO:910所示的反義鏈；和
（33）SEQ ID NO: 882所示的有義鏈，和SEQ ID NO:911所示的反義鏈。
在一些實施方案中，前述寡核苷酸或其鹽的至少一個核苷酸綴合至一個或多個靶向配體，形成siRNA綴合物。前述siRNA綴合物含有上述siRNA以及綴合連接至該siRNA的綴合基團。術語“寡核苷酸鹽”是指鹽形式的寡核苷酸化合物。寡核苷酸鹽包括寡核苷酸綴合化合物的鹽以及未綴合的寡核苷酸化合物的鹽。寡核苷酸鹽有利地以固體粉末形式存在。
一般來說，前述綴合基團包含藥學上可接受的至少一個靶向配體和任選的接頭（linker），並且，前述siRNA、前述接頭和前述靶向配體依次連接。靶向基團可以是siRNA給藥領域常規使用的配體，例如WO2009082607A2中描述的各種配體，以引用的方式將其全部公開內容併入本文。在一些實施方案中，前述靶向配體為2-4個。前述siRNA分子可以非共價或共價綴合至前述綴合基團，例如可以共價綴合至前述綴合基團。siRNA與綴合基團的綴合位點可以在siRNA有義鏈或反義鏈的3’端或5’端，還可以在siRNA的內部序列中。在一些實施方案中，前述siRNA與綴合基團的綴合位點在siRNA有義鏈的3’末端或5’末端。在一些實施方案中，前述siRNA與綴合基團的綴合位點在siRNA反義鏈的3’末端或5’末端。在一些優選的實施方案中，前述siRNA與綴合基團的綴合位點在siRNA有義鏈的3’末端。
在一些實施方案中，靶向配體包含脫唾液酸醣蛋白受體配體。在一些實施方案中，脫唾液酸醣蛋白受體配體包括一種或多種半乳糖衍生物或由其組成。如本發明所用，術語“半乳糖衍生物”包括半乳糖和對脫唾液酸醣蛋白受體的親和力等於或大於半乳糖的親和力的乳糖衍生物。半乳糖衍生物包括但不限於：半乳糖、半乳糖胺、N-甲醯半乳糖胺、N-乙醯基半乳糖胺、N-丙醯基-半乳糖胺、N-正丁醯基-半乳糖胺和N-異丁醯基半乳糖胺。可用於寡核苷酸和其他分子在體內靶向肝臟的半乳糖衍生物和半乳糖衍生物簇是本領域已知的。半乳糖衍生物已被用於藉由其與肝細胞表面上表達的脫唾液酸醣蛋白受體（ASGPr）的結合而在體內將分子靶向肝細胞。ASGPr配體與ASGPr（s）的結合有利於細胞特異性靶向肝細胞以及內吞分子進入肝細胞。ASGPr配體可以是單體（例如，具有單個半乳糖衍生物）或多聚體（例如，具有多個半乳糖衍生物）。可使用本領域已知的方法將半乳糖衍生物或半乳糖衍生物簇連接至siRNA的3’端或5’端。
在一些實施方案中，前述siRNA綴合物中藥學上可接受的靶向配體可以是半乳糖或N-乙醯基半乳糖胺（GalNAc），其中，半乳糖或N-乙醯基半乳糖胺分子可以是一價、二價、三價、四價。應當理解的是，所述的一價、二價、三價、四價分別指siRNA分子與含有作為靶向配體的半乳糖或N-乙醯基半乳糖胺分子的綴合基團形成siRNA綴合物後，該siRNA綴合物中siRNA分子與半乳糖或N-乙醯基半乳糖胺分子的摩爾比為1:1、1:2、1:3或1:4。在一些實施方式中，所述藥學上可接受的靶向配體是N-乙醯基半乳糖胺。在在一些實施方案中，當本發明所述的siRNA與含有N-乙醯基半乳糖胺的綴合基團綴合時，N-乙醯基半乳糖胺分子是三價或四價。在一些實施方案中，當本發明所述的siRNA與含有N-乙醯基半乳糖胺的綴合基團綴合時，N-乙醯基半乳糖胺分子是三價。
在一些實施方案中，靶向配體選自碳水化合物、氨基糖、膽固醇、多肽或脂質。
在一些實施方案中，靶向配體包含N-乙醯基半乳糖胺（GalNAc）部分。
在一些實施方案中，前述GalNac部分是單價GalNAc部分、二價GalNAc部分、三價GalNAc部分或四價GalNAc部分。
在一些實施方案中，靶向配體為A1或L96。A1為式（XII）所示的GalNAc靶向配體；L96為式（V）所示的N-[tris（GalNAc-烷基）醯胺基癸醯基]-4-羥基脯氨醇Hyp-（GalNAc-烷基）3（XIII）。
在另一方面，本發明提供了一種組合物，其包含前述寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽，以及任選地藥學上可接受的載體。
在一些實施方案中，前述組合物的劑型為口服劑、靜脈注射劑、皮下注射劑或肌內注射劑。
在本發明的一些優選的實施方案中，前述組合物的劑型為皮下注射劑。
在一些實施方案中，前述組合還包含其他治療或/和預防AGT-相關疾病的藥物。
在另一方面，本發明提供了一種前述寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽或組合物在製備用於治療或/和預防AGT-相關疾病的藥物中的用途。
已經開發了各種製劑以促進寡核苷酸使用。例如，可以使用使降解最小化、促進遞送和/或攝取或為製劑中的寡核苷酸提供另一種有益特性的製劑將寡核苷酸遞送至受試者或細胞環境。在一些實施方案中，本文提供了包含寡核苷酸（例如，單鏈或雙鏈寡核苷酸）以降低AGT的表達的組合物。可以合適地配製此類組合物，使得當施用於受試者（至靶標細胞的直接環境中或全身性地）時，足夠部分的寡核苷酸進入細胞以降低AGT表達。各種合適的寡核苷酸製劑中的任一種可用於遞送寡核苷酸用於減少AGT，如本文所公開。在一些實施方案中，將寡核苷酸或其綴合物配製於緩衝溶液、諸如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、脂質體、膠束結構和殼體中。緩衝溶液可以選自乙酸鹽、檸檬酸鹽、穀醇溶蛋白、碳酸鹽或磷酸鹽或其任何組合的溶液。在一些實施方案中，將裸露（即，沒有遞送劑）的寡核苷酸或其綴合物配製於水中或水溶液（例如，pH調節的水）中。在一些實施方案中，將裸露的寡核苷酸或其綴合物配製於鹼性緩衝水溶液（例如，PBS）中。
具有陽離子脂質的寡核苷酸的製劑可用於促進寡核苷酸轉染至細胞中。例如，可以使用陽離子脂質，諸如脂轉染試劑（lipofectin），陽離子甘油衍生物和聚陽離子分子（例如，聚賴氨酸）。
因此，在一些實施方案中，製劑包含脂質納米顆粒。在一些實施方案中，賦形劑包含脂質體、脂質、脂質複合物、微球、微粒、納米球或納米顆粒，或者可以以其他方式配製用於向有此需要的受試者的細胞、組織、器官或身體施用。
在一些實施方案中，如本文所公開的製劑包含賦形劑。在一些實施方案中，賦形劑向組合物賦予活性成分的提高的穩定性、提高的吸收、提高的溶解度和/或治療性增強。在一些實施方案中，賦形劑是緩衝劑（例如，檸檬酸鈉、磷酸鈉、tris鹼或氫氧化鈉）或媒介物（例如，緩衝溶液、礦脂、二甲基亞碸或礦物油）。在一些實施方案中，將寡核苷酸凍乾用於延長其保質期，且然後在使用（例如，施用於受試者）之前製成溶液。因此，包含本文所述的寡核苷酸中的任一種的組合物中的賦形劑可以是凍乾保護劑（例如，甘露醇、乳糖、聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮）或塌陷溫度改變劑（例如，葡聚糖、ficoll或明膠）。
在一些實施方案中，將藥物組合物配製為與其意欲的施用途徑相容。施用途徑的實例包括腸胃外，例如靜脈內、皮內、皮下、口服（例如，吸入）、經皮（局部）、經黏膜和直腸施用。通常，施用的途徑是靜脈內或皮下的。
適用於可注射用途的藥物組合物包括無菌水溶液（在水溶性的情況下）或分散體以及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散體的無菌粉末。對於靜脈內或皮下施用，合適的載體包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor EL.TM. （BASF, Parsippany, N.J.）或磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）。前述載體可以是溶劑或分散介質，其含有例如水、乙醇、多元醇（例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等）及其合適的混合物。在許多情況下，優選在組合物中包括等滲劑，例如糖，多元醇諸如甘露醇、山梨醇和氯化鈉。無菌可注射溶液可以藉由如下來製備：將所需量的寡核苷酸與所需的以上列舉的成分中的一種或組合併入選擇的溶劑中，隨後進行過濾滅菌。
在一些實施方案中，組合物可以含有至少約0.1%或更多的治療劑（例如，用於降低AGT表達的寡核苷酸），儘管一種或多種活性成分的百分比可以在總組合物的重量或體積的約1%和約80%或更多之間。製備此類藥物製劑的領域中的技術人員將考慮因素諸如溶解度、生物利用度、生物半衰期、施用的途徑、產品保質期以及其他藥理學考量，並且因此各種劑量和治療方案可以是期望的。
即使許多實施方案涉及本文公開的任何寡核苷酸的肝臟靶向遞送，也考慮靶向其他組織。
在一些實施方案中，如本文所述的寡核苷酸的施用導致細胞中的AGT表達的水準的降低。在一些實施方案中，AGT表達的水準的降低可以是與AGT的適當對照水準相比降低至1%或更低、5%或更低、10%或更低、15%或更低、20%或更低、25%或更低、30%或更低、35%或更低、40%或更低、45%或更低、50%或更低、55%或更低、60%或更低、70%或更低、80%或更低或90%或更低。適當的對照水準可以是未與如本文所述的寡核苷酸接觸的細胞或細胞群體中的AGT表達的水準。在一些實施方案中，在有限的時間段之後評價根據本文公開的方法將寡核苷酸遞送至細胞的效果。例如，可以在將前述寡核苷酸引入細胞後至少8小時、12小時、18小時、24小時；或至少1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周或8周分析血液中的AGT的水準。
在一些實施方案中，寡核苷酸以轉基因的形式遞送，所述轉基因被工程改造為在細胞中表達本文公開的寡核苷酸（例如，呈shRNA形式）。在一些實施方案中，使用經工程改造以表達本文公開的任何寡核苷酸的轉基因遞送寡核苷酸。可以使用病毒載體（例如，腺病毒、逆轉錄病毒、牛痘病毒、痘病毒、腺相關病毒或單純皰疹病毒）或非病毒載體（例如，質粒或合成的mRNA）遞送轉基因。在一些實施方案中，轉基因可以直接注射給受試者。
在另一方面，本發明提供了預防患有將得益於AGT表達降低的失調的受試者中的至少一個症狀的方法，所述失調例如為AGT-相關疾病，例如，高血壓，例如，臨界性高血壓（也稱為高血壓前期）、原發性高血壓（也稱為原發高血壓或特發性高血壓）、繼發性高血壓（也稱為非原發性高血壓）、高血壓危症（也稱為惡性高血壓）、高血壓急迫狀態、孤立性收縮期或舒張期高血壓、妊娠相關的高血壓（例如，先兆子癇、子癇和產後子癇前期）、糖尿病性高血壓、頑固性高血壓、難治性高血壓、陣發性高血壓、腎血管性高血壓（也稱為腎性高血壓）、戈德布拉特氏高血壓、高眼壓症、青光眼、肺動脈高壓、門靜脈高壓、系統性靜脈高血壓、收縮期高血壓、不穩定性高血壓；高血壓性心臟病、高血壓性腎病、動脈粥樣硬化、動脈硬化、血管病 （包括外周血管病）、糖尿病性腎病、糖尿病性視網膜病、慢性心力衰竭、心肌病、糖尿病性心肌病、腎小球硬化症、主動脈縮窄、主動脈瘤、心室纖維化、庫欣綜合征和其他糖皮質激素過多狀態（包括慢性類固醇治療）、嗜鉻細胞瘤、腎素瘤、繼發性醛固酮增多症和其他鹽皮質激素過多狀態、睡眠呼吸暫停、甲狀腺/甲狀旁腺疾病、心力衰竭（例如，左心室收縮功能不全）、心肌梗死、心絞痛、中風、糖尿病（例如，糖尿病性腎病）、腎病（例如，慢性腎病或糖尿病性腎病，任選在妊娠環境中）、腎衰竭（例如，慢性腎衰竭）、認知障礙（如阿爾茨海默病）和系統性硬化（例如，硬皮病腎危象）。在特定實施方案中，AGT相關疾病包括宮內發育遲緩（IUGR）和胎兒生長受限。所述方法包括將治療有效量的本發明的iRNA劑（例如，dsRNA）或載體施用於受試者，由此預防患有將得益於AGT表達降低的失調的受試者中的至少一個症狀。
在某些方面，本發明提供了用於藉由向受試者施用治療劑（例如，寡核苷酸或編碼其的載體或轉基因）來預防受試者中的如本文所述的疾病、病症、症狀或病況的方法。在一些實施方案中，待治療的受試者是將從例如AGT蛋白的量的減少在治療上受益的受試者。
本文所述的方法通常涉及向受試者施用有效量（即能夠產生期望的治療結果的量）的寡核苷酸。治療上可接受的量可以是能夠治療疾病或病症的量。任一受試者的適當劑量將取決於某些因素，包括受試者的體型、體表面積、年齡、待施用的特定組合物、組合物中的一種或多種活性成分、施用的時間和途徑、總體健康和同時施用的其他藥物。
在一些實施方案中，經腸（例如，經口，藉由胃餵食管，藉由十二指腸餵食管，經由胃造口術或經直腸），腸胃外（例如，皮下注射，靜脈內注射或輸注，動脈內注射或輸注，肌內注射），局部（例如，表皮，吸入，經由滴眼或藉由黏膜），或藉由直接注射入靶標器官（例如，受試者的肝臟），向受試者施用本文公開的組合物中的任一種。通常，本文公開的寡核苷酸靜脈內或皮下施用。
在一些實施方案中，寡核苷酸以約0.001 mg/kg至約200 mg/kg（例如，約0.1 mg/kg至約100 mg/kg）的範圍內的劑量施用。在一些實施方案中，寡核苷酸以約0.1mg/kg至約50 mg/kg的範圍內，優選約0.1mg/kg至約20mg/kg、0.3 mg/kg至約18 mg/kg、0.5 mg/kg至約15 mg/kg或0.5 mg/kg至約12 mg/kg，更優選約1mg/kg至約10 mg/kg的範圍內劑量向受試者施用。
在一些實施方案中，寡核苷酸以約50mg至約800mg的固定劑量施用。在一些實施方案中，寡核苷酸以約約50mg至約200mg、約200mg至約400mg或約400mg至約800mg的固定劑量向受試者施用。在一些實施方案中，寡核苷酸以約約100mg、約200mg、約300mg、約400mg、500mg、約600mg、約700mg或約800mg的固定劑量向受試者施用。
作為一組非限制性實例，將通常每年一次、每年兩次、每季度（每三個月一次）、每兩個月（每兩個月一次）、每個月或每週施用本發明的寡核苷酸。在一些實施方案中，固定劑量以每月一次的間隔施用於所述受試者。在一些實施方案中，固定劑量以每六個月一次的間隔施用於所述受試者。
在一些實施方案中，所述受試者約每六個月被施用一次約150mg的固定劑量。在一些實施方案中，所述受試者約每六個月被施用一次約300mg的固定劑量。在一些實施方案中，所述受試者約每六個月被施用一次約300mg的固定劑量。在一些實施方案中，所述受試者約每六個月被施用一次約600mg的固定劑量。在一些實施方案中，所述受試者約每六個月被施用一次約800mg的固定劑量。在一些實施方案中，所述受試者約每六個月被施用一次約800mg的固定劑量。
在一些實施方案中，待治療的受試者是人（例如人患者）或非人靈長類動物或其他哺乳動物受試者。其他示例性受試者包括家養動物諸如狗和貓；牲畜諸如馬、牛、豬、綿羊、山羊和雞；和動物諸如小鼠、大鼠、豚鼠和倉鼠。
在另一方面，本發明提供了一種用於在受試者中抑制血管收縮素原（AGT）基因表達的方法，前述方法包括向前述受試者施用固定劑量的約50mg至約800mg的寡核苷酸或其鹽。
在另一方面，本發明提供了一種用於預防或治療患有血管收縮素原（AGT）相關病症的受試者的方法，所述方法包括向所述受試者施用固定劑量的約50mg至約800mg的寡核苷酸或其鹽。
在另一方面，本發明提供了一種用於在受試者中降低血壓水準的方法，所述方法包括向所述受試者施用固定劑量的約50mg至約800mg的寡核苷酸或其鹽。
在一些實施方式中，所述方法還包括向受試者施用用於治療高血壓的其他治療劑。在一些實施方式中，其他治療劑選自以下：利尿劑、血管收縮素轉化酶（ACE）抑制劑、血管收縮素II受體拮抗劑、β-阻滯劑、血管擴張劑、鈣通道阻滯劑、醛固酮拮抗劑、α2-激動劑、腎素抑制劑、α-阻滯劑、外周作用腎上腺素能劑、選擇性D1受體部分激動劑、非選擇性α-腎上腺素能拮抗劑、合成的甾體抗鹽皮質激素劑；上述中任何的組合；及配製成藥劑組合的高血壓治療劑。在一些實施方式中，其他治療劑包括血管收縮素II受體拮抗劑。在其他實施方式中，血管收縮素II受體拮抗劑選自以下：氯沙坦、纈沙坦、奧美沙坦、依普沙坦和阿齊沙坦。
為了達到清楚和簡潔描述的目的，本文中作為相同的或分開的一些實施方案的一部分來描述特徵，然而，將要理解的是，本發明的範圍可包括具有所描述的所有或一些特徵的組合的一些實施方案。
下面，參考具體實施例更詳細地描述本發明，然而，實施例僅用於說明目的，對於本發明不具有限制作用。
實施例
在本文沒有具體給出試劑來源的情況下，此類試劑可以從任何分子生物學試劑供應商處獲得，其品質/純度標準適用於分子生物學。
核酸序列表示中使用的核苷酸單體的縮寫。將理解這些單體當存在於寡核苷酸中時，除非另有說明，否則其藉由5'-3'磷酸二酯鍵互相連接。並且應理解，當核苷酸含有2'-氟修飾時，則氟替換親本核苷酸中該位置處的羥基（即，其是2'-去氧-2'-氟核苷酸）。 表A.用於核酸序列表示的核苷酸單體的縮寫
縮寫 核苷酸
A 腺苷-3'-磷酸酯
Af 2'-氟腺苷-3'-磷酸酯
Afs 2'-氟腺苷-3'-硫代磷酸酯
As 腺苷-3'-硫代磷酸酯
C 胞苷-3'-磷酸酯
Cf 2'-氟胞苷-3'-磷酸酯
Cfs 2'-氟胞苷-3'-硫代磷酸酯
Cs 胞苷-3'-硫代磷酸酯
G 鳥苷-3'-磷酸酯
Gf 2'-氟鳥苷-3'-磷酸酯
Gfs 2'-氟鳥苷-3'-硫代磷酸酯
Gs 鳥苷-3'-硫代磷酸酯
U 尿苷-3'-磷酸酯
Uf 2'-氟尿苷-3'-磷酸酯
Ufs 2'-氟尿苷-3'-硫代磷酸酯
Us 尿苷-3'-硫代磷酸酯
Am 2'-O-甲基腺苷-3'-磷酸酯
Ams 2'-O-甲基腺苷-3'-硫代磷酸酯
Cm 2'-O-甲基胞苷-3'-磷酸酯
Cms 2'-O-甲基胞苷-3'-硫代磷酸酯
Gm 2'-O-甲基鳥苷-3'-磷酸酯
Gms 2'-O-甲基鳥苷-3'-硫代磷酸酯
Um 2'-O-甲基尿苷-3'-磷酸酯
Ums 2'-O-甲基尿苷-3'-硫代磷酸酯
s 硫代磷酸酯類連接
P 磷酸酯
dA 2'-去氧腺苷-3'-磷酸酯
dAs 2'-去氧腺苷-3'-硫代磷酸酯
dC 2'-去氧胞苷-3'-磷酸酯
dCs 2'-去氧胞苷-3'-硫代磷酸酯
dG 2'-去氧鳥苷-3'-磷酸酯
dGs 2'-去氧鳥苷-3'-硫代磷酸酯
dT 2'-去氧胸苷-3'-磷酸酯
dTs 2'-去氧胸苷-3'-硫代磷酸酯
dU 2'-去氧尿苷-3'-磷酸酯
dUs 2'-去氧尿苷-3'-硫代磷酸酯
（Agn） 腺苷-二醇核酸（GNA）
（Cgn） 胞苷-二醇核酸（GNA）
（Ggn） 鳥苷-二醇核酸（GNA）
（Tgn） 胸苷-二醇核酸（GNA）
I 肌苷-3'-磷酸酯
Im 2'-O-甲基肌苷-3'-磷酸酯
Ims 2'-O-甲基肌苷-3'-硫代磷酸酯
If 2'-氟肌苷-3'-磷酸酯
Ifs 2'-氟肌苷-3'-硫代磷酸酯
靶向配體的製備
（i）L96的製備參照專利CN104717982B描述的方法進行。
（ii）A1的製備步驟如下：
（1）中間體E1的合成 將F1（199.46 mg，0.41 mmol）溶於DMF中並加入HBTU（155.39 mg，0.41 mmol）活化，隨後加入DIEA（67.81 L，0.41 mmol），攪拌30 min後將中間體G1（100.0 mg，0.14 mmol）加入至反應體系，過夜攪拌後TLC檢測反應完全，減壓濃縮後，柱層析分離（PE:EA=10:1）得中間體I-F1（174.98 mg，產率58%）。中間體I-F1與鈀碳在氫氣催化條件下脫除苄基得到中間體II-F1（156.34， 95%）。在DMF中將HBTU活化的中間體II-F1與（3R,5S）-5-[[雙（4-甲氧基苯基）苯基甲氧基]甲基]-3-吡咯烷醇偶聯，得到中間體E1，HNMR（400MHz, DMSO-D 6）: δ7.91-7.86（m, 8H）, 7.51-7.45（m, 6H），7.40-7.32（m, 10H）, 7.02-6.95（m, 3H）, 6.03-5.89（m, 4H）, 5.31（d, 3H）, 5.07-4.99（m, 4H）, 4.43-4.37（m, 3H）, 4.23-4.19（m, 4H）, 4.17-4.13（m, 6H）, 4.05-4.00（m, 6H）, 3.88-3.81（m, 6H）, 3.77（s, 6H）, 3.69-3.66（m, 9H）, 3.50-3.47（m, 12H）, 3.40-3.37 （m, 6H）, 3.20-3.16（m, 16H）, 2.60-2.57（m, 2H）, 2.46（s, 9H）, 2.30（s, 9H）, 2.10（m, 6H）, 2.07（s, 9H）, 1.98（s, 9H）, 1.56-1.45（m, 8H）, 1.32-1.27（m, 4H）。HRMS [M+H] +m/z 2467 （calcd for C 115H 168N 14O 45, 2466）。
（2）具有保護基團的固相載體A1的合成
中間體E1在DMAP和Et 3N存在下用琥珀酸酐處理以獲得定量產率的半琥珀酸酯中間體E1-1。將半琥珀酸酯中間體E1-1 與胺含量為 250  mol/g的60% 二乙烯基苯 （DVB） 交聯的 （氨基甲基） 聚苯乙烯樹脂的氨基偶聯，得到負載量為100 mol/g、具有保護基團的固相載體A1。
寡核苷酸的製備
（1）siRNA的製備
siRNA序列經由有義鏈（sense strand，SS）和反義鏈（antisense strand，AS）在固相支持物上單獨合成，經脫保護、切割、純化、退火、純化並凍乾後得到。
固相合成（圖2）：使用亞磷醯胺技術在固相支援物上使用寡核苷酸自動合成儀分別合成有義鏈和反義鏈。所述合成儀如AKTA Oligopilot（Cytiva公司），Dr.Oligo 192XLc（昆山伯利克精密儀器有限公司）。固相合成從序列的3’端開始，按照序列順序依次將單體偶聯進序列，每偶聯一個亞磷醯胺單體，均包含四個化學步驟：1）解封或脫保護（脫羥基保護基）；2）偶聯；3）氧化；4）封端。所用亞磷醯胺單體、試劑、純化耗材均為商業化流通試劑及耗材，如購自上海兆維科技發展有限公司多種亞磷醯胺單體（如5'-O-（4,4'-Dimethoxytrityl）-2'-O-methyl-Uridine-3'-CE-Phosphoramidite），購自Sigma-Aldrich LLC反應試劑（如40wt％甲胺水溶液，28wt％氫氧化銨水溶液等）等。本文所使用的siRNA合成及純化方法如US20130178612A1，US2015100197A1等所描述；含VPUm、APU結構序列合成方法如J. Med. Chem. 2018, 61, 734-744所描述。
（2）雙鏈RNA（dsRNA）藥劑的製備
（a）有義鏈的合成
固相亞磷醯胺法是一種技術成熟的寡核酸合成方法。採用電腦控制的合成儀，在不銹鋼合成柱中進行反應。有義鏈合成中以負載有靶向配體（例如L96和A1）的固相支援物為起始，或直接以固相支持物為起始，藉由固相合成儀控制不同的管路按照序列3'到5'的順序注入不同的原料、試劑和溶劑，逐個連接亞磷醯胺核苷單體。反應過程包含脫除DMT保護基反應、縮合反應、氧化或硫代反應、封端反應共四步迴圈，每次迴圈連接上一個核苷酸單元，得到19或21個核苷酸單元的寡核酸序列。合成完成後，在固相合成柱上脫去保護基（2-氰乙基），再藉由氨解反應將合成好的序列從固相支持物上切割下來，過濾，用乙醇洗滌濾餅，收集濾液及洗滌液，濃縮得到有義鏈粗品。粗品經色譜純化（SOURCE 15Q），凍乾得目標產品有義鏈。其中，在合成儀中，以負載有靶向配體（例如L96）的固相支持物為起始，合成了siRNA有義鏈綴合物；直接以固相支援物為起始，合成了siRNA。
（b）反義鏈的合成
反義鏈合成與有義鏈類似，藉由固相合成儀控制不同的管路按照序列3'到5'的順序注入不同的原料、試劑和溶劑，逐個連接亞磷醯胺核苷單體。反應過程包含脫除DMT保護基反應、縮合反應、氧化或硫代反應、封端反應共四步迴圈，每次迴圈連接上一個核苷酸單元，得到21或23個核苷酸單元的寡核酸序列。合成完成後，在固相合成柱上脫去保護基（2-氰乙基），再藉由氨解反應將合成好的序列從固相支持物上切割下來，過濾，用乙醇洗滌濾餅，收集濾液及洗滌液，濃縮得到反義鏈粗品。粗品經色譜純化（SOURCE 15Q），超濾，凍乾得目標產品反義鏈siRNA。
（c）雙鏈siRNA製備
將AS鏈和SS鏈分別溶解在注射水中，以確定的比例（1.01:1.0-1.2:1.0）混合，30-50℃孵育時間30-90 min，降溫至室溫。經冷凍乾燥，得到雙鏈siRNA產品。
根據同樣的方法，製備得到下表2、表3和表4的雙鏈siRNA藥劑。
實施例1. AGT-siRNA體外肝臟細胞系活性篩選
首先，使用基於電腦的演算法生成與人AGT mRNA（NM_000029.3，表1）互補的候選寡核苷酸序列，其中某些序列也與食蟹猴的AGT mRNA（XM_005443695.2，表1）互補或不多於2個錯配。其中某些設計為有義鏈和反義鏈分別為19/21配對的雙鏈siRNA，反義鏈帶有兩個與mRNA序列互補的懸垂末端，在某些情況下反義鏈的懸垂末端為非互補的UU；其中某些序列設計為有義鏈和反義鏈分別為21/23配對的雙鏈siRNA，反義鏈帶有兩個與mRNA序列互補的懸垂末端；其中某些序列設計為21/21、23/23配對的雙鏈siRNA。其中某些互補配對序列反義鏈的5’端第1位（有義鏈3’端最後1位）鹼基替換為與AGT mRNA不匹配的鹼基。 表1 人、食蟹猴AGT mRNA序列
物種 GenBank RefSeq
人 NM_000029.3
食蟹猴 XM_005443695.2
某些寡核苷酸可包含二醇核酸（GNA）修飾。在某些寡核苷酸中，個別核醣核酸替換為（Tgn），其為式（I）所示的胸苷-二醇核酸（GNA）S-異構體。在某些寡核苷酸中，個別核醣核酸替換為（Cgn），其為式（II）所示的胞苷-二醇核酸（GNA）S-異構體。在某些寡核苷酸中，個別核醣核酸替換為（Agn），其為式（III）所示的腺苷-二醇核酸（GNA）S-異構體。在某些寡核苷酸中，個別核醣核酸替換為（Ggn），其為式（IV）所示的鳥苷-二醇核酸（GNA）S-異構體。 表示與寡核苷酸的其餘部分的連接。Tgn、Cgn、Agn和Ggn的結構式如下： 、 、 、
某些寡核苷酸序列可包含2'-5'-磷酸二酯鍵，其中相鄰的核苷單元對是將2'-5'鍵聯至5'-2'。在某些寡核苷酸中，個別核醣核酸替換為（U-2'5'），其為式（V）所示的尿苷-2'-磷酸酯。在某些寡核苷酸中，個別核醣核酸替換為（G-2'5'），其為式（VI）所示的鳥苷-2'-磷酸酯。在某些寡核苷酸中，個別核醣核酸替換為（C-2'5'），其為式（VII）所示的胞苷-2'-磷酸酯。在某些寡核苷酸中，個別核醣核酸替換為（A-2'5'），其為式（VIII）所示為腺苷-2'-磷酸酯。在某些寡核苷酸中，個別核醣核酸替換為（T-2'5'），其為式（IX）所示的胸苷-2'-磷酸酯。 、 、 、
表2、表3和表4中，“G”、“C”、“A”、“U”、“T”和“I”通常分別代表以鳥嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、尿嘧啶、胸腺嘧啶和次黃嘌呤為鹼基的核苷酸。表2、表3和表4中的裸序列是指未經修飾的寡核苷酸序列。
對於核苷酸的修飾：m代表2’-甲氧基；f代表2'-去氧-2'-氟；s代表硫代磷酸酯；APU為式（X）所示的5'-磷酸酯類似物修飾的尿苷酸（2'-乙醯氨基-5'-乙烯基膦酸酯-尿苷酸）；VPUm為式（XI） 所示的5'-磷酸酯類似物修飾的尿苷酸（2'-甲氧基-5'-乙烯基膦酸酯-尿苷酸）： 、
A1為式（XII）所示的GalNAc靶向配體；L96為式（XIII）所示的N-[三（GalNAc-烷基）醯胺基癸醯基]-4-羥基脯氨醇（Hyp-（GalNAc-烷基）3）： 表2 寡核苷酸裸序列
序列編號 有義鏈序列 裸序列SEQ ID NO 反義鏈序列 裸序列SEQ ID NO
AL0181001 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA 1 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA 220
AL0181002 CUUCCACCUCGUCAUCCACAA 2 UUGUGGAUGACGAGGUGGAAGGG 221
AL0181003 CCACCUCGUCAUCCACAAUGA 3 UCAUUGUGGAUGACGAGGUGGAA 222
AL0181004 CCUCGUCAUCCACAAUGAGAA 4 UUCUCAUUGUGGAUGACGAGGUG 223
AL0181005 CGUCAUCCACAAUGAGAGUAA 5 UUACUCUCAUUGUGGAUGACGAG 224
AL0181006 AUCCACAAUGAGAGUACCUGA 6 UCAGGUACUCUCAUUGUGGAUGA 225
AL0181007 CCACAAUGAGAGUACCUGUGA 7 UCACAGGUACUCUCAUUGUGGAU 226
AL0181008 CAAUGAGAGUACCUGUGAGCA 8 UGCUCACAGGUACUCUCAUUGUG 227
AL0181009 GACACCGAAGACAAGUUGAGA 9 UCUCAACUUGUCUUCGGUGUCAA 228
AL0181010 GUCGGGAUGCUGGCCAACUUA 10 UAAGUUGGCCAGCAUCCCGACCA 229
AL0181011 GGGAUGCUGGCCAACUUCUUA 11 UAAGAAGUUGGCCAGCAUCCCGA 230
AL0181012 ACUUCUUGGGCUUCCGUAUAU 12 AUAUACGGAAGCCCAAGAAGUUG 231
AL0181013 AUGGCAUGCACAGUGAGCUAU 13 AUAGCUCACUGUGCAUGCCAUAU 232
AL0181014 GGCAUGCACAGUGAGCUAUGA 14 UCAUAGCUCACUGUGCAUGCCAU 233
AL0181015 GCUGACAGGCUACAGGCAAUA 15 UAUUGCCUGUAGCCUGUCAGCUG 234
AL0181016 GUGUUCCUUGGAAGGACAAGA 16 UCUUGUCCUUCCAAGGAACACCC 235
AL0181017 GAUGCGCACAAGGUCCUGUCU 17 AGACAGGACCUUGUGCGCAUCCA 236
AL0181018 GGCUGUACAGGGCCUGCUAGU 18 ACUAGCAGGCCCUGUACAGCCUG 237
AL0181019 UUGCUGCUGAGAAGAUUGACA 19 UGUCAAUCUUCUCAGCAGCAACA 238
AL0181020 GAGAAGAUUGACAGGUUCAUG 20 CAUGAACCUGUCAAUCUUCUCAG 239
AL0181021 GGACAGCACCCUGGCUUUCAA 21 UUGAAAGCCAGGGUGCUGUCCAC 240
AL0181022 ACAGCACCCUGGCUUUCAACA 22 UGUUGAAAGCCAGGGUGCUGUCC 241
AL0181023 AGGAGUUCUGGGUGGACAACA 23 UGUUGUCCACCCAGAACUCCUGG 242
AL0181024 GGUGGACAACAGCACCUCAGU 24 ACUGAGGUGCUGUUGUCCACCCA 243
AL0181025 GUGGACAACAGCACCUCAGUA 25 UACUGAGGUGCUGUUGUCCACCC 244
AL0181026 GCCUCACUAUGCCUCUGACCU 26 AGGUCAGAGGCAUAGUGAGGCUG 245
AL0181027 GGACAAGGUGGAGGGUCUCAA 27 UUGAGACCCUCCACCUUGUCCAG 246
AL0181028 GACAAGGUGGAGGGUCUCACU 28 AGUGAGACCCUCCACCUUGUCCA 247
AL0181029 ACAAGGUGGAGGGUCUCACUU 29 AAGUGAGACCCUCCACCUUGUCC 248
AL0181030 CUCACUUUCCAGCAAAACUCA 30 UGAGUUUUGCUGGAAAGUGAGAC 249
AL0181031 ACUCCCUCAACUGGAUGAAGA 31 UCUUCAUCCAGUUGAGGGAGUUU 250
AL0181032 CCCUCAACUGGAUGAAGAAAA 32 UUUUCUUCAUCCAGUUGAGGGAG 251
AL0181033 CCUCAACUGGAUGAAGAAACU 33 AGUUUCUUCAUCCAGUUGAGGGA 252
AL0181034 CAACUGGAUGAAGAAACUAUA 34 UAUAGUUUCUUCAUCCAGUUGAG 253
AL0181035 AACUGGAUGAAGAAACUAUCU 35 AGAUAGUUUCUUCAUCCAGUUGA 254
AL0181036 GGUGCUGCAAGGAUCUUAUGA 36 UCAUAAGAUCCUUGCAGCACCAG 255
AL0181037 GCUGCAAGGAUCUUAUGACCU 37 AGGUCAUAAGAUCCUUGCAGCAC 256
AL0181038 GGUGCUGAACAGCAUUUUUUU 38 AAAAAAAUGCUGUUCAGCACCUC 257
AL0181039 GUGCUGAACAGCAUUUUUUUU 39 AAAAAAAAUGCUGUUCAGCACCU 258
AL0181040 GCUGAACAGCAUUUUUUUUGA 40 UCAAAAAAAAUGCUGUUCAGCAC 259
AL0181041 GAACAGCAUUUUUUUUGAGCU 41 AGCUCAAAAAAAAUGCUGUUCAG 260
AL0181042 CAGCAUUUUUUUUGAGCUUGA 42 UCAAGCUCAAAAAAAAUGCUGUU 261
AL0181043 GAGCUUGAAGCGGAUGAGAGA 43 UCUCUCAUCCGCUUCAAGCUCAA 262
AL0181044 GCUUGAAGCGGAUGAGAGAGA 44 UCUCUCUCAUCCGCUUCAAGCUC 263
AL0181045 AUGAGAGAGAGCCCACAGAGU 45 ACUCUGUGGGCUCUCUCUCAUCC 264
AL0181046 GAGAGAGAGCCCACAGAGUCU 46 AGACUCUGUGGGCUCUCUCUCAU 265
AL0181047 AGAGAGAGCCCACAGAGUCUA 47 UAGACUCUGUGGGCUCUCUCUCA 266
AL0181048 GAGUCUACCCAACAGCUUAAA 48 UUUAAGCUGUUGGGUAGACUCUG 267
AL0181049 AGUCUACCCAACAGCUUAACA 49 UGUUAAGCUGUUGGGUAGACUCU 268
AL0181050 CAUUCCUGUUUGCUGUGUAUA 50 UAUACACAGCAAACAGGAAUGGG 269
AL0181051 CCUGUUUGCUGUGUAUGAUCA 51 UGAUCAUACACAGCAAACAGGAA 270
AL0181052 GUUUGCUGUGUAUGAUCAAAA 52 UUUUGAUCAUACACAGCAAACAG 271
AL0181053 GCAAAGGCCAGCAGCAGAUAA 53 UUAUCUGCUGCUGGCCUUUGCCU 272
AL0181054 CAGCGAUGUGUCACCCCCAGU 54 ACUGGGGGUGACACAUCGCUGAU 273
AL0181055 GCGAUGUGUCACCCCCAGUCU 55 AGACUGGGGGUGACACAUCGCUG 274
AL0181056 GAUGUGUCACCCCCAGUCUCA 56 UGAGACUGGGGGUGACACAUCGC 275
AL0181057 GUGUCACCCCCAGUCUCCCAA 57 UUGGGAGACUGGGGGUGACACAU 276
AL0181058 GUCACCCCCAGUCUCCCACCU 58 AGGUGGGAGACUGGGGGUGACAC 277
AL0181059 CACCCCCAGUCUCCCACCUUU 59 AAAGGUGGGAGACUGGGGGUGAC 278
AL0181060 CCCCCAGUCUCCCACCUUUUA 60 UAAAAGGUGGGAGACUGGGGGUG 279
AL0181061 CCCAGUCUCCCACCUUUUCUU 61 AAGAAAAGGUGGGAGACUGGGGG 280
AL0181062 CAGUCUCCCACCUUUUCUUCU 62 AGAAGAAAAGGUGGGAGACUGGG 281
AL0181063 UCUCCCACCUUUUCUUCUAAU 63 AUUAGAAGAAAAGGUGGGAGACU 282
AL0181064 CACCUUUUCUUCUUAAUGAGU 64 ACUCAUUAAGAAGAAAAGGUGGG 283
AL0181065 CCUUUUCUUCUAAUGAGUCGA 65 UCGACUCAUUAGAAGAAAAGGUG 284
AL0181066 AGCCGUUUCUCCUUGGUCUAA 66 UUAGACCAAGGAGAAACGGCUGC 285
AL0181067 GCCGUUUCUCCUUGGUCUAAA 67 UUUAGACCAAGGAGAAACGGCUG 286
AL0181068 CCAGUUUGCUGGGUUUAUUUU 68 AAAAUAAACCCAGCAAACUGGGA 287
AL0181069 CAGUUUGCUGGGUUUAUUUUA 69 UAAAAUAAACCCAGCAAACUGGG 288
AL0181070 GUCCACAAUGAGAGUACCUGA 70 UCAGGUACUCUCAUUGUGGACGA 289
AL0181071 GGCAUGCACACUGAGCUAUGA 71 UCAUAGCUCACUGUGCAUGCCAU 233
AL0181072 GAGAAGAUUGACAGGUUCAUA 72 UAUGAACCUGUCAAUCUUCUCAG 290
AL0181073 GGACAGCACCGUGGCUUUCAA 73 UUGAAAGCCAGGGUGCUGUCCAC 240
AL0181074 GCUGAACAGCGUUUUUUUUGA 74 UCAAAAAAAAUGCUGUUCAGCAC 259
AL0181075 CCUUUUCUUCGAAUGAGUCGA 75 UCGACUCAUUAGAAGAAAAGGUG 284
AL0181076 AGCCGUUUCUGCUUGGUCUAA 76 UUAGACCAAGGAGAAACGGCUGC 285
AL0181077 GCCGUUUCUGCUUGGUCUAAA 77 UUUAGACCAAGGAGAAACGGCUG 286
AL0181078 CGUUGUUCUGGGUACUACAGA 78 UCUGUAGUACCCAGAACAACGGC 291
AL0181079 GCCACCUCGUCAUCCACAAUA 79 UAUUGUGGAUGACGAGGUGGCAG 292
AL0181080 CACCUCGUCAUCCACAAUGAA 80 UUCAUUGUGGAUGACGAGGUGGA 293
AL0181081 AUCCACAAUGCGAGUACCUGA 81 UCAGGUACUCUCAUUGUGGAUGA 225
AL0181082 UCCACAAUGAGAGUACCUGUA 82 UACAGGUACUCUCAUUGUGGAUG 294
AL0181083 GAGCUUGAAGGGGAUGAGAGA 83 UCUCUCAUCCGCUUCAAGCUCAA 262
AL0181084 GAGAGAGAGCGCACAGAGUCU 84 AGACUCUGUGGGCUCUCUCUCAU 265
AL0181085 GUUUUUUGAGCUUGAAGCGGA 85 UCCGCUUCAAGCUCAAAAAACAU 295
AL0181086 GUUUUGAGCUUGAAGCGGAUA 86 UAUCCGCUUCAAGCUCAAAACAA 296
AL0181087 GUUUGAGCUUGAAGCGGAUGA 87 UCAUCCGCUUCAAGCUCAAACAA 297
AL0181088 CCAGUCUCCCACCUUUUCUUA 88 UAAGAAAAGGUGGGAGACUGGGG 298
AL0181089 CCCCAGUCUCCCACCUUUUCU 89 AGAAAAGGUGGGAGACUGGGGAG 299
AL0181090 GCGACUUUGAGCUGGAAAGCA 90 UGCUUUCCAGCUCAAAGUCGCCU 300
AL0181091 GCAGCCGUUUCUCCUUGGUCU 91 AGACCAAGGAGAAACGGCUGCUU 301
AL0181092 CCGUUUCUCCUUGGUCUAAGU 92 ACUUAGACCAAGGAGAAACGGCU 302
AL0181093 GUCCACAAUGAGAGUACCUGA 70 UCAGGUACUCUCAUUGUGGACGA 289
AL0181094 GUCCACAAUGAGAGUACCUGU 93 ACAGGUACUCUCAUUGUGGACGA 303
AL0181095 AUCCACAAUGAGAGUACCUGU 94 ACAGGUACUCUCAUUGUGGAUGA 304
AL0181096 GCAUCCACAAUGAGAGUACCU 95 AGGUACUCUCAUUGUGGAUGCCG 305
AL0181097 CCCAGUCUCCCACCUUUUCUA 96 UAGAAAAGGUGGGAGACUGGGGG 306
AL0181098 CAGUCUCCCACCUUUUCUUCA 97 UGAAGAAAAGGUGGGAGACUGGG 307
AL0181099 GGUCUCCCACCUUUUCUUCUA 98 UAGAAGAAAAGGUGGGAGACCGG 308
AL0181100 GUCUCCCACCUUUUCUUCUAA 99 UUAGAAGAAAAGGUGGGAGACUG 309
AL0181101 CAGCCGUUUCUCCUUGGUCUA 100 UAGACCAAGGAGAAACGGCUGCU 310
AL0181102 GGCCGUUUCUCCUUGGUCUAA 101 UUAGACCAAGGAGAAACGGCCGC 311
AL0181103 GCCGUUUCUCCUUGGUCUAAG 102 CUUAGACCAAGGAGAAACGGCUG 312
AL0181104 CGUUUCUCCUUGGUCUAAGUG 103 CACUUAGACCAAGGAGAAACGGC 313
AL0181105 CGUUUCUCCUUGGUCUAAGUA 104 UACUUAGACCAAGGAGAAACGGC 314
AL0181106 GUUUCUCCUUGGUCUAAGUGU 105 ACACUUAGACCAAGGAGAAACGG 315
AL0181107 GUUUCUCCUUGGUCUAAGUGA 106 UCACUUAGACCAAGGAGAAACGG 316
AL0181108 CAGUCUCCCAGCUUUUCUUCU 107 AGAAGAAAAGGUGGGAGACUGGG 281
AL0181109 GGCCGUUUCUCCUUGGUCUAA 101 UUAGACCAAGGAGAAACGGCCGC 311
AL0181110 GCCGUUUCUCGUUGGUCUAAA 108 UUUAGACCAAGGAGAAACGGCUG 286
AL0181111 GGCCGUUUCUGCUUGGUCUAA 109 UUAGACCAAGGAGAAACGGCCGC 311
AL0181112 GGCCGUUUCUACUUGGUCUAA 110 UUAGACCAAGGAGAAACGGCCGC 311
AL0181113 CCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA 111 UCUUAGACCAAGGAGAAACGGCU 317
AL0181114 GCGUUUCUCCUUGGUCUAAGU 112 ACUUAGACCAAGGAGAAACGCCU 318
AL0181115 GCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA 113 UCUUAGACCAAGGAGAAACGCCU 319
AL0181116 GCGUUUCUCCGUGGUCUAAGU 114 ACUUAGACCAAGGAGAAACGCCU 318
AL0181117 CCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA 111 UCUUAGACCAAGGAGAAACGGCU 317
AL0181118 UCCCACCUUUUCUUCUAAU 115 AUUAGAAGAAAAGGUGGGAGA 320
AL0181119 GCCCACCUUUUCUUCUAAA 116 UUUAGAAGAAAAGGUGGGCGA 321
AL0181120 GCAUCCACAAUGAGAGUAA 117 UUACUCUCAUUGUGGAUGCCG 322
AL0181121 GCGUCAUCCACAAUGAGAA 118 UUCUCAUUGUGGAUGACGCGG 323
AL0181122 CCUCGUCAUCCACAAUGAA 119 UUCAUUGUGGAUGACGAGGUG 324
AL0181123 CACCUCGUCAUCCACAAUA 120 UAUUGUGGAUGACGAGGUGGA 325
AL0181124 GUCCACAAUGAGAGUACCA 121 UGGUACUCUCAUUGUGGACGA 326
AL0181125 GCCACAAUGAGAGUACCUA 122 UAGGUACUCUCAUUGUGGCUG 327
AL0181126 CACAAUGAGAGUACCUGUA 123 UACAGGUACUCUCAUUGUGGA 328
AL0181127 GCAAUGAGAGUACCUGUGA 124 UCACAGGUACUCUCAUUGCGG 329
AL0181128 CAAUGAGAGUACCUGUGAA 125 UUCACAGGUACUCUCAUUGUG 330
AL0181129 GAUGAGAGUACCUGUGAGA 126 UCUCACAGGUACUCUCAUCGU 331
AL0181130 GGAGAGUACCUGUGAGCAA 127 UUGCUCACAGGUACUCUCCUU 332
AL0181131 GAGAGUACCUGUGAGCAGA 128 UCUGCUCACAGGUACUCUCAU 333
AL0181134 CUCCCACCUUUUCUUCUAA 129 UUAGAAGAAAAGGUGGGAGAC 334
AL0181135 GCUCCCACCUUUUCUUCUA 130 UAGAAGAAAAGGUGGGAGCCU 335
AL0181136 GUCUCCCACCUUUUCUUCA 131 UGAAGAAAAGGUGGGAGACUG 336
AL0181137 GGUCUCCCACCUUUUCUUA 132 UAAGAAAAGGUGGGAGACCGG 337
AL0181138 CCCACCUUUUCUUCUAAUA 133 UAUUAGAAGAAAAGGUGGGAG 338
AL0181139 CCACCUUUUCUUCUAAUGA 134 UCAUUAGAAGAAAAGGUGGGA 339
AL0181140 CACCUUUUCUUCUAAUGAA 135 UUCAUUAGAAGAAAAGGUGGG 340
AL0181141 GCCUUUUCUUCUAAUGAGA 136 UCUCAUUAGAAGAAAAGGCGG 341
AL0181142 CCUUUUCUUCUAAUGAGUA 137 UACUCAUUAGAAGAAAAGGUG 342
AL0181143 CUUUUCUUCUAAUGAGUCA 138 UGACUCAUUAGAAGAAAAGGU 343
AL0181144 AGCACCUGAAUUUCUGUUU 139 AAACAGAAAUUCAGGUGCUUG 344
AL0181145 GUCUGUAAUACCUUAGUUU 140 AAACUAAGGUAUUACAGACAC 345
AL0181146 CAAAUGCACCUCCCAGUUU 141 AAACUGGGAGGUGCAUUUGUG 346
AL0181147 UGGACAGCACCCUGGCUUU 142 AAAGCCAGGGUGCUGUCCACA 347
AL0181148 CUUCUAAUGAGUCGACUUU 143 AAAGUCGACUCAUUAGAAGAA 348
AL0181149 AGGUGGAGGGUCUCACUUU 144 AAAGUGAGACCCUCCACCUUG 349
AL0181150 GAACCAUAGCUGGUUAUUU 145 AAAUAACCAGCUAUGGUUCCG 350
AL0181151 UUGCCUUCGGUUUGUAUUU 146 AAAUACAAACCGAAGGCAAUG 351
AL0181152 GGUUUGUAUUUAGUGUCUU 147 AAGACACUAAAUACAAACCGA 352
AL0181153 CAAGUUGAGAACAAAAAUU 148 AAUUUUUGUUCUCAACUUGAA 353
AL0181154 GUUUGUGAAACAAAAAAGU 149 ACUUUUUUGUUUCACAAACAA 354
AL0181155 UGGACAAGGUGGAGGGUCU 150 AGACCCUCCACCUUGUCCAGG 355
AL0181156 CUCACUUUCCAGCAAAACU 151 AGUUUUGCUGGAAAGUGAGAC 356
AL0181157 ACUUCUUGGGCUUCCGUAU 152 AUACGGAAGCCCAAGAAGUUG 357
AL0181158 GUCUUGAAUGUAAGAACAU 153 AUGUUCUUACAUUCAAGACAC 358
AL0181159 UUCCUGUUUGCUGUGUAUG 154 CAUACACAGCAAACAGGAAUG 359
AL0181160 GGCAAGAACCAGUGUUUAG 155 CUAAACACUGGUUCUUGCCUC 360
AL0181161 GAUUGACAGGUUCAUGCAG 156 CUGCAUGAACCUGUCAAUCUU 361
AL0181162 GUAUAUAUGGCAUGCACAG 157 CUGUGCAUGCCAUAUAUACGG 362
AL0181163 CCAUAGCUGGUUAUUUCUC 158 GAGAAAUAACCAGCUAUGGUU 363
AL0181164 AUGUAAGAACAUGACCUCC 159 GGAGGUCAUGUUCUUACAUUC 364
AL0181165 CCGUAUAUAUGGCAUGCAC 160 GUGCAUGCCAUAUAUACGGAA 365
AL0181166 GUGUCUUGAAUGUAAGAAC 161 GUUCUUACAUUCAAGACACUA 366
AL0181167 AGGCAAGAACCAGUGUUUA 162 UAAACACUGGUUCUUGCCUCC 367
AL0181168 CAUUCCUGUUUGCUGUGUA 163 UACACAGCAAACAGGAAUGGG 368
AL0181169 GGGUUUUAAAAUUAAAGUA 164 UACUUUAAUUUUAAAACCCAA 369
AL0181170 CUUCUUGGGCUUCCGUAUA 165 UAUACGGAAGCCCAAGAAGUU 370
AL0181171 GUUUUAAAAUUAAAGUAUA 166 UAUACUUUAAUUUUAAAACCC 371
AL0181172 UAUAUGGCAUGCACAGUGA 167 UCACUGUGCAUGCCAUAUAUA 372
AL0181173 CUUGAAUGUAAGAACAUGA 168 UCAUGUUCUUACAUUCAAGAC 373
AL0181174 GAUCUUAUGACCUGCAGGA 169 UCCUGCAGGUCAUAAGAUCCU 374
AL0181175 GGUGGACAACAGCACCUCA 170 UGAGGUGCUGUUGUCCACCCA 375
AL0181176 AGAUUGACAGGUUCAUGCA 171 UGCAUGAACCUGUCAAUCUUC 376
AL0181177 GUUCAUGCAGGCUGUGACA 172 UGUCACAGCCUGCAUGAACCU 377
AL0181178 CAGGAGUUCUGGGUGGACA 173 UGUCCACCCAGAACUCCUGGG 378
AL0181179 CGUAUAUAUGGCAUGCACA 174 UGUGCAUGCCAUAUAUACGGA 379
AL0181180 ACUCCCUCAACUGGAUGAA 175 UUCAUCCAGUUGAGGGAGUUU 380
AL0181181 GGGUCUCACUUUCCAGCAA 176 UUGCUGGAAAGUGAGACCCUC 381
AL0181182 AGGAGUUCUGGGUGGACAA 177 UUGUCCACCCAGAACUCCUGG 382
AL0181183 GACCAGCUUGUUUGUGAAA 178 UUUCACAAACAAGCUGGUCGG 383
AL0181184 CCUGUGAGCAGCUGGCAAA 179 UUUGCCAGCUGCUCACAGGUA 384
AL0181185 GGUCUCACUUUCCAGCAAA 180 UUUGCUGGAAAGUGAGACCCU 385
AL0181186 CAAAAAUUGGGUUUUAAAA 181 UUUUAAAACCCAAUUUUUGUU 386
AL0181187 GCUUGUUUGUGAAACAAAA 182 UUUUGUUUCACAAACAAGCUG 387
AL0181188 AAGACGUUUAUUACUAACA 183 UGUUAGUAAUAAACGUCUUGC 388
AL0181189 CGACCAGCUUGUUUGUGAA 184 UUCACAAACAAGCUGGUCGGU 389
AL0181190 CUUGUUUGUGAAACAAAAA 185 UUUUUGUUUCACAAACAAGCU 390
AL0181191 ACAACUUCUCGGUGACUCA 186 UGAGUCACCGAGAAGUUGUCC 391
AL0181192 UGGUCGGGAUGCUGGCCAA 187 UUGGCCAGCAUCCCGACCAUU 392
AL0181193 CUGAAUUUCUGUUUGAAUG 188 CAUUCAAACAGAAAUUCAGGU 393
AL0181194 AGGAUCUUAUGACCUGCAG 189 CUGCAGGUCAUAAGAUCCUUG 394
AL0181195 GAGAAGAUUGACAGGUUCA 190 UGAACCUGUCAAUCUUCUCAG 395
AL0181196 GUUCCAAAAAGAAUUCCAA 191 UUGGAAUUCUUUUUGGAACAG 396
AL0181197 UGUAAGAACAUGACCUCCG 192 CGGAGGUCAUGUUCUUACAUU 397
AL0181198 GGCUGUACAGGGCCUGCUA 193 UAGCAGGCCCUGUACAGCCUG 398
AL0181199 CAACUGGAUGAAGAAACUA 194 UAGUUUCUUCAUCCAGUUGAG 399
AL0181200 CCCUCAACUGGAUGAAGAA 195 UUCUUCAUCCAGUUGAGGGAG 400
AL0181201 UACGUGAAAGAUGCAAGCA 196 UGCUUGCAUCUUUCACGUAUU 401
AL0181202 GCAAAGGCCAGCAGCAGAU 197 AUCUGCUGCUGGCCUUUGCCU 402
AL0181203 GCAAGGAUCUUAUGACCUG 198 CAGGUCAUAAGAUCCUUGCAG 403
AL0181204 GCUGACAGGCUACAGGCAA 199 UUGCCUGUAGCCUGUCAGCUG 404
AL0181205 CCCUUGUGUUAGUAAUAAA 200 UUUAUUACUAACACAAGGGAG 405
AL0181206 GCACCUGAAUUUCUGUUUG 201 CAAACAGAAAUUCAGGUGCUU 406
AL0181207 GAGCACAGCAUGAGGCCAG 202 CUGGCCUCAUGCUGUGCUCAG 407
AL0181208 CUCCCUUGUGUUAGUAAUA 203 UAUUACUAACACAAGGGAGAA 408
AL0181209 ACAAUACGUGAAAGAUGCA 204 UGCAUCUUUCACGUAUUGUUC 409
AL0181210 GAACAAUACGUGAAAGAUG 205 CAUCUUUCACGUAUUGUUCAA 410
AL0181211 UUUCUCCCUUGUGUUAGUA 206 UACUAACACAAGGGAGAAAUA 411
AL0181212 CCAAUGCCGGGAAGCCCAA 207 UUGGGCUUCCCGGCAUUGGCC 412
AL0181213 UGCAAGCACCUGAAUUUCU 208 AGAAAUUCAGGUGCUUGCAUC 413
AL0181214 GGUGCUGCAAGGAUCUUAU 209 AUAAGAUCCUUGCAGCACCAG 414
AL0181215 CCACACAGCUGACAGGCUA 210 UAGCCUGUCAGCUGUGUGGUC 415
AL0181216 UUGAACAAUACGUGAAAGA 211 UCUUUCACGUAUUGUUCAAAA 416
AL0181217 GACACCGAAGACAAGUUGA 212 UCAACUUGUCUUCGGUGUCAA 417
AL0181218 GAGCCAGUGUGGACAGCAC 213 GUGCUGUCCACACUGGCUCCC 418
AL0181219 UGGAAGGACAAGAACUGCA 214 UGCAGUUCUUGUCCUUCCAAG 419
AL0181220 CAACUUCUCGGUGACUCAA 215 UUGAGUCACCGAGAAGUUGUC 420
AL0181221 AACGUCUUGCCACAAUAAG 216 CUUAUUGUGGCAAGACGUUUA 421
AL0181222 CUGAGAAGAUUGACAGGUU 217 AACCUGUCAAUCUUCUCAGCA 422
AL0181223 CCAGUUUGCUGGGUUUAUU 218 AAUAAACCCAGCAAACUGGGA 423
AL0181224 ACUUCUCGGUGACUCAAGU 219 ACUUGAGUCACCGAGAAGUUG 424
AL0181225 GUCCCACCUUUUCUUCUAA 789 UUAGAAGAAAAGGUGGGACAC 805
AL0181226 GUCCCACCAUUUCUUCUAA 790 UUAGAAGAAAAGGUGGGACAC 805
AL0181227 GUCCCACCCUUUCUUCUAA 791 UUAGAAGAAAAGGUGGGACAC 805
AL0181228 GUCCCACCGUUUCUUCUAA 792 UUAGAAGAAAAGGUGGGACAC 805
AL0181229 GUCCCACCUAUUCUUCUAA 793 UUAGAAGAAAAGGUGGGACAC 805
AL0181230 GUCCCACCUCUUCUUCUAA 794 UUAGAAGAAAAGGUGGGACAC 805
AL0181231 GUCCCACCUGUUCUUCUAA 795 UUAGAAGAAAAGGUGGGACAC 805
AL0181232 GUCCCACCUUAUCUUCUAA 796 UUAGAAGAAAAGGUGGGACAC 805
AL0181233 GUCCCACCUUCUCUUCUAA 797 UUAGAAGAAAAGGUGGGACAC 805
AL0181234 GUCCCACCUUGUCUUCUAA 798 UUAGAAGAAAAGGUGGGACAC 805
AL0181235 GCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA 113 UCUUAGACCAAIGAGAAACGCCU 806
AL0181236 GCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA 113 UCUUAGACCAAGIAGAAACGCCU 807
AL0181237 GCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA 113 UCUUAGACCAAGGAIAAACGCCU 808
AL0181238 GCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA 113 UCUUAGACCAAGGAGAIACGCCU 809
AL0181239 GCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA 113 UCUUAGACCAAGGAGAAICGCCU 810
AL0181240 GCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA 113 UCUUAGACCAAGGAGAAACICCU 811
AL0181241 GCCACCUUUUCUUCUAAUA 799 UAUUAGAAGAAAAGGUGGCAG 812
AL0181242 GACCUUUUCUUCUAAUGAA 800 UUCAUUAGAAGAAAAGGUCGG 813
AL0181243 CAAGUUGAGAACAAAAAUA 801 UAUUUUUGUUCUCAACUUGAA 814
AL0181244 GGGCAAGAACCAGUGUUUA 802 UAAACACUGGUUCUUGCCCCC 815
AL0181245 GGACCAGCUUGUUUGUGAA 803 UUCACAAACAAGCUGGUCCGU 816
AL0181246 CACCAGCUUGUUUGUGAAA 804 UUUCACAAACAAGCUGGUGGG 817
AL0181247 GCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA 113 UCUUAGACCAIGGAGAAACGCCU 818
AL0181248 GCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA 113 UCUUAGACCIAGGAGAAACGCCU 819
AL0181249 GCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA 113 UCUUAGICCAAGGAGAAACGCCU 820
AL0181250 GCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA 113 UCUUIGACCAAGGAGAAACGCCU 821
AL0181251 GCACCUCGUCAUCCACAAUGA 868 UCAUUGUGGAUGACGAGGUGCAA 872
AL0181252 GUGCUGCUGAGAAGAUUGACA 869 UGUCAAUCUUCUCAGCAGCACCA 873
AL0181253 GAGAGAGAGCCCACAGAGUCA 870 UGACUCUGUGGGCUCUCUCUCAU 874
AL0181254 GCUUUUCUUCUAAUGAGUCGA 871 UCGACUCAUUAGAAGAAAAGCUG 875
表3 修飾寡核苷酸
修飾siRNA編號 有義鏈修飾序列 修飾序列SEQ ID NO /對應裸序列SEQ ID NO 反義鏈修飾序列 修飾序列SEQ ID NO /對應裸序列SEQ ID NO
AL0185001 GmsUmsCmAmUmCmCfAmCfAfAfUmGmAmGmAmGmUmAmCmAm 425/1 UmsGfsUmAmCmUfCmUmCmAmUmUmGmUfGmGfAmUmGmAmCmsGmsAm 599/220
AL0185002 CmsCmsAmCmCmUmCfGmUfCfAfUmCmCmAmCmAmAmUmGmAm 426/3 UmsCfsAmUmUmGfUmGmGfAmUmGmAmCfGmAfGmGmUmGmGmsAmsAm 600/222
AL0185003 CmsCmsUmCmGmUmCfAmUfCfCfAmCmAmAmUmGmAmGmAmAm 427/4 UmsUfsCmUmCmAfUmUmGfUmGmGmAmUfGmAfCmGmAmGmGmsUmsGm 601/223
AL0185004 AmsUmsCmCmAmCmAfAmUfGfAfGmAmGmUmAmCmCmUmGmAm 428/6 UmsCfsAmGmGmUfAmCmUfCmUmCmAmUfUmGfUmGmGmAmUmsGmsAm 602/225
AL0185005 GmsGmsCmAmUmGmCfAmCfAfGfUmGmAmGmCmUmAmUmGmAm 429/14 UmsCfsAmUmAmGfCmUmCfAmCmUmGmUfGmCfAmUmGmCmCmsAmsUm 603/233
AL0185006 GmsAmsGmAmAmGmAfUmUfGfAfCmAmGmGmUmUmCmAmUmGm 430/20 CmsAfsUmGmAmAfCmCmUfGmUmCmAmAfUmCfUmUmCmUmCmsAmsGm 604/239
AL0185007 GmsGmsAmCmAmGmCfAmCfCfCfUmGmGmCmUmUmUmCmAmAm 431/21 UmsUfsGmAmAmAfGmCmCfAmGmGmGmUfGmCfUmGmUmCmCmsAmsCm 605/240
AL0185008 GmsCmsUmGmAmAmCfAmGfCfAfUmUmUmUmUmUmUmUmGmAm 432/40 UmsCfsAmAmAmAfAmAmAfAmUmGmCmUfGmUfUmCmAmGmCmsAmsCm 606/259
AL0185009 GmsAmsGmCmUmUmGfAmAfGfCfGmGmAmUmGmAmGmAmGmAm 433/43 UmsCfsUmCmUmCfAmUmCfCmGmCmUmUfCmAfAmGmCmUmCmsAmsAm 607/262
AL0185010 GmsAmsGmAmGmAmGfAmGfCfCfCmAmCmAmGmAmGmUmCmUm 434/46 AmsGfsAmCmUmCfUmGmUfGmGmGmCmUfCmUfCmUmCmUmCmsAmsUm 608/265
AL0185011 CmsCmsCmAmGmUmCfUmCfCfCfAmCmCmUmUmUmUmCmUmUm 435/61 AmsAfsGmAmAmAfAmGmGfUmGmGmGmAfGmAfCmUmGmGmGmsGmsGm 609/280
AL0185012 CmsAmsGmUmCmUmCfCmCfAfCfCmUmUmUmUmCmUmUmCmUm 436/62 AmsGfsAmAmGmAfAmAmAfGmGmUmGmGfGmAfGmAmCmUmGmsGmsGm 610/281
AL0185013 CmsCmsUmUmUmUmCfUmUfCfUfAmAmUmGmAmGmUmCmGmAm 437/65 UmsCfsGmAmCmUfCmAmUfUmAmGmAmAfGmAfAmAmAmGmGmsUmsGm 611/284
AL0185014 AmsGmsCmCmGmUmUfUmCfUfCfCmUmUmGmGmUmCmUmAmAm 438/66 UmsUfsAmGmAmCfCmAmAfGmGmAmGmAfAmAfCmGmGmCmUmsGmsCm 612/285
AL0185015 GmsCmsCmGmUmUmUfCmUfCfCfUmUmGmGmUmCmUmAmAmAm 439/67 UmsUfsUmAmGmAfCmCmAfAmGmGmAmGfAmAfAmCmGmGmCmsUmsGm 613/286
AL0185016 GmsUmsCmCmAmCmAfAmUfGfAfGmAmGmUmAmCmCmUmGmAm 440/70 UmsCfsAmGmGmUfAmCmUfCmUmCmAmUfUmGfUmGmGmAmCmsGmsAm 614/289
AL0185017 GmsGmsCmAmUmGmCfAmCfAfCfUmGmAmGmCmUmAmUmGmAm 441/71 UmsCfsAmUmAmGfCmUmCfAmCmUmGmUfGmCfAmUmGmCmCmsAmsUm 603/233
AL0185018 GmsAmsGmAmAmGmAfUmUfGfAfCmAmGmGmUmUmCmAmUmAm 442/72 UmsAfsUmGmAmAfCmCmUfGmUmCmAmAfUmCfUmUmCmUmCmsAmsGm 615/290
AL0185019 GmsGmsAmCmAmGmCfAmCfCfGfUmGmGmCmUmUmUmCmAmAm 443/73 UmsUfsGmAmAmAfGmCmCfAmGmGmGmUfGmCfUmGmUmCmCmsAmsCm 605/240
AL0185020 GmsCmsUmGmAmAmCfAmGfCfGfUmUmUmUmUmUmUmUmGmAm 444/74 UmsCfsAmAmAmAfAmAmAfAmUmGmCmUfGmUfUmCmAmGmCmsAmsCm 606/259
AL0185021 CmsCmsUmUmUmUmCfUmUfCfGfAmAmUmGmAmGmUmCmGmAm 445/75 UmsCfsGmAmCmUfCmAmUfUmAmGmAmAfGmAfAmAmAmGmGmsUmsGm 611/284
AL0185022 AmsGmsCmCmGmUmUfUmCfUfGfCmUmUmGmGmUmCmUmAmAm 446/76 UmsUfsAmGmAmCfCmAmAfGmGmAmGmAfAmAfCmGmGmCmUmsGmsCm 612/285
AL0185023 GmsCmsCmGmUmUmUfCmUfGfCfUmUmGmGmUmCmUmAmAmAm 447/77 UmsUfsUmAmGmAfCmCmAfAmGmGmAmGfAmAfAmCmGmGmCmsUmsGm 613/286
AL0185024 CmsGmsUmUmGmUmUfCmUfGfGfGmUmAmCmUmAmCmAmGmAm 448/78 UmsCfsUmGmUmAfGmUmAfCmCmCmAmGfAmAfCmAmAmCmGmsGmsCm 616/291
AL0185025 GmsCmsCmAmCmCmUfCmGfUfCfAmUmCmCmAmCmAmAmUmAm 449/79 UmsAfsUmUmGmUfGmGmAfUmGmAmCmGfAmGfGmUmGmGmCmsAmsGm 617/292
AL0185026 CmsAmsCmCmUmCmGfUmCfAfUfCmCmAmCmAmAmUmGmAmAm 450/80 UmsUfsCmAmUmUfGmUmGfGmAmUmGmAfCmGfAmGmGmUmGmsGmsAm 618/293
AL0185027 AmsUmsCmCmAmCmAfAmUfGfCfGmAmGmUmAmCmCmUmGmAm 451/81 UmsCfsAmGmGmUfAmCmUfCmUmCmAmUfUmGfUmGmGmAmUmsGmsAm 602/225
AL0185028 UmsCmsCmAmCmAmAfUmGfAfGfAmGmUmAmCmCmUmGmUmAm 452/82 UmsAfsCmAmGmGfUmAmCfUmCmUmCmAfUmUfGmUmGmGmAmsUmsGm 619/294
AL0185029 GmsAmsGmCmUmUmGfAmAfGfGfGmGmAmUmGmAmGmAmGmAm 453/83 UmsCfsUmCmUmCfAmUmCfCmGmCmUmUfCmAfAmGmCmUmCmsAmsAm 607/262
AL0185030 GmsAmsGmAmGmAmGfAmGfCfGfCmAmCmAmGmAmGmUmCmUm 454/84 AmsGfsAmCmUmCfUmGmUfGmGmGmCmUfCmUfCmUmCmUmCmsAmsUm 608/265
AL0185031 GmsUmsUmUmUmUmUfGmAfGfCfUmUmGmAmAmGmCmGmGmAm 455/85 UmsCfsCmGmCmUfUmCmAfAmGmCmUmCfAmAfAmAmAmAmCmsAmsUm 620/295
AL0185032 GmsUmsUmUmUmGmAfGmCfUfUfGmAmAmGmCmGmGmAmUmAm 456/86 UmsAfsUmCmCmGfCmUmUfCmAmAmGmCfUmCfAmAmAmAmCmsAmsAm 621/296
AL0185033 GmsUmsUmUmGmAmGfCmUfUfGfAmAmGmCmGmGmAmUmGmAm 457/87 UmsCfsAmUmCmCfGmCmUfUmCmAmAmGfCmUfCmAmAmAmCmsAmsAm 622/297
AL0185034 CmsCmsAmGmUmCmUfCmCfCfAfCmCmUmUmUmUmCmUmUmAm 458/88 UmsAfsAmGmAmAfAmAmGfGmUmGmGmGfAmGfAmCmUmGmGmsGmsGm 623/298
AL0185035 CmsCmsCmCmAmGmUfCmUfCfCfCmAmCmCmUmUmUmUmCmUm 459/89 AmsGfsAmAmAmAfGmGmUfGmGmGmAmGfAmCfUmGmGmGmGmsAmsGm 624/299
AL0185036 GmsCmsGmAmCmUmUfUmGfAfGfCmUmGmGmAmAmAmGmCmAm 460/90 UmsGfsCmUmUmUfCmCmAfGmCmUmCmAfAmAfGmUmCmGmCmsCmsUm 625/300
AL0185037 GmsCmsAmGmCmCmGfUmUfUfCfUmCmCmUmUmGmGmUmCmUm 461/91 AmsGfsAmCmCmAfAmGmGfAmGmAmAmAfCmGfGmCmUmGmCmsUmsUm 626/301
AL0185038 CmsCmsGmUmUmUmCfUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmUm 462/92 AmsCfsUmUmAmGfAmCmCfAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmGmGmsCmsUm 627/302
AL0185039 GmsUmsCmCmAmCmAfAmUfGfAfGmAmGmUmAmCmCmUmGmAm 440/70 UmsCfsAmGmGmUfAmCmUfCmUmCmAmUfUmGfUmGmGmAmCmsGmsAm 614/289
AL0185040 GmsUmsCmCmAmCmAfAmUfGfAfGmAmGmUmAmCmCmUmGmUm 463/93 AmsCfsAmGmGmUfAmCmUfCmUmCmAmUfUmGfUmGmGmAmCmsGmsAm 628/303
AL0185041 AmsUmsCmCmAmCmAfAmUfGfAfGmAmGmUmAmCmCmUmGmUm 464/94 AmsCfsAmGmGmUfAmCmUfCmUmCmAmUfUmGfUmGmGmAmUmsGmsAm 629/304
AL0185042 GmsCmsAmUmCmCmAfCmAfAfUfGmAmGmAmGmUmAmCmCmUm 465/95 AmsGfsGmUmAmCfUmCmUfCmAmUmUmGfUmGfGmAmUmGmCmsCmsGm 630/305
AL0185043 CmsCmsCmAmGmUmCfUmCfCfCfAmCmCmUmUmUmUmCmUmAm 466/96 UmsAfsGmAmAmAfAmGmGfUmGmGmGmAfGmAfCmUmGmGmGmsGmsGm 631/306
AL0185044 CmsAmsGmUmCmUmCfCmCfAfCfCmUmUmUmUmCmUmUmCmAm 467/97 UmsGfsAmAmGmAfAmAmAfGmGmUmGmGfGmAfGmAmCmUmGmsGmsGm 632/307
AL0185045 GmsGmsUmCmUmCmCfCmAfCfCfUmUmUmUmCmUmUmCmUmAm 468/98 UmsAfsGmAmAmGfAmAmAfAmGmGmUmGfGmGfAmGmAmCmCmsGmsGm 633/308
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AL0185057 GmsCmsCmGmUmUmUfCmUfCfGfUmUmGmGmUmCmUmAmAmAm 478/108 UmsUfsUmAmGmAfCmCmAmAmGmGmAmGfAmAfAmCmGmGmCmsUmsGm 645/286
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AL0185261 GmsAmsGmAmGmAmGmAmGfCfCfCmAmCmAmGmAmGmUmCmAm 884/870 UmsGfsAmCmUmCfUmGmUfGmGmGmCmUfCmUfCmUmCmUmCmsAmsUm 895/874
AL0185262 GmsAmsGmAmGmAmGmAmGfCfCfCmAmCmAmGmAmGmUmCmAm 884/870 （VPUm）sGfsAmCmUmCfUmGmUfGmGmGmCmUfCmUfCmUmCmUmCmsAmsUm 896/874
AL0185263 CmsCmsUmUmUmUmCmUmUfCfUfAmAmUmGmAmGmUmCmGmAm 885/65 UmsCfsGmAmCmUfCmAmUfUmAmGmAmAfGmAfAmAmAmGmGmsUmsGm 611/284
AL0185264 GmsCmsUmUmUmUmCmUmUfCfUfAmAmUmGmAmGmUmCmGmAm 886/871 UmsCfsGmAmCmUfCmAmUfUmAmGmAmAfGmAfAmAmAmGmCmsUmsGm 897/875
AL0185265 GmsCmsUmUmUmUmCmUmUfCfUfAmAmUmGmAmGmUmCmGmAm 886/871 （VPUm）sdCsGmAmdCUmdCAmUmUmAmdGAmAfGmAmAmAmAmGmCmsUmsGm 898/875
AL0185266 GmsUmsGmCmUmGmCmUmGfAfGfAmAmGmAmUmUmGmAmCmAm 880/869 （VPUm）sdGsUmCmdAAmdTCmUmUmCmdTCmAfGmCmAmGmCmAmCmsCmsAm 899/873
AL0185267 GmsAmsGmAmAmGmAmUmUfGfAfCmAmGmGmUmUmCmAmUmAm 881/72 （VPUm）sdAsUmGmdAAmdCCmUmGmUmdCAmAfUmCmUmUmCmUmCmsAmsGm 900/290
AL0185268 GmsCmsUmGmAmAmCmAmGfCfGfUmUmUmUmUmUmUmUmGmAm 882/74 UmsdCsAmAmdAAmdAAmAmAmUmdGCmUfGmUmUmCmAmGmCmsAmsCm 901/259
AL0185269 GmsCmsUmGmAmAmCmAmGfCfGfUmUmUmUmUmUmUmUmGmAm 882/74 （VPUm）sdCsAmAmdAAmdAAmAmAmUmdGCmUfGmUmUmCmAmGmCmsAmsCm 902/259
AL0185270 GmsAmsGmAmGmAmGmAmGfCfCfCmAmCmAmGmAmGmUmCmAm 884/870 （VPUm）sdGsAmCmdTCmdTGmUmGmGmdGCmUfCmUmCmUmCmUmCmsAmsUm 903/874
AL0185237 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm 592/113 （VPUm）sCfsUmUmAmGfAmCmCfAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmImCmsCmsUm 857/811
AL0185271 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm 592/113 （VPUm）sCfsUmUmAm（G-2'5'）AmCmCfAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmImCmsCmsUm 904/811
AL0185272 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm 592/113 （VPUm）sCfsUmUmAmGf（A-2'5'）CmCfAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmImCmsCmsUm 905/811
AL0185273 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm 592/113 （VPUm）sCfsUmUmAmGm（A-2'5'）CmCfAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmImCmsCmsUm 906/811
AL0185274 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm 592/113 （VPUm）sCfsUmUmdAGm（A-2'5'）CmCfAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmImCmsCmsUm 907/811
AL0185259 GmsCmsUmGmAmAmCmAmGfCfGfUmUmUmUmUmUmUmUmGmAm 882/74 （VPUm）sCfsAmAmAmAfAmAmAfAmUmGmCmUfGmUfUmCmAmGmCmsAmsCm 895/259
AL0185275 GmsCmsUmGmAmAmCmAmGfCfGfUmUmUmUmUmUmUmUmGmAm 882/74 （VPUm）sCfsAmAmAm（A-2'5'）AmAmAfAmUmGmCmUfGmUfUmCmAmGmCmsAmsCm 908/259
AL0185276 GmsCmsUmGmAmAmCmAmGfCfGfUmUmUmUmUmUmUmUmGmAm 882/74 （VPUm）sCfsAmAmAmAf（A-2'5'）AmAfAmUmGmCmUfGmUfUmCmAmGmCmsAmsCm 909/259
AL0185277 GmsCmsUmGmAmAmCmAmGfCfGfUmUmUmUmUmUmUmUmGmAm 882/74 （VPUm）sCfsAmAmAmAm（A-2'5'）AmAfAmUmGmCmUfGmUfUmCmAmGmCmsAmsCm 910/259
AL0185278 GmsCmsUmGmAmAmCmAmGfCfGfUmUmUmUmUmUmUmUmGmAm 882/74 （VPUm）sCfsAmAmdAAm（A-2'5'）AmAfAmUmGmCmUfGmUfUmCmAmGmCmsAmsCm 911/259
表4 帶靶向配體的siRNA序列
帶靶向配體的siRNA編號 有義鏈修飾序列 修飾序列SEQ ID NO /對應裸序列SEQ ID NO 反義鏈修飾序列 修飾序列SEQ ID NO /對應裸序列SEQ ID NO
AL0187001 GmsUmsCmAmUmCmCfAmCfAfAfUmGmAmGmAmGmUmAmCmAm_L96 425/1 UmsGfsUmAmCmUfCmUmCmAmUmUmGmUfGmGfAmUmGmAmCmsGmsAm 599/220
AL0187002 GmsUmsCmAmUmCmCfAmCfAfAfUmGmAmGmAmGmUmAmCmAm_L96 425/1 UmsGfsUmAmCm（Tgn）CmUmCmAmUmUmGmUfGmGfAmUmGmAmCmsGmsAm 677/220
AL0187003 CmsAmsGmUmCmUmCfCmCfAfGfCmUmUmUmUmCmUmUmCmUm_L96 477/107 AmsGfsAmAmGmAfAmAmAmGmGmUmGmGfGmAfGmAmCmUmGmsGmsGm 643/281
AL0187004 GmsGmsCmCmGmUmUfUmCfUfCfCmUmUmGmGmUmCmUmAmAm_L96 471/101 UmsUfsAmGmAmCfCmAmAmGmGmAmGmAfAmAfCmGmGmCmCmsGmsCm 644/311
AL0187005 GmsCmsCmGmUmUmUfCmUfCfGfUmUmGmGmUmCmUmAmAmAm_L96 478/108 UmsUfsUmAmGmAfCmCmAmAmGmGmAmGfAmAfAmCmGmGmCmsUmsGm 645/286
AL0187006 GmsCmsGmUmUmUmCfUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmUm_L96 482/112 AmsCfsUmUmAmGfAmCmCmAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmGmCmsCmsUm 647/318
AL0187007 GmsCmsGmUmUmUmCfUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm_L96 483/113 UmsCfsUmUmAmGfAmCmCmAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmGmCmsCmsUm 648/319
AL0187008 CmsCmsGmUmUmUmCfUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm_L96 481/111 （VPUm）sCfsUmUmAmGfAmCmCmAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmGmGmsCmsUm 681/317
AL0187009 GmsGmsCmCmGmUmUfUmCfUfCfCmUmUmGmGmUmCmUmAmAm_L96 471/101 （VPUm）sUfsAmGmAmCfCmAmAmGmGmAmGmAfAmAfCmGmGmCmCmsGmsCm 678/311
AL0187010 GmsCmsCmGmUmUmUfCmUfCfGfUmUmGmGmUmCmUmAmAmAm_L96 478/108 （VPUm）sUfsUmAmGmAfCmCmAmAmGmGmAmGfAmAfAmCmGmGmCmsUmsGm 679/286
AL0187011 GmsCmsGmUmUmUmCfUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm_L96 483/113 （VPUm）sCfsUmUmAmGfAmCmCmAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmGmCmsCmsUm 680/319
AL0187012 CmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm_A1 590/111 （APU）sCfsUmUmAmGfAmCmCfAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmGmGmsCmsUm 787/317
AL0187013 GmsCmsCmGmUmUmUmCmUfCfGfUmUmGmGmUmCmUmAmAmAm_A1 591/108 （APU）sUfsUmAmGmAfCmCmAfAmGmGmAmGfAmAfAmCmGmGmCmsUmsGm 788/286
AL0187014 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm_A1 592/113 （APU）sCfsUmUmAmGfAmCmCfAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmGmCmsCmsUm 774/319
AL0187015 CmsAmsGmUmCmUmCmCmCfAfGfCmUmUmUmUmCmUmUmCmUm_A1 593/107 AmsGfsAmAmGmAfAmAmAfGmGmUmGmGfGmAfGmAmCmUmGmsGmsGm 610/281
AL0187016 GmsCmsGmUmUmUmCfUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmUm_A1 482/112 AmsCfsUmUmAmGfAmCmCmAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmGmCmsCmsUm 647/318
AL0187017 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmUm_A1 594/112 AmsCfsUmUmAmGfAmCmCmAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmGmCmsCmsUm 647/318
AL0187018 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmUm_A1 594/112 AmsCfsUmUmAmGfAmCfCmAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmGmCmsCmsUm 763/318
AL0187019 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmUm_A1 594/112 AmsCfsUmUmAmGfAmCmCfAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmGmCmsCmsUm 764/318
AL0187020 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmUm_L96 594/112 AmsCfsUmUmAmGfAmCmCfAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmGmCmsCmsUm 764/318
AL0187021 CmsAmsGmUmCmUmCmCmCfAfGfCmUmUmUmUmCmUmUmCmUm_L96 593/107 AmsGfsAmAmGmAfAmAmAfGmGmUmGmGfGmAfGmAmCmUmGmsGmsGm 610/281
AL0187022 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm_L96 592/113 UmsCfsUmUmAmGfAmCmCfAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmGmCmsCmsUm 773/319
AL0187023 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm_L96 592/113 （APU）sCfsUmUmAmGfAmCmCfAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmGmCmsCmsUm 774/319
AL0187024 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm_L96 592/113 （VPUm）sCfsUmUmAmGfAmCmCfAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmGmCmsCmsUm 775/319
AL0187025 CmsUmsCmCmCmAmCfCfUfUmUmUmCmUmUmCmUmAmAm_L96 595/129 （APU）sUfsAmGmAmAfGmAmAfAmAmGmGmUfGmGfGmAmGmsAmsCm 776/334
AL0187026 CmsCmsCmAmCmCmUfUfUfUmCmUmUmCmUmAmAmUmAm_L96 596/133 （APU）sAfsUmUmAmGfAmAmGfAmAmAmAmGfGmUfGmGmGmsAmsGm 777/338
AL0187027 CmsAmsCmCmUmUmUfUfCfUmUmCmUmAmAmUmGmAmAm_L96 597/135 （APU）sUfsCmAmUmUfAmGmAfAmGmAmAmAfAmGfGmUmGmsGmsGm 778/340
AL0187028 CmsCmsUmUmUmUmCfUfUfCmUmAmAmUmGmAmGmUmAm_L96 598/137 （APU）sAfsCmUmCmAfUmUmAfGmAmAmGmAfAmAfAmGmGmsUmsGm 779/342
AL0187029 CmsAmsAmGmUmUmGfAfGfAmAmCmAmAmAmAmAmUmUm_L96 518/148 AmsAfsUmUmUmUfUmGmUfUmCmUmCmAfAmCfUmUmGmsAmsAm 780/353
AL0187030 AmsGmsGmCmAmAmGfAfAfCmCmAmGmUmGmUmUmUmAm_L96 532/162 （APU）sAfsAmAmCmAfCmUmGfGmUmUmCmUfUmGfCmCmUmsCmsCm 781/367
AL0187031 GmsUmsUmUmUmAmAfAfAfUmUmAmAmAmGmUmAmUmAm_L96 536/166 （APU）sAfsUmAmCmUfUmUmAfAmUmUmUmUfAmAfAmAmCmsCmsCm 782/371
AL0187032 GmsAmsCmCmAmGmCfUfUfGmUmUmUmGmUmGmAmAmAm_L96 548/178 （APU）sUfsUmCmAmCfAmAmAfCmAmAmGmCfUmGfGmUmCmsGmsGm 783/383
AL0187033 GmsGmsUmCmUmCmAfCfUfUmUmCmCmAmGmCmAmAmAm_L96 550/180 （APU）sUfsUmGmCmUfGmGmAfAmAmGmUmGfAmGfAmCmCmsCmsUm 784/385
AL0187034 CmsGmsAmCmCmAmGfCfUfUmGmUmUmUmGmUmGmAmAm_L96 554/184 （APU）sUfsCmAmCmAfAmAmCfAmAmGmCmUfGmGfUmCmGmsGmsUm 785/389
AL0187037 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm_L96 592/113 （VPUm）sCfsUmUmAmGfAmCmCfAmAmGmGmAfImAfAmAmCmGmCmsCmsUm 854/808
AL0187040 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm_L96 592/113 （VPUm）sCfsUmUmAmGfAmCmCfAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmImCmsCmsUm 857/811
AL0187041 GmsCmsCmAmCmCmUfUfUfUmCmUmUmCmUmAmAmUmAm_L96 833/799 （VPUm）sAfsUmUmAmGfAmAmGfAmAmAmAmGfGmUfGmGmCmsAmsGm 858/812
AL0187042 GmsAmsCmCmUmUmUfUfCfUmUmCmUmAmAmUmGmAmAm_L96 834/800 （VPUm）sUfsCmAmUmUfAmGmAfAmGmAmAmAfAmGfGmUmCmsGmsGm 859/813
AL0187043 CmsAmsAmGmUmUmGfAfGfAmAmCmAmAmAmAmAmUmAm_L96 835/801 （VPUm）sAfsUmUmUmUfUmGmUfUmCmUmCmAfAmCfUmUmGmsAmsAm 860/814
AL0187044 GmsGmsGmCmAmAmGfAfAfCmCmAmGmUmGmUmUmUmAm_L96 836/802 （VPUm）sAfsAmAmCmAfCmUmGfGmUmUmCmUfUmGfCmCmCmsCmsCm 861/815
AL0187045 GmsGmsAmCmCmAmGfCfUfUmGmUmUmUmGmUmGmAmAm_L96 837/803 （VPUm）sUfsCmAmCmAfAmAmCfAmAmGmCmUfGmGfUmCmCmsGmsUm 862/816
AL0187046 CmsAmsCmCmAmGmCfUfUfGmUmUmUmGmUmGmAmAmAm_L96 838/804 （VPUm）sUfsUmCmAmCfAmAmAfCmAmAmGmCfUmGfGmUmGmsGmsGm 863/817
AL0187047 GmsUmsCmCmCmAmCfCfUfUmUmUmCmUmUmCmUmAmAm_L96 822/789 （VPUm）sUfsAmGmAmAfGmAmAfAmAmGmGmUfGmGfGmAmCmsAmsCm 839/805
AL0187048 GmsUmsCmCmCmAmCfCfUfCmUmUmCmUmUmCmUmAmAm_L96 827/794 （VPUm）sUfsAmGmAmAfGmAmAfAmAmGmGmUfGmGfGmAmCmsAmsCm 839/805
AL0187049 GmsUmsCmCmCmAmCfCfUfUmGmUmCmUmUmCmUmAmAm_L96 831/798 （VPUm）sUfsAmGmAmAfGmAmAfAmAmGmGmUfGmGfGmAmCmsAmsCm 839/805
AL0187050 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm_L96 592/113 （VPUm）sCfsUmUmAmGfAmCmCfAmImGmGmAfGmAfAmAmCmGmCmsCmsUm 864/818
AL0187051 GmsCmsUmGmAmAmCmAmGfCfGfUmUmUmUmUmUmUmUmGmAm_L96 882/74 （VPUm）sCfsAmAmAmAfAmAmAfAmUmGmCmUfGmUfUmCmAmGmCmsAmsCm 894/259
AL0187052 GmsCmsUmGmAmAmCmAmGfCfGfUmUmUmUmUmUmUmUmGmAm_L96 882/74 （VPUm）sdCsAmAmdAAmdAAmAmAmUmdGCmUfGmUmUmCmAmGmCmsAmsCm 902/259
AL0187053 GmsAmsGmAmGmAmGmAmGfCfCfCmAmCmAmGmAmGmUmCmAm_L96 884/870 （VPUm）sGfsAmCmUmCfUmGmUfGmGmGmCmUfCmUfCmUmCmUmCmsAmsUm 896/874
AL0187054 GmsAmsGmAmGmAmGmAmGfCfCfCmAmCmAmGmAmGmUmCmAm_L96 884/870 （VPUm）sdGsAmCmdTCmdTGmUmGmGmdGCmUfCmUmCmUmCmUmCmsAmsUm 903/874
AL0187055 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm_L96 592/113 （VPUm）sCfsUmUmAmGf（A-2'5'）CmCfAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmImCmsCmsUm 905/811
AL0187056 GmsCmsGmUmUmUmCmUmCfCfUfUmGmGmUmCmUmAmAmGmAm_L96 592/113 （VPUm）sCfsUmUmdAGm（A-2'5'）CmCfAmAmGmGmAfGmAfAmAmCmImCmsCmsUm 907/811
AL0187057 GmsCmsUmGmAmAmCmAmGfCfGfUmUmUmUmUmUmUmUmGmAm_L96 882/74 （VPUm）sCfsAmAmAmAm（A-2'5'）AmAfAmUmGmCmUfGmUfUmCmAmGmCmsAmsCm 910/259
AL0187058 GmsCmsUmGmAmAmCmAmGfCfGfUmUmUmUmUmUmUmUmGmAm_L96 882/74 （VPUm）sCfsAmAmdAAm（A-2'5'）AmAfAmUmGmCmUfGmUfUmCmAmGmCmsAmsCm 911/259
（1）Hep3B細胞培養和轉染：
使用人類肝癌細胞系Hep3B（上海複申生物科技有限公司），置於37℃，5% CO 2的培養箱中，使用DMEM培養基（Hyclone，SH30022.01，2g/L Glucose），添加10%FBS（aqlabteech，AQ-MV-06600）、1%青黴素-鏈黴素（凱基生物，KGY0023）培養，待細胞匯合度達到90%，藉由胰酶（Amresco，0458-250G）進行消化，用計數儀（Nexcelom，cellometer Mini）計數，150 μl細胞懸液/孔，接種於96孔板中，細胞數：2*10 4細胞/孔，待次日貼壁進行轉染。
使用Lipofectamine TMRNAiMAX（thermofisher，13778150）進行轉染，將5 μl（50nM）稀釋化合物分散在20 μL Opti-MEM（thermofisher，1105821）中，0.2 μL RNAiMAX分散在25 μL Opti-MEM中，siRNA的終濃度為5nM，孵育5分鐘後，與化合物分散液混勻，孵育10分鐘，將細胞加入轉染複合物中（n=2），在37℃、5%CO 2培養箱中培養24小時。
（2）細胞裂解
轉染一天后去除培養基；加入PBS清洗； 每孔加入 50 μl 裂解液，保存於 -80°C。
（3）RT-qPCR
使用無RNA酶的離心管中配製混合液2.5μl buffer、0.2μl 的Enzyme Mix（Foregene，DRT-02011），0.4μl 裂解液、0.4μl的5μM的引物，加無RNA酶的ddH 2O至5μl，每個樣品3個重複，將96孔板放到qPCR儀（ROCGENE，Archimed），執行程式：stage1，42℃，5min；95℃，10sec；擴增，95℃，5sec；59℃，20sec；72℃，10sec；40個迴圈；溶解曲線，95℃，15sec，59℃，60sec，95℃，15sec。
（4）資料統計分析：
將資料匯出EXCEL格式，用CT AGT-CT hTBP，將對照組進行歸一化處理，為了計算相對沉默效率的倍數變化，資料使用△△CT法進行分析，結果見表5和表6，每個表格的資料為單獨試驗所獲得的資料，由於細胞的批次不同，對靶基因的沉默效率會有不同。
在給藥量為0.05nM時，裸序列AL0181001-AL0061069、AL0181070-AL0181223組對Hep3B細胞株的AGT基因表達水準的抑制效果如表5和表6所示。抑制率在10-90%之間，其中AL0181001、AL0181002、AL0181003、AL0181004、AL0181005、AL0181006、AL0181012、AL0181014、AL0181019、AL0181020、AL0181021、AL0181033、AL0181038、AL0181040、AL0181042、AL0181043、AL0181045、AL0181046、AL0181050、AL0181051、AL0181053、AL0181056、AL0181059、AL0181060、AL0181061、AL0181062、AL0181063、AL0181065、AL0181066、AL0181067、AL0181069、AL0181153、AL0181074、AL0181154、AL0181156、AL0181077、AL0181078、AL0181160、AL0181084、AL0181167、AL0181089、AL0181169、AL0181170、AL0181171、AL0181090、AL0181091、AL0181092、AL0181097、AL0181098、AL0181099、AL0181178、AL0181102、AL0181103、AL0181104、AL0181105、AL0181181、AL0181183、AL0181185、AL0181108、AL0181110、AL0181111、AL0181112、AL0181187、AL0181189、AL0181113、AL0181115、AL0181195、AL0181128、AL0181135、AL0181136、AL0181215、AL0181217、AL0181218、AL0181147和AL0181222組對AGT的mRNA的敲低率大於75%，甚至大於90%。 表2 裸序列AGT siRNA敲低水準
序列編號 0.05nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%） 序列編號 0.05nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%）
平均值 SD 平均值 SD
AL0181001 4 0 AL0181036 84 1
AL0181002 21 2 AL0181037 83 2
AL0181003 12 1 AL0181038 13 1
AL0181004 6 1 AL0181039 26 2
AL0181005 21 2 AL0181040 9 0
AL0181006 8 0 AL0181041 27 0
AL0181007 27 4 AL0181042 15 0
AL0181008 52 2 AL0181043 10 0
AL0181009 53 0 AL0181044 49 2
AL0181010 30 1 AL0181045 19 1
AL0181011 30 1 AL0181046 8 0
AL0181012 18 0 AL0181047 26 1
AL0181013 34 4 AL0181048 35 2
AL0181014 8 3 AL0181049 48 6
AL0181015 31 2 AL0181050 21 7
AL0181016 30 3 AL0181051 12 6
AL0181017 91 8 AL0181052 39 10
AL0181018 74 3 AL0181053 23 6
AL0181019 11 1 AL0181054 40 3
AL0181020 12 0 AL0181055 46 1
AL0181021 10 0 AL0181056 14 1
AL0181022 32 1 AL0181057 26 3
AL0181023 42 1 AL0181058 51 3
AL0181024 65 4 AL0181059 14 1
AL0181025 59 2 AL0181060 17 2
AL0181026 56 2 AL0181061 10 1
AL0181027 26 3 AL0181062 10 1
AL0181028 44 4 AL0181063 14 0
AL0181029 78 9 AL0181064 42 1
AL0181030 28 3 AL0181065 5 0
AL0181031 35 2 AL0181066 6 0
AL0181032 50 3 AL0181067 6 0
AL0181033 12 1 AL0181068 36 2
AL0181034 41 4 AL0181069 17 1
AL0181035 58 6 　 　 　
表6 裸序列AGT siRNA敲低水準
序列編號 0.05nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%） 序列名稱 0.05nM給藥量 mRNA剩餘活性（%）
平均值 SD 平均值 SD
AL0181070 94 11 AL0181150 73 11
AL0181071 87 7 AL0181151 69 13
AL0181072 94 12 AL0181152 80 13
AL0181073 41 9 AL0181153 18 5
AL0181074 23 4 AL0181154 16 3
AL0181075 26 2 AL0181155 41 12
AL0181076 32 12 AL0181156 24 6
AL0181077 21 2 AL0181157 58 6
AL0181078 21 1 AL0181158 59 4
AL0181079 40 2 AL0181159 33 2
AL0181080 40 7 AL0181160 15 2
AL0181081 37 6 AL0181161 45 7
AL0181082 72 14 AL0181162 68 8
AL0181083 37 4 AL0181163 94 12
AL0181084 19 10 AL0181164 87 26
AL0181085 51 2 AL0181165 34 2
AL0181086 61 5 AL0181166 95 12
AL0181087 66 5 AL0181167 14 1
AL0181088 63 16 AL0181168 30 3
AL0181089 19 4 AL0181169 23 3
AL0181090 19 4 AL0181170 22 3
AL0181091 8 2 AL0181171 20 0
AL0181092 13 3 AL0181172 69 13
AL0181094 40 11 AL0181173 93 14
AL0181095 50 34 AL0181174 93 7
AL0181096 55 10 AL0181175 67 4
AL0181097 18 3 AL0181176 40 8
AL0181098 21 5 AL0181177 42 9
AL0181099 14 3 AL0181178 16 1
AL0181100 26 9 AL0181179 48 4
AL0181101 37 20 AL0181180 56 6
AL0181102 15 4 AL0181181 24 1
AL0181103 13 5 AL0181182 39 4
AL0181104 17 2 AL0181183 14 3
AL0181105 17 4 AL0181184 28 10
AL0181106 46 10 AL0181185 15 5
AL0181107 67 36 AL0181186 65 10
AL0181108 21 5 AL0181187 8 2
AL0181110 24 6 AL0181188 72 13
AL0181111 23 9 AL0181189 19 2
AL0181112 22 4 AL0181190 35 4
AL0181113 23 8 AL0181191 27 3
AL0181114 48 2 AL0181192 60 6
AL0181115 22 4 AL0181193 67 6
AL0181116 40 11 AL0181194 104 17
AL0181118 26 4 AL0181195 22 5
AL0181119 75 14 AL0181196 29 6
AL0181120 124 25 AL0181197 119 28
AL0181121 40 3 AL0181198 89 17
AL0181122 61 9 AL0181199 29 4
AL0181123 62 7 AL0181200 32 8
AL0181124 113 12 AL0181201 112 12
AL0181125 33 12 AL0181202 48 6
AL0181126 45 6 AL0181203 40 3
AL0181127 77 9 AL0181204 53 5
AL0181128 23 6 AL0181205 56 15
AL0181129 36 5 AL0181206 51 9
AL0181130 47 4 AL0181207 68 17
AL0181133 43 2 AL0181208 65 7
AL0181134 33 12 AL0181209 71 4
AL0181135 22 3 AL0181210 64 9
AL0181136 23 2 AL0181211 61 8
AL0181137 35 8 AL0181212 43 9
AL0181138 40 6 AL0181213 66 20
AL0181139 31 4 AL0181214 46 8
AL0181140 36 5 AL0181215 24 5
AL0181141 50 7 AL0181216 54 5
AL0181142 26 4 AL0181217 18 5
AL0181143 34 9 AL0181218 20 3
AL0181144 132 14 AL0181219 46 3
AL0181145 104 23 AL0181220 26 7
AL0181146 63 6 AL0181221 67 12
AL0181147 20 2 AL0181222 21 2
AL0181148 120 17 AL0181223 35 2
AL0181149 68 12 AL0181001 28 2
將mRNA抑制率按從高到低排序後，取前15，並根據序列位置進行步移的siRNA設計，所有序列進行化學修飾，在給藥量為0.5nM和0.05nM時，修飾序列AL0185001-AL0185180組的AGT mRNA的敲低情況如表7所示。 表7 修飾序列AGT siRNA敲低水準
修飾siRNA編號 0.5nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%） 0.05nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%）
平均值 SD 平均值 SD
AL0185001 15 4 55 6
AL0185002 49 13 74 4
AL0185003 51 3 84 15
AL0185004 50 7 95 12
AL0185005 54 25 69 29
AL0185006 66 9 88 16
AL0185007 57 1 76 1
AL0185008 57 12 78 8
AL0185009 102 4 97 16
AL0185010 52 14 78 17
AL0185011 49 11 99 7
AL0185012 29 8 65 1
AL0185013 53 18 72 8
AL0185014 29 1 62 2
AL0185015 26 5 48 0
AL0185016 68 13 121 24
AL0185017 41 1 80 10
AL0185018 38 3 57 1
AL0185019 52 1 97 13
AL0185020 38 3 53 32
AL0185021 65 13 85 11
AL0185022 18 1 54 10
AL0185023 29 4 70 7
AL0185024 33 3 24 3
AL0185025 64 4 41 3
AL0185026 41 4 80 7
AL0185027 15 1 44 4
AL0185028 38 2 42 3
AL0185029 46 4 58 5
AL0185030 40 2 51 4
AL0185031 59 5 70 6
AL0185032 108 8 70 5
AL0185033 52 4 72 5
AL0185034 26 2 45 4
AL0185035 20 1 73 5
AL0185036 91 8 108 10
AL0185037 33 2 61 4
AL0185038 2 0 19 1
AL0185039 9 4 47 8
AL0185040 15 13 49 11
AL0185041 3 1 35 1
AL0185042 49 12 72 6
AL0185043 19 6 51 4
AL0185044 13 8 33 8
AL0185045 62 12 63 4
AL0185046 9 5 40 16
AL0185047 13 1 49 11
AL0185048 5 1 28 19
AL0185049 13 11 42 23
AL0185050 72 3 70 4
AL0185051 32 14 72 19
AL0185052 48 0 75 10
AL0185053 35 5 44 3
AL0185054 4 2 13 8
AL0185055 15 5 70 11
AL0185056 10 2 45 16
AL0185057 11 4 69 12
AL0185058 21 7 74 12
AL0185059 19 4 63 8
AL0185060 28 2 76 15
AL0185061 17 6 64 9
AL0185062 13 4 56 2
AL0185063 11 3 48 6
AL0185064 11 3 19 5
AL0185065 7 4 22 4
AL0185066 30 11 72 11
AL0185067 48 9 81 3
AL0185068 43 17 68 15
AL0185069 49 13 71 15
AL0185070 98 19 90 5
AL0185071 133 5 103 24
AL0185072 84 10 99 29
AL0185073 65 22 74 21
AL0185074 66 25 70 13
AL0185075 22 2 44 15
AL0185076 65 6 75 9
AL0185077 63 12 75 22
AL0185078 30 21 67 4
AL0185081 10 7 48 10
AL0185082 33 15 79 20
AL0185083 23 12 68 10
AL0185084 53 25 83 19
AL0185085 6 1 30 7
AL0185086 6 4 15 4
AL0185087 9 3 30 8
AL0185088 60 7 119 15
AL0185089 6 4 24 2
AL0185090 27 6 77 8
AL0185100 70 9 97 3
AL0185101 65 6 82 9
AL0185102 48 20 103 10
AL0185103 33 5 88 2
AL0185104 5 1 29 5
AL0185105 19 5 86 1
AL0185106 79 6 109 3
AL0185107 75 5 83 7
AL0185108 62 5 77 2
AL0185109 4 2 55 24
AL0185110 6 4 55 20
AL0185111 13 3 60 11
AL0185112 15 6 66 21
AL0185113 21 10 57 7
AL0185114 66 8 70 10
AL0185115 81 19 106 19
AL0185116 47 17 89 11
AL0185117 70 11 73 13
AL0185118 96 6 104 4
AL0185119 63 17 89 7
AL0185120 58 8 80 12
AL0185121 50 16 100 36
AL0185122 66 25 98 4
AL0185123 6 1 39 3
AL0185124 28 8 111 25
AL0185125 12 5 55 20
AL0185126 11 5 59 28
AL0185127 5 2 69 16
AL0185128 69 10 88 25
AL0185129 54 3 56 6
AL0185130 77 20 76 6
AL0185131 38 10 79 8
AL0185132 62 21 96 13
AL0185133 37 16 73 2
AL0185134 35 15 91 7
AL0185135 82 16 117 19
AL0185136 88 13 99 16
AL0185137 27 14 68 20
AL0185138 37 10 101 4
AL0185139 11 3 67 10
AL0185140 63 15 100 20
AL0185141 9 2 93 11
AL0185142 80 12 117 28
AL0185143 112 22 103 14
AL0185144 110 21 130 9
AL0185145 4 2 40 13
AL0185146 124 24 142 11
AL0185147 19 6 71 26
AL0185148 80 19 100 21
AL0185149 52 13 72 25
AL0185150 107 21 82 9
AL0185151 75 22 98 20
AL0185152 25 10 90 15
AL0185153 65 11 92 28
AL0185154 94 14 122 10
AL0185155 72 17 111 51
AL0185156 27 9 89 19
AL0185157 95 43 103 39
AL0185158 68 28 99 29
AL0185159 72 13 88 5
AL0185160 88 15 94 14
AL0185161 69 11 78 7
AL0185162 64 6 82 5
AL0185163 94 22 107 34
AL0185164 82 17 95 20
AL0185165 71 14 99 16
AL0185166 90 32 104 23
AL0185167 70 9 90 15
AL0185168 37 0 79 9
AL0185169 59 9 88 5
AL0185170 25 15 63 21
AL0185171 40 7 92 12
AL0185172 84 3 108 35
AL0185173 45 21 87 16
AL0185174 66 19 74 9
AL0185175 100 13 86 21
AL0185176 53 5 84 18
AL0185177 91 20 100 16
AL0185178 20 4 80 27
AL0185179 97 22 114 24
AL0185180 15 10 60 13
實施例2. 化學修飾的AGT-siRNA體外猴原代肝細胞活性篩選
（1）食蟹猴肝細胞細胞培養和轉染：使用食蟹猴肝細胞（北京瑞德百奧生物科技有限公司，cmTCSC），先預熱培養基，取出解凍培養基（北京瑞德百奧生物科技有限公司，HEPO24）到生物安全櫃，在36ml解凍培養基（TPCS，HEPO24）中加入4mL的FBS，製成完全解凍培養基，在37°C水浴中加熱10分鐘。用塗層介質（北京瑞德百奧生物科技有限公司，HEPO44）在CO 2培養箱中的37°C處理0.5h。從液氮中取出細胞，37℃水浴鍋溶解細胞，約2min後取出，將細胞懸液轉至預熱的40ml解凍培養基中，用2ml完全解凍培養基清洗細胞凍存管，將細胞懸液在180 × g下離心1min，棄去上清，加入2ml提前預熱的CM播種培養基（北京瑞德百奧生物科技有限公司，CMHEP054），輕緩吹散混勻細胞懸液，取20μl細胞懸液計數。根據計數結果，接種12孔板，3*10 5/孔，置於37℃，5% CO 2的培養箱中培養。貼壁4-5h後，吸出CM播種培養基，更換為預熱的培養基（北京瑞德百奧生物科技有限公司，CMHEP064），貼壁6h後轉染。使用Lipofectamine™ 3000 Transfection Reagent（thermofisher，L3000150）進行轉染，體系①用50μl Opti-MEM（thermofisher，1105821）稀釋50nM修飾後siRNA（蘇州貝信生物技術有限公司），體系②用50μl Opti-MEM稀釋3μl Lip3000，分別靜置5min後，將體系①與②混合再靜置15min，滴加到12孔板，轉染4h後更換DMEM/F12完全培養基，將12孔板置於培養箱中孵育48h。
（2）使用RNA-Quick Purification Kit（RNA快速提取試劑盒，奕杉生物，RN001）提取總RNA：從培養箱中取出12孔板，吸乾培養基，用適量的PBS洗一次，每孔加入500μl的裂解緩衝液，將上清轉移到新的1.5 ml離心管中。向裂解的細胞中加入500μl的無水乙醇充分混勻（若出現沉澱，這是正常現象，繼續進行操作即可）。將離心管顛倒幾次，或用移液器用力吹吸10次使產生的沉澱分散開，然後將液體加入離心柱，將離心管對稱放入離心機（eppendorf，5430），4000 × g離心1min。取出離心管向柱中加入500μl的洗滌緩衝液，12000 × g離心1min，離心結束後取出柱子時注意不要讓收集管內的廢液接觸到RNA柱，以免污染，倒掉廢液，將RNA柱裝回收集管，空管離心一次，能完全去除可能殘留的洗滌緩衝液。將柱子放到乾淨的無RNA酶的1.5ml離心管上，開蓋晾乾2分鐘。在RNA柱的膜中心部位加入30μl的洗脫緩衝液，室溫靜置2分鐘，2000 × g離心1min，RNA洗脫下來後，置於冰上。測定洗脫的RNA濃度，以便於後續實驗使用。提取出來的RNA可立即用於後續實驗，也可保存在-80℃備用。
（3）使用HiScript® II Q RT SuperMix for qPCR （+gDNA wiper）反轉錄試劑盒（諾唯贊，R223-01）合成cDNA：使用無RNA酶的離心管中配製混合液4μl 4 × gDNA wiper Mix、1μg範本RNA、加無RNA酶的ddH 2O至16μl去除基因組DNA，用移液器輕輕吹打混勻，42℃ 2 min。然後反應管中直接加入4μl 5 × HiScript II qRT SuperMix II用移液器輕輕吹打混勻，置於PCR儀（Applied Biosystems，9700）50℃，15min；85℃，5sec，4℃保持。產物可立即用於qPCR反應，或在-20℃保存，並在半年內使用，長期存放需分裝後在-80℃保存，cDNA應避免反復凍融。
（4）使用ChamQ SYBR qPCR Master Mix（諾唯贊，Q311-02）qPCR定量：配置混合液10μl 2 × ChamQ SYBR qPCR Master Mix、0.5 μl Forword primer（睿博興科）、0.5 μl Reverse primer（睿博興科）、1μl Template cDNA、8 μl ddH 2O至20 μl體系，每個樣品3個重複，將96孔板放到qPCR儀（ROCGENE，Archimed），執行程式：預變性，95℃，30sec；擴增，95℃，10sec，60℃，30sec，40個迴圈；溶解曲線，95℃，15sec，60℃，60sec，95℃，15sec。
（5）資料統計分析：將資料匯出EXCEL格式，用CT AGT-CT GAPDH，將對照組進行歸一化處理，為了計算相對沉默效率的倍數變化，資料使用△△CT法進行分析，將得到的三個平行重復資料計算平均值和標準差，7次猴原代細胞的篩選結果見表8-表14，每個表格的資料為單獨試驗所獲得的資料，由於細胞的批次不同，對靶基因的沉默效率會有不同，在某些試驗中，可能由於細胞狀態而出現低濃度，如表14中0.01nM的給藥量時，生物學重複的複孔之間偏差較大，應參考其他濃度和相同濃度下誤差較小資料。
由表8可見，以AL0185001組為質控標準，在給藥量為0.5 nM時， AL0185055- AL0185057、AL0185061-64、AL0185091-AL0185094組的siRNA的抑制效果均高於90%；在給藥量為低濃度0.05nM時，除AL0185062和AL01850663組外，其它siRNA的抑制率均大於80%。
由表9可見，以AL0185001組為質控標準，在給藥量為0.5 nM時，除AL0185081和AL0185188組外，其它siRNA的抑制效果優於AL0185001組；在給藥量為低濃度0.05nM時，除AL0185089組外，其它siRNA的抑制率均優於AL0185001組。其中AL0185188-AL0185195組為AL0185081、AL0185085、AL0185087和AL0185089組基礎上進行熱不穩定鹼基修飾（VPU和APU），結果表明siRNA經過VPU修飾或APU修飾後可進一步提高藥效。
由表10可見，以AL0185001組為質控標準，在給藥量為0.5 nM時，除AL0185104組外，其它siRNA的抑制效果均在70%左右；在給藥量為低濃度0.05nM時，其它siRNA的抑制率有所下降。
由表11可見，以AL0185001組為質控標準，在給藥量為0.5 nM時，AL0185210、AL0185215、AL0185219、AL0185220、AL0185221、AL0185222、AL0185228、AL0185229、AL0185230組的siRNA的抑制效果均高於98%；在給藥量為低濃度0.05nM時，抑制效果均高於94%。上述siRNA均進行熱不穩定鹼基修飾（VPU和APU），其中，AL0185222組還具有（Tgn）修飾；AL0185228組 還具有（C-2'5'）修飾；AL0185229 組還具有（A-2'5'）修飾；AL0185230 組還具有（U-2'5'）修飾；結果表明siRNA經過VPU修飾後可進一步提高藥效。GNA修飾、2'5'修飾能夠降低種子區域（siRNA反義鏈的2-8位）的miRNA樣脫靶活性，並且對AGT mRNA的抑制效果仍然可以達到大於98%的抑制藥效。結果表明經過VPU修飾、APU修飾、GNA修飾、2'5'修飾後可進一步提高藥效。
由表12可見，以AL0185001組為質控標準，在給藥量為0.01nM或0.05 nM時，藉由在某些位置引入Im修飾可進一步提高藥效。如系列AL0185234、AL0185237和AL0185244組。
由表13可見，VPUm或鹼基換成DNA修飾後可以進一步提高藥效，如與AL0185258組相比，加入VPUm或替換DNA修飾後藥效可以提高2-3倍，特別是在較低的給藥濃度時，如AL0185255、AL0185259、AL0185257、AL0185268、AL0185269和 AL0185270組對靶蛋白mRNA的沉默效率可以達到80%以上。
由表14可見，在反義鏈的6-7位加入A-2'5' 或U-2'5'或C-2'5' 或G-2'5'修飾後，其藥效可以穩定，因為此修飾可降低種子區的熱穩定性，可以降低序列的脫靶風險，在0.05nM給藥量時，AL0185259組的藥效最優，在0.01nM濃度時與不加A-2'5' 或U-2'5'或C-2'5' 或G-2'5'修飾的相比，提高siRNA的沉默活性，如序列AL0185272、AL0185274、AL0185277和AL0185278組，一定程度表明在給藥量相對低時，A-2'5' 或U-2'5'或C-2'5' 或G-2'5'修飾有時可以獲得較好的靶基因的沉默效果。 表8 食蟹猴原代肝細胞中AGT siRNA的抑制結果I
修飾siRNA編號 0.5nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%） 0.05nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%）
平均值 SD 平均值 SD
AL0185055 8.05 0.43 16.47 2.53
AL0185056 6.79 0.05 16.34 1.46
AL0185057 5.89 0.48 14.75 0.68
AL0185061 5.67 0.08 17.28 3.49
AL0185062 6.81 0.32 25.78 7.97
AL0185063 7.23 0.05 26.90 6.26
AL0185064 6.04 0.14 10.25 3.08
AL0185001 7.51 3.60 17.40 1.48
AL0185091 6.66 0.18 16.33 3.37
AL0185092 4.63 0.17 13.63 3.68
AL0185093 4.71 0.62 13.79 4.38
AL0185094 4.48 0.19 8.92 0.23
表9 食蟹猴原代肝細胞中AGT siRNA的抑制結果II
修飾siRNA編號 0.5nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%） 0.05nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%）
平均值 SD 平均值 SD
AL0185081 47.80 17.05 31.12 0.93
AL0185085 34.94 1.65 34.52 0.90
AL0185087 27.14 0.04 31.37 0.97
AL0185089 35.73 7.75 43.75 5.96
AL0185188 54.71 2.16 26.55 2.06
AL0185189 30.76 1.08 28.96 1.42
AL0185190 31.99 3.43 31.22 0.85
AL0185191 30.79 0.91 30.37 2.19
AL0185192 34.66 9.21 23.27 2.95
AL0185193 33.75 0.16 31.94 6.37
AL0185194 27.48 2.81 29.42 3.87
AL0185195 22.63 0.87 26.23 0.59
AL0185001 41.89 6.43 38.96 2.80
表10 食蟹猴原代肝細胞中AGT siRNA的抑制結果III
修飾siRNA編號 0.5nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%） 0.05nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%）
平均值 SD 平均值 SD
AL0185104 51.29 4.92 102.33 7.82
AL0185109 26.06 0.55 37.81 4.46
AL0185123 24.58 3.67 54.22 4.71
AL0185127 29.40 1.20 50.13 0.27
AL0185139 27.96 0.59 46.29 3.26
AL0185141 26.89 3.48 55.53 5.07
AL0185145 27.85 1.92 44.43 5.13
AL0185189 31.21 8.19 36.94 0.24
AL0185195 25.86 2.16 30.12 2.19
AL0185061 34.14 3.52 50.50 8.13
AL0185094 28.09 1.68 29.37 1.59
AL0185001 32.27 5.03 40.58 0.81
表11 食蟹猴原代肝細胞中AGT siRNA的抑制結果IV
修飾siRNA編號 0.5nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%） 0.05nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%）
平均值 SD 平均值 SD
AL0185210 1.04 0.46 2.12 0.40
AL0185215 0.89 0.13 2.88 0.82
AL0185219 0.88 0.25 3.17 0.58
AL0185220 0.74 0.24 3.24 0.46
AL0185221 0.75 0.13 2.10 0.14
AL0185222 1.15 0.14 5.23 0.39
AL0185228 0.66 0.15 2.96 1.14
AL0185229 0.72 0.07 2.94 0.43
AL0185230 0.79 0.06 3.06 0.13
AL0115001 1.25 0.16 4.39 0.57
表12 食蟹猴原代肝細胞中AGT siRNA的抑制結果V
修飾siRNA編號 0.01nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%） 0.05nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%）
平均值 SD 平均值 SD
AL0185232 21.18 4.16 18.11 3.05
AL0185234 9.85 1.26 1.72 0.83
AL0185235 24.24 7.17 20.42 4.79
AL0185236 24.21 2.06 14.44 3.29
AL0185237 16.32 1.64 2.09 1.48
AL0185244 10.95 3.02 4.83 1.11
AL0185245 18.18 3.35 16.67 2.76
AL0185246 17.42 7.36 5.48 1.05
AL0185247 19.13 4.54 19.74 5.45
AL0185199 13.00 2.29 1.42 0.25
AL0115001 14.05 3.77 14.32 2.02
表13 食蟹猴原代肝細胞中AGT siRNA的抑制結果VI
修飾siRNA編號 0.05nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%） 0.01nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%）
平均值 SD 平均值 SD
AL0185255 4.09 1.48 15.86 3.00
AL0185266 4.17 1.59 21.38 4.20
AL0185257 4.87 1.32 17.08 3.19
AL0185267 12.78 3.13 28.98 4.97
AL0185258 5.86 0.67 25.18 3.55
AL0185268 3.86 0.81 14.10 1.05
AL0185259 4.89 1.96 8.63 0.52
AL0185269 9.77 1.78 13.48 2.00
AL0185262 6.40 1.11 7.09 0.72
AL0185270 5.75 0.29 12.30 1.40
AL0185001 5.31 0.56 5.89 0.75
表14 食蟹猴原代肝細胞中AGT siRNA的抑制結果VII
修飾siRNA編號 0.05nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%） 0.01nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%）
平均值 SD 平均值 SD
AL0185271 8.83 3.00 82.31 20.34
AL0185272 10.16 2.10 65.91 8.79
AL0185273 11.14 3.06 81.68 11.46
AL0185274 9.68 1.19 65.90 8.65
AL0185259 6.82 0.86 103.32 49.22
AL0185275 10.78 2.37 87.90 31.36
AL0185276 27.12 9.06 92.20 49.64
AL0185277 23.46 5.42 74.09 10.75
AL0185278 15.58 1.56 97.83 49.93
AL0185001 12.60 3.05 76.39 18.01
實施例3. AGT siRNA在肝細胞系中的活性篩選
（1）細胞培養和轉染：
使用人類肝癌細胞系Hep3B、Huh7和HepG2（上海複申生物科技有限公司），置於37℃，5% CO 2的培養箱中，使用DMEM培養基（Hyclone，SH30022.01，2g/L Glucose），添加10%FBS（aqlabteech，AQ-MV-06600）、1%青黴素-鏈黴素（凱基生物，KGY0023）培養，待細胞匯合度達到90%，藉由胰酶（Amresco，0458-250G）進行消化，用計數儀（Nexcelom，cellometer Mini）計數，150 μl細胞懸液/孔，接種於96孔板中，細胞數：2*10 4細胞/孔，待次日貼壁進行轉染。
使用Lipofectamine TMRNAiMAX（thermofisher，13778150）進行轉染，將5 μl（5nM、0.5nM和0.1nM）稀釋化合物分散在20 μL Opti-MEM（thermofisher，1105821）中，0.2 μL RNAiMAX分散在25 μL Opti-MEM中，siRNA的終濃度分別為0.5nM、0.05nM和0.01nM，孵育5分鐘後，與化合物分散液混勻，孵育10分鐘，將細胞加入轉染複合物中（n=2），在37℃、5%CO 2培養箱中培養24小時。
（2）細胞裂解
轉染一天後去除培養基；加入PBS清洗； 每孔加入 50 μl 裂解液，保存於 -80°C。
（3）RT-qPCR
使用無RNA酶的離心管中配製混合液2.5μl buffer、0.2μl 的Enzyme Mix（Foregene，DRT-02011），0.4μl 裂解液、0.4μl的5μM的引物，加無RNA酶的ddH 2O至5μl，每個樣品3個重複，將96孔板放到qPCR儀（ROCGENE，Archimed），執行程式：stage1，42℃，5min；95℃，10sec；擴增，95℃，5sec；59℃，20sec；72℃，10sec；40個迴圈；溶解曲線，95℃，15sec，59℃，60sec，95℃，15sec。
（4）資料統計分析：
將資料匯出EXCEL格式，用CT AGT-CT hTBP，將對照組進行歸一化處理，為了計算相對沉默效率的倍數變化，資料使用△△CT法進行分析，結果見表15和表16。每個表格的資料為單獨試驗所獲得的資料，由於細胞的批次不同，對靶基因的沉默效率會有不同。
由表15可見，在給藥量為0.5nM和0.01nM時，裸序列AL0181240組在Hep3B、HepG2和Huh7細胞株中AGT基因表達水準的抑制效果的平均值大多數情況優於其它序列，尤其在0.01nM的低劑量時表現更優。
由表16可見，在給藥量為0.5nM、0.05nM和0.01nM時，經過修飾的序列在3個給藥劑量下，AL0185199、AL0185234和AL0185237組對AGT mRNA的沉默效率均顯著優於AL0185300組（P＜0.05）。 表15 肝細胞系中AGT siRNA的抑制效果
序列編號 0.5nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%） 0.01nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%）
平均值 SD 平均值 SD
Hep3B細胞
AL0181115 18.67 1.90 47.21 1.36
AL0181237 20.60 1.45 57.89 4.57
AL0181240 18.95 1.03 47.13 4.28
AL0181300 26.61 5.40 47.36 6.54
HepG2細胞
AL0181115 41.12 5.07 64.48 4.59
AL0181237 45.61 1.45 73.91 8.52
AL0181240 35.34 5.78 61.02 6.27
AL0181300 56.96 5.36 69.74 3.64
Huh7細胞
AL0181115 11.71 1.02 46.68 7.60
AL0181237 8.22 0.97 69.42 5.85
AL0181240 12.32 1.23 34.99 3.23
AL0181300 16.98 2.56 62.85 6.83
表16 肝細胞系中AGT siRNA的抑制效果
序列編號 0.5nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%） 0.05nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%） 0.01nM給藥量 AGT mRNA剩餘活性（%） t test p value
平均值 SD 平均值 SD 平均值 SD
AL0185199 16.86 3.05 27.43 2.16 49.41 4.70 0.012
AL0185234 15.87 4.58 24.87 3.53 51.84 6.88 0.038
AL0185237 12.15 1.08 24.12 6.80 44.56 12.98 0.004
AL0185300 24.04 3.75 45.31 6.20 83.47 14.00 ——
注：與AL018300進行Paired t test
實施例4. AGT RNAi劑在小鼠中的體內測試I
試驗採用SPF級雄性、8～9周周齡的B6.Cg-Tg（hAGT）2041Sig/J小鼠（來源Jackson laboratory）。在給藥第0天獲得給藥前血清樣品，按照hAGT水準隨機分組。B6.Cg-Tg（hAGT）2041Sig/J小鼠單次皮下給予3mg/kg的AGT RNAi劑。分別給藥後第1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周和第8周取小鼠血液（眼球取血，取血後1h內送檢），hAGT表達水準，以給藥前為對照，檢測hAGT的敲低水準。實驗期間，所有動物未見死亡或瀕死症狀。臨床觀察所有動物均未見明顯異常。
實驗分組見表17；hAGT變化水準如圖3。 表17 給藥分組表
序號 組別 給藥劑量 給藥方式
1 AL0187002 3mg/kg 單次皮下注射
2 AL0187003 3mg/kg 單次皮下注射
3 AL0187004 3mg/kg 單次皮下注射
4 AL0187005 3mg/kg 單次皮下注射
5 AL0187006 3mg/kg 單次皮下注射
6 AL0187007 3mg/kg 單次皮下注射
7 AL0187008 3mg/kg 單次皮下注射
8 AL0187009 3mg/kg 單次皮下注射
9 AL0187010 3mg/kg 單次皮下注射
10 AL0187011 3mg/kg 單次皮下注射
由圖3可以看出，與給藥前相比，在藥物干預後第3周時，除AL0187004外，其它所有AGT siRNA的敲低效果達到最低（90%以上），隨後逐漸緩慢回升，在第6周後AL0187002、AL0187004和AL0187009組中血液中hAGT的水準已經恢復到給藥前。藥物干預都可顯著降低小鼠血液中hAGT水準，而其中最顯著也是持續降低時間最長的為AL0187003、AL0187006、AL0187007、AL0187008、AL0187010和AL0187011組，並且在給藥8周後藥物的hAGT的抑制依然約50%， AL0187005、AL0187006、AL0187007、AL0187008、AL0187010和AL0187011組，與AL0187002組具有顯著差異（P＜0.05）。
實施例4. AGT RNAi劑在小鼠中的體內測試II
對體外和體內藥效表現較好的siRNA序列進行不同修飾以考察不同修飾對藥效的影響。試驗採用SPF級雄性、8～9周周齡的B6.Cg-Tg（hAGT）2041Sig/J小鼠（來源Jackson laboratory）。在給藥第0天獲得給藥前血清樣品，按照hAGT水準隨機分組。B6.Cg-Tg（hAGT）2041Sig/J小鼠單次皮下給予3mg/kg的AGT RNAi劑。分別給藥後第1周、2周、3周、4周和5周取小鼠血液（眼球取血，取血後1h內送檢），hAGT表達水準，以給藥前為對照，檢測hAGT的敲低水準。實驗期間，所有動物未見死亡或瀕死症狀。臨床觀察所有動物均未見明顯異常。
實驗分組見表18；hAGT變化水準如圖4。 表18 給藥分組表
序號 組別 給藥劑量 給藥方式
1 AL0187002 3mg/kg 單次皮下注射
2 AL0187006 3mg/kg 單次皮下注射
3 AL0187012 3mg/kg 單次皮下注射
4 AL0187013 3mg/kg 單次皮下注射
5 AL0187014 3mg/kg 單次皮下注射
6 AL0187015 3mg/kg 單次皮下注射
7 AL0187016 3mg/kg 單次皮下注射
8 AL0187017 3mg/kg 單次皮下注射
9 AL0187018 3mg/kg 單次皮下注射
10 AL0187019 3mg/kg 單次皮下注射
由圖4可以看出，與給藥前相比，在藥物干預後第2周時，除AL0187002、AL0187013、AL0187015外，其它所有AGT siRNA的敲低效果達到最低（90%以上），隨後逐漸緩慢回升，在第5周後AL0187002和AL0187013組中血液中hAGT的水準恢復較快。藥物干預都可顯著降低小鼠血液中hAGT水準，而其中最顯著為AL0187006、AL0187012、AL0187014、AL0187015、AL0187016、AL0187017、AL0187018和AL0187019組，並且在給藥5周後藥物的hAGT的抑制依然約75%，與AL0187002組具有顯著差異（P＜0.05）。
實施例5. AGT RNAi劑在小鼠中的體內測試III
對體外和體內藥效表現較好的siRNA序列進行不同修飾以考察不同修飾對藥效的影響。試驗採用SPF級雄性、8～9周周齡的B6.Cg-Tg（hAGT）2041Sig/J小鼠（來源Jackson laboratory）。在給藥第0天獲得給藥前血清樣品，按照hAGT水準隨機分組。B6.Cg-Tg（hAGT）2041Sig/J小鼠單次皮下給予3mg/kg的AGT RNAi劑。分別給藥後第1周、2周、3周、4周和5周取小鼠血液（眼球取血，取血後1h內送檢），hAGT表達水準，以給藥前為對照，檢測hAGT的敲低水準。實驗期間，所有動物未見死亡或瀕死症狀。臨床觀察所有動物均未見明顯異常。
實驗分組見表19；hAGT變化水準如圖5和圖6。 表19  給藥分組表
序號 組別 給藥劑量 給藥方式
1 AL0187002 3mg/kg 單次皮下注射
2 AL0187020 3mg/kg 單次皮下注射
3 AL0187021 3mg/kg 單次皮下注射
4 AL0187022 3mg/kg 單次皮下注射
5 AL0187023 3mg/kg 單次皮下注射
6 AL0187024 3mg/kg 單次皮下注射
7 AL0187025 3mg/kg 單次皮下注射
8 AL0187026 3mg/kg 單次皮下注射
9 AL0187028 3mg/kg 單次皮下注射
10 AL0187029 3mg/kg 單次皮下注射
11 AL0187030 3mg/kg 單次皮下注射
12 AL0187031 3mg/kg 單次皮下注射
13 AL0187032 3mg/kg 單次皮下注射
14 AL0187033 3mg/kg 單次皮下注射
15 AL0187034 3mg/kg 單次皮下注射
由圖5和圖6可以看出，與給藥前相比，在藥物干預後第2周時，除AL0187002、AL0187021、AL0187030和AL0187033組外，其它AGT siRNA的敲低效果達到最低（90%以上），隨後逐漸緩慢回升，在第5周後AL0187030、AL0187033和AL0187002組中血液中hAGT的水準恢復較快。藥物干預都可顯著降低小鼠血液中hAGT水準，而其中最顯著為AL0187020、AL0187023、AL0187024、AL0187025和AL0187028組，並且在給藥5周後藥物的hAGT的抑制依然可以達到80%，與AL0187002組具有顯著差異（P＜0.05）。
實施例6. AGT RNAi劑在小鼠中的體內測試IV
實驗同實施例5，分組見表20和表21。兩個實驗單獨開展，實驗期間，所有動物未見死亡或瀕死症狀。臨床觀察所有動物均未見明顯異常。hAGT變化水準如圖7和圖8。 表20 給藥分組表
序號 組別 給藥劑量 給藥方式
1 AL0187002 3mg/kg 單次皮下注射
2 AL0187037 3mg/kg 單次皮下注射
3 AL0187040 3mg/kg 單次皮下注射
4 AL0187041 3mg/kg 單次皮下注射
5 AL0187042 3mg/kg 單次皮下注射
6 AL0187043 3mg/kg 單次皮下注射
7 AL0187044 3mg/kg 單次皮下注射
8 AL0187045 3mg/kg 單次皮下注射
9 AL0187046 3mg/kg 單次皮下注射
10 AL0187047 3mg/kg 單次皮下注射
11 AL0187048 3mg/kg 單次皮下注射
12 AL0187049 3mg/kg 單次皮下注射
13 AL0187050 3mg/kg 單次皮下注射
14 AL0187024 3mg/kg 單次皮下注射
表21 給藥分組表
序號 組別 給藥劑量 給藥方式
1 AL0187002 1mg/kg 單次皮下注射
2 AL0187024 1mg/kg 單次皮下注射
3 AL0187040 1mg/kg 單次皮下注射
4 AL0187047 1mg/kg 單次皮下注射
5 AL0187051 1mg/kg 單次皮下注射
6 AL0187052 1mg/kg 單次皮下注射
7 AL0187053 1mg/kg 單次皮下注射
8 AL0187054 1mg/kg 單次皮下注射
由圖7可以看出，與給藥前相比，在藥物干預後第2周除AL0187041組外，其它AGT siRNA的敲低效果達到最低（80%以上），隨後逐漸緩慢回升。藥物干預都可顯著降低小鼠血液中hAGT水準，而其中最顯著為AL0187024、AL0187037、AL0187040、AL0187043、AL0187045、AL0187047、AL0187048和AL0187049組，並且在給藥5周後藥物的hAGT的抑制依然可以達到80%。
由圖8可以看出，當給藥量為1mg/kg時，與給藥前相比，在藥物干預後第2周AGT siRNA的敲低效果達到最低，隨後逐漸緩慢回升。藥物干預都可顯著降低小鼠血液中hAGT水準，而其中最顯著為AL0187024、AL0187040、AL0187047和AL0187051組，並且在給藥4周後藥物的hAGT的抑制依然可以達到80%。
實施例7. AGT RNAi劑在非人靈長類（NHP）中的藥效測試
對hAGT轉基因小鼠體內藥效表現較好的siRNA序列在食蟹猴中進行藥效的評價。試驗採用10-22歲的雄性食蟹猴（來源昆明科靈生物科技有限公司 （KBI））。在給藥第0天獲得給藥前血清樣品，按照AGT水準隨機分組。所有實驗組給予1mg/kg的AGT RNAi劑。實驗分為以下三組：
第1組：分別給藥後第1周、2周、3周、4周和5周取食蟹猴血液，AGT表達水準，以給藥前為對照，檢測AGT的敲低水準。實驗期間，臨床觀察所有動物均未見明顯異常。實驗分組見表22；AGT變化水準如圖9。
第2組：分別給藥後第1周、2周、3周、4周、5周和6周取食蟹猴血液，AGT表達水準，以給藥前為對照，檢測AGT的敲低水準。實驗期間，臨床觀察所有動物均未見明顯異常。實驗分組見表23；AGT變化水準如圖10。
第3組：分別給藥後第1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周和10周取食蟹猴血液，AGT表達水準，以給藥前為對照，檢測AGT的敲低水準。實驗期間，臨床觀察所有動物均未見明顯異常。實驗分組見表24；AGT變化水準如圖11。 表22 給藥分組表
序號 組別 給藥劑量 給藥方式
1 AL0187002 1mg/kg 單次皮下注射
2 AL0187020 1mg/kg 單次皮下注射
3 AL0187021 1mg/kg 單次皮下注射
4 AL0187022 1mg/kg 單次皮下注射
5 AL0187024 1mg/kg 單次皮下注射
表23 給藥分組表
序號 組別 給藥劑量 給藥方式
1 AL0187043 1mg/kg 單次皮下注射
2 AL0187045 1mg/kg 單次皮下注射
3 AL0187047 1mg/kg 單次皮下注射
表24 給藥分組表
序號 組別 給藥劑量 給藥方式
1 AL0187040 1mg/kg 單次皮下注射
2 AL0187051 1mg/kg 單次皮下注射
由圖9、10和11可以看出，與給藥前相比，在藥物干預後第3周所有AGT siRNA的敲低效果達到最低，隨後逐漸緩慢回升。藥物干預都可顯著降低食蟹猴血液中AGT水準，在第1組實驗中，其中藥效最顯著為AL0187020、AL0187022和AL0187024組，並且在給藥5周後藥物的AGT的抑制依然可以達到75%，與AL0187002組具有顯著差異（P＜0.05）。在第2組和第3組實驗中AL0187047、AL0187040和AL0187051組藥效顯著，在給藥7周時，對AGT 的抑制依然可以達到70%，甚至80%以上。
圖1示出了腎素-血管收縮素-醛固酮系統抑制劑的作用位元點，其中，實線表示主要途徑，虛線表示替代途徑，虛線表示阻斷途徑。ACE：血管收縮素轉換酶；ARB：血管收縮素受體阻斷劑；AT-R：血管收縮素受體；DRI：直接腎素抑制劑；LVH：左心室肥厚。
圖2示出了siRNA固相合成步驟。
圖3示出了AGT siRNA在hAGT轉基因小鼠的體內藥效I。
圖4示出了AGT siRNA在hAGT轉基因小鼠的體內藥效II。
圖5和圖6示出了AGT siRNA在hAGT轉基因小鼠的體內藥效III。
圖7和圖8示出了AGT siRNA在hAGT轉基因小鼠的體內藥效IV。
圖9、圖10和圖11示出了AGT siRNA在非靈長類（NHP）動物的體內藥效。
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Claims (10)

  1. 一種用於降低AGT的表達的寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽，其中該寡核苷酸包含有義鏈和反義鏈，該有義鏈具有與SEQ ID NO: 2-219、789-804、868-871中任一所示的序列或其片段、或該序列或其片段的修飾序列至少80％以上的序列同一性的序列，優選具有85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%以上的序列同一性的序列；該反義鏈具有與SEQ ID NO: 221-424、805-821、872-875中任一所示的序列或其片段、或該序列或其片段的修飾序列至少80％以上的序列同一性的序列，優選具有85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%以上的序列同一性的序列； 和/或，該有義鏈的修飾序列包含選自SEQ ID NO: 426-598、822-838、876-886中任一所述的序列； 和/或，該反義鏈的修飾序列包含選自SEQ ID NO: 600-676、678-788、839-867、887-911中任一所述的序列。
  2. 如請求項1所述的寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽，其中，該寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽選自羧酸鹽、鈉鹽、三乙胺鹽以及其它可藥用鹽。
  3. 如請求項1或2所述的寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽，其中，該有義鏈包含選自SEQ ID NO: 74、101、107、108、111-113、129、133、135、137、148、166、178、184、789、794、798、799、800、801、802、803、804、870中任一所述的未經修飾寡核苷酸，或SEQ ID NO: 471、477、478、481-483、518、536、548、554、592-598、822、827、831、832、833、834、835、836、837、838中任一所述的經修飾寡核苷酸；該反義鏈包含選自SEQ ID NO: 259、281、286、311、317、318、319、334、338、340、342、353、371、383、389、805、808、811、812、813、814、815、816、817、818、874中任一所述的未經修飾寡核苷酸，或SEQ ID NO: 643、644、645、647、648、681、678、679、680、764、610、773、774、775、776、777、778、779、780、782、783、785、839、854、857、858、859、860、861、862、863、864中任一所述的經修飾寡核苷酸。
  4. 如請求項1-3中任一項所述的寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽，其中，該寡核苷酸包含選自下述有義鏈和反義鏈組合中的任一項： （1）該有義鏈包含SEQ ID NO: 101所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 311所示的序列； （2）該有義鏈包含SEQ ID NO: 107所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 281所示的序列； （3）該有義鏈包含SEQ ID NO: 108所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 286所示的序列； （4）該有義鏈包含SEQ ID NO: 111所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 317所示的序列； （5）該有義鏈包含SEQ ID NO: 112所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 318所示的序列； （6）該有義鏈包含SEQ ID NO: 113所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 319所示的序列； （7）該有義鏈包含SEQ ID NO: 129所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 334所示的序列； （8）該有義鏈包含SEQ ID NO: 133所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 338所示的序列； （9）該有義鏈包含SEQ ID NO: 135所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 340所示的序列； （10）該有義鏈包含SEQ ID NO: 137所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 342所示的序列； （11）該有義鏈包含SEQ ID NO: 148所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 353所示的序列； （12）該有義鏈包含SEQ ID NO: 166所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 371所示的序列； （13）該有義鏈包含SEQ ID NO: 178所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 383所示的序列； （14）該有義鏈包含SEQ ID NO: 184所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 389所示的序列； （15）該有義鏈包含SEQ ID NO: 113所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 808所示的序列； （16）該有義鏈包含SEQ ID NO: 113所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 811所示的序列； （17）該有義鏈包含SEQ ID NO: 113所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 818所示的序列； （18）該有義鏈包含SEQ ID NO: 789所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 805所示的序列； （19）該有義鏈包含SEQ ID NO: 794所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 805所示的序列； （20）該有義鏈包含SEQ ID NO: 798所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 805所示的序列； （21）該有義鏈包含SEQ ID NO: 799所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 812所示的序列； （22）該有義鏈包含SEQ ID NO: 800所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 813所示的序列； （23）該有義鏈包含SEQ ID NO: 801所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 814所示的序列； （24）該有義鏈包含SEQ ID NO: 802所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 815所示的序列； （25）該有義鏈包含SEQ ID NO: 803所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 816所示的序列； （26）該有義鏈包含SEQ ID NO: 804所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 817所示的序列； （27）該有義鏈包含SEQ ID NO: 868所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 872所示的序列； （28）該有義鏈包含SEQ ID NO: 869所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 873所示的序列； （29）該有義鏈包含SEQ ID NO: 870所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 874所示的序列； （30）該有義鏈包含SEQ ID NO: 871所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 875所示的序列；和 （31）該有義鏈包含SEQ ID NO: 74所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 259所示的序列； 其中每個鏈在長度上獨立地為19至25個核苷酸。
  5. 如請求項1-4中任一項所述的寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽，其中，該寡核苷酸包含至少一個經修飾的核苷酸； 和/或，該經修飾的核苷酸中的至少一種經修飾的核苷酸選自以下組成的組：去氧核苷酸、3'末端去氧胸苷（dT）核苷酸、2'-O-甲基修飾的核苷酸、2'-氟修飾的核苷酸、2'-去氧修飾的核苷酸、鎖核苷酸、2'-5'-連接核醣核苷酸（3'-RNA）、解鎖核苷酸、構象限制性核苷酸、約束乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、2'-氨基修飾的核苷酸、2'-O-烯丙基修飾的核苷酸、2'-O-烷基修飾的核苷酸、2'-羥基修飾的核苷酸、2'-甲氧基乙基修飾的核苷酸、2'-O-烷基修飾的核苷酸、嗎啉代核苷酸、氨基磷酸酯、包括非天然鹼基的核苷酸、四氫吡喃修飾的核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾的核苷酸、環己烯基修飾的核苷酸、包括硫代磷酸酯基的核苷酸、包括甲基膦酸酯基的核苷酸、包括5'-磷酸酯的核苷酸、包括5'-磷酸酯模擬物的核苷酸、乙烯基-膦酸酯核苷酸、熱不穩定核苷酸、二醇修飾的核苷酸（glycol modified nucleotide）、包括2'磷酸酯的核苷酸和2-O-（N-甲基乙醯胺）修飾的核苷酸；以及其組合； 和/或，該經修飾的核苷酸中的至少一種經修飾的核苷酸選自由以下組成的組：LNA、HNA、CeNA、2′-甲氧基乙基、2′-O-烷基、2′-O-烯丙基、2′-C-烯丙基、2′-氟、2′-去氧、2'-羥基和乙二醇；以及其組合； 和/或，該經修飾的核苷酸中的至少一種經修飾的核苷酸選自由以下組成的組：去氧核苷酸、2'-O-甲基修飾的核苷酸、2'-氟修飾的核苷酸、2'-去氧修飾的核苷酸、乙二醇修飾的核苷酸（GNA）、包括2'磷酸酯的核苷酸和包括硫代磷酸酯基的核苷酸；以及其組合； 和/或，該寡核苷酸包含至少一個2'-修飾的核苷酸； 和/或，該2'-修飾的核苷酸選自2'-烷氧基修飾的核苷酸、2'-經取代的烷氧基修飾的核苷酸、2'-烷基修飾的核苷酸、2'-經取代的烷基修飾的核苷酸、2'-氟修飾的核苷酸、2'-醯基氨基修飾的核苷酸、2'-去氧修飾的核苷酸、2'-O-烯丙基修飾的核苷酸、2'-O-烷基修飾的核苷酸、2'-羥基修飾的核苷酸、2'-甲氧基乙基修飾的核苷酸、2'-氨基修飾的核苷酸、2'-經取代的氨基修飾的核苷酸、2'-去氧核苷酸、包括2'磷酸酯的核苷酸和2'-O-（N-甲基乙醯胺）修飾的核苷酸中的一種或多種； 和/或，所述2'-修飾是選自以下的修飾：2'-甲氧基、2'-乙醯氨基、2'-氨基乙基、2'-氟、2'-O-甲氧基乙基和2'-氟-β-d-阿拉伯核醣核酸； 和/或，該寡核苷酸可包含二醇核酸（GNA）修飾；優選地，該二醇核酸（GNA）修飾選自腺苷-二醇核酸、胞苷-二醇核酸、胸苷-二醇核酸和鳥苷-二醇核酸；優選地，二醇核酸（GNA）修飾選自式（I）所示的胸苷-二醇核酸S-異構體（Tgn）、式（II）所示的胞苷-二醇核酸S-異構體（Cgn）、式（III）所示的腺苷-二醇核酸S-異構體（Agn）和式（IV）所示的鳥苷-二醇核酸S-異構體（Ggn）； 、 、 、 ； 和/或，該寡核苷酸可包含2'-5'-磷酸二酯鍵，優選地，該寡核苷酸包含選自式（V）所示的尿苷-2'-磷酸酯（U-2'5'）、式（VI）所示的鳥苷-2'-磷酸酯（G-2'5'）；式（VII）所示的胞苷-2'-磷酸酯（C-2'5'）；式（VIII）所示腺苷-2'-磷酸酯（A-2'5'）和式（IX））所示的胸苷-2'-磷酸酯（T-2'5'）； 、 、 、 和/或，該寡核苷酸還包含5'-磷酸酯類似物修飾的核苷酸； 和/或，該5'-磷酸酯類似物修飾的核苷酸為式（X）所示的APU；優選地，該5'-磷酸酯類似物修飾的核苷酸為式（XI） 所示的VPUm： ； 。
  6. 如請求項1-5中任一項所述的寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽，其中，該寡核苷酸包含至少一個經修飾的核苷酸間鍵； 和/或，該至少一個經修飾的核苷酸間鍵是硫代磷酸酯鍵。
  7. 如請求項1-6中任一項所述的寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽，其中，該寡核苷酸包含選自下述有義鏈和反義鏈組合中的任一項： （1）該有義鏈包含SEQ ID NO: 477所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 643所示的序列； （2）該有義鏈包含SEQ ID NO:471所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 644所示的序列； （3）該有義鏈包含SEQ ID NO:478所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 645所示的序列； （4）該有義鏈包含SEQ ID NO:482所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 647所示的序列； （5）該有義鏈包含SEQ ID NO:483所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 648所示的序列； （6）該有義鏈包含SEQ ID NO:481所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 681所示的序列； （7）該有義鏈包含SEQ ID NO:471所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 678所示的序列； （8）該有義鏈包含SEQ ID NO:478所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 679所示的序列； （9）該有義鏈包含SEQ ID NO:483所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 680所示的序列； （10）該有義鏈包含SEQ ID NO:594所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 764所示的序列； （11）該有義鏈包含SEQ ID NO:593所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 610所示的序列； （12）該有義鏈包含SEQ ID NO:592所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 773所示的序列； （13）該有義鏈包含SEQ ID NO:592所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 774所示的序列； （14）該有義鏈包含SEQ ID NO:592所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 775所示的序列； （15）該有義鏈包含SEQ ID NO:595所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 776所示的序列； （16）該有義鏈包含SEQ ID NO:596所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 777所示的序列； （17）該有義鏈包含SEQ ID NO:597所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 778所示的序列； （18）該有義鏈包含SEQ ID NO:598所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 779所示的序列； （19）該有義鏈包含SEQ ID NO:518所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 780所示的序列； （20）該有義鏈包含SEQ ID NO:536所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 782所示的序列； （21）該有義鏈包含SEQ ID NO:548所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 783所示的序列； （22）該有義鏈包含SEQ ID NO:554所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 785所示的序列； （23）該有義鏈包含SEQ ID NO: 592所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 854所示的序列； （24）該有義鏈包含SEQ ID NO: 592所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 857所示的序列； （25）該有義鏈包含SEQ ID NO: 592所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 864所示的序列； （26）該有義鏈包含SEQ ID NO: 822所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 839所示的序列； （27）該有義鏈包含SEQ ID NO: 827所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 839所示的序列； （28）該有義鏈包含SEQ ID NO: 831所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 839所示的序列； （29）該有義鏈包含SEQ ID NO: 598所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 840所示的序列； （30）該有義鏈包含SEQ ID NO: 832所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 841所示的序列； （31）該有義鏈包含SEQ ID NO: 832所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 842所示的序列； （32）該有義鏈包含SEQ ID NO: 832所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 848所示的序列； （33）該有義鏈包含SEQ ID NO: 832所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 849所示的序列； （34）該有義鏈包含SEQ ID NO: 832所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 850所示的序列； （35）該有義鏈包含SEQ ID NO: 833所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 858所示的序列； （36）該有義鏈包含SEQ ID NO: 834所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 859所示的序列； （37）該有義鏈包含SEQ ID NO: 835所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 860所示的序列； （38）該有義鏈包含SEQ ID NO: 836所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 861所示的序列； （39）該有義鏈包含SEQ ID NO: 837所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 862所示的序列； （40）該有義鏈包含SEQ ID NO: 838所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 863所示的序列； （41）該有義鏈包含SEQ ID NO: 882所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 894所示的序列； （42）該有義鏈包含SEQ ID NO: 882所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 902所示的序列； （43）該有義鏈包含SEQ ID NO: 884所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 896所示的序列； （44）該有義鏈包含SEQ ID NO: 884所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 903所示的序列； （45）該有義鏈包含SEQ ID NO: 592所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 905所示的序列； （46）該有義鏈包含SEQ ID NO: 592所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 907所示的序列； （47）該有義鏈包含SEQ ID NO: 882所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 910所示的序列；和 （48）該有義鏈包含SEQ ID NO: 882所示的序列，和該反義鏈包含SEQ ID NO: 911所示的序列； 其中每個鏈在長度上獨立地為19至25個核苷酸。
  8. 如請求項1-7中任一項所述的寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽，其中，該寡核苷酸的至少一個核苷酸綴合至一個或多個靶向配體； 和/或，該靶向配體包含碳水化合物、氨基糖、膽固醇、多肽或脂質； 和/或，該靶向配體包含N-乙醯基半乳糖胺（GalNAc）部分； 和/或，該GalNac部分是單價GalNAc部分、二價GalNAc部分、三價GalNAc部分或四價GalNAc部分； 和/或，該靶向配體為式（XII）所示的A1： 和/或，該靶向配體為式 （XIII）所示的L96： 。
  9. 一種組合物，其包含如請求項1至8中任一項所述的寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽，以及任選地藥學上可接受的載體； 和/或，該組合物的劑型為口服劑、注射劑；注射劑選自靜脈注射劑、皮下注射劑或肌內注射劑； 和/或，該組合還包含其他治療或/和預防AGT-相關疾病的藥物。
  10. 如請求項1至8中任一項所述的寡核苷酸或其藥學上可接受的鹽或如請求項9所述的組合物在製備用於治療或/和預防AGT-相關疾病的藥物中的用途； 其中，AGT-相關疾病選自高血壓，例如，臨界性高血壓（也稱為高血壓前期）、原發性高血壓（也稱為原發高血壓或特發性高血壓）、繼發性高血壓（也稱為非原發性高血壓）、高血壓危症（也稱為惡性高血壓）、高血壓急迫狀態、孤立性收縮期或舒張期高血壓、妊娠相關的高血壓（例如，先兆子癇、子癇和產後子癇前期）、糖尿病性高血壓、頑固性高血壓、難治性高血壓、陣發性高血壓、腎血管性高血壓（也稱為腎性高血壓）、戈德布拉特氏高血壓、高眼壓症、青光眼、肺動脈高壓、門靜脈高壓、系統性靜脈高血壓、收縮期高血壓、不穩定性高血壓；高血壓性心臟病、高血壓性腎病、動脈粥樣硬化、動脈硬化、血管病 （包括外周血管病）、糖尿病性腎病、糖尿病性視網膜病、慢性心力衰竭、心肌病、糖尿病性心肌病、腎小球硬化症、主動脈縮窄、主動脈瘤、心室纖維化、庫欣綜合征和其他糖皮質激素過多狀態（包括慢性類固醇治療）、嗜鉻細胞瘤、腎素瘤、繼發性醛固酮增多症和其他鹽皮質激素過多狀態、睡眠呼吸暫停、甲狀腺/甲狀旁腺疾病、心力衰竭（例如，左心室收縮功能不全）、心肌梗死、心絞痛、中風、糖尿病（例如，糖尿病性腎病）、腎病（例如，慢性腎病或糖尿病性腎病，任選在妊娠環境中）、腎衰竭（例如，慢性腎衰竭）、認知障礙（如阿爾茨海默病）和系統性硬化（例如，硬皮病腎危象）； 或者，AGT-相關疾病選自宮內發育遲緩（IUGR）和胎兒生長受限。
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